MD4696C1 - Water-soluble compound 2,6-bis(S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-trichloro-dicopper-hydrate for use as an antifungal agent - Google Patents
Water-soluble compound 2,6-bis(S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-trichloro-dicopper-hydrate for use as an antifungal agent Download PDFInfo
- Publication number
- MD4696C1 MD4696C1 MDA20190027A MD20190027A MD4696C1 MD 4696 C1 MD4696 C1 MD 4696C1 MD A20190027 A MDA20190027 A MD A20190027A MD 20190027 A MD20190027 A MD 20190027A MD 4696 C1 MD4696 C1 MD 4696C1
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- copper
- water
- compound
- activity
- compounds
- Prior art date
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Description
Invenţia se referă la utilizarea unui compus coordinativ binuclear de cupru în bază de izotiosemicarbazone hidroxiaromatice în calitate de remediu antimicotic şi poate fi aplicată în medicină. The invention refers to the use of a binuclear coordinating copper compound based on hydroxyaromatic isothiosemicarbazones as an antimycotic remedy and can be applied in medicine.
Rezistenţa tot mai sporită a fungilor faţă de remediile antimicotice (antifungice) existente face actuală elaborarea unor noi tipuri de remedii antimicotice mai eficiente. Printre caracteristicele dorite, pe care trebuie să le posede aceste remedii se numără, pe lângă activitatea înaltă exprimată în concentraţii minime inhibitorii (CMI) sau fungicide (CMF) cât mai joase, şi o solubilitate a remediilor în apă (hidrosolubilitate). Ultima caracteristică este condiţionată de faptul că apa reprezintă mediul biologic natural, solventul in vivo universal, din componenţa organismelor vii. Totodată reieşind din considerentele practice de pregătire şi aplicare a remediilor antimicrobiene, este foarte de dorit de a elabora ingredienţi activi solubili hidrosolubili. Aceasta ar permite de a spori eficacitatea remediilor antimicrobiene utilizate sub formă de soluţii apoase, evitând folosirea solvenţilor organici, a diferitor adjuvanţi de solubilizare sau umectare, cu toate consecinţele pozitive pentru toxicitate, costuri economice etc. The increasing resistance of fungi to the existing antimycotic (antifungal) remedies makes the development of new types of more effective antimycotic remedies urgent. Among the desired characteristics, which these remedies must possess, are, in addition to the high activity expressed in minimum inhibitory (MIC) or fungicidal (CMF) concentrations as low as possible, and a solubility of the remedies in water (hydrosolubility). The last characteristic is conditioned by the fact that water represents the natural biological environment, the universal in vivo solvent, from the composition of living organisms. Also emerging from the practical considerations of preparation and application of antimicrobial remedies, it is highly desirable to develop water-soluble active ingredients. This would allow to increase the effectiveness of antimicrobial remedies used in the form of aqueous solutions, avoiding the use of organic solvents, various solubilizing or wetting adjuvants, with all the positive consequences for toxicity, economic costs, etc.
O clasă promiţătoare de remedii antimicrobiene, inclusiv antifungice, reprezintă derivaţii tiosemicarbazidei, în special produşii condensării cu aldehide sau cetone - tiosemicarbazonele. Este cunoscut că tiosemicarbazonele şi compuşii coordinativi respectivi cu unele metale de tranziţie, în special cupru, pot manifesta un spectru larg de acivitate biologică [1, 2, 3]. Activitatea biologică a tiosemicarbazonelor şi compuşilor lor coordinativi variază foarte larg în funcţie de natura metalului, structura ligandului sau a complexului, natura substituenţilor atât din fragmentul carbonilic cât şi la fragmentul tiosemicarbazidic. Ultimul poate fi derivatizat prin substituţie la atomii de azot sau la sulful din gruparea tiocarbonilică. A promising class of antimicrobial remedies, including antifungals, are thiosemicarbazide derivatives, especially condensation products with aldehydes or ketones - thiosemicarbazones. It is known that thiosemicarbazones and the respective coordinating compounds with some transition metals, especially copper, can exhibit a wide spectrum of biological activity [1, 2, 3]. The biological activity of thiosemicarbazones and their coordinating compounds varies widely depending on the nature of the metal, the structure of the ligand or the complex, the nature of the substituents both in the carbonyl fragment and in the thiosemicarbazide fragment. The latter can be derivatized by substitution at the nitrogen atoms or at the sulfur in the thiocarbonyl group.
Ca o ilustrare a dependenţei activităţii biologice de structura ligandului sau a compusului coordinativ de metal pot servi complecşii binucleari de cupru(II) cu tiosemicarbazonele N4-substituite a hidroxiacetofenonei. Dimerii de cupru nu posedă o activitate de inhibare faţă de fungul Aspergillus niger, dar în schimb sunt activi faţă de Paecilomyces variotii [4]. Binuclear complexes of copper(II) with N4-substituted thiosemicarbazones of hydroxyacetophenone can serve as an illustration of the dependence of biological activity on the structure of the ligand or the coordinating metal compound. Copper dimers do not possess an inhibitory activity against Aspergillus niger, but instead are active against Paecilomyces variotii [4].
Alţi complecşi binucleari (dimeri) de cupru(II), şi anume în baza ligandului binucleabil - bis(4-feniltiosemicarbazona) 2,6-diformil-4-metilfenolului, sunt inactivi faţă de diferite specii de fungi sau bacterii [5]. Other copper(II) binuclear complexes (dimers), namely based on the binucleable ligand - bis(4-phenylthiosemicarbazone) 2,6-diformyl-4-methylphenol, are inactive against different species of fungi or bacteria [5].
O cale relativ mai puţin utilizată pentru derivatizarea tiosemicarbazidelor constă în alchilarea atomului donor de sulf tionic cu obţinerea S-alchilizotiosemicarbazidelor. În urma alchilării atomului de sulf, se reduce drastic capacitatea de coordinare a atomului tioeteric, format cu majoritatea metalelor de tranziţie. Ca urmare, atomul de sulf din fragmentul izotiosemicarbazidic nu mai participă la coordinare, iar locul lui în setul de atomi donor ai izotiosemicarbazidei este ocupat de atomul terminal N4. Din datele din Stadiul tehnicii reiese că alchilarea sulfului din fragmentul tiosemicarbazidic în multe cazuri nu contribuie la ridicarea activităţii biologice a tiosemicarbazonelor şi compuşilor coordinativi. De exemplu, pentru derivaţii S-alchilaţi ai 1,4-benzochinon-izotiosemicarbazon-guanilhidrazonei s-a stabilit că în rezultatul alchilării sulfului se micşorează activitatea antibacteriană comparativ cu tiosemicarbazona iniţială [6]. Alt exemplu poate servi tiosemicarbazona aldehidei benzoice, care posedă o activitate antituberculoasă, dar derivatul S-substituit S-alchilizotiosemicarbazona aldehidei benzoice nu mai este activ contra bacilului tuberculos [7]. Din studiul comparativ al activităţii antiproliferative al complecşilor metalelor, inclusiv al cuprului, cu tiosemicarbazone hidroxiaromatice nealchilate şi S-metilizotiosemicarbazonele respective reiese că alchilarea sulfului reduce drastic capacitatea complecşilor de a inhiba proliferarea celulelor canceroase [8]. Efectul tiometilării atomului de sulf tiosemicarbazidic asupra activităţii biologice poate fi divergent. De exemplu, analogul S-metilic H2L6 este mai citotoxic decât compusul nealchilat H2L1: A relatively less used way for the derivatization of thiosemicarbazides consists in the alkylation of the ionic sulfur donor atom to obtain S-alkylisothiosemicarbazides. Following the alkylation of the sulfur atom, the coordination capacity of the thioether atom, formed with most transition metals, is drastically reduced. As a result, the sulfur atom in the isothiosemicarbazide fragment no longer participates in coordination, and its place in the set of isothiosemicarbazide donor atoms is occupied by the terminal atom N4. From the State of the Art data, it appears that the alkylation of sulfur from the thiosemicarbazide fragment in many cases does not contribute to increasing the biological activity of thiosemicarbazones and coordinating compounds. For example, for the S-alkylated derivatives of 1,4-benzoquinone-isothiosemicarbazone-guanylhydrazone, it was established that as a result of sulfur alkylation, the antibacterial activity decreases compared to the initial thiosemicarbazone [6]. Another example can serve benzoic aldehyde thiosemicarbazone, which possesses antituberculosis activity, but the S-substituted derivative S-alkylisothiosemicarbazone of benzoic aldehyde is no longer active against the tubercle bacillus [7]. From the comparative study of the antiproliferative activity of metal complexes, including copper, with non-alkylated hydroxyaromatic thiosemicarbazones and the respective S-methylisothiosemicarbazones, it appears that sulfur alkylation drastically reduces the ability of the complexes to inhibit the proliferation of cancer cells [8]. The effect of thiomethylation of the thiosemicarbazide sulfur atom on the biological activity can be divergent. For example, the S-methyl analogue H2L6 is more cytotoxic than the non-alkylated compound H2L1:
, ,
pe de altă parte compusul dimer [Cu2L6 Cl3] posedă o activitate mai redusă faţă de liniile de celule canceroase decât [Cu2HL1Cl3] [9]. on the other hand, the dimer compound [Cu2L6 Cl3] has a lower activity against cancer cell lines than [Cu2HL1Cl3] [9].
În unele cazuri coordinarea izotiosemicarbazonelor cu metale poate să mărească activitatea biologică a S-metilizotiosemicarbazonelor. De exemplu, S-alchilizotiosemicarbazonele aldehidei 5-metilsalicilice posedă o activitate antibacteriană redusă faţă de tulpinile S. aureus, B. cereus ş.a., concentraţia minimă inhibitoare fiind la nivelul de 400 µg/mL. În schimb, compuşii binucleari ai fierului trivalent (µ-oxodimeri) cu N1,N4-bis(saliciliden)-S-metil-izotiosemicarbazida sunt activi faţă de tulpinile sus-menţionate la concentraţii de 10...50 µg/mL, totodată compuşii mononucleari sunt considerabil mai puţin activi, concentraţia minimă inhibitoare situându-se în intervalul 100...500 µg/mL [10]. Pe de altă parte, este cunoscut că unele tiosemicarbazone necoordinate, manifestă o activitate antimicrobiană semnificativ mai mare decât respectivii compuşi coordinativi ai cuprului [3, p.61], [4]. In some cases the coordination of isothiosemicarbazones with metals can increase the biological activity of S-methylisothiosemicarbazones. For example, the S-alkylisothiosemicarbazones of 5-methylsalicylic aldehyde possess a reduced antibacterial activity against strains of S. aureus, B. cereus, etc., the minimum inhibitory concentration being at the level of 400 µg/mL. On the other hand, the binuclear compounds of trivalent iron (µ-oxodimers) with N1,N4-bis(salicylidene)-S-methyl-isothiosemicarbazide are active against the above-mentioned strains at concentrations of 10...50 µg/mL, also the compounds mononuclear cells are considerably less active, the minimum inhibitory concentration being in the range of 100...500 µg/mL [10]. On the other hand, it is known that some non-coordinated thiosemicarbazones show a significantly higher antimicrobial activity than the corresponding copper-coordinated compounds [3, p.61], [4].
Dezavantajul acestor compuşi biologic activi constă în faptul că foarte mulţi din ei sunt insolubili sau foarte puţin solubili în apă. Majoritatea absolută a tiosemicarbazonelor şi complecşii lor sunt insolubili în apă. O metodă de a conferi hidrosolubilitate constă în introducerea în ligandul organic a unor grupe hidrofile ca grupa sulfonică (-SO3H) sau carboxilică (-COOH). Aceste grupe uşor se ionizează în mediul bazic cu formarea sărurilor respective ale metalelor alcaline sau amoniu, care de regulă conferă solubilitate în apă ligandului sau complexului respectiv. The disadvantage of these biologically active compounds is that many of them are insoluble or very slightly soluble in water. The absolute majority of thiosemicarbazones and their complexes are insoluble in water. A method to confer water solubility consists in the introduction of hydrophilic groups such as sulfonic (-SO3H) or carboxylic (-COOH) groups into the organic ligand. These groups easily ionize in the basic environment with the formation of the respective salts of alkali metals or ammonium, which usually give solubility in water to the respective ligand or complex.
Pe această cale au fost obţinuţi complecşi hidrosolubili de cupru, zinc şi nichel cu tiosemicarbazone ale aldehidelor aromatice sulfonate [11]. Solubilitatea lor în apă a permis testarea in vivo a activităţii biologice, în special a citotoxicităţii contra celulelor de leucemie cronică mieloidă umană. Un dezavantaj al acestor compuşi constă în aceea că introducerea grupei sulfonice necesită stadii suplimentare de sinteză organică, în plus grupa sulfonică poate influenţa negativ asupra activităţii biologice. In this way, water-soluble complexes of copper, zinc and nickel with thiosemicarbazones of sulfonated aromatic aldehydes were obtained [11]. Their solubility in water allowed the in vivo testing of biological activity, especially cytotoxicity against human chronic myeloid leukemia cells. A disadvantage of these compounds is that the introduction of the sulfonic group requires additional stages of organic synthesis, in addition the sulfonic group can negatively influence the biological activity.
În scopul de a obţine tiosemicarbazone heteroaromatice şi complecşi de cupru(II) hidrosolubili cu activitate antiproliferativă contra celulelor canceroase, în nucleul heteroaromatic s-a introdus grupa morfolinică, care poate conferi o hidrosolubilitate şi spori activitatea biologică a compuşilor rezultaţi [12]. In order to obtain heteroaromatic thiosemicarbazones and water-soluble copper(II) complexes with antiproliferative activity against cancer cells, the morpholine group was introduced into the heteroaromatic nucleus, which can confer water solubility and increase the biological activity of the resulting compounds [12].
Au fost sintetizate diverse tiosemicarbazone pe bază de 5-metilmorfolin-piridin-2-carboxaldehidă (HL1-HL6) şi complecşii respectivi de cupru (1-6), care s-a dovedit că sunt deja hidrosolubili: Various thiosemicarbazones based on 5-methylmorpholine-pyridine-2-carboxaldehyde (HL1-HL6) and the respective copper complexes (1-6) were synthesized, which proved to be already water-soluble:
S-a determinat că o parte din compuşii coordinativi formează dimeri slabi (asociaţi) în stare solidă, care în soluţie apoasă se scindează în monomerii reprezentaţi mai sus. Totodată liganzii şi complecşii lor de cupru au fost testaţi şi pentru activitate antibacteriană faţă de microorganismele Gram-pozitive S.aureus şi Gram-negative P. aeruginosa. HL1-HL5 împreună cu complecşii 1 - 5 au arătat o activitate antibacteriană considerabilă faţă de bacteriile S.aureus. În schimb ligandul HL6 în bază de S-metilizotiosemicarbazidă şi complexul 6, spre deosebire de ceilalţi compuşi, au manifestat un nivel foarte redus de activitate antibacteriană. Alt dezavantaj constă că sinteza 5-metilmorfolin-piridin-2-carboxaldehidei, care conferă în final hidrosolubilitate complecşilor, este destul de anevoioasă şi necesită şapte stadii de sinteză. It was determined that some of the coordinating compounds form weak (associated) dimers in the solid state, which in aqueous solution split into the monomers represented above. At the same time, their copper ligands and complexes were also tested for antibacterial activity against Gram-positive S.aureus and Gram-negative P. aeruginosa microorganisms. HL1-HL5 together with complexes 1 - 5 showed considerable antibacterial activity against S.aureus bacteria. Instead, the HL6 ligand based on S-methylisothiosemicarbazide and complex 6, unlike the other compounds, showed a very low level of antibacterial activity. Another disadvantage is that the synthesis of 5-methylmorpholine-pyridine-2-carboxaldehyde, which ultimately gives the complexes water solubility, is quite difficult and requires seven stages of synthesis.
Pentru derivaţii S-metilizotiosemicarbazonelor hidroxiaromatice, structural destul de apropiaţi de compusul utilizat de solicitanţi în revendicări, anume pentru N4-alil-S-metilizotiosemicarbazona aldehidei 2-hidroxinaftoice [13] sau pentru compusul coordinativ al cuprului cu N4-alil-S-metilizotiosemicarbazona 3,5-dibromosalicilaldehidei [14], s-a depistat o activitate antibacteriană şi antimicotică. Dezavantajul acestor compuşi constă în faptul că nu sunt solubili în apă. Totodată nivelul activităţii antimicotice (faţă de fungul Candida albicans) nu este destul de înalt - concentraţiile minime inhibitorii sau fungicide pentru primul compus ating valori de respectiv 700 µg/mL [13], iar pentru compusul coordinativ valori de 63 şi 250 µg/mL [14]. For derivatives of hydroxyaromatic S-methylisothiosemicarbazones, structurally quite close to the compound used by the applicants in the claims, namely for N4-allyl-S-methylisothiosemicarbazone of 2-hydroxynaphthoic aldehyde [13] or for the coordinating compound of copper with N4-allyl-S-methylisothiosemicarbazone 3 ,5-dibromosalicylaldehyde [14], an antibacterial and antimycotic activity was detected. The disadvantage of these compounds is that they are not soluble in water. At the same time, the level of antifungal activity (compared to the Candida albicans fungus) is not high enough - the minimum inhibitory or fungicidal concentrations for the first compound reach respectively 700 µg/mL [13], and for the coordinating compound values of 63 and 250 µg/mL [ 14].
Recent au fost descrişi compuşii coordinativi ai cuprului(II) cu 4-alil-S-metilizotiosemicarbazona aldehidei salicilice, care manifestă proprietăţi antimicrobiene pronunţate [15]. Aceşti compuşi pot fi consideraţi ca cei mai apropiaţi din punct de vedere structural şi după activitatea antimicotică în raport cu compusul propus pentru utilizare în invenţia revendicată. Dezavantajul compuşilor din analogul proxim constă în faptul că ei nu sunt solubili în apă, iar activitatea antimicotică nu este destul de înaltă. Recently, the coordination compounds of copper(II) with 4-allyl-S-methylisothiosemicarbazone of salicylic aldehyde have been described, which exhibit pronounced antimicrobial properties [15]. These compounds can be considered the closest in terms of structure and antifungal activity to the compound proposed for use in the claimed invention. The disadvantage of the compounds from the proximate analogue is that they are not soluble in water, and the antifungal activity is not high enough.
Problema soluţionată de invenţie constă în extinderea gamei de remedii antimicotice în bază de compuşi coordinativi (combinaţii complexe) ai cuprului(II) cu izotiosemicarbazone aromatice şi care totodată să fie solubili în apă (hidrosolubili). The problem solved by the invention consists in expanding the range of antimycotic remedies based on coordinating compounds (complex combinations) of copper(II) with aromatic isothiosemicarbazones and which are also soluble in water (hydrosoluble).
Problema s-a soluţionat printr-o analiză şi o selecţie neevidentă dintre compuşii coordinativi binucleari (dimeri) ai cuprului cu derivaţi de izotiosemicarbazone aromatice binucleabile, urmată de sinteza şi investigaţii microbiologice corespunzătoare. Totodată pentru referinţă au fost sintetizaţi doi compuşi coordinativi hidrosolubili ai cuprului cu izotiosemicarbazone aromatice apropiate structural, dar pentru care solicitanţii au depistat că ultimii nu posedă o activitate antimicrobiană înaltă. De aici rezultă că pentru o activitate antimicrobiană înaltă, condiţia de hidrosolubilitate a compuşilor coordinativi este una necesară, dar nu şi suficientă. The problem was solved by an analysis and a non-obvious selection of binuclear coordination compounds (dimers) of copper with derivatives of binucleable aromatic isothiosemicarbazones, followed by the corresponding synthesis and microbiological investigations. At the same time, for reference, two water-soluble coordination compounds of copper with structurally close aromatic isothiosemicarbazones were synthesized, but for which the applicants found that the latter do not possess a high antimicrobial activity. From this it follows that for a high antimicrobial activity, the condition of hydrosolubility of the coordinating compounds is necessary, but not sufficient.
Esenţa invenţiei constă în aceea că pentru un compus binuclear al cuprului(II) hidrosolubil în bază de derivat S-alchilat al tiosemicarbazidei, şi anume 2,6-bis(S-metilizotiosemicarbazidometiliden)-4-metilfenolato-tricloro-dicupru-hidrat, s-a depistat că în soluţii apoase el posedă o activitate pronunţată contra diferitor fungi. În rezultat compusul dat se propune pentru utilizare în calitate de remediu antimicotic. The essence of the invention consists in the fact that for a water-soluble copper(II) binuclear compound based on the S-alkylated derivative of thiosemicarbazide, namely 2,6-bis(S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-trichloro-dicupru-hydrate, detected that in aqueous solutions it possesses a pronounced activity against various fungi. As a result, the given compound is proposed for use as an antifungal remedy.
Rezultatul atins de invenţie constă în faptul că în soluţii apoase compusul coordinativ binuclear 2,6-bis(S-metilizotiosemicarbazidometiliden)-4-metilfenolato-tricloro-dicupru-hidrat posedă o activitate antimicotică la concentraţii minime inhibitorii sau fungicide în intervalul de valori de 2...8 µg/mL. The result achieved by the invention consists in the fact that in aqueous solutions the binuclear coordinating compound 2,6-bis(S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-trichloro-dicupru-hydrate possesses an antimycotic activity at minimum inhibitory or fungicidal concentrations in the value range of 2 ...8 µg/mL.
Ligandul (H3DF-T1) din componenţa compusului cordinativ, produsul condensării S-metilizotiosemicarbazidei cu o dialdehidă hidroxiaromatică, este unul binucleabil, adică poate coordona simultan doi ioni de cupru cu utilizarea punţii de fenolat şi a patru atomi donori de azot N1 şi N4 ale ambelor „braţe” izotiosemicarbazidice, deoarece, ca urmare a alchilării atomilor donor de sulf, ultimii nu se mai pot coordina la ionii de cupru(II). În medii neutre ligandul se coordonează în formă monodeprotonizată în urma disocierii grupei fenolice, iar în mediile bazice - în formă trideprotonizată, datorită disocierii suplimentare a câte un proton de la grupele amino terminale din braţele izotiosemicarbazidice. Structura H3DF-T1 este redată mai jos: The ligand (H3DF-T1) in the coordination compound, the product of the condensation of S-methylisothiosemicarbazide with a hydroxyaromatic dialdehyde, is a binucleate one, that is, it can simultaneously coordinate two copper ions using the phenolate bridge and four nitrogen donor atoms N1 and N4 of both isothiosemicarbazide "arms", because, as a result of the alkylation of the sulfur donor atoms, the latter can no longer coordinate to the copper(II) ions. In neutral environments, the ligand coordinates in a monodeprotonated form following the dissociation of the phenolic group, and in basic environments - in a trideprotonated form, due to the additional dissociation of one proton from the terminal amino groups of the isothiosemicarbazide arms. The structure of H3DF-T1 is shown below:
. .
Compusul coordinativ se obţine la interacţiunea H3DF-T1 cu clorura de cupru(II) în mediu alcoolic şi reprezintă un dimer de cupru coordinat cu ligandul monodeprotonizat, care mai conţine trei ioni de clor şi o moleculă de apă de cristalizare: 2,6-bis(S-metilizotiosemicarbazidometiliden)-4-metilfenolato-tricloro-dicupru-hidrat. Reieşind din datele analizei elementale, spectrale şi proprietăţile chimice şi magnetochimice dimerul de cupru foarte probabil că are următoarea structură [Cu2(µ-H2DF-T1)-µ-Cl]Cl2·H2O, unde H2DF-T1 reprezintă ligandul iniţial monodeprotonizat la atomul punte de oxigen fenolic, iar notarea µ-Cl denotă faptul că un ion de clor are rolul de a doua punte între ionii de Cu(II): The coordination compound is obtained by the interaction of H3DF-T1 with copper(II) chloride in an alcoholic medium and represents a copper dimer coordinated with the monodeprotonated ligand, which also contains three chlorine ions and a molecule of water of crystallization: 2,6-bis (S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-trichloro-dicuprous-hydrate. Based on the elemental, spectral analysis and chemical and magnetochemical properties, the copper dimer very likely has the following structure [Cu2(µ-H2DF-T1)-µ-Cl]Cl2·H2O, where H2DF-T1 represents the initial monodeprotonated ligand at the bridge atom of phenolic oxygen, and the notation µ-Cl denotes the fact that a chlorine ion has the role of a second bridge between Cu(II) ions:
. .
Nu este exclus că ceilalţi doi anioni de clor să coordineze apical la câte un ion de cupru, iar la dizolvarea dimerului în apă ei să disocieze uşor din sfera internă a compusului coordinativ cu formarea electroliţilor de tipul 1:2, o condiţie ce ar contribui la hidrosolubilitatea dimerului de cupru. Conform regulilor de nomenclatură chimică denumirea desfăşurată a compusului, în conformitate cu formula structurală de mai sus, poate fi {µ-cloro-[µ-2,6-bis(S-metilizotiosemicarbazidometiliden)-4-metilfenolato-N1,N4,N ́1,N ́4,µ-O]dicupru(II)}-dicloro-hidrat. Din considerente practice dimerul de cupru utilizat în continuare va fi notat prin C1. It is not excluded that the other two chlorine anions coordinate apically to one copper ion each, and when the dimer is dissolved in water, they dissociate easily from the internal sphere of the coordinating compound with the formation of electrolytes of the 1:2 type, a condition that would contribute to water solubility of the copper dimer. According to the rules of chemical nomenclature, the common name of the compound, according to the structural formula above, can be {µ-chloro-[µ-2,6-bis(S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-N1,N4,N ́1 ,N ́4,µ-O]dicopper(II)}-dichloro-hydrate. For practical reasons the copper dimer used in the following will be denoted by C1.
Complexul C1 este cunoscut din Stadiul tehnicii, însă activitatea lui biologică nu a fost cercetată (Gerbeleu N.V., Revenko M.D., Zhovmir F.K., Kuyavskaia B.Ya. Binuclear compounds of copper(II) with ligands based on chalcogensemicarbazides and 2,6-diformyl-4-methylphenol. Zhurn. Neorg. Khimii (J. Inorg.Chem. USSR), 1986, 31, No. 8, pp. 2017-2022). Complex C1 is known from the state of the art, but its biological activity has not been investigated (Gerbeleu N.V., Revenko M.D., Zhovmir F.K., Kuyavskaia B.Ya. Binuclear compounds of copper(II) with ligands based on chalcogensemicarbazides and 2,6-diformyl- 4-methylphenol. Zhurn. Neorg. Khimii (J. Inorg. Chem. USSR), 1986, 31, No. 8, pp. 2017-2022).
[Cu2(µ-H2DF-T1)-µ-Cl]Cl2·H2O este solubil în apă şi formează soluţii de culoare verde-intensă la concentraţii relativ mici. Această hidrosolubilitate este una mai puţin obişnuită, deoarece dimerul analog de cupru cu tiosemicarbazona nealchilată, tot cu trei ioni de clor în componenţa sa, este insolubil în apă. [Cu2(µ-H2DF-T1)-µ-Cl]Cl2·H2O is soluble in water and forms deep-green colored solutions at relatively low concentrations. This water solubility is less common, because the copper analog dimer with non-alkylated thiosemicarbazone, also with three chlorine ions in its composition, is insoluble in water.
Rezultatul neevident al invenţiei este evidenţiat de faptul că pentru comparaţie au fost sintetizaţi compuşi coordinativi ai cuprului(II) cu liganzi structural foarte apropiaţi cu grupa funcţională carboxilică legată de inelul aromatic, care după analogie cu grupa sulfonică [11] pot forma săruri hidrosolubile a compuşilor coordinativi ai cuprului. Pentru aceasta au fost utilizaţi următorii liganzi polifuncţionali şi binucleabili - tiosemicarbazona acidului 3-formilsalicilic (H3FSA-T): The non-obvious result of the invention is highlighted by the fact that, for comparison, coordination compounds of copper(II) were synthesized with ligands structurally very close to the carboxylic functional group linked to the aromatic ring, which by analogy with the sulfonic group [11] can form water-soluble salts of the compounds copper coordinates. For this, the following polyfunctional and binucleable ligands were used - 3-formylsalicylic acid thiosemicarbazone (H3FSA-T):
şi S-metilizotiosemicarbazona acidului 3-formilsalicilic (H3FSA-T1): and 3-formylsalicylic acid S-methylisothiosemicarbazone (H3FSA-T1):
. .
În rezultatul condensării template în mediu bazic dintre H3FSA-T şi acidul 3-formilsalicilic, a fost sintetizată sare hidrosolubilă de potasiu a compusului mononuclear de cupru (în continuare C2). Sinteza s-a efectuat în esenţă analogic cu sinteza compusului de nichel(II), similar după structură şi hidrosolubilitate, descris anterior în literatura nonbrevet (Zhovmir F.K., Gerbeleu N.V. Template synthesis and properties of coordination compounds of nickel(II) with binucleating ligands based on thiosemicarbazide and 3-formylsalicylic acid. Zhurn. Neorg. Khimii (J. Inorg.Chem. USSR), 1984, 29, No. 9, pp. 2304-2308). Compusul C2 are următoarea formulă structurală: As a result of template condensation in basic medium between H3FSA-T and 3-formylsalicylic acid, the water-soluble potassium salt of the mononuclear copper compound (hereinafter C2) was synthesized. The synthesis was essentially analogous to the synthesis of the nickel(II) compound, similar in structure and water solubility, previously described in the non-patent literature (Zhovmir F.K., Gerbeleu N.V. Template synthesis and properties of coordination compounds of nickel(II) with binucleating ligands based on thiosemicarbazide and 3-formylsalicylic acid. Zhurn. Neorg. Khimii (J. Inorg. Chem. USSR), 1984, 29, No. 9, pp. 2304-2308). Compound C2 has the following structural formula:
. .
La interacţiunea H3FSA-T1 cu clorură de cupru(II) în mediu etanol-apă, în prezenţa unui exces mic de hidroxid de potasiu, s-a obţinut compusul mononuclear (în continuare C3), în care grupa carboxilă este ionizată, fapt ce conferă o hidrosolubilitate compusului C3: Upon the interaction of H3FSA-T1 with copper(II) chloride in ethanol-water medium, in the presence of a small excess of potassium hydroxide, the mononuclear compound (hereinafter C3) was obtained, in which the carboxyl group is ionized, a fact that confers a water solubility of the C3 compound:
. .
Ambii compuşi C2 şi C3, deşi sunt solubili în apă, în urma testărilor microbiologice au arătat că posedă o activitate antimicotică (antifungică) cu mult mai redusă faţă de C1, iar în unele cazuri chiar o lipsă a activităţii biologice. Both compounds C2 and C3, although they are soluble in water, after microbiological tests have shown that they possess a much lower antimycotic (antifungal) activity compared to C1, and in some cases even a lack of biological activity.
În calitate de microorganisme-test pentru evaluarea activităţii antimicotice au fost selectate tulpinile Candida albicans ATCC 10231, Candida parapsilosis ATCC 22019, Cryptococcus neoformans CECT 1043. Evaluarea activităţii antimicotice s-a efectuat in vitro prin metoda diluţiilor succesive duble, conform protocolului standard. The strains of Candida albicans ATCC 10231, Candida parapsilosis ATCC 22019, Cryptococcus neoformans CECT 1043 were selected as test microorganisms for the evaluation of the antifungal activity. The evaluation of the antifungal activity was performed in vitro by the method of double successive dilutions, according to the standard protocol.
După cum reiese din rezultatele testării activităţii antimicotice soluţiile apoase, puternic diluate, a dimerului de cupru selectat posedă o activitate antimicotică înaltă. Concentraţia minimă fungicidă fiind în jur de 4...8 µg/mL. Totodată, pentru comparaţie, compusul coordinativ al cuprului(II) din analogul proxim clorura de [diaqua-N4-alil-S-metilizotiosemicarbazidosalicilidenato(-)-cupru(II)] manifestă o activitate antifungicidă semnificativ mai mică de 7...8 ori faţă de Candida albicans ATCC 10231 [15]. As it appears from the results of the antimycotic activity testing, highly diluted aqueous solutions of the selected copper dimer possess a high antimycotic activity. The minimum fungicidal concentration being around 4...8 µg/mL. At the same time, for comparison, the coordinating compound of copper(II) from the proximate analogue chloride of [diaqua-N4-allyl-S-methylisothiosemicarbazidosalicylidenato(-)-copper(II)] exhibits a significantly lower antifungal activity 7...8 times against Candida albicans ATCC 10231 [15].
Din Stadiul tehnicii se cunoaşte că S-alchilarea tiosemicarbazidei poate diminua activitatea antimicrobiană a izotiosemicarbazonelor [6, 7, 12]. De aceea activitatea fungicidă a C1, care face parte din grupa de compuşi coordinativi cu izotiosemicarbazone, este una neaşteptată. It is known from the state of the art that S-alkylation of thiosemicarbazide can decrease the antimicrobial activity of isothiosemicarbazones [6, 7, 12]. That is why the fungicidal activity of C1, which is part of the group of coordinating compounds with isothiosemicarbazones, is unexpected.
Avantajele invenţiei constau în următoarele: The advantages of the invention consist of the following:
- compusul coordinativ binuclear de cupru cu bis(S-metilizotiosemicarbazona) 2,6-diformil-4-metilfenolului este solubil în apă - mediul biologic natural; - the binuclear coordination compound of copper with bis(S-methylisothiosemicarbazone) 2,6-diformyl-4-methylphenol is soluble in water - the natural biological environment;
- C1 posedă o activitate antimicotică la concentraţii minime fungicide de 2...8 µg/mL; - C1 possesses an antimycotic activity at minimum fungicidal concentrations of 2...8 µg/mL;
- sinteza compusului coordinativ este una relativ simplă şi se realizează din precursori accesibili comercial. - the synthesis of the coordinating compound is relatively simple and is made from commercially available precursors.
În concluzie din cercetările microbiologice rezultă că compusul binuclear de cupru C1 poate fi aplicat în farmaceutică sub formă de soluţii apoase diluate la combaterea diferitor micoze. In conclusion, the microbiological research shows that the binuclear copper compound C1 can be applied in pharmaceuticals in the form of diluted aqueous solutions to combat various mycoses.
Exemple de realizare a invenţiei Examples of realization of the invention
Exemplul 1: sinteza compusului C1: [Cu2(H2DF-T1)-µ-Cl]Cl2·H2O Example 1: synthesis of compound C1: [Cu2(H2DF-T1)-µ-Cl]Cl2·H2O
Ligandul precursor bis(S-metilizotiosemicarbazona) de 2,6-diformil-4-metilfenol (H3DF-T1) şi compusul de cupru C1 testat au fost descrişi anterior (Gerbeleu N.V., Revenko M.D., Zhovmir F.K., Kuyavskaia B.Ya. Binuclear compounds of copper(II) with ligands based on chalcogensemicarbazides and 2,6-diformyl-4-methylphenol. Zhurn. Neorg. Khimii (J. Inorg.Chem. USSR), 1986, 31, No. 8, pp. 2017-2022). Conform procedeului bine cunoscut a fost sintetizată hidroiodura de S-metilizotiosemicarbazidă prin alchilarea tiosemicarbazidei cu iodmetan în mediu de etanol. În continuare hidroiodura de izotiosemicarbazidă a fost condensată în mediu etanol-apă, în prezenţă de carbonat de sodiu, cu 2,6-diformil-4-metilfenol. The bis(S-methylisothiosemicarbazone) precursor ligand of 2,6-diformyl-4-methylphenol (H3DF-T1) and the copper compound C1 tested were previously described (Gerbeleu N.V., Revenko M.D., Zhovmir F.K., Kuyavskaia B.Ya. Binuclear compounds of copper(II) with ligands based on chalcogensemicarbazides and 2,6-diformyl-4-methylphenol. Zhurn. Neorg. Khimii (J. Inorg.Chem. USSR), 1986, 31, No. 8, pp. 2017-2022) . According to the well-known procedure, S-methylisothiosemicarbazide hydroiodide was synthesized by alkylating thiosemicarbazide with iodomethane in ethanol medium. Next, isothiosemicarbazide hydroiodide was condensed in ethanol-water medium, in the presence of sodium carbonate, with 2,6-diformyl-4-methylphenol.
Ligandul este insolubil în apă, solubil în DMSO sau DMF şi se caracterizează prin următoarele caracteristici. P.t. 208...211°C. The ligand is insoluble in water, soluble in DMSO or DMF and is characterized by the following characteristics. p.t. 208...211°C.
Benzile reprezentative în spectrul IR înregistrat cu spectrometrul FT-IR PerkinElmer Spectrum 100 (disc KBr, cm-1): 3484s, 3404s, asc, 3081s, 1636p, asc, 1607p, 1517fp, asc, 1299p, asc, 1016m, asc, 757p, asc, 691m, asc (unde s semnifică slab, m - mediu, p - puternic, fp - foarte puternic şi asc - ascuţit). Representative bands in the IR spectrum recorded with the PerkinElmer Spectrum 100 FT-IR spectrometer (KBr disk, cm-1): 3484s, 3404s, asc, 3081s, 1636p, asc, 1607p, 1517fp, asc, 1299p, asc, 1016m, asc, 757p , asc, 691m, asc (where s means weak, m - medium, p - strong, fp - very strong and asc - sharp).
Compusul coordinativ de cupru C1 s-a obţinut conform unui procedeu modificat: The coordinating copper compound C1 was obtained according to a modified procedure:
La suspensia de H3DF-T1, (1,70 g, 5 mmoli) în metanol (100 mL) se adaugă la temperatura camerei CuCl2·2H2O (1,70 g, 10 mmoli). Amestecul se agită magnetic timp de cca 15 min până dispare ligandul iniţial de culoare galbenă, apoi se încălzeşte la temperatura de 50...60°C timp de 0,5 ore. După răcire, peste 4...6 ore produsul cristalin verde se filtrează, se spală cu metanol, apoi cu eter şi se usucă la aer. Se obţin 2,86 g (97%) de produs cristalin (microace) de culoare verde. To the suspension of H3DF-T1, (1.70 g, 5 mmol) in methanol (100 mL) was added CuCl2·2H2O (1.70 g, 10 mmol) at room temperature. The mixture is magnetically stirred for about 15 min until the initial yellow ligand disappears, then it is heated to a temperature of 50...60°C for 0.5 hours. After cooling, after 4...6 hours, the green crystalline product is filtered, washed with methanol, then with ether and air-dried. 2.86 g (97%) of a green crystalline product (microneedles) are obtained.
Produsul (C1) este solubil în apă (cca 1%), DMSO sau DMF, în care formează soluţii limpezi de culoare verde-intens. Soluţiile apoase peste 24 ore încep foarte lent să capete o nuanţă nucărie fără a se forma un careva precipitat în decurs de 6 luni. The product (C1) is soluble in water (approx. 1%), DMSO or DMF, in which it forms clear deep-green solutions. Aqueous solutions after 24 hours very slowly start to take on a nutty shade without forming any precipitate within 6 months.
La păstrare în flacoane închise etanş, ferite de lumină, C1 este stabil cel puţin 3 ani de zile. When stored in tightly closed vials, protected from light, C1 is stable for at least 3 years.
Spectrul IR(disc KBr, cm-1): 3503s, 3419s, asc., 3300s, 2797m, 1555fp, asc, 1315p, asc, 1144p, asc, 904m, asc, 713m. IR spectrum (KBr disk, cm-1): 3503s, 3419s, asc., 3300s, 2797m, 1555fp, asc, 1315p, asc, 1144p, asc, 904m, asc, 713m.
Exemplul 2: sinteza compusului C2: K3[Cu((fsa)2T)]·4H2O Example 2: synthesis of the compound C2: K3[Cu((fsa)2T)]·4H2O
Ligandul precursor tiosemicarbazona acidului 3-formilsalicilic (H3FSA-T), p.t. 211°C, a fost descris anterior (Zhovmir F.K., Gerbeleu N.V. Template synthesis and properties of coordination compounds of nickel(II) with binucleating ligands based on thiosemicarbazide and 3-formylsalicylic acid. Zhurn. Neorg. Khimii (J. Inorg.Chem. USSR), 1984, 29, No. 9, pp. 2304-2308). The thiosemicarbazone precursor ligand of 3-formylsalicylic acid (H3FSA-T), m.p. 211°C, was previously described (Zhovmir F.K., Gerbeleu N.V. Template synthesis and properties of coordination compounds of nickel(II) with binucleating ligands based on thiosemicarbazide and 3-formylsalicylic acid. Zhurn. Neorg. Khimii (J. Inorg.Chem. USSR), 1984, 29, No. 9, pp. 2304-2308).
Spectrul IR(disc KBr, cm-1): 3677s, 3442m asc., 3287m, 3168p, 2974s, 2902s, 1663p (νasCOOH), 1611p, 1600p, 1549p, 1450m, 1412p, 1380m, 1225fp, 1151fp, 1108p, 1079p, 1064p, 946m, 754p, 702m, 672m asc. IR spectrum (KBr disk, cm-1): 3677s, 3442m asc., 3287m, 3168p, 2974s, 2902s, 1663p (νasCOOH), 1611p, 1600p, 1549p, 1450m, 1412p, 1380m, 1225fp, 1151 fp, 1108p, 1079p, 1064p, 946m, 754p, 702m, 672m asc.
Complexul hidrosolubil K3[Cu((fsa)2T)]·4H2O a fost sintetizat prin condensarea templată pe matrice de Cu(II) a H3FSA-T cu acidul 3-formilsalicilic (H2FSA) în mediu bazic puternic. Soluţia de CuCl2·2H2O (1,70 g, 10 mmol) în metanol (100 mL) se adaugă cu picătura la agitare magnetică la o soluţie de metanol-apă (7:3, 100 mL), încălzită la 50...60°C, care conţine H3FSA-T (2,50 g, ~10,1 mmol), H2FSA (2,00 g, ~12 mmol) şi KOH (12,0 g, ~214 mmol). După finalizarea adăugării se menţine temperatura suspensiei cristaline formate de culoare cafenie-roşie aproximativ 0,5 ore şi se lasă amestecul să se răcească pentru aproximativ 24 ore. Se filtrează precipitatul cristalin (microace) cafeniu-întunecat cu nuanţă roşie, se spală cu metanol, apoi cu eter dietilic şi se usucă la aer. Randamentul constituie 5,05...5,39g (79...84%). The water-soluble complex K3[Cu((fsa)2T)]·4H2O was synthesized by Cu(II) matrix-templated condensation of H3FSA-T with 3-formylsalicylic acid (H2FSA) in strong basic medium. The solution of CuCl2·2H2O (1.70 g, 10 mmol) in methanol (100 mL) is added dropwise under magnetic stirring to a solution of methanol-water (7:3, 100 mL), heated to 50...60 °C, containing H3FSA-T (2.50 g, ∼10.1 mmol), H2FSA (2.00 g, ∼12 mmol), and KOH (12.0 g, ∼214 mmol). After completion of the addition, the temperature of the brownish-red crystalline suspension formed is maintained for approximately 0.5 hours and the mixture is allowed to cool for approximately 24 hours. Filter the dark brownish-red crystalline precipitate (micro needles), wash with methanol, then with diethyl ether and dry in air. The yield is 5.05...5.39g (79...84%).
Produsul este solubil în apă, DMSO şi DMF, insolubil în etanol, acetonitril. Soluţiile apoase posedă o culoare cafenie-roş foarte intensă şi sunt stabile cel puţin o lună. The product is soluble in water, DMSO and DMF, insoluble in ethanol, acetonitrile. Aqueous solutions have a very intense brownish-red color and are stable for at least one month.
Rezultatele analizei elementale confirmă structura propusă: The results of the elemental analysis confirm the proposed structure:
găsit, %: Cu - 10,45; C - 31,22; H - 2,28; N - 6,70. found, %: With - 10.45; C - 31.22; H - 2.28; N - 6.70.
Pentru C17H16CuK3N3O10S For C17H16CuK3N3O10S
calculat, %: Cu - 10,00; C - 32,14; H - 2,54; N - 6,61. calculated, %: With - 10.00; C - 32.14; H - 2.54; N - 6.61.
Spectrul IR(disc KBr, cm-1): 3203m, f. larg, 1601fp, 1535fp, 1418p, 1374p, 1305p, 1222m asc, 1122p, 1083p, 1035m, 986m, 881sl asc, 870s, 830s, 798s, 745m. f. asc, 671s. IR spectrum (KBr disk, cm-1): 3203m, wide f., 1601fp, 1535fp, 1418p, 1374p, 1305p, 1222m asc, 1122p, 1083p, 1035m, 986m, 881sl asc, 870s, 830s, 798s, 74 5 m. f. asc, 671s.
Exemplul 3: sinteza compusului C3: K[Cu(HFSA-T1)Cl]·2H2O Example 3: synthesis of the compound C3: K[Cu(HFSA-T1)Cl]·2H2O
Ligandul precursor S-metilizotiosemicarbazona acidului 3-formilsalicilic- hemihidrat (H3FSA-T1·0,5H2O) a fost obţinut conform procedeului descris (Zhovmir F.K., Gerbeleu N.V. Template synthesis and properties of coordination compounds of nickel(II) with binucleating ligands based on thiosemicarbazide and 3-formylsalicylic acid. Zhurn. Neorg. Khimii (J. Inorg.Chem. USSR), 1984, 29, No. 9, pp. 2304-2308). The precursor ligand S-methylisothiosemicarbazone of 3-formylsalicylic acid hemihydrate (H3FSA-T1·0.5H2O) was obtained according to the described procedure (Zhovmir F.K., Gerbeleu N.V. Template synthesis and properties of coordination compounds of nickel(II) with binucleating ligands based on thiosemicarbazide) and 3-formylsalicylic acid. Zhurn. Neorg. Khimii (J. Inorg. Chem. USSR), 1984, 29, No. 9, pp. 2304-2308).
Spectrul IR(disc KBr, cm-1): 3541s, 3480s, 3241m, 2888m, 2681m, 1653p (νasCOOH), 1628p, 1615p, 1598p, 1553m, 1475p asc, 1432fp asc, 1393fp asc, 1353m, 1289fp, 1188m, 1141 asc, 1066m, 956s, 940s, 842p asc, 811p, 762m asc, 737s, 664s asc. IR spectrum (KBr disc, cm-1): 3541s, 3480s, 3241m, 2888m, 2681m, 1653p (νasCOOH), 1628p, 1615p, 1598p, 1553m, 1475p asc, 1432fp asc, 1393fp asc, 1353m, 1 289fp, 1188m, 1141 asc, 1066m, 956s, 940s, 842p asc, 811p, 762m asc, 737s, 664s asc.
Complexul de cupru C3 s-a obţinut conform următorului procedeu: The C3 copper complex was obtained according to the following procedure:
Soluţia de CuCl2·2H2O (0,87 g, 5 mmol) în etanol (30 mL) se adaugă cu picătura la agitare magnetică la o soluţie de etanol-apă (20:8, 28 mL), la temperatura camerei, care conţine H3FSA-T1·0,5H2O (1,31 g, ~10,1 mmol) şi KOH (1,12 g, ~20 mmol). După finalizarea adăugării se menţine aproximativ o oră agitarea suspensiei cristaline formate de culoare verde-kaki. Se filtrează precipitatul cristalin (microace) verde-kaki, se spală cu etanol, apoi cu eter dietilic şi se usucă la aer. După uscare se obţine 1,10g (54%) de praf cristalin verde-baltă cu nuanţă surie. The solution of CuCl2·2H2O (0.87 g, 5 mmol) in ethanol (30 mL) is added dropwise under magnetic stirring to a solution of ethanol-water (20:8, 28 mL) at room temperature containing H3FSA -T1·0.5H2O (1.31 g, ~10.1 mmol) and KOH (1.12 g, ~20 mmol). After the addition is complete, the stirring of the green-khaki crystalline suspension is maintained for approximately one hour. The khaki-green crystalline precipitate (micro needles) is filtered, washed with ethanol, then with diethyl ether and air-dried. After drying, 1.10g (54%) of a muddy-green crystalline powder with a swarthy shade is obtained.
Produsul este solubil în apă, DMSO sau DMF, insolubil în etanol, acetonitril. Soluţiile apoase nu sunt stabile - peste câteva zile din ele cade un precipitat sur greu solubil în DMF sau DMSO, probabil că are loc o reacţie de polimerizare coordinativă. The product is soluble in water, DMSO or DMF, insoluble in ethanol, acetonitrile. Aqueous solutions are not stable - after a few days, a heavy acid precipitate soluble in DMF or DMSO falls from them, probably a coordination polymerization reaction takes place.
Găsit, %: Cu - 15,35; C - 29,59; H - 3,06; N - 9,24, 9,55. Found, %: With - 15.35; C - 29.59; H - 3.06; N - 9.24, 9.55.
Pentru C10H13ClCuKN3O5S calculat, %: Cu - 14,94; C - 28,23; H - 3,08; N - 9,87. For calculated C10H13ClCuKN3O5S, %: Cu - 14.94; C - 28.23; H - 3.08; N - 9.87.
Spectrul IR(disc KBr, cm-1): 1604m, 1590m, 1540p, 1487fp, 1418p, 1357p, 1283m, 1133m, 916m asc, 870m asc, 754m asc, 673m. IR spectrum (KBr disk, cm-1): 1604m, 1590m, 1540p, 1487fp, 1418p, 1357p, 1283m, 1133m, 916m asc, 870m asc, 754m asc, 673m.
Exemplul 4: evaluarea activităţii antibacteriene a compuşilor Example 4: evaluation of the antibacterial activity of the compounds
Tulpinile de microorganisme selectate pentru testarea microbiologică au fost furnizate de Colecţia Naţională de Microorganisme Patogene. Au fost utilizate următoarele tulpini de fungi: Candida albicans ATCC 10231, Candida parapsilosis ATCC 22019, Cryptococcus neoformans CECT 1043. The strains of microorganisms selected for microbiological testing were provided by the National Collection of Pathogenic Microorganisms. The following strains of fungi were used: Candida albicans ATCC 10231, Candida parapsilosis ATCC 22019, Cryptococcus neoformans CECT 1043.
Evaluarea activităţii antifungice s-a efectuat in vitro prin metoda diluţiilor succesive duble, conform protocolului standard, care constă în aceea că la etapa iniţială se iau şiruri de 10 eprubete în care se introduc câte 1 mL de mediu nutritiv lichid Sabouraud (pH 6,8). Ulterior se picură 1 mL de preparat în prima eprubetă (din şirul de 10 eprubete). Se pipetează amestecul obţinut, după care 1 mL din acesta se transferă în eprubeta următoare, astfel că procedura se repetă până la eprubeta nr.10 a şirului. În aşa mod, concentraţia preparatului iniţial se micşorează de 2 ori în fiecare eprubetă următoare. În acelaşi timp, se prepară culturi de 24 ore de fung-test. Se prepară iniţial suspensii de culturi de fungi cu densităţile optice (D.O.) de 2,0 în conformitate cu indicele McFarland. Ulterior, se transferă 1 mL de suspensie de fung obţinută într-o eprubetă ce conţine 9 mL de apă distilată sterilă. Se amestecă conţinutul obţinut, după care se transferă 1 mL în eprubeta cu nr.2 din şirul de 5 eprubete ce conţin câte 9 mL de apă distilată sterilă. Din eprubeta cu nr.5 a şirului se ia câte 0,1 mL de suspensie de fung, ceea ce reprezintă doza de însămânţare, şi se adaugă în fiecare eprubetă care conţine preparatele titrate. Ulterior, eprubetele cu preparatele titrate, în care s-au introdus dozele de însămânţare ale fungilor, se plasează în termostat la temperatura de 35°C timp de 24 ore. A 2-a zi se analizează preliminar rezultatele obţinute. Ultima eprubetă din şir în care nu se atestă o creştere vizibilă a fungului se consideră a fi concentraţia minimă inhibitorie (CMI) a preparatului. Pentru aprecierea concentraţiei minime fungicide (CMF), conţinutul eprubetelor cu CMI şi a eprubetelor cu concentraţii mai înalte ale preparatelor se însămânţează pe agarul peptonat solid din cutiile Petri cu ajutorul ansei bacteriologice. Cutiile însămânţate se plasează în termostat la temperatura de 35°C pentru 24 ore. Concentraţia preparatelor care nu permit creşterea nici a unei colonii de fung se consideră a fi concentraţia minimă fungicidă a compusului. The evaluation of the antifungal activity was carried out in vitro by the method of double successive dilutions, according to the standard protocol, which consists in the fact that at the initial stage rows of 10 test tubes are taken in which 1 mL of Sabouraud liquid nutrient medium (pH 6.8) is introduced. Afterwards, drop 1 mL of the preparation into the first test tube (from the row of 10 test tubes). The obtained mixture is pipetted, after which 1 mL of it is transferred to the next test tube, so the procedure is repeated up to test tube no. 10 of the row. In this way, the concentration of the initial preparation is reduced by 2 times in each subsequent test tube. At the same time, 24-hour fungal test cultures are prepared. Initially, suspensions of fungal cultures with optical densities (OD) of 2.0 according to the McFarland index are prepared. Afterwards, transfer 1 mL of the fungal suspension obtained into a test tube containing 9 mL of sterile distilled water. Mix the content obtained, after which transfer 1 mL to the test tube with no. 2 from the row of 5 test tubes containing 9 mL of sterile distilled water. Take 0.1 mL of the mushroom suspension from test tube no. 5 of the row, which represents the seeding dose, and add it to each test tube containing the titrated preparations. Afterwards, the test tubes with the titrated preparations, in which the seeding doses of the fungi were introduced, are placed in the thermostat at a temperature of 35°C for 24 hours. On the 2nd day, the obtained results are preliminarily analyzed. The last test tube in the row in which there is no visible growth of the fungus is considered to be the minimum inhibitory concentration (MIC) of the preparation. To assess the minimum fungicidal concentration (MCF), the contents of the test tubes with MIC and of the test tubes with higher concentrations of the preparations are seeded on the solid peptone agar in the Petri dishes with the help of the bacteriological loop. The seeded boxes are placed in the thermostat at a temperature of 35°C for 24 hours. The concentration of preparations that do not allow the growth of any fungus colony is considered to be the minimum fungicidal concentration of the compound.
Pentru evaluare s-au pregătit soluţii proaspete de 0,5% ale compuşilor sintetizaţi C1, C2 şi C3 în apă distilată. Fresh 0.5% solutions of the synthesized compounds C1, C2 and C3 in distilled water were prepared for the evaluation.
Rezultatele testării activităţii antimicotice (antifungice) exprimate în valorile concentraţiilor minime inhibitorii (CMI) şi concentraţiilor minime fungicide (CMF) în µg/mL pentru dimerul de cupru revendicat C1 şi compuşii de referinţă sintetizaţi (C2, C3,) sunt prezentate în tabelul de mai jos. Totodată pentru comparaţie în tabel au fost incluse datele din Stadiul tehnicii privind activitatea antifungică a analogului proxim structural C4 - compusul [Cu(L)(H2O)2]Cl, (notat ca (1) în [15]), unde HL reprezintă N4-alil-S-metilizotiosemicarbazona aldehidei salicilice. The results of antimycotic (antifungal) activity testing expressed in minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (CMF) values in µg/mL for the claimed copper dimer C1 and the synthesized reference compounds (C2, C3,) are presented in the table below down. At the same time, for comparison in the table, the data from the State of the art regarding the antifungal activity of the structural proximate analogue C4 - the compound [Cu(L)(H2O)2]Cl, (noted as (1) in [15]), where HL represents N4, were included -allyl-S-methylisothiosemicarbazone of salicylic aldehyde.
Tabel Table
Activitatea antimicotică a compuşilor testaţi (concentraţiile minime sunt date în µg/mL) Antimycotic activity of the tested compounds (minimum concentrations are given in µg/mL)
Tulpina C1 C2 C3 C4 ([15]) CMI CMF CMI CMF CMI CMF CMI CMF Candida albicans ATCC 10231 4 8 - - 31 63 30 60 Candida parapsilosis ATCC 22019 4 8 - - 125 250 - - Cryptococcus neoformans CECT 1043 2 4 63 125 31 63 - - Strain C1 C2 C3 C4 ([15]) CMI CMF CMI CMF CMI CMF CMI CMF Candida albicans ATCC 10231 4 8 - - 31 63 30 60 Candida parapsilosis ATCC 22019 4 8 - - 125 250 - - Cryptococcus neoformans CECT 1043 2 4 63 125 31 63 - -
Din datele prezentate în tabel rezultă că C1 posedă o activitate antimicotică superioară, fiind aproximativ de 10 ori mai mare, comparativ cu alţi complecşi hidrosolubili ai cuprului(II) cu S-metilizotiosemicarbazone hidroxiaromatice (C2, C3) sau comparativ cu C4 din analogul proxim. From the data presented in the table, it follows that C1 possesses a superior antimycotic activity, being approximately 10 times higher, compared to other water-soluble complexes of copper(II) with hydroxyaromatic S-methylisothiosemicarbazones (C2, C3) or compared to C4 from the proximate analogue.
Compusul C1, fiind solubil în dimetilsulfoxid (DMSO), poate fi utilizat în cazuri speciale şi sub formă de soluţii în DMSO pentru diluţia ulterioară cu apă, totodată în soluţiile apoase foarte diluate orice interferenţă a DMSO va fi neglijabilă. Compound C1, being soluble in dimethylsulfoxide (DMSO), can be used in special cases and in the form of solutions in DMSO for further dilution with water, at the same time in highly diluted aqueous solutions any interference of DMSO will be negligible.
În concluzie, compusul dimer de cupru cu formula [Cu2(µ-H2DF-T1)-µ-Cl]Cl2·H2O (C1) poate fi aplicat în farmaceutică sub formă de soluţii apoase în concentraţii de ordinul miimelor de procent (0,001% = 10µg/mL), pentru combaterea diferitor micoze, de exemplu, a candidozelor. In conclusion, the copper dimer compound with the formula [Cu2(µ-H2DF-T1)-µ-Cl]Cl2·H2O (C1) can be applied in pharmaceuticals in the form of aqueous solutions in concentrations of the order of thousands of percent (0.001% = 10µg/mL), for combating different mycoses, for example, candidiasis.
1. Lobana T.S., Sharma R., Bawa G., Khanna S. Bonding and structure trends of thiosemicarbazone derivatives of metals - An overview. Coordination Chemistry Revs, 253 (7), 2009, p. 977-1055 1. Lobana T.S., Sharma R., Bawa G., Khanna S. Bonding and structure trends of thiosemicarbazone derivatives of metals - An overview. Coordination Chemistry Revs, 253 (7), 2009, pp. 977-1055
2. Pelosi G. Thiosemicarbazone Metal Complexes: From Structure to Activity. The Open Crystallography Journal, 2010, vol. 3, p. 16-28 2. Pelosi G. Thiosemicarbazone Metal Complexes: From Structure to Activity. The Open Crystallography Journal, 2010, vol 3, pp 16-28
3. West D.X., Liberta A.E., Padhye S.B., Chikate R.C., Sonawane P.B., Kumbhar A.S., Yerande R.G. Thiosemicarbazone complexes of copper(II): structural and biological studies. Coordination Chemistry Revs, vol. 123, 1993, p. 49-71 3. West D.X., Liberta A.E., Padhye S.B., Chikate R.C., Sonawane P.B., Kumbhar A.S., Yerande R.G. Thiosemicarbazone complexes of copper(II): structural and biological studies. Coordination Chemistry Revs, vol 123, 1993, pp 49-71
4. West D.X., Yang Y., Klein T.L., Goldberg K.I., Liberta A.E., Valdes-Martinez J., Toscano R.A. Binuclear copper(II) complexes of 2-hydroxyacetophenone 4N-substituted thiosemicarbazones. Polyhedron, 1995, vol. 14 (12), p. 1681-1693 4. West D.X., Yang Y., Klein T.L., Goldberg K.I., Liberta A.E., Valdes-Martinez J., Toscano R.A. Binuclear copper(II) complexes of 2-hydroxyacetophenone 4N-substituted thiosemicarbazones. Polyhedron, 1995, vol. 14 (12), pp. 1681-1693
5. Naik A.D., Revankar V.K. Exchange coupled dicopper(II) complexes of thiosemicarbazones. Indian J. Chem., vol. 43A, 2004, p.1447-1453 5. Naik A.D., Revankar V.K. Exchange coupled dicopper(II) complexes of thiosemicarbazones. Indian J. Chem., vol. 43A, 2004, p.1447-1453
6. Schulze W., Gutsche W., Wohlrabe K., Fleck W., Tresselt D. Zur Synthese und biologischen Wirksamkeit von Analogen des 1,4-Benzochinon-guanylhydrazon-thiosemicarbazons. Farmazie, 1985, 40(8), p. 540-541 6. Schulze W., Gutsche W., Wohlrabe K., Fleck W., Tresselt D. Zur Synthese und biologischen Wirklichkeit von Analogen des 1,4-Benzoquinone-guanylhydrazone-thiosemicarbazons. Pharmacy, 1985, 40(8), pp. 540-541
7. Kitaev Iu. P., Buzikin B.I. Hydrazones (in Russian). Moscow, Nauka, 1974, p. 383 7. Kitaev Iu. P., Buzikin B.I. Hydrazones (in Russian). Moscow, Nauka, 1974, p. 383
8. Gulea A., Pourier D., Roy J., Stavila V., Bulimestru I., Ţapcov V., Bîrcă M., Popovschi L. In vitro antileukemia, antibacterial and antifungal activities of some 3d metal complexes: Chemical synthesis and structure-activity relationships. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, 2008, 23(6), p. 806-818 8. Gulea A., Pourier D., Roy J., Stavila V., Bulimestru I., Ţapcov V., Bîrcă M., Popovschi L. In vitro antileukemia, antibacterial and antifungal activities of some 3d metal complexes: Chemical synthesis and structure-activity relationships. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, 2008, 23(6), p. 806-818
9. Zaltariov M.F., Hammerstad M., Arabshahi H.L., Jovanovic K., Richter K.W., Cazacu M., Shova S., Balan M., Andersen N.H., Radulovic S., Reynisson J., Andersson K.K. and Arion V.B. New Iminodiacetate-Thiosemicarbazone Hybrids and Their Copper(II) Complexes Are Potential Ribonucleotide Reductase R2 Inhibitors with High Antiproliferative Activity. Inorganic Chemistry, 2017, 56 (6), p. 3532-3549 9. Zaltariov M.F., Hammerstad M., Arabshahi H.L., Jovanovic K., Richter K.W., Cazacu M., Shova S., Balan M., Andersen N.H., Radulovic S., Reynisson J., Andersson K.K. and Arion V.B. New Iminodiacetate-Thiosemicarbazone Hybrids and Their Copper(II) Complexes Are Potential Ribonucleotide Reductase R2 Inhibitors with High Antiproliferative Activity. Inorganic Chemistry, 2017, 56 (6), p. 3532-3549
10. Shleahov A.N., Malinovskii T.I., Shova S.G., Burdenko T.A., Simonova L.L. Antimicrobial activity of Fe3+ complexes with S-alkylisothiosemicarbazones of substituted salicylic aldehydes (In Russian). Khimiko-Farmatzevticheskii Zhurnal (Soviet Chemical Pharmaceutical Journal), 1984, vol. 18 (12), p.1464-1466 10. Shleahov A.N., Malinovskii T.I., Shova S.G., Burdenko T.A., Simonova L.L. Antimicrobial activity of Fe3+ complexes with S-alkylisothiosemicarbazones of substituted salicylic aldehydes (In Russian). Khimiko-Farmatzevticheskii Zhurnal (Soviet Chemical Pharmaceutical Journal), 1984, vol. 18 (12), p.1464-1466
11. Hosseini-Yazdi S., Mirzaahmadi A., Khandar A.A., Eigner V., Dušek M., Lotfipour F., Mahdavi M., Soltani S., Dehghan G. Synthesis, characterization and in vitro biological activities of new water-soluble copper(II), zinc(II), and nickel(II) complexes with sulfonato-substituted Schiff base ligand. Inorganica Chimica Acta, 458, 2017, p. 171-180 11. Hosseini-Yazdi S., Mirzaahmadi A., Khandar A.A., Eigner V., Dušek M., Lotfipour F., Mahdavi M., Soltani S., Dehghan G. Synthesis, characterization and in vitro biological activities of new water- soluble copper(II), zinc(II), and nickel(II) complexes with sulfonato-substituted Schiff base ligand. Inorganica Chimica Acta, 458, 2017, p. 171-180
12. Ohui K., Afanasenko E., Bacher F., Ting R., Zafar A., BlancoCabra N., Torrents E., Domotor O., May N.V., Darvasiova D., Enyedy E.A., Popovic-Bijelic A.D., Reynisson J., Rapta P., Babak M., Pastorin G. and Arion V.B. New Water-Soluble Copper(II) Complexes with Morpholine-Thiosemicarbazone Hybrids: Insights into the Anticancer and Antibacterial Mode of Action. Journal of Medicinal Chemistry, 03 decembrie 2018, p. 512-530 12. Ohui K., Afanasenko E., Bacher F., Ting R., Zafar A., BlancoCabra N., Torrents E., Domotor O., May N.V., Darvasiova D., Enyedy E.A., Popovic-Bijelic A.D., Reynisson J., Rapta P., Babak M., Pastorin G. and Arion V.B. New Water-Soluble Copper(II) Complexes with Morpholine-Thiosemicarbazone Hybrids: Insights into the Anticancer and Antibacterial Mode of Action. Journal of Medicinal Chemistry, 03 December 2018, p. 512-530
13. MD 4402 B1 2016.02.29 13. MD 4402 B1 2016.02.29
14. Usataia I., Graur V., Tsapcov V., Vasîlca M., Bălan G., Burduniuc O., Gulea A. Antibacterial and antifungal activities or iron(III), cobalt(III), nickel(II) and copper(II) coordination compounds with 3,5-dibromosalicylaldehyde 4-allyl-S-metylizothiosemicarbazone. International Scientific Conference on Microbial Biotechnology (4th Edition). Chişinău, Moldova, 11-12 octombrie, 2018, pag. 57-58 14. Usataia I., Graur V., Tsapcov V., Vasîlca M., Bălan G., Burduniuc O., Gulea A. Antibacterial and antifungal activities or iron(III), cobalt(III), nickel(II) and copper (II) coordination compounds with 3,5-dibromosalicylaldehyde 4-allyl-S-metylisothiosemicarbazone. International Scientific Conference on Microbial Biotechnology (4th Edition). Chisinau, Moldova, October 11-12, 2018, page 57-58
15. Pahontu E., Usataia I., Graur V., Chumakov Y., Petrenko P., Gudumac V. and Gulea A. Synthesis, characterization, crystal structure of novel Cu(II), Co(III), Fe(III) and Cr(III) complexes with 2-hydroxybenzaldehyde-4-allyl-S-methylisothiosemicarbazone: Antimicrobial, antioxidant and in vitro antiproliferative activity. Applied Organometallic Chemistry (published on-line by John Wiley & Sons, Ltd), 2018; e4544 15. Pahontu E., Usataia I., Graur V., Chumakov Y., Petrenko P., Gudumac V. and Gulea A. Synthesis, characterization, crystal structure of novel Cu(II), Co(III), Fe(III ) and Cr(III) complexes with 2-hydroxybenzaldehyde-4-allyl-S-methylisothiosemicarbazone: Antimicrobial, antioxidant and in vitro antiproliferative activity. Applied Organometallic Chemistry (published online by John Wiley & Sons, Ltd), 2018; e4544
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDA20190027A MD4696C1 (en) | 2019-04-04 | 2019-04-04 | Water-soluble compound 2,6-bis(S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-trichloro-dicopper-hydrate for use as an antifungal agent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDA20190027A MD4696C1 (en) | 2019-04-04 | 2019-04-04 | Water-soluble compound 2,6-bis(S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-trichloro-dicopper-hydrate for use as an antifungal agent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD4696B1 MD4696B1 (en) | 2020-05-31 |
| MD4696C1 true MD4696C1 (en) | 2021-02-28 |
Family
ID=70846644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDA20190027A MD4696C1 (en) | 2019-04-04 | 2019-04-04 | Water-soluble compound 2,6-bis(S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-trichloro-dicopper-hydrate for use as an antifungal agent |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD4696C1 (en) |
-
2019
- 2019-04-04 MD MDA20190027A patent/MD4696C1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD4696B1 (en) | 2020-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Loginova et al. | Metal complexes as promising agents for biomedical applications | |
| Zhang et al. | Main group bismuth (III), gallium (III) and diorganotin (IV) complexes derived from bis (2-acetylpyrazine) thiocarbonohydrazone: synthesis, crystal structures and biological evaluation | |
| Pahontu et al. | Synthesis, characterization, crystal structure of novel Cu (II), Co (III), Fe (III) and Cr (III) complexes with 2‐hydroxybenzaldehyde‐4‐allyl‐S‐methylisothiosemicarbazone: Antimicrobial, antioxidant and in vitro antiproliferative activity | |
| Bacchi et al. | Antimicrobial and mutagenic activity of some carbono-and thiocarbonohydrazone ligands and their copper (II), iron (II) and zinc (II) complexes | |
| Adeyemi et al. | Synthesis, characterization and biological activities of organotin (IV) diallyldithiocarbamate complexes | |
| Rauf et al. | Synthesis, spectroscopic characterization, DFT optimization and biological activities of Schiff bases and their metal (II) complexes | |
| Olar et al. | N, N-dimethylbiguanide complexes displaying low cytotoxicity as potential large spectrum antimicrobial agents | |
| Olar et al. | Prospects for new antimicrobials based on N, N-dimethylbiguanide complexes as effective agents on both planktonic and adhered microbial strains | |
| Joksimović et al. | Synthesis, characterization, biological activity, DNA and BSA binding study: novel copper (II) complexes with 2-hydroxy-4-aryl-4-oxo-2-butenoate | |
| Gaëlle et al. | Synthesis, characterization and antimicrobial properties of cobalt (II) and cobalt (III) complexes derived from 1, 10-phenanthroline with nitrate and azide co-ligands | |
| Indoria et al. | Synthesis, spectroscopy, structures and antimicrobial activity of mixed-ligand zinc (II) complexes of 5-nitro-salicylaldehyde thiosemicarbazones | |
| Lobana et al. | Di-2-pyridylketone-N1-substituted thiosemicarbazone derivatives of copper (II): Biosafe antimicrobial potential and high anticancer activity against immortalized L6 rat skeletal muscle cells | |
| Lobana et al. | Synthesis and structures of 5-nitro-salicylaldehyde thiosemicarb-azonates of copper (ii): molecular spectroscopy, ESI-mass studies, antimicrobial activity and cytotoxicity | |
| Çeşme | 2-Aminophenol-based ligands and Cu (II) complexes: Synthesis, characterization, X-ray structure, thermal and electrochemical properties, and in vitro biological evaluation, ADMET study and molecular docking simulation | |
| Đurić et al. | Silver (I) complexes with 1, 10-phenanthroline-based ligands: The influence of epoxide function on the complex structure and biological activity | |
| Uvarova et al. | Antiproliferative and antimycobacterial effects of mononuclear palladium (II) complexes with N-heterocyclic ligands | |
| Lustri et al. | Spectroscopic characterization and biological studies in vitro of a new silver complex with furosemide: Prospective of application as an antimicrobial agent | |
| El-Saied et al. | Preparation, Characterization and Antimicrobial Activities of N'-((3-(hydroxyimino) butan-2-ylidene)-2 (phenylamino) acetohydrazide and Its Metal Complexes | |
| Kalia et al. | Antimicrobial and toxicological studies of some metal complexes of 4-methylpiperazine-1-carbodithioate and phenanthroline mixed ligands | |
| Pontoriero et al. | Synthesis, characterization and biological studies of a cobalt (III) complex of sulfathiazole | |
| MD4696C1 (en) | Water-soluble compound 2,6-bis(S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-trichloro-dicopper-hydrate for use as an antifungal agent | |
| El-Sayed et al. | Synthesis, characterization of Lanthanum mixed ligand complexes based on benzimidazole derivative and the effect of the added ligand on the antimicrobial, and anticancer activities | |
| MD4687C1 (en) | Water-soluble compound 2,6-bis(S-methylisothiosemicarbazidomethylidene)-4-methylphenolato-trichloro-dicopper-hydrate for use as a selective pharmaceutical agent against Gram-positive bacteria | |
| Shahid et al. | Spectral characterization, crystal structures and biological activities of iminodiacetate ternary complexes | |
| Antonijević-Nikolić et al. | Preparation, characterisation and study of in vitro biologically active azamacrocyclic Cu (II) dicarboxylate complexes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG4A | Patent for invention issued | ||
| TC4A | Change of name of proprietor (patent for invention) |
Owner name: INSTITUTIA PUBLICA UNIVERSITATEA DE STAT DIN MOLDOVA, MD STR. A. MATEEVICI NR. 60, MD-2009, CHISINAU, REPUBLICA MOLDOVA Free format text: PREVIOUS NAME OF PROPRIETOR: INSTITUTUL DE CHIMIE, MINISTERUL EDUCATIEI, CULTURII SI CERCETARII, MD; UNIVERSITATEA DE STAT DIN MOLDOVA, MD |
|
| KA4A | Patent for invention lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration) | ||
| MM4A | Patent for invention definitely lapsed due to non-payment of fees |