LV14787B - Augu ekstraktu aerosols sublingvālai lietošanai un tā pagatavošanas metode - Google Patents

Description

IZGUDROJUMA APRAKSTS

Tehnikas joma

Izgudrojums attiecas uz uztura bagātinātāja ražošanu, konkrēti, uz aerosolu mutes dobumam ar antimikrobiālu un imūnstimulējošu iedarbību un tā pagatavošanas paņēmieniem.

Tehnikas līmenis

Akūtas respiratorās un kakla infekcijas pieder pie visizplatītākajām slimībām pasaulē.

Ir zināmi patogēnie un nosacīti patogēnie mikroorganismi, kas var pārejoši pastāvēt vesela cilvēka kaklā, jo normālā mikroflorā nomāc to aktivitāti. Patogēnie mikroorganismi ir bīstami vienmēr. Gadījumos, kad organisma imūnsistēma tiek nomākta, piemēram, vīrusu infekciju dēļ, nosacīti patogēnie mikroorganismi pārtop par patogēniem un „palaiž” infekcijas procesu kaklā. Tādēļ akūtās respiratorās vīrusu slimības, t.sk. gripa, ļoti bieži izraisa kakla slimības.

Kakla slimības nevar uzskatīt tikai par lokālu procesu, kas skar rīkli, mandeles, balseni. Reimatoīdais artrīts, glomerulonerits, meningīts un vesela virkne citu slimību varētu būt kakla infekciju sekas. Tas nozīmē, ka arī gadījumos, kad infekciozais process prevalē it kā lokāli, t.i. rīklē, jādomā par organisma aizsargspēju sistēmisku nostiprināšanu.

Cīņai ar infekcijām ir pieejams diezgan plašs pretvīrusu zāļu un antibiotiķu klāsts. Tomēr visās valstīs starp dabas vielām tiek meklētas alternatīvas ķīmiski sintezētiem medikamentiem, jo:

- akūtas respiratorās un kakla infekcijas raksturojas ar ļoti lielu izplatību slimnieku skaitā un ģeogrāfijas ziņā,

- zāles ir dārgas,

- pastāv ļoti daudz baktēriju un vīrusu veidu un tie ātri izmainās mutāciju rezultātā,

- ir labi zināms zāļu rezistences fenomens (kad zāles nedarbojas),

- vakcinācija dod efektu tikai pēc piekoši ilgstoša laika perioda.

Fitoterapija ir spējīga nodrošināt vienlaikus antimikrobiālo, antivirālo un imūnstimulējošo iedarbību (Coutinho H. D. et al. BMC Complement Altem Med.,

2009,9,13) ar zemāku, kā zālēm, blakņu risku (Vajdy M., Expert Opin Biol Ther., 2011,11,1501-13). Tā ir pieradīta ozolzīļu ekstraktu spēja nomākt Klebsiella pneumoniae Staphylococcu aureus, Pseudomonas aeroginosa (Mohebi R. et al. Roum. Arch. Microbiol. Immunol., 2011,70,4,149). Pelargonium sidoides, Nigella sativa un Phyllanthus niruri ekstrakti ir efektīvi pie tonsilo-faringīta (Bereznoy V. V. et al. Altem.Ther. Health. Med., 2003,9,5,68; Dirjomuljono M. et.al. Int. J. Clin. Pharmacol.Ther., 2008,46,6,295). Augu vielām piemīt arī pretvīrusu iedarbība, piemēram, melnā plūškoka augļu ekstrakts uzrādīja augstu efektivitāti klīniskajos apstākļos attiecībā pret A un B gripa vīrusiem (Krawitz C. et al. BMC Complement. Altem. Med., 2011,Feb 25,11 ). Saaukstēšanās un gripas simptomi ātri pāriet, iekšķīgi lietojot šķidro kompozīciju no melno piparu, žeņ-šeņa, kanēļa, safrāna ekstraktiem (W02011034528(A1)-20111-03-24). Patentu pieteikumos figurē augiadaptogēni, piemēram, žeņ-šeņ un zelta sakne (patenta pieteikums AU20100310406 20101022), Andrographolide ģints augi (patenta pieteikums US2008011486320080505), kā arī sēnes, piemēram, korejas Phellinus linteus (patenta pieteikums KR20030076396 20031030). Ķīnas tautas medicīnas augu ekstraktu kompozīcija kakla slimību āpstēšanai satur 10 augus (patenta pieteikums CN20101502288 20100928), bet pretsaaukstēšanās formula - 26 ingredientus (patenta pieteikums KR20020069954 20021112).

Cīņai ar akūtām respiratorām un kakla infekcijām visbiežāk izmanto greipfrūta sēklas, ehinacejas un propolisa ekstraktus. Greipfrūta (Citrus paradīsi) ekstraktam piemīt antibakteriālā un antifungāla iedarbība (Cyetnic Z. et al. Acta Pharm., 2004,54,3,243), kura ir sevišķi liela ekstraktam uz glicerīna bāzes ( Giamperi L. et al. Fitoterapia, 2004,75,2,221). Greipfrūta sēklu ekstrakts uzrāda antimikrobiālu iedarbību uz plašu gramnegatīvo un gram-pozitīvo organismu klāstu atšķaidījumos, kas ir droši. Sis ekstrakts noārda baktēriju šūnu apvalku jau pēc 15. kontakta minūtēm (Heggers J. P. et al. J. Altem. Complement Med., 2002,8,3,333).

Propoliss ir pēc sastāva sarežģīta sveķiem vai līmei līdzīga viela, kas palīdz aizsargāt bišu saimes ligzdu no kaitīgiem mikroorganismiem. Medicīnā propoliss ir pazīstams ar savu antimikrobiālo (Elbaz G. A., Elsayad I. I. Oral Health. Prev. Dent., 2012,10,2,155), pretiekaisuma (Abdulrahman M. et al. Pediatr. Hematol. Oncol., 2012,29,3,285) un imūnstimulējošo (Bratter C. et al. Forsch. Komplementarmed., 1999,6,5,256) iedarbību. Propolisa antimikrobiālo un pretiekaisuma aktivitāti saista ar polifenoliem, ar kuriem sevišķi bagāts propolisa ūdens-spirta ekstrakts (Silva J. C. et al. Food Chem.Toxicol., 2012,50,5,1790).

Starp augiem ar imūnstimulējošu iedarbību neapšaubāmi visbiežāk izmantotā ir ehinaceja (Echinacea angustifolia). Ehinacejas ekstrakts ir sevišķi efektīvs respiratorā trakta slimību gadījumos (Tiralongo E. et al. Evid. Based. Complement. Altemat. Med., 2012,417267), regulējot hemokīna un citokīna sintēzi leikocītos atbilstību aktuālajam imūnsistēmas stāvoklim (Ritchie M. R. et al. Phytomedicine, 2011,18,10826). Imūnstimulējošo aktivitāti saista ar ehinacejas polisaharīdiem (heteroglikāniem) (Wagner H. et. al. Ārzneimittelforschung, 1985,35,7,1069). Ehinacejas preparāti nomāc A gripas vīrusu in vivo (Bodinet C. et al., Planta Med., 2002,68,1,896) un uzlabo imūnatbildi uz pretgripas vakcīnu; tiek uzsvērta ehinacejas preparātu loma respiratorā trakta infekciju profilaksē (Di Pierro F. et al. Altem. Med. Rews., 2010,17,1,36). Imūnmodulējošas vielas no ehinacejas ekstraktu saturošām ledenēm absorbējās caur mutes dobuma gļotādu (Guiotto P. et al. Phytomedicine, 2008,15,8,547). Ehinacejas ekstrakta imūnstimulējošais potenciāls tiek palielināts kombinācijā ar Glycyrrhiza glabra ekstraktu (Wagner H., Jurcic

K. Phytomedicine, 2002,9,5,390). Tika aprakstīts propolisa un ehinacejas ekstraktu kombinācijas pretiekaisuma iedarbības sinerģisms (Barak V. et al. IMAJ,

2002,4,suppl.,919). Randomizētajos, dubultaklajos, placebo-kontrolētajos klīniskajos pētījumos tika pierādīta kombinācijas - ehinacejas, propolisa ekstraktu un C vitamīna augstā efektivitāte respiratorā trakta infekciju profilaksē bērniem (Arsh. Pediatr. Adolesc. Med., 2004,158,3,217).

Kā ir zināms, fitopreparātiem bieži piemīt imūnstimulējoša iedarbība (nespecifiskā), kā arī spēja izraisīt adjuvantiem līdzīgu efektu (Kumar S. et al. J. Chin. Integr. Med., 2011,9,2,65). Sastādot jaunā preparāta receptūru šis aspekts jāņēm vēra. Augu imūnstimulējošais efekts ir saistīts ar polifenolu iedarbību (Feldman K. S, et al. Bioorg. Med. Chem. Lett., 1999,9,7,985; Hikosaka K. et al. Phytother. Res.,2007,21,2,120). Tieši fenola savienojumi ir atbildīgi par sinerģismu, kas raksturo mūsdienu fitoķūniskos preparātus (Wagner H., Ulrich-Merzenich G. Phytomedicine, 2009,16,2-3,97).

Tautas dziedniecībā diezgan plaši tiek pielietoti kanēļa preparāti. Zinātnisko pētījumu rezultāti liecina par kanēļa antimikrobiālo aktivitāti (Keskin D., Toroglu S. J. Environ. Biol., 2011,32,2,251), antioksidantām īpašībām, sevišķi etanola ekstraktam (Yang C.H. et al. Molecules, 2012,17,6,7294). Pēc antimikrobiālās aktivitātes pret Streptococcus mutans kanēļa eļļa ir biežāk izmantota nekā krustnagliņu eļļa ( Gupta C. et al. Acta Biomed., 2011,82,3,197). Kanēļa ekstrakta imūnmodulējošā iedarbība tiek īstenota ar citoķīnu sekrēcijas veicināšanas starpniecību aktivētajos T limfocītos (Lee B. J. et al. Immunopharmacol. Immunotoxicol., 2011,33,4,714). Interesanti atzīmēt, ka kanēļskābes derivāts tika atrasts retajā propolisa veidā (Austrālijā), kas ir slavens ar sevišķi augstu antioksidatīvo iedarbību (Abu-Mellal A. et al. Phytochemistry, 2012,77,251).

Kā medikamentiem, tā arī fitoķīmiskiem uztura bagātinātājiem efektivitātes svarīgākais noteicošais faktors ir preparāta forma un ievadīšanas veids. Akūto respiratoro un kakla infekciju gadījumā būtu loģiski izmantot produktu, kas nodrošina ne tikai lokālu, bet arī sistēmisku iedarbību. Augu ekstraktu ievadīšana pilienu, tablešu, kapsulu veidā ne vienmēr būs efektīva daudzu iemeslu dēļ. Šādas gatavās formas nodrošina tikai īslaicīgu aktīvo vielu kontaktu ar mutes dobuma audiem. Augu polifenoli raksturojas ar vāju stabilitāti kuņģa skābajā vidē un zemu biopieejamību kuņģa-zamu traktā (Schantz

M., et al. Biotechnol. J., 2010,5,10,1050). Jāņem vērā arī fakts, ka augu ekstrakti var inhibēt medikamentu uzsūkšanos zarnās, jo nomāc epiteliocītu organisko anjonu transportējošā polipeptīda, kas piedalās zāļu absorbcijas procesā, funkcijas (Fuchikami H. et al. Drug Metab. Dispos., 2006,34,4,577). No otras puses, siekalas, mucīns un eritrocīti izteikti palielina kanēļa ekstrakta lipofīlo polifenolu antiradikālo aktivitāti (Ginsburg I. et al. Arch. Oral. Biol., 2012, May 26, Epub ahead of print). Šis fenomens varētu būt sevišķi nozīmīgs mutes dobuma un kakla iekaisuma procesu remdēšanā.

Runājot par augu ekstraktu biopieejamības palielināšanu mutes dobumā, jāmin, ka pēdējo gadu laikā strauji attīstās tādu gatavo formu izstrāde, kas nodrošina sublingvālo un transbukālo aktīvo vielu ievadīšanu. Izmanto plēves (AU2010279441 (Al) - 2012-04-05), aerosolus (KR20040076005 (A) - 2004-08-31). Kā nodrošināt maksimālu aktīvo vielu lokālu iedarbību, gan arī to efektīvu transportēšanu asinsplūsmā ?

Šajā ziņā sevišķi perspektīvas izskatās dabas vielu kompozīcijas aerosolu veidā, kas nodrošina mutes dobuma un kakla dezinfekciju, bioloģiski aktīvo vielu sublingvālo un transbukālo absorbciju un transportēšanu asinsplūsmā organisma imūnsistēmas stimulācijai. Vaigu un zemmēles reģiona asinsrites sistēmas anatomija ir ļoti „piemērota” aktīvo vielu pārnesei no mutes dobuma centrālajā asinsplūsmas cirkulācijā, tādā veidā bioloģiski aktīvās vielas gremošanas trakta fermentu iedarbības rezultātā netiek pakļautas destrukcijai. Sublingviālu lietošanas metodi uzskata par jaunu pieeju augu ekstraktu ātras un drošas absorbcijas problēmas risināšanai, kas inducē gļotādu un sistēmisko T šūnu un antivielu atbildi ar ļoti plašu izplatību dažādu orgānu gļotādās, t.sk. kuņģa-zamu, respiratorā trakta un reproduktīvās sistēmas (Czerkinsky C., Holmgren J. Curr.Top. Microbiol. Immunol., 2012,354,1).

No vienas puses, mutes dobuma gļotāda ir pievilcīga alternatīva makromolekulu ievadīšanai. Tajā pat laikā, kopumā, mutes dobumā hidrofīlās makromolekulas grūti absorbējas to izmēra un hidrofilitātes dēļ (Goswami T. et al. Arch. Oral Biol., 2009,54,6,577). Procesam traucē arī siekalas, kas noskalo aktīvās vielas no gļotādas (Pademi C. et al. Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. Oral. Radiol., 2012,Jul.6,Epub ahead of print). Minētie iemesli var skaidrot, kāpēc tirgū ir maz augu ekstraktu aerosolu mutes dobuma veselībai.

Aerosola formu sublingvālai un transbukālai ievadīšanai biežāk pielieto zālēm, un pārsvarā tām, kas satur tikai vienu aktīvo ingredientu. Var minēt salicilskābes atvasinājumu (patenta pieteikums US200905 84247 20090902), fentanilu (patenta pieteikums GB2011001274320100630), sildenafilu (patenta pieteikums EP20110174378 20030827) u.c. Biopieejamības palielināšanai izmanto dažādus tehnoloģiskos paņēmienus: nano-emulgācija (patenta pieteikums CN20021029357 20020906), transkutola iekļaušana receptūrā audu caurlaidības palielināšanai (patenta pieteikums NZ20070569949 20070125), sarežģītās šķīdinātāju sistēmas (patenta pieteikumi GB20110015179 20090423; US20090351179 20090109). Tomēr, augu ekstraktu aerosolu mutes transmukozālai ievadīšanai izstrādē ir daudz neatrisinātu tehnisku problēmu. Šī slēdziena ilustrācijai var minēt patenta pieteikumu US2003/0082107 Al (publicēts 1.05.2003.), kurā tiek piedāvāta bukālā aerosola šķidrās fāzes daudz variantu formula praktiski visām farmakoloģisko grupu vielām, bet augu ekstraktu vielas pieteikumā nav minētas.

Jaunā, efektīvā augu ekstraktu aerosola sublingvālai un transbukālai ievadīšanai izstrāde varētu būta veiksmīga gadījumā, ja tiks īstenoti divi galvenie uzdevumi: atrasta attiecīgā aktīvo un palīgvielu kombinācija, kas nodrošinās augstu lokālo antibakteriālo iedarbību mutes dobumā un sistēmisko imūnstimulējošo efektu, kā arī ātru uzsūkšanos sistēmiskā asinplūsmā.

Kā jau tika atzīmēts augstāk, svarīga problēma sublingvālo un oromukozālo augu ekstraktu spreju efektivitātes ziņā ir ievadāmo vielu mukoadhezitātes un biopieejamības uzlabošana. Mukoadhezitātes uzlabošanai preparātu sastāvā iekļauj polimēra nanošķiedras (W02012097763(A2)-2012-07-26), aktīvo vielu saturošas mikrodaļiņas (Pitarresi G. et al. Macromol. Biosci., 2012,12,6,770). Varētu izmantot arī pektīnu (Sriamomsak P. Expert Opin. Drug. Beliv., 2011,8,8,1009), bet ar to grūti nodrošināt preparātu standartizāciju un stabilitāti. Par vispiemērotākiem izskatās ciklodekstrīni, glikozes cikliski oligomēri. Ciklodekstrīni ne tikai veicina sublingvālo absorbciju, bet arī uzlabo preparātu garšu (Kaartama R. et al. Eur. J. Pharm. Biopharm., 2012,81,1,178).

Tuvu optimālam aerosolam sublingvālai lietošanai, izskatās produkts, kas ir aprakstīts patenta pieteikumā KR20050059630 20050704 (publicēts 2007.01.11). Lai iegūtu stabilu augu ekstraktu kompozīciju, ekstraktus filtrēja caur mikrofiltru ar poru diametru 0,5-2,0 mkm, pievienoja ciklodekstrinu 0,01-2,0% koncentrācijā, šķaidīja pie temperatūras 80-100°C un pievienoja ūdeni līdz vajadzīgajam apjomam. Minētajā patenta pieteikumā mikrofiltrāciju izmantoja kompozīcijas stabilitātes uzlabošanai.

Augu ekstraktu ražošanā diezgan plaši izmanto filtrāciju. Atbilstoši spējai atdalīt šķidruma komponentus, filtrācijas metodes tiek klasificētas sekojoši: dzidrināšana līdz 50 pm; mikrofiltrācija 50 pm - 0.1 pm; ultrafiltrācija 0.1 pm - 0.001 pm; reversā osmoze <0.001 pm (http://wwwwwdmag.com/Filtering-Through-the-Claims-oi-Varying-WaterTreatment-Methods-article 668). Pieņēmums, ka augi satur ne tikai zīdītāju bioķīmisko un fizioloģisko procesu aktivatorus (vitamīni, fenola savienojumi utt.), bet arī inhibitorus, pamato domu, ka izmantojot ultrafiltrāciju var ietekmēt augu produktu funkcionālās īpašības. Mūsu veikto eksperimentālo pētījumu darba hipotēze bija saistīta ar ideju izmantot ultrafiltrāciju augu ekstraktu aerosola antibakteriālās iedarbības veicināšnai.

Izgudrojuma izklāsts izgudrojuma mērķis ir izstrādāt augu ekstraktu kompozīciju sublingvālai lietošanai aerosola formā ar lokālu antibakteriālu efektivitāti un sistēmisko imūnstimulējošo iedarbību.

Augu ekstraktu ar antimikrobiālo iedarbību atlasei iepriekšējos mūsu pētījumos tika veikts 16 augu ekstraktu (kliņģerīte, kumelīte, salvija, kanēlis, nagliņkoks, lakrica, lavanda, raudene, rudā mežrozīte, smaržīgā kalme, kakao ekstrakts, greipfrūta augļa kauliņi, vīnogu kauliņi, piparmētra, ehinaceja, zaļā tēja), 6 sulu (aroniju, ābolu, cidoniju, citronu, dzērveņu, melnā plūškoka), kā arī propolisa ekstrakta, mentola un glicerīna skrinings. Tika testētas arī minēto augu ekstraktu kombinācijas (kopā 71 variants) attiecībā uz Streptococcus mutans, Staphylocoecus aureus un Streptococcus ppogcnes, izmantojot agara difūzijas metodi. Noteiktas aktīvo ekstraktu un to kombināciju minimālās inhibējošās koncentrācijas. Pētījumu rezultātā tika atlasīti ehinacējas, kanēļa, propolisa, greipfrūta kauliņu, piparmētras ekstrakti, glicerīns. Jāatzīmē, ka krustnagliņu ekstrakts netika iekļauts atlasīto ingredientu sarakstā, jo tas neuzlaboja dotās kompozīcijas efektivitāti.

Mūsu veikto eksperimentu gala posmā izmantojām sekojošas vielas:

- ehinacejas etanola ekstraktu,

- propolisa etanola ekstraktu,

- greipfrūta kauliņu etanola ekstraktu,

- kanēļa mizas etanola ekstraktu,

- piparmētru etanola ekstraktu,

- glicerīnu.

Akūtās respiratorās slimības biežāk izraisa vīrusi, bet slimības attīstības gaitā infekcijas procesā iesaistās nosacīti patogēnie mikroorganismi. Tādēļ, kā testēšanas objekti pētījumā tika izmantoti nosacīti patogēni - Streptoc&ccus mutans , Streptococcus pyogenes un Stapkylococcus aureus standarta celmi. Kultūras ieguva no Latvijas Universitātes Mikroorganismu kultūru kolekcijas.

Jaunā produkta pagatavošanai sajauc visus ekstraktus (70% etanola) nepieciešamajās attiecībās (l.tab,), pielej klāt 10% no kopējā apjoma glicerīnu, labi sajauc.

Ekstraktu kompozīcijas antibakteriālās efektivitātes novērtēšani m vitro izmantojām agāra difūzijas metodi un minimālās inhibējošās koncentrācijas noteikšanu. Augu ekstraktu specifiskā aktivitāte tika vērtēta kā atsevišķiem ekstraktiem, tā arī to kombinācijām. 1, attēlā ir parādīta atsevišķo ingredientu un to kombinācijas antimikrobiālā iederbība pret S.mMans in vitro. Kompozīcijas bāzes versijas ingredientu sastāvs tiek uzrādīts 1, tabulā.

1.Att.Atsevišķo ingredientu un jaunā produkta antimikrobiāla aktivitāte pret S.mutans in vitro.

.Tabula. Jauna produkta bāzes versijas dabas vielu saturs.

ingredients

Koncentrācijā, g/100 g

Kanēļa ekstrakts (CAnnamonum verum. miza)	1,218
Ehinacejas ekstrakts (Echinacea angustifolia}	1,218
Greipfrūta kauliņu ekstrakts (Citrus varadisi'}	1,218
Propolisa etanola ekstrakts	0,468
Piparmētras ekstrakts (Mentha piperita)	1,218

Kā var redzēt 1.attēlā, jaunā produkta izstrādātajai bāzes versijai antimikrobiālā aktivitāte ir augstāka, nekā atsevišķiem ekstraktiem un tirgū populāriem preparātiem ar analogām indikācijām.

Ar nolūku vēl palielināt kompozīcijas antimikrobiālo aktivitāti tika izmantota ultrafiltrācija. Pēc jaunā produkta ingredientu (augu etanola ekstrakti, glicerīns) sajaukšanas, tas tika laists caur audumu mikrofiltriem „Amafiltergroup” sekojošā secībā : 5 ļim filtrs, 1 pm filtrs un keramiskais ultrafiltrs ar cut-off-point (filtrācijas slieksni) 30 KDa. Iegūtajam ultrafiltrātam pievienoja beta-ciklodekstrīnu gala koncentrācijā 1%.

2.tabulā ir parādīta jaunā produkta antimikrobiālā aktivitātes atkarība no augstāk minētām tehnoloģiskām manipulācijām.

2.Tabula. Jaunā produkta antimikrobiālā (pret S.aureus) iedarbība in vitro. Agara difūzijas metode.

Testetā nrodukta versija	Inhibēšanas zonas diametrs, mm
1. Bāzes versij a, ingredienti tika ņemti optimālāja koncentrācijā (skat. 1. tabulu)	30±3
2. Bāzes versija nēc ultrafiltrācijas	37±1
3. Gala versija pēc ultrafiltrācijas un beta-ciklodekstrina pievienošanas	41±2

Piezīme: atšķirības starp 1-2,2-3 versiju rādītājiem ir statistiski ticamas (p<0,05)

Kā rāda veiktā eksperimenta rezultāti (2.tab.), jaunā produkta ultrafiltrācija par 23 % palielināja kompozīcijas antimikrobiālo aktivitāti. Pilnīgi šī fenomena mehānisms nav skaidrs, bet to var saistīt ar ekstraktu šķīduma atbrīvošanos no kādiem lielmolekulārajiem savienojumiem, kam piemīt aktīvo vielu iedarbības inhibējoša loma antimikrobiālas iedarbības ziņā.

Papildu beta-ciklodekstrīns par 11% veicināja jaunā produkta antimikrobiālo aktivitāti in vitro (2.tab.). Ir pamats domāt, ka ciklodekstrīns uzlaboja augu ekstraktu antimikrobiālo iedarbību, palielinot mikrobu šūnu apvalku caurlaidību produkta aktīvām vielām.

Balstoties uz veiktajiem pētījumiem tika izstrādāta jaunā produkta gala receptūra (3. tab.).

3.Tabula. Jaunā produkta gala versijas ingredienti.

Ingredients	Koncentrācijā, g/100g	Ingredientu daudzums viena devā ( 2 pūtieni) - 0,3 g
Kanēļa ekstrakts (Cinnamonum verum, miza)	1,218	3,65 mg
Ehinacejas ekstrakts (Echinacea angustifolia)	1,218	3,65 mg
Greipfrūta kauliņu ekstrakts (Citrus varadisi)	1,218	3,65 mg
Propolisa ekstrakts	0,468	1,4 mg
Piparmētru ekstrakts (Mentha piverita)	1,218	3,65 mg
Glicerīns, 99,5%	10,00	30,00 mg
Beta-ciklodekstrīns	1,00	3,00 mg
Etanols 70%	83,66	0,25 g

Tannā un tirgū esošā produkta efektivitātes salīdzināšanas rezultāti ir prezentēti 2.attēla.

Jaunaīsprodulfts C-t'ftiritO'feSoSiiteipi'oilulitE)

2. Att. Jauna un tirgu esošā produkta antimikrobialā aktivitāte in vitro.

Lai novērtētu jaunā produkta gala versijas spēju modulēt imūnsistēmu in vivo tika veikti eksperimenti uz laboratorijas žurkām: pētīta jaunā produkta spēja novērst vai mazināt iekaisuma parādības, izmantojot lokālā iekaisuma modeli.

Žurku Wistar*Kyoto tēviņi ar masu 190±ll g tika baroti ar standarta barību un dzirdināti ad libitum. Dzīvniekus randomizēja 3 grupās (n=9):

1. grupa - kontrole,

2. grupa - 7 dienu laikā dzīvniekiem ievadīja jauno produktu, izsmidzinot to aerosola formā (0,lg, 3 reizes dienā) atvērtā un fiksētā mutē uz 2 min; 8.dienā žurkas kreisās pakaļkājas spilventiņā ievadīja 50mkl 1% karragināna šķīduma, pagatavotu fizioloģiskajā šķīdumā, bet labajā pakaļkājā - SOmkl fizioloģiskā šķīduma; 30 min pēc preparāta izsmidzināšanas dzīvniekiem nebija dota iespēja ēst un dzert, lai mazinātu varbūtību preparāta iekļūšanai kuņģī,

3. grupa - 7 dienu laikā dzīvniekiem ievadīja fizioloģisko šķīdumu (placebo), izsmidzinot to aerosola formā 0,1 g, 3 reizes dienā) atvērtā un fiksētā mutē uz 2 min; tālākās manipulācijas bija līdzīgas 2, grupas dzīvniekiem.

Žurkām ievadītā jaunā produkta ingredientu daudzums vienā devā (0,1 g) bija sekojošs (mg): propolisa ekstrakts 0,47; greipfrūta kauliņu ekstrakts 1,22; ehinaoejas ekstrakts i ,22; glicerīns 10; kanēļa ekstrakts 1,22; piparmētras ekstrakts l,22;beta-ciklodekstrms 1,00; kā arī etanols 70% - 0,08 g.

Eksperimentam ar dzīvniekiem iegūta Dzīvnieku aizsardzības Padomes atļauja.

Pirms uzsākšanas un eksperimenta beigās žurkas tika nosvērtas, 24 stundas pēc karragināna vai placebo ievadīšanas, venozās asins paraugi tika ņemti atkārtoti, žurkas tika eitanazētas ar cervikālo translokāciju. Abu kāju spilventiņi tika preparēti, audi kvantitatīvi savākti un ievietoti tris-buferī, homogenizēti ar ultraskaņu līdz homogēna šķidruma iegūšanai. Homogenātu centrifugējām pie 14000 x g 30 min, sadalījām alikvotās un uzglabājām pie -70°. Paraugos ar ELISA metodi noteica prostaglandīnu E2 (PGE2), izmantojot Cayman Chemicals reaģentu komplektu un nervu augšanas faktoru (NAF) ar firmas Promega reaģentiem. Bioķīmiskos rādītājus aprēķināja, ņemot vērā iegūto audu masu.

Konstatēts, ka 2. grupas žurku (kas saņēma jauno produktu) spilventiņu audu masa pēc 24 stundām pēc karragināna ievadīšanās bija 2,2 reizes mazāka par 3. Grupas dzīvniekiem, proti, spilventiņi bija uzpampuši mazāk, jo iekaisums bija vājāks. PGE2 koncentrācija audu homogenāta 2. grupas paraugiem bija 65,5 ng/g, bet placebo grupai 88,7 ng/g (p<0,01). NAF saturs homogenātā par 22% pieauga 3. grupas žurkām, kas saņēma iekaisuma induktoru (karraginānu) un jaunā produkta vietā - fizioloģisko šķīdumu (placebo). Ķermeņa masas dinamikas atšķirības starp grupām eksperimenta laikā netika novērotas.

Iegūtie eksperimentālie in vivo dati liecina, ka karragināns veicināja lokālo iekaisuma procesu pakaļkāju spilventiņos, bet jaunā produkta sublingvāla profilaktiskā ievadīšana to izteikti (ap 50%) mazināja. Nervu augšanas faktora iekaisuma skarto spilventiņu audos koncentrācijas kritums liecina par 2. grupas dzīvnieku diskomforta un sāpju mazināšanos. Jāpasvītro arī fakts, ka jaunais aerosols tika iesmidzināts mutes dobumā uz īsu laiku, bet nodrošināja sistēmisko efektu. Tas ir skaidrojams ar preparāta ingredientu ātro transmukozālo absorbciju.

Tātad, jaunā produkta profilaktiskā lietošana mazina inducētā lokālā iekaisuma smagumu. Šis fakts dod pamatu sagaidīt analogo profilaktisko efektu akūto respiratoro un kakla infekciju gadījumos, kas raksturojas ar lokālu iekaisuma procesu - atbildes reakciju uz mikrorganismu invāziju. Ņemot vērā jaunā produkta lokālo antibakteriālo iedarbību var secināt, ka jaunais augu ekstraktu aerosols sublingvālai lietošanai varēs nodrošināt attiecīgo efektu mutes dobumā, kā arī sistēmisko imūnstimulējošo iedarbību. Šādas iedarbības pamatā varētu būt augu ekstraktu un propolisa antioksidatīvā, antibakteriālā, pretiekaisuma, imūnstimulējošā iedarbība, kā arī izmantotie tehnoloģiskie paņēmieni produkta funkcionalitātes palielināšanai.

Pamatojoties uz pētījuma rezultātiem var secināt, ka izstrādātajai jaunajai augu ekstraktu kompozīcijai aerosola formā mutes dobumam ir raksturīga augsta lokālā antimikrobiālā efektivitāte, ātra transmukozālā absorbcija un sistēmiskā imūnstimulējošā iedarbība. Preparāts ir indicēts akūto respiratoro un kakla infekciju, t.sk. gripas, gadījumos. Kompozīciju var lietot profilaktiski. Ieteicams - 3 reizes dienā pa divām devām (pūtienam).

Claims (5)

1. Pretenzijas

   1. Kompozīcija, kas satur, rēķinot uz lOOg produktal,218g kanēļa mizas (Cinnamonum verum), 1,218g ehinacejas (Echinacea angustifolia), 1,218g greipfrūta kauliņu (Citrus paradīsi), 0,468g propolisa, 1,218g piparmētru (Mentha piperita) etanola ekstraktus, lOg glicerīna, lg beta-ciklodekstrina, 41,83g 35% etanola.
2. 2. Kompozīcija, saskaņā ar 1. pretenziju, ir paredzēta pielietojumam akūto respiratoro un kakla infekciju gadījumos.
3. 3. Kompozīcija, saskaņā ar 1. pretenziju, ir paredzēta sistēmiskai imūnas sistēmas stimulācijai.
4. 4. Kompozīcija, saskaņā ar 1., 2., un 3. pretenziju, ir paredzēta profilaktiskai lietošanai pret saaukstēšanos.
5. 5. Paņēmiens kompozīcijas saskaņā ar 1. pretenziju iegūšanai, kas raksturīgs ar to, ka no augu un propolisa etanola ekstraktiem tiek pagatavots maisījums, kuru filtrē caur keramisko ultrafiltru ar cut-off-point (filtrācijas slieksni) 30 KDa.