LU505228B1 - Application of an efficient aerobic denitrifying actinomycete strain in the treatment of micropolluted water - Google Patents

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LU505228B1
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Haihan Zhang
Wanqiu Yang
Sixuan Pan
Ben Ma
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Abstract

Die vorliegende Erfindung offenbart die Anwendung eines effizienten aeroben denitrifizierenden Aktinomycet-Stamms auf dem Gebiet der mikrobiellen Technologie bei der Behandlung von mikroverschmutztem Wasser Der Aktinomycet-Stamm ist Streptomyces phaeofaciens LST24, und die effektive Sequenzlänge der 16SrRNA des Streptomyces phaeofaciens LST24 beträgt 1412 bp, wie in der Sequenzliste gezeigt. Die vorliegende Erfindung realisiert die Anwendung des aeroben Denitrifikationsaktinomycetenstamms LST24 bei der Behandlung von mikroverschmutzten Gewässern, der effiziente Stickstoff- und Kohlenstoffentfernungseigenschaften aufweist Der aerobe Denitrifikationsaktinomycetenstamm LST24 kann den Gehalt an Ammoniakstickstoff, Nitrat, Nitrit und CSB Mn in mikroverschmutzten Gewässern effektiv reduzieren und hat ein großes Anwendungspotenzial bei der In-situ Behandlung von anderen mikroverschmutzten Gewässern wie Landschaftswasserkörpern und Wasserquellenreservoirs. Der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 wird durch Anreicherung, Kultivierung, Trennung und Reinigung aus dem darüber liegenden Wasser des Landschaftswassers gewonnen. Der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 wird mit Nitrat als einzige Stickstoffquelle angebaut.The present invention discloses the application of an efficient aerobic denitrifying actinomycete strain in the field of microbial technology in the treatment of micropolluted water. The actinomycete strain is Streptomyces phaeofaciens LST24, and the effective sequence length of the 16SrRNA of Streptomyces phaeofaciens LST24 is 1412 bp as shown in the sequence listing. The present invention realizes the application of the aerobic denitrifying actinomycete strain LST24 in the treatment of micro-polluted waters, which has efficient nitrogen and carbon removal properties. The aerobic denitrifying actinomycete strain LST24 can effectively reduce the contents of ammonia nitrogen, nitrate, nitrite and COD Mn in micro-polluted waters, and has great application potential in the in-situ treatment of other micro-polluted waters such as landscape water bodies and water source reservoirs. The Streptomyces phaeofaciens strain LST24 is obtained from the overlying water of the landscape water by enrichment, cultivation, separation and purification. The Streptomyces phaeofaciens strain LST24 is grown with nitrate as the sole nitrogen source.

Description

BESCHREIBUNGDESCRIPTION

ANWENDUNG EINES EFFIZIENTEN AEROBENAPPLICATION OF AN EFFICIENT AEROBIC

DENITRIFIZIERENDEN AKTINOMYCETEN-STAMMES BEI DERDENITRIFYING ACTINOMYCETES STRAIN IN

BEHANDLUNG VON MIKROVERSCHMUTZTEM WASSERTREATMENT OF MICRO-POLLUTED WATER

Technischer BereichTechnical part

Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der mikrobiellen Technologie, insbesondere die Anwendung eines effizienten aeroben denitrifizierenden Aktinomyceten-Stammes bei derThe present invention relates to the field of microbial technology, in particular to the application of an efficient aerobic denitrifying actinomycete strain in the

Behandlung von mikroverschmutztem Wasser.Treatment of micro-polluted water.

HintergrundtechnologieBackground technology

Mit der Entwicklung von Industrie und Landwirtschaft sind städtische und ländlicheWith the development of industry and agriculture, urban and rural

Oberflächengewässer unterschiedlichen Graden Stickstoffbelastung ausgesetzt. Nitrat in derSurface waters are exposed to varying degrees of nitrogen pollution. Nitrate in the

Wasserumgebung führt zu einer Eutrophierung der Gewässer, was zu einer Abnahme derAquatic environment leads to eutrophication of water bodies, which leads to a decrease in

Wasserqualität führt, was potenzielle Risiken für die menschliche Gesundheit und die Stabilität der Ökosysteme birgt. In natürlichen aquatischen Ökosystemen weisen Gewässer typischerweise einen leicht verschmutzten Zustand auf, bei dem die Konzentration von Schadstoffen (Nitrat, organisches Material usw.) normalerweise unter 10mg/L liegt. Der Einsatz physikalischer und chemischer Methoden zur Entfernung dieser Schadstoffe aus leicht verschmutztem Wasser ist oft nicht kostengünstig. Daher ist es von großer Bedeutung, eine effiziente und wirtschaftlichewater quality, which poses potential risks to human health and ecosystem stability. In natural aquatic ecosystems, water bodies typically exhibit a slightly polluted state, where the concentration of pollutants (nitrate, organic matter, etc.) is usually below 10 mg/L. The use of physical and chemical methods to remove these pollutants from slightly polluted water is often not cost-effective. Therefore, it is of great importance to develop an efficient and economical

Methode zur Reinigung mikroverschmutzter Gewässer zu finden. Die traditionelle mikrobiellemethod for cleaning micro-polluted waters. The traditional microbial

Denitrifikationstechnologie beinhaltet gegenwärtig zwei Reaktionen: aerobe Nitrifikation und anaerobe Denitrifikation. Das Vorhandensein von gelöstem Sauerstoff ist ein wichtigerDenitrification technology currently involves two reactions: aerobic nitrification and anaerobic denitrification. The presence of dissolved oxygen is an important

Hemmfaktor im traditionellen Denitrifikationsprozess. Die aerobe Denitrifikation mit ihrer starken Beständigkeit gegen gelösten Sauerstoff kann = Nitrifikations- undInhibiting factor in the traditional denitrification process. Aerobic denitrification with its strong resistance to dissolved oxygen can = nitrification and

Denitrifizierungsprozesse in einem Bioreaktor ermöglichen und ist aufgrund ihrer Vorteile wie erschwinglicher Preis, hoher Effizienz und sauberer Nebenprodukte zu einem heißen Thema in der Stickstoffentfernungsforschung geworden. Actinomyces sind umweltfreundlichedenitrification processes in a bioreactor and has become a hot topic in nitrogen removal research due to its advantages such as affordable price, high efficiency and clean byproducts. Actinomyces are environmentally friendly

Mikroorganismen mit der Fähigkeit, komplexe Schadstoffe abzubauen. Sie können sich nicht nur durch asexuelle Sporen vermehren, sondern auch durch Myzelruptur, mit starkerMicroorganisms with the ability to degrade complex pollutants. They can reproduce not only through asexual spores, but also through mycelium rupture, with strong

Anpassungsfähigkeit an verschiedene Umweltbelastungen. Durch die Isolierung eines aeroben denitrifizierenden Aktinomyceten-Stammes mit guter Denitrifizierungsleistung werden seineAdaptability to different environmental stresses. By isolating an aerobic denitrifying actinomycete strain with good denitrification performance, its

Wachstums-, Denitrifizierungs- und Dekarbonisierungseigenschaften sowie seine Anwendung in der Denitrifikation und Dekarbonisierung in mikroverschmutzten Gewässern eingehend erforscht.Growth, denitrification and decarbonization properties as well as its application in denitrification and decarbonization in micropolluted waters have been extensively investigated.

Dies liefert neue Erkenntnisse für die Entwicklung diverser und effizienter aeroberThis provides new insights for the development of diverse and efficient aerobic

Denitrifizierungs-biologischer Ressourcen und hat einen wichtigen theoretischen Wert und 905228 praktische Bedeutung für die Verbesserung der Denitrifizierungs-Behandlungseffizienz undDenitrification biological resources and has important theoretical value and 905228 practical significance for improving denitrification treatment efficiency and

Wirtschaftlichkeit mikroverschmutzter Gewässer.Economic efficiency of micro-polluted waters.

Auf dieser Grundlage entwirft die vorliegende Erfindung eine Anwendung eines effizienten aeroben denitrifizierenden Aktinomyceten-Stammes bei der Behandlung von mikroverschmutztem Wasser, um die oben genannten Probleme zu lösen.On this basis, the present invention designs an application of an efficient aerobic denitrifying actinomycetes strain in the treatment of micropolluted water to solve the above problems.

Inhalt der ErfindungContent of the invention

Zur Lösung der oben genannten Probleme bietet die vorliegende Erfindung die folgende technische Lösung:To solve the above problems, the present invention offers the following technical solution:

Die Anwendung eines effizienten aeroben denitrifizierenden Aktinomycet-Stammes in derThe application of an efficient aerobic denitrifying actinomycete strain in the

Behandlung von leicht verschmutztem Wasser. Der Aktinomycet-Stamm ist Streptomyces phaeofaciens LST24, und die effektive Sequenzlänge der 16SrRNA des Aktinomycet-StammesTreatment of slightly polluted water. The actinomycete strain is Streptomyces phaeofaciens LST24, and the effective sequence length of the 16SrRNA of the actinomycete strain

LST24 beträgt 1412 bp, wie in der Sequenzliste gezeigt.LST24 is 1412 bp, as shown in the sequence listing.

Vorzugsweise wird der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 durch Anreicherung,Preferably, Streptomyces phaeofaciens strain LST24 is obtained by enrichment,

Kultivierung, Trennung und Reinigung aus dem darüberliegenden Wasser vonCultivation, separation and purification from the overlying water of

Landschaftsgewässern erhalten.preserved landscape waters.

Vorzugsweise wird der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 mit Nitrat als einzigePreferably, Streptomyces phaeofaciens strain LST24 is used with nitrate as the only

Stickstoffquelle angebaut.Nitrogen source grown.

Vorzugsweise eignet sich der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 zur Stickstoff- undPreferably, the Streptomyces phaeofaciens strain LST24 is suitable for nitrogen and

Kohlenstoffentfernung in leicht verschmutzten Gewässern.Carbon removal in lightly polluted waters.

Vorzugsweise bezieht sich der mikrobelastete Wasserkörper auf einen Wasserkörper mit einerPreferably, the micropolluted water body refers to a water body with a

Konzentration von Schadstoffen unter 10mg/L (wie CSB Mn, Ammoniakstickstoff,Concentration of pollutants below 10mg/L (such as COD Mn, ammonia nitrogen,

Nitratstickstoff und Nitritstickstoff).Nitrate nitrogen and nitrite nitrogen).

Vorzugsweise wird der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 aus der darüberliegendenPreferably, the Streptomyces phaeofaciens strain LST24 from the overlying

Wasserprobe des Landschaftswasserkörpers angereichert und kultiviert, auf Gaoshi No.lWater sample of landscape water body enriched and cultivated on Gaoshi No.l

Medium getrennt, auf aerobe Denitrifikation abgeschirmt und auf aerobeMedium separated, screened for aerobic denitrification and screened for aerobic

Denitrifikationsflüssigkeit für aerobe kontinuierliche Kultivierung geimpft.Denitrification fluid inoculated for aerobic continuous cultivation.

Vorzugsweise verwendet die aerobe kontinuierliche Kultur lösliche Stärke als Kohlenstoffquelle bei einer Temperatur von 30 °C; Die Impfmenge von Streptomyces phaeofaciens LST24 beträgt 1% des Volumens des aeroben Denitrifizierungsfl ü ssigkeitskulturmediums.Preferably, the aerobic continuous culture uses soluble starch as a carbon source at a temperature of 30 °C; the inoculation amount of Streptomyces phaeofaciens LST24 is 1% of the volume of the aerobic denitrification liquid culture medium.

Die Anwendung eines effizienten aeroben denitrifizierenden Aktinomyceten-Stammes bei derThe application of an efficient aerobic denitrifying actinomycete strain in the

Behandlung von leicht verschmutztem Wasser beinhaltet die folgenden spezifischen Schritte:Treatment of slightly contaminated water involves the following specific steps:

S1. Erfassung und Leistungsprüfung von Stämmen; LUS05228S1. Collection and performance testing of strains; LUS05228

Anreicherung: auf Polycarbonat-Membran (0.22) uw m) Filtern Sie 100 mlEnrichment: on polycarbonate membrane (0.22) uw m) Filter 100 ml

Landschaftswasserprobe und legen Sie die Polycarbonatmembran sofort auf festes Gaoshi No.1Landscape water sample and immediately place the polycarbonate membrane on solid Gaoshi No.1

Medium mit 80 ppm K2Cr207. Das Medium wurde sieben Tage lang bei 30 + 2° C inkubiert.Medium with 80 ppm K2Cr207. The medium was incubated for seven days at 30 + 2°C.

Alle Proben wurden dreifach inkubiert (n=3).All samples were incubated in triplicate (n=3).

Unter ihnen können Aktinomyceten die Poren von Polycarbonatmembranen durchdringen und auf festem Kulturmedium wachsen, während die Zugabe von K2Cr207 das wettbewerbsfähigeAmong them, actinomycetes can penetrate the pores of polycarbonate membranes and grow on solid culture medium, while the addition of K2Cr207 increases the competitive

Wachstum von Bakterien und Pilzen auf festem Kulturmedium hemmen kann;can inhibit the growth of bacteria and fungi on solid culture medium;

Die Formel des festen Kulturmediums Gaoshi No.1 ist: 0.5g/L KNO3, 0.01g/L NaCl, 0.01g/LThe formula of Gaoshi No.1 solid culture medium is: 0.5g/L KNO3, 0.01g/L NaCl, 0.01g/L

FeSO4, 0.5g/L KH2PO4, 0.5g/L MgSO4, 20g/L Agarpulver, 20g/L lôsliche Stärke, und der pH wird auf 7.2-7.4 eingestellt;FeSO4, 0.5g/L KH2PO4, 0.5g/L MgSO4, 20g/L agar powder, 20g/L soluble starch, and the pH is adjusted to 7.2-7.4;

Vorläufiges Screening: Nehmen Sie angereichertes und kultiviertes Gao-Festkulturmedium Nr.1, wählen Sie trockene Aktinomyceten-Kolonien der gleichen Farbe, Form und Größe auf demPreliminary screening: Take enriched and cultured Gao solid culture medium No.1, select dry actinomycete colonies of the same color, shape and size on the

Medium aus und markieren Sie sie auf Gaos Festkulturmedium Nr.1. Das Kulturmedium wird sieben Tage lang mit der Reinkulturmethode bei 30 + 2° C inkubiert, und alle Proben werden in drei Portionen kultiviert (n=3). Nach insgesamt 6-9-maliger Aufreinigung wurden aus dem erstenMedium and label them on Gao's solid culture medium No.1. The culture medium is incubated for seven days at 30 + 2°C using the pure culture method, and all samples are cultured in three portions (n=3). After a total of 6-9 times of purification,

Screening mehrere reine Actinomyceten-Kolonien gewonnen;Screening yielded several pure actinomycete colonies;

Re-Screening: Inokulieren Sie mehrere ursprünglich gesiebte reine Bakterienkolonien in GaoshiRe-screening: Inoculate several originally screened pure bacterial colonies into Gaoshi

No.1 flüssiges Kulturmedium und inkubieren Sie fünf Tage lang bei 135r/min und 30° C alsNo.1 liquid culture medium and incubate for five days at 135r/min and 30° C as

Saatgutlösung. Fügen Sie 6% der Saatlösung dem Denitrifizierungsmedium volumenweise hinzu, schütteln und kultivieren Sie bei 135 r/min und 30° C und ermitteln Sie die Konzentrationen vonSeed solution. Add 6% of the seed solution to the denitrification medium by volume, shake and culture at 135 r/min and 30° C and determine the concentrations of

Nitrat und Gesamtstickstoff bei 24 und 48 Stunden. Wählen Sie die Kolonie mit der höchstenNitrate and total nitrogen at 24 and 48 hours. Select the colony with the highest

Gesamtstickstoffentfernungseffizienz als optimalen Stamm und nennen Sie sie Stamm LST24.total nitrogen removal efficiency as the optimal strain and name it strain LST24.

Nach der Probensequenzierung wird bestätigt, dass es sich um einen reinen Stamm handelt, und schließen Sie das erneute Screening ab.After sample sequencing, confirm that it is a pure strain and complete rescreening.

S2. Molekularbiologische Identifizierung von Stämmen:S2. Molecular biological identification of strains:

Der Stamm LST24, der im Re-Screening untersucht wurde, wurde einer 16S rDNAThe strain LST24, which was re-screened, was subjected to a 16S rDNA

Gensequenzanalyse unterzogen. Die genomische DNA des Stamms LST24 wurde mit Hilfe desThe genomic DNA of strain LST24 was analyzed using the

Omega DNA (Biotechnology, USA) Kit extrahiert und mit diesem als Vorlage fiir 16S rDNA amplifiziert. Primer: 27F (5 '- AGTTGATCMTGTTACTAG-3') und 14925 (5 '-Omega DNA (Biotechnology, USA) kit and amplified using this as template for 16S rDNA. Primers: 27F (5 '- AGTTGATCMTGTTACTAG-3') and 14925 (5 '-

GGTTACCTGTTACGAT-3');GGTTACCTGTTACGAT-3');

PCR Reaktionssystem (25 u L): Template DNA 20-50ng/u L, PCR Premium 12.5 u L, 27F (10) u M)1 u L.1492R (10) u M)1 u L.DdH20 9.5 y L. PCR-Programm: 95 °C fiir 5PCR reaction system (25 u L): Template DNA 20-50ng/u L, PCR Premium 12.5 u L, 27F (10) u M)1 u L.1492R (10) u M)1 u L.DdH20 9.5 y L. PCR program: 95 °C for 5

Minuten, 94 °C für 30 Sekunden, 57 °C für 30 Sekunden, 72 °C für 90 Sekunden des 90228 72 °C für 10 Minuten; 30-Zyklen verstärken. Die Aufreinigung und Sequenzierung derminutes, 94 °C for 30 seconds, 57 °C for 30 seconds, 72 °C for 90 seconds of 90228 72 °C for 10 minutes; 30 cycles. The purification and sequencing of the

PCR-Produkte wurde von der Bioengineering Company abgeschlossen, die amplifiziertenPCR products were completed by the Bioengineering Company, the amplified

Sequenzen wurden in NCBI hochgeladen und anschließend mit Hilfe der GenBank-Datenbank über BLAST für Homologie-Sequenzen verglichen.Sequences were uploaded to NCBI and subsequently compared to the GenBank database via BLAST for homology sequences.

Die Sequenzlänge des Stammes LST24 beträgt 1412 bp, wie in der Sequenztabelle in Abbildung 6 gezeigt. Nach dem Vergleich weist die Sequenz eine hohe Ähnlichkeit von 99,93% mitThe sequence length of strain LST24 is 1412 bp, as shown in the sequence table in Figure 6. After comparison, the sequence shows a high similarity of 99.93% with

Streptomyces phaeofaciens JCM 4814 (NCBI Login Nummer: NR 041126.1) in der NCBIStreptomyces phaeofaciens JCM 4814 (NCBI login number: NR 041126.1) in the NCBI

Datenbank auf, die zur Gattung Streptomyces gehört. Nennen Sie es den Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 mit hocheffizienter aerober Denitrifikation;database that belongs to the genus Streptomyces. Call it Streptomyces phaeofaciens strain LST24 with highly efficient aerobic denitrification;

S3. Bestimmung der aeroben Denitrifizierungsfähigkeit von Stämmen:S3. Determination of the aerobic denitrification capacity of strains:

Inokulieren Sie LST24 Samenlösung mit einer Impfmenge von 1% (Volumenverhältnis) auf denitrifizierendes fl ü ssiges Medium und br ü ten Sie bei 30 °C und 135 rpm in einem Shaker f ür 48 Stunden. Während dieses Zeitraums werden alle drei Stunden Proben genommen, um dieInoculate LST24 seed solution at an inoculation rate of 1% (volume ratio) onto denitrifying liquid medium and incubate at 30 °C and 135 rpm in a shaker for 48 hours. During this period, samples are taken every three hours to determine the

Konzentration von bakterieller Lichtdichte (OD600), Gesamtstickstoff (TN),Concentration of bacterial light density (OD600), total nitrogen (TN),

Ammoniakstickstoff (NH4+- N), Nitrat (NO3,N), Nitrit (NO2,N) und gelöstem organischemAmmonia nitrogen (NH4+- N), nitrate (NO3,N), nitrite (NO2,N) and dissolved organic

Kohlenstoff (DOC) zu messen. Wie in Abbildung 2 gezeigt, befindet sich der Stamm in einer langsamen Phase bei 0-9 Stunden und eine logarithmische Phase bei 9-45 Stunden. Nach 45Carbon (DOC). As shown in Figure 2, the strain is in a slow phase at 0-9 hours and a logarithmic phase at 9-45 hours. After 45

Stunden Kultivierung tritt der Stamm in eine stabile Phase, und die Konzentration von DOC nimmt während der Kultivierungszeit allmählich ab. Nach 48 Stunden Kultivierung beträgt dieAfter 48 hours of cultivation, the strain enters a stable phase and the concentration of DOC gradually decreases during the cultivation period. After 48 hours of cultivation, the

DOC-Abtragsrate des Stammes LST24 in einem anfänglichen DOC-Medium von 150mg/L 91,5%. Darüber hinaus bestätigte der Pearson-Korrelationsindex eine signifikante negativeDOC removal rate of strain LST24 in an initial DOC medium of 150 mg/L was 91.5%. In addition, the Pearson correlation index confirmed a significant negative

Korrelation zwischen der DOC-Konzentration und dem Zellwachstum (r=-0.937, P<0.001, n=17), was darauf hindeutet, dass Kohlenstoffquellen Energie- und Elektronenspender für dasCorrelation between DOC concentration and cell growth (r=-0.937, P<0.001, n=17), indicating that carbon sources are energy and electron donors for

Wachstum und den Metabolismus des Stammes LST24 liefern können. Aus Abbildung 2 undgrowth and metabolism of the LST24 strain. From Figure 2 and

Abbildung B kann man sehen, dass nach 48-Stunden der Kultivierung die Nitratentfernungsrate 99,12%, und die Gesamt-Stickstoffentfernungsrate 97,18% betrug. Es gab keine signifikanteFigure B shows that after 48 hours of cultivation, the nitrate removal rate was 99.12% and the total nitrogen removal rate was 97.18%. There was no significant

Ansammlung von Nitrit und Ammoniakstickstoff während des Prozesses. Wie oben gesehen, hatAccumulation of nitrite and ammonia nitrogen during the process. As seen above,

Stamm LST24 offensichtliche aerobe Denitrifikationsfähigkeit; Darüber hinaus hat der Stamm, wie in Abbildung 3 gezeigt, eine starke Anpassungsfähigkeit an die Umwelt, und die optimalenStrain LST24 obvious aerobic denitrification ability; In addition, as shown in Figure 3, the strain has a strong adaptability to the environment, and the optimal

Anbaubedingungen für den Stamm sind: Stärke als Kohlenstoffquelle, einCultivation conditions for the strain are: starch as a carbon source, a

Kohlenstoffstickstoffverhältnis von 10, eine Drehzahl von 125 rpm und eine neutrale Umgebung mit einem pH-Wert von 7;Carbon nitrogen ratio of 10, a rotation speed of 125 rpm and a neutral environment with a pH of 7;

S4. Anwendungseffekt der Dehnung in leicht verschmutztem Rohwasser:S4. Application effect of expansion in slightly contaminated raw water:

Fügen Sie die Stammsaatlösung in einem 5% Volumenverhältnis zum aeroben Reaktor hinzu, der °05228 das Rohwasser des Landschaftswasserkôrpers und das Rohwasser des Wasserquellenreservoirs hinzufügt.Die Sauerstoffperistaltikpumpe sorgt für eine kontinuierliche Belüftung des Reaktors.Add the stock seed solution in a 5% volume ratio to the aerobic reactor, which adds the raw water of the landscape water body and the raw water of the water source reservoir. The oxygen peristaltic pump ensures continuous aeration of the reactor.

Überwachung der Entfernung von CSB Mn, Ammoniakstickstoff, Nitrat, Nitrit undMonitoring the removal of COD Mn, ammonia nitrogen, nitrate, nitrite and

Gesamtstickstoff im Reaktor sowie der Gesamtzahl der Zellen und des OD 600-Werts nachTotal nitrogen in the reactor as well as the total number of cells and the OD 600 value after

Zugabe der Saatflüssigkeit des Stammes LST24;Addition of seed fluid of strain LST24;

Die Behandlung von Landschaftswasser-Rohwasser durch den Stamm ist in Abbildung 4 dargestellt. Die TN-Konzentration sank von 7,08 mg/L auf 1,14 mg/L, was zu einerThe treatment of landscape water raw water by the tribe is shown in Figure 4. The TN concentration decreased from 7.08 mg/L to 1.14 mg/L, resulting in a

TN-Abtragsrate von 83,62% führte. Die CSB-Mn-Konzentration sank von 7,01 mg/L auf 0,67 mg/L, was zu einer CSB-Mn-Abtragsrate von 90,33%. Darüber hinaus zeigte OD 600 einen zunehmenden Trend in komplexen Rohwasserumgebungen: Nach dem achten Reaktionstag erreichte der OD 600-Wert 0,16 und die Gesamtzahl der Zellen im Reaktor stieg um das 9,5-fache.TN removal rate of 83.62%. The COD-Mn concentration decreased from 7.01 mg/L to 0.67 mg/L, resulting in a COD-Mn removal rate of 90.33%. In addition, OD 600 showed an increasing trend in complex raw water environments: after the eighth day of reaction, the OD 600 value reached 0.16 and the total number of cells in the reactor increased by 9.5 times.

Niitzliche AuswirkungenUseful effects

Im Vergleich zum Stand der Technik sind die vorteilhaften Wirkungen der vorliegendenCompared to the state of the art, the advantageous effects of the present

Erfindung:Invention:

Der aerobe denitrifizierende Aktinomycet-Stamm LST24 mit effizienten Stickstoff- undThe aerobic denitrifying actinomycete strain LST24 with efficient nitrogen and

Kohlenstoffentfernungseigenschaften in der vorliegenden Erfindung kann den Gehalt anCarbon removal properties in the present invention may include the content of

Ammoniakstickstoff, Nitrat, Nitrit und CSB Mn in leicht verschmutztem Wasser effektiv reduzieren und hat ein großes Anwendungspotenzial bei der In-situ-Behandlung von anderen leicht verschmutzten Gewässern wie Landschaftsgewässern und Wasserquellenreservoirs. Dies hat breite Anwendungsmöglichkeiten für die Entwicklung von Denitrifizierungsbakterien oderEffectively reduce ammonia nitrogen, nitrate, nitrite and COD Mn in slightly polluted water and has great application potential in the in-situ treatment of other slightly polluted waters such as landscape waters and water source reservoirs. This has wide application possibilities for the development of denitrification bacteria or

Klärmitteln.Clarifying agents.

AbbildungenIllustrations

Um eine klarere Erklärung der technischen Lösung der Ausführungsformen der vorliegendenIn order to provide a clearer explanation of the technical solution of the embodiments of the present

Erfindung zu geben, wird eine kurze Einführung in die beigefügten Zeichnungen gegeben, die für die Beschreibung der Ausführungsformen erforderlich sind. Es ist offensichtlich, dass die beigefügten Zeichnungen in der folgenden Beschreibung nur einige Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung sind. Für gewöhnliches technisches Personal auf der Grundlage dieserIn order to give a better understanding of the invention, a brief introduction is given to the accompanying drawings, which are necessary for the description of the embodiments. It is obvious that the accompanying drawings in the following description are only some embodiments of the present invention. For ordinary technical personnel on the basis of these

Zeichnungen können andere begleitende Zeichnungen ohne kreativen Aufwand erhalten werden.Drawings can be obtained other accompanying drawings without any creative effort.

Abbildung 1 ist ein schematisches Diagramm des phylogenetischen Stammes LST24 der vorliegenden Erfindung;Figure 1 is a schematic diagram of the phylogenetic strain LST24 of the present invention;

Abbildung 2 zeigt die Wachstumskurve und die Gesamtabbaukurve für gelösten organischenFigure 2 shows the growth curve and the total degradation curve for dissolved organic

Kohlenstoff (DOC) des Stammes LST24 der vorliegenden Erfindung unter Verwendung vonCarbon (DOC) of the strain LST24 of the present invention using

Nitrat als Stickstoffquelle; LUS05228Nitrate as a nitrogen source; LUS05228

Abbildung 3 zeigt die aerobe Denitrifikationsleistung des Stammes LST24 der vorliegendenFigure 3 shows the aerobic denitrification performance of strain LST24 of the present

Erfindung, wenn Nitrat die einzige Stickstoffquelle ist;Invention when nitrate is the only source of nitrogen;

Abbildung 4 zeigt die aerobe Denitrifikationsleistung des Stammes LST24 der vorliegendenFigure 4 shows the aerobic denitrification performance of strain LST24 of the present

Erfindung unter Verwendung von Nitrat als einzige Stickstoffquelle unter verschiedenenInvention using nitrate as the sole nitrogen source among various

Kohlenstoffquellen, C/N, pH-Werten und Drehzahlbedingungen;Carbon sources, C/N, pH values and speed conditions;

Abbildung 5 zeigt die Schadstoffentfernung und das Zellwachstum des Stammes LST24 nachFigure 5 shows the pollutant removal and cell growth of strain LST24 after

Zugabe zum Rohwasser des Landschaftswasserkôrpers gemäß der vorliegenden Erfindung;Addition to the raw water of the landscape water body according to the present invention;

Abbildung 6 zeigt die beabsichtigte Sequenzdarstellung des Aktinomyceten-Stammes der vorliegenden Erfindung;Figure 6 shows the intended sequence representation of the actinomycete strain of the present invention;

Spezifische DurchführungsmethodeSpecific implementation method

Im Folgenden wird eine klare und vollständige Beschreibung der technischen Lösung in denBelow you will find a clear and complete description of the technical solution in the

Ausführungsbeispielen der vorliegenden Erfindung in Verbindung mit den beigefügtenEmbodiments of the present invention in conjunction with the attached

Zeichnungen bereitgestellt. Offensichtlich sind die beschriebenen Ausführungsbeispiele nur einDrawings are provided. Obviously, the embodiments described are only a

Teil der Ausführungsbeispiele der vorliegenden Erfindung, nicht alle von ihnen Basierend auf den Ausführungsbeispielen der vorliegenden Erfindung fallen alle anderen Ausführungsbeispiele, die gewôhnliches technisches Personal auf dem Gebiet der Technik ohne kreative Arbeit erhalten hat, in den Schutzbereich der vorliegenden Erfindung.Part of the embodiments of the present invention, not all of them Based on the embodiments of the present invention, all other embodiments obtained by ordinary technical personnel in the art without creative work fall within the scope of the present invention.

Um das Verständnis der vorliegenden Erfindung zu erleichtern, wird nachfolgend eine umfassendere Beschreibung unter Bezugnahme auf die entsprechenden Zeichnungen bereitgestellt. Mehrere Ausführungsbeispiele der vorliegenden Erfindung sind in den beigefügtenIn order to facilitate the understanding of the present invention, a more comprehensive description is provided below with reference to the corresponding drawings. Several embodiments of the present invention are shown in the attached

Zeichnungen gezeigt. Die vorliegende Erfindung kann jedoch in vielen verschiedenen Formen implementiert werden, nicht beschränkt auf die hier beschriebenen Ausführungsbeispiele. ImThe present invention may, however, be implemented in many different forms, not limited to the embodiments described herein. In

Gegenteil besteht der Zweck der Bereitstellung dieser Ausführungsformen darin, dieOn the contrary, the purpose of providing these embodiments is to

Offenbarung der vorliegenden Erfindung gründlicher und umfassender zu machen.To make the disclosure of the present invention more thorough and comprehensive.

Es ist zu beachten, dass, wenn ein Bauteil als "fest an" einer anderen Komponente bezeichnet wird, es direkt an eine andere Komponente angeschlossen werden kann oder es kann eine zentrierte Komponente sein. Wenn ein Bauteil als mit einem anderen Bauteil "verbunden" betrachtet wird, kann es direkt mit einem anderen Bauteil verbunden werden oder es können beide zentrierende Komponenten vorhanden sein. Die Begriffe "vertikal", "horizontal", "links", "rechts" und ähnliche Ausdrücke, die in diesem Artikel verwendet werden, dienen nur derIt should be noted that when a component is referred to as being "fixed to" another component, it may be directly connected to another component or it may be a centered component. When a component is considered to be "connected" to another component, it may be directly connected to another component or both centering components may be present. The terms "vertical", "horizontal", "left", "right" and similar expressions used in this article are for the purpose of identification only.

Veranschaulichung.Illustration.

Sofern nicht anders definiert, haben alle in diesem Artikel verwendeten technischen und wissenschaftlichen Begriffe die gleichen Bedeutungen wie diejenigen, die allgemein vonUnless otherwise defined, all technical and scientific terms used in this article have the same meanings as those generally used by

Fachleuten auf dem technischen Gebiet der vorliegenden Erfindung verstanden werden. Di 905228Those skilled in the art will understand the present invention. Di 905228

Begriffe, die in der Spezifikation der vorliegenden Erfindung in diesem Artikel verwendet werden, dienen nur der Beschreibung bestimmter Ausführungsbeispiele und sollen die vorliegende Erfindung nicht einschränken. Der Begriff "und/oder", der in diesem Artikel verwendet wird, umfasst alle Kombinationen eines oder mehrerer verwandter aufgelisteterTerms used in the specification of the present invention in this article are for the purpose of describing particular embodiments only and are not intended to limit the present invention. The term "and/or" used in this article includes all combinations of one or more related listed

Elemente.Elements.

Die vorliegende Erfindung bietet eine technische Lösung:The present invention offers a technical solution:

Die Anwendung eines effizienten aeroben denitrifizierenden Aktinomycet-Stammes in derThe application of an efficient aerobic denitrifying actinomycete strain in the

Behandlung von leicht verschmutztem Wasser. Der Aktinomycet-Stamm ist Streptomyces phaeofaciens LST24, und die effektive Sequenzlänge der 16SrRNA des Aktinomycet-StammesTreatment of slightly polluted water. The actinomycete strain is Streptomyces phaeofaciens LST24, and the effective sequence length of the 16SrRNA of the actinomycete strain

LST24 beträgt 1412 bp, wie in der Sequenzliste gezeigt.LST24 is 1412 bp, as shown in the sequence listing.

In dieser Ausführungsform wird der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 durchIn this embodiment, the Streptomyces phaeofaciens strain LST24 is

Anreicherung, Kultivierung, Trennung und Reinigung aus dem darüberliegenden Wasser vonEnrichment, cultivation, separation and purification from the overlying water of

Landschaftswasserkörpern erhalten.preserved landscape water bodies.

In dieser Ausführungsform wird der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 mit Nitrat als einzige Stickstoffquelle angebaut.In this embodiment, Streptomyces phaeofaciens strain LST24 is grown with nitrate as the sole nitrogen source.

In dieser Ausführungsform eignet sich der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 zurIn this embodiment, the Streptomyces phaeofaciens strain LST24 is suitable for

Stickstoff- und Kohlenstoffentfernung in leicht verschmutzten Gewässern.Nitrogen and carbon removal in lightly polluted waters.

In dieser Ausführungsform bezieht sich der mikroverschmutzte Wasserkörper auf einenIn this embodiment, the micro-polluted water body refers to a

Wasserkörper mit einer Konzentration von Schadstoffen unter 10mg/L (wie CSB Mn,Water bodies with a concentration of pollutants below 10 mg/L (such as COD Mn,

Ammoniakstickstoff, Nitratstickstoff und Nitritstickstoff).Ammoniacal nitrogen, nitrate nitrogen and nitrite nitrogen).

Bei dieser Ausführungsform wird der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 aus der darüberliegenden Wasserprobe des Landschaftswasserkörpers angereichert und kultiviert. Er wird dann auf Gaoshi No.1 Kulturmedium isoliert, auf aerobe Denitrifikation gesichtet und auf aerobe Denitrifikation flüssige Kulturmedium für aerobe kontinuierliche Kultivierung geimpft.In this embodiment, Streptomyces phaeofaciens strain LST24 is enriched and cultured from the overlying water sample of the landscape water body. It is then isolated on Gaoshi No.1 culture medium, screened for aerobic denitrification, and inoculated onto aerobic denitrification liquid culture medium for aerobic continuous cultivation.

In dieser Ausf ü hrungsform verwendet die aerobe kontinuierliche Kultur lösliche Stärke alsIn this embodiment, the aerobic continuous culture uses soluble starch as

Kohlenstoffquelle bei einer Temperatur von 30 °C; Die Impfmenge von Streptomyces phaeofaciens LST24 beträgt 1% des Volumens des aeroben Denitrifizierungsfl ü ssigkeitskulturmediums.Carbon source at a temperature of 30 °C; The inoculation amount of Streptomyces phaeofaciens LST24 is 1% of the volume of the aerobic denitrification liquid culture medium.

Die Anwendung eines effizienten aeroben denitrifizierenden Aktinomyceten-Stammes bei derThe application of an efficient aerobic denitrifying actinomycete strain in the

Behandlung von leicht verschmutztem Wasser beinhaltet die folgenden spezifischen Schritte:Treatment of slightly contaminated water involves the following specific steps:

S1. Erfassung und Leistungsprüfung von Stämmen;S1. Recording and performance testing of strains;

Anreicherung: auf Polycarbonat-Membran (0.22) uw m) Filtern Sie 100 mlEnrichment: on polycarbonate membrane (0.22) uw m) Filter 100 ml

Landschaftswasserprobe und legen Sie die Polycarbonatmembran sofort auf festes Gaoshi No. 1Landscape water sample and immediately place the polycarbonate membrane on solid Gaoshi No. 1

Medium mit 80 ppm K2Cr207. Das Medium wurde sieben Tage lang bei 30 + 2° C inkubieft 909228Medium with 80 ppm K2Cr207. The medium was incubated for seven days at 30 + 2° C 909228

Alle Proben wurden dreifach inkubiert (n=3).All samples were incubated in triplicate (n=3).

Unter ihnen können Aktinomyceten die Poren von Polycarbonatmembranen durchdringen und auf festem Kulturmedium wachsen, während die Zugabe von K2Cr207 das wettbewerbsfähigeAmong them, actinomycetes can penetrate the pores of polycarbonate membranes and grow on solid culture medium, while the addition of K2Cr207 increases the competitive

Wachstum von Bakterien und Pilzen auf festem Kulturmedium hemmen kann;can inhibit the growth of bacteria and fungi on solid culture medium;

Die Formel des festen Kulturmediums Gaoshi No.1 ist: 0.5g/L KNO3, 0.01g/L NaCl, 0.01g/LThe formula of Gaoshi No.1 solid culture medium is: 0.5g/L KNO3, 0.01g/L NaCl, 0.01g/L

FeSO4, 0.5g/L KH2PO4, 0.5g/L MgSO4, 20g/L Agarpulver, 20g/L lôsliche Stärke, und der pH wird auf 7.2-7.4 eingestellt;FeSO4, 0.5g/L KH2PO4, 0.5g/L MgSO4, 20g/L agar powder, 20g/L soluble starch, and the pH is adjusted to 7.2-7.4;

Vorläufiges Screening: Nehmen Sie angereichertes und kultiviertes Gao-Festkulturmedium Nr.1, wählen Sie trockene Aktinomyceten-Kolonien der gleichen Farbe, Form und Größe auf demPreliminary screening: Take enriched and cultured Gao solid culture medium No.1, select dry actinomycete colonies of the same color, shape and size on the

Medium aus und markieren Sie sie auf Gaos Festkulturmedium Nr.1. Das Kulturmedium wird sieben Tage lang mit der Reinkulturmethode bei 30 + 2° C inkubiert, und alle Proben werden in drei Portionen kultiviert (n=3). Nach insgesamt 6-9-maliger Aufreinigung wurden aus dem erstenMedium and label them on Gao's solid culture medium No.1. The culture medium is incubated for seven days at 30 + 2°C using the pure culture method, and all samples are cultured in three portions (n=3). After a total of 6-9 times of purification,

Screening mehrere reine Actinomyceten-Kolonien gewonnen;Screening yielded several pure actinomycete colonies;

Re-Screening: Inokulieren Sie mehrere ursprünglich gesiebte reine Bakterienkolonien in GaoshiRe-screening: Inoculate several originally screened pure bacterial colonies into Gaoshi

No.1 flüssiges Kulturmedium und inkubieren Sie fünf Tage lang bei 135r/min und 30° C alsNo.1 liquid culture medium and incubate for five days at 135r/min and 30° C as

Saatgutlösung. Fügen Sie 6% der Saatlösung dem Denitrifizierungsmedium volumenweise hinzu, schütteln und kultivieren Sie bei 135 r/min und 30° C und ermitteln Sie die Konzentrationen vonSeed solution. Add 6% of the seed solution to the denitrification medium by volume, shake and culture at 135 r/min and 30° C and determine the concentrations of

Nitrat und Gesamtstickstoff bei 24 und 48 Stunden. Wählen Sie die Kolonie mit der höchstenNitrate and total nitrogen at 24 and 48 hours. Select the colony with the highest

Gesamtstickstoffentfernungseffizienz als optimalen Stamm und nennen Sie sie Stamm LST24.total nitrogen removal efficiency as the optimal strain and name it strain LST24.

Nach der Probensequenzierung wird bestätigt, dass es sich um einen reinen Stamm handelt, und schließen Sie das erneute Screening ab.After sample sequencing, confirm that it is a pure strain and complete rescreening.

S2. Molekularbiologische Identifizierung von Stämmen:S2. Molecular biological identification of strains:

Der Stamm LST24, der im Re-Screening untersucht wurde, wurde einer 16S rDNAThe strain LST24, which was re-screened, was subjected to a 16S rDNA

Gensequenzanalyse unterzogen. Die genomische DNA des Stamms LST24 wurde mit Hilfe desThe genomic DNA of strain LST24 was analyzed using the

Omega DNA (Biotechnology, USA) Kit extrahiert und mit diesem als Vorlage fiir 16S rDNA amplifiziert. Primer: 27F (5 '- AGTTGATCMTGTTACTAG-3') und 14925 (5 '-Omega DNA (Biotechnology, USA) kit and amplified using this as template for 16S rDNA. Primers: 27F (5 '- AGTTGATCMTGTTACTAG-3') and 14925 (5 '-

GGTTACCTGTTACGAT-3');GGTTACCTGTTACGAT-3');

PCR Reaktionssystem (25 u L): Template DNA 20-50ng/u L, PCR Premium 12.5 u L, 27F (10) u M)1 u L.1492R (10) u M)1 u L.DdH20 9.5 y L. PCR-Programm: 95 °C fiir 5PCR reaction system (25 u L): Template DNA 20-50ng/u L, PCR Premium 12.5 u L, 27F (10) u M)1 u L.1492R (10) u M)1 u L.DdH20 9.5 y L. PCR program: 95 °C for 5

Minuten, 94 °C für 30 Sekunden, 57 °C für 30 Sekunden, 72 °C für 90 Sekunden und 72 °C für 10 Minuten; 30-Zyklen verstärken. Die Aufreinigung und Sequenzierung derminutes, 94 °C for 30 seconds, 57 °C for 30 seconds, 72 °C for 90 seconds and 72 °C for 10 minutes; 30 cycles. The purification and sequencing of the

PCR-Produkte wurde von der Bioengineering Company abgeschlossen, die amplifiziertenPCR products were completed by the Bioengineering Company, the amplified

Sequenzen wurden in NCBI hochgeladen und anschließend mit Hilfe der GenBank-Datenbank über BLAST für Homologie-Sequenzen verglichen. LU505228Sequences were uploaded to NCBI and subsequently compared to the GenBank database via BLAST for homology sequences. LU505228

Die Sequenzlänge des Stammes LST24 beträgt 1412 bp, wie in der Sequenztabelle in Abbildung 6 gezeigt. Nach dem Vergleich weist die Sequenz eine hohe Ähnlichkeit von 99,93% mitThe sequence length of strain LST24 is 1412 bp, as shown in the sequence table in Figure 6. After comparison, the sequence shows a high similarity of 99.93% with

Streptomyces phaeofaciens JCM 4814 (NCBI Login Nummer: NR 041126.1) in der NCBIStreptomyces phaeofaciens JCM 4814 (NCBI login number: NR 041126.1) in the NCBI

Datenbank auf, die zur Gattung Streptomyces gehört. Nennen Sie es den Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 mit hocheffizienter aerober Denitrifikation;database that belongs to the genus Streptomyces. Call it Streptomyces phaeofaciens strain LST24 with highly efficient aerobic denitrification;

S3. Bestimmung der aeroben Denitrifizierungsfähigkeit von Stämmen:S3. Determination of the aerobic denitrification capacity of strains:

Inokulieren Sie LST24 Samenlösung mit einer Impfmenge von 1% (Volumenverhältnis) auf denitrifizierendes fl ü ssiges Medium und br ü ten Sie bei 30 °C und 135 rpm in einem Shaker f ür 48 Stunden. Während dieses Zeitraums werden alle drei Stunden Proben genommen, um dieInoculate LST24 seed solution at an inoculation rate of 1% (volume ratio) onto denitrifying liquid medium and incubate at 30 °C and 135 rpm in a shaker for 48 hours. During this period, samples are taken every three hours to determine the

Konzentration von bakterieller Lichtdichte (OD600), Gesamtstickstoff (TN),Concentration of bacterial light density (OD600), total nitrogen (TN),

Ammoniakstickstoff (NH4+- N), Nitrat (NO3,N), Nitrit (NO2,N) und gelöstem organischemAmmonia nitrogen (NH4+- N), nitrate (NO3,N), nitrite (NO2,N) and dissolved organic

Kohlenstoff (DOC) zu messen. Wie in Abbildung 2 gezeigt, befindet sich der Stamm in einer langsamen Phase bei 0-9 Stunden und eine logarithmische Phase bei 9-45 Stunden. Nach 45Carbon (DOC). As shown in Figure 2, the strain is in a slow phase at 0-9 hours and a logarithmic phase at 9-45 hours. After 45

Stunden Kultivierung tritt der Stamm in eine stabile Phase, und die Konzentration von DOC nimmt während der Kultivierungszeit allmählich ab. Nach 48 Stunden Kultivierung beträgt dieAfter 48 hours of cultivation, the strain enters a stable phase and the concentration of DOC gradually decreases during the cultivation period. After 48 hours of cultivation, the

DOC-Abtragsrate des Stammes LST24 in einem anfänglichen DOC-Medium von 150mg/L 91,5%. Darüber hinaus bestätigte der Pearson-Korrelationsindex eine signifikante negativeDOC removal rate of strain LST24 in an initial DOC medium of 150 mg/L was 91.5%. In addition, the Pearson correlation index confirmed a significant negative

Korrelation zwischen der DOC-Konzentration und dem Zellwachstum (r=-0.937, P<0.001, n=17), was darauf hindeutet, dass Kohlenstoffquellen Energie- und Elektronenspender für dasCorrelation between DOC concentration and cell growth (r=-0.937, P<0.001, n=17), indicating that carbon sources are energy and electron donors for

Wachstum und den Metabolismus des Stammes LST24 liefern können. Aus Abbildung 2 undgrowth and metabolism of the LST24 strain. From Figure 2 and

Abbildung B kann man sehen, dass nach 48-Stunden der Kultivierung die Nitratentfernungsrate 99,12%, und die Gesamt-Stickstoffentfernungsrate 97,18% betrug. Es gab keine signifikanteFigure B shows that after 48 hours of cultivation, the nitrate removal rate was 99.12% and the total nitrogen removal rate was 97.18%. There was no significant

Ansammlung von Nitrit und Ammoniakstickstoff während des Prozesses. Wie oben gesehen, hatAccumulation of nitrite and ammonia nitrogen during the process. As seen above,

Stamm LST24 offensichtliche aerobe Denitrifikationsfähigkeit; Darüber hinaus hat der Stamm, wie in Abbildung 3 gezeigt, eine starke Anpassungsfähigkeit an die Umwelt, und die optimalenStrain LST24 obvious aerobic denitrification ability; In addition, as shown in Figure 3, the strain has a strong adaptability to the environment, and the optimal

Anbaubedingungen für den Stamm sind: Stärke als Kohlenstoffquelle, einCultivation conditions for the strain are: starch as a carbon source, a

Kohlenstoffstickstoffverhältnis von 10, eine Drehzahl von 125 rpm und eine neutrale Umgebung mit einem pH-Wert von 7;Carbon nitrogen ratio of 10, a rotation speed of 125 rpm and a neutral environment with a pH of 7;

S4. Anwendungseffekt der Dehnung in leicht verschmutztem Rohwasser:S4. Application effect of expansion in slightly contaminated raw water:

Fügen Sie die Stammsaatlösung in einem 5% Volumenverhältnis zum aeroben Reaktor hinzu, der das Rohwasser des Landschaftswasserkörpers und das Rohwasser des Wasserquellenreservoirs hinzufügt.Die Sauerstoffperistaltikpumpe sorgt für eine kontinuierliche Belüftung des Reaktors.Add the stock seed solution in a 5% volume ratio to the aerobic reactor, which adds the raw water of the landscape water body and the raw water of the water source reservoir.The oxygen peristaltic pump ensures continuous aeration of the reactor.

Überwachung der Entfernung von CSB Mn, Ammoniakstickstoff, Nitrat, Nitrit undMonitoring the removal of COD Mn, ammonia nitrogen, nitrate, nitrite and

Gesamtstickstoff im Reaktor sowie der Gesamtzahl der Zellen und des OD 600-Werts nacht 09228Total nitrogen in the reactor as well as the total number of cells and the OD 600 value after 09228

Zugabe der Saatflüssigkeit des Stammes LST24;Addition of seed fluid of strain LST24;

Die Behandlung von Landschaftswasser-Rohwasser durch den Stamm ist in Abbildung 4 dargestellt. Die TN-Konzentration sank von 7,08 mg/L auf 1,14 mg/L, was zu einerThe treatment of landscape water raw water by the tribe is shown in Figure 4. The TN concentration decreased from 7.08 mg/L to 1.14 mg/L, resulting in a

TN-Abtragsrate von 83,62% führte. Die CSB-Mn-Konzentration sank von 7,01 mg/L auf 0,67 mg/L, was zu einer CSB-Mn-Abtragsrate von 90,33%. Darüber hinaus zeigte OD 600 einen zunehmenden Trend in komplexen Rohwasserumgebungen: Nach dem achten Reaktionstag erreichte der OD 600-Wert 0,16 und die Gesamtzahl der Zellen im Reaktor stieg um das 9,5-fache.TN removal rate of 83.62%. The COD-Mn concentration decreased from 7.01 mg/L to 0.67 mg/L, resulting in a COD-Mn removal rate of 90.33%. In addition, OD 600 showed an increasing trend in complex raw water environments: after the eighth day of reaction, the OD 600 value reached 0.16 and the total number of cells in the reactor increased by 9.5 times.

In der Praxis wurde der aerobe denitrifizierende Aktinomycet-Stamm LST24 als Streptomyces phaeofaciens (NCBI-Registrierungsnummer: OM980672) identifiziert, der zur GattungIn practice, the aerobic denitrifying actinomycete strain LST24 was identified as Streptomyces phaeofaciens (NCBI registration number: OM980672), which belongs to the genus

Streptomyces (Streptomyces sp.) gehört und effiziente Stickstoff- undStreptomyces (Streptomyces sp.) and efficient nitrogen and

Kohlenstoffentfernungseigenschaften aufweist. Der Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24, der eine hohe Effizienz bei der Stickstoff- und Kohlenstoffentfernung aufweist, wurde imThe Streptomyces phaeofaciens strain LST24, which has high nitrogen and carbon removal efficiency, was

Schlüssellabor für Nordwest-Wasserressourcen und Umweltôkologie der Xi'an Universität fürKey Laboratory of Northwest Water Resources and Environmental Ecology, Xi'an University of

Architektur und Technologie am Dezember 25, 2021 deponiert. Die Prozessform der Anwendung des Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24, der eine hohe Effizienz bei der Stickstoff- undArchitecture and Technology on December 25, 2021. The process form of application of Streptomyces phaeofaciens strain LST24, which has high efficiency in nitrogen and

Kohlenstoffentfernung aufweist, ist aerobe Belüftung, bei der die Samenflüssigkeit des StammsCarbon removal is aerobic aeration, in which the seminal fluid of the stem

LST24 in leicht verschmutzte Rohwasserproben geimpft wird. Und die Wasserprobe wurde einerLST24 is inoculated into slightly contaminated raw water samples. And the water sample was subjected to

Belüftungsbehandlung — unterzogen Die Dosierung des aeroben denitrifizierendenAeration treatment — subjected to the dosage of aerobic denitrifying

Aktinomycet-Stammes LST24, der effiziente Stickstoff- undActinomycete strain LST24, which efficiently uses nitrogen and

Kohlenstoffentfernungseigenschaften hat, beträgt 5% des Reaktorvolumens. Der aerobe denitrifizierende Aktinomycet-Stamm LST24, der effiziente = Stickstoff- undcarbon removal properties is 5% of the reactor volume. The aerobic denitrifying actinomycete strain LST24, which has efficient nitrogen and

Kohlenstoffentfernungseigenschaften aufweist, kann effektiv den Gehalt an Ammoniakstickstoff,carbon removal properties, can effectively reduce the content of ammonia nitrogen,

Nitrat, Nitrit und CSB Mn in leicht verschmutztem Wasser reduzieren und hat großesReduce nitrate, nitrite and COD Mn in slightly polluted water and has great

Anwendungspotenzial bei der In-situ-Behandlung anderer leicht verschmutzter Gewässer wiePotential for in-situ treatment of other lightly polluted waters such as

Landschaftswasserkôrper und Wasserquellenreservoirs. Dies hat breiteLandscape water bodies and water source reservoirs. This has broad

Anwendungsmôglichkeiten für die Entwicklung von Denitrifizierungsbakterien oder Klärmitteln.Application possibilities for the development of denitrification bacteria or clarifiers.

Das Vorstehende ist nur eine bevorzugte spezifische Umsetzung der vorliegenden Erfindung, aber der Schutzumfang der vorliegenden Erfindung ist nicht darauf beschränkt. Jedes technischeThe above is only a preferred specific implementation of the present invention, but the scope of the present invention is not limited thereto. Any technical

Personal, das mit dem technischen Bereich vertraut ist, das im Rahmen der offenbartenPersonnel familiar with the technical field, which within the scope of the disclosed

Technologie gleichwertige Ersetzungen oder Anderungen basierend auf der technischen Lôsung und dem erfinderischen Konzept der vorliegenden Erfindung vornimmt, sollte in denTechnology equivalent replacements or changes based on the technical solution and inventive concept of the present invention should be included in the

Schutzbereich der vorliegenden Erfindung fallen.fall within the scope of the present invention.

Claims (8)

PATENTANSPRÜCHE 0505228PATENT CLAIMS 0505228 1. Fin effizienter aerober denitrifizierender Aktinomycet-Stamm, dadurch gekennzeichnet, dass der Aktinomycet-Stamm Streptomyces phaeofaciens LST24 ist und die effektive Sequenzlänge der 16SrRNA des Aktinomycet-Stamms LST24 1412 bp beträgt, wie in der Sequenzliste gezeigt.1. An efficient aerobic denitrifying actinomycete strain, characterized in that the actinomycete strain is Streptomyces phaeofaciens LST24 and the effective sequence length of the 16SrRNA of the actinomycete strain LST24 is 1412 bp as shown in the sequence listing. 2. Fin hocheffizienter aerober denitrifizierender Aktinomycet-Stamm gemäB Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Streptomyces phaeofaciens LST24 durch Anreicherung, Kultivierung, Trennung und Reinigung aus überlagertem Wasser von Landschaftsgewässern gewonnen wird.2. A highly efficient aerobic denitrifying actinomycete strain according to claim 1, characterized in that the Streptomyces phaeofaciens LST24 is obtained by enrichment, cultivation, separation and purification from overlying water of landscape waters. 3. Ein hocheffizienter aerober denitrifizierender Aktinomycet-Stamm gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Streptomyces phaeofaciens LST24 mit Nitrat als alleiniger Stickstoffquelle angebaut wird...3. A highly efficient aerobic denitrifying actinomycete strain according to claim 1, characterized in that the Streptomyces phaeofaciens LST24 is grown with nitrate as the sole nitrogen source... 4. Ein hocheffizienter aerober denitrifizierender Aktinomycet-Stamm gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Streptomyces phaeofaciens LST24 zur Stickstoff- und Kohlenstoffentfernung in leicht verschmutzten Gewässern geeignet ist.4. A highly efficient aerobic denitrifying actinomycete strain according to claim 1, characterized in that Streptomyces phaeofaciens LST24 is suitable for nitrogen and carbon removal in slightly polluted waters. 5. Ein hocheffizienter aerober denitrifizierender Aktinomycet-Stamm gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der leicht verschmutzte Wasserkörper sich auf einen Wasserkörper mit einer Schadstoffkonzentration unter 10mg/L bezieht (wie CSB Mn, Ammoniakstickstoff, Nitratstickstoff und Nitritstickstoff).5. A highly efficient aerobic denitrifying actinomycete strain according to claim 1, characterized in that the slightly polluted water body refers to a water body with a pollutant concentration below 10 mg/L (such as COD Mn, ammonia nitrogen, nitrate nitrogen and nitrite nitrogen). 6. Effizienter aerober denitrifizierender Aktinomycet-Stamm gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Streptomyces phaeofaciens LST24 aus einer Wasserprobe angereichert und kultiviert wird, die über einem Landschaftswasserkörper liegt, sequentiell auf Gaos Kulturmedium Nr.1 getrennt, auf aerobe Denitrifikation gesichtet und auf einem aeroben denitrifizierenden flüssigen Kulturmedium für aerobe kontinuierliche Kultivierung geimpft wird.6. An efficient aerobic denitrifying actinomycete strain according to claim 1, characterized in that the Streptomyces phaeofaciens LST24 is enriched and cultured from a water sample overlying a landscape water body, sequentially separated on Gao's No.1 culture medium, screened for aerobic denitrification, and inoculated on an aerobic denitrifying liquid culture medium for aerobic continuous cultivation. 7. Ein effizienter aerober denitrifizierender Aktinomyceten-Stamm gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die aerobe kontinuierliche Kultivierung lösliche Stärke als Kohlenstoffquelle bei einer Temperatur von 30 ‘C verwendet; Die Impfmenge von Streptomyces phaeofaciens LST24 beträgt 1% des Volumens des aeroben Denitrifizierungsflüssigkeitskulturmediums.7. An efficient aerobic denitrifying actinomycetes strain according to claim 1, characterized in that the aerobic continuous cultivation uses soluble starch as a carbon source at a temperature of 30'C; the inoculation amount of Streptomyces phaeofaciens LST24 is 1% of the volume of the aerobic denitrifying liquid culture medium. 8. Die Anwendung eines effizienten aeroben denitrifizierenden Aktinomyceten-Stammes gemäß einer der Ansprüche 1-7 bei der Behandlung von leicht verschmutztem Wasser, wobei die spezifischen Schritte wie folgt sind:8. The use of an efficient aerobic denitrifying actinomycete strain according to any one of claims 1-7 in the treatment of slightly polluted water, the specific steps being as follows: S1. Erfassung und Leistungsprüfung von Stämmen; Anreicherung: auf Polycarbonat-Membran (0.22) uw m) Filtern Sie 100 mlS1. Detection and performance testing of strains; enrichment: on polycarbonate membrane (0.22) uw m) Filter 100 ml Landschaftswasserprobe und legen Sie die Polycarbonatmembran sofort auf festes Gaoshi No/°05228 Medium mit 80 ppm K2Cr207, das Medium wurde sieben Tage lang bei 30 + 2° C inkubiert, alle Proben wurden dreifach inkubiert (n=3), unter ihnen können Aktinomyceten die Poren von Polycarbonatmembranen durchdringen und auf festem Kulturmedium wachsen, während die Zugabe von K2Cr207 das wettbewerbsfähige Wachstum von Bakterien und Pilzen auf festem Kulturmedium hemmen kann; die Formel des festen Kulturmediums Gaoshi No.1 ist: 0.5g/L KNO3, 0.01g/L NaCl,Landscape water sample and immediately place the polycarbonate membrane on Gaoshi No/°05228 solid medium containing 80ppm K2Cr207, the medium was incubated at 30 + 2°C for seven days, all samples were incubated in triplicate (n=3), among them, actinomycetes can penetrate the pores of polycarbonate membranes and grow on solid culture medium, while the addition of K2Cr207 can inhibit the competitive growth of bacteria and fungi on solid culture medium; the formula of Gaoshi No.1 solid culture medium is: 0.5g/L KNO3, 0.01g/L NaCl, 0.01g/L FeSO4, 0.5g/L KH2PO4, 0.5g/L MgSO4, 20g/L Agarpulver, 20g/L lôsliche Stärke, und der pH wird auf 7.2~7.4 eingestellt; vorläufiges Screening: Nehmen Sie angereichertes und kultiviertes Gao-Festkulturmedium0.01g/L FeSO4, 0.5g/L KH2PO4, 0.5g/L MgSO4, 20g/L agar powder, 20g/L soluble starch, and the pH is adjusted to 7.2~7.4; Preliminary screening: Take enriched and cultured Gao solid culture medium Nr.1, wählen Sie trockene Aktinomyceten-Kolonien der gleichen Farbe, Form und Größe auf dem Medium aus und markieren Sie sie auf Gaos Festkulturmedium Nr.1; das Kulturmedium wird sieben Tage lang mit der Reinkulturmethode bei 30 + 2° C inkubiert, und alle Proben werden in drei Portionen kultiviert (n=3); nach insgesamt 6-9-maliger Aufreinigung wurden aus dem ersten Screening mehrere reine Actinomyceten-Kolonien gewonnen; re-Screening: Inokulieren Sie mehrere ursprünglich gesiebte reine Bakterienkolonien in Gaoshi No.1 flüssiges Kulturmedium und inkubieren Sie fünf Tage lang bei 135r/min und 30° C als Saatgutlosung; fügen Sie 6% der Saatlôsung dem Denitrifizierungsmedium volumenweise hinzu, schütteln und kultivieren Sie bei 135 r/min und 30° C und ermitteln Sie die Konzentrationen von Nitrat und Gesamtstickstoff bei 24 und 48 Stunden; wählen Sie die Kolonie mit der hochsten Gesamtstickstoffentfernungseffizienz als optimalen Stamm und nennen Sie sie Stamm LST24; nach der Probensequenzierung wird bestätigt, dass es sich um einen reinen Stamm handelt, und schließen Sie das erneute Screening ab;No.1, select dry actinomycete colonies of the same color, shape and size on the medium and mark them on Gao's No.1 solid culture medium; the culture medium is incubated at 30 + 2°C for seven days by the pure culture method, and all samples are cultured in three portions (n=3); after a total of 6-9 times of purification, several pure actinomycete colonies were obtained from the first screening; re-screening: inoculate several originally sieved pure bacterial colonies into Gaoshi No.1 liquid culture medium and incubate at 135r/min and 30°C for five days as seed solution; add 6% of the seed solution to the denitrification medium by volume, shake and culture at 135r/min and 30°C, and determine the concentrations of nitrate and total nitrogen at 24 and 48 hours; select the colony with the highest total nitrogen removal efficiency as the optimal strain and name it strain LST24; after sample sequencing, it is confirmed to be a pure strain and complete the rescreening; S2. Molekularbiologische Identifizierung von Stämmen: der Stamm LST24, der im Re-Screening untersucht wurde, wurde einer 16S rDNA Gensequenzanalyse unterzogen; die genomische DNA des Stamms LST24 wurde mit Hilfe des Omega DNA (Biotechnology, USA) Kit extrahiert und mit diesem als Vorlage fiir 16S rDNA amplifiziert, primer: 27F (5 '- AGTTGATCMTGTTACTAG-3') und 14925 (5 '- GGTTACCTGTTACGAT-3"); PCR Reaktionssystem (25 u L): Template DNA 20-50ng/u L, PCR Premium 12.5 u L, 27F (10) 4 M)1 u L.1492R (10) u M)1 u L.DdH20 9.5 u L. PCR-Programm: 95 °C f ür 5 Minuten, 94 °C für 30 Sekunden, 57 °C für 30 Sekunden, 72 °C für 90 Sekunden und 72 °C für 10 Minuten; 30-Zyklen verstärken; die Aufreinigung und Sequenzierung derS2. Molecular biological identification of strains: the strain LST24, which was re-screened, was subjected to 16S rDNA gene sequence analysis; the genomic DNA of the strain LST24 was extracted using the Omega DNA (Biotechnology, USA) kit and amplified using it as a template for 16S rDNA, primer: 27F (5 '- AGTTGATCMTGTTACTAG-3') and 14925 (5 '- GGTTACCTGTTACGAT-3"); PCR reaction system (25 u L): Template DNA 20-50ng/u L, PCR Premium 12.5 u L, 27F (10) 4 M)1 u L.1492R (10) u M)1 u L.DdH20 9.5 u L. PCR program: 95 °C for 5 minutes, 94 °C for 30 seconds, 57 °C for 30 seconds, 72 °C for 90 seconds and 72 °C for 10 minutes; 30 cycles amplification; the purification and sequencing of the PCR-Produkte wurde von der Bioengineering Company abgeschlossen, die amplifiziertiy 505228 Sequenzen wurden in NCBI hochgeladen und anschließend mit Hilfe der GenBank-Datenbank über BLAST für Homologie-Sequenzen verglichen; die Sequenzlänge des Stammes LST24 beträgt 1412 bp, wie in der Sequenztabelle in Abbildung 6 gezeigt; nach dem Vergleich weist die Sequenz eine hohe Ähnlichkeit von 99,93% mit Streptomyces phaeofaciens JCM 4814 (NCBI Login Nummer: NR 041126.1) in der NCBI Datenbank auf, die zur Gattung Streptomyces gehört; nennen Sie es den Streptomyces phaeofaciens Stamm LST24 mit hocheffizienter aerober Denitrifikation;PCR products was completed by the Bioengineering Company, the amplified 505228 sequences were uploaded to NCBI, and then compared with the GenBank database via BLAST for homology sequences; the sequence length of strain LST24 is 1412 bp, as shown in the sequence table in Figure 6; after comparison, the sequence has a high similarity of 99.93% with Streptomyces phaeofaciens JCM 4814 (NCBI login number: NR 041126.1) in the NCBI database, which belongs to the genus Streptomyces; call it the Streptomyces phaeofaciens strain LST24 with high-efficiency aerobic denitrification; S3. Bestimmung der aeroben Denitrifizierungsfahigkeit von Stämmen: inokulieren Sie LST24 Samenlösung mit einer Impfmenge von 1% (Volumenverhältnis) auf denitrifizierendes fl ü ssiges Medium und br ü ten Sie bei 30 °C und 135 rpm in einem Shaker f ür 48 Stunden; während dieses Zeitraums werden alle drei Stunden Proben genommen, um die Konzentration von bakterieller Lichtdichte (OD600), Gesamtstickstoff (TN), Ammoniakstickstoff (NH4+- N), Nitrat (NO3,N), Nitrit (NO2,N) und gelöstem organischem Kohlenstoff (DOC) zu messen; xie in Abbildung 2 gezeigt, befindet sich der Stamm in einer langsamen Phase bei 0-9 Stunden und eine logarithmische Phase bei 9-45 Stunden; nach 45 Stunden Kultivierung tritt der Stamm in eine stabile Phase, und die Konzentration von DOC nimmt während der Kultivierungszeit allmählich ab; nach 48 Stunden Kultivierung beträgt die DOC-Abtragsrate des Stammes LST24 in einem anfänglichen DOC-Medium von 150mg/L 91,5%; darüber hinaus bestätigte der Pearson-Korrelationsindex eine signifikante negative Korrelation zwischen der DOC-Konzentration und dem Zellwachstum (r=-0.937, P<0.001, n=17), was darauf hindeutet, dass Kohlenstoffquellen Energie- und Elektronenspender für das Wachstum und den Metabolismus des Stammes LST24 liefern können; aus Abbildung 2 und Abbildung B kann man sehen, dass nach 48-Stunden der Kultivierung die Nitratentfernungsrate 99,12%, und die Gesamt-Stickstoffentfernungsrate 97,18% betrug; es gab keine signifikante Ansammlung von Nitrit und Ammoniakstickstoff während des Prozesses; wie oben gesehen, hat Stamm LST24 offensichtliche aerobe Denitrifikationsfähigkeit; Darüber hinaus hat der Stamm, wie in Abbildung 3 gezeigt, eine starke Anpassungsfähigkeit an die Umwelt, und die optimalen Anbaubedingungen für den Stamm sind: Stärke als Kohlenstoffquelle, ein Kohlenstoffstickstoffverhältnis von 10, eine Drehzahl von 125 rpm und eine neutrale Umgebung mit einem pH-Wert von 7;S3. Determination of aerobic denitrification ability of strains: inoculate LST24 seed solution with an inoculation amount of 1% (volume ratio) onto denitrifying liquid medium and incubate at 30 °C and 135 rpm in a shaker for 48 hours; during this period, samples are taken every three hours to measure the concentration of bacterial light density (OD600), total nitrogen (TN), ammonia nitrogen (NH4+- N), nitrate (NO3,N), nitrite (NO2,N) and dissolved organic carbon (DOC); as shown in Figure 2, the strain is in a slow phase at 0-9 hours and a logarithmic phase at 9-45 hours; after 45 hours of cultivation, the strain enters a stable phase, and the concentration of DOC gradually decreases during the cultivation period; after 48 hours of cultivation, the DOC removal rate of strain LST24 in an initial DOC medium of 150mg/L was 91.5%; in addition, Pearson correlation index confirmed a significant negative correlation between DOC concentration and cell growth (r=-0.937, P<0.001, n=17), indicating that carbon sources can provide energy and electron donors for the growth and metabolism of strain LST24; from Figure 2 and Figure B, it can be seen that after 48 hours of cultivation, the nitrate removal rate was 99.12%, and the total nitrogen removal rate was 97.18%; there was no significant accumulation of nitrite and ammonia nitrogen during the process; as seen above, strain LST24 has obvious aerobic denitrification ability; In addition, as shown in Figure 3, the strain has strong environmental adaptability, and the optimal cultivation conditions for the strain are: starch as a carbon source, a carbon nitrogen ratio of 10, a rotation speed of 125 rpm, and a neutral environment with a pH of 7; S4. Anwendungseffekt der Dehnung in leicht verschmutztem Rohwasser: Fügen Sie die Stammsaatlösung in einem 5% Volumenverhältnis zum aeroben Reaktor hinzu, der das Rohwasser des Landschaftswasserkörpers und das Rohwasser desS4. Application effect of dilation in slightly polluted raw water: Add the stock seed solution in a 5% volume ratio to the aerobic reactor containing the raw water of the landscape water body and the raw water of the Wasserquellenreservoirs hinzufügt; die Sauerstoffperistaltikpumpe sorgt für eine kontinuierliche 99228 Belüftung des Reaktors; überwachung der Entfernung von CSB Mn, Ammoniakstickstoff, Nitrat, Nitrit und Gesamtstickstoff im Reaktor sowie der Gesamtzahl der Zellen und des OD 600-Werts nach Zugabe der Saatflüssigkeit des Stammes LST24;water source reservoirs; the oxygen peristaltic pump ensures continuous 99228 aeration of the reactor; monitoring the removal of COD Mn, ammonia nitrogen, nitrate, nitrite and total nitrogen in the reactor as well as the total number of cells and OD 600 value after addition of the seed liquid of strain LST24; die Behandlung von Landschaftswasser-Rohwasser durch den Stamm ist in Abbildung 4 dargestellt; die TN-Konzentration sank von 7,08 mg/L auf 1,14 mg/L, was zu einer TN-Abtragsrate von 83,62% führte; die CSB-Mn-Konzentration sank von 7,01 mg/L auf 0,67 mg/L, was zu einer CSB-Mn-Abtragsrate von 90,33%; darüber hinaus zeigte OD 600 einen zunehmenden Trend in komplexen Rohwasserumgebungen: nach dem achten Reaktionstag erreichte der OD 600-Wert 0,16 und die Gesamtzahl der Zellen im Reaktor stieg um das 9,5-fache.the treatment of landscape water raw water by the strain is shown in Figure 4; the TN concentration decreased from 7.08 mg/L to 1.14 mg/L, resulting in a TN removal rate of 83.62%; the COD-Mn concentration decreased from 7.01 mg/L to 0.67 mg/L, resulting in a COD-Mn removal rate of 90.33%; in addition, OD 600 showed an increasing trend in complex raw water environments: after the eighth day of reaction, the OD 600 value reached 0.16 and the total number of cells in the reactor increased by 9.5 times.
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