KR970021307A - HCV-신드비스(Sindbis) 재조합 바이러스 클론 및 그를 이용한 C형 간염 치료제의 탐색방법 - Google Patents
HCV-신드비스(Sindbis) 재조합 바이러스 클론 및 그를 이용한 C형 간염 치료제의 탐색방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 세린계 단백질 분해효소의 활성을 나타내는 HCV의 NS3/NS4A 유전자 부위 또는 전기 유전자 부위 중에서 헬리케이스(helicase) 코딩 부위를 제거한 나머지 유전자를 신드비스(sindbis) 바이러스의 구조유전자 5′앞에 삽입하여 제조한 HCV-신드비스 재조합 cDNA 클론 및 그를 이용하여 단백질 분해효소의 활성을 억제하는 저해제를 탐백하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에서 제조한 Tpro CT 및 Tpro T cDNA 클론은 감염성이 있으며, Tpro CT 및 Tpro T의 HCV-신드비스 재조합 바이러스로부터 HCV 단백질 분해효소가 정확히 합성되며, 합성된 HCV 단백질 분해효소는 NS4A/신드비스 코어 절단부위에서 절단하는 활성을 가지고 있어, 융합단백질로부터 신드비스 코어 단백질을 절단하고, 이로부터 신드비스 바이러스 입자가 형성된다. 아울러, Tpro CT 및 Tpro T cDNA 클론으로부터 제조된 바이러스 Tpro CT 및 Tpro T로 감염됨 BHK-21 세포의 형태가 원형으로 변화하며, 그 배양액의 pH가 산성으로 변화하므로, 이는 재조합 바이러스의 복제에 대한 HCV 단백질 분해효소의 활성도를 표시하는 좋은 지표가 될 수 있다. 따라서, 본 발명에서 제조한 Tpro CT 및 Tpro T cDNA 클론을 이용하면, HCV의 복제에 필수적인 HCV 단백질 분해효소의 활성을 저해하므로 C형 간염의 치료제로 이용될 수 있을 것이다.
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 플라스미드 pSK frag123의 유전자 지도를 나타낸다,
제2도는 Tpro CT, Tpro CTI, Tpro T, Tpro TI, Toto 헬퍼(helper) 및 Toto 1000의 cDNA 클론을 나타내는 모식도이다,
제3(A)도는 재조합 바이러스의 cDNA 클론으로부터 합성된 RAN로 BHK-21 세포를 감염시키고, 세포를 파쇄하여 전기영동한 다음, HCV 양성인 환자의 혈청과 마우스로부터 채취한 항-신드비스 혈청을 사용하여 면역블럭(immunoblotting)한 결과를 나타내는 사진이다,
제3(B)도는 v1000 바이러스 및 Vpro T 바이러스 입자를 분리하여 전기영동한 다음, 마우스로부터 채취한 항-신드비스 항체를 사용하여 ECL(enhanced chemiluminescence)-면역블럿한 결과를 나타내는 사진이다.
Claims (9)
- HCV 단백질 분해효소의 활성을 나타내는 HCV의 NS3/NS4A 유전자 부위를 신드비스(Sindbis) 바이러스의 구조유전자 5′앞에 삽입하여 제조한 HCV-신드비스의 재조합 cDNA 클론 Tpro CT.
- HCV 단백질 분해효소의 활성을 나타내는 HCV의 NS3/NS4A 유전자 부위 중에서 헬리케이스(helicase)(아미노산 서열 1356-1635) 코딩 부위를 제거한 나머지 유전자를 신드비스(Sindbis) 바이러스의 구조유전자 5′앞에 삽입하여 제조한 HCV-신드비스의 제조합 cDNA 클론 Tpro T.
- 제1항의 HCV-신드비스의 재조합 cDNA 클론 Tpro CT를 BHK-21 세포(ATCC CRL 6281)에 감염시켜 제조한 HCV-신드비스의 재조합 바이러스 Vpro CT(KCTC 0185BP).
- 제2항의 HCV-신드비스의 재조합 cDNA 클론 Tpro T를 BHK-21 세포(ATCC CRL 6281)에 감염시켜 제조한 HCV-신드비스의 재조합 바이러스 Vpro T(KCTC 0185BP).
- 제1항에 있어서, HCV 단백질 분해효소는 NS4A/신드비스(Sindbis) 코어 절단부 위에서 절단하는 활성을 가지고 있는 것을 특징으로 하는 HCV-신드비스의 재조합 cDNA 클론 Tpro CT.
- 제2항에 있어서, HCV 단백질 분해효소는 NS4A/신드비스(Sindbis) 코어 절단부 위에서 절단하는 활성을 가지고 있는 것을 특징으로 하는 HCV-신드비스의 재조합 cDNA 클론 Tpro T.
- 제1항의 HCV-신드비스의 재조합 cDNA 클론 Tpro CT로부터 실험실적(in vitro)으로 전사된 RNA를 포유 동물세포에 감염시키고, 배양하는 공정을 포함하는 HCV 단백질 분해효소 저해제의 탐색방법.
- 제2항의 HCV-신드비스의 재조합 cDNA 클론 Tpro T로부터 실험실적(in vitro)으로 전사된 RNA를 포유 동물세포에 감염시키고, 배양하는 공정을 포함하는 HCV 단백질 분해효소 저해제의 탐색방법.
- 제7항 또는 제8항에 있어서, HCV-신드비스의 재조합 cDNA 클론 Tpro CT 또는 Tpro T로 감염된 포유동물세포의 배양액 pH가 비감염 포유 동물세포나 v1000 바이러스로 감염된 포유 동물세포의 배양액 pH보다 더 조속히 산성화되는 것을 지표로 하여 HCV 단백질분해효소의 저해제를 탐색하는 것을 특징으로 하는 HCV 단백질 분해효소 저해제의 탐색방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019950034771A KR970021307A (ko) | 1995-10-10 | 1995-10-10 | HCV-신드비스(Sindbis) 재조합 바이러스 클론 및 그를 이용한 C형 간염 치료제의 탐색방법 |
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| KR1019950034771A KR970021307A (ko) | 1995-10-10 | 1995-10-10 | HCV-신드비스(Sindbis) 재조합 바이러스 클론 및 그를 이용한 C형 간염 치료제의 탐색방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
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| KR970021307A true KR970021307A (ko) | 1997-05-28 |
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ID=66583594
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| KR1019950034771A KR970021307A (ko) | 1995-10-10 | 1995-10-10 | HCV-신드비스(Sindbis) 재조합 바이러스 클론 및 그를 이용한 C형 간염 치료제의 탐색방법 |
Country Status (1)
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| KR (1) | KR970021307A (ko) |
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1995
- 1995-10-10 KR KR1019950034771A patent/KR970021307A/ko active IP Right Grant
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