Claims (33)
임의로 공유 결합된 올리고머들을 포함하는 제2 및 제3가닥을 표적 서열과 결합시킴으로써 표적 서열을 가지고 있는 단일 가닥 핵산을 검출, 인지 및/또는 그것의 발현을 억제 또는 변경시키는 방법으로서, 상기 표적 서열을 제2 및 제3가닥과 접촉시킴으로써 제2 가닥은 왓슨-크릭 염기 짝짓기에 의해 표적 서열에 결합하고 제3 가닥은 제2 가닥과 수소 결합하고 결합하여 그것과 삼중 나선 복합체를 형성하며, 제2가닥은 피리미딘-5-공여체/수용체를 가지는 최소한 하나의 누클레오시드를 포함하고 제3가닥은 생리적 pH에서 상기 피리미딘-5공여체/수용체와 결합할수 있는 염기를 가지는 상응하는 누클레오시드를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.A method for detecting, recognizing and / or inhibiting or altering expression of a single stranded nucleic acid having a target sequence by combining a second and third strand, optionally comprising covalently linked oligomers, with a target sequence, wherein the target sequence is modified. By contacting the second and third strands, the second strand binds to the target sequence by Watson-Crick base pairing, and the third strand hydrogen bonds with and binds to the second strand, forming a triple helix complex with the second strand. Comprises at least one nucleoside having a pyrimidine-5-donor / receptor and the third strand has a corresponding nucleoside having a base capable of binding to the pyrimidine-5 donor / receptor at physiological pH How to feature.
제1항에 있어서, 제3가닥의 누클레오시드가 제2B도의 모티프 I 내지 V'중 하나를 따라 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1, wherein the nucleoside of the third strand is selected along one of the motifs I through V ′ of FIG. 2B.
제2항에 있어서, 제2가닥의 누클레오시드가 제2A의 과돌연변이 1 내지 4중 하나를 따라 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 2, wherein the nucleoside of the second strand is selected according to one of the overmutations 1 to 4 of 2A.
임의로 공유 결합된 올리고머들을 포함하는 제2 및 제3가닥을 표적 서열과 결합시킴으로써 표적 서열에 가지고 있는 단일 가닥 핵산을 검출, 인지 및/또는 그것의 발현을 억제 또는 변경시키는 방법으로서, 상기 표적 서열을 제2 및 제3가닥과 접촉시킴으로써 제2가닥은 왓슨-크릭 염기 짝짓기에 의해 표적 서열에 결합하고 제3가닥은 제2가닥과 수소 결합 및 그것에 결합하여 그것과 삼중 나선 복합체를 형성하며, 제2가닥의 누클레오시드의 서열은 제2A도의 과돌연변이 1 내지 4중 하나를 따라 선택되고, 제3가닥의 누클레오시드 서열은 제2B도의 모티프 I 내지 V'중 하나를 따라 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.A method of detecting, recognizing, and / or inhibiting or altering the expression of a single stranded nucleic acid in a target sequence by combining the second and third strands, optionally comprising covalently linked oligomers, with a target sequence, wherein the target sequence is modified. By contacting the second and third strands, the second strand binds to the target sequence by Watson-Crick base pairing, and the third strand binds to the hydrogen and bonds with the second strand to form a triple helix complex with the second strand. The sequence of nucleosides of the strand is selected according to one of the overmutations 1 to 4 of FIG. 2A, and the nucleoside sequence of the third strand is selected along one of the motifs I to V 'of FIG. 2B. Way.
제4항에 있어서, 상기 제2 및 제3가닥이 임의로 공유 결합된 실질적으로 중성의 올리고머들을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.5. The method of claim 4, wherein said second and third strands comprise substantially neutral oligomers, optionally covalently bonded.
제4항에 있어서, 상기 표적 서열이 약4 내지 약40 누클레오시드 유니트를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 4, wherein the target sequence has about 4 to about 40 nucleoside units.
제6항에 있어서, 상기 제2 및 제3가닥이 임의로 공유 결합된 실질적으로 중성의 올리고머들을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.7. The method of claim 6, wherein said second and third strands comprise substantially neutral oligomers, optionally covalently bonded.
제7항에 있어서, 상기 실질적으로 중성의 올리고머가 메틸포스포네이트 올리고인 것을 특징으로 하는 방법.8. The method of claim 7, wherein said substantially neutral oligomer is a methylphosphonate oligo.
선택된 단일 가닥의 핵산의 발현을 억제 또는 변경시키는 방법으로서, (a) 상기 단일 가닥의 핵산의 표적 서열을 선택하는 단계; (b) 임의로 공유 결합된 올리고머들을 포함하고 있으며, 제2가닥은 표적 서열에 실질적으로 상보하고 제3가닥은 제2가닥에 실질적으로 상보하며, 제2가닥의 누클레오시드의 서열은 제2A도의 과돌연변이 1 내지 4중 하나를 따라 선택되고, 제3가닥의 누클레오시드 서열은 제2B도의 모티프 I 내지 V'중 하나를 따라 선택되는 것을 특징으로 하는 제 2 및 제3가닥과 상기 표적 서열을 접촉시키는 단계; 그리고 (c) 제2가닥을 표적 서열 및 제3가닥과 결합시킴으로써 삼중 나선 복합체를 형성하는 단계로 이루어지는 방법.A method of inhibiting or altering the expression of a selected single strand of nucleic acid, the method comprising: (a) selecting a target sequence of said single stranded nucleic acid; (b) optionally covalently linked oligomers, the second strand is substantially complementary to the target sequence, the third strand is substantially complementary to the second strand, and the sequence of the nucleoside of the second strand is Hypermutation is selected according to one of 1 to 4, and the nucleoside sequence of the third strand is selected according to one of the motifs I to V 'of FIG. 2B. Contacting; And (c) combining the second strand with the target sequence and the third strand to form a triple helix complex.
제9항에 있어서, 상기 표적 서열이 약4 내지 약40 누클레오시드 유니트를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 9, wherein the target sequence has about 4 to about 40 nucleoside units.
제10항에 있어서, 상기 제2 및 제3가닥이 실질적으로 중성의 올리고머를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 10, wherein said second and third strands comprise substantially neutral oligomers.
제9항에 있어서, 상기 표적 서열이 mRNA의 부분 또는 프리-mRNA인 것을 특징으로 하는 방법.10. The method of claim 9, wherein the target sequence is part of a mRNA or a pre-mRNA.
선택된 mRNA의 생성물의 발현을 억지 또는 변경시키는 방법으로서, 상기 mRNA의 표적 서열 또는 그것의 프리-mRNA를 임의로 공유 결합된 올리고머들을 포함하고 있으며 제2가닥은 제2A도의 과돌연변이 1 내지 4중 하나를 따라 선택된 누클레오시드 서열을 가지며, 제3가닥은 제2B도의 모티프 I내지 V'중 하나를 따라 선택된 누클레오시드 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 제2 및 제3가닥과 접촉시킴으로써 제2 및 제3가닥이 표적 서열과 결합하여 삼중 나선을 형성하는 것으로 이루어지는 방법.A method of inhibiting or altering the expression of a product of a selected mRNA, the method comprising the oligomers optionally covalently linked to the target sequence of the mRNA or its pre-mRNA and the second strand is one of the overmutations 1 to 4 of FIG. 2A. Having a nucleoside sequence selected according to the present invention, wherein the third strand has a nucleoside sequence selected according to one of motifs I to V 'of FIG. 2B. Wherein the strands combine with the target sequence to form triple helices.
제13항에 있어서, 제2 및 제3가닥이 약4 내지 약 40 누클레오시드를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 13, wherein the second and third strands have about 4 to about 40 nucleosides.
제14항에 있어서, 제2 및 제3가닥이 실질적으로 중성의 올리고머들을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.15. The method of claim 14, wherein the second and third strands comprise substantially neutral oligomers.
핵산의 단일 가닥의 표적 서열을 가지는 임의로 공유 결합된 올리고머들을 포함하고 있으며 제2가닥에 대한 누클레오시드 서열이 제2A도의 과돌연변이 1 내지 4중 하나를 따라 선택되고, 제3가닥에 대한 누클레오시드 서열은 제2B도의 모티프 I 내지 V'중 하나를 따라 선택되는 것을 특징으로 하는 제2 및 제3가닥을, 제2가닥이 표적 서열 및 제3가닥과 수소 결합에 의하여 특이적으로 및 선택적으로 결합하도록 결합시킴으로써 형성된 삼중 나선 복합체.And optionally covalently linked oligomers having a single strand of target sequence of the nucleic acid, wherein the nucleoside sequence for the second strand is selected along one of the overmutations 1-4 of FIG. 2A, and the nucleoside for the third strand The seed sequence is selected according to one of motifs I to V 'of FIG. 2B, wherein the second and third strands are specifically and selectively selected by hydrogen bonding with the target sequence and the third strand. A triple helix complex formed by bonding to bond.
퓨린 및 피리미딘 염기들을 둘다 포함하는 누클레오시들을 가지는 단일 가닥의 핵산의 특이한 표적 서열의 발현을 검출, 인지 또는 억제하는 방법으로서, 단일 가닥의 핵산을, 임의로 공유 결합된 올리고머들을 포함하고 제2가닥은 상기 표적 서열에 충분히 상보하며 제3가닥은 제2가닥에 충분히 상보하는 것을 특징으로 하는 제2 및 제3가닥과 접촉시킴으로써 표적 서열의 염기들과 제2 및 제3가닥의 각각의 염기들 사이의 트리플렛의 형성에 의하여 삼중 나선을 형성시키는 것으로 이루어지며, 제2가닥은 피리미딘-5-공에체/수용체를 가지는 최소한 하나의 누클레오시드를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.A method of detecting, recognizing or inhibiting the expression of a specific target sequence of a single strand of nucleic acid having nucleosides comprising both purine and pyrimidine bases, the method comprising detecting a single strand of nucleic acid, optionally comprising covalently linked oligomers, The strand is sufficiently complementary to the target sequence and the third strand is sufficiently complementary to the second strand, and the bases of the target sequence and the respective bases of the second and third strands are brought into contact with the second and third strands. Forming triple helices by formation of triplets therebetween, wherein the second strand comprises at least one nucleoside having a pyrimidine-5-coegreomer / receptor.
제17항에 있어서, 상기 제2가닥의 누클레오시드 서열이 제2A도의 과돌연변이 1 내지 4중 하나를 따라 선택되고, 제3가닥의 누클레오시드 서열은 제2B도의 모피트 I 내지 V'중 하나를 따라 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.The nucleoside sequence of claim 2 wherein the nucleoside sequence of the second strand is selected according to one of the overmutations 1 to 4 of FIG. 2A, and the nucleoside sequence of the third strand is of the mutants I to V 'of FIG. 2B. Characterized in that it is selected according to one.
제2A도의 과돌연변이 1 내지 4중 하나를 따라 선택된 누클레오시드 서열을 가지고 있고, 이것의 각 염기가 표적 서열의 상응하는 염기 및 제3가닥의 상응하는 염기에 상보하는 것을 특징으로 하는, 표적 서열 및 제3가닥과 결합하여 삼중 나선 복합체를 형성할 수 있는 올리고머를 포함하는 제2가닥.The target sequence has a nucleoside sequence selected according to one of the 1 to 4 overmutations of FIG. 2A, each base of which complements the corresponding base of the target sequence and the corresponding base of the third strand. And a second strand comprising an oligomer capable of combining with the third strand to form a triple helix complex.
제2B도의 모티프 I 내지 V'중 하나를 따라 선택되는 염기 서열을 가지고 있고, 각 염기가 제2가닥의 상응하는 염기에 상보하며, 그것은 계속해서 표적 서열의 상응하는 염기에 상보하는 것을 특징으로 하는, 표적 서열 및 제2가닥과 결합하여 삼중 나선 복합체를 형성할 수 있는 올리고머를 포함하는 제3가닥.Having base sequences selected according to one of the motifs I to V 'of FIG. 2B, each base complements the corresponding base of the second strand, which is subsequently complemented to the corresponding base of the target sequence And a third strand comprising an oligomer capable of binding to the target sequence and the second strand to form a triple helix complex.
선택된 표적 서열을 가지는 단일 가닥의 핵산의 발현을 검출, 인지 또는 억제 또는 변경시키는 방법으로서, 상기 표적 서열, 제2가닥 및 제3가닥사이에, 표적 서열과 제2가닥 사이의 및 제2가닥과 제3가닥 사이의 수소 결합에 의해 삼중 나선복합체를 형성시키는 것을 포함하며, (a) 상기 제2 및 제3가닥이 임의로 공유 결합된 올리고머들을 포함하며, (b) 제2가닥의 최소한 하나의 누클레오시드가 왓슨-크릭 염기 짝짓기에 의해 표적 서열의 누클레오시드의 염기에 결합하는 왓슨-크릭 결합 페이스 및 제3가닥의 누클레오시드의 상보하는 염기와 특이적으로 수소 결합하는 제2-제3가닥 결합 페이스를 가지고 있는 것을 특징으로 하는 방법.A method for detecting, recognizing, or inhibiting or altering the expression of a single strand of nucleic acid having a selected target sequence, comprising: between the target sequence, the second strand and the third strand, between the target sequence and the second strand and the second strand; Forming a triple helix complex by hydrogen bonding between the third strand, wherein (a) the second and third strands comprise optionally covalently bonded oligomers, and (b) at least one silkworm of the second strand A third to third hydrogen bond specifically with the complementary base of the nucleotides of the Watson-Crick binding face and the third strand of the nucleoside by the cleoside that binds to the base of the nucleoside of the target sequence by Watson-Crick base pairing And having a strand joining face.
제21항에 있어서, 삼중 나선 복합체의 형성이 단일 가닥 핵산의 발현을 억제 또는 실질적으로 변경시키는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 21, wherein the formation of the triple helix complex inhibits or substantially alters the expression of the single stranded nucleic acid.
제22항에 있어서, 상기 표적 서열이 mRNA의 일부 또는 프리-mRNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 22, wherein the target sequence comprises a portion of the mRNA or pre-mRNA.
제21항에 있어서, 상기 제2 및 제3가닥이 약4 내지 약40 누클레오시드를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 21, wherein said second and third strands comprise about 4 to about 40 nucleosides.
제21항에 있어서, 제2가닥이 제2A도의 과돌연변이 1 내지 4중 하나를 따라 선택되는 누클레오시드 서열을 가지며, 제3가닥이 제2B도의 모티프 I 내지 V'중 하나를 따라 선택되는 누클레오시드 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 방법.22. The silkworm of claim 21 wherein the second strand has a nucleoside sequence selected along one of the overmutations 1-4 of Figure 2A and the third strand is selected along one of the motifs I-V 'of Figure 2B. And having a cleoside sequence.
제25항에 있어서, 제2 및 제3가닥이 약4 내지 약40 누클레오시드를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 25, wherein the second and third strands comprise about 4 to about 40 nucleosides.
제26항에 있어서, 제2 및 제3가닥이 실질적으로 중성의 올리고머를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.27. The method of claim 26, wherein the second and third strands comprise substantially neutral oligomers.
퓨린 및 파리미딘 염기를 둘 다 포함하는 누클레오시드들의 선택된 표적 서열을 가지는 단일 가닥 핵산의 발현을 검출, 인지 또는 억제 또는 변경시키는 방법으로서, 표적 서열과 제2가닥 사이의 및 제2가닥과 제3가닥 사이의 특이한 수소 결합에 의해 삼중 나선 복합체를 형성시키는 것으로 이루어지머, (a) 상기 제2 및 제3가닥이 임의로 공유 결합된 올리고머들을 포함하고, (b) 제2가닥이 각 누클레오시드의 염기 부분이 왓슨-크릭 결합 페이스 및 제2-제3가닥 결합 페이스를 가지고 있는 누클레오시드를 포함하며, (c) 각개의 제2가닥 누클레오시드의 왓슨-크릭 결합 페이스가 왓슨-크릭 염기 짝짓기에 의해 표적 서열의 상응하는 누클레오시드의 염기와 수소 결합하고, (d) 각개의 제2가닥 누클레오시드의 제2-제3가닥 결합 페이스가 제3가닥의 상응하는 누클레오시드의 상보하는 염기와 특이적으로 수소 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.A method for detecting, recognizing, or inhibiting or altering the expression of a single stranded nucleic acid having a selected target sequence of nucleosides comprising both purine and parimidine bases, the method comprising between the target sequence and the second strand and the second strand and Forming a triple helix complex by specific hydrogen bonding between the three strands, wherein (a) the second and third strands optionally comprise covalently bonded oligomers, and (b) the second strand each nucleoside The base portion of comprises a nucleoside having a Watson-Crick binding face and a second-third strand binding face, and (c) the Watson-Crick binding face of each second-stranded nucleoside is a Watson-Crick base Pairing hydrogens with the base of the corresponding nucleoside of the target sequence, and (d) the second-third strand binding face of each second-stranded nucleoside is linked to the corresponding nucleoside of the third strand. Characterized in that a hydrogen bond with the base-specific complementary to the seed Leo.
피리미딘과 퓨린 염기들의 어떠한 선택된 조합을 가지는 단일 가닥의 핵산의 표적 서열 사이에 삼중 나선 복합체를 형성시키는 방법으로서, 제2가닥을 표적 서열에 결합시키고 제3가닥을 제2가닥에 결합시킴으로써 삼중 나선을 형성시키는 것으로 이루어지며, 상기 제2가닥 누클레오시드들의 염기 부분들은 표적 서열의 누클레오시드들의 염기 부분에 대해 실질적인 상보성을 소유하고 있는 왓슨-크릭 결합 페이스 및 실질적인 상보성으로 제3가닥의 누클레오시드들의 염기 부분에 결합하기 위하여 수소 결합 부위들의 톡특한 쌍을 소유하고 있는 제2-제3가닥 결합 페이스를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.A method of forming a triple helix complex between a target sequence of a single strand of nucleic acid having any selected combination of pyrimidine and purine bases, wherein the triple strand is formed by binding the second strand to the target sequence and the third strand to the second strand. Wherein the base portions of the second strand nucleosides are substantially complementary to the Watson-Crick binding face and substantially complementary to the nucleosides of the nucleosides of the target sequence. And a second-third strand binding face possessing a unique pair of hydrogen bonding sites for binding to the base portion of the seeds.
제29항에 있어서, 상기 제2 및 제3가닥이 정확한 상보성을 가지고 있는 것을 특징으로 하는 방법.30. The method of claim 29, wherein said second and third strands have precise complementarity.
표적 서열의 퓨린 누클레오시드를 제2-제3가닥 결합 페이스에 상보하는 제2가닥 누클레오시드 및 제3가닥 누클레오시드와 접촉시킴으로써 트리플렛을 형성시키는 것으로 이루어지는, 단일 가닥의 핵산의 표적 서열의 퓨린 누클레오시드, 제2가닥의 상응하는 누클레오시드 및 제3가닥의 상응하는 누클레오시드 사이에 트리플렛을 형성시키는 방법으로, 제2가닥 누클레오시드는 왓슨-크릭 염기 짝짓기에 의해 퓨린 염기에 결합할 수 있는 왓슨-크릭 결합 페이스 및 최소한 2개의 수소 결합 부위를 가지는 제2-제3가닥 결합 페이스를 가지는 피리미딘 유사체를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.Of the target sequence of a single strand of nucleic acid, consisting of contacting the purine nucleoside of the target sequence with a second strand and a third strand nucleoside complementary to the second to third strand binding face to form a triplet. By forming a triplet between the purine nucleoside, the corresponding nucleoside of the second strand and the corresponding nucleoside of the third strand, the second strand nucleoside binds to the purine base by Watson-Crick base pairing. A pyrimidine analog having a Watson-Crick binding face and a second-third strand binding face having at least two hydrogen bonding sites.
제31항에 있어서, 상기 제3가닥 누클레오시드가 제2B도의 모티프 I 내지 V'중 하나에 따라 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.32. The method of claim 31, wherein said third stranded nucleoside is selected according to one of motifs I through V 'of FIG. 2B.
다수의 누클레오시드들을 포함하고 있고, 각 누클레오시드의 염기 부분이 왓슨-크릭 염기 짝짓기에 의하여 표적 서열의 누클레오시드의 염기에 결합할 수 있는 왓슨-크릭 결합 페이스 및 최소한 2개의 수소 결합 부위를 가지며 제 3 가닥의 누클레오시드의 염기에 결합할 수 있는 제2-제3가닥 결합 페이스를 가지는 것을 특징으로 하는, 피리미딘 및 퓨린 누클레오시드와 제3가닥의 혼합물을 가지고 있는 단일 가닥위 핵산의 표적 서열과 삼중 나선 복합체를 형성할 수 있는 제2가닥.Watson-Crick binding face and at least two hydrogen binding sites, comprising a plurality of nucleosides, wherein the base portion of each nucleoside can bind to the base of the nucleoside of the target sequence by Watson-Crick base pairing A single strand having a mixture of pyrimidine and purine nucleosides and a third strand, characterized in that it has a second to third strand binding face capable of binding to the base of the nucleoside of the third strand. A second strand capable of forming a triple helix complex with a target sequence of the nucleic acid.
※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.※ Note: The disclosure is based on the initial application.