KR920003167B1 - Process for producing human interferon - Google Patents
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Abstract
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Description
본 발명은 전혈(全血)을 사용하여 인간 인터페론(이하, ＂HuIFN＂으로 약칭한다)을 제조하는 방법 및 인간혈액의 HuIFN 생산능력 측정방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing human interferon (hereinafter abbreviated as "HuIFN") using whole blood and a method for measuring HuIFN production capacity of human blood.
최근에 들어 혈액중의 효소량 또는 그 대사물질을 화학적으로 측정하는 임상시험이 널리 사용되고 있다.Recently, clinical trials to chemically measure the amount of enzyme in the blood or its metabolites have been widely used.
혈액중 한가지 성분인 HuIFN이 항바이러스성 및 항종양 특성을 나타내는 관계로 임상시험 항목에 혈청 HuIFN량도 포함하자고 하는 제안이 있었다. 그러나, 혈청 HuIFN이 소량이기 때문에 이같은 제안은 실현되고 있지 않다.Since HuIFN, an ingredient in the blood, exhibits antiviral and antitumor properties, a proposal has been made to include serum HuIFN levels in clinical trials. However, such a proposal is not realized because of the small amount of serum HuIFN.
혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈소판과 같은 유형 성분들이 혈장중에 현탁되어 현탁액을 형성하고 있는 것으로서 혈액 1mm3중에는 성인의 경우 백혈구 7,400개 및 혈소판 3×105개 외에도 남성의 경우 적혈구 5.4×106개, 여성의 경우 적혈구 4.8×106개를 함유하고 있다.Blood is a suspension of tangible components such as red blood cells, white blood cells and platelets in the plasma to form a suspension. Among the blood 1mm 3 , in addition to 7,400 white blood cells and 3 × 10 5 platelets in adults, 5.4 × 10 6 red blood cells in men, Women contain 4.8 × 10 6 red blood cells.
HuIFN은 백혈구에 의하여 생산된다는 것은 공지되어 있다. HuIFN을 제조하는 종래의 방법에서는 인간혈액으로부터 분리된 생육 가능한 백혈구가 사용되었다.It is known that HuIFN is produced by white blood cells. In conventional methods of making HuIFNs, viable white blood cells isolated from human blood were used.
예를 들어, Hans Strander 및 Kari Cantell의
그러나, 이들 종래의 방법을 상세히 검토한 결과, 혈액으로부터의 백혈구 회수율이 30~50%로 낮고, 또 분리 조작중 백혈구에 손상을 입혀 그 생존율이 40~60%로 저하됨으로써, 결과적으로 전체 백혈구 회수율이 10~30%로 저하할 뿐만아니라, 또 분리 채취된 백혈구로서는 HuIFN 생산량이 일정하지 않음을 확인할 수 있었으며, 이같은 이유로서 혈액의 HuIFN 생산능력을 측정한다는 것이 극히 곤란하고, 또 HuIFN의 대량생산을 방해하는 원인이 되어 있다.However, as a result of examining these conventional methods in detail, the recovery rate of leukocytes from the blood is low at 30-50%, and the leukocytes are damaged during the separation operation, and the survival rate thereof is reduced to 40-60%. Not only did this decrease to 10-30%, but it was also confirmed that HuIFN production was not constant with the white blood cells isolated. For this reason, it was extremely difficult to measure the HuIFN production capacity of blood. It is a cause of interruption.
본 발명자는 귀중한 인간혈액을 원료로 하는 HuIFN의 다량 생산과 기증된 혈액을 사용하여 HuIFN 생산능력을 측정하기 위하여 예의 연구를 행한 결과, 전혈을 항응혈제 및 바이러스와 접촉시켜 가면서 용기중에서 배양시킴으로써 HuIFN을 대량으로 용이하게 생산할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.The present inventors have conducted extensive studies to measure the production of HuIFN using a large amount of HuIFN, which is a precious human blood as a raw material, and donated blood.HuFN is cultured in a container by contacting whole blood with anticoagulants and viruses. The present invention was found to be easily produced in large quantities.
본 발명자는 또한 전혈을 항응혈제 및 바이러스와 접촉시켜 가면서 용기중에서 배양하고, 또 축적된 HuIFN을 적정함으로써 혈액의 HuIFN 생산능력을 극히 용이하고, 또 안정되게 측정할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.The present inventors also found that the ability of HuIFN production in blood to be measured extremely easily and stably by culturing in a container while contacting whole blood with an anticoagulant and a virus, and titrating the accumulated HuIFN, the present invention. Completed.
또한, 상세히 검토를 한 결과, 전혈 1ml당 20~200, 000HA의 범위 또는 이에 상당하는 양의 불활성 바이러스와 접촉시키는 것이 바람직하다고 판명되었다. 이때, HA는 바이러스의 적혈구 응집가를 나타내는 단위이다.Further studies have shown that it is desirable to make contact with an inert virus in the range of 20 to 200,000 HA per equivalent of whole blood or equivalent amount. In this case, HA is a unit representing the hemagglutination value of the virus.
본 발명에서 ＂전혈＂의 용어는 기증된 혈액, 또는 이 혈액으로부터 액체 성분인 혈장을 제거하여 수득되는 전유형 성분(全有形成分)을 적당한 비혈장 액체, 예를 들어 생리 식염수, 완충용액 또는 영양배지 등에 현탁시킨 현탁액을 의미한다.In the present invention, the term "whole blood" refers to a donor-type blood, or an all-type component obtained by removing plasma, which is a liquid component, from a suitable non-plasma liquid, for example, physiological saline, buffer or Suspension suspended in nutrient medium and the like.
본 발명에서의 항응혈제로서는 전혈의 응고를 방지할 수 있고, 또 HuIFN 생산에 악영향이 없는 것이라면 좋다. 그 예로는 헤파린, 산 시트레이트-텍스트로즈(ACD : acid cirate-dextrose) 및 시트레이트-포스페이트-덱스트로스(CPD : citrate-phosphate-dextrose)가 바람직하게 사용될 수 있다.The anticoagulant in the present invention may be any one which can prevent the coagulation of whole blood and does not adversely affect HuIFN production. Examples thereof include heparin, acid cirate-dextrose (ACD) and citrate-phosphate-dextrose (CPD).
또, 본 발명에서 사용가능한 바이러스는 전혈중에는 HuIFN의 생산을 유도할 수 있는 것들인데, 예를 들자면, 센다이(Sendai)바이러스 또는 뉴우캐슬병(Newcastle disease)바이러스 등의 바이러스, 또는 이의 혼합물이나 불활성화 바이러스를 사용할 수 있다.In addition, the viruses usable in the present invention are those capable of inducing the production of HuIFN in whole blood, for example, viruses such as Sendai virus or Newcastle disease virus, or mixtures or inactivation thereof. Viruses can be used.
본 발명에서 사용되는 불활성화 바이러스는 예를 들자면, 적외선 조사, 열처리 또는 pH처리 등에 의해 증식능을 일부 또는 전부 상실한 바이러스를 뜻한다. 바이러스의 적합한 사용범위는 전혈 1ml당 20~200, 000HA이다.Inactivated virus used in the present invention, for example, means a virus that lost part or all of its proliferative capacity by infrared irradiation, heat treatment or pH treatment. A suitable range of use for the virus is 20 to 20 000 HA per 1 ml of whole blood.
전혈을 항응혈제 및 바이러스 공존하의 용기중에서 배양되는 단계는 전혈을 용기내에서 항응혈제 및 바이러스와 접촉시켜 HuIFN을 제조하는 방식으로 실시한다. 예를 들어, 용기내의 일정량의 항응혈제 및 바이러스에 적합한 양의 전혈을 첨가하고 이 혼합물을 배양시킨다.The step of culturing whole blood in a container in the presence of anticoagulant and virus is carried out by contacting the whole blood with the anticoagulant and virus in the container to produce HuIFN. For example, an amount of anticoagulant and a suitable amount of whole blood in a container are added and the mixture is incubated.
이와 달리, 항응혈제와 전혈의 혼합물을 용기에 넣고 여기에 바이러스를 첨가해서 배양시킨다. 이 배양단계에서 생리 식염수, 등장성 완충용액 또는 영양배지와 같은 적합한 배지를 추가해서 사용할 수 있다.Alternatively, the mixture of anticoagulant and whole blood is placed in a container and incubated with the addition of a virus. In this culture step, a suitable medium such as physiological saline, isotonic buffer or nutrient medium may be added and used.
본 발명에서 사용되는 용기로서는, 형상이나 용량의 대소에 상관없이 탱크, 단지, 플라스크, 시험관, 앰풀 및 마이크로 프레이트 웰을 사용할 수 있다.As the container used in the present invention, a tank, a jar, a flask, a test tube, an ampoule, and a micro plate well may be used regardless of the size or the size of the container.
배양조건으로는 HuIFN이 생산될 수 있는 조건이면 흡족하며, 예를 들어 온도 30~40℃ 및 배양시간 5~50 시간이다. 이 경우에 필요하다면 프라이밍(priming)과 슈퍼인덕숀(superinduction) 등의 조치를 취할 수도 있다.Culture conditions are satisfactory if HuIFN can be produced, for example, the temperature is 30 ~ 40 ℃ and incubation time 5 ~ 50 hours. In this case, priming and superinduction can be taken if necessary.
배양해서 HuIFN을 생산하고, 또 경우에 따라 생리 식염수 또는 등장성 완충용액으로 희석한 후에 전혈을 원심분리 또는 여과와 같은 적합한 방법으로 분리해서 혈구와 같은 유형 성분을 제거하고, 또 HuIFN을 함유하는 수득상청액 또는 세척액을 정제하거나 또는 적정한다.Cultured to produce HuIFN, optionally diluted with physiological saline or isotonic buffer, and then whole blood is separated by a suitable method such as centrifugation or filtration to remove constituents such as blood cells, and to obtain containing HuIFN. The supernatant or wash is purified or titrated.
이 HuIFN은 염석, 투석, 여과, 농축, 이온 교환체에 의한 흡착 및 탈착, 용출, 겔 여과, 항체와 같은 적합한 리간드를 사용하는 친화성 크로마토그래피, 등전점 분획 및 전기영동 등과 같은 종래의 방법을 결합한 정제방법을 사용하여 가능한한 고순도의 HuIFN 제제로 제조할 수 있다.The HuIFN combines conventional methods such as salting out, dialysis, filtration, concentration, adsorption and desorption by ion exchangers, elution, gel filtration, affinity chromatography using suitable ligands such as antibodies, isoelectric point fractionation and electrophoresis. Purification methods can be used to make HuIFN formulations as high as possible.
이 수득된 HuIFN은 그 단독으로 또는 1개 또는 그 이상의 다른 물질과 혼합해서 주사제 또는 내복약 또는 외용약 등으로 질병예방 및 치료에 유리하게 이용될 수 있다.The obtained HuIFN, alone or in admixture with one or more other substances, can be advantageously used for disease prevention and treatment as an injection, oral or external medicine.
인간 전혈의 HuIFN 생산능력은 전술한 상청액 또는 여과액에서의 HuIFN 함량을 적정함으로써 본 발명에 따라 측정할 수 있다.HuIFN production capacity of human whole blood can be measured according to the present invention by titrating the HuIFN content in the supernatant or filtrate described above.
이와 같은 적정의 목적으로는 전혈에 의한 HuIFN 생산량을 측정할 수 있는 방법이라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 예를 들면, 생물 측정법(Biossay), 방사면역 측정법(Radioimmunassay) 및 효소면역 측정법(Enzyme-linked immunosorbent assay)을 들 수 있다.For the purpose of such titration, any method that can measure HuIFN production by whole blood may be used, for example, biossay, radioimmunassay, and enzyme-linked enzyme immunoassay (Enzyme-linked). immunosorbent assay).
최근에 측정법이 매우 안전하고 편리하며, 또 식속한 측정법으로서 효소 면역 측정법이 개발되었다. IFN을 항원으로 적정할 수 있는 효소면역 측정법이라면 아무것이든지 본 발명에서 사용할 수 있다. 예를 들어, 2항체 샌드위치법 및 변형 2항체 샌드위치법의 사용이 바람직하다.Recently, the enzyme immunoassay has been developed as a very safe, convenient, and contingent assay. Any enzyme immunoassay capable of titrating IFN as an antigen can be used in the present invention. For example, the use of the binary antibody sandwich method and the modified binary antibody sandwich method is preferable.
이와 같이 측정된 HuIFN 생산능력은 개인의 임상시험에 충분히 응용할 수 있음이 판명되었다.The HuIFN production capacity thus measured was found to be sufficiently applicable to individual clinical trials.
본 발명에 의한 방법에 의하여 암 환자로의 혈액의 HuIFN 생산능력은 건강한 사람의 생산능력에 비하여 매우 낮다는 것도 판명되었다.It has also been found by the method according to the present invention that the HuIFN production capacity of blood to cancer patients is very low compared to the production capacity of healthy people.
다음 실험으로 본 발명을 설명한다.The present invention is explained by the following experiment.
[실험 1][Experiment 1]
(HuIFN 생산능력에 미치는 혈액처리의 영향)Effect of Blood Treatment on HuIFN Production Capacity
HuIFN 생산능력에 미치는 혈액처리의 영향을 조사하였다. 이 실험에서는 건강한 사람 3명의 헤파린 첨가 신선한 혈액시료를 사용하였다.The effect of blood treatment on HuIFN production capacity was investigated. In this experiment, heparin-added fresh blood samples from three healthy individuals were used.
이 실험에서 사용된 처리 혈액으로는, 혈액을 원심 분리하여 액체 성분 혈장을 제거해서 수득되는 전유형성분을 RPMI 1640 배지에 혈액과 동일 농도로 현탁시킨 혈장제거 현탁액과 혈액을 통상법에 따라 0.75% 염화암모늄을 함유하는 트리스-염산 완충용액(pH7.2)으로 처리하여 적혈구를 용혈(溶血)시키고, 이 혼합물을 원심 분리하여 수득된 적혈구를 제거한 유형성분 RPMI 1640 배지에서 혈액과 동일 농도가 되도록 현탁시킨 염화암모늄 처리 현탁액을 사용하였다.The treated blood used in this experiment was a plasma removal suspension in which all types of components obtained by centrifuging the blood to remove the liquid component plasma were suspended in RPMI 1640 medium at the same concentration as the blood and 0.75% chloride. The red blood cells were hemolyzed by treatment with tris-hydrochloric acid buffer solution containing ammonium (pH 7.2), and the mixture was suspended in blood-type RPMI 1640 medium from which red blood cells obtained by centrifugation were removed to the same concentration as blood. Ammonium chloride treatment suspension was used.
헤파린 첨가 혈액 또는 처리 혈액 1ml를 각기 다른 프라스틱제 시험관에 취한 다음, 여기에 센다이 바이러스를 0, 100 또는 100 적혈구 응집가(HA)의 양으로 각각 함유하는 생리 식염수를 0.1ml씩 첨가한 다음 37℃에서 16시간 동안 배양하였다.Take 1 ml of heparinized blood or treated blood into different plastic test tubes, add 0.1 ml of physiological saline each containing Sendai virus in an amount of 0, 100 or 100 hemagglutination (HA), and then at 37 ° C. Incubated for 16 hours.
이 배양 혼합물을 자외선 조사하여 센다이 바이러스를 완전히 불활성화시키고, 또 원심 분리하여 수득한 상청액을 사용하여 전혈 1ml당 HuIFN 역가를 측정하였다.The culture mixture was irradiated with ultraviolet light to completely inactivate Sendai virus and centrifuged to determine the HuIFN titer per ml of whole blood.
HuIFN 역가는 Anne L. R. Pidot,
시험결과는 표 1에 수록하였다.The test results are listed in Table 1.
이들 결과로부터 자명한 것처럼, 전혈 또는 혈액중의 전유형 성분을 함유하는 혈장제거 현탁액의 경우가 HuIFN 생산량이 크고 또 생산률이 일정해서 HuIFN 생산용 시료로서 매우 적합하였다. 또한, 적혈구를 응혈제거한 염화암모늄 처리 현탁액의 경우, HuIFN 생산량이 적고 또 생산율이 일정하지 못함을 확인할 수 있었다.As apparent from these results, the plasma elimination suspension containing whole blood or whole-type components in the blood was very suitable as a HuIFN production sample because the HuIFN production was large and the production rate was constant. In addition, in the case of the ammonium chloride treatment suspension in which red blood cells were coagulated, it was confirmed that the HuIFN production amount was low and the production rate was not constant.
[표 1]TABLE 1
[실험 2][Experiment 2]
(HuIFN 생산에 미치는 바이러스 접종량의 영향)(Influence of Virus Inoculation on HuIFN Production)
HuIFN 생산에 미치는 바이러스 접종량의 영향을 조사하였다. 건강한 사람 3명과 암환자 2명의 헤파린 첨가 신선한 혈액시료를 사용하였다.The effect of virus inoculation on HuIFN production was investigated. Heparin-added fresh blood samples from three healthy and two cancer patients were used.
실험 1에 기술한 방법에 따라 헤파린 첨가 혈액시료 1ml씩을 각기 다른 시험관에 취하고, 여기에 0, 2, 20, 200, 2,000, 20,000 또는 200,000HA 양의 센다이 바이러스를 함유하는 생리 식염수 0.1ml씩을 첨가하여 배양한 후 혈액 1ml당 HuIFN 역가를 측정하였다.According to the method described in Experiment 1, 1 ml of heparin-added blood samples were taken in different test tubes, and 0.1 ml of physiological saline containing Sendai virus in an amount of 0, 2, 20, 200, 2,000, 20,000 or 200,000 HA was added thereto. HuIFN titers were measured per 1 ml of blood after incubation.
또, 혈액 1ml당 2,000,000HA 센다이 바이러스 함량으로도 실험을 행할 계획이었으나, 이같은 고역가 센다이 바이러스 함유 약제의 제조가 불가능하여 실험을 행할 수 없었다.In addition, although the experiment was planned to be carried out with a content of 2,000,000HA Sendai virus per 1 ml of blood, such a high titer Sendai virus-containing drug could not be manufactured and the experiment could not be performed.
시험 결과를 표 2에 수록하였다.The test results are listed in Table 2.
[표 2]TABLE 2
주 : ND는 측정하지 못함을 뜻한다.Note: ND means no measurement.
상기 시험 결과로부터 명백한 것처럼, 접종 바이러스의 양은 혈액 1ml당 20~200,000HA가 바람직하다.As is clear from the test results, the amount of inoculated virus is preferably 20 to 200,000 HA per 1 ml of blood.
또, 암환자의 혈액의 HuIFN 생산능력은 건강한 사람보다 극히 낮다는 사실이 판명되었다. 이러한 사실은 혈액의 HuIFN 생산능력을 측정함으로써 암의 조기발견에 사용할 수 있음을 제시하는 것이다.It has also been found that cancer patients' blood HuIFN production capacity is much lower than healthy people. This suggests that it can be used for early detection of cancer by measuring blood HuIFN production capacity.
본 발명의 몇가지 실시태양을 다음 실시예로 기술한다.Some embodiments of the invention are described in the following examples.
[HuIFN 생산량]HuIFN Production
[실시예 1]Example 1
건강한 사람의 헤파린 첨가 신선 혈액 1ml를 플라스틱제 시험관에 취하고, 여기에 센다이 바이러스 1, 000HA를 첨가하여 37℃에서 20시간 동안 배양하고, 또 자외선 조사하여 바이러스를 완전히 불활성화 시켰다. 이 혼합물을 원심 분리한 후, 수득 상청액을 사용 HuIFN 역가를 측정하였다. HuIFN의 생산량은 혈액 1ml당 약 3, 600단위이었다.1 ml of heparin-added fresh blood of a healthy person was taken in a plastic test tube, and Sendai virus 1,000HA was added thereto, followed by incubation at 37 ° C. for 20 hours, followed by ultraviolet irradiation to completely inactivate the virus. After centrifugation of this mixture, the resulting supernatant was used to measure HuIFN titer. HuIFN production was about 3,600 units per ml of blood.
[실시예 2]Example 2
건강한 사람의 헤파린 첨가 신선 혈액 1ml에 뉴우캐슬형 바이러스 2, 000HA의 약 90% 불활성화 바이러스를 첨가하였다. 이 혼합물을 37℃로 25시간 배양한 후에 실시예 1에서와 동일하게 HuIFN 역가를 측정하였다. HuIFN의 생산량은 혈액 1ml당 약 2, 800단위이었다.To 1 ml of heparin-added fresh blood of healthy humans, approximately 90% inactivated virus of Newcastle type virus 2,000HA was added. After incubating the mixture at 37 ° C. for 25 hours, HuIFN titers were measured in the same manner as in Example 1. HuIFN production was about 2,800 units per ml of blood.
[실시예 3]Example 3
여러명의 건강한 사람의 헤파린 첨가 신선 혈액을 원심 분리하여 혈장을 제거하였다. 이와 같이 해서 수득된 전유형 성분을 생리 식염수를 사용 원심 세척하고, 또 이어 혈액과 동일 성분 밀도가 되도록 RPMI 1640 배지로서 현탁시켰다. 수득 현탁액을 소형 단지에 취하고, 또 현탁액 1ml당 500HA 센다이 바이러스를 첨가하였다. 이 혼합믈을 37℃로 16시간 동안 배양한 후에 실시예 1에서와 동일하게 처리하고 또 HuIFN 역가를 측정하였다. HuIFN의 생산량은 혈액 1ml당 약 3, 000단위이었다.Plasma was removed by centrifugation of fresh, heparinized blood from several healthy individuals. The all-type component thus obtained was centrifuged using physiological saline and then suspended as RPMI 1640 medium to have the same component density as blood. The resulting suspension was taken in a small jar and 500HA Sendai virus was added per ml of suspension. The mixture was incubated at 37 ° C. for 16 hours, and then treated in the same manner as in Example 1, and HuIFN titers were measured. HuIFN production was about 3,000 units per ml of blood.
[실시예 4]Example 4
실시예 3에서와 유사한 방법으로 혈액의 전유형 성분을 함유하는 현탁액을 제조하였다. 이 현탁액을 소형단지에 취하고, 또 이 현탁액 1ml당 HuIFN 300 단위를 가하고, 또 37℃로 6시간 동안 배양하였다. 배양후에 여기에 현탁액 1ml당 1, 000HA 센다이 바이러스를 추가하고, 또 37℃로 16시간 동안 추가로 배양하였다. 수득 혼합물을 실시예 1에서와 유사하게 처리하고, 또 HuIFN 역가를 측정하였다. HuIFN의 생산량은 혈액 1ml당 약 27, 000단위이었다.Suspensions containing all types of blood components were prepared in a similar manner as in Example 3. This suspension was taken in a small jar and 300 units of HuIFN per 1 ml of this suspension were added and incubated at 37 ° C. for 6 hours. After incubation, 1,000 HA Sendai virus was added to 1 ml of the suspension and further incubated at 37 ° C. for 16 hours. The resulting mixture was treated similarly as in Example 1 and HuIFN titers were measured. HuIFN production was about 27, 000 units per ml of blood.
[혈액의 HuIFN 생산능력 측정][Measurement of HuIFN Production Capacity of Blood]
[실시예 5]Example 5
건강한 사람(남자, 28세)의 헤파린 첨가 신선 혈액 1ml를 실시예 1에서와 유사하게 처리하고, 또 HuIFN 역가를 생물 측정법(Bioassay)으로 측정하였다. HuIFN 생산능력은 혈액 1ml당 약 3,600단위이었다.1 ml of heparin-added fresh blood from a healthy person (male, 28 years old) was treated similarly to Example 1, and HuIFN titers were measured by bioassay. HuIFN production capacity was about 3,600 units per ml of blood.
[실시예 6]Example 6
건강한 사람(여자, 33세)의 헤파린 첨가 신선 혈액 1ml를 실시예 2에서와 유사하게 처리하고, 또 실시예 5에서와 유사하게 HuIFN 적정을 행하였다. HuIFN 생산능력은 혈액 1ml당 약 2, 800단위이었다.1 ml of heparin-added fresh blood from a healthy person (woman, 33 years old) was treated similarly to Example 2, and HuIFN titration was performed similarly to Example 5. HuIFN production capacity was about 2,800 units per ml of blood.
[실시예 7]Example 7
건강한 사람(남자, 61세)의 헤파린 첨가 신선 혈액을 실시예 3에서와 유사하게 처리해서 혈액의 전유형 성분을 함유하는 현탁액을 수득하였다. 이 현탁액 1ml를 플라스틱제 시험관에 취하고, 또 여기에 1, 000HA 센다이 바이러스를 첨가하였다. 이 혼합물을 37℃로 16시간 동안 배양한 후에 HuIFN 적정을 2항체 샌드위치법에 의한 효소 면역 측정법으로 측정하였다. HuIFN 생산능력은 혈액 1ml당 약 3, 400단위이었다. 또한, 이 측정치는 생물 측정법에 따라 측정한 값과 일치하였다.Heparin-added fresh blood from a healthy person (male, 61 years old) was treated similarly to Example 3 to obtain a suspension containing all types of blood components. 1 ml of this suspension was taken in a plastic test tube, and 1,000 HA Sendai virus was added thereto. After incubating the mixture at 37 ° C. for 16 hours, HuIFN titration was measured by enzyme immunoassay by the binary antibody sandwich method. HuIFN production capacity was about 3,400 units per ml of blood. In addition, this measurement was consistent with the value measured according to the biometric method.
[실시예 8]Example 8
암환자(남자, 68세)의 헤파린 첨가 신선 혈액을 실시예 5에서와 유사하게 처리하여 HuIFN 생산능력을 측정한 바, 혈액 1ml당 약 140단위이었다.The heparin-added fresh blood of a cancer patient (male, 68 years old) was treated similarly to Example 5, and the HuIFN production capacity was measured, and it was about 140 units per ml of blood.
[실시예 9]Example 9
암환자(여자, 55세)의 헤파린 첨가 신선 혈액을 실시예 5에서와 유사하게 처리하여 HuIFN 생산능력을 측정한 바, 혈액 1ml당 약 70단위이었다.Heparin-added fresh blood of a cancer patient (female, 55 years old) was treated in the same manner as in Example 5 to measure HuIFN production capacity, which was about 70 units per ml of blood.
본 발명 기술분야에 숙련된 자들에게는 본 발명 범주를 벗어나지 않는 범위내에서 각종 변경이나 수정이 가능함을 알 수 있을 것이며, 또 본 발명이 명세서에 기술된 내용으로 한정하는 것이 아님을 주지해야 할 것이다.It will be appreciated by those skilled in the art that various changes and modifications can be made without departing from the scope of the present invention and that the present invention is not limited to the contents described in the specification.
Claims (6)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58125152A JPS6017361A (en) | 1983-07-08 | 1983-07-08 | Method for measuring interferon generic capacity of blood |
| JP83-125122 | 1983-07-08 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR850000984A KR850000984A (en) | 1985-03-14 |
| KR920003167B1 true KR920003167B1 (en) | 1992-04-23 |
Family
ID=14903155
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1019840003855A KR920003167B1 (en) | 1983-07-08 | 1984-07-04 | Process for producing human interferon |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6017361A (en) |
| KR (1) | KR920003167B1 (en) |
-
1983
- 1983-07-08 JP JP58125152A patent/JPS6017361A/en active Granted
-
1984
- 1984-07-04 KR KR1019840003855A patent/KR920003167B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6017361A (en) | 1985-01-29 |
| JPH0365960B2 (en) | 1991-10-15 |
| KR850000984A (en) | 1985-03-14 |
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