KR890003712B1 - 과산화효소 및 과산화효소 관련제품의 보존제로서 시클로피록솔아민의 용도 - Google Patents

과산화효소 및 과산화효소 관련제품의 보존제로서 시클로피록솔아민의 용도 Download PDF

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Abstract

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Description

과산화표소 및 과산화효소 관련제품의 보존제로서 시클로피록솔아민의 용도
본 발명은 신규의 시클로피록솔아민의 용도에 관한 것이며, 보다 상세하게는 과산화효소 및 과산화효소 관련제품의 보존제로서 시클로피록솔아민의 용도에 관한 것이다.
단백질 함유 제품의 보존제로는 일반적으로 아지드화나트륨이 사용되어 왔다. 또한, 효소면역 측정법에서 가장 널리 사용되는 효소인 과산화수소(수소-과산화물 산화 환원효소 : EC 1. 11. 1. 7) 및 이와 관련된 제품의 보조제로서, 통상적으로 단백제품의 보존제인 아지드화나트륨은 과산화효소 및 이와 관련된 제품 보존시 과산화효소의 활성을 저해한다. 또한, 종래의 과산화효소 및 이와 관련된 제품의 보존에 겐타마이신 및 치메로살이 사용디어 왔으나, 이들을 보존제로서 사용한 제품의 보존기간은 보통 2-3개월이었다.
본 발명의 관산화효소 및 이와 관련된 제품의 보존제로서의 시클로피록솔아민은 6-시클로헥실-히드록시-4-메틸-2(1H)-피라든. 2 아미노 에탄올염 또는 시클로피록스(CICLOPIROX)등으로 불리우며, 분자식 C14H24N2O3, 분자량 168.4를 갖는 백색 내지 약갼 노랸색을 띤 결정성 분말로서 에탄올 및 클로로포름에 잘 녹는 성상을 가지며, 거의 모든 진균류에 대해 저해작용을 나타내며, 그램음성 및 그램양성 박테리아에 대해서도 저해작용을 가지며 또한, 마이코플라즈마나 트리코모나스에 대한 저해작용을 갖는 화합물로 알려져 있다.
본 발명은 앞에 말한 특징을 갖는 시클로피록솔아민을 사용한 과산화효소 및 이와 관련된 제품의 보존제로써의 용도에 대한 것이며 시클로피록솔아민 자체만을 사용하거나 또는 종래의 과산화효소 및 이와 관련된 제품에서 보존제로 사용하는 겐타마이신과 혼합하여사용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 시클로피록솔아민을 겐타마이신과 함께 사용한 결과 상승효과가 나타났으며 과산화효소 및 과산화효소 관련제품의 안정성 및 보존성이 월등히 좋아 보존기간이 6개월까지 연장되었다.
본 발명은 하기 실시예로서 보다 상세히 설명하면 다음과 같다.
[실시예 1]
과산화효소 활성 시험
단일클론 항-HBsAg 항체를 사용하여 다음 방법에 따라 시험을 하였다.
단일클론 항-HBsAg 항체를 고추냉이 과산화효소(Horseradish peroxidase)와 결합시켜 PBS(phosphate buffer saline)로 희석하고, 단백안정제로 BSA(소혈청알부민)를 넣고, 겐타마이신, 시클로피록솔아민을 0.005%(w/v)가 되게 넣은 후 4℃냉강고에서 2달간 보관한 후에 실험하였다. 단일클론 항-HBsAg 항체를 10mM탄산염 완충용액(pH 9.6)으로 희석하여 0.02mg/ml가 되게 한 다음, 폴리스틸렌 튜브에 200ml씩 넣고 4℃냉장고에서 16~20시간 보관하였다.
반응액을 흡인제거하고, 증류수로 씻은 다음 PBS로 0.5% BSA를 만들어 500μl씩을 넣고 실온에서 1시간동안 정치시켰다. 반응액을 흡인제거하고, 증류수로 씻은 다음 양성대조액(HBsAg 함량 15ng/ml)과 음성대조액을 20μl씩 넣은 다음, 각각의 보존제가 첨가된 과산화효소 접합체 50μl씩 넣고, 37℃에서 3시간 동안 반응시켰다. 반응액을 흡인제거하고, 증류수도 3회 씻은 다음 기질액(OPD용액)을 준비하여 20μl씩 넣고 실온에서 30분 동안 반응시킨후 1N 황산 1ml씩을 넣고 반응을 정지시키고, 492nm에서 흡광도를 측정하였다. 과산화수소 활성정도는 보존제를 넣지 않은 대조와 비교하였다. 종래의 보존제로서 사용한 겐타마이신에 비하여, 본 발명의 시클로피록솔아민을 사용한 결과 10%의 효소활성이 더 있었으며 겐타마이신과 혼합하여 사용하였을시 24%의 상승효과를 보였다.
결과는 표1에 나타내었다.
[표 1]
Figure kpo00001
*주(註) :
Figure kpo00002
A(흡광도 차이)=양성대조약-음성대조액
(분광광도계를 사용하여 492nm에서 측정함)
[실시예 2]
실시예 1과 같이 실시하며, 기간이 지남에 따른 과산화효소의 활성이 과산화효소 관련제품에 미치는 영향을 나타내었다. 보존제로서 겐타마이신르 사용한 경우는 2개월 이상 경과시 과산화효소 활상이 급격히 떨어졌으나, 시클로피록솔아민을 사용한 경우는 4개월까지는 초기 효소활성의 80%까지 유지되는 좋은 효과를 나타냈다. 그 결과는 표 2에 나타냈다.
[표 2]
Figure kpo00003
주(註) : 잔류활성 %=기간에 따른 활성/최초활성×100
(분광광도계를 사용하여 492nm에서 측정)

Claims (2)

  1. 과산화효소 및 이와 관련된 제품의 보존제로서 시클로피록솔아민의 용도.
  2. 과산화효소 및 이와 관련된 제품의 보존제로서 시클로피록솔아민 및 겐타마이신을 병용하는 방법.
KR1019870007427A 1987-07-10 1987-07-10 과산화효소 및 과산화효소 관련제품의 보존제로서 시클로피록솔아민의 용도 KR890003712B1 (ko)

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