KR860004145A - Method for producing a recombinant baculovirus expression vector - Google Patents

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Abstract

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Description

재조합 벡큘로비루스 표현 벡터의 제조방법Method for producing a recombinant baculovirus expression vector

본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음As this is a public information case, the full text was not included.

제1도는 전이벡터 pAC 101의 구성에 대한 도식을 나타낸다.1 shows a schematic of the configuration of the transition vector pAC 101.

제2도는 변형된 전이벡터 pAC 311, pAC 360, pAC 373과 pAC 380을 구성하는 도식을 나타낸다.2 shows a schematic of the modified transition vectors pAC 311, pAC 360, pAC 373 and pAC 380.

제3도는 AcMNPV의 폴리헤드린 유전자의 부분적인 뉴클레오티드 배열과 그 유전자 상부의 배열을 나타낸다.3 shows the partial nucleotide sequence of the polyhedrin gene of AcMNPV and the sequence on top of that gene.

Claims (32)

벡큘로비루스 유전자 또는 그 부분을 함유하는 DNA 분체(단편)을 제조하기 위하여 벡큘로비루스 DNA를 절단시키고 상기 DNA 단편을 클로닝 운반체내로 삽입시킨 후 선택유전자 또는 그 부분중의 최소한 하나를 변화된 클로닝 운반자내로 삽입시켜 상기의 선택 유전자 또는 그 부분이 벡큘로비루스 유전자의 프로모터 또는 그 자신의 프로모터의 전사조절을 받도록 하며 재조합을 유발시켜 재조합과 비재조합의 백큘로비루스의 혼합물을 제조하기 위하여 상기 재조합 전이 벡터를 벡큘로비루스 DNA와 접촉시키며 그 혼합물로 부터 재조합 벡큘로 비루스 표현 벡터를 분리시킴을 특징으로 하는, 숙주 곤충세포 내에서 선택유전자 또는 그 부분을 표현할 수 있는 재조합 벡큘로비루스 표현벡터의 제조방법.To prepare a DNA fragment (fragment) containing the baculovirus gene or portion thereof, the baculovirus DNA is cut, the DNA fragment is inserted into a cloning carrier, and at least one of the selection gene or a portion thereof is changed into a cloning carrier. Inserted into the subject so that the selected gene or portion thereof is subject to transcriptional regulation of the promoter of the baculovirus gene or its own promoter and induces recombination to produce a mixture of recombinant and non-recombinant baculoviruses A method for producing a recombinant baculovirus expression vector capable of expressing a selection gene or a part thereof in a host insect cell, characterized in that the recombinant baculovirus expression vector is separated from the mixture by contacting with baculovirus DNA. 제1항에 있어서, 벡큘로비루스유전자의 최소 일부분에 대치되어 선택 유전자 또는 그 부분이 클로닝 운반체내로 삽입되는 방법.The method of claim 1, wherein the selection gene or portion thereof is inserted into the cloning carrier, replacing at least a portion of the baculovirus gene. 제1항에 있어서, 벡큘로비루스 유전자가 폴리헤드린 프로모터를 포함하는 폴리헤드린 유전자 또는 그 일부분인 제조방법.The method of claim 1, wherein the baculovirus gene is a polyhedrin gene comprising a polyhedrin promoter or a portion thereof. 제3항에 있어서, 선택유전자 또는 그 부분이 폴리헤드린 합성암호의 DNA 배열의 최소한 일부분에 대치되어 클로닝 운반자내로 삽입되는 제조방법.The method of claim 3, wherein the selection gene or portion thereof is replaced by at least a portion of the DNA sequence of the polyhedrin synthesis code and inserted into the cloning carrier. 제1항에 있어서, 벡큘로비루스가 10K 프로모터를 포함하는 10K 유전자 또는 그것의 일부분인 제조 방법.The method of claim 1, wherein the baculovirus is a 10K gene comprising a 10K promoter or a portion thereof. 제1항에 있어서, 벡큘로비루스가 오토그래파 캘리포니카(Autographa Californica), 트리코프루시아니(Trichoplusia ni), 라치프루시아 오우(Rachip lusia ou), 또는 갈레리아 멜로넬라(Galleria mellonella)인 제조방법.The method of claim 1, wherein the baculovirus is Autographa Californica, Trichoplusia ni, Rachip lusia ou, or Galleria mellonella. Manufacturing method. 제1항에 있어서, 벡큘로비루스가 오토그래파 캘리포니카인 제조방법.The method of claim 1, wherein the baculovirus is autographer california. 벡큘로비루스 유전자 또는 그 부분을 포함하는 DNA 분체(단편)을 제조하기 위하여 벡큘로비루스 DNA를 절단하고 벡큘로비루스 유전자 전이벡터를 제조하기 위하여 상기 단편을 클로닝 운반자로 삽입시키고 최소한 하나의 선택유전자 또는 그 부분을 상기 벡큘로비루스 유전자 전이벡터 내로 삽입시켜 그 유전자 또는 그 부분이 벡큘로비루스 프로모터 또는 그 자신의 프로모터의 전자 조절을 받는 것을 특징으로 하는, 벡큘로비루스 제놈대로 유도된 최소한 하나의 선택 유전자 또는 그 부분을 가지는 재조합 전이벡터의 제조방법.In order to cut the baculovirus DNA to prepare a DNA fragment (fragment) comprising the baculovirus gene or a part thereof, the fragment is inserted into a cloning carrier to prepare a baculovirus virus transfer vector and at least one selection gene or At least one selection gene derived according to the baculovirus genome, wherein the portion is inserted into the baculovirus gene transfer vector such that the gene or portion thereof is subjected to electronic regulation of the baculovirus promoter or its own promoter. Or a method for producing a recombinant transfer vector having the portion. 제8항에 있어서, 선택유전자 또는 그 부분이 벡큘로비루스의 최소한 일부분에 대치되어 클로닝 운반자내로 삽입되는 제조방법.The method of claim 8, wherein the selection gene or portion thereof is replaced by at least a portion of the baculovirus and inserted into the cloning carrier. 제8항에 있어서, 벡큘로비루스 유전자가 폴리헤드린 프로모터를 포함하는 폴리헤드린 유전자 또는 그 부분인 제조방법.The method of claim 8, wherein the baculovirus gene is a polyhedrin gene or part thereof comprising a polyhedrin promoter. 제10항에 있어서, 선택유전자 또는 그 부분이 폴리헤드린 합성암호의 DNA 배열의 최소한 일부분에 대치되어 클로닝 운반자내로 삽입되는 방법.The method of claim 10, wherein the selection gene or portion thereof is replaced by at least a portion of the DNA sequence of the polyhedrin synthesis code and inserted into the cloning carrier. 제8항에 있어서, 벡큘로비루스 유전자가 10K 프로모터를 포함하는 10K 유전자 또는 그 일부분인 제조방법.The method of claim 8, wherein the baculovirus gene is a 10K gene comprising a 10K promoter or part thereof. 제8항에 있어서, 백큘로비루스가 오토그래파 캘리포니카, 트리코프루시아니, 타치프루시아오우, 또는 갈레리아 멜로넬라인 제조방법.9. The method of claim 8, wherein the baculovirus is autographa californica, tricoprucciani, tachipulciaou, or galeria melelloline. 제8항에 있어서, 벡큘로비루스가 오토그래파 캘리포니카인 제조방법.The method of claim 8, wherein the baculovirus is autographer california. 최소한 하나의 프로모터를 포함하는 DNA 분체(단편)을 제조하기 위하여 벡큘로비루스 DNA를 점단하고 선택유전자 또는 그 부분을 클로닝할 수 있는 최소한 하나의 유용부위를 가지는 변형 클로닝 운반자를 제조하기 위하여 상기 DNA 분체를 클로닝 운반체내로 삽입시켜 상기 유용클로닝 부위가 선택유전자 또는 그 부분이 상기 프로모터의 전지조절하에 있도록 위치하는 것을 특징으로 하는, 벡큘로비루스 DNA유전자 조작의 중간 운반체로서 이용될 수 있는 벡큘로비루스 전이 벡터의 제조방법.The DNA powder to prepare a modified cloning carrier having at least one useful site capable of cleaving baculovirus DNA to clone a DNA fragment (fragment) containing at least one promoter and cloning a selection gene or a portion thereof. Baculovirus transfer that can be used as an intermediate carrier of baculovirus DNA gene manipulation, by inserting into a cloning carrier such that the useful cloning site is positioned such that the selection gene or portion thereof is under cell control of the promoter. Method for producing a vector. 제15항에 있어서, 벡큘로비루스 유전자가 폴리헤드린 프로모터를 함유하는 폴리헤드린 유전자 또는 그 부분인 제조방법.The method of claim 15, wherein the baculovirus gene is a polyhedrin gene or portion thereof containing a polyhedrin promoter. 제15항에 있어서, 벡큘로비루스 유전자가 10K 프로모터를 포함하는 10K 유전자 또는 그 부분의 제조방법.The method of claim 15, wherein the baculovirus gene comprises a 10K promoter. 제15항에 있어서, 벡큘로비루스가 오토그래파 캘리포니카, 트리코프루시아니, 라치프루시아오우 또는 갈레리아 멜로넬라인 제조방법.16. The method according to claim 15, wherein the baculovirus is autographa californica, tricoprucciani, lachipruciau or galeria melanoline. 제15항에 있어서, 벡큘로비루스가 오토그래파 캘리포니카인 제조방법.16. The method of claim 15, wherein the baculovirus is autographer california. 민감성 숙주 곤충세포를 재조합 벡큘로비루스 표현벡터와 감염시키고 상기 표현벡터는 최소한 하나의 선택유전자 또는 그 부분을 포함하는 재조합 벡큘로비루스 제놈이며, 상기 선택유전자 또는 그 부분을 벡큘로비루스 또는 그 자신의 프로모터의 전사조절하에 존재하는 것을 특징으로 하는 선택 폴리펩티드의 합성방법.Infecting a sensitive host insect cell with a recombinant baculovirus expression vector, the expression vector is a recombinant baculovirus genome comprising at least one selection gene or portion thereof, wherein the selection gene or portion thereof is baculovirus or its own A method of synthesizing a selective polypeptide, wherein the polypeptide is present under transcriptional control of a promoter. 제20항에 있어서, 벡큘로비루스 프로모터가 폴리헤드린 프로모터인 제조방법.The method of claim 20, wherein the baculovirus promoter is a polyhedrin promoter. 제20항에 있어서, 벡큘로비루스 프로모터가 10K 프로모터인 제조방법.The method of claim 20, wherein the baculovirus promoter is a 10K promoter. 표현벡터가 최소한 하나의 선택유전자 또는 그 부분을 포함하는 벡큘로비루스 제놈이며 선택유전자 또는 그 부분이 벡큘로비루스 프로모터 또는 그 자신의 프로모터의 전사조절하에 존재하는 숙주곤충 세포에서 선택유전자 또는 그 부분을 표현할 수 있는 재조합 벡큘로 표현벡터.The expression vector is a baculovirus genome comprising at least one selection gene or part thereof, and the selection gene or part thereof is selected from a host insect cell under the transcriptional control of the baculovirus promoter or its own promoter. Recombinant baculo expression vector that can be expressed. 제23항에 있어서, 벡큘로비루스 프로모터가 폴리헤드린 프로모터인 재조합 벡큘로비루스 표현벡터.The recombinant baculovirus expression vector according to claim 23, wherein the baculovirus promoter is a polyhedrin promoter. 제23항에 있어서, 벡큘로비루스 프로모터가 10K 프로모터인 재조합 벡큘로비루스 표현벡터.The recombinant baculovirus expression vector according to claim 23, wherein the baculovirus promoter is a 10K promoter. 벡큘로비루스 유전자에 결합한 최소한 하나의 선택유전자 또는 그 부분을 포함하고 상기 유전자 또는 그 부분은 상기 벡큘로비루스 유전자 또는 그 자신의 유전자의 프로모터의 전사 조절하에 존재하는 DNA 배열을 갖는 클로닝 운반자를 특징으로 하는, 선택유전자 또는 그 부분을 벡큘로비루스 제놈내로 도입시킬 수 있는 재조합 전이벡터.At least one selection gene or portion thereof bound to the baculovirus gene, wherein the gene or portion thereof is characterized by a cloning carrier having a DNA sequence present under the transcriptional control of a promoter of the baculovirus gene or its own gene A recombinant transfer vector capable of introducing a selection gene or a portion thereof into the baculovirus genome. 제26항에 있어서, 벡큘로비루스 프로모터가 폴리헤드린 프로모터인 재조합 전이벡터.The recombinant transfer vector of claim 26, wherein the baculovirus promoter is a polyhedrin promoter. 제26항에 있어서, 벡큘로비루스 프로모터가 10K 프로모터인 재조합 전이벡터.The recombinant transfer vector of claim 26, wherein the baculovirus promoter is a 10K promoter. 벡큘로비루스 전이벡터가 벡큘로비루스 프로모터 유전자와 선택유전자 또는 그 부분을 클로닝 하는 최소한 하나의 유용부위를 포함하고, 선택유전자 또는 그 부분이 상기 유용클로닝 부위로 삽입될 때 벡큘로비루스 프로모터의 전사조절하에 존재하도록 상기 유용클로닝 부위가 존재하는, 백큘로비루스의 유전자 조작을 위한 중간 운반자로서 사용될 수 있는 벡큘로비루스 전이벡터.The baculovirus transfer vector comprises at least one useful site for cloning the baculovirus promoter gene and the selection gene or part thereof, and the transcriptional regulation of the baculovirus promoter when the selection gene or part thereof is inserted into the useful cloning site A baculovirus transfer vector, wherein said useful cloning site is present so that it can be used as an intermediate carrier for genetic engineering of baculoviruses. 제29항에 있어서, 벡큘로비루스 프로모터기를 폴리헤드린 프로모터인 벡큘로비루스 전이벡터.The baculovirus transfer vector of claim 29, wherein the baculovirus promoter group is a polyhedrin promoter. 제29항에 있어서, NRRL B -15428 또는 NRRL B -155778로 지칭되는 벡클로비루스 전이벡터.The baculovirus transition vector of claim 29, referred to as NRRL B -15428 or NRRL B -155778. 제29항에 있어서, 벡큘로비루스 프로모터가 10K 프로모터인 벡큘로비루스 전이벡터.The baculovirus transfer vector of claim 29, wherein the baculovirus promoter is a 10K promoter. ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.※ Note: The disclosure is based on the initial application.
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