Claims (8)
(a) rIFN-α,하이브리드(hybrid), rIFN-α, rIFN-β 및 rIFN-r 중에서 선택된 인터페론을 코드화하는 서열을 함유하는 dsDNA를 엔도뉴클레아제로 절단하여 시스테인 잔기를 코드화하는 뉴클레오티드트리플렛(triplet)을 함유한 첫번째 dsDNA단편 및 나머지 인터페론을 코드화하는 하나 이상의 다른 절단단편을 형성하고; (b) 나머지 인터페론을 코드화하는 다른 절단단편으로부터 시스테인을 코드화하는 뉴클레오티드트리플렛을 분자간 s-s 결합을 형성할 수 없는 아미노산 잔기를 코드화하는 뉴클레오티드 트리플렛으로 대체시켜, 그 말단이 나머지 인터페론을 코드화하는 dsDNA 서열의 말단에 보족적인, 분리된 첫번째 단편에 상응하는 dsDNA서열을 제조하고; (d) 상기의 dsDNA서열을 적절한 방향으로 연결시켜서, 상기의 변형된 인터페론을 코드화하는 dsDNA서열을 수득함을 특징으로 하여, 인터페론활성 및 rIFN-α, 하이브리드 rIFN-α, rIFN-β 및 rIFN-α 중에서 선택된 인터페론의 아미노산 서열을 가지며, 서열중 적어도 하나의 시스테인 잔기가 분자간 s-s 결합을 형성할 수 없는 아미노산 잔기로 대체된, 플리펩타이드를 코드화하는 이중 나선(ds)DNA 서열을 제조하는 방법.(a) rIFN-α,The first dsDNA fragment containing a nucleotide triplet encoding a cysteine residue by cleaving a dsDNA containing a sequence encoding an interferon selected from hybrid, rIFN-α, rIFN-β and rIFN-r with an endonuclease. And one or more other cleavage fragments encoding the remaining interferon; (b) replacing nucleotide triplets encoding cysteines from other cleavage fragments encoding the remaining interferon with nucleotide triplets encoding amino acid residues that cannot form intermolecular ss bonds, the ends of which are the ends of the dsDNA sequence encoding the remaining interferon To prepare a dsDNA sequence corresponding to the isolated first fragment; (d) linking the above dsDNA sequences in an appropriate direction to obtain a dsDNA sequence encoding the modified interferon, interferon activity and rIFN-α, hybrid rIFN-α, rIFN-β and rIFN- α A method of making a double helix (ds) DNA sequence encoding a polypeptide having an amino acid sequence of interferon selected from among which at least one cysteine residue is replaced with an amino acid residue that is unable to form an intermolecular s-s bond.
제1항에 있어서, 코드화 나선이 하기서열을 함유하는 방법.The method of claim 1 wherein the encoded helix contains the following sequence.
상기식에서, X 및 Y는 아미노산 잔기를 코드화하는 뉴클레오-티드트리플렛이고, 단, X 및 Y가 코드화하는 아미노산 잔기중의 적어도 하나는 분자간 S-S 결합의 형성에 참여할 수 없다.Wherein X and Y are nucleo-tidtriplets encoding amino acid residues, provided that at least one of the amino acid residues that X and Y encodes cannot participate in the formation of an intermolecular S-S bond.
제2항에 있어서, X가 글리신 잔기를 코드화하는 뉴클레오티드트리플렛인 방법.The method of claim 2, wherein X is a nucleotide triplet encoding a glycine residue.
제2항에 있어서, X가 뉴클레오티드트리-플렛 GGC인 방법.The method of claim 2, wherein X is a nucleotide tree-flat GGC.
제2 또는 3항에 있어서, Y가 세린잔기를 코드화하는 뉴클레오티드트리플렛인 방법.The method according to claim 2 or 3, wherein Y is a nucleotide triplet encoding a serine residue.
제2 내지 5항중의 어느 하나에 있어서, Y가 뉴클레오티드트리플렛 AGC인 방법.The method of any one of claims 2-5, wherein Y is a nucleotide triplet AGC.
제2 내지 6항중의 어느 하나에서 정의된 바와 같은 DNA서연을 함유하는 발현 벡터에 의해서 형질전환된 숙주를 배양시키고, 숙주에서 폴리펩타이드를 발현시켜서, 회수함을 특징으로 하여 인터페론 활성 및 rIFN-α, 하이브리드 rIFN-α, rIFN-β 및 rIFN-α 중에서 선택된 인터페론의 아미노산 서연을 가지며, 서열중 적어도 하나의 시스테인 잔기가 분자간 S-S결합을 형성할 수 없는 아미노산 잔기로 대체된 폴리펩타이드를 제조하는 방법.Interferon activity and rIFN-α are characterized by culturing the host transformed with an expression vector containing the DNA sequence as defined in any one of claims 2 to 6, expressing the polypeptide in the host, and recovering the same. , Hybrid rIFN-α, rIFN-β And an amino acid sequence of an interferon selected from rIFN-α, wherein at least one cysteine residue in the sequence is replaced with an amino acid residue that cannot form an intermolecular S-S bond.
제7항에 있어서, 숙주가 대장군인 방법.8. The method of claim 7, wherein the host is colonic.
※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.※ Note: The disclosure is based on the initial application.