KR840002128B1 - 헤테로폴리싸카라이드 s-119의 제법 - Google Patents

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내용 없음.

Description

헤테로폴리싸카라이드 S-119의 제법

헤테로폴리싸카라이드가 혹종의 미생물에 의해 생성된다는 것은 공지된 사실이다.

친수성 콜로이드로서 작용하는 헤테로폴리싸카라이드 몇몇은 그의 점도 특성과 레올로지(rheology) 때문에 수성 용액의 농후제(thickening agent)로서 사용되고 있다.

아그로박테리움 라디오박테르(Agrobacterlum radicbacter) IFO(Institute of Fermentation, OSaka) 12607, IFO 12664, IFO 12665, IFO 13127, IFO 13256, IFO 13532 및 IFO 13533으로 분류된 미생물이 세포의 폴리싸카라이드를 생성하는데 사용되어 왔다(Hisamatus, et al., "각종 아그로박테리움 균주중에 석신산을 함유하는 산성폴리싸카라이드", Carbohydrate Research, 61(1978) 89-96) 이들 미생물은 Amemura와 그의 동료의 발효화학장치 ; 49권(1971년) 559-564항, Chem, Abst, 75권, 1971, 74882; 기술된 합성배지에서 배양시킨 것이다.

6 : 1 : 1 : 1.5의 비율로 D-글루코스, D-갈락토스, 피루빈산 및 0-아세틸기를 함유하는 세포의 폴리싸카라이드가, L.P.T.M. Zevenhuizen "리조비움(Rhizobium) 및 아그로박테리움의 산성 세포의 폴리싸카라이드의 메틸화 분석 ", Carbohydrate Research, 26권, (1973), 409-419항에 기술되어 있다. Zevenhuizen에 의해 사용된 미생물은 에이. 튀메화시엔스(A. tumfaciens) A-8 및 A-10로서 기술되어 있다.

에이. 라디오박테르(A. Radiobacter) ATCC 31643의 변이균주는 선택된 자양배지에서 배양시켰을 때, 에이. 튀메화시엔스 A-8 및 A-10에 기재된 것과 동일한 조성을 가지는 수용성 헤테로폴리싸카라이드를 생산하는 것이 발견되었다.

이제까지 기재된 바, 없는 본 생성물의 비제한 기탁은 1980년 5월 12일에 American Type culture collection 기탁번호 ATCC 31643호로 되었다.

본 미생불은 하와이의 가후까(Kahuka)에서 얻은 토양 샘플로부터 분리하였다. 본 미생물은 탄소원으로서 1%의 42DE 옥수수시럽을 가진 E-1 한천판(agar plate)상에서 30℃에서 5일간 배양된 후 검상의 군체(群體)로서 얻어진다. 그런 다음 이 미생물을 자양 한천상에서 순수하게 배양시켰다.

신선한 NA 경판으로부터 YM 플라스크시드를 개시하고 회전세이커상에서 30℃에서 배양하였다. 약 24시간후, 이 시드를 사용하여, 3% 가수분해된 전분을 탄소원으로 하는 E-1 플라스크에 접종시켰다. 이 플라스크를 30℃에서 세이커(shaker) 상에서 배양시켰다. 약 72시간후에 플라스크 내용물은 점성의 배양액임을 알게되었으며 2배용량의 99% LPA를 가했을 때 섬유상 침전물이 관찰되었다.

상기와 동일한 방법으로 다른 YM시드 플라스크를 제조하고 24시간 후에 여러가지 종류의 배지를 함유하는 4개의 플라스크에 이것을 접종시켰다. 이들 플라스크를 약 72시간동안 32℃의 세이커상에서 배양하고 이때의 pH, 점성, 검수율 및 생성물 점도를 측정하였다. 결과를 표 1에 나타내었다.

[표 1]

검 생산에 미치는 배지효과

ND : 측정하지 않았음.

E-1 배지는 5g의 인산 2칼륨, 0.1g의 황산 마그네슘, 0.9g의 질산암모니움 0.5g의 프로모소이 100(cen-tral soya chemurgy Division에 의해 시판되는 콩가루의 효소분해물), 30g의 덱스트로스 및 1ι의 수도물을 포함한다. E-1 배지의 pH는 7.6-7.8이다.

본 미생물은 14L 및 70L의 대규모 배양을 하였다. 이러한 대규모 배양의 데이타를 표 2에 기재하였다. 점도는 실온 60rpm에서 스핀들(spindle) 2(<500 cp), 5(500-2000 cp), 또는 4(>2000 cp)를 사용하여 블룩휠드(Brookfield) LVF 점도계에서 측정하였다.

[표 2]

NH₄NO₃. 전체량으로서 5% 글루코스를 탄소원으로서 첨가

잔류탄소원 ; 발효는 RCS≤0.1%일 때 완료한 것임.

다음은 ATCC 31643(이후 S-119로 명명함)의 분류학적 연구를 요약한 것이다.

A.군체 형태화적 특징

자양 한천상에서 작고 반투명한 색소가 없는 군체(0.2-0.3mm 직경)가 상온에서 2일후에 나타났다. 5일간의 배양후 직경이 1.2-1.5mm에 도달하였다. 군체는 둥글고, 전체가 푸르며, 볼록하지만, 장기간의 배양후에는 두껍게 주름진 형상을 나타내었다. 점액성의 특징은 관찰되지 않았다.

YM한천상에서 작고 불투명한 뮤코이드(mucoid)성의 흰색 내지 회색 군체(0.2-0.3mm 직경)가 실온에서 2일후에 나타났다. 5일간의 배양후에 직경이 2.2-2.5mm에 도달하였다. 군체는 둥글고 전체가 푸르며 볼록하지만, 장기간의 부화후에는 두껍게 주름진 형상을 나타내었다. 점액성은 있으나 경질막 조직은 관찰되지 않았다.

B.세포형태학적 특징

S-119균주는 그램 음성인 막대형태의 세균이다. 자양 한천상에서 세포의 펑균크기는 0.5×0.8-1.2μm인 바, 양끝은 반원형이다. 액포상(液胞狀) 구조가 간혹 관찰되었다. 이극성 착색이 통상적이다.

YM한천상에서 세포는 더욱 크게되며 평균 크기는 약 0.6×2.0-2.5μm인 바, 양쪽끝은 반원형이었다. 한쪽 끝은 다른 쪽보다 더컸다. 액포가 간혹 나타났으며 이는 세포의 불균일한 염색의 원인이 된다. 혹종의 세포는 만곡되는 경향이 있으며 세포의 팔리사이드(pallisade) 배열이 통상적이다. Y-형 세포가 가끔 관찰되었다. 이동성은 혹합편모, 극단(極單)편모 및 주(周)편모에 의한다.

C.생리학 및 생화학적 특징

싸이토크롬 옥시다제, 카탈라제는 양성 ; 호기성이다. 본 미생물은 41℃에서 생육될 수 있으나 43℃에서는 안된다. 60℃에서 30분간 생존가능하다. 3.0% NaCl에 내성을 보여주나 6.5% NaCl에서는 내성이 없다. 5-12의 pH에서 생육하였다.

다수의 탄수화물이 이용된다. 다음의 탄수화물로부터 산이 생성되나, 가스는 발생하지 않는다.

다음 탄수화물로부터 산은 생성되지 않는다.

중성 내지 약 알카리성 반응이 관찰되었다. 혈청영역은 형성되지 않았다. H₂S는 시스테인으로부터 제조된다. ADH, LDC 및 ODC는음성이었다. 인톨, VP. MR 및 심몬(Simmon)구연산 시험은 음성이었다. 젤라틴, 카제인, 전분, 트윈(Twoon) 80, 에스쿨린 및 난황등은 가수분해되지 않았다. 3-캐토락토스 시험은 음성 이었다.

본 미생물은 EMB, 맥콩키 및 SS 한천상에서는 생육하지만 만니톨염 및 텔루라이트 혈 한천상에서는 생육하지 않는다. 콩고 적색소는 흡착된다. 0.02 및 0.1% 리페닐테트라졸리움 클로라이드에 내성이 있었다.

D.항생물질 감수성 시험

S-119 균구는 다음 항생제에 대해 감수성이 있다.

S-119 균주는 다음 항생제에 대해 감수성이 없다.

E.영양 요구성

생육에서 생육인자를 필요로하지 않는다. 알루미늄염은 유일한 질소원으로서 공급된다. 시험된 유기화합물 114중에서 최소한 53개는 유일한 탄소 및 에너지원으로서 이용된다. 이는 다음과 같다.

F.생화학 및 기타 각종시험

표 3 참조.

G.확인

S-119 균주는 그램음성이고 호기성인 막대형 세균이다. 혼합(극 극성 및 주의) 편모에 의해 운동한다. 옥시다제 및 카탈라제는 양성이다. 다수의 탄수화물을 사용하였다. 세포는 가끔 배형이고 팔리사이드 배열을 한 세포중에서 액포가 형성되는 것은 통상적이다. Y-형 및 폴리-β-하이드록시-부티레이트의 축적이 관찰될 수 있다. 시트레이트가 이용된다. Bergey's Manual(제 8권)에 따라 본 미생물은 일종의 아그로박테리움(Agrobacterium)이다. 아그로박테리움 라디오박테르(ATCC 19358)인용 균주와 비교한 본 미생물의 유사값(S_J)은 76.9%인바, Colwell 및 Liston(1961)에 따른 동일종류의 범위내에 포함된다. 본 미생물은 3-케토락토스를 생성하지 않는다. 따라서 본 미생물은 아그로박테리움 라디오박테르의 변이균주이다.

[표 3]

S-119 균주에 대해 사용된 생화학 및 기타 각종시험

[발효조건]

헤테로폴리싸카라이드 S-119는 적당한 액체 자양배지 중에서 조절된 조건하에서 미생물 ATCC 31643을 접종시켜 호기성 발효시킴으로써 생산된다. 배지는 탄소원, 질소 및 무기염을 함유하는 통상의 배지이다.

일반적으로, 자양배지중의 탄소원으로서 탄수화물(예컨때, 글루코스, 푸락토스, 말토스, 슈크로스, 크실로스, 만니톨등)을 단독으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 배지중에 사용된 단수 및 복수의 탄수화물의 정확한 량은 부분적으로는 배지의 기타 성분에 의존하지만, 일반적으로 탄수화물의 량은 배지중량의 약 2-5% 범위내에 있다.

이들 탄소원은 단독으로 사용될 수 있거나, 또는 몇몇의 이러한 탄소원과 혼합되어 배지중에 사용될 수 있다. 일반적으로, 많은 단백질성 물질은 발효 공정중의 질소원으로서 사용될 수 있다. 적당한 질소원에는, 예컨대, 효모 가수분해물, 제 1 효모, 콩가루, 목화씨가루, 카제인 가수분해물, 콘스팁(Cornsteep)액, 양조기의 가용성 성분 또는 토마토페이스트 등이 포함된다. 질소원은 단독 또는 혼합하여 액체 배지의 약 0.05-0.2중량% 범위의 변화량으로 바람직하게 사용된다. 프로모소이 100은 0.005-0.4% 범위로 사용되었다.

배양 배지에 혼합될 수 있는 자양 무기염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 인산염, 황산염, 염화물, 탄산염의 이온을 생산하는 염이 포함된다. 또한 코발트, 망간, 철 및 마그네슘과 같은 미량금속이 포함된다.

실시예에 기술된 배지는 사용될 수 있는 광범위한 종류의 배지를 단지 설명한 것이며 제한한 것이 아니다.

기타 배지로서, S-119는 낮은 Ca⁺⁺조건하에, 즉, 탈이온수 또는 실제로 Ca⁺⁺이온을 함유하지 않는(즉 최종 발효액 육즙중의 1%검당 약 4ppm Ca⁺⁺이하) 기타 배지 시스템 중에서 생육될 수 있다.

발효는 약 25℃-35℃ 범위의 온도에서 수행되지만, 최적결과를 얻기 위해서는 약 28℃-32℃의 온도에서 발효를 유도하는 것이 바람직하다. ATCC 31643을 생육시키고 폴리싸카타이드 S-119를 얻기 위한 자양 배지의 pH는 약 6-8로 변화될 수 있다.

폴리싸카라이드 S-119가 표면 및 침부(深部)의 배양 두 방법에 의해 생성된다 하더라도 침부 배양 조건으로 발효시키는 것이 바람직하다.

소규모 발효는 생산균을 적당한 자양 배지로 접종시키고, 생산배지에 이동시킨 후, 몇일간 30℃의 항온에서 세이커 상에서 발효시켜 편리하게 수행한다.

발효는 배지를 넣은 멸균 플라스크 중에서 1 또는 그 이상 단계의 시드 배양물을 제조하는 것에 의해 개시한다. 시드단계용 자양 배지는 탄소원 및 질소원을 적당히 조합한 것이 좋다. 시드 플라스크는 약 30℃의 항온실에서 1-2일간, 또는 생육이 충분히 될때까지 진탕시키고 결과의 생육된 것을 제 2 단계 시드 또는 생산 배지에 접종한다.

중간단계의 시드 플라스크를 사용하는 경우, 동일 방법으로 배양한다. 즉, 최종 시드단계로부터의 플라스크 내용물 일부를 사용하여 생산배지에 접종한다. 접종시킨 플라스크를 몇일동안 항온에서 진탕하고 부화기간 종료시에 플라스크 내용물을 이 소프로판올과 같은 적당한 알콜, 편리하게는 CMB(85 : 15 알콜 : 물의 일정비등 혼합물)으로 침전시켜 회수한다. 대규모 배양시, 교반기 및 배지통기용 장치를 장착한 적당한 탱크에서 발효시키도록 하는 것이 바람직하다. 이 방법에 있어서, 자양 배지는 탱크에서 만들고 약 120℃까지의 온도로 가열하여 멸균한다. 냉각후 미리 배양한 생산균 배양물을, 이 멸균배지에 접종시키고, 2-4일간 발효시킨다. 그동안 자양배지를 교반 및/또는 통기시키고, 온도를 약 30℃로 유지한다. S-119를 만드는 이 방법은 대량 생산에 특히 적합하다.

ATCC 31643은 여러가지 조건의 배지에서 자랄 수 있으나 다음에 제시된 상태가 권해진다.

1.배양물의 유지

배양물은 자양한천(NA)나 YM 한천상에서 매우 잘자라나 NA가 배양물 유지에 더 좋다.

2.시드(seed)조제

본 미생물의 시드조제는 섭씨 30도에서 YM육즙내에서 배양하는 것으로 개시된다. 그런 다음 24-30시간후에 이 YM시드를 사용하여 시드배지에 접종한다. 시드배지의 조성은 다음과 같다.

24-30시간 후에, 5-10%의 접종량을 사용하여 최종 발효조에 접종한다.

3.70L 발효조

pH는 6.5-7.2로 조절되어야 한다 : 온도는 섭씨 30도로 조절된다.

발효시간은 60-70시간 범위이고 발효액의 점도는 1900cp에서 2300cp 범위이다. 5% 글루코스로부터의 변환효율은 48-52% 범위이다. 제포제 SAG 471(유니온 카바이드)이 사용된다.

S-119 발효액으로 만든 그람 염색은 크기가 대략 0.6×2.0-2.5μ인 그람 음성의 봉 모양의 세포를 보여준다.

4.회수

발효 종료후 헤테로폴리싸카라이드 S-119는 헤테로폴리싸카라이드에는 빈약한 용매이며 이것과는 반응하지 않는 혼화가능한 용매로 발효액을 처리함으로써 회수된다. 이러한 방법으로 헤테로폴리싸카라이드를 용액으로부터 침전시킨다. 사용되는 용매의 양은 일반적으로 발효액으로 약 2-3배 범위이다. 사용될 수 있는 여러가지 용매중에서는 아세톤과 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-부탄올, 2급-부탄올, 3급 부탄올, 이소-부탄올, n-아밀알코올과 같은 저급의 알칸올이다. 이소프로판올이 바람직하다. S-119의 침전은 발효액을 처음에 약70-75℃로 짧은시간, 예로 5-10분간, 가열하고 30℃나 그 이하로 냉각시킨후 용매를 첨가하는 것에 의해 가능하다. 침전을 위해서 사용되는 알코올은 농도가 57-59%의 것이다. 이것은 발효액으로부터 헤테로폴리싸카라이드를 침전시키는 바람직한 방법이다. 고체는 여과 및 흡입하는 것에 의해 액체로부터 분리회수하고, 온도를 상승시켜 건조시킨다.

5.건조

생성물은 강제통기 건조기에서 55℃로 1시간까지 건조된다.

6.생성물의 품질

브룩휠드 LVF, 스핀들 2, 25℃, 60회전/분으로 측정한 1% 탈이온수의 점도는 250-450cp 범위이다.

[헤테로폴리싸카라이드 S -119]

ATCC 31643으로부터 생성된 헤테로폴리싸카라이드는 주로 탄수화물과 2.9-3.5%(0-아세틸로 계산된)의 0-글리코시드 결합 에스테르의 0-아실기(아세틸 및 석시닐 혹은 이것들의 조합물), 3.0-4.0%의 피루빈산 및 약 12%의 단백질로 구성되어 있다. 이 헤테로폴리싸카라이드는 마이너스의 편광도를 보여주며, 주로 β-결합으로 있는 것으로 표시된다. ([α] 589=-14°; [α] 578=-15°) 이러한 값은 탈이온수증의 1%용액으로부터 얻어졌다.

S-119 폴리싸카라이드의 탄수화물 부분은 유론산은 없고 중성 서당글루코오스(88%)와 갈락토스(12%)를 함유한다. 갈락토스에 대한 클루코스의 대략적인 몰비는 7.4 : 1이다. 클로이드 적정(DIMDAC/설폰산방법)은 이 검이 음이온성(0.9mm 안이온 그룹 당량/g 검)이라는 것을 표시한다.

3.5%의 아세틸 함량은 S-119 검의 0.2% 수용액을 알칼리성, 하이드록실아민 시약으로 처리한 후 산성의 염화 제 2철시약으로 처리하는 것에 의해 결정된다. [S, Hestrin (1949) J. Biol. chem. 180권 249-261항].

폴리싸카라이드 S-119의 중성당은 생성물 10mg을 2ml 2NH₂SO₄에 용해시키고 이 혼합물을 100℃로 4시간 가열함으로써 얻어진다. 결과의 용액을 냉각시키고 수산화 바륨으로 중화시키고, pH는 고체 탄화가스로 5-6으로 만든다. 황산 바륨의 결과 침전물은 원심분리로 제거되고 상층액은 감압하에서 시럽상태로 농축된다. 가수분해물중의 당은 이것의 알도노니트릴 아세톤 유도체를 가스-액체 크로마토그라피함에 의해 확인된다. 가스-액체 크로마토그라피는 Hewlett Packard Model 5750 크로마토그라피를 사용하여 3%의 OV-225(80/100메쉬의 가스크롬 Q상)에서 210℃에서 행한다. 당은 표준 시료와 비교하는 것에 의해 비교정량한다. [J. K. Baird, M.T. Holroyde, and D.C. Ellwood (1973) Carbohydr, Res, 27 464-467 ].

폴리싸카라이드의 여러가지 중성은 왓트만 No. 1 크로마토그라피 종이를 사용하여 용매로서 피리딘 : 에틸아세테이트 : 물(2 : 5 : 5)의 상층을 사용하는 하강의 종이 크로마토그라피에 의해 확인된다. 크로마토그램은 질산은 침엽법 및 산성아닐린 프탈레이트 스프레이시약에 의해 염색된다. 서당성분은 표준당과의 크로마토그라피 및 아닐틴 프탈레이트 스프레이 시약에서의 특이적 색반응에 의해 확인된다.

폴리싸카라이드의 유론산 함량은 두 개의 독립된 방법에 의해 결정된다. 한가지 방법은 시료를 19%의 염산으로 탈탄소시키고 방출된 탄소 가스를 표준수산화 나트륨중에서 잡고 역적정에 의해 [B.L. Browning(1967) Methods of wood chemistry Ⅱ권, 632-633항] 또는 카바졸 비색법 [T. Bitter 및 H.M. Muir(1962) Anal. Biochem, 4 330-334]에 의해 결정된다. 탈탄소법에서는 2.8%라는 값이 없고 비색법에서는 4.8% 이었다.

종이 전기 영동법은 상술한 중화된 산 가수분해물중에 존재하는 유론산의 실험적 확인과 분리에 사용되었다. 이의 시료 및 공지된 유론산 표준품 소량을 카마그(camag)전기 영동 종이 No. 68-011에 가하고 전기영동은 카마그 모델 HVE전기 영동 장치를 사용하여 pH2.7의 완충액중에서 2.0시간동안 수행하였다. 크로마토그램을 공기 건조시키고 질산은 침엽 시약으로 염색시키는 것에 의해 분리된 유론산의 위치를 결정하였다. 이 방법으로는 유론산의 스포트는 발견되지 않았다.

천연 S-119의 적외선 스펙트럼은 건조시료를 KBR 펠렛으로 하는 것에 의해 측정된다. 헤테로폴리싸카라이드는 1725cm^-11600-1650cm^-1, 및 1350-1400cm^-1에서 피크가 나타난다.

헤테로폴리싸카라이드 S-119는 다음과 같은 특성을 갖는다.(모든 측정은 실온에서 행하였다)

1. 점도(블룩휠드 LVF 점도계)

2. 전단(웰스-블룩휠드 미소점도계 RUT-C/P)

3. 50℃ 저장안정성(4주일간)

4. 산, 염기, 열, 안정성

5. 염 및 색소의 적합성

6. 조직/유동성

고점도 검, 원활한 연속적인 유동, 신축성, 젤라틴화되지 않음, 접촉에 대해 약간 검상(狀)임.

7. 신너지즘(Synergism) 및 효소(웰스-불룩휠드 RVT-c/p 9.6초^-1에서의)

8. 밀크 반응성

A. 분산성 : 우수함

B. 훼이(Whey) 분리 : 1일 때

9. 필름 형성

형성된 필름은 약간 탄성이 있으며 고도의 장력 강도를 갖는다.

헤테로폴리싸카라이드 S-119는 수성조성물, 예컨대 날염-염색 시스템에서의 이동방지제로서 사용될 수 있다.

통상적인 더모솔(thrmosol) 공정(상업역색 공정용으로 우수하게 확립된 공정)에서와 같이, 수성염료조액체를 사용하여 날염시킴으로서 물질에 함침시키는 상업적인 염색공정에서, 염료함침 물질은 염료의 열고착 또는 환원전에 중간 건조단계에 통상 도입된다. 이 중간 건조 단계중에는 염료의 이동이 일어나는 문제가 있다. 염료이동은 물질을 얼룩지게 하거나 또는 농담이 생겨서 염색된 직물의 외형가치를 손상시키기 때문에 바람직하지 못하다.

직물을 소기의 염료로 함침시킨 후의 통상적인 건조 공정에서, 염료조 액체를 건조시키기 충분한 시간, 약 100℃의 온도에서 처리시킨 물질을 가열하고 보온한다. 이 가열은, 열기 적외선방사, 마이크로파 오븐등과 같은 기타 적합한 장치에 의해 신속하게 한다. 압력은 대기압 이하로부터 이상까지 변화될 수 있다. 기질표면에 염료 이동이 일어나는 것이 이러한 통상적인 건조 공정기간 중에 있다. 상술한 이동은 비조절되고 랜덤하며 불균일한 경향이 있으며, 불균일한 염색작용, 채색(彩色) 및 일반적으로 최종생성물의 품질을 떨어지게 한다.

염료이동은 3차원적으로 일어나는 바, 즉, 날실 및 씨줄방향 및 직물두께 방향을 통하여 발생한다.

날실 방향의 이동은 물질 형상에 상당한 영향을 주지는 않지만 씨줄방향 및 기질두께 방향을 통한 이동은 항상 적당한 상업건조공정 조건하에서라도 어느 정도 일어날 수 있다.

본 명세서에 사용된 바와같이, 물질은 직포, 부직포 또는 판직포와 같은 직물, 또한 연속적인 상태를 염색될 수 있는 실, 섬유 등을 의미한다.

헤테로폴리싸카라이드 S-119는 구입가능한 염료 및 이것의 혼합물 예컨대 분산성, 적접성, 매염, 반응성 또는 산성염료 및 이와 혼합하여 날염 염색공정에 사용될 수 있다. 염료/S-119 이동방지제 용액을 날염 염색하기에 적합한 혹종의 물체, 예컨대 100% 폴리에스테르, 100% 면, 폴리에스테르/면혼방(임의의 비율), 골덴, 100% 나일론, 100% 폴리프로필텐, 100% 아크릴, 및 폴리에스테르/면/나일론/폴리프로필렌/아크릴 혼합(임의 조합비율)을 날염 염색하는데 사용한다. 이동방지제로서의 S-119의 사용량은 염료용액의 총중량을 기준으로 0.001%-1.00% 이상으로 변화될 수 있으며 S-119의 농도는 약 0.005-0.5중량% 범위가 바람직하다. 이들 사용량은 물체의 종류 및 사용하는 염료 및 사용방법 및 건조방법에 달려있다. 10% 이상의 S-119 농도에서, 용액의 점성은 문제가 될 수 있고 이러한 용액은 바랍직하지 못하다. 그러나, 50% 수성 페이스트를 제조할 수 있으며 30% 용액은 주입가능하므로 고농도물은 차후 희석을 위해 제조될 수 있다.

본 발명의 수성 염용액의 pH가 일반적으로 광범위하게 변화될 수 있다 하더라도 적당한 pH 한계는 특별한 염욕시스템에 적합함은 명백하다.

처리되는 직물을 본 발명의 수성 염욕액과 접촉시켜 소기의 염료와 함침시킨후, 이 물질을 통상적인 방법으로 건조시키고, 염료는 열 또는 기타 방법, 예컨대 화학 작용에 의해 고착시킨다. 이러한 고착 기술은 공지되여 있으며 직물 염색분야에 널리 알려진 것이다. 고착화는 약 120-230℃의 온도에서 약 3분-15초 동안 수행될 수 있는 바, 직물, 염료 및 기타 조건인자에 좌우된다.

광범위한 부가제가 염료욕조용 액체중에 존재할 수 있다. 이러한 부가제에는 염료조 색물, 담체, 촉진제등이 포함될 수 있으며, 이들은 본 발명의 실시에 통상의 목적을 위하여 통상적인 량으로 사용될 수 있다. 염료 자체는 염욕의 총중량을 기준으로 약 5중량% 또는 그 이상까지의 량으로 염욕액에 혼합시킬 수 있다. 보다 무겁고 어두운 색조를 얻기 위해서는 염료를 약 2-5중량%의 량으로, 특히 약 3-4중량%의 량으로 사용할 수 있는 반면, 가벼운 색조는 약 1/2중량% 또는 그 이하의 농도를 사용하여 달성할 수 있다. 이러한 범위외의 염료 농도도 본 발명의 법위내에 있지만, 직물 재료를 패딩, 분무, 코팅, 날염 또는 기타 방법으로 함침시키는때 사용하는 염욕액의 량은 통상 함수율의 25-150%에 있으며 제공된 혹종의 요구되는 색조에 좌우된다.

염료이동의 정도는 American Association of Textile chemists and Colorists(AATCC)에 의해 최근에 채용된 ''Evaluation of Dyestuff Migration'' AATCC Test Method 140-1974 및 AATCC Technical Manual(23)에 기재된 방법에 의해 비주관적으로 측정될 수 있다. 날실 및 씨줄방향의 이동은 이 시험에 의해 결정되며, 물질의 두께방향 이동으로의 이동은 측정된 수평방향으로서의 이동치를 수직수평 방향으로 이동과 관련한 수식에 의하여 결정된다.

요약하면, AATCC 시험에서, 물질을 염료-보조제 함유욕을 통하여 날염시키고 특정 가속수준으로 날염시켜 최종적으로 편평한 비다공질 표면(예컨대 유리판)에 위치시키고 관찰 유리로 덮는다. 관찰유리는 증발을 최소화하기 위하여 공급되므로, 물질내부를 통하여 수평방향으로(즉, 유리가 덮친 대역으로부터 덮히지 않은 대역까지) 강제 이동시켜 액상중의 특정의 이동을 평가한다.

본 발명을 실시예에 의거 상세히 설명하면 다음과 같다.

[실시예 1]

헤테로폴리싸카라이드 S-119의 파일롯트 플랜트 생산

YM배지중 30℃에서 배양하는 것에 의해 시드 제조를 개시한다. 24시간 이 YM시드를 사용하여 다음의 조성을 갖는 100갈론의 시드 배지에 접종한다.

29시간 후에 100갈론의 이 배지를 최종 발효조에 접종하였다.

[실시예 2]

이동방지제로서의 S-119의 사용

0.5g/ι 헤테로폴리싸카라이드 S-119 및 100g/ι 파라세트 블랙(palacet Black) Z-PAT 50% 용액(분산염료)을 함유하는 용액을 100% 폴리에스테르 직물상에서, 흡수율이 80%(직물중량을 기준으로)가 되도록 패딩하였다. 이 직물을 통상의 방법으로 건조시키고 가공하였다. 결과의 염색된 직물은 색상면에서 균일하고 얼룩이 없었다.

동일한 결과를 얻기 위해서는 공지의 이동방지제, 알긴(KELGIN XL

, Kelco Division, Merck & Co., Inc)을 2g/ι 필요로 한다.

[실시예 3]

이동방지제로서의 S-119의 사용

60% 폴리에스테르/40% 면직물에 0.1g/ι의 S-119, 3.0g/ι의 C. I. 분산 블루 120 및 2.0g/ι, C. I. 직접 블루 98을 함유하는 염료로 그 흡수율이 80%가 되도록 패딩하였다. 패딩된 직물을 통상의 방법으로 건조시키고 처리하였다. 결과의 염색직물은 색조면에서 균일하였다.

4.0g/ι(활성물질의 양에 기준하여)의 수퍼 클리어(Superclear) 100-N(Diamond shamock Corp.)을 사용했을 때 동일한 결과가 얻어지지 않았다.

Claims (1)

1. 미생물 ATCC 31643을 액체자양 배지중에서, 동화탄소원을 사용하여 호기성 배양하여 헤테로폴리싸카라이드 S-119를 회수하는 것을 특징으로 하는 헤테로폴리싸카라이드 S-119를 제조하는 방법.