KR20240044461A - 면역 조절을 위한 치은 틈새에서의 접합 상피의 표적화 - Google Patents

면역 조절을 위한 치은 틈새에서의 접합 상피의 표적화 Download PDF

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KR20240044461A
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하빈더 싱 길
아킬레쉬 케이. 샤키아
로한 제이. 인그롤
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텍사스 테크 유니버시티 시스템
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Abstract

본 발명은 치은 틈새의 접합 상피를 표적화함으로써 면역 반응을 활성화, 조정 및/또는 무반응화하는 방법을 포함한다.

Description

면역 조절을 위한 치은 틈새에서의 접합 상피의 표적화
관련 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2021년 8월 5일 출원된 미국 가출원 일련번호 제63/229,784호에 우선권을 주장하고, 상기의 전체 내용은 본원에 참조로 편입되었다.
본 발명은 일반적으로 면역 반응의 표적화 분야에 관한 것으로, 좀 더 특별하게는, 감염제제에 대한 예방접종, 알레르기 유발 항원 면역치료 및 자가면역 질환을 위한 면역 조절을 위해 치은 틈새의 접합 상피(JE)를 표적화하는 것에 관한 것이다.
연방정부 자금 지원 연구에 대한 언급
본 발명은 국립보건원/NSF/DARPA에서 수여한 R01AI135197 및 R01AI137846 하의 정부 지원을 받아 이루어졌다. 미 정부는 본 발명에 대해 일정 권한을 갖는다.
컴팩트 디스크 상에 출원된 물질의 참조 편입
없음.
본 발명의 범위를 제한하지 않으면서, 본 발명의 배경이 면역화 및 알레르기 유발 항원 면역치료와 관련하여 기술된다.
잇몸을 통과한 치아 맹출(tooth eruption)이 연속적이며 중단이 없없을 인간 점막 표면에 틈새를 만들어낸다. 이와 같은 불연속성을 밀폐하기 위해, 치은 조직이 접합 상피를 통해 각각의 치아에 부착된다. 접합 상피는 치아에 부착되어 구강 및 기저 조직 사이에 밀폐부를 형성한다. 접합 상피 밀폐부는 두께가 단지 두세 개의 세포층이고, 이들 세포들 사이에 넓은 세포간 공간이 존재하기 때문에, 샐 수 있고 투과율이 높다. 이와 같은 부착 영역 이외의 치은 조직이 치은 틈새를 형성한다. 점막체계 내 다른 곳에서는 보이지 않는 접합 상피의 높은 투과율이 공생 세균, 잠재적 병원균, 및 식품 알레르기 유발 항원에 용이한 통로를 제공한다. 치은 틈새는 면역세포, 예컨대 호중구, 자연살해 세포, 대식세포, 수지상세포, CD4+/CD8+ T 세포, B 세포 및 선천 림프 세포와 같은 선천 및 적응 면역세포의 광범위한 연결망을 갖는다. 이와 같은 연결망은 미생물, 알레르기 유발 항원 및 식품 단백질에 의한 상시적인 자극에 대해 방어 및 면역 반응 생성에 도움이 된다.
점막 표면은 환경과의 제1 접촉점이기 때문에, 당연히 대다수의 병원균 및 알레르기 유발 항원의 진입 입구로 작용한다. 예를 들어, 현재 세계적인 유행병을 유발하고 있는 코로나바이러스는 1차적으로 호흡기 점막을 통해 전달되고, HIV는 1차적으로 생식기 점막 및 위장 점막을 통해 전달되며, 호흡기 알레르기를 유발하는 꽃가루는 호흡기 점막에 접촉을 개시하고, 땅콩 식품 알레르기 유발 항원은 구강 점막에서의 첫 접촉을 개시한다. 강력한 점막 및 전신 면역 반응이 단순히 전신 면역 반응과 비교할 때 감염 방지에 더 효과적임이 문헌에서 인정되고 널리 보고되었다. 하지만, 주사를 통한 백신 전달은 강력한 점막 면역을 자극하지 않고, 강력한 전신 면역을 자극할 뿐이다. 강력한 점막 면역 및 강력한 전신 면역을 생성하기 위해서는, 백신이 점막 표면을 통해 전달되어야 한다. 하지만, 점막 표면은 물질이 내부로 유입되지 못하도록 설계되었기 때문에, 단순히 점막 표면의 상면에 백신을 배치하는 것으로는 효율적인 흡수로 이어지지 않는다. 예를 들어, 알레르기를 치료하기 위해, 점막 전달 방식이 주목을 받아왔고, 이것은 알레르기 유발 항원이 구강 점막을 자극하기 위해 약 1분 동안 환자의 혀 아래에 놓이는 설하 면역치료(SLIT)라 불린다. SLIT 접근방식을 활용한 잔디 및 꽃가루 알레르기 유발 항원 함유 정제가 최근에 꽃가루 및 잔디 알레르기에 의해 유발된 알레르기 비염을 치료하기 위해 FDA에서 승인을 받은 바 있다. SLIT의 경우, 혀 아래 점막을 통한 흡수가 비효율적이기 때문에, 주사와 비교하여, 약 50~100배 많은 양의 알레르기 유발 항원이 요구되고, 환자 반응의 가변성이 높다. 또 다른 예로서, 위장 점막의 상면에 백신을 위치시키는 데 반드시 일조를 하는 백신의 섭취에 의한 구강 접종은 위장의 높은 산성 환경 및 효소가 풍부한 환경이 백신을 손상시킬 수 있기 때문에 효능이 낮으며, 또한 위장 점막이 제공하는 강한 장벽이 백신의 점막 내피를 통한 기저 조직층으로의 효율적인 수송을 방해한다. 따라서, 효율적인 면역 반응을 획득하기 위해, 점막 장벽이 깨져서 분자들을 점막 표면을 통해 기저 조직으로 전달해야 하며; 단순히 분자를 점막 표면의 상면에 배치시키는 것이 효율적인 면역 반응을 초래하지 않음이 이해된다. 분자의 흡수 및 수송의 개선을 달성하기 위해, 다른 접근방식, 예컨대 마이크로 및 나노입자에 분자를 봉입 및 세포를 통한 입자의 흡수 의존, 수송의 향상을 위해 점막 장벽을 교란시키기 위한 화학물질의 사용, 감염성 바이러스 및 세균의 사용, pH의 변화, 또는 기계적 방법들이 사용된다.
선행기술을 담은 하나의 특허는 Francois에 개시된 미국 특허 제9,271,899호로, 제목은 "구강 점막을 통한 알레르기 탈감작화를 위한 방법, 물품, 및 키트(Methods, articles and kits for allergic desensitization, via the oral mucosa)"이며, 이것은 구강 점막의 영역을 통해 개체가 알레르기 유발 항원에 탈감작화되도록 사용하는 조성물들 및 방법들을 교시하는데, 구체적으로 구강 면역 관용을 유발하는 전정 점막을 표적으로 한다.
이와 같은 진보에도 불구하고, 강력한 면역 반응을 촉발하기 위해 항원의 복용을 최대화하는 신규한 면역 표적화 전략에 대한 요구가 여전히 이어지고 있다.
본원에 구현되고 넓게 기술된 바와 같이, 본 개시의 측면은 개체(예를 들면, 인간/ 및 애완동물(예컨대, 개, 고양이, 소, 돼지, 또는 다른 가축)에서의 면역 반응의 조절 방법에 관한 것으로, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 유효량을 치은 틈새로 전달하여, 구체적으로 접합 상피(JE)를 표적화하되, 상기 유효량이 면역 반응을 활성화 또는 조절하기에 충분한 단계를 포함한다. 일 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합은 전정 점막에 전달되지 않는다. 또 다른 측면에서, 면역 반응의 조절은 치은 틈새의 접합 상피를 표적화함으로써 면역 반응을 활성화 또는 무반응화하는 것이다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 제공되어, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 치은 틈새로의 전달을 극대화한다. 또 다른 측면에서, 상기 방법은 하나 이상의 항원의 치은 틈새(GC)의 투과율(permeability)을 증가시키는 하나 이상의 제제를 첨가하는 단계를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 0.001~100%는 치은 틈새의 접합 상피(JE)에 있는 침적물(depot)에 존재한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 치은 틈새의 접합 상피(JE)에 반복적으로 제공된다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 접합 상피로의 전달은 음식 또는 음료의 섭취 전 또는 후에 이루어진다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 매일 또는 매주 1, 2, 3, 4, 5 또는 6회 적용된다. 또 다른 측면에서, 둘 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 치은 틈새의 접합 상피(JE)에 전달된다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대해 개체를 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 탈감작화(desensitize)한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대해 상기 개체를 0.1~100% 사이로 탈감작화한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 접합 상피로의 전달이 상기 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하기 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상 전에 이루어진다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 접합 상피(JE)로의 전달이 상기 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하고 나서, 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상이 지난 후 이루어진다. 또 다른 측면에서, 접합 상피에 전달된 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 양이 피코그램에서 밀리그램의 범위에 속한다. 또 다른 측면에서, 면역 반응은 활성화, 조정, 또는 무반응화 면역 반응이다.
본원에서 구현되고 넓게 기술된 바와 같이, 본 개시의 측면은 개체에서 면역 반응을 촉발하는 방법에 관한 것으로, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 유효량을 치은 틈새에 제공하는데, 구체적으로 접합 상피(JE)를 표적화하는 단계를 포함하되, 유효량이 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대한 면역 반응을 촉발하기에 충분하고, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 치은 틈새의 접합 상피를 표적으로 하는 전달 장치에 내포, 도포 또는 부착된다. 일 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 전정 점막에 전달되지 않는다. 또 다른 측면에서, 면역 반응의 촉발은 치은 틈새의 접합 상피를 표적화함으로써 면역 반응을 활성화 또는 무반응화하는 것이다. 또 다른 측면에서, 전달 장치는 두께가 5 mm 미만, 바람직하게는 3 mm 미만, 및 바람직하게는 1 mm 미만이다. 또 다른 측면에서, 전달 장치는 천연 또는 합성 중합체, 유기 물질, 금속, 무기 물질(들) 또는 이들의 조합을 포함한다. 또 다른 측면에서, 전달 장치는 점막접착층 또는 소수성 층 또는 친수성 층 또는 이들의 조합을 포함한다. 또 다른 측면에서, 전달 장치는 치은 틈새에 항원의 확산을 허용하는 미세다공성 구조를 포함한다. 또 다른 측면에서, 상기 장치는 치은 틈새에 도달하도록 설계된 시스템/장치, 예컨대 치간 칫솔을 포함한다. 또 다른 측면에서, 접합 상피에 전달되는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 양은 피코그램에서 밀리그램에 이르는 범위에 속한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합은 개체를 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 탈감작화한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합은 상기 개체를 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 0.1~100% 사이로 탈감작화한다. 또 다른 측면에서, 접합 상피로의 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 전달이 상기 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하기 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상 전에 이루어진다. 또 다른 측면에서, 접합 상피로의 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 전달이 상기 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하고 나서 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상이 지난 후에 이루어진다. 또 다른 측면에서, 면역 반응의 증가는 면역 반응의 활성화, 조정, 또는 무반응화의 증가이다. 또 다른 측면에서, 면역 반응은 하기 중 적어도 하나를 표적으로 삼는다: 세균, 바이러스, 곰팡이류, 원생동물, 기생충, 프리온, 독소, 암, 알레르기, 또는 자가면역 질환. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원은 하기 중 적어도 하나에서 선택된다: 단백질, 펩타이드, 데옥시리보핵산(DNA) 올리고뉴클레오타이드, 리보핵산(RNA) 올리고뉴클레오타이드, 망가진 세포, 온전한 세포, 지질, 독소 변이체, 탄수화물, 바이러스-유사 입자, 리포좀, 살아 있는 약화된 또는 죽은 천연 또는 재조합 미생물, 비로솜, 중합체/무기 /유기 마이크로 및 나노 입자, 또는 면역 자극 복합체(ISCOMS). 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원은 T- 및 B 세포 림프구증식 질환, 난소암, 췌장암, 두경부암, 편평 세포 암종, 위암, 유방암, 전립선암 또는 비소세포 폐암에서 선택된 암 세포 또는 이것의 일부분에서 획득된 펩타이드를 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원은 땅콩, 조개류, 달걀 단백질, 우유 단백질, 콩류, 견과류에서 선택된 음식 알레르기 유발 항원, 또는 집먼지 진드기 또는 꽃가루에서 선택된 기도 알레르기 유발 항원을 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원은 적어도 치실 또는 얇은 장치 또는 끈/패치 또는 치은 틈새로의 배치에 적합한 두께를 가진 치간 칫솔에 부착, 흡착, 또는 물리적 또는 화학적으로 고정된다. 또 다른 측면에서, 상기 조성물은 사이토카인, 케모카인, 톨 유사 수용체 리간드 또는 활성화제, 명반, 뮤라밀 다이펩타이드, 피리딘, 키토산, 사포닌, 오일, 에멀젼, 세균성 세포벽 추출물, 세균성 단백질, 세포질 세균성 DNA 또는 모방체, 바이러스 RNA 또는 모방체, 합성 올리고뉴클레오타이드, 인터페론(IFN) 유전자 자극제(STING) 작용제(2'3'-cGAMP, c-di-AMP, 2'3'-c-di-AM(PS)2 (Rp,RP), c-di-GMP, CL401, CL413, CL429, 플라젤린, 이미퀴모드, LPS-EB, MPLA, ODN 1585, ODN 1826, ODN2006, ODN2395, pam3CSK4, poly(I:C), R848, TDB), 천연 중합체(폴리-γ-글루탐산, 키토산, 마난, 리포마난, 레티난, 덱스트란), 합성 중합체(폴리-N-이소프로필아크리알마이드, 공중합체, 블록 중합체, 폴리포스파젠, 고분자 전해질, 고분자 무수물, 폴리메타크릴레이트, 폴리글리콜-코-락타이드, 폴리카프로락톤, 폴리비닐피롤리돈, 양이온 중합체) 및 이들의 조합에서 선택되는 하나 이상의 보조제를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원(들)은 선천 면역 반응, 적응 면역 반응 또는 둘 다를 활성화한다.
본원에서 구현되고 넓게 기술된 바와 같이, 본 개시의 측면은 치은 틈새의 접합 상피를 표적화하는 전달 장치 상의 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 유효량을 포함하는 면역화에 관한 것으로, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 양은 면역 반응을 활성화 또는 조절하기에 충분하다. 일 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합은 전정 점막에 전달되지 않는다. 또 다른 측면에서, 면역 반응의 조절은 치은 틈새의 접합 상피를 표적으로 삼음으로써 면역 반응을 활성화 또는 무반응화하는 것이다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 제공되어 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 치은 틈새로의 전달을 극대화한다. 또 다른 측면에서, 상기 면역화는 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 치은 틈새(GC)로의 투과성을 증가시키는 하나 이상의 제재를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 0.001~100% 사이가 치은 틈새의 접합 상피(JE)의 침적물에 존재한다. 또 다른 측면에서, 면역화는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 운반체, 부형제, 희석제, 완충제, 또는 염을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제(하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합)는 치은 틈새의 접합 상피를 표적화함으로써 활성 제제의 약력학/약물동력학을 향상시킴으로써 건강 상태를 개선한다.
본원에서 구현되고 넓게 기술된 바와 같이, 본 개시의 측면은 하나 이상의 활성 제제를 사전에 결정된 양만큼 포함하는 치실을 제조하는 방법에 관한 것으로, 치실을 제공하는 단계 및 사전에 결정된 양의 활성 제제를 함유한 약제학적으로 허용가능한 운반체 중의 활성 제제를 치실 상에 배치하는 단계를 포함한다. 일 측면에서, 배치 공정은 치실의 단일 연속부 상에 또는 상기 각각의 배치 영역 사이에 동일한 또는 상이한 간격으로 치실의 둘 이상의 분리된 부분 상에 배치된다. 일 측면에서, 배치 공정은 치실 상에 액적을 배치하거나 치실 상에 액적을 끌어서 피펫을 사용하여, 또는 분사 배치, 또는 잉크젯 배치, 또는 피펫 사용 배치 또는 카트리지 배치 또는 이들의 조합을 사용하여 치실 상의 특정 거리/길이에 걸쳐 액적을 펴 바르는 단계를 포함한다. 일 측면에서, 배치된 물질의 점도는 0.01 센티푸아즈(cp), 1 cp, 10 cp, 100 cp, 1000 cp, 10000 cp, 100000 cp, 200000 cp, 300000 cp, 500000 cp, 1000000, 또는 100000000 cp이다. 일 측면에서, 상기 배치 공정은 수동, 자동 또는 반자동 또는 이들의 조합으로 이루어진다. 또 다른 측면에서, 상기 배치는 치실의 일면 또는 치실의 양면 상에 이루어진다. 일 측면에서, 각각의 이웃한 침적물은 동일한 활성 제제 또는 상이한 활성 제제를 포함하고 또는 각각의 이웃한 침적물은 상이한 농도/양의 동일한 활성 제제를 포함하거나; 또는 각각의 이웃한 침적물은 상이한 농도의 상이한 활성 제제를 포함하거나; 또는 각각의 이웃한 침적물은 이웃한 침적물과 상이한 측면 상에 이루어지거나; 또는 각각의 이웃한 침적물은 치실의 이웃한 침적물의 맞은편 상에 배치되거나; 또는 이웃한 침적물 각각은 이전의 이웃한 침적물과 상이한 활성 제제를 포함한다. 또 다른 측면에서, 상이한 활성 제제의 배치는 치실의 일면 또는 치실의 양면 상에 이루어진다. 또 다른 측면에서, 활성 제제의 배치는 치실의 일면 또는 치실의 양면 상에 이루어지는데, 각면은 동일한 또는 상이한 농도/양의 활성 제제를 포함한다. 일 측면에서, 각각의 이웃한 침적물은 서로의 상면에 배치된 동일한 활성 제제 또는 상이한 활성 제제를 포함한다. 또 다른 측면에서, 활성 제제는 동일한 또는 상이한 거리/길이에 걸쳐 맞은편 상에 배치된다. 또 다른 측면에서, 각각의 이웃한 침적물은 용해도를 위해 상이한 용매 요건을 갖는 상이한 활성 제제를 포함하고(예를 들어, 하나의 활성 제제는 용매로 물을 포함하는 반면, 다른 활성 제제는 유기 용매를 요구함); 또는 각각의 이웃한 침적물은 이웃한 침적물과 상이한 측면 상에 배치되거나; 또는 각각의 이웃한 침적물은 치실의 이웃한 침적물의 맞은편 상에 배치되거나; 또는 이웃한 침적물 각각은 상이한 용매 요건을 가진 이전의 이웃한 침적물과 상이한 용매 요건을 갖는 상이한 활성 제제를 포함한다. 또 다른 측면에서, 상이한 용매 요건을 갖는 활성 제제는 동일한 또는 상이한 거리/길이에 걸쳐 맞은편 상에 배치된다. 또 다른 측면에서, 동일한 용매 요건을 갖는 활성 제제는 동일한 또는 상이한 거리/길이를 갖는 서로의 상부에 배치된다. 또 다른 측면에서, 상이한 용매 요건을 갖는 활성 제제는 동일한 또는 상이한 거리/길이를 갖는 서로의 상면에 배치된다. 또 다른 측면에서, 치실은 단단하거나, 너덜너덜하거나, 다수의 가닥을 포함하거나, 접착성을 갖도록 처리되거나, 약제학적으로 허용가능한 운반체에 접착되도록 처리되었거나, 또는 활성 제제에 접착되도록 처리되었거나, 활성 제제 및 약제학적으로 허용가능한 운반체에 접착되도록 처리되었다. 또 다른 측면에서, 치실은 배치 공정에서 용이하도록 표면 에너지를 변경하거나 또는 균일한 배치의 형성을 촉진하도록 처리된다. 또 다른 측면에서, 각각의 이웃한 침적물은 이웃한 침적물 사이를 구분하는 염료 또는 표시를 포함한다. 또 다른 측면에서, 치실은 활성 제제, 약제학적으로 허용가능한 운반체, 또는 둘 다에 담그지 않는다. 또 다른 측면에서, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에서 선택된 하나 이상의 활성 제제는 전정 점막에 전달되지 않는다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 치은 틈새의 접합 상피를 표적화함으로써 면역 반응을 활성화하거나 또는 무반응화하는 면역 반응을 촉발한다. 또 다른 측면에서, 치실은 두께가 5 mm 미만, 바람직하게는 3 mm 미만, 및 바람직하게는 1 mm 미만이다. 또 다른 측면에서, 치실은 천연 또는 합성 중합체, 유기 물질, 금속, 무기 물질 또는 이들의 조합을 포함한다. 또 다른 측면에서, 치실은 점막접착층 또는 소수성 층 또는 친수성 층 또는 조합을 포함한다. 또 다른 측면에서, 치실은 치은 틈새로의 항원의 확산을 허용하는 미세다공성 구조를 포함한다. 또 다른 측면에서, 접합 상피에 전달된 일정 양의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는 하나 이상의 활성 제제는 피코그램에서 밀리그램에 이르는 범위에 속한다. 또 다른 측면에서, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는 하나 이상의 활성 제제는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대해 개체를 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 탈감작화한다. 또 다른 측면에서, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는 하나 이상의 활성 제제는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대해 상기 개체를 0.1~100% 사이로 탈감작화한다. 또 다른 측면에서, 치실은 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 접합 상피로 전달하고, 치실은 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하고 나서 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상이 지난 후, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 접합 상피에 전달한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 면역 반응을 활성화, 조정, 또는 무반응화한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 하기 중 하나를 표적으로 삼는 면역 반응을 촉발한다: 세균, 바이러스, 곰팡이류, 원생동물, 기생충, 프리온, 독소, 암, 알레르기, 또는 자가면역 질환. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 하기 중 적어도 하나에서 선택된 하나 이상의 항원을 포함한다: 단백질, 펩타이드, 데옥시리보핵산 (DNA) 올리고뉴클레오타이드, 리보핵산 (RNA) 올리고뉴클레오타이드, 망가진 세포, 온전한 세포, 지질, 독소 변이체, 탄수화물, 바이러스-유사 입자, 리포좀, 살아 있는 약화된 또는 죽은 천연 또는 재조합 미생물, 비로솜, 중합체/무기/유기 마이크로 및 나노입자, 또는 면역 자극 복합체(ISCOMS). 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 T- 및 B 세포 림프구증식 질환, 난소암, 췌장암, 두경부암, 편평 세포 암종, 위암, 유방암, 전립선암 또는 비소 세포 폐암에서 선택된 암 세포 또는 이것의 일부에서 획득된 펩타이드를 포함하는 항원을 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 땅콩, 조개류, 달걀 단백질, 우유 단백질, 콩류, 견과류에서 선택된 식품 알레르기 유발 항원, 또는 집먼지 진드기 또는 꽃가루에서 선택된 기도 알레르기 유발 항원인 항원을 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 치실 또는 얇은 장치 또는 끈/패치 또는 치은 틈새로의 배치에 적합한 두께를 갖는 치간 칫솔에 부착, 흡착 또는 물리적으로 또는 화학적으로 고정되는 것 중 적어도 하나인 항원을 포함한다. 또 다른 측면에서, 치실은 사이토카인, 케모카인, 톨 유사 수용체 리간드 또는 활성화제, 명반, 뮤라밀 다이펩타이드, 피리딘, 키토산, 사포닌, 오일, 에멀젼, 세균성 세포벽 추출물, 세균성 단백질, 세포질 세균성 DNA 또는 모방체, 바리어스 RNA 또는 모방체, 합성 올리고뉴클레오타이드, 인터페론(IFN) 자극제 유전자(STING) 작용제 (2'3'-cGAMP, c-di-AMP, 2'3'-c-di-AM(PS)2 (Rp,RP), c-di-GMP, CL401, CL413, CL429, 플라젤린, 이미퀴모드, LPS-EB, MPLA, ODN 1585, ODN 1826, ODN2006, ODN2395, pam3CSK4, poly(I:C), R848, TDB), 천연 중합체(폴리-γ-글루탐산, 키토산, 마난, 리포마난, 레티난, 덱스트란), 합성 중합체(폴리-N-이소프로필아크리알마이드, 공중합체, 블록 중합체, 폴리포스파젠, 고분자 전해질, 고분자 무수물, 폴리메타크릴레이트, 폴리글리콜-코-락타이드, 폴리카프로락톤, 폴리비닐피롤리돈, 양이온 중합체) 및 이들의 조합에서 선택된 하나 이상의 보조제를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는 하나 이상의 활성 제제는 선천 면역 반응, 적응 면역 반응, 또는 둘 다를 활성화한다.
본원에서 구현되고 넓게 기술된 바와 같이, 본 개시의 측면은 미리 결정된 양의 하나 이상의 활성 제제를 포함하는 치실을 제조하는 방법에 관한 것으로, 치실 및 약제학적으로 허용가능한 운반체에 하나 이상의 활성 제제의 비연속적인 방식으로 퇴적된 치실 상의 침적물을 포함하되, 각각의 침적물은 공지된, 미리 결정된 양의 활성 제제를 갖는다. 일 측면에서, 각각의 이웃한 침적물은 동일한 활성 제제 또는 상이한 활성 제제를 포함하거나, 또는 각각의 이웃한 침적물은 상이한 농도의 동일한 활성 제제를 포함하거나; 또는 각각의 이웃한 침적물은 상이한 농도의 상이한 활성 제제를 포함하거나; 또는 각각의 이웃한 침적물이 이웃한 침적물과 상이한 면에 놓이거나; 또는 각각의 이웃한 침적물이 치실 상에서 이웃한 침적물의 맞은편에 놓이거나; 또는 각각의 이웃한 침적물이 이전의 이웃한 침적물과 상이한 활성 제제를 포함한다. 또 다른 측면에서, 치실은 단단하거나, 너덜너덜하거나, 다수의 올들을 포함하거나, 접착성을 갖도록 처리되었거나, 약제학적으로 허용가능한 운반체에 접착되도록 처리되었거나, 또는 활성 제제에 접착되도록 처리되었다. 또 다른 측면에서, 각각의 이웃한 액적 또는 패치는 이웃한 침적물들 사이를 구별하는 염료 또는 표시를 포함한다. 또 다른 측면에서, 치실은 활성 제제, 약제학적으로 허용가능한 운반체, 또는 둘 다에 담그지 않는다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 전정 점막에 전달되지 않는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에서 선택된다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 치은 틈새의 접합 상피를 표적화함으로써 면역 반응을 활성화 또는 무반응화하는 면역 반응을 촉발한다. 또 다른 측면에서, 치실은 두께가 5 mm 미만, 바람직하게는 3 mm 미만, 및 바람직하게는 1 mm 미만이다. 또 다른 측면에서, 치실은 천연 또는 합성 중합체, 유기 물질, 금속, 무기 물질 또는 이들의 조합을 포함한다. 또 다른 측면에서, 치실은 점막접착층 또는 소수성 층 또는 친수성 층 또는 조합을 포함한다. 또 다른 측면에서, 치실은 치은 틈새에 항원의 확산을 허용하는 미세다공성 구조를 포함한다. 또 다른 측면에서, 접합 상피에 전달되는 일정 양의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는 하나 이상의 활성 제제는 피코그램에서 밀리그램의 범위에 속한다. 또 다른 측면에서, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는 하나 이상의 활성 제제는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대해 개체를 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 탈감작화한다. 또 다른 측면에서, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는 하나 이상의 활성 제제는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대해 개체를 0.1~100% 사이로 탈감작화한다. 또 다른 측면에서, 치실은 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하기 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상 전에 접합 상피로 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 전달한다. 또 다른 측면에서, 치실 침적물(deposit)은 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하고 나서 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상이 지난 후에 접합 상피에 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 전달한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 면역 반응을 활성화, 조정 또는 무반응화한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 하기 중 적어도 하나를 표적으로 삼는 면역 반응을 촉발한다: 세균, 바이러스, 곰팡이류, 원생동물, 기생충, 프리온, 독소, 암, 알레르기, 또는 자가면역 질환. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원을 포함하는 하나 이상의 활성 제제는 하기 중 적어도 하나에서 선택된다: 단백질, 펩타이드, 데옥시리보핵산(DNA) 올리고뉴클레오타이드, 리보핵산 (RNA) 올리고뉴클레오타이드, 망가진 세포, 온전한 세포, 지질, 독소 변이체, 탄수화물, 바이러스-유사 입자, 리포좀, 살아 있는 약화된 또는 죽은 천연 또는 재조합 미생물, 비로솜, 중합체/무기/유기 마이크로 및 나노입자, 또는 면역 자극 복합체(ISCOMS). 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제 T- 및 B 세포 림프구증식 질환, 난소암, 췌장암, 두경부암, 편평 세포 암종, 위암, 유방암, 전립선암 비소 세포 폐암에서 선택된 암 세포 또는 이것의 일부분에서 획득된 펩타이드를 포함하는 항원을 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 땅콩, 조개류, 달걀 단백질, 우유 단백질, 콩류, 견과류에서 선택된 식품 알레르기 유발 항원 또는 집먼지 진드기 또는 꽃가루에서 선택된 기도 알레르기 유발 항원인 항원을 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 활성 제제는 치실 또는 얇은 장치 또는 끈 패치 또는 치은 틈새에 배치되기에 적합한 두께를 가진 치간 칫솔에 부착, 흡착 또는 물리적 또는 화학적으로 고정되는 것 중 하나인 항원을 포함한다. 또 다른 측면에서, 치실은 사이토카인, 케모카인, 톨 유사 수용체 리간드 또는 활성화제, 명반, 뮤라밀 다이펩타이드, 피리딘, 키토산, 사포닌, 오일, 에멀젼, 세균성 세포벽 추출물, 세균성 단백질, 세포질 세균성 DNA 또는 모방체, 바이러스 RNA 또는 모방체, 합성 올리고뉴클레오타이드, 인터페론 (IFN) 유전자 자극제(STING) 작용제(2'3'-cGAMP, c-di-AMP, 2'3'-c-di-AM(PS)2 (Rp,RP), c-di-GMP, CL401, CL413, CL429, 플라젤린, 이미퀴모드, LPS-EB, MPLA, ODN 1585, ODN 1826, ODN2006, ODN2395, pam3CSK4, poly(I:C), R848, TDB), 천연 중합체(폴리-γ-글루탐산, 키토산, 마난, 리포마난, 레티난, 덱스트란), 합성 중합체 (폴리-N-이소프로필아크리알마이드, 공중합체, 블록 중합체, 폴리포스파젠, 고분자 전해질, 고분자 무수물, 폴리메타크릴레이트, 폴리글리콜-코-락타이드, 폴리카프로락톤, 폴리비닐피롤리돈, 양이온 중합체) 및 이들의 조합에서 선택된 하나 이상의 보조제를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는 하나 이상의 활성 제제는 선천 면역 반응, 적응 면역 반응, 또는 둘 다를 활성화한다.
본 발명의 특징 및 이점을 좀 더 온전히 이해하기 위해, 첨부된 도면과 함께 본 발명의 상세한 설명이 이제 하기와 같이 언급된다.
도 1a 내지 1f는 치은 틈새 및 접합 상피를 나타낸다: (도 1a) 인간 입. (도 1b) 치은 틈새 및 접합 상피(JE)의 구조. (도 1c) 치은 틈새의 접합 상피에 활성 제제의 전달 및 시간 경과에 따른 접합 상피 및 이웃한 조직에서 활성 제제의 확산, (도 1d) 치실에 도포된 항원 분자의 전달 및 마우스 잇몸 조직 상에서의 치실 효과, 및 (도 1e) 잇몸 조직의 로다민에 접합된 난백 알부민(Ova)의 확산 (생체외). 항원 침적 치실을 치아에 두르고, 도포된 항원이 잇몸 선에 침적되도록 약 10 내지 15회 치실질을 함으로써, 앞니 각각에 대해 치실질이 이루어진다. (도 1f) 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC) 접합 난백 알부민(Ova)으로 도포된 치실의 전달 효율.
도 2a 내지 2g는 치실-매개 백신 전달 및 면역 반응의 특징을 나타낸다. (도 2a)(1) 도포된 치실 입체현미경 사진 및 도 2a(2) 마우스의 치실질 절차. (도 2b) 접종 일정: Balb/c 마우스(n=5)에게 항원(난백 알부민 (Ova), 모델 항원)-침적 치실로 잇몸을 치실질하여 접종하였다. 치실에는 25 μg Ova +/- 25 μg CpG(단일가닥 올리고데옥시뉴클레오타이드 보조제)가 포함되었고, 마우스에게 총 4주 동안 매주 접종하였다. 도포제가 없는 치실로 처리된 마우스는 대조군으로 취급되었다. 전신 면역 반응: 마우스는 28일 및 56일차에 출혈이 있었고, 혈청에서 항-Ova 항체 반응(1:12500 또는 1:2500 희석)을 효소면역 측정법(ELISA)을 통해 분석하였다. 도 2(c)(1)~(3) 56일차 항-Ova 항체 반응- 도 2(c) (1) IgG, 도 2(c)(2) IgG1 및 도 2(c)(3) IgG2a. 개별 마우스 혈청을 분석에 사용하였다. 도 2(d)(1)~(3)은 기억 면역 반응을 보여준다: 접종된 마우스는 안락사시키고, 골수 세포를 채취하였다. 세포를 10% 소태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신 항생제가 보충된 RPMI 배지로 웰당 1x106 세포의 농도로 3회 배양하였다. 96시간 후 배양된 세포의 상청액을 수집하고, 항-Ova 반응을 분석하였다. 도 2(d)(1)~(3) 골수 세포에서 항-Ova 항체 반응 - 도 2(d)(1) IgG, 도 2(d)(2) IgG1, 도 2(d)(3) IgG2a. 이와 같은 결과는 반응이 국부적 및 전신적일 뿐만 아니라, 앞으로 동일한 항원(Ag)에 노출되는 경우를 대비하여 개체에게서 기억 반응을 유도할 수 있었음을 시사한다. 도 2(e)(1)~(4)는 점막 면역 반응을 보여준다. 56일차에, 치실만으로 처리된 백신 접종된 마우스에서 대변, 비강 세척액 및 폐 세척액을 채집하였다. 항-Ova 도 2(e)(1) 대변 중 IgG (1:5 희석), 도 2(e)(2) 대변 중 IgA (1:5 희석), 도 2(e)(3) 비강 세척액 중 IgG (희석되지 않음), 및 도 2(e)(4) IgG 폐 세척액(희석되지 않음). 도 2(f)(1)~(2) 치실을 통해 접종된 마우스의 (1) 혈청에서 또는 (2) 골수에서 유의미한 양의 IgE가 검출되지 않았으며, 이것은 접합 상피의 표적 부위가 전달된 Ag에 대해 개체를 감작화하지 않음을 나타낸다. 도 2(g) 접종된 마우스를 안락사시켜서 비장 세포를 채취하였다. 세포를 10% 소태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신 항생제를 보충한 RPMI 배지로 배양하고, 웰당 1x106 세포의 농도로 Ova (200μg/ml)로 3회 재자극하였다. 배양된 세포의 상청액을 96시간 후에 채취하고 사이토카인 수치를 분석하였다. 도 2(g)는 비장 세포 배양물 중 사이토카인 수치를 보여주고, 도 2(g)(1) IFN-감마, 및 도 2(g)(2) IL-4. 데이터는 평균±SD로 표현되었다. 일방향 ANOVA 테스트를 사용하여 상이한 혈청 희석제에서 그룹들을 비교하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001.
도 3a 내지 3c는 독감 예방접종용 치실을 보여준다. 도 3(a) 접종 일정: Balb/c 마우스(n=10)에 총 3회에 걸쳐 치실에 코팅된 비활성화된(Inac.) 바이러스 10 μg 또는 25 μg으로 백신접종하였다 - 0일차, 14일차 및 28일차에 각각 1회씩. 56일차에, 마우스를 출혈시켜 ELISA를 통해 항-Inac. 바이러스 면역 반응(1:800 또는 1:50 희석)을 분석하였다. 도 3(b)(1)~(3) 56일차에 혈청에서의 항-Inac. 바이러스 도 3(b)(1) IgG, 도 3(b)(2) IgG1, 도 3(b)(3) IgG2a 항체 반응. 바이러스 면역유발: 56일차, 마우스에게 A/PR/8/34(H1N1) 독감 바이러스 3xLD50(치사용량 50%)으로 면역을 유발하였다. 분석에 개별 마우스 샘플을 사용하였다. 데이터를 평균 ±SD로 표현하였다. 일방향 ANOVA 테스트를 사용하여 그룹들을 비교하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001. 도 3(c)(1)~(2) 체중 변화 및 감염의 중증도에 대해 마우스를 매일 관찰하였다. 도 3(c)(1) 체중의 변화 백분율, 도 3(c)(2) 감염 후 접종된 마우스의 생존율 백분율. 각 그룹의 마우스 수 n=5.
도 4a 내지 4d는 보조제(CpG)로 추가로 보충한 금 나노입자(AuNP)에 접합된 펩타이드(M2e)로 이루어진 백신접종 제형인 M2e-AuNP+CpG (MAC)의 치실 매개 전달, 백신 및 면역 반응의 특징을 보여준다. 도 4(a)(1) AuNP 56 μg, M2e 8.1 μg, 및 CpG(1X용량) 20 μg을 함유한 M2e-AuNP+CpG로 코팅된 치실의 입체현미경 사진 및 도 4(a)(2) 마우스에서 치실질 절차. 도 4(b) 백신접종 일정: Balb/c 마우스(n=10)에 백신 제형[M2e-AuNP+CpG (MAC)]이 코팅된 치실을 잇몸에 치실질하거나 또는 백신 제형[M2e-AuNP+CpG (MAC)]을 혀 아래 놓음으로써[설하 면역치료(SLIT)] 백신접종을 하였다. 치실에 코팅되었거나 또는 SLIT를 통해 전달되는 백신 제형(MAC)은 AuNP 56 μg, M2e 8.1 μg, 및 CpG 20 μg(단일 가닥 올리고데옥시뉴클레오타이드 보조제)로 이루어졌고, 마우스에게 0일차 및 21일차에 백신 접종하였다. 처리를 받지 않은 미처리 마우스를 대조군으로 취급하였다. 전신 면역 반응: 마우스를 21일차 및 42일차에 출혈시켜, 효소결합 면역흡착 검사(ELISA)를 통해 혈청에서 항-M2e 항체 반응(1:6400 희석)을 분석하였다. 도 4c(1)~(3) 42일차에 혈청에서 항-M2e 항체 반응- 도 4c(1) IgG, 도 4c(2) IgG1 및 도 4c(3) IgG2a. 개별 마우스 혈청을 분석에 사용하였다. 데이터는 평균±SD로 표현하였다. 일방향 ANOVA 테스트를 사용하여 그룹들을 비교하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001. 바이러스 면역유발. (도 4d(1)~(2)) 43일차에 A/California/07/2009 H1N1 바이러스의 3xLD50 (lethal dose 50%)로 마우스를 면역유발하였다. 체중 변화 및 감염의 중증도에 대해 마우스를 매일 관찰하였다. 도 4d(1) 체중의 변화 백분율, 도 4D(2) 감염 후 접종된 마우스의 생존율 백분율. 각 그룹의 마우스 수 n=5.
도 5a 내지 5e는 치실 매개 백신 전달 및 면역 반응의 특징을 보여준다. (도 5a) 백신접종 일정: 항원(땅콩 추출물(PE))이 침적된 치실로 잇몸을 치실질하여 Balb/c 마우스(n=5)에 접종하였다. 치실에 25 μg PE +/- 25 μg CpG(단일가닥 올리고데옥시뉴클레오타이드 보조제)를 침적시키고, 총 4주에 걸쳐 마우스를 매주 접종하였다. 어떤 코팅제 또는 침적물이 없는 치실로 처리된 마우스를 대조군으로 취급하였다. 전신 면역 반응: 28일차 및 56일차에 마우스를 출혈시키고, 효소결합 면역흡착 검사(ELISA)를 통해 혈청 중 항-PE 항체 반응(1:12500 희석)을 분석하였다. 도 5b(1)~(3) 56일차에 혈청 중 항-PE 항체 반응- 도 5b(1) IgG, 도 5b(2) IgG1, 및 도 5b(3) IgG2a. 분석에 개별 마우스 혈청을 사용하였다. (도 5c(1)~(3)) 기억 면역 반응: 접종된 마우스를 안락사시키고, 골수 세포를 채취하였다. 10% 소태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신 항생제로 보충한 RPMI 배지로 웰당 1x106 세포의 농도로 3회 세포를 배양하였다. 배양된 세포의 상청액을 96시간 후 채취하여, 항-PE 반응을 분석하였다. 항-PE 도 5c(1) IgG, 도 5c(2) IgG1, 도 5c(3) IgG2a. 이와 같은 결과는 상기 반응이 국소적 및 전신적일 뿐만 아니라, 앞으로 동일한 항원(Ag)에 노출되는 경우를 대비하여 개체에게서 기억 반응을 유도할 수 있었음을 시사한다. (도 5d) 점막 면역 반응. 56일차에, 대변, 비강 세척액 및 폐 세척액을 접종된 및 미처리 마우스에서 채취하였다. 항-PE 도 5d(1) 대변 중 IgG (1:5 희석), 도 5d(2) 대변 중 IgA(1:5 희석), 도 5d(3) 비강 세척액 중 IgG (희석되지 않음), 및 도 5d(4) IgG 폐 세척액 (희석되지 않음). (도 5e(1)~(2)) 치실을 통해 접종된 마우스의 도 5e(1) 혈청에서, 또는 도 5e(2) 골수에서 IgE의 유의미한 양이 검출되지 않았으며, 이것은 표적 부위, 즉 접합 상피가 전달된 Ag에 대하여 개체를 감작화하지 않음을 시사한다. 데이터는 평균±SD로 표현되었다. 일방향 ANOVA 테스트를 사용하여 상이한 혈청 희석에서 그룹들을 비교하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001.
도 6a 내지 6d는 땅콩 알레르기 유발 항원 면역치료 일정을 보여준다. (도 6a) 면역치료 일정: 5주 연속 1주 간격으로 구강경로를 통해 [땅콩 추출물(PE) 1mg + 콜레라 독소(CT) 15μg]로 Balb/c 마우스(n=5)를 감작화하였다. 이어서 항원-코팅된 치실로 치실질을 하여 마우스에 접종하였다. 치실은 PE 5 μg +/- CpG 5 μg(단일가닥 올리고데옥시뉴클레오타이드 보조제)로 코팅하고, 총 3주에 걸쳐 매주 3회 마우스에 접종하였다. 어떤 처리도 받지 않은 감작화된 마우스를 대조군(미처리군)으로 유지시켰다. 백신접종 후(PV) 10일차에 마우스를 출혈시켰다. 복강내 경로(IP)를 통해 백신접종 후 8주차에 PE 알레르기 유발 항원(500 μg)으로 마우스를 면역유발하였고, 이어서 안락사시켜 상이한 조직을 채취하였다(도 6b(1)~(3)). 효소결합 면역흡착 검사(ELISA)를 통해 혈청 중 항-PE 항원(1:12500 희석)을 확인하였다. 백신접종 후 10일차에 항-PE 도 6b(1) IgG, 도 6b(2) IgG1 및 도 6b(3) IgG2a 항체 반응. 분석에 개별 마우스 혈청을 사용하였다. 데이터는 평균±SD로 표현하었다. 일방향 ANOVA 테스트를 사용하여 상이한 혈청 희석의 그룹들을 비교하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001 및 ns: 유의미하지 않음. PE는 과반응을 유도하였다. (도 6c) (1) PE로 IP 면역유발 후 플라즈마 MCPT-1 수치. 장 조직의 조직학적 분석. (도 6d) 백신접종 후 8주차에, 복강내 경로를 통해 PE 알레르기 유발 항원(500μg)으로 마우스를 면역유발하였다. 이어서 마우스를 안락사시켜, 근위부, 중간부 및 원위부 단부에서 소장을 채취하여 고정 및 탈수시키고, 절단하기 위해 파라핀 왁스에 침지시켰다. 조직 단면을 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색으로 염색하여 조직 분석을 위해 절개하였다. 도 6d(1) 상이한 처리군의 마우스들로부터 각각의 단면에서 계수된 호산구의 개수. 도 6d(2) H&E 염색된 소장의 명시 야상(Brightfield image)으로 화살표는 호산구 침투를 가리킨다. 개별 마우스 시료를 분석에 사용하였다. 데이터는 평균±SD로 표현되었다. 일방향 ANOVA를 사용하여 그룹들을 비교하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 및 ns: 유의미하지 않음.
도 7a 내지 7d는 기도 알레르기 유발 항원 면역치료를 보여준다. (도 7a) 면역치료 일정: 일주일 간격으로 복강내(IP) 주사(Ova 25μg + 명반 2mg(보조제)) 2회를 통해 Balb/c 마우스(n=5)를 감작화하였다. 감작화 후(PS) 10일차에, 3일 연속으로 비강내 경로(IN)를 통해 마우스를 Ova(50μg)로 면역유발하여, 기도 염증을 일으켰다. 이어서 항원이 침적된 치실로 치실질을 함으로써 마우스에게 접종하였다. 치실은 Ova 25 μg +/- CpG 25 μg(단일가닥 올리고데옥시뉴클레오타이드 보조제)로 코팅되었고, 총 3주에 걸쳐 매주 3회 백신을 접종하였다. 어떤 처리도 받지 않은 감작화된 마우스를 대조군으로 유지시켰다(미처리). 백신접종 후 10일차에 마우스를 출혈시켰다. 백신접종 후 28일차부터 3일 연속 비강내 경로(IN)를 통해 Ova 알레르기 유발 항원(50μg)으로 마우스를 면역유발하였고, 이어서 안락사시켜서 상이한 조직들을 채취하였다. 전신 면역 반응: (도 7b(1)~(4)) 백신접종 후 10일차에 효소결합 면역흡착 검사(ELISA)를 통한 항-Ova 도 7b(1) IgG, 도 7b(2) IgG1, 도 7b(3) IgG2a 및 도 7b(4) 혈청 중 IgE 항체 반응(1:12500 또는 1:500 또는 1:20 희석)을 분석하였다. (도 7c) 면역유발 후 폐 세척액 분석. 이어서 마우스를 안락사시켜 폐 세척액의 점막 분비물을 채취하였다. 폐 세척액 중 도 7c(1) 호산구 및 도 7c(2) 호중구의 세포 개수-세포는 상이한 염색 키트로 염색하고 공초점 현미경 아래서 세포를 관찰함으로써 계수하였다. 폐의 조직학적 분석: (도 7d) 이어서 마우스를 안락사시키고, 폐를 수확하여, 고정, 세척하고 조직분석을 위해 절단하였다. 조직 단면을 점액 침적에 대해 염색하는 과아이오딘산-Schiff(PAS)로 염색하거나 또는 콜라겐 침적에 대해 염색하는 트리크롬 블루(TCB)로 염색하였다. PAS로 염색된 폐(맨 위 패널) 및 TCB 염색 폐(맨 아래 패널)의 대표적인 명시 야상. 맨위 패널의 화살표가 점액 침적물을 가리키고, 맨아래 패널의 화살표는 콜라겐 침적물을 가리킨다.
도 8은 침적 능력, 짧은 길이 또는 긴 길이를 가진 침적물의 단일 영역으로 또는 침적물의 다수의 뚜렷한 영역으로서, 치실의 일측에만, 침적물의 상이한 패턴으로, 펩타이드, 나노입자, 단백질, 올리고뉴클레오타이드, 마이크로입자로 치실에 침적되는 것을 보여준다.
도 9는 꽃가루 알갱이 마이크로입자를 포함하는 수용성 및 비수용성 물질을 침적시키는 침적 능력을 보여준다.
도 10은 침적 능력, 및 예로서 상이한 두 가지 화합물로 만든 상이한 침적 패턴을 보여준다. 하나의 제형은 NHS-로다민(형광 시약)에 접합된 수중 난백 알부민(단백질) ('A'라 불림) 및 두 번째 제형은 수중 금 나노입자 및 CpG(단일 가닥 DNA)에 접합된 M2e 펩타이드('B'라 불림)였다.
도 11은 다수의 물질의 침적 능력을 보여주되, 여기서는 4개 뚜렷한 부위로서 침적된 상이한 4개의 식용 색소(파랑, 초록, 노랑, 빨강)가 보여진다.
도 12는 상이한 제형으로 치실의 양면을 코팅하기 위한 코팅 능력을 보여준다.
도 13은 치실을 코팅하기 위한 자동 코팅 스테이션의 예를 보여준다.
도 14는 치실 시스템의 설계의 두 가지 예를 보여준다.
본 발명의 다양한 구현예의 제작 및 사용이 아래에 상세하게 논의되는 동안, 본 발명이 광범위한 구체적 문맥에서 구현될 수 있는 여러 응용가능한 발명 개념을 제공함이 이해되어야 한다. 본원에 논의되는 구체적인 구현예는 단지 본 발명을 만들고 사용하기 위한 구체적인 방법을 예시하는 것으로, 본 발명의 범위를 정하는 것은 아니다.
본 발명의 이해를 돕기 위해, 아래 수많은 용어가 정의되었다. 본원에서 정의된 용어들은 본 발명과 관련된 분야에서 보통의 기술자에 의해 공통적으로 이해되는 의미를 갖는다. 예컨대 관사['a', 'an' 및 'the']는 단일 독립체를 지칭하려는 것이 아니라, 예시를 위해 사용될 수 있는 구체적인 예의 일반적인 부류를 포함한다. 본원의 용어는 본 발명의 구체적인 구현예를 기술하는 데 사용되지만, 청구항에서 요약된 것을 제외하고, 이것의 사용이 본 발명의 범위를 정하는 것은 아니다.
"Methods, Articles And Kits For Allergic Desensitization, Via The Oral Mucosa"란 제목의 미국 특허 제9,271,899호 ('899 특허)는 수지상세포 대 비만 세포 비율이 높은 영역이 있는 구강 점막, 특히 전정 점막을 표적으로 삼음으로써 개체에서 알레르기 면역치료를 수행하는 법을 주장한다. 구체적으로, 상기 발명의 상세한 설명의 첫 문단은 "본 발명은 구강 점막, 예컨대 수지상 세포 대 비만 세포 비가 높은 영역을 표적으로 하는, 특히 전정 점막을 표적으로 하는 알레르기 면역치료에 관한 것이다." 구강 전정은 잇몸과 치아에 의해 내부에 접합되고, 뺨과 입술에 의해 외부에 접합된 입 안의 좁은 틈 부분이다. 본 특허는 특히 전정 점막에 초점을 맞추고 있지만, 알레르기 유발 항원이 치은/뺨과 같은 다른 구강 점막과 접촉될 수 있음을 언급한다. '899 특허는 바람직한 수지상 대 비만 세포 비, 특히 높은 수지상 대 비만 세포 비를 가지고, 알레르기 유발 항원과 구강의 전정 조직 사이의 접촉 시간을 극대화하는, 구강 점막 부위로 알레르기 유발 항원의 전달을 향상시키기 위한 방법을 제공할 필요를 주장한다. 알레르기 유발 항원의 전달 방법에는 치약, 파우치, 구강크림, 구강청결제, 구강 스프레이 등이 포함된다. '899 특허는 파우치 또는 기타 치아관련 제품을 통해 제공될 수 있는 1 피코그램과 15 mg 사이의 알레르기 유발 항원 단백질을 포함하는 제형을 논의한다. '899 특허는 알레르기 유발 항원을 포함하는 치약의 형태의 제형을 제조하는 법에 관해 논의한다. 치약 2 gm이 1 내지 10%의 알레르기 유발 항원을 포함할 수 있는 예시를 제시한다. 따라서, 개체는 이 방법에 따르면 2 내지 200mg의 알레르기 유발 항원을 투여받게 된다. 한편, '899 특허는 높은 수지상 대 비만 세포 비가 중요함을 주장하고, 전정 점막이 관심대상의 점막 중 하나이지만, '899 특허에 기술된 방법들은 이들 점막, 구체적으로 전정 점막이 지배적으로 표적화되는 방법에 대해 교시하지 않으며, 또한 전정 조직에서 세포에 도달하는 임의의 용량에 대해 언급됨이 없다.
대조적으로, 본 발명의 기술은 구체적으로 접합 상피(JE)를 표적으로 하여, 피코그램에서 마이크로그램에 이르는 알레르기 유발 항원/백신 분자를 접합 상피에 전달하고, 면역 반응을 생성한다. 접합 상피는 치은 틈새(때때로 치은 열구, 치은홈, 또는 잇몸 주머니라고도 불림)의 오목부의 가장 깊은 곳의 바닥에 위치한다. 접합 상피는 자유롭게 노출되지 않고, 대신 일측에서, 단단한 치아 표면에 부착되며, 다른 측에서, 부드러운 기저 연결조직에 부착된다. 이와 같은 방식으로, 접합 상피는 치아 둘레를 감쌈으로써, 부착띠를 형성한다. 접합 상피의 세포는 케라틴이 없고, 넓은 세포간 공간을 갖는다. 이와 같은 접합 상피에서의 넓은 세포간 공간은 접합 상피로의 높은 투과율이라는 독특한 특성을 부여하는데, 이런 특성은 뺨, 입술, 부착된 치은, 및 심지어 전정의 점막을 포함한 구강 점막 어디에서도 발견되지 않는다. 접합 상피의 이러한 높은 수준의 투과성은 설하 점막보다 더 높아서 현재 가장 투과적인 구강 점막부위로 여겨지고 있다. 본 발명의 발명가들은 접합 상피의 이와 같은 독특함을 인식하였고, 본원에 마이크로그램의 항원 분자가 마우스에게서 쉽게 접합 상피를 투과할 수 있고 강력한 면역 반응을 유도함을 보여주었다. 이와 같이, 본 발명의 기술은 접합 상피가 높은 투과율을 보이고 기저 조직으로의 분자의 효율적인 흡수를 제공하기 때문에 접합 상피를 표적으로 하며, 이런 특성은 강력한 면역 반응을 생성하는 데 일조한다. 본 발명은 또한 직접적으로 면역원 (백신/알레르기 유발 항원)의 접합 표적화를 설하 면역치료 (SLIT)와 비교하여, SLIT와 비교했을 때 접합 상피를 표적화함으로써 상당히 더 높은 면역 반응을 입증한다. 대조적으로, '899 특허는 투과성에 초점을 두지 않으며, 사실상, 전정 점막의 투과율은 접합 상피의 투과율보다 낮다. '899 특허는 추가로 알레르기 유발 항원을 전달하기 위해 치실의 사용에 관해 논의한다. 상기 특허는 알레르기 유발 항원이 코팅층에 내재될 수도 있고, 또는 알레르기 유발 항원이 직접적으로 코팅층으로서 치실 상에 코팅될 수 있다고 진술한다. 알레르기 유발 항원은 이어서 항원 물질을 전정 점막에 전달하기 위해 치실에서 탈락되거나 또는 방출된다. 하지만, 치실로 전달되는 알레르기 유발 항원이 어디로 전달되는지는 언급하지 않는다. 추가적으로, '899 특허는 접합 상피를 교시하지 않으며, 그것의 독특한 높은 투과율도 교시하지 않고, '899 특허는 접종에 대해서 언급하지 않는다. 대조적으로, 본 발명은 치은 틈새의 접합 상피, 즉 전정 점막보다 수지상 세포 개체수가 더 적은 영역을 표적으로 하는 데, 이점은 '899 특허의 교시와 정반대가 된다. 인간 구강 점막에서의 수지상 세포 개체수가 전정, 협측, 구개 및 설측 조직과 비교할 때 치은에서 그 수가 더 적음이 문서화되어 있다. 사실, 가장 많은 수의 LC가 전정, 협측, 구개 및 설측 조직에서 발견된 반면, 더 적은 수가 설하 영역 및 치은에서 관측되었다 (참조: "Dendritic cells of the oral mucosa", A-H Hovav, Mucosal Immunology, 7, 27-37, 2014). '899 특허로부터의 참조 문헌[Allam et al. Allergy 2008: 63: 720-727]에 의하면, 상기 특허의 교시의 근간을 형성하면서, 또한 치은이 가장 많은 비만 세포을 가지며, 따라서, '899 특허의 교시에 따르면, 접합 상피는 알레르기 유발 항원 면역치료에 대해 덜 선호되어야 함을 확인시켜준다. 게다가, 본 발명은 전정 점막을 표적으로 삼지 않는다.
본 발명의 구강 점막은, 점막 표면 상에 단순히 분자를 놓는 것이 효율적인 면역 조절로 이어지지 않는다는 정설과 대조되게, 사실, 물질이 접합 상피의 상면에 놓이면, 강력한 면역 조절 반응이 달성될 수 있음이 입증된다. 접합 상피에서의 점막 장벽을 약화 또는 파괴하기 위해 다른 추가적인 접근방식이 요구되지 않고, 단순히 작은 분자들 예컨대 데옥시리보핵산(DNA), 또는 대형 분자 예컨대 단백질, 및 심지어 나노입자 및 바이러스 접합 상피 상에 놓는 것만으로도 강력한 면역 반응을 유발할 수 있다. 사실, 접합 상피는 림프관에 풍부하다.
본 발명은 강력한 전신 및 점막 면역 반응에 접속하기 위해 접합 상피를 통한 치은 틈새로의 항원 및 알레르기 유발 항원의 투여에 관한 것이다. 접합 상피는 길이가 단 2 mm이고, 치은 틈새는 깊이가 1 내지 2 mm이고, 본 발명가들은 접합 상피를 통한 흡수를 위해 치은 틈새로의 표적화된 침적을 위해 치실 위에 항원 및/또는 알레르기 유발 항원을 침적시켰다. 발명가들이 접합 상피를 표적으로 삼기 위해 치실을 사용하는 동안, 접합 상피를 표적으로 할 수 있는 다른 접근방식이 사용될 수 있다. 예를 들어, 치수 상으로 치은 틈새와 유사한 얇고 평평한 표면이 사용될 수 있다. 이와 같이 평평한 표면은 면역조절을 유발하기 위해 관심대상 물질로 코팅되거나 또는 상기 물질이 평평한 표면 상에 봉입될 수 있다. 발명가들은 마우스 모형을 사용하여, 치실이 항원/알레르기 유발 항원 용액으로 코팅될 수 있음을 보여주고, 마우스 치아를 치실질할 수 있음을 보여주며, 이와 같은 방법이 항원/알레르기 유발 항원 전달의 효과적인 형태임을 보여준다. 이와 같은 새로운 접근 방식은 면역 조절을 위해 알레르기 유발 항원 및 항원을 투여하는 비침습적인 무통의 쉬운 방식이다. 알레르기의 경우, 본 발명의 면역화는 알레르기 면역 반응을 약화시키고/시키거나 알레르기 유발 항원에 대한 보호 면역 반응을 유도하는 역할을 한다. 반대로, 본 발명은 또한 감염 및 기타 제제에 대한 면역 반응을 촉발하는 데 사용될 수 있다.
본 발명은 당해기술에 잘 알려진 치실로 사용될 수 있다. 예를 들어, 치실은 나일론이나 모노필라멘트 또는 다중 필라멘트를 형성하도록 형성, 펌핑 또는 압출되는 중합체로 중합되는 나일론 치실로 생산될 수 있다. 중합체는 경화가 가능하고, 상기 모노필라멘트 또는 다중 필라멘트가 조합되어 한 가닥 또는 여러 가닥의 치실을 형성할 수 있다. 치실은 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE 또는 TEFLON®), 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 스타이렌 부타디엔 공중합체, 또는 이들의 조합으로 생산될 수 있다. 일단 형성되면, 중합체는 용융되어 얇은 가닥으로 압출될 수 있다. 예를 들면, 관련 부분이 본원에 참조로 편입된 미국 특허 제6,270,890호를 참조할 수 있다.
하나의 비제한적인 예에서, 나일론 또는 PTFE는 염기성 아미노산(또는 이것의 염)과 혼합되어, 하나 이상의 필라멘트를 형성하도록 형성 또는 압출된다. 다중 필라멘트의 경우, 이들은 일반적으로 꼬아서 치실을 형성한다. 대안적으로, 치실, 예컨대 PTFE의 단일 리본이 형성될 수 있다. 종종, 치실은 데니어가 약 450 내지 약 1350이고, 다른 예들에서, 치실 데니어는 약 100 내지 약 900이다.
이어서 치실에는 당해기술의 숙련가에가 알려진 바와 같이, 본 발명의 면역원(들) 및/또는 알레르기 유발 항원(들) 및/또는 항원(들)이 침적된다. 예를 들어, 치실은 항원 및/또는 알레르기 유발 항원을 포함하는 수조에서 처리된다. 상기 수조는 치실에 접착되는 하나 이상의 왁스를 포함할 수 있고, 따라서 항원 및/또는 알레르기 유발 항원이 치실에 접착되게 할 수 있다. 일 예에서, 나일론 또는 PTFE 섬유를 포함하는 치실은 항원 및/또는 알레르기 유발 항원으로 코팅된다. 왁스 또는 중합체, 예를 들면, 예컨대 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 아세테이트가 치실에 또는 치실 주변에 항원 및/또는 알레르기 유발 항원을 코팅하는 데 사용될 수 있다. 관련 부분이 참조로 본원에 편입된 미국 특허 제6,289,904호를 참조할 수 있다.
필라멘트성 치실의 경우, 얇은 필라멘트 다발이 형성되기 이전, 다발이 형성되는 중에, 또는 심지어 다발이 형성된 후에, 항원 및/또는 알레르기 유발 항원이 상기 다발, 예를 들면, 나일론 필라멘트 다발에 내재될 수 있다. 다발은 또한 선택적으로 왁스 또는 중합체로 코팅될 수도 있다. 필라멘트의 수는 치실 필라멘트의 데니어에 따라 약 2 내지 약 500개, 예를 들면, 약 2 내지 약 250개이다. 치실 필라멘트는 종종 1인치당 약 1 내지 5회 꼬여서 치실을 형성한다. 꼬임은 치실이 실패에 걸리고/걸리거나 차후 취급 시 치실에 온전함을 제공한다. 면역화를 위해, 치실 필라멘트가 치은의 접합 상피에서 치아 표면에 대해 펼쳐지고 벌려짐으로써, 항원 및/또는 알레르기 유발 항원 면역화를 달성한다. 치실은 또한 교합된 섬유로 형성될 수도 있다. 치실 제품은 바람직하게는 치아 사이에 맞을 뿐만 아니라 치은의 접합 상피에 도달할 정도가 되도록 두께를 갖는다. 다중 필라멘트가 사용되는 경우, 코팅이 꼬임 전 및/또는 꼬임 후에 도포될 수 있는데, 일반적으로 항원 및/또는 알레르기 유발 항원의 도포 후에 꼬임이 이루어진다. 다른 첨가제들은 항원 및/또는 알레르기 유발 항원을 보존하거나 또는 코팅 공정에 일조하기 위해, 또는 항원 및/또는 알레르기 유발 항원의 방출 제어를 달성하도록 치실에 도포될 수 있다.
또한, 향이 액체 또는 고체로서 치실에 도포될 수 있다. 향이 액체 또는 고체 형태로 분사 및 건조될 수 있다. 향이 액체로 적용될 경우, 치실은 일반적으로 실패에 감겨지기 전에 건조된다. 건조는 공기 건조되거나 또는 가열 건조될 수 있고, 이후 치실은 실패에 감긴다.
본원에 사용된 용어 '항원'은 항원의 수령자에서 체액성 및/또는 세포성 면역 반응을 개시할 수 있는 분자를 가리킨다. 항원은 본 발명의 경우 상이한 문맥에서 사용될 수도 있는데, 예를 들어, 비제한적으로, (1) 백신접종이 유리한 치료가 되는 질병 또는 질환을 예방 또는 치료하기 위해 면역 반응을 생성하는 제제로서, 및/또는 (2) 면역 반응을 무반응화하는, 즉, 활성화된 면역세포가 활성화 수치를 감소시키게 하는 제제로서, 및/또는 (3) 면역 반응을 조절하여 개체에서 유리한 치료 효과를 달성하기 위한 제제로서 사용될 수 있다. 항원은, 예를 들어, 단순 중간 대사 생성물, 당, 지질 및 호르몬 뿐만 아니라 펩타이드, 폴리펩타이드, 복합체 탄수화물, 포스포리피드, 핵산 및/또는 당단백질과 같은 거대분자 또는 이들의 조합을 포함하는 모든 유형의 생물학적 분자를 포함한다. 항원의 일반 범주는, 비제한적으로, 바이러스 항원, 세균성 항원, 균류 항원, 원생동물 및 기타 기생충 항원, 종양 항원, 및 정반대로, 자가면역 질환, 알레르기 및 이식 거부에 관여하는 항원 및 기타 잡다한 항원을 포함한다.
본원에 개시된 바이러스 항원의 예에는, 예컨대 레트로바이러스 항원, 예컨대 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 항원에서 유래된 레트로바이러스 항원, 예컨대 개그(gag), 폴(pol) 및 환경(env) 유전자의 유전자 생성물, Nef 단백질, 역전사 효소, 및 기타 HIV 구성성분; 코로나바이러스 항원, 예컨대 스파이크 단백질, 뉴클레오단백질, 메신저 RNA(mRNA); 간염 바이러스 항원, 예컨대 간염 B 바이러스의 S, M, 및 L 단백질, 간염 B 바이러스의 프리-S 항원, 및 기타 간염, 예를 들면, 간염 A, B, 및 C, 바이러스 구성성분, 예컨대 C형 간염 바이러스 RNA; 독감 바이러스 항원, 예컨대 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제 및 기타 독감 바이러스 구성성분; 홍역 바이러스 항원 예컨대 홍역 바이러스 융합 단백질 및 기타 홍역 바이러스 구성성분; 루벨라 바이러스 항원, 예컨대 단백질 E1 및 E2 및 기타 루벨라 바이러스 구성성분; 로타바이러스 항원 및 기타 로타바이러스 구성성분; 거대세포바이러스 항원, 예컨대 봉투 당단백질 B 및 기타 거대세포바이러스 항원 구성성분; 호흡기 세포융합 바이러스 항원, 예컨대 RSV 융합 단백질, M2 단백질 및 기타 호흡기 세포융합 바이러스 항원 구성성분; 헤르페스 단순 바이러스 항원, 예컨대 즉시 조기 단백질, 당단백질 D, 및 기타 헤르페스 단순 바이러스 항원 구성성분; 수두 대상포진 바이러스 항원, 예컨대 gpI, gpII, 및 기타 수두 대상포진 바이러스 항원 구성성분; 일본 뇌염 바이러스 항원, 예컨대 단백질 E, M-E, M-E-NS1, NS1, NS1-NS2A, 80% E, 및 기타 일본 뇌염 바이러스 항원 구성성분; 광견병 바이러스 항원, 예컨대 광견병 당단백질, 광견병 뉴클레오단백질 및 기타 광견병 바이러스 항원 구성성분, 웨스트나일(west nile) 바이러스; 황열병; 야토병; 간염(바이러스; 세균성); RSV(호흡기 세포융합 바이러스); HPIV 1 및 HPIV 3; 아데노바이러스; 천연두가 포함된다. 바이러스 항원의 추가적인 예들은 관련 부분이 본원에 참조로 편입된 문헌[Fundamental Virology, Second Edition, eds. Fields, B. N. and Knipe, D. M.(Raven Press, New York, 1991)]을 참조할 수 있다.
기타 항원의 예에는 전체, 열로 죽은, 또는 이들의 일부분을 포함하는데, 여기에는 피코로나바이러스, 코로나바이러스, 토가바이러스, 플라비르바이러스, 라브도바이러스, 파라미소바이러스, 오소미소바이러스, 번야바이러스, 아레나바이러스, 레오바이러스, 레트로바이러스, 파필로마바이러스, 파르보바이러스, 헤르페스바이러스, 매독바이러스, 헤파드나바이러스, 스폰지폼 바이러스, 독감, 헤르페스 단순 바이러스 1 및 2, 홍역, 뎅기열, 천연두, 소아마비 또는 HIV가 포함된다. 기타 항원은 병원균, 예컨대 트리파노솜, 촌충, 회충, 기생충, 말라리아에 대항할 수 있다. 본 발명에서 구체적인 생명체의 예들, 벡터에 사용가능하고 궁극적으로 항원으로 사용되는 알레르기 유발 항원 및 핵산 및 아미노산 서열이 미국 특허 제6,541,011호에서 발견될 수 있으며, 관련 부분들은 본원에 참조로 편입되는데, 특히 생명체와 본 발명에서 사용될 수 있는 구체적인 서열을 매칭하는 표가 편입되었다.
본원에 개시된 세균성 항원은 예를 들어 세균성 항원, 예컨대 백일해 독소, 사상성 헤마글루티닌, 퍼탁틴, 아데닐레이트 시클라제 및 기타 백일해 세균성 항원 구성성분; 디프테리아 세균성 항원, 예컨대 디프테리아 독소 또는 변성 독소 및 기타 디프테리아 세균성 항원 구성성분; 파상풍 세균성 항원, 예컨대 파상풍 독소 또는 변성 독소 및 기타 파상풍 세균성 항원 구성성분; 연쇄상 구균 세균성 항원, 예컨대 M 단백질 및 기타 연쇄상 구균 세균성 항원 구성성분; 그램 음성 바실루스(bacilli) 세균성 항원, 예컨대 리포폴리사카라이드 및 기타 그램 음성 세균성 항원 구성성분, 결핵 마이코박테륨 세균성 항원, 예컨대 미콜산, 열 충격 단백질 65(HSP65), 30 kDa 주요 분비 단백질, 항원 85A 및 기타 마이코박테륨 항원 구성성분; 헬리코박터 파일로리 세균성 항원 구성성분; 폐렴 쌍구균 세균성 항원, 예컨대 폐렴구균용혈소, 폐렴 쌍구균 협막다당 및 기타 폐렴 쌍구균 세균성 항원 구성성분; 헤모필루스 독감 세균성 항원, 예컨대 협막다당 및 기타 헤모필루스 독감 세균성 항원 구성성분; 탄저병 세균성 항원, 예컨대 탄저병 보호 항원 및 기타 탄저병 세균성 항원 구성성분; 리케치아 세균성 항원, 예컨대 rompA 및 기타 리케치아 세균성 항원 구성성분을 포함한다. 또한 본원에 기술된 세균성 항원과 함께 임의의 기타 세균성, 마이코박테륨, 마이코플라즈마, 리케치아, 또는 클라미도 항원, 예컨대 네이세리아 수막염; 연쇄상 구균에 의한 폐렴; 네이세리아 임질과; 살모넬라 장티푸스균; 이질균; 비브리오 콜레라; 뎅기열; 뇌염; 일본 뇌염; 라임 병; 예르시니아 페스티스가 포함된다.
본 발명에 사용하기 위한 균류 항원의 예에는, 비제한적으로, 예를 들면 캔디다 균류 항원 구성성분; 히스토플라즈마 균류 항원, 예컨대 열 충격 단백질 60 (HSP60) 및 기타 히스토플라즈마 균류 항원 구성성분; 효모균류 균류 항원, 예컨대 협막다당 및 기타 효모균류 균류 항원 구성성분; 콕시디오이데스 균류 항원, 예컨대 소구 항원 및 기타 콕시디오이데스 균류 항원 구성성분; 및 백선 균류 항원, 예컨대 백선균백신 및 기타 콕시디오이 데스 균류 항원 구성성분이 포함된다.
본 발명에서 사용하기 위한 원생동물 및 기타 기생충 항원의 예에는, 비제한적으로, 예를 들면, 열대열원충 항원 예컨대 낭충 표면 항원, 포자 소체 표면 항원, 포자 소체(circumsporozoite) 항원, 생식모세포/생식세포 표면 항원, 혈액단계 항원 pf 155/RESA 및 기타 말라리아원충 항원 구성성분; 톡소플라즈마 항원, 예컨대 SAG-1, p30 및 기타 톡소플라즈마 항원 구성성분; 주혈흡충종 항원, 예컨대 글루타티온-S-트랜스퍼라제, 파라미오신, 및 기타 주혈흡충종 항원 구성성분; 리슈마니아 메이저(leishmania major) 및 기타 리슈마니아 항원, 예컨대 gp63, 리포포스포글리칸 및 이것의 관련 단백질 및 기타 리슈마니아 항원 구성성분; 및 트리파노소마 크루지 항원, 예컨대 75 내지 77 kDa 항원, 56 kDa 항원 및 기타 트리파노소마 항원 구성성분이 포함된다.
본 발명에 사용하기 위한 종양 항원의 예에는, 비제한적으로, 예를 들면, CEA, 전립선 특이 항원(PSA), HER-2/neu, BAGE, GAGE, MAGE 1-4, 6 및 12, MUC (뮤신)(예를 들면, MUC-1, MUC-2 등), GM2 및 GD2 강글리오사이드, ras, myc, 티로시나아제, MART (멜라노마 항원), Pmel 17(gp 100), GnT-V 인트론 V 서열(N-아세틸글루코아미닐트랜스퍼라아제 V 인트론 V 서열), 전립선 Ca psm, PRAME(멜라노마 항원), 베타-카테닌, MUM-1-B(멜라노마 유비쿼터스(ubiquitous) 돌연변이 유전자 산물), GAGE(멜라노마 항원) 1, BAGE(멜라노마 항원) 2-10, c-ERB2 (Her2/neu), EBNA (Epstein-Barr 바이러스 핵 항원) 1-6, gp75, 인간 유두종 바이러스(HPV) E6 및 E7, p53, 폐 저항 단백질(LRP), Bcl-2, 및 Ki-67이 포함된다. 추가적으로, 면역원 분자는 자가면역 질환, 즉 대체로 관련 표적 기관, 조직, 또는 세포, 예를 들면, CII, SLE 또는 MG에 의해 발현되는 분자에 특이적인 항원의 활성 때문인 병리학의 개시 및/또는 증식에 관여하는 자가 항원이다. 이와 같은 질병에서, 진행 중인 항체-매개(즉, Th1/Th17-유형) 면역 반응을 세포성(즉, Th2-유형) 면역 반응을 향한 관련 자가 항원에 겨냥하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로, 예방 차원에서 적절한 자가 항원에 대한 Th2 반응을 유도함으로써, 관련 자가면역 질환을 갖지 않았으나 해당 질환에 걸리기 쉽다고 의심되는 개체에서 자가 항원에 대한 Th1/17 반응의 시작을 방지하거나 또는 이것의 수치를 감소시키는 것이 바람직할 수 있다. 관심대상의 자가 항원에는, 비제한적으로, (a) SLE와 관련하여, Smith 단백질, RNP 리보뉴클레오단백질, 및 SS-A 및 SS--B 단백질; 및 (b) MG와 관련하여, 아세틸콜린 수용체가 포함된다. 하나 이상의 자가면역 반응 유형에 관여하는 기타 사소한 항원의 예에는, 예를 들면, 콜라겐 유형 II 단백질/펩타이드, 미엘린 올리고덴드로사이트 당단백질(MOG), 내인성 호르몬 예컨대, 황체 형성 호르몬, 소낭 자극 호르몬, 테스토스테론, 성장 호르몬, 프로락틴 및 기타 호르몬이 포함된다.
본 발명에 사용하기 위한 자가면역질환, 알레르기 및 이식 거부와 관련된 항원의 예에는, 비제한적으로, 예를 들면, 당뇨병, 진성 당뇨병, 관절염(예컨대 류마티스 관절염, 연소성 류마티스성 관절염, 골관절염, 건선성 관절염), 다발성 경화증, 중증근무력증, 전신 홍반성 루푸스, 자가면역성 갑상샘염, 피부염(예컨대 아토피성 피부염 및 습진 피부염), 건선, 쇼그렌 증후군(쇼그렌 증후군에 속발하는 건성 각결막염 포함) 원형 탈모증, 절지동물 물림 반응으로 인한 알레르기 반응, 크론병, 아프타 궤양, 홍채염, 결막염, 각결막염, 궤양성 대장염, 천식, 알레르기성 천식, 피부 홍반 루푸스, 피부경화증, 질염, 직장염, 약물 발진, 나병 역전 반응, 결절 나병 홍반, 자가면역 포도막염, 알레르기성 뇌척수염, 급성 괴사성 출혈성 뇌병증, 특발성 양측 진행성 감각신경성 청력 상실, 재생불량성빈혈, 순적색세포빈혈, 특발성 혈소판 감소증, 다연골염, 베게너 육아종증, 만성 활성 간염, 스티븐스-존슨 증후군, 특발성 스프루, 편평 태선, 크론병, 그레이브스 눈병증, 유육종증, 원발성 담즙성 간경변, 후포도막염, 간질성 폐섬유증이 포함된다. 자가면역 질환에 관여하는 항원의 예에는 콜라겐 유형 II, 콜라겐 유형 II 펩타이드(CII250-270), 프로테오글리칸, 시트룰리네이트(citrullinated) 펩타이드 항원, 비멘틴, 피브리노겐, α-에놀라제, 펩티딜 아르기닌 데이미나제-4, 인슐린, 췌장(islet) 항원 2 (IA2), 아연 수송체 8(ZnT8), 췌장(islet) 특이적 글루코오스-6-포스파타제 촉매 소단위 관련 단백질(IGRP), 크로모그라닌 A(ChgA), 췌장(islet) 아밀로이드 폴리 폴리펩티드(IAPP), 글루탐산 디카르복실라제 65(GAD 65), 천연 DNA, 미엘린 염기성단백질, 미엘린 단백질지질 단백질, 아세틸콜린 수용체 구성성분, 티로글로불린 및 갑상선 자극 호르몬(TSH) 수용체가 포함된다. 알레르기에 관여하는 항원의 예에는 꽃가루 항원, 예컨대 삼나무 꽃가루 항원, 돼지풀 꽃가루 항원, 호밀 풀 꽃가루 항원, 곤충 유발 항원, 예컨대 집먼지 진드기(즉, Der p1, Der p2, LTN-DP2-1, LTN-DPE-1), 바퀴벌레 항원(즉, Bla g2), 동물 유발 항원, 예컨대 고양이 항원(즉, Fel d1), 개 항원 (즉, Can f1), 조직 접합성 항원, 식품 알레르기 유발 항원, 예컨대 땅콩 항원(Ar1 h1, Ara h2, Ara h3, Ara h6), 우유 항원(즉, Bos d11, Bos d4, Bos d6, Bos d8), 달걀 단백질(즉, Gal d2, Gal d3, Gal d4), 새우 항원(즉, 토로포마이오신), 견과류(즉 헤이즐넛 Cor a 9, 아몬드 Pru du6), 콩류(즉, 대두 Gly m6) 및 항생제, 예컨대 페니실린, 세팔로스포린 및 기타 치료제 약물(예컨대, 인슐린, 에피네프린)이 포함된다. 이식 거부에 관여하는 항원의 예에는 이식 수혜자에게 이식될 조직의 항원 구성성분, 예컨대, 심장, 폐, 간, 췌장, 신장 및 신경 이식 조직 구성성분이 포함된다. 항원은 자가면역 질환을 치료하는 데 유용한 변형된 펩타이드 리간드일 수 있다. 항원은 알레르기 유발 제제에서 유래된 원 추출물 또는 정제된 추출물, 예컨대 호흡기 알레르기 유발 항원(예컨대 꽃가루, 집먼지 진드기, 곤충 및 기타), 식품 알레르기 유발 항원(예컨대 땅콩, 캐슈넛, 호두, 대두, 조개류 및 기타), 독(예컨대 벌독) 및 기타 알레르기 유발 항원에서 유래된 추출물일 수 있다.
본원에 사용된 용어 '침적물', '침적물(depot)', '침적(deposition)'은 치실 상에서 이웃한 침적물(들)로부터 일정 간격 분리된 활성 제제가 하나 이상의 침적물 형태로 존재하는 것을 가리킨다.
본원에 사용된 용어 '에피토프(들)'은 병원체 DNA 또는 RNA에 의해 인코딩되는 수많은 병원체 폴리펩타이드 중 어느 것 내부에 위치되는 에피토프와 유사한 1차, 2차, 또는 3차 구조를 포함하는 펩타이드 또는 단백질 항원, 및/또는 면역원성인 알레르기 유발 항원을 가리킨다.
항원(들) 및/또는 에피토프(들)은 펩타이드, 단백질 및 이들의 일부분에 제한되지 않고, 유전자, 플라스미드, 벡터(바이러스, 세균성 및 비바이러스), DNA, RNA, CRISPR 분자, mRNA, siRNA, 또는 기타 개별적 또는 조합 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 운반체 및 제형은 이들 분자를 안정화하거나 또는 이들의 기능을 향상시키거나 또는 방출 제어를 제공하기 위해 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 '약제학적으로 허용가능한 운반체'는 이것이 투여된 개체(예를 들면, 인간/애완동물(예컨대, 개, 고양이, 소, 돼지, 또는 기타 가축 또는 가축 아닌 동물)에 부작용을 유발하지 않는 운반체를 가리킨다. 적합한 약제학적으로 허용가능한 운반체에는, 예를 들어, 물, 식염수, 인 완충 식염수, 덱스트로즈, 글리세롤, 에탄올, 디메틸 설폭사이드 등, 또는 이들의 조합 중 하나 이상이 포함된다. 추가적으로, 원하는 경우, 면역화/백신은 적은 양의 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 및/또는 백신의 효과성을 향상시키는 보조제를 함유할 수 있다.
효과적일 수 있는 보조제의 비제한적인 예에는, 비제한적으로, 수산화알루미늄, N-아세틸-뮤라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-아세틸-nor-뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타민, 세균에서 추출된 3가지 구성성분을 함유하는 MTP-PE 및 RIBI, 모노포스포릴 지질 A, 트레할로스 디미콜레이트 및, 예를 들면, 2% 스쿠알렌/Tween 80 에멀젼 중 세포벽 골격이 포함된다. STING 작용제(예를 들면, 2'3'-cGAMP, c-di-AMP, 2'3'-c-di-AM(PS)2 (Rp,RP), c-di-GMP, CL401, CL413, CL429, 플라젤린, 이미퀴모드, LPS-EB, MPLA, ODN 1585, ODN 1826, ODN2006, ODN2395, ODN 1018, pam3CSK4, poly(I:C), R848, TDB), 보조제의 다른 예에는 DDA(디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드), 프로인트(Freund) 완전, 불완전 보조제, 퀼라, 천연 중합체(즉, 폴리-γ-글루탐산, 키토산, 마난, 리포마난, 레티난, 덱스트란), 합성 중합체(즉, 폴리－N-이소프로필아크리알마이드, 공중합체, 블록 중합체, 폴리포스파젠, 고분자 전해질, 고분자 무수물, 폴리메타크릴레이트, 폴리글리콜-코-락타이드, 폴리카프로락톤, 폴리비닐피롤리돈, 양이온 중합체)이 포함된다. 또한, 면역 조절 물질, 예컨대 림포카인(예를 들면, IFN-감마, IL-2 및 IL-12) 또는 합성 IFN-감마 유도제, 예컨대 폴리 I:C는 본원에 기술된 보조제와 조합하여 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 '개체'는 인간, 애완동물(예컨대, 개, 고양이, 소, 양, 염소, 말, 토끼, 또는 돼지) 또는 기타 가축, 또는 비가축 동물, 예컨대, 사슴, 버팔로, 또는 또는 야생마를 가리킨다.
접합 상피는 치은 틈새의 바닥에 위치하며, 건강한 잇몸의 경우 1~2 mm 깊이에 존재한다. 더 나아가, 치은 틈새의 정점 조직은 치아를 꽉 안고 있어서, 1 mm 미만, 바람직하게는 500 μm 미만인 얇은 기구만이 틈새로 진입하는 것이 허용된다. 따라서, 치은 틈새로의 물질 투여는 간단한 일이 아니다. 이와 같은 문제를 극복하기 위해, 본 발명은 치실 상에 침적된 항원 및/또는 알레르기 유발 항원을 사용한다. 치실은 치은 틈새를 청소하기 위해 수백만명이 매일 사용하는 것으로, 본 발명은 접합 상피를 통한 흡수를 위해 치은 틈새에 표적 침적을 위해 항원/알레르기 유발 항원으로 코팅될 수 있음을 기술한다. 치실은 비침습적이며, 통증이 없고, 집에서 편안하게 스스로 할 수 있다는 추가적인 장점을 제공한다. 치실은 접합 상피에 물질을 전달하고자 하는 최종 목표를 가진 시스템의 비제한적인 예로 받아들여져야 한다. 치은 틈새로 진입하여 접합 상피를 표적으로 하는 데 도움이 되도록 한다는 원칙을 기반으로 한 다른 접근 방식들, 예컨대 테이프, 필름, 줄, 끈, 봉합실, 젤, 하이드로겔, 중합체, 점성물질, 입자 또는 이들의 조합이 본 발명에 포함된다. 이들 시스템 및 장치는 치은 틈새에 삽입될 수 있으나, 틈새 안으로 들어가기 보다 치은 틈새의 정점 측면에 놓일 수 있어서, 관심대상 분자(들)가 이어서 상기 시스템 및 장치에서 치은 틈새로 확산되어, 궁극적으로는 조직에 스며들기 위해 접합 상피로 확산될 수 있다. 이와 같이 치은 틈새의 정점측에 놓인 시스템은 치은 틈새로 분자의 확산을 극대화하지만 외부로 또는 일반적인 구강 내로의 손실을 최소화하도록 설계될 수 있다. 이와 같은 일 접근 방식에서, 전달 시스템은 치은 틈새 맞은 편을 마주보는 측에 침투불가능한 층으로 코팅될 수 있다.
치실을 코팅하기 위해, 본 발명가들은 피펫을 사용하여 치실에 물질을 도포하는 간단한 수동 코팅 공정을 개발하였다. 이들은 예비 코팅 가능성 연구 후 5개의 상이한 치실들 중에 오랄-B® 글라이드 프로-헬스 오리지널 치실을 선택하였다. 이와 같은 방법을 사용하여, 발명가들은 단백질, 소분자, 펩타이드, 나노입자, 단일 가닥 DNA 올리고뉴클레오타이드 및 독감 바이러스를 비롯한 상이한 분자들을 치실에 코팅할 수 있었다. 이어서, 발명가들은 마우스의 치아를 치실질하는 가능성을 수립하였다. 발명가들은 접근의 용이성 때문에 아래 앞니에 치실질을 하기로 결정하였다. 마우스를 마취 상태로 유지하여 치실질을 수행하였다. 도면은 치실질 전, 치실질 중, 치실질 이후의 앞니를 보여준다. 형광 입체 현미경으로의 촬영으로 코팅된 형광 난백 알부민(Ova)이 30분 이내로 접합 상피를 통해 치은 조직으로 진입함을 확인하였다. 발명가들은 치실에 코팅된 Ova(M1) 및 치실질 후 치실에 남은 Ova(M2)를 정량화하여 치은 틈새로 전달된 Ova의 부분을 결정하였다. n=4 마우스의 경우, 전달 효율([M1-M2]/M1 x 100)은 약 75%였다.
항원 또는 알레르기 유발 항원이 접합 상피에 투여될 때 면역 반응이 생성되었다. 발명가들은 Ova(25 μg Ova +/- 25 μg CpG), 땅콩 추출물 단백질(PE)(25 μg PE +/- 25 μg CpG), 또는 비활성화된 독감 바이러스(A/PR/8/34 (H1N1))(25/10 μg PR8)를 치실에 코팅하여 Ova 및 PE의 경우 매주 5번 투여하고, 독감 바이러스의 경우 2주마다 3번 투여하였다. 56일차(0일차는 첫 투여 날을 뜻함)에 채취한 혈청 시료가 Ova, PE, 및 PR8에 대한 전신 IgG 반응의 강한 자극을 명확히 보여주었고, 대변 분석은 점막 IgA 및 IgG의 발달을 보여주었다. 반응, 특히 CpG에서 유래된 IgG2a가 유의미하게 더 높았기 때문에 CpG의 명확한 보조제 효과가 관측되었다.
접합 상피로의 투여가, 알레르기 반응을 보여주는, IgE 생산 초래하는지 여부를 결정하기. Ova 및 PE에 특이적인 혈청 IgE 항원은 무의미하고, 단지 치실(무코팅)을 받은 마우스와 견줄만 했고, 이것은 접합 상피의 치실-기반 표적화가 알레르기를 유도하지 않음을 시사한다.
접합 상피에 투여된 독감 백신은 보호성이다. 비활성화된 PR8를 백신으로 받은 마우스에서 3x50% 치사량으로 면역을 유발하였다. 도면은 마우스가 보호받았으며, 최소한의 체중 감량을 나타내었음을 보여준다.
본 발명을 사용하여, 식품 알레르기 모형으로서 땅콩에, 또는 기도 알레르기 모델로서 Ova에 감작화된 마우스의 치료를 위한 땅콩 추출물(PE) 또는 Ova를 도포한 치실의 효과성이 결정될 수 있다. 두 가지 알레르기 모형의 경우, 설하 면역치료(SLIT)가 양성 대조군으로 사용될 수 있다. 최근, FDA는 꽃가루 알레르기 SLIT를 위한 설하정을 또한 승인하였다. 이와 같은 접합 상피의 투과성이 그리 높지 않기 때문에, SLIT는 많은 양의 알레르기 유발 항원을 혀 아래에 두는 것이 필요하다. 땅콩 면역치료의 경우, 땅콩-감작화된 마우스에 3주에 걸쳐 CpG(치실 :PE ) 없이 또는 치실에 바른 5 μg CpG(치실 :PE+CpG )와 함께 5 μg PE을 9번 투여하였다. 2개의 대조군을 추가하였다: 제1 대조군은 처리되지 않은 감작화된 마우스(미처리군)로 이루어졌고, 제2 대조군은 구강 땅콩 면역유발을 받은 미처리 마우스(면역유발만 있는 미처리 마우스)로 이루어졌다. 치료 효능을 평가하기 위해, 마우스에서 PE 500 μg으로 복강내로 면역을 유발시켰다. 더 낮은 알레르기 증상 임상점수, MCPT-1 마커를 통해 정량화된 더 낮은 비만 세포 탈과립, 및 면역유발 후 마우스 장 조직에서 호산구의 더 낮은 침투에서 보여지듯이, 치실은 미처리 마우스에 대해 탁월한 탈감작화를 제공하였고, 더 적은 투여(9) 및 더 낮은 용량을 요구하였다. 예상된 바와 같이, 미처리된 땅콩-감작화 마우스는 장 조직에서 유의미하게 더 높은 MCPT-1 및 호산구를 가졌다. 면역유발만 된 미처리 마우스는 면역유발 후 비정상적인 판독이 없었다. 이와 유사하게, Ova 기도-알레르기 모형의 경우, Ova-감작화된 마우스에 3주 만에 CpG(치실:Ova) 없이 또는 25 μg CpG(치실:Ova+CpG)와 함께, OVA 25 μg을 9번 투여하였다. 처리되지 않은 감작화된 마우스(미처리군)가 대조군으로 추가되었다. 마우스에서 비강을 통해 Ova 50 μg/일 용량으로 3회 면역을 유발시켰다. 치실군은 염증 세포(호산구 및 호중구)의 수가 더 낮았고, 폐의 점액도 낮았다. 미처리된 대조군은 유의미한 염증 세포 및 점액 생산을 보여주었다. 점액은 기도 알레르기 반응의 특징으로 치실군보다 낮았고, 이는 좀 더 낮은 용량에서 더 나은 반응을 자극함을 시사한다.
세포 반응에 대한 통찰을 얻기 위해, Ova를 투여한 마우스의 비장 세포를 Ova로 시험관에서 재자극하였다(주의: 이들 마우스는 백신접종 연구에 속하고, 기도 알레르기에는 속하지 않음). 사이토카인 프로파일은 Ova+CpG을 투여받은 마우스에서 TH1 및 TH2 효과기 반응 모두 생산되고 있음을 보여주었다. 재자극 없는 동일한 마우스의 골수 세포는 Ova-특이적 IgG를 생산하였고, PE+CpG를 투여받은 마우스(백신 연구에 속하고, 식품 알레르기에는 속하지 않음)의 골수 세포 역시 동일하였다. 이것은 반응이 국소적이지 않고 전신에서 이루어짐을 보여주고, 확인을 위해 더 많은 연구가 필요하겠지만, 기억 반응의 생성을 시사한다.
이와 같은 연구들은 치실이 코팅될 수 있고, 코팅된 치실이 접합 상피를 표적화하는 데 사용될 수 있으며, 이것이 전신 및 점막 면역 반응을 생성함을 입증한다. 또한 투여 방법이 치명적인 독감 바이러스 면역유발로부터 마우스를 보호하였고, 기도 알레르기 및 땅콩 식품 알레르기 마우스 모형에서 탈감작화을 나타내었다.
본 발명가들은 피펫 끝을 사용하여 항원/알레르기 유발 항원을 함유한 용액을 사용하여 치실을 수작업으로 코팅하였다. 코팅의 재현성을 높이고 전달 효율을 증가시키기 위해, 컴퓨터 제어 선형단계 및 유체 분배 시스템을 사용하는 자동화된 코팅 방식이 사용될 수 있다. 치실-코팅기가 사용되어 코팅 액체 병을 단순히 바꿈으로써 임의의 항원 또는 알레르기 유발 항원으로 특정 길이의 치실을 코팅할 수 있다. 코팅을 위한 다른 선택 방안에는 담그기 코팅, 또는 분사 코팅, 또는 잉크 젯 인쇄, 또는 피펫-기반 코팅, 또는 카트리지 인쇄 또는 이들의 조합이 포함된다. 코팅을 위해 부형제 예컨대 농후제, 또는 표면 장력 감소제가 코팅 및 전달 효율을 향상시킬 필요가 있다. 추가적으로, 분자의 안정성을 향상시키기 위해, 탈수력으로부터 분자를 보호하는 것으로 알려진 트레할로스 및 기타 물질들이 사용될 수 있다. 본원에 나타낸 바와 같이, 바이러스 입자가 코팅될 수 있기 때문에, 이들이 면역 반응을 향상시킬 수 있기에 나노입자 및 마이크로입자로 코팅하는 것이 가능하다. 전달 효율이 평가될 수 있고, 영상 촬영이 사용되어 코팅의 특징을 규명할 수 있다.
땅콩 알레르기 유발 항원 면역치료를 위한 새로운 패러다임의 개발. 입은 음식이 몸과 접촉하는 첫 번째 장소로, 치아로 씹은 음식 입자는 잠재적으로 치은 틈새에 들어갈 수 있고, 차후에 접합 상피를 통해 조직에 들어갈 수 있다. 따라서, 잇몸의 면역망이 면역 관용을 유지하는데 주요한 역할을 할 수 있다는 점이 전혀 놀랍지 않다. 정말로, 땅콩 알레르기 유발 항원 면역치료를 위해 코팅된 치실을 사용한 개념증명 연구(proof-of-concept study)가 감작화를 감소시켰다. 이와 같은 접근 방식은 땅콩 및 기타 식품 알레르기 유발 항원에 대한 알레르기 유발 항원 면역치료의 빠른 개발을 허용한다. 치실은 또한 접합 상피를 표적화함으로써 예를 들면, 땅콩 알레르기 유발 항원 면역치료를 위해 사용될 수 있다. 땅콩 알레르기 유발 항원의 용량의 효과, 치실사용의 빈도, 보조제의 사용, 식균작용 및 항원 처리를 향상시키기 위한 입자의 사용, 및 방출지연 코팅이 면역치료의 관점에서 연구될 것이다.
치은 틈새로의 투여는, 생후 6~12개월에 인간에게서 발생하는 치아 맹출(tooth eruption) 후에만 이루어질 수 있다. 제안된 패러다임은 신생아가 약 1세가 될 때까지 영유아 백신에서 중심이 될 수 없는 반면, 새로운 패러다임으로 인해 야기된 증폭된 면역 반응은 명확히 백신 개발에 영향을 미칠 것이고, 이것은 암 및 HIV 백신에 일조할 수 있고, 안전을 위해 삶의 후반에 치료되는 알레르기 및 종종 삶의 말기에 나타나는 자가면역질환에 대한 탁월한 치료를 제공할 수 있다.
도 1a 내지 1f는 면역화의 구강 경로를 보여준다: (도 1a) 인간의 입. (도 1b) 치은 틈새 및 접합 상피(JE)의 구조. (도 1c) 치은 틈새의 접합 상피로의 활성 제제의 전달 및 시간 경과에 따른 접합 상피 및 이웃한 조직으로의 활성 제제의 확산, (도 1d) 치실에 코팅된 항원 분자의 전달 및 마우스 잇몸 조직에서 치실질의 효과, 및 (도 1e) 로다민에 접합된 난백 알부민(Ova)의 잇몸 조직에서의 확산. 앞니 각각에서, 항원이 침적된 치실을 치아에 두르고 10회 치실질을 하여 코팅된 항원이 잇몸선에 침적되도록 함으로써, 치실질이 이루어진다. (도 1f) 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC)-접합 난백 알부민(Ova)으로 코팅된 치실의 전달 효율.
감염제제에 대한 백신접종을 위한 치은 틈새의 접합 상피 표적화.
실시예 1: 치실을 매개로 한 접합 상피(JE)로의 난백 알부민(Ova)의 전달이 마우스에서 강력한 전신 및 점막 항체 반응을 유도한다(백신 앵글).
도 2a 내지 2g가 치실 매개 백신 전달 및 면역 반응의 특징 규명을 보여준다. (도 2a)(1) 코팅된 치실 입체현미경 사진 및 도 2a(2) 마우스에서 치실질 절차. (도 2b) 백신접종 일정: Balb/c 마우스(n=5)는 항원(난백 알부민 (Ova), 모형 항원)-침적된 치실로 잇몸을 치실질함으로써 백신접종되었다. 치실에는 25 μg Ova +/- 25 μg CpG(단일가닥 올리고데옥시뉴클레오타이드 보조제)의 침적물이 포함되고, 마우스에 총 4주에 걸쳐 매주 백신접종을 하였다. 어떤 코팅도 없는 치실로 처리된 마우스는 대조군으로 취급하였다. 전신 면역 반응: 28 및 56일차에 마우스에서 출혈을 일으켜서, 혈청 중 항-Ova 항체 반응(1:12500 또는 1:2500 희석 중 하나)을 효소결합 면역흡착 검사(ELISA)를 통해 분석하였다. 도 2(c)(1)~(3) 56일차에 항-Ova 항체 반응- 도 2(c) (1) IgG, 도 2(c)(2) IgG1 및 도 2(c)(3) IgG2a. 분석에 개별 마우스 혈청을 사용하였다. 도 2(d)(1)~(3)은 기억 면역 반응을 보여준다: 접종된 마우스를 안락사시키고, 골수 세포를 채취하였다. 10% 소태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신 항생제로 보충한 RPMI 배지로 웰당 1x106 세포의 농도에서 3회 세포를 배양하였다. 96시간 이후, 배양된 세포의 상청액을 채취하고 항-Ova 반응을 분석하였다. 도 2(d)(1)~(3) 골수 세포에서 항-Ova 항체 반응- 도 2(d)(1) IgG, 도 2(d)(2) IgG1, 도 2(d)(3) IgG2a. 이 결과는 상기 반응이 단순히 국소적인 것이 아니라 전신적인 것이며, 앞으로 동일한 항원(Ag)에 노출되는 경우를 대비하여 개체에게서 기억 반응을 유도할 수 있었음을 시사한다. 도 2(e)(1)~(4)는 점막 면역 반응을 보여준다. 56일차에, 대변, 비강세척액 및 폐 세척액을 치실로만 처리된 백신접종된 마우스에서 채취하였다. 항-Ova 도 2(e)(1) 대변에서 IgG(1:5 희석), 도 2(e)(2) 대변에서 IgA(1:5 희석), 도 2(e)(3) IgG 비강 세척액(희석되지 않음), 및 도 2(e)(4) IgG 폐 세척액(희석되지 않음). 도 2(f)(1)~(2) 치실를 통해 백신이 접종된 마우스의 (1) 혈청 또는 (2) 골수 어디에서도 유의미한 양의 IgE가 검출되지 않았고, 이는 접합 상피의 표적 부위가 전달된 Ag에 대해 개체를 감작화하지 않음을 시사한다. 도 2(g) 접종된 마우스를 안락사시키고 비장 세포를 채취하였다. 세포를 배양하여, 10% 소태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신 항생제로 보충한 RPMI 배지로 웰당 1x106 세포의 농도로 3회 Ova(200μg/ml)에 의해 재자극하였다. 배양된 세포의 상청액을 96시간 후 채취하여 사이토카인 수치를 분석하였다. 도 2(g)는 비장 세포 배양액에서 사이토카인 수치를 보여주고, 도 2(g)(1) IFN-감마, 및 도 2(g)(2) IL-4. 데이터는 평균±SD로 표현하였다. 일방향 ANOVA 테스트를 사용하여 상이한 혈청 희석제에서의 그룹들 사이를 비교하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001.
실시예 2: 치실로 매개된 비활성화된(Inac.) 독감 바이러스의 접합 상피(JE)로의 전달이 강력한 전신 항체 반응을 유도하고 치명적인 면역유발로부터 마우스를 보호한다.
도 3a 내지 3c는 독감 백신접종을 위해 침적된 치실을 보여준다. 도 3(a) 백신접종 일정: Balb/c 마우스(n=10)는 총 3회 동안 (0일차, 14일차, 및 28일차 각각 1회씩) 치실에 코팅된 비활성화된(Inac.) 바이러스 10 μg 또는 25 μg으로 백신 접종을 하였다. 56일차에, 마우스에 출혈을 일으켰고, ELISA를 통해 항-Inac. 바이러스 면역 반응(1:800 또는 1:50 중 하나로 희석)을 분석하였다. 도 3(b)(1)~(3) 항-Inac. 바이러스, 56일차 혈청 중 도 3(b)(1) IgG, 도 3(b)(2) IgG1, 도 3(b)(3) IgG2a 항체 반응 . 바이러스 면역유발: 56일차에, A/PR/8/34(H1N1) 독감 바이러스 3xLD50(치사량의 50%)로 마우스에서 면역을 유발하였다. 개별 마우스 시료를 분석에 사용하였다. 데이터는 평균±SD로 표현하였다. 일방향 ANOVA 테스트를 사용하여 그룹들을 비교하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001. 도 3(c)(1)~(2) 체중 변화 및 감염의 중증도에 대해 마우스를 매일 관찰하였다. 도 3(c)(1) 체중의 변화 백분율, 도 3(c)(2) 감염 후 접종된 마우스의 생존율 백분율. 각 그룹에 마우스 n=5.
실시예 3: 치실로 매개된 M2e 금 나노입자(AuNP) 접합체 기반 보편적 독감 백신의 접합 상피(JE)로의 전달이 강력한 전신 항체 반응을 유도하고 치명적인 면역유발로부터 마우스를 보호한다.
도 4a 내지 4d는 치실로 매개된, 금 나노입자(AuNP)에 접합된 펩타이드(M2e)로 이루어지고 보조제(CpG)로 추가로 보충된 백신 제형인 M2e-AuNP+CpG(MAC)의 전달, 백신 및 면역 반응의 특징 규명을 보여준다. 도 4(a)(1) AuNP 56 μg, M2e 8.1 μg 및 CpG(1X 용량) 20 μg을 함유한 M2e-AuNP+CpG로 코팅된 치실의 입체현미경 사진 및 도 4(A)(2) 마우스에서 치실질 절차. 도 4(b) 백신접종 일정: 백신 제형[M2e-AuNP+CpG (MAC)]이 코팅된 치실을 잇몸에 치실질을 하거나, 또는 백신 제형 [M2e-AuNP+CpG (MAC)]을 혀 아래 놓음으로써[설하 면역치료 (SLIT)], Balb/c 마우스(n=10)에 백신을 접종하였다. 치실에 코팅되거나 또는 SLIT를 통해 전달되는 백신 제형(MAC)은 AuNP 56 μg, M2e 8.1 μg, 및 CpG(단일가닥 올리고데옥시뉴클레오타이드 보조제) 20 μg으로 이루어지고, 0일차 및 21일차에 마우스에 백신을 접종하였다. 처리되지 않은 미처리 마우스는 대조군으로 취급하였다. 전신 면역 반응: 21일차 및 42일차에 마우스에서 출혈을 일으켰고, 효소결합 면역흡착 검사(ELISA)를 통해 혈청 중 항-M2e 항체 반응(1:6400 희석)을 분석하였다. 도 4c(1)~(3) 42일차 혈청 중 항-M2e 항체 반응- 도 4c(1) IgG, 도 4c(2) IgG1 및 도 4c(3) IgG2a. 분석에 개별 마우스 혈청을 사용하였다. 데이터는 평균±SD로 표현하였다. 일방향 ANOVA 테스트를 사용하여 그룹들을 비교하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001. 바이러스 면역유발. (도 4d(1)~(2)) 43일차에 A/캘리포니아/07/2009 H1N1 바이러스의 3xLD50(치사량 50%)으로 마우스에 면역을 유발하였다. 체중 변화 및 감염의 중증도에 대해 마우스를 매일 관찰하였다. 도 4d(1) 체중의 변화 백분율, 도 4d(2) 감염 후 접종된 마우스의 생존율 백분율. 각 그룹당 마우스 n=5 .
알레르기 유발 항원-특이면역치료를 위한 치은 틈새에서의 접합 상피 표적화.
실시예 4: 치실로 매개된 접합 상피(JE)로의 땅콩 추출물(PE)의 전달이 마우스에서 강력한 전신 및 점막 항체 반응을 유도한다(백신 앵글).
도 5a 내지 5e는 치실 매개 백신 전달 및 면역 반응의 특징 규명을 보여준다. (도 5a) 백신접종 일정: 항원(땅콩 추출물(PE))이 침적된 치실을 잇몸에 치실질함으로써 Balb/c 마우스(n=5)에 백신 접종을 하였다. 치실에 25 μg PE +/- 25 μg CpG(단일가닥 올리고데옥시뉴클레오타이드 보조제)을 침적시켰고, 총 4주에 걸쳐, 매주 마우스에 백신을 접종하였다. 어떤 코팅 또는 침적물 없는 치실로 처리된 마우스는 대조군으로 취급하였다. 전신 면역 반응: 28일차 및 56일차에 마우스에 출혈을 일으켰고, 효소결합 면역흡착 검사(ELISA)를 통해 혈청 중에 항-PE 항체 반응(1:12500 희석)을 분석하였다. 도 5b(1)~(3) 56일차에 혈청 중 항-PE 항체 반응- 도 5b(1) IgG, 도 5b(2) IgG1 및 도 5b(3) IgG2a. 분석에 개별 마우스 혈청을 사용하였다. (도 5c(1)~(3)) 기억 면역 반응: 접종된 마우스를 안락사시키고, 골수 세포를 채취하였다. 10% 소태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신 항생제으로 보충된 RPMI 배지로 웰당 1x106 세포의 농도로 3회 세포를 배양하였다. 배양된 세포의 상청액을 96시간 후 채취하여, 항-PE 반응을 분석하였다. 항-PE 도 5c(1) IgG, 도 5c(2) IgG1, 도 5c(3) IgG2a. 이와 같은 결과는 반응이 국소적이지 않고 전신에 걸쳐 나타나며, 앞으로 동일한 항원(Ag)에 노출되는 경우를 대비하여 개체에게서 기억 반응을 유도할 수 있었음을 시사한다. (도 5d) 점막 면역 반응. 56일차에, 대변, 비강 세척액 및 폐 세척액을 접종된 및 미처리 마우스에게서 채취하였다. 항-PE 도 5d(1) 대변에서의 IgG(1:5 희석), 도 5d(2) 대변에서의 IgA(1:5 희석), 도 5d(3) 비강 세척액에서의 IgG(희석되지 않음), 및 도 5d(4) 폐 세척액에서의 IgG(희석되지 않음). (도 5e(1)~(2)) 치실을 통해 백신 접종된 마우스의 5e(1) 혈청 또는 도 5e(2) 골수 혈청에서 유의미한 양의 IgE가 검출되지 않았고, 이것은 표적 부위인 접합 상피가 전달된 Ag에 대해 개체를 감작화하지 않았음을 시사한다. 데이터는 평균±SD로 표현하였다. 일방향 ANOVA 테스트를 사용하여 상이한 혈청 희석에서 그룹들을 비교하였다.*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001.
실시예 5: 치실로 매개된 접합 상피(JE)로의 땅콩 추출물(PE)의 전달이 마우스에서 강력한 전신 항체 반응을 유도한다(치료 요법). '식품 알레르기'의 면역치료를 위한 접합 상피의 표적화
도 6a 내지 6d는 땅콩 알레르기 유발 항원 면역치료 일정을 보여준다. (도 6a) 면역치료 일정: 연속 5주 동안 1주일 간견으로 경구 투여[1mg 땅콩 추출물 (PE)+ 15μg 콜레라 독소(CT)]를 통해 Balb/c 마우스(n=5)를 감작화하였다. 이어서항원-코팅된 치실을 치실질함으로써 마우스에 백신을 접종하였다. 치실을 5 μg PE +/- 5 μg CpG(단일가닥 올리고데옥시뉴클레오타이드 보조제)로 코팅하고, 총 3주에 걸쳐 매주 3회 마우스에 백신을 접종하였다. 어떤 처리도 되지 않은 감작화된 마우스는 대조군(미처리군)으로 유지하였다. 백신접종(PV) 10일 후 마우스에서 출혈을 일으켰다. 백신접종 8주 후, 복강내 경로(IP)를 통해 PE 알레르기 유발 항원(500 μg)으로 마우스에서 면역을 유발하였고, 이어서 안락사시킨 후, 상이한 조직들을 채취하였다. (도 6b(1)~(3)) 효소결합 면역흡착 검사(ELISA)를 통해 혈청 중 항-PE 항원(1:12500 희석)을 확인하였다. 백신접종 10일 후, 항-PE 도 6b(1) IgG, 도 6b(2) IgG1 및 도 6b(3) IgG2a 항체 반응. 분석에 개별 마우스 혈청을 사용하였다. 데이터는 평균±SD로 표현하였다. 일방향 ANOVA 테스트를 사용하여 상이한 혈청 희석에서 그룹들을 비교하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.및 ns: 유의미하지 않음. PE 유도 과민증. (도 6c) (1) PE로 IP 면역유발 후 플라즈마 MCPT-1 수치. 장 조직의 조직학적 분석. (도 6d) 백신접종 8주후, 복강내 경로를 통해 PE 알레르기 유발 항원(500 μg)으로 마우스에서 면역을 유발하였다. 이어서 마우스를 안락사시켰고, 근위, 중위, 원위에서 작은 창자를 채취하여, 절단을 위해 고정, 탈수 및 파라핀 왁스에 내재시켰다. 조직 단편을 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색으로 염색하여 조직학을 위해 단편화하였다. 도 6d(1) 상이한 처리군의 마우스로부터 유래된 각각의 단편에서 계수된 호산구의 개수. 도 6d(2) H&E 염색 창자의 명시 야상으로, 화살표가 호산구 침투를 가리킨다. 개별 마우스 시료를 분석에 사용하였다. 데이터는 평균±SD로 표현하였다. 일방향 ANOVA를 사용하여 그룹들을 비교하였다.*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 및 ns: 유의미하지 않음.
실시예 6: 치실로 매개된 접합 상피(JE)로의 난백 알부민(Ova)의 전달이 마우스에서 강력한 전신 항체 반응을 유도한다(치료 요법). '기도 알레르기'의 면역치료를 위한 접합 상피의 표적화.
도 7a 내지 7d는 기도 알레르기 유발 항원 면역치료를 보여준다. (도 7a) 면역치료 일정: 1주일 간격으로 복부 내(IP) 주사(Ova 25μg + 명반 2mg(보조제)) 2회를 통해 Balb/c 마우스(n=5)를 감작화하였다. 감작화 10일 후(PS), 3일 연속으로 비강내 경로(IN)를 통해 Ova(50 μg)로 마우스에서 면역을 유발하여 기도 염증을 일으켰다. 이어서 항원-침적된 치실을 치실질함으로써, 마우스에게 백신을 접종하였다. 치실을 25 μg Ova +/- 25 μg CpG(단일가닥 올리고데옥시뉴클레오타이드 보조제)로 코팅하였고, 총 3주에 걸쳐 매주 3회 마우스에 백신을 접종하였다. 어떤 처리도 되지 않은 감작화된 마우스는 대조군으로 유지하였다(미처리군). 백신접종 10일 후 마우스에 출혈을 일으켰다. 백신접종 28일 후, 3일 연속 비강내 경로(IN)를 통해 Ova 알레르기 유발 항원(50μg)으로 마우스에서 면역을 유발하였고, 이어서 안락사시켜서, 상이한 조직들을 채취하였다. 전신 면역 반응: 백신접종 10일 후 효소결합 면역흡착 검사(ELISA)를 통해 혈청 중(1:12500 또는 1:500 또는 1:20 희석) (도 7b(1)~(4)) 항-Ova 도 7b(1) IgG, 도 7b(2) IgG1, 도 7b(3) IgG2a 및 도 7b(4) IgE 항체 반응을 분석하였다. (도 7c) 면역유발 후 폐 세척액 분석. 이어서 마우스를 안락사시키고, 폐 세척액의 점막 분비물을 채취하였다. 폐 세척액 중 도 7c(1) 호산구 및 도 7c(2) 호중구의 세포 계수 - 세포를 diff-stain 키트로 염색하고, 공초점 현미경 하에서 세포를 관찰함으로써 계수하였다. 폐의 조직학적 분석: (도 7d) 이어서 마우스를 안락사시켰고, 폐를 수확하여, 고정하고, 세척하여 조직학을 위해 단편화하였다. 점액 침적물을 염색하기 위해 과요오드산-Schiff(PAS)로, 또는 콜라겐 침적물을 염색하기 위해 트리크롬 블루(TCB)로 조직 단편을 염색하였다. PAS로 염색한 폐(맨 위 패널) 및 TCB로 염색한 폐(맨 아래 패널)의 대표적인 명시 야상. 맨 위 패널의 화살표가 점액 침적물을 가리키고, 맨 아래 패널의 화살표가 콜라겐 침적물을 가리킨다.
실시예 7. 치실 상의 침적을 위한 방법(들).
시장에서 판매되는 다수의 치실은 물질의 연속적인 코팅제(예컨대, 왁스, 풍미제 등)로 코팅된다. 현재, 전체 치실 길이(치실 카트리지 내에서 수백 피트)가 코팅되어 있다. 이러한 코팅은 적절히 특징이 규명되지 않았고, 의학적 응용을 위해 사용될 수 없는데, 예컨대, 백신을 전달하거나 또는 약물/치료 분자를 전달하는 경우, 공지된 양의 약을 전달하는 것이 중요하기 때문이고, 여기서 추천된 용량에서의 편차가 해롭거나 또는 부작용을 유발할 수 있다.
본 발명의 조성물과 방법은 유체 분배를 통한 간단한 방식의 분자 코팅을 다룬다. 상기 방법이 사용되어 구체적인 길이의 치실에, 상기 치실의 구체적인 표면 상에, 그리고 심지어 별도의 위치에 하나 이상의 활성 제제/분자를 코팅할 수 있다. 또한, 상기 방법은 필요한 경우 양면을 코팅하는 데 사용될 수 있다.
본 발명은 치실을 코팅하는 신규한 방법을 제공한다. 물질(예를 들어, 합성 분자 또는 중합체, 아미노산 또는 이것의 중합체, 뉴클레오타이드 또는 이것의 중합체, 지질, 탄수화물, 천연 물질, 항원/ 알레르기 유발 항원/ 보조제/약물/ 이들의 조합)이 잇몸 조직에 전달되기 위해 치실의 표면 상에 코팅될 수 있다. 상기 전달은 예를 들어, 조절 면역 반응을 전신 효과 또는 국소 효과로 조절하기 위해, 임의의 의도적인 용도를 가질 수 있다. 치실의 표면은 치실의 더 짧은 또는 더 긴 거리/길이에 걸쳐 생물제제를 침적(상기 침적 공정에 따르면, 치실의 단일 근접 부분에 또는 각각의 상기 침적된 영역 사이의 동일한 또는 상이한 간격을 갖는, 치실의 둘 이상의 별개 부분 상에 침적이 이루어진다)시키고(침적 공정은 치실에 액적을 놓거나, 또는 치실에 액적(들)을 끌어서, 피펫 또는 또는 분사 코팅, 또는 잉크 젯 인쇄, 또는 피펫 기반 코팅, 또는 카트리지 인쇄 또는 이들의 조합을 사용하여 치실의 일정 거리/길이에 걸쳐 액적을 바르는 단계를 포함함), 상기 코팅이 건조되도록 방치함으로써 코팅될 수 있다. 본 발명을 입증하기 위해, 우리는 항원/ 알레르기 유발 항원/ 펩타이드/마이크로입자/ 나노입자/ 단일 가닥 데옥시리보핵산(DNA)을 사용하여 효과성과 개념증명을 보여준 바 있다. 다양한 양의 생물제제가 치실의 표면 상에 코팅될 수 있다. 코팅된 물질은 단순한 치실질로 잇몸 조직에 쉽게 전달될 수 있다.
코팅된 치실을 사용하는 의학적 응용을 위해, 하기의 특성을 갖는 것이 중요하다: (a) 코팅은 코팅된 치실의 짧은 길이에 걸쳐 일관됨으로써 사용자에 의해 잇몸 주머니에 일관되게 전달될 수 있어야 하고; (b) 공지된 양의 제형이 치실에 코팅되어야 하고; 및/또는 (c) 코팅은 의도된 사용 시기까지 표면에 부착되어 있어야 한다.
치실은 종종 소수성(예컨대 TEFLON® 또는 NYLON®) 물질로 이루어져서, 코팅액을 사용하여 이들 표면을 습윤시키는 것이 어렵다. 습윤이 어렵기 때문에, 치실에 연속적이고 균일한 코팅을 달성하기가 어렵다. 코팅 용액을 제조하기 위해 여러 상이한 용매가 사용될 수 있는데, 치실에 코팅해야 하는 생물제제에 물이 선호되고, 수계 코팅용액을 치실에 코팅하는 것이 훨씬 어렵다. 하지만, 활성 제제가 물에 용해되지 않는(또는 부분적으로 용해되는) 용매 중에 존재하고, 활성 제제가 치실에 침적되고, 용매가 활성 제제를 남기고 증발되는 비수성 용액 또한 사용될 수 있다.
연속적인 코팅을 제조하는 대신, 별도의 액적이 치실 표면에 침적될 수 있다. 이렇게 함으로써, 길이 전체에 걸쳐 코팅을 균일하게 펴 바를 필요가 적게 되고, 재생산 가능한 코팅 및 패턴이 달성될 수 있다. (1) 유체 분배 시스템을 사용하여(수동 또는 자동 또는 이것의 조합) 액적이 치실에 배치될 수 있다. 개념증명을 위해, 수동 분배가 이루어졌다. (2) 치실 표면은 (예를 들어 친수성 중합체로 코팅함으로써, 또는 예를 들어 산소 플라즈마 처리에 의해, 또는 치실 표면의 표면 에너지를 변화시킬 수 있는 기타 종래의 표면 처리 방식에 의해) 친수성이 되어 코팅 액의 펴 바름이 좀 더 용이해질 수 있다. (3) 치실 표면에 코팅액을 도포한다. 특정 기간 이후 그리고 충분한 용매가 증발된 후, 치실 위의 액체는 기계적으로 펴 바를 수 있다. 일부 용매가 증발된 후, 코팅액의 점도가 증가되고, 이것을 치실 위에 펴 바르는 능력이 개선된다.
치실에 침적물을 배치하기 위한 분배 시스템(수동, 자동, 또는 이들의 조합)을 사용하는 것의 이점은 하기와 같다: (1) 분사/담그기 코팅과 비교하여 침적시키는 제형의 손실이 적음; (2) 정밀한 양을 침적시킬 수 있음; (3) 여러 침적 제형을 침적시킴; 및/또는 (4) 수성 용액조차 액적으로 침적될 수 있어서 치실의 표면 수정이 방지될 수 있으므로 균일한 패턴을 생성할 수 있다.
분사 또는 담그기 코팅은 물질의 낭비를 초래할 수 있다. 이와 달리, 치실의 표면 상의 별도의 침적물로 침적시키는 것의 사용은 물질의 손실을 거의 또는 전혀 초래하지 않는다. 치실에 침적시키기 방식으로는, 정밀한 제어(예를 들어, 목표가 길이/직경이 1 mm 미만인 작은 점을 치실에 침적시키는 것이라면)가 달성되기 어렵다. 하지만, 유체 분배를 통해, 심지어 나노리터에서 피코리터에 이르는 양까지 치실의 공지된 정밀한 위치에 간단히 침적될 수 있다. 유체 분배로, 상이한 침적 자리 사이에 작은 간격을 두고 상이한 물질(들)을 침적시키는 것 또한 복잡하지 않다. 이러한 수준의 정확도 및 정밀도는 분사/담그기 코팅으로 달성하기 어렵다. 본 발명의 방식이 사용되어 침적 장치를 개발 및 구축할 수 있고, 이와 같은 장치는 약국, 가정 또는 의원에 배치될 수 있다. 더 나아가, 제안된 발명을 사용하여, 용해도를 위한 상이한 용매 요건을 가진 활성 제제(예를 들어, 물을 용매로 사용하는 항원인 하나의 활성 제제가 있는 반면, 유기 용매 요건을 가진 보조제로서 다른 활성 제제가 있음)가 치실에 침적될 수 있다.
도 8은 침적 능력, 치실의 일 측에만 짧은 길이 또는 더 긴 길이를 가진 침적물의 단일 부위로서, 또는 복수의 별도 침적 부위로서, 상이한 침적 패턴으로, 펩타이드, 나노입자, 단백질, 올리고뉴클레오타이드, 마이크로입자로 치실의 침적을 보여준다.
도 9는 수용성 및 비수용성 물질, 예컨대 꽃가루 입자 마이크로입자를 침적시키는, 침적 능력을 보여준다.
도 10은 침적 능력 및 예로서 2가지 상이한 화합물로 만든 상이한 침적 패턴을 보여준다. 하나의 제형은 수중의 NHS-로다민(형광 시약)에 접합된 난백 알부민(단백질)으로 'A'라 지칭하고, 두 번째 제형은 수중의 금 나노입자 및 CpG(단일 가닥 DNA)에 접합된 M2e 펩타이드로, 'B'라 지칭한다.
도 11은 복수의 물질의 침적 능력을 보여주는데, 여기서는 4개의 구별된 부분으로 침적된 4가지 상이한 식용 색소(파랑, 초록, 노랑, 빨강)가 보여진다.
도 12는 상이한 제형으로 치실의 양면을 코팅하기 위한 코팅 능력을 보여준다.
도 13은 치실을 코팅하기 위한 자동 코팅 스테이션(10)의 예를 보여준다. 자동 코팅 스테이션(10)은 1차원 또는 2차원으로의 움직임을 허용하는 제어된 선형 운동 스테이지(14)를 포함하는 스탠드(12)를 포함하는데, 본 구현예에서는 2차원 스테이지로 표현되고, 주사기 조립체(18)가 부착되어 치실(22) 위에 액적(들)(20)의 전달을 제어하는 등(16)이 구비된다. 스테이지는 컴퓨터(24)로 제어되는데, 이것은 제어된 선형운동 스테이지(14) 및/또는 주사기 조립체(18)에 연결될 수 있다.
도 14는 치실 시스템의 설계의 2가지 예를 보여준다.
본 명세서에서 논의된 임의의 구현예가 본 발명의 임의의 방법, 키트, 시약 또는 조성물과 관련하여 구현될 수 있고, 그리고 그 반대도 가능하다고 생각된다. 더 나아가, 본 발명의 조성물이 사용되어, 본 발명의 방법을 달성할 수 있다.
본원에 기술된 특정 구현예는 예시로서 보여지는 것으로, 본 발명의 제한으로 여겨져서는 안 됨이 이해될 것이다. 본 발명의 주요 특징이 본 발명의 범위에서 벗어나지 않으면서, 다양한 구현예에 활용될 수 있다. 당해기술의 기술자는 단지 일상적인 실험, 본원에 기술된 구체적인 절차에 대한 수많은 등가물을 사용하는 것을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이와 같은 등가물은 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 간주되고, 청구항에 의해 포함된다.
본 명세서에서 언급된 모든 공개물과 특허 출원은 본 발명이 속한 당해기술의 숙련가의 수준을 시사한다. 모든 출판물과 특허 출원은 마치 개별 공개물과 특허 출원이 구체적으로 그리고 개별적으로 참조로 편입되었음이 시사된 것과 마찬가지로, 본원에 참조로 편입된다.
청구항 및/또는 명세서에서 용어 '포함하는'과 함께 사용될 때 단수 관사 ['a' 또는 'an']의 사용은 '하나'를 의미할 수 있으나, 이것은 또한 '하나 이상의', '적어도 하나의' 및' 하나 보다 많은', 및 '하나 또는 그 이상의'의 의미와 일치한다. 청구항에서 사용된 용어 '또는'은, 본 개시가 대안 및 '및/또는'만을 가리키는 정의를 지지하지만, 대안을 언급한다고 명쾌하게 시사되지 않는 한 또는 대안이 상호 배타적인 경우, '및/또는'을 의미한다. 본 출원 전반에 걸쳐, 용어 '약'은 값이 장치, 상기 값을 결정하는 데 활용되는 방법, 또는 연구 주제들 사이에서 존재하는 변형에 대한 본질적인 오류 변형을 포함함을 시사하기 위해 사용된다.
본 명세서 및 청구항에서 사용된 단어 '포함하는'(임의의 형태들, 예컨대 '포함한다'), '가지는'('가지는'과 관련하여 임의의 형태, 예컨대 '가지다'), '포함되는'('포함되는'과 관련하여 임의의 형태, 예컨대 '포함되다') 또는 '함유하는'('함유하는'의 임의의 형태, 예컨대 '함유하다')는 포함적이거나 또는 개방적으로, 추가적인, 언급되지 않은 요소들 또는 방법 단계를 배제하지 않는다. 본원에 제공된 조성물들 및 방법들의 구현예에서, '포함하는'은 '필수적으로 이루어진' 또는 '이루어진'으로 교체될 수 있다. 본원에 사용된 문구 '필수적으로 이루어진'은 청구된 발명의 특징 또는 기능에 물질적으로 영향을 미치지 않는 것뿐만 아니라 명시된 정수(들) 또는 단계들을 요구한다. 본원에 사용된 용어 '이루어지는'은 언급된 정수(예를 들면, 특징, 요소, 특성, 속성, 방법/공정 단계 또는 한계) 또는 정수들의 모임(예를 들면, 특징(들), 요소(들), 특성(들), 속성(들), 방법/공정 단계 또는 제한(들))만의 존재를 시사하기 위해 사용된다.
본원에 사용된 용어 '또는 이들의 조합'은 상기 용어에 앞서 나열된 항목들의 모든 순열 및 조합을 가리킨다. 예를 들어, 'A, B, C, 또는 이들의 조합'은 A, B, C, AB, AC, BC, 또는 ABC 중 적어도 하나를 포함하는 것이고, 특별한 문맥에서 순서가 중요한 경우, BA, CA, CB, CBA, BCA, ACB, BAC, 또는 CAB를 포함한다. 이 예를 계속 사용하면, 하나 이상의 항목 또는 용어의 반복, 예컨대 BB, AAA, AB, BBC, AAABCCCC, CBBAAA, CABABB 등을 함유하는 조합이 명백히 포함된다. 당해기술의 숙련가는 문맥에서 명확히 드러내지 않는 한, 전형적으로 임의의 조합에서 항목 또는 용어의 수에 대한 제한이 없음을 이해할 것이다.
본원에 사용된 근사치의 단어들, 예컨대, 비제한적으로, '약', '실질적인', 또는 '실질적으로'는 수식된 경우, 반드시 절대적이거나 완벽하지 않다고 이해되는 상황을 가리키지만, 당해기술의 숙련가가 상기 상황이 존재하는 것으로 지정하는 것을 보장하기에 충분한 근사치로 간주될 것이다. 설명이 얼마나 달라질 수 있는지는 변화가 얼마나 크게 도입될 수 있는지 그리고 당해기술의 숙련가가 얼마나 크게 수식된 특징이 수식되지 않은 특징의 필수 특성 및 능력을 여전히 가진 것으로 인식하게 하는지에 달려있다. 일반적으로, 앞서 논의된 바처럼, 근사치의 단어,예컨대 '약'에 의해 수식되는 수치는 적어도 ±1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 12 또는 15% 정도 언급된 값에서 달라질 수 있다.
추가적으로, 본원의 섹션 제목은 37 CFR 1.77 하의 제안과 일치되도록 제공되거나 그렇지 않은 경우, 조직적 단서를 제공하기 위한 것이다. 이와 같은 제목들은 본 개시에서 제시될 수 있는 임의의 청구항에서 명시된 발명(들)을 제한하거나 특성화하지 않을 것이다. 구체적으로, 그리고 예시로서, 제목이 '발명의 분야'를 가리킨다고 해도, 또는 그와 같은 청구항은 소위 기술적 분야를 기술하는 이와 같은 제목 하의 언어에 의해 제한되어서는 안 된다. 나아가, '발명의 배경' 섹션에서 기술에 대한 설명은 상기 기술이 본 개시에서 임의의 발명(들)에 대한 선행기술임을 승인하는 것으로 여겨져서는 안 된다. '요약' 역시 청구항에 명시된 발명(들)의 특성화로 간주되어서는 안 된다. 더 나아가, 본 개시에서 단수로 '본 발명'에 대한 언급은 본 개시에서 신규성의 단일 지점만 존재한다고 주장하기 위해 사용되어서는 안 된다. 복수의 발명들이 본 개시를 통해 나온 복수의 청구항들의 제한에 따라 명시될 수 있고, 따라서 그와 같은 청구항은 본 발명(들)을, 그리고 그것에 의해 보호받는 그들의 등가물들을 규정한다. 모든 경우에, 그와 같은 청구항의 범위가 본 개시의 측면에서 그 자체의 장점으로 고려되어야 하지만, 본원에 명시된 제목에 의해 제한되어서는 안 된다.
본원에 개시되고 청구된 모든 조성물 및/또는 방법들은 본 개시의 측면에서 과도한 실험 없이 이루어지고 실행될 수 있다. 본 발명의 조성물들과 방법들은 바람직한 구현예의 측면에서 기술된 바 있는 반면, 당해기술의 숙련가들에게는 본 발명의 개념, 정신 및 범위에서 벗어나지 않으면서 본원에 기술된 단계들 또는 단계들의 서열에서 상기 조성물 및/또는 방법에 적용될 수 있음이 명백해질 것이다. 이와 같이 당해기술의 숙련가들에게 명백한 모든 유사 치환체 및 변형은 첨부된 청구항에서 정의된 바와 같이, 본 발명의 정신, 범위, 및 개념 내에 존재하는 것으로 여겨진다.
특허청과 본 출원에 첨부된 청구항을 해석할 때 본 출원에서 발표된 임의의 특허의 독자를 돕기 위해, 첨부된 청구항이 특정 청구항에서 '~하는 수단' 또는 '~하는 단계'라는 단어가 특정 구현예에서 명백하게 사용되지 않는 한, 특허 출원 일자에 존재하기 때문에, 35 U.S.C. § 112의 제6항, U.S.C. § 112 항 f), 또는 등가물을 초래하기 위한 임의의 첨부된 청구항을 의도하지 않음을 알리고 싶어 한다.
청구항 각각에 대해, 각각의 종속항은, 이전 청구항이 청구항 용어 또는 요소에 적합한 선행 기반을 제공하는 한, 독립항 및 각각의 모든 청구항에 대한 선행 기반 청구항으로부터, 둘 다를 의존할 수 있다.

Claims (105)

  1. 개체에서 면역 반응을 조절하는 방법으로서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 유효량을 치은 틈새에 전달하는 단계를 포함하고, 상기 양은 면역 반응을 활성화 또는 조절하기에 충분한, 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 전정 점막으로의 전달을 위해 표적화되지 않은, 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 면역 반응의 조절이 치은 틈새에서 접합 상피를 표적화함으로써 면역 반응을 활성화 또는 무반응화하는, 방법.
  4. 청구항 1에 있어서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 제공되어 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 치은 틈새로의 전달을 극대화하는, 방법.
  5. 청구항 1에 있어서, 치은 틈새(GC)로의 항원의 투과성을 증가시키는 하나 이상의 제제를 첨가하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  6. 청구항 1에 있어서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 0.001% 내지 100%가 치은 틈새의 접합 상피(JE)에서 침적물(depot)로 존재하는, 방법.
  7. 청구항 1에 있어서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 치은 틈새의 접합 상피로 반복적으로 제공되는, 방법.
  8. 청구항 1에 있어서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 접합 상피로 음식 또는 음료의 섭취 전후로 전달되는, 방법.
  9. 청구항 1에 있어서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 하루, 한 주, 한 달 기준으로 1회 또는 1회 이상의 빈도로, 예컨대 하루에 1, 2, 3, 4, 5 또는 6회, 한 주에 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7회, 또는 한 달에 1, 2, 3 또는 4회 적용되는, 방법.
  10. 청구항 1에 있어서, 둘 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 치은 틈새의 접합 상피(JE)에 전달되는, 방법.
  11. 청구항 1에 있어서, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 개체를 상기 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대해 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 탈감작화(desensitize)시키는, 방법.
  12. 청구항 1에 있어서, 항원, 면역원, 또는 이들의 조합이 개체에서 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대한 면역 반응을 0.1 내지 100%로 촉발하여 상기 항원, 면역원, 또는 이들의 조합에서 상기 개체를 보호하는, 방법.
  13. 청구항 1에 있어서, 상기 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하기 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상 전에, 접합 상피(JE)로의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 전달이 이루어지는, 방법.
  14. 청구항 1에 있어서, 상기 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하고 나서 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상이 지난 후에, 접합 상피(JE)로의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 전달이 이루어지는, 방법.
  15. 청구항 1에 있어서, 접합 상피에 전달되는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 양이 피코그램 내지 밀리그램의 범위인, 방법.
  16. 청구항 1에 있어서, 면역 반응은 활성화, 조정 또는 무반응화 면역 반응인, 방법.
  17. 개체에서 면역 반응을 촉발하는 방법으로서,
    하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 유효량을 치은 틈새로 제공하는 단계를 포함하고, 상기 양은 항원에 대한 면역 반응을 촉발하기에 충분하고;
    하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 치은 틈새에 있는 접합 상피를 표적화하는 전달장치에 내재되거나, 코팅되거나 또는 부착되는, 방법.
  18. 청구항 17에 있어서, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 전정 점막에 전달되지 않는, 방법.
  19. 청구항 17에 있어서, 면역 반응의 촉발이 치은 틈새의 접합 상피를 표적화함으로써 면역 반응을 활성화 또는 무반응화하는 것인, 방법.
  20. 청구항 17에 있어서, 상기 전달 장치의 두께가 5 mm 미만, 바람직하게는 3 mm 미만, 바람직하게는 1 mm 미만인, 방법.
  21. 청구항 17에 있어서, 전달 장치가 천연 또는 합성 중합체, 유기 물질, 금속, 무기 물질 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  22. 청구항 17에 있어서, 전달 장치가 점막접착층 또는 소수성 층 또는 친수성 층 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  23. 청구항 17에 있어서, 전달 장치가 치은 틈새로의 항원의 확산을 허용하는 미세다공성 구조를 포함하는, 방법.
  24. 청구항 17에 있어서, 상기 장치가 치은 틈새에 도달하도록 설계된 시스템/장치, 치간 칫솔 또는 브리스틀(bristle)을 포함하는, 방법.
  25. 청구항 17에 있어서, 접합 상피에 전달되는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 양이 피코그램 내지 밀리그램의 범위에 속하는, 방법.
  26. 청구항 17에 있어서, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합은 개체의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대해 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 탈감작화시키는, 방법.
  27. 청구항 17에 있어서, 항원, 면역원, 또는 이들의 조합이 항원, 면역원, 또는 이들의 조합에 대한 상기 개체의 면역 반응을 0.1 내지 100%로 촉발하는, 방법.
  28. 청구항 17에 있어서, 상기 개체가 음식, 음료, 또는 둘 다를 섭취하기 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상 전에 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 접합 상피(JE)에 전달되는, 방법.
  29. 청구항 17에 있어서, 상기 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하고 나서 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상이 지난 후, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 접합 상피(JE)에 전달되는, 방법.
  30. 청구항 17에 있어서, 면역 반응의 증가가 면역 반응의 활성화, 조정, 또는 무반응화의 증가인, 방법.
  31. 청구항 17에 있어서, 면역 반응이 세균, 바이러스, 곰팡이류, 원생동물, 기생충, 프리온, 독소, 암, 알레르기, 또는 자가면역 질환 중 적어도 하나를 표적으로 하는, 방법.
  32. 청구항 17에 있어서, 하나 이상의 항원이 단백질, 펩타이드, 데옥시리보핵산(DNA) 올리고뉴클레오타이드, 리보핵산(RNA) 올리고뉴클레오타이드, 망가진 세포, 온전한 세포, 지질, 독소 변이체, 탄수화물, 바이러스-유사 입자, 리포좀, 살아 있는 약화된 또는 죽은 천연 또는 재조합 미생물, 비로솜, 중합체/무기/유기 마이크로 및 나노입자, 또는 면역 자극 복합체(ISCOMS) 중 적어도 하나에서 선택되는, 방법.
  33. 청구항 17에 있어서, 항원이 T- 및 B 세포 림프구증식 질환, 난소암, 췌장암, 두경부암, 편평 세포 암종, 위암, 유방암, 전립선암 또는 비소 세포 폐암에서 선택된 암 세포 또는 이것의 일부분에서 수득된 펩타이드를 포함하는, 방법.
  34. 청구항 17에 있어서, 항원이 땅콩, 조개류, 달걀 단백질, 우유 단백질, 콩류, 견과류에서 선택된 식품 알레르기 유발 항원이거나, 또는 집먼지 진드기 또는 꽃가루에서 선택된 기도 알레르기 유발 항원인, 방법.
  35. 청구항 17에 있어서, 항원이 치실 또는 얇은 장치, 또는 끈/패치 또는 치은 틈새로의 배치에 적합한 두께를 가진 치간 칫솔에 부착, 흡착, 또는 물리적으로 또는 화학적으로 고정되는 것 중 적어도 하나인, 방법.
  36. 청구항 17에 있어서, 사이토카인, 케모카인, 톨 유사 수용체 리간드 또는 활성화제, 명반, 뮤라밀 다이펩타이드, 피리딘, 키토산, 사포닌, 오일, 에멀젼, 세균성 세포벽 추출물, 세균성 단백질, 세포질 세균성 DNA 또는 모방체, 바이러스 RNA 또는 모방체, 합성 올리고뉴클레오타이드, 인터페론(IFN) 유전자 자극제(STING) 작용제(2'3'-cGAMP, c-di-AMP, 2'3'-c-di-AM(PS)2 (Rp,RP), c-di-GMP, CL401, CL413, CL429, 플라젤린, 이미퀴모드, LPS-EB, MPLA, ODN 1585, ODN 1826, ODN2006, ODN2395, pam3CSK4, poly(I:C), R848, TDB), 천연 중합체(폴리-γ-글루탐산, 키토산, 마난, 리포마난, 레티난, 덱스트란), 합성 중합체(폴리－N-이소프로필아크리알마이드, 공중합체, 블록 중합체, 폴리포스파젠, 고분자 전해질(polyelectrolytes), 고분자 무수물, 폴리메타크릴레이트, 폴리글리콜-코-락타이드, 폴리카프로락톤, 폴리비닐피롤리돈, 양이온 중합체) 및 이들의 조합에서 선택된 하나 이상의 보조제를 추가로 포함하는, 방법.
  37. 청구항 17에 있어서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 선천 면역 반응, 적응 면역 반응, 또는 둘 다를 활성화하는, 방법.
  38. 치은 틈새의 접합 상피를 표적으로 하는 전달 장치 상에 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 유효량을 포함하는 면역화(immunization)로서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 양은 면역 반응을 활성화 또는 조절하기에 충분한, 면역화.
  39. 청구항 38에 있어서, 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 전정 점막에 전달되지 않는, 면역화.
  40. 청구항 38에 있어서, 면역 반응의 조절은 치은 틈새의 접합 상피를 표적으로 함으로써 면역 반응을 활성화 또는 무반응화하는, 면역화.
  41. 청구항 38에 있어서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합이 제공되어 치은 틈새로의 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 전달을 극대화하는, 면역화.
  42. 청구항 38에 있어서, 치은 틈새(GC)로의 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 투과성을 증가시키는 하나 이상의 제제를 추가로 포함하는, 면역화.
  43. 청구항 38에 있어서, 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 0.001 내지 100%가 치은 틈새의 접합 상피(JE)의 침적물로 존재하는, 면역화.
  44. 청구항 38에 있어서, 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 운반체, 부형제, 희석제, 완충제, 또는 염을 추가로 포함하는, 면역화.
  45. 하나 이상의 활성 제제의 미리 결정된 양을 포함하는 치실을 만드는 방법으로서,
    치실을 제공하는 단계; 및
    상기 치실 상에 약제학적으로 허용가능한 운반체 중 하나 이상의 활성 제제 침적물을 침적시키는 단계를 포함하고,
    각각의 침적물은 공지된, 미리 결정된 양의 활성 제제를 갖는, 방법.
  46. 청구항 45에 있어서, 각각의 이웃한 침적물이 동일한 활성 제제 또는 상이한 활성 제제를 포함하거나, 또는 각각의 이웃한 침적물이 상이한 농도의 동일한 활성 제제를 포함하거나; 또는 각각의 이웃한 침적물이 상이한 농도의 상이한 활성 제제를 포함하거나; 또는 각각의 이웃한 침적물이 이웃한 침적물과 상이한 평면 상에 놓이거나; 각각의 이웃한 침적물이 상기 침적물로부터 상기 치실의 맞은편 상에 놓이거나; 또는 이웃한 침적물 각각이 이전의 이웃한 침적물과 상이한 활성 제제를 포함하는, 방법.
  47. 청구항 45에 있어서, 각각의 이웃한 침적물이 수성-기반 용매(들) 중 용해도를 가진 활성 제제와 유기 용매(들) 중 용해도를 가진 기타 활성 제제에서 선택된 상이한 용매 요건을 가진 상이한 활성 제제를 포함하는, 방법.
  48. 청구항 45에 있어서, 둘 이상의 활성 제제가 동일한 또는 상이한 거리/길이를 갖는 침적물의 형태로 서로의 상면에 침적되는, 방법.
  49. 청구항 47에 있어서, 상이한 용매 요건을 가진 활성 제제가 동일한 또는 상이한 거리/길이에 걸쳐 맞은편 상에 침적되는, 방법.
  50. 청구항 48에 있어서, 동일한 용매 요건을 가진 활성 제제가 동일한 또는 상이한 거리/길이를 갖는 서로의 상면에 침적되는, 방법.
  51. 청구항 45에 있어서, 상이한 용매 요건을 가진 활성 제제가 동일한 또는 상이한 거리/길이를 갖는 맞은편에 침적되는, 방법.
  52. 청구항 45에 있어서, 치실이 단단하거나, 너덜너덜하거나, 여러 가닥을 포함하거나, 접착성을 갖도록 처리되었거나, 약제학적으로 허용가능한 운반체에 접착되도록 처리되었거나, 또는 활성 제제에 접착되도록 처리된, 방법.
  53. 청구항 45에 있어서, 각각의 이웃한 침적물이 이웃한 액적 또는 패치 사이를 구별하는 염료 또는 표시를 포함하는, 방법.
  54. 청구항 45에 있어서, 치실이 활성 제제, 약제학적으로 허용가능한 운반체, 또는 둘 다에 담가지지 않는, 방법.
  55. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 전정 점막에 전달되지 않는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 아미노산 또는 그것의 중합체, 뉴클레오타이드 또는 그것의 중합체, 지질, 탄수화물, 천연 물질, 약물 또는 이들의 조합에서 선택되는, 방법.
  56. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 치은 틈새의 접합 상피를 표적화함으로써 면역 반응을 활성화 또는 무반응화하는 면역 반응을 촉발하는, 방법.
  57. 청구항 45에 있어서, 치실의 두께가 5 mm 미만이고, 바람직하게는 3 mm 미만이고, 바람직하게는 1 mm 미만인, 방법.
  58. 청구항 45에 있어서, 치실이 천연 또는 합성 중합체, 유기 물질, 금속, 무기 물질 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  59. 청구항 45에 있어서, 치실이 점막접착층 또는 소수성 층 또는 친수성 층 또는 조합을 포함하는, 방법.
  60. 청구항 45에 있어서, 치실이 치은 틈새로의 항원의 확산을 허용하는 미세다공성 구조를 포함하는, 방법.
  61. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제는 접합 상피에 전달되는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합의 피코그램 내지 밀리그램의 범위의 양을 포함하는, 방법.
  62. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 개체를 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대하여 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 탈감작화시키는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  63. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 개체를 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대하여 0.1 내지 100% 사이로 탈감작화시키는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  64. 청구항 45에 있어서, 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하기 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상 전에, 치실이 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 접합 상피에 전달하는, 방법.
  65. 청구항 45에 있어서, 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하고 나서 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상이 지난 후, 치실이 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 접합 상피에 전달하는, 방법.
  66. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 면역 반응을 활성화, 조정, 또는, 무반응화하는, 방법.
  67. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 세균, 바이러스, 곰팡이류, 원생동물, 기생충, 프리온, 독소, 암, 알레르기, 또는 자가면역 질환 중 적어도 하나를 표적으로 하는 면역 반응을 촉발하는, 방법.
  68. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 단백질, 펩타이드, 데옥시리보핵산(DNA) 올리고뉴클레오타이드, 리보핵산(RNA) 올리고뉴클레오타이드, 망가진 세포, 온전한 세포, 지질, 독소 변이체, 탄수화물, 바이러스-유사 입자, 리포좀, 살아 있는 약화된 또는 죽은 천연 또는 재조합 미생물, 비로솜, 중합체/무기/유기 마이크로 및 나노입자, 또는 면역 자극 복합체(ISCOMS) 중 적어도 하나에서 선택된 하나 이상의 항원을 포함하는, 방법.
  69. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 T- 및 B 세포 림프구증식 질환, 난소암, 췌장암, 두경부암, 편평 세포 암종, 위암, 유방암, 전립선암 또는 비소 세포 폐암에서 선택된 암 세포 또는 이것의 일부분에서 수득된 펩타이드를 포함하는 항원을 포함하는, 방법.
  70. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 땅콩, 조개류, 달걀 단백질, 우유 단백질, 콩류, 견과류에서 선택된 식품 알레르기 유발 항원이거나 또는 집먼지 진드기 또는 꽃가루에서 선택된 기도 알레르기 유발 항원인 항원을 포함하는, 방법.
  71. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 약물, 예컨대 인슐린, 에피네프린, 스테로이드, 자극제를 포함하는, 방법.
  72. 청구항 45에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 치실 또는 얇은 장치 또는 끈/패치 또는 치은 틈새로 배치되기에 적합한 두께를 가진 치간 칫솔에 부착, 흡착, 또는 물리적으로 또는 화학적으로 고정된 것 중 적어도 하나인 항원을 포함하는, 방법.
  73. 청구항 45에 있어서, 사이토카인, 케모카인, 톨 유사 수용체 리간드 또는 활성화제, 명반, 뮤라밀 다이펩타이드, 피리딘, 키토산, 사포닌, 오일, 에멀젼, 세균성 세포벽 추출물, 세균성 단백질, 세포질 세균성 DNA 또는 모방체, 바이러스 RNA 또는 모방체, 합성 올리고뉴클레오타이드, 인터페론(IFN) 유전자 자극제(STING) 작용제(2'3'-cGAMP, c-di-AMP, 2'3'-c-di-AM(PS)2 (Rp,RP), c-di-GMP, CL401, CL413, CL429, 플라젤린, 이미퀴모드, LPS-EB, MPLA, ODN 1585, ODN 1826, ODN2006, ODN2395, pam3CSK4, poly(I:C), R848, TDB), 천연 중합체(폴리－γ-글루탐산, 키토산, 마난, 리포마난, 레티난, 덱스트란), 합성 중합체(폴리－N-이소프로필아크리알마이드, 공중합체, 블록 중합체, 폴리포스파젠, 고분자 전해질, 고분자 무수물, 폴리메타크릴레이트, 폴리글리콜-코-락타이드, 폴리카프로락톤, 폴리비닐피롤리돈, 양이온 중합체) 및 이들의 조합에서 선택된 하나 이상의 보조제를 추가로 포함하는, 방법.
  74. 청구항 45에 있어서, 침적물의 점도가 0.01 센티푸아즈 (cp), 1 cp, 10 cp, 100 cp, 1000 cp, 10000 cp, 100000 cp, 200000 cp, 300000 cp, 500000 cp, 1000000, 또는 100000000 cp인, 방법.
  75. 하나 이상의 활성 제제의 미리 결정된 양을 포함하는 치실로서,
    치실; 및
    약제학적으로 허용가능한 운반체 중의 활성 제제의 하나 이상의 침적물(depot)의 치실 상의 침적물(deposit)을 포함하고, 각각의 액적 또는 패치는 공지된, 미리 결정된 양의 활성 제제를 갖는, 치실.
  76. 청구항 75에 있어서, 각각의 이웃한 침적물이 동일한 활성 제제 또는 상이한 활성 제제를 포함하거나, 각각의 이웃한 침적물이 동일한 활성 제제를 상이한 농도로 포함하거나; 또는 각각의 이웃한 침적물이 상이한 활성 제제를 상이한 농도로 포함하거나; 또는 각각의 이웃한 침적물이 이웃한 침적물과 상이한 평면에 놓이거나; 또는 각각의 이웃한 침적물이 치실 상의 이웃한 침적물의 맞은편에 놓이거나; 또는 이웃한 침적물 각각이 이전의 이웃한 침적물과 상이한 활성 제제를 포함하는, 치실.
  77. 청구항 75에 있어서, 각각의 이웃한 침적물이, 수성-기반 용매(들)에서 용해도를 갖는 하나의 활성 제제 및 유기 용매(들)에서 용해도를 갖는 다른 활성 제제에서 선택되는 상이한 용매 요건을 가진 상이한 활성 제제를 포함하는, 치실.
  78. 청구항 75에 있어서, 둘 또는 그 이상의 활성 제제가 동일하거나 또는 상이한 거리/길이를 갖는 액적 또는 패치의 형태로 서로의 상면에 침적되는, 치실.
  79. 청구항 77에 있어서, 상이한 용매 요건을 가진 활성 제제가 동일한 또는 상이한 거리/길이에 걸쳐 맞은편에 침적된, 치실.
  80. 청구항 78에 있어서, 동일한 용매 요건을 가진 활성 제제가 동일한 또는 상이한 거리/길이를 갖는 서로의 상면에 침적된, 치실.
  81. 청구항 75에 있어서, 상이한 용매 요건을 가진 활성 제제가 동일한 또는 상이한 거리/길이로 맞은편에 침적된, 치실.
  82. 청구항 75에 있어서, 치실이 단단하거나, 너덜너덜하거나, 여러 가닥을 포함하거나, 접착성을 갖도록 처리되었거나, 약제학적으로 허용가능한 운반체에 접착되도록 처리되었거나, 또는 활성 제제에 접착되도록 처리된, 치실.
  83. 청구항 75에 있어서, 각각의 이웃한 액적 또는 패치가 이웃한 침적물 사이를 구별하는 염료 또는 표시를 포함하는, 치실.
  84. 청구항 75에 있어서, 치실이 활성 제제, 약제학적으로 허용가능한 운반체, 또는 둘 다에 담가지지 않은, 치실.
  85. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 전정 점막에 전달되지 않는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 아미노산 또는 그의 중합체, 뉴클레오타이드 또는 그의 중합체, 지질, 탄수화물, 천연 물질, 약물 또는 이들의 조합에서 선택되는, 치실.
  86. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 치은 틈새의 접합 상피를 표적화함으로써 면역 반응을 활성화 또는 무반응화하는 면역 반응을 촉발하는, 치실.
  87. 청구항 75에 있어서, 치실의 두께가 5 mm 미만이고, 바람직하게는 3 mm 미만이고, 바람직하게는 1 mm 미만인, 치실.
  88. 청구항 75에 있어서, 치실이 천연 또는 합성 중합체, 유기 물질, 금속, 무기 물질 또는 이들의 조합을 포함하는, 치실.
  89. 청구항 75에 있어서, 치실이 점막접착층 또는 소수성 층 또는 친수성 층 또는 이들의 조합을 포함하는, 치실.
  90. 청구항 75에 있어서, 치실이 치은 틈새로 항원의 확산을 허용하는 미세다공성 구조를 포함하는, 치실.
  91. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제는 접합 상피에 전달되는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 약물, 소분자 또는 이들의 조합의 피코그램 내지 밀리그램의 범위의 양을 포함하는, 치실.
  92. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 개체를 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합에 대하여 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 탈감작화시키는 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는, 치실.
  93. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 개체에게 항원, 면역원, 또는 이들의 조합에 대해 0.1 내지 100%로 면역 반응을 촉발하는 항원, 면역원, 또는 이들의 조합을 포함하는, 치실.
  94. 청구항 75에 있어서, 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하기 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간, 또는 그 이상 전에 치실이 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 접합 상피에 전달하는, 치실.
  95. 청구항 75에 있어서, 개체가 음식, 음료 또는 둘 다를 섭취하고 나서 0 시간, 0.1 시간, 0.2 시간, 0.3 시간, 0.4 시간, 0.5 시간, 0.6 시간, 0.7 시간, 0.8 시간, 0.9 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간 또는 그 이상이 지난 후, 치실이 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 접합 상피에 전달하는, 치실.
  96. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 면역 반응을 활성화, 조정, 또는 무반응화하는 것인, 치실.
  97. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 세균, 바이러스, 곰팡이류, 원생동물, 기생충, 프리온, 독소, 암, 알레르기, 또는 자가면역 질환 중 적어도 하나를 표적으로 하는 면역 반응을 촉발하는, 치실.
  98. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가, 단백질, 펩타이드, 데옥시리보핵산(DNA) 올리고뉴클레오타이드, 리보핵산(RNA) 올리고뉴클레오타이드, 망가진 세포, 온전한 세포, 지질, 독소 변이체, 탄수화물, 바이러스-유사 입자, 리포좀, 살아 있는 약화된 또는 죽은 천연 또는 재조합 미생물, 비로솜, 중합체/무기/유기 마이크로 및 나노입자, 또는 면역 자극 복합체(ISCOMS) 중 적어도 하나에서 선택된 하나 이상의 항원을 포함하는, 치실.
  99. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 T- 및 B 세포 림프구증식 질환, 난소암, 췌장암, 두경부암, 편평 세포 암종, 위암, 유방암, 전립선암 또는 비소 세포 폐암에서 선택된 암 세포 또는 그의 일부분에서 수득된 펩타이드를 포함하는 항원을 포함하는, 치실.
  100. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 땅콩, 조개류, 달걀 단백질, 우유 단백질, 콩류, 견과류에서 선택된 식품 알레르기 유발 항원, 또는 집먼지 진드기 또는 꽃가루에서 선택된 기도 알레르기 유발 항원인 항원을 포함하는, 치실.
  101. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 인슐린, 에피네프린, 스테로이드, 자극제와 같은 약물을 포함하는, 치실.
  102. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 치실 또는 얇은 장치 또는 끈/패치, 또는 치은 틈새에 배치하기에 적합한 두께를 가진 치간 칫솔에 부착, 흡착, 또는 물리적으로 또는 화학적으로 고정되는 것 중 적어도 하나인 항원을 포함하는, 치실.
  103. 청구항 75에 있어서, 사이토카인, 케모카인, 톨 유사 수용체 리간드 또는 활성화제, 명반, 뮤라밀 다이펩타이드, 피리딘, 키토산, 사포닌, 오일, 에멀젼, 세균성 세포벽 추출물, 세균성 단백질, 세포질 세균성 DNA 또는 모방체, 바이러스 RNA 또는 모방체, 합성 올리고뉴클레오타이드, 인터페론(IFN) 유전자 자극제(STING) 작용제(2'3'-cGAMP, c-di-AMP, 2 '3'-c-di-AM(PS)2 (Rp,RP), c-di-GMP, CL401, CL413, CL429, 플라젤린, 이미퀴모드, LPS-EB, MPLA, ODN 1585, ODN 1826, ODN2006, ODN2395, pam3CSK4, 폴리(I:C), R848, TDB), 천연 중합체(폴리－γ-글루탐산, 키토산, 마난, 리포마난, 레티난, 덱스트란), 합성 중합체(폴리－N-이소프로필아크리알마이드, 공중합체, 블록 중합체, 폴리포스파젠, 고분자 전해질, 고분자 무수물, 폴리메타크릴레이트, 폴리글리콜-코-락타이드, 폴리카프로락톤, 폴리비닐피롤리돈, 양이온 중합체) 및 이들의 조합에서 선택된 하나 이상의 보조제를 추가로 포함하는, 치실.
  104. 청구항 75에 있어서, 하나 이상의 활성 제제가 선천 면역 반응, 적응 면역 반응, 또는 둘 다를 활성화하는 하나 이상의 항원, 면역원, 알레르기 유발 항원, 또는 이들의 조합을 포함하는, 치실.
  105. 청구항 75에 있어서, 침적물의 점도가 0.01 센티푸아즈 (cp), 1 cp, 10 cp, 100 cp, 1000 cp, 10000 cp, 100000 cp, 200000 cp, 300000 cp, 500000 cp, 1000000, 또는 100000000 cp인, 치실.
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