KR20240035933A - Method for inducing the fruiting body primordia of the Matsutake family, method for producing the fruiting body primordia of the Matsutake family, fungal medium, culture medium - Google Patents
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Abstract
[과제]송이류의 자실체 원기를 유도하는 신규 기술을 제공하는 것을 목적으로 한다.
[해결수단]배양액과 상기 배양액이 침투한 배지 기재를 포함하는 균상 배지에서 송이류의 종균을 배양하는 것을 포함하고, 상기 배양액은, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 송이류의 자실체 원기의 유도 방법.[Project] The purpose is to provide a new technology to induce fruiting body vigor of pine mushrooms.
[Solution] A method of cultivating Matsutake seeds in a fungal medium containing a culture medium and a medium substrate into which the culture medium has penetrated, wherein the culture medium contains adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), and cyclic AMP. (c-AMP), flavin adenine dinucleotide (FAD), flavin mononucleotide (FMN), oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide The fruiting body primordia of Matsutake, characterized in that it contains one or more primary metabolites selected from the group consisting of adenine dinucleotide phosphate (NADPH), glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid and malic acid. Induction method.
Description
본 발명은, 송이류의 자실체 원기를 유도하는 유도 방법 등에 관한 것이다. The present invention relates to an induction method for inducing fruiting body vigor of pine mushrooms, etc.
송이(Tricholoma matsutake)는, 금빛송이(Tricholoma equestre)과에 속하는 담자균류이며, 적송의 뿌리에 균근을 만들어 공생하는 균근균이다. 송이가 적송에 공생함으로써 만들어지는 송이의 자실체는, 독특한 향기를 가져, 일본에서는 선호되어 식용되고 있다.Tricholoma matsutake is a basidiomycete belonging to the Tricholoma equestre family and is a mycorrhizal fungus that forms mycorrhizae on the roots of red pine trees. The fruiting body of the matsutake, which is produced by symbiosis with the red pine, has a unique scent and is preferred and eaten in Japan.
송이는, 생육 조건 등의 다양한 조건이 갖추어지지 않으면, 자실체를 형성하지 않는다. 이 때문에, 산 등에서 자연스럽게 번식하는 송이의 자실체는, 그 수확량에 한계가 있어, 고가로 거래되고 있다. 이러한 상황을 감안하여, 송이의 균상 재배(인공 재배)하기 위한 기술이 요구되고 있다. 그러나, 송이는, 시든 나무 또는 낙엽 등을 분해하여 성장하는 부생균(표고버섯 등)과 비교해 균상 재배가 어려워, 상업적으로 이용 가능한 균상 재배 방법은 아직도 확립되어 있지 않다.Clusters do not form fruiting bodies unless various conditions such as growth conditions are met. For this reason, the fruiting bodies of clusters that naturally reproduce in mountains and other places have a limited yield and are sold at a high price. In consideration of this situation, technology for fungal bed cultivation (artificial cultivation) of matsutake is required. However, pine mushrooms are difficult to cultivate on fungal beds compared to saprophytic bacteria (such as shiitake mushrooms) that grow by decomposing dead trees or fallen leaves, and a commercially usable fungal bed cultivation method has not yet been established.
송이의 자실체는, 균사가 집합하여 형성되는 자실체 원기가 성장한 것이다. 이 때문에, 송이의 균상 재배를 행하기 위해서는, 송이 종균으로부터 자실체 원기를 유도하는 것이 필요하다. 송이 종균으로부터 자실체 원기를 유도하는 기술에 대해서는, 예를 들면, 이하와 같은 보고가 있다.The fruiting body of a cluster is the growth of the fruiting body primordia formed by the assembly of hyphae. For this reason, in order to perform fungal bed cultivation of matsutake, it is necessary to induce fruiting body primordia from matsutake spawn. Regarding technology for inducing fruiting body primordia from cluster spawn, for example, there are reports as follows.
비특허 문헌 1에서는, 적송림 토양(고생층 토양)에 대하여 소정의 조성의 배양액을 첨가한 균상 배지에서 송이 종균을 배양함으로써, 자실체 원기가 형성되었다고 보고되고 있다. 비특허 문헌 2에서는, 버미큘라이트에 대하여 소정의 조성의 배양액을 첨가한 균상 배지에서 송이 종균을 배양함으로써, 자실체 원기가 형성되었다고 보고되고 있다. 또한, 특허 문헌 1에는, 30℃ 이하의 온도에서, 균근성 버섯류의 종균을 물 습윤 상태의 보리를 포함하는 균상 배지에서 배양함으로써, 균근성 버섯의 자실체 원기가 얻어진다고 기재되어 있고, 균근성 버섯의 일예로서 송이를 들고 있다.In Non-Patent Document 1, it is reported that fruiting body primordia were formed by cultivating matsutake spawn in a fungal bed medium containing a culture solution of a predetermined composition in red pine forest soil (paleotropic soil). In Non-Patent Document 2, it is reported that fruiting body primordia were formed by cultivating matsutake spawn in a fungal medium containing vermiculite and a culture medium of a predetermined composition. Additionally, Patent Document 1 describes that the fruiting body primordia of mycorrhizal mushrooms are obtained by culturing the spawn of mycorrhizal mushrooms in a fungal medium containing barley in a water-wet state at a temperature of 30°C or lower, and mycorrhizal mushrooms As an example, he is holding a bunch.
본 발명은, 송이류의 자실체 원기를 유도하는 신규 기술을 제공하는 것을 목적으로 한다.The purpose of the present invention is to provide a new technology for inducing fruiting body vigor of Matsutake species.
본 발명자 등은, 비특허 문헌 1에 기재된 배양액, 또는 비특허 문헌 2에 기재된 배양액을 이용하여, 송이의 균상 재배를 시도했다. 그러나, 어느 배양액을 이용하더라도, 송이의 자실체 원기를 유도할 수 없었다.The present inventors and others attempted fungal bed cultivation of pine mushrooms using the culture medium described in Non-Patent Document 1 or the culture medium described in Non-Patent Document 2. However, no matter which culture medium was used, fruiting body primordia of clusters could not be induced.
이 시험 결과에 기초하여, 본 발명자 등은 예의 검토했다. 그 결과, 균상 배지에 첨가되는 배양액에, 특정의 일차 대사 산물을 함유함으로써, 특정의 일차 대사 산물을 함유하지 않는 경우와 비교해, 송이의 자실체 원기가 유도되기 쉬워지는 것을 발견하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.Based on the results of this test, the present inventors and others conducted intensive studies. As a result, it was discovered that by containing a specific primary metabolite in the culture medium added to the fungal medium, the fruiting body primordia of the matsutake can be more easily induced compared to the case where the specific primary metabolite is not contained, and the present invention was completed. It came down to this.
본 발명의 요지는 이하와 같다.The gist of the present invention is as follows.
[1] 배양액과 상기 배양액이 침투한 배지 기재를 포함하는 균상 배지에서 송이류의 종균을 배양하는 것을 포함하고, 상기 배양액은, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 송이류의 자실체 원기의 유도 방법.[1] A method comprising cultivating Matsutake seeds in a fungal medium containing a culture medium and a medium infiltrated with the culture medium, wherein the culture medium contains adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), and cyclic AMP ( c-AMP), flavin adenine dinucleotide (FAD), flavin mononucleotide (FMN), oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine Induction of fruiting body primordia of matsutake, characterized in that it contains one or more primary metabolites selected from the group consisting of dinucleotide phosphate (NADPH), glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid and malic acid. method.
[2] 상기 일차 대사 산물이 피루브산과 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)인 것을 특징으로 하는, [1]에 기재된 유도 방법.[2] The induction method according to [1], wherein the primary metabolites are pyruvic acid and reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH).
[3] 상기 배양액에 있어서의 상기 피루브산의 농도가 0.01 ~ 1 g/L이며,[3] The concentration of pyruvic acid in the culture medium is 0.01 to 1 g/L,
상기 배양액에 있어서의 상기 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)의 농도가 0.1 ~ 15 mg/L인, 것을 특징으로 하는 [2]에 기재된 유도 방법.The induction method according to [2], wherein the concentration of reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) in the culture medium is 0.1 to 15 mg/L.
[4] 배양액과 상기 배양액이 침투한 배지 기재를 포함하는 균상 배지에서 송이류의 종균을 배양하는 것을 포함하고, 상기 배양액은, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 송이류의 자실체 원기의 제조 방법.[4] A method comprising cultivating Matsutake seeds in a fungal medium containing a culture medium and a medium infiltrated with the culture medium, wherein the culture medium contains adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), and cyclic AMP ( c-AMP), flavin adenine dinucleotide (FAD), flavin mononucleotide (FMN), oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine Production of fruiting body primordia of Matsutake, characterized in that it contains one or more primary metabolites selected from the group consisting of dinucleotide phosphate (NADPH), glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid and malic acid. method.
[5] 송이류의 종균을 배양하기 위한 균상 배지로서, 배양액과 상기 배양액이 침투한 배지 기재를 포함하고, 상기 배양액이, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 균상 배지.[5] A fungal medium for cultivating Matsutake seeds, comprising a culture medium and a medium substrate into which the culture medium has penetrated, wherein the culture medium contains adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), and cyclic AMP (c -AMP), flavin adenine dinucleotide (FAD), flavin mononucleotide (FMN), oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) A fungal medium comprising at least one primary metabolite selected from the group consisting of nucleotide phosphate (NADPH), glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid, and malic acid.
[6] 송이류의 종균을 배양하기 위한 균상 배지에 함유되는 배양액으로서, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 배양액.[6] As a culture medium contained in a fungal medium for cultivating Matsutake seeds, adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), cyclic AMP (c-AMP), flavin adenine dinucleotide (FAD), Flavin mononucleotide (FMN), oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid A culture medium characterized in that it contains one or more primary metabolites selected from the group consisting of oxaloacetic acid, succinic acid, and malic acid.
본 발명에 따르면, 송이류의 자실체 원기를 유도하는 신규 기술을 제공할 수 있다.According to the present invention, it is possible to provide a new technology for inducing fruiting body vigor of bunches.
도 1은 시험관 1 개당 평균 자실체 원기수를 나타내는 그래프이다(시험 번호 1 ~ 27).
도 2는 시험관 1 개당 평균 자실체 원기수를 나타내는 그래프이다(시험 번호 28 ~ 48).
도 3은 송이의 자실체 원기가 형성된 균상 배지의 사진이다.Figure 1 is a graph showing the average number of fruiting body primordia per test tube (test numbers 1 to 27).
Figure 2 is a graph showing the average number of fruiting body primordia per test tube (test numbers 28 to 48).
Figure 3 is a photograph of the fungal bed medium on which the fruiting body primordia of the bunch were formed.
이하, 본 발명의 일실시 형태에 대하여 설명한다.Hereinafter, one embodiment of the present invention will be described.
본 실시 형태는, 송이류의 자실체 원기(이하, '송이류 자실체 원기'라고 함)를 유도하는 유도 방법에 관한 것이다. 본 실시 형태의 유도 방법은, 소정의 균상 배지에서 송이류의 종균을 배양하는 것(이하, 이 공정을 '배양 공정'이라고도 함)을 포함한다. 또한, 본 명세서에 있어서, 송이류란, 송이(Tricholoma matsutake), 가송이(Tricholoma bakamatsutake), 구실잣밤송이(Tricholoma fulvocastaneum) 및 송이아재비(Tricholoma robustum)의 4 종의 균종을 가리키며, 배양 공정에서는, 이들 4 종의 균종 중 적어도 1 종의 종균을 배양한다.This embodiment relates to an induction method for inducing fruiting body primordia of matsutake species (hereinafter referred to as 'matsutake fruiting body primordia'). The induction method of the present embodiment includes culturing the Matsutake seeds in a predetermined fungal medium (hereinafter, this process is also referred to as the 'cultivation process'). In addition, in this specification, matsutake refers to four fungal species: matsutake (Tricholoma matsutake), tricholoma bakamatsutake, Tricholoma fulvocastaneum, and Tricholoma robustum, and in the culture process, Cultivate at least one seed of these four bacterial species.
배양 공정에서 이용되는 균상 배지는, 배양액과, 배양액이 침투한 배지 기재를 포함하며, 배양액에는, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군(이하, '일차 대사 산물군'이라고도 함)으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물(이하, 단순히 '특정의 일차 대사 산물'이라고도 함)이 포함되어 있다. 또한, 본 명세서에 있어서, 일차 대사 산물이란, 생체를 유지하기 위하여 필요한 물질의 총칭이다.The fungal medium used in the culture process includes a culture medium and a medium substrate into which the culture liquid has penetrated. The culture medium contains adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), cyclic AMP (c-AMP), and flavin adenine. dinucleotide (FAD), flavin mononucleotide (FMN), oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), glucose One or more primary metabolites selected from the group consisting of hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid, and malic acid (hereinafter also referred to as 'primary metabolite group') (hereinafter simply referred to as 'specific primary metabolites') (also known as ) is included. In addition, in this specification, primary metabolite is a general term for substances necessary to maintain living organisms.
전술한 일차 대사 산물군 중, 사이클릭 AMP(c-AMP)와 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH) 이외의 물질은, 당 대사(당을 분해하여 에너지를 생성하는 반응)에 관여하는 일차 대사 산물이며, 당을 분해하여 에너지를 생성할 때까지의 사이에 생기는 중간 생성물 및 최종 생성물(이하, '당 대사의 생성물'이라고도 함)과, 당을 분해하여 에너지를 생성할 때까지의 각종 반응을 진행(또는 촉진)시키기 위하여 필요한 효소 및 보효소(이하, '당 대사의 촉매 물질'이라고도 함)이다.Among the above-mentioned group of primary metabolites, substances other than cyclic AMP (c-AMP) and reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) are primary substances involved in sugar metabolism (a reaction that produces energy by breaking down sugar). It is a metabolite, intermediate products and final products that occur during the process of breaking down sugar to generate energy (hereinafter also referred to as 'products of sugar metabolism'), and various reactions until breaking down sugar to generate energy. Enzymes and coenzymes (hereinafter also referred to as 'catalysts of sugar metabolism') are required to proceed (or promote).
전술한 일차 대사 산물군 중, 당 대사의 생성물은, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산이다. 한편, 전술한 특정의 일차 대사 산물군 중, 당 대사의 촉매 물질(보다 구체적으로, 보효소)은, 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 및 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)이다.Among the above-mentioned primary metabolite group, the products of sugar metabolism are adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid, and malic acid. On the other hand, among the specific primary metabolite groups described above, the catalytic substances (more specifically, coenzymes) of sugar metabolism include flavin adenine dinucleotide (FAD), flavin mononucleotide (FMN), and oxidized nicotinamide adenine dinucleotide. (NAD + ), and reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH).
배양액에 포함되는 특정의 일차 대사 산물은, 전술한 일차 대사 산물군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물이면 되는데, 전술한 일차 대사 산물군 중에서도, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물을 이용하는 것이 바람직하다.The specific primary metabolite contained in the culture medium may be one or more primary metabolites selected from the above-described primary metabolite group, including adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), Cyclic AMP (c-AMP), flavin mononucleotide (FMN), oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) ), it is preferable to use one or more primary metabolites selected from the group consisting of pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid, and malic acid.
배양액에 포함되는 특정의 일차 대사 산물에는, 일차 대사 산물군으로부터 선택한 1 종의 물질을 이용해도 되고, 일차 대사 산물군으로부터 선택한 2종 이상의 물질을 이용해도 된다. 일차 대사 산물군으로부터 선택한 2종 이상의 물질을 이용하는 경우, 그 조합은 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들면, 피루브산(당 대사의 중간 생성물)과 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)(당 대사의 촉매 물질)를 조합하여 이용할 수 있다.As the specific primary metabolite contained in the culture medium, one substance selected from the primary metabolite group may be used, or two or more substances selected from the primary metabolite group may be used. When using two or more substances selected from the primary metabolite group, the combination is not particularly limited, but for example, pyruvic acid (an intermediate product of sugar metabolism) and reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) (an intermediate product of sugar metabolism) catalyst materials) can be used in combination.
배양액에 있어서의 특정의 일차 대사 산물의 농도는, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 바람직한 농도는, 이하에 나타내는 바와 같다.The concentration of specific primary metabolites in the culture medium is not particularly limited, but preferred concentrations are as shown below.
송이류 자실체 원기를 보다 유도하기 쉽게 하기 위해, 배양액에 있어서의 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH)의 농도는, 각각, 0.02 ~ 50.0 mg/L로 하는 것이 바람직하고, 0.1 ~ 15.0mg/L로 하는 것이 보다 바람직하며, 0.2 ~ 5.0 mg/L로 하는 것이 특히 바람직하다.In order to make it easier to induce fruiting body primordia of matsutake, adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), cyclic AMP (c-AMP), flavin adenine dinucleotide (FAD), and flavin mono in the culture medium. Nucleotide (FMN), oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD + ), oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) ) The concentration is preferably 0.02 to 50.0 mg/L, more preferably 0.1 to 15.0 mg/L, and particularly preferably 0.2 to 5.0 mg/L.
송이류 자실체 원기를 보다 유도하기 쉽게 하기 위해, 배양액에 있어서의 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산, 사과산의 농도는, 각각, 0.001 ~ 5.0 g/L로 하는 것이 바람직하고, 0.005 ~ 3.0 g/L로 하는 것이 보다 바람직하며, 0.01 ~ 1.0 g/L로 하는 것이 특히 바람직하다.In order to make it easier to induce matsutake fruiting body primordia, the concentrations of glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid, and malic acid in the culture medium are preferably set to 0.001 to 5.0 g/L, respectively. It is more preferable to set it to 0.005 to 3.0 g/L, and it is especially preferable to set it to 0.01 to 1.0 g/L.
상술한 특정의 일차 대사 산물이 함유되는 배양액은, 버섯(송이류에 한정되지 않음)의 생육에 필요한 양분을 포함하는 액체이며, 전술한 특정의 일차 대사 산물 외에, 적어도, 영양원과 물을 포함하고 있다.The culture medium containing the above-mentioned specific primary metabolites is a liquid containing nutrients necessary for the growth of mushrooms (not limited to pine mushrooms) and, in addition to the above-mentioned specific primary metabolites, contains at least a nutrient source and water. there is.
영양원은, 버섯(송이류에 한정되지 않음)의 생육에 필요한 양분이며, 예를 들면, 탄소원, 질소원, 무기염, 비타민류, 식물 호르몬류를 들 수 있다.Nutrient sources are nutrients necessary for the growth of mushrooms (not limited to pine mushrooms), and examples include carbon sources, nitrogen sources, mineral salts, vitamins, and plant hormones.
탄소원으로서, 예를 들면, 포도당(글루코오스), 맥아당, 당밀, 덱스트린, 글리세린, 전분 등의 탄수화물을 들 수 있다.Examples of carbon sources include carbohydrates such as glucose, maltose, molasses, dextrin, glycerin, and starch.
질소원으로서, 예를 들면, 아스파라긴산, 아르기닌, 스트룰린, 오르니틴, 세린, 글루타민, 알라닌, 글리신, 메티오닌, L-이소류신, DL-이소류신 등의 아미노산을 들 수 있다. 질소원은, 아미노산 단체에 한정되는 것은 아니며, 아미노산과 아미노산 이외의 성분을 포함하는 질소원이어도 된다. 이러한 질소원으로서는, 예를 들면, 펩톤, 고기 엑기스, 면실 가루, 대두 가루, 효모 엑기스, 건조 효모, 카세인, 콘 스티프 리쿼, NZ-아민(등록 상표)을 들 수 있다. 또한, 질소원은, 아미노산을 포함하지 않는 질소원이 이용되어도 된다. 이러한 질소원으로서는, 예를 들면, 황산 암모늄, 질산 암모늄, 염화 암모늄 등을 들 수 있다.Examples of nitrogen sources include amino acids such as aspartic acid, arginine, strulline, ornithine, serine, glutamine, alanine, glycine, methionine, L-isoleucine, and DL-isoleucine. The nitrogen source is not limited to amino acids alone, and may be a nitrogen source containing amino acids and components other than amino acids. Examples of such nitrogen sources include peptone, meat extract, cottonseed flour, soybean flour, yeast extract, dried yeast, casein, corn steep liquor, and NZ-amine (registered trademark). Additionally, a nitrogen source that does not contain amino acids may be used as the nitrogen source. Examples of such nitrogen sources include ammonium sulfate, ammonium nitrate, and ammonium chloride.
무기염으로서, 예를 들면, 인산 이수소 칼륨, 인산 나트륨, 식염, 탄산 칼슘, 염화 칼슘, 황산 마그네슘, 염화 망간, 염화 철(III), 구연산 제 1 철, 구연산 제 2 철, 황산 아연, 황산 망간(II), 황산 구리(II), 황산 코발트(II), 황산 니켈(II) 등을 들 수 있다.Inorganic salts include, for example, potassium dihydrogen phosphate, sodium phosphate, table salt, calcium carbonate, calcium chloride, magnesium sulfate, manganese chloride, iron(III) chloride, ferrous citrate, ferric citrate, zinc sulfate, sulfuric acid. Manganese (II), copper (II) sulfate, cobalt (II) sulfate, nickel (II) sulfate, etc. are mentioned.
비타민류는, 비타민 및 그것과 동일한 작용을 가지는 물질을 가리키며, 예를 들면, 염산 티아민(비타민 B1), 니코틴산(비타민 B3), 엽산, 비오틴(비타민 B7), 염화 카르니틴, 아데닌 황산염 등을 들 수 있다.Vitamins refer to vitamins and substances that have the same action as them. Examples include thiamine hydrochloride (vitamin B1), nicotinic acid (vitamin B3), folic acid, biotin (vitamin B7), carnitine chloride, and adenine sulfate. there is.
식물 호르몬류는, 식물 호르몬 및 그것과 동일한 작용을 가지는 물질을 가리키며, 예를 들면, 벤질아데닌, 지베렐린산(GA3) 등을 들 수 있다.Plant hormones refer to plant hormones and substances having the same action as them, and examples include benzyladenine and gibberellic acid (GA3).
배양액에 함유되는 영양원은, 물에 용해되는 수용성의 물질이어도 되지만, 물에 용해되지 않는 불용성의 물질이어도 된다. 불용성의 물질로서는, 예를 들면, 건조 효모 등을 들 수 있다.The nutrient source contained in the culture medium may be a water-soluble substance that dissolves in water, or may be an insoluble substance that does not dissolve in water. Examples of insoluble substances include dry yeast.
배양액에 함유되는 상술한 각 성분(영양원)의 농도는, 버섯(송이류에 한정되지 않음)의 생육이 가능한 공지의 균상 배지(또는 배양액)에 있어서의 각 성분(영양원)의 농도에 기초하여 설정할 수 있으며, 특별히 한정되는 것은 아니다.The concentration of each component (nutrient source) described above contained in the culture medium is set based on the concentration of each component (nutrient source) in a known fungal medium (or culture medium) capable of growing mushrooms (not limited to pine mushrooms). It can be done and is not particularly limited.
배양액에 함유되는 물로서, 예를 들면, 순수, 이온 교환수, 여과수, 수돗물, 정수(井水)를 들 수 있다.Examples of water contained in the culture medium include pure water, ion-exchanged water, filtered water, tap water, and purified water.
배양액에는, 특정의 일차 대사 산물, 영양원 및 물 외에, 다른 성분이 포함되어 있어도 된다. 배양액에 포함될 수 있는 다른 성분으로서는, 예를 들면, 염산, 구연산, 수산화 칼륨 등의 pH 조정제, 또는 아데닐산(AMP), 구아닐산(GMP), 시티딜산(CMP), 우리딜산(UMP) 등의 리보뉴클레오타이드, 또는 티미딜산(TMP) 등의 데옥시리보뉴클레오타이드를 들 수 있다.The culture medium may contain other components in addition to specific primary metabolites, nutrients, and water. Other components that may be included in the culture medium include, for example, pH adjusters such as hydrochloric acid, citric acid, and potassium hydroxide, or ribosomes such as adenylic acid (AMP), guanylic acid (GMP), cytidylic acid (CMP), and uridylic acid (UMP). Examples include nucleotides and deoxyribonucleotides such as thymidylic acid (TMP).
배양액의 pH는, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들면, 4.0 ~ 6.0으로 할 수 있다.The pH of the culture medium is not particularly limited, but can be, for example, 4.0 to 6.0.
균상 배지에 있어서의 배양액의 양은, 침투하는 배양액에 의해 배지 기재가 충분히 습윤하고, 한편, 배지 기재로부터 배양액이 누출되지 않는 양으로 하면 되며, 이용하는 배지 기재의 흡수성 및 보수성을 고려하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 배지 기재로서 압맥과 톱밥의 혼합물(예를 들면, 질량비로 2.5 : 1(압맥 : 톱밥))을 이용하는 균상 배지에서는, 배양액의 함유량은, 균상 배지 100 질량%에 대하여, 60 ~ 75 질량%로 할 수 있고, 송이류 자실체 원기를 보다 유도하기 쉽게 하기 위해, 65 ~ 70 질량%로 하는 것이 바람직하다. 또한, 예를 들면, 배지 기재로서 토양을 이용하는 균상 배지에서는, 배양액의 함유량은, 균상 배지 100 질량%에 대하여, 10 ~ 20 질량%로 할 수 있고, 송이류 자실체 원기를 보다 유도하기 쉽게 하기 위해, 15 ~ 20 질량%인 것이 바람직하다. 또한, 예를 들면, 배지 기재로서 버미큘라이트를 이용하는 균상 배지에서는, 배양액의 함유량은, 균상 배지 100 질량%에 대하여, 75 ~ 85 질량%로 할 수 있고, 송이류 자실체 원기를 보다 유도하기 쉽게 하기 위해, 80 ~ 85 질량%로 하는 것이 바람직하다.The amount of culture medium in the fungal medium should be such that the medium substrate is sufficiently wetted by the infiltrating culture medium and the culture medium does not leak from the medium substrate. It can be determined by taking into consideration the absorbency and water retention properties of the medium substrate used. For example, in a fungal medium using a mixture of pressure veins and sawdust (e.g., mass ratio of 2.5:1 (pressure veins: sawdust)) as a medium substrate, the content of the culture medium is 60 to 75% based on 100% by mass of the fungal bed medium. It can be set in mass%, and in order to make it easier to induce cluster fruiting body primordia, it is preferably set at 65 to 70 mass%. In addition, for example, in a fungal medium using soil as a medium substrate, the content of the culture solution can be 10 to 20% by mass based on 100% by mass of the fungal medium. In order to make it easier to induce matsutake fruiting body primordia, , is preferably 15 to 20% by mass. Additionally, for example, in a fungal medium using vermiculite as a medium substrate, the content of the culture medium can be 75 to 85% by mass based on 100% by mass of the fungal medium, in order to make it easier to induce cluster fruiting body primordia. , it is preferably set to 80 to 85% by mass.
본 실시 형태의 유도 방법에 있어서, 특정의 일차 대사 산물을 함유하는 배양액은, 영양원과 물을 포함하는 공지의 배양액(특정의 일차 대사 산물을 포함하지 않는 배양액)에 대하여, 특정의 일차 대사 산물을 함유시킨 것이어도 된다. 영양원과 물을 포함하는 공지의 배양액(특정의 일차 대사 산물을 포함하지 않는 배양액)으로서는, 비특허 문헌 1에 기재되는 배양액(하마다 배지), 또는 비특허 문헌 2에 기재되는 배양액(가와이·오가와 배지)을 들 수 있다.In the induction method of the present embodiment, the culture medium containing a specific primary metabolite is a known culture medium containing a nutrient source and water (a culture medium that does not contain the specific primary metabolite). It may be contained. As a known culture medium containing a nutrient source and water (a culture medium that does not contain a specific primary metabolite), the culture medium (Hamada medium) described in Non-patent Document 1, or the culture medium (Kawai-Ogawa Medium) described in Non-patent Document 2 ) can be mentioned.
배양액이 침투하는 배지 기재는, 버섯(송이류에 한정되지 않음)의 균사를 신장시키기 위하여 필요한 수분을 보지(保持)하고, 또한 균사를 신장시키기 위하여 필요한 공간을 제공하기 위한 고형분이다. 배지 기재는, 배양액이 침투 가능한 것이면 되며, 예를 들면, 톱밥, 압맥, 칩 더스트, 산태, 수태, 옥수수 속대, 면실 껍질, 버개스, 알팔파, 비트 펄프, 왕겨, 티모시, 오카라, 콩 껍질, 실리카 겔, 고흡수 폴리머, 자연 환경으로부터 채취한 토양, 인위적으로 작성한 인공 토양(예를 들면, 버미큘라이트)을 이용할 수 있다. 또한, 이들 성분(배지 기재)은, 2 종 이상을 혼합하여 이용해도 되고, 또한, 입도를 조정하여 이용해도 된다(예를 들면, 입도를 2 ~ 5 mm).The medium substrate through which the culture medium penetrates is a solid content that retains the moisture necessary for elongating the hyphae of mushrooms (not limited to pine mushrooms) and also provides the space necessary for the elongation of the hyphae. The medium substrate can be any material that can be penetrated by the culture medium, for example, sawdust, pressed barley, chip dust, mountain berries, snails, corn cobs, cottonseed husk, bagasse, alfalfa, beet pulp, rice husk, timothy, okara, soybean husk, Silica gel, highly absorbent polymers, soil collected from the natural environment, and artificial soil created artificially (for example, vermiculite) can be used. In addition, these components (medium base material) may be used in combination of two or more types, or may be used by adjusting the particle size (for example, particle size is 2 to 5 mm).
균상 배지의 제조 방법은, 특정의 일차 대사 산물을 포함하는 배양액이 배지 기재에 침투하는 것이면 되며, 특별히 한정되는 것은 아니다. 일예로서는, 특정의 일차 대사 산물과 영양원과 물을 혼합하여 미리 배양액을 작성해 두고, 이 배양액을 배지 기재에 첨가하여 침투시킴으로써, 균상 배지를 제조할 수 있다.The method for producing the fungal medium is not particularly limited as long as it allows the culture solution containing a specific primary metabolite to penetrate the medium substrate. As an example, a fungal medium can be prepared by mixing a specific primary metabolite, a nutrient source, and water to prepare a culture medium in advance, and then adding this culture medium to the medium substrate and allowing it to permeate.
그 외에도, 특정의 일차 대사 산물을 함유하지 않는 배양액과, 특정의 일차 대사 산물을 함유하는 배양액을, 배지 기재에 순차 첨가하여 침투시켜 감으로써, 균상 배지를 제조해도 된다. 또한, 이 방법으로 제조되는 균상 배지에 있어서, 배양액 중의 특정의 일차 대사 산물의 농도는, 균상 배지에 포함되는 배양액의 총 체적(즉, 특정의 일차 대사 산물을 함유하지 않는 배양액과 특정의 일차 대사 산물을 함유하는 배양액의 합계 체적)에 대한, 그 배양액에 포함되는 일차 대사 산물의 질량의 비율로서 구해진다.In addition, a fungal medium may be prepared by sequentially adding a culture medium not containing a specific primary metabolite and a culture medium containing a specific primary metabolite to the medium substrate and allowing them to permeate. In addition, in the fungal medium prepared by this method, the concentration of the specific primary metabolite in the culture medium is determined by the total volume of the culture medium contained in the fungal medium (i.e., the culture medium not containing the specific primary metabolite and the specific primary metabolite It is obtained as the ratio of the mass of the primary metabolite contained in the culture medium to the total volume of the culture medium containing the product.
균상 배지의 제조 과정에는, 배지 기재 및 배양액에 포함되는 미생물(균을 포함함)을 사멸(또는 제거)시키는 멸균 공정이 포함되어 있는 것이 바람직하다. 멸균 공정에서 이용되는 멸균의 수단은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 가열에 의해 미생물을 사멸시키는 가열 멸균, 또는 여과에 의해 미생물을 제거하는 여과 멸균을 이용할 수 있다. 가열 멸균에 있어서의 가열 조건은, 상압에 의한 가열 멸균이면, 98 ~ 100℃에서 4 ~ 12 시간의 가열 조건으로 할 수 있고, 고압에 의한 가열 멸균이면, 110 ~ 125℃에서 30 ~ 180 분간의 가열 조건으로 할 수 있다. 여과 멸균에는, 예를 들면, 어드밴테크 도요(주)사 제품인 멤브레인 필터 A020A025A를 이용할 수 있다.The manufacturing process of the fungal medium preferably includes a sterilization process to kill (or remove) microorganisms (including bacteria) contained in the medium substrate and culture medium. The sterilization means used in the sterilization process is not particularly limited, but heat sterilization, which kills microorganisms by heating, or filtration sterilization, which removes microorganisms by filtration, can be used. The heating conditions for heat sterilization can be 98 to 100°C for 4 to 12 hours if heat sterilization is at normal pressure, and 30 to 180 minutes at 110 to 125°C for high pressure heat sterilization. This can be done under heating conditions. For filtration sterilization, for example, membrane filter A020A025A manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd. can be used.
여기서, 배지 기재 및 배양액에 포함되는 미생물을 사멸(또는 제거)시키는 멸균 처리는, 배지 기재에 배양액을 침투시켜 균상 배지를 제조한 후에, 제조한 균상 배지에 대하여 행해져도 되지만, 특정 일차 대사 산물 중에는, 가열에 의해 변성(실활)해 버리는 물질도 있다. 이 때문에, 균상 배지의 제조 과정에 멸균 공정을 포함시키는 경우에는, 배지 기재(또는, 일차 대사 산물이 함유하지 않는 배양액을 침투시킨 배지 기재)에 미리 가열 멸균 처리를 해 두고, 이 배지 기재에 대하여, 여과 멸균한 특정의 일차 대사 산물을 포함하는 배양액을 첨가하여 침투시키는 것이 바람직하다.Here, the sterilization treatment to kill (or remove) the microorganisms contained in the medium substrate and the culture medium may be performed on the prepared fungal medium after the fungal medium is prepared by infiltrating the medium substrate with the culture medium. However, among the specific primary metabolites, , there are also substances that are denatured (deactivated) by heating. For this reason, when a sterilization step is included in the manufacturing process of a fungal medium, the medium substrate (or the medium substrate permeated with a culture solution not containing primary metabolites) is heat sterilized in advance, and this medium substrate is , it is preferable to infiltrate by adding a filter-sterilized culture medium containing a specific primary metabolite.
균상 배지에서 배양하는 송이류의 종균에는, 송이(Tricholoma matsutake), 가송이(Tricholoma bakamatsutake), 구실잣밤송이(Tricholoma fulvocastaneum) 및 송이아재비(Tricholoma robustum)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1 종의 종균을 이용하면 되는데, 자실체 원기가 유도되기 쉽도록 하기 위해, 송이(Tricholoma matsutake)의 종균을 이용하는 것이 바람직하다.The pine mushroom spawn cultured on a fungal medium includes at least one type of spawn selected from the group consisting of pine mushrooms (Tricholoma matsutake), pine pine mushrooms (Tricholoma bakamatsutake), Tricholoma fulvocastaneum, and pine mushrooms (Tricholoma robustum). You can use it, but in order to make it easier to induce fruiting body primordia, it is preferable to use the spawn of Tricholoma matsutake.
균상 배지에서 배양하는 송이류의 종균에는, 공지의 송이류의 균주를 이용할 수 있으며, 균주에 대하여 한정되는 것은 아니다. 공지의 송이(Tricholoma matsutake)의 균주로서는, 예를 들면, NITE BP-03662, NITE BP-03663, NITE BP-03664, NITE BP-03665, NITE BP-03666, NITE BP-03667 및 NITE BP-03668의 수탁 번호가 부여된 균주를 들 수 있다. 이들 송이(Tricholoma matsutake)의 균주는, 부다페스트 조약의 규정에 기초하는 국제 기탁 기관인 독립 행정법인 제품 평가 기술 기반 기구 특허 미생물 기탁 센터((우)292-0818 일본국 지바현 기사라즈시 가즈사 가타마리 2-5-8 122호실)에, 2022년 8월 16일자로 국제 기탁되어 있다. 또한, 이들 균주 외에, 공지의 송이의 균주로서는, NBRC33136(Accepted Date : 2000년 6월 2일), 또는 NBRC108713(Accepted Date : 2011년 7월 29일)을 들 수 있다. 이들 송이(Tricholoma matsutake)의 균주는, 독립 행정법인 제품 평가 기술 기반 기구(NITE)((우)292-0818 일본국 지바현 기사라즈시 가즈사 가타마리 2-5-8)에 보존되어 있고, 소정의 수속을 거침으로써 그 분양을 받을 수 있다. 또한, 균상 배지에서 배양하는 송이(Tricholoma matsutake)의 종균은, 전술한 균주에 한정되는 것은 아니며, 후술하는 실시예에서 사용한 균주를 이용할 수도 있다. 후술하는 실시예에서 사용한 송이(Tricholoma matsutake)의 균주 중, 'FFPRI'로 시작하는 번호가 부여된 균주는, 국립 연구개발 법인 삼림 연구·정비 기구(일본 이바라키현 쓰쿠바시 마츠노사토 1)에 보존되어 있고, 소정의 수속을 거침으로써 그 분양을 받을 수 있다.For the pine mushroom seed cultured in a fungal medium, known pine mushroom strains can be used, and the strain is not limited. Known strains of matsutake (Tricholoma matsutake) include, for example, NITE BP-03662, NITE BP-03663, NITE BP-03664, NITE BP-03665, NITE BP-03666, NITE BP-03667, and NITE BP-03668. Strains to which accession numbers have been assigned may be mentioned. These strains of matsutake (Tricholoma matsutake) were obtained from the Patent Microorganism Depository Center of the Product Evaluation Technology Foundation, an independent administrative corporation, an international depository organization based on the provisions of the Budapest Treaty (2 Katamari Kazusa, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan, 292-0818). -5-8 Room 122), internationally deposited on August 16, 2022. In addition to these strains, known strains of Matsutake include NBRC33136 (Accepted Date: June 2, 2000) or NBRC108713 (Accepted Date: July 29, 2011). These strains of matsutake (Tricholoma matsutake) are preserved at the National Organization for Product Evaluation and Technology (NITE) (2-5-8 Kazusa Katamari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan, 292-0818, Japan), and are You can receive the sale by going through the procedures. In addition, the seed strain of Tricholoma matsutake cultured in a fungal medium is not limited to the above-mentioned strains, and the strains used in the examples described below can also be used. Among the strains of matsutake (Tricholoma matsutake) used in the examples described below, strains assigned numbers starting with 'FFPRI' are preserved at the National Research and Development Corporation Forest Research and Maintenance Organization (1 Matsunosato, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture, Japan). It can be purchased by completing certain procedures.
또한, 송이류의 종균으로서 이용하는 송이류는, 균근균(공생균)의 증식 또는 유지에 사용하는 배지, 예를 들면 Ohta 배지(Ohta, A. (1990) Trans. Mycol. Soc. Japan 31 : 323-334), MMN 배지(Marx, D. H. (1969) Phytopathology 59 : 153-163), 하마다 배지(하마다(1964) 송이, 97-100) 등을 이용하여 증식시킬 수 있고, 전술한 공지의 배지에서 증식시킨(또는 유지시킨) 송이류를 본 실시 형태에 따른 균상 배지에서 배양할 수 있다.In addition, the pine mushrooms used as spores of the pine mushrooms are a medium used for the growth or maintenance of mycorrhizal fungi (symbiotic bacteria), for example, Ohta medium (Ohta, A. (1990) Trans. Mycol. Soc. Japan 31:323- 334), MMN medium (Marx, D. H. (1969) Phytopathology 59: 153-163), Hamada medium (Hamada (1964) Songi, 97-100), etc., and grown in the above-mentioned known media. (or maintained) Matsutake can be cultured in the fungal medium according to this embodiment.
균상 배지에 접종하는 송이류의 종균의 양(이하, 단순히 '접종량'이라고도 함)은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 균상 배지 상면의 표면적 1 평방cm당, 예를 들면, 건조 중량으로 0.04 ~ 3.6 mg인 것으로 할 수 있고, 송이류의 자실체 원기를 보다 유도하기 쉽게 하기 위해, 건조 중량으로 0.4 ~ 0.9 mg로 하는 것이 바람직하다.The amount of pine mushroom seed inoculated into the fungal medium (hereinafter simply referred to as 'inoculation amount') is not particularly limited, but is, for example, 0.04 to 3.6 mg in dry weight per 1 square cm of the surface area of the upper surface of the fungal medium. It can be set to , and in order to make it easier to induce the fruiting body primordia of clusters, it is preferable to set it to 0.4 to 0.9 mg in dry weight.
배양 공정에 있어서 송이류의 종균의 배양 방법은, 버섯(송이류에 한정되지 않음)의 생육이 가능한 것이면 되며, 특별히 한정되는 것은 아니다. 예를 들면, 진탕 배양법 또는 정치 배양법 등을 이용할 수 있다.In the culture process, the method for cultivating the pine mushroom spawn is not particularly limited as long as it is capable of growing mushrooms (not limited to pine mushrooms). For example, a shaking culture method or a static culture method can be used.
배양 공정에 있어서의 송이류의 종균의 배양 조건도, 버섯(송이류에 한정되지 않음)의 생육이 가능한 것이면 되며, 특별히 한정되는 것은 아니다. 예를 들면, 배양 온도는, 10 ~ 28℃로 할 수 있고, 송이류 자실체 원기를 보다 유도하기 쉽게 하기 위해, 15 ~ 23℃로 하는 것이 바람직하다. 배양 습도는, 예를 들면, 50 ~ 95%로 할 수 있고, 송이류 자실체 원기를 보다 유도하기 쉽게 하기 위해, 70 ~ 90%로 하는 것이 바람직하다. 배양 기간은, 예를 들면, 사용하는 균주에 따라 상이하지만, 예를 들면, 30 ~ 200 일간으로 할 수 있다. 일조 조건은, 송이류 자실체 원기의 유도에 영향을 미치는 것은 아니지만, 예를 들면, 8 ~ 16 시간/1 일로 할 수 있고, 암흑 조건으로 할 수도 있다. 배양 용기 내외의 기압 및 기상의 조성은, 예를 들면, 통상의 공기로 할 수 있다.The culture conditions for the pine mushroom spawn in the culture process are not particularly limited as long as they allow for the growth of mushrooms (not limited to pine mushrooms). For example, the culture temperature can be 10 to 28°C, and is preferably 15 to 23°C to make it easier to induce cluster fruiting body primordia. The culture humidity can be, for example, 50 to 95%, and is preferably set to 70 to 90% to make it easier to induce cluster fruiting body primordia. The culture period varies depending on the strain used, but can be, for example, 30 to 200 days. The sunlight conditions do not affect the induction of fruiting body primordia of the matsutake fruiting body, but can be, for example, 8 to 16 hours per day, or dark conditions can also be used. The atmospheric pressure and gaseous composition inside and outside the culture vessel can be, for example, normal air.
이상 설명한 배양 공정을 포함하는 본 실시 형태의 유도 방법에 의하면, 특정의 일차 대사 산물을 포함하고 있지 않은 배양액을 이용한 균상 배지에서 송이류의 종균을 배양하는 경우와 비교해, 송이류 자실체 원기가 유도되기 쉬워진다. 또한 본 명세서에 있어서, 송이류 자실체 원기란, 균상 배지의 표면에 형성되는 곱슬마디 형상의 구조물(균사의 집합체)이며, 송이류 자실체 원기가 유도되면, 균상 배지로부터 돌출되는 곱슬마디 형상의 돌기를 눈으로 확인할 수 있다.According to the induction method of the present embodiment including the culturing process described above, compared to the case of cultivating the Matsutake fruiting body primordia on a fungal medium using a culture medium that does not contain a specific primary metabolite, the Matsutake fruiting body primordia is induced. It gets easier. In addition, in the present specification, the matsutake fruiting body primordia is a curly node-shaped structure (collection of hyphae) formed on the surface of the fungal bed medium, and when the matsutake fruiting body primordia is induced, the curly node-shaped protrusions protruding from the fungal bed medium are formed. You can check it with your eyes.
또한, 상술한 배양 공정을 포함하는 본 실시 형태의 유도 방법에 의하면, 송이류의 자실체 원기가 유도되기 때문에, 본 발명의 일실시 형태로서, 배양 공정을 포함하는 송이류의 자실체 원기의 제조 방법을 제공할 수도 있다.In addition, since the induction method of the present embodiment including the above-described culturing process induces the fruiting body primordia of the Matsutake family, as an embodiment of the present invention, a method for producing the fruiting body primordia of the Matsutake family including the culturing step is provided. You can also provide it.
[실시예][Example]
다음으로, 실시예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 단, 본 발명은 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.Next, the present invention will be described in more detail through examples. However, the present invention is not limited to these examples.
<평가 1 : 특정의 일차 대사 산물의 유효성><Evaluation 1: Effectiveness of specific primary metabolites>
하기 평가 1-1 ~ 평가 1-2를 행하여, 송이(Tricholoma matsutake)의 자실체 원기의 유도 성능에 대하여, 특정의 일차 대사 산물의 유효성을 평가했다.The following evaluations 1-1 to 1-2 were performed to evaluate the effectiveness of specific primary metabolites with respect to the ability to induce fruiting body primordia of matsutake (Tricholoma matsutake).
[평가 1-1 : NITE BP-03663을 이용한 특정의 일차 대사 산물의 유효성][Evaluation 1-1: Effectiveness of specific primary metabolites using NITE BP-03663]
하기 표 1에 나타내는 각 성분(영양원, pH 조정제)을 물에 혼합하여, pH5.1의 배양액을 얻었다. 배양액 1000 ml당 각 성분의 함량은, 하기 표 1에 나타내는 바와 같았다.Each component (nutrient source, pH adjuster) shown in Table 1 below was mixed with water to obtain a culture medium with pH 5.1. The content of each component per 1000 ml of culture medium was as shown in Table 1 below.
(2ml)Min. mix
(2ml)
(5ml)Vit. Mix
(5ml)
(1ml)Hor. Mix
(1ml)
(250ml)Amino. Mix
(250ml)
얻어진 배양액을, 23.5 ml씩 복수로 나누었다. 23.5 ml의 배양액 중 8 ml의 배양액에 대하여, 하기 표 2에 나타내는 일차 대사 산물을 각각 혼합하고, 일차 대사 산물을 포함하는 배양액(이하, '배양액metabo'이라고 함)을 얻었다. 얻어진 배양액metabo에 포함되는 일차 대사 산물의 농도는, 후술하는 표 2에 나타내는 바와 같았다. 한편, 나머지 배양액(이하, '배양액non-metabo'이라고 함) 15.5 ml에는, 일차 대사 산물을 함유시키지 않았다.The obtained culture solution was divided into ascites portions of 23.5 ml each. The primary metabolites shown in Table 2 below were mixed with 8 ml of the 23.5 ml of the culture solution, and a culture solution containing the primary metabolites (hereinafter referred to as 'culture solution metabo ') was obtained. The concentrations of primary metabolites contained in the obtained culture medium metabo were as shown in Table 2 described later. Meanwhile, 15.5 ml of the remaining culture medium (hereinafter referred to as 'culture medium non-metabo ') did not contain primary metabolites.
배지 기재로서 압맥과 톱밥을 준비했다. 또한, 이들 배지 기재에는, 일차 대사 산물은 포함되어 있지 않았다. 준비한 압맥 7.5 g에, 13.5 ml의 배양액non-metabo을 각각 더하여 4 ~ 16 시간 정치하고, 압맥을 팽윤시켰다. 준비한 톱밥 3 g을, 팽윤한 압맥에 혼합하고, 2 ml의 배양액non-metabo을 더 더하여 혼합했다. 이 조작에 의해, 압맥(7.5 g)과 톱밥(3 g)으로 이루어지는 배지 기재(이하, 단순히 '압맥 배지 기재'라고 함)에, 배양액non-metabo이 합계로 15.5 ml 침투했다.Pressure veins and sawdust were prepared as medium substrates. Additionally, these media substrates did not contain primary metabolites. To 7.5 g of the prepared pressure veins, 13.5 ml of non-metabo culture medium was added and allowed to stand for 4 to 16 hours to swell the pressure veins. 3 g of the prepared sawdust was mixed with the swollen press, and 2 ml of non-metabo culture medium was further added and mixed. Through this operation, a total of 15.5 ml of non-metabo culture medium permeated into the medium substrate (hereinafter simply referred to as 'press medium substrate') consisting of pressure veins (7.5 g) and sawdust (3 g).
배양액non-metabo이 침투한 압맥 배지 기재를, 내경 30 mm의 시험관에 충전하여 신에츠 폴리머(주)사 제품 신에츠 실리코센 T-32로 마개를 하고, 121℃로 60 분간 멸균하고 나서 냉각했다. 어드밴테크 도요(주)사 제품인 멤브레인 필터 A020A025A를 이용하여 여과 멸균한, 8 ml의 배양액metabo을, 냉각한 압맥 배지 기재에 더하여 침투시켜, 균상 배지(이하, 이 균상 배지를 '압맥 배지'라고 함)를 얻었다.The pressure medium substrate permeated with the culture medium non-metabo was filled into a test tube with an inner diameter of 30 mm, capped with Shin-Etsu Silicosen T-32 manufactured by Shin-Etsu Polymer Co., Ltd., sterilized at 121°C for 60 minutes, and then cooled. 8 ml of culture medium metabo , filter-sterilized using membrane filter A020A025A manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd., was added to the cooled press medium base and permeated into the fungal medium (hereinafter, this fungal medium is referred to as 'press medium'). ) was obtained.
또한, 얻어진 압맥 배지에는, 15.5 ml의 배양액non-metabo과, 8 ml의 배양액metabo이 포함되어 있고, 합계로 23.5 ml의 배양액(이하, '배양액total'이라고 함)이 포함되어 있었다. 압맥 배지에 포함되는 이 배양액total에 있어서, 일차 대사 산물의 농도는, 후술하는 표 2에 나타내는 바와 같았다.In addition, the obtained pressure medium contained 15.5 ml of non-metabo culture medium and 8 ml of metabo culture medium, and a total of 23.5 ml of culture medium (hereinafter referred to as 'culture medium total '). In this culture total contained in the pressure medium, the concentration of primary metabolites was as shown in Table 2 described later.
송이의 종균으로서, NITE BP-03663을 준비했다. 준비한 송이의 종균을, 일차 대사 산물을 포함하는 압맥 배지에 접종하여 배양했다. 구체적으로, 시험관에 충전되어 있는 상기 압맥 배지에 대하여, 액체 배양한 송이의 균사체 5.4 mg(건조 중량)을 접종하여, 시험관을 신에츠 폴리머(주)사 제품 신에츠 실리코센 T-32로 마개를 했다. 하기 표 2에 나타내는 시험 번호(No.) 1 개에 대하여, 5 개의 시험관(이하, 각각 '시험관 1 ~ 5'라고 함) 내의 압맥 배지에 송이의 종균을 접종할 수 있도록, 이 조작을 반복하여 행했다. 이후, 하기 배양 조건으로 90 일간 배양했다. 또한, 일차 대사 산물을 함유시키지 않는 것 이외는 상술한 압맥 배지(일차 대사 산물을 포함하는 압맥 배지)와 동일한 조건으로 제조한 압맥 배지를, 컨트롤 배지로서 이용하여, 전술한 배양 방법과 동일한 방법으로 송이의 종균을 접종하여 배양했다.As a spawn for pine matsutake, NITE BP-03663 was prepared. The prepared mushroom seed was inoculated into pressure medium containing primary metabolites and cultured. Specifically, 5.4 mg (dry weight) of liquid-cultured cluster mycelium was inoculated into the pressure medium filled in the test tube, and the test tube was capped with Shin-Etsu Silicosen T-32 manufactured by Shin-Etsu Polymer Co., Ltd. For each test number (No.) shown in Table 2 below, this operation was repeated so that the matsutake seed could be inoculated into the pressure medium in five test tubes (hereinafter referred to as 'test tubes 1 to 5', respectively). did it Thereafter, the cells were cultured for 90 days under the following culture conditions. In addition, the pressure medium prepared under the same conditions as the pressure medium (pressure medium containing primary metabolites) described above, except that it did not contain primary metabolites, was used as a control medium, and the pressure medium was used in the same manner as the culture method described above. Matsutake spawn was inoculated and cultured.
<배양 조건><Culture conditions>
온도 : 22℃에서 30 일간, 이후 17℃에서 60 일간Temperature: 22℃ for 30 days, then 17℃ for 60 days.
분위기 : 실내와 동일(공기)Atmosphere: Same as indoor (air)
조명 : 없음Lighting: None
배양법 : 정치 배양Culture method: stationary culture
송이의 종균을 접종하여 90 일간 배양한 후, 압맥 배지의 표면에 형성되는 직경이 1 mm 이상인 곱슬마디 형상의 돌기(자실체 원기)의 수를 카운트했다. 하기 표 2에 나타내는 시험 번호(No.)마다, 시험관 1 개당 자실체 원기의 수(이하, '평균 자실체 원기수'라고 함)를 구했다. 결과를 표 2 및 도 1에 나타낸다.After inoculating the cluster seed and culturing it for 90 days, the number of curly node-shaped protrusions (fruiting body primordia) with a diameter of 1 mm or more formed on the surface of the pressure medium was counted. For each test number (No.) shown in Table 2 below, the number of fruiting body primordia per test tube (hereinafter referred to as 'average fruiting body primordia') was calculated. The results are shown in Table 2 and Figure 1.
(CNTL)27
(CNTL)
도 1 및 표 2에 나타내는 바와 같이, 압맥 배지에 함유되는 배양액에 일차 대사 산물군으로부터 선택되는 특정의 일차 대사 산물이 포함되어 있는 경우에는, 일차 대사 산물이 포함되지 않는 경우와 비교해, 자실체 원기의 형성수가 상승했다. 이 결과로부터, 압맥 배지에 포함되는 배양액에, 특정의 일차 대사 산물이 함유됨으로써, 자실체 원기가 유도되는 것이 명백해졌다.또한, 도 1 ~ 도 2에 있어서, PiAc는 피루브산을 나타내고, OxAc는 옥살로 초산을 나타내고, ScAc는 호박산을 나타내고, MaAc는 사과산을 나타낸다.As shown in Figure 1 and Table 2, when the culture medium contained in the pressure medium contains a specific primary metabolite selected from the primary metabolite group, compared to the case where the primary metabolite is not contained, the fruiting body primordia The number of formations has risen. From these results, it became clear that fruiting body primordia is induced by containing a specific primary metabolite in the culture medium contained in the pressure medium. Additionally, in Figures 1 and 2, PiAc represents pyruvic acid, and O x A c represents oxaloacetic acid, S c A c represents succinic acid, and M a A c represents malic acid.
[평가 1-2 : NITE BP-03662를 이용한 특정의 일차 대사 산물의 유효성][Evaluation 1-2: Effectiveness of specific primary metabolites using NITE BP-03662]
본 평가에서는, 평가 1-1에서 이용한 특정의 일차 대사 산물 중 일부의 일차 대사 산물을 이용했다. 또한, 압맥 배지에 섭취하는 송이의 종균으로서 NITE BP-03662를 이용했다. 이들 이외는 평가 1-1과 동일한 조건으로, 상기 (1)에 나타내는 시험관 1 개당 평균 자실체 원기수를 구했다. 결과를 표 3 및 도 2에 나타낸다.In this evaluation, some primary metabolites among the specific primary metabolites used in evaluation 1-1 were used. Additionally, NITE BP-03662 was used as a seed bacterium for bunches consumed in pressure medium. Other than these, the average number of fruiting body primordia per test tube shown in (1) above was determined under the same conditions as Evaluation 1-1. The results are shown in Table 3 and Figure 2.
(CNTL)48
(CNTL)
도 2 및 표 3에 나타내는 바와 같이, 압맥 배지에 함유되는 배양액에, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 또는 사과산이 포함되는 경우에는, 이들 특정의 일차 대사 산물이 포함되지 않는 경우와 비교해, 자실체 원기의 형성수가 증가했다. 이 결과로부터, NITE BP-03662를 이용한 경우라도, 압맥 배지에 포함되는 배양액에 특정의 일차 대사 산물이 함유됨으로써, 자실체 원기가 유도되는 것이 명백해졌다.As shown in Figure 2 and Table 3, adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), cyclic AMP (c-AMP), flavin mononucleotide (FMN), and oxidized form were added to the culture medium contained in pressure medium. When nicotinamide adenine dinucleotide (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid or malic acid is included, these specific Compared to the case where the primary metabolite was not included, the number of fruiting body primordia formed increased. From these results, it became clear that even when NITE BP-03662 was used, fruiting body primordia was induced by containing specific primary metabolites in the culture medium contained in the pressure medium.
<평가 2 : 균상 배지의 조성에 의한 영향><Evaluation 2: Effect of composition of fungal medium>
하기 평가 2-1 ~ 평가 2-3을 행하여, 송이(Tricholoma matsutake)의 자실체 원기의 유도 성능에 대한, 균상 배지의 조성이 미치는 영향을 평가했다.The following evaluations 2-1 to 2-3 were performed to evaluate the influence of the composition of the fungal medium on the performance of inducing fruiting body primordia of matsutake (Tricholoma matsutake).
[평가 2-1 : 토양 배지에 있어서의 유도 성능][Evaluation 2-1: Induction performance in soil medium]
하기 표 4에 나타내는 각 성분(영양원, pH 조정제)을 물에 혼합하여, pH5.1의 배양액을 얻었다. 배양액 1000 ml당 각 성분의 농도는, 하기 표 4에 나타내는 바와 같았다. 또한, 이 배양액은, 비특허 문헌 1에 기재되는 배양액(하마다 배지)에 상당하는 것이다.Each component (nutrient source, pH adjuster) shown in Table 4 below was mixed with water to obtain a culture medium with pH 5.1. The concentration of each component per 1000 ml of culture medium was as shown in Table 4 below. Additionally, this culture medium corresponds to the culture medium (Hamada medium) described in Non-Patent Document 1.
(에비오스(등록 상표))
(아사히 그룹 식품(주)사 제품)dry yeast
(Ebios (registered trademark))
(Asahi Group Food Co., Ltd. product)
(ｐH5.1이 되는 양)Appropriate amount
(Amount equivalent to pH5.1)
얻어진 배양액을, 12.5 ml씩 복수로 나누었다. 12.5 ml의 배양액 중 1.25 ml의 배양액에 대하여, 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)와 피루브산을 각각 혼합하여, 이들 일차 대사 산물을 포함하는 배양액(이하, '배양액metabo')을 얻었다. 얻어진 배양액metabo에 있어서, 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)의 농도는 25 mg/L이며, 피루브산의 농도는 2.5g/L였다. 한편, 나머지 11.25 ml의 배양액(이하, '배양액non-metabo'이라고 함)에는, 일차 대사 산물을 함유시키지 않았다.배지 기재로서 화강암을 모재로 하는 토양(일본국 시가현에서 채취)을 준비했다. 또한, 이 배지 기재에는, 일차 대사 산물은 포함되어 있지 않았다. 준비한 토양 62 g(55 mL)을 내경 30 mm의 시험관에 충전하여, 120℃에서 50 분간 멸균하고, 이 후 냉각하여 토양으로 이루어지는 배지 기재(이하, 단순히 '토양 배지 기재'라고 함)로 했다. 별도로, 11.25 ml의 배양액non-metabo을 120℃ 15 분간 멸균하고, 이후 냉각했다. 이를 토양 배지 기재에 더하여, 배양액non-metabo을 침투시켰다. 배양액non-metabo이 침투한 토양 배지 기재에, 어드밴테크 도요(주)사 제품인 멤브레인 필터 A020A025A를 이용하여 여과 멸균한, 1.25 ml의 배양액metabo을 더하여 침투시켜, 균상 배지(이하, 이 균상 배지를 '토양 배지'라고 함)를 얻었다.The obtained culture solution was divided into ascites portions of 12.5 ml each. Reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and pyruvic acid were mixed with 1.25 ml of the 12.5 ml of the culture medium, respectively, to obtain a culture medium (hereinafter referred to as 'culture medium metabo ') containing these primary metabolites. In the obtained culture medium metabo , the concentration of reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) was 25 mg/L and the concentration of pyruvic acid was 2.5 g/L. Meanwhile, the remaining 11.25 ml of culture medium (hereinafter referred to as 'culture medium non-metabo ') did not contain primary metabolites. Soil (collected from Shiga Prefecture, Japan) with granite as the base material was prepared as a medium substrate. Additionally, this medium substrate did not contain primary metabolites. 62 g (55 mL) of the prepared soil was filled into a test tube with an inner diameter of 30 mm, sterilized at 120°C for 50 minutes, and then cooled to form a medium substrate made of soil (hereinafter simply referred to as 'soil medium substrate'). Separately, 11.25 ml of non-metabo culture medium was sterilized at 120°C for 15 minutes and then cooled. In addition to this soil medium substrate, non-metabo culture medium was infiltrated. 1.25 ml of culture medium metabo , filter-sterilized using a membrane filter A020A025A manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd., was added to the soil medium substrate into which the culture medium non- metabo had infiltrated, and the fungal medium (hereinafter referred to as 'fungal medium') was added and infiltrated. (referred to as ‘soil medium’) was obtained.
또한, 얻어진 토양 배지에는, 11.25 ml의 배양액non-metabo과, 1.25 ml의 배양액metabo이 포함되어 있고, 합계로 12.5 ml의 배양액(이하, '배양액total'이라고 함)이 포함되어 있었다. 토양 배지에 포함되는 이 배양액total에 있어서, 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)의 농도는 2.5 mg/L이며, 피루브산의 농도는 0.25 g/L였다.In addition, the obtained soil medium contained 11.25 ml of non-metabo culture medium, 1.25 ml of metabo culture medium, and a total of 12.5 ml of culture medium (hereinafter referred to as 'culture medium total '). In the total amount of this culture contained in the soil medium, the concentration of reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) was 2.5 mg/L and the concentration of pyruvic acid was 0.25 g/L.
송이(Tricholoma matsutake)의 종균으로서, NITE BP-03665, NITE BP-03666, NITE BP-03667, NITE BP-03668을 준비했다. 또한, 송이(Tricholoma matsutake)의 종균으로서, FFPRI460553, FFPRI460555, FFPRI460556, FFPRI460558, FFPRI460564, FFPRI460565, FFPRI460566, FFPRI460567, FFPRI460568(이들은 일본국 나가노현 우에다시에서 채취한 상이한 자실체로부터 분리, 모두 국립 연구 개발 법인 삼림 연구·정비 기구 보존)을 준비했다.As spawn for Matsutake (Tricholoma matsutake), NITE BP-03665, NITE BP-03666, NITE BP-03667, and NITE BP-03668 were prepared. In addition, as seed strains of matsutake (Tricholoma matsutake), FFPRI460553, FFPRI460555, FFPRI460556, FFPRI460558, FFPRI460564, FFPRI460565, FFPRI460566, FFPRI460567, FFPRI460568 (these are different strains collected from Ueda City, Nagano Prefecture, Japan) Separated from the entity, all national research and development corporation forests Preservation of research and maintenance equipment) was prepared.
준비한 송이의 종균을, 각각 일차 대사 산물을 포함하는 토양 배지에 접종하여 배양했다. 구체적으로, 액체 배양한 송이의 종균 4.5 mg(건조 중량)을, 각각, 일차 대사 산물을 포함하는 상술한 토양 배지에 접종하고, 하기 배양 조건으로 150 일간 배양했다. 또한, 일차 대사 산물을 함유시키지 않는 것 이외는 상술한 토양 배지(일차 대사 산물을 포함하는 토양 배지)와 동일한 조건으로 제조한 토양 배지를, 컨트롤 배지로서 이용하여, 전술한 배양 방법과 동일한 방법으로 송이의 종균을 배양했다.The prepared mushroom spawn was inoculated into a soil medium containing each primary metabolite and cultured. Specifically, 4.5 mg (dry weight) of liquid-cultured matsutake seeds were inoculated into the above-described soil medium containing primary metabolites, respectively, and cultured for 150 days under the following culture conditions. In addition, a soil medium prepared under the same conditions as the above-mentioned soil medium (soil medium containing primary metabolites) except that it does not contain primary metabolites was used as a control medium, and the same method as the above-described culture method was used as a control medium. Matsutake spawn was cultured.
<배양 조건><Culture conditions>
온도 : 22℃에서 30 일간, 이 후 17℃에서 120 일간Temperature: 30 days at 22℃, then 120 days at 17℃
분위기 : 실내와 동일(공기)Atmosphere: Same as indoor (air)
일조 시간 : 없음Sunshine hours: None
배양법 : 정치 배양Culture method: stationary culture
송이의 종균을 150 일간 배양한 후, 토양 배지의 표면에 형성되는 곱슬마디 형상의 돌기(자실체 원기)의 유무를 목시로 확인하고 또한 그 직경을 측정했다. 직경이 1 mm 이상인 곱슬마디 형상의 돌기가 형성되어 있는 경우에, 자실체 원기가 형성되어 있다고 판단하여, 자실체 원기를 확인할 수 있는 토양 배지의 수를 카운트했다. 카운트 결과를, 하기 표 5 및 표 6에 나타낸다. 또한, 도 3의 (a)에, 자실체 원기가 형성된 토양 배지의 사진을 나타낸다. 또한, 하기 표 5 및 표 6에 나타내는 분수에 대하여, 분자는 자실체 원기가 확인된 시험관(토양 배지)의 수를 나타내고, 분모는 송이의 종균을 섭취한 시험관(토양 배지)의 수를 나타낸다.After culturing the cluster spores for 150 days, the presence or absence of curly node-shaped protrusions (fruiting body primordia) formed on the surface of the soil medium was visually confirmed and their diameters were measured. When curly node-shaped protrusions with a diameter of 1 mm or more were formed, it was determined that fruiting body primordia were formed, and the number of soil media in which fruiting body primordia could be confirmed was counted. The count results are shown in Tables 5 and 6 below. Additionally, Figure 3(a) shows a photograph of the soil medium in which the fruiting body primordia were formed. In addition, for the fractions shown in Tables 5 and 6 below, the numerator represents the number of test tubes (soil medium) in which fruiting body primordia were confirmed, and the denominator represents the number of test tubes (soil medium) in which cluster spores were ingested.
표 5 및 표 6에 나타내는 바와 같이, 토양 배지에 함유된 배양액에, 일차 대사 산물로서 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)와 피루브산이 포함되는 경우에는, 송이의 종균을 섭취한 시험관(토양 배지) 중 적어도 하나에서 자실체 원기가 유도되었다. 한편, 토양 배지에 함유된 배양액에 일차 대사 산물이 포함되지 않는 경우에는, 송이의 종균을 섭취한 시험관(토양 배지) 모두에 있어서, 자실체 원기는 유도되지 않았다.As shown in Tables 5 and 6, when the culture medium contained in the soil medium contains reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and pyruvic acid as primary metabolites, the test tube (soil medium) ingested the mushroom seed ), fruiting body primordia were induced in at least one of the following. On the other hand, when the culture medium contained in the soil medium did not contain primary metabolites, fruiting body primordia was not induced in all test tubes (soil medium) in which cluster spores were ingested.
[평가 2-2 : 버미큘라이트 배지에 있어서의 유도 성능][Evaluation 2-2: Induction performance in vermiculite medium]
하기 표 7에 나타내는 각 성분을 물에 혼합하여, pH5.0 ~ 5.2의 제 1 액을 얻었다. 제 1 액 1000 ml당 각 성분의 농도는, 하기 표 7에 나타내는 바와 같았다. 또한, 하기 표 8 나타내는 각 성분을 물에 혼합하여, pH5.0 ~ 5.2의 제 2 액을 얻었다. 제 2 액 1000 ml당 각 성분의 농도는, 하기 표 8에 나타내는 바와 같았다. 또한, 이들 배양액은, 비특허 문헌 2에 기재되는 배양액(가와이·오가와 배지)에 상당한다.Each component shown in Table 7 below was mixed with water to obtain a first liquid with a pH of 5.0 to 5.2. The concentration of each component per 1000 ml of the first liquid was as shown in Table 7 below. Additionally, each component shown in Table 8 below was mixed with water to obtain a second liquid with pH 5.0 to 5.2. The concentration of each component per 1000 ml of the second liquid was as shown in Table 8 below. Additionally, these culture media correspond to the culture media (Kawai-Ogawa medium) described in Non-Patent Document 2.
(ｐH5.0-5.2가 되는 양)Appropriate amount
(Amount equivalent to pH5.0-5.2)
얻어진 제 2 액에 대하여, 또한 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)와 피루브산을 각각 혼합하여, 일차 대사 산물을 포함하는 배양액(이하, '배양액metabo'이라고도 함)을 얻었다. 얻어진 배양액metabo에 있어서, 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)의 농도는 25 mg/L이며, 피루브산의 농도는 2.5 g/L였다.배지 기재로서 버미큘라이트를 준비했다. 또한, 이 배지 기재에는, 일차 대사 산물은 포함되어 있지 않았다. 준비한 버미큘라이트 27 g(200 mL)을 500 ml 플라스크에 충전하여, 버미큘라이트로 이루어지는 배지 기재(이하, 단순히 '버미 배지 기재'라고 함)로 했다. 이것에 120 ml의 제 1 액을 각각 더하여 밀봉하고, 120℃에서 50 분간 멸균하고, 이 후 냉각했다. 어드밴테크 도요(주)사 제품인 멤브레인 필터 A020A025A를 이용하여 여과 멸균한, 12 ml의 배양액metabo을, 냉각한 버미 배지 기재에 더하여 침투시켜, 균상 배지(이하, 이 균상 배지를 '버미 배지'라고 함)를 얻었다.The obtained second liquid was further mixed with reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and pyruvic acid to obtain a culture medium containing primary metabolites (hereinafter also referred to as 'culture medium metabo '). In the obtained culture medium metabo , the concentration of reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) was 25 mg/L and the concentration of pyruvic acid was 2.5 g/L. Vermiculite was prepared as a medium substrate. Additionally, this medium substrate did not contain primary metabolites. 27 g (200 mL) of the prepared vermiculite was charged into a 500 ml flask to prepare a medium substrate made of vermiculite (hereinafter simply referred to as 'vermi medium substrate'). 120 ml of the first liquid was added thereto, sealed, sterilized at 120°C for 50 minutes, and then cooled. 12 ml of culture medium metabo , filter-sterilized using membrane filter A020A025A manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd., was added to the cooled vermi medium base and infiltrated into the fungal medium (hereinafter, this fungal medium is referred to as ‘vermi medium’). ) was obtained.
또한 얻어진 버미 배지에는, 120 ml의 제 1 액과, 12 ml의 배양액metabo이 포함되어 있고, 합계로 132 ml의 배양액(이하, '배양액total'이라고 함)이 포함되어 있었다. 버미 배지에 포함되는 이 배양액total에 있어서, 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)의 농도는 2.3 mg/L이며, 피루브산의 농도는 0.23 g/L였다.Additionally, the obtained vermi medium contained 120 ml of the first liquid and 12 ml of the culture medium metabo , and contained a total of 132 ml of the culture medium (hereinafter referred to as 'culture liquid total '). In the total amount of this culture contained in the vermi medium, the concentration of reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) was 2.3 mg/L and the concentration of pyruvic acid was 0.23 g/L.
송이(Tricholoma matsutake)의 종균으로서, NITE BP-03665, NITE BP-03666, NITE BP-03667, NITE BP-03668을 준비했다. 또한, 송이(Tricholoma matsutake)의 종균으로서, FFPRI460552, FFPRI460558, FFPRI460559, FFPRI460560, FFPRI460561, FFPRI460563, FFPRI460564, FFPRI460567(이들은 일본 나가노현 우에다시에서 채취한 상이한 자실체로부터 분리, 모두 국립 연구개발 법인 삼림 연구·정비 기구 보존)을 준비했다.As spawn for Matsutake (Tricholoma matsutake), NITE BP-03665, NITE BP-03666, NITE BP-03667, and NITE BP-03668 were prepared. In addition, as spawn of matsutake (Tricholoma matsutake), FFPRI460552, FFPRI460558, FFPRI460559, FFPRI460560, FFPRI460561, FFPRI460563, FFPRI460564, FFPRI460567 (all isolated from different fruiting bodies collected in Ueda, Nagano Prefecture, Japan, all from National Research and Development Corporation Forest) Research and maintenance instrument preservation) was prepared.
준비한 송이의 종균을, 각각 일차 대사 산물을 포함하는 상술한 버미 배지에 접종하여 배양했다. 구체적으로, 액체 배양한 송이의 종균 43.2 mg(건조 중량)을, 각각, 일차 대사 산물을 포함하는 상술한 버미 배지에 접종하고, 하기 배양 조건으로 150 일간 배양했다.The prepared matsutake seeds were inoculated into the above-described vermi medium containing each primary metabolite and cultured. Specifically, 43.2 mg (dry weight) of liquid-cultured matsutake seeds were inoculated into the above-described vermi medium containing primary metabolites, and cultured for 150 days under the following culture conditions.
<배양 조건><Culture conditions>
온도 : 17℃Temperature: 17℃
분위기 : 실내와 동일(공기)Atmosphere: Same as indoor (air)
조명 : 없음Lighting: None
배양법 : 정치 배양Culture method: stationary culture
송이의 종균을 150 일간 배양한 후, 토양 배지의 표면에 형성되는 곱슬마디 형상의 돌기(자실체 원기)의 유무를 목시로 확인하고 또한 그 직경을 측정했다. 직경이 1 mm 이상인 곱슬마디 형상의 돌기가 형성되어 있는 경우에, 송이의 자실체 원기가 형성되어 있다고 판단하여, 자실체 원기를 확인할 수 있는 시험관(토양 배지)의 수를 카운트했다. 카운트 결과를, 하기 표 9 및 표 10에 나타낸다. 또한, 도 3의 (b)에, 송이의 자실체 원기가 형성된 버미 배지의 사진을 나타낸다. 또한, 하기 표 9 및 표 10에 나타내는 분수에 대하여, 분자는 자실체 원기가 확인된 시험관(버미 배지)의 수를 나타내고, 분모는 송이의 종균을 섭취한 시험관(버미 배지)의 수를 나타낸다.After culturing the cluster spores for 150 days, the presence or absence of curly node-shaped protrusions (fruiting body primordia) formed on the surface of the soil medium was visually confirmed and their diameters were measured. When curly node-shaped protrusions with a diameter of 1 mm or more were formed, it was determined that the fruiting body primordia of the cluster had been formed, and the number of test tubes (soil medium) in which the fruiting body primordia could be confirmed was counted. The count results are shown in Tables 9 and 10 below. Additionally, Figure 3(b) shows a photograph of the vermi medium on which the fruiting body primordia of the bunch were formed. In addition, for the fractions shown in Tables 9 and 10 below, the numerator represents the number of test tubes (vermi medium) in which fruiting body primordia were confirmed, and the denominator represents the number of test tubes (vermi medium) in which cluster spawn was ingested.
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표 9 및 표 10에 나타내는 바와 같이, 버미 배지에 함유되는 배양액에, 일차 대사 산물로서, 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)와 피루브산이 포함되는 경우에는, 송이의 종균을 섭취한 시험관(버미 배지) 중 적어도 1 개에서 자실체 원기가 유도되었다. 한편, 버미 배지에 함유되는 배양액에 일차 대사 산물이 포함되지 않는 경우에는, 송이의 종균을 섭취한 시험관(토양 배지) 모두에 있어서, 자실체 원기는 유도되지 않았다.As shown in Table 9 and Table 10, when the culture medium contained in the vermi medium contains reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and pyruvic acid as primary metabolites, the test tube ingesting the mushroom seed (vermi) Fruiting body primordia were induced in at least one of the media. On the other hand, when the culture medium contained in the vermi medium did not contain primary metabolites, fruiting body primordia was not induced in all test tubes (soil medium) in which matsutake spawn was ingested.
[평가 2-3 : 압맥 배지에 있어서의 유도 성능][Evaluation 2-3: Induction performance in pressure medium]
사용한 각 원료를 2 배량(즉, 압맥 15 g, 톱밥 6 g, 배양액 47 ml로 하여 300 ml 플라스크 내에서 압맥 배지를 작성)으로 한 것, 배양액에 함유하는 일차 대사 산물로서 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH) 및 피루브산을 이용한 것 이외는, 평가 1-1과 동일한 방법으로 압맥 배지를 작성했다. 작성한 압맥 배지에 포함되는 배양액total(47 ml)에 있어서, 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)의 농도는 1.7 mg/L이며, 피루브산의 농도는 0.17 g/L였다.The amount of each raw material used was doubled (i.e., 15 g of pressure medium, 6 g of sawdust, and 47 ml of culture medium were used to create pressure medium in a 300 ml flask). Reduced nicotinamide adenine dimethyl was added as the primary metabolite contained in the culture solution. A pressure medium was prepared in the same manner as evaluation 1-1, except that nucleotide (NADH) and pyruvic acid were used. In the total (47 ml) culture medium contained in the prepared pressure medium, the concentration of reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) was 1.7 mg/L, and the concentration of pyruvic acid was 0.17 g/L.
송이(Tricholoma matsutake)의 종균으로서, NITE BP-03663, NITE BP-03664, NITE BP-03666, NITE BP-03667, NITE BP-03668을 준비했다. 또한, 송이(Tricholoma matsutake)의 종균으로서, FFPRI460561, FFPRI460564, FFPRI460565, FFPRI460566, FFPRI460567(이들은 일본 나가노현 우에다시에서 채취한 상이한 자실체로부터 분리, 모두 국립 연구개발 법인 삼림 연구·정비 기구 보존)을 준비했다.As spawn for Matsutake (Tricholoma matsutake), NITE BP-03663, NITE BP-03664, NITE BP-03666, NITE BP-03667, and NITE BP-03668 were prepared. In addition, as spawn of matsutake (Tricholoma matsutake), FFPRI460561, FFPRI460564, FFPRI460565, FFPRI460566, and FFPRI460567 (these were isolated from different fruiting bodies collected in Ueda City, Nagano Prefecture, Japan, all preserved by the National Research and Development Corporation Forest Research and Maintenance Organization) were prepared. .
준비한 송이의 종균을, 각각 일차 대사 산물을 포함하는 상술한 압맥 배지에 접종하여 배양했다. 구체적으로, 액체 배양한 송이의 종균 36 mg(건조 중량)을, 각각, 일차 대사 산물을 포함하는 상술한 압맥 배지에 접종하고, 하기 배양 조건으로 150일간 배양했다. 또한, 일차 대사 산물을 함유시키지 않는 것 이외는 상술한 압맥 배지(일차 대사 산물을 포함하는 압맥 배지)와 동일한 조건으로 제조한 압맥 배지를, 컨트롤 배지로서 이용하여, 전술한 배양 방법과 동일한 방법으로 송이의 종균을 배양했다.The prepared mushroom spawn was inoculated into the above-described pressure medium containing each primary metabolite and cultured. Specifically, 36 mg (dry weight) of liquid-cultured matsutake seeds were inoculated into the pressure medium containing primary metabolites, respectively, and cultured for 150 days under the following culture conditions. In addition, the pressure medium prepared under the same conditions as the pressure medium (pressure medium containing primary metabolites) described above, except that it did not contain primary metabolites, was used as a control medium, and the pressure medium was used in the same manner as the culture method described above. Matsutake spawn was cultured.
<배양 조건><Culture conditions>
온도 : 22℃에서 30 일간, 이후 17℃에서 120 일간Temperature: 30 days at 22℃, then 120 days at 17℃
분위기 : 실내와 동일(공기)Atmosphere: Same as indoor (air)
일조 시간 : 없음Sunshine hours: None
배양법 : 정치 배양Culture method: stationary culture
송이의 종균을 120 일간 배양한 후, 압맥 배지의 표면에 형성되는 곱슬마디 형상의 돌기(자실체 원기)의 유무를 목시로 확인하고 또한 그 직경을 측정했다. 직경이 1 mm 이상인 곱슬마디 형상의 돌기가 형성되어 있는 경우에, 송이의 자실체 원기가 형성되어 있다고 판단하여, 자실체 원기를 확인할 수 있는 시험관(압맥 배지)의 수를 카운트했다. 카운트 결과를, 하기 표 11 및 표 12에 나타낸다. 또한, 도 3의 (c)에, 송이의 자실체 원기가 형성된 압맥 배지의 사진을 나타낸다. 또한, 하기 표 11 및 표 12에 나타내는 분수에 대하여, 분자는 자실체 원기가 확인된 시험관(압맥 배지)의 수를 나타내고, 분모는 송이의 종균을 섭취한 시험관(압맥 배지)의 수를 나타낸다.After culturing the cluster spores for 120 days, the presence or absence of curly node-shaped protrusions (fruiting body primordia) formed on the surface of the pressure medium was visually confirmed and their diameters were measured. When curly node-shaped protrusions with a diameter of 1 mm or more were formed, it was determined that the fruiting body primordia of the cluster had been formed, and the number of test tubes (pressure medium) in which the fruiting body primordia could be confirmed was counted. The count results are shown in Tables 11 and 12 below. In addition, Figure 3(c) shows a photograph of the pressure medium on which the fruiting body primordia of the bunch were formed. In addition, for the fractions shown in Tables 11 and 12 below, the numerator represents the number of test tubes (pressure medium) in which fruiting body primordia was confirmed, and the denominator represents the number of test tubes (pressure medium) in which cluster spawn was ingested.
460561FFPRI
460561
460564FFPRI
460564
460565FFPRI
460565
460566FFPRI
460566
460567FFPRI
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표 11 및 표 12에 나타내는 바와 같이, 압맥 배지에 함유되는 배양액에, 일차 대사 산물로서, 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)와 피루브산이 포함되는 경우에는, 송이의 종균을 섭취한 시험관(압맥 배지) 중 적어도 1 개에서 자실체 원기가 유도되었다. 한편, 압맥 배지에 함유되는 배양액에 일차 대사 산물이 포함되지 않는 경우에는, 송이의 종균을 섭취한 시험관(압맥 배지) 모두에 있어서, 자실체 원기는 유도되지 않았다.As shown in Table 11 and Table 12, when the culture medium contained in the pressure medium contains reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and pyruvic acid as primary metabolites, the test tube ingesting the pine mushroom spawn (pressure Fruiting body primordia were induced in at least one of the media. On the other hand, when the culture medium contained in the pressure medium did not contain primary metabolites, fruiting body primordia was not induced in all test tubes (pressure medium) in which matsutake spawn was ingested.
이상 설명한 평가 2-1 ~ 2-3의 결과로부터, 균상 배지의 조성(즉, 배지 기재의 종류 및 배양액의 조성)이 바뀌어도, 배양액에 특정의 일차 대사 산물이 포함되어 있으면, 송이의 자실체 원기가 유도되는 것이 명백해졌다. 또한, 평가 2-1 ~ 2-3에 나타내는 바와 같이, 배양액에 일차 대사 산물이 포함되어 있으면, 다양한 균 주의 송이의 종균에 대하여, 자실체 원기가 유도되는 것이 명백해졌다.From the results of evaluations 2-1 to 2-3 described above, even if the composition of the fungal medium (i.e., the type of medium substrate and the composition of the culture medium) is changed, if the culture medium contains a specific primary metabolite, the fruiting body primordia of the cluster It became clear that it was being induced. Additionally, as shown in Evaluations 2-1 to 2-3, it became clear that when primary metabolites were included in the culture medium, fruiting body primordia was induced in cluster spores of various strains.
Claims (6)
상기 배양액은, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 송이류의 자실체 원기의 유도 방법.It includes cultivating the spawn of Matsutake mushrooms in a fungal medium containing a culture medium and a medium substrate into which the culture medium has penetrated,
The culture medium contains adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), cyclic AMP (c-AMP), flavin adenine dinucleotide (FAD), flavin mononucleotide (FMN), and oxidized nicotinamide adenine dinucleotide. (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid and malic acid. A method for inducing fruiting body primordia in Matsutake, characterized by comprising at least one type of primary metabolite.
상기 일차 대사 산물이 피루브산과 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)인 것을 특징으로 하는, 유도 방법.According to claim 1,
An induction method, characterized in that the primary metabolites are pyruvic acid and reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH).
상기 배양액에 있어서의 상기 피루브산의 농도가 0.01 ~ 1 g/L이며,
상기 배양액에 있어서의 상기 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH)의 농도가 0.1 ~ 15 mg/L인 것을 특징으로 하는 유도 방법.According to claim 2,
The concentration of pyruvic acid in the culture medium is 0.01 to 1 g/L,
An induction method, characterized in that the concentration of reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) in the culture medium is 0.1 to 15 mg/L.
상기 배양액은, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 송이류의 자실체 원기의 제조 방법.It includes cultivating the spawn of Matsutake mushrooms in a fungal medium containing a culture medium and a medium substrate into which the culture medium has penetrated,
The culture medium contains adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), cyclic AMP (c-AMP), flavin adenine dinucleotide (FAD), flavin mononucleotide (FMN), and oxidized nicotinamide adenine dinucleotide. (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid and malic acid. A method for producing fruiting body primordia of Matsutake, characterized by comprising at least one type of primary metabolite.
배양액과 상기 배양액이 침투한 배지 기재를 포함하고,
상기 배양액이, 아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 균상 배지.As a fungal medium for cultivating Matsutake seeds,
It includes a culture medium and a medium substrate into which the culture medium has penetrated,
The culture medium contains adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), cyclic AMP (c-AMP), flavin adenine dinucleotide (FAD), flavin mononucleotide (FMN), and oxidized nicotinamide adenine dinucleotide. (NAD + ), reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid and malic acid. A fungal medium, characterized in that it contains one or more primary metabolites.
아데노신 삼인산(ATP), 구아노신 삼인산(GTP), 사이클릭 AMP(c-AMP), 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 플라빈 모노뉴클레오타이드(FMN), 산화형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NAD＋), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드(NADH), 환원형 니코틴아마이드 아데닌 디뉴클레오타이드 인산(NADPH), 글루코오스 육인산(G6P), 피루브산, 옥살로 초산, 호박산 및 사과산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 일차 대사 산물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 배양액.
As a culture medium contained in a fungal medium for cultivating Matsutake seeds,
Adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), cyclic AMP (c-AMP), flavin adenine dinucleotide (FAD), flavin mononucleotide (FMN), oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD + ) , reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), glucose hexaphosphate (G6P), pyruvic acid, oxaloacetic acid, succinic acid, and malic acid. A culture medium, characterized in that it contains metabolites.
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