KR20240026704A - Ginsenoside Rk1을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents
Ginsenoside Rk1을 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 METTL1을 저해하여 세포사멸을 증가시킬 수 있는 Ginsenoside Rk1을 유효성분으로 함유하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 Ginsenoside Rk1은 전립선 암세포에 다량 발현되어 있는 METTL1의 유전자의 발현을 저해시켜 암대사를 억제하여 암세포의 성장 억제 및 세포사멸을 유도 시키는 작용 효과가 있으므로, 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 활용될 수 있다.
Description
본 발명은 전립선 암대사 관련 METTL1을 억제하는 유효성분인 Ginsenoside Rk1 및 이를 유효성분으로 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
전립선암(prostate cancer, PC)은 남성에게 가장 흔한 악성 종양이고, 미국과 유럽에서 암-관련 사망의 두 번째 원인이다. 서구 스타일 식단의 보급과 노령 인구의 급증으로 인해, 전립선암(PC)의 발병률은 대부분의 선진국들에서 현저하게 증가해 왔다. 혈청을 이용한 전립선-특이적 항원(Prostate-specificantigen, PSA)을 스크리닝하는 것은 PC의 조기 발견의 현저한 향상을 가져왔고, 수술과 방사선 치료에 의해 치유될 수 있는 국소화된 질병을 가진 환자 비율의 증가를 가져왔다. 그러나, 이러한 PC 환자의 20-30%는 여전히 병의 재발을 겪고있다.
여성은 전립선을 가지고 있지 않아서 전입선암에 걸릴 수 없지만 자녀에게 유전자인자를 유전시킬 수는 있다. 미국 암 학회에 따르면 약 6명 중 1명의 남성이 자기의 일생에서 암에 걸린다. 다행히 대부분의 전입선 종양의 성장은 느리고 조기에 발견하면 치료로 종양의 크기를 줄일 수 있다. 최근까지 전립선암의 위험인자로 잘 알려진 것은 나이, 민족성(유전), 가족력(유전)이다. 노령은 모든 유형의 암에 대한 위험성을 증가시키지만 민족성과 가족력의 관여는 유전적 요소 또한 매우 크다는 것을 시사한다.
고형암(solid tumor)은 근치(根治) 수술이 이루어지지 않는 한 예후 불량이며, 그 주된 요인은 현재의 화학요법의 효과가 불충분하다는데에 기인한다. 종래의 화학요법 약은, 핵산 합성 과정, DNA, 미소관에 작용하여, 핵산으로부터 단백질 생성 과정을 저해하는 것을 기본으로 하여, 암 세포 뿐 아니라 세포 증식이 일어나는 재생성 조직 정상세포에의 장해를 피할 수 없었다. 최근, 암 세포에 특이적으로 발현하고 있는 분자가 차례차례로 분류되고 있어, 이들을 표적으로 하는 저해약의 경우 정상세포에의 유해 반응을 최소로 할 수 있으며 그 결과, 투여량도 증대할 수 있다. 이러한 분자 표적 치료약도 개발되어 왔지만, 그 최대의 결점은, 반드시 많은 증례에 유효한것은 아니고, 개개의 증례에 의해 효과가 달라, 그것을 투여 전에 예측하는 것이 불완전하다는 것이다. 분자 표적 치료약의 효과가 개개의 증례로 크게 다른 이유로 치료의 표적으로 여겨 온 분자가 발암 과정이나 전이에 관련되는 유전자인 것을 들 수 있다. 발암 과정은 암종에 따라서 뿐 아니라, 같은 암종 내에서도 다양하기때문에, 표적으로 하는 분자가 암의 증식에 관여하는 정도는 개개의 증례에 따라 다르다고 생각된다. 그러므로, 암종을 넘어 보편적으로 중심적 역할을 하는 분자가 확인되면, 많은 암 증례에 보편적으로 효과를 기대할 수 있는 분자 표적 치료약의 개발이 가능해진다.
본 발명자들은, 선행연구를 통해 전립선 암세포 특이적으로 암세포 성장을 억제할 수 있는 기술을 연구한 결과, METTL1 유전자가 전립선암세포에 다량 발현되며, METTL1 유전자를 전립선암의 진단 또는 치료제의 표적유전자로 활용할 수 있음을 발견하였다. 이에, 전립선암을 억제할 수 있는 유효성분을 개발하고자 후석 연구를 진행하였고, 진세노사이드 Rk1이 METTL1 유전자를 억제함으로써 전립선암 예방, 개선 또는 치료할 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 전립선암 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 전립선암에 대한 항암 보조제를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 암세포내 METTL1의 발현을 억제하기 위한 암세포 사멸용 조성물 및 METTL1의 발현을 저해시키는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는 전립선암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는 전립선암에 대한 항암 보조제를 제공한다.
또한, 본 발명은 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는 전립선암 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.
나아가, 본 발명은 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는, 인비트로(in vitro)상에서 암세포내 METTL1의 발현을 억제하기 위한 암세포 사멸용 조성물을 제공한다.
더 나아가, 본 발명은 인비트로(in vitro)상에서 암세포에 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 처리하여 METTL1의 발현을 저해시키는 방법을 제공한다.
본 발명은 전립선 암대사에 관여하는 METTL1 유전자의 억제 효능을 가진 Ginsenoside Rk1의 전립선암 억제 용도에 관한 것으로, Ginsenoside Rk1을 전립선 암세포에 처리한 결과 세포증식의 감소와 METTL1의 발현 억제와 AMPK의 활성증가 및 암대사 관련단백질(Hexokinase 2(HK2), pyruvate kinase M2 (PKM2))의 발현을 억제시키는 효과가 나타났으므로, 본 발명의 Ginsenoside Rk1은 암 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 개선용 건강식품에 유용하게 이용될 수 있다. 본 발명의 Ginsenoside Rk1을 함유하는 조성물은 전립선암의 표적 유전자 치료제로 부작용을 최소화하는 바이오신약으로서 항암제의 개발에 활용가능성을 줄 수 있다. 또한 암치료의 방법에서 대사치료라는 새로운 치료법을 제시한다.
도 1은 PC3 전립선암주에서 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)의 처리 농도에 따른 세포증식 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 PC3 전립선암주에서의 Ginsenoside Rk1의 METTL1의 억제와 AMPK의 활성증가 및 암대사관련 인자 발현 억제 효과를 확인한 western blot 분석 결과 이미지이다.
도 3은 PC3 전립선암주에서의 Ginsenoside Rk1의 세포사멸 관련 인자에 대한 효과를 확인한 western blot 분석 결과 이미지이다.
도 4는 PC3 전립선암주에서의 Ginsenoside Rk1의 세포주기 분석을 통한 세포사멸 효과를 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 PC3 전립선암주에서의 Ginsenoside Rk1의 METTL1의 억제와 AMPK의 활성증가 및 암대사관련 인자 발현 억제 효과를 확인한 western blot 분석 결과 이미지이다.
도 3은 PC3 전립선암주에서의 Ginsenoside Rk1의 세포사멸 관련 인자에 대한 효과를 확인한 western blot 분석 결과 이미지이다.
도 4는 PC3 전립선암주에서의 Ginsenoside Rk1의 세포주기 분석을 통한 세포사멸 효과를 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
일 측면에서, 본 발명은 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는 전립선암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 METTL1(methyltransferase like 1) 유전자는 NCBI Gene ID: 4234이다.
본 발명에서, 용어 "예방"이란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 전립선암의 발생 및 이로 인한 합병증을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용된 용어 "치료"란 상기 약학적 조성물의 투여에 의해 전립선암 질환 의심 및 발병 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를의미한다. 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 대한의학협회 등에서 제시된 자료를 참조하여 본원의 조성물이 효과가 있는 질환의 정확한 기준을 알고, 개선, 향상 및 치료된 정도를 판단할 수 있을 것이다.
본 발명의 Ginsenoside Rk1은 암대사 관련 METTL1을 저해하는 활성을 갖는 것일 수 있고, 구체적으로는 전립선암세포에 과발현되어 있는 METTL1을 억제하며 AMPK를 활성화 시켜 암대사 관련 HK2와 PKM2의 발현을 억제하는 것일 수 있고, 이를 통해 암대사를 억제하여 암세포의 성장을 억제 및 세포사멸을 유도하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명의 Ginsenoside Rk1은 불활성형인 pro-PARP와 pro-caspase3의 발현을 감소시켜 암세포의 세포사멸을 유도하는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 유효성분을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여량은 개체의 연령, 체중, 성별, 신체 상태 등을 고려하여 선택된다. 상기 약학 조성물 중 포함되는 유효성분의 농도는 대상에 따라 다양하게 선택할 수 있음은 자명하며, 바람직하게는 약학 조성물에 0.01 ~ 5,000㎍/ml의 농도로 포함되는 것이다. 그 농도가 0.01 ㎍/ml 미만일 경우에는 약학 활성이 나타나지 않을 수 있고, 5,000㎍/ml를 초과할 경우에는 인체에 독성을 나타낼 수 있다.
상기 약학적 조성물은 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화될 수 있다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질, 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/ 또는 폴리에틸렌 글리콜)를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.
또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제제이며, 주사용 제제의 용매로서 물, 링거액, 등장성 생리식염수 또는 현탁액을 들 수 있다. 상기 주사용 제제의 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수있으며 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있다.
또한, 상기 주사용 제제는 올레산과 같은 지방산을 사용할 수 있다.
본 발명의 상기 약학적 조성물을 투여할 수있는 개체는 인간을 포함한 모든 동물을 포함한다. 예를 들어, 개, 고양이, 마우스와 같은 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
일 측면에서, 본 발명은 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는 전립선암에 대한 항암 보조제를 제공한다.
본 발명의 ginsenoside Rk1은 화학적 항암 약물(항암제) 등과 함께 투여함으로써, 암세포의 사멸 효과를 통해 종래의 항암제의 암치료 효과를 증가시킬 수 있다. 병용 투여는 상기 항암제와 동시에 또는 순차적으로 이루어질 수 있다.
일 측면에서, 본 발명은 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는 전립선암 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 "식품"이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 건강기능식품 및 기능성 음료를 모두 포함하는 것일 수 있다.
상기 "건강기능식품"이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 "기능성 음료"란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며, 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 유효성분을 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상기 기술한 것 이외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 상기 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
일 측면에서, 본 발명은 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는, 인비트로(in vitro)상에서 암세포내 METTL1의 발현을 억제하기 위한 암세포 사멸용 조성물을 제공한다.
일 측면에서, 본 발명은 인비트로(in vitro)상에서 암세포에 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 처리하여 METTL1의 발현을 저해시키는 방법을 제공한다.
본 발명에서 상기의 ‘암’은 췌장암, 유방암, 전립선암, 뇌종양, 두경부암종, 흑색종, 골수종, 흑색종, 백혈병, 림프종, 신경아세포종, 간암, 위암, 결장암, 골암, 자궁암, 난소암, 직장암, 식도암, 소장암, 항문부근암, 결장암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종 및 중추신경계 종양로 구성되는 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있으며, 가장 바람직하게는 전립선암일 수 있다.
상기 진세노사이드 Rk1은 전립선 암세포주에 0.01 내지 500 μM, 바람직하게는 1 내지 200 μM, 보다 바람직하게는 50 내지 150μM의 농도로 처리하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
준비예 1. 진세노사이드 Rk1의 준비
본 발명의 하기 실시예에서의 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)은 Sigma-Aldrich 카타로그번호 42754-5mg을 구입하여 각 실험을 수행하였다.
실시예 1. 전립선 암세포주 배양 및 Ginsenoside Rk1의 전립선암에서의 세포생존 억제 효과 확인실험
한국세포주은행으로부터 분양된 인간 PC3 전립선 암세포주는 10% 우태아 혈청(FBS)이 포함된 RPMI1640으로 37℃의 5% CO2에 조건의 세포배양기에서 배양하였다. PC3 전립선 암세포주의 생존력을 분석하기 위해서, PC3 전립선 암세포주를 1×104 cells/100 ㎕로 96 well에 심고 24시간 동안 배양한 후에, Ginsenoside Rk1을 농도별(0, 5, 10, 20, 40, 60, 80, 120 μM)로 처리하여 24시간 후에 세포 생존율을 MTT 방법으로 측정하였다. 또한, PC3 전립선 암세포주를 6well plate에 2×105/ml로 세포로 배양후 Ginsenoside Rk1을 60, 120 μM 로 처리하여 24시간 후에 crystal violet 염색후 10% acetic acid로 용해하여 흡광도 590 nM에서 측정하였다.
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, Ginsenoside Rk1 처리후 24시간후에 처리 농도 의존적으로 암세포의 증식을 억제하여 세포 생존율이 감소되는 효과가 있음을 확인하였다.
실시예 2. Ginsenoside Rk1의 METTL1의 억제와 AMPK의 활성증가 및 암대사관련 인자 발현 억제 효과
AMPK는 세포의 에너지 상태에 대한 중요한 센서로서 AMPK 신호계는 에너지 상태를 성장신호와 연결 시킨다. AMPK의 활성감소는 mTOR등을 활성화 시키며, 당분해를 촉진시킨다. METTL1을 억제시 AMPK가 활성을 가지며, 암 대사를 억제할수 있다. 이에, PC3 전립선암주에서 Ginsenoside Rk1이 METTL1의 억제와 AMPK의 활성증가 및 암대사관련 인자 발현 억제 효과가 있는지를 평가하였다.
PC3 전립선 암세포주를 6well plate에 2×105/ml로 세포로 배양후 Ginsenoside Rk1을 0, 80 μM 로 처리하여 24시간 후에 수거하여 METTL1, p-AMPK, HK2 및 PKM2 단백질을 추출하여 Western-blot을 사용하여 단백질 발현을 확인 하였다.
구체적으로, 단백질 측정을 위한 웨스턴 볼롯(Western blot) 분석을 위해, 수거한 세포를 PBS로 세척 한 다음 lysis 용액 (20mM 자당, 1mM EDTA, 20 μM Tris-CL, pH7.2, 1mM DTT, 10mM KCL, 1.5 mM MgCL2, 5 μg/mL 펩스타틴 A, 10 μg/ml 류펩틴 및 2 μg/mL 아프로티닌)를 첨가 하여 용리 시켰다. 원심 분리 후 상등액을 수집하여 목적 단백질 농도를 측정한 후 30 μg을 함유한 분취액을 bio-rad 단백질 분석 키트을 이용하여 SDS-폴리아크릴아마이드 겔 상에서 분리하고 지시된 1차 항체를 이용하여 포옥시다아제 공액화 2차 각항체를 이용하였으며, ECL검출 시스템으로 분석하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, Ginsenoside Rk1처리시 METTL1을 억제 하며 AMPK를 활성화 시켜 암대사 관련 HK2와 PKM2의 발현을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.
실시예 3. Ginsenoside Rk1의 세포사멸 유도 효과
PC3 전립선암주에서 Ginsenoside Rk1 처리시 암대사 억제를 통하여 세포사멸을 유도하는지 확인하기 위하여, PC3 전립선 암세포주를 6well plate에 2×105/ml로 세포로 배양후 Ginsenoside Rk1을 0, 80 μM 로 처리하고 24시간 후에 수거하여 pro-PARP와 pro-caspase3 단백질을 추출하여 상기 실시예 2와 동일한 방법으로 Western-blot 분석을 통해 단백질 발현을 확인 하였다.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, PC3 전립선암주에서의 Ginsenoside Rk1이 불활성형인 pro-PARP와 pro-caspase3의 발현을 감소시켜 세포사멸을 유도하는 효과를 나타냄을 확인하였다.
실시예 3. PC3 전립선암주에서의 Ginsenoside Rk1의 세포주기 분석을 통한 세포사멸 효과
PC3 전립선암주에서의 Ginsenoside Rk1의 세포주기 분석을 통하여 세포사멸 효과를 평가하였다. 먼저, PCS 전립선 암세포주를 6well plate에 2×105/ml로 세포로 배양후 Ginsenoside Rk1을 0, 120 μM 로 처리하여 24시간 후에 수거하고, 세포를 PBS로 2회 세척한 후 원심분리하여, 형성된 펠렛(pellet)을 4℃에서 24시간 동안 75%(v/v) 에탄올로 고정하였다. 세포를 PBS로 한 차례 세척하고 암 조건에서 30분 동안 PBS(pH7.4)에 녹인 RNase A(0.1 mg/ml)를 포함하는 차가운 PI 용액(50 50 ㎍/㎖)에 재현탁하여, FACS(Fluorescent activated cell sorter)를 사용하여 세포사멸을 측정한 후 비율을 분석하였다.
Ginsenoside Rk1처리시 세포주기의 세포사멸 부분인 sub-G1이 증가하는지 확인 한 결과, Ginsenoside Rk1 120 μM처리시 세포사멸 부분인 sub-G1이 50.90% 증가하여 세포사멸 유도 효과가 있음을 확인하였다(도 4).
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
Claims (7)
- 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는 전립선암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 Ginsenoside Rk1은 암대사 관련 METTL1을 저해하는 것인, 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 Ginsenoside Rk1은 pro-PARP와 pro-caspase3의 발현을 감소시켜 전립선암의 세포사멸을 유도하는 것인, 약학적 조성물.
- 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는 전립선암에 대한 항암 보조제.
- 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는 전립선암 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 유효성분으로 포함하는, 인비트로(in vitro)상에서 암세포내 METTL1의 발현을 억제하기 위한 암세포 사멸용 조성물.
- 인비트로(in vitro)상에서 암세포에 진세노사이드 Rk1(Ginsenoside Rk1)을 처리하여 METTL1의 발현을 저해시키는 방법.
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| KR101496155B1 (ko) | 2012-03-09 | 2015-02-27 | 한국과학기술연구원 | 진세노사이드 알지5 또는 진세노사이드 알케이1의 함량비율이 증가된 가공 파낙스속 식물 추출물, 그 제조방법, 및 그 가공 파낙스속 식물 추출물을 포함하는 조성물 |
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2022
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