KR20230165772A - 질 미생물총-연관 방법, 조성물, 및 장치 - Google Patents

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콜린 데니스 아코스타
요한 이.티. 판 휠카마 플리크
토마스 군델룬트 라스무쎈
엘레케 페나 보스마
브륀율프 모르텐젠
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프레야 바이오사이언시즈 에이피에스
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Abstract

본 발명은, 여성 대상체가 비뇨생식관에서 장내미생물불균형 미생물군을 나타내는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 염증 치료에 사용하기 위한 제약 조성물에 관한 것이다. 제약 조성물은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하고, 여기서 제제는 (i) 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고; (ii) 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하고; 여기서 제약 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 본 발명은 또한, 상기 조성물의 제조 방법, 및 그를 포함하는 및/또는 사용하는 장치에 관한 것이다.

Description

질 미생물총-연관 방법, 조성물, 및 장치
관련 출원
본 출원은 2021년 3월 3일에 출원된 미국 가출원 번호 63/156,328의 이익을 청구하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
발명의 배경
질은 여성의 자궁에서 신체 외부로 이어지는 섬유근 튜브형 관이다. 건강한 질은 질 감염으로부터 그의 숙주를 보호하는 미생물, 특히 락토바실러스(Lactobacillus) 속의 상호 공생 세균총(flora)에 의해 콜로니화된다. 가임기 여성의 건강한 질의 산도 (pH 약 3.8-4.5)는 락토바실러스에 의한 분비된 글리코겐/글루코스의 락트산 및 아세트산으로의 분해에 기인하는 것으로 생각된다. 산성 조건은 박테리아, 원생동물 및 바이러스를 포함한 많은 병원성 미생물 및 병원균(pathobiont)의 성장에 불리하다. 그러나, 질 미생물군의 불균형으로 인해 병원성 미생물 및 병원균이 과성장할 수 있고, 이는 장내미생물불균형(dysbiosis), 염증 및/또는 감염을 초래한다.
박테리아성 질염, 질 칸디다증 및 트리코모나스증 및 이들의 조합과 같은, 관련된 병원성 미생물에 따라, 많은 종류의 질 감염 (질염)이 존재한다.
질내 또는 경구 사용을 위한 락토바실러스-함유 생성물 (예를 들어, 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 람노수스(Lactobacillus rhamnosus), 또는 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri) 포함)이 수년 동안 이용가능하였다. 이들 생성물은 인간 기원의 동결건조 락토바실러스 아시도필루스 또는 다른 락토바실러스 종 (예를 들어, 락토바실러스 람노수스, 또는 락토바실러스 가세리)을 함유하는 질 좌약 뿐만 아니라 다양한 영양 보충제를 포함한다. 이들 생성물은 외인성 락토바실러스로 질을 콜로니화할 수 없는 생성물로 인해 대부분 비-효과적이었다. 이는 낮은 품질 또는 생태학적으로 부적합한 균주의 사용에 기인하는 것일 수 있다.
질 미생물 틈새에서의 단일 균주와 같은 단리된 박테리아의 콜로니화 및 확립은 시험관내 실험으로부터 예측하기 어렵고, 예를 들어, 질 미생물 틈새에서 상이한 박테리아 종이 상호작용하는 것이 통상적이며, 이들 상호작용은 실험실에서 재현하기 어렵다. 상이한 여성들이 락토바실러스의 종/균주의 상이한 조성에 의해 콜로니화될 수 있으며 이러한 락토바실러스의 조성은 시간에 따라 변한다는 것은 잘 확립되어 널리 받아들여지고 있다. 따라서, 박테리아 종이 유망한 시험관내 결과를 나타내더라도, 이는 생체내에서 콜로니화 또는 생착(engrafting)되지 않고 요망되는 치료적 효과를 제공하지 않을 수 있거나, 전달된 균주(들)가 집합적으로 적응하고 시간에 따라 콜로니화 유지를 제공할 수 없기 때문에 효과가 일시적이다. 예를 들어, 질 점막 (질 상피 세포 - VEC) 부착, 예를 들어, 과산화수소 및/또는 박테리오신과 같은 항-미생물/항-병원성 물질을 생성하는 능력, 산성화를 위해 락트산을 생성하는 능력, 및 배양에서 빠른 배가 시간에 대한 특정 값이 종종 시험관 내에서 측정되지만, 이들 특징이 생체내에서 특정 균주가 질 틈새에 생착되는 능력 (질을 콜로니화하는 그의 능력)에 대한 성공적인 예측으로 일상적으로 이어지지는 않는다.
따라서, 여성의 질 질환 및 불리한 건강 상태에 대한 추가의 치료적 조성물의 개발에 대한 필요성이 존재한다.
발명의 요약
본 발명은 조성물, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 그의 생성 방법 및 치료적 방법을 제공함으로써 이러한 충족되지 않은 필요성을 해결한다. 조성물 및 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는, 악영향 없이 잘 용인되며, 비뇨생식관의 염증을 포함한 여성 비뇨생식관의 질환, 증상 및/또는 장애의 치료에 효과적이고/거나 질 틈새를 효과적으로 콜로니화한다.
예를 들어, 제1 측면에 대해 논의된 주제는, 기술적 맥락에서 달리 요구하지 않는 한 또는 논의된 주제가 명확하게 하나의 측면에만 관련되지 않는 한, 제2 측면, 및 임의의 다른 측면에도 적용됨을 이해해야 한다. 예를 들어, 제1 측면과 관련하여, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 락토바실러스 속으로부터의 4개의 박테리아 종을 포함하고, 1 내지 4개의 박테리아 종이 제제의 약 80-99.9%를 구성한다고 언급되며, 여기서 1 내지 4개의 락토바실러스는, 락토바실러스 크리스파투스(Lactobacillus crispatus), 락토바실러스 이너스(Lactobacillus iners), 락토바실러스 젠세니이(Lactobacillus jensenii) 및 락토바실러스 가세리를 포함한다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 크리스파투스를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 이너스를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 젠세니이를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 가세리를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다.
제2 측면 또는 또 다른 측면과 관련하여, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 언급되는 경우, 이는 또한, 제1 측면의 동일한 락토바실러스 종, 상대적 양 및 조합이, 제2 측면에 대해 명시적으로 언급되지 않은 경우에도 제2 또는 임의의 다른 측면의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제에서 사용될 수 있도록 의도된다.
따라서, 제1, 제2, 및 임의의 다른 측면의 개시내용은 관련 없는 별도의 챕터가 아니라 동일한 중요한 원칙의 구현예를 반영하는 것으로 조합되어 평가되어야 한다.
제1 측면에서는, 대상체에게 유효량의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 제약 조성물은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하고, 여기서 제제는 (i) 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고; (ii) 5% 미만의 가르드네렐라(Gardnerella) 종, 아토포비움(Atopobium) 종, 및 프레보텔라(Prevotella) 종을 포함하고; 여기서 제약 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 것인, 여성 대상체가 비뇨생식관에서 장내미생물불균형 미생물군을 나타내는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 염증 치료에 사용하기 위한 제약 조성물이 본원에 기재된다.
제2 측면에서는, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하며, 여기서 제제는 (i) 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고; (ii) <5%의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하고; 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 것인, 여성 대상체가 비뇨생식관에서 장내미생물불균형 미생물군을 나타내는, 임의로 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 염증 치료에 사용하기 위한 제약 조성물이 본원에 제공된다.
제3 측면에서는, (i) 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고; (ii) 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하고; 제약 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 것인, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 또는 그를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.
제4 측면에서는, 고체, 반고체, 액체 제형, 또는 필름-형성 제형인, 질 투여용으로 제형화된 본원에 기재된 제약 조성물 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 투여 형태가 본원에 제공된다.
제5 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 투여 형태를 포함하며, 여기서 상기 투여 형태는 질강으로의 투여에 적합하고, 여기서 투여 형태는 어플리케이터, 디스펜서 또는 좌약인, 질 전달 시스템을 제공한다.
제6 측면에서는, 조성물 또는 제제가 장치를 사용하여 투여되고, 여기서 장치는 질강으로의 삽입을 위한 개방 단부 (예를 들어, 팁), 및 개방 단부를 통해 조성물 또는 제제를 배출하기 위한 분배 단부 (예를 들어, 플런저 또는 피스톤)를 포함하고, 방법은 a) 개방 단부를 질강에 도입하는 단계, b) 조성물 또는 제제를 질강 내로 배출함으로써, 조성물 또는 제제를 질강에 투여하는 단계를 포함하는 것인, 인간 여성 대상체에 대한 본원에 기재된 제약 조성물 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 질 투여 방법이 본원에 제공된다.
제7 측면에서는, 하기 단계를 포함하는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성 방법이 본원에 제공된다: A. 공여자 여성 비뇨생식관으로부터 미생물군 샘플을 제공하는 단계이며; 여기서 단계 A는 단계 (1), (2), (3) 중 1, 2, 또는 3개 또는 임의의 이들의 조합 및 단계 (4) 및 (5) 둘 다를 포함하는 것인 단계: (1) 희석제를 미생물군 샘플에 첨가하여 희석된 샘플을 생성하는 단계, (2) 시험 (예를 들어, 핵산 시퀀싱)을 위해 희석된 미생물군 샘플의 일부를 제거하는 단계, (3) 미생물군 샘플의 나머지 부분의 냉장 또는 동결을 위해 사전-냉각시키는 단계, (4) 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 저장하는 단계, (5) (a) 하나 이상의 전염성 병원체의 실질적 존재를 배제하기 위한 공여자의 시험 (예를 들어, 혈액, 및/또는 자궁경부질 분비물, 및/또는 소변 샘플 시험), (b) 미생물군의 조성 및 생존능의 확인, 또는 (c) 공여-후 30-90일의 기간 내에 일어나는 복수의 사후-스크리닝 시험에 의한 여성 공여자의 건강의 추가 확인의 임의의 조합의 임의의 완료까지 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 유지하는 단계; 및 B. 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리로부터 해제하여 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 정의하는 단계.
제8 측면에서는, 본원에 기재된 방법에 의해 얻을 수 있는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 본원에 제공된다.
제9 측면에서는, 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리를 포함하고, 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는, 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 본원에 제공된다.
제10 측면에서는, 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하고, 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는, 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 본원에 제공된다.
제11 측면에서는, 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 크리스파투스를 포함하고, 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는, 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 본원에 제공된다.
제12 측면에서는, 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하고, 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는, 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 본원에 제공된다.
제13 측면에서는, 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 가세리 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하고, 또한 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는, 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 본원에 제공된다.
추가의 측면에서는, a) 조성물을 질강에 투여하기에 적합한 투여 형태, 및 b) 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 (i) 제제는 락토바실러스 속으로부터의 1 내지 5개의 박테리아 종을 포함하고, (ii) 1 내지 5개의 박테리아 종은 제제의 약 80-99.9%를 구성하고, 여기서 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 것인, 질 전달 시스템이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 조성물은 락토바실러스 속의 1 내지 4개의 박테리아 종을 포함한다. 구현예에서, 투여 형태는 어플리케이터, 디스펜서 또는 좌약일 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 크리스파투스를 포함할 수 있다.
제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 이너스를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 젠세니이를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 가세리를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다.
제제는 병원체 및 병원균을 갖지 않거나 실질적으로 갖지 않을 수 있다. 병원체 또는 병원균은 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 프레보텔라 종 중 하나 이상이다. 제제는 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함할 수 있다
제제는 항미생물 내성 (AMR) 유전자를 갖지 않거나 실질적으로 갖지 않을 수 있다.
제제는 인간 정자 (스퍼마토조아(spermatozoa))를 갖지 않거나 실질적으로 갖지 않을 수 있다.
질 미생물군 제제에 추가로, 조성물은 살정제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 산성화 작용제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 락트산을 추가로 포함할 수 있다. 제제는 글리칸을 포함할 수 있다. 글리칸은 점액일 수 있다.
제제는 30개 미만 또는 20개 미만의 락토바실러스 속 이외의 종을 포함할 수 있다.
조성물은 질 미생물군에 대한 산성화 효과를 가질 수 있다. 조성물은 4.5 이하의 pH를 가질 수 있다.
투여 형태는 102 내지 1011 CFU/VCC의 락토바실러스를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 투여 형태는 적어도 106 CFU/VCC, 적어도 107 CFU/VCC 또는 적어도 108 CFU/VCC를 포함한다. 조성물은 투여 형태로 분배되거나 제형화될 수 있다. 투여 형태는 멸균 포장될 수 있다.
어플리케이터 또는 디스펜서는 질강으로의 삽입을 위한 개방 단부 (예를 들어, 팁), 및 조성물을 배출하기 위한 분배 단부 (예를 들어, 플런저 또는 피스톤)를 포함할 수 있다.
제제는 배양-독립적 방법에 의해 얻어질 수 있다.
투여 형태는 눈금화(calibration)될 수 있다 (예를 들어, 부피 표시 또는 최대 부피 표시 또는 제어를 가짐). 투여 형태는 단일 사용 또는 다중 사용 장치일 수 있다. 투여 형태는 불활성 중합체 물질, 예컨대 폴리스티렌 또는 폴리프로필렌으로부터 디자인될 수 있다.
추가의 측면에서는, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하며, 여기서 (i) 제제는 락토바실러스 속으로부터의 1 내지 5개의 박테리아 종을 포함하고, (ii) 1 내지 5개의 박테리아 종은 제제의 약 80-99.9%를 구성하고, 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 것인, 질 투여용으로 제형화된 제약 조성물이 본원에 제공된다. 하나의 구현예에서, 제약 조성물은 락토바실러스 속으로부터의 1 내지 4개의 박테리아 종을 포함한다. 제제는 80-99.9% 락토바실러스 크리스파투스를 포함할 수 있다. 제제는 80-99.9% 락토바실러스 이너스를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 젠세니이를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 가세리를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다.
제제는 추가의 락토바실러스 종을 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 추가의 락토바실러스 종은 낮은 상대적 양, 예컨대 0,001%, 0,001 - 0,002%, 0,002-0,005%, 0,005-0,01%, 0,01-0.05%, 0.05-0.1%, 또는 0.1-1%로 존재할 수 있다.
제제는 병원체 및 병원균을 갖지 않거나 실질적으로 갖지 않을 수 있다. 병원체 또는 병원균은 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종 중 하나 이상일 수 있다. 제제는 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함할 수 있다. 제제는 항미생물 내성 (AMR) 유전자를 실질적으로 갖지 않을 수 있다. 제제는 인간 정자 (스퍼마토조아)를 실질적으로 갖지 않을 수 있다.
조성물은 살정제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 산성화 작용제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 락트산을 추가로 포함할 수 있다. 제제는 글리칸을 포함할 수 있다. 글리칸은 점액일 수 있다.
제제는 20개 미만의 락토바실러스 속 이외의 종을 포함할 수 있다.
조성물은 4.5 이하의 pH를 가질 수 있다.
제제는 배양-독립적 방법에 의해 얻어질 수 있다.
추가의 측면에서는, 장치를 사용한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의, 해당 투여를 필요로 하는 인간 여성 대상체에 대한 질 투여 방법이 본원에 제공되며, 여기서 장치는 질강으로의 삽입을 위한 개방 단부 (예를 들어, 팁), 및 개방 단부를 통해 조성물을 배출하기 위한 분배 단부 (예를 들어, 플런저 또는 피스톤)를 포함하고, 방법은 a) 개방 단부를 질강에 도입하는 단계, b) 조성물 또는 제제를 질강 내로 배출함으로써, 조성물 또는 제제를 질강에 투여하는 단계를 포함한다. 장치는 본원에 기재된 바와 같은 어플리케이터 또는 디스펜서일 수 있다. 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물일 수 있다.
조성물의 배출은 질의 점막 또는 자궁내막 표면의 접촉을 포함할 수 있다. 대상체는 그녀의 질 건강 개선을 필요로 한다. 대상체에 대한 투여는 대상체가 쇄석술 자세에 있는 동안 수행될 수 있다. 조성물은 대상체가 직립 자세에 있을 때 그의 대부분이 적어도 5, 10, 20, 또는 30분 동안 질강에 머무르는 것을 허용하는 적합한 점도를 가질 수 있다.
장치는 눈금화될 수 있다 (예를 들어, 부피 표시 또는 최대 부피 표시 또는 제어를 가짐). 장치는 투여 당 약 102 내지 1011 CFU의 락토바실러스를 투여할 수 있다. 바람직하게는, 장치는 적어도 106 CFU/VCC, 적어도 107 CFU/VCC 또는 적어도 108 CFU/VCC를 투여할 수 있다.
투여는 3-21일 내에 1, 2, 또는 3회 또는 1, 2, 3 또는 그 초과의 주기에 대하여 주기 당 1개 용량으로 수행될 수 있다. 투여는 1 내지 6개월의 기간 동안 1 내지 4주마다 1회 수행될 수 있다. 장치는 단일 사용 또는 다중 사용 장치일 수 있다.
방법은 질 점막을 하나 이상의 락토바실러스 종으로 콜로니화하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 하나 이상의 락토바실러스 종은 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개일 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 크리스파투스를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 이너스를 포함한다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 젠세니이를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 가세리를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다.
제제는 병원체 및 병원균을 실질적으로 갖지 않을 수 있다. 병원체 또는 병원균은 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종 중 하나 이상일 수 있다. 제제는 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함할 수 있다. 제제는 항미생물 내성 (AMR) 유전자를 실질적으로 갖지 않을 수 있다. 제제는 인간 정자 (스퍼마토조아)를 실질적으로 갖지 않을 수 있다.
조성물은 살정제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 산성화 작용제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 락트산을 추가로 포함할 수 있다. 제제는 글리칸을 포함할 수 있다. 글리칸은 점액일 수 있다.
제제는 20개 미만의 락토바실러스 속 이외의 종을 포함할 수 있다.
조성물은 4.5 이하의 pH를 가질 수 있다. 조성물은 약 pH 3.5 내지 4.5의 질관의 pH를 달성하기에 효과적인 pH를 가질 수 있다.
제제는 배양-독립적 방법에 의해 얻어질 수 있다.
또 다른 측면에서, 본원에 기재된 투여 형태 (a) 및 조성물 (b)를 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 본원에 기재된 투여 형태 (a) 및 조성물 (b)는 별도의 멸균 포장 내에 있을 수 있다. 투여 형태는 다중-투여 형태일 수 있다. 투여 형태 (a) 및/또는 조성물 (b)는 다수 용량을 포함할 수 있다. 투여 형태는 단일 사용 또는 다중 사용 장치일 수 있다. 조성물은 냉동-건조 또는 동결건조될 수 있다. 키트는 냉동-건조 또는 동결건조 조성물에 대한 재현탁 매질을 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 측면에서는, 여성 공여자의 비뇨생식관 (예를 들어, 질 미생물 틈새) 분비물로부터 유래된 락토바실러스 속으로부터의 1 내지 5개, 또는 1 내지 4개의 박테리아 종을 포함하며, 여기서 1 내지 5개의 박테리아 종은 제제의 약 80-99.9%를 구성하고, 상기 박테리아 종 중 하나 이상의 종은 여성 수용자의 비뇨생식관에 생착 (예를 들어, 콜로니화)될 수 있는 것인, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 본원에 제공된다. 하나의 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 락토바실러스 속으로부터의 1 내지 4개의 박테리아 종을 포함한다.
제제는, 전형적으로 비뇨생식관 (예를 들어, 질 미생물 틈새)의 건강한 (예를 들어, 비-장내미생물불균형) 마이크로바이옴에서 나타나는, 80-99.9%의 락토바실러스 종을 포함할 수 있다. 이들 락토바실러스 종은 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 크리스파투스를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 이너스를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 젠세니이를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9% 락토바실러스 가세리를 포함할 수 있다. 제제는 약 80-99.9%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다.
제제는 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물로서 제형화될 수 있다. 제약 조성물은 항생제, 면역 작용제, 호르몬 작용제, 대사물질 또는 펩티드로 구성된 군으로부터 선택된 활성 작용제를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 제약 조성물은 제약 조성물 중에 포함된 제제에 첨가되는 적어도 하나의 락토바실러스 균주를 포함할 수 있다. 제약 조성물은 현탁액, 스프레이, 겔, 크림, 분말, 캡슐, 세척용 용액, 오뷸(ovule), 질 삽입물, 탐폰, 정제 또는 마이크로캡슐화 생성물 형태일 수 있다.
또 다른 측면에서, 하기 단계를 포함하는, 상기 청구항 중 어느 하나의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성 방법이 본원에 제공된다: A. 공여자 여성 비뇨생식관으로부터 미생물군 샘플을 제공하는 단계이며; 여기서 단계 A는 임의로 (1), (2), (3), (4), (5) 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는 것인 단계: (1) 희석제를 미생물군 샘플에 첨가하여 희석된 샘플을 생성하는 단계, (2) 시험 (예를 들어, 핵산 시퀀싱)을 위해 희석된 미생물군 샘플의 일부를 제거하는 단계, (3) 미생물군 샘플의 나머지 부분의 냉장 또는 동결을 위해 사전-냉각시키는 단계, (4) 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 저장하는 단계, (5) (a) 하나 이상의 전염성 병원체의 실질적 존재를 배제하기 위한 공여자의 시험 (예를 들어, 혈액, 및/또는 자궁경부질 분비물, 및/또는 소변 샘플 시험), (b) 미생물군의 조성 및 생존능의 확인, 또는 (c) 공여-후 30-90일의 기간 내에 일어나는 복수의 사후-스크리닝 시험에 의한 여성 공여자의 건강의 추가 확인의 임의의 조합의 임의의 완료까지 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 유지하는 단계; 및 B. 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리로부터 해제하여 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 정의하는 단계.
공여자 여성으로부터의 미생물군 샘플은 자궁경부질 분비물일 수 있다. 미생물군 샘플은 글리칸을 포함할 수 있다. 글리칸은 점액일 수 있다. 미생물군 샘플은 중량이 적어도 100 mg, 150 mg, 200 mg 또는 그 초과일 수 있다. 미생물군 샘플은 80-99.9%의, 비뇨생식관 (예를 들어, 질 미생물 틈새)의 건강한 (예를 들어, 비-장내미생물불균형) 마이크로바이옴에서 전형적으로 나타나는 락토바실러스 종을 포함할 수 있다. 이들 락토바실러스 종은 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리를 포함할 수 있다. 미생물군 샘플은 약 80-99.9% 락토바실러스 크리스파투스를 포함할 수 있다. 미생물군 샘플은 약 80-99.9% 락토바실러스 이너스를 포함할 수 있다. 미생물군 샘플은 약 80-99.9% 락토바실러스 젠세니이를 포함할 수 있다. 미생물군 샘플은 약 80-99.9% 락토바실러스 가세리를 포함할 수 있다. 미생물군 샘플은 약 80-99.9%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함할 수 있다.
방법의 단계 B는 미생물군 샘플이 병원체 및 병원균을 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 단계 B는 미생물군 샘플이 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 단계 B는 미생물군 샘플이 항미생물 내성 (AMR) 유전자를 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 단계 B는 미생물군 샘플이 인간 정자 (스퍼마토조아)를 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 단계 B는 여성 공여자가 하기 중 임의의 하나 이상 (2개 이상, 3개 이상, 또는 4개 이상)을 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함할 수 있다: (i) 박테리아 질염과 관련된 박테리아 (예를 들어, 가르드네렐라 종 및 프레보텔라 종), (ii) 효모 (예를 들어, 칸디다(Candida), 크림토콕쿠스(Cryptococcus), 및 사카로미세스(Saccharomyces) 종), (iii) 성 전염 병원체 (예를 들어, 네이세리아 고노레아(Neisseria gonorrhea), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 및 트리코모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis)), (iv) 요로 감염과 관련된 박테리아 (예를 들어, 대장균(E. coli), 스타필로콕쿠스(Staphylococcus), 클라미디아(Chlamydia), 및 미코플라스마(Mycoplasma)), 및 (v) 바이러스 (예를 들어, HIV, 인간 유두종 바이러스 (HPV), B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, HSV-2), 또는 임의의 이들의 조합.
또 다른 측면에서는, 임의로 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 복원을 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, 건강한 질 미생물군 균형을 복원하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서 건강한 인간 질 미생물군 균형을 복원하는 방법이 본원에 제공된다. 여성 대상체는 비뇨생식관에서 장내미생물불균형 미생물군을 나타낼 수 있고, 건강한 질 미생물군 균형의 복원은 장내미생물불균형의 치료를 제공한다. 여성 대상체는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물의 투여 전에 체류하는 장내미생물불균형 미생물군을 실질적으로 감소시키기 위해 유효량의 항미생물 작용제 (예를 들어, 항생제)로 치료될 수 있다.
일부 구현예에서, 여성 대상체는 병원체 로드를 감소시키기 위해 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여 전에 질 세척에 적용된다. 질 세척은 식염수, 산성 용액, 또는 방부제 용액을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 용액으로 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 산성 용액은 락트산이고, 임의로, 여기서 락트산은 약 3.5 내지 4.5, 임의로 약 pH 3.8-4.3의 pH를 갖는다. 방부제 용액은 클로르헥시딘 또는 프로비돈-아이오딘일 수 있으며, 여기서 포비돈-아이오딘 용액은 약 10% 또는 5-10% 포비돈-아이오딘을 포함한다. 특정 구현예에서, 질 세척은 클로르헥시딘으로 수행되며, 여기서 용액은 약 0.5% 클로르헥시딘을 포함한다.
건강한 질 미생물군 균형의 복원은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물에 의해 제공되는 하나 이상의 종의 콜로니화 및 생착을 포함할 수 있다. 건강한 질 미생물군 균형의 복원은 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물의 투여 전에 동일한 대상체에서 결정된 (a), (b), (c), (d) 또는 (e)의 값과 비교할 때, (a) 비뇨생식관에 체류하는 병원체 및/또는 병원균의 상대적 풍부도의 감소 (예를 들어, 10% 미만의 병원체 및/또는 병원균의 상대적 풍부도), (b) 50% 초과 (60% 초과, 또는 70% 초과)의 락토바실러스의 상대적 풍부도의 증가, (c) 하나 이상의 전-염증 마커의 감소 (예를 들어, 국소 또는 전신), 및/또는 (d) 질 pH의 감소 (예를 들어, 적어도 pH 0.3, 0.5, 1.0, 또는 1.5만큼), 및/또는 (e) 아이슨-헤이(Ison-Hay) 스코어링 시스템을 기반으로 한 등급 변화 (예를 들어, 등급 0 또는 등급 I). 건강한 질 미생물군 균형의 복원은 락트산 생성 박테리아의 하나 이상의 종이 지배적인 (예를 들어, 적어도 50%, 60%, 70% 또는 적어도 80%) 미생물 군집의 생착을 포함한다.
박테리아를 생성하는 락트산의 하나 이상의 종은 하기로부터 선택될 수 있다: 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개.
건강한 질 미생물군 균형의 복원은 약 pH 3.5 내지 4.5의 질관의 pH를 달성하는 것을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 락트산 생성 박테리아의 하나 이상의 종의 투여는 질 pH를 약 3.7 내지 약 4.2, 보다 바람직하게는 약 3.8 내지 약 4.0으로 복원한다. 미생물 군집은 적어도 1주, 또는 적어도 2, 3, 4주 동안 락트산 생성 박테리아 (예를 들어, 락토바실러스)가 지배적인 상태로 유지될 수 있다. 미생물 군집은 적어도 2, 3, 4, 5 또는 적어도 6개월 동안 락트산 생성 박테리아 (예를 들어, 락토바실러스)가 지배적인 상태로 유지될 수 있다.
일부 구현예에서, 제제의 투여는 추가의 락토바실러스 종의 투여를 추가로 포함하며, 여기서 추가의 락토바실러스 종은 낮은 상대적 양, 예컨대 0,001%, 0,001 - 0,002%, 0,002-0,005%, 0,005-0,01%, 0,01-0.05%, 0.05-0.1%, 또는 0.1-1%로 존재할 수 있다.
방법은 항생제, 면역 작용제, 및 호르몬 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 활성 작용제의 투여를 포함할 수 있다.
대상체는 백인일 수 있다. 대상체는 아시아인일 수 있다. 대상체는 흑인/아프리카인일 수 있다. 대상체는 히스패닉계일 수 있다. 대상체는 가임기 또는 폐경기 이전에 있을 수 있다. 대상체는 폐경기 이후에 있을 수 있다.
건강한 질 미생물군 균형의 복원은 항병원성 미생물 틈새/질 환경을 제공할 수 있다. 건강한 질 미생물군 균형의 복원은 항-염증성 또는 저-염증성 미생물 틈새/질 환경을 제공할 수 있다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 질 미세환경에서 락토바실러스-지배적 미생물군을 제공할 수 있고, 이는 질 pH의 감소, 병원성 박테리아의 양의 감소 및 질 미생물군 균형의 복원을 제공한다. 또한, 대상체가 임의의 질 증상을 나타내지 않더라도, 장내미생물불균형 질 틈새의 염증이 치료된다.
또 다른 측면에서는, 임의로 청구항 중 어느 하나의 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, 장내미생물불균형을 치료하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 장내미생물불균형의 치료 방법이 본원에 제공된다. 장내미생물불균형은 비뇨생식관의 감염과 관련될 수 있다. 감염은 (재발성) 박테리아 질염 (BV), 질 칸디다증 및 트리코모나스증 중 하나 이상일 수 있다.
또 다른 측면에서는, 임의로 청구항 중 어느 하나의 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, 염증을 치료하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 (만성) 염증의 치료 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서는, 임의로 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, (재발성) 박테리아 질염 (BV)을 치료하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 (재발성) BV의 치료 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 임의로 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, 질 칸디다증을 치료하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 질 칸디다증의 치료 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 임의로 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, 트리코모나스증을 치료하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 트리코모나스증의 치료 방법이 본원에 제공된다.
본원에 기재된 방법은 항생제, 항-진균제, 면역 작용제, 및 호르몬 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 활성 작용제를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다.
도 1은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성을 위한 공여자 프로그램의 개략도이다. 공여자는 마이크로바이옴 시퀀싱, 건강 검진, 및 특정 질환의 부재를 기반으로 하여 선택되었다. 공여 방문 전과 후 둘 다에 시험을 수행하였다. 공여자에 의해 제공된 모든 샘플을 품질 관리에 적용하였다 (예를 들어, 도 5 참조). 공여자 및 샘플이 모든 요건에서 합격한 경우에만 샘플이 방출되었다.
도 2는 자궁경부질 분비물을 얻기에 적합한 공여자를 식별하기 위해 샷건 DNA 시퀀싱에 의해 평가된 96명의 여성 대상체의 코호트로부터의 질 마이크로바이옴의 분포를 나타낸다. 박테리아의 상대적 풍부도를 측정하였고, 표시된 분류 파라미터를 사용하여 대상체를 "건강한", "장내미생물불균형" 및 "정의되지 않음"으로 분류하였다.
도 3은 샷건 시퀀싱에 의해 평가된, 건강한 질 마이크로바이옴 (n=61)을 갖는 96명의 여성 대상체의 코호트 (도 2 참조)로부터의 공여자에서의 상대적 박테리아 풍부도의 누적 막대 그래프를 나타낸다. 이 그래프에서 모든 공여자 마이크로바이옴은 적어도 80%의 질 락토바실러스 종 (락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 가세리, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 이너스) 또는 그의 혼합물, 및 5% 미만의 선택된 병원체 (아토포비움 종, 프레보텔라 종, 비. 바지날레(B. vaginale), 및 에프. 바지나에(F. vaginae)) 또는 그의 혼합물을 함유한다.
도 4는 샷건 시퀀싱에 의해 평가시 장내미생물불균형 질 마이크로바이옴 (좌측, n=27) 또는 정의되지 않은 마이크로바이옴 (우측, n=8)을 갖는 96명의 여성 대상체의 코호트 (도 2 참조)로부터의 공여자에서의 상대적 박테리아 풍부도의 누적 막대 그래프를 나타낸다. 장내미생물불균형 마이크로바이옴은 적어도 20%의 선택된 질 병원체로부터의 종 (아토포비움 종, 프레보텔라 종, 비. 바지날레, 및 에프. 바지나에) 또는 그의 혼합물, 및 10% 미만의 질 락토바실러스 종 (락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 가세리, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 이너스) 또는 그의 혼합물을 함유한다.
도 5는 자궁경부질 분비물을 얻기 위한 예시적 절차 및 그의 프로세싱를 도시하는 흐름도를 나타낸다. 도 5a는 일반적인 개요를 제공하는 반면, 도 5b는 절차의 구체적인 예시적 구현예를 제공한다. 분비물을 특징화 및 품질 관리 (예를 들어, 생존능 수, DNA 시퀀싱 및 병원체 스크리닝 포함)를 위한 샘플로 분할하고 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제로 프로세싱하였다.
도 6a-6c는 샷건 시퀀싱에 의해 평가시 9명의 공여자 (A-I)로부터의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 존재하는 4개의 주요 락토바실러스 종의 누적 막대 그래프를 나타낸다. 8회의 대표적 공여 방문으로부터의 결과가 각각의 공여자에 대하여 나타나 있다. 존재하는 경우, 수직선은 반복 공여자로서의 새로운 방문 라운드를 나타낸다.
도 7은 최대 11개월 동안 -80℃에서 저장 후 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 안정성을 도시하는 플롯을 나타낸다. 각각의 데이터 포인트는 하나의 샘플을 나타내며; 각각의 연결선은 하나의 공여자의 하나의 공여 방문으로부터의 샘플을 나타낸다. 유사한 기호 및 음영은 유사한 마이크로바이옴을 나타낸다.
도 8은 -80℃로부터의 해동 후 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생존능의 막대 그래프를 나타낸다. a. 샘플의 점진적 해동 및 대략 30℃까지의 가온. b. 세포 생존능에 대한 반복된 동결-해동 주기 또는 주변 온도 (RT = 실온)에서의 연장된 인큐베이션의 효과.
도 9a-9b는 샷건 시퀀싱에 의해 측정시 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 2명의 수용자 (A-B) 및 그의 각각의 공여자에서의 상대적 박테리아 풍부도의 누적 막대 그래프를 나타낸다. 모든 수용자는 스크리닝시 그의 마이크로바이옴을 기반으로 하여 등록되었고; 베이스라인 마이크로바이옴 샘플은 투여 직전에 채취되었다. 별표 (*)는 그 샘플 채취 전에 한 번의 월경이 발생하였음을 나타낸다. 2개의 별표(**)는 2개의 월경 주기가 지났음을 나타낸다.
도 10은 투여-전 및 투여-후, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 2명의 수용자, 및 그의 각각의 공여자에 대한 주성분 분석 (PCA) 플롯을 나타낸다. 입력으로서 사용된 변수는 샷건 시퀀싱에 의해 측정시 박테리아 종의 상대적 풍부도이다. 도 9에서의 그래프와 동일한 입력이 사용되었다.
도 11은 장내미생물불균형 (n=19) 및 건강한 (n=41) 마이크로바이옴을 갖는 여성들을 비교하는, 스크리닝 코호트 (n=60)에서의 염증 마커의 패널의 플롯을 나타낸다. a. PCA 플롯, 여기서 각각의 점은 1명의 여성에 상응하며; 92개의 염증 패널 마커가 변수로서 사용되었다. 별표 (*)는 예를 들어 칸디다와 같은 인식되지 않는 감염을 가질 수 있는 건강한 마이크로바이옴을 갖는 여성을 나타낸다. b. 박테리아 질염과 관련된 선택된 염증 마커의 상자-수염(Box and whisker) 플롯.
도 12는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제로의 투여-전 및 투여-후 수용자 2에서의 도 11에 기재된 염증 패널로부터의 염증 마커의 플롯을 나타낸다. a. 공여자 샘플 및 비교를 위한 스크리닝 코호트의 서브세트에 비해, 투여 전 및 투여 후 수용자에서의 염증 상태의 전환을 보여주는 PCA 플롯. 92개의 염증 패널 마커가 변수로서 사용되었다. b. 스크리닝 코호트에 대해 도 11b에서와 동일한 선택된 염증 마커를 보여주는, 투여-전 및 투여-후 수용자 2에 대한 점 플롯. 수평선은 중앙값을 나타내며; 각각의 점은 기술적 복제를 나타내고: 각각의 시점에 대하여, 동일한 샘플의 2개 분취량을 사용하였고, 이는 이중으로 실행되었다.
도 13은 3개의 상이한 셋업 (도 13a, 13b 및 13c)에서의 예시적 질 전달 시스템(100)을 나타낸다. 도 13a는 사전-충전 구성의 질 전달 시스템을 나타낸다. 기본 분배 장치(102)는 다음을 포함한다: 임의로 수동으로 또는 전기기계적으로 구성될 수 있는 분배 단부 (예를 들어, 플런저 또는 피스톤)(101); 및 질강 내로 보다 잘 삽입되도록 임의의 적합한 형태로 성형될 수 있는, 질강 내 삽입을 위한 개방 단부 (예를 들어, 팁)(105). 임의로, 장치(102)는, 예를 들어, 투여를 보조하기 위한, 눈금(104)의 유형을 포함하고, 예를 들어, 부피 표시 또는 최대 부피 표시 또는 제어를 갖는다. 사전-충전된 구성에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물(103) (예를 들어, 동결 또는 액체 형태)은 분배 장치(102) 내에 포함된다. 조성물(103)을 투여하기 위해, 분배 단부(101)는 일부 힘에 의해 분배 장치(102) 내로 밀려 들어가고, 조성물은 개방 단부(105)를 통해 예를 들어 질강 내로 배출된다. 내용물이 동결 형태로 제공되는 경우, 사용자는 투여 전에 먼저 동결 내용물(103)을 해동시킨다.
도 13b는 대안적 구성의 질 전달 시스템(100)을 나타낸다. 분배 장치(102)는 사전-충전되지 않고 비어 있다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물(103)은 분배 장치(102)로부터 별도로, 예를 들어, 저온-바이알 또는 다른 적합한 저장 용기와 같은, 캡(106)을 갖는 용기(107) 내에서 제공된다. 분배 장치 및 용기는 별도로 포장, 운송 및 또는 저장될 수 있다. 이어서, 사용자는, 통상적으로 사용 (예를 들어, 비뇨생식관으로의 투여) 직전에, 용기(107)의 내용물(103)을 분배하고 내용물을 분배 장치(102) 내에 분배한다. 요망되는 경우, 내용물(103)은 동결될 수 있고, 이 경우 사용자는 투여 전에 동결 내용물(103)을 해동시키거나, 또는 내용물(103)이 동결건조 형태로 제공될 수 있고, 이 경우 사용자는 투여 전에 동결건조 내용물(103)을 재수화시킨다. 분배 단부(101)는 나타낸 바와 같이 분배 장치(102)로부터 탈착되어 제공될 수 있거나, 대안적으로, 그에 부착되고 나중에 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물(103)로 분배 장치(102)를 충전하기 직전에 제거된다.
도 13c는 대안적 구성의 질 전달 시스템(100)을 나타낸다. 분배 장치(108)는 분배 단부(101), 및 개방 단부(105)를 포함하지만, (102)와 달리, 분배 장치(108)는 예를 들어 빠른 연결을 가능하게 하기 위해, 카트리지와 같은 용기(109)와의 연결을 허용하는 도킹 플랫폼(110)을 포함한다. 임의로, 용기(109)는, 예를 들어, 도킹 플랫폼(110)과 분배 단부(101) 사이의 적합한 공간에서, 분배 장치(108)로 로딩될 수 있다. 용기(109)는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물(103), 임의로 눈금의 유형(104), 및 양단에 캡(106)을 포함한다. 이어서, 용기(109)의 한쪽 단부는 분배 장치(108)의 도킹 플랫폼(110)에, 또한 다른 단부는 분배 단부(101)에 연결될 수 있다. 용기(109)의 캡(106)은, 그의 시일이 도킹 플랫폼(110) 및 분배 단부(101)와의 접촉시 파괴되도록 구성될 수 있고, 예를 들어, 이들은 도킹 플랫폼(110) 및 분배 단부(101) 둘 다에 의해 관통되어 내용물(103)을 방출할 수 있는 연질 물질 (예를 들어, 고무 또는 다른 연질 중합체 또는 필름 등)로부터 제조될 수 있다.
모든 구성은 단일 사용 또는 다중 사용 응용에 대해 적합화될 수 있다. 예를 들어, 도 13c에 예시된 질 전달 시스템(100)은, 질 전달 시스템의 분배 단부(101)를, 각각의 사용 후에 폐기되거나 세정가능/멸균가능 다중-사용 물질로 제조되고 장치(108)로부터 제거가능하게 구성되도록 분배 장치(108, 점선) 및 구성(105) 및/또는 (110)에 영구적으로 부착시켜 유지함으로써, 다중 사용에 대해 적합화될 수 있다.
도 14는 제1 임상 연구의 디자인을 도시한 것이다. 이 연구는 수용자에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 3회 연속 투여가 수행될 때 질 마이크로바이옴의 전환을 탐색하고 맵핑한다. 수용자는 질 샘플의 메타게놈 시퀀싱으로부터 정의된 기준을 기반으로 하여 질 장내미생물불균형을 갖는 것으로 스크리닝된다.
도 15는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제와 항생제를 투여하는 임상 연구의 예시적 디자인을 요약하는 개요이다.
도 16은 제2 임상 연구의 디자인을 도시한 것이다. 이 연구는 후속 조치 방문 및 치료 성공의 평가에 의해 분리된, 수용자에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 최대 3회 투여가 수행될 때, 질 마이크로바이옴의 전환을 탐색하고 맵핑한다. 수용자는 질 샘플의 메타게놈 시퀀싱으로부터 정의된 기준을 기반으로 하여 질 장내미생물불균형을 갖는 것으로 스크리닝된다.
상세한 설명
본 발명은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물, 장치, 및 키트, 및 그의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다. 질 미생물군의 조성이 관련된 병태 및 질환의 예방 또는 치료를 위한 질 미생물군의 조절을 위한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 조성물이 본원에 제공된다. 본 출원인은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 생성하기 위한 안전하고 효과적인 공정을 개발하였고, 예를 들어, 장내미생물불균형 및/또는 염증성 병태를 치료하기 위해, 여성 비뇨생식관에서 건강한 인간 질 미생물군 균형을 복원 또는 유지하기 위해, 이를 투여하고 사용하기 위한 장치 및 방법을 제공한다.
질 세균총, 질 미생물 틈새
건강한 질 세균총은 락트산 박테리아, 주로 락토바실러스 (질 미생물 틈새에 체류함)의 종이 지배적으로 서식하는 산성 환경을 특징으로 한다. 건강한 여성의 미생물 조성은 상이할 수 있지만, 전형적으로 하기 4개의 락토바실러스 종 중 하나: 엘. 크리스파투스, 엘. 이너스, 엘. 가세리, 엘. 젠세니이, 및 이들의 혼합물이 지배적이다. 가임기 여성의 건강한 질은 체액 그램 당 107-109 콜로니 형성 단위의 락트산 생성 박테리아 (예를 들어, 락토바실러스)가 지배적인 것으로 추정된다. 종 분포는 상이한 지리적 배경, 인종 (예를 들어, 아시아인, 백인 여성, 흑인, 히스패닉계), 연령, 생활 방식 등의 여성 사이에서 상이하다. 질 세균총의 조성은 또한 여성이 그녀의 어머니로부터 물려받은 특정 계통 및/또는 종 및/또는 소화관에서 비뇨생식관으로 이동한 계통 및/또는 종에 의해 영향 받는다. 건강한, 생식력을 갖는 여성은, 주로 락트산 생성의 결과로, 약 3 내지 5.5 (보다 구체적으로는 pH 3.5 내지 4.5)의 질 내 pH를 나타낸다. 질 pH는 출생부터 폐경까지 생리학적 변화를 겪는다. 4.0-4.5 초과의 질 pH의 증가는 락토바실러스 박테리아의 생존에 해롭지만, 다른 미생물에는 해롭지 않다. 질 락토바실러스는 병원성 미생물 (예를 들어, 효모 (칸디다 알비칸스(Candida albicans), 트리코모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis), 네이세리아 고노로에아에(Neisseria gonorrhoeae), 및 클라미디아 트라코마티스, 및 바이러스, 예를 들어, HIV, HSV-2, 및 다양한 혐기성미생물)에 의한 질 콜로니화에 대하여 보호 효과를 갖고, 예를 들어, 결장에 존재하는 박테리아, 예컨대 가르드네렐라 바지날리스(Gardnerella vaginalis), 모빌룬쿠스(Mobiluncus), 박테로이데스(Bacteroides), 프레보텔라(Prevotella) 및 대장균의 질 확립을 막는 것으로 믿어진다.
여러 인자가 질 세균총의 교란에 기여할 수 있다. 인자는 다음을 포함할 수 있다: a) 질 내 락토바실러스 수준을 현저히 감소시킬 수 있는 병원성 박테리아를 죽이기 위한 항생제 사용; b) 여성의 삶의 여러 단계 (예를 들어, 사춘기, 임신, 가임기, 폐경기 전과 후)에서 관찰되는 호르몬 변화, 특히 에스트로겐 수준의 변화; 에스트로겐 수준은 질 내 락토바실러스 수준 (지배성)과 관련되는 것으로 생각된다; c) 질 pH가 증가하면 락토바실러스 이외의 박테리아가 번성하기 시작할 수 있기 때문에, 질 세균총을 교란시킬 수 있는 pH 증가와 관련될 수 있는 성교 (정액은 일반적으로 알칼리성임); d) 약물, 예를 들어, 화학요법제 또는 항진균제의 사용; e) 피임 제품의 사용; f) 월경 중; g) 불충분한 위생 (예를 들어, 직장으로부터 비뇨생식기 영역으로의 미생물의 바람직하지 않은 확산 촉진); h) 예를 들어, 당뇨병과 같은 일반적 건강 상태.
질 세균총의 교란은 질 장내미생물불균형 및 질 장애, 예를 들어, 칸디다증 및 박테리아 질염을 초래할 수 있으며, 이들은 전세계 여성에게 영향을 미치는 두 가지 통상적 질 장애이다. 박테리아 질염은 가르드네렐라 바지날리스, 박테로이데스, 모빌룬쿠스, 프레보텔라, 및 미코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis)와 같은 다양한 원치않는 종에 의해 교체된 질 락트산 생성 박테리아의 대체의 결과인 것으로 믿어진다. 질 감염은 가장 흔하게는 하기 중 하나 이상과 관련된다: 에스케리키아(Escherichia), 엔테로콕쿠스(Enterococcus), 슈도모나스(Pseudomonas), 프로테우스(Proteus), 클레브시엘라(Klebsiella), 스트렙토콕쿠스(Streptococcus), 스타필로콕쿠스, 가르드네렐라, 우레아플라스마(Ureaplasma), 박테로이데스, 펩토콕쿠스(Peptococcus), 네이세리아(Neisseria), 세라티아(Serratia), 코리네박테리움(Corynebacterium), 클로스트리디움(Clostridium), 및 칸디다.
질 락토바실러스 지배성은 락트산의 생성 및 질의 산성화를 통해, 또한 예를 들어 과산화수소와 같은 다른 항미생물 생성물의 생성에 의해 감염에 대한 내성에 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다. 질 내 락토바실러스의 존재는 박테리아 질염, 효모 질염, 및 네이세리아 고노레아, 클라미디아 트라코마티스, 및 트리코모나스 바지날리스를 포함한 성 전염 병원체의 감소된 빈도와 연관되었다. 락토바실러스 지배성은 인종 그룹에 따라 달라진다 (이들은 아시아인 및 백인 여성에서는 매우 지배적이나, 흑인 및 히스패닉계 여성에서는 덜 지배적이지만, 이들은 여전히 다수를 차지한다고 생각됨).
연구는, 락토바실러스-고갈 군집은 일시적으로 며칠 동안 지속될 수 있는 반면, 다른 경우에는 고갈된 군집이 몇 주 동안 지속됨을 보여주었다. 락토바실러스-고갈 군집을 갖는 일부 여성은 무증상이고 건강하게 유지된다. 그러나, 이러한 여성은 감염 및 성 전염 질환 (STD)에 대하여 보다 높은 위험에 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 질 세균총은 교란된 질 세균총을 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 그의 조성물로 다시 채우거나 보충함으로써 복원된다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 락토바실러스
본 발명의 측면은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 그의 제조 및 사용 방법, 및 그를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 필요로 하는 여성 대상체에서 건강한 질 세균총을 보충하기 위한 비-항생제, 생태학적으로 적절한 접근법의 개발에 상당한 관심이 있어 왔다. 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 단리되고 배양-증식된 정의된 또는 단일 균주 조성물 또는 다수의 단리되고 배양-증식된 균주를 함유하는 조성물을 사용하는 과거에 겪었던 문제에 대한 해결책을 제공한다. 문제는 투여된 균주의 질강을 포함한 비뇨생식관에서의 질 콜로니화 및 생착의 결여를 포함한다. 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는, 예를 들어, 건강한 질 미생물군의 유지를 위해 질 미생물 틈새를 조절하고 불균형 질 미생물군의 회복을 돕기 위해 질강에 투여될 수 있다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 투여시 질 미생물 틈새를 효율적으로 콜로니화할 수 있다는 점에서 단일 및 배양-증식 균주를 함유하는 조성물에 대해 바람직하고 유리한 것으로 밝혀졌다.
여성 비뇨생식 (또한 생식-비뇨로서 공지됨)관은 상호연결된 생물지리적 틈새로 이루어진다. 질 미생물 군집으로부터의 박테리아는 자궁경부를 통해 비뇨생식관의 원격 부위로 이동할 수 있다. 질 미생물 군집에서 장내미생물불균형은 원격 부위에서의 장내미생물불균형을 초래할 수 있다. 이들 부위에서의 장내미생물불균형은 요로 감염 (UTI) 및 골반 염증성 질환 (PID)을 포함한 다양한 질환 및 병태와 관련되었다. 일부 구현예에서, 질에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여는 비뇨생식관의 원격 부위에서의 장내미생물불균형의 해소를 포함한다.
일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3, 4 또는 5개의 상이한 박테리아 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3, 또는 4개의 상이한 박테리아 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 박테리아 종은 (제제의 모든 검출가능한 박테리아 분류군 (예를 들어, 종)의 총합 중) 제제의 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 약 99.5%, 약 99.9%, 80-99%, 75%-95%, 85%-95%, 85%-99%, 또는 90%-99%를 구성한다.
일부 구현예에서, 제제는 (a) 내지 (o) 락토바실러스 종 중 하나 및 종 조합을 포함한다: a) 락토바실러스 크리스파투스; (b) 락토바실러스 이너스; (c) 락토바실러스 젠세니이; (d) 락토바실러스 가세리; (e) 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 이너스; (f) 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이; (g) 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리; (h) 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이; (i) 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리; (j) 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리; (k) 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이; (l) 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리; (m) 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리; (n) 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리; (o) 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리.
하나의 측면에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 (i) 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고; (ii) 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하고; 여기서 제약 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 하나의 박테리아 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 크리스파투스를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 이너스를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 젠세니이를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 가세리를 포함한다.
일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 2개의 박테리아 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 이너스를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리를 포함한다.
일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 3개의 박테리아 종을 포함한다.
일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 젠세니이를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 가세리를 포함한다.
일부 구현예에서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 4개의 박테리아 종을 포함한다.
일부 구현예에서, 락토바실러스 크리스파투스 또는 락토바실러스 이너스는 제제의 다른 박테리아 종보다 더 큰 상대적 양으로 존재하며, 예를 들어, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 80-99.9%는 20%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만의 다른 박테리아 종을 추가로 포함하는 락토바실러스 크리스파투스일 수 있다.
추가의 락토바실러스 종
일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 락토바실러스 종은 소량 (예를 들어, 제제의 락토바실러스 종의 20%, 15%, 10%, 5%, 2%, 1% 미만)으로 제제 중에 존재한다. 일부 구현예에서, 이들 락토바실러스 종은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 0.01 - 1%, 0.02 - 0.5% 또는 0.01 - 0.3%의 농도로 존재한다.
추가의 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 또는 락토바실러스 가세리 이외의 추가의 락토바실러스를 포함하며, 여기서 추가의 락토바실러스 종은, 예를 들어, 락토바실러스 아시도필루스, 리모실락토바실루스 페르멘툼(Limosilactobacillus fermentum) (이전에는 락토바실러스 페르멘툼(Lactobacillus fermentum)으로서 공지됨), 락티카세이바실루스 카세이(Lacticaseibacillus casei) (이전에는 락토바실루스 카세이(Lactobacillus casei)로서 공지됨), 및 락티카세이바실루스 람노수스(Lacticaseibacillus rhamnosus) (이전에는 락토바실러스 람노수스(Lactobacillus rhamnosus)로서 공지됨)를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 리모실락토바실러스 페르멘툼, 락티카세이바실루스 카세이, 락티카세이바실루스 람노수스는 락토바실러스로서 언급되고 락토바실러스의 의미 내에 포함된다.
본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 10% 미만, 7% 미만, 5% 미만, 2% 미만, 1% 미만, 0.5% 미만, 또는 0.1% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 본 발명의 제제는 5% 미만의 가르드네렐라 바지날리스, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종 및 파니헤세아 바지나에(Fannyhessa vaginae)를 추가로 포함할 수 있다. 가르드네렐라 바지날리스는 역사적으로 잘못 분류되었으며 최근에 비피도박테리아(Bifidobacteria) 속에 속하는 것으로 재분류되었다. 따라서, 용어 가르드네렐라 바지날리스 및 비피도박테리움 바지날리스(Bifidobacterium vaginalis)는 상호교환가능하게 사용된다. 아토포비움 바지나에(Atopobium vaginae) 및 파니헤세아 바지네아(Fannyhessea vaginea) 또한 본 출원 전반에 걸쳐 상호교환가능하게 사용된다.
동물 또는 인간 신체로부터 분리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 (단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제)가 본원에 제공된다. 따라서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제와 상호교환가능하게 사용된다.
락토바실러스 크리스파투스-지배적 제제
락토바실러스 크리스파투스가 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리 각각보다 더 많은 양으로 존재하는, 락토바실러스 크리스파투스-지배적 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 본원에 제공된다. 락토바실러스 크리스파투스-지배적 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 바람직한 측면 및 구현예가 하기에 제공된다.
하나의 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%의 상대적 양의 락토바실러스 크리스파투스; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 90%, 95%, 99% 또는 99.9% 초과의 상대적 양의 락토바실러스 크리스파투스를 포함한다. 일부 구현예에서, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리 종은 제제 중에 검출가능한 양으로 존재하지 않는다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 이너스; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 가세리 및/또는 락토바실러스 젠세니이를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 이너스를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 최대 5%, 10%, 20% 또는 30%를 구성한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 이너스를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 5-40%, 예컨대 5-10%, 10-20%, 20-30%, 또는 30-40%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 이너스를 구성하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 5%, 10%, 20% 또는 30%를 구성한다.
하나의 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 가세리 및/또는 락토바실러스 이너스를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 0.01 내지 약 45%를 구성한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 0,01-5%, 5-10%, 10-20%, 또는 30-40%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 0,01-5%를 구성한다.
하나의 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 가세리를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 0.01 내지 약 20%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 0.01 내지 약 15%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 2-15%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 2-10%를 구성한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 0,01-5%, 5-10%, 또는 10-20%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 0,01-5%, 5-10%, 또는 10-20%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이 각각은 모든 검출가능한 박테리아 종의 최대 15%를 구성한다.
하나의 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 50%, 60%, 70% 또는 80%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01-20%, 0.2-15% 또는 0.2-10%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01 내지 약 5%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 60%를 구성하고, 추가로 여기서 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01 내지 약 10%를 구성한다.
락토바실러스 이너스-지배적 제제
본 발명은 추가로, 락토바실러스 이너스가 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리 각각보다 더 많은 양으로 존재하는, 락토바실러스 이너스-지배적 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 제공한다. 락토바실러스 이너스-지배적 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 바람직한 측면 및 구현예가 하기에 제공된다.
하나의 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%의 상대적 양의 락토바실러스 이너스; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 90%, 95%, 99% 또는 99.9% 초과의 상대적 양의 락토바실러스 이너스를 포함한다. 일부 구현예에서, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리 종은 제제 중에 검출가능한 양으로 존재하지 않는다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 크리스파투스; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 가세리를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 크리스파투스를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 20% 미만, 10% 또는 5% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 크리스파투스를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01-10%, 0.01-5%, 0.01-2% 또는 0.01-1%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 크리스파투스를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 크리스파투스를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 70%를, 또한 락토바실러스 크리스파투스는 20% 미만을 구성한다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 가세리 및/또는 락토바실러스 크리스파투스를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 1%, 0.5%, 0.2%, 0.1%, 0.05% 또는 0.01% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01 - 0.05%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 70%를, 또한 락토바실러스 젠세니이는 1% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 80%를, 또한 락토바실러스 젠세니이는 0.1% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 90%를, 또한 락토바실러스 젠세니이는 0.1% 미만을 구성한다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 젠세니이 및/또는 락토바실러스 크리스파투스를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 락토바실러스 젠세니이 및/또는 락토바실러스 크리스파투스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 2%, 1%, 0.5%, 0.1% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 가세리는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 가세리는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01-5%, 1-4%, 또는 1-3%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 70%를, 또한 락토바실러스 가세리는 5% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 80%를, 또한 락토바실러스 가세리는 5% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 90%를, 또한 락토바실러스 가세리는 5% 미만을 구성한다.
하나의 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 가세리를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 0.01 내지 약 10%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 0.01 내지 약 5%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 0.01-1%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 2%, 1%, 0.5%, 0.2% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 2%, 1%, 0.5%, 0.2% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이 각각은 제제 중의 모든 검출가능한 박테리아 종의 2%, 1%, 0.5%, 0.2% 미만을 구성한다.
하나의 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 젠세니이를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 0.01 내지 약 10%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 0.01 내지 약 5%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 0.01-1%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 가세리는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 2%, 1%, 0.5%, 0.2% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 크리스파투스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 2%, 1%, 0.5%, 0.2% 미만을 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리 각각은 제제 중의 모든 검출가능한 박테리아 종의 2%, 1%, 0.5%, 0.2% 미만을 구성한다.
하나의 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 50%, 60%, 70% 또는 80%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01-25%, 0.1-20% 또는 0.2-15%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01 내지 약 5%를 구성한다. 일부 구현예에서, 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리를 포함하며, 여기서 락토바실러스 이너스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 50%를 구성하고, 추가로 여기서 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01 내지 약 25%를 구성한다.
락토바실러스 젠세니이-지배적 제제
본 발명은 추가로, 락토바실러스 젠세니이가 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리 각각보다 더 많은 양으로 존재하는, 락토바실러스 젠세니이-지배적 실질적으로 완전한 질 마이크로바이옴 제제를 제공한다. 락토바실러스 젠세니이-지배적 실질적으로 완전한 질 마이크로바이옴 제제의 바람직한 측면 및 구현예가 하기에 제공된다.
하나의 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%의 상대적 양의 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 60%, 65%, 70% 또는 75% 초과의 상대적 양의 락토바실러스 젠세니이를 포함한다. 일부 구현예에서, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01 내지 약 20%를 구성한다. 일부 구현예에서, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.05 내지 약 15%를 구성한다. 일부 구현예에서, 락토바실러스 젠세니이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 65%를 구성하고, 추가로 여기서 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 가세리 각각은 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 0.01 내지 약 15%를 구성한다.
락토바실러스 가세리-지배적 제제
본 발명은 추가로, 락토바실러스 가세리가 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 젠세니이 및 락토바실러스 가세리 각각보다 더 많은 양으로 존재하는, 락토바실러스 가세리-지배적 실질적으로 완전한 질 마이크로바이옴 제제를 제공한다. 락토바실러스 가세리-지배적 실질적으로 완전한 질 마이크로바이옴 제제의 바람직한 측면 및 구현예가 하기에 제공된다.
하나의 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%의 상대적 양의 락토바실러스 가세리; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 90%, 95%, 99% 또는 99.9% 초과의 상대적 양의 락토바실러스 가세리를 포함한다. 일부 구현예에서, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리 종은 제제 중에 검출가능한 양으로 존재하지 않는다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 가세리, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및/또는 락토바실러스 젠세니이; 및 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 이너스 및/또는 락토바실러스 젠세니이를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 크리스파투스 및/또는 락토바실러스 젠세니이를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제제는 검출가능한 양의 락토바실러스 이너스 및/또는 락토바실러스 크리스파투스를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 제제는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% 또는 그 초과의 상대적 양의 락토바실러스 가세리를 포함한다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 및 그를 포함하는 제약 조성물은 대상체에 대한 투여, 바람직하게는 질 투여에 적합하다. 대상체는 인간일 수 있다.
하나의 측면에서, 질 투여에 적합한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 본원에 제공된다. 추가의 측면에서, 본원에 제공된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 염증 또는 염증과 관련된 장애의 치료에서의 사용을 위한 것이다. 추가의 측면에서, 본원에 제공된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 수용자의 질 틈새에서의 생착 및 염증 치료를 위한 유효량의 질 락토바실러스를 포함한다.
질 틈새에서의 락토바실러스
락토바실러스는 질 미생물 군집에서 지배적인 미생물이며, 이들은 건강한 비뇨생식관을 유지하는 데 중요한 역할을 한다. 락토바실러스는 항-부착 인자, 과산화수소, 박테리오신의 분비 및 및 병원체 및 병원균에 대해 적대적인 산성 환경을 생성하는 글리코겐의 락트산으로의 발효를 포함하는 것으로 보이는 메커니즘을 통해 병원성 미생물의 부착 및 성장 및/또는 병원균의 과성장을 방지할 수 있다. 락토바실러스 속은 그램 양성, 공기관용성 혐기성, 락트산 생성 박테리아의 표현형적으로 이질적인 그룹을 포함한다. 다른 전형적인 특징은 카탈라제-음성이고 막대-형상인 것을 포함하고, 일반적으로 약 50% 미만인 구아닌 (G) 및 시토신 (C)의 낮은 함량을 갖는 DNA를 갖는다. 이들은 피르미큐테스(Firmicutes) 문, 바실리(Bacilli) 강, 락토바실랄레스(Lactobacillales) 목 및 락토바실라세아에(Lactobacillaceae) 과의 구성원이다. 당업자는 표준 기술을 사용하여 락토바실러스 종을 식별할 수 있을 것이다.
락토바실러스의 종은, 예를 들어, 16S rRNA (리보솜 RNA) 서열 (또는 일반적으로 16S rDNA로서 언급되는, 16S rRNA를 인코딩하는 DNA)를 기반으로 하여, 유전적으로, 뿐만 아니라 표현형적으로 식별될 수 있다. 유전자 분석은 표준 기술, 예를 들어, 전체 게놈 시퀀싱 분석 뿐만 아니라 수백 개의 DNA 서열 및 몇몇 유전자 단편의 뉴클레오티드 변이를 기반으로 하는 폭넓게 사용되는 타이핑 접근: 다중-유전자좌 서열 타이핑 (MLST), 탠덤 반복 분석의 다중-유전자좌 변수 (MLVA), rMLST 및 cgMLST)를 사용하여 수행될 수 있으며, 이는 예를 들어 하기 문헌에서 논의되었다: Marcos -Losada, M. 등, "Microbial sequence typing in the genomic era", Infection, Genetics and Evolution, Vol. 63, Sep. 2018, p. 346-359.
다른 식별 기술은 다음을 포함한다: 질 pH, 뉴젠트(Nugent) 스코어, 위프(Whiff) 시험, 글루코스 발효 생성물의 기체 액체 크로마토그래피 분석, 총 혐기성미생물 농도, 총 호기성미생물 농도, 효소 활성 (예를 들어, 리파제, 포스포리파제 A2 및 포스포리파제 C, 과산화수소 생성).
일부 구현예에서, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 단리된 및/또는 배양-증식 박테리아 균주(들)를 포함하지 않는다 (또한 이로부터 유래되지 않음). 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는, 예를 들어, 건강한 질 세균총을 갖는 여성 공여자의 질관으로부터 수집된, 자궁경부질 분비물 (질액)로부터 제조될 수 있다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 상업적으로 입수가능한 수집 장치, 예컨대 월경액 수집 장치 (연질 컵 또는 연질 디스크), 시린지, 튜브, 스패튤라 또는 비커, 또는 흡수성 매트릭스를 사용하여 표준 기술을 사용하여 수집될 수 있다. 일부 구현예에서, 월경액 수집 장치는 질 자가-샘플링 장치이다. 질 자가-샘플링 장치는, 예를 들어, 또 다른 사람의 도움 없이 질액 또는 자궁경부질 분비물을 수집하기 위해 공여자에 의해 사용될 수 있다.
임의로, 수집된 물질은 원심분리에 적용된다. 원심분리 단계는, 질액 성분의 물리적 분리 없이, 수집을 용이하게 하기 위해 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 하기 중 하나 이상을 포함한다: 점액 (예를 들어, 자궁경부에 의해 분비됨), 배출된 상피 세포, 질 삼출물, 및 여성 공여자의 분비물에서 발견되는 락토바실러스 이외의 박테리아. 점액 및 분비물의 다른 성분 (다른 박테리아 포함)은 비뇨생식관에 투여되어 여성 수용자에서의 생착을 지지함에 따라 락토바실러스 성장 및 생존에 유익하다고 생각된다. 이는 단리된 균주(들)를 포함하는 조성물에 비해 이점을 제공한다. 따라서, 일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 시험관내에서 배양되거나 (예를 들어, 균주 단리 목적으로) 증식되지 않고, 그보다는 바람직하게는 4℃ 냉장고에서 저장되거나 수집 후 즉시 동결되거나 (예를 들어, 0℃, -20℃, -80℃, -190℃로의 동결), 임의로 분무 건조 또는 동결건조된다.
요망되는 경우, 자궁경부질 분비물은, 예를 들어, 냉장 또는 동결 전에, 예를 들어, 멸균을 위한 및/또는 잔류 입자, 응집물 및 세포를 제거하기 위한 여과, 및 예를 들어, 본원에서 논의된 바와 같은 요망되는 부피, 농도 (예를 들어, CFU/mL) 및/또는 점도에 도달하기 위한 희석제 첨가에 의해, 추가로 프로세싱될 수 있다. 임의로, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 이것이 투여 형태로 제형화되고/거나 어플리케이터 또는 디스펜서로 분배될 때까지 냉장 또는 동결 유지된다.
본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 다른 이점은, 구현예에서, 실질적인 생착이, 단리된, 증식된 균주의 생착을 증가시키기 위해 때때로 사용되는, 점막에 대한 락토바실러스의 부착에 의해 콜로니화 능력을 증가시키기 위한 점액 부착성 부형제 (예를 들어, 히드로콜로이드, 예를 들어 크산탄 검, 로커스트 빈 검 알기네이트 등)의 사용을 필요로 하지 않는 것을 포함한다. 이는 점액 부착성 부형제로 인한 알레르기 반응과 같은 불리한 부작용을 촉발할 위험을 최소화하고, 용인성을 증가시킨다. 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 또 다른 이점은 질 점막에서의 락토바실러스의 효율적이고 연장된 생착/콜로니화이다. 일부 구현예에서, 콜로니화 효과는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여 후 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 그 초과의 월경 주기 동안 지속된다.
본 발명의 방법 및 제제의 하나의 추가의 이점은, 장내미생물불균형 대상체의 염증을 성공적으로 치료하기 위해 항생제로의 사전-치료를 필요로 하지 않는다는 점이며, 이는 이전에는 가능하지 않았다. 이는 보다 작은 샘플 농도 또는 단일 균주의 사용에 기인할 가능성이 높지만, 본원에 제공된 제제는 질 미생물군의 전체 생태계 뿐만 아니라 제제 내 질 미생물군의 보다 높은 농도 및/또는 양을 포함한다. 마지막으로, 항생제의 과도한 사용 또는 남용은 항생제 내성 증가 문제와 직접적으로 관련된다. 본 발명의 제제는 치료 전에 또는 치료 동안의 항생제 사용에 의존하지 않고, 따라서 이는 본 발명의 추가 진보 및 유리한 효과이다.
선구자(pioneer) 종
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 또 다른 이점은 공여자의 질 미생물총의 실질적으로 완전한 생태계의 존재이다. 특정 구현예에서, 매우 낮은 양, 예컨대 0.01% 또는 심지어 0.001%로 존재하는 락토바실러스도 제제 투여에 의해 수용자에게 성공적으로 전달된다. 이론에 얽매이지 않고, 실질적으로 완전한 생태계는, 예를 들어, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리 및/또는 락토바실러스 이너스 등의 선구자 종에 대한 최적의 성장 조건을 제공하는 것으로 믿어지며, 이는, 예를 들어 보다 높은 pH에서, 차선의 수용자 장내미생물불균형 질 틈새에서 우선적으로 콜로니화하고 증식한다.
구현예에서, 선구자 종은 장내미생물불균형 질 틈새에서 초기에 생착되고 증식함으로써, 예를 들어, 대사물질 (아미노산 포함)을 방출하고 pH를 감소시킬 수 있는 것을 특징으로 한다. 이는 또한 제제 및 질강에 존재하는 다른 락토바실러스의 증식을 촉진할 것으로 예상된다.
실질적으로 완전한 생태계를 제공함으로써, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된 질 락토바실러스 종은 협력하여 작용하여 장내미생물불균형을 역전시키고, 특정 구현예에서는, 질 마이크로바이옴의 '트위닝(twinning)', 예를 들어 수용자의 질 틈새에서의 공여자의 건강한 질 미생물군의 비슷한 카피 재생을 일으킬 수 있다.
락토바실러스 종은 이들이 증식하고 번성하는 종-특이적 최적 pH 범위를 갖는 것으로 생각된다. 엘. 크리스파투스는 전형적으로 약 3.7-4.0의 pH 범위에서 잘 증식하며, pH 3.7-3.9에서 더욱 최적으로 증식한다. 엘. 이너스는 전형적으로 3.9-4.2의 pH 범위에서 가장 잘 증식한다. 엘. 가세리 및 엘. 젠세니이는 약 4.0 - 5.2의 pH 값에서 가장 잘 증식한다. 특히 엘. 젠세니이는 높은 pH에서 잘 증식할 수 있다.
일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고, 이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하며, 여기서 엘. 크리스파투스는 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 약 99.9%의 상대적 농도로 존재하고, 또한 여기서 투여 후 엘. 젠세니이의 생착 및/또는 증식 속도는 엘. 크리스파투스의 생착 및/또는 증식 속도에 비해 더 높다.
일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고, 이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하며, 여기서 엘. 크리스파투스 및 엘. 이너스는 둘 다 약 30-45%로 존재하고, 또한 여기서 투여 후 엘. 젠세니이의 생착 및/또는 증식 속도는 엘. 크리스파투스의 생착 및/또는 증식 속도에 비해 더 높다.
일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고, 이는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하며, 여기서 엘. 크리스파투스 및 엘. 이너스는 둘 다 약 30-45%로 존재하고, 또한 여기서 투여 후 엘. 가세리의 생착 및/또는 증식 속도는 엘. 크리스파투스의 생착 및/또는 증식 속도에 비해 더 높다.
일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하며, 여기서 엘. 크리스파투스 및 엘. 이너스는 둘 다 약 30-45%로 존재하고, 또한 여기서 투여 후 엘. 이너스의 생착 및/또는 증식 속도는 엘. 크리스파투스의 생착 및/또는 증식 속도에 비해 더 높다.
일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 약 3.8 - 5.0, 4.0 - 5.0, 4.0 - 4.8, 4.0 - 4.6, 4.0 - 4.5, 4.2 - 5.0, 4.2 - 4.8, 4.2 - 4.6, 4.4 - 4.8 또는 pH 4.4 - 5.0의 pH에서 증식이 가능한 엘. 이너스, 엘. 가세리 및/또는 엘. 젠세니이 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 엘. 이너스, 엘. 가세리 및/또는 엘. 젠세니이의 증식은 수용자 질 틈새의 pH를 엘. 크리스파투스의 증식에 알맞은 pH로 감소시킨다. 일부 구현예에서, 엘. 이너스, 엘. 가세리 및/또는 엘. 젠세니이의 증식은 수용자 질 틈새의 pH를 엘. 크리스파투스의 증식에 적합한 pH로 감소시킨다. 일부 구현예에서, 제제의 투여 후, 엘. 이너스, 엘. 가세리 및/또는 엘. 젠세니이 중 적어도 하나는 최고의 생착 및/또는 증식 속도를 갖고, 이는 엘. 크리스파투스의 증식 속도보다 더 크다.
구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 사용한 장내미생물불균형의 성공적인 투여 및 치료는, 낮은 상대적 양으로 존재할 수 있는 소수 종을 포함한 공여자의 질 생태계를 수용자에게 전달한다.
장내미생물불균형 수용자에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여 후, 선구자 종, 예를 들어, 엘. 이너스, 엘. 가세리 및/또는 엘. 젠세니이는, 예를 들어 장내미생물불균형 질 틈새의 체류 pH와 상용성인 보다 높은 pH 범위의 이들의 특정 용인성으로 인해, 증식 이점을 가질 수 있다. 따라서, 생태계에 포함된 락토바실러스 종은 투여 후 동일한 속도로 콜로니화 및 증식하지 않을 수 있지만, 예를 들어, 장내미생물불균형 질 틈새의 pH에 따라, 예를 들어, 생태계의 선구자 종 (예를 들어, 엘. 이너스, 엘. 가세리 및/또는 엘. 젠세니이)과 같은 락토바실러스의 서브세트를 먼저 증식하도록 장려할 수 있다. 이러한 선구자 종의 초기 증식은, 장내미생물불균형 질 틈새를, 번성을 위해 보다 낮은 pH를 선호하는 예를 들어, 엘. 크리스파투스 등의 "추종자-종"에 대하여 서식가능하게 만든다. 선구자 종, 예를 들어, 엘. 이너스, 엘. 가세리 및/또는 엘. 젠세니이의 증식은, pH 수준을, 예를 들어, pH 4.8로부터 4.0으로 감소시키도록 돕고, 이로써 엘. 크리스파투스의 증식을 위한 보다 적합한 조건을 생성할 수 있다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 존재하는 상이한 락토바실러스 종 사이의 상호작용이 장내미생물불균형의 성공적인 치료에 영향을 주는 것으로 예측된다. 이 유리한 효과는 단리된 균주 또는 단리된 종에서는 관찰가능하지 않다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된 락토바실러스는 인간 질을 콜로니화될 수 있고 그에 확립 (생착)될 수 있다. 일부 구현예에서, 콜로니화 및 생착은 월경 배출 동안에도 일어난다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된 락토바실러스는 여러 월경 주기에 걸쳐 투여 후에 질에서 계속 체류할 수 있다. 일부 구현예에서, 락토바실러스는 질 투여시 1개 또는 1개 초과 (예를 들어, 2, 3, 4, 5 또는 6개)의 월경 주기에 걸쳐 질 미생물 틈새에 생착된다. 체류 시간은 하기와 같이 결정될 수 있다: 예를 들어, 핵산 시퀀싱을 사용하여 (예를 들어, 특정 락토바실러스에 대하여), 예를 들어, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여 전과 후의 시퀀싱 결과를 비교하여, 예를 들어, 수용자의 미생물 군집에 대한 새로 첨가된 구성원 (예를 들어, 하나 이상의 락토바실러스)의 정체를 결정하고, 이어서 미리 정해진 시간 간격으로 (예를 들어, 월경 주기 전 또는 후에, 임의로, 다수의 월경 주기에 걸쳐) 새로 첨가된 구성원의 전부 또는 특정 서브세트가 특정 시간 간격으로 여전히 실질적으로 존재함을 결정 (예를 들어, 핵산 시퀀싱을 통해)한다. 일부 구현예에서, 수용자의 마이크로바이옴의 체류 시간은 공여자의 마이크로바이옴과 비교될 수 있다. 체류 시간은 호르몬 수준 (예를 들어, 에스트로겐), 식이, 성 행위, 질의 산도 상태, 및 생식기 감염 및 다른 미생물 섭동, 예를 들어, 항생제로의 치료의 존재 또는 부재를 포함한 다양한 인자에 따라 달라질 수 있습니다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된 락토바실러스의 성공적인 콜로니화 및 생착은 하기 중 하나 이상에 의해 나타날 수 있다: 질강 및 질 미생물 틈새에서의 감소된 pH, 증가된 락트산 함량, 항생제 내성 유전자의 보다 낮은 풍부도, 진균 DNA의 감소된 양, 감소된 독소 함량, 감소된 병원성 인자, 감소된 염증성 시토카인 및 케모카인, 감소된 면역 세포 침윤, 감소된 총 박테리아 DNA 로드, 감소된 총 병원성 DNA 로드, 증가된 점탄성, 증가된 시알로글리칸 함량, 병원균 또는 병원체의 감소된 상대적 또는 절대적 풍부도, 또는 임의의 이들의 조합 (예를 들어, 동일한 대상체의 베이스라인 (예를 들어, 투여 및 생착 전) 또는 비-치료 대조군 대상체와 비교할 때).
안정성
본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제로 제형화된 제약 조성물 중에 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된 락토바실러스는 일반적으로 4℃ 냉장고에 저장되는 경우 최대 1주, 또한 약 -18℃, 또는 바람직하게는 약 -80℃에서 동결 저장되는 경우 최대 수개월 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 15, 18, 또는 24개월, 또는 그 초과) 동안 생존한다. 생존능은 시간에 따라 감소한다. 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 또는 그의 제약 조성물은, 이들이 사용 전에 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 또는 적어도 80% 생존 박테리아를 보유하는 경우, 투여에 적합하다. 생존 세포는 일반적으로 콜로니화 및 생착이 가능하다. 퍼센트 생존능은 집단 내의 생존 박테리아의 백분율을 지칭한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는, 예를 들어, 제약 조성물의 제형화를 위해, 예를 들어, 식염수 등의 희석제 첨가를 위해, 추가로 프로세싱된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 또는 그의 제약 조성물은, 예를 들어, 조성물에서, 예를 들어, 용이한 저장, 포장, 제형화, 및 수송을 위해 냉동-건조 (동결건조)되도록 추가로 프로세싱되고, 이는 투여 전에 재수화될 수 있다.
일부 조성물 특징
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물, 예컨대 제약 조성물이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 제약 조성물은 다음을 포함한다: i) 예를 들어, 하나 이상의 락토바실러스 종 및 임의로 자궁경부질 분비물 (예를 들어, 질 점액, 질 삼출물, 다른 질액, 및 질 상피 세포 등)의 하나 이상의 잔류 구성성분을 포함하는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, ii) 예를 들어, 식염수 등의, 제약상 허용가능한 완충제 또는 희석제 또는 다른 부형제 (예를 들어, 조성물의 점도 및/또는 등장성/삼투압을 조정하기 위해), iii) 하나 이상의 산성화 작용제, 예를 들어, 락트산 또는 붕산 (예를 들어, 조성물의 pH를, 예를 들어, pH 5 미만, 또는 pH 3.0 내지 4.5로 조정하기 위해), iv) 예를 들어, 프리바이오틱스 (예를 들어, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제와 공생 혼합물을 생성하기 위해), 살정제 (예를 들어, 제제 중의 잔류 정자를 죽이거나 불활성화하기 위해); 호르몬 작용제 (예를 들어, 에스트로겐), 항-염증성 작용제 등과 같은 하나 이상의 다른 활성 작용제. 바람직한 구현예에서, 제약 조성물은 (i) 및 (ii)를 포함한다. 하나의 구현예에서, 제약 조성물은 (i) 및 (ii)로 이루어진다. 하나의 구현예에서, 제약 조성물은 (i) 및 (ii)를 포함하나 (iii) 및 (iv)는 포함하지 않는다. 하나의 구현예에서, 제약 조성물은 (i), (ii), 및 (iii)을 포함하나 (iv)는 포함하지 않는다. 하나의 구현예에서, 제약 조성물은 (i), (ii), (iii) 및 살정제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제약 조성물은 프리바이오틱스, 호르몬 또는 항-염증성 작용제를 포함하지 않는다.
산성화 작용제
본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은 임의로, 예를 들어, 유기 산 또는 그의 염과 같은, 하나 이상의 산성화 작용제를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 산성화 작용제는 조성물의 pH를, 예를 들어, pH 5.5 또는 5.0 미만, 예를 들어, pH 3.5 내지 4.5, 또는 pH 3.0 내지 4.5로 감소시키기 위해 사용될 수 있다. pH 감소에 있어, 이러한 산성화제는 항-미생물 작용제 (예를 들어, 칸디다 또는 병원성 박테리아를 억제하기 위한)로서 작용할 수 있다. 산성화 작용제는, 예를 들어, 락트산, 아세트산, 아스코르브산, 시트르산, 폴산 소르브산, 또는 붕산을 포함한다. 다른 구현예에서, 산성화 작용제는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물과 별도로 투여되며; 예를 들어, 조성물의 투여 전에, 그와 동시에, 또는 그 후에 (예를 들어, 상이한 투여 형태, 예컨대 좌약, 크림, 겔, 분말, 두쉬(douche) 또는 유사 형태로), 예를 들어, 1 내지 7일, 또는 1 내지 10일 동안 투여된다. 이들 구현예에서, 산성화 작용제는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된 락토바실러스의 생존 및 생착을 촉진하기 위해 사용될 수 있다. 산성화 작용제는 또한, 예를 들어, 제제 중에 존재할 수 있는 잔류 정자를 죽이거나 불활성화하기 위한, 살정제로서 유용할 수 있다. 하나의 구현예에서, 살정 활성은 락트산 첨가에 의해 기여된다. 하나의 구현예에서, 락트산은 D- 및 L-이성질체의 라세미 혼합물로서, 또는 예를 들어, 단지 D-락테이트 또는 단지 L-락테이트를 포함한, 상이한 적합한 비율로 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은 0.1%, 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3% 또는 5%의 산성화제 (예를 들어, 락트산) 첨가에 의해 산성화된다. 바람직한 구현예에서, 산성화제는 0.5% 내지 1.5%, 또는 0.2% 내지 2% (w/w)의 농도로, 또는 건강한 질에 매칭되는 유사한 농도로 첨가된다.
점도
본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은 하나 이상의 제약상 허용가능한 완충제 또는 희석제 또는 다른 부형제를 포함할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 희석제는 식염수 (예를 들어, 0.9% NaCl), 예를 들어, 멸균 일반 식염수이다. 하나의 구현예에서, 희석제는 조성물의 점도를 조정하기 위해, 예를 들어, 자궁경부질 분비물로부터 유래된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 점도를 낮춤으로써, 예를 들어, 어플리케이터 또는 디스펜서 또는 유사한 질 전달 시스템을 사용하여, 조성물을 여성 수용자에게 투여하는 능력을 증가시키기 위해 사용된다. 다른 구현예에서, 하나 이상의 부형제는, 예를 들어, 좌약, 크림 또는 용해 필름 또는 정제와 같은 상이한 투여 형태로 조성물을 제형화하기 위해 사용된다.
일부 구현예에서, 투여 형태는 액체, 고체 또는 반고체이다. 고체 투여 형태는 바람직하게는 정제, 캡슐, 또는 필름을 포함한다. 반고체 투여 형태는 바람직하게는 좌약, 연고, 겔, 크림 또는 경질 포움을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 투여 형태는 겔이다.
예를 들어, 어플리케이터 또는 디스펜서를 사용한, 여성 수용자의 질강으로의 투여를 위해 점도를 조정할 때, 질강에 용이하게 분배가능하도록 (예를 들어, 액체 조성물의 배출을 위한 상당한 힘의 적용 없이) 주의를 기울여 점도를 조정해야 하지만, 그러나 투여 후 임의의 상당한 양의 시간 동안 질강 내에 머무르지 않는 유체/액체가 되도록 조성물을 만드는 것은 피해야 한다. 따라서, 점도는 질강으로부터의 빠른 배출을 막기에 적합하도록 선택되어야 한다. 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은 바람직하게는, 여성 수용자가 직립 자세에 있을 때, 대부분이 적어도 5분, 적어도 10분, 적어도 20분, 적어도 30분 동안 질강에 머무르는 것을 허용하는 점도를 가질 수 있지만, 투여는 바람직하게는 예를 들어 여성 수용자가 누운 상태로 쇄석술 자세에서 수행된다. 점도는, 예를 들어, 점도계를 사용하여 측정될 수 있다.
살정제
본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은 하나 이상의 살정제를 포함할 수 있다. 노녹시놀-9 (N-9)의 막 파괴 특성 (자궁경부질 상피에 손상을 유발하여 질 조직의 투과성을 증가시킴)으로 인해, 또한 이것은 락토바실러스 종에 해로운 것으로 나타났기 때문에, 이것의 사용시 주의를 기울여야 한다. 다른 살정제는 옥톡시놀-9, 나트륨 콜레이트, 및 벤즈알코늄 클로라이드를 포함한다. 하나의 구현예에서, 락트산이 사용된다. 다른 구현예에서, 락트산은, 예를 들어, 시트르산과 조합되어 사용될 수 있다.
프리바이오틱스
본원에서 사용되는 바와 같이, "프리바이오틱"은, 예를 들어, 생체내에서, 측정될 수 있는 바와 같이, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제에 포함된 박테리아 (예컨대 락토바실러스)의 성장을 증가시키는 성장 기질이다. 요망되는 경우, 일반적으로 필요하지는 않지만, 예를 들어, 공생 혼합물을 생성하기 위해, 여성 수용자의 비뇨생식관에 투여시 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제에 포함된 박테리아의 성장을 증가시키기 위해, 본원에 기재된 조성물에 프리바이오틱이 첨가될 수 있다. 이는, 특정 상황 하에, 성공적인 콜로니화 및 생착을 증가시킬 수 있다. 다른 구현예에서, 프리바이오틱스는 생착된 제제의 유지 및/또는 일반적인 질 건강을 위해 사용될 수 있다.
프리바이오틱이 요망되는 경우, 이는 여성 수용자의 비뇨생식관에 체류될 수 있는 임의의 효모 (예를 들어, 칸디다 종), 병원균 또는 병원체 (예를 들어, 대장균 및 다른 그램-음성 박테리아)에 의해 크게 대사가능하지 않도록 (예를 들어, 이들의 성장 촉진을 피하기 위해) 주의 깊게 선택되어야 한다. 프리바이오틱스는, 예를 들어, 락티톨, 락툴로스, 또한 일부 경우에는 또한 다른 올리고사카라이드 및 가용성 섬유, 예를 들어, 프룩토올리고사카라이드 (FOS), 글루코올리고사카라이드 (GOS), 및 이눌린을 포함할 수 있다.
다른 활성 작용제
요망되는 경우, 예를 들어, 수용자 여성에서 박테리아 또는 진균 감염 및/또는 성 전염 질환을 해결하기 위해 다른 활성 작용제, 예를 들어 항미생물 작용제, 항진균 작용제, 항박테리아 작용제, 항바이러스 작용제, 항생제, 항기생충 작용제 (예를 들어, 트리코모나스 바지날리스에 대한 활성을 가짐), 항-염증성 작용제 등이 본원에 기재된 조성물에 첨가될 수 있다. 조성물 중에 포함된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 (및 락토바실러스)의 활성 및 효능을 실질적으로 방해하지 않도록 이들 작용제를 제약 조성물로 제형화할 때 주의를 기울여야 한다.
일부 구현예에서, 제약 조성물은 에스트로겐의 형태를 포함한다. 적절한 수준의 에스트로겐은 질 점막의 영양성에서 역할을 하며, 에스트로겐은 글리코겐의 세포 함량을 증가시킨다.
일부 구현예에서, 제약 조성물은, 예를 들어, 락토바실러스의 항-병원성 효과를 강화하기 위해, 티오술페이트를 포함한다.
요망되는 경우, 제약 조성물은, 예를 들어, 메트로니다졸, 또는 하기 부류의 하나 이상의 항생제와 같은 항생제를 추가로 함유할 수 있다: 마크롤리드 (예를 들어, 아지트로마이신, 클라리트로마이신 및 에리트로마이신), 테트라사이클린 (예를 들어, 독시사이클린, 티게사이클린), 플루오로퀴놀론 (예를 들어, 게미플록사신, 레보플록사신, 시프로플록사신 및 모시플록사신), 세팔로스포린 (예를 들어, 세프트리악손, 데포탁심, 세프타지딤, 세페핌), 임의로 베타-락타마제 억제제 (예를 들어, 술박탐, 타조박탐 및 클라불란산)을 갖는 페니실린 (예를 들어, 아목시실린, 클라불라네이트를 갖는 아목시실린, 암피실린, 피페라실린, 및 티카르실린), 예컨대 암피실린-술박탐, 피페라실린-타조박탐 및 클라불라네이트를 갖는 티카르실린, 아미노글리코시드 (예를 들어, 아미카신, 아르베카신, 젠타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 파로모마이신, 로도스트렙토마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 및 아프라마이신), 페넴 또는 카르바페넴 (예를 들어, 도리페넴, 에르타페넴, 이미페넴 및 메로페넴), 모노박탐 (예를 들어, 아즈트레오남), 옥사졸리디논 (예를 들어, 리네졸리드), 반코마이신, 글리코펩티드 항생제 (예를 들어, 텔라반신) 등.
일부 구현예에서, 제약 조성물은 메트로니다졸, 티니다졸, 세크니다졸, 클린다마이신, 티스타틴, 아지트로마이신, 에리트로마이신, 오플록사신, 독시사이클린, 레보플록사신, 아목시실린, 및 플루코나졸로부터 선택된 항미생물제 (항생제 또는 항진균제)를 추가로 함유할 수 있다.
요망되는 경우, 제약 조성물은 마이코박테리아로의 감염 치료를 위한 작용제를 함유할 수 있다. 마이코박테리아로의 감염 치료에 적합한 작용제는 아미노글리코시드 (예를 들어, 카프레오마이신, 카나마이신, 스트렙토마이신), 플루오로퀴놀론 (예를 들어, 시프로플록사신, 레보플록사신, 목시플록사신), 이소지아니드 및 이소지아니드 유사체 (예를 들어, 에티오나미드), 아미노살리실레이트, 시클로세린, 디아릴퀴놀린, 에탐부톨, 피라지나미드, 프로티오나미드, 리팜핀 등을 포함한다.
요망되는 경우, 제약 조성물은 적합한 항바이러스 작용제, 예컨대 렘데시비르, 오셀타미비르, 자나마비르, 아만티딘 또는 리만타딘, 리바비린, 간시클로비르, 발간시클로비르, 포스카비르, 시토감(Cytogam)® (시토메갈로바이러스 면역 글로불린), 플레코나릴, 루핀트리비르, 팔리비주맙, 모타비주맙, 시타라빈, 도코사놀, 데노티비르, 시도포비르, 및 아시클로비르를 함유할 수 있다.
요망되는 경우, 제약 조성물은 적합한 항진균 작용제, 예컨대 폴리엔 (예를 들어, 니스타틴 및 나타마이신) 및 이미다졸 항진균제 (예를 들어, 플루카노졸 및 클로트리마졸)를 함유할 수 있다.
요망되는 경우, 제약 조성물은 하나 이상의 적합한 스테로이드를 함유할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 안드로겐/동화작용 스테로이드, 에스트로겐, 프로게스토겐, 코르티코스테로이드, 신경스테로이드, 에스트라디올, 에스트로피페이트, 프레마린, 드로스피레논, 노르에스티스테론, 레보노르게스트렐, 테스토스테론, 플루옥시메스테론, 메틸에스테로스테론, 옥산드롤론, 및 옥시메톨론을 포함할 수 있다.
조합 요법
또한, 유효량의 본원에 기재된 조성물, 예컨대 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것에 의한, 해당 치료를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 인간 여성, 예를 들어, 장내미생물불균형 (예를 들어, 비뇨생식관에서의 장내미생물불균형)을 나타내는 대상체의 치료 방법이 본원에 제공된다.
치료를 위한 투여 요법은 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 조성물의 투여와 조합된 하나 이상의 다른 요법을 포함할 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 질 장내미생물불균형의 치료 방법은 관리 표준(standard of care) 치료를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 질 장내미생물불균형의 치료 방법은 항미생물 작용제, 항진균 작용제, 항박테리아 작용제, 항바이러스 작용제, 항생제, 항기생충 작용제 (예를 들어, 트리코모나스 바지날리스에 대한 활성을 가짐), 항-염증성 작용제 등을 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 현재의 관리 표준 항미생물제 (항생제, 항진균제)는 메트로니다졸, 티니다졸, 세크니다졸, 클린다마이신, 니스타틴, 아지트로마이신, 에리트로마이신, 오플록사신, 독시사이클린, 레보플록사신, 아목시실린, 및 플루코나졸을 포함한다. 또 다른 예에서, 본원에 기재된 질 장내미생물불균형의 치료 방법은, 예를 들어, 질 미생물군의 재콜로니화를 돕기 위해, 또한 병원성 작용제의 재성장 및 그에 따른 재발을 막기 위해, 티오술페이트를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 치료적 작용제는 a) 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제와의 제약 조성물로서의 제형화를 위한 것으로, 또는 b) 조합 요법으로서 고려될 수 있다. 이들 조합 요법은 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 조성물의 투여와 함께 또는 그와 별도로, 또한 그와 동시에 (실질적으로 같은 시간에) 또는 그에 순차적으로 (예를 들어, 그 전에 또는 후에) 투여될 수 있다. 이들은 상이한 투여 경로 및 투여 형태로, 예컨대 경구 (예를 들어, 환제로서) 또는 국소 (예를 들어, 겔로서) 투여될 수 있다. 조합 요법의 사용은, 치료가 조성물 중에 포함된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 (및 락토바실러스)의 활성 및 효능을 실질적으로 방해하지 않음을, 또한 이들이 방해하는 경우, 방해를 최소화하기 위해 요법이 조정되어야 하는지 (예를 들어, 시기, 투여, 시퀀싱 등)를 결정하기 위해 평가되어야 한다.
질 전달 시스템
또한, 질 전달 시스템 (예를 들어, 도 13a, 13b, 13c)이 본원에 제공된다.
질 전달 시스템은 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물을, 예를 들어, 여성에게 (예를 들어, 질강에) 투여하기 위해 사용될 수 있다. 질 전달 시스템은 질강으로의 조성물의 투여를 위한 수단을 제공한다. 이는 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 질 전달에 적합한 장치 또는 투여 형태로 구성될 수 있다. 예를 들어, 적합한 장치는 질강으로의 삽입을 위한 개방 단부 (예를 들어, 팁), 및 개방 단부를 통해 조성물을 배출하기 위한 분배 단부 (예를 들어, 플런저 또는 피스톤)를 포함한다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은 양쪽 말단을 통해 로딩될 수 있고, 예를 들어, 사전-충전되어 또는 조성물과 별도로 포장될 수 있다. 요망되는 경우, 포장은 멸균이다. 이어서, 장치가 투여를 위해 직접 사용되거나 (사전-충전된 경우) 사용자에 의한 투여 즉시 (또는 그 직전에) 조성물로 충전될 수 있다. 대안적으로, 장치는 조성물로 충전되고 투여 전에 며칠 내지 약 1주 동안 냉장 하에 저장된다 (또는 대안적으로 보다 장기간 동안 저장되는 경우 동결됨). 일부 경우에, 예를 들어, 장치가 어플리케이터 또는 디스펜서인 경우, 질강에서의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 방출 후, 장치가 질강으로부터 제거된다. 적합한 장치는 어플리케이터 및 디스펜서, 예를 들어, 의학 및 과학에서 통상적으로 사용되는 것들을 포함한다. 어플리케이터 및 디스펜서는 수동으로 작동되거나 전기기계적 보조물을 포함할 수 있다.
요망되는 경우, 질 전달 시스템은 눈금화되고, 예를 들어, 투여를 보조하기 위해, 예를 들어, 부피 표시 또는 최대 부피 표시 또는 제어를 갖는다. 하나의 구현예에서, 질 전달 시스템은 단일-사용 장치이고, 이는 각각의 사용 후에 폐기된다. 또 다른 구현예에서, 질 전달 시스템은 다중-사용 장치이고, 이 경우 이는 각각의 사용 후에 세정되고, 임의로 멸균되어야 할 것이다. 단일 사용 및 다중 사용 어플리케이터는 둘 다, 예를 들어, 불활성 중합체 물질, 예컨대 폴리스티렌 또는 폴리프로필렌과 같은 임의의 적합한 물질의 것일 수 있다.
질 전달 시스템의 예시적 및 비-제한적 구현예가 임의적 특징과 함께 도 13a, 13b, 및 13c에 도시되어 있다.
다른 구현예에서, 질 전달 시스템은 이것이 용해될 때까지 질강에 남아 있을 질 좌약을 포함한다. 예를 들어, 제제를 불활성화할 수 있는 압력 또는 열이 제형화 공정 동안 적용되는 경우, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된 박테리아 (락토바실러스)를 손상시키는 것을 피하기 위해 질 좌약 또는 정제의 제형화시 주의를 기울여야 한다. 열 및 압력이 미생물에 미치는 영향을 줄이기 위한 조치를 취해야 한다. 추가의 구현예에서, 질 전달 시스템은, 예를 들어, 여성용 위생 기저귀, 팬티 라이너, 생리대, 탐폰, 팬티 가드 또는 요실금 가드와 같은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물을 포함하는 흡수 생성물을 포함한다.
본원에 기재된 질 전달 시스템은 임의로, 건조 형태, 예를 들어 동결건조 또는 분무 건조되고 이어서 임의로 본원에 기재된 투여 형태로 제형화되거나 예를 들어 사용 전에 멸균수, 약산 용액, 겔, 또는 완충제로 재구성되는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물을 포함할 수 있다. 조성물이 재구성되지 않는 경우, 투여 형태의 정확한 제형에 따라, 예를 들어 체류 질액에 의해 보조되는 재수화가 질강 내부에서 달성될 수 있다. 동결건조에 의해 생존 박테리아를 보존하는 방법은 미생물의 장기간 보존을 촉진할 수 있다. 당업자는 표준 기술을 사용하여 박테리아를 동결건조시킬 수 있을 것이다.
이들 모든 구현예에서, 염료, 향수, pH 완충제, 건조제 또는 재현탁제, 또는 약물 제형화를 위한 다른 표준 물질이 조성물 및 장치에 포함될 수 있다.
이들 모든 구현예에서, 본원에 기재된 장치 및 조성물은 적합한 포장, 예를 들어, 병, 플라콘, 블리스터 팩, 카트리지, 어플리케이터 또는 디스펜서에 포장될 수 있다. 하나의 구현예에서, 질 전달 시스템은 질강으로의 조성물 또는 제제의 투여에 적합한 본 발명의 제약 조성물 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 투여 형태를 포함하며, 여기서 투여 형태는 어플리케이터, 디스펜서 또는 좌약이다. 추가의 구현예에서, 제약 조성물 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 액체 또는 반고체 형태이다. 고체 투여 형태는 캡슐, 정제 및 필름을 포함한다. 반고체 투여 형태는 좌약, 연고, 겔, 크림 또는 경질 포움을 포함한다.
투여 형태 및 제형
질 전달 시스템에 적합한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 다중 투여 형태가 본원에서 고려되며, 이는 현탁액, 스프레이, 겔, 크림, 연고, 분말, (젤라틴 또는 식물성 셀룰로스) 캡슐, 세척용 용액 또는 두쉬, 포움, 필름, 오뷸, 질 삽입물 (예를 들어, 탐폰), 정제, 디스크, 웨이퍼 (예를 들어, 필름 상의 건조, 기화에 의함), 또는 당업자에게 공지된 부형제 및 제형 기술을 사용하는 마이크로캡슐화 생성물을 포함한다. 특히 바람직한 투여 형태는 형성 겔, 동결건조 겔, 정제, 동결 제형 및 필름을 포함한다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 제형화하기 위해, 벌크화 작용제, 중합체, 탄소 공급원, 점막부착성 작용제, 또는 pH 개질제 및/또는 완충제 등의 다수의 적합한 부형제가 사용될 수 있다.
탄소 공급원 부형제는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 함유된 미생물군에 대한 탄소 공급원으로서 작용할 수 있다. 이러한 탄소 공급원은 만니톨, 말토덱스트란, 및 구아 검을 포함한다. 일부 부형제는 또한 점막부착성 작용제로서 또는 점도 작용제로서 역할을 할 수 있다. 벌크화 작용제는 만니톨, 미세-결정 셀룰로스, 말토덱스트란, 구아 검, 이눌린, 또는 알긴산 (예를 들어, 알긴산나트륨) 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 중합체는 구조적 중합체를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 중합체는 뮤신, 히알루론산, 폴리비닐 알콜, 나트륨 CMC, 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 카르보폴 (예를 들어, 카르보폴 934), 및 폴록사머 (예를 들어, 폴록사머 407) 중 하나 이상을 포함한다. 점막부착성 작용제는 알긴산 (알긴산나트륨) 및 나트륨 CMC를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 점도 작용제는 구아 검 및 카르보폴 934를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 부형제는 pH 개질제 및/또는 완충제, 예컨대 락트산 및 아세테이트 완충제의 역할을 한다.
적합한 제형은 적합한 수직 표면 상에서 유동을 거의 내지 전혀 나타내지 않고, 제형화시 및 (장기간) 저장 동안 높은 박테리아 생존능 (예를 들어, CFU 수)을 유지한다.
요망되는 제형화 선택 파라미터는, 예를 들어, 다음을 포함한다: (예를 들어, 질관에서 재구성된 생성물의) 점막부착성; (재구성된 생성물의) 점도 (예를 들어, 겔-기반 생성물은 주변 온도에서 시린지 주사가능해야 하고 바람직하게는 37℃에서 (체온에서, 예를 들어 질관에서) 응고되어야 함); 예를 들어, 이상적으로 생리학적 농도 (약 0.5 - 1.0 mg/mL)에서 또는 그 미만에서, (재구성된 생성물의) 총 당 함량; 재구성된 생성물의 부피, 예를 들어, 최대 3 mL; (예를 들어, 겔/매트릭스의) 수화 속도 / 붕해 속도, 예를 들어, 요망되는 방출 속도를 제공하기 위해 충분한 물리적 온전성; pH, 예를 들어, 약 pH 3.4-3.9 (예를 들어, 경쟁적 질 박테리아의 억제를 촉진하기 위해); (예를 들어, 건조된 제형)의 물 활성 / 수분 함량, 예를 들어, 0.5 - 3% 물 (예를 들어, 장기간 건조된 제형 안정성을 위해); 미생물 다양성, 예를 들어, 락토바실러스 종, 예컨대 엘. 크리스파투스, 엘. 가세리, 엘. 젠세니이, 및 엘. 이너스의 상대적 풍부도; 총 용량 / 역가, 예를 들어, 바람직하게는 투여 당 (용량 당) 적어도 약 1x105 CFU/VCC, 적어도 약 106 CFU/VCC, 적어도 약 107 CFU/VCC 또는 적어도 약 108 CFU/VCC, 다양한 온도에서의 저장 수명 (재구성되지 않음), 및 미생물 제한, 예를 들어, 미생물, 예컨대 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 칸디다 알비칸스, 스타필로콕쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)의 부재, Ph Eur 기준 5.1.4, 2.6.12 & 2.6.13).
적합한 시험 방법은 표준 검정, 예컨대 플레이트 수 (예를 들어, MRS 아가), 예를 들어, 생존 박테리아 수, 용량 결정, 저장 수명; 예를 들어, 점막부착성 및 점도에 대한 레오미터, pH 계량기, 칼 피셔(Karl Fisher) / 물 활성 계량기, 예를 들어, 미생물 로드에 대한, Ph Eur 시험을 포함한다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 동결건조되고, 예를 들어, 겔 및 정제 뿐만 아니라, 예를 들어, 캡슐 등의 동결건조 생성물로 충전될 수 있는 다른 투여 형태로 제형화될 수 있다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 또한, 동결될 수 있는 겔로, 뿐만 아니라 동결될 수 있는 액체 매질 (예를 들어, 글리세롤 가짐)로 제형화될 수 있다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 또한 (공기-건조된) 필름으로 제형화될 수 있고, 이는, 예를 들어, 디스크와 같이 성형될 수 있다. 생존능 손실은 부형제 및 투여 형태에 따라 제형화 단계에서 대략 0.5 log 내지 1 log의 범위이다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 정제, 사전-형성 겔, 동결건조 겔, 액체 제형, 동결 제형, 필름-형성 제형 또는 필름으로부터 선택된 투여 형태로 제공된다.
사전-형성 및 동결 겔
본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 사전-형성 겔 중에 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 사전-형성 겔은, 예를 들어, 시린지 내로 끌어올리기 위해, 바이알 내에 제공된다. 일부 구현예에서, 사전-형성 겔은, 예를 들어, 도 13에 나타낸 바와 같이, 적합한 어플리케이터 내에 제공된다. 사전-형성 겔은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 안정성을 유지하기 위한 것에 따라 동결 또는 냉장 저장될 수 있다. 일부 구현예에서, 사전-형성 겔은 히알루론산을 포함한다. 일부 구현예에서, 히알루론산은 약 0.3 - 3%의 농도로 포함된다. 일부 구현예에서, 히알루론산은 약 0.5 - 2%의 농도로 포함된다. 일부 구현예에서, 히알루론산을 포함하는 사전-형성 겔은 -80℃에서 동결될 수 있다. 일부 구현예에서, 히알루론산을 포함하는 동결된 사전-형성 겔은 적어도 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월 또는 그 초과의 기간 동안 실질적으로 안정적이다.
동결건조 겔
본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 동결건조 겔 중에 포함될 수 있다. 동결건조 겔은 안정적일 수 있고 2-8℃에서 연장된 기간 동안 저장될 수 있다. 동결건조 겔은 동결건조된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 겔 형성 부형제를 포함한다. 동결건조 겔은 바이알 내에 공급될 수 있다. 동결건조 겔은 투여 전에 재구성 작용제로 재구성될 수 있다 (예를 들어, 임상 또는 가정 셋팅에서). 일부 구현예에서, 재구성 작용제는 겔, 겔 형성 작용제, 또는 액체를 포함한다. 액체는 물, 식염수 또는 대상체에 대한 재구성 및 후속 투여에 적합한 또 다른 액체를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 동결건조 겔은 나트륨-카르복시메틸셀룰로스 (Na-CMC)를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, Na-CMC는 약 1 - 3%의 농도로 포함된다. 일부 구현예에서, Na-CMC는 약 2%의 농도로 포함된다. 특정 구현예에서, 동결건조 겔은 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 히알루론산을 포함한다. 일부 구현예에서, 히알루론산은 약 0.3 - 3%의 농도로 포함된다. 일부 구현예에서, 히알루론산은 약 0.5 - 2%의 농도로 포함된다. 특정 구현예에서, 동결건조 겔은 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 히알루론산 및 나트륨-카르복시메틸셀룰로스 (Na-CMC)를 상기 농도로 포함한다. NA-CMP, 히알루론산, 또는 이들 둘 다의 조합을 포함하는 동결건조 겔은, 적어도 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월 또는 그 초과의 기간 동안 2-8℃에서 또는 -20℃에서 안정적이다. 일부 구현예에서, 히알루론산을 포함하는 동결건조 겔은 -80℃에서 동결될 수 있다. 일부 구현예에서, 히알루론산을 포함하는 동결된 동결건조 겔은 적어도 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월 또는 그 초과의 기간 동안 안정적이다. 일부 구현예에서, 동결건조 겔 및 재구성 작용제는 키트로서 제공된다.
필름-형성 제형
본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 필름-형성 제형 중에 포함될 수 있다. 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 중합체 부형제와 함께 제형화될 수 있으며, 여기서 중합체 부형제는 생체부착 특성 및 필름-형성 능력을 갖는다. 필름-형성 제형에 대한 예시적 중합체 부형제는 폴리비닐 알콜 (PVA), 락트산나트륨 및 락트산을 포함한다. 특정 구현예에서, 필름-형성 제형은 폴리비닐 알콜 (PVA)을 포함한다. 일부 구현예에서, PVA는 약 10 - 25%, 10-20%, 또는 약 12-15%의 농도로 포함된다. 특정 구현예에서, 필름-형성 제형은 PVA를 약 12%의 농도로 포함한다. 일부 구현예에서, 필름-형성 제형은 PVA를, 예를 들어, 약 10-25%, 10-20%, 12-15% 또는 12%의 농도로 포함하고, 공기-건조된다. 일부 구현예에서, 필름-형성 제형은 디스크 또는 웨이퍼로서 제공된다. 일부 구현예에서, 필름-형성 제형은 점막부착성 페서리 또는 패치로서 제공된다. 필름-형성 제형은 2-8℃에서 적어도 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월 또는 그 초과의 기간 동안 실질적으로 안정적이다. 일부 구현예에서, 필름-형성 제형은 유체, 예를 들어, 자궁경부질 용액과 접촉시 빠르게 분산되거나 용해되어 질내에서 점성 및 생체부착성 겔을 형성한다. 일부 구현예에서, 생체부착성 분산액의 형성은 연장된 기간 동안 질 내에서 유지된다.
정제
본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 정제 중에 포함될 수 있다. 정제는 겔-형성 특성, 점막-부착 특성, 또는 이들 둘 다의 조합을 갖는 작용제를 포함할 수 있다. 정제는 부형제, 예컨대 팽윤 작용제, 벌크화 작용제, 락트산, 카르보폴, HPMC, 알기네이트, 또는 나트륨-카르복시메틸셀룰로스 (Na-CMC)를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 벌크화 작용제는 미세결정 셀룰로스, HPMC / PVP, 말토덱스트란, 또는 폴록사머 407을 포함한다. 특정 구현예에서, 정제는 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 Na-CMC를 포함한다. 특정 구현예에서, 정제는 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 폴리비닐피롤리돈 (PVP)을 포함한다. 정제는 추가로 실질적으로 안정적일 수 있고, 예를 들어, 실질적으로 락토바실러스 생존능을 유지할 수 있다. 정제는 적어도 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월 또는 그 초과의 기간 동안 2-8℃에서 또는 실온 (약 25℃)에서 실질적으로 안정적일 수 있다. 특정 구현예에서, 정제는 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 나트륨-카르복시메틸셀룰로스 (Na-CMC)를 포함하고, 적어도 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월 또는 그 초과의 기간 동안 2-8℃에서 또는 실온 (약 25℃)에서 안정적이다. 특정 구현예에서, 정제는 본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 및 폴리비닐피롤리돈 (PVP)을 포함하고, 적어도 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월 또는 그 초과의 기간 동안 2-8℃에서 또는 실온 (약 25℃)에서 안정적이다.
액체 제형
본 발명의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 액체 제형 중에 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 액체 제형은 동결 제형으로서 제공될 수 있다. 일부 구현예에서, 액체 제형은 키트 내에 겔화 작용제와 함께 제공된다. 액체 제형은 동결보호제, 예컨대 글리세롤을 포함할 수 있으며, 여기서 글리세롤 농도는 임의로 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 또는 10% 미만이다. 일부 구현예에서, 액체 제형은, 예를 들어, -20℃ 또는 -80℃에서 동결될 수 있고, 실질적으로 락토바실러스 생존능을 유지한다. 일부 구현예에서, 액체 제형은 락트산을 추가로 포함한다. 바람직한 구현예에서, 액체 제형은 락트산 및 동결보호제, 예컨대 글리세롤을 포함한다. 일부 구현예에서, 동결보호제, 및 임의로 락트산을 포함하는 동결 액체 제형은, 적어도 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 18개월 또는 그 초과의 기간 동안 실질적으로 안정적이다. 일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 액체 제형은 키트로서 겔화 작용제와 함께 제공된다. 일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 동결 액체 제형은 키트로서 겔화 작용제와 함께 제공된다. 일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하지 않는 동결 액체 제형은 키트로서 동결건조 겔과 함께 제공되며, 여기서 동결건조 겔은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함한다.
키트
임의로 사용자를 위한 지시를 포함한, 본원에 기재된 바와 같은, 하나 이상의 투여 형태 또는 장치 및 다른 작용제를 포함한, 질 전달 시스템을 포함하는 키트가 또한 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 투여 형태 또는 장치 및 조성물은 별도의 멸균 포장 내에 있다. 일부 구현예에서, 투여 형태 및/또는 조성물은 다중 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 형태 또는 장치는 즉시 사용가능하다. 또 다른 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 또는 그의 조성물은 재구성되어야 한다. 이러한 구현예에서, 키트는 재구성을 위한 매질을 추가로 포함한다. 키트는 단일 투여 형태 또는 다중-투여 형태를 포함할 수 있다.
제제 및 조성물의 생성 방법 및 공여자 고려사항
본 발명의 측면은 본원에 기재된 바와 같은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성 방법을 포함한다. 이들 방법은 질액, 바람직하게는 자궁경부질 분비물의 샘플을 제공하기 위한 적합한 여성 공여자를 선택하고, 샘플을 프로세싱하여 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물 (예컨대 제약 조성물)을 제공하는 것을 포함한다. 공여자 여성은 일반적으로 건강하고, 질 미생물군의 장내미생물불균형을 나타내지 않고, 임의로 하나 이상의 추가의 건강 시험에 적용된다. 본원에 제공된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 (i) 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고; (ii) 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함한다. 예를 들어, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성 방법은, 건강한 여성 공여자로부터 미생물군 샘플 (예컨대 자궁경부질 분비물)을 제공하는 단계, 및 예를 들어, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 필요로 하는 여성 수용자에 대한 투여를 위한, (제약) 조성물로서의 프로세싱된 샘플을 (예를 들어, 예를 들면 하기 단계 5(a) 내지 5(e) 중 하나 이상의 수행으로부터 얻어진 것들과 같은, 하나 이상의 미리 정해진 (품질) 파라미터의 충족을 기반으로 하여) 격리로부터 해제하는 단계를 포함한다.
일반적으로, 건강한 여성 공여자로부터의 미생물군 샘플 (예컨대 자궁경부질 분비물)의 제공 및 프로세싱 단계는 다음을 포함한 1, 2, 3, 4, 5개 또는 그 초과의 단계, 및 임의의 조합, 예를 들어, 임의의 2, 3, 4, 5개 또는 그 초과의 단계를 포함할 수 있다: (1) 희석제 (예를 들어, 식염수), 완충제, 또는 다른 부형제를 미생물군 샘플에 첨가하여 희석된 샘플을 생성하는 단계; (2) 시험 (예를 들어, 핵산 시퀀싱)을 위해 희석된 미생물군 샘플의 일부를 제거하는 단계; (3) 미생물군 샘플의 나머지 부분을 냉장 또는 동결을 위해 사전-냉각시키는 단계; (4) 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 저장하는 단계, 및/또는 (5) (a), (b), (c), (d), 및/또는 (e)의 임의의 조합의 완료까지 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 유지하는 단계: (a) 전염성 병원체의 존재를 배제하기 위한 공여자의 시험 (예를 들어, 혈액, 질 면봉, 및/또는 소변 샘플 시험), (b) 공여자 샘플 미생물군 (예를 들어, 락토바실러스)의 조성 및 생존능 확인, (c) 공여-후 30-90일 (또는 대안적으로: 10-120일, 또는 30-60일)의 기간 내에 일어나는 복수의 사후-스크리닝 시험에 의한 여성 공여자의 건강의 추가 확인, (d) 정자 세포의 존재에 대한 시험, 및/또는 (e) 샘플의 pH 시험 (예를 들어, 도 14). 단계 (1) 내지 (5) 및 5(a) 내지 5(e) 중 임의의 것은 임의적이며 요망되는 임의의 특정 순서로 순차적으로 또는 병행하여 수행될 수 있다.
하나의 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성 방법은 다음을 포함한다:
A. 공여자 여성 비뇨생식관으로부터 미생물군 샘플을 제공하는 단계이며; 여기서 단계 A는 단계 (1), (2), (3) 중 1, 2, 또는 3개 또는 임의의 이들의 조합, 및 단계 (4) 및 (5) 둘 다를 포함하는 것인 단계:
(1) 희석제를 미생물군 샘플에 첨가하여 희석된 샘플을 생성하는 단계,
(2) 시험 (예를 들어, 핵산 시퀀싱)을 위해 희석된 미생물군 샘플의 일부를 제거하는 단계,
(3) 미생물군 샘플의 나머지 부분을 냉장 또는 동결을 위해 사전-냉각시키는 단계,
(4) 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 저장하는 단계,
(5) (a) 하나 이상의 전염성 병원체의 실질적 존재를 배제하기 위한 공여자의 시험 (예를 들어, 혈액, 및/또는 자궁경부질 분비물, 및/또는 소변 샘플 시험), (b) 미생물군의 조성 및 생존능 확인, 또는 (c) 공여-후 30-90일의 기간 내에 일어나는 복수의 사후-스크리닝 시험에 의한 여성 공여자의 건강의 추가 확인의 임의의 조합의 임의의 완료까지 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 유지하는 단계; 및
B. 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리로부터 해제하여 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 정의하는 단계.
단계 (1)은, 예를 들어, (예를 들어, 샘플의 pH 조정을 위한) 산성화 작용제의 첨가; (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 투여를 보조하기 위한) 샘플의 점도의 조정; 등장성/삼투압의 조정; 및/또는 살정제, 항미생물 작용제, 호르몬 작용제, 항-염증성 작용제, 및 임의로 프리바이오틱스를 포함한, 본원에 기재된 것과 같은 하나 이상의 다른 활성 작용제의 첨가를 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 산성화 작용제는 락트산이다.
단계 (2)를 위해, 미생물군 샘플 (예를 들어, 질액/질 분비물의 샘플)은 바람직하게는 적어도 75 mg 또는 100 mg, 보다 바람직하게는 적어도 150 mg이고, 일부가 핵산 시퀀싱을 위해 제거된다. 미생물군 샘플은 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 또는 300 mg일 수 있다. 추가의 구현예에서, 미생물군 샘플 (예를 들어, 질액/질 분비물의 샘플)은 적어도 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 500 mg, 700 mg, 또는 그 초과이다. 하나의 구현예에서, 미생물군 샘플 (예를 들어, 질액/질 분비물의 샘플)은 적어도 500 mg이다.
시퀀싱을 수행하여 공여자 미생물군 샘플의 미생물 군집을 평가하고 적합한 공여자 여성을 선택한다. 바람직하게는, 핵산 시퀀싱에 의해 공여자 미생물군 샘플에서 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3, 4 또는 5개의 상이한 박테리아 종의 존재가 검출된다. 가장 바람직하게는, 핵산 시퀀싱에 의해 공여자 미생물군 샘플에서 락토바실러스 속으로부터의 하나의 (지배적) 박테리아 종이 검출된다. 일부 구현예에서, 핵산 시퀀싱은 공여자 미생물군 샘플이 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 약 99.5%, 약 99.9%, 80-99.9%, 75%-95%, 85%-95%, 85%-99.9%, 또는 90%-99.9%의, 제제 중의 모든 검출가능한 종 전체 중 하나의 종의 락토바실러스를 포함함을 결정한다. 일부 구현예에서, 핵산 시퀀싱은 공여자 미생물군 샘플이 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99.9%, 약 99.5%, 약 99.9%, 80-99%, 75%-95%, 85%-95%, 85%-99.9%, 또는 90%-99.9%의, 제제 중의 모든 검출가능한 종 전체 중 하나 초과의 종 (예를 들어, 2, 3, 4, 또는 5개 종)의 락토바실러스를 포함함을 결정한다. 바람직하게는, 핵산 시퀀싱은 공여자 미생물군 샘플이 a) 락토바실러스 크리스파투스; (b) 락토바실러스 이너스; (c) 락토바실러스 젠세니이; (d) 락토바실러스 가세리, 또는 임의의 이들의 조합 (2, 3, 또는 모든 4개 종의 조합 포함)으로부터 선택된 락토바실러스의 종을 포함함을 결정한다.
임의로, 예를 들어, 공여자 샘플이 병원체 및 병원균을 실질적으로 갖지 않음을 결정하기 위해, 핵산 시퀀싱을 수행하여 공여자 샘플에서의 임의의 병원체 또는 병원균을 식별한다. 예를 들어, 핵산 시퀀싱을 수행하여 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및/또는 프레보텔라 종 중 하나 이상의 존재를 검출한다. 일부 구현예에서는, 핵산 시퀀싱을 수행하여 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 프레보텔라 종, 및/또는 파니헤세아 바지나에 중 하나 이상의 존재를 검출한다. 일부 구현예에서는, 핵산 시퀀싱을 수행하여 가르드네렐라 바지날리스, 박테로이데스, 모빌룬쿠스 종, 스네아티아(Sneathia) 종, 및 미코플라스마 호미니스 중 하나 이상의 존재를 검출한다. 일부 구현예에서는, 핵산 시퀀싱을 수행하여 에스케리키아, 엔테로콕쿠스, 슈도모나스, 프로테우스, 클레브시엘라, 스트렙토콕쿠스, 스타필로콕쿠스, 가르드네렐라, 우레아플라스마, 박테로이데스, 펩토콕쿠스, 네이세리아, 세라티아, 코리네박테리움, 클로스트리디움, 및 칸디다 중 하나 이상의 존재를 검출한다. 이들 종 중 임의의 하나 이상의 존재는 원치 않는 종에 의한 건강한 질 락트산 생성 박테리아의 대체를 시사하며, 이는 질 장내미생물불균형의 존재를 나타낸다. 약 1%, 3%, 5%, 8%, 10% 초과 또는 약 15% 초과의 하나 이상의 원치 않는 종에 속하는 종을 함유하는 공여자 샘플은 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성을 위한 추가의 프로세싱에 사용되지 않는다. 하나의 구현예에서, 약 5% 초과의 하나 이상의 원치 않는 종에 속하는 종 (예를 들어, 이는 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및/또는 프레보텔라 종임)을 함유하는 공여자 샘플은 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성을 위한 추가의 프로세싱에 사용되지 않는다.
임의로, 예를 들어, 공여자 샘플이 항미생물 내성 (AMR) 유전자를 실질적으로 갖지 않음을 결정하기 위해, 핵산 시퀀싱을 수행하여 공여자 샘플 중의 임의의 항미생물 내성 (AMR) 유전자의 존재를 식별한다. 항미생물 내성 (AMR) 유전자는, 예를 들어, 아미노글리코시드, 베타-락탐, 테트라사이클린, 및 술폰아미드를 포함한 하나 이상의 항생제에 대한 내성을 부여하는 유전자를 포함한다 (예를 들어, NCBI 국립 항생제 내성 유기체 데이터베이스 (NDARO)에 기재되고 분류됨). 항생제의 광범위한 사용으로 인해 컷-오프가 0이 아님이 인식될 것이다. AMR 유전자의 존재에 대해 일부 합리적인 허용이 이루어진다. 정확한 컷-오프는, 예를 들어, AMR 유전자의 성질 (예를 들어, 건강 문제 정도) 및 공중 보건 권장 사항을 기반으로 하여, 당업자에 의해 결정될 수 있다.
대안적으로, 또는 추가로, 공여자 샘플이 그램-음성 독소 (예를 들어, 내독소 또는 지질다당류 (LPS) 및 다른 분비 외독소 및 장독소), 병원성 인자/ 박테리아 독성 인자, 및/또는 콜로니화 인자 (예를 들어, 운동성, 부착성, 침입성 등) 중 하나 이상을 실질적으로 갖지 않음을 결정하기 위해 시험이 수행된다.
임의로, 예를 들어, 공여자 샘플이 인간 정자 (스퍼마토조아)를 실질적으로 갖지 않음을 결정하기 위해, 공여자 샘플 중의 임의의 인간 정자 (스퍼마토조아)의 존재를 식별하기 위해 시험이 수행된다 (예를 들어, 현미경검사에 의해).
단계 (3)은, 요망되는 저장, 격리 및 투여를 위한 사용 기간에 따라, 후속 냉장 (예를 들어, 4℃에서) 또는 동결 (예를 들어, -18℃ 또는 -80℃)을 위한 사전-냉각을 포함할 수 있다. 이 단계는 또한, 예를 들어, 용이한 저장, 포장, 제형화 및 수송을 위해, 냉동-건조 (동결건조)를 포함할 수 있다. 또한, 이 단계는, 예를 들어, 냉장, 동결, 또는 냉동-건조시, 임의로 생존능 시험을 포함할 수 있다 (예를 들어, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된 락토바실러스의 생존능).
단계 (4) 및 (5)는 냉장, 동결 또는 냉동-건조된 미생물군 샘플을 격리 하에 저장하고, 공여자 미생물군 샘플 및/또는 샘플 공여자에 대해 수행된 다수의 시험 완료까지 저장된 미생물군 샘플을 유지하는 것을 포함한다. 샘플 및/또는 공여자가 하나 이상의 미리 정해진 시험 (샘플 품질 및/또는 여성 공여자 건강 시험)에서 합격함에 따라, 격리가 해제되고, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 또는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)로서의 사용을 위해, 예를 들어, 수용자 여성에 대한 투여를 위해, 샘플이 방출된다. 이는 하기 중 하나 이상을 포함한다: (a) 전염성 병원체의 존재를 배제하기 위한 공여자의 시험 (예를 들어, 혈액, 질 면봉, 및/또는 소변 샘플 시험), (b) 공여자 샘플 미생물군 (예를 들어, 락토바실러스)의 조성 및 생존능 확인, 및/또는 (c) 공여-후 30-90일 (또는 대안적으로: 10-120일, 또는 30-60일)의 기간 내에 일어나는 복수의 사후-스크리닝 시험에 의한 여성 공여자의 건강의 추가 확인.
전염성 (또한 잠재적으로 감염성) 병원체의 존재를 배제하기 위한 단계 5 시험 (예를 들어, 혈액, 질 면봉, 및/또는 소변 샘플 시험)은 여성 공여자가 하기 중 임의의 하나 이상 (2개 이상, 3개 이상, 또는 4개 이상)을 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함할 수 있다: (i) 박테리아 질염과 관련된 박테리아 (예를 들어, 가르드네렐라 및 모빌룬쿠스), (ii) 효모 (예를 들어, 칸디다, 크림토콕쿠스, 및 사카로미세스 종), (iii) 성 전염 병원체 (네이세리아 고노레아, 클라미디아 트라코마티스, 및 트리코모나스 바지날리스 포함), (iv) 요로 감염과 관련된 박테리아 (예를 들어, 대장균, 스타필로콕쿠스, 클라미디아, 및 미코플라스마), 및 (v) 바이러스 (예를 들어, HIV, 인간 유두종 바이러스 (HPV), B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, HSV-2).
단계 5 시험은, 여성 공여자가 클라미디아, 연성하감, 크랩 (사면발이), 생식기 포진, 생식기 사마귀, B형 간염, 인간 면역결핍 바이러스/후천성 면역결핍 증후군, 인간 유두종 바이러스, 트리코모나스증, 전염성 연속종, 골반 염증성 질환, 매독, 임질 및 효모 감염을 포함한 임의의 하나 이상의 성 전염 감염 또는 질환 (STI, STD)을 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함할 수 있다.
단계 5 시험은, 예를 들어, 박테리아 질염 (BV) 및 박테리아 감염에 대한 하나 이상의 확립된 시험에 의해, 여성 공여자가 질관에서 장내미생물불균형을 나타내지 않음을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 이러한 시험은 다음을 포함한다: 암셀 기준(Amsel Criteria), 뉴젠트 그램(Nugent Gram)-염색 스코어링 시스템, 및 헤이-아이슨 기준(Hay-Ison Criteria). 대안적으로, 다른 방법을 사용하여, 예를 들어, 비브이 블루(BV Blue) 시험 또는 어펌 미생물 식별 시험(Affirm Microbial Identification Test)을 사용하여 장내미생물불균형의 부재를 결정할 수 있다.
암셀 기준은 하기 4개의 증상 중 3개의 존재를 포함한다: (a) 얇고 균질한 악취 배출물; (b) 질 pH 액 >4.5; (c) 10% KOH 첨가시 질액으로부터 아민 냄새; 및 (d) "단서" 세포 (세포 경계를 가리는 부착성 박테리아를 갖는 질 상피 세포)의 존재 (Amsel 등, Am. J. Med. 74:14-22 (1983)).
뉴젠트 그램-염색 스코어링 시스템은 3개 형태형(morphotype)의 박테리아의 상대적 풍부도에 대한 통상적으로 준비된 그램 염색의 평가, 또한 이어서 하기 양을 기반으로 하는 소위 뉴젠트 스코어의 계산을 포함한다: 큰 그램 양성 막대 (락토바실러스 형태형; 락토바실러스 감소가 0 내지 4로 스코어링됨), 작은 그램-음성 및 가변성 막대 (박테로이데스 및 가르드네렐라 형태형; 0 내지 4로 스코어링됨), 및 곡선형 그램-가변성 막대 (모빌룬쿠스 종 형태형; 0 내지 2로 스코어링됨). 뉴젠트 스코어는 0 내지 10의 범위일 수 있으며, 여기서 0-3의 스코어는 정상 (비-BV), 4-6은 중간, 7-10은 BV에 대해 양성으로 간주된다.
헤이-아이슨 기준 (대안적으로 아이슨-헤이 스코어링 시스템)은 세균총의 하기 5개 등급을 제안한다: a) 등급 0, 박테리아가 없는 상피 세포; b) 등급 I, 정상 질 세균총 (락토바실러스 형태형 단독); c) 등급 II, 혼합 박테리아 세균총을 갖는 감소된 수의 락토바실러스 형태형; d) 등급 III, 단지 혼합 박테리아 세균총, 락토바실러스 형태형이 거의 없거나 없음; e) 등급 IV, 단지 그램 양성 구균.
등급 0, I, 및 IV는 BV가 없는 여성에서 나타난다. 등급 II는 중간이며 암셀 기준에 의해 정의시 BV를 갖는 여성에서 나타난다. 등급 III은 암셀 기준에 의해 진단된 BV와 일치한다. 등급 III 세균총은 BV를 나타낸다 (C.A. Ison and P.E. Hay, Sex Transm. Infect. 2002 Dec;78(6):413-5).
비브이 블루 시험 (Gryphus diagnostics)은 BV 관련 박테리아, 예컨대 가르드네렐라 바지날리스, 박테로이데스 종, 프레보텔라 종, 및 모빌룬쿠스 종에 의해 생성된 효소인 시알리다제 활성을 검출한다. 질액 샘플을 시알리다제에 대한 발색 기질을 함유하는 시험 용기에 배치한다. 인큐베이션 후, 현상액을 첨가하고, 샘플이 높은 수준의 시알리다제를 함유한 경우, 청색 또는 녹색이 나타난다. 시알리다제를 함유하지 않은, 또는 낮은 수준의 이 효소를 함유하는 샘플은 반응에서 황색을 생성할 것이다.
어펌 미생물 식별 시험 (Beckton Dickinson)은 3개 유형의 질염 관련 유기체: 칸디다 종, 지. 바지날리스(G.vaginalis) 및 티. 바지날리스(T.vaginalis)의 상이한 검출 및 식별을 위한 DNA 프로브-기반 진단 시험이다.
일부 구현예에서, 공여자 여성은 규칙적인 주기적 월경 주기를 갖는 18세 이상 연령의 일반적으로 건강한, 폐경기 이전 여성으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 공여자 여성은 일반적으로 건강한, 폐경기 이후 여성으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 공여자 여성은 폐경기 이전 및 폐경기 이후 둘 다의 여성으로부터 선택된다. 공여자는 경구 피임약, 호르몬 피임약, 호르몬 자궁내 장치를 가질 수 있거나 피임약을 복용하지 않을 수 있다. 공여자는 질 증상, 예컨대 냄새, 배출물, 또는 가려움증을 실질적으로 갖지 않는다. 임의로, 공여자는, 샘플 공여 기간 동안, 예를 들어, 초기 공여자 스크리닝으로부터 최종 공여까지, a-e) 중 하나 이상 (또는 이들 모두)을 사용하거나 수행하지 않는다: a) 삽입되는 질 여성용 제품, 예를 들어 탐폰, 월경컵, 섹스 토이의 사용, 그러나 생리대는 허용됨; b) 예를 들어, 세정 제품, 살정제, 윤활제, 위생 파우더 및 스프레이와 같은 다른 질 제품의 사용; c) 질 및 항문 성교; d) 목욕하기, 수영하기, 온수 욕조에 앉기; 및/또는 e) 끈 팬티 착용.
공여자는, 이들이 하기 중 하나 이상을 나타내는 경우 배제될 수 있다 (예를 들어, 개별 최대 임계값이 설정될 수 있는 바이러스, 진균, 및 박테리아 병원체 및/또는 병원균 로드와 관련하여, 미리 결정된 임계값의 세트를 초과하는, 예를 들어, 0 초과의 시험, 예컨대 이를 실질적으로 갖지 않음): (a) 하기 중 하나 이상의 건강 이력: 박테리아 질염, 재발성 효모 감염, 트리코모나스증, 매독, 생식기 사마귀를 포함한 인간 유두종 바이러스 (HPV), 높은 등급의 파프 스미어(pap smear), 헤르페스, 골반 염증성 질환, 재발성 요로 감염, 및 미코플라스마, 또는 임의의 이들의 조합; (b) 하기 중 하나 이상에 대한 양성 시험: HIV, A/B/C형 간염, 매독, 인간 T-림프영양 바이러스 (HTLV)-I/II, WNV, 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스 (EBV), 풍진, 톡소플라즈마 곤디이, 단순 헤르페스 바이러스 (HSV)-1/2, , 클라미디아, 고노레아, 미코플라스마 제니탈리움, 트리코모나스 바지날리스, HPV, 및 병원성/비정상적으로 고려되고/거나 항생제 내성을 나타내는 다른 효모 또는 박테리아, 또는 임의의 이들의 조합, (c) 예를 들어, qPCR에 의해 결정시, 통상적인 질 락토바실러스 종 중 하나가 지배적이지 않은 질액/자궁경부질 분비물; 및/또는 (d) 고노레아 또는 클라미디아의 이력 (예를 들어, 스크리닝 전 12개월 이내), 또는 (a), (b), (c) 및 (d)의 임의의 조합.
또한, 공여자는, 이들이 하기 중 하나 이상을 나타내는 경우 배제될 수 있다: 자궁절제술, 자궁내 장치 삽입 또는 제거, 자궁경부 냉동요법, 또는 자궁경부 레이저 치료 (예를 들어, 스크리닝 전 2개월 이내), 전신 항생제의 규칙적인 주기적 사용을 필요로 하는 임의의 병태, 장기간-작용 호르몬 치료의 사용, 약물 또는 알콜 남용 병력을 포함한 사회적, 의학적, 또는 정신과적 병태, 폐경 (예를 들어, 다른 알려진 원인 없이 연속 12개월 초과의 무월경으로서 정의됨), 불규칙한 월경 주기, 다른 의약의 사용, 또는 이들의 조합. 바람직하게는, 공여자는 현재 임신 중이거나 모유 수유 중이 아니다.
요망되는 경우, 시토메갈로바이러스 (CMV), 풍진, 및 수두 대상포진(Varicella Zoster) 바이러스 (VZV) IgG, 또는 임의의 이들의 조합 중 하나 이상을 나타내는 공여자는, 단지 CMV 양성 및/또는 풍진 및/또는 VZV 양성 수용자와 매칭되거나, 배제될 수 있다.
투여 방법
본 발명의 측면은 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 인간 여성 대상체에 대한 질 투여 방법을 포함한다. 방법은 투여용 장치의 사용을 포함할 수 있고, 예를 들어, 이들 방법은 통상적으로 의료 제공자에 의해 (예를 들어, 진료소에서) 수행된다. 예를 들어, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은 동결되어, 예를 들어, 저온-바이알 내에서 제공되고, 이어서 해동되고 37℃로 사전-가열되고, 이어서 의료서비스 제공자에 의해 시린지/어플리케이터로 분배되고, 이어서 수용자에게 투여된다. 대안적으로, 방법은, 예를 들어, 좌약, 정제, 캡슐, 필름, 크림 등과 같은 본원에 기재된 대안적 투여 형태의 사용을 포함한다. 방법은, 요망되는 경우, 수용자 스스로에 의해, 예를 들어, 자가-투여에 의해 (예를 들어, 가정에서) 수행될 수 있다. 방법은 또한, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 또는 조성물의 제공에 추가로 다른 의료 관련 활동, 예컨대 건강 문제 진단 및 관리 표준 제공을 포함할 수 있다. 활동은 본원에 제공된 하나 이상의 조합 요법을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 투여 방법은 항미생물 작용제, 항진균 작용제, 항박테리아 작용제, 항바이러스 작용제, 항생제, 항기생충 작용제 (예를 들어, 트리코모나스 바지날리스에 대한 활성을 가짐), 항-염증성 작용제 등의 투여를 추가로 포함할 수 있다.
투여가 장치를 사용하여 수행되는 구현예에서, 장치는 전형적으로 질강으로의 삽입을 위한 개방 단부 (예를 들어, 팁), 및 개방 단부를 통해 조성물을 배출하기 위한 분배 단부 (예를 들어, 플런저 또는 피스톤)를 포함한다. 투여 단계는 다음을 포함한다: a) 개방 단부를 질강에 도입하는 단계, b) 조성물을 질강 내로 배출하는 단계, c) 장치를 질강으로부터 제거하는 단계 (요망되는 용량 투여 후). 투여는 바람직하게는 수용체를 쇄석술 자세에 두고, 예를 들어, 여성 수용자를 쇄석술 자세에 두고 수행된다. 일부 구현예에서, 수용자는, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 또는 조성물에 질강에서의 충분한 체류 시간, 예를 들어, 질의 점막 또는 자궁내막 표면과의 충분한 접촉 시간을 허용하기 위해 직립 자세로 돌아가기 전에 쇄석술 자세에서 적어도 5분, 적어도 10분, 적어도 20분, 적어도 30분 동안 유지되어야 한다. 일부 구현예에서, 투여는 질강 내 높은 영역, 예를 들어 질 원개(vaginal fornix) 근처를 표적화하여 수행된다.
요망되는 경우, 투여 시기 결정시 수용자 여성의 월경 주기가 고려된다. 예를 들어, 월경 배출 동안에는 절차를 피할 수 있다. 일부 구현예에서는, 예를 들어, 배란 전 및 월경 배출 전을 포함하는 시간 윈도우 동안을 포함한, 월경 배출 동안 이외의 시간이 투여를 수행하기에 바람직하다.
일부 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된 박테리아 (예를 들어, 락토바실러스)가 수용자 여성의 질 내에서 콜로니화하고 확립 (생착)되기 위한 최적의 조건을 제공하기 위한 절차의 정확한 단계, 시기, 및 길이는 수용자마다 다르다 (또한, 예를 들어 의료서비스 제공자에 의해 결정됨).
치료 방법 및 수용자 고려사항
적합한 여성 수용자는 질 미생물군의 장내미생물불균형을 나타내는 여성 및 장내미생물불균형, 예컨대 감염 (예를 들어, 병원체로의), 및/또는 (만성) 염증과 관련된 장내미생물불균형의 치료를 필요로 하는 여성을 포함한다.
본 발명의 측면은 여성 비뇨생식관에서 건강한 인간 질 미생물군 균형을 복원하는 방법에 관한 것이다. 방법은, 인간 질 또는 질 상피를 콜로니화하거나 그에 서식할 수 있는, 또한 병원성 미생물의 성장을 억제하고 전-염증성 (예를 들어, 항-염증성)이 아닌 미생물 틈새를 제공하는 미생물 종의 군집을 제공할 목적으로, 질 미생물군 균형의 복원을 필요로 하는 여성 대상체에게 유효량의, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 방법은 건강한 질 미생물군 또는 건강한 질 미생물군 균형을 유지할 목적으로, 질 미생물군 균형을 필요로 하는 여성 대상체에게 유효량의, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
하나의 측면에서, 본 발명은, 대상체에게 유효량의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 제약 조성물은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하고,
여기서 (i) 제제는
(i) 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 > 80-99.9%를 구성하는, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고;
(ii) <5%의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하며; 여기서 제약 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 것인, 여성 대상체가 비뇨생식관에서 장내미생물불균형 미생물군을 나타내는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 염증 치료에 사용하기 위한 제약 조성물을 제공한다.
염증 및 염증과 관련된 장애, 병태 또는 질환은 상호교환가능하게 사용되고, 급성 및 만성 염증을 포함한다. 장내미생물불균형 질 미생물군은 염증과 관련될 수 있다.
대상체는 무증상 대상체일 수 있으며, 여기서 무증상 대상체는 암셀의 기준, 뉴젠트 스코어 또는 박테리아 질염 (BV)과 관련된 증상의 다른 측정을 갖지 않는 것을 특징으로 한다. 하나의 측면에서, 수용자는 무증상, 장내미생물불균형 여성이다.
질 세척
장내미생물불균형 수용자의 질강 내 병원체의 양을 감소시키기 위해, 일부 구현예에서, 제약 조성물의 투여 전에, 질강을 헹구고, 예를 들어 질 세척을 수행한다.
질 세척은 세척액에 사전-침지된 흡수 물질로 수행될 수 있다. 하나의 구현예에서, 흡수성 물질은 거즈이다. 일부 구현예에서는, 탐폰-형상의 거즈가 사용될 수 있다. 세척은 전형적으로, 부인과 의사와 같은 의료 전문가에 의해 수행되며, 여기서 수용자는 쇄석술 자세에 있고 사전-침지된 흡수성 물질은 질 상피의 표면을 세척하기 위해 펜치와 함께 사용된다. 질 세척을 수행한 후, 과량의 세척액은 건조 흡수성 물질, 예를 들어, 탐폰-형상의 건조 거즈에 의해 흡수될 수 있다.
질 세척은, 식염수, 방부제, 또는 락트산을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 질강 내 병원체의 양을 감소시키기에 적합한 임의의 용액으로 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 질 세척은 식염수 질 세척, 락트산 세척, 또는 방부제 용액으로의 세척을 포함한다. 적합한 방부제 용액은 클로로헥시딘 및 포비돈-아이오딘을 포함한다. 특정 구현예에서, 질 세척은 식염수로 수행된다. 또 다른 특정 구현예, 질 세척은 락트산으로 수행되며, 임의로 여기서 락트산은 약 3.5 - 4.5의 pH를 갖는다. 특정 구현예에서, 질 세척은 약 3.8-4.3 또는 3.8 내지 약 4.0의 pH를 갖는 락트산으로 수행된다. 추가의 특정 구현예에서, 질 세척은 방부제 용액으로 수행되며, 임의로 여기서 방부제 용액은 클로로헥시딘 또는 포비돈-아이오딘이다. 특정 구현예에서, 질 세척은 포비돈-아이오딘으로 수행되며, 여기서 용액은 약 10% 포비돈-아이오딘을 포함한다. 특정 구현예에서, 질 세척은 클로르헥시딘으로 수행되며, 여기서 용액은 약 0.5% 클로르헥시딘을 포함한다.
질 미생물군의 항상성
건강한 인간 질 미생물군 균형은, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 투여 후 측정시, 질 락토바실러스 (예를 들어, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된 락토바실러스)의 각각의 종의 상대적 수 또는 합계가 항상성 상태에 있는, 선택된 다양한 미생물 종 (하나 이상의 락토바실러스 종 포함)의 확립 (예를 들어, 생착 포함)을 포함한다. 항상성은, 일반적으로, 집단 내의 각각의 종의 상대적 풍부도가 주어진 기간에 걸쳐, 예를 들어 적어도 1일, 3일, 5일, 7일, 10일, 14일, 21일, 30일, 60일, 90일, 6개월, 또는 적어도 12개월 동안, 또는 예들 들어, 가임기 여성에서 여러 (1, 2, 3, 4, 5, 6개) 월경 주기에 걸쳐 실질적으로 달라지지 않는 상태이다. 항상성은, 예를 들어, 메타게놈 시퀀싱, 예컨대 MLST 및 MLVA, 16S 시퀀싱 및/또는 qPCR에 의해 측정될 수 있다. 요망되는 경우, 예를 들어, 건강한 박테리아의 콜로니 형성 단위의 지속성을 측정하기 위해, CFU 수를 얻을 수 있다.
항상성 상태에 있는 건강한 인간 질 미생물군 균형 (바람직하게는 락토바실러스가 풍부, 예를 들어, 적어도 50%, 60%, 70% 또는 적어도 80%의, 예를 들어, 엘. 크리스파투스, 엘. 이너스, 엘. 가세리 및 엘. 젠세니이 중 하나 이상으로부터 선택된 락토바실러스)은, 예를 들어, 질 병원체 (비-병원성)에 의해 유발된 섭동에 대한 내성을 부여하고/거나 항-염증 환경을 제공하고, 일정 기간 동안 안정적이다. 그러나, 건강한 질 미생물군은 모든 병원체의 완전한 부재를 필요로 하지는 않는다. 많은 건강한 여성은 그의 미생물 군 중에 존재하는 낮은 수준의 효모 및/또는 병원균을 갖는다.
일부 구현예에서, 여성 비뇨생식관에서 건강한 인간 질 미생물군 균형을 복원하는 방법은 비뇨생식관에서 비-전-염증성 또는 항-염증성 환경을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은, (예를 들어, 치료를 위한) 투여시 비뇨생식관에 항-염증성 활성을 제공한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은, (예를 들어, 치료를 위한) 투여시 대상체 또는 수용자에서 국소 또는 전신 염증성 또는 면역 반응을 유발하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은, (예를 들어, 치료를 위한) 투여시 대상체 또는 수용자에서 국소 또는 전신 항-염증 또는 면역 반응을 촉진한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물은, (예를 들어, 치료를 위한) 투여시, 비뇨생식관의 질 상피 세포에서 항-염증성 및 전-염증성 매개체의 균형의 유지를 제공한다.
염증 마커
본원에 기재된 방법에 의해 조절될 수 있는 전-염증성 시토카인은, 예를 들어, IL-1β, IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17, IL-23, 및 TNF-α를 포함한다. 하나의 구현예에서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여는 염증 마커의 수준을 감소 또는 안정화시키는 효과가 있으며, 여기서 마커는 IL-1a, IFN-γ, IL-18, IL-12, 및 MMP-10 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-염증 마커는 본 발명의 제제의 투여 후에 증가한다.
본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된 락토바실러스의 투여 및 생착시 항-염증성 및 전-염증성 매개체는 적합한 상업적으로 입수가능한 바이오마커 패널을 사용하여 측정될 수 있다 (예를 들어, 질 샘플 (예를 들어, 질액/분비물) 또는 전신 샘플, (예를 들어, 혈액) 수집).
여성 비뇨생식관의 (만성) 염증의 치료 방법이 본원에 제공된다. 방법은 치료를 필요로 하는 여성 대상체에게 유효량의, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 방법에 의해 치료되는 대상체는 다수의 불리한 건강 결과, 예컨대 요로 감염 (UTI)을 초래할 수 있는 염증 (일부 경우에는 만성 염증)을 나타내는 여성을 포함한다.
장내미생물불균형
여성 비뇨생식관의 장내미생물불균형의 치료 방법이 본원에 제공된다. 방법은 치료를 필요로 하는 여성 대상체에게 치료 유효량의, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 방법에 의해 치료되는 대상체는, 장내미생물불균형, 염증, 및/또는 감염을 일으키는 병원성 미생물 및 병원균의 과성장을 초래할 수 있는 질 미생물군의 불균형을 나타내는 여성을 포함한다. 방법은 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물로의 박테리아 질염, 질 칸디다증 및 트리코모나스증 및 이들의 조합과 같은 질 감염 (질염)의 치료를 포함한다.
질 장내미생물불균형은 여성 성인 대상체의 약 30-40%에서 나타나는 널리 퍼져 있는 병태이다. 일부 구현예에서, 장내미생물불균형 여성 대상체는 임의의 증상을 나타내지 않는다 (무증상). 다른 구현예에서, 장내미생물불균형 여성 대상체는 암셀의 기준, 뉴젠트 스코어 기준 또는 헤이-아이슨 기준에 의해 특징화되는 질 증상을 앓고 있다.
박테리아 질염 (BV)은 가장 통상적인 질 감염이고 임신 동안 합병증 뿐만 아니라 성 전염 질환의 증가된 위험과 관련된다. 이는 자연 발생 세균총의 불균형으로 인해 유발되며, 여기서 락토바실러스는 혐기성 박테리아의 혼합된 세균총에 의해 과성장된다. 다른 진단 기준 중, 4.5 초과의 pH는 박테리아 질염을 시사하는 것으로 생각된다. BV는 암셀 기준, 뉴젠트 스코어, 헤이-아이슨 기준, 또는 또 다른 적합한 진단 방법에 의해 진단될 수 있다. 현재의 치료 옵션은 메트로니다졸 및 클린다마이신 등의 전통적인 항생제의 경구 또는 질 투여에 의존하지만, 최초 노출 후 3개월 이내에 50% 초과의 높은 재발률이 있다. 대안적 치료 옵션은 락트산 또는 아세테이트와 같은 자연 발생 산으로의 질의 산성화를 포함한다.
하나의 구현예에서, BV의 하나 이상의 진단 징후를 나타내는 여성 대상체는 유효량의, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물로 치료된다. 하나의 구현예에서, 유효량의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 투여를 포함하는 치료는, BV에 대한 관리 표준 치료의 제공을 포함한, (본원에 기재된 바와 같은) 조합 요법, 예를 들어, 여성 대상체에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 투여 전의, 그와 동시의, 또는 그 후의 메트로니다졸 및 클린다마이신 등의 항생제 투여 및/또는 예를 들어, 락트산 또는 아세테이트 등의 산성화 작용제로의 질 산성화를 추가로 포함한다.
질 칸디다증은 임의의 칸디다 종 (효모)의 진균 감염이며, 그 중 칸디다 알비칸스가 가장 통상적이다. 대부분의 칸디다 감염은 치료가능하며 단지 최소의 합병증, 예컨대 발적 또는 가려움증을 초래한다. 그러나, 합병증은 면역-손상 환자와 같은 특정 집단에서는 치료되지 않고 방치되는 경우 심각하거나 심지어 치명적일 수도 있다. 세제의 외부 사용 또는 내부 교란 (호르몬 또는 생리학적)은 정상적인 질 세균총을 교란시키고 칸디다 세포의 과성장을 초래하여 감염을 유발할 수 있다. 임신 및 경구 피임약의 사용도 위험 인자로서 보고되었다. 임상 셋팅에서, 칸디다증은 통상적으로 항진균제, 예컨대 클로트리마졸, 니스타틴, 플루코나졸 및 케토코나졸로 치료된다. 그러나, 예를 들어 씨. 알비칸스 등의 특정 효모는 상기 항진균 약물에 대한 내성을 나타낼 수 있다.
하나의 구현예에서, 칸디다증의 하나 이상의 진단 징후를 나타내는 여성 대상체는 유효량의, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물로 치료된다. 하나의 구현예에서, 유효량의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 투여를 포함하는 치료는, 칸디다증에 대한 관리 표준 치료의 제공을 포함한, (본원에 기재된 바와 같은) 조합 요법, 예를 들어, 여성 대상체에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 투여 전의, 그와 동시의, 또는 그 후의, 예를 들어, 클로트리마졸, 니스타틴, 플루코나졸 및/또는 케토코나졸 등의 항진균제 투여를 추가로 포함한다.
트리코모나스증은 성 전염 비뇨생식관의 질환이고, 기생충 트리코모나스 바지날리스에 의해 유발된다. 증상은 자궁경부, 요도 및 질의 염증을 포함하고, 이는 가려움증 및 화끈거림을 생성한다. 치료 옵션은 항생제/항-원충제 (예를 들어, 메트로니다졸) 또는 항-기생충제 (예를 들어, 티니다졸) 약물의 사용을 포함한다. 그러나, 대부분의 항-미생물 약물에서과 같이, 내성이 나타날 수 있다.
하나의 구현예에서, 트리코모나스증의 하나 이상의 진단 징후를 나타내는 여성 대상체는 유효량의, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물로 치료된다. 하나의 구현예에서, 유효량의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 투여를 포함하는 치료는, 트리코모나스증에 대한 관리 표준 치료의 제공을 포함한, (본원에 기재된 바와 같은) 조합 요법, 예를 들어, 여성 대상체에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 투여 전의, 그와 동시의, 또는 그 후의, 예를 들어, 항생제/항-원충제 (예를 들어, 메트로니다졸) 또는 항-기생충제 (예를 들어, 티니다졸) 등의 항진균제 투여를 추가로 포함한다.
정의
하기 정의는 본원에 개시된 모든 측면에 적용된다. 예를 들어, 용어 "실질적으로 완전한 질 미생물군 제제"는, 질 전달 시스템에 관한 제1 측면과 관련하여 사용될 때, 또는 제약 조성물에 관한 제2 측면과 관련하여 사용될 때, 또는 본원에 개시된 임의의 다른 측면과 관련하여 사용될 때 동일한 의미를 갖는다.
일반적
달리 설명되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖다. 또한, 본원에 기재된 것들과 유사한 또는 등가인 방법 및 물질이 본 개시내용의 실행 또는 시험에서 사용될 수 있음이 이해되어야 한다. 물질, 방법, 및 예는 단지 예시적이며 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 개시내용의 다른 특징은 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백하다.
단수형 용어 "a", "an", 및 "the"는 문맥상 달리 명백히 나타내지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다. 유사하게, 용어 "또는"은 문맥상 달리 명백히 나타내지 않는 한 "및"을 포함하도로 의도된다. 용어 "포함하다(comprises)"는 "포함하다(includes)"를 의미한다. 약어 "e.g."는 라틴어 exempli gratia로부터 유래되며, 본원에서 비-제한적 예를 나타내기 위해 사용된다. 따라서, 약어 "e.g."는 용어 "예를 들어"와 동의어이다. 용어 "임의적" 또는 "임의로"는 후속되는 기재 사건, 상황 또는 대체가 일어나거나 일어나지 않을 수 있음을, 또한 기재가 사건 또는 상황이 일어나는 경우 및 그렇지 않은 경우를 포함함을 의미한다.
달리 나타내지 않는 한, 명세서 또는 청구범위에서 사용된 성분의 양, 시간 등을 표현하는 모든 수치는 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 달리 암시적으로 또는 명시적으로 나타내지 않는 한, 또는 문맥상 보다 명확한 구성을 갖도록 당업자에 의해 달리 적절하게 이해되지 않는 한, 기재된 수치 파라미터는 추구하는 요망되는 특성 및/또는 당업자에게 공지된 바와 같은 표준 시험 조건/방법 하에서의 검출 한계에 따라 달라질 수 있는 근사치이다.
바람직한 구현예에서, 용어 "약"은 표시된 수치 값으로부터 ± 10%, 또한 더욱 더 바람직하게는 ± 5%의 편차를 허용한다.
용어 "포함하는"은 동시에 또한 바람직한 옵션으로서 용어 "이루어진"을 개시하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 조성물이 3개 성분을 포함한다고 언급되는 경우, 이는 또한 바람직한 구현예로서 이들 3개 성분으로 이루어진 조성물을 개시한다.
용어 "포함하는"이 제약 활성 화합물(들), 박테리아(들) 등을 언급할 때 사용되는 경우, 이는 또한 동시에 그 제약 활성 화합물(들), 박테리아(들) 등이 바람직하게는 유일한 제약 활성 화합물(들), 박테리아(들) 등임을 개시하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 공여자 샘플이 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 이너스를 포함한다고 언급되는 경우, 이는 동시에, 또한 바람직하게는 공여자 샘플이 유일한 박테리아로서 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 이너스를 포함함을 개시한다. 공여자 샘플이 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 및 부형제를 포함한다고 언급되는 경우, 이는 그에 따라 동시에, 또한 바람직하게는 공여자 샘플이 유일한 박테리아로서 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 이너스를 포함하고 추가로 부형제를 포함함을 개시한다. 이는 또한, 공여자 샘플이 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 및 부형제로 이루어짐을 개시한다.
식별된 모든 특허, 특허 출원, 및 공개물은, 예를 들어, 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 이러한 공개물에 기재된 방법론을 설명하고 개시할 목적으로 명시적으로 본원에 참조로 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이 "비뇨생식관(genitourinary tract 또는 urogenital tract)"은 본원에서 사용되는 바와 같이 자궁, 나팔관, 난소, 질, 자궁경부, 외음부, 및 요로를 포함한다. 일부 경우에, "질관(vaginal tract)", "질강(vaginal cavity)" 또는 "질(vagina)"을 구체적으로 언급하는 교시 및 예시가 본원에서 사용된다. 당업자는 이들 예시 및 교시가 단지 예시적이며 비-제한적이므로, 적절한 경우, 질 뿐만 아니라 비뇨생식관의 다른 해부학적 부위에도 적용됨을 인식할 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같이 "장내미생물불균형(dysbiosis)"은 정상적으로 지배적인 종이 풍부도에 있어 감소하고 덜 지배적인 종이 더욱 풍부하게 및/또는 지배적이 되는 미생물 불균형을 의미한다. 질 장내미생물불균형은 질 내 미생물 불균형, 즉 건강한 상태의 이상이다. 장내미생물불균형은 일반적으로 하기 중 하나 이상과 관련된다: (a) 미생물군 자체의 함량 또는 양의 질적 및 양적 변화, (b) 대사 활성의 변화; 및/또는 (c) 그의 국소 분포의 변화. 장내미생물불균형 인간 질 미생물군 균형은 질 조직의 염증을 촉진하고/거나 하나 이상의 병원성 미생물의 콜로니화 또는 성장을 허용하거나 촉진하는 환경에 기여하거나 이를 확립하는 질 미생물의 집단을 지칭한다. 장내미생물불균형은 또한 질 항상성의 섭동을 지칭한다. 일부 구현예에서, 장내미생물불균형 질 미생물군은 일반적으로 건강한 미생물군에 비해 pH 증가, 예를 들어, 4.5 초과의 pH, 예를 들어, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0 이상의 pH를 초래한다. 일부 구현예에서, 질 장내미생물불균형은 락토바실러스 종의 감소, 및 질 혐기성 박테리아의 증가된 다양성을 특징으로 한다. 질 장내미생물불균형은 상부 생식관 감염 또는 골반 염증성 질환 (PDI), 및 성 전염 질환의 증가된 위험과 관련된다. 장내미생물불균형은 >20% 선택된 병원체와 같은 선택된 병원체의 상대적 양, 및 질 락토바실러스의 낮은 상대적 풍부도, 예를 들어 <10% 질 락토바실러스 (엘. 크리스파투스, 엘. 이너스, 엘. 젠세니이, 엘. 가세리)를 특징으로 할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이 장내미생물불균형 대상체는 질 증상을 갖는 대상체 (유증상 대상체) 및 임의의 질 증상을 갖지 않는 대상체 (무증상 대상체)를 포함하며, 여기서 증상은 암셀의 기준, 뉴젠트 스코어 및/또는 헤이/아이슨 스코어에 의해 특징화될 수 있다.
대조적으로, 용어 "정상" 또는 "건강한" "질 세균총" 또는 "질 틈새" "미생물군" 또는 "상태" 또는 유사 용어는, 여성이 질 불편을 갖지 않고 질 병리를 나타내지 않음 (예를 들어, 질의 병리학에 상응하거나 그로 인해 발생하는 징후 또는 증상이 없음)을 의미하고, 질의 상태는 성 전염 질환 및 병원체에 대하여 상대적으로 낮은 감수성을 갖고 일반적으로 낮은 pH, 예를 들어, pH 4.5 이하, 예를 들어, 3.2 내지 4.5를 갖는 것이고; 일반적으로 락트산 생성 박테리아 (예를 들어, 락토바실러스 종)가 지배적이다. 정상 질 미생물군 또는 정상 세균총은 정상적인, 건강한, 즉 비-병리적, 비-병원성 및/또는 비-내미생물불균형 상태로 질에 국소화된 미생물의 군집이다.
"자궁경부질 분비물" ("CVS") 또는 "질액"은 자궁경부에 의해 분비되는 점액, 탈락된 상피 세포, 질 삼출물, 및 여성의 질에서 발견되는 박테리아의 혼합물을 지칭한다.
"단리된 박테리아 균주"는 (예를 들어, 질 박테리아 군집으로부터의, 예를 들어, 자궁경부질 분비물 또는 질액의 샘플로부터 유래된) 다른 균주로부터 분리되고 상기 균주를 포함하는 배양물에서 시험관내 배양된 균주를 의미한다. 단리된 박테리아 균주는 그의 네이티브 상태로 그것이 유래된 물질 (예를 들어, 질 점액 및 상피 세포)에 수반되는 오염물질 또는 성분을 실질적으로 갖지 않는다.
"배양-독립적 방법"은, 예를 들어, 배양에서, 박테리아 균주의 단리 및/또는 시험관내 증식을 포함하지 않는 방법을 의미한다.
용어 "미생물(microbe)"은 용어 "미생물(microorganism)"과 동의어로 사용되며 이는 박테리아 (고세균(Archaea), 에우박테리아(Eubacteria)), 효모, 진균, 및 바이러스를 포함한다. 용어 "종"은 본원에서 분류학적으로 및/또는 유전적으로 구별되는 미생물의 군을 지칭하기 위해 사용된다. 종은 하나 이상의 구별가능한 (예를 들어, 시퀀싱에 의해) 균주를 포함할 수 있다.
용어 "미생물군"은 별개의 공유 환경 ("미생물 틈새")으로 국소화된 미생물의 군집을 지칭한다. 예를 들어, "질 미생물군"은 질에 국소화되거나 질에서 발견되는 하나 이상의 미생물 종의 군집이다. 용어 "미생물총" 또는 "세균총"은 용어 "미생물군"과 동의어로 사용된다. 건강한 또는 정상 미생물군은 질과 같은 숙주의 특정 미생물 틈새를 콜로니화하는 (그에 서식하는) 공생 미생물의 군집을 명명한다. 박테리아는 정상 세균총에서 가장 많은 미생물 성분이다.
본원에서 사용되는 바와 같이 "점막"은 점막성 막을 나타낸다. 점액은 점막에 의해 생성되고 점막을 덮고 있는 분비물이다. 점액은 점성이며 전형적으로 점막 및 점막하선에서 발견되는 점액 세포 (예를 들어, 배상 세포)로부터 생성되며, 소독 효소 (예컨대 리소자임), 면역글로불린, 무기 염, 락토페린 등의 단백질, 및 당단백질 (뮤신)이 풍부하다. 점막 표면은 생식성 관 (질)의 상피 내벽을 포함하고, 예를 들어 락토바실러스는 질 점막 표면을 콜로니화할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량"은 대상체에서 요망되는 유익한 또는 치료적 효과를 일으키기에 충분한 전형적인 대상체 (예를 들어, 여성 수용자)에게 투여되는 (예를 들어, 조성물 또는 제제의) 양을 의미한다. 요망되는 유익한 또는 치료적 효과는, 예를 들어, 장내미생물불균형, 염증 또는 감염 또는 비뇨생식관의 예방 및/또는 치료를 포함하고, 또한 질 미생물군의 복원 및/또는 재균형화 (예를 들어, 항상성을 달성하기 위해), 예를 들어, 비뇨생식관 및 질 미생물군의 항-염증성 및/또는 항-병원성 상태를 포함한다. 유효량은, 예를 들어, 적어도 하나 이상의 증상을 완화하거나, 증상의 발병을 지연시키거나, 증상의 경과를 변경하거나 (예를 들어, 증상의 진행을 늦춤), 또는 증상을 역전시키기에 충분한 (예를 들어, 투여량에서, 또한 필요한 기간 동안) 양이다. 유효량은 일반적으로 통계적으로 유의한 측정가능한 변화를 유발한다.
전달 시스템에서의 유효량은 특정 작용제, 의도된 용도, 예상 방출 속도 및 시스템이 치료를 제공할 것으로 예상되는 시간에 따라 달라진다. 투여량을 투여하기 위해 다양한 크기를 갖는 다양한 장치를 구성할 수 있다. 당업자는 각각의 구체적 적용 및 전달 시스템에 필요한 활성 작용제의 유효량을 쉽게 결정할 수 있다. 유효량은, 예를 들어, 임상 시험 및 동물 연구에서 결정될 수 있다. 용어 "유효량"은 용어 "치료 유효량"과 상호교환가능하게 사용된다.
"동결건조" 또는 "냉동-건조" 조성물은, 예를 들어, 용이한 저장 및 수송을 위해, 수분이 제거된 조성물을 지칭한다. 이러한 조성물은 사용 (예를 들어, 투여) 전에 재수화될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생존"은 주어진 조건 (예를 들어, 특정 저장 조건 (예를 들어 온도, 습도 포함) 하에 특정 기간 동안의 저장)에서 살아남을 수 있고 일반적으로 병태에 노출된 후 (예를 들어, 비뇨생식관에서) 콜로니화 및 번식할 수 있는 세포 (예를 들어, 박테리아 세포)를 지칭한다. 퍼센트 생존능은 집단 내의 생존 세포의 백분율을 지칭한다. 예를 들어, 퍼센트 생존능은 살아남고 (예를 들어, 냉장, 동결 및/또는 저장) 질 점막 표면에 적용시 콜로니화할 제약 조성물 중의 락토바실러스의 백분율을 지칭할 수 있다.
약어 "cfu"는 "콜로니-형성 단위"를 의미한다.
약어 "VCC"는 생존 세포 수 (생존 세포 염색에 의해 결정됨)를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이 어구 "부형제" "제약상 허용가능한 담체" "희석제" 또는 "완충제"는 최종 제형의 부분을 형성하고/거나 약물 또는 다른 작용제를 대상체로의 전달을 위한 형태에서 유지하기 위해 첨가되는 비-활성, 제약상 허용가능한 물질, 성분, 조성물 또는 비히클을 의미한다. 각각의 담체는 바람직하게는 제형의 다른 성분과 상용성이며, 예를 들어 담체는 치료시 활성 성분 또는 작용제의 영향을 감소시키지 않으며, 예를 들어, 담체는 제약상 불활성이다. 일부 구현예에서, 제약상 허용가능한 담체는 물 이외의 담체 (예를 들어, 크림, 에멀젼, 겔, 리포솜, 나노입자, 필름, 연고 및/또는 질 장치)일 수 있다. 일부 구현예에서는, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 제약상 허용가능한 담체 및/또는 희석제 (예를 들어, 식염수)와 함께 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 이들 조성물은 당업자에게 공지된 수단에 의해 제제의 용이한 투여를 허용한다. 일부 구현예에서는, 완충 작용제, 예를 들어, 산도를 선택된 수준 (예를 들어, pH 3.5 내지 4.5)으로 유지하고 산도의 급격한 변화를 방지하는 약한 산 또는 염기가 첨가된다.
용어 "접촉", "투여" 또는 "적용", 또한 보다 구체적으로, "질 적용" 또는 "질 투여"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 예를 들어, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 중에 포함된, 요망되는 박테리아 군집 (예를 들어, 락토바실러스 포함)의 콜로니화 및 생착을 목적으로, 대상체 또는 부위에 제공되거나 주어지는 장치, 투여 형태 또는 제약 조성물, 및 대상체 (예를 들어, 여성 수용자) 또는 특정 기관 또는 다른 생리학적 부위 (예를 들어, 비뇨생식관 또는 질강 또는 그의 하위 부분, 예를 들어 질벽 (점막 또는 자궁내막 표면) 또는 질 원개의 부위)에 관한 것이다. 하나의 구현예에서, 투여는 국소로 수행된다. 하나의 구현예에서, 투여는, 예를 들어, 질환 또는 장애의 치료와 관련하여, 예를 들어, 질 건강을 개선하기 위해, 질로 수행된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약 조성물" 또는 "치료적 조성물"은 제약상 허용가능한 담체, 예를 들어, 제약 산업에서 통상적으로 사용되는 담체, 또는 추가의 활성 작용제와 조합된 활성 작용제 (예를 들어, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제)를 지칭한다. 제약 조성물은 생리학상 및 약리학상 허용가능하다. 일반적으로, 화합물, 물질 (장치), 조성물, 및/또는 투여 형태는, 이들이, 합리적인 이익/위험 비율 (예를 들어, 요망되는 이익(들) 대 부작용 (유해 사건))에 상응하며, (예를 들어, 의사 또는 규제 기관에 의한) 건전한 의학적 판단 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 경우, "제약상" "치료적" 또는 "제약상 허용가능한" 것이다. 제약 조성물은 일반적으로 저장에서 완충 및 보존을 위한 작용제를 포함할 것이며, 투여 경로에 따라, 적절한 전달을 위한 완충제 및 담체를 포함할 수 있다. 제약 조성물은 통상적으로 단위 용량으로 투여될 수 있다. 용어 "단위 용량"은 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며, 각 단위는 요구되는 생리학상 허용가능한 희석제, 즉 담체, 또는 비히클과 관련하여 요망되는 치료적 효과를 생성하도록 계산된 미리 정해진 양의 활성 물질을 함유한다.
용어 "용량" 및 "투여량"은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 용량은 각각의 투여에서 개인에게 주어지는 활성 성분의 양을 지칭한다. 용량은 투여 빈도 (예를 들어, 매일, 1주 당, 1개월 당, 또는 3개월 당 1회 이상); 개인의 크기 및 용인성; 병태의 중증도; 의도된 결과 (예를 들어, 치료, 예방, 미생물 군집의 조절 또는 복원), 및 투여 경로를 포함한 다수의 인자에 따라 달라질 것이다. 베이스라인 용량은 대상체의 초기 반응에 기반하여 투여 및 조절될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 단일 용량은 (용량 당) 104 내지 1010 콜로니 형성 단위의 범위일 수 있다. 다른 구현예에서, 조성물의 단일 용량은 103 내지 1012, 104 내지 109, 105 내지 109, 105 내지 108, 106 내지 109, 107 내지 109, 또는 107 내지 1010 콜로니 형성 단위 (용량 당)의 범위일 수 있다.
"투여 형태"는 제약 조성물의 특정 물리적 형태를 지칭하며, 예를 들어, 요망되는 양의 활성 작용제를 전달하기 위해 요구되는 용량 및 투여 경로에 따라 달라진다. 예를 들어, 투여 형태는, 예를 들어, 질 투여를 위한, 좌약, 정제, 캡슐, 필름, 크림 등, 또는 예를 들어, 어플리케이터 또는 디스펜서 등의 장치 내에 있을 수 있다. 투여 형태는 단일 또는 다중-사용 투여 형태일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료", "치료하는"은 예방적 및 치료적 치료를 지칭하며, 여기서 목적은 병태 또는 질환 또는 장애와 관련된 병태의 증상의 진행 또는 중증도를 방지하거나, 역전시키거나, 완화하거나, 개선하거나, 억제하거나, 늦추거나 또는 중지시키는 것이다. 치료는 (질환 또는 병태의) 증상 또는 마커의 개선, 치료의 부재 하에 예상되는 증상의 진행 또는 악화의 중단 또는 적어도 이를 늦추는 것을 포함한다. 치료 유효성은 하나 이상의 증상 또는 임상 마커를 모니터링함으로써 측정될 수 있고, 예를 들어, 투여 전의 대상체의 병태 및 증상 또는 치료를 받지 않는 대조군 대상체와 비교된다. 일례에서, 질 감염의 치료는 감염성 작용제의 양 (예를 들어, 세포 또는 바이러스 입자의 수) 감소, 증상의 중증도 감소, 및/또는 증상의 빈도 감소를 지칭한다. 병원체의 수준을, 면역 시스템에 의해 또는 건강한 질 미생물군에 의해 확립된 상태 (예를 들어, 감염이, 예를 들어, 증상 또는 일반적인 진단 기술에 의해 더 이상 검출가능하지 않음)에 의해 억제되는 수준으로 감소시키는 치료는 본원에서 사용되는 용어와 같이 효과적인 것으로 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "콜로니화" 또는 "생착"은, 미생물, 예를 들어, 박테리아 (예를 들어, 락토바실러스)에 의한, 환경 (예를 들어, 미생물 틈새), 예를 들어, 질 또는 질 상피의 콜로니화에 따라, 그 미생물의 생존 집단이, 예를 들어, 틈새에서, 특정 기간 동안 체류를 계속하는 것을 지칭한다. 생착은 미생물이 틈새에서 체류를 계속하는 기간에 따라 일시적 또는 안정적일 수 있다. 콜로니화 및 생착 (및 체류 시간)은, 예를 들어, 콜로니 형성 단위 (CFU)/그램의 수를 카운팅하고/거나 특정 기간에 걸쳐 채취한 하나 이상의 질 샘플 중에 포함된 미생물의 핵산 시퀀싱을 수행함으로써, 정량화될 수 있다.
용어 "대상체"는 치료, 관찰 또는 연구에 적용되는 인간 (예를 들어, 인간 여성)을 지칭한다. 하나의 구현예에서, 대상체는 사춘기에 있다. 하나의 구현예에서, 대상체는 임신 중이다. 하나의 구현예에서, 대상체는 가임기에 있다. 하나의 구현예에서, 대상체는 폐경기 이전에 있다. 하나의 구현예에서, 대상체는 폐경기 이후에 있다. 하나의 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의 수용자, 예를 들어, 수용자 여성이다. 하나의 구현예에서, 대상체는 미생물 샘플을 제공하는 공여자 여성이다. 일부 구현예에서, 대상체는 미생물 불균형과 관련된 임상 병태 (예를 들어, 장내미생물불균형, 감염, 또는 염증성 병태)를 앓고 있거나 나타내는 인간 여성이다. 일부 구현예에서, 대상체는 예방적으로 본원에 기재된 조성물 및 제제를 사용하는 인간 여성이다.
용어 "증가된", "증가시키다", "향상시키다", 또는 "활성화하다"는 참조 수준과 비교하여 적어도 10%의 증가, 예를 들어 참조 수준과 비교하여 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40%, 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%의 증가 또는 최대 100% (100% 포함) 증가 또는 참조 수준과 비교하여 10-100%의 임의의 증가, 또는 참조 수준과 비교하여 적어도 약 2배, 또는 적어도 약 3배, 또는 적어도 약 4배, 또는 적어도 약 5배 또는 적어도 약 10배 증가, 또는 2배 내지 10배 또는 그 초과의 임의의 증가를 의미할 수 있다.
용어 "낮추다", "감소된", "감소시키다" 또는 "줄이다", "하향-조절하다" 또는 "억제하다"는 참조 수준과 비교하여 적어도 10%만큼의 감소, 예를 들어 참조 샘플과 비교하여 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40%, 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%만큼의 감소 또는 최대 100% (100% 포함) 감소 (즉, 참조 샘플과 비교하여 부재 수준 (또는 검출 한계 미만의 수준)), 또는 참조 수준과 비교하여 10-100%의 임의의 감소를 의미한다.
용어 "실질적으로"는 많은 또는 상당한 정도를 의미한다. 예를 들어 병원체를 "실질적으로 갖지 않는" 샘플의 경우, 용어는 대부분, 또는 본질적으로 병원체가 결여된, 그러나 가능하게는 완전히 결여된 것은 아님을 의미한다. 선택된 병원체를 실질적으로 갖지 않는 샘플은 약 5%, <5%, <4%, <3%, <2%, 또는 <1%의 선택된 병원체를 포함하는 샘플을 지칭할 수 있다. 특정 구현예에서, 용어 "실질적으로 없는"은 <5%를 포함한다.
용어 "염증", "염증 장애", "염증과 관련된 질환", "염증과 관련된 병태"는 상호교환적으로 사용되고 염증을 포함하거나 염증을 특징으로 하는 임의의 병태, 장애, 질병 또는 상태를 설명한다. 염증은 급성 염증 또는 만성 염증일 수 있다.
실시예
실시예 1: 공여자 및 수용자의 식별을 위한 여성의 스크리닝
본 실시예는 질 마이크로바이옴 조성 및 병원체의 부재의 분석을 기반으로 한 적합한 공여자의 식별 공정을 기재한다. 스크리닝의 개략적 개요를 도 1에 나타내었다.
참가자 등록 및 질 샘플
질 건강 문제의 이력을 갖지 않는 건강한 여성을 모집하였다. 등록 참가자에게는 마이크로바이옴 분석을 위한 질 면봉, 및 HPV 분석을 위한 별도의 면봉을 알리고, 동의를 받고, 제공하였다. 총 96명의 여성이 동의하고 샘플을 제공하였다. 스크리닝된 최종 60명의 여성에 대하여, 질 면봉 대신에, 마이크로바이옴 및 바이오마커 분석 둘 다를 가능하게 하도록 질 자가-샘플링 장치 (예를 들어, 또한 명칭 'Flex 디스크'로 판매되는, The Flex Company에 의한 소프트디스크 월경 컵과 같은, 질강 내로 삽입되는 유연한 월경 컵), 뿐만 아니라 HPV 스크리닝을 위한 전용 면봉을 사용하여 자궁경부질 분비물 (CVS) 샘플을 얻었다. 두 샘플 유형 모두 올바른 샘플링 절차를 공여자에게 철저히 지시한 후 공여자에 의한 자가-샘플링을 통해 얻었다.
마이크로바이옴 분석
질 면봉 또는 CVS 샘플로부터의 마이크로바이옴 조성을 샷건 DNA 시퀀싱 분석에 의해 결정하였다. 질 마이크로바이옴 분석을 위한 면봉을 DNA 추출 전에 4℃에서 최대 48시간 동안 유지하였다. CVS 샘플을 식염수로 희석하여 점도를 감소시키고, 분취하고 (절차는 실시예 3 참조), DNA 추출 전에 -80℃에서 저장하였다. 미생물 DNA를 추출하고 인간 DNA를 제거하기 위해 차등 용해 방법을 사용하는 Molysis Complete5 키트 (MolZym)를 사용하여 두 샘플 유형 모두로부터 DNA를 추출하였다. 마이크로바이옴의 샷건 시퀀싱 및 생물정보학 분석을 Seqbiome (아일랜드 코르크)에 의해 수행하였다. Nextera XT 인덱스 키트 (Illumina)로의 멀티플렉싱을 위한 고유한 이중 인덱스를 사용하여, Illumina Nextera XT 라이브러리 제제 키트 가이드라인에 따라 모든 샘플을 샷건 메타게놈 시퀀싱을 위해 준비하였다. 표준 Illumina 시퀀싱 프로토콜을 사용하여, Teagasc DNA Sequencing Facility에서, v2.5 키트를 갖는 Illumina NextSeq 500 시퀀싱 플랫폼 (300-주기 키트/150bp PE 시퀀싱) 상에서 샘플을 시퀀싱하였다. FastQC를 사용하여 미처리(raw) 시퀀싱 데이터의 품질을 평가하였다. 최소 품질 체크 컷오프 또는 최소 4M 판독의 시퀀싱 깊이를 충족하지 않는 샘플은 재-시퀀싱을 거쳤다. 이어서, 샷건 메타게놈 시퀀싱 데이터를 Kneaddata 래퍼 도구를 활용하는 분석 워크플로를 통해 프로세싱하였다. Trimmomatic 및 Bowtie2를 사용하여 품질 필터링 및 숙주 게놈 오염제거 (인간)를 수행하였다. 고세균, 진균 및 바이러스 게놈에 속하는 참조 서열을 또한 포함하는 GTDB (게놈 분류학 데이터베이스)의 맞춤형 버전을 사용하여 Kraken2 종 분류기를 사용하여 품질 필터링된 판독의 분류학적 분류를 추가로 수행하였다. 이어서 Kraken2 분류를 Bracken 도구로 통과시켜 종 수준 풍부도를 추정하였다. 박테리아 종의 존재 및 상대적 풍부도에 관한 정보를 얻음으로써 각각의 추정 공여자 및 수용자에 대하여 질 마이크로바이옴 조성을 결정하였다.
본 연구에 대하여, 공여자로서 자격부여를 위해, 질 마이크로바이옴 조성은 하기 2개의 기준에서 합격해야 했다: 적어도 80% 질 락토바실러스 (엘. 크리스파투스, 엘. 이너스, 엘. 젠세니이, 엘. 가세리)를 포함하고 5% 미만의 선택된 병원체 (아토포비움 종, 프레보텔라 종, 비. 바지날레, 및 에프. 바지나에)를 포함함. 96명 중 61명 여성 (64%)의 질 마이크로바이옴 조성은 이들 2개의 기준을 만족하였고 건강한 질 마이크로바이옴으로 고려되었다. 질 미생물군 중에 존재하는 락토바실러스의 상대적 풍부도를 도 3에 도시하였고, 여기서 각각의 막대는 단일 건강한 공여자의 마이크로바이옴 조성을 나타낸다. 종의 상대적 양은 y축에 표시되어 있다. 스크리닝된 공여자의 마이크로바이옴은 그의 상대적 조성에 있어 상이하였다. 여러 경우에, 마이크로바이옴에서는 단일 종, 예를 들어, 엘. 크리스파투스가 지배적이었으며, 여기서 다른 마이크로바이옴은, 예를 들어, 엘. 크리스파투스, 엘. 이너스 및 엘. 젠세니이의 조합을 포함하는, 락토바실러스의 이질적인 집단을 나타내었다. 주목할 점은, 0.05% 미만과 같은, 미세한 상대량도 검출될 수 있었다는 것이다 (표 2 참조).
스크리닝된 96명의 여성 중, 28% (n=27)는 장내미생물불균형 마이크로바이옴 (>20% 선택된 병원체 및 <10% 질 락토바실러스로서 정의됨)을 나타내었다 (도 2 및 4). 장내미생물불균형 질 미생물군을 나타낸 여성은 질 질환 증상을 갖지 않고 일반적인 양호한 건강을 가졌다. 나머지 8% (n=8)는 건강한 및 장내미생물불균형 마이크로바이옴 분류 사이에 있거나, 임의의 질 질환 증상을 나타내지 않거나, 또는 스크리닝 기준에서 분류/정의되지 않는 종을 함유하였다 (도 4). 이들 여성은 추정 공여자 또는 수용자로서 자격부여되지 않았다.
건강한 코호트 (n=61)의 마이크로바이옴 조성은 99.26%의 중앙값 질 락토바실러스 풍부도 및 0.03%의 선택된 병원체를 가졌다. 반면에, 장내미생물불균형 코호트 (n=27)는 0.34%의 중앙값 질 락토바실러스 풍부도 및 87.21%의 선택된 병원체를 특징으로 하였다. 정의되지 않은 코호트 (n=8)는 35.76%의 중앙값 질 락토바실러스 풍부도 및 61.83%의 선택된 병원체를 특징으로 하였다.
이는 선택 기준 (도 2 참조)이 건강한 및 장내미생물불균형 질 미생물군을 높은 신뢰성 있게 구별할 수 있음을 시사한다. 건강한 질 마이크로바이옴만이 추정 공여자로서 고려되어 추가의 엄격한 스크리닝 절차를 거쳤다.
HPV 스크리닝
인간 유두종바이러스 (HPV)는 매우 널리 퍼져 있는 바이러스 감염이고, 그의 여러 균주가 자궁경부암과 관련된다. HPV-양성 여성의 유병률은 높다. 공여자의 스크리닝 방문 동안 HPV 스크리닝을 위해 채취한 질 면봉에 대하여, Qiagen QIAmp DNA 미니 키트를 사용하여 DNA 추출을 수행하였다. 각각의 공여자 샘플로부터의 추출된 DNA를 SeeGene Anyplex II HPV28 키트에서 사용하였고, 이 검정에 대해 셋업되고 보정된 BioRad CFX96 Dx qPCR 기계 (Triolab, 덴마크) 상에서 반정량적으로 실행하였다. 반정량적 방법은 공지된 모든 고위험 유전형을 포함한 HPV의 28개의 상이한 유전형에 대하여 3개 수준의 양을 제공한다. HPV-음성인 샘플만이 적합한 추정 공여자로 고려되었다.
의료진에 의한 병원체 체크 및 검사
수용자에 대한 임의의 악영향을 최소화하기 위해, 추정 공여자 (건강한 마이크로바이옴을 갖고 HPV 스크린에서 합격한 여성)를 병원체, 병원균, 및 성 전염 질환의 존재에 대하여 부인과 의사에 의해 추가로 스크리닝하고, 건강 및 부인과 검진에 적용하여 암 또는 자궁내막증과 같은 다른 질환의 존재를 평가하였다. 절차는 추가의 HPV 시험을 포함하였다.
표준 진단 시험을 HIV, A형, B형, 및 C형 간염, 시토메갈로바이러스, 트레포네마(Treponema), 요로 감염, HPV, 클라미디아, 고노레아, 트리코모나스, 헤르페스 제니탈리스(Herpes genitalis), 칸디다, 미코플라스마, 및 스트렙토콕쿠스 A, B, C, 및 G에 대하여 수행하였다. 건강 검진 동안, 추정 공여자는 병력 및 의약 사용, 인구통계, 심박수 및 혈압 측정을 포함한 일반적인 건강 체크를 받았다.
승인된 공여자에 대하여, 이들이 특정된 기간에 걸쳐 그의 최종 공여를 제공한 후에 후속 조치 방문에서 동일한 시험을 다시 수행하였다(도 1 참조). 승인된 공여자가 후속 조치 방문에서의 시험에서 합격하고, 모든 샘플이 모든 품질 체크에서 합격할 때까지 (실시예 4 참조), 샘플은 격리되어 유지되었으며 수용자에 대한 투여를 위해 방출되지 않았다.
공여자 선택
마이크로바이옴 분석, 병원체 스크리닝, 및 건강 및 부인과 검진을 포함한 상기에 기재된 스크리닝 절차에 대한 공여자를 선택하였다. 건강한 질 마이크로바이옴을 갖고, 양성 병원체 시험을 갖지 않고, 건강 및 부인과 검진에서 비정상적 소견을 갖지 않는 대상체만이 적합한 공여자로 고려되고 프로그램에 등록되었다 (또한 실시예 2 참조).
스크리닝 프로토콜에 따라, 96명 중 12명 (13%)의 여성이 공여자 프로그램에 등록되었고 그의 공여 방문을 시작하였다. 이들 중, 3명은 충분한 공여를 제공하지 못하거나 후속 조치 스크리닝 동안 불합격하였다. 전체적으로, 스크리닝을 위해 등록된 모든 96명의 여성 중 9%가 모든 스크리닝 기준에서 완전히 합격하여 9명의 승인된 공여자 (n=9)가 되었다 (표 1).
표 1은 HPV 스크리닝에서 합격한 공여자 대상체 (n=38)에 대해 스크리닝된 병원체 및 병원균의 개요를 제공한다.
표 1.
완전히 승인된 공여자 (n=9)를 포함한 모든 스크리닝된 대상체 (n=96)의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 조성을 표 2에 요약하였다.
표 2 4개 코호트의 질 미생물군 조성: (i) 건강한, (ii) 완전히 승인된 공여자, (iii) 장내미생물불균형 및 (iv) 정의되지 않음. 샘플 제제에서 검출가능한 종의 총량에 대한 중앙값 및 사분위수 범위 (IQR) (% 단위)의 정량화된 박테리아의 상대적 양이 나타나 있다.
표 2.
상기에 기재된 바와 같은 질 락토바실러스 및 병원체의 상대적 양 (또한 도 2 참조)을 기반으로 하여 "건강한", "장내미생물불균형" 및 "정의되지 않은" 코호트를 분류하였다. "완전히 승인된 공여자"는, 최초 스크린에서 합격한 것에 추가로, 예를 들어, 상기에 기재된 바와 같은 STI 및 다른 감염 및 의학적 병태를 배제하기 위한, 추가의 스크린을 성공적으로 수행한 대상체를 지칭한다. 모든 스크리닝 기준에서 합격하고 적합한 공여자로서 자격부여된 대상체 (n=9)는 99.62%의 중앙값 질 락토바실러스 농도 및 0.01%의 선택된 병원체를 가졌다. 승인된 공여자는 최고량의 선택된 질 락토바실러스 및 그룹 중 최저량의 질 병원체를 가졌다. 완전히 승인된 공여자는 엘. 크리스파투스-지배적 질 미생물군 조성물로 제한되지 않으며 락토바실러스 종의 혼합물을 포함하거나 엘. 이너스 지배적이었다.
수용자 선택
수용자를 모집하였고 임상 연구에 등록하였다. 하나의 연구에서, 18 내지 45세의 건강한 지원자 여성을 스크리닝 및 참가를 위해 모집하였다. 질 질환 증상을 갖지 않고 일반적인 양호한 건강을 갖는 여성만을 스크리닝을 위해 등록하였다. 또 다른 연구는 질 증상을 갖는 단일 환자를 등록하였다. 모든 수용자는 상기에 기재된 포함 기준에 따라 질 장내미생물불균형을 갖는 것으로 (장내미생물불균형 질 마이크로바이옴이 서식하는 것으로) 분류되었다 (도 2 참조): >20% 선택된 병원체 (아토포비움 종, 프레보텔라 종, 비. 바지날레, 및 에프. 바지나에) 및 <10% 질 락토바실러스.
실시예 2: 공여자 CVS 샘플 수득
본 실시예는 공여자로부터 질 미생물군 샘플을 얻는 공정을 기재하며, 여기서 샘플은 실질적으로 완전한 질 미생물군을 포함한다.
공여 방문 셋업
실시예 1에 기재된 스크리닝 공정에서 성공적으로 합격한 공여자는 2회의 부인과 의사/병원체 체크 방문 사이의 40일의 기간 내에 자궁경질 분비물 (CVS)을 공여하도록 초대되었다 (도 1 참조). 각각의 공여자는 월경일과 그 후 하루를 제외하고 40일 동안 임의의 시간에 10-15회 공여를 제공하였다. 공여는 적어도 16시간 간격을 두었다.
공여 기간 동안, 공여자는 다음 제한사항을 준수해야 한다: 질 및 항문 성교 금지; 호수, 자쿠지, 수영장에서의 수영 금지; 질내 제품 (예를 들어, 탐폰, 비누)를 사용하지 않음. 각각의 방문에서, 공여자는 일반적인 건강 질문과 함께 이들 제한사항의 준수를 확인하기 위한 설문지를 작성하였다.
공여 기간 후, 공여자는 부인과 의사에게 후속 조치 체크를 받았다. 이들이 이 후속 조치에서 합격한 경우에만, 그의 샘플이 방출 및 투여를 위한 사용에 대해 고려되었다 (도 1, 실시예 1 참조). 그 때까지, 또한 모든 샘플이 모든 품질 체크에서 합격할 때까지 (실시예 4 참조), 모든 샘플을 격리하여 유지하였다.
CVS의 공여자 자가-수집
자궁경부질 분비물 (CVS) 샘플을 철저한 지시 후 질 자가-샘플링 장치를 사용하여 자가-수집을 통해 얻었다. 공여자는 위생적으로 디자인된 전용 공여자 룸에서 CVS 샘플을 얻었다. 각각의 공여자 후에 공여자 룸을 70% 에탄올로 청소하고 격주로 환경 모니터링에 적용하여 장내세균(Enterobacteriaceae), 총 호기성 미생물 수, 및 효모 및 곰팡이에 대하여 체크하였다. 이 셋업은, 예를 들어, 가정 샘플링과 비교하여, 청결도를 최대화하고 최소화 프로세싱 시간을 최소화한다. 공여자가 샘플링 절차를 올바르게 따르지 않아 유발되는, 피부 박테리아로 이루어진 단지 단일 오염이 공여자 샘플 중 하나에서 검출되었다.
질 자가-샘플링 장치는 플라스틱 호일 컵 및 가요성/유연한 링을 갖는 단일 사용 월경 컵이었다 (실시예 1에 기재됨). CVS 공여에 대하여, 이는 월경 컵과 같이 자궁경부 위에 착용되지 않고, 대신에 이를 부분적으로 접힌 상태로 질에 삽입하여, 이를 종방향 위치에서 약 10초 동안 방치하고 이를 그의 종축을 따라 비틀면서 이를 제거함으로써 큰 면봉으로서 사용되었다. 공여자는 질 자가-샘플링 장치를 제공된 라벨링 및 사전-칭량된 멸균 50 mL 튜브 내에 두었다. 15-20 min 후, 별도의 멸균 50 mL 튜브에 넣은 새로운 질 자가-샘플링 장치로 이 과정을 두 번째로 반복하였다.
부분적으로 접힌 상태로 질관에 삽입되는 것과 함께 질 자가-샘플링 장치의 부드럽고 유연한 물질은, 질을 손상시키거나 자극하지 않으면서, 질강의 표면으로부터 CVS의 효과적인 수집을 가능하게 한다. 질 자가-샘플링 장치는 질 사용을 위해 의도되며 안전하지만, 최대한 공여자 안전 및 제어를 보장하기 위해, 장치의 각각의 배치를 장내세균의 오염에 대해 스크리닝하고 임의의 오염을 갖지 않음을 확인하였다.
본원에 기재된 절차는 자궁경부 상의 수집 장치로서 연장된 기간에 걸쳐 질 자가-샘플링 장치를 사용하는 것에 비해 여러 이점을 갖는 것으로 믿어진다. 상기 방법을 사용하면, CVS 샘플 중에 포함된 박테리아가 질 자가-샘플링 장치와 접촉하는 데 더 적은 시간이 소요되고, 수집되는 질 점액 및 질 박테리아의 양이 증가한다. 질 상피는 질 마이크로바이옴에 대한 기질을 함유한다. 따라서, 이러한 방식으로 얻어진 샘플은 보다 높은 농도의 생존 질 락토바실러스 및 점액, 및 보다 낮은 양의 자궁내막으로부터의 체액을 갖는다.
실시예 3: 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성
본 실시예는 자궁경부질 분비물로부터의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성을 보여준다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 생성하는 공정
샘플 프로세싱의 개략도가 도 5a 및 5b에 제공되어 있다. 각각의 방문에서, 공여자에게 설문지와 함께, 사전-라벨링 및 사전-칭량된 2개의 50 mL 멸균 튜브, 및 2개의 질 자가-샘플링 장치가 제공되었다 (실시예 1 및 2 참조). CVS를 190 x g 및 주변 온도에서 5 min 동안 원심분리에 의해 수집하였다. 낮은 속도는 장치로부터 CVS를 수집하면서, 층으로 상-분리하지 않는다. 모든 추가 단계는 주변 온도에서 멸균 조건 하에 수행하였다. 자가-샘플링 장치를 튜브로부터 폐기하고, CVS 샘플 중량을 결정하였다. 200 mg 미만의 총 (2개 튜브 합계) 중량을 갖는 샘플을 폐기하였다. 혈액이 가시적으로 존재하는 샘플을 폐기하였다.
각각의 튜브 내의 샘플을 1 mL 식염수와 혼합하여 점도를 감소시키고, 그 후 2개의 샘플을 합치고, 저장 및 추가 시험을 위해 분취하였다. 이어서 2개의 합친 샘플을 도 5b에 나타낸 바와 같이 품질 관리 (실시예 4 참조) 및 저장을 위해 여러 분취량에 걸쳐 분포시켰다.
저장용 샘플을 함유하는 저온바이알을 CoolCell (Corning)에 넣은 다음 -80℃에 두었다. CoolCell은 분 당 1℃의 제어된 냉각 속도를 갖고, 이는 샘플의 최대 생존능 유지를 보장한다. 최소 2시간 후, 샘플을 '격리'로 라벨링된 일반 -80℃ 저장 상자로 옮겼다. 샘플은 모든 방출 기준이 충족된 후에만 방출되었다 (도 5b 참조, 또한 상기에 기재된 바와 같음).
실시예 4: 품질 관리
본 실시예는 자궁경부질 분비물로부터 생성된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 품질 관리를 기재하고, 따라서 이는 투여를 위해 안전하게 사용될 수 있다.
전반적 절차
품질 관리에 대한 세부사항과 함께 샘플 프로세싱 절차의 개략도가 도 5a 및 5b에 제공되어 있다. 이 절차는 분석 및 품질 관리에 사용되는 부피를 가능한 한 낮게 하여 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 손실을 최소화하는 방식으로 고도로 최적화된다. pH 측정에 사용된 샘플은 측정 후에 폐기된다. 체류 바이알은 안전성의 이유로 투여 후에 적어도 1년 동안 유지된다 (예를 들어, 수용자에서 나타난 STI의 체크를 위해). 각각의 공여자의 모든 최초 및 최종 샘플을 qPCR 분석에 적용하여 다중-약물 내성 유전자 (MDR 유전자)의 부재를 체크하였다.
품질 관리를 위한 분석
pH는 마이크로-pH 프로브를 사용하여 측정하였다. 기술적 삼중 측정을 수행하고, 측정간 차이가 > 0.2인 경우에는 반복하였다. pH 측정에 사용된 샘플은 측정 후 폐기된다. 현미경 검사를 수행하였다. 정자 세포를 식별하기 위한 매우 민감하고 선택적인 방법인 산 인산염 종이의 사용 및 현미경검사에 의해 광학적으로 정자 세포의 부재를 결정하였다. 스크리닝에서 엘. 크리스파투스, 엘. 젠세니이, 또는 엘. 가세리가 지배적인 공여자에 대하여 생존 세포 수 (VCC)로, 또는 de Man, Rogosa and Sharpe (MRS) 아가 플레이트 상에서 콜로니-형성 단위 (CFU) 수에 의해 생존능을 시험하였다. 스크리닝에서 엘. 이너스가 지배적인 공여자에 대해서는, 이 방법이 사용될 수 없었다. 대신에, 이들 샘플에 대한 생존능은 BacLight 생존/사멸 염색 (ThermoFisher Scientific)을 사용하고 현미경 하에 Thoma 세포 카운팅 챔버에서 생존 세포/mL를 카운팅하여 시험하였다. 샘플을 투여에 사용한 후 1주 내에, 안정성 바이알을 사용하여, 용량 계산, 및 질 투여시 세포 생존능을 시험하였다.
메타게놈 데이터를 기반으로 하여 투여 후 인실리코(in silico) 생착 체크를 수행하기에 충분한 박테리아 서열 판독을 얻기 위해 제조업자의 지시에 따라 제조업자의 지시에 따라 Molysis Complete5 키트 (Molzym)를 사용하여 DNA 추출을 수행하였다 (사용된 방법은 실시예 1 참조). 검정을 위해 보정된 BioRad CFX96 Dx qPCR 기계 상에서 SeeGene Allplex Entero-DR qPCR 검정 키트를 사용하여, 샷건 시퀀싱에 사용된 것과 동일한 DNA를 사용하여 다중-약물 내성 (MDR) 마커 qPCR을 수행하였다. 이 키트는 카르바페네마제 유전자 (NDM, KPC, OXA-48, VIM, IMP), 확장 스펙트럼 베타-락타마제 (ESBL) 유전자 (CTX-M) 및 반코마이신 내성 유전자 (VanA, VanB)의 단일 또는 다중 검출을 허용한다.
실시예 5: 공여자 마이크로바이옴 특징화
본 실시예는 질 투여에 적합한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 기재한다.
공여 기간 동안 마이크로바이옴 조성
여성의 질 마이크로바이옴은 월경 주기에 걸쳐 또는 성 활동에 따라 변동될 수 있는 것으로 알려져 있다 (Gajer 등, 2012, Science Translational Medicine). 피임을 사용하지 않은 혼합 종 조성을 갖는 공여자에 대하여 (표 3), 월경 주기에 걸쳐 종 사이의 변동이 관찰되었지만 (도 6a, b), 샘플 중의 엘. 크리스파투스, 엘. 이너스, 엘. 젠세니이, 엘. 가세리 전체는 안정적으로 >80%로 유지되었다. 강하게 엘. 크리스파투스-지배적 마이크로바이옴을 갖는 공여자는 연장된 기간에 걸쳐 매우 안정적이었다 (예를 들어, 공여자 7, 도 6g).
엘. 이너스-지배적 공여자의 마이크로바이옴은 대부분 안정적이었지만, 하나의 경우에는, 공여 기간 종료 무렵에 엘. 이너스와 엘. 크리스파투스 사이의 전환이 관찰되었다 (도 6i). 이 공여자는 피임으로 인해 월경 주기를 갖지 않았다. 공여자에서 관찰된 마이크로바이옴 안정성은, 예를 들어, 성교 금지와 같은 공여자가 준수하는 제한사항에 의해 보조될 가능성이 높다.
일부 공여자는 제2 라운드의 공여 방문을 위해 복귀하였다. 도 6에서, 이는 수직선으로 표시된다. 공여자 2, 5, 및 7의 경우 두 라운드 중간에 1개월이 있었고, 공여자 1의 경우에는 1.5개월이 있었다. 공여자 6의 경우, 라운드 중간에 2개월이 있었고, 그녀는 제1 라운드에서는 피임약 환제를 사용하고 제2 라운드에서는 호르몬 피임약을 사용하지 않는 것으로 변하였다.
여러 공여자 샘플에서, 특정 종 (대부분 엘. 젠세니이)이 소량이지만 매우 일관된 양 (0.3-3.5%)으로 존재하였다. 이들 공여자 중 한 명에서는, 더욱 더 소량의 엘. 이너스가 일관적으로 존재하였다 (0.07-0.33%). 또한 또 다른 엘. 크리스파투스-지배적 공여자에서는 더욱 더 소량의 엘. 이너스 (0.02-0.10%) 및 엘. 젠세니이 (0.01-0.03%) 둘 다가 일관적으로 관찰되었다. 혼합 종 조성을 갖는 2명의 공여자에서, 이들의 상대적 풍부도가 때때로 0.27%만큼 낮게 감소되었음에도 불구하고 공여 기간에 걸쳐 혼합물 중에 존재하는 어떠한 종도 완전히 사라지지 않았다 (검출 수준 미만). 전체적으로, 이는 질 마이크로바이옴이 안정적 생태계이며 한 사람에서의 다양한 락토바실러스 종 사이의 공생 관계를 가리킨다는 것을 의미한다. 이는 실시예 7에 기재된 바와 같은 제제의 질 투여 관찰에 의해 추가로 입증된다.
4개의 주요 질 락토바실러스 (엘. 크리스파투스, 엘. 이너스, 엘. 젠세니이, 엘. 가세리)에 추가로, 다른 락토바실러스도 공여자 샘플에서 소량으로 일관적으로 존재하는 것으로 정기적으로 관찰되었다 (대부분 <0.05%): 엘. 아세토톨레란스(L. acetotolerans), 엘. 아시도필루스(L. acidophilus), 엘. 아밀로보루스(L. amylovorus), 엘. 갈리나룸(L. gallinarum), 엘. 기게리오룸(L. gigeriorum), 엘. 헬베티쿠스(L. helveticus), 엘. 존소니이(L. johnsonii), 엘. 케피라노파시엔스(L. kefiranofaciens), 엘. 키타사토니스(L. kitasatonis), 엘. 파라가세리(L. paragasseri), 엘. 프시타시(L. psittaci), 락토바실러스 sp002911475, 엘. 타이와넨시스(L. taiwanensis), 엘. 울투넨시스, 엘. 콜레오호미니스(L. coleohominis), 엘. 레우테리(L. reuteri), 및 엘. 바지날리스(L. vaginalis). 이들 락토바실러스의 안정적 존재는 또한, 전체적으로 건강한 질 틈새를 촉진하고 유지하는 데 필요할 수 있는 복잡한 생태계를 가리킨다.
일부 다른 락토바실러스가 공여자 샘플의 서브세트에서 산발적으로 나타났다. 엘. 헬베티쿠스는 2명의 엘. 이너스-지배적 공여자에서 관찰되지 않았고, 엘. 이너스-지배적으로부터 엘. 크리스파투스-지배적으로 전환된 단일 공여자의 최종 방문에서만 나타났으며, 이는 특정 종이 서로와의 공동서식을 선호하며 다른 것들은 생태계에서 공존불가능할 수 있음을 시사할 수 있다. 엘. 이너스-지배적 공여자가 투여에 적합하지 않은 것으로 고려된 문헌의 보고와 대조적으로, 데이터는 완전히 승인된 공여자의 엘. 이너스-지배적 마이크로바이옴이 매우 안정적이고 건강한 생태계이며 (또한 실시예 8의 염증성 마커 데이터 참조) 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제에 대한 적합한 공여자임을 시사한다.
엘. 가세리는 드물게 지배적 종으로서 관찰되었지만 (도 3) 여러 공여자에서 전형적으로 소량으로 나타났다 (도 6, 표 1). 엘. 가세리는 엘. 크리스파투스-지배적 공여자 4 (도 6d)에서는 0.01- 2.23%의 상대적 농도로; 혼합 마이크로바이옴 공여자 1 (도 6a)에서는 0.01-0.07%의 상대적 농도로; 또한 엘. 이너스-지배적 공여자 8 (도 6h)에서는 0.3-7.14%의 상대적 농도로 검출되었다. 소수의 락토바실러스 종의 일관된 유지는, 소수 종이 질 생태계의 유지 또는 안정성에 있어 지금까지 알려지지 않은 역할을 할 수 있음을 시사한다.
얻어진 샘플의 물리적 특성
샘플 중량은 동일한 공여자의 공여 사이에서, 또한 공여자 사이에서 변동되었지만, 평균적으로 >200 mg이었다. CFU 및 pH는 안정적으로 유지되었고, <4.5의 정의된 임계값 내에 있었다 (표 3). 전체적으로, 마이크로바이옴 조성 및 샘플 특성 둘 다에 걸친 이러한 안정성은 공여자 마이크로바이옴의 건강 및 안정성을 나타낸다.
표 3에 CVS 및 생성된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 특성을 요약하였다. 각각의 행은 40-일 기간에 걸쳐 10-15회 공여 동안 한 명의 공여자에 대한 데이터를 함유한다. '시간 윈도우' 열에는 공여자가 '공여 수' 열에 나열된 샘플 수를 제공한 기간이 나열된다. 공여자 ID는 도 6의 마이크로바이옴 그래프에서와 동일하다. 중량은, 식염수 첨가 전에, 공여자에 의해 제공된 두 샘플의 합계 중량이다. 용량은, 분석을 위한 모든 부피를 꺼낸 후 수용자에게 투여하는 데 사용되는 실질적으로 완전한 마이크로바이옴 제제 바이알에서의 최종 mL 양이다 (도 5b 참조). 저온바이알에 들어갈 수 있는 최대 용량은 1,8 mL이다. 생존 세포/용량은 두 엘. 이너스-지배적 공여자 (8 및 9)를 제외하고 모든 종에 대하여 2-3일 동안 혐기적으로 성장한 MRS 배지에서 CFU 플레이트 카운팅에 의해 결정되었다. 이들에 대하여, 생존/사멸 염색 및 현미경 하에 카운팅 챔버에서의 생존 세포 카운팅에 의해 생존 세포/용량을 결정하였다. 약어: hIUD: 호르몬 자궁내 장치; 환제: 경구 피임약.
반복된 CVS 공여가 샘플의 조성에 영향을 미치는지의 여부를 추가로 평가하였다. 공여자는 6-시간 간격으로 1일 당 2x 및 4-시간 간격으로 1일 당 3x의 두 샘플을 제공하였다. 반복된 CVS 공여 절차 둘 다 pH의 현저한 증가 (대략 0.4 증가), 및 샘플 중량 (약 200 mg 또는 그 미만으로) 및 CFU (1 log)의 감소를 초래하여, 하루 이내의 반복된 샘플을 부적합하게 하였다. 이는 마이크로바이옴이 샘플링 후 완전히 재생되기까지 6시간 초과를 필요로 함을 시사한다. 결과적으로, 공여자는 공여 사이에 최대 대략 16-시간 간격으로 하루에 한 번 샘플을 제공하도록 허용되었다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 안정성
2주 내지 11개월의 상이한 저장 기간 후에 상이한 질 마이크로바이옴 조성을 포함하는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 안정성을 시험하였다 (도 7). 안정성은 50 μL 분취량으로 시험하였고, 이는 전체 부피 바이알을 대표하는 것으로 나타났다 (데이터는 나타내지 않음).
일반적으로, 생존능은 시간에 따라 모든 종에 대해 높게 유지되었으며 유의한 손실은 관찰되지 않았다 (평균 생존능 손실은 1-로그 미만). 종 사이의 큰 생존능 차이는 관찰되지 않았다. 다른 연구자들은 L. 크리스파투스-지배적이 아닌 질 미생물군 조성에 대해 9개월 후 2-로그 생존능 감소를 보고하였다. 본원에서 볼 수 있는 개선된 안정성은, 적어도 부분적으로, 본원에 제공된 자궁경부질 분비물을 얻는 수집 방법에 기인할 수 있는데, 이는 수집 컵을 공여자 대상체 내부에 착용하는 연장된 기간에 의존하지 않으며 그 대신에 질 점액 및 박테리아를 잠시 동안만 수집 컵에 노출시킨다. 이론에 얽매이지 않고, 락토바실러스가 질 상피에 접촉하지 않거나 부착할 수 없는 상태로 월경 컵에 오래 체류할수록 생존능은 더 악화되는 것으로 믿어지며, 이는 특히 엘. 이너스와 같은 민감성 종에 대해 특히 관련 있을 수 있다.
본원에 기재된 샘플 수득 및 프로세싱 공정은 모든 시험 종 조성물에 대해 연장된 기간에 걸쳐 안정적인 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 제공한다.
또한, 샘플을 해동하는 방식이 제제 중에 포함된 락토바실러스의 생존능에 영향을 미치는지의 여부를 평가하였다. 진료소에서 제제의 질 투여를 수행할 때, 임상의는 일반적으로 필요한 모든 물질을 30-37℃로 예열할 것이다. 두 가지 대안적 방법에 의해 샘플 해동 및 대략 30℃까지의 가온 후 샘플 생존능을 시험하였다: (i) -80℃로부터 4℃까지, 이어서 실온 (RT) 및 30℃까지 해동, 또는 (ii) 4℃ 단계 없이 동일한 절차.
도 8a는 결과를 나타내며, 여기서 '신선한 CFU'는 샘플링 직후 및 임의의 저장 전에 신선한 샘플 플레이팅시 얻어진 CFU이다. '4C 및 RT를 통해 해동된 CFU'는 -80℃ 저장으로부터 샘플을 꺼내고 이를 4℃에 30 min 동안, 이어서 실온 (RT)에 30 min 동안, 또한 이어서 30℃에 둠으로써 이를 점차 가온시킨 후의 CFU이다. 'RT를 통해 해동된 CFU'는 동일한 절차를 따르되, 4℃에서의 단계를 건너뛴 것이다.
CFU 및 세포 생존능은 모든 시험 샘플에서 안정적으로 유지되었으며, 여기서 전자의 방법이 2개 샘플에 대하여 약간 더 나은 생존능을 제공하였으며, 세 번째 것에서는 후자의 방법이 약간 더 나았다 (도 8a). 그러나, 차이는 작았으며 일반적으로 허용가능한 생존능이 유지되었다. 이는 4℃ 단계가 생략될 수 있음을 시사하고, 제제의 질 투여 동안 진료소에서의 실행에 방법 (ii)가 사용되었다.
반복된 동결-해동 주기
안정성의 또 다른 측면은 반복된 동결-해동 주기를 견디는 능력이다. 이는 수용자가 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 수용하기 위한 약속을 보고하지 않고 나중 시점에 투여를 위해 샘플을 재-냉동시켜야 하는 경우에 실제로 관련이 있다. 대안적으로, 운송이 지연되어 도중에 해동 후 재동결시켜야 할 수 있다. 따라서, 샘플에 대한 동결-해동 주기의 영향, 뿐만 아니라 실온 (RT)에서의 연장된 인큐베이션을 평가하였다.
도 8b는 예비 데이터를 나타내며, 여기서 '신선한 CFU'는 샘플링 직후 및 임의의 저장 전에 신선한 샘플 플레이팅시 얻어진 CFU이다. '1 동결/해동 주기'는 -80℃ 저장으로부터 샘플을 꺼내고 이를 RT에 약 40 min 동안 두고 약 30 min 동안 약 30-37℃로 예열한 후의 CFU이다. '2 동결/해동 주기'는 이 동결-해동 주기를 1회 더 반복하되 30-37℃로의 가열 없이 샘플을 해동 주기 중간에 2-3주 동안 -80℃에서 저장한 후의 CFU이다. '4h 동안 해동'은 -80℃ 저장으로부터 샘플을 꺼내고 플레이팅 전에 30 min 대신에 4시간 동안 실온 (RT)에 둔 후의 CFU이다. 결과는, 동결-해동 주기를 2회 겪는 것이 주기를 단지 1회 겪는 것보다 생존능을 더 감소시킴을 나타낸다. 엘. 크리스파투스-엘. 젠세니이 혼합물은 대부분 강건하였고 다른 시험 조성물보다 반복된 동결-해동 주기를 더 잘 견딜 수 있었다 (도 8b).
RT에서의 연장된 (4h) 인큐베이션은 생존능을 1 log 초과 또는 1 log에 가깝게 감소시키고, 따라서 이는 회피되어야 한다. 이들 예비 데이터는, RT에 보다 장기간 방지하지 않은 경우, 모든 샘플이 적어도 1회의 동결-해동 주기 동안 세포 생존능을 유지할 수 있었음을 보여준다. 이는, 샘플이 재동결될 수 있고 폐기할 필요가 없는 임상 셋팅에서 유용하다.
실시예 6: 제제의 질 투여를 위한 공여자 및 수용자 매칭
투여 전 시험관내에서 공여자 샘플이 선택될 수 있는지의 여부를 평가하기 위해, 하기 검정을 수행하였다. 비. 바지날레-지배적 (이전에는 가르드네렐라 바지날리스라 불림)인 수용자 2로부터의 CVS 물질 (도 8b)을 바이오뱅킹 프로토콜에 따라 프로세싱하고 (실시예 8 참조), 가르드네렐라 바지날리스 배지 (ThermoFisher Scientific, PB5067A) 상에 플레이팅하고 기체 팩을 갖는 혐기성 단지에서 37℃에서 밤새 성장시켰다. 1 mL 멸균 식염수를 플레이트에 첨가한 후, 콜로니를 긁어내고, 재현탁시키고, 약 0.5 McFarland 표준 밀도로 희석하였다. 100 μL의 희석된 수용자 샘플을 4개의 새로운 가르드네렐라 바지날리스 플레이트 상에 플레이팅하고 5 min 동안 공기-건조시켰다. 이어서, 각각 대략 3 mm의 직경을 갖는 4개의 멸균 홀을 각각의 플레이팅 내로 펀칭하였다. 공여자-유래의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 각각의 홀 내에 넣었다 (희석되지 않은 샘플로 2개 복제, 또한 5x 희석된 샘플로 2개 복제). 이들 플레이트를 기체 팩을 갖는 혐기성 단지에서 37℃에서 혐기적으로 인큐베이션하였다. 홀 주위에 형성된 할로(halo)의 존재 및 크기를 5 및 7일 후에 측정하였다. 할로는 가시적으로 결정될 수 있는 뚜렷한 외관 변화를 특징으로 하는 웰 주위의 대역이다. 홀이 병원성 세포의 증식에 부정적 영향을 미치는 작용제를 함유한 경우, 수용자로부터의 병원성 세포의 억제 또는 증식이 홀 주위에서 관찰될 수 있었다. 웰 주위의 할로가 클수록, 억제/배제가 더 강한 것이다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 전체가 투여되었기 때문에, 여기서 관찰된 효과는 완전한 조성물의 결과이다. 따라서, 할로 검정은 어떤 공여자가 적합하고 병원체, 예를 들어, 수용자의 질강에 체류하는 것들의 세포 증식을 억제할 수 있는 가장 좋은 기회를 갖는지를 평가하기 위한 판독값을 제공한다. 락토바실러스-지배적 미생물 제제가 틈새 (예를 들어, 수용자의 질강)에서의 체류 병원체 성장을 억제하는 능력은, 틈새에 투여시 생착 및 안정적인 콜로니화를 보조할 것으로 예상된다. 가르드네렐라 바지날리스 배지는 락토바실러스가 민감성인 항생제를 함유하지 않고, 따라서 항생제 없이 투여하는 것을 나타낸다.
결과를 표 4에 요약하였다.
표 4.
공여자 1 및 5로부터의 희석되지 않은 샘플은 병원체의 성장에 대한 강한 억제 효과를 나타내는 동등하게 큰 할로 (3 mm)를 나타내었다. 동일한 샘플을 5배 희석하였고, 이는 감소된 효능을 제공하였으며, 이는 공여자 1에 대한 할로의 감소에 의해 알 수 있다. 공여자 5의 경우, 희석은 억제 효과를 없앴다. 공여자 4 및 9로부터의 샘플은 양쪽 농도에서 병원체 성장 억제에 있어 효과적이지 않았다.
이들 데이터는, 공여자 1이 공여자 5, 4 및 9보다 이 수용자에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여에 잠재적으로 더 잘 매칭될 수 있으며, 이는 이 수용자에서 체류하는 장내미생물불균형 마이크로바이옴 치료에 대한 성공 가능성 증가를 허용함을 시사한다. 따라서, 공여자 1의 이 샘플을 임상 셋팅에서 수용자 2에 대한 투여에 사용하였다 (하기 실시예 7에 기재됨).
실시예 7: 제제의 질 투여를 통한 장내미생물불균형 마이크로바이옴의 치료
본 실시예는, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 어떻게 질 투여를 사용하여 수용자의 장내미생물불균형 마이크로바이옴을 공여자의 건강한 마이크로바이옴으로 전환시킴으로써 장내미생물불균형 마이크로바이옴을 치료할 수 있는지를 입증한다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여 및 결과
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 샘플을 먼저 40분 동안 -80℃로부터 실온까지 옮김으로써 해동시켰다. 그 후, 샘플을 30분 동안 37℃에서 인큐베이터에 배치하였다. 이어서 샘플을 함유하는 튜브를 혼합을 위해 온화하게 5회 반전시켰다. 샘플을 5 mL 시린지 내로 끌어올리고 5 mL 시린지에 부착된 수정 카테터를 사용하여 쇄석술 자세로 누워 있는 수용자에게 질내 적용하였다. 수용자는 샘플이 질내 삽입된 후 30분 동안 수평 자세로 누워서 유지하도록 지시받았다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여 후 장내미생물불균형 질 미생물군의 두 가지 대표적 변화를 도 9에 나타내었다. 수용자 1은 3개 용량 (연속 3일 동안에 걸쳐 1개 용량/ 일)을 수용하였으며 (도 9a), 수용자 2는 단지 단일 용량을 수용하였다 (도 9b). 수용자 2의 성공 기회를 증가시키기 위해, 시험관내 공여자-수용자 매칭 검정을 실시예 6에 기재된 바와 같이 수행하였다. 공여자 1로부터의, 그 검정에서 가장 잘 수행된 샘플 (표 4 참조)이, 수용자 2에서 투여에 성공적으로 사용되었다. 수용자는 제제의 투여 전에 또는 동안 항생제로 사전-치료되지 않았다. 제제의 투여 후, 수용자의 마이크로바이옴 변화는, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 단독 투여에 의해 (즉, 항생제로의 치료 없이), 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 장내미생물불균형 마이크로바이옴을 공여자의 것과 보다 가깝게 비슷한 마이크로바이옴으로 변화시킬 수 있음을 입증한다.
모든 수용자는, 일반적으로 그의 방문 전 1개월인 스크리닝에서 그의 마이크로바이옴을 기반으로 하여 등록되었다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여를 위한 그의 방문시, 그의 마이크로바이옴이 베이스라인 측정으로서 다시 체크되었다. 수용자 1은 질에서 무증상이었으며, 수용자 2는 투여시 질 질환 증상을 나타내었다. 수용자 2는 제제의 투여 1주 후 증상의 현저한 감소, 또한 2주 후에는 모든 질 질환 증상의 완전한 소멸을 보고하였다.
수용자의 투여-후 마이크로바이옴은 공여자의 것과 유사한 것으로 나타났고, 이는 '마이크로바이옴 트위닝'이라 불릴 수 있고 상당히 안정적으로 유지되었다. 전체적으로 투여-후 수용자는 공여자 샘플과 무감독(unsupervised) 주성분 분석 (PCA) 플롯에서 함께 클러스터링된 반면, 투여-전 수용자는 별도의 클러스터를 형성한다 (도 10). 이는, 제제의 투여 후 수용자의 질 마이크로바이옴이 장내미생물불균형 상태로부터 변했을 뿐만 아니라 건강한, 비-장내미생물불균형 공여자의 질 마이크로바이옴 조성과 비슷함을 시사한다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제(들)의 투여-전 및 투여-후 수용자의 마이크로바이옴 조성, 및 각각의 공여자의 조성을 표 5에 요약하였다. 표는 공여자 및 수용자 샘플에서의 종의 상대적 풍부도 (샷건 시퀀싱에 의해 결정됨)를 나타내며, 여기서는 각각의 경우에 제제의 투여 후 '마이크로바이옴 트위닝'이 관찰되었고, 즉 소량으로 공여자 마이크로바이옴 중에 존재하였고, 제제의 투여 전에 수용자 중에 부재하였던 종을 포함한 공여자 종이 수용자의 질 틈새에서 배양되었다. 이 현상이 관찰되는 것과 관련 있는 종이 회색 열에 강조되어 있다.
수용자의 투여-후 마이크로바이옴은 공여자 마이크로바이옴에 소량으로 존재한 종을 포함하였고 (표 5; 여기서 엘.은 락토바실러스이고, 비.는 비피도박테리움임), 이는 전체적인 안정적 생태계가 공여자로부터 수용자에게 전달되었음을 시사한다. 이들 종은 대부분의 공여자의 모든 공여 방문에서 안정적으로 존재하였음이 또한 관찰되었다 (실시예 5 참조). 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여를 통한 수용자로의 전체 생태계의 전달은, 체류 병원체 및 병원균을 근절하고 실질적으로 비어 있는 미생물 틈새를 생성하기 위해 사용되는 항생제 사전-치료의 부재 하에서도, 락토바실러스-지배적 공여자 마이크로바이옴의 성공적인 생착 및 콜로니화를 허용할 수 있다. 이는, 이전에 시험되었던 단일 종 또는 단일 균주 제제가 일반적으로 잘 작용하지 않는 이유를 설명한다. 대안적으로 또는 추가로, 초기 생착을 지지하기 위해 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 (예를 들어, 뮤신, 락트산 등)에 특정 물질이 필요할 수 있다.
또한, 투여-후 2주부터 수용자 2의 마이크로바이옴은 혼합 종 조성을 갖는 공여자의 것과 거의 동일하였지만, 투여-후 1주에는 엘. 젠세니이가 제1 지배적 락토바실러스 종이었다. 이는 다른 종의 콜로니화에 대한 길을 열어주는 '선구자 종'의 존재를 나타낼 수 있다. 이 현상은 상이한 기질 활용 능력 또는 상이한 종의 pH 최적화에 의해 설명될 수 있다. 그러나, 다른 수용자의 일부, 예컨대 수용자 1에서는, 1주 후 마이크로바이옴이 공여자의 것과 이미 거의 동일하였다. 공여자에서 관찰되는 마이크로바이옴 내의 종 변동이 또한 수용자에서도 관찰되었고, 이는 생태계의 전달을 시사한다. 수용자 1에서 사용된 물질은 수용자 2에 사용된 것과 동일한 공여자, 그러나 상이한 방문으로부터의 것이었다. 이들 샘플에 걸쳐, 종은 동일하지만 그의 상대적 풍부도는 상이하고, 이는 종의 풍부도가 반드시 결정 인자는 아님을 나타낸다. 또한, 실질적으로 완전한 질 마이크로바이옴 제제는 단일 및 다중 용량 둘 다에서 효과적이었다.
생착은 전체 생태계가 공여자 물질에 존재하는 경우에 성공적인 것으로 보이고, 따라서 실질적으로 완전한 제제를 필요로 한다.
다른 연구자들은 이전에, 엘. 이너스의 유해한 역할을 제안하였다. 그러나, 엘. 이너스는 시험된 공여자 마이크로바이옴에 존재한다. 본원에 기재된 엄격한 스크리닝 기준에서 합격하는 여성에서, 엘. 이너스는 또한 건강한, 안정적 마이크로바이옴을 나타내는 데 있어 유익한 역할을 할 수 있다. 이는 제제 투여를 위한 모든 4개의 주요 락토바실러스 종을 사용하는 선택 과정을 확인시켜준다.
맹검 접근으로서, 수용자 질 틈새 중 하나에서 특정 공여자 마이크로바이옴에 의한 생착을 체크하기 위해, 치료-후 수용자 마이크로바이옴을 모든 공여자 마이크로바이옴의 라이브러리와 비교하였다 (메타게놈 시퀀싱 데이터). 수용자 마이크로바이옴과의 근접성을 기반으로 하여 공여자 라이브러리로부터 올바른 기증자 샘플을 식별하는 것이 가능했으며, 이는 수용자에서의 공여자 마이크로바이옴의 생착이 성공적이었음을 시사한다.
따라서, 본 실시예는 장내미생물불균형 수용자에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여에 의한 장내미생물불균형 질 마이크로바이옴의 성공적인 치료를 입증하며, 여기서는 투여-후 수용자의 미생물군 조성이 공여자의 미생물군 조성과 가깝게 비슷하다. (다른 사람들에 의해 제안된 바와 같이) 투여 전 항생제 치료가 필요한 것으로 생각되었지만, 이들 데이터는, 실질적으로 완전한 생태계를 함유하는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 제공되는 경우 항생제로의 사전치료가 요구되지 않음을 입증한다.
실시예 8: 장내미생물불균형 여성에서의 상승된 질 염증 마커
본 실시예는 장내미생물불균형 질 마이크로바이옴이 건강한 여성과 구별되는 국소 염증 상태를 나타냄을 입증한다.
바이오마커 분석을 위한 스크리닝 코호트 CVS의 바이오뱅킹
CVS 샘플을 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제에 대해 기재된 바와 같이 수집하였지만 (실시예 2 참조), 하기 차이점이 있었다: 샘플을 수용시 즉시 얼음 위에 놓고 전체 프로세싱 절차 전반에 걸쳐 저온으로 유지하였다. 실온 대신에 저온 멸균 식염수를 사용하였고, 샘플을 CoolCell을 사용하지 않고 -80℃로 동결시켰다. 샘플 당 1 ml 멸균 식염수 첨가 대신에, 샘플 1 mg 당 2,5 μL를 첨가하여 모든 샘플이 분석 전에 중량 정규화되도록 하였다. 시퀀싱을 제외하고는 품질 체크를 생략하였다 (CFU, pH, 정자 세포 체크).
염증성 단백질 분석
박테리아 질염 (BV) 관련 및 장내미생물불균형 질 미생물군은 여러 전-염증성 시토카인, 예컨대 IL-1a, IL-1b, IL-8, IL-12, IL-18, 및 FMS-관련 티로신 키나제 3 리간드 (FLT-3L), 뿐만 아니라 매트릭스 메탈로프로테이나제 (MMP)의 증가된 농도와 연관되었다. 스크리닝 코호트에서 무증상 및 장내미생물불균형, 또한 건강한 여성의 염증 상태를 조사하기 위해, O-link 분석 (BioXpedia, 덴마크 오르후스)을 수행하였다. O-link는, 항체-연결 올리고뉴클레오티드를 사용하여 단백질 상에서 qPCR이 수행되는, 매우 특이적인 표적화된 프로테오믹스 방법이다. 92개의 염증 마커를 정량화하기 위해 여기에서 사용된 염증 패널과 같이 다양한 서브세트를 표적화하는 다중-웰 플레이트의 상이한 패널이 이용가능하다.
스크리닝 코호트에서 장내미생물불균형 및 건강한 그룹 사이에 염증성 단백질 마커를 기반으로 한 명확한 분리가 관찰되었다 (도 11a). 장내미생물불균형 샘플과 클러스터링된 단지 하나의 건강한 미생물 샘플은, 예를 들어, 칸디다와 같은, 박테리아 메타게놈 시퀀싱에 의해 포착되지 않는 미확인 감염으로 인한 것일 수 있다 (이 데이터는 사전-부인과 검사 및 병원체 스크린에서 생성되었으며, 모든 여성이 무증상이었음). Th1 시토카인 (IFNγ, IL-12), 선천적/염증조절복합체 관련 시토카인 (IL-1, IL-18), 및 메탈로프로테이나제 (예를 들어, MMP-10)에 속하는, IFNγ, IL-1α, IL-12, IL-18, 및 MMP-10 등의, BV에서 상향조절되는 것으로 알려진 여러 전-염증성 시토카인 (참조문헌 및 도 11b 참조)이 또한 장내미생물불균형 참가자에서 상향조절되었다. 수평선은 중앙값을 나타낸다.
실시예 9: 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여는 질 틈새의 염증성 상태를 감소시킴
본 실시예는 국소 염증 상태의 감소에 의한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여에 의해 유도된 장내미생물불균형 질 마이크로바이옴의 변화를 기재한다.
바이오마커 분석을 위한 공여자 및 수용자 CVS의 바이오뱅킹
여러 시점에, 수용자 2로부터 채취한 CVS 샘플을 Olink 염증성 바이오마커 분석에 사용하였다. 샘플을 실시예 8에서의 스크리닝 코호트의 바이오뱅킹 샘플과 동일한 방식으로 프로세싱하였다. 각각의 공여자에 대하여, 수용자 2에 사용된 것을 포함하여, 제5 방문 을 투여에 사용하지 않았고 대신에 바이오뱅킹 방법에 따라 프로세싱하였다. 이는 바이오뱅킹의 유일한 목적을 위해 다수의 분취량을 산출하였다.
염증성 단백질 분석
Olink 플레이트 사이의 배치 간 변동 없이 수용자 2의 샘플을 장내미생물불균형 및 건강한 질 마이크로바이옴 샘플과 비교할 수 있도록, 스크리닝으로부터의 샘플의 서브세트 (샘플 이용가능성 기반)를 수용자 샘플과 동일한 Olink 염증 플레이트 상에서 다시 실행하였다. 수용자 2에 사용된 공여자의 바이오뱅킹 샘플을 동일한 플레이트 상에서 실행하였다.
재-실행 스크리닝 코호트 샘플의 서브세트는 다시, 장내미생물불균형 및 건강한 그룹 사이에 염증성 단백질 마커를 기반으로 한 명확한 분리를 나타내었다 (도 12a). 공여자 바이오뱅킹 샘플은 건강한 / 락토바실러스-지배적 스크리닝 샘플과 함께 클러스터링되었다. 투여-전, 즉 수용자에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여 전에, 수용자 2의 샘플은 장내미생물불균형 샘플과 클러스터링되었고 공여자 뿐만 아니라 건강한 코호트로부터 분리되었다 (도 12a). 수용자에 대한 제제의 투여 1개월 후, 수용자의 마이크로바이옴은 건강한 코호트와 클러스터링되었고, 이는 건강한 대상체를 나타내는 솔리드 원과 가깝게 근접하여 있는, 도 12a의 PCA 플롯에서의 "1m 후" 데이터 포인트에 의해 볼 수 있다. 따라서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여는 수용자의 질 마이크로바이옴을 장내미생물불균형 마이크로바이옴으로부터 건강한 공여자의 마이크로바이옴을 향해 전환시켰다 (도 12a). 투여-후 및 공여자 점은 정확히 겹치지 않고, 이는 Olink에 대해 검정되고 수용자에 대한 투여에 사용된 공여자 샘플의 약간의 차이에 기인할 수 있다 (동일한 공여자이지만 공여 날짜 및 제제가 상이함). 또한, 건강한 공여자 마이크로바이옴은 그의 락토바실러스의 상대적 양에서도 변동하기 때문에 (도 6a-c 참조), 공여자와 수용자 사이에 약간의 변동이 예상된다.
이용가능한 데이터 포인트의 적은 수에 의해 제한됨에도 불구하고, 장내미생물불균형 및 건강한 코호트에서 차등적으로 발현된 선택된 BV-관련 전-염증 마커 (도 11b)는 변하지 않았거나 투여-후 하향조절되는 경향을 나타내었고 (도 12b), 이는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여에 의한 장내미생물불균형의 치료가 질강에서의 국소 염증을 치료하거나 개선할 수 있음을 시사한다.
실시예 10: 임상 연구
본 실시예는 질 장내미생물불균형의 치료제로서 본원에 제공된 바와 같은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 사용 효능을 평가하는 것을 목표로 하는 2개의 임상 연구를 기재한다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제로의 치료 결과로 질 마이크로바이옴에서의 전환을 탐색하고 맵핑하는 2개의 임상 연구를 수행한다.
제1 연구의 주요 목적은, 건강한 공여자로부터, 질 면봉 샘플의 메타게놈 시퀀싱으로부터 정의된 기준을 기반으로 하여 질 장내미생물불균형을 갖는 것으로 스크리닝된 건강한, 무증상 지원자 여성까지, 3개의 순차적 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 용량의 효과를 평가하는 것이다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여는 연속 3일로 상이한 3회 방문에서 3회 수행될 것이며, 대상체 및 그의 질 마이크로바이옴은 제1 용량 후 대략 6개월까지 추적된다. 연구는 18 - 45세의 건강한 지원자 여성 n=40에서의 단일-현장, 무작위, 이중-맹검, 위약-대조, 2-아암(arm), 병렬-그룹 연구이다. 이는 총 11회 연구 방문을 포함한다 (도 14).
제2 연구의 주요 목적은, 건강한 공여자로부터, 질 면봉 샘플의 메타게놈 시퀀싱으로부터 정의된 기준을 기반으로 하여 질 장내미생물불균형을 갖는 것으로 스크리닝된 건강한, 무증상 또는 유증상 여성 지원자까지, 후속 조치 방문에 의해 분리된 최대 3개의 개별 용량의 효과를 평가하는 것이다. 단일 용량으로의 치료는 후속 조치 방문에 의해 분리되어 최대 3회 수행되며, 대상체 및 그의 질 마이크로바이옴은 제1 용량 후 대략 6개월까지 추적된다. 각각의 용량을 수용자의 장내미생물불균형 마이크로바이옴의 성공적인 전환에 대하여 개별적으로 평가한다. 제2 용량은, 제1 투여가 제1 투여량 후 후속 조치 방문에서 제1 용량이 질 마이크로바이옴을 건강한, 락토바실러스-지배적 분류학적 프로파일로 성공적으로 전환시키지 못했다고 결정되는 경우에만 투여한다. 유사하게, 제2 투여 후 후속 조치 방문에서 장내미생물불균형 질 마이크로바이옴이 유지된 것으로 나타난 경우에만 제3 투여를 수행한다. 이 연구는 18 - 40세의 건강한 지원자 여성 n=48에서의 단일-현장, 무작위, 이중-맹검, 위약-대조, 2-아암, 병렬-그룹 연구이다. 이는 총 10회 연구 방문을 포함한다 (도 16).
조사용 생성물은 대략 1,4-1,8 mL의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 함유하는 저온바이알이다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 얻기 위해 사용된 공여자는 본원에 기재된 스크리닝 및 후속 조치 절차를 거쳤다. 시험 생성물과 유사하나 대략 1.3 ml의 멸균 식염수 용액만을 함유하는 참조 생성물 (위약)이 제공된다.
시험은 참가에 대한 모든 기준을 체크하고 질 면봉을 채취하여 사전-정의된 장내미생물불균형 기준이 메타게놈 시퀀싱 (하기 참조)을 기반으로 하여 충족되는지의 여부를 체크하는 스크리닝 방문을 포함한다. 모든 기준이 확인되면, 베이스라인 방문인 방문 2는 각각의 개별 대상체의 다음 월경 주기 중 제8일 (연구 1) 또는 제10일 (연구 2)쯤에 수행되도록 예정된다. 베이스라인 평가 이외에, 대상체는 "활성"인 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 또는 "위약" 아암으로 3 (활성) : 1 (위약)의 비율로 무작위화되고, 제1 용량이 주어진다. 연구 1에 대하여, 방문 2, 3 및 4 (방문 2와 동일한 월경 주기에서 제8, 9 및 10일에 수행됨)는 총 3개 용량에 대하여 각각 1개 용량을 수용하는 것으로 이루어진다. 연구 2에 대하여, 투여 1이 작용하지 않은 경우에 참가자의 주기에서 제10일에 제2 용량이 주어진다. 투여 2가 작용하지 않은 경우에 참가자의 주기의 제10일에도 방문 6에서 투여 3이 수행된다.
전체적으로, 연구 1에 대하여, 최종 용량 후 최대 6개월의 기간 동안 7회 후속 조치 방문 (방문 5-11)이 수행되도록 예정된다. 연구 2에 대하여, 제1 용량 후 최대 6개월의 기간 동안 총 3회 후속 조치 방문 (방문 7-9)이 수행되도록 예정된다. 모든 후속 조치 방문은 방문 사이에 1회 월경 주기를 갖는 대상체의 월경 주기에서 제8일 (연구 1) 또는 제10일 (연구 2)쯤에 일어나도록 예정된다. 모든 후속 조치 방문에서, 질 샘플에서의 미생물군의 메타게놈 시퀀싱 평가를 수행한다.
포함 자격을 얻기 위해, 참가자는 하기 기준을 모두 충족해야 한다:
서면 동의를 제공할 수 있고 제공할 의향이 있음.
≥18 내지 ≤45 (연구 1) 또는 ≥18 내지 ≤40 (연구 2).
조사자에 의해 결정시 일반적으로 건강함.
임의의 질 증상을 갖지 않음 (단지 연구 1).
폐경기 이전.
질 장내미생물불균형의 하기 사전-정의 기준을 충족함: 질 샘플의 메타게놈 시퀀싱을 기반으로 하여 합계 락토바실러스 상대적 풍부도 10% 미만 및 가르드네렐라 + 아토포비움 + 프레보텔라의 합계 상대적 풍부도 20% 초과.
알려진 길이의 규칙적이고 예측가능한 월경 주기를 갖거나 장기-작용 프로게스틴 또는 호르몬 피임약의 사용으로 인해 적어도 3개월 동안 무월경 상태를 가졌음.
개인의 의료, 성, 및 행동 이력에 관한 질문을 받을 의향이 있음.
SCVMP로의 3회 또는 최대 3회 치료를 받을 의향이 있음.
진료소에서 자궁경부질 분비물 및 질 면봉 샘플을 자가-수집할 의향이 있음.
치료 후 적어도 1회 월경 주기 길이 (28일) 동안 보조 살정제 또는 윤활제를 사용하지 않고, 콘돔을 사용하지 않는 한, 질 성교를 금할 의향이 있음.
치료 후 적어도 1회 월경 주기 길이 (28일) 동안 목욕, 수영, 온수 욕조에 앉기, 끈 팬티 착용을 피할 의향이 있음.
치료 후 적어도 1회 월경 주기 길이 (28일) 동안 삽입형 여성용 질 제품 (예를 들어, 탐폰, 월경 컵, 섹스 토이), 질 세정 제품, 살정제, 윤활제, 또는 연구 조사자가 승인하지 않은 다른 질 제품을 사용하지 않을 의향이 있음.
연구 참가 기간에 임신되길 원하지 않고 연구 참가 기간에 성교 동안 콘돔을 사용할 의향이 있음 (단지 연구 2).
하기 기준 중 임의의 것의 존재는 참가자를 연구로부터 배제한다:
장기-작용 프로게스틴 또는 호르몬 피임약을 사용하는 것 이외에 알려진 또 다른 원인 없이 연속 12개월 초과의 무월경으로서 정의되는, 폐경기 이후인 참가자.
임신, 모유 수유 중이고/거나 지난 2개월 이내에 임신한 참가자, 또는 연구 2의 경우 향후 6개월 내에 임신할 계획/희망이 있는 참가자.
연구 1에 대하여, 현재 임신 가능성이 있지만, 효과적인 피임 방법을 사용하지 않는 참가자의 경우:
a. 치료 2주 전, 임상 시험 전반에 걸쳐, 후속 조치 절차 완료까지 또는 참가자가 연구를 조기에 중단한 경우 연구 참가 중단 후 2주 동안 성교를 완전히 금지. (이 방법을 활용하는 참가자는 성적으로 활동성이 되어야 하는 경우 대안적 피임 방법을 사용하는 데 동의해야 하며 최종 방문을 위해 이들이 진료소에 나타날 때 이전 2주 동안 금욕했는지의 여부에 대한 질문을 받을 것임).
b. 스크리닝 방문 전에 수술로 불임 수술을 받은 남성 성 파트너를 갖고 그 참가자의 유일한 남성 성 파트너임.
c. 살정제, 기계적 장벽 (예를 들어, 남성용 콘돔, 여성용 피임판), 또는 피임약 환제와 같은 허용가능한 피임 방법의 사용. 참가자는 연구 종료 후 적어도 1주 동안 이 방법을 사용해야 함.
d. 가장 높은 예상 실패율이 연간 1% 미만임을 보여주는 공개된 데이터를 갖는 임의의 비-호르몬 자궁내 장치 (IUD) 또는 피임 임플란트의 사용. 참가자는 제1 스크리닝 방문 3개월 전에, 연구 전반에 걸쳐, 또한 연구 종료 2주 후에 장치를 삽입해야 함.
동성 관계에 있는 여성, 또는 연구 전반에 걸쳐 다른 여성과 성 관계를 맺을 가능성이 있는 여성 (단지 연구 1).
HIV/AIDS 또는 다른 면역결핍증을 갖는는 참가자.
HIV, 클라미디아, 임질, 미코플라스마 제니탈리움, 및/또는 트리코모나스 바지날리스; 및 연구 2에 대하여 또한 및/또는 소변 hCG에 대한 스크리닝에서 양성으로 시험된 참가자.
조사자의 의견으로 현재 임상시험 참가가 금지되는 치료를 필요로 하는 질 칸디다 감염을 갖는 참가자 (단지 연구 1).
참가자는 실험 약물과 관련된 치료를 수용하고 있지 않을 수 있음. 참가자가 최근 실험 시험에 참가한 경우, 이들은 본 연구의 30일 이상 전에 완료되어야 했음.
스크리닝 전 최종 2개월 이내에 자궁경부에 대한 외상과 관련된 일종의 시술 (즉, IUD 제거, 자궁경부 냉동요법, 또는 자궁경부 레이저 치료)를 받은 참가자.
연구 동안 항생제 치료를 필요로 할 가능성이 있음을 시사하는, 정기적인 항생제 사용을 필요로 하는 임의의 공지된 병태를 갖는 참가자.
스크리닝 전 마지막 달 이내에 전신 및/또는 질 적용 항생제 사용 (단지 연구 1).
조사자의 의견으로 참가자가 연구를 준수할 가능성이 낮게 하거나 그녀의 참가로부터 데이터 해석을 복잡하게 만드는 사회적, 의학적, 또는 정신과적 병태를 갖는 참가자.
조사자의 의견으로 참가자가 연구를 준수할 가능성이 낮게 하거나 그녀의 참가로부터 데이터 해석을 복잡하게 만들 수 있는 약물 또는 알콜 남용의 병력을 갖는 참가자 (단지 연구 1).
조사자의 의견으로 참가에서 배제시키는 부인과 암 병력, 부인과 질환, 또는 수술 부인과 병력을 갖는 참가자 (단지 연구 1).
조사자의 의견으로 참가에서 배제시키는 스크리닝 검사의 비정상적 소견을 갖는 참가자.
연구 1과 동일하지만, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제에 추가로 항생 작용제를 추가로 투여하는 변형된 임상 시험을 도 15에 나타내었다.
예비 결과
2개 연구에 걸쳐, 질 마이크로바이옴을 장내미생물불균형으로부터 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 투여에 사용된 공여자 샘플과 유사하거나 거의 유사한 분류학적 프로파일을 갖는 락토바실러스-지배적 건강한 질 마이크로바이옴으로 전환하는 데 있어 하기 성공률이 관찰되었다. 데이터는 수용자의 피임 방법에 따라 계층화되었으며 활성 개입으로 무작위화된 수용자 (위약 수용자가 아님)에 대해서만 나타내었다 (표 6).
표 6.
비-IUD 호르몬 피임을 사용한 8명의 치료된 장내미생물불균형 대상체 중, 3명 (38%)은 장내미생물불균형 질 마이크로바이옴으로부터 건강한 질 마이크로바이옴으로 성공적으로 전환되었다. 유사하게, 임의의 호르몬 피임을 사용하지 않은 9명의 치료받은 장내미생물불균형 대상체 중 3명 (33%)은 장내미생물불균형 질 마이크로바이옴으로부터 건강한 질 마이크로바이옴으로 성공적으로 전환되었다. 따라서, 이들 두 그룹에서 17명 중 총 6명의 대상체 (35%)는 장내미생물불균형 질 마이크로바이옴으로부터 건강한 질 마이크로바이옴으로 성공적으로 전환되었다. 자궁 내 장치 (IUD)를 착용한 모든 7명의 장내미생물불균형 대상체는 그의 장내미생물불균형 질 마이크로바이옴을 되돌리는 데 있어 성공하지 못하였다. IUD를 사용하는 7명의 참가자 중, 4명은 호르몬 IUD 브랜드 Mirena를 가졌고, 1명은 호르몬 IUD 브랜드 Jaydess를 가졌고, 1명은 알려지지 않은 호르몬 IUD 브랜드를 가졌고, 1명의 참가자는 또한 알려지지 않은 브랜드를 갖는 구리 IUD를 가졌다. 데이터는, 적어도 치료 동안 IUD를 사용하지 않는 수용자에 대하여, 약 1/3의 대상체가 실질적으로 완전한 질 마이크로바이옴 제제를 사용하여 성공적으로 치료되었음을 시사한다. 이 성공률은 항생제로의 (사전-)치료의 부재 하에서도 달성되었다. 이는, (본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 마이크로바이옴 제제의 투여에 의한) 장내미생물불균형의 성공적인 치료가 항생제 및 그의 사용과 관련된 악영향의 부재 하에 실행가능함을 시사한다.
실시예 11: 시뮬레이션된 질액을 사용한 다양한 투여량 제형의 다중파라미터 평가
형성 겔, 동결건조 겔, 정제, 및 필름을 포함한, 본원에 기재된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 제형화하기 위해 다양한 적합한 투여 형태를 평가하였다. 적합한 투여 형태를 달성하기 위해, 만니톨, 미세-결정 셀룰로스, 뮤신 (돼지, Sigma), 히알루론산 (Sigma), 말토덱스트린, 구아 검 (Sigma), 이눌린 (Sigma), 알긴산 (알긴산나트륨, Dupont), 폴리비닐 알콜 (PVA Parteck SRP 80, Merck), 나트륨 CMC (Ac-Di-sol, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, DuPont), 폴리비닐피롤리돈 (Kollidon (PVP), BASF), 히드록시프로필 메틸셀룰로스 (Methocel K4M (HPMC), Colorcon), 폴록사머 (폴록사머 407 (Kolliphor), BASF), 카르보폴 (카르보폴 934, Serva), 락트산, 및 아세테이트 완충제를 포함한 다수의 부형제를 평가하였다.
기본 제형
예를 들어, 히알루론산, 알긴산나트륨, HPMC / PVP, 및 폴록사머 407을 포함한 부형제를 사용하여 형성 겔을 제조하였다. 겔을 pH 조정하여 pH 약 pH 3.4 - pH 3.9를 유지하였다. 락트산 및 아세테이트 완충제의 조합을 평가하였다.
예를 들어, 미세결정 셀룰로스, HPMC / PVP, 말토덱스트란, 및 폴록사머 407을 포함한 벌크화 작용제 등의 부형제 및 압축을 사용하여 정제를 제조하였다. 점막부착성 및/또는 겔화가 개선되는지의 여부를 결정하기 위해 동결건조 부형제를 또한 평가하였다. 락트산 및 아세테이트 완충제 염의 조합을 포함에 대해 평가하였다. 과도한 파손의 부재 및 우수한 가공성을 보장하기 위해, 정제 인장 강도는 약 1.0 MPa로 표적화되었다. 재구성된 정제의 pH에 대한 표적 (예를 들어, 질강 내부에서)은 약 pH 3.4 - pH 3.9였다. 낮은 액체 부피 환경에서 (예를 들어, 질강 내부에서)의 붕해 프로파일을 또한 평가하였다.
동결건조 겔의 경우, 예를 들어 히알루론산, 알긴산나트륨, HPMC / PVP, 및 폴록사머 407을 포함한 다수의 부형제를 동결건조시켰다. 모든 겔을 pH 조정하여 pH 약 pH 3.4 - pH 3.9를 유지하였다. 락트산 및 아세테이트 완충제의 조합을 평가하였다. 표적 동결건조 외관은 깨끗하고 균일한 케이크였다. 표적 물 함량은 일반적으로 3% w/w 물 미만이었다 (예를 들어, 약물 물질의 생존능 증가를 위해). 바이알에서의 표적 재구성 시간은 수동 스월링으로 2분 미만이었다.
다양한 농도의 필름 (공기-건조된) PVA를 평가하였다. 예를 들어, PVA에 나트륨 CMC 및 다른 부형제를 보충하여 건조 시간, 필름의 최종 가요성, 점막부착성 등을 개질시켰다. 락트산 및 아세테이트 완충제의 조합을 평가하고, 시뮬레이션된 질액에서의 침지에 대한 pH 효과를 평가하였다. 표적 필름 특성은 (예를 들어, 질관에 대한) 적용을 위한 충분한 가요성, 비-점착성, 프로세싱 용이성을 위한 허용가능한 건조 시간, 적합한 필름 두께, 및 낮은 액체 부피 환경에서의 (예를 들어, 질강 내부에서) 붕해 프로파일, 뿐만 아니라 약물 물질의 효과적 방출 및 생착을 포함하였다. 재구성된 필름의 pH에 대한 표적 (예를 들어, 질강 내부에서)은 약 pH 3.4 - pH 3.9였다.
점도 (예를 들어, 37℃에서, 예를 들어, 질강 내부에서)의 최적화, 점막부착성 (예를 들어, 상피, 점막 표면에 대한, 예를 들어, 질강 내부에서)의 향상 및/또는 약물 물질 안정성 (예를 들어, 제형화 및 저장시 박테리아 생존능)에 대한 긍정적 영향에 대해 모든 성분을 평가하였다. 이상적 제형은 적합한 수직 표면 상에서 유동을 거의 내지 전혀 나타내지 않고, 제형화시 및 (장기간) 저장 동안 높은 박테리아 생존능 (예를 들어, CFU 수)을 유지한다.
평가된 제형화 선택 파라미터는 다음을 포함하였다: (예를 들어, 질관 내에서, 재구성된 생성물의) 점막부착성; (재구성된 생성물의) 점도, 예를 들어, 겔-기반 생성물에 대한 최종 점도는 주변 온도에서 시린지 주사가능해야 하고 바람직하게는 37℃에서 (체온에서, 예를 들어 질관에서) 응고되어야 함; 예를 들어, 이상적으로 생리학적 농도 (약 0.5 - 1.0 mg/mL)에서 또는 그 미만에서, (재구성된 생성물의) 총 당 함량; 재구성된 생성물의 부피, 예를 들어, 최대 3 mL; (예를 들어, 겔/매트릭스)의 수화 속도 / 붕해 속도, 예를 들어, 요망되는 방출 속도를 제공하기 위해 충분한 물리적 온전성; pH, 예를 들어, 약 pH 3.4-3.9 (예를 들어, 경쟁적 질 박테리아의 억제를 촉진하기 위해); (예를 들어, 건조된 제형)의 물 활성 / 수분 함량, 예를 들어, 0.5 - 3% 물 (예를 들어, 장기간 건조된 제형 안정성에 대하여); 미생물 다양성, 예를 들어, 락토바실러스 종, 예컨대 엘. 크리스파투스, 엘. 가세리, 엘. 젠세니이, 및 엘. 이너스의 상대적 풍부도; 총 용량 / 역가, 예를 들어, 바람직하게는 투여 당 (용량 당) 1x105 CFU/VCC 초과, 1x106 CFU/VCC 초과, 1x107 CFU/VCC 초과, 또는 1x108 CFU/VCC 초과, 다양한 온도에서의 저장 수명 (재구성되지 않음), 및 미생물 제한, 예를 들어, 미생물, 예컨대 슈도모나스 아에루기노사, 칸디다 알비칸스, 스타필로콕쿠스 아우레우스의 부재, Ph Eur 기준 5.1.4, 2.6.12 & 2.6.13).
다음을 포함한 표준 검정: 플레이트 수 (예를 들어, MRS 아가) 또는 생존 세포 수 (VCC, 예를 들어, 형광 염색을 사용한 Quantom Tx 자동화 카운팅 시스템 (AM620) 사용), 예를 들어, 생존 박테리아 수, 용량 결정, 저장 수명; 예를 들어, 점막부착성 및 점도에 대한 레오미터, pH 계량기, 칼 피셔 / 물 활성 계량기, 예를 들어, 미생물 로드에 대한 Ph Eur 시험을 사용하여 시험을 수행하였다.
겔 제형
겔 제형을 하기 부형제와 함께 제조하였다:
0.5% 및 2%의 히알루론산
HPMC + 카르보폴 + PVP
폴록사머 20% + 알긴산나트륨 2%
PVA 3% + NaCMC 2%
폴록사머 20% + 구아 검 2%
0.5% 및 2%의 구아 검
뮤신 5%
이눌린 8%
히알루론산 0.5%, HPMC Kollidon 25+ 카르보폴, 구아 검 0.5%, 시뮬레이션된 점액 및 이눌린에 대하여 56 mm 유리 슬라이드 상에서 0.5 mL로 주변 온도에서 중력 하에 유량 (점도, mPa x sec / 전단 속도 1/sec)을 결정하였다. 얻어진 값은 제형에 따라 0 내지 3의 전단 속도에서 300 내지 1x107 mPa x sec 내지 100 1/sec의 전단 속도에서 7,000 mPa x sec의 범위였다. 구아 검 (0.5%) 및 히알루론산 (0.5%)은 겔을 형성하는 것으로 보이지 않았고, 이는 낮은 점도를 제공하였다. 15 내지 45℃의 온도에 대한 점도 (10s-1의 고정 전단 속도)를 또한 결정하였다. 폴록사머는 약 25℃ (약 10,000 내지 12,000 mPa x sec)에서 점도가 증가하면서 열-가역적 겔화 거동을 나타낸 반면, 다른 제형은, 제형에 따라, 15℃에서 약 500 내지 12,000 mPa x sec 내지 45℃에서 약 200 내지 11,000의 다양한 수준으로 그의 점도의 작은 변화를 나타내었다.
다음 단계는 어떠한 겔 베이스가 동결건조되고 재구성되어 허용가능한 겔을 형성할 수 있는지를 평가하는 것을 포함하였다. 균질성을 나타내도록 '케이크'의 외관을 또한 평가하였다.
하기 조성을 갖는 시뮬레이션된 질액 (SVF)을 생성하였다: 10 mL의 물 중으로의, 35 mg의 NaCl, 14 mg의 KOH, 22 mg의 수산화칼슘, 20 mg의 락트산, 10 mg의 아세트산, 1.6 mg의 글리세롤, 50 mg의 글루코스, HCL을 사용하여 pH 4.2로 조정함.
단일 바이알을 사용하여 SVF를 사용한 단일 자궁경부-질 분비물 공여를 시뮬레이션하였으며, 사용된 용량은 전형적인 공여로부터 예상되는 ~0.5 mL 내지 1.5 mL의 범위를 나타내는 것으로 고려되었다. 적합한 부형제를 결정한 후, 1.5 mL의 SVF를 첨가함으로써 이들 부형제를 사용하여 겔을 형성하였다. SVF의 첨가는 pH 균형을 교정하고 부형제 베이스에 대한 실질적으로 완전한 질 미생물 제제의 첨가를 모사하는 것을 허용하였다. 샘플을 바이알 내에서 수동-진탕시켜 균질 겔을 형성하고, 이어서 동결건조시켰다. 일부 부형제는 동결건조-후 허용가능한 외관을 생성하였다. PVA, 구아 검 및 HA는 허용가능한 (투명) 겔을 형성하였고; Kolliphor P 407 (폴록사머 407) 및 Methocel K4M은 백색 결정질 케이크를 형성하였고; 말토덱스트린 및 PVP는 변색 (예를 들어, 황색)을 나타낸 반면, 알긴산나트륨, 뮤신, 및 NaCMC는 변색 (예를 들어, 갈색)을 가지며 불균일한 케이크를 생성하였다. 놀랍게도, 전형적으로 일관적으로 허용가능한 케이크를 형성하는 만니톨은 결정질이었고, 이는 아마도 SVF에서의 염 함량에 기인할 것이다.
생성된 겔을 동결건조 후 1.5 mL의 탈이온수로 재구성하였다. HA, 구아검 및 PVA는 각각 2:30 min, 2:30 min, 및 1:30 min의 재구성 시간으로 쉽게 재구성되었다. HA는 pH 4.6의 균질한 겔을 형성하였다. 구아 검은 pH 4.5의 불균질 겔을 형성하였다. PVA는 pH 4.7에서 일부 거품 발생과 함께 균질한 액체를 형성하였다. PVP, NaCMC, 폴록사머, 알긴산나트륨 및 HPMC는 반-균질 겔을 형성하였다. 모두 재구성하는 데 3분 초과를 필요로 하였다. PVP는 pH 4.1로 천천히 용해되었다. NaCMC는 pH 4.9로 불균질 점성 액체를 형성하였다. 폴록사머는 pH 5.4로 일부 거품 발생을 나타내었다. HPMC는 pH 4.4에서 일부 거품 발생을 갖는 겔을 형성하였다. 알긴산나트륨은 pH 5.5로 불균질하였다. 만니톨은 pH 4.4로 일부 결정이 남아 있는 균질한 액체를 형성하였다.
적용시 약물 생성물의 중력 하에서의 효과를 연구하기 위해 점막부착 시험을 수행하였다. 이를 위해, (예컨대 질강에 존재하는) 점막 표면을 시뮬레이션하였다. 500 mg의 뮤신을 대략 3톤의 압력으로 평평한 2 cm 도구를 사용하여 디스크 a로 압축하였다. 이어서 이들을 기판, 예를 들어 플라스틱 상자의 저부에 부착하였다. 이어서 각각의 디스크를 대략 200 μL의 탈이온수로 습윤화하고 뮤신 표면이 만졌을 때 점착성이 될 때까지 장갑을 낀 손가락으로 문질렀다. 이어서 약 0.5 mL의 샘플 (또는 정제 및 PVA 필름의 경우, 전체 투여량 단위)을 수평 위치로 적용하고, 2분 동안 정치시켰다. 이어서 샘플이 수직 위치에 있도록 상자를 올리고, 구아 검, 폴록사머, 만니톨, PVP, 히알루론산, 알긴산나트륨, CMC, HPMC, 및 PVA 겔 샘플의 부착 특성과 관련하여 가시적 평가 (점막부착 시험)를 수행하였다. 이 시험에서 히알루론산, NaCMC, 알긴산나트륨 및 HPMC가 최선의 점막부착을 나타내었다.
폴록사머가 조기 시험에서 열-가역적 거동을 나타내었기 때문에, 점막부착 시험은 37℃에서 예열된 플라스틱 상자 및 뮤신 디스크 상에서 반복되었다. 형성된 겔은 주변 온도에서보다 더 점성이고, 습윤화된 뮤신 디스크의 표면 상에서 유지됨을 확인하였다. 이는 폴록사머가 체온에서 적합한 점도에 있을 수 있음을 나타낸다.
농도 조정 후에 시린지 주사가능성을 또한 평가하였다: 3% (45mg) 카르보폴, 4% (60mg) 알긴산나트륨, 3% (45mg) HPMC & 1.9% (30mg) 나트륨 CMC, 및 24% (360mg) 폴록사머. 이들을 SVF:락테이트 완충제 혼합물을 사용하여 제조하였다. ~3.4 - 4의 pH 범위에서 락테이트 완충제의 포함은, 예를 들어, 잠재적으로 기존 미생물 틈새에 체류하는 바람직하지 않은 박테리아 분류군의 경쟁을 최소화함으로써, 생체내에서 (예를 들어, 질관 내에서) 락트산 박테리아의 생착을 촉진할 수 있다. 부형제를 1.5mL SVF+락테이트 완충제와 혼합하였다. 카르보폴 및 폴록사머 둘 다, 침강시 분산되는 일부 공기 버블을 가지며 수동 진탕 후에 균질한 겔을 형성하였다. 알긴산나트륨 및 HPMC + Na-CMC는 균질한 겔을 형성하지 않았다.
실질적으로 완전한 질 미생물 제제에 대한 투여 형태로서의 동결건조 겔 포맷은, 예를 들어, 부형제와의 블렌딩 후 동결건조 및 바이알 내 포장에 의해 생성될 수 있다. 이어서 바이알을, 예를 들어 진료소 셋팅에서, 물과 재구성하여 바이알 내에서 겔을 형성한 후, 예를 들어, 어플리케이터, 예컨대 시린지를 사용함으로써, 재구성된 약물 생성물을 적용하여, 실질적으로 완전한 질 미생물 제제를 포함하는 조성물을 대상체의 질관에 투여할 수 있다.
동결 겔은 (임의로 적합한 락테이트 완충제와 함께) 겔화 부형제와 블렌딩된 실질적으로 완전한 질 미생물 제제에 대한 투여 형태를 기술하며, 이어서 액체 겔 형태가 동결 (-80℃에서)되고 바이알 또는 사전-충전된 시린지 내에 저장된다 (예를 들어, 도 13 참조).
정제 평가
겔에 추가로, 정제-페서리가 추가의 투여 형태로서 생성되었다. 임의로 개개의 자궁경부-질액 공여로부터 제조된 단일 정제를 가질 것을 목표로 하며, 하기 측면이 고려되었다: 정제 형성을 위한 압축 및 동결건조, 뿐만 아니라 허용가능한 수준의 점막부착성을 제공하기 위한 적합한 부형제 선택, 약 pH 3.5-4의 pH 표적을 갖는 락테이트 완충제의 임의적 포함. (예를 들어, 추가 프로세싱을 위해 합리적으로 자유-유동하는 분말을 형성하기 위해) 허용가능한 겔 형성 및 허용가능한 동결건조 둘 다를 생성한 평가된 부형제 모두를 (추가의 부형제와 함께) 수동 정제 프레스 상에서 정제화 품질에 대하여 평가하였고, 이는 카르보폴, HPMC, 젤라틴, 알긴산나트륨, 폴록사머, NaCMC, 및 펙틴을 포함하였다. 정제를 5.5 mm 도구로 약 1 톤으로 압축하여 정제를 형성하였다. 습윤화된 뮤신 디스크에 정제를 온화하게 첨가하고, 상기에 기재된 바와 같이 점막부착을 평가하였다.
모든 정제는 5분이 넘는 동안 부착되어 유지되었다. 부착성의 영향을 평가하기 위해 정제를 1분마다 헹구었다. NaCMC는 겔로 팽윤되기 시작했다. 카르보폴, HPMC, 알기네이트, NaCMC의 정제는 충분한 정제 온전성을 나타내었다. 폴록사머는 정제를 형성하였지만 상대적으로 낮은 강도를 가졌다. 펙틴 및 젤라틴 정제는 낮은 경도 및 일부 취성을 나타내었다.
중합체 필름
필름 형성/주조는 살아있는 생물학적 물질의 생존능을 보존하는 잠재적인 경로이다. 이를 조사하기 위해, 하기 부형제 시험 샘플을 생성하였다:
PVA 3%
PVA 20%
PVA 3%, NaCMC 2%
PVA 20%, NaCMC 5%
모든 샘플을 필요에 따라 혼합하여 겔/필름을 만들고 플라스틱 블리스터 팩 (크기 0)으로 옮기고 경화를 위해 약 48시간 동안 주변 조건에서 저장하였다.
3% PVA를 함유하는 두 샘플 모두 적합한 필름을 형성하지 않았다. NaCMC를 함유하는 필름은 취성을 나타내었고, 블리스터 몰드로부터 제거하기 어려웠다. 20% PVA 샘플은 필름을 형성하였고, 블리스터 몰드로부터 용이하게 제거될 수 있었다. 필름은 가요성이고 인열 저항성이었다.
실질적으로 완전한 질 미생물 제제를 포함하는 필름 형성이 가능한지의 여부를 평가하기 위해, 필름 제제에 대한 '샌드위치' 접근을 시도하였다. 이는 평평한 디스크 디자인의 금형을 생산하기 위해 위로 향한 Karl Fischer 뚜껑 (PTFE 라이닝을 가짐)에서 수행하였다. 12% PVA 용액 (이전 20%로부터의)을 사용하여 초기 점도를 감소시켰고, 이는 피펫을 통해 보다 일관된 샘플 제제를 허용한다. 제조는 하기와 같이 수행되었다:
0.25 mL의 12% PVA를 각 몰드 내에 피펫팅한 후 0.5 mL의 SVF를 피펫팅하였다 (실질적으로 완전한 질 미생물 제제를 시뮬레이션하기 위해). 또 다른 0.25 mL의 12% PVA를 상단에 피펫팅하여 '샌드위치'를 완성하였다. 몰드를 방치하여 고화되도록 하였다.
약 48시간 후, 디스크가 형성되었고, 이는 가요성이고 PTFE 라이닝 상에 명백한 잔류물이 남지 않았다. 이는 PTFE가 성형에 적합한 물질일 수 있으며 필름이 이 표면으로부터 용이하게 회수될 수 있음을 시사한다.
필름을 뮤신 디스크에 온화하게 첨가하고 상기에 기재된 바와 같이 점막부착을 평가하였다. PVA 디스크는 뮤신 표면으로부터의 움직임을 나타내지 않았고, 이는 우수한 점막부착을 나타낸다. 5분 후 약 2 mL의 SVF의 세척을 수행하였고, 이는 뮤신 표면으로부터 PVA 디스크를 변위시키지 않았다.
표 7: 제형 요약:
++ 투여 형태에 적합
+ 투여 형태에 잠재적으로 적합
- 투여 형태에 적합하지 않음
실시예 12: 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 투여 형태의 제형화
시뮬레이션된 질액을 사용한 제형화 작업 (실시예 11) 및 수행된 생존능 시험 (데이터는 나타내지 않음)으로부터 얻어진 부형제 데이터를 기반으로 하여, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 (SCVMP)를 함유하는 다수의 제형을 생성하였다.
동결건조 겔 1 :
제형은 NaCMC 및 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하였고, 이를 동결건조에 적용하였다.
30 mg의 NaCMC를 칭량하고 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 SCVMP를 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 mL 락테이트 완충제를 사용하여 헹구고 임의의 잔류 SCVMP를 그의 바이알로부터 꺼내고 이어서 이를 동결건조 바이알로 옮겼다. 바이알을 캡핑하고 수동 스월링하여 균질한 겔을 형성하였고, 이어서 이를 냉동-건조시켰다.
동결건조 겔 2 :
제형은 폴록사머 및 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하였고, 이를 동결건조에 적용하였다.
240 mg의 폴록사머 407를 칭량하고 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 SCVMP를 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 mL 락테이트 완충제를 사용하여 헹구고 임의의 잔류 SCVMP를 그의 바이알로부터 꺼내고 이어서 이를 동결건조 바이알로 옮겼다. 바이알을 캡핑하고 수동 스월링하여 균질한 겔을 형성하였고, 이어서 이를 냉동-건조시켰다.
동결 겔 1 :
제형은 히알루론산 및 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하였고, 이를 -80℃에서의 동결에 적용하였다.
45 mg의 히알루론산을 칭량하고 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 SCVMP를 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 mL 락테이트 완충제를 사용하여 헹구고 임의의 잔류 SCVMP를 그의 바이알로부터 꺼내고 이어서 이를 동결건조 바이알로 옮겼다. 바이알을 캡핑하고 수동 스월링하여 균질한 겔을 형성하였고, 이어서 이를 -80℃에서 동결시켰다.
동결 겔 2 :
제형은 폴록사머 및 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하였고, 이를 -80℃에서의 동결에 적용하였다.
240 mg의 폴록사머 407을 칭량하고 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 SCVMP를 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 mL 락테이트 완충제를 사용하여 헹구고 임의의 잔류 SCVMP를 그의 바이알로부터 꺼내고 이어서 이를 동결건조 바이알로 옮겼다. 바이알을 캡핑하고 수동 스월링하여 균질한 겔을 형성하였고, 이어서 이를 -80℃에서 동결시켰다.
동결건조 정제 1 :
제형은 NaCMC 및 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하였고, 이를 동결건조에 적용하였다.
30 mg의 NaCMC를 칭량하고 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 SCVMP를 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 mL 락테이트 완충제를 사용하여 헹구고 임의의 잔류 SCVMP를 그의 바이알로부터 꺼내고 이어서 이를 동결건조 바이알로 옮겼다. 바이알을 캡핑하고 수동 스월링하여 균질한 겔을 형성하였고, 이어서 이를 냉동 건조시켰다. 동결건조되면, 물질에 300 mg의 NaCMC를 첨가하고 1 톤으로 압축하였다.
동결건조 정제 2 :
제형은 폴록사머 및 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하였고, 이를 동결건조에 적용하였다.
30 mg의 폴록사머 407을 칭량하고 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 SCVMP를 동결건조 바이알로 옮겼다. 1 mL 락테이트 완충제를 사용하여 헹구고 임의의 잔류 SCVMP를 그의 바이알로부터 꺼내고 이어서 이를 동결건조 바이알로 옮겼다. 바이알을 캡핑하고 수동 스월링하여 균질한 겔을 형성하였고, 이어서 이를 냉동 건조시켰다. 동결건조되면, 물질에 300 mg의 PVP (Kollidon)를 첨가하고 0.5 톤으로 압축하였다.
PVA 필름 디스크
제형은 2개의 PVA 층 (층 당 대략 0.25 mL의 PVA) 사이에 끼워진 12% PVA 및 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하였다.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 제형화 후 t=0에서 생존 세포 수 (VCC)를 결정하였다. 1개월 및 2개월 후의 생존능을 또한 결정하고 VCC 및 CFU 둘 다를 평가한다.
표 8: 제형화 후 t=0에서의 생존 세포 수.
실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 동결건조되고, 예를 들어 겔 및 정제 뿐만 아니라, 예를 들어, 캡슐과 같은 동결건조 생성물로 충전될 수 있는 다른 투여 형태로 제형화될 수 있다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 또한, 동결될 수 있는 겔, 뿐만 아니라 동결될 수 있는 액체 매질 (예를 들어, 글리세롤을 가짐)로 제형화될 수 있다. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제는 또한, 예를 들어 디스크와 같이 성형될 수 있는 (공기-건조된) 필름으로 제형화될 수 있다. 생존능 손실은 부형제 및 투여 형태에 따라 제형화 단계에서 대략 0.5 log 내지 1 log의 범위이다.
참조문헌
열거된 항목
1. a) 조성물을 질강에 투여하기에 적합한 투여 형태, 및
b) 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물
을 포함하며, 여기서 (i) 제제는 락토바실러스 속으로부터의 1 내지 5개의 박테리아 종을 포함하고, (ii) 1 내지 5개의 박테리아 종은 제제의 약 80-99%를 구성하고, 여기서 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 것인, 질 전달 시스템.
2. 투여 형태가 어플리케이터, 디스펜서 또는 좌약인, 항목 1의 질 전달 시스템.
3. 제제가 약 80-99% 락토바실러스 크리스파투스를 포함하는 것인, 항목 1 또는 2의 질 전달 시스템.
4. 제제가 약 80-99% 락토바실러스 이너스를 포함하는 것인, 항목 1 또는 2의 질 전달 시스템.
5. 제제가 약 80-99% 락토바실러스 젠세니이를 포함하는 것인, 항목 1 또는 2의 질 전달 시스템.
6. 제제가 약 80-99% 락토바실러스 가세리를 포함하는 것인, 항목 1 또는 2의 질 전달 시스템.
7. 제제가 약 80-99%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함하는 것인, 항목 1 또는 2의 질 전달 시스템.
8. 제제가 병원체 및 병원균을 실질적으로 갖지 않는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
9. 병원체 또는 병원균이 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 프레보텔라 종 중 하나 이상인, 항목 8의 질 전달 시스템.
10. 제제가 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는 것인, 항목 8의 질 전달 시스템.
11. 제제가 항미생물 내성 (AMR) 유전자를 실질적으로 갖지 않는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
12. 제제가 인간 정자 (스퍼마토조아)를 실질적으로 갖지 않는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
13. 조성물이 살정제를 추가로 포함하는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
14. 조성물이 산성화 작용제를 추가로 포함하는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
15. 조성물이 락트산을 추가로 포함하는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
16. 제제가 글리칸을 포함하는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
17. 상기 글리칸이 점액인, 항목 16의 질 전달 시스템.
18. 제제가 20개 미만의 락토바실러스 속 이외의 종을 포함하는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
19. 조성물이 4.5 이하의 pH를 갖는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
20. 투여 형태가 102 내지 1010 CFU의 락토바실러스를 포함하는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
21. 조성물이 투여 형태 중에 분산된 또는 제형화된 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
22. 투여 형태가 멸균 포장된 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
23. 어플리케이터 또는 디스펜서가 질강으로의 삽입을 위한 개방 단부 (예를 들어, 팁), 및 조성물을 배출하기 위한 분배 단부 (예를 들어, 플런저 또는 피스톤)를 포함하는 것인, 항목 2의 질 전달 시스템.
24. 제제가 배양-독립적 방법에 의해 얻어진 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
25. 투여 형태가 눈금화된 (예를 들어, 부피 표시 또는 최대 부피 표시 또는 제어를 갖는) 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
26. 투여 형태가 단일 사용 또는 다중 사용 장치인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
27. 투여 형태가 불활성 중합체 물질, 예컨대 폴리스티렌 또는 폴리프로필렌으로부터 디자인된 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 질 전달 시스템.
28. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하며, 여기서 (i) 제제는 락토바실러스 속으로부터의 1 내지 5개의 박테리아 종을 포함하고, (ii) 1 내지 5개의 박테리아 종은 제제의 약 80-99%를 구성하고, 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 것인, 질 투여용으로 제형화된 제약 조성물.
29. 제제가 80-99% 락토바실러스 크리스파투스를 포함하는 것인, 항목 28의 제약 조성물.
30. 제제가 80-99% 락토바실러스 이너스를 포함하는 것인, 항목 28의 제약 조성물.
31. 제제가 약 80-99% 락토바실러스 젠세니이를 포함하는 것인, 항목 28의 제약 조성물.
32. 제제가 약 80-99% 락토바실러스 가세리를 포함하는 것인, 항목 28의 제약 조성물.
33. 제제가 약 80-99%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함하는 것인, 항목 28의 제약 조성물.
34. 제제가 병원체 및 병원균을 실질적으로 갖지 않는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
35. 병원체 또는 병원균이 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종 중 하나 이상인, 항목 34의 제약 조성물.
36. 제제가 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는 것인, 항목 34의 제약 조성물.
37. 제제가 항미생물 내성 (AMR) 유전자를 실질적으로 갖지 않는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
38. 제제가 인간 정자 (스퍼마토조아)를 실질적으로 갖지 않는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
39. 살정제를 추가로 포함하는, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
40. 산성화 작용제를 추가로 포함하는, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
41. 락트산을 추가로 포함하는, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
42. 제제가 글리칸을 포함하는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
43. 상기 글리칸이 점액인, 항목 42의 제약 조성물.
44. 제제가 20개 미만의 락토바실러스 속 이외의 종을 포함하는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
45. 4.5 이하의 pH를 갖는, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
46. 제제가 배양-독립적 방법에 의해 얻어진 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
47. 장치를 사용한 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 조성물의, 해당 투여를 필요로 하는 인간 여성 대상체에 대한 질 투여 방법이며, 여기서 장치는 질강으로의 삽입을 위한 개방 단부 (예를 들어, 팁), 및 개방 단부를 통해 조성물을 배출하기 위한 분배 단부 (예를 들어, 플런저 또는 피스톤)를 포함하고, 방법은
a) 개방 단부를 질강에 도입하는 단계,
b) 조성물을 질강 내로 배출함으로써,
조성물을 질강에 투여하는 단계
를 포함하는 것인, 질 투여 방법.
48. 장치가 항목 2-27 중 어느 하나의 어플리케이터 또는 디스펜서인, 항목 47의 방법.
49. 조성물이 항목 28-46 중 어느 하나의 제약 조성물인, 항목 47의 방법.
50. 조성물의 배출이 질의 점막 또는 자궁내막 표면의 접촉을 포함하는 것인, 상기 항목 중 어느 하나의 방법.
51. 대상체가 그녀의 질 건강 개선을 필요로 하는 것인, 항목 47-50 중 어느 하나의 방법.
52. 대상체에 대한 투여가 대상체가 쇄석술 자세에 있는 동안 수행되는 것인, 항목 47-51 중 어느 하나의 방법.
53. 조성물이, 대상체가 직립 자세에 있을 때 그의 대부분이 적어도 5, 10, 20, 또는 30분 동안 질강에 머무르는 것을 허용하는 적합한 점도를 갖는 것인, 항목 47-52 중 어느 하나의 방법.
54. 장치가 눈금화된 (예를 들어, 부피 표시 또는 최대 부피 표시 또는 제어를 갖는) 것인, 항목 47-53 중 어느 하나의 방법.
55. 장치가 투여 당 약 102 내지 1010 CFU의 락토바실러스를 투여하는 것인, 항목 47-54 중 어느 하나의 방법.
56. 투여가 3-21일 내에 1, 2, 또는 3회 수행되는 것인, 항목 47-55 중 어느 하나의 방법.
57. 투여가 1 내지 6개월의 기간 동안 1 내지 4주마다 1회 수행되는 것인, 항목 47-55 중 어느 하나의 방법.
58. 장치가 단일 사용 또는 다중 사용 장치인, 항목 47-57 중 어느 하나의 방법.
59. 질 점막을 하나 이상의 락토바실러스 종으로 콜로니화하는 것을 추가로 포함하는, 상기 항목 중 어느 하나의 방법.
60. 하나 이상의 락토바실러스 종이 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개인, 항목 59의 방법.
61. 제제가 약 80-99% 락토바실러스 크리스파투스를 포함하는 것인, 항목 59 또는 60의 방법.
62. 제제가 약 80-99% 락토바실러스 이너스를 포함하는 것인, 항목 59 또는 60의 방법.
63. 제제가 약 80-99% 락토바실러스 젠세니이를 포함하는 것인, 항목 59 또는 60의 방법.
64. 제제가 약 80-99% 락토바실러스 가세리를 포함하는 것인, 항목 59 또는 60의 방법.
65. 제제가 약 80-99%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함하는 것인, 항목 59 또는 60의 방법.
66. 제제가 병원체 및 병원균을 실질적으로 갖지 않는 것인, 항목 47-65 중 어느 하나의 방법.
67. 병원체 또는 병원균이 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종 중 하나 이상인, 항목 66의 방법.
68. 제제가 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는 것인, 항목 66의 방법.
69. 제제가 항미생물 내성 (AMR) 유전자를 실질적으로 갖지 않는 것인, 항목 47-68 중 어느 하나의 방법.
70. 제제가 인간 정자 (스퍼마토조아)를 실질적으로 갖지 않는 것인, 항목 47-69 중 어느 하나의 방법.
71. 조성물이 살정제를 추가로 포함하는 것인, 항목 47-70 중 어느 하나의 방법.
72. 조성물이 산성화 작용제를 추가로 포함하는 것인, 항목 47-71 중 어느 하나의 방법.
73. 조성물이 락트산을 추가로 포함하는 것인, 항목 47-72 중 어느 하나의 방법.
74. 제제가 글리칸을 포함하는 것인, 항목 47-73 중 어느 하나의 방법.
75. 상기 글리칸이 점액인, 항목 74의 방법.
76. 제제가 20개 미만의 락토바실러스 속 이외의 종을 포함하는 것인, 항목 47-75 중 어느 하나의 방법.
77. 조성물이 4.5 이하의 pH를 갖는 것인, 항목 47-76 중 어느 하나의 방법.
78. 제제가 배양-독립적 방법에 의해 얻어진 것인, 항목 47-77 중 어느 하나의 방법.
79. 항목 1-46 중 어느 하나의 투여 형태 (a) 및 조성물 (b)를 포함하는 키트.
80. 투여 형태 (a) 및 조성물 (b)가 별도의 멸균 포장 내에 있는 것인, 항목 79의 키트.
81. 투여 형태가 다중-투여 형태인, 항목 79 또는 80의 키트.
82. 투여 형태 (a) 및/또는 조성물 (b)가 다중 용량을 포함하는 것인, 항목 79-81 중 어느 하나의 키트.
83. 투여 형태가 단일 사용 또는 다중 사용 장치인, 항목 79-82 중 어느 하나의 키트.
84. 조성물이 냉동-건조 또는 동결건조된 것인, 항목 79-83 중 어느 하나의 키트.
85. 냉동-건조 또는 동결건조 조성물에 대한 재현탁 매질을 추가로 포함하는, 항목 84의 키트.
86. 여성 공여자의 비뇨생식관 (예를 들어, 질 미생물 틈새) 분비물로부터 유래된 락토바실러스 속으로부터의 1 내지 5개의 박테리아 종을 포함하며, 여기서 1 내지 5개의 박테리아 종은 제제의 약 80-99%를 구성하고, 상기 박테리아 종 중 하나 이상의 종은 여성 수용자의 비뇨생식관에 생착 (예를 들어, 콜로니화)될 수 있는 것인, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
87. 약 80-99% 락토바실러스 크리스파투스를 포함하는, 항목 86의 제제.
88. 약 80-99% 락토바실러스 이너스를 포함하는, 항목 86의 제제.
89. 약 80-99% 락토바실러스 젠세니이를 포함하는, 항목 86의 제제.
90. 약 80-99% 락토바실러스 가세리를 포함하는, 항목 86의 제제.
91. 약 80-99%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함하는, 항목 86의 제제.
92. 제약 조성물 (예를 들어, 항목 28-47 중 어느 하나의 제약 조성물)로서 제형화된, 항목 86의 제제.
93. 항생제, 면역 작용제, 및 호르몬 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 활성 작용제를 추가로 포함하는, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
94. 현탁액, 스프레이, 겔, 크림, 분말, 캡슐, 세척용 용액, 오뷸, 질 삽입물, 탐폰, 정제 또는 마이크로캡슐화 생성물 형태인, 상기 항목 중 어느 하나의 제약 조성물.
95. A. 공여자 여성 비뇨생식관으로부터 미생물군 샘플을 제공하는 단계이며; 여기서 단계 A는 임의로 (1), (2), (3), (4), (5) 또는 임의의 이들의 조합을 포함하는 것인 단계:
(1) 희석제를 미생물군 샘플에 첨가하여 희석된 샘플을 생성하는 단계,
(2) 시험 (예를 들어, 핵산 시퀀싱)을 위해 희석된 미생물군 샘플의 일부를 제거하는 단계,
(3) 미생물군 샘플의 나머지 부분의 냉장 또는 동결을 위해 사전-냉각시키는 단계,
(4) 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 저장하는 단계,
(5) (a) 하나 이상의 전염성 병원체의 실질적 존재를 배제하기 위한 공여자의 시험 (예를 들어, 혈액, 및/또는 자궁경부질 분비물, 및/또는 소변 샘플 시험), (b) 미생물군의 조성 및 생존능의 확인, 또는 (c) 공여-후 30-90일의 기간 내에 일어나는 복수의 사후-스크리닝 시험에 의한 여성 공여자의 건강의 추가 확인의 임의의 조합의 임의의 완료까지 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 유지하는 단계; 및
B. 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리로부터 해제하여 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 정의하는 단계
를 포함하는, 상기 항목 중 어느 하나의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성 방법.
96. 공여자 여성으로부터의 미생물군 샘플이 자궁경부질 분비물인, 항목 95의 방법.
97. 미생물군 샘플이 글리칸을 포함하는 것인, 항목 95 또는 96의 방법.
98. 상기 글리칸이 점액인, 항목 97의 방법.
99. 미생물군 샘플이 적어도 150 mg을 포함하는 것인, 항목 95-98 중 어느 하나의 방법.
100. 미생물군 샘플이 약 80-99% 락토바실러스 크리스파투스를 포함하는 것인, 항목 95-99 중 어느 하나의 방법.
101. 미생물군 샘플이 약 80-99% 락토바실러스 이너스를 포함하는 것인, 항목 95-99 중 어느 하나의 방법.
102. 미생물군 샘플이 약 80-99% 락토바실러스 젠세니이를 포함하는 것인, 항목 95-99 중 어느 하나의 방법.
103. 미생물군 샘플이 약 80-99% 락토바실러스 가세리를 포함하는 것인, 항목 95-99 중 어느 하나의 방법.
104. 미생물군 샘플이 약 80-99%의, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개를 포함하는 것인, 항목 95-103중 어느 하나의 방법.
105. 항목 95의 단계 B가, 미생물군 샘플이 병원체 및 병원균을 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함하는 것인, 항목 95-104 중 어느 하나의 방법.
106. 항목 95의 단계 B가, 미생물군 샘플이 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함하는 것인, 항목 95-105 중 어느 하나의 방법.
107. 항목 95의 단계 B가, 미생물군 샘플이 항미생물 내성 (AMR) 유전자를 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함하는 것인, 항목 95-106 중 어느 하나의 방법.
108. 항목 95의 단계 B가, 미생물군 샘플이 인간 정자 (스퍼마토조아)를 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함하는 것인, 항목 95-107 중 어느 하나의 방법.
109. 항목 95의 단계 B가, 여성 공여자가 하기 중 임의의 하나 이상 (2개 이상, 3개 이상, 또는 4개 이상)을 실질적으로 갖지 않음을 결정하는 것을 포함하는 것인, 항목 95-108 중 어느 하나의 방법: (i) 박테리아 질염과 관련된 박테리아 (예를 들어, 가르드네렐라 종 및 프레보텔라 종), (ii) 효모 (예를 들어, 칸디다, 크림토콕쿠스, 및 사카로미세스 종), (iii) 성 전염 병원체 (예를 들어, 네이세리아 고노레아, 클라미디아 트라코마티스, 및 트리코모나스 바지날리스), (iv) 요로 감염과 관련된 박테리아 (예를 들어, 대장균, 스타필로콕쿠스, 클라미디아, 및 미코플라스마), 및 (v) 바이러스 (예를 들어, HIV, 인간 유두종 바이러스 (HPV), B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, HSV-2), 또는 임의의 이들의 조합.
110. 임의로 항목 1 내지 27 중 어느 하나의 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 복원을 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 항목 28 내지 46 중 어느 하나의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, 건강한 질 미생물군 균형을 복원하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서 건강한 인간 질 미생물군 균형을 복원하는 방법.
111. 여성 대상체가 비뇨생식관에서 장내미생물불균형 미생물군을 나타내고, 건강한 질 미생물군 균형의 복원이 장내미생물불균형의 치료를 제공하는 것인, 항목 110의 방법.
112. 여성 대상체가 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물의 투여 전에 체류하는 장내미생물불균형 미생물군을 실질적으로 감소시키기 위해 유효량의 항미생물 작용제 (예를 들어, 항생제)로 치료되는 것인, 항목 110 또는 111의 방법.
113. 건강한 질 미생물군 균형의 복원이 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물에 의해 제공되는 하나 이상의 종의 콜로니화 및 생착을 포함하는 것인, 항목 110 내지 112 중 어느 하나의 방법.
114. 건강한 질 미생물군 균형의 복원이 하기 중 하나 이상을 포함하는 것인, 항목 110 내지 113 중 어느 하나의 방법: 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물의 투여 전에 동일한 대상체에서 결정된 (a), (b), (c), (d) 또는 (e)의 값과 비교할 때, (a) 비뇨생식관에 체류하는 병원체 및/또는 병원균의 상대적 풍부도의 감소 (예를 들어, 10% 미만의 병원체 및/또는 병원균의 상대적 풍부도), (b) 50% 초과 (60% 초과, 또는 70% 초과)의 락토바실러스의 상대적 풍부도의 증가, (c) 하나 이상의 전-염증 마커의 감소 (예를 들어, 국소 또는 전신), 및/또는 (d) 질 pH의 감소 (예를 들어, 적어도 pH 0.3, 0.5, 1.0, 또는 1.5만큼), 및/또는 (e) 아이슨-헤이 스코어링 시스템을 기반으로 한 등급 변화 (예를 들어, 등급 0 또는 등급 I).
115. 건강한 질 미생물군 균형의 복원이 락트산 생성 박테리아의 하나 이상의 종이 지배적인 (예를 들어, 적어도 50%, 60%, 70% 또는 적어도 80%) 미생물 군집의 생착을 포함하는 것인, 항목 110 내지 114 중 어느 하나의 방법.
116. 락트산 생성 박테리아의 하나 이상의 종이 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리 중 1, 2, 3, 또는 4개로부터 선택되는 것인, 항목 115의 방법.
117. 건강한 질 미생물군 균형의 복원이 약 pH 3.5 내지 4.5의 질관의 pH를 달성하는 것을 포함하는 것인, 항목 110 내지 116 중 어느 하나의 방법.
118. 미생물 군집이, 적어도 1주, 또는 적어도 2, 3, 4주 동안 락트산 생성 박테리아 (예를 들어, 락토바실러스)가 지배적인 상태로 유지되는 것인, 항목 115 또는 116의 방법.
119. 미생물 군집이, 적어도 2, 3, 4, 5 또는 적어도 6개월 동안 락트산 생성 박테리아 (예를 들어, 락토바실러스)가 지배적인 상태로 유지되는 것인, 항목 115 또는 116의 방법.
120. 항생제, 면역 작용제, 및 호르몬 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 활성 작용제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 항목 110 내지 119 중 어느 하나의 방법.
121. 대상체가 백인인, 항목 110 내지 120 중 어느 하나의 방법.
122. 대상체가 아시아인인, 항목 110 내지 120 중 어느 하나의 방법.
123. 대상체가 흑인/아프리카인인, 항목 110 내지 120 중 어느 하나의 방법.
124. 대상체가 히스패닉계인, 항목 110 내지 120 중 어느 하나의 방법.
125. 대상체가 가임기에 있는 것인, 항목 110 내지 124 중 어느 하나의 방법.
126. 대상체가 폐경기 이후에 있는 것인, 항목 110 내지 124 중 어느 하나의 방법.
127. 건강한 질 미생물군 균형의 복원이 항병원성 미생물 틈새/질 환경을 제공하는 것인, 항목 110 내지 126 중 어느 하나의 방법.
128. 건강한 질 미생물군 균형의 복원이 항-염증성 또는 저-염증성 미생물 틈새/질 환경을 제공하는 것인, 항목 110 내지 127 중 어느 하나의 방법.
129. 임의로 항목 1 내지 27 중 어느 하나의 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 항목 28 내지 46 중 어느 하나의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, 장내미생물불균형을 치료하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 장내미생물불균형의 치료 방법.
130. 장내미생물불균형이 비뇨생식관의 감염과 관련되는 것인, 항목 129의 방법.
131. 감염이 (재발성) 박테리아 질염 (BV), 질 칸디다증 및 트리코모나스증 중 하나 이상인, 항목 129 또는 130의 방법.
132. 임의로 항목 1 내지 27 중 어느 하나의 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 항목 28 내지 46 중 어느 하나의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, 염증을 치료하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 (만성) 염증의 치료 방법.
133. 임의로 항목 1 내지 27 중 어느 하나의 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 항목 28 내지 46 중 어느 하나의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, (재발성) 박테리아 질염 (BV)을 치료하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 (재발성) BV의 치료 방법.
134. 임의로 항목 1 내지 27 중 어느 하나의 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 항목 28 내지 46 중 어느 하나의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, 질 칸디다증을 치료하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 질 칸디다증의 치료 방법.
135. 임의로 항목 1 내지 27 중 어느 하나의 질 전달 시스템을 사용하여, 해당 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의, 항목 28 내지 46 중 어느 하나의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, 트리코모나스증을 치료하는 것을 포함하는, 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 트리코모나스증의 치료 방법.
136. 항생제, 면역 작용제 및 호르몬 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 활성 작용제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 항목 129 내지 135 중 어느 하나의 방법.

Claims (60)

  1. 인간 대상체의 여성 비뇨생식관에서의 염증 치료에 사용을 위한 제약 조성물로서, 여성 대상체가 비뇨생식관에서 장내미생물불균형 미생물군을 나타내며, 대상체에게 유효량의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 제약 조성물은 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하고, 여기서 제제는
    (i) 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고;
    (ii) 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하며;
    여기서 제약 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는, 사용을 위한 제약 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 여성 대상체가 염증의 치료 전에 또는 치료 동안 항생제로 치료되지 않는 것인, 사용을 위한 제약 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 필요로 하는 대상체의 질강에 투여되는, 사용을 위한 제약 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 제약 조성물의 투여 전에, 질 세척이 수행되고/거나 질 세척 후에 락트산으로 헹구어지는 것인, 사용을 위한 제약 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 질 세척이 식염수, 락트산 또는 방부 작용제로 수행되고, 임의로 여기서 방부 작용제는 포비돈-아이오딘 또는 클로로헥시딘인, 사용을 위한 제약 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 박테리아 질염을 갖는 것으로 진단되지 않은 것인, 사용을 위한 제약 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 질 삼출물 및/또는 점액을 추가로 포함하고, 임의로 여기서 점액은 자궁경부질 점액인, 사용을 위한 제약 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 첨가된 동결보호제를 포함하지 않는, 사용을 위한 제약 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 락트산을 약 0.5 내지 2%의 농도로, 바람직하게는 약 1-1.5%의 농도로 추가로 포함하는 것인, 사용을 위한 제약 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 것인, 사용을 위한 제약 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%가 락토바실러스 크리스파투스로 이루어진 것인, 사용을 위한 제약 조성물.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%가 하기로 이루어진 것인, 사용을 위한 제약 조성물:
    (a) 락토바실러스 크리스파투스;
    (b) 락토바실러스 이너스;
    (c) 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 이너스;
    (d) 락토바실러스 크리스파투스 및 락토바실러스 젠세니이;
    (e) 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이;
    (f) 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 가세리 및 락토바실러스 젠세니이;
    (g) 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이;
    (h) 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리;
    (i) 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리; 또는
    (j) 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 및 락토바실러스 가세리.
  13. 제12항에 있어서, (c) 내지 (j)에 대하여, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리가 제제 중에 존재하는 다른 질 락토바실러스 중 하나 이상보다 더 큰 상대적 양으로 존재할 수 있는 것인, 사용을 위한 제약 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 염증의 치료가, 여성 비뇨생식관에서 염증과 관련된 질환, 장애 또는 원치 않는 병태를 치료하거나 대상체에게 이것이 발병할 위험을 감소시키는 것인, 사용을 위한 제약 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 여성 대상체의 비뇨생식관에서의 장내미생물불균형 질 미생물군의 모든 검출가능한 박테리아 종의 10% 미만이 락토바실러스 속에 속하고, 장내미생물불균형 질 미생물군의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 그 초과가 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종으로 이루어진 군으로부터 선택된 병원체 또는 병원균인, 사용을 위한 제약 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 여성 인간 대상체가 자궁내 장치 (IUD)를 착용하지 않는 것을 특징으로 하는, 사용을 위한 제약 조성물.
  17. 제16항에 있어서, IUD가 호르몬 IUD 또는 비-호르몬 IUD인, 사용을 위한 제약 조성물.
  18. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제 또는 이를 포함하는 제약 조성물로서, 제제가
    (i) 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종을 포함하고;
    (ii) 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하고;
    제제 및/또는 제약 조성물이 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 것인, 제제 또는 제약 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 현탁액, 스프레이, 겔, 크림, 연고, 반고체 포움, 필름, 분말, 캡슐, 세척용 용액 또는 두쉬, 오뷸, 질 삽입물, 탐폰, 정제 또는 마이크로캡슐화 생성물 형태인, 제제 또는 제약 조성물.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 적어도 약 106개 생존 박테리아 세포, 바람직하게는 적어도 약 107개 생존 박테리아 세포를 포함하는, 제제 또는 제약 조성물.
  21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제가 식염수인, 제약 조성물.
  22. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 또는 락토바실러스 가세리 이외의 추가의 락토바실러스를 포함하며, 여기서 추가의 락토바실러스는 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 0.01 - 1%의 농도로 존재하는 것인, 제제 또는 제약 조성물.
  23. 제18항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 배양-독립적 방법에 의해 얻어진 것인, 제제 또는 제약 조성물.
  24. 투여 형태가 고체, 반고체, 액체 제형, 또는 필름-형성 제형인, 질 투여용으로 제형화된 제18항 내지 제23항 중 어느 한 항의 제약 조성물 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는, 투여 형태.
  25. 제24항에 있어서, 상기 고체 투여 형태가 캡슐, 정제, 동결건조 겔, 및 필름으로부터 선택되는 것인, 투여 형태.
  26. 제25항에 있어서,
    a) 동결건조 겔이 나트륨-카르복시메틸셀룰로스 (Na-CMC) 또는 히알루론산을 포함하거나;
    b) 정제가 폴리비닐피롤리돈 (PVP) 또는 나트륨-카르복시메틸셀룰로스 (Na-CMC를 포함하거나; 또는
    c) 필름이 폴리비닐 알콜 (PVA)을 포함하는 것인, 투여 형태.
  27. 제24항에 있어서, 반고체 투여 형태가 좌약, 연고, 사전-형성 겔, 동결 겔, 크림 또는 포움으로부터 선택되는 것인, 투여 형태.
  28. 제27항에 있어서, 사전-형성 겔 또는 동결 겔이 히알루론산을 포함하는 것인, 투여 형태.
  29. 어플리케이터, 디스펜서 또는 좌약에 적합한 투여 형태의, 제18항 내지 제23항 중 어느 한 항의 제약 조성물 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 포함하는, 질강으로의 투여를 위한 질 전달 시스템.
  30. 제29항에 있어서, 제약 조성물 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 액체 또는 반고체 형태이고, 임의로 여기서 제약 조성물 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 겔 형태 (예를 들어, 동결건조 또는 동결된) 또는 필름 형태인 질 전달 시스템.
  31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 제약 조성물 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가, 임의로 (예를 들어, 키트로서 제공된) 어플리케이터 또는 디스펜서로부터 분리된 저장 용기 내에서, 임의로 겔 형성 부형제와 제형화되어, 동결건조된 것인, 질 전달 시스템.
  32. 제31항에 있어서, 동결건조된 제약 조성물 또는 동결건조된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제가 재구성되고 이어서 어플리케이터 또는 디스펜서와 조합된 것인, 질 전달 시스템.
  33. 인간 여성 대상체에 대한 제18항 내지 제23항 중 어느 한 항의 제약 조성물 또는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 질 투여 방법으로서, 조성물 또는 제제가 장치를 사용하여 투여되고, 여기서 장치는 질강으로의 삽입을 위한 개방 단부 (예를 들어, 팁), 및 개방 단부를 통해 조성물 또는 제제를 배출하기 위한 분배 단부 (예를 들어, 플런저 또는 피스톤)를 포함하며, 방법은,
    a) 개방 단부를 질강에 도입하는 단계,
    b) 조성물 또는 제제를 질강 내로 배출함으로써,
    조성물 또는 제제를 질강에 투여하는 단계
    를 포함하는 것인, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 조성물의 배출이 질의 점막 또는 자궁내막 표면의 접촉하는 것을 포함하는 것인, 방법.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 여성 인간 대상체에 대한 투여가 대상체가 쇄석술 자세에 있는 동안 수행되는 것인, 방법.
  36. 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 또는 제제가, 대상체가 직립 자세에 있을 때 조성물 또는 제제의 대부분이 적어도 5, 10, 20, 또는 30분 동안 질강에 머무르는 것을 허용하는 적합한 점도를 갖는 것인, 방법.
  37. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 장치가 질강으로의 투여 당 락토바실러스의 적어도 약 106개 생존 박테리아 세포, 바람직하게는 적어도 약 107개 생존 박테리아 세포를 투여하는 것인, 방법.
  38. 제33항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 3-21일의 기간 내에 1, 2, 또는 3회 수행되는 것인, 방법.
  39. 제33항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 1회 또는 다수회 수행되고, 여기서 임의로 투여가 1 내지 6개월의 기간 동안 1 내지 4주마다 수행되는 것인, 방법.
  40. 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제의 생성 방법으로서,
    A. 공여자 여성 비뇨생식관으로부터 미생물군 샘플을 제공하는 단계로서, 여기서 단계 A는 단계 (1), (2), (3) 중 1, 2, 또는 3개 또는 임의의 이들의 조합, 및 단계 (4) 및 (5) 둘 다를 포함하는 것인 단계:
    (1) 희석제를 미생물군 샘플에 첨가하여 희석된 샘플을 생성하는 단계,
    (2) 시험 (예를 들어, 핵산 시퀀싱)을 위해 희석된 미생물군 샘플의 일부를 제거하는 단계,
    (3) 미생물군 샘플의 나머지 부분을 냉장 또는 동결을 위해 사전-냉각시키는 단계,
    (4) 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 저장하는 단계,
    (5) (a) 하나 이상의 전염성 병원체의 실질적 존재를 배제하기 위한 공여자의 시험 (예를 들어, 혈액, 및/또는 자궁경부질 분비물, 및/또는 소변 샘플 시험), (b) 미생물군의 조성 및 생존능 확인, 또는 (c) 공여-후 30-90일의 기간 내에 일어나는 복수의 사후-스크리닝 시험에 의한 여성 공여자의 건강의 추가 확인의 임의의 조합의 임의의 완료까지 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리 하에 유지하는 단계; 및
    B. 냉장 또는 동결된 미생물군 샘플을 격리로부터 해제하여 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제를 정의하는 단계
    를 포함하는, 방법.
  41. 제40항에 있어서, 제제가
    (i) 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 >80-99.9%를 구성하는, 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 젠세니이, 락토바실러스 가세리로부터 선택된, 락토바실러스 속으로부터의 1, 2, 3 또는 4개의 박테리아 종; 및
    (ii) 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종
    을 포함하는 것인, 방법.
  42. 제40항 또는 제41항의 방법에 의해 얻을 수 있는 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  43. 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제로서, 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 가세리를 포함하고, 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는, 단리된 제제.
  44. 제43항에 있어서, 엘. 가세리가 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 최대 10%를 구성하는 것인, 단리된 제제.
  45. 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제로서, 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하고, 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는, 단리된 제제.
  46. 제45항에 있어서, 엘. 이너스가 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 10% 내지 90%를 구성하는 것인, 단리된 제제.
  47. 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제로서, 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 크리스파투스를 포함하고, 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는, 단리된 제제.
  48. 제47항에 있어서, 엘. 이너스가 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 25%를 구성하는 것인, 단리된 제제.
  49. 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제로서, 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 크리스파투스, 락토바실러스 이너스 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하고, 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는, 단리된 제제.
  50. 제49항에 있어서,
    (i) 엘. 젠세니이가 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 50%, 60% 또는 70%를 구성하거나;
    (ii) 엘. 이너스가 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 50%, 60% 또는 70%를 구성하거나; 또는
    (iii) 엘. 크리스파투스가 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 50%, 60% 또는 70%를 구성하는 것인, 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  51. 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제로서, 함께 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 약 80-99.9%를 구성하는 락토바실러스 이너스, 락토바실러스 가세리 및 락토바실러스 젠세니이를 포함하고, 또한 5% 미만의 가르드네렐라 종, 아토포비움 종, 및 프레보텔라 종을 포함하는, 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  52. 제51항에 있어서,
    (i) 엘. 이너스가 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60% 또는 70%를 구성하거나;
    (ii) 엘. 젠세니이가 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 또는 50%를 구성하거나; 또는
    (iii) 엘. 가세리가 제제의 모든 검출가능한 박테리아 종의 최대 20%를 구성하는 것인, 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  53. 락토바실러스 종이 여성 수용자의 비뇨생식관에 생착 (예를 들어, 콜로니화)될 수 있고, 제제가 점액 및 락트산을 추가로 포함하며, 임의로 여기서 제제가 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 것인, 제18항 내지 제23항, 또는 제42항 중 어느 한 항의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 또는 제43항 내지 제52항 중 어느 한 항에 따른 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  54. 락토바실러스의 적어도 약 106개 생존 세포, 바람직하게는 적어도 약 107개 생존 세포를 포함하는, 제18항 내지 제23항, 또는 제42항 중 어느 한 항의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 또는 제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 따른 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  55. 락토바실러스 종이 적어도 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주 또는 7주의 기간 동안 안정적으로 생착 (예를 들어, 콜로니화)될 수 있는 것인, 제18항 내지 제23항, 또는 제42항 중 어느 한 항의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 또는 제43항 내지 제54항 중 어느 한 항에 따른 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  56. 락토바실러스 종이 적어도 1 월경 주기, 2 월경 주기, 3 월경 주기 또는 그 초과의 기간 동안 안정적으로 생착 (예를 들어, 콜로니화)될 수 있는 것인, 제18항 내지 제23항, 또는 제42항 중 어느 한 항의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 또는 제43항 내지 제55항 중 어느 한 항에 따른 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  57. 자궁경부질 점액을 포함하고 적어도 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 또는 그 초과의 중량인, 제18항 내지 제23항, 또는 제42항 중 어느 한 항의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 또는 제43항 내지 제56항 중 어느 한 항에 따른 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  58. 동결 후 제제의 총 CFU 또는 VCC가 제제의 동결 전의 총 CFU/VCC보다 2 log 미만, 바람직하게는 1 log 미만으로 더 낮고, 임의로, 여기서 CFU/VCC는 적어도 106 CFU/VCC, 적어도 107 CFU/VCC 또는 적어도 108 CFU/VCC인, 제18항 내지 제23항, 또는 제42항 중 어느 한 항의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 또는 제43항 내지 제57항 중 어느 한 항에 따른 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  59. 동결보호제가 첨가되지 않은, 제18항 내지 제23항, 또는 제42항 중 어느 한 항의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 또는 제43항 내지 제58항 중 어느 한 항에 따른 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
  60. 약 0.5 ml 내지 약 2 ml, 1 ml 내지 2 ml, 또는 약 1.5 내지 1.8 ml의 투여량 부피를 갖는, 제18항 내지 제23항, 또는 제42항 중 어느 한 항의 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제, 또는 제43항 내지 제59항 중 어느 한 항에 따른 질 투여에 적합한 단리된 실질적으로 완전한 질 미생물군 제제.
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