KR20230085904A - 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물에 사용하기 위한 초항원 접합체 - Google Patents

암을 치료하기 위한 방법 및 조성물에 사용하기 위한 초항원 접합체 Download PDF

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KR20230085904A
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미칼 샤하르
메이어 아줄레이
아쉐르 나탄
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네오티엑스 테라퓨틱스 엘티디.
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Abstract

본 발명은 초항원 접합체를 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체와 조합하여 사용하여 암을 치료하는 방법 또는 조성물을 제공한다.

Description

암을 치료하기 위한 방법 및 조성물에 사용하기 위한 초항원 접합체
본 발명은 일반적으로 초항원 접합체 및 요법에서의 그의 용도에 관한 것이다.
미국 암 학회에 따르면, 미국에서 1백만명 초과의 사람들이 매년 암으로 진단된다. 암은 일단 자연 제어 메카니즘에 적용되었으나 비제어된 방식으로 계속 증식하는 암성 세포로 형질전환된 세포의 비제어된 증식으로부터 발생하는 질환이다.
최근 수년간, 암 세포를 발견하고 파괴하기 위해 대상체의 면역계를 이용하려고 시도한 다수의 면역요법이 개발되었다. 이러한 면역요법은, 예를 들어 신체에 의해 제조된 천연 분자를 사용하여 암과 싸우기 위한 신체의 자연 방어를 부스팅하도록 설계된 것, 또는 대안적으로 면역계 기능을 개선시키거나, 보다 우수하게 표적화하거나, 또는 회복시키도록 설계된 재조합 분자의 투여를 통한 것을 포함한다. 특정 면역요법은 일반적 면역계 증진제인 것으로 공지된 화합물, 예컨대 시토카인, 예를 들어 IL-2 및 인터페론의 투여를 포함한다. 지금까지 개발된 다양한 면역요법이 효능을 나타냈지만, 이들은, 예를 들어 오프-타겟 활성, 시토카인 폭풍에 대한 잠재력을 포함한 투여된 활성제에 대한 알레르기 반응, 활성제에 결합하고 중화시키는 항체의 자극에 의해 유발된 효력의 손실, 혈액 세포 수의 감소, 및 피로를 비롯한 부작용과 연관될 수 있다.
다른 면역요법은 암에 대한 면역 반응을 증진시키는 면역 체크포인트 억제제로 지칭되는 분자를 이용한다. 이러한 체크포인트 억제제는 면역 억제 체크포인트를 차단하는 암 세포의 능력을 억제하여 항암 요법의 효력을 증진시키는 기능을 한다. 제1 세대 면역 체크포인트 억제제 이필리무맙 (예르보이(YERVOY)®; 브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb))은 2011년에 미국 식품 의약품국에 의해 승인된 것으로, ADCC-매개 조절 T-세포 (Treg) 세포독성을 유발할 수 있는 IgG1 모노클로날 항체이다. 보다 최근에, PD-1 억제제, 예컨대 니볼루맙 및 펨브롤리주맙은 PD-1과 PD-L1 사이의 억제 신호를 방지하는 것으로 승인되었다. 이들 약물이 일부 환자에서 지속적인 반응을 강화시켰지만, 단독요법으로서의 이들 약물의 반응률은 낮았고 21% 범위였으며, 완전 반응률은 여러 연구에서 약 1%였다.
따라서, 면역요법 및 종양학 분야에서 이루어진 유의한 개발에도 불구하고, 암을 치료하기 위한 안전하고 효과적인 면역요법에 대한 필요가 여전히 존재한다.
발명의 개요
본 발명은, 부분적으로, 대상체에서 암에 대한 표적화된 면역 반응이 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체를 B-세포 고갈제 (예를 들어, 항-CD20 항체)와 조합함으로써 유의하게 증진될 수 있다는 발견에 기초한다.
또한, 대상체에게 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체를 B-세포 고갈제 (예를 들어, 항-CD20 항체)와 조합하여 투여하는 것은 대상체에서 종양 내 T-세포의 수를 증가시킬 수 있고/거나 (즉, T-세포 종양 침윤을 증가시킬 수 있고/거나), 대상체에서 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시킬 수 있고/거나, 대상체에서 종양 내 조절 T-세포 (Treg)의 수를 감소시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다.
따라서, 한 측면에서, 본 발명은 암을 치료하는 데 사용하기 위한 초항원 접합체를 제공하며, 상기 초항원은 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 암은 종양, 예를 들어 고형 종양을 포함한다.
추가 측면에 따르면, 본 발명은 T-세포의 종양 내로의 침윤을 촉진하는 데 사용하기 위한 초항원 접합체를 제공하며, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고; 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
일부 측면에 따르면, 종양에서 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 데 사용하기 위한 초항원 접합체가 추가로 제공되며, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
또한, 본 발명의 추가 측면은 조절 T-세포 (Treg)의 종양 내로의 침윤을 감소시키는 데 사용하기 위한 초항원 접합체를 제공하며, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
본 발명은 또한, 추가 측면에 따르면, 암을 치료하는 데 사용하기 위한 초항원 접합체를 제공하며, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
추가 측면에 따르면, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 데 있어서 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 효능을 개선시키는 방법을 제공한다. 방법은 대상체에게 B-세포 고갈제의 유효량을 초항원 접합체와 조합하여 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 대상체에게 초항원 접합체를 투여하기 전에 대상체에게 B-세포 고갈제의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 암은 종양, 예를 들어 고형 종양을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 종양 내로의 T-세포 (예를 들어, CD8+ T-세포)의 침윤의 촉진을 필요로 하는 대상체에서 종양 내로의 T-세포 (예를 들어, CD8+ T-세포)의 침윤을 촉진하는 방법을 제공한다. 방법은 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여함으로써, 종양 내로의 T-세포의 침윤을 촉진하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 먼저 대상체에게 B-세포 고갈제를 투여한 다음, 대상체에게 초항원 접합체를 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비의 증가를 필요로 하는 대상체에서 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 방법을 제공한다. 방법은 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여함으로써, 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 먼저 대상체에게 B-세포 고갈제를 투여한 다음, 대상체에게 초항원 접합체를 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 종양 내로의 조절 T-세포 (Treg)의 침윤의 감소를 필요로 하는 대상체에서 종양 내로의 Treg의 침윤을 감소시키는 방법을 제공한다. 방법은 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여함으로써, 종양 내로의 Treg의 침윤을 감소시키는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 먼저 대상체에게 B-세포 고갈제를 투여한 다음, 대상체에게 초항원 접합체를 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 먼저 대상체에게 B-세포 고갈제를 투여한 다음, 대상체에게 초항원 접합체를 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 암은 종양, 예를 들어 고형 종양을 포함한다.
상기 각각의 측면에서, 대상체에게의 B-세포 고갈제 및 초항원 접합체의 투여는 (i) 종양 내로의 T-세포의 침윤을 촉진하고/거나, (ii) 종양 내의 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키고/거나, (iii) 종양 내로의 Treg의 침윤을 감소시킨다.
또한, 각각의 상기 측면에서, 초항원은 포도상구균 장독소 A 또는 그의 면역학적 변이체 및/또는 단편을 포함할 수 있다. 예를 들어, 초항원은 서열식별번호(SEQ ID NO): 3의 아미노산 서열 또는 그의 면역학적 반응성 변이체 및/또는 단편을 포함할 수 있다.
또한, 각각의 상기 측면에서, 암 항원은 EpCAM 및 5T4로부터 선택된다. 상기 방법 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, 표적화 모이어티는 항체, 예를 들어 항-5T4 항체 또는 항-EpCAM 항체이다. 특정 실시양태에서, 표적화 모이어티는 항-5T4 항체, 예를 들어 5T4 암 항원에 결합하는 Fab 단편을 포함하는 항-5T4 항체이다. 특정 실시양태에서, 항-5T4 항체는 서열식별번호: 8의 아미노산 잔기 1-222를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 잔기 1-214를 포함하는 경쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 초항원 접합체는 서열식별번호: 8을 포함하는 제1 단백질 쇄 및 서열식별번호: 9를 포함하는 제2 단백질 쇄를 포함한다.
상기 측면 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, B-세포 고갈제는 항-CD20 항체, 예를 들어 이브리투모맙, 오비누투주맙, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 리툭시맙, 벨투주맙, 토시투모맙, 우블리툭시맙, 벨투주맙, PRO131921 및 TRU-015에서 선택된 항-CD20 항체이다. 특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 오비누투주맙이다.
상기 측면 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, 암은 5T4- 또는 EpCAM-발현 암이다. 암은 유방암, 방광암, 자궁경부암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막암, 위암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비소세포 폐암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신세포암 및 피부암으로부터 선택될 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 결장암 및 결장직장암으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 암은 조혈암이다.
각각의 상기 측면에서, 조합물 또는 방법은 대상체에게 면역강화제를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 면역강화제는 CTLA-4-기반 억제제 또는 PD-1-기반 억제제, 예를 들어 PD-1 또는 PD-L1 억제제를 포함한다. 특정 실시양태에서, PD-1 억제제는 항-PD-1 항체, 예를 들어 니볼루맙, 펨브롤리주맙 및 세미플리맙으로부터 선택된 항-PD-1 항체이다. 특정 실시양태에서, PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체, 예를 들어 아테졸리주맙, 아벨루맙 및 두르발루맙으로부터 선택된 항-PD-L1 항체이다.
각각의 상기 측면에서, 조합물 또는 방법은 대상체에게 화학요법제, 예를 들어 도세탁셀을 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 (i) 대상체 내의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량; (ii) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (iii) 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 이들 및 다른 측면 및 특색은 하기 상세한 설명, 도면 및 청구범위에 기재된다.
본 발명의 상기 및 다른 목적, 특색 및 이점은 첨부 도면에 예시된 바와 같은, 바람직한 실시양태의 하기 설명으로부터 명백해질 것이다. 비슷하게 참조된 요소는 상응하는 도면에서 공통적인 특색을 나타낸다. 도면은 반드시 축척에 맞는 것은 아니며, 대신 본 발명의 원리를 예시하는 데 중점을 둔다.
도 1은 특정의 예시적인 야생형 및 변형된 초항원에서의 상동 A-E 영역을 보여주는 서열 정렬이다.
도 2는 2개의 단백질 쇄를 포함하는, 예시적인 초항원 접합체인 나프투모맙 에스타페나톡스에 상응하는 아미노산 서열이다. 제1 단백질 쇄는 서열식별번호: 7의 잔기 1 내지 458 (또한 서열식별번호: 8 참조)을 포함하고, 서열식별번호: 7의 잔기에 상응하는 키메라 5T4 Fab 중쇄, 및 서열식별번호: 7의 잔기 223-225에 상응하는 GGP 트리펩티드 링커를 통해 공유 연결된, 서열식별번호: 7의 잔기 226 내지 458에 상응하는 SEA/E-120 초항원을 포함한다. 제2 쇄는 서열식별번호: 7의 잔기 459 내지 672를 포함하고 (또한 서열식별번호: 9 참조), 키메라 5T4 Fab 경쇄를 포함한다. 2개의 단백질 쇄는 Fab 중쇄와 경쇄 사이의 비-공유 상호작용에 의해 함께 유지된다.
도 3은 단일 250 μg/마우스 용량의 래트 IgG2b 이소형 또는 항-마우스 CD20 항체를 주사한 마우스의 비장에서 B-세포에 대한 염색을 보여주는 점 도표이다. 주사 14일 후에 염색을 수행하였다 (실시예 1에 기재된 바와 같이 제7일). 각각의 군에 대해, 총 림프구 중 B220/CD45R B-세포 대용물 마커를 갖는 세포의 백분율이 도시된다. 도 3a는 래트 IgG2b 이소형 군 ("대조군")에 대한 결과를 보여주고, 도 3b는 항-마우스 CD20 항체 군 ("B 세포 고갈")에 대한 결과를 보여준다.
도 4는 종양 표적화된 초항원 ("TTS"), 항-CD20 항체와 조합된 종양 표적화된 초항원 ("B 세포 고갈 TTS"), 항-CD20 항체 ("B 세포 고갈 대조군"), 또는 IgG 대조군 ("대조군")으로의 처리 후의 MC38-EpCAM 종양 부피를 예시하는 선 그래프이다. 10마리 마우스/군의 평균 종양 부피 ±SE가 도시된다. **p=0.0013; ***p=0.0008; ****p<0.0001.
도 5는 항-PD-L1 항체 ("PD-L1"), 항-CD20 항체와 조합된 항-PD-L1 항체 ("B 세포 고갈 PD-L1"), 항-CD20 항체 ("B 세포 고갈 대조군"), 또는 IgG 대조군 ("대조군")으로의 처리 후의 MC38-EpCAM 종양 부피를 예시하는 선 그래프이다. 10마리 마우스/군의 평균 종양 부피 ±SE가 도시된다. ****p<0.0001.
도 6a-6d는 항-CD20 항체 처리에 의한 B-세포 고갈의 존재 ("B 고갈") 또는 부재 ("비-고갈") 하에 대조군, 종양 표적화된 초항원 ("TTS"), 및 항-PD-L1 항체 ("항-PD-L1") 처리된 마우스로부터 절제된 종양 내로의 T-세포 하위세트의 침윤을 예시하는 그래프이다. 도 6a는 일반적인 CD8+ T-세포 침윤을 도시한다. 도 6b는 종양에서의 일반적인 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 도시한다. 도 6c는 Vβ3+ CD8+ T-세포 침윤을 도시한다. 도 6d는 종양에서의 Vβ3+ CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 도시한다.
상세한 설명
본 발명은, 부분적으로, 대상체에서 암에 대한 표적화된 면역 반응이 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체를 B-세포 고갈제 (예를 들어, 항-CD20 항체)와 조합함으로써 유의하게 증진될 수 있다는 발견에 기초한다.
또한, 대상체에게 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체를 B-세포 고갈제 (예를 들어, 항-CD20 항체)와 조합하여 투여하는 것은 대상체에서 종양 내 T-세포의 수를 증가시킬 수 있고/거나 (즉, T-세포 종양 침윤을 증가시킬 수 있고/거나), 대상체에서 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시킬 수 있고/거나, 대상체에서 종양 내 조절 T-세포 (Treg)의 수를 감소시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다.
따라서, 본 발명은 암을 치료하는 데 사용하기 위한 초항원 접합체를 제공하며, 상기 초항원은 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 암은 종양, 예를 들어 고형 종양을 포함한다.
추가 측면에 따르면, 본 발명은 T-세포의 종양 내로의 침윤을 촉진하는 데 사용하기 위한 초항원 접합체를 제공하며, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고; 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
일부 측면에 따르면, 종양에서 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 데 사용하기 위한 초항원 접합체가 추가로 제공되며, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
또한, 본 발명의 추가 측면은 조절 T-세포 (Treg)의 종양 내로의 침윤을 감소시키는 데 사용하기 위한 초항원 접합체를 제공하며, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
본 발명은 또한, 추가 측면에 따르면, 암을 치료하는 데 사용하기 위한 초항원 접합체를 제공하며, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
추가 측면에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 효능을 개선시키는 방법을 제공한다. 방법은 대상체에게 B-세포 고갈제의 유효량을 초항원 접합체와 조합하여 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 대상체에게 초항원 접합체를 투여하기 전에 대상체에게 B-세포 고갈제의 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 종양 내로의 T-세포 (예를 들어, CD8+ T-세포)의 침윤의 촉진을 필요로 하는 대상체에서 종양 내로의 T-세포 (예를 들어, CD8+ T-세포)의 침윤을 촉진하는 방법을 제공한다. 방법은 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여함으로써, 종양 내로의 T-세포의 침윤을 촉진하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 먼저 대상체에게 B-세포 고갈제를 투여한 다음, 대상체에게 초항원 접합체를 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비의 증가를 필요로 하는 대상체에서 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 방법을 제공한다. 방법은 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여함으로써, 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 먼저 대상체에게 B-세포 고갈제를 투여한 다음, 대상체에게 초항원 접합체를 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 종양 내로의 조절 T-세포 (Treg)의 침윤의 감소를 필요로 하는 대상체에서 종양 내로의 Treg의 침윤을 감소시키는 방법을 제공한다. 방법은 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여함으로써, 종양 내로의 Treg의 침윤을 감소시키는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 먼저 대상체에게 B-세포 고갈제를 투여한 다음, 대상체에게 초항원 접합체를 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 먼저 대상체에게 B-세포 고갈제를 투여한 다음, 대상체에게 초항원 접합체를 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 (i) 대상체 내의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량; (ii) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (iii) 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
I. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 발명의 목적을 위해, 하기 용어가 하기에 정의된다.
본원에 사용된 단수 용어는 하나 이상을 의미할 수 있다. 예를 들어, "초항원 접합체 및 B-세포 고갈제로의 치료"와 같은 언급은 1종의 초항원 접합체 및 B-세포 고갈제; 1종 초과의 초항원 접합체 및 1종의 B-세포 고갈제; 1종의 초항원 접합체 및 1종 초과의 B-세포 고갈제; 또는 1종 초과의 초항원 접합체 및 1종 초과의 B-세포 고갈제로의 치료를 의미할 수 있다.
달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "항체"는 최적화되거나, 조작되거나 또는 화학적으로 접합된 무손상 항체 또는 항체의 항원-결합 단편 (예를 들어, 완전 인간 항체, 반합성 항체 또는 완전 합성 항체를 포함한 파지 디스플레이 항체)을 포함한, 무손상 항체 (예를 들어, 무손상 모노클로날 항체) 또는 항체의 항원-결합 단편을 의미하는 것으로 이해된다. 최적화된 항체의 예는 친화도-성숙 항체이다. 조작된 항체의 예는 Fc 최적화된 항체, 면역원성을 감소시키도록 조작된 항체, 및 다중-특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)이다. 항원-결합 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 단일 쇄 항체 (예를 들어, scFv), 미니바디 및 디아바디를 포함한다. 독소 모이어티에 접합된 항체는 화학적으로 접합된 항체의 예이다. 특정 실시양태에서, 항체는 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 또는 IgE 이소형을 갖는다. 특정 실시양태에서, 항체는 표면 플라즈몬 공명 또는 생물층 간섭측정법에 의해 측정 시 적어도 100 nM, 50 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.1 nM, 0.01 nM, 또는 0.001 nM의 친화도 (Kd)로 표적 항원 (예를 들어, CD20)에 결합한다.
본원에 사용된 용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로 비조절된 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 상태를 의미하는 것으로 이해된다. 암의 예는 흑색종, 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 암의 보다 특정한 예는 편평 세포암 (예를 들어, 상피 편평 세포암), 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐 선암종 및 폐 편평세포 암종을 포함한 폐암, 복막암, 간세포성암, 위장암을 포함한 위암 또는 위의 암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 골암, 뇌암, 망막모세포종, 자궁내막암 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암 또는 신암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종, 고환암, 뿐만 아니라 두경부암, 검 또는 설암을 포함한다. 암은 암 또는 암성 세포를 포함하고, 예를 들어 암은 복수의 개별 암 또는 암성 세포, 예를 들어 백혈병, 또는 복수의 연관된 암 또는 암성 세포를 포함하는 종양을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "불응성"은 치료에 반응하지 않거나 또는 더 이상 반응하지 않는 암을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 불응성 암은 치료의 시작 전 또는 시작 시에 치료에 대해 저항성일 수 있다. 다른 실시양태에서, 불응성 암은 치료 동안 또는 치료 후에 저항성이 될 수 있다. 불응성 암은 또한 저항성 암으로도 불린다. 본원에 사용된 용어 "재발생" 또는 "재발"은 선행 치료에서의 양성 반응 (예를 들어, 종양 부담의 감소, 종양 부피의 감소, 종양 전이의 감소, 또는 치료에 대한 양성 반응을 나타내는 바이오마커의 조정) 후 불응성 암 또는 불응성 암의 징후 및 증상의 복귀를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "면역원"은 면역 반응을 유발 (촉발, 유도 또는 야기)하는 분자이다. 이러한 면역 반응은 항체 생산, 특정 세포, 예컨대, 예를 들어 특정 면역학적-적격 세포의 활성화, 또는 둘 다를 수반할 수 있다. 면역원은 많은 유형의 물질, 예컨대 비제한적으로 유기체로부터의 분자, 예컨대, 예를 들어 단백질, 단백질의 서브유닛, 사멸 또는 불활성화된 전세포 또는 용해물, 합성 분자 및 매우 다양한 다른 생물학적 및 비생물학적 작용제 둘 다로부터 유래될 수 있다. 실질적으로 모든 단백질을 포함한, 본질적으로 임의의 거대분자 (자연 발생 거대분자 또는 재조합 DNA 접근법을 통해 생산된 거대분자를 포함함)가 면역원으로서의 역할을 할 수 있는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "면역원성"은 면역 반응을 유발 (촉발, 유도 또는 야기)하는 면역원의 능력에 관한 것이다. 상이한 분자는 상이한 정도의 면역원성을 가질 수 있고, 또 다른 분자와 비교하여 더 큰 면역원성을 갖는 분자는, 예를 들어 더 낮은 면역원성을 갖는 작용제보다 더 큰 면역 반응을 유발 (촉발, 유도 또는 야기)할 수 있는 것으로 공지되어 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 본원에 사용된 용어 "항원"은 항체, 특정 면역학적-적격 세포 또는 둘 다에 의해 인식되는 분자를 지칭한다. 항원은 많은 유형의 물질, 예컨대 비제한적으로 유기체로부터의 분자, 예컨대, 예를 들어 단백질, 단백질의 서브유닛, 핵산, 지질, 사멸 또는 불활성화된 전세포 또는 용해물, 합성 분자 및 매우 다양한 다른 생물학적 및 비-생물학적 작용제 둘 다로부터 유래될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항원성"은 항체, 특정 면역학적-적격 세포 또는 둘 다에 의해 인식되는 항원의 능력에 관한 것이다.
본원에 사용된 용어 "에피토프 확산"은 항원에 대해 지시된 초기 에피토프-특이적 면역 반응으로부터 그 항원 상의 다른 에피토프 (분자내 확산) 또는 다른 항원 (분자간 확산)에 대한 면역 반응의 에피토프 특이성의 다양화를 지칭한다. 에피토프 확산은 대상체의 면역계가 원래 치료 프로토콜에 반응하여 면역계에 의해 초기에 인식되지 않은 추가의 표적 에피토프를 결정하게 함과 동시에 종양 집단에서 회피 변이체의 가능성을 감소시켜 질환의 진행에 영향을 미친다.
본원에 사용된 용어 "면역 반응"은 자극에 대한 면역계의 세포, 예컨대 B-세포, T-세포 (CD4+ 또는 CD8+), 조절 T-세포, 항원-제시 세포, 수지상 세포, 단핵구, 대식세포, NKT 세포, NK 세포, 호염기구, 호산구 또는 호중구에 의한 반응을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 반응은 특정한 항원에 대해 특이적이고 ("항원-특이적 반응"), 항원-특이적 수용체를 통한 CD4+ T-세포, CD8+ T-세포 또는 B-세포에 의한 반응을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 면역 반응은 T-세포 반응, 예컨대 CD4+ 반응 또는 CD8+ 반응이다. 이들 세포에 의한 이러한 반응은, 예를 들어 세포독성, 증식, 시토카인 또는 케모카인 생산, 트래픽킹 또는 식세포작용을 포함할 수 있고, 반응을 겪는 면역 세포의 성질에 의존할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "주요 조직적합성 복합체" 또는 "MHC"는 조직적합성의 중요한 결정기인 유전자의 특이적 클러스터를 지칭하며, 이들 중 다수는 항원 제시에 수반되는 진화적으로 관련된 세포 표면 단백질을 코딩한다. 부류 I MHC 또는 MHC-I은 주로 CD8+ T 림프구 (CD8+ T-세포)에 대한 항원 제시에서 기능한다. 부류 II MHC 또는 MHC-II는 주로 CD4+ T 림프구 (CD4+ T-세포)에 대한 항원 제시에서 기능한다.
본원에 사용된 용어 "유래된", 예를 들어 "로부터 유래된"은, 예를 들어 생물학적 숙주, 예컨대 박테리아, 바이러스 및 진핵 세포 및 유기체로부터 유래된 야생형 분자 및 예를 들어 화학적 수단에 의해 변형되거나 재조합 발현 시스템에서 생산된 변형된 분자를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "혈청반응성인", "혈청반응" 또는 "혈청반응성"은 포유동물, 예컨대 비제한적으로 인간의 혈청에서 항체와 반응하는 작용제, 예컨대 분자의 능력을 의미하는 것으로 이해된다. 이는 항체가 작용제를 불활성화 또는 중화시키는지 여부에 상관없이, 예를 들어 분자에 특이적인 항체 및 분자에 결합하는 비특이적 항체를 포함한 모든 유형의 항체와의 반응을 포함한다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 상이한 작용제는 서로에 대해 상이한 혈청반응성을 가질 수 있으며, 여기서 또 다른 작용제보다 더 낮은 혈청반응성을 갖는 작용제는, 예를 들어 더 높은 혈청반응성을 갖는 작용제보다 더 적은 항체와 반응하고/거나 항체에 대해 더 낮은 친화도 및/또는 결합력을 가질 것이다. 이는 또한 동물, 예컨대 포유동물, 예컨대 인간에서 항체 면역 반응을 도출하는 작용제의 능력을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "가용성 T-세포 수용체" 또는 "가용성 TCR"은, 수용체 쇄의 막횡단 영역이 결실 또는 돌연변이되어 수용체가 세포에 의해 발현될 때 막 내로 삽입, 횡단하지 않거나 또는 달리 그와 회합하지 않는 경우를 제외하고, 전장 (예를 들어, 막 결합된) 수용체의 쇄를 포함하는 "가용성" T-세포 수용체를 의미하는 것으로 이해된다. 가용성 T-세포 수용체는 야생형 수용체의 도메인의 단지 세포외 도메인 또는 세포외 단편만을 포함할 수 있다 (예를 들어, 막횡단 및 세포질 도메인이 결여되어 있음).
본원에 사용된 용어 "초항원"은 MHC 부류 II 분자 및 T-세포 수용체의 Vβ 도메인에 결합하여, 특정한 Vβ 유전자 절편을 발현하는 T-세포를 활성화시킴으로써, T-세포의 하위세트를 자극하는 분자의 부류를 의미하는 것으로 이해된다. 상기 용어는 야생형, 자연 발생 초항원, 예를 들어 특정 박테리아로부터 단리된 것 또는 그로부터의 비변형 유전자로부터 발현된 것, 뿐만 아니라 변형된 초항원을 포함하며, 여기서 예를 들어 초항원을 코딩하는 DNA 서열은, 예를 들어 표적화 모이어티를 갖는 융합 단백질을 생산하고/거나 초항원의 특정 특성, 예컨대 비제한적으로 그의 MHC 부류 II 결합 (예를 들어, 친화도를 감소시키기 위함) 및/또는 그의 혈청반응성 및/또는 그의 면역원성 및/또는 항원성 (예를 들어, 그의 혈청반응성을 감소시키기 위함)을 변경시키기 위해, 예를 들어 유전자 조작에 의해 변형되었다. 정의는 본원 또는 하기 미국 특허 및 특허 출원에 기재된 야생형 및 변형된 초항원 및 그의 임의의 면역학적 반응성 변이체 및/또는 단편을 포함한다: 미국 특허 번호 5,858,363, 6,197,299, 6,514,498, 6,713,284, 6,692,746, 6,632,640, 6,632,441, 6,447,777, 6,399,332, 6,340,461, 6,338,845, 6,251,385, 6,221,351, 6,180,097, 6,126,945, 6,042,837, 6,713,284, 6,632,640, 6,632,441, 5,859,207, 5,728,388, 5,545,716, 5,519,114, 6,926,694, 7,125,554, 7,226,595, 7,226,601, 7,094,603, 7,087,235, 6,835,818, 7,198,398, 6,774,218, 6,913,755, 6,969,616 및 6,713,284, 미국 특허 출원 번호 2003/0157113, 2003/0124142, 2002/0177551, 2002/0141981, 2002/0115190, 2002/0051765 및 2001/0046501 및 PCT 국제 공개 번호 WO/03/094846.
본원에 사용된 용어 "표적화 모이어티"는 세포 분자, 예를 들어 세포 표면 분자, 바람직하게는 질환 특이적 분자, 예컨대 암 (또는 암성) 세포 상에서 우선적으로 발현된 항원에 결합할 수 있는 임의의 구조, 분자 또는 모이어티를 지칭한다. 예시적인 표적화 모이어티는 항체 (그의 항원 결합 단편을 포함함) 등, 가용성 T-세포 수용체, 인터류킨, 호르몬 및 성장 인자를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "종양-표적화된 초항원" 또는 "TTS" 또는 "암-표적화된 초항원"은 1종 이상의 표적화 모이어티와 (직접적으로 또는 간접적으로) 공유 연결된 1종 이상의 초항원을 포함하는 분자를 의미하는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "T-세포 수용체"는 T-세포에 특이적인 수용체를 의미하는 것으로 이해되고, 관련 기술분야에 공지된 바와 같은 용어의 이해를 포함한다. 용어는 또한, 예를 들어 불변 CD3 쇄와의 복합체로서 세포 막에서 발현된 고도 가변 α 또는 β 쇄의 디술피드-연결된 이종이량체를 포함하는 수용체 및 T-세포의 하위세트 상에서 CD3과의 복합체로서 세포 막에서 발현된 가변 γ 및 δ 쇄로 구성된 수용체를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "치료 유효량" 및 "유효량"은 질환 또는 상태를 치료하는 데 있어서 적어도 일부 효과를 생성하는 활성제, 예를 들어 제약 활성제 또는 제약 조성물의 양을 의미하는 것으로 이해된다. 치유적 치료를 위해 본 발명을 실시하는 데 사용된 제약 활성제(들)의 유효량은 투여 방식, 대상체의 연령, 체중 및 전반적 건강에 따라 다르다. 이들 용어는 단일 작용제 단독, 예컨대 초항원 접합체 또는 B-세포 고갈제 (예를 들어, 항-CD20 항체)가 약하게 작용하거나 전혀 작용하지 않을 수 있지만, 서로 조합되는 경우에, 예를 들어 비제한적으로 순차적 투여를 통해 2종 이상의 작용제가 상승작용적 결과를 생성하는 작용을 하는 본 발명에 기재된 것과 같은 상승작용적 상황을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에 기재된 방법 및 조성물에 의해 치료될 유기체를 지칭한다. 이러한 유기체는 바람직하게는 포유동물 (예를 들어, 뮤린, 원숭이, 말, 소, 돼지, 개, 고양이 등)을 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 보다 바람직하게는 인간을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 포유동물, 예를 들어 인간에서의 질환의 치료를 의미하는 것으로 이해된다. 이는 다음을 포함한다: (a) 질환을 억제하는 것, 즉 그의 발달을 정지시키는 것; 및 (b) 질환을 경감시키는 것, 즉 질환 상태의 퇴행을 유발하는 것; 및 (c) 질환을 치유하는 것. 치유적 치료와 관련하여 사용된 용어 "방지하다" 또는 "차단하다"는 주어진 행위, 작용, 활성 또는 사건을 완전히 방지 또는 차단하거나 또는 완전히는 아니지만 방지 또는 차단하는 (예를 들어, 부분적으로 방지 또는 차단하는) 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "암의 성장을 억제하다"는 시험관내 또는 생체내에서 암 또는 암성 세포의 성장 속도를 측정가능하게 저속화, 정지 또는 역전시키는 것을 의미하는 것으로 이해된다. 바람직하게는, 세포 성장 속도의 결정에 적합한 검정을 사용하여 결정 시, 성장 속도는 20%, 30%, 50% 또는 70% 또는 그 초과로 저속화된다. 전형적으로, 성장 속도의 역전은 신생물성 세포에서 세포 사멸의 괴사 또는 아폽토시스 메카니즘을 개시 또는 가속화시켜, 신생물의 수축을 유발함으로써 달성된다.
본원에 사용된 용어 "변이체", "변이체들", "변형된", "변경된", "돌연변이된" 등은 참조 단백질, 펩티드 또는 다른 화합물과 상이한 단백질 또는 펩티드 및/또는 다른 작용제 및/또는 화합물을 의미하는 것으로 이해된다. 이러한 의미에서의 변이체는 하기 및 다른 곳에 보다 상세하게 기재된다. 예를 들어, 변이체의 핵산 서열 내 변화는 침묵성일 수 있으며, 예를 들어 이들은 핵산 서열에 의해 코딩되는 아미노산을 변경시키지 않을 수 있다. 변경이 이러한 유형의 침묵 변화에 제한되는 경우에, 변이체는 참조 펩티드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 코딩할 것이다. 변이체의 핵산 서열 내 변화는 참조 핵산 서열에 의해 코딩되는 펩티드의 아미노산 서열을 변경시킬 수 있다. 이러한 핵산 변화는 하기에 논의된 바와 같이, 참조 서열에 의해 코딩되는 단백질 또는 펩티드에 아미노산 치환, 부가, 결실, 융합 및/또는 말단절단을 유발할 수 있다. 일반적으로, 아미노산 서열의 차이는 참조 및 변이체의 서열이 전체적으로 유사하고 많은 영역에서 동일하도록 제한된다. 변이체 및 참조 단백질 또는 펩티드는 1개 이상의 치환, 부가, 결실, 융합 및/또는 말단절단 (이는 임의의 조합으로 존재할 수 있음)에 의해 아미노산 서열이 상이할 수 있다. 변이체는 또한 말단 또는 내부 결실에 의한 것과 같이 참조 서열보다 더 짧음으로써 참조 단백질 또는 펩티드 서열과 상이한 본 발명의 단백질 또는 펩티드의 단편일 수 있다. 본 발명의 단백질 또는 펩티드의 또 다른 변이체는 또한 참조 단백질 또는 펩티드와 본질적으로 동일한 기능 또는 활성을 유지하는 단백질 또는 펩티드를 포함한다. 변이체는 또한 다음일 수 있다: (i) 아미노산 잔기 중 1개 이상이 보존된 또는 비-보존된 아미노산 잔기로 치환되고 이러한 치환된 아미노산 잔기가 유전자 코드에 의해 코딩되는 것일 수 있거나 아닐 수 있는 것인 변이체, 또는 (ii) 아미노산 잔기 중 1개 이상이 치환기를 포함하는 것인 변이체, 또는 (iii) 성숙 단백질 또는 펩티드가 또 다른 화합물, 예컨대 단백질 또는 펩티드의 반감기를 증가시키는 화합물 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜)과 융합된 것인 변이체, 또는 (iv) 추가의 아미노산이 성숙 단백질 또는 펩티드, 예컨대 리더 또는 분비 서열 또는 성숙 단백질 또는 펩티드의 정제에 사용되는 서열에 융합된 것인 변이체. 변이체는 돌연변이유발 기술 및/또는 핵산, 아미노산, 세포 또는 유기체에 적용된 것을 포함한 변경 메카니즘, 예컨대 화학적 변경, 융합, 보조물 등에 의해 제조될 수 있고/거나 재조합 수단에 의해 제조될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "순차적 투여" 및 관련 용어는 적어도 제1 작용제 (예를 들어, 초항원 접합체)와 적어도 제2 작용제 (예를 들어, B-세포 고갈제)의 투여를 지칭하고, 이들 작용제의 시차를 둔 용량 (즉, 시간-시차를 둔 용량) 및 투여량의 변화를 포함한다. 이는 하나의 작용제가 또 다른 작용제의 투여 전에 투여되거나, 그와 중첩되거나 (부분적으로 또는 총체적으로), 또는 그 후에 투여되는 것을 포함한다. 이 용어는 일반적으로 제1 작용제 (예를 들어, 초항원 접합체)와 제2 작용제 (예를 들어, B-세포 고갈제)의 상승작용적 조합을 달성하기 위한 최상의 투여 계획을 고려한다. 이러한 투여 전략 (예를 들어, 순차적 투여)에 의해, 상승작용적 효과 (예를 들어, 조합된 초항원 접합체와 B-세포 고갈제 투여의 상승작용적 효과)를 달성할 수 있다. 또한, 용어 "순차적 투여" 및 관련 용어는 또한 적어도 제1 작용제 (예를 들어, 초항원 접합체), 제2 작용제 (예를 들어, B-세포 고갈제), 그리고 그 이상, 또는 보다 많은 임의적인 추가의 작용제 또는 화합물, 예컨대 예를 들어 코르티코스테로이드, 면역 조정제, 또는 대상체에게 투여되는 초항원 접합체에 대한 잠재적 면역반응성을 감소시키도록 설계된 작용제의 투여를 포함한다.
본원에 사용된, 투여와 관련된 용어 "전신" 및 "전신으로"는 작용제가 단지 신체의 국재화된 부분, 예컨대 비제한적으로 종양 내 보다는 전신과 연관된 적어도 1종의 계, 예컨대 비제한적으로 순환계, 면역계 및 림프계에 노출되도록 하는 작용제의 투여를 의미하는 것으로 이해된다. 따라서, 예를 들어 전신 요법 또는 전신으로 투여되는 작용제는, 반대로 단지 표적 조직 보다는 전신과 연관된 적어도 1종의 계가 요법 또는 작용제에 노출되는 것인 요법 또는 작용제이다.
본원에 사용된 용어 "비경구 투여"는 화합물이 장을 통한 흡수를 수반하지 않으면서 대상체 내로 흡수되는 투여의 임의의 형태를 포함한다. 본 발명에 사용되는 예시적인 비경구 투여는 근육내, 정맥내, 복강내 또는 관절내 투여를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
용어 "약"이 정량적 값 앞에 사용된 경우에, 본 발명은 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 특정 정량적 값 그 자체를 또한 포함한다. 본원에 사용된 용어 "약"은, 달리 나타내거나 추론되지 않는 한, 공칭 값으로부터의 ±10% 편차를 지칭한다.
본 명세서의 다양한 곳에서, 값은 군 또는 범위로 개시된다. 구체적으로 기재는 이러한 군 및 범위의 구성원의 각각의 및 모든 개별 하위조합을 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 0 내지 40 범위의 정수는 구체적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 및 40을 개별적으로 개시하는 것으로 의도되고, 1 내지 20 범위의 정수는 구체적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20을 개별적으로 개시하는 것으로 의도된다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 조성물 및 키트가 특정 성분을 갖거나, 포함하거나 또는 그로 구성되는 것으로 기재되는 경우, 또는 공정 및 방법이 특정 단계를 갖거나, 포함하거나 또는 그로 구성되는 것으로 기재되는 경우, 추가적으로, 언급된 성분으로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진 본 발명의 조성물 및 키트가 존재하고, 언급된 처리 및 방법 단계로 본질적으로 이루어지거나 또는 이루어진 본 발명에 따른 공정 및 방법이 존재하는 것으로 고려된다.
본 출원에서, 요소 또는 성분이 언급된 요소 또는 성분의 목록에 포함되고/거나 그로부터 선택되는 경우, 상기 요소 또는 성분이 언급된 요소 또는 성분 중 어느 하나일 수 있거나 또는 상기 요소 또는 성분이 언급된 요소 또는 성분 중 2종 이상으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
추가로, 본원에서 명백하든 내포되든 간에, 본 발명의 취지 및 범주로부터 벗어나지 않는 한, 본원에 기재된 조성물 또는 방법의 요소 및/또는 특색은 다양한 방식으로 조합될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정한 화합물이 언급된 경우에, 문맥으로부터 달리 이해되지 않는 한, 그 화합물은 본 발명의 조성물 및/또는 본 발명의 방법의 다양한 실시양태에서 사용될 수 있다. 다시 말해서, 본 출원 내에서, 실시양태는 명확하고 정확한 출원이 기록되고 그려질 수 있도록 하는 방식으로 기재 및 도시되었지만, 실시양태는 본 발명의 교시 및 본 발명(들)으로부터 벗어나지 않으면서 다양하게 조합 또는 분리될 수 있는 것으로 의도되고 인지될 것이다. 예를 들어, 본원에 기재 및 도시된 모든 특색은 본원에 기재 및 도시된 본 발명(들)의 모든 측면에 적용가능할 수 있는 것으로 인지될 것이다.
표현 "중 적어도 하나"는 문맥 및 용도로부터 달리 이해되지 않는 한, 표현 다음에 언급된 대상 및 언급된 대상 중 2종 이상의 다양한 조합 각각을 개별적으로 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 3종 이상의 언급된 대상과 관련하여 표현 "및/또는"은 문맥으로부터 달리 이해되지 않는 한 동일한 의미를 갖는 것으로 이해되어야 한다.
용어 "포함하다", "포함한다", "포함한", "가진다", "갖는다", "갖는", "함유하다", "함유한다" 또는 "함유하는" (그의 문법적 등가물 포함)의 사용은, 달리 구체적으로 언급되거나 문맥으로부터 이해되지 않는 한, 일반적으로 개방형 및 비제한적인 것으로, 예를 들어 추가의 언급되지 않은 요소 또는 단계를 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
단계의 순서 또는 특정한 작용을 수행하는 순서는 본 발명이 작동가능하게 유지되는 한 중요하지 않은 것으로 이해되어야 한다. 더욱이, 2개 이상의 단계 또는 작용이 동시에 수행될 수 있다.
본원에서 임의의 및 모든 예 또는 예시적인 용어, 예를 들어 "예컨대" 또는 "포함한"의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 예시하기 위해 의도된 것이며, 청구되지 않는 한 본 발명의 범주에 대한 제한을 가하지 않는다. 본 명세서의 어떠한 용어도 임의의 청구되지 않은 요소가 본 발명의 실시에서 필수적임을 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.
II. 초항원 접합체
A. 초항원
초항원은, 예를 들어 피코몰 농도에서 T 림프구를 활성화시킬 수 있는 박테리아 단백질, 바이러스 단백질 및 인간-조작된 단백질이다. 초항원은 또한 T 림프구 (T-세포)의 많은 하위세트를 활성화시킬 수 있다. 초항원은 프로세싱되지 않으면서 주요 조직적합성 복합체 I (MHCI)에 결합할 수 있고, 특히 통상적인 펩티드-결합 부위에서의 대부분의 다형성을 피하면서 MHC 부류 II 분자 상의 항원-결합 홈 밖의 보존된 영역에 결합할 수 있다. 초항원은 또한 T-세포 수용체의 초가변 루프에 결합하기 보다는 T-세포 수용체 (TCR)의 Vβ 쇄에 결합할 수 있다. 박테리아 초항원의 예는 포도상구균 장독소 (SE), 화농연쇄상구균(Streptococcus pyogenes) 외독소 (SPE), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) 독성 쇼크-증후군 독소 (TSST-1), 포도상구균 유사분열촉진 외독소 (SME), 포도상구균 초항원 (SSA), 포도상구균 장독소 A (SEA), 포도상구균 장독소 A (SEB) 및 포도상구균 장독소 E (SEE)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
많은 초항원을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 단리 및 클로닝되었고, 이들 또는 변형된 (재조작된) 폴리뉴클레오티드 서열로부터 발현된 초항원이 항암 요법에 사용되었다 (하기 논의된 나프투모맙 에스타페나톡스 참조). 이들 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 발현된 초항원은 야생형 초항원, 변형된 초항원 또는 표적화 모이어티와 접합 또는 융합된 야생형 또는 변형된 초항원일 수 있다. 초항원은 포유동물, 예컨대 인간에게 직접적으로, 예를 들어 주사에 의해 투여될 수 있거나, 또는 예를 들어 신체 외부 초항원에 대한 환자 혈액의 노출에 의해 전달될 수 있거나, 또는 예를 들어 치료될 포유동물 내부에 초항원을 코딩하는 유전자를 배치하고 (예를 들어, 공지된 유전자 요법 방법 및 벡터를 통해, 예컨대, 예를 들어 유전자를 함유하고 이를 발현할 수 있는 세포를 통해) 포유동물 내에서 유전자를 발현시키는 것을 통해 전달될 수 있다.
초항원 및 포유동물에의 그의 투여의 예는 하기 미국 특허 및 특허 출원에 기재되어 있다: 미국 특허 번호 5,858,363, 6,197,299, 6,514,498, 6,713,284, 6,692,746, 6,632,640, 6,632,441, 6,447,777, 6,399,332, 6,340,461, 6,338,845, 6,251,385, 6,221,351, 6,180,097, 6,126,945, 6,042,837, 6,713,284, 6,632,640, 6,632,441, 5,859,207, 5,728,388, 5,545,716, 5,519,114, 6,926,694, 7,125,554, 7,226,595, 7,226,601, 7,094,603, 7,087,235, 6,835,818, 7,198,398, 6,774,218, 6,913,755, 6,969,616 및 6,713,284, 미국 특허 출원 번호 2003/0157113, 2003/0124142, 2002/0177551, 2002/0141981, 2002/0115190 및 2002/0051765 및 국제 (PCT) 공개 번호 WO/03/094846.
B. 변형된 초항원
본 발명의 범주 내에서, 초항원은 T 림프구를 자극하는 초항원의 능력을 유지하거나 증진시키는 변형을 포함한 다양한 방식으로 조작될 수 있고, 예를 들어 초항원의 다른 측면, 예컨대, 예를 들어 그의 혈청반응성 또는 면역원성을 변경시킬 수 있다. 변형된 초항원은 초항원 활성 (즉, T 림프구의 하위세트를 활성화시키는 능력)을 갖는 합성 분자를 포함한다.
초항원을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 대해, 그의 생물학적 유용성 또는 활성, 즉 종양 세포의 세포독성을 유발하기 위한 T-세포 반응 유도의 인지가능한 상실 없이, 다양한 변화가 이루어질 수 있는 것으로 고려된다. 추가로, MHC 부류 II 분자에 대한 초항원의 친화도는 초항원의 세포독성에 대해 최소 영향을 미치면서 감소될 수 있다. 이는, 예를 들어 초항원이 MHC 부류 II 항원에 결합하는 그의 야생형 능력을 유지하는 경우에 달리 발생할 수 있는 독성을 감소시키는 데 도움을 줄 수 있다 (이러한 경우에서와 같이, 부류 II 발현 세포, 예컨대 면역계 세포도 또한 초항원에 대한 반응에 의해 영향을 받을 수 있음).
초항원 (예를 들어, 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드)을 변형시키는 기술, 예컨대 합성 초항원을 제조하는 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 PCR 돌연변이유발, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 및 부위-특이적 돌연변이유발을 포함한다 (미국 특허 번호 5,220,007; 5,284,760; 5,354,670; 5,366,878; 5,389,514; 5,635,377; 및 5,789,166 참조).
일부 실시양태에서, 초항원은 그의 혈청반응성이 참조 야생형 초항원과 비교하여 감소되지만 T-세포를 활성화시키는 그의 능력은 야생형에 비해 유지 또는 증진되도록 변형될 수 있다. 이러한 변형된 초항원을 제조하기 위한 하나의 기술은 한 초항원으로부터의 특정 영역 내 특정 아미노산을 또 다른 것으로 치환시키는 것을 포함한다. 이는 SEA, SEE 및 SED를 포함하나 이에 제한되지는 않는 많은 초항원이 특정 기능에 연관된 특정 영역에서 서열 상동성을 공유하기 때문에 가능하다 (문헌 [Marrack and Kappler (1990) Science 248(4959): 1066]; 또한 상이한 야생형과 조작된 초항원 사이의 상동성 영역을 보여주는 도 1 참조). 예를 들어, 본 발명의 특정 실시양태에서, 목적하는 T-세포 활성화-유도 반응을 갖지만 목적하지 않은 높은 혈청반응성은 갖지 않는 초항원은, 생성된 초항원이 그의 T-세포 활성화 능력을 유지하지만 감소된 혈청반응성을 갖도록 변형된다.
인간의 혈청은 정상적으로 초항원에 대해 다양한 역가의 항체를 함유하는 것으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 공지되고 이해된다. 포도상구균 초항원의 경우, 예를 들어 상대 역가는 TSST-1>SEB>SEC-1>SE3>SEC2>SEA>SED>SEE이다. 그 결과, 예를 들어 SEE (포도상구균 장독소 E)의 혈청반응성은, 예를 들어 SEA (포도상구균 장독소 A)의 것보다 더 낮다. 이러한 데이터에 기초하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 높은 역가 초항원, 예컨대, 예를 들어 SEB (포도상구균 장독소 B) 대신에 낮은 역가 초항원, 예컨대, 예를 들어 SEE를 투여하는 것을 선호할 수 있다. 그러나, 또한 발견된 바와 같이, 상이한 초항원은 서로에 대해 상이한 T-세포 활성화 특성을 갖고, 야생형 초항원의 경우, 최상의 T-세포 활성화 초항원은 종종 또한 바람직하지 않게 높은 혈청반응성을 갖는다.
이들 상대 역가는 때때로 혈청반응성으로 인한 잠재적 문제, 예컨대 중화 항체로 인한 문제에 상응한다. 따라서, 낮은 역가 초항원, 예컨대 SEA 또는 SEE의 사용은 비경구로 투여된 초항원의 혈청반응성을 감소시키거나 피하는 데 도움이 될 수 있다. 낮은 역가 초항원은, 예를 들어 일반 집단에서 전형적인 항-초항원 항체에 의해 측정 시 낮은 혈청반응성을 갖는다. 일부 경우에 그것은 또한 낮은 면역원성을 가질 수 있다. 이러한 낮은 역가 초항원은 본원에 기재된 바와 같이 그의 낮은 역가를 유지하기 위해 변형될 수 있다.
초항원을 변형시키기 위한 접근법은 목적하는 T-세포 활성화 특성 및 감소된 혈청반응성 둘 다 및 일부 경우에 또한 감소된 면역원성을 갖는 초항원을 생성시키는 데 사용될 수 있다. 초항원 사이의 특정 상동성 영역이 혈청반응성과 관련된다는 것을 고려하여, 목적하는 T-세포 활성화 및 목적하는 혈청반응성 및/또는 면역원성을 갖는 재조합 초항원을 조작하는 것이 가능하다. 추가로, 초항원 또는 포도상구균 장독소의 단백질 서열 및 면역학적 교차-반응성은 2개의 관련 군으로 나누어진다. 한 군은 SEA, SEE 및 SED로 이루어진다. 제2 군은 SPEA, SEC 및 SEB이다. 따라서, 포도상구균 장독소에 대해 지시된 높은 역가 또는 내인성 항체와의 교차-반응성을 감소 또는 제거하기 위해 낮은 역가 초항원을 선택하는 것이 가능하다.
혈청반응성에서 소정 역할을 하는 것으로 여겨지는 초항원 내의 영역은, 예를 들어 아미노산 잔기 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 및 27을 포함하는 영역 A; 아미노산 잔기 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 및 49를 포함하는 영역 B; 아미노산 잔기 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 및 84를 포함하는 영역 C; 아미노산 잔기 187, 188, 189 및 190을 포함하는 영역 D; 및 아미노산 잔기 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226 및 227을 포함하는 영역 E를 포함한다 (미국 특허 번호 7,125,554 및 본원 도 1 참조). 따라서, 이들 영역이, 예를 들어 아미노산 치환을 사용하여 돌연변이되어, 변경된 혈청반응성을 갖는 초항원을 생산할 수 있는 것으로 고려된다.
상기 열거된 초항원에 대한 폴리펩티드 또는 아미노산 서열은 임의의 서열 데이터 뱅크, 예를 들어 프로테인 데이터 뱅크(Protein Data Bank) 및/또는 진뱅크(GenBank)로부터 수득될 수 있다. 예시적인 진뱅크 수탁 번호는 다음을 포함하나 이에 제한되지는 않는다: SEE는 P12993이고; SEA는 P013163이고; SEB는 P01552이고; SEC1은 P01553이고; SED는 P20723이고; SEH는 AAA19777임.
본 발명의 특정 실시양태에서, 야생형 SEE 서열 (서열식별번호: 1) 또는 야생형 SEA 서열 (서열식별번호: 2)은 임의의 확인된 영역 A-E (도 1 참조) 내의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환되도록 변형될 수 있다. 이러한 치환은, 예를 들어 K79, K81, K83 및 D227 또는 K79, K81, K83, K84 및 D227 또는 예를 들어 K79E, K81E, K83S 및 D227S 또는 K79E, K81E, K83S, K84S 및 D227A를 포함한다. 특정 실시양태에서, 초항원은 SEA/E-120 (서열식별번호: 3; 또한 미국 특허 번호 7,125,554 참조) 또는 SEAD227A (서열식별번호: 4; 또한 미국 특허 번호 7,226,601 참조)이다.
1. 변형된 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드
자연 발생 또는 참조 초항원을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 생물학적 기능적 등가물은 별개의 서열을 함유하지만 동시에 자연 발생 또는 참조 초항원을 코딩하는 능력은 유지하도록 조작된 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 이는 유전자 코드의 축중성, 즉 동일한 아미노산을 코딩하는 다중 코돈의 존재로 인해 달성될 수 있다. 한 예에서, 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 능력을 방해하지 않으면서 그 폴리뉴클레오티드 내로 제한 효소 인식 서열을 도입하는 것이 가능하다. 다른 폴리뉴클레오티드 서열은, 상이하지만 참조 초항원에 대해 적어도 1종의 생물학적 특성 또는 활성에 있어서 기능상 실질적으로 등가 (예를 들어, 생물학적 특성 또는 활성, 예를 들어 비제한적으로 종양 세포의 세포독성을 유발하는 T-세포 반응을 유도하는 능력의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%)인 초항원을 코딩할 수 있다.
또 다른 예에서, 폴리뉴클레오티드는, 보다 유의한 변화를 함유할 수 있기는 하지만 참조 초항원에 대해 기능상 등가인 초항원일 수 있다 (그리고 이를 코딩할 수 있음). 특정 아미노산은, 예를 들어 항체의 항원-결합 영역, 기질 분자, 수용체 상의 결합 부위 등과 같은 구조와의 상호작용 결합 능력의 인지가능한 상실 없이 단백질 구조에서 다른 아미노산을 대체할 수 있다. 추가로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 생물학적 활성을 파괴하지 않을 수 있으며, 따라서 생성된 구조 변화는 종종 단백질이 그의 설계된 기능을 수행하는 능력에 영향을 미치는 것이 아니다. 따라서 본 발명의 목적을 여전히 충족시키면서 본원에 개시된 유전자 및 단백질의 서열에 다양한 변화가 이루어질 수 있는 것으로 고려된다.
아미노산 치환은 아미노산 측쇄 치환기의 상대 유사성, 예를 들어 그의 소수성, 친수성, 전하 및/또는 크기 등을 이용하도록 설계될 수 있다. 아미노산 측쇄 치환기의 크기, 형상 및/또는 유형의 분석에 의해, 아르기닌, 리신 및/또는 히스티딘이 모두 양으로 하전된 잔기이고/거나; 알라닌, 글리신 및/또는 세린이 모두 유사한 크기이고/거나; 페닐알라닌, 트립토판 및/또는 티로신이 모두 일반적으로 유사한 형상을 갖는 것으로 밝혀져 있다. 따라서, 이들 고려사항에 기초하여, 아르기닌, 리신 및/또는 히스티딘; 알라닌, 글리신 및/또는 세린; 및/또는 페닐알라닌, 트립토판 및/또는 티로신은 본원에서 생물학적 기능적 등가물로서 정의된다. 추가로, 비-자연 발생 아미노산을 도입하는 것이 가능할 수 있다. 다른 자연 발생 및 비-자연 발생 아미노산으로 아미노산 치환을 만드는 접근법은 미국 특허 번호 7,763,253에 기재되어 있다.
기능적 등가물의 관점에서, "생물학적 기능적 등가" 단백질 및/또는 폴리뉴클레오티드의 정의에 내포된 것은 허용되는 수준의 등가 생물학적 활성을 갖는 분자를 유지하면서 분자의 정의된 부분 내에서 제한된 수의 변화가 이루어질 수 있다는 개념인 것으로 이해된다. 따라서 생물학적 기능적 등가물은 선택된 아미노산 (또는 코돈)이 생물학적 기능에 실질적으로 영향을 미치지 않으면서 치환될 수 있는 단백질 (및 폴리뉴클레오티드)인 것으로 간주된다. 기능적 활성은 종양 세포의 세포독성을 유발하는 T-세포 반응의 유도를 포함한다.
추가로, 변형된 초항원은, 상이하지만 이 경우 관련 폴리펩티드를 사용한 키메라 분자의 생성을 수반하는 "도메인 스와핑"을 통해 다양한 단백질의 상동 영역을 치환시킴으로써 생성될 수 있는 것으로 고려된다. 이들 분자의 기능적 관련 영역을 확인하기 위해 다양한 초항원 단백질을 비교함으로써 (예를 들어, 도 1 참조), 초항원 기능에 대한 이들 영역의 중요성을 결정하기 위해 이들 분자의 관련 도메인을 스와핑시키는 것이 가능하다. 이들 분자는, 이들 "키메라"가 가능하게는 동일한 기능을 제공하면서 자연 분자와 구별될 수 있다는 점에서 추가의 가치를 가질 수 있다.
특정 실시양태에서, 초항원은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3 및 서열식별번호: 4로부터 선택된 참조 초항원의 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 초항원은 임의로 참조 초항원의 생물학적 활성 또는 특성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100%를 유지한다.
특정 실시양태에서, 초항원은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3 및 서열식별번호: 4로부터 선택된 초항원을 코딩하는 핵산에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 핵산에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 초항원은 임의로 참조 초항원의 생물학적 활성 또는 특성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100%를 유지한다.
서열 동일성은 관련 기술분야의 기술 내에 있는 다양한 방식으로, 예를 들어 공중 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 메그얼라인(Megalign) (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 결정될 수 있다. 프로그램 blastp, blastn, blastx, tblastn 및 tblastx에 의해 사용되는 알고리즘을 사용하는 BLAST (베이직 로컬 얼라인먼트 서치 툴(Basic Local Alignment Search Tool)) 분석 (문헌 [Karlin et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268; Altschul, (1993) J. Mol. Evol. 36, 290-300; Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402] (참조로 포함됨))은 서열 유사성 검색을 위해 조정된다. 서열 데이터베이스 검색에서의 기초적 문제의 논의를 위해, 문헌 [Altschul et al., (1994) Nature Genetics 6:119-129] (전문이 참조로 포함됨)을 참조한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 비교될 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함한, 정렬 측정에 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 히스토그램, 설명, 정렬, 기대값 (즉, 데이터베이스 서열에 대한 매치를 보고하기 위한 통계적 유의성 한계값), 컷오프, 매트릭스 및 필터에 대한 검색 파라미터는 디폴트 설정이다. blastp, blastx, tblastn 및 tblastx에 의해 사용되는 디폴트 점수화 매트릭스는 BLOSUM62 매트릭스이다 (문헌 [Henikoff et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-10919] (전문이 참조로 포함됨)). 4개의 blastn 파라미터는 하기와 같이 조정될 수 있다: Q=10 (갭 생성 페널티); R=10 (갭 연장 페널티); wink=1 (질의에 따라 모든 wink.sup.th 위치에 워드 히트를 생성함); 및 gapw=16 (내부에 갭이 있는 정렬이 생성되는 윈도우 폭을 설정함). 등가 Blastp 파라미터 설정은 Q=9; R=2; wink=1 및 gapw=32일 수 있다. 검색은 또한 NCBI (국립 생물 정보 센터) BLAST 어드밴스드 옵션 파라미터를 사용하여 수행될 수 있다 (예를 들어: -G, 갭 개방 코스트 [정수]: 디폴트 = 뉴클레오티드의 경우 5/ 단백질의 경우 11; -E, 갭 연장 코스트 [정수]: 디폴트 = 뉴클레오티드의 경우 2/ 단백질의 경우 1; -q, 뉴클레오티드 미스매치에 대한 페널티 [정수]: 디폴트 = -3; -r, 뉴클레오티드 매치에 대한 리워드 [정수]: 디폴트 = 1; -e, 기대값 [실제]: 디폴트 = 10; -W, 워드 크기 [정수]: 디폴트 = 뉴클레오티드의 경우 11/ megablast의 경우 28/ 단백질의 경우 3; -y, 비트 단위의 blast 연장에 대한 드롭오프 (X): 디폴트 = blastn의 경우 20/ 기타의 경우 7; -X, 갭이 있는 정렬에 대한 X 드롭오프 값 (비트 단위): 디폴트 = blastn에 적용가능하지 않은 모든 프로그램에 대해 15; 및 -Z, 갭이 있는 정렬에 대한 최종 X 드롭오프 값 (비트 단위): blastn의 경우 50, 기타의 경우 25). 쌍별 단백질 정렬을 위한 ClustalW가 또한 사용될 수 있다 (디폴트 파라미터는, 예를 들어 Blosum62 매트릭스 및 갭 개방 페널티 = 10 및 갭 연장 페널티 = 0.1을 포함할 수 있음). GCG 패키지 버전 10.0에서 이용가능한 서열 사이의 Bestfit 비교는 DNA 파라미터 GAP=50 (갭 생성 페널티) 및 LEN=3 (갭 연장 페널티)을 사용하고, 단백질 비교에서의 등가의 설정은 GAP=8 및 LEN=2이다.
C. 표적화된 초항원
특이성을 증가시키기 위해, 초항원은 바람직하게는, 암 세포에 의해 우선적으로 발현된 항원, 예를 들어 세포 표면 항원, 예컨대 5T4에 결합하는 표적화된 초항원 접합체를 생성하기 위해 표적화 모이어티에 접합된다. 표적화 모이어티는 초항원을 암성 세포, 예를 들어 암성 세포의 표면에 결합시키는 데 사용될 수 있는 비히클이다. 표적화된 초항원 접합체는 다수의 T 림프구를 활성화시키는 능력을 유지하여야 한다. 예를 들어, 표적화된 초항원 접합체는 다수의 T-세포를 활성화시키고 이들을 표적화 모이어티에 결합된 종양-연관 항원을 함유하는 조직으로 지시하여야 한다. 이러한 상황에서, 특이적 표적 세포가 우선적으로 사멸되어, 신체의 나머지는 비교적 무해하게 된다. 비-특이적 항암제, 예컨대 세포증식억제성 화학요법 약물은 비특이적이고 치료될 종양과 연관되지 않은 다수의 세포를 사멸시키기 때문에, 이러한 유형의 요법이 바람직하다. 예를 들어, 표적화된 초항원 접합체를 사용한 연구는 종양 조직 내로의 세포독성 T 림프구 (CTL) 침윤에 의한 염증이 표적화된 초항원의 최초 주사에 반응하여 급속히 증가한다는 것을 제시하였다 (Dohlsten et al. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:9791-9795). 종양 내로의 CTL 침윤에 의한 이러한 염증은 표적화된 초항원의 항종양 치료의 주요 이펙터 중 하나이다.
종양-표적화된 초항원은 암에 대한 면역요법을 나타내고 초항원에 접합된 표적화 모이어티를 함유하는 치료 융합 단백질이다 (Dohlsten et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:9287-9291; Dohlsten et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:8945-8949).
표적화 모이어티는 원칙적으로 세포 분자, 예를 들어 세포 표면 분자 및 바람직하게는 질환 특이적 분자에 결합할 수 있는 임의의 구조일 수 있다. 표적화 모이어티가 지시되는 표적화된 분자 (예를 들어, 항원)는 통상적으로 (a) 초항원이 결합하는 Vβ 쇄 에피토프 및 (b) 초항원이 결합하는 MHC 부류 II 에피토프와는 상이하다. 표적화 모이어티는 항체 (그의 항원 결합 단편을 포함함), 가용성 T-세포 수용체, 성장 인자, 인터류킨 (예를 들어, 인터류킨-2), 호르몬 등으로부터 선택될 수 있다.
특정의 바람직한 실시양태에서, 표적화 모이어티는 항체 (예를 들어, Fab, F(ab)2, Fv, 단일 쇄 항체 등)이다. 항체는 전형적으로 임의의 관심 세포 표면 항원에 대해 생성될 수 있기 때문에 이들은 매우 다양하고 유용한 세포-특이적 표적화 모이어티이다. 모노클로날 항체는 세포 표면 수용체, 종양-연관 항원 및 백혈구 계통-특이적 마커, 예컨대 CD 항원에 대해 생성되었다. 항체 가변 영역 유전자는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 하이브리도마 세포로부터 용이하게 단리될 수 있다. 표적화 모이어티를 생산하는 데 사용될 수 있는 예시적인 종양-연관 항원은 gp100, 멜란-A/MART, MAGE-A, MAGE (흑색종 항원 E), MAGE-3, MAGE-4, MAGEA3, 티로시나제, TRP2, NY-ESO-1, CEA (암배아성 항원), PSA, p53, 맘마글로빈-A, 서바이빈, MUC1 (뮤신1)/DF3, 메탈로판스티물린-1 (MPS-1), 시토크롬 P450 이소형 1B1, 90K/Mac-2 결합 단백질, Ep-CAM (MK-1), HSP-70, hTERT (TRT), LEA, LAGE-1/CAMEL, TAGE-1, GAGE, 5T4, gp70, SCP-1, c-myc, 시클린 B1, MDM2, p62, Koc, IMP1, RCAS1, TA90, OA1, CT-7, HOM-MEL-40/SSX-2, SSX-1, SSX-4, HOM-TES-14/SCP-1, HOM-TES-85, HDAC5, MBD2, TRIP4, NY--CO-45, KNSL6, HIP1R, Seb4D, KIAA1416, IMP1, 90K/Mac-2 결합 단백질, MDM2, NY/ESO, EGFRvIII, IL-13Rα2, HER2, GD2, EGFR, PDL1, 메소텔린, PSMA, TGFβRDN, LMP1, GPC3, Fra, MG7, CD133, CMET, PSCA, 글리피칸3, ROR1, NKR-2, CD70 및 LMNA를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
예시적인 암-표적화 항체는 항-CD19 항체, 항-CD20 항체, 항-5T4 항체, 항-Ep-CAM 항체, 항-Her-2/neu 항체, 항-EGFR 항체, 항-CEA 항체, 항-전립선 특이적 막 항원 (PSMA) 항체 및 항-IGF-1R 항체를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 초항원은 면역학적 반응성 항체 단편, 예컨대 C215Fab, 5T4Fab (WO8907947 참조) 또는 C242Fab (WO9301303 참조)에 접합될 수 있는 것으로 이해된다.
본 발명에 사용될 수 있는 종양 표적화된 초항원의 예는 C215Fab-SEA (서열식별번호: 5), 5T4Fab-SEAD227A (서열식별번호: 6) 및 5T4Fab-SEA/E-120 (서열식별번호: 7, 도 1 및 도 2 참조)을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 바람직한 접합체는 항-5T4 항체의 Fab 단편 및 SEA/E-120 초항원의 융합 단백질인 나프투모맙 에스타페나톡스로 공지된 초항원 접합체이다. 나프투모맙 에스타페나톡스는 조작된 포도상구균 장독소 초항원 (SEA/E-120) 및 뮤린 IgG1/κ 항체 C242의 불변 영역 서열에 융합된 변형된 5T4 가변 영역 서열을 포함하는 표적화 5T4 Fab를 누적적으로 포함하는 2개의 단백질 쇄를 포함한다. 제1 단백질 쇄는 서열식별번호: 7의 잔기 1 내지 458을 포함하고 (또한 서열식별번호: 8 참조), 서열식별번호: 7의 잔기 1 내지 222에 상응하는 키메라 5T4 Fab 중쇄 및 서열식별번호: 7의 잔기 223 내지 225에 상응하는 GGP 트리펩티드 링커를 통해 공유 연결된, 서열식별번호: 7의 잔기 226 내지 458에 상응하는 SEA/E-120 초항원을 포함한다. 제2 쇄는 서열식별번호: 7의 잔기 459 내지 672를 포함하고 (또한 서열식별번호: 9 참조), 키메라 5T4 Fab 경쇄를 포함한다. 2개의 단백질 쇄는 Fab 중쇄와 경쇄 사이의 비-공유 상호작용에 의해 함께 유지된다. 서열식별번호: 7의 잔기 1-458은 서열식별번호: 8의 잔기 1-458에 상응하고, 서열식별번호: 7의 잔기 459-672는 서열식별번호: 9의 잔기 1-214에 상응한다. 나프투모맙 에스타페나톡스는 Fab 중쇄와 Fab 경쇄 사이의 비-공유 상호작용에 의해 함께 유지되는 서열식별번호: 8 및 9의 단백질을 포함한다. 나프투모맙 에스타페나톡스는 약 10 pM 농도에서 암 세포의 T-세포 매개 사멸을 유도하고, 접합체의 초항원 성분은 인간 항체 및 MHC 부류 II에 대한 낮은 결합을 갖도록 조작되었다.
표적화 모이어티를 기반으로 하는 다른 항체는 관련 기술분야에 공지되어 있으며 하기에 보다 상세하게 논의된 기술을 사용하여 설계, 변형, 발현 및 정제될 수 있는 것으로 고려된다.
표적화 모이어티의 또 다른 유형은 가용성 T-세포 수용체 (TCR)를 포함한다. 가용성 TCR의 일부 형태는 단지 세포외 도메인만을 함유하거나 또는 세포외 및 세포질 도메인을 함유할 수 있다. 미국 공개 출원 번호 U.S. 2002/119149, U.S. 2002/0142389, U.S. 2003/0144474 및 U.S. 2003/0175212 및 국제 공개 번호 WO2003020763; WO9960120 및 WO9960119에 기재된 바와 같이 TCR이 막 결합되지 않도록 막횡단 도메인이 결실 및/또는 변경된 가용성 TCR을 생산하기 위한 TCR의 다른 변형이 또한 구상될 수 있다.
표적화 모이어티는 재조합 기술을 사용하거나 또는 초항원에 표적화 모이어티를 화학적으로 연결시킴으로써 초항원에 접합될 수 있다.
1. 재조합 링커 (융합 단백질)
표적화 모이어티에 직접적으로 또는 간접적으로 (예를 들어, 링커를 함유하는 아미노산을 통해) 연결된 초항원을 코딩하는 유전자는 통상적인 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성 및 발현될 수 있는 것으로 고려된다. 예를 들어, 변형된 초항원의 아미노 말단은 표적화 모이어티의 카르복시 말단에 연결될 수 있거나 또는 그 반대의 경우일 수 있다. 표적화 모이어티로서의 역할을 할 수 있는 항체 또는 항체 단편의 경우, 경쇄 또는 중쇄가 융합 단백질을 생성하기 위해 이용될 수 있다. 예를 들어, Fab 단편의 경우에, 변형된 초항원의 아미노 말단은 중쇄 항체 쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)에 연결될 수 있다. 일부 경우에, 변형된 초항원은 초항원에 VH 및 VL 도메인을 연결함으로써 Fab 단편에 연결될 수 있다. 대안적으로, 펩티드 링커가 초항원 및 표적화 모이어티를 함께 연결하는 데 사용될 수 있다. 링커가 사용되는 경우에, 링커는 바람직하게는 친수성 아미노산 잔기, 예컨대 Gln, Ser, Gly, Glu, Pro, His 및 Arg를 함유한다. 바람직한 링커는 1-10개의 아미노산 잔기, 보다 특히 3-7개의 아미노산 잔기로 이루어진 펩티드 가교이다. 예시적인 링커는 트리펩티드 - GlyGlyPro -이다. 이들 접근법은 나프투모맙 에스타페나톡스 초항원 접합체의 설계 및 제조에 성공적으로 사용되었다.
2. 화학적 연결
또한 초항원이 화학적 연결을 통해 표적화 모이어티에 연결될 수 있는 것으로 고려된다. 초항원의 표적화 모이어티에 대한 화학적 연결은 링커, 예를 들어 펩티드 링커를 요구할 수 있다. 펩티드 링커는 바람직하게는 친수성이고, 아미드, 티오에테르, 디술피드 등으로부터 선택된 1종 이상의 반응성 모이어티를 나타낸다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,858,363, 6,197,299 및 6,514,498 참조). 또한 화학적 연결이 동종- 또는 이종이관능성 가교 시약을 사용할 수 있는 것으로 고려된다. 초항원의 표적화 모이어티에 대한 화학적 연결은 종종 화합물 내 많은 위치에 존재하는 관능기 (예를 들어, 1급 아미노 기 또는 카르복시 기)를 이용한다.
D. 초항원 및 초항원 접합체의 발현
재조합 DNA 기술이 사용되는 경우에, 초항원 또는 초항원-표적화 모이어티 접합체는 표준 발현 벡터 및 발현 시스템을 사용하여 발현될 수 있다. 초항원을 코딩하는 핵산 서열을 함유하도록 유전자 조작된 발현 벡터는 숙주 세포 내로 도입 (예를 들어, 형질감염)되어 초항원을 생산한다 (예를 들어, 문헌 [Dohlsten et al. (1994), Forsberg et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:12430-12436, Erlandsson et al. (2003) J. Mol. Biol. 333:893-905] 및 WO 2003002143 참조).
숙주 세포는, 예를 들어 형질전환 또는 형질감염 기술에 의해, 핵산 서열을 혼입시키고 초항원을 발현하도록 유전자 조작될 수 있다. 숙주 세포 내로의 핵산 서열의 도입은 인산칼슘 형질감염, DEAE-덱스트란 매개 형질감염, 미세주사, 양이온성 지질-매개 형질감염, 전기천공, 형질도입, 스크레이프 로딩, 탄도적 도입, 감염 또는 다른 방법에 의해 수행될 수 있다. 이러한 방법은 많은 표준 실험실 매뉴얼, 예컨대 문헌 [Davis et al. (1986) Basic Methods In Molecular Biology and Sambrook, et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.]에 기재되어 있다.
적절한 숙주 세포의 대표적인 예는 박테리아 세포, 예컨대 스트렙토코쿠스, 스타필로코쿠스, 이. 콜라이(E. coli), 스트렙토미세스 및 바실루스 서브틸리스 세포; 진균 세포, 예컨대 효모 세포 및 아스페르길루스 세포; 곤충 세포, 예컨대 드로소필라 S2 및 스포도프테라 Sf9 세포; 포유동물 세포, 예컨대 CHO, COS, HeLa, C127, 3T3, BHK, HEK-293 및 보웨스 흑색종 세포를 포함한다.
초항원에 대한 생산 시스템의 예는, 예를 들어 미국 특허 번호 6,962,694에서 발견된다.
E. 단백질 정제
초항원 및/또는 초항원-표적화 모이어티 접합체는 바람직하게는 사용 전에 정제되며, 이는 다양한 정제 프로토콜을 사용하여 달성될 수 있다. 초항원 또는 초항원-표적화 모이어티 접합체를 다른 단백질로부터 분리하였으면, 부분적 또는 완전한 정제 (또는 균질성 수준으로의 정제)를 달성하기 위해 크로마토그래피 및 전기영동 기술을 사용하여 관심 단백질을 추가로 정제할 수 있다. 순수한 펩티드의 제조에 특히 적합한 분석 방법은 이온-교환 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피; 친화성 크로마토그래피; 폴리아크릴아미드 겔 전기영동; 등전 포커싱이다. 본원에 사용된 용어 "정제된"은 다른 성분으로부터 단리가능한 조성물을 지칭하는 것으로 의도되며, 여기서 관심 거대분자 (예를 들어, 단백질)는 그의 원래 상태에 비해 임의의 정도로 정제된다. 일반적으로, 용어 "정제된"은 다양한 다른 성분을 제거하기 위해 분획화에 적용된 거대분자를 지칭하며, 이는 그의 생물학적 활성을 실질적으로 유지한다. 용어 "실질적으로 정제된"은 관심 거대분자가 조성물의 주요 성분을 형성하는, 예컨대 조성물의 내용물의 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95% 또는 그 초과를 구성하는 조성물을 지칭한다.
예를 들어 활성 분획의 비활성을 결정하고, SDS-PAGE 분석, 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 또는 임의의 다른 분획화 기술에 의해 분획 내에 주어진 단백질의 양을 평가하는 것을 포함한, 단백질의 정제의 정도를 정량화하기 위한 다양한 방법이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 단백질 정제에 사용하기에 적합한 다양한 기술은, 예를 들어 황산암모늄, PEG, 항체 등을 사용하거나 또는 열 변성에 의한 침전에 이어서 원심분리; 크로마토그래피 단계, 예컨대 이온 교환, 겔 여과, 역상, 히드록시아파타이트, 친화성 크로마토그래피; 등전 포커싱; 겔 전기영동; 및 상기 및 다른 기술의 조합을 포함한다. 다양한 정제 단계를 수행하는 순서는 변화될 수 있거나 또는 특정 단계가 생략될 수 있고, 여전히 실질적으로 정제된 단백질 또는 펩티드의 제조를 위한 적합한 방법이 얻어지는 것으로 고려된다.
III. B-세포 고갈제
특정 실시양태에서, 초항원 접합체의 효능은 B-세포 고갈제와 함께 치료될 대상체에게 초항원 접합체를 투여함으로써 증진될 수 있는 것으로 고려된다.
본원에 사용된 "B-세포 고갈제"는 대상체에서 (또는 대상체로부터의 세포, 유체 또는 조직 샘플에서) B-세포, 예를 들어 말초 B-세포의 수를 감소시키는 임의의 작용제를 지칭한다. 예를 들어, 대상체에 대한 B-세포 고갈제의 투여는 대상체 (또는 대상체로부터의 세포, 유체 또는 조직 샘플)에서의 B-세포, 예를 들어 말초 B-세포의 양을 B-세포 고갈제의 투여 전의 대상체 (또는 대상체로부터의 세포, 유체 또는 조직 샘플)에서의 B-세포, 예를 들어 말초 B-세포의 양에 비해 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%만큼 감소시킬 수 있다.
대상체에서의 B-세포의 수는 B-세포 마커, 예컨대 CD20, CD19, PAX5, 및/또는 B220/CD45R에 대한 항체를 사용하여, 예를 들어 유동 세포측정, 면역조직화학 또는 면역형광 방법을 포함한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 대상체에서의 B-세포의 수는 또한 대상체에서 또는 대상체로부터의 세포, 유체 또는 조직 샘플에서 B-세포 마커의 단백질 또는 mRNA 수준의 정량화에 의해 결정될 수 있다. 단백질 수준의 정량화를 위한 예시적인 방법은 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA) 또는 웨스턴 블롯을 포함하고, mRNA 수준의 정량화를 위한 예시적인 방법은 정량적 RT-PCR 또는 마이크로어레이 기술을 포함한다. 특정 실시양태에서, 대상체 내의 B-세포의 수는 본원의 실시예 1에 기재된 바와 같이 B220/CD45R에 대한 염색에 의해 결정될 수 있다.
특정 실시양태에서, B-세포 고갈제는 항-CD20 항체이다. CD20 (B-림프구 항원 CD20, B-림프구 표면 항원 B1, 인간 B-림프구-제한된 분화 항원, Leu-16, Bp35, BM5, 및 LF5로도 공지됨)은 프리-B 및 성숙 B 림프구 상에 발현된 대략 35 kD의 분자량을 갖는 소수성 막횡단 단백질이다. CD20은 B-세포의 형질 세포로의 발생 및 분화에서 역할을 한다. 예시적인 항-CD20 항체는 이브리투모맙, 오비누투주맙, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 리툭시맙, 벨투주맙, 토시투모맙, 우블리툭시맙, 벨투주맙, PRO131921, 및 TRU-015를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 유형 I 항-CD20 항체이다 (문헌 [Cragg et al. (2004) Blood 103:2738-2743, Cragg et al. (2003) Blood 101: 1045-1052, Klein et al. (2013) mAbs 5:22-33], 및 미국 특허 출원 공개 번호 US20170209573A1에 기재된 바와 같음). 유형 I 항-CD20 항체는 부류 I CD20 에피토프에 결합하고, 주로 보체를 이용하여 표적 세포를 사멸시키고/거나, CD20을 지질 뗏목에 국재화시키고/거나, 높은 CDC 활성을 나타내고/거나, B-세포에 대한 완전한 결합 능력을 나타내고/거나, 동형 응집 및 직접 세포 사멸의 단지 약한 유도를 나타낸다. 유형 I 항-CD20 항체의 예는 리툭시맙, 오파투무맙, 벨투주맙, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, PRO131921, 우블리툭시맙, HI47 IgG3 (ECACC, 하이브리도마), 2C6 IgG1 (국제 (PCT) 공개 번호 WO2005/103081에 개시된 바와 같음), 2F2 IgG1 (국제 (PCT) 공개 번호 WO2004/035607 및 WO2005/103081에 개시된 바와 같음) 및 2H7 IgG1 (국제 (PCT) 공개 번호 WO2004/056312에 개시된 바와 같음)을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 유형 II 항-CD20 항체이다 (문헌 [Cragg et al. (2004) Blood 103:2738-2743, Cragg et al. (2003) Blood 101: 1045-1052, Klein et al. (2013) mAbs 5:22-33], 및 미국 특허 출원 공개 번호 US20170209573A1에 기재된 바와 같음). 유형 II 항-CD20 항체는 부류 II CD20 에피토프에 결합하고, 주로 세포 사멸의 직접적인 유도를 통하여 작동하고/거나, CD20을 지질 뗏목에 국재화시키지 않고/거나, 낮은 CDC 활성을 나타내고/거나, 유형 I 항-CD20 항체와 비교하여 B-세포에 대한 결합 능력의 단지 약 절반을 나타내고/거나, 동형 응집 및 직접 세포 사멸을 유도한다. 유형 II 항-CD20 항체의 예는 오비누투주맙 (GA101), 토시투무맙 (B1), 인간화 B-Ly1 항체 IgG1 (국제 (PCT) 공개 번호 WO 2005/044859 및 WO 2007/031875에 개시된 바와 같은 키메라 인간화 IgG1 항체), 11B8 IgG1 (국제 (PCT) 공개 번호 WO 2004/035607에 개시된 바와 같음) 및 AT80 IgG1을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 IgG 항체, 예를 들어 IgG1 항체이다. 특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체와 비교하여 Fc 영역 내에 증가된 비율의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다. 특정 실시양태에서, 항-CD20 항체의 Fc 영역 내의 N-연결된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-푸코실화된다.
특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 (i) 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH2, 및 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH3을 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역; 및 (ii) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL2, 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함하는 이뮤노글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CDR은 인간 또는 인간화 이뮤노글로불린 프레임워크 영역 사이에 개재된다. 특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 (i) 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH2, 및 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH3을 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역; 및 (ii) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL2, 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함하는 이뮤노글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 CD20에의 결합에 대해 경쟁하거나, 또는 CD20 상의 동일한 에피토프에 결합한다.
특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 (i) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 17에 대해 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 18에 대해 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 이뮤노글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 중쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 (i) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 17에 대해 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 18에 대해 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 이뮤노글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 CD20에의 결합에 대해 경쟁하거나, 또는 CD20 상의 동일한 에피토프에 결합한다.
특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 (i) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 19에 대해 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄, 및 (ii) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 20에 대해 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 이뮤노글로불린 경쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 (i) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 19에 대해 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄, 및 (ii) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 20에 대해 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 항체와 CD20에의 결합에 대해 경쟁하거나, 또는 CD20 상의 동일한 에피토프에 결합한다.
특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 오비누투주맙 (또한 가지바(GAZYVA)®, 가지바로(GAZYVARO)®, 또는 GA101로 공지됨)이다. 특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 토시투모맙이다. 추가의 예시적인 항-CD20 항체, 및 사용 방법은 미국 특허 출원 공개 번호 US20170209573A1에 기재되어 있다.
추가의 예시적인 B-세포 고갈제는 항-CD19 항체 (예를 들어, 블리나투모맙, 이네빌리주맙, 타파시타맙), 항-CD21 항체 (예를 들어, OKB-7), 항-CD22 항체 (예를 들어, 에프라투주맙, 이노투주맙, 목세투모맙), BLyS 억제제 (예를 들어, 아타시셉트, 벨리무맙, 블리시비모드, BR3-Fc), 및 화학요법제 (예를 들어, 겜시타빈)를 포함한다.
IV. 면역강화제
특정 실시양태에서, 초항원 접합체 및/또는 B-세포 고갈제의 효능은 치료될 대상체에게 면역강화제를 추가로 투여함으로써 증진될 수 있는 것으로 고려된다.
특정 실시양태에서, 예시적인 면역강화제는 (a) 활성화 T-세포 신호전달을 자극할 수 있고, (b) 암성 세포와 T-세포 사이의 T-세포 억제 신호전달을 억제할 수 있고, (c) 비-인간 IgG1-매개 면역 반응 경로, 예를 들어 인간 IgG4 이뮤노글로불린-매개 경로를 통해 T-세포 확장, 활성화 및/또는 활성을 유도하는 억제 신호전달을 억제할 수 있고, (d) (a) 및 (b)의 조합, (e) (a) 및 (c)의 조합, (f) (b) 및 (c)의 조합, 및 (g) (a), (b) 및 (c)의 조합을 수행할 수 있다.
특정 실시양태에서, 면역강화제는 체크포인트 경로 억제제이다. 다수의 T-세포 체크포인트 억제제 경로, 예를 들어 PD-1 면역 체크포인트 경로 및 세포독성 T-림프구 항원-4 (CTLA-4) 면역 체크포인트 경로가 지금까지 확인되었다.
PD-1은 과다활성 면역 반응을 방지하기 위해 적절한 시간에 T-세포 활성을 억제하거나 또는 달리 조정하는 면역계 체크포인트로서의 역할을 하는, T-세포의 표면 상에 존재하는 수용체이다. 그러나, 암 세포는 T-세포 활성을 차단하거나 또는 조정하기 위해 T-세포의 표면 상의 PD-1과 상호작용하는 리간드, 예를 들어 PD-L1, PD-L2 등을 발현함으로써 이러한 체크포인트를 이용할 수 있다. 이러한 접근법을 사용하여, 암은 T-세포 매개 면역 반응을 피할 수 있다.
CTLA-4 경로에서, T-세포 상의 CTLA-4와 (암 세포 보다는) 항원 제시 세포의 표면 상의 그의 리간드 (예를 들어, B7-1로도 공지된 CD80 및 CD86)와의 상호작용은 T-세포 억제를 유도한다. 그 결과, T-세포 활성화 또는 활성을 억제하는 리간드 (예를 들어, CD80 또는 CD86)는 암 세포 보다는 항원 제시 세포 (면역계에서의 주요 세포 유형)에 의해 제공된다. CTLA-4 및 PD-1 결합 둘 다가 T-세포에 대해 유사한 부정적 영향을 갖지만, 하향조절의 시기, 담당 신호전달 메카니즘 및 이들 2종의 면역 체크포인트에 의한 면역 억제의 해부학적 위치는 상이하다 (American Journal of Clinical Oncology. Volume 39, Number 1, February 2016). T-세포 활성화의 초기 프라이밍 상에 국한되는 CTLA-4와는 달리, PD-1은 훨씬 더 이후에 이펙터 상 동안 기능한다 (Keir et al. (2008) ANNU. REV IMMUNOL., 26:677-704). CTLA-4 및 PD-1은 독립적, 비-중복 작용 메카니즘을 갖는 2종의 T-세포-억제 수용체를 나타낸다.
특정 실시양태에서, 면역강화제는 암성 세포에 의해 발현된 항원이 암성 세포와 T-세포 사이의 T-세포 억제 신호전달을 억제하는 것을 (완전히 또는 부분적으로) 방지한다. 한 실시양태에서, 이러한 면역강화제는 체크포인트 억제제, 예를 들어 PD-1-기반 억제제이다. 이러한 면역강화제의 예는, 예를 들어 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 및 항-PD-L2 항체를 포함한다.
특정 실시양태에서, 초항원 접합체는 PD-1-기반 억제제와 함께 투여된다. PD-1-기반 억제제는 (i) PD-1 억제제, 즉 T-세포 상의 PD-1에 결합하여 관심 암 세포에 의해 발현된 PD-1 리간드의 결합을 방지하는 분자 (예를 들어, 항체 또는 소분자) 및/또는 (ii) PD-L 억제제, 예를 들어 PD-L1 또는 PD-L2 억제제, 즉 PD-1 리간드 (예를 들어, PD-L1 또는 PD-L2)에 결합하여 PD-1 리간드가 T-세포 상의 그의 동족 PD-1에 결합하는 것을 방지하는 분자 (예를 들어, 항체 또는 소분자)를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서 초항원 접합체는 CTLA-4 억제제, 예를 들어 항-CTLA-4 항체와 함께 투여된다. 예시적인 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙 및 트레멜리무맙을 포함한다.
특정 실시양태에서, 면역강화제는 암성 세포에 의해 발현된 항원이 인간 IgG4 (비-인간 IgG1) 매개 면역 반응 경로를 통해 (예를 들어 ADCC 경로를 통해서가 아니라) T-세포 확장, 활성화 및/또는 활성을 억제하는 것을 (완전히 또는 부분적으로) 방지한다. 이러한 실시양태에서, 초항원 접합체 및 면역강화제에 의해 강화된 면역 반응이 일부 ADCC 활성을 포함할 수 있지만, 면역 반응의 주요 성분(들)은 ADCC 활성을 수반하지 않는 것으로 고려된다. 대조적으로, 현재 면역요법에 사용되는 항체의 일부, 예컨대 이필리무맙 (항-CTLA-4 IgG1 모노클로날 항체)은 이펙터 세포 상의 Fc 수용체를 통해 그의 Fc 도메인을 통한 신호전달을 통한 ADCC를 통해 표적화 세포를 사멸시킬 수 있다. 이필리무맙은, 많은 다른 치료 항체와 같이, 인간 IgG1 이뮤노글로불린으로서 설계되었고, 이필리무맙이 CTLA-4와 CD80 또는 CD86 사이의 상호작용을 차단하지만, 그의 작용 메카니즘은 높은 수준의 세포 표면 CTLA-4를 발현하는 종양-침윤 조절 T-세포의 ADCC 고갈을 포함하는 것으로 여겨진다 (Mahoney et al. (2015) NATURE REVIEWS, DRUG DISCOVERY 14: 561-584). CTLA-4가 T-세포 활성화를 음성적으로 제어하는 작용을 하는 T-세포의 하위세트 (조절 T-세포) 상에서 고도로 발현된다는 것을 고려하면, 항-CTLA-4 IgG1 항체가 투여되는 경우에, 조절 T-세포의 수는 ADCC를 통해 감소된다.
특정 실시양태에서, 작용 방식이 T-세포 집단을 유의하게 고갈시키지 않으면서 (예를 들어, T-세포 집단이 확장하는 것을 허용하면서) 주로 암 세포와 T-세포 사이의 억제 신호를 차단하는 것인 면역강화제를 사용하는 것이 바람직하다. 이를 달성하기 위해, 인간 IgG4 이소형을 갖거나 이를 기반으로 하는 항체, 예를 들어 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L2 항체를 사용하는 것이 바람직하다. 인간 IgG4 이소형이 특정 상황에서 바람직한데, 이러한 항체 이소형이 인간 IgG1 이소형과 비교하여 ADCC 활성을 거의 또는 전혀 불러오지 않기 때문이다 (상기 문헌 [Mahoney et al. (2015)]). 따라서, 특정 실시양태에서, 면역강화제, 예를 들어 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L2 항체는 인간 IgG4 이소형을 갖거나 이를 기반으로 한다. 특정 실시양태에서, 면역강화제는 Treg를 고갈시키는 것으로 공지되지 않은 항체, 예를 들어 비-CTLA-4 체크포인트에 지시된 IgG4 항체 (예를 들어, 항-PD-1 IgG4 억제제)이다.
특정 실시양태에서, 면역강화제는 인간 IgG1 이소형 또는 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 매개 세포독성 (CDC)을 도출하는 또 다른 이소형을 갖거나 이를 기반으로 하는 항체이다. 다른 실시양태에서, 면역강화제는 인간 IgG4 이소형 또는 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 매개 세포독성 (CDC)을 거의 또는 전혀 도출하지 않는 또 다른 이소형을 갖거나 이를 기반으로 하는 항체이다.
예시적인 PD-1-기반 억제제는 미국 특허 번호 8,728,474, 8,952,136 및 9,073,994 및 EP 특허 번호 1537878B1에 기재되어 있다. 예시적인 항-PD-1 항체는 니볼루맙 (옵디보(OPDIVO)®, 브리스톨-마이어스 스큅), 펨브롤리주맙 (키트루다(KEYTRUDA)®, 머크(Merck)), 세미플리맙 (리브타요(LIBTAYO)®, 레게네론(Regeneron)/사노피(Sanofi)), 스파르탈리주맙 (PDR001), MEDI0680 (AMP-514), 피딜리주맙 (CT-011), 도스탈리맙, 신틸리맙, 토리팔리맙, 캄렐리주맙, 티슬렐리주맙 및 프롤골리맙을 포함한다. 예시적인 항-PD-L1 항체는 아벨루맙 (바벤시오(BAVENCIO)®, EMD 세로노(EMD Serono)/화이자(Pfizer)), 아테졸리주맙 (테센트릭(TECENTRIQ)®, 제넨테크(Genentech)) 및 두르발루맙 (임핀지(IMFINZI)®, 메드이뮨(Medimmune)/아스트라제네카(AstraZeneca))을 포함한다.
PD-1-기반 억제제는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기술, 예를 들어 상기 기재된 바와 같은 기술을 사용하여 설계, 발현 및 정제될 수 있다. 항-PD-1 항체는 미국 특허 번호 8,728,474, 8,952,136 및 9,073,994에 기재된 바와 같이 설계, 발현, 정제, 제제화 및 투여될 수 있다.
다른 면역강화제 (예를 들어, 항체 및 다양한 소분자)는 하기 리간드 중 1종 이상을 수반하는 신호전달 경로를 표적화할 수 있다: B7-H3 (특히 전립선, 신세포, 비소세포 폐, 췌장, 위, 난소, 결장직장 세포 상에서 발견됨); B7-H4 (특히 유방, 신세포, 난소, 췌장, 흑색종 세포 상에서 발견됨); HHLA2 (특히 유방, 폐, 갑상선, 흑색종, 췌장, 난소, 간, 방광, 결장, 전립선, 신장 세포 상에서 발견됨); 갈렉틴 (특히 비소세포 폐, 결장직장 및 위 세포 상에서 발견됨); CD30 (특히 호지킨 림프종, 대세포 림프종 세포 상에서 발견됨); CD70 (특히 비-호지킨 림프종, 신세포 상에서 발견됨); ICOSL (특히 교모세포종, 흑색종 세포 상에서 발견됨); CD155 (특히 신장, 전립선, 췌장 교모세포종 세포 상에서 발견됨); 및 TIM3. 유사하게, 사용될 수 있는 다른 잠재적 면역강화제는, 예를 들어 4-1BB (CD137) 효능제 (예를 들어, 완전 인간 IgG4 항-CD137 항체 우렐루맙/BMS-663513), LAG3 억제제 (예를 들어, 인간화 IgG4 항-LAG3 항체 LAG525, 노파르티스(Novartis)); IDO 억제제 (예를 들어, 소분자 INCB024360, 인사이트 코포레이션(Incyte Corporation)), TGFβ 억제제 (예를 들어, 소분자 갈루니세르팁, 일라이 릴리(Eli Lilly)) 및 T-세포 및/또는 종양 세포 상에서 발견되는 다른 수용체 또는 리간드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 리간드 중 1종 이상을 수반하는 신호전달 경로를 표적화하는 면역강화제 (예를 들어, 항체 및 다양한 소분자)는 ADCC를 통해서가 아니라 효능제/길항제 상호작용에 기초한 제약 개입에 적용가능하다.
A. 항체 생산
항체를 생산하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA 분자는 관심 항체의 CDR 및 가변 영역의 서열, 예를 들어 미국 특허 번호 8,952,136에 제공된 항체 서열 및 미국 특허 번호 9,073,994에 기재된 하이브리도마 기탁물을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다. 합성 DNA 분자는 목적하는 항체를 코딩하는 통상적인 유전자 발현 구축물을 생산하기 위해, 예를 들어 불변 영역 코딩 서열 및 발현 제어 서열을 포함한 다른 적절한 뉴클레오티드 서열에 라이게이션될 수 있다. 정의된 유전자 구축물의 생산은 관련 기술분야의 상용 기술 내에 있다. 대안적으로, 본원에 제공된 서열은 통상적인 혼성화 기술 또는 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 기술에 의해, 서열이 본원에 제공된 서열 정보에 기초하거나 또는 하이브리도마 세포에서 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 관한 선행 기술 서열 정보에 기초한 것인 합성 핵산 프로브를 사용하여, 하이브리도마로부터 클로닝될 수 있다.
본원에 개시된 항체를 코딩하는 핵산은 발현 벡터 내로 혼입 (라이게이션)될 수 있으며, 이는 통상적인 형질감염 또는 형질전환 기술을 통해 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 예시적인 숙주 세포는 달리 IgG 단백질을 생산하지 않는 이. 콜라이 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장 (BHK) 세포, 원숭이 신장 세포 (COS), 인간 간세포성 암종 세포 (예를 들어, Hep G2) 및 골수종 세포이다. 형질전환된 숙주 세포는 숙주 세포가 이뮤노글로불린 경쇄 및/또는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 유전자를 발현하도록 허용하는 조건 하에서 성장될 수 있다.
특정 발현 및 정제 조건은 사용되는 발현 시스템에 따라 다를 것이다. 예를 들어, 유전자가 이. 콜라이에서 발현되는 경우에, 그것은 먼저 적합한 박테리아 프로모터, 예를 들어 Trp 또는 Tac 및 원핵 신호 서열로부터의 하류에 조작된 유전자를 배치함으로써 발현 벡터 내로 클로닝된다. 발현된 분비된 단백질은 굴절반사소체 또는 봉입체에 축적되며, 프렌치 프레스 또는 초음파처리에 의한 세포의 파괴 후 수거될 수 있다. 이어서 굴절반사소체는 가용화되고, 단백질은 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 리폴딩 및 절단된다.
본원에 개시된 항체를 코딩하는 DNA 구축물이 진핵 숙주 세포, 예를 들어 CHO 세포에서 발현되는 경우에, 그것은 먼저 적합한 진핵 프로모터, 분비 신호, IgG 인핸서 및 다양한 인트론을 함유하는 발현 벡터 내로 삽입된다. 이러한 발현 벡터는 불변 영역의 모두 또는 일부를 코딩하는 서열을 임의로 함유하여, 중쇄 및/또는 경쇄의 전체 또는 일부가 발현되는 것을 가능하게 한다. 일부 실시양태에서, 단일 발현 벡터는 발현될 중쇄 및 경쇄 가변 영역 둘 다를 함유한다.
유전자 구축물은 통상적인 기술을 사용하여 진핵 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 숙주 세포는 VL 또는 VH 단편, VL-VH 이종이량체, VH-VL 또는 VL-VH 단일 쇄 폴리펩티드, 완전한 중쇄 또는 경쇄 이뮤노글로불린 쇄 또는 그의 부분을 발현하며, 이들 각각은 또 다른 기능 (예를 들어, 세포독성)을 갖는 모이어티에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 중쇄 (예를 들어, 중쇄 가변 영역) 또는 경쇄 (예를 들어, 경쇄 가변 영역)의 전체 또는 일부를 발현하는 폴리펩티드를 발현하는 단일 벡터로 형질감염된다. 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 (a) 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드 또는 (b) 전체 이뮤노글로불린 중쇄 및 전체 이뮤노글로불린 경쇄를 코딩하는 단일 벡터로 형질감염된다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 1종 초과의 발현 벡터 (예를 들어, 중쇄 또는 중쇄 가변 영역의 전체 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드를 발현하는 하나의 발현 벡터 및 경쇄 또는 경쇄 가변 영역의 전체 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드를 발현하는 또 다른 발현 벡터)로 형질감염된다.
이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드 또는 이뮤노글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 생산하는 방법은 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포를 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드 또는 이뮤노글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드의 발현을 허용하는 조건 하에서 성장시키는 것 (배양하는 것)을 포함할 수 있다. 이어서, 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드는 관련 기술분야에 널리 공지된 기술, 예를 들어 친화성 태그, 예컨대 글루타티온-S-트랜스퍼라제 (GST) 및 히스티딘 태그를 사용하여 정제될 수 있다.
표적 단백질, 예를 들어 PD-1, PD-L1 또는 PD-L2에 결합하는 모노클로날 항체 또는 항체의 항원-결합 단편을 생산하는 방법은 (a) 완전한 또는 부분적 이뮤노글로불린 중쇄를 코딩하는 발현 벡터 및 완전한 또는 부분적 이뮤노글로불린 경쇄를 코딩하는 별개의 발현 벡터; 또는 (b) 두 쇄 (예를 들어, 완전한 또는 부분적 쇄)를 코딩하는 단일 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포를 두 쇄의 발현을 허용하는 조건 하에서 성장시키는 것을 포함할 수 있다. 무손상 항체 (또는 항원-결합 단편)는 관련 기술분야에 널리 공지된 기술, 예를 들어 단백질 A, 단백질 G, 친화성 태그, 예컨대 글루타티온-S-트랜스퍼라제 (GST) 및 히스티딘 태그를 사용하여 수거 및 정제될 수 있다. 단일 발현 벡터 또는 2종의 별개의 발현 벡터로부터 중쇄 및 경쇄를 발현하는 것은 관련 기술분야의 통상의 기술 내에 있다.
B. 항체 변형
항체 및 항체 단편의 항원성을 감소 또는 제거하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 항체가 인간에게 투여되는 경우에, 항체는 바람직하게는 인간에서 항원성을 감소 또는 제거하기 위해 "인간화"된다. 바람직하게는, 인간화 항체는 그가 유래된 비-인간화 마우스 항체와 동일한 또는 실질적으로 동일한 항원에 대한 친화도를 갖는다.
하나의 인간화 접근법에서, 마우스 이뮤노글로불린 불변 영역이 인간 이뮤노글로불린 불변 영역으로 대체된 키메라 단백질이 생성된다. 예를 들어, 문헌 [Morrison et al. (1984) PROC. NAT. ACAD. SCI. 81:6851-6855, Neuberger et al. (1984) NATURE 312:604-608]; 미국 특허 번호 6,893,625 (Robinson); 5,500,362 (Robinson); 및 4,816,567 (Cabilly)을 참조한다.
CDR 그라프팅으로 공지된 접근법에서, 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 CDR은 또 다른 종으로부터의 프레임워크 내로 그라프팅된다. 예를 들어, 뮤린 CDR은 인간 FR 내로 그라프팅될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-ErbB3 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 CDR은 인간 FR 또는 컨센서스 인간 FR 상으로 그라프팅된다. 컨센서스 인간 FR을 생성하기 위해, 여러 인간 중쇄 또는 경쇄 아미노산 서열로부터의 FR을 정렬하여 컨센서스 아미노산 서열을 확인한다. CDR 그라프팅은 미국 특허 번호 7,022,500 (Queen); 6,982,321 (Winter); 6,180,370 (Queen); 6,054,297 (Carter); 5,693,762 (Queen); 5,859,205 (Adair); 5,693,761 (Queen); 5,565,332 (Hoogenboom); 5,585,089 (Queen); 5,530,101 (Queen); 문헌 [Jones et al. (1986) NATURE 321: 522-525; Riechmann et al. (1988) NATURE 332: 323-327; Verhoeyen et al. (1988) SCIENCE 239: 1534-1536; 및 Winter (1998) FEBS LETT 430: 92-94]에 기재되어 있다.
"슈퍼휴머니제이션(SUPERHUMANIZATION)™으로 불리는 접근법에서, 인간 CDR 서열은 인간화될 마우스 항체의 CDR에 대한 인간 CDR의 구조적 유사성에 기초하여, 인간 배선 유전자로부터 선택된다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,881,557 (Foote); 및 문헌 [Tan et al. (2002) J. IMMUNOL. 169:1119-1125]을 참조한다.
면역원성을 감소시키는 다른 방법은 "재성형", "과다키메라화" 및 "베니어링/재표면화"를 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Vaswami et al. (1998) ANNALS OF ALLERGY, ASTHMA, & IMMUNOL. 81:105; Roguska et al. (1996) PROT. ENGINEER 9:895-904]; 및 미국 특허 번호 6,072,035 (Hardman)를 참조한다. 베니어링/재표면화 접근법에서, 뮤린 항체 내 표면 접근가능한 아미노산 잔기는 인간 항체 내 동일한 위치에서 보다 빈번하게 발견되는 아미노산 잔기에 의해 대체된다. 이러한 유형의 항체 재표면화는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,639,641 (Pedersen)에 기재되어 있다.
마우스 항체를 인간에서의 의학적 용도에 적합한 형태로 전환시키기 위한 또 다른 접근법은 ACTIVMAB™ 기술 (백시넥스, 인크.(Vaccinex, Inc.), 뉴욕주 로체스터)로 공지되어 있으며, 이는 포유동물 세포에서 항체를 발현시키기 위한 백시니아 바이러스-기반 벡터를 수반한다. IgG 중쇄 및 경쇄의 조합 다양성의 높은 수준이 생성되는 것으로 언급된다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,706,477 (Zauderer); 6,800,442 (Zauderer); 및 6,872,518 (Zauderer)을 참조한다.
마우스 항체를 인간에서 사용하기에 적합한 형태로 전환시키기 위한 또 다른 접근법은 칼로바이오스 파마슈티칼스, 인크.(KaloBios Pharmaceuticals, Inc.) (캘리포니아주 팔로 알토)에 의해 상업적으로 실시되는 기술이다. 이 기술은 항체 선택을 위한 "에피토프 초점" 라이브러리를 생산하기 위해 독점적 인간 "수용자" 라이브러리의 사용을 수반한다.
마우스 항체를 인간에서의 의학적 용도에 적합한 형태로 변형시키기 위한 또 다른 접근법은 휴먼 엔지니어링(HUMAN ENGINEERING)™ 기술이며, 이는 조마 (유에스) 엘엘씨(XOMA (US) LLC)에 의해 상업적으로 실시된다. 예를 들어, 국제 (PCT) 공개 번호 WO 93/11794 및 미국 특허 번호 5,766,886; 5,770,196; 5,821,123; 및 5,869,619를 참조한다.
임의의 상기 접근법을 포함한 임의의 적합한 접근법은 본원에 개시된 초항원 접합체의 결합 모이어티 성분을 포함한 항체의 인간 면역원성을 감소 또는 제거하는 데 사용될 수 있다.
다중특이적 항체를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 다중특이적 항체는 이중특이적 항체를 포함한다. 이중특이적 항체는 적어도 2종의 상이한 에피토프에 결합 특이성을 갖는 항체이다. 예시적인 이중특이적 항체는 관심 항원의 2종의 상이한 에피토프에 결합한다. 이중특이적 항체는, 예를 들어 문헌 [Milstein et al., NATURE 305:537-539 (1983), WO 93/08829, Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991), WO 94/04690, Suresh et al. (1986) METHODS IN ENZYMOLOGY 121:210, WO96/27011, Brennan et al. (1985) SCIENCE 229: 81, Shalaby et al. (1992) J. EXP. MED. 175: 217-225, Kostelny et al. (1992) J. IMMUNOL. 148(5):1547-1553, Hollinger et al. (1993) PNAS, 90:6444-6448, Gruber et al. (1994) J. IMMUNOL. 152:5368, Wu et al. (2007) NAT. BIOTECHNOL. 25(11): 1290-1297, 미국 특허 공개 번호 2007/0071675, 및 Bostrom et al., SCIENCE 323:1640-1644 (2009)]에 기재된 바와 같은 전장 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, F(ab')2 이중특이적 항체 및 디아바디)으로서 제조될 수 있다.
IV. 제제 및 제약 조성물
초항원 접합체 및 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체는 암을 치료하기 위해, 예를 들어 암 세포의 성장 속도를 늦추고, 전이의 발생률 또는 수를 감소시키고, 종양 크기를 감소시키고, 종양 성장을 억제하고, 종양 또는 암 세포로의 혈액 공급을 감소시키고, 암 세포 또는 종양에 대한 면역 반응을 촉진하고, 암의 진행을, 예를 들어 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100%만큼 방지 또는 억제하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 초항원 접합체 및 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체는 암을 치료하기 위해, 예를 들어 암을 갖는 대상체의 수명을, 예를 들어 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년, 6년, 7년, 8년, 9년 또는 10년만큼 증가시키기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 초항원 접합체 및 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체는 암을 치료하기 위해, 예를 들어 암 치료 후 대상체의 무암 생존을, 예를 들어 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년, 6년, 7년, 8년, 9년 또는 10년 동안 용이하게 하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 초항원 접합체 및 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체는 암을 치료하기 위해, 예를 들어 암 치료 후 대상체에서의 암 진행을, 예를 들어 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년, 6년, 7년, 8년, 9년 또는 10년 동안 방지하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 각각의 접근법에서, 초항원 접합체 및 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체는 대상체에게 함께, 순차적으로 또는 간헐적으로 투여될 수 있다.
초항원 접합체 및 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기술을 사용하여 개별적으로 또는 함께 제제화될 수 있다. 예를 들어, 치료 용도를 위해, 초항원 접합체 및/또는 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체는 제약상 허용되는 담체와 조합된다. 본원에 사용된 "제약상 허용되는 담체"는 합리적인 이익/위험 비에 상응하는, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 완충제, 담체 및 부형제를 의미한다. 상기 담체(들)는 제제 중 다른 성분과 상용성이며 수용자에게 유해하지 않다는 의미에서 "허용되는" 것이어야 한다. 제약상 허용되는 담체는 제약 투여와 상용성인 완충제, 용매, 분산 매질, 코팅, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 제약 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 작용제의 용도는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
초항원 접합체는 B-세포 고갈제와 조합되어 사용된다. 초항원 접합체는 B-세포 고갈제와 개별적으로 또는 동시에 (동일하거나 상이한 제제로) 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, B-세포 고갈제는 초항원 접합체 전에 투여된다.
본원에 개시된 초항원 접합체 및/또는 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체를 함유하는 제약 조성물은 단일 투여 형태 또는 상이한 투여 형태로 제공될 수 있다. 제약 조성물 또는 조성물들은 그의 의도된 투여 경로와 상용성이도록 제제화되어야 한다. 투여 경로의 예는 정맥내 (IV), 근육내, 피내, 흡입, 경피, 국소, 경점막 및 직장 투여이다. 대안적으로, 작용제는 종종 데포 또는 지속 방출 제제로, 전신보다는 국부로, 예를 들어 작용 부위 내로 직접 작용제 또는 작용제들의 주사를 통해 투여될 수 있다.
유용한 제제는 제약 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing Company, 1990)]을 참조한다. 비경구 투여에 적합한 제제 성분은 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 염수 용액, 고정 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항박테리아제, 예컨대 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트; 및 장성 조정제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스를 포함한다.
정맥내 투여를 위해, 적합한 담체는 생리 염수, 정박테리아수, 크레모포르(Cremophor) ELTM (바스프(BASF), 뉴저지주 파시파니) 또는 포스페이트 완충 염수 (PBS)를 포함한다. 담체는 제조 및 저장 조건 하에서 안정하여야 하고, 미생물에 대해 보존되어야 한다. 담체는, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 그의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다.
제약 제제는 바람직하게는 멸균된 것이다. 멸균은, 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 조성물이 동결건조되는 경우, 동결건조 및 재구성 전 또는 후에 필터 멸균이 수행될 수 있다.
본 발명의 초항원 접합체 및/또는 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체는 단독으로 또는 다른 화합물, 예컨대 담체 또는 다른 치료 화합물과 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 제약 조성물은 1종 이상의 초항원 접합체 및 임의로 1종 이상의 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체의 유효량을 포함하고, 또한 제약상 허용되는 담체 중에 용해 또는 분산된 추가의 작용제를 함유할 수 있다. 어구 "제약" 또는 "약리학상 허용되는"은 포유동물, 예컨대, 예를 들어 인간에게 투여되는 경우에 유해, 알레르기 또는 다른 불리한 반응을 생성하지 않는 물질, 예를 들어 조성물을 지칭한다. 적어도 1종의 초항원 접합체 및/또는 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체를 함유하는 제약 조성물의 제조는 본 개시내용에 비추어 및 본원에 참조로 포함된 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990]에 의해 예시된 바와 같이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지될 것이다. 더욱이, 인간 투여를 위해, 제제는 생물학적 표준에 대한 FDA 사무국에서 요구하는 바와 같은 멸균성, 발열원성, 일반적 안전성 및 순도 표준을 충족하여야 하는 것으로 이해될 것이다.
본 발명의 구체적 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 종양-표적화된 초항원을 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체와 조합하여 포함한다. 이러한 조합은, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 임의의 종양-표적화된 초항원 및/또는 B-세포 고갈제, 예를 들어, 항-CD20 항체를 포함한다.
본 발명의 구체적 실시양태에서, 종양-표적화된 초항원은 표적화 모이어티에 접합된, 포도상구균 장독소 (SE), 화농연쇄상구균 외독소 (SPE), 황색포도상구균 독성 쇼크-증후군 독소 (TSST-1), 포도상구균 유사분열촉진 외독소 (SME), 포도상구균 초항원 (SSA), 포도상구균 장독소 A (SEA), 포도상구균 장독소 B (SEB) 및 포도상구균 장독소 E (SEE)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 박테리아 초항원을 포함한다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, 조성물은 표적화 모이어티에 접합된, 하기 프로테인 데이터 뱅크 및/또는 진뱅크 수탁 번호를 갖는 초항원 (하기를 포함하나 이에 제한되지는 않음: SEE는 P12993임; SEA는 P013163임; SEB는 P01552임; SEC1은 P01553임; SED는 P20723임; 및 SEH는 AAA19777)을 포함하는 종양-표적화된 초항원뿐만 아니라 그의 변이체를 포함한다.
특정 실시양태에서, 초항원 접합체는 야생형 또는 조작된 초항원 서열, 예컨대 야생형 SEE 서열 (서열식별번호: 1) 또는 야생형 SEA 서열 (서열식별번호: 2)을 포함하며, 이들은 임의의 확인된 영역 A-E (도 1 참조) 내의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환되도록 변형될 수 있다. 특정 실시양태에서, 접합체에 혼입된 초항원은 SEA/E-120 (서열식별번호: 3) 또는 SEAD227A (서열식별번호: 4)이다.
초항원에 접합될 표적화 모이어티의 구체적 예는, 예를 들어 세포 분자에 결합할 수 있는 임의의 분자 및 바람직하게는 질환 특이적 분자, 예컨대 암 세포 특이적 분자를 포함한다. 표적화 모이어티는 항원 결합 단편, 가용성 T-세포 수용체, 성장 인자, 인터류킨, 호르몬 등을 포함한 항체로부터 선택될 수 있다. 예시적인 암 표적화 항체는 항-CD19, 항-CD20 항체, 항-5T4 항체, 항-Ep-CAM 항체, 항-Her-2/neu 항체, 항-EGFR 항체, 항-CEA 항체, 항-전립선 특이적 막 항원 (PSMA) 항체 및 항-IGF-1R 항체를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, 초항원은 면역학적 반응성 항체 단편, 예컨대 C215Fab, 5T4Fab (WO8907947 참조) 또는 C242Fab (WO9301303 참조)에 접합될 수 있다.
이러한 종양-표적화된 초항원의 예는 C215Fab-SEA (서열식별번호: 5), 5T4Fab-SEAD227A (서열식별번호: 6) 및 5T4Fab-SEA/E-120 (서열식별번호: 7)을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 초항원 접합체는 나프투모맙 에스타페나톡스로서 관련 기술분야에 공지된 5T4 Fab-SEA/E-120이며, 이는 함께 항-5T4 항체의 Fab 단편을 규정하는 2개의 폴리펩티드 서열을 포함하고, 여기서 폴리펩티드 서열 중 하나는 SEA/E-120 초항원, 즉 서열식별번호: 8 (SEA/E-120에 3개의 아미노산 링커에 의해 커플링된 5T4 Fab의 키메라 VH 쇄) 및 서열식별번호: 9 (5T4 Fab의 키메라 VL 쇄)를 추가로 포함한다.
예시적인 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 나프투모맙 에스타페나톡스로서 관련 기술분야에 공지된 종양-표적화된 초항원 5T4Fab-SEA/E-120을 항-CD20 항체, 예를 들어 이브리투모맙, 오비누투주맙, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 리툭시맙, 벨투주맙, 토시투모맙, 우블리툭시맙, 벨투주맙, PRO131921, 또는 TRU-015, 예를 들어 오비누투주맙과 조합하여 포함한다.
초항원 접합체 및 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체를 함유하는 제제 또는 투여 형태는 이들이 고체, 액체 또는 에어로졸 형태로 투여되어야 하는지 여부, 및 주사와 같은 투여 경로를 위해 멸균될 필요가 있는지 여부에 따라 상이한 유형의 담체를 포함할 수 있다.
담체 또는 희석제의 예는 지방, 오일, 물, 염수 용액, 지질, 리포솜, 수지, 결합제, 충전제 등 또는 그의 조합을 포함한다. 조성물은 또한 1종 이상의 성분의 산화를 지연시키기 위해 다양한 항산화제를 포함할 수 있다. 추가적으로, 미생물의 작용의 방지는 보존제, 예컨대 파라벤 (예를 들어, 메틸파라벤, 프로필파라벤), 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 또는 그의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 항박테리아제 및 항진균제에 의해 야기될 수 있다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물은, 예를 들어 적어도 약 0.1%의 활성 화합물을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 활성 화합물은 단위 중량의 약 2% 내지 약 75% 또는 예를 들어 약 25% 내지 약 60% 및 그 안에서 추론가능한 임의의 범위를 차지할 수 있다. 용해도, 생체이용률, 생물학적 반감기, 투여 경로, 제품 보관 수명, 뿐만 아니라 다른 약리학적 고려사항과 같은 인자가 이러한 제약 제제를 제조하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 고려될 것이고, 따라서 다양한 투여량 및 치료 요법이 바람직할 수 있다. 이러한 결정은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 공지되고 사용된다.
활성제는 암 세포의 성장 또는 증식을 감소, 저하, 억제 또는 달리 제거하거나, 아폽토시스를 유도하거나, 암 또는 종양의 혈관신생을 억제하거나, 전이를 억제하거나 또는 세포 내 세포독성을 유도하기에 효과적인 양 또는 양들로 투여된다. 암의 치유적 치료를 위해 본 발명을 실시하는 데 사용된 활성 화합물(들)의 유효량은 투여 방식, 대상체의 연령, 체중 및 전반적 건강에 따라 다르다. 이들 용어는 상승작용적 상황, 예컨대 단일 작용제 단독, 예컨대 초항원 접합체 또는 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체는 약하게 작용하거나 전혀 작용하지 않을 수 있지만, 예를 들어 비제한적으로 순차적 투여를 통해 서로 조합되는 경우에 2종 이상의 작용제는 상승작용적 결과를 나타내도록 작용을 하는 것인 본 발명에 제시되고 기재된 상승작용적 상황을 포함한다.
특정 비제한적 예에서, 초항원 접합체의 용량은 투여당 약 1 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중, 약 10 마이크로그램/kg/체중, 약 15 마이크로그램/kg/체중, 약 20 마이크로그램/kg/체중, 약 50 마이크로그램/kg/체중, 약 100 마이크로그램/kg/체중, 약 200 마이크로그램/kg/체중, 약 350 마이크로그램/kg/체중, 약 500 마이크로그램/kg/체중, 약 1 밀리그램/kg/체중, 약 5 밀리그램/kg/체중, 약 10 밀리그램/kg/체중, 약 50 밀리그램/kg/체중, 약 100 밀리그램/kg/체중, 약 200 밀리그램/kg/체중, 약 350 밀리그램/kg/체중, 약 500 밀리그램/kg/체중, 내지 약 1000 mg/kg/체중 또는 그 초과 및 그 안에서 추론가능한 임의의 범위를 포함할 수 있다. 본원에 열거된 수들로부터 추론가능한 범위의 비제한적 예는, 약 5 mg/kg/체중 내지 약 100 mg/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 500 밀리그램/kg/체중, 약 1 마이크로그램/kg/체중 내지 약 100 밀리그램/kg/체중의 범위이다. 다른 예시적인 투여량 범위인, 약 1 마이크로그램/kg/체중 내지 약 1000 마이크로그램/kg/체중, 약 1 마이크로그램/kg/체중 내지 약 100 마이크로그램/kg/체중, 약 1 마이크로그램/kg/체중 내지 약 75 마이크로그램/kg/체중, 약 1 마이크로그램/kg/체중 내지 약 50 마이크로그램/kg/체중, 약 1 마이크로그램/kg/체중 내지 약 40 마이크로그램/kg/체중, 약 1 마이크로그램/kg/체중 내지 약 30 마이크로그램/kg/체중, 약 1 마이크로그램/kg/체중 내지 약 20 마이크로그램/kg/체중, 약 1 마이크로그램/kg/체중 내지 약 15 마이크로그램/kg/체중, 약 1 마이크로그램/kg/체중 내지 약 10 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 1000 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 100 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 75 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 50 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 40 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 30 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 20 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 15 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 10 마이크로그램/kg/체중, 약 10 마이크로그램/kg/체중 내지 약 1000 마이크로그램/kg/체중, 약 10 마이크로그램/kg/체중 내지 약 100 마이크로그램/kg/체중, 약 10 마이크로그램/kg/체중 내지 약 75 마이크로그램/kg/체중, 약 10 마이크로그램/kg/체중 내지 약 50 마이크로그램/kg/체중, 약 10 마이크로그램/kg/체중 내지 약 40 마이크로그램/kg/체중, 약 10 마이크로그램/kg/체중 내지 약 30 마이크로그램/kg/체중, 약 10 마이크로그램/kg/체중 내지 약 20 마이크로그램/kg/체중, 약 10 마이크로그램/kg/체중 내지 약 15 마이크로그램/kg/체중, 약 15 마이크로그램/kg/체중 내지 약 1000 마이크로그램/kg/체중, 약 15 마이크로그램/kg/체중 내지 약 100 마이크로그램/kg/체중, 약 15 마이크로그램/kg/체중 내지 약 75 마이크로그램/kg/체중, 약 15 마이크로그램/kg/체중 내지 약 50 마이크로그램/kg/체중, 약 15 마이크로그램/kg/체중 내지 약 40 마이크로그램/kg/체중, 약 15 마이크로그램/kg/체중 내지 약 30 마이크로그램/kg/체중, 약 15 마이크로그램/kg/체중 내지 약 20 마이크로그램/kg/체중, 약 20 마이크로그램/kg/체중 내지 약 1000 마이크로그램/kg/체중, 약 20 마이크로그램/kg/체중 내지 약 100 마이크로그램/kg/체중, 약 20 마이크로그램/kg/체중 내지 약 75 마이크로그램/kg/체중, 약 20 마이크로그램/kg/체중 내지 약 50 마이크로그램/kg/체중, 약 20 마이크로그램/kg/체중 내지 약 40 마이크로그램/kg/체중, 약 20 마이크로그램/kg/체중 내지 약 30 마이크로그램/kg/체중 등의 범위가 상기 기재된 수들에 기초하여 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 투여되는 초항원 접합체의 유효량 또는 유효 용량은 0.01 내지 500 μg/kg 대상체 체중, 예를 들어 0.1-500 μg/kg 대상체 체중 및 예를 들어 1-100 μg/kg 대상체 체중의 범위의 양이다.
특정 실시양태에서, B-세포 고갈제의 유효량 또는 유효 용량은 대상체에서 B-세포의 수를 효과적으로 감소시키는 양 또는 용량이다. 특정 실시양태에서, B-세포 고갈제의 유효량 또는 유효 용량은 초항원 접합체의 투여 전에 대상체에서 B-세포의 수를 효과적으로 감소시키는 양 또는 용량이다. 특정 실시양태에서, 초항원 접합체와 조합되어 투여되는 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체의 유효량 또는 유효 용량은 적어도 상가적 또는 상승작용적 항종양 효과를 발생시키는 양 또는 용량이다.
일반적으로, B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체의 치료 유효량은 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg, 예를 들어 1 mg/kg 내지 100 mg/kg 또는 1 mg/kg 내지 10 mg/kg의 범위이다. 특정 실시양태에서, B-세포 고갈제 (예를 들어, 항-CD20 항체)의 유효량 또는 유효 용량은 약 2 g이다 (예를 들어, 약 2 g의 단일 투여로서, 또는 수회 투여, 예를 들어 각각 약 1 g의 2회 투여 또는 예를 들어 100 mg, 900 mg 및 1000 mg의 3회 투여로서 투여됨). 특정 실시양태에서, B-세포 고갈제 (예를 들어, 항-CD20 항체)의 유효량 또는 유효 용량은 약 1000 mg이다 (예를 들어, 약 1000 mg의 단일 투여로서, 또는 수회 투여, 예를 들어 각각 약 500 mg의 2회 투여로서 투여됨).
투여되는 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체의 양은 치료될 질환 또는 적응증의 유형 및 정도, 환자의 전반적 건강, 초항원 접합체 및 B-세포 고갈제의 생체내 효력, 제약 제제 및 투여 경로와 같은 변수에 좌우될 것이다.
V. 치료 요법 및 적응증
치료 요법은 또한 달라질 수 있고, 종종 종양 유형, 종양 위치, 질환 진행 및 환자의 건강 및 연령에 좌우된다. 특정 유형의 종양은 보다 공격적인 치료 프로토콜을 요구할 수 있지만, 그러나 동시에, 환자는 보다 공격적인 치료 요법을 허용할 수 없을 수 있다. 임상의는 종종 관련 기술분야 내의 통상의 기술 및 치료 제제의 공지된 효능 및 독성 (존재하는 경우)에 기초하여 이러한 결정을 내리는 데 가장 적합할 수 있다.
본 발명의 구체적 실시양태에서, 본 발명의 치료 방법은 종양-표적화된 초항원을, B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체와 조합하여, 그를 필요로 하는 환자, 즉 암 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 조합 치료는, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 임의의 종양-표적화된 초항원 및/또는 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체의 투여를 포함한다. 본 발명의 구체적 실시양태에서, 종양-표적화된 초항원은 표적화 모이어티에 접합된, 포도상구균 장독소 (SE), 화농연쇄상구균 외독소 (SPE), 황색포도상구균 독성 쇼크-증후군 독소 (TSST-1), 포도상구균 유사분열촉진 외독소 (SME), 포도상구균 초항원 (SSA), 포도상구균 장독소 A (SEA), 포도상구균 장독소 B (SEB) 및 포도상구균 장독소 E (SEE)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 박테리아 초항원을 포함한다.
특정 실시양태에서, 초항원 접합체는 야생형 또는 조작된 초항원 서열, 예컨대 야생형 SEE 서열 (서열식별번호: 1) 또는 야생형 SEA 서열 (서열식별번호: 2)을 포함하며, 이들은 임의의 확인된 영역 A-E (도 1 참조) 내의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환되도록 변형될 수 있다. 특정 실시양태에서, 접합체에 혼입된 초항원은 SEA/E-120 (서열식별번호: 3) 또는 SEAD227A (서열식별번호: 4)이다.
초항원에 접합될 표적화 모이어티의 구체적 예는, 예를 들어 세포 분자에 결합할 수 있는 임의의 분자 및 바람직하게는 질환 특이적 분자, 예컨대 암 세포 특이적 분자를 포함한다. 표적화 모이어티는 항원 결합 단편, 가용성 T-세포 수용체, 성장 인자, 인터류킨, 호르몬 등을 포함한 항체로부터 선택될 수 있다. 예시적인 암 표적화 항체는 항-CD19, 항-CD20 항체, 항-5T4 항체, 항-Ep-CAM 항체, 항-Her-2/neu 항체, 항-EGFR 항체, 항-CEA 항체, 항-전립선 특이적 막 항원 (PSMA) 항체 및 항-IGF-1R 항체를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, 초항원은 면역학적 반응성 항체 단편, 예컨대 C215Fab, 5T4Fab (WO8907947 참조) 또는 C242Fab (WO9301303 참조)에 접합될 수 있다.
이러한 종양-표적화된 초항원의 예는 C215Fab-SEA (서열식별번호: 5), 5T4Fab-SEAD227A (서열식별번호: 6) 및 5T4Fab-SEA/E-120 (서열식별번호: 7)을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 초항원 접합체는 나프투모맙 에스타페나톡스로서 관련 기술분야에 공지된 5T4 Fab-SEA/E-120이며, 이는 함께 항-5T4 항체의 Fab 단편을 규정하는 2개의 폴리펩티드 서열을 포함하고, 여기서 폴리펩티드 서열 중 하나는 SEA/E-120 초항원, 즉 서열식별번호: 8 (SEA/E-120에 3개의 아미노산 링커에 의해 커플링된 5T4 Fab의 키메라 VH 쇄) 및 서열식별번호: 9 (5T4 Fab의 키메라 VL 쇄)를 추가로 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 나프투모맙 에스타페나톡스로서 관련 기술분야에 공지된 종양-표적화된 초항원 5T4Fab-SEA/E-120을, 임의로 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체, 예를 들어 이브리투모맙, 오비누투주맙, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 리툭시맙, 벨투주맙, 토시투모맙, 우블리툭시맙, 벨투주맙, PRO131921, 또는 TRU-015, 예를 들어 오비누투주맙과 조합하여 포함한다.
바람직하게는, 치료될 환자는 적절한 골수 기능 (말초 절대 과립구 수 >2,000개/mm3 및 혈소판 수 100,000개/mm3로 정의됨), 적절한 간 기능 (빌리루빈<1.5 mg/dl) 및 적절한 신장 기능 (크레아티닌<1.5 mg/dl)을 가질 것이다.
전형적인 치료 과정은 다중 용량을 수반할 수 있다. 전형적인 치료는 2-주 기간에 걸쳐 6회 용량 적용을 수반할 수 있다. 2-주 요법은 1, 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 초과로 반복될 수 있다. 치료 과정 동안, 계획된 투여를 완료할 필요성이 재평가될 수 있다.
초항원 접합체를 사용한 면역요법은 종종 T 림프구의 신속한 (수시간 이내) 및 강력한 폴리클로날 활성화를 유발한다. 초항원 접합체 치료 주기는 4 내지 5회 1일 정맥내 초항원 접합체 약물 주사를 포함할 수 있다. 이러한 치료 주기는, 예를 들어 3 내지 8주 간격으로 주어질 수 있다. 종양 내로의 CTL 침윤에 의한 염증은 항종양 치료 초항원의 주요 이펙터 중 하나이다. CTL의 대량 활성화 및 분화의 단기간 후에, T-세포 반응은 다시 기준선 수준으로 신속하게 (4-5일 이내에) 감소한다. 따라서, 세포증식억제성 약물이 초항원 치료를 방해할 수 있는 림프구 증식의 기간은 짧고 잘-정의되어 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 치료 요법은 초항원 접합체 및 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체를 대상체에게 동시에 투여하는 것을 수반할 수 있다. 이는 대상체에게 작용제 둘 다를 포함하는 단일 조성물 또는 약리학적 제제를 투여함으로써, 또는 대상체에게 2종의 별개의 조성물 또는 제제를 동시에 투여함으로써 달성될 수 있으며, 여기서 하나의 조성물은 초항원 접합체를 포함하고, 다른 것은 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체를 포함한다.
대안적으로, 초항원 접합체는 수분, 수일 내지 수주 범위의 간격으로 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체에 선행하거나 후속할 수 있다. B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체, 및 초항원 접합체가 대상체에게 개별적으로 투여되는 실시양태에서, 초항원 접합체 및 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체가 여전히 대상체에 대해 유리하게 조합된 효과를 발휘할 수 있도록, 각각의 전달 시간 사이에 상당한 기간이 지나지 않게 보장하여야 한다. 일부 상황에서, 서로 약 12-72시간 이내에 두 양식으로 대상체를 치료하는 것이 바람직할 수 있다. 그러나, 일부 상황에서는, 각각의 투여 사이에 수일 (2, 3, 4, 5, 6 또는 7) 내지 수주 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8)가 경과하도록 치료 기간을 상당히 연장하는 것이 바람직할 수 있다.
초항원 접합체가 "A"이고, B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체가 "B"인 다양한 조합이 사용될 수 있다: A/B/A, B/A/B, B/B/A, A/A/B, A/B/B, B/A/A, A/B/B/B, B/A/B/B, B/B/B/A, B/B/A/B, A/A/B/B, A/B/A/B, A/B/B/A, B/B/A/A, B/A/B/A, B/A/A/B, A/A/A/B, B/A/A/A, A/B/A/A, 및 A/A/B/A.
특정 실시양태에서, 고려되는 방법은 먼저 대상체에게 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체, 예를 들어 본원에 고려되는 항-CD20 항체의 유효량을 투여한 다음, 대상체에게 초항원 접합체, 예를 들어 본원에 고려되는 초항원 접합체의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, B-세포 고갈제의 투여와 초항원 접합체의 투여 사이의 기간은 초항원 접합체의 투여 전에 대상체에서 B-세포의 수를 효과적으로 감소시키는 기간이다. B-세포 고갈제는 대상체에게 1회, 2회, 또는 2회 초과로 투여될 수 있는 것으로 고려된다. 특정 실시양태에서, 대상체가 B-세포 고갈제의 2회 또는 2회 초과의 투여를 받은 경우에, 2회 또는 2회 초과의 투여는 2일 이상의 연속일일 수 있다.
예를 들어, 특정 실시양태에서, 대상체는 초항원 접합체의 투여 (예를 들어, 초기 투여)의 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 21, 또는 28일 전에 B-세포 고갈제의 투여 (예를 들어, 초기 투여)를 받는다. 특정 실시양태에서, 대상체는 초항원 접합체의 투여 (예를 들어, 초기 투여)의 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 21 또는 28일, 또는 28일 초과 전에 B-세포 고갈제의 투여 (예를 들어, 초기 투여)를 받는다. 특정 실시양태에서, 대상체는 초항원 접합체의 투여 (예를 들어, 초기 투여)의 약 1 내지 약 28, 약 1 내지 약 21, 약 1 내지 약 14, 약 1 내지 약 7, 약 7 내지 약 28, 약 7 내지 약 21, 약 7 내지 약 14, 약 14 내지 약 28, 약 14 내지 약 21, 또는 약 21 내지 약 28일 전에 B-세포 고갈제의 투여 (예를 들어, 초기 투여)를 받는다. 특정 실시양태에서, 대상체는 초항원 접합체의 투여 (예를 들어, 초기 투여)의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 21, 및/또는 28일 전에 B-세포 고갈제의 투여를 받는다. 예를 들어, 대상체는 초항원 접합체의 투여 (예를 들어, 초기 투여)의 12일 및 13일 전에 B-세포 고갈제의 투여를 (예를 들어, 1일당 1000 mg B-세포 고갈제의 용량으로) 받을 수 있다.
특정 실시양태에서, 대상체는 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체, 예를 들어 본원에서 고려되는 항-CD20 항체를 제1 28일 치료 사이클의 제1일, 제2일, 제8일 및 제15일에 (예를 들어, 제1일에 100 mg, 제2일에 900 mg, 제8일에 1000 mg, 및 제15일에 1000 mg의 용량으로) 투여받는다. 특정 실시양태에서, 대상체는 B-세포 고갈제를 임의적인 후속 치료 사이클의 제1일에 (예를 들어, 제1일에 1000 mg의 용량으로) 투여받는다.
특정 실시양태에서, 대상체는 (i) 초항원 접합체, 예를 들어 본원에 고려된 초항원 접합체를 2 내지 12주 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12주)마다 연속 2 내지 6일 (예를 들어, 연속 2, 3, 4, 5 또는 6일) 동안 매일 투여받고/거나, (ii) 초항원 접합체의 투여 (예를 들어, 초기 투여)의 13 및 12일 전에 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체, 예를 들어 본원에 고려된 항-CD20 항체를 투여받는다.
특정 실시양태에서, B-세포 고갈제의 투여는 B-세포 고갈제의 투여가 없는 상응하는 방법과 비교하여 초항원 접합체의 투여에 반응하여 대상체에서 항-약물 항체 (ADA)의 형성을 효과적으로 감소시킨다.
"항-약물 항체" 또는 "ADA"는 치료제, 예를 들어 초항원 접합체에 결합하고, 대상체에서 치료제의 혈청 농도 및 기능에 영향을 미칠 수 있는 항체를 지칭한다. ADA의 존재는 치료제와 항체 사이의 면역 복합체의 형성 (중화, 비-중화 또는 둘 다)을 통해 치료제의 클리어런스를 증가시켜, 치료제의 반감기를 감소시킬 수 있다. 또한, 치료제의 활성 및 효능은 (특히 중화 ADA의 경우) 치료제에 대한 항체의 결합을 통해 감소될 수 있다. ADA는 또한 알레르기성 또는 과민 반응 및 다른 유해 사건과 연관될 수 있다.
특정 실시양태에서, 고려되는 방법은 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 방법과 비교하여 초항원 접합체의 투여에 반응하여 대상체에서 항-약물 항체 (ADA)의 형성을 효과적으로 감소시킨다. 특정 실시양태에서, ADA의 형성은 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체를 투여하지 않은 상응하는 방법과 비교하여 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 50배, 또는 적어도 100배 감소된다. 특정 실시양태에서, ADA의 형성은 본질적으로 예방된다. 특정 실시양태에서, ADA 형성의 감소 또는 예방은 초항원 접합체의 투여 후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 12개월, 또는 그 초과 동안이다. 특정 실시양태에서, ADA의 감소 또는 예방은 초항원 접합체의 투여 후 약 2개월 동안이다.
특정 실시양태에서, 초항원 접합체의 투여 후 대상체에서의 ADA 역가는 초항원 접합체의 투여 전 대상체에서의 ADA 역가를 초과하지 않는다. 특정 실시양태에서, 초항원 접합체의 투여 후 대상체에서의 ADA 역가는 초항원 접합체의 투여 전 대상체에서의 ADA 역가를 1.1배 초과, 1.2배 초과, 1.5배 초과, 2배 초과, 3배 초과, 4배 초과, 5배 초과, 또는 10배 초과로 초과하지 않는다. 특정 실시양태에서, 초항원 접합체의 투여 후 대상체에서의 ADA 역가는 초항원 접합체의 투여 전 대상체에서의 ADA 역가와 비교하여 1.1배 미만, 1.2배 미만, 1.5배 미만, 2배 미만, 3배 미만, 4배 미만, 5배 미만, 또는 10배 미만으로 증가된다. 특정 실시양태에서, 초항원 접합체의 투여 후 대상체에서의 ADA 역가는 초항원 접합체의 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 12개월, 또는 그 초과에서의 ADA 역가이다. 특정 실시양태에서, 초항원 접합체의 투여 후 대상체에서의 ADA 역가는 초항원 접합체의 투여 후 약 2개월에서의 ADA 역가이다.
특정 실시양태에서, 초항원 접합체의 투여 후에, 예를 들어 초항원 접합체의 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 12개월, 또는 그 초과에 대상체에서 ADA가 본질적으로 검출가능하지 않다.
ADA는 예를 들어 대상체로부터 채취한 혈액 샘플에서 검출될 수 있다. ADA는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 검출될 수 있다. ADA를 검출하는 예시적인 방법은 문헌 [Mire-Sluis et al. (2004) J. IMMUNOL. METHODS 289:1-16, Nencini et al. (2014) DRUG DEV. RES. 75 Suppl 1:S4-6, 및 Schouwenburg et al. (2015) NAT. REV. RHEUMATOL. 9, 164-172]에 기재되어 있다. ADA를 검출하는 예시적인 방법은 샌드위치 ELISA이며, 여기서 초항원 접합체는 검정 플레이트에 코팅되고, 치료된 대상체의 혈청에 노출되고, ADA의 존재는 표지된 초항원 접합체에 의해 검출된다. ADA를 검출하는 또 다른 예시적인 방법은 치료된 대상체의 혈청으로부터의 이뮤노글로불린이 단백질 (예를 들어 단백질 A 세파로스) 상에서 응집되고 ADA의 존재가 표지된 초항원 접합체에 의해 검출되는 항원 결합 시험이다.
또한, 초항원 접합체 및/또는 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체는 치료 효과의 효력 및/또는 선택성을 증진시키는 1종 이상의 추가의 작용제와 함께 또는 순차적으로 공-투여될 수 있다. 이러한 작용제는, 예를 들어 코르티코스테로이드, 추가의 면역 조정제, 및 투여된 초항원 접합체에 대한 환자의 가능한 면역반응성을 감소시키도록 설계된 화합물을 포함한다.
특정 실시양태에서, 초항원 접합체 및/또는 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체는 화학요법제와 함께 또는 순차적으로 공-투여될 수 있다. 예시적인 화학요법제는 항미세관제, 토포이소머라제 억제제, 항대사물, 단백질 합성 및 분해 억제제, 유사분열 억제제, 알킬화제, 플라틴화제, 핵산 합성의 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제 (HDAC 억제제, 예를 들어 보리노스타트 (SAHA, MK0683), 엔티노스타트 (MS-275), 파노비노스타트 (LBH589), 트리코스타틴 A (TSA), 모세티노스타트 (MGCD0103), 벨리노스타트 (PXD101), 로미뎁신 (FK228, 뎁시펩티드)), DNA 메틸트랜스퍼라제 억제제, 질소 머스타드, 니트로소우레아, 에틸렌이민, 알킬 술포네이트, 트리아젠, 폴레이트 유사체, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오티드 리덕타제 억제제, 빈카 알칼로이드, 탁산, 에포틸론, 삽입제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 작용제, 아폽토시스 및 방사선을 촉진하는 작용제, 또는 표면 단백질에 결합하여 독성제를 전달하는 항체 분자 접합체를 포함한다. 추가의 예시적인 화학요법제는 백금-기반 작용제 (예컨대 시스플라틴), 시클로포스파미드, 다카르바진, 메토트렉세이트, 플루오로우라실, 겜시타빈, 카페시타빈, 히드록시우레아, 토포테칸, 이리노테칸, 아자시티딘, 보리노스타트, 익사베필론, 보르테조밉, 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 시토칼라신 B, 그라미시딘 D, 브로민화에티듐, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 콜키신, 안트라시클린 (예를 들어, 독소루비신 또는 에피루비신), 다우노루비신, 디히드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 아드리아마이신, 1-데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 퓨로마이신, 리신 또는 메이탄시노이드를 포함한다.
추가로 본 발명은 외과적 개입과 조합되어 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 외과적 개입의 경우에, 본 발명은 수술 전에, 예를 들어 수술불가능한 종양 대상체가 절제를 받도록 하기 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 본 발명은 수술 시에 및/또는 그 후에, 잔류 또는 전이성 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 절제된 종양 층은 종양-표적화된 초항원 및/또는 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체를 포함하는 제제로 주사 또는 관류될 수 있다. 관류는 절제후, 예를 들어 카테터를 수술 부위에 이식된 채로 남겨둠으로써 계속될 수 있다. 주기적 수술 후 치료가 또한 고려된다. 본 발명의 요법과 수술과의 임의의 조합은 본 발명의 범주 내에 있다.
연속 투여가 또한 적용될 수 있으며, 적절한 경우에, 예를 들어 종양이 절제되고 종양 층이 잔류 미세 질환을 제거하기 위해 치료된다. 시린지 또는 소작을 통한 전달이 바람직하다. 이러한 연속 관류는 치료 개시 후 약 1-2시간 내지 약 2-6시간, 내지 약 6-12시간, 내지 약 12-24시간, 내지 약 1-2일, 내지 약 1-2주 또는 그 초과의 기간 동안 일어날 수 있다. 일반적으로, 연속 관류를 통한 치료 조성물의 용량은 단일 또는 다중 주사에 의해 주어진 것과 등가일 것이며, 관류가 수행되는 동안의 기간에 걸쳐 조정된다. 추가로 사지 관류가, 특히 흑색종 및 육종의 치료에 있어서 본 발명의 치료 조성물을 투여하는 데 사용될 수 있는 것으로 고려된다.
원발성 또는 전이성 흑색종, 선암종, 편평 세포 암종, 선편평 세포 암종, 흉선종, 림프종, 육종, 폐암, 간암, 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 백혈병, 자궁암, 유방암, 전립선암, 난소암, 췌장암, 결장암, 다발성 골수종, 신경모세포종, NPC, 방광암, 자궁경부암 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 암이 본원에 기재된 방법 및 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 것으로 고려된다.
더욱이, 본원에 기재된 방법 및 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 암은 치료될 신체 위치 및/또는 계에 기초할 수 있으며, 예를 들어 비제한적으로 골암 (예를 들어, 유잉 패밀리의 종양, 골육종); 뇌암 (예를 들어, 성인 뇌 종양, (예를 들어, 성인 뇌 종양, 뇌간 신경교종 (소아기), 소뇌 성상세포종 (소아기), 뇌 성상세포종/악성 신경교종 (소아기), 상의세포종 (소아기), 수모세포종 (소아기), 천막상 원시 신경외배엽 종양 및 송과체모세포종 (소아기), 시각 경로 및 시상하부 신경교종 (소아기) 및 소아기 뇌 종양 (기타)); 유방암 (예를 들어, 여성 또는 남성 유방암); 소화기/위장암 (예를 들어, 항문암, 담관암 (간외), 카르시노이드 종양 (위장), 결장암, 식도암, 담낭암, 간암 (성인 원발성), 간암 (소아기), 췌장암, 소장암, 위의 (위) 암); 내분비암 (예를 들어, 부신피질 암종, 카르시노이드 종양 (위장), 도세포 암종 (내분비 췌장), 부갑상선암, 크롬친화세포종, 뇌하수체 종양, 갑상선암); 안암 (예를 들어, 흑색종 (안내), 망막모세포종); 비뇨생식기암 (예를 들어, 방광암, 신장 (신세포) 암, 음경암, 전립선암, 신우 및 요관 암 (이행 세포), 고환암, 요도암, 윌름스 종양 및 다른 소아기 신장 종양); 배세포암 (예를 들어, 두개외 배세포 종양 (소아기), 생식선외 배세포 종양, 난소 배세포 종양, 고환암); 부인과암 (예를 들어, 자궁경부암, 자궁내막암, 임신성 영양막 종양, 난소 상피암, 난소 배세포 종양, 난소 저 악성 잠재 종양, 자궁 육종, 질암, 외음부암); 두경부암 (예를 들어, 하인두암, 후두암, 구순암 및 구강암, 잠재성 원발성인 전이성 편평 경부암, 비인두암, 구인두암, 부비동암 및 비강암, 부갑상선암, 타액선암); 폐암 (예를 들어, 비소세포 폐암, 소세포 폐암); 림프종 (예를 들어, AIDS-관련 림프종, 피부 T-세포 림프종, 호지킨 림프종 (성인), 호지킨 림프종 (소아기), 임신 동안의 호지킨 림프종, 균상 식육종, 비-호지킨 림프종 (성인), 비-호지킨 림프종 (소아기), 임신 동안의 비-호지킨 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, 세자리 증후군, T-세포 림프종 (피부), 발덴스트롬 마크로불린혈증); 근골격암 (예를 들어, 유잉 패밀리의 종양, 골육종/골의 악성 섬유성 조직구종, 횡문근육종 (소아기), 연부 조직 육종 (성인), 연부 조직 육종 (소아기), 자궁 육종); 신경계암 (예를 들어, 성인 뇌 종양, 소아기 뇌 종양 (예를 들어, 뇌간 신경교종, 소뇌 성상세포종, 뇌 성상세포종/악성 신경교종, 상의세포종, 수모세포종, 천막상 원시 신경외배엽 종양 및 송과체모세포종, 시각 경로 및 시상하부 신경교종, 다른 뇌 종양), 신경모세포종, 뇌하수체 종양 원발성 중추 신경계 림프종); 호흡기/흉부암 (예를 들어, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 악성 중피종, 흉선종 및 흉선 암종); 및 피부암 (예를 들어, 피부 T-세포 림프종, 카포시 육종, 흑색종 및 피부암)이 있다.
초항원 접합체 및 B-세포 고갈제의 조합은 다양한 암, 예를 들어 유방암, 방광암, 자궁경부암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막암, 위암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비소세포 폐암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신세포암 및 피부암으로부터 선택된 암을 치료하는 데 사용될 수 있는 것으로 이해된다. 특정 실시양태에서, 방법은 두경부암을 치료하는 데 (예를 들어, 아테졸리주맙과 조합되어) 사용될 수 있다.
추가로, 암은 종양 세포로 구성된 종양을 포함할 수 있다. 예를 들어, 종양 세포는 흑색종 세포, 방광암 세포, 유방암 세포, 폐암 세포, 결장암 세포, 전립선암 세포, 간암 세포, 췌장암 세포, 위암 세포, 고환암 세포, 신암 세포, 난소암 세포, 림프암 세포, 피부암 세포, 뇌암 세포, 골암 세포 또는 연부 조직 암 세포를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 따라 치료될 수 있는 고형 종양의 예는 육종 및 암종, 예컨대 비제한적으로 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 척삭종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신세포 암종, 간세포암, 담관 암종, 융모막암종, 정상피종, 배아성 암종, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 폐 암종, 소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종, 핍지교종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 및 망막모세포종을 포함한다.
특정 실시양태에서, 초항원 접합체 및 B-세포 고갈제의 조합은 조혈암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 예시적인 조혈암은 백혈병, 급성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL; 예를 들어, B-세포 ALL, T-세포 ALL 또는 프리-B ALL), FAB ALL, 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수구성 백혈병 (CML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL; 예를 들어, 형질전환된 CLL), 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종, 모발상 세포 백혈병, 골수이형성 증후군 (MDS), 림프종, 호지킨병, 악성 림프종, 비-호지킨 림프종, 버킷 림프종, 다발성 골수종 또는 리히터 증후군 (리히터 형질전환)을 포함한다.
특정 실시양태에서, 초항원 접합체 및 B-세포 고갈제의 조합은 만성 림프구성 백혈병 (예를 들어, 재발성 또는 불응성 만성 림프구성 백혈병; 예를 들어, 클로람부실, CC-99282, 이브루티닙, rIL-15, TGR-1202, FT596, CAL-101, ABT-199, TRU-016, 리툭시맙, 엔토스플레티닙, 티라브루티닙, 및/또는 베네토클락스 (ABT-199)와 조합됨), 외투 세포 림프종 (예를 들어, 클로람부실과 조합됨), 여포성 림프종 (예를 들어, 벤다무스틴, CHOP, CVP, 모수네투주맙, INCB050465, 또는 BGB3111과 조합됨), 이식후 림프증식성 장애, 급성 림프구성 백혈병 (ALL; 예를 들어, 이델라리십과 조합됨), 원발성 CNS 림프종 (예를 들어, 베네토클락스와 조합됨), 리히터 형질전환 또는 리히터 증후군 (예를 들어, 아테졸리주맙, 베네토클락스, 메틸프레드니솔론 (예를 들어, 고용량 메틸프레드니솔론 (HDMP)), 및/또는 레날리도미드와 조합됨), 소림프구성 림프종 (예를 들어, CC-99282 또는 엔토스플레티닙과 조합됨), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 비-호지킨 림프종 (NHL; 예를 들어, 무통성 NHL; 예를 들어, CC-122, 엔토스플레티닙, 글로피타맙, DCDS0780A, RO7227166, 및/또는 토실리주맙과 조합됨), 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL; 예를 들어, 재발성 및/또는 불응성 DLBCL; 예를 들어, CC-122 또는 폴라투주맙 베도틴과 조합됨), 또는 말초 T-세포 림프종 (PTCL; 예를 들어, PCTL과 조합됨)을 치료하는 데 사용될 수 있다.
VI. 키트
추가로, 본 발명은, 예를 들어 초항원 접합체를 함유하는 제1 용기 및 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체를 함유하는 제2 용기를 포함하는 키트를 제공한다. 이러한 키트는 또한 추가의 작용제, 예컨대, 예를 들어 코르티코스테로이드 또는 또 다른 지질 조정제를 함유할 수 있다. 용기 수단은 그 자체가 시린지, 피펫 및/또는 다른 이러한 유사 장치일 수 있으며, 이로부터 제제는 신체의 특정 영역에 적용되고/거나, 동물 내로 주사되고/거나, 키트의 다른 성분과 함께 적용 및/또는 혼합될 수 있다.
키트는 적합하게 분취된 초항원 접합체 및/또는 B-세포 고갈제, 예를 들어 항-CD20 항체, 및 임의로 본 발명의 지질 및/또는 추가의 작용제 조성물을 포함할 수 있다. 키트의 성분은 수성 매질 또는 동결건조 형태로 포장될 수 있다. 키트의 성분이 1종 및/또는 그 초과의 액체 용액 중에 제공되는 경우에, 액체 용액은 멸균 수용액이다.
본 발명의 실시는 상기 예로부터 보다 완전히 이해될 것이며, 이는 단지 예시적 목적을 위해 본원에 제공되며 어떤 방식으로도 본 발명을 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
실시예
실시예 1: 종양 표적화된 초항원 및 B-세포 고갈제 요법
본 실시예는 마우스 결장암 모델에서 B-세포 고갈제 (항-CD20 항체)와 조합된 종양 표적화된 초항원을 시험하는 생체내 연구를 기재한다.
마우스를 (i) IgG 대조군, (ii) 항-CD20 항체, (iii) 종양 표적화된 초항원, (iv) 항-CD20 항체 및 종양 표적화된 초항원, (v) 항-PD-L1 항체, 또는 (vi) 항-CD20 항체 및 항-PD-L1 항체로 처리하였다.
간략하게, 제-7일에, 마우스에 250 μg/마우스의 IgG 대조군 또는 항-CD20 항체 (SA271G2; 바이오레전드(Biolegend))를 i.v. 주사하였다. 제0일에, 마우스에 5 x 105개의 종양 세포 (MC38-EpCAM)를 접종하였다. 제7일에, 종양을 측정하고, ~50 mm3의 평균 종양 부피를 갖는 마우스를 처리군으로 무작위화하였다 (n=10 마우스/군). 종양 표적화된 초항원을 제공받는 마우스는 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제14일, 제15일, 제16일 및 제17일에 20 μg/마우스의 종양 표적화된 초항원 (C215Fab-SEA)의 i.p. 주사로 처리하였다. 종양 표적화된 초항원 C215Fab-SEA는 종양-반응성 mAb (C215Fab) 및 박테리아 초항원 포도상구균 장독소 A (SEA)를 포함하는 융합 단백질이다. C215Fab-SEA를 생체내 뮤린 실험을 용이하게 하기 위해, 예를 들어 나프투모맙 에스타페나톡스 대신에 모델 종양 표적화된 초항원으로서 사용하였다. 항-PD-L1 항체를 제공받는 마우스는 제10일 및 제14일에 100 μg/마우스의 항체 (마우스 IgG1e3, pdl1-mab15; 인비보젠(Invivogen))의 주사로 처리하였다. PBS를 대조군으로서 사용하였다. 종양을 주 2회 측정하였다. 결과를 도 3-5에 제시한다.
생체내 B-세포 고갈은 항-CD20 항체만을 제공받은 마우스의 비장에서 입증되었다. 도 3에 도시된 바와 같이, 항-CD20 항체로 처리된 마우스에서는, 대조군에 비해 95% 초과의 B-세포가 고갈되었다.
제17일에, 2회의 처리 사이클의 완료시에, 대조군 (즉, 비-고갈 마우스)에 비해 항-CD20 항체로 처리된 마우스 (즉, 고갈 마우스)에서 보다 큰 종양이 관찰되었다 (**p=0.0013; 도 4).
항-CD20 항체 단독으로의 처리가 종양 부피를 유의하게 증가시켰지만, 종양 표적화된 초항원과 조합된 항-CD20 항체로의 처리는 종양 부피를 유의하게 감소시켰다 (종양 성장 억제 (TGI)=67%; ****p<0.0001; 도 4). 또한, 종양 표적화된 초항원 처리는 비-고갈 마우스에 비해 고갈 마우스에서 유의하게 더 효과적이었다 (***p=0.0008; 도 4). 항-CD20 항체와 조합된 종양 표적화된 초항원의 항종양 효과는 단독으로 투여된 경우의 각각의 작용제의 상가적 효과보다 더 컸다.
항-PD-L1 항체로의 처리는 또한 고갈 마우스에서 종양 부피를 유의하게 감소시켰다 (****p<0.0001; 도 5). 그러나, 종양 표적화된 초항원과 달리, 항-PD-L1 항체는 비-고갈 마우스에 비해 고갈 마우스에서 유의하게 더 효과적이지 않았다 (도 5).
이들 결과는 암 (예를 들어, 결장암)의 치료를 위한 B-세포 고갈제 (예를 들어, 항-CD20 항체, 예를 들어 오비누투주맙)와 조합된 종양 표적화된 초항원 (예를 들어, C215Fab-SEA 또는 나프투모맙 에스타페나톡스)의 잠재력을 입증한다.
실시예 2: B-세포 고갈은 종양 표적화된 초항원 처리 후에 세포독성 T-세포 확장 및 침윤을 증진시킨다
본 실시예는 종양 미세환경 (TME) 내로의 세포독성 T-세포 (CD8+) 확장 및 침윤에 대한 B-세포 고갈제 (항-CD20 항체)와 조합된 종양 표적화된 초항원의 효과를 시험하는 생체외 연구를 기재한다.
마우스를 (i) IgG 대조군, (ii) 항-CD20 항체, (iii) 종양 표적화된 초항원, (iv) 항-CD20 항체 및 종양 표적화된 초항원, (v) 항-PD-L1 항체, 또는 (vi) 항-CD20 항체 및 항-PD-L1 항체로 처리하였다. 간략하게, 제-7일에, 마우스에 250 μg/마우스의 IgG 대조군 또는 항-CD20 항체 (SA271G2; 바이오레전드(Biolegend))를 i.v. 주사하였다. 제0일에, 마우스에 5 x 105개의 종양 세포 (MC38-EpCAM)를 접종하였다. 제7일에, 종양을 측정하고, ~50 mm3의 평균 종양 부피를 갖는 마우스를 처리군으로 무작위화하였다. 종양 표적화된 초항원을 제공받는 마우스는 제7일에 시작하여 20 μg/마우스의 종양 표적화된 초항원 (C215Fab-SEA)의 4회 연속 매일 i.p. 주사로 처리하였다. 항-PD-L1 항체를 제공받는 마우스는 제10일에 100 μg/마우스의 항체 (마우스 IgG1e3, pdl1-mab15; 인비보젠)의 1회 주사로 처리하였다. PBS를 대조군으로서 사용하였다.
제13일에, 각각의 군으로부터의 마우스 (n=3)를 희생시키고, 종양을 제거하고, 단일 세포 현탁액으로 가공하였다. 종양 세포 현탁액을 FACS에 의해 분석하여 CD8+ T-세포, Vβ3+CD8+ T-세포 (종양 표적화된 초항원 처리에 의해 활성화되는 것으로 공지된 T-세포 집단), 및 CD4+ T-세포의 수를 결정하였다. 도 6a 및 도 6c에서 볼 수 있는 바와 같이, CD8+ T-세포 및 Vβ3+CD8+ T-세포의 종양 침윤은 종양 표적화된 초항원 단독으로의 처리 (즉, "비-고갈") 및 항-CD20 항체와 조합된 종양 표적화된 초항원으로의 처리 (즉, "고갈") 후에 증가되었다. 그러나, 비-고갈 마우스로부터의 종양에 비해 고갈 마우스로부터의 종양에서 CD8+ T-세포 및 Vβ3+CD8+ T-세포의 더 큰 침윤이 관찰되었다. 또한, CD8:CD4의 비는 비-고갈 마우스에 비해 고갈 마우스로부터의 종양에서 유의하게 더 높았다 (도 6b 및 도 6d). 세포독성 T-세포 침윤에 대한 효과는 항-PD-L1 처리 후에 관찰되지 않았다 (도 6a-6d).
종합하면, 이들 결과는 B-세포 고갈제 (예를 들어, 항-CD20 항체, 예를 들어 오비누투주맙)에 의한 B-세포의 고갈이 종양 표적화된 초항원 (예를 들어, C215Fab-SEA 또는 나프투모맙 에스타페나톡스)에 의한 처리 후에 종양 미세환경 (TME) 내로의 일반적인 및 Vβ3+ 세포독성 T-세포 (CD8+) 확장 및 침윤을 증가시킨다는 것을 시사한다.
참조로 포함됨
본원에 언급된 각각의 특허 및 과학 문헌의 전체 개시내용은 모든 목적을 위해 참조로 포함된다.
등가물
본 발명은 그의 취지 또는 본질적인 특징을 벗어나지 않으면서 다른 구체적 형태로 구현될 수 있다. 따라서 상기 실시양태는 모든 면에서 본원에 기재된 발명을 제한하기 보다는 예시적인 것으로 간주되어야 한다. 따라서, 본 발명의 범주는 상기 설명에 의해서가 아니라 첨부된 청구범위에 의해 나타내어지고, 청구범위의 등가의 의미 및 범위 내에 있는 모든 변화는 그 안에 포괄되는 것으로 의도된다.
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Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Ser 660 665 670 <210> 8 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 8 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Thr Met Ile Thr Asn Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val 115 120 125 Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala 195 200 205 Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Ser Gly Gly 210 215 220 Pro Ser Glu Lys Ser Glu Glu Ile Asn Glu Lys Asp Leu Arg Lys Lys 225 230 235 240 Ser Glu Leu Gln Gly Thr Ala Leu Gly Asn Leu Lys Gln Ile Tyr Tyr 245 250 255 Tyr Asn Ser Lys Ala Ile Thr Ser Ser Glu Lys Ser Ala Asp Gln Phe 260 265 270 Leu Thr Asn Thr Leu Leu Phe Lys Gly Phe Phe Thr Gly His Pro Trp 275 280 285 Tyr Asn Asp Leu Leu Val Asp Leu Gly Ser Thr Ala Ala Thr Ser Glu 290 295 300 Tyr Glu Gly Ser Ser Val Asp Leu Tyr Gly Ala Tyr Tyr Gly Tyr Gln 305 310 315 320 Cys Ala Gly Gly Thr Pro Asn Lys Thr Ala Cys Met Tyr Gly Gly Val 325 330 335 Thr Leu His Asp Asn Asn Arg Leu Thr Glu Glu Lys Lys Val Pro Ile 340 345 350 Asn Leu Trp Ile Asp Gly Lys Gln Thr Thr Val Pro Ile Asp Lys Val 355 360 365 Lys Thr Ser Lys Lys Glu Val Thr Val Gln Glu Leu Asp Leu Gln Ala 370 375 380 Arg His Tyr Leu His Gly Lys Phe Gly Leu Tyr Asn Ser Asp Ser Phe 385 390 395 400 Gly Gly Lys Val Gln Arg Gly Leu Ile Val Phe His Ser Ser Glu Gly 405 410 415 Ser Thr Val Ser Tyr Asp Leu Phe Asp Ala Gln Gly Gln Tyr Pro Asp 420 425 430 Thr Leu Leu Arg Ile Tyr Arg Asp Asn Thr Thr Ile Ser Ser Thr Ser 435 440 445 Leu Ser Ile Ser Leu Tyr Leu Tyr Thr Thr 450 455 <210> 9 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 9 Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Thr Ser Leu Leu Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Tyr Thr Ser Ser Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105 110 Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 115 120 125 Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 130 135 140 Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu 145 150 155 160 Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185 190 Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Asn Glu Ser 210 <210> 10 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutated Protein <400> 10 Ser Glu Lys Ser Glu Glu Ile Asn Glu Lys Asp Leu Arg Lys Lys Ser 1 5 10 15 Glu Leu Gln Gly Thr Ala Leu Gly Asn Leu Lys Gln Ile Tyr Tyr Tyr 20 25 30 Asn Glu Lys Ala Ile Thr Glu Asn Lys Glu Ser Asp Asp Gln Phe Leu 35 40 45 Glu Asn Thr Leu Leu Phe Lys Gly Phe Phe Thr Gly His Pro Trp Tyr 50 55 60 Asn Asp Leu Leu Val Asp Leu Gly Ser Lys Asp Ala Thr Asn Lys Tyr 65 70 75 80 Lys Gly Lys Lys Val Asp Leu Tyr Gly Ala Tyr Tyr Gly Tyr Gln Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Thr Pro Asn Lys Thr Ala Cys Met Tyr Gly Gly Val Thr 100 105 110 Leu His Asp Asn Asn Arg Leu Thr Glu Glu Lys Lys Val Pro Ile Asn 115 120 125 Leu Trp Ile Asp Gly Lys Gln Thr Thr Val Pro Ile Asp Lys Val Lys 130 135 140 Thr Ser Lys Lys Glu Val Thr Val Gln Glu Leu Asp Leu Gln Ala Arg 145 150 155 160 His Tyr Leu His Gly Lys Phe Gly Leu Tyr Asn Ser Asp Ser Phe Gly 165 170 175 Gly Lys Val Gln Arg Gly Leu Ile Val Phe His Ser Ser Glu Gly Ser 180 185 190 Thr Val Ser Tyr Asp Leu Phe Asp Ala Gln Gly Gln Tyr Pro Asp Thr 195 200 205 Leu Leu Arg Ile Tyr Arg Asp Asn Lys Thr Ile Asn Ser Glu Asn Leu 210 215 220 His Ile Ala Leu Tyr Leu Tyr Thr Thr 225 230 <210> 11 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 11 Tyr Ser Trp Ile Asn 1 5 <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 12 Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 13 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 13 Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr 1 5 10 <210> 14 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 14 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 15 Gln Met Ser Asn Leu Val Ser 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 16 Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 17 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 17 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 18 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val 115 <210> 19 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 19 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 20 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 20 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (74)

  1. 암을 치료하는 데 사용하기 위한 초항원 접합체로서, 상기 초항원은 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 것인 초항원 접합체.
  2. T-세포의 종양 내로의 침윤을 촉진하는 데 사용하기 위한 초항원 접합체로서, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고; 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 것인 초항원 접합체.
  3. 제2항에 있어서, T-세포가 CD8+ T-세포인 초항원 접합체.
  4. 종양에서 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 데 사용하기 위한 초항원 접합체로서, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 것인 초항원 접합체.
  5. 종양 내로의 조절 T-세포 (Treg)의 침윤을 감소시키는 데 사용하기 위한 초항원 접합체로서, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 것인 초항원 접합체.
  6. 암을 치료하는 데 사용하기 위한 초항원 접합체로서, 상기 초항원은 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결되고, 여기서 상기 사용은 B-세포 고갈제와 조합되고, 상기 B-세포 고갈제는 초항원 접합체를 대상체에게 투여하기 전에 그를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 것인 초항원 접합체.
  7. 제1항 또는 제6항에 있어서, 암이 종양을 포함하는 것인 초항원 접합체.
  8. 제7항에 있어서, B-세포 고갈제 및 초항원 접합체의 상기 조합이 종양 내로의 T-세포의 침윤을 촉진하는 것인 초항원 접합체.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, B-세포 고갈제 및 초항원 접합체의 상기 조합이 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 것인 초항원 접합체.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, B-세포 고갈제 및 초항원 접합체의 상기 조합이 종양 내로의 Treg의 침윤을 감소시키는 것인 초항원 접합체.
  11. 제2항 내지 제5항 및 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 종양이 고형 종양인 초항원 접합체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 초항원이 포도상구균 장독소 A 또는 그의 면역학적 변이체 및/또는 단편을 포함하는 것인 초항원 접합체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 초항원이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열 또는 그의 면역학적 반응성 변이체 및/또는 단편을 포함하는 것인 초항원 접합체.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 암 항원이 EpCAM 또는 5T4인 초항원 접합체.
  15. 제14항에 있어서, 암 항원이 5T4인 초항원 접합체.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 모이어티가 항체인 초항원 접합체.
  17. 제16항에 있어서, 항체가 항-5T4 항체 또는 항-EpCAM 항체인 초항원 접합체.
  18. 제17항에 있어서, 항체가 항-5T4 항체인 초항원 접합체.
  19. 제18항에 있어서, 항-5T4 항체가 5T4 암 항원에 결합하는 Fab 단편을 포함하는 것인 초항원 접합체.
  20. 제19항에 있어서, 항-5T4 항체가 서열식별번호(SEQ ID NO): 8의 아미노산 잔기 1-222를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 잔기 1-214를 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 초항원 접합체.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 서열식별번호: 8을 포함하는 제1 단백질 쇄 및 서열식별번호: 9를 포함하는 제2 단백질 쇄를 포함하는 초항원 접합체.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, B-세포 고갈제가 항-CD20 항체인 초항원 접합체.
  23. 제22항에 있어서, 항-CD20 항체가 이브리투모맙, 오비누투주맙, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 리툭시맙, 벨투주맙, 토시투모맙, 우블리툭시맙, 벨투주맙, PRO131921 및 TRU-015로부터 선택된 것인 초항원 접합체.
  24. 제23항에 있어서, 항-CD20 항체가 오비누투주맙인 초항원 접합체.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 5T4-발현 또는 EpCAM-발현 암인 초항원 접합체.
  26. 제25항에 있어서, 암이 5T4-발현 암인 초항원 접합체.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 유방암, 방광암, 자궁경부암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막암, 위암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비소세포 폐암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신세포암, 피부암 및 조혈암으로부터 선택된 것인 초항원 접합체.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 대상체에게 면역강화제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 초항원 접합체.
  29. 제28항에 있어서, 면역강화제가 CTLA-4-기반 또는 PD-1-기반 억제제인 초항원 접합체.
  30. 제29항에 있어서, PD-1-기반 억제제가 PD-1 또는 PD-L1 억제제인 초항원 접합체.
  31. 제30항에 있어서, PD-1 억제제가 항-PD-1 항체인 초항원 접합체.
  32. 제31항에 있어서, 항-PD-1 항체가 니볼루맙 펨브롤리주맙 및 세미플리맙으로부터 선택된 것인 초항원 접합체.
  33. 제30항에 있어서, PD-L1 억제제가 항-PD-L1 항체인 초항원 접합체.
  34. 제33항에 있어서, 항-PD-L1 항체가 아테졸리주맙, 아벨루맙 및 두르발루맙으로부터 선택된 것인 초항원 접합체.
  35. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 대상체에게 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 초항원 접합체.
  36. 제35항에 있어서, 화학요법제가 도세탁셀인 초항원 접합체.
  37. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 데 있어서 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 효능을 개선시키는 방법으로서, 대상체에게 초항원 접합체를 투여하기 전에 대상체에게 B-세포 고갈제의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  38. 종양 내로의 T-세포의 침윤의 촉진을 필요로 하는 대상체에서 종양 내로의 T-세포의 침윤을 촉진하는 방법으로서, 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 이어서 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여함으로써, 종양 내로의 T-세포의 침윤을 촉진하는 것을 포함하는 방법.
  39. 제38항에 있어서, T-세포가 CD8+ T-세포인 방법.
  40. 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비의 증가를 필요로 하는 대상체에서 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 방법으로서, 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 이어서 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여함으로써, 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 것을 포함하는 방법.
  41. 종양 내로의 조절 T-세포 (Treg)의 침윤의 감소를 필요로 하는 대상체에서 종양 내로의 Treg의 침윤을 감소시키는 방법으로서, 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 이어서 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여함으로써, 종양 내로의 Treg의 침윤을 감소시키는 것을 포함하는 방법.
  42. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 (i) B-세포 고갈제의 유효량; 및 이어서 (ii) 종양의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  43. 제38항 또는 제42항에 있어서, 암이 종양을 포함하는 것인 방법.
  44. 제43항에 있어서, 대상체에게의 B-세포 고갈제 및 초항원 접합체의 투여가 종양 내로의 T-세포의 침윤을 촉진하는 것인 방법.
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서, 대상체에게의 B-세포 고갈제 및 초항원 접합체의 투여가 종양 내 CD8+ T-세포 대 CD4+ T-세포의 비를 증가시키는 것인 방법.
  46. 제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게의 B-세포 고갈제 및 초항원 접합체의 투여가 종양 내로의 Treg의 침윤을 감소시키는 것인 방법.
  47. 제38항 내지 제41항 및 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 종양이 고형 종양인 방법.
  48. 제38항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 초항원이 포도상구균 장독소 A 또는 그의 면역학적 변이체 및/또는 단편을 포함하는 것인 방법.
  49. 제38항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 초항원이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열 또는 그의 면역학적 반응성 변이체 및/또는 단편을 포함하는 것인 방법.
  50. 제38항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 암 항원이 EpCAM 또는 5T4인 방법.
  51. 제50항에 있어서, 암 항원이 5T4인 방법.
  52. 제38항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 표적화 모이어티가 항체인 방법.
  53. 제52항에 있어서, 항체가 항-5T4 항체 또는 항-EpCAM 항체인 방법.
  54. 제53항에 있어서, 항체가 항-5T4 항체인 방법.
  55. 제54항에 있어서, 항-5T4 항체가 5T4 암 항원에 결합하는 Fab 단편을 포함하는 것인 방법.
  56. 제55항에 있어서, 항-5T4 항체가 서열식별번호: 8의 아미노산 잔기 1-222를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 잔기 1-214를 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
  57. 제38항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 초항원 접합체가 서열식별번호: 8을 포함하는 제1 단백질 쇄 및 서열식별번호: 9를 포함하는 제2 단백질 쇄를 포함하는 것인 방법.
  58. 제38항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, B-세포 고갈제가 항-CD20 항체인 방법.
  59. 제58항에 있어서, 항-CD20 항체가 이브리투모맙, 오비누투주맙, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 리툭시맙, 벨투주맙, 토시투모맙, 우블리툭시맙, 벨투주맙, PRO131921 및 TRU-015로부터 선택된 것인 방법.
  60. 제59항에 있어서, 항-CD20 항체가 오비누투주맙인 방법.
  61. 제38항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 5T4-발현 또는 EpCAM-발현 암인 방법.
  62. 제61항에 있어서, 암이 5T4-발현 암인 방법.
  63. 제38항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 유방암, 방광암, 자궁경부암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막암, 위암, 두경부암, 간암, 흑색종, 중피종, 비소세포 폐암, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신세포암, 피부암 및 조혈암으로부터 선택된 것인 방법.
  64. 제38항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 면역강화제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  65. 제64항에 있어서, 면역강화제가 CTLA-4-기반 또는 PD-1-기반 억제제인 방법.
  66. 제65항에 있어서, PD-1-기반 억제제가 PD-1 또는 PD-L1 억제제인 방법.
  67. 제66항에 있어서, PD-1 억제제가 항-PD-1 항체인 방법.
  68. 제67항에 있어서, 항-PD-1 항체가 니볼루맙 펨브롤리주맙 및 세미플리맙으로부터 선택된 것인 방법.
  69. 제66항에 있어서, PD-L1 억제제가 항-PD-L1 항체인 방법.
  70. 제69항에 있어서, 항-PD-L1 항체가 아테졸리주맙, 아벨루맙 및 두르발루맙으로부터 선택된 것인 방법.
  71. 제38항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  72. 제71항에 있어서, 화학요법제가 도세탁셀인 방법.
  73. (i) 대상체 내의 암성 세포에 의해 발현된 암 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 공유 연결된 초항원을 포함하는 초항원 접합체의 유효량; (ii) B-세포 고갈제의 유효량; 및 (iii) 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  74. 초항원 접합체를 함유하는 제1 용기 및 B-세포 고갈제를 함유하는 제2 용기, 및 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 따른 B-세포 고갈제와 조합된 초항원 접합체의 사용에 대한 지침서를 포함하는 키트.
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