KR20230071114A - 탈세포화된 힘줄 기질 방법 및 이의 용도 - Google Patents

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첼시 에스. 바니
데이비드 번홀트
애나-로라 넬슨
피터 제이. 밀레트
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더 스테드만 클리닉 앤드 스테드만 필리폰 리서치 인스티튜트
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Abstract

탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 및 DTM 하이드로젤 제조 방법이 제공된다. 이러한 조성물 및 하이드로젤은 힘줄 부상 봉합에 유용하며 일부 경우에 주사, 관절경 시술에 의해, 또는 전통적인 외과적 봉합에 대한 부속물로서 사용될 수 있다.

Description

탈세포화된 힘줄 기질 방법 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 각각 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 2020년 6월 20일에 출원된 미국 가출원 번호 63/041,877, 및 2020년 6월 25일에 출원된 미국 가출원 번호 63/043,931의 이익을 주장하는 국제 출원이다.
발명의 분야
본원에 설명된 발명은 일반적으로 탈세포화된 힘줄 기질, 그리고 탈세포화된 힘줄 기질을 제조 및 사용하는 방법에 관한 것이다.
발명의 배경
재생 의학은 세포외 기질 물질에 대한 많은 용도를 확인한 부상하는 분야이다. 힘줄은 근육과 뼈를 연결하는 섬유성 결합 조직이다. 근육과 힘줄 사이의 연결은 근건 접합부 또는 힘줄-근육 삽입점으로 지칭되고; 힘줄과 뼈 사이의 연결은 골건 접합부로 지칭된다. 이는 힘줄 삽입부 또는 부착부(enthesis)로도 알려져 있으며, 이 곳의 질환은 부착부병증으로 알려져 있다. 힘줄 콜라겐 원섬유가 골기질에 삽입되는 힘줄과 뼈 사이의 접합부인 후자의 연결은 일반적인 힘줄 부상 위치이다. 일반적으로 이러한 부상은 과도한 사용, 내인성 힘줄 변성(건병증) 또는 외상성 부상으로 인해 발생한다.
힘줄 부상은 잘 특성화된 세포 및 조직 변화를 유도하여 힘줄의 생체역학적 특성이 변경된다. 예를 들어, Arya and Kulig, J. Appl. Physiol. 108:670-675 (2010). 과도한 사용, 내인성 변성 또는 외상으로 인한 부상은 힘줄 파열로 나타날 수 있다. 파열은 중증도에 따라, 1도 최소 파열, 2도 중등도 내지 중증 파열, 마지막으로 3도 완전 파열로 분류된다. 이들은 또한 회전근개, 아킬레스건, 대퇴사두건, 상완이두건 등과 같이, 신체의 여러 상이한 해부학적 영역에서 부분인 또는 완전한 것과 같은 다른 방식으로도 분류된다.
파열은 일반적으로 외과적 개입을 필요로 한다. 일부 양태에서, 본 발명은 파열을 포함하는 힘줄 부상 봉합에 유용한 조성물 제조 방법을 제공한다.
더욱이, 본 발명의 조성물은 힘줄 재성장, 힘줄 치유, 또는 뼈로의 천연 힘줄 삽입의 재구성을 가속화하는 조직 재생을 유도한다. 본 발명의 방법은 세포외 기질에 존재하는 내인성 성장 인자를 보존하고 힘줄 재생, 치유 및/또는 봉합을 위한 조성물을 제공한다.
발명의 요약
한 양태에서, 본 발명은 기질 메탈로프로테네이스(matrix metalloproteinase, MMP) 및/또는 콜라게네이스 소화된 힘줄 조직, 항균제 및 멸균 수성 담체 용액을 포함하는 조성물 제조 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(decellularized tendon matrix, DTM) 조성물을 제공하고 여기서 DTM 조성물은 다음 단계를 포함하는 공정에 의해 제조된다: (i) 힘줄 조직 표본을 세절; (ii) 세절된 힘줄 조직 표본을 탈세포화; (iii) 분쇄; (iv) 소화; (v) 정지 및 중화; (vi) 세척; 및, (vii) 동결건조.
한 양태에서, 본 발명은 성장 인자를 보존하는 탈세포화된 힘줄 기질 제조 방법을 제공한다.
일부 구체예에서, 본 개시내용은 기질 메탈로프로테네이스(MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 제공한다. 일부 구체예에서, 본 개시내용은 콜라게네이스 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 제공한다. 일부 구체예에서, 조성물은 콜라겐 소화물을 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 항균제를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 멸균 수성 담체 용액을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 탈세포화된 힘줄 기질(DTM)은 단백질이 풍부하여 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 50% 이상을 보유한다. 일부 구체예에서, 조성물은 성형 가능하다. 일부 구체예에서, 조성물은 해부학적 토포그래피에 실질적으로 부착할 수 있다.
일부 구체예에서, 본 개시내용은 또한 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 상기 방법은 힘줄 조직 표본 세절; 세절된 힘줄 조직 표본 탈세포화; 분쇄; 소화; 정지 및 중화; 세척; 및 동결건조로부터 선택된 하나 이상의 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 MMP-2, MMP-9, MMP-14 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 기질 메탈로프로테네이스(MMP)로 소화시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 본원에 기재된 콜라게네이스로 소화시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 본원에 기재된 DNase로 탈세포화하는 것을 포함한다.
본 개시내용은 또한 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 제공하고 여기서 DTM 조성물은 힘줄 조직 표본 세절; 세절된 힘줄 조직 표본 탈세포화; 소화; 및 동결건조로부터 선택된 하나 이상의 단계를 포함하는 공정에 의해 제조된다. 일부 구체예에서, 본 개시내용은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 제공하고 여기서 DTM 조성물은 힘줄 조직 표본 세절; 세절된 힘줄 조직 표본 탈세포화; 분쇄; 소화; 정지; 중화; 세척; 및 동결건조로부터 선택된 하나 이상의 단계를 포함하는 공정에 의해 제조된다. 일부 구체예에서, 탈세포화 단계는 카오트로픽 염(chaotropic salt), 비이온성 세제, 양쪽성이온성 세제, 양이온성 세제, 음이온성 세제, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 포함하는 용액에 세절된 힘줄 조직 표본을 노출시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 탈세포화 단계는 DNase, RNase, 또는 이들의 조합에 세절된 힘줄 조직 표본을 노출시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 탈세포화 단계는 DNase에 세절된 힘줄 조직 표본을 노출시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 소화 단계는 기질 메탈로프로테네이스(MMP)를 포함하는 용액으로 소화시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 기질 메탈로프로테네이스(MMP)는 MMP-2, MMP-9, MMP-14, 또는 이들의 조합으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 정지 및/또는 중화 단계는 TAPI-0, TAPI-1, TAPI-2, 마리마스타트, 포스포라미돈, 루테올린, PMSF, 펩스타틴 A, 류펩틴, E-64, 소듐 오르토바나데이트, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 프로테이스 억제제를 포함하는 용액으로 정지 및/또는 중화하는 것을 포함한다.
본 개시내용은 또한 힘줄 재생 자극 방법을 제공하고, 방법은 DTM 본원에 기재된 조성물을 약제학적으로 허용 가능한 담체에 재현탁시키는 단계; 및 재현탁된 DTM 조성물을 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위에 적용하는 단계로부터 선택된 하나 이상의 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 재현탁된 DTM 조성물은 성형 가능하다. 일부 구체예에서, 재현탁된 DTM 조성물은 퍼티 점조도를 갖는다. 일부 구체예에서, 재현탁된 DTM 조성물은 겔이다. 일부 구체예에서, 재현탁된 DTM 조성물은 페이스트이다. 일부 구체예에서, 재현탁된 DTM 조성물은 요변성이다. 일부 구체예에서, 재현탁된 DTM 조성물은 점탄성이다. 일부 구체예에서, 재현탁된 DTM 조성물은 주사 가능하다. 일부 구체예에서, 재현탁된 DTM 조성물은 퍼짐 가능하다.
본 개시내용은 또한 재현탁된 DTM 본원에 기재된 조성물, 및 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카르보디이미드 (EDC) 및 PEG-N-하이드록시석신이미드 (NHS) 에스터 중 하나 이상을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 하이드로젤을 제공한다. 일부 구체예에서, 하이드로젤은 성형 가능하다. 일부 구체예에서, 하이드로젤은 퍼티 점조도를 갖는다. 일부 구체예에서, 하이드로젤은 페이스트이다. 일부 구체예에서, 하이드로젤은 요변성이다. 일부 구체예에서, 하이드로젤은 점탄성이다. 일부 구체예에서, 하이드로젤은 주사 가능하다. 일부 구체예에서, 하이드로젤은 퍼짐 가능하다.
본 개시내용은 또한 소프트-캐스트 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 물체를 제공하고, 여기서 소프트-캐스트 물체는 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 생리학적 완충액에 재현탁시키는 단계; DTM 조성물을 PEG-N-하이드록시석신이미드(NHS) 에스터와 혼합하여 연질 하이드로젤을 생성하는 단계; 연질 하이드로젤을 삼차원 몰드로 옮기는 단계; 중합 반응을 경화시키는 단계; 및 중합 반응을 불활성화시키는 단계 중 하나 이상의 단계를 포함하는 공정에 의해 제조된다.
본 개시내용은 또한 재현탁된 DTM 본원에 기재된 조성물을 포함하고, 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카보디이미드 (EDC) 및 (EDC) 커플링제와 함께 N-하이드록시석신이미드(NHS) 또는 N-하이드록시설포석신이미드(설포NHS)로부터 선택된 수용성 커플링제를 추가로 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 하이드로젤을 제공한다.
본 개시내용은 또한 대상의 힘줄 파열 치료 및/또는 힘줄 재생 자극 방법을 제공하고, 방법은 기질 메탈로프로테네이스(MMP) 또는 콜라게네이스 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 수득하는 단계; DTM 조성물을 약제학적으로 허용 가능한 담체에 재현탁시키는 단계; 및 재현탁된 DTM 조성물을 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위에 적용하는 단계 중 하나 이상을 포함한다.
본 개시내용은 또한 천연 힘줄로부터 생성된 탈세포화된 힘줄 기질을 제공하고, 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 90 중량% 초과의 TGF-β를 포함한다. 일부 구체예에서, 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 95 중량% 초과의 TGF-β를 포함한다. 일부 구체예에서, 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 99 중량% 초과의 TGF-β를 포함한다. 일부 구체예에서, 청구항 18-20 중 어느 하나의 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 5 중량% 미만의 세포 물질을 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 2 중량% 미만의 세포 물질을 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 1 중량% 미만의 세포 물질을 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 0.1 중량% 미만의 세포 물질을 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질은 TGF-β 생성 세포가 실질적으로 없다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 5 중량% 미만의 DNA를 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 2 중량% 미만의 DNA를 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 1 중량% 미만의 DNA를 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 0.1 중량% 미만의 DNA를 포함한다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질은 DNA가 실질적으로 없다.
본 개시내용은 또한 힘줄로부터 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 제조하는 방법을 제공하고, 방법은 힘줄을 탈세포화하여 탈세포화된 힘줄을 생성하는 단계; 탈세포화된 힘줄을 기질 메탈로프로테네이스(MMP)를 포함하는 효소 용액과 접촉시켜 소화되고 탈세포화된 힘줄을 생성하는 단계; 소화되고 탈세포화된 힘줄을 동결건조하여 동결건조된 힘줄을 생성하는 단계; 및 동결건조된 힘줄을 재구성하여 탈세포화된 힘줄 기질을 생성하는 단계 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 힘줄을 DNase 용액과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, DNase 용액은 용매의 밀리리터당 약 10 내지 약 100 단위의 DNase, 용매의 밀리리터당 약 25 내지 약 75 단위의 DNase, 용매의 밀리리터당 약 40 내지 약 60 단위의 DNase, 용매의 밀리리터당 약 40 내지 약 60 단위의 DNase, 또는 용매의 밀리리터당 약 50 단위의 DNase를 포함한다. 일부 구체예에서, 탈세포화는 힘줄을 힘줄 1 그램당 약 4 밀리리터 내지 약 50 밀리리터의 DNase 용액과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 탈세포화는 힘줄을 힘줄 1 그램당 약 5 밀리리터 내지 약 10 밀리리터의 DNase 용액과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 탈세포화는 힘줄을 힘줄 1 그램당 약 10 밀리리터 내지 약 50 밀리리터의 DNase 용액과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 접촉은 약 1 시간의 기간 동안 일어나고, 임의로 진탕기에서 일어난다. 일부 구체예에서, 탈세포화는 힘줄을 인산염 완충 식염수로 세척하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 탈세포화는 힘줄을 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 동결건조는 소화되고 탈세포화된 힘줄을 영하 80 ℃에서 적어도 약 30 분 동안 동결시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 약 1 분 내지 약 15 분 동안 약 1500 G 내지 약 2500 G에서 원심분리를 사용하여 70 마이크로미터 스트레이너를 통해 여과하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, MMP는 콜라게네이스를 포함한다. 일부 구체예에서, 콜라게네이스는 콜라게네이스 I형, 콜라게네이스 III형, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 효소 용액 중의 콜라게네이스 I형의 농도는 밀리리터당 약 2 밀리그램이다. 일부 구체예에서, 효소 용액 중의 콜라게네이스 III형의 농도는 밀리리터당 약 1 밀리그램이다. 일부 구체예에서, 탈세포화된 힘줄은 힘줄 1 그램당 약 10 밀리리터 내지 약 50 밀리리터의 효소 용액과 접촉된다. 일부 구체예에서, 탈세포화된 힘줄은 힘줄 1 그램당 약 5 밀리리터 내지 약 10 밀리리터의 효소 용액과 접촉된다. 일부 구체예에서, 탈세포화된 힘줄은 약 24 시간 동안 효소 용액과 접촉된다. 일부 구체예에서, 탈세포화된 힘줄은 약 12 시간 동안 효소 용액과 접촉된다. 일부 구체예에서, 탈세포화된 힘줄은 약 1 시간, 약 2 시간, 약 3 시간, 약 4 시간, 약 5 시간, 약 6 시간, 약 7 시간, 약 8 시간, 약 9 시간, 약 10 시간, 약 11 시간, 약 12 시간, 약 13 시간, 약 14 시간, 약 15 시간, 약 16 시간, 약 17, 약 18 시간, 약 19 시간, 약 20 시간, 약 21 시간, 약 22 시간, 약 23 시간, 또는 약 24 시간 동안 효소 용액과 접촉된다. 일부 구체예에서, 탈세포화된 힘줄은 약 37 ℃에서 효소 용액과 접촉된다. 일부 구체예에서, 재구성은 약 2 마이크로리터 내지 약 5 마이크로리터의 용매를 약 1 밀리그램의 동결건조된 힘줄과 혼합하는 것을 포함한다.
도 1A-B는 천연 슬개건 및 아킬레스건 가공 전에 힘줄 중의 DNA 함량 (도 1A) 및 단백질 함량 (도 1B)의 천연 힘줄 특성분석을 도시한다. 측정은 총 6 명의 공여자의 힘줄을 나타낸다.
도 2A-B는 힘줄 유형 및 위치에 기초한 천연 TGF-β 농도를 도시한다. (가공 전에) 천연 힘줄 샘플에서 발견되는 TGF-β3 농도(도 2A) 및 TGF-β1 농도(도 2B)가 나타난다.
도 3은 DNase 및 세제를 사용한 탈세포화의 비교를 도시한다. 슬개건 및 아킬레스건의 DNA 함량은 천연 힘줄, DNase 50U로 1 시간 동안 처리된 힘줄, DNase 50U로 2 시간 동안 처리된 힘줄, 및 SDS 또는 EDTA를 사용한 전통적인 탈세포화 방법으로 처리된 힘줄에서 측정된다.
도 4는 C-1 콜라게네이스 I, C-3 콜라게네이스 III, C-1 콜라게네이스 I과 C-3 콜라게네이스 III 모두, 및 펩신을 포함하는, 힘줄 샘플을 소화하기 위한 다양한 효소 시약을 사용하여 힘줄의 총 단백질을 도시한다.
도 5는 힘줄을 탈세포화된 힘줄 기질로 가공하기 전 및 후의 TGF-β 농도를 도시한다. 천연 힘줄은 슬개건 및 아킬레스건의 모든 근위, 중간 및 원위 부분을 평균화하여 측정된다.
도 6A-F는 탈세포화된 힘줄 기질 가공이, 당겨지지 않고 미연신 형태(도 6B)로부터 연신(도 6A)되는 능력을 갖는 탄성 특징을 용이하게 함을 도시한다. DTM은 멸균 동결건조 분말로 보관이 안정적이고 퍼티 또는 주사 가능 용액으로 재구성될 수 있다. 이 이미지는 동결건조된 DTM을 3-5 ul/mg으로 재현탁시켜 형성될 수 있는 DTM 퍼티를 나타낸다. 이 퍼티는 원하는 봉합 영역에 외과적 적용을 위해 성형 가능/연신 가능하다.도 6C: 동결건조된. 도 6D: 재구성된. 도 6E: 재구성된, 48 시간. 도 6F: 1 ml의 PBS에 대해 0, 1, 3, 5, 및 7 g의 동결건조된 DTM의 농도를 갖는 인간 DTM의 진동 응력 스위프. 복소 탄성률은 y축(Pa)에 표시되고 진동 응력은 x축(Pa)에 표시되어, 테스트된 모든 재구성 농도가 낮은 응력 조건에서 잘-형성된 탄성 구조를 유지한다.
도 7A-C는 DNase 처리가 힘줄 조직을 효과적으로 탈세포화함을 도시한다. 힘줄은 1 시간에 걸쳐 다양한 농도의 DNase (10U, 50U, 및 100U)를 사용하여 탈세포화되었다. 1X PBS가 탈세포화 없음에 대해 대조군으로 사용되었다. DNA 농도는 DNEasy 키트(Qiagen)를 사용하여 결정되었다. 이 데이터는 50U 정도로 적은 DNase가 조직 탈세포화에서 효과적임을 나타낸다.
도 8은 DNase 처리가 힘줄 탈세포화에서 표준 세제 방법만큼 효과적임을 도시한다.50U의 DNase를 기존 세제, 1% SDS 및 0.1% EDTA와 비교했다. DNase 50U는 0.5 시간, 1 시간, 및 2 시간에 테스트된 반면, 표준 SDS 및 EDTA 프로토콜은 24-시간 탈세포화를 요구한다. DNA 농도는 DNEasy 키트(Qiagen, n=3)를 사용하여 결정되었다. 모둔 값은 탈세포화 없음으로 정규화되었다. Tukey의 HSD 다중 비교 사후 테스트는 DNase 대 SDS 및 EDTA에 의한 여러 상이한 시간의 DNase 처리 또는 탈세포화 사이에 유의한 차이가 없음을 나타낸다.
도 9A-H는 아킬레스건 기질이 슬개건보다 더 많은 단백질 함량을 가짐을 도시한다. 아킬레스건 및 슬개건은 힘줄의 근위, 중심/중간, 원위 말단으로 이루어진 1/3 부분으로 분할되었다. (A-D) 천연 힘줄의 총 단백질은 BCA 단백질 정량 키트(Thermo Scientific)를 사용하여 측정되었다. (E-H) TGF-β는 TGF-β 자기 비드 패널 Milliplex 키트(Millipore Sigma, #TGFBMAG-64K-03)를 사용하여 측정되었다. ANOVA는 힘줄 영역 사이에 통계적으로 유의한 차이를 보이지 않으므로 힘줄 전체가 가공을 통해 사용될 수 있다. 두 상이한 힘줄을 비교할 때 (D) 총 단백질은 상이하지 않지만 (P=0.93), (H) TGF-β가 아킬레스건 및 슬개건에서 통계적으로 더 높다 (P = 0.0045).
도 10A: 효소 소화 동안 부가된 콜라게네이스 용액의 성공적 제거를 확인하기 위해 콜라게네이스 활성을 측정했다. 천연 힘줄 (n=3) 및 효소 소화된 및 여과된 샘플 (n=10; p=0.922) 사이에서 콜라게네이스 활성 상 현저한 차이는 없었다. 여과후, 생활성이 유지되었는지를 확인하기 위해 TGFβ 프로파일을 테스트했다 (n=10). 조합시킨 천연 힘줄 및 DTM 사이에서 (도 10B) TGFβ1 및 (도 10C) TGFβ2 에서의 통계적 유의성이 확인되지 않았다. 그러나 , 조합시킨 천연 힘줄 및 DTM (p=0.0189) 사이에서 (도 10D) TGFβ3에서 통계적 유의성이 확인되었다. 도 10E은 여과가 콜라게네이스 활성을 효과적으로 제거함을 도시한다. 탈세포화된 힘줄은 DTM의 형태 인자를 개선하기 위해 콜라게네이스로 처리되었다. 100 kDa 필터는 최종 생성물에서 콜라게네이스 활성 제거에 매우 효과적이었다. ANOVA는 그룹 간에 유의한 차이가 있음을 나타낸다 (F (4, 22) =18.06, p<0.0001). 중요하게도, 천연 샘플과 100 kDa 여과된 샘플 사이의 유의한 콜라게네이스 활성 차이가 없다.
도 11은 펩신으로 힘줄을 탈세포화하는 표준 방법보다 DTM에서 더 많은 생활성이 유지됨을 도시한다. 힘줄은 콜라게네이스 1형 (92.5 g 힘줄/g 콜라게네이스 1) 및 3형 (185 g 힘줄/ 1 g Col 3)을 포함하는 용액을 사용하여, 또는 이전에 공개된 방법(Farnebo et.al 2014, PMID: 24341855)이 주어진 펩신을 사용하여, 탈세포화 후 소화되었다. ANOVA는 F (3,11) =5.056, p=0.0193으로 그룹 간의 유의한 차이를 나타냈다. Tukey의 사후 HSD는 펩신이 현저히 적은 TGF-β를 가짐을 나타낸다 (P= 0.0249).
도 12A-G는 상이한 표면에 플레이팅된 세포의 증식 차이를 도시한다. 조직 배양 플레이트는 콜라겐 또는 DTM으로 코팅된 미처리 (대조군, "TC 처리") 상태로 남겨졌다. 일차 건세포(ZenBio #TEN-F)를 20,000 세포/웰로 플레이팅하고 및 Presto 청색 (Thermo Fisher)을 사용하여 플레이팅 후 (A) 48 시간 또는 (B) 7 일에 세포 생존률을 정량했고, 현저하게 상이한 성장 속도가 발생했거나 (C) , 또는 (D) 플레이팅 후48 시간 또는 (E) 7 일에 세포 생존률을 정량했고, 현저하게 상이한 성장 속도가 발생했다 (F). (ANOVA = F (3,26) = 10.6, p<0.0001). (G)는 (D)-(F) 내 상응하는 데이터에 대한 통계적 분석을 나타낸다.
도 13A-J는 일차 건세포 및 ADSCs을 20,000 세포/웰에서 플레이팅하고 플레이팅 후 (도 13A, 13B) 48 시간 및 (도 13C, 13D) 7 일에 세포 생존률을 정량했고, 현저하게 상이한 성장 속도가 발생했음 (n=4-9/그룹)을 도시한다. (도 13E-13J) 콜라겐 코팅, 조직-배양 처리된 및 DTM 코팅된 플레이트를 건세포로 시딩하고 살아 있는 세포 이미징의 정지 이미지를 0 (E-G) 및 48 시간 (도 13H-13J) 에 촬영하였고, 표준 조직 배양물 (E/H), 및 콜라겐 코팅된 플레이트 (F/I) 와 비교하여 DTM (도 13G/13J) 에서 건세포 세포 모폴로지 상 편차를 나타냈다. 스케일 막대 = 200 μm; 상이한 표면 상에 플레이팅된 세포의 모폴로지 및/또는 증식 차이를 또한 도시한다. 조직 배양 플레이트는 콜라겐 또는 DTM으로 코팅된 미처리 (대조군, "TC 처리") 상태로 남겨졌다. 일차 건세포(ZenBio #TEN-F)를 20,000 세포/웰로 플레이팅했다. 살아 있는 세포 이미지는 3 일에 걸쳐 타임 랩스 비디오에 의해 촬영되었고 상이한 표면 처리 사이에 현저하게 상이한 세포 모폴로지 및 증식 속도를 나타낸다. 살아 있는 세포 이미징의 정지 이미지는 48 시간에 촬영되었고 표준 조직 배양물 (도 13E, 13H) 또는 콜라겐 코팅된 플레이트 (도 13F, 13I)와 비교하여 DTM (도 13G, 13J) 에서 건세포가 더욱 빠르게 부착, 증식하고 병소 부착이 증가되며 더 많은 천연 유사 세포 모폴로지가 있음을 나타낸다.
도 14A-C는 DTM의 외과적 적용의 이미지를 도시한다. DTM은 퍼티 또는 주사 가능 용액으로 형성될 수 있다. 이 경우에 퍼티는 DTM을 고정하기 위해 외과적으로 부착되고 극상근 및 대결절에 놓였다. (도 14A) 극상근의 초기 회전근개 파열 ; (도 14B) 초기 파열 6 주 후 극상근 아래에 배치된 DTM; (도 14C) 초기 파열의 봉합, 대결절에 극상근 봉합사-앵커링; (도 14D) 단지 봉합에 대한 HBQ (도 14E) 및 봉합된 DTM, 골건 접합부에서 뼈 (적색) 및 연골 (청색) 조직 형성을 나타냄; (도 14F) 단지 봉합을 위한 힘줄 중간에 대한 H&E (도 14G) 및 봉합된 DTM , DTM 처리로 힘줄 세포성의 증가를 나타냄. 스케일 막대 = 100 μm
도 15는 두 가공 단계에 걸쳐 넷의 상이한 공여자로부터 네 가지 샘플에 걸친 정규화된 TGFb 함량을 도시한다. 각 공여자에 대해, 첫 번째 열은 천연 힘줄 중의 TGFb의 양을 나타내고, 두 번째 열은 탈세포화된 힘줄 중의 TGFb의 양을 나타내고, 세 번째 열은 소화된 힘줄 중의 TGFb의 양을 나타낸다.
도 16A-16L은 천연 슬개골 및 아킬레스건이 유사한 생활성 가능성을 갖는다는 것을 도시한다. 아킬레스건과 슬개건은 힘줄의 근위부, 중앙/중간 및 원위부로 구성된 1/3 섹션으로 분할되었다. 천연 힘줄의 총 단백질은 BCA 단백질 정량화 키트(Thermo Scientific)를 사용하여 측정되었다. TGF-β는 TGF-β 자기 비드 패널(Millipore Sigma, #TGFBMAG-64K-03)을 사용하여 측정하였다. (도 16A) 천연 아킬레스건과 슬개건 사이의 총 단백질 함량을 분석한 결과 힘줄 유형 간에 유의한 차이가 발견되지 않았다(n=10). (도 16B-C) 아킬레스건과 슬개건은 근위부, 중간부, 원위부 사이의 총 단백질 함량에 유의성이 없었다. (도 16J)는 (도 16A)-(도 16C)의 해당 데이터에 대한 통계 분석을 나타낸다. (도 16D-16F) 아킬레스건 및 슬개골 데이터를 결합하여 근위부, 중간부, 원위부 사이의 TGFβ 함량 변화를 분석하였다(n=10). 영역 간 TGFβ 함량에서 통계적 차이는 발견되지 않았다. (도 16K)는 (도 16D)-(도 16F)의 해당 데이터에 대한 통계 분석을 나타낸다. (도 16G) TGFβ1(p=0.0137)(도 16H) 및 TGFβ2(p=0.0283)는 슬개건에 비해 아킬레스건에서 유의하게 낮았으나(도 16I) TGFβ3에서는 힘줄 간의 차이가 발견되지 않았다. (도 16L)은 (도 16G)-(도 16I)의 해당 데이터에 대한 통계 분석을 나타낸다.
도 17A-17F는 DNAse 처리가 힘줄 조직을 효과적으로 탈세포화한다는 것을 도시한다. 슬개건과 아킬레스건은 1시간에 걸쳐 다양한 농도의 DNAse(10U, 50U 및 100U)를 사용하여 탈세포화되었다(도 17A). 1X PBS는 탈세포화되지 않은 대조군으로 사용되었다. 이 데이터는 50U 만큼의 작은 DNAse가 조직 탈세포화에 효과적임을 나타낸다. (도 17B) 50U의 DNAse를 전통적인 세제인 1% SDS 및 0.1% EDTA와 비교했다. DNAse 50U는 0.5시간, 1시간 및 2시간에서 테스트되었으며 표준 SDS 및 EDTA 프로토콜은 24시간 탈세포화를 요구한다. 모든 값은 비탈세포화에 대해 정규화되었다. Tukey의 HSD 다중 비교 사후 테스트는 DNAse 대 SDS 및 EDTA에 의한 DNAse 처리 또는 탈세포화의 다른 시간 사이에 큰 차이가 없음을 나타낸다. 세포 핵을 식별하기 위해 DAPI로 염색된 (도 17C) 천연 힘줄 또는 (D) DTM 탈세포화의 조직학적 절편, 눈금 막대 = 100 μm; 천연 힘줄의 DAPI(4배 확대). (도 17D) 2시간 동안 50U DNAse에 의한 탈세포화된 힘줄의 DAPI(4X 배율). (도 17E)는 (도 17A)-(도 17D)의 해당 데이터에 대한 통계 분석을 나타낸다. (도 17F) DNA 함량은 DTM 처리 기술 또는 표준 세제 방법 1% SDS 또는 0.1% EDTA를 사용하여 탈세포화 후 측정하고 미처리 PBS 대조군 샘플(n=2)에 대해 정규화하였다.
도 18은 여과 유무에 따른 DTM의 콜라게네이스 활성을 나타낸다.
도 19A-19D는 효소 분해가 TGFβ 생활성을 유지함을 도시한다. (도 19E)는 (도 19A)-(도 19D)의 해당 데이터에 대한 통계 분석을 나타낸다.
도 20A-20B는 남성과 여성 사이에 발견된 통계적으로 유의미한 차이가 없음을 도시한다. (도 20A)는 총 단백질 함량에 대한 공여자 풀 인구 통계를 예시하고, (도 20B)는 남성과 여성, 그리고 아킬레스건과 슬개건 사이의 총 단백질 함량을 도시한다. 남성과 여성의 아킬레스건 및 슬개건 사이의 총 단백질 함량에서 통계적 차이는 발견되지 않았다.
도 21A-21C는 남성과 여성 힘줄에서 (도 21A) TGF-β1, (도 21B) TGF-β2 및 (도 21C) TGF-β3의 농도를 도시한다. (도 20D)는 도 20 및 도 20 및 도 21A-21C의 대응하는 데이터에 대한 통계 분석을 도시한다.
도 22는 DTM을 사용하거나 사용하지 않고 극상근 힘줄 파열을 봉합한 토끼 힘줄의 평균 파괴력을 도시한다.
도 23은 힘줄 절개부의 개략도를 도시한다.
도 24 힘줄 줄기 세포 마커의 유전자 발현을 결정하기 위해 qRT-PCR을 ADSC(n=3) 및 건세포(n=3) 모두에서 수행하여 Scleraxis 및 Tenomodulin 발현을 확인했으며 두 세포 유형 모두 2일에 Tnmd의 상향 조절을 발현함, 7일째에 다시 정상화되고(도 24A-24B), 2일째에 두 세포 유형 모두에서 Scx의 정상화된 수준을 나타내고, 7일째에 두 세포 유형 모두에서 상당한 상향조절을 보였다(도 24C-24D).
도 25는 복소 탄성률 (Pa) 대 진동 응력(Pa)을 도시한다.
도 26은 복소 탄성률 (Pa) 대 진동 응력(Pa) - 모든 샘플을 도시한다.
도 27은 복소 탄성률 (Pa) 대 진동 응력(Pa) - 토끼 샘플만을 도시한다.
도 28은 위상각(°) 대 진동 응력(Pa)을 도시한다.
도 29는 저장 탄성률(Pa) 및 손실 탄성률(Pa) 대 각 주파수(rad/s) - 샘플 A를 도시한다.
도 30는 저장 탄성률(Pa) 및 손실 탄성률(Pa) 대 각 주파수(rad/s) - 샘플 B를 도시한다.
도 31는 저장 탄성률(Pa) 및 손실 탄성률(Pa) 대 각 주파수(rad/s) - 샘플 C를 도시한다.
도 32는 저장 탄성률(Pa) 및 손실 탄성률(Pa) 대 각 주파수(rad/s) - 샘플 D를 도시한다.
도 33는 저장 탄성률(Pa) 및 손실 탄성률(Pa) 대 각 주파수(rad/s) - 샘플 E를 도시한다.
상세한 설명
회전근개 파열은 어깨의 기능을 현저하게 감소시키고 심한 통증을 유발할 수 있는 일반적인 연조직 부상이다. 많은 경우 통증을 해결하고 관절 기능을 개선하기 위해 회전근개 수술 봉합을 시행한다. 수술 기술의 발전에도 불구하고 회전근개 봉합술(RCR)이 항상 예상만큼 빨리 치유되지는 않는다. 이것은 일부 연구에서 실패율이 50%를 초과하는 모든 회전근개 파열의 최대 40%를 차지하는 대량 및/또는 만성 파열의 봉합에 특히 해당된다. 실패의 대부분은 힘줄의 열악한 치유 능력과 부착부의 천연 조직학적 해부학적 재생 실패의 결과로 뼈-힘줄 경계면에서 발생한다. 동종이식편은 RCR에서 상업적으로 사용할 수 있지만 임상적 사용은 조직 재생을 자극하지 않고 재파열 사례에서 최대 67%의 구조적 실패와 관련되기 때문에 제한적이다. 새로운 조직 공학 전략은 큰 가능성을 가지고 개발되고 있지만 대부분은 임상 전환을 복잡하게 만드는 세포 또는 성장 인자의 추가를 포함한다. 결과적으로, RCR에서 치유를 개선할 수 있는 쉽게 번역할 수 있는 외과적 증강 접근법에 대한 상당한 미충족 임상적 요구가 있다. 이 연구에서는 새로운 처리 기술을 구현하여 TGFβ 생체 활성을 보존하는 탈세포화 힘줄 기질 (DTM) 퍼티의 개발에 대해 설명한다. 시험관 내에서 DTM은 힘줄-특이적 전사 인자인 Scleraxis 및 Tenomodulin의 발현을 증가시켜 건세포 및 지방 유래 줄기 세포의 증식을 촉진한다. 만성 회전근개 파열의 토끼 모델에 배치될 때 DTM은 조직학적 조직 봉합의 세포질을 증가시키고 정상적인 섬유 연골 부착부와 더 유사한 뼈-힘줄 경계면에서의 석회화를 촉진하여 조직학적 조직 봉합을 개선한다. 종합하면, 이러한 데이터는 조작된 DTM 퍼티가 힘줄-뼈 경계면에서 치유를 개선하기 위한 유망한 전환 전략을 제시하는 재생 촉진 생체 활성을 유지함을 나타낸다.
힘줄 및 인대 부상은 매년 약 1,700만 명의 미국인에게 영향을 미치며 근골격계 부상의 두 번째 주요 원인이다. 회전근개, 팔뚝 신근, 아킬레스건 및 슬개건을 포함하여 특정 힘줄이 더 높은 부상률을 보이는 경향이 있는 것으로 밝혀졌다. 2016년에는 미국에서 460,000건이 넘는 회전근개 수술이 시행되었으며 이는 두 번째로 가장 많이 시행된 정형외과 연조직 봉합 시술이었다. 불행하게도, 수술 기술과 재활 프로토콜을 개선하기 위한 상당한 임상적 진전에도 불구하고, 회전근개 봉합술(RCR)의 구조적 결과는 여전히 통계적으로 열악하다. 표준 회전근개 봉합 후 40%만큼 높은 재파열률이 기록되었고 대량 파열에서 실패율이 73-94%로 증가했다. 파열 크기가 증가함에 따라 재파열률이 높아지는 것 외에도 환자 연령이 증가함에 따라 봉합 실패의 발생률도 증가한다.
힘줄-뼈 접합부에서 효과적인 봉합을 달성하는 것이 RCR에서 중요한데 수술 후 실패의 대부분이 발생하는 곳이기 때문이다. 회전근개에서 뼈 내로의 힘줄 삽입은 섬유연골 부착부를 통해 발생하는데 섬유연골 부착부에서는 힘줄에서 섬유 연골로 석회화된 섬유 연골에서 뼈로 점진적인 조직학적 전이가 있다. RCR 후 정상적인 부착부는 재생되지 않으며, 오히려 석회화된 연골 영역이 뚜렷하게 결여된 기계적으로 약한 섬유혈관 흉터가 힘줄-뼈 접합부에서 관찰된다. 적절한 힘줄 전구 세포의 부족, 섬유 연골 부착부의 낮은 혈관성, 재생을 촉진할 수 있는 성장 인자의 제한된 생체이용가능성을 포함하는 많은 중요한 요인이 힘줄의 열악한 재생 능력에 기여할 수 있다. RCR의 열악한 임상 결과를 감안할 때, 더 강한 힘줄을 재생하기 위해 현재 정형외과 분야에서 생물학적 치유를 자극하고 부착부 구조를 재구성하는 것이 주요 과제이다.
흥미롭게도, 성인 힘줄 조직이 제대로 치유되지 않는 반면, 신생아 힘줄은 "무흉터 치유"라고 하는 과정에서 부상 후 성공적으로 재생될 수 있다. 계보 추적으로 신생아 힘줄 재생을 가능하게 하는 주요 세포 집단으로서 Scleraxis(Scx) 양성 힘줄 전구 세포를 확인했다. 성인 조직에서 이러한 Scx-계보 건세포는 부상에 모집되지 않으며 부상 후 3일 동안 매우 최소한의 세포 증식이 있다. 건세포 모집 및 후속 기능적 힘줄 재생의 조절은 신생아 조직에서 Transforming Growth Factor-β (TGFβ) 신호 전달에 의해 직접 조절되는 것으로 보인다.
탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 퍼티는 천연 TGFβ 생체 활성을 보존하고 세포 증식을 촉진하기 위해 새로운 효소 처리 기술을 활용하여 개발되었다. 탈세포화 기질은 구조적 및 생물학적 치유를 지원하기 위해 생체모방 및 생활성 기질을 제공하기 위해 뼈 재생 전략에 광범위하게 활용되었다. 힘줄 및 진피 동종이식은 RCR을 지원하기 위해 상업적으로이용 가능하지만 임상 결과에 대한 불분명한 영향과 결절에서 동종이식으로의 뼈 내성장의 제한된 증거의 조합으로 인해 사용이 제한되었다. 조작된 탈세포화 기질은 조직의 생활성을 보존하고 외과적 적용을 위한 임상적으로 더 유용한 형성 인자를 생성함으로써 동종 이식 기술을 개선할 수 있는 기회를 제공한다. 특정 이론에 얽매이지 않고 TGFβ가 보존된 새로운 탈세포화된 힘줄 매트릭스 퍼티가 토끼 만성 회전근개 파열 모델에서 RCR 후 힘줄-뼈 치유를 향상시킬 것이라는 가설이 있다.
달리 정의되지 않는 한, 여기에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 숙련자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 언급된 모든 특허 및 간행물은 그 전체가 참고로 포함된다.
정의
본원에 사용된 용어 "공동 투여", "공동 투여하는", "조합으로 투여된", "조합으로 투여하는", "동시(simultaneous)" 및 "동시(concurrent)"는 둘 이상의 활성 약학적 성분의 투여를 포함한다. 공동 투여는 별개의 조성물로 동시 투여, 별개의 조성물로 상이한 시간에 투여, 또는 둘 이상의 활성 약제학적 성분이 존재하는 조성물로 투여를 포함한다. 별개의 조성물로 동시 투여 및 두 제제가 존재하는 조성물로 투여하는 것이 바람직하다.
용어 "생체내"는 대상의 신체에서 일어나는 사건을 지칭한다.
용어 "생체외"는 대상의 신체의 외부에서 일어나는 사건을 지칭한다. 생체외 분석은 살아 있거나 죽은 세포가 사용되는 세포 기반 분석을 포함하고 온전한 세포가 사용되지 않는 무세포 분석을 포함할 수도 있다.
본원에 사용된 "치료", "치료하는", "완화하는" 및 "개선하는"은 상호교환적으로 사용된다. 이들 용어는 치료적 이점 및/또는 예방적 이점을 포함하지만 이에 제한되지 않는 유익한 또는 원하는 결과를 얻기 위한 접근 방식을 의미한다. 치료적 이점은 치료되는 기저 장애의 근절 또는 개선을 의미한다. 또한, 환자가 여전히 기저 장애를 앓고 있을 수 있음에도 불구하고 환자에게서 개선이 관찰되도록 기저 장애와 관련된 하나 이상의 생리학적 증상의 근절 또는 개선으로 치료적 이점이 달성된다.
용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 용어는 질병 치료를 포함하지만 이에 제한되지 않는 의도적 적용에 영향을 미치기에 충분한 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 화합물의 조합의 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 의도된 적용(생체외 또는 생체내), 또는 대상 및 치료되는 질병 상태(예를 들어, 대상의 체중, 연령 및 성별), 질병 상태의 중증도, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있는 투여 방식 등에 따라 달라질 수 있다. 용어는 또한 표적 세포에서 특정 반응을 유도할 용량에 적용된다 (예를 들어, 혈소판 부착 및/또는 세포 이동의 감소). 특정 용량은 선택된 특정 화합물, 따라야 하는 투여 요법, 화합물이 다른 화합물과 조합으로 투여되는지 여부, 투여 시기, 투여되는 조직, 및 화합물이 운반되는 물리적 전달 시스템에 따라 달라질 것이다.
본원에서 사용된 용어 "치료 효과"는 치료 이점 및/또는 예방 이점을 포함한다. 예방 효과는 질환 또는 병태의 출현 지연 또는 제거, 질환 또는 병태의 증상 개시 지연 또는 제거, 질환 또는 병태의 진행 지연, 정지 또는 역전, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본원에서 사용된, "공여자"는 힘줄 결합 조직에 대한 포유동물 공급원을 지칭한다. 공여자는 사체 힘줄 조직을 포함하여, 인간 또는 다른 동물 출처일 수 있다. "동종" 공여자 조직은 동일한 종의 비유전적으로 동일한 구성원으로부터의 공여자 조직이며, 예를 들어, 한 인간 대상으로부터 수확한 다음, 생성된 조성물을 다른 인간 대상에게 투여한다. 힘줄 결합 조직은 탈세포화된 힘줄 기질 조성물을 생성하기 위한 본원의 방법에서 사용하기 위해 다른 종의 공여자로부터 수확될 수 있으며; 그러한 조성물은 "이종이식(xenographic)" 탈세포화된 힘줄 기질 조성물이다. 바람직한 이종이식 원천은 돼재, 말, 소, 양, 개 및 설치류이다. 원천에 관계 없이, 이종이식 힘줄 조직은 사체 공여자의 신선하거나 신선하게 냉동된 조질일 수 있다. 바람직한 동종이식 원천은 아킬레스건 및 슬개건이다. 이러한 힘줄은 쉽게 구할 수 있으며 크기가 비교적 크다. 이들은 또한 찢어지거나 손상된 인대 및 힘줄의 재건을 위한 자가이식 및 동종이식 적용에 널리 사용된다.
본원에서 사용된 "탈세포화"는 힘줄 결합 조직의 세포 성분의 일반적인 (80% 이상), 거의 완전한 (95% 이상), 또는 본질적으로 완전한 (99% 이상) 제거를 지칭한다.
본원에서 사용된, "기질 메탈로프로테네이스"는 기질 메탈로프로테네이스(MMP) 계열의 단백질을 지칭한다. 기질 메탈로프로테네이스(MMP)는 모든 세포외 기질(ECM) 성분을 집합적으로 분해할 수 있는 아연 의존성 엔도프로테네이스의 큰 계열을 포함한다. 용어는 각각의 MMP 계열 구성원의 아포- 및 활성화된 형태를 모두 포함한다. 용어는 MMP-2, MMP-9, MMP-14, 이의 동족체, 유도체 및 단편을 포함한다. Fanjul-Fernandez et al.은 리뷰 논문, Biochim. Biophy. Acta 1803:3-19 (2010)에서 포유류 MMP 계열을 요약한다.
IGF-1 (인슐린 유사 성장 인자 1, 또는 소마토메딘 C), TGF-β (전환 성장 인자 베타), PDGF (혈소판 유래 성장 인자), VEGF (혈관 투과 인자 (VPF)로도 알려진 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)), bFGF (염기성 섬유모세포 성장 인자, 도는 섬유모세포 성장 인자 2 (FGF2)), GDF-5 (성장 분화 인자 5), GDF-6 (성장 분화 인자 6), GDF-7 (성장 분화 인자 7), HGF (간세포 성장 인자 또는 산란 인자)를 포함하는 다양한 성장 인자가 알려져 있다. 이론에 얽매이지 않고, 성장 인자의 상기 비제한적인 목록은 힘줄의 세포외 기질에서 발견되는 것으로 당업계에 공지되어 있다.
어구 "약제학적으로 허용 가능한"은 건전한 의학적 판단 내에서, 합리적인 이익/위험 비율에 따라, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이, 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 제형을 지칭한다.
"약제학적으로 허용 가능한 담체" 또는 "약제학적으로 허용 가능한 부형제"는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 및 불활성 성분을 포함하는 것으로 의도된다. 활성 약제학적 성분을 위한 그러한 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 약제학적으로 허용 가능한 부형제의 사용은 당업계에 잘 알려져 있다. 임의의 통상적인 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 약제학적으로 허용 가능한 부형제가 DTM 성분과 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 본 발명의 치료적 조성물에서 이의 사용이 고려된다. 다른 약물과 같은 추가적인 활성 약제학적 성분이 또한 기재된 조성물 및 방법에 포함될 수 있다.
범위가 예를 들어 분자량 또는 화학식과 같은 물리적 또는 화학적 특성을 기재하기 위해 본원에서 사용될 때, 범위 및 그 안의 특정 구체예의 모든 조합 및 하위조합이 포함되도록 의도된다. 숫자 또는 수치 범위를 언급할 때 용어 "약"의 사용은 언급된 숫자 또는 수치 범위가 실험적 가변성 내(또는 통계적 실험 오차 내)의 근사치이므로, 숫자 또는 수치 범위가 변할 수 있음을 의미한다. 변동은 언급된 숫자 또는 수치 범위의 일반적으로 0% 내지 15%, 바람직하게는 0% 내지 10%, 더욱 바람직하게는 0% 내지 5%이다. 용어 "포함하는(comprising)" (및 "포함하다(comprise)" 또는 "포함하다(comprises)" 또는 "갖는(having)" 또는 "포함하는(including)"과 같은 관련 용어)는 구체예, 예를 들어, 기재된 특징으로 "구성되는" 또는 "본질적으로 구성되는" 임의의 물질의 조성물, 방법 또는 공정의 구체예를 포함한다.
둘 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드의 맥락에서 용어 "서열 동일성", "퍼센트 동일성" 및 "서열 퍼센트 동일성"은, 임의의 보전적 아미노산 치환을 서열 동일성의 일부로 고려하지 않고, 최대 일치를 위해 (필요한 경우 갭을 도입하여) 비교하고 정렬할 때 동일하거나 특정 백분율의 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기를 갖는 둘 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 퍼센트 동일성은 서열 비교 소프트웨어 또는 알고리즘을 사용하여 또는 육안 검사에 의해 측정될 수 있다. 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열의 정렬을 얻기 위해 사용될 수 있는 다양한 알고리즘 및 소프트웨어가 당업계에 공지되어 있다. 퍼센트 서열 동일성을 결정하기 위한 적합한 프로그램은 예를 들어 미국 정부의 생명공학 정보 센터 BLAST 웹 사이트로부터 입수 가능한 BLAST 프로그램 세트를 포함한다. 두 서열 간의 비교는 BLASTN 또는 BLASTP 알고리즘을 사용하여 수행될 수 있다. BLASTN은 핵산 서열 비교에 사용되는 한편, BLASTP는 아미노산 서열 비교에 사용된다. ALIGN, ALIGN-2 (Genentech, South San Francisco, California) 또는 DNASTAR로부터 입수 가능한 MegAlign은 서열 정렬에 사용될 수 있는추가의 공개적으로 이용 가능한 소프트웨어 프로그램이다. 당업자는 특정 정렬 소프트웨어에 의해 최대 정렬을 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 특정 구체예에서, 정렬 소프트웨어의 디폴트 파라미터가 사용된다.
의심의 여지를 피하기 위해, 본 발명의 특정 양태, 구체예 또는 실시예와 관련하여 설명된 특정 특성(예를 들어 정수, 특징, 값, 용도, 질환, 화학식, 화합물 또는 그룹)은 호환되지 않는 한 본원에 설명된 임의의 다른 양태, 구체예 또는 실시예에 적용 가능한 것으로 이해하도록 의도된다. 따라서 그러한 특성은 본원에 정의된 정의, 청구범위 또는 구체예 중 임의의 것과 관련하여 적절한 경우에 사용될 수 있다. 본 명세서(임의의 첨부된 청구범위, 요약서 및 도면 포함)에 개시된 모든 특성 및/또는 그렇게 공개된 임의의 방법 또는 공정의 모든 단계는, 특성 및/또는 단계 중 적어도 일부가 상호 배타적인 조합을 제외하고, 임의의 조합에서 조합될 수 있다. 본 발명은 임의의 개시된 구체예의 임의의 세부사항으로 제한되지 않는다. 본 발명은 본 명세서(임의의 첨부된 청구범위, 요약서 및 도면 포함)에 개시된 특성 중 임의의 신규한 것, 또는 신규한 조합, 또는 그렇게 개시된 임의의 방법 또는 공정의 단계 중 임의의 신규한 것, 또는 임의의 신규한 조합으로 확장된다.
탈세포화된 힘줄 기질 제조 방법
본 개시내용의 구체예의 한 목표는 온화하고 특이적인 탈세포화 및 소화 프로토콜을 개발함으로써 기질에서 성장 인자, 특히 TGF-β를 보존하는 DTM을 제조하는 것이다. 전통적으로 세제는 가혹하고 단백질 및 세포 물질을 제거하거나 변성시킬 수 있다.
탈세포화된 기질에 대한 일반적인 소화 기술은 모든 단백질을 작은 폴리펩타이드로 무차별적으로 절단하는 일반적인 프로테네이스, 가장 일반적으로 펩신을 사용한다. 이러한 적용에서 콜라겐의 절단에 특이적인 효소는 차후 자체 조립 펩타이드를 형성할 수 있는 더 작은 부분으로 힘줄을 분해하기 위해 사용된다. 주로 콜라겐 I형인 콜라겐은 힘줄의 구조적 골격을 형성한다. 콜라겐을 특별히 절단함으로써 힘줄을 소화시키지만, 부착된 성장 인자의 생활성은 보존된다.
콜라게네이스는 힘줄에서 일반적으로 발견되는 삼중 나선형 천연 콜라겐 원섬유를 소화시키는 엔도펩티데이스이다. 콜라게네이스는 콜라겐에서 높은 빈도로 발견되는 Pro-X-Gly-Pro 서열에서 중성 아미노산(X)과 글라이신 사이의 결합을 절단한다. 클로스트리듐 히스톨리티쿰(Clostridium histolyticum)에 의해 만들어진 것과 같은 박테리아 콜라게네이스는 거의 모든 콜라겐 유형을 공격하고 수불용성 천연 콜라겐 및 수용성 변겅 콜라겐을 모두 분해할 수 있다. 삼중 나선에서 다중 절단을 통해 천연의 삼중 나선 I형, II형 및 III형 콜라겐을 소화시키는 클로스트리듐 콜라게네이스의 능력은 주요한 구별 요인이다. 클로스트리듐 콜라게네이스는 활성 부위의 중심에 아연 함유 모티프를 공유하는 프로테이스 계열인 비정상적으로 큰 메탈로프로테이스를 나타낸다 (Gonzales and Robert-Baudouy 1996).
기질 메탈로프로테네이스(MMP)는 또한 콜라겐 섬유를 매우 특이적인 서열에서 절단하는 능력을 갖는다. 간질 콜라겐 I형, II형 및 III형은 삼중 나선 구조로 인해 단백질 분해 공격에 대한 저항성이 높지만, 특정 부위에서 MMP 콜라게네이스에 의해 절단될 수 있다. MMP-2 및 -9는 구조적 수준에서 밀접하게 관련되며 콜라겐 I형 및 III형에 대한 콜라게네이스 활성을 나타내어, 고전적인 3/4 및 1/4 단편을 생성한다. MMP-1, MMP-8, MMP-13, MT-MMP는 또한 일부 제한된 콜라게네이스 활성을 갖는다.
한 양태에서, 본 발명은 기질 메탈로프로테네이스(MMP) 소화된 힘줄 조직, 항균제, 및 멸균 수성 담체 용액을 포함하는 조성물 제조 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 기질 메탈로프로테네이스(MMP)는 MMP-2, MMP-9, MMP-14, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 양태에서, MMP는 구성적으로 활성이 되도록 조작된다. 당업자는 다른 MMP가 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 콜라게네이스, 젤라티네이스, 스트로멜리신, 및 막형 MMP(MT-MMP)가 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 콜라게네이스는 힘줄 탈세포화 및/또는 탈세포화된 힘줄 소화에 사용될 수 있다. 본원에 설명된 바와 같이, 콜라게네이스는 삼중 나선 원섬유 콜라겐을 독특한 3/4 및 1/4 단편으로 분해할 수 있다. 이들 콜라겐은 뼈, 연골 및 상아질의 주요 성분이다. 콜라게네이스는 콜라게네이스 1형, 콜라게네이스 2형, 콜라게네이스 3형, 콜라게네이스 8형, 콜라게네이스 13형, 콜라게네이스 14형 및 콜라게네이스 18형을 포함한다. 사용될 수 있는 하나 이상의 MMP의 비제한적 예는 MMP1 (간질 콜라게네이스, CLG, CLGN), MMP2 (젤라티네이스-A, 72 kDa 젤라티네이스), MMP3 (스트로멜리신 1, CHDS6, MMP-3, SL-1, STMY, STMY1, STR1), MMP7 (마트릴리신, PUMP 1, MMP-7, MPSL1, PUMP-1), MMP8 (호중구 콜라게네이스, CLG1, HNC, MMP-8, PMNL-CL), MMP9 (젤라티네이스-B, 92 kDa 젤라티네이스, CLG4B, GELB, MANDP2, MMP-9), MMP10 (스트로멜리신 2, SL-2, STMY2), MMP11 (스트로멜리신 3, SL-3, ST3, STMY3), MMP12 (대식세포 메탈로엘라스테이스, HME, ME, MME, MMP-12), MMP13 (콜라게네이스 3, CLG3, MANDP1, MMP-13), MMP14 (MT1-MMP, MMP-14, MMP-X1, MT-MMP, MT-MMP 1, MT1-MMP, MT1MMP, MTMMP1, WNCHRS), MMP15 (MT2-MMP, MT2-MMP, MTMMP2, SMCP-2, MMP-15, MT2MMP), MMP16 (MT3-MMP, C8orf57, MMP-X2, MT-MMP2, MT-MMP3, MT3-MMP), MMP17 (MT4-MMP, MT4-MMP, MMP-17, MT4MMP, MTMMP4), MMP18 (콜라게네이스 4, xcol4, 제노푸스 콜라게네이스), MMP19 (RASI-1, 때로 스트로멜리신-4로 지칭됨, MMP18, RASI-1, CODA), MMP20 (에나멜리신, AI2A2, MMP-20), MMP21 (X-MMP, MMP-21, HTX7), MMP23A (CA-MMP), MMP23B (MIFR, MIFR-1, MMP22), MMP24 (MT5-MMP, MMP-24, MMP25, MT-MMP 5, MT-MMP5, MT5-MMP, MT5MMP, MTMMP5), MMP25 (MT6-MMP, MMP-25, MMP20, MMP20A, MMPL1, MT-MMP 6, MT-MMP6, MT6-MMP, MT6MMP, MTMMP6), MMP26 (마트릴리신-2, 엔도메테이스), MMP27(MMP-22, C-MMP, MMP-27), 및 MMP28 (엘립신, EPILYSIN, MM28, MMP-25, MMP-28)을 포함한다.
탈세포화된 힘줄을 효소적으로 소화시키기 위해 사용되는 콜라게네이스의 농도는 사용되는 특정 콜라게네이스에 따라 달라질 수 있다. 특정 구체예에서 콜라게네이스 1형은 탈세포화된 힘줄을 효소적으로 소화시키기 위해 사용될 수 있다. 특정 구체예에서 콜라게네이스 3형은 탈세포화된 힘줄을 효소적으로 소화시키기 위해 사용될 수 있다. 탈세포화된 힘줄을 효소적으로 소화시키기 위해 사용되는 콜라게네이스의 농도는 약 0.1 밀리그램(mg) / 밀리리터(mL), 약 0.2 mg/mL, 약 0.3 mg/mL, 약 0.4 mg/mL, 약 0.5 mg/mL, 약 0.6 mg/mL, 약 0.7 mg/mL, 약 0.8 mg/mL, 약 0.9 mg/mL, 약 1.0 mg/mL, 약 1.1 mg/mL, 약 1.2 mg/mL, 약 1.3 mg/mL, 약 1.4 mg/mL, 약 1.5 mg/mL, 약 1.6 mg/mL, 약 1.7 mg/mL, 약 1.8 mg/mL, 약 1.9 mg/mL, 약 2.0 mg/mL, 약 2.1 mg/mL, 약 2.2 mg/mL, 약 2.3 mg/mL, 약 2.4 mg/mL, 약 2.5 mg/mL, 약 2.6 mg/mL, 약 2.7 mg/mL, 약 2.8 mg/mL, 약 2.9 mg/mL, 약 3.0 mg/mL, 약 3.1 mg/mL, 약 3.2 mg/mL, 약 3.3 mg/mL, 약 3.4 mg/mL, 약 3.5 mg/mL, 약 3.6 mg/mL, 약 3.7 mg/mL, 약 3.8 mg/mL, 약 3.9 mg/mL, 약 4.0 mg/mL, 약 5.0 mg/mL, 약 6.0 mg/mL, 약 7.0 mg/mL, 약 8.0 mg/mL, 약 9.0 mg/mL, 또는 약 10.0 mg/mL일 수 있다. 특정 구체예에서, 탈세포화된 힘줄을 효소적으로 소화시키기 위해 사용되는 콜라게네이스의 농도는 약 1.0 mg/mL이다. 다른 구체예에서, 탈세포화된 힘줄을 효소적으로 소화시키기 위해 사용되는 콜라게네이스의 농도는 약 2.0 mg/mL이다.
항균제는 비경구 제제에서 사용하기에 적합한 물질이며, 예를 들어, 벤질 알코올, 클로르부탄올, 또는 2-에톡시에탄올과 같은 알킬 알코올 또는 아릴 알코올이다. 아미노 아릴 산 에스터가 또한 적합하며, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 또는 부틸 파라벤 및 이들의 조합이다. 알킬 산 및 아릴 산이 또한 적합할 수 있으며, 예를 들어, 벤조산 또는 소르브산; 바이구아니드, 예를 들어, 클로르헥시딘 또는 페놀, 예를 들어 페놀 또는 3-크레졸이다. 일부 구체예에서, 화학적으로 상용성인 항균제의 조합이 사용된다.
한 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 제공하고 여기서 DTM 조성물은 (i) 힘줄 조직 표본 세절; (ii) 세절된 힘줄 조직 표본 탈세포화; (iii) 소화; 및 (iv) 동결건조 단계를 포함하는 공정에 의해 제조된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(decellularized tendon matrix, DTM) 조성물을 제공하고 여기서 DTM 조성물은 다음 단계를 포함하는 공정에 의해 제조된다: (i) 힘줄 조직 표본을 세절; (ii) 세절된 힘줄 조직 표본을 탈세포화; (iii) 분쇄; (iv) 소화; (v) 정지 및 중화; (vi) 세척; 및, (vii) 동결건조.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 전에 힘줄 기질은 중량으로 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%의 단리된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 전에, 힘줄 기질은 중량으로 약 50% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 55%, 60% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 65%, 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 75%, 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 85%, 또는 약 85% 내지 약 90%의 단리된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 전에, 힘줄 기질은 중량으로 약 90% 미만, 약 85% 미만, 약 80% 미만, 약 75% 미만, 약 70% 미만, 약 65% 미만, 약 60% 미만, 약 55% 미만, 약 50% 미만, 약 45% 미만, 약 40% 미만, 약 35% 미만, 약 30% 미만, 약 25% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 또는 약 10% 미만의 단리된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 전에 힘줄 기질은 부피로 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%의 단리된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 전에, 힘줄 기질은 부피로 약 50% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 55%, 60% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 65%, 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 75%, 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 85%, 또는 약 85% 내지 약 90%의 단리된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 전에, 힘줄 기질은 부피로 약 90% 미만, 약 85% 미만, 약 80% 미만, 약 75% 미만, 약 70% 미만, 약 65% 미만, 약 60% 미만, 약 55% 미만, 약 50% 미만, 약 45% 미만, 약 40% 미만, 약 35% 미만, 약 30% 미만, 약 25% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 또는 약 10% 미만의 단리된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 후에, 힘줄 기질은 중량으로 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%의 탈세포화된, 분쇄된, 소화된, 동결건조된 및/또는 세척된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 후에, 힘줄 기질은 중량으로 약 50% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 55%, 60% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 65%, 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 75%, 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 85%, 또는 약 85% 내지 약 90%의 탈세포화된, 분쇄된, 소화된, 동결건조된 및/또는 세척된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 후에, 힘줄 기질은 중량으로 약 99% 초과, 약 95% 초과, 약 90% 초과, 약 85% 초과, 약 80% 초과, 약 75% 초과, 약 70% 초과, 약 65% 초과, 약 60% 초과, 약 55% 초과, 약 50% 초과, 약 45% 초과, 약 40% 초과, 약 35% 초과, 약 30% 초과, 약 25% 초과, 약 20% 초과, 약 15% 초과, 또는 약 10% 초과의 탈세포화된, 분쇄된, 소화된, 동결건조된 및/또는 세척된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 후에, 힘줄 기질은 부피로 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%의 탈세포화된, 분쇄된, 소화된, 동결건조된 및/또는 세척된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 후에, 힘줄 기질은 부피로 약 50% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 55%, 60% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 65%, 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 75%, 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 85%, 또는 약 85% 내지 약 90%의 탈세포화된, 분쇄된, 소화된, 동결건조된 및/또는 세척된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
일부 경우에, 탈세포화, 분쇄, 소화, 동결건조, 및/또는 세척 후에, 힘줄 기질은 부피로 약 99% 초과, 약 95% 초과, 약 90% 초과, 약 85% 초과, 약 80% 초과, 약 75% 초과, 약 70% 초과, 약 65% 초과, 약 60% 초과, 약 55% 초과, 약 50% 초과, 약 45% 초과, 약 40% 초과, 약 35% 초과, 약 30% 초과, 약 25% 초과, 약 20% 초과, 약 15% 초과, 또는 약 10% 초과의 탈세포화된, 분쇄된, 소화된, 동결건조된 및/또는 세척된 힘줄 조직의 부분으로 존재할 수 있다.
한 양태에서, 탈세포화 단계는 카오트로픽 염, 비이온성 세제, 양쪽성이온성 세제, 양이온성 세제, 음이온성 세제, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 용액에 세절된 힘줄 조직 표본을 노출시키는 것을 포함한다. 일부 양태에서, 탈세포화 단계는 하나 이상의 동결/해동 사이클을 포함한다. 일부 양태에서, 탈세포화 단계는 DNAase 및/또는 RNAase로 처리하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 탈세포화 단계는 균형염 용액, 예를 들어, 행크 균형염 용액의 인산염 완충 식염수에서의 한 번 이상의 세척을 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 세절된 힘줄 조직 표본을 초순수에서 헹군 다음 적당한 교반을 사용하면서 1% w/v 소듐 도데실 설페이트(SDS)를 포함하는 용액을 사용하여 탈세포화한다. 일부 구체예에서, 적당한 교반은 간헐적이다.
또 다른 양태에서, 세절된 힘줄 조직 표본은 이온성 세제, 비이온성 세제, 음이온성 세제, 또는 양이온성 세제 중 하나 이상을 포함하는 용액을 사용하여 탈세포화된다. 일부 양태에서, 탈세포화 용액은 카오트로픽 염을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 카오트로픽 염은 요소이다. 일부 구체예에서, 탈세포화 용액은 0.5 M 요소 내지 8 M 요소를 포함한다. 일부 구체예에서, 탈세포화 용액은 2 M 내지 5 M 요소를 포함한다. 일부 구체예에서 탈세포화 용액은 약 3 M 요소를 포함한다.
일부 양태에서, 탈세포화 용액은 계면활성제 및 카오트로픽 염을 포함한다. 일부 양태에서, 탈세포화 용액은 소포제, 예를 들어, Antifoam 204를 추가로 포함한다.
또 다른 양태에서, 공정은 세포 단백질을 침전시키는 단계를 추가로 포함하고, 공정은 세절된 힘줄 조직 표본을 농축된 코스모트로픽(cosmotropic) 용액으로 처리하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 농축된 코스모트로픽 용액은 암모늄 설페이트이다. 코스모트로픽 염석은 예를 들어 Wingfield, Curr. Protoc. Protein Sci., APPENDIX 3: Appendix-3F (2001)에 요약된 방법에 따라 수행된다.
세절은 당업계에 공지된 방법, 예를 들어, 먼저 힘줄 조직 표본으로부터 건초, 지방 및 활막 조직 제거를 사용하여 달성될 수 있다. 이후, 힘줄 조직 표본은 대략 1 내지 4 mm3 크기 조각으로 세절된 다음, 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척된다.
한 양태에서, 정지 및 중화 단계는 TAPI-0, TAPI-1, TAPI-2, 마리마스타트, 포스포라미돈, 루테올린, PMSF, 펩스타틴 A, 류펩틴, E-64, 소듐 오르토바나데이트, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 프로테이스 억제제를 포함하는 용액으로 정지 및 중화하는 것을 포함한다.
탈세포화는 탈세포화된 표본 및 대조군 표본(즉 시작 공여자 힘줄 조직의 미처리 샘플)을 절단한 다음, 헤마톡실린-에오신 염색 및 Masson-Goldner 트리크롬 염색으로 염색하여 세포 성분 및 콜라겐 섬유 구조를 각각 검출하는 것을 포함하는 당업계에 공지인 방법에 의해 모니터링될 수 있다. DNA는 탈세포화된 샘플 및 미처리 시작 샘플로부터 추출될 수 있고; 탈세포화된 샘플은 비슷한 시작 중량에 대해 회수된 DNA가 최소 4 배 더 적어야 한다. 예를 들어, Seif-Naraghi et al., Acta Biomater. 8:3695-3703 (2012)를 참조하라.
탈세포화된 조직은 혈관 수상구조의 ECM 성분을 포함하여 조직의 전부 또는 대부분의 영역의 세포외 기질(ECM) 성분을 갖는다. ECM 성분은 다음 중 임의의 하나 또는 임의의 조합을 포함할 수 있다: 피브로넥틴, 피브릴린, 라미닌, 엘라스틴, 콜라겐 계통의 구성원(예를 들어, 콜라겐 I, III 및 IV), 성장 인자 및 사이토카인을 포함하는 ECM 관련 성장 단백질, 글리코사미노글리칸, 기저 물질, 망상 섬유 및 트롬보스폰딘, 이는 기저층과 같은 정의된 구조로 조직화된 상태로 유지될 수 있다. 성공적인 탈세포화는 표준 조직학적 염식 절차를 사용하여 조직학적 섹션에서 검출 가능한 근섬유, 내피 세포, 평활근 세포 및 핵의 부재 또는 (예를 들어, 형광 분석에 의해 측정하여) 검출 가능한 DNA의 97% 이상의 제거로 정의될 수 있다. 잔여 세포 파편은 탈세포화된 조직으로부터 제거될 수 있다.
ECM의 모폴로지 및 아키텍처는 탈세포화 과정 동안 및 이후에 유지될 수 있다. 본원에서 사용된 "모폴로지(morphology)"는 ECM의 전체적인 형상을 지칭하는 한편, 본원에서 사용된 "아키텍처(architecture)"는 외부 표면, 내부 표면 및 이들 사이의 ECM을 지칭한다. ECM의 모폴로지 및 아키텍처는 시각적으로 및/또는 조직학적으로 검사될 수 있다.
하나 이상의 화합물은 예를 들어 탈세포화된 조직을 보존하기 위해, 또는 숙주로의 재세포화 또는 통합 또는 이식을 위해 탈세포화된 조직을 준비하기 위해 탈세포화된 조직 내에 또는 상에 적용될 수 있다. 그러한 화합물은 하나 이상의 성장 인자 (예를 들어, VEGF, DKK-1, FGF, BMP-1, BMP-4, SDF-1, IGF 및 HGF), 면역 조절제 (예를 들어, 사이토카인, 글루코코르티코이드, IL2R 길항제, 류코트리엔 길항제) 및/또는 응집 연쇄반응을 수정하는 인자 (예를 들어, 아스피린, 헤파린 결합 단백질 및 헤파린)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 탈세포화된 조직은 예를 들어 조사(예를 들어, UV, 감마)로 추가로 처리되어 탈세포화된 조직 상에 또는 안에 남아 있는 임의의 유형의 미생물의 존재를 감소 또는 제거할 수 있다.
일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 100 이상, 99 이상, 98 이상, 97 이상, 96 이상, 95 이상, 94 이상, 93 이상, 92 이상, 91 이상, 90% 이상을 보유하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 조성물은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 사용하여 제조되고, 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 85% 이상, 80% 이상, 75% 이상, 70% 이상, 65% 이상, 60% 이상, 55% 이상, 50% 이상, 45% 이상, 또는 40% 이상을 보유하는 것을 추가로 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 99% 이상, 98% 이상, 97% 이상, 96% 이상, 95% 이상, 94% 이상, 93% 이상, 92% 이상, 91% 이상, 90% 이상, 89% 이상, 88% 이상, 87% 이상, 86% 이상, 85% 이상, 84% 이상, 83% 이상, 82% 이상, 81% 이상, 80% 이상, 79% 이상, 78% 이상, 77% 이상, 76% 이상, 75% 이상, 74% 이상, 73% 이상, 72% 이상, 71% 이상, 70% 이상, 69% 이상, 68% 이상, 67% 이상, 66% 이상, 65% 이상, 64% 이상, 63% 이상, 62% 이상, 61% 이상, 60% 이상, 59% 이상, 58% 이상, 57% 이상, 56% 이상 55% 이상, 54% 이상, 53% 이상, 52% 이상, 51% 이상, 50% 이상, 49% 이상, 48% 이상, 47% 이상, 46% 이상, 45% 이상, 44% 이상, 43% 이상, 42% 이상, 41% 이상, 40% 이상, 39% 이상, 38% 이상, 37% 이상, 36% 이상, 35% 이상, 34% 이상, 33% 이상, 32% 이상, 31% 이상, 31% 이상, 30% 이상, 29% 이상, 28% 이상, 27% 이상, 26% 이상 25% 이상, 24% 이상, 23% 이상, 22% 이상, 21% 이상, 20% 이상, 19% 이상, 18% 이상, 17% 이상, 16% 이상, 15% 이상, 14% 이상, 13% 이상, 12% 이상, 11% 이상, 또는 10% 이상을 보유하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 탈세포화 전에 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 약 70% 내지 약 100%를 유지한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 탈세포화 전에 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 약 70% 내지 약 75%를 유지한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 탈세포화 전에 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 약 75% 내지 약 80%를 유지한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 탈세포화 전에 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 약 80% 내지 약 85%를 유지한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 탈세포화 전에 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 약 85% 내지 약 90%를 유지한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 탈세포화 전에 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 약 90% 내지 약 95%를 유지한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 탈세포화 전에 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 약 95% 내지 약 100%를 유지한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 탈세포화 전에 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 약 75% 내지 약 95%를 유지한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 탈세포화 전에 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 약 70% 내지 약 80%를 유지한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법을 사용하여 제조된 조성물은 탈세포화 전에 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 약 80% 내지 약 90%를 유지한다. 일부 구체예에서, 성장 인자는 IGF-1, TGF-β, PDGF, VEGF, bFGF, GDF-5, GDF-6, GDF-7, HGF, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 성장 인자는 적어도 TGF-β를 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 사이토카인의 90% 이상을 보유하는 것을 추가로 포함하고, 여기서 성장 인자는 IGF-1, TGF-β, PDGF, VEGF, bFGF, GDF-5, GDF-6, GDF-7, HGF, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법의 일부 양태에서, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 99% 이상, 98% 이상, 97% 이상, 96% 이상, 95% 이상, 94% 이상, 93% 이상, 92% 이상, 91% 이상, 90% 이상, 89% 이상, 88% 이상, 87% 이상, 86% 이상, 85% 이상, 84% 이상, 83% 이상, 82% 이상, 81% 이상, 80% 이상, 79% 이상, 78% 이상, 77% 이상, 76% 이상, 75% 이상, 74% 이상, 73% 이상, 72% 이상, 71% 이상, 70% 이상, 69% 이상, 68% 이상, 67% 이상, 66% 이상, 65% 이상, 64% 이상, 63% 이상, 62% 이상, 61% 이상, 60% 이상, 59% 이상, 58% 이상, 57% 이상, 56% 이상 55% 이상, 54% 이상, 53% 이상, 52% 이상, 51% 이상, 50% 이상, 49% 이상, 48% 이상, 47% 이상, 46% 이상, 45% 이상, 44% 이상, 43% 이상, 42% 이상, 41% 이상, 40% 이상, 39% 이상, 38% 이상, 37% 이상, 36% 이상, 35% 이상, 34% 이상, 33% 이상, 32% 이상, 31% 이상, 31% 이상, 30% 이상, 29% 이상, 28% 이상, 27% 이상, 26% 이상 25% 이상, 24% 이상, 23% 이상, 22% 이상, 21% 이상, 20% 이상, 19% 이상, 18% 이상, 17% 이상, 16% 이상, 15% 이상, 14% 이상, 13% 이상, 12% 이상, 11% 이상, 또는 10% 이상을 보유하는 것을 추가로 포함하고, 여기서 성장 인자는 IGF-1, TGF-β, PDGF, VEGF, bFGF, GDF-5, GDF-6, GDF-7, HGF, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 TGF- β의 90% 이상을 보유하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 TGF- β의 95% 이상을 보유하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 TGF- β의 99% 이상을 보유하는 것을 추가로 포함한다. 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법의 일부 양태에서, 방법은 천연 힘줄 중의 TGF-β의 중량으로 99% 이상, 98% 이상, 97% 이상, 96% 이상, 95% 이상, 94% 이상, 93% 이상, 92% 이상, 91% 이상, 90% 이상, 89% 이상, 88% 이상, 87% 이상, 86% 이상, 85% 이상, 84% 이상, 83% 이상, 82% 이상, 81% 이상, 80% 이상, 79% 이상, 78% 이상, 77% 이상, 76% 이상, 75% 이상, 74% 이상, 73% 이상, 72% 이상, 71% 이상, 70% 이상, 69% 이상, 68% 이상, 67% 이상, 66% 이상, 65% 이상, 64% 이상, 63% 이상, 62% 이상, 61% 이상, 60% 이상, 59% 이상, 58% 이상, 57% 이상, 56% 이상 55% 이상, 54% 이상, 53% 이상, 52% 이상, 51% 이상, 50% 이상, 49% 이상, 48% 이상, 47% 이상, 46% 이상, 45% 이상, 44% 이상, 43% 이상, 42% 이상, 41% 이상, 40% 이상, 39% 이상, 38% 이상, 37% 이상, 36% 이상, 35% 이상, 34% 이상, 33% 이상, 32% 이상, 31% 이상, 31% 이상, 30% 이상, 29% 이상, 28% 이상, 27% 이상, 26% 이상 25% 이상, 24% 이상, 23% 이상, 22% 이상, 21% 이상, 20% 이상, 19% 이상, 18% 이상, 17% 이상, 16% 이상, 15% 이상, 14% 이상, 13% 이상, 12% 이상, 11% 이상, 또는 10% 이상을 보유하는 것을 추가로 포함한다.
탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법의 일부 양태에서, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 85% 이상, 80% 이상, 75% 이상, 70% 이상, 65% 이상, 60% 이상, 55% 이상, 50% 이상, 45% 이상, 또는 40% 이상을 보유하는 것을 추가로 포함하고, 여기서 성장 인자는 IGF-1, TGF-β, PDGF, VEGF, bFGF, GDF-5, GDF-6, GDF-7, HGF, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법의 일부 양태에서, 방법은 탈세포화된 조직 또는 DTM에 존재하는 성장 인자의 농도를 500% 이상, 250% 이상, 200% 이상, 150% 이상, 100% 이상, 95% 이상, 90% 이상, 85% 이상, 80% 이상, 75% 이상, 70% 이상, 65% 이상, 60% 이상, 55% 이상, 50% 이상, 45% 이상, 40% 이상, 35% 이상, 30% 이상, 25% 이상, 20% 이상, 15% 이상, 10% 이상, 5% 이상만큼 증가시키는 것을 추가로 포함하고, 여기서 성장 인자는 IGF-1, TGF-β, PDGF, VEGF, bFGF, GDF-5, GDF-6, GDF-7, HGF, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 양태에서, 조성물은 상기 성장 인자 중 2 가지 이상, 상기 성장 인자 중 3 가지 이상, 상기 성장 인자 중 4 가지 이상, 상기 성장 인자 중 5 가지 이상, 상기 성장 인자 중 6 가지 이상, 상기 성장 인자 중 7 가지 이상을 보유한다. 한 양태에서, 조성물은 HGF 및 IGF-1, TGF-β, PDGF, VEGF, bFGF, GDF-5, GDF-6, 및 GDF-7로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성장 인자를 보유한다. 한 양태에서 조성물은 IGF-1 및 HGF를 보유한다.
한 양태에서, DTM 조성물은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 IGF-1 및 HGF의 85% 이상, 84% 이상, 83% 이상, 82% 이상, 81% 이상, 80% 이상, 79% 이상, 78% 이상, 77% 이상, 76% 이상, 75% 이상, 74% 이상, 73% 이상, 72% 이상, 71% 이상, 70% 이상, 69% 이상, 68% 이상, 67% 이상, 66% 이상, 65% 이상, 64% 이상, 63% 이상, 62% 이상, 61% 이상, 60% 이상, 59% 이상, 58% 이상, 57% 이상, 56% 이상 55% 이상, 54% 이상, 53% 이상, 52% 이상, 51% 이상, 50% 이상, 49% 이상, 48% 이상, 47% 이상, 46% 이상, 45% 이상, 44% 이상, 43% 이상, 42% 이상, 41% 이상, 40% 이상, 39% 이상, 38% 이상, 37% 이상, 36% 이상, 35% 이상, 34% 이상, 33% 이상, 32% 이상, 31% 이상, 31% 이상, 30% 이상, 29% 이상, 28% 이상, 27% 이상, 26% 이상 25% 이상, 24% 이상, 23% 이상, 22% 이상, 21% 이상, 20% 이상, 19% 이상, 18% 이상, 17% 이상, 16% 이상, 15% 이상, 14% 이상, 13% 이상, 12% 이상, 11% 이상, 또는 10% 이상을 유지하는 것을 추가로 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 세포 물질의 90% 이상을 제거하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 세포 물질의 95% 이상을 제거하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 세포 물질의 99% 이상을 제거하는 것을 추가로 포함한다. 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법의 일부 양태에서, 방법은 천연 힘줄 중의 세포 물질의 중량으로 99% 이상, 98% 이상, 97% 이상, 96% 이상, 95% 이상, 94% 이상, 93% 이상, 92% 이상, 91% 이상, 90% 이상, 89% 이상, 88% 이상, 87% 이상, 86% 이상, 85% 이상, 84% 이상, 83% 이상, 82% 이상, 81% 이상, 80% 이상, 79% 이상, 78% 이상, 77% 이상, 76% 이상, 75% 이상, 74% 이상, 73% 이상, 72% 이상, 71% 이상, 70% 이상, 69% 이상, 68% 이상, 67% 이상, 66% 이상, 65% 이상, 64% 이상, 63% 이상, 62% 이상, 61% 이상, 60% 이상, 59% 이상, 58% 이상, 57% 이상, 56% 이상 55% 이상, 54% 이상, 53% 이상, 52% 이상, 51% 이상, 50% 이상, 49% 이상, 48% 이상, 47% 이상, 46% 이상, 45% 이상, 44% 이상, 43% 이상, 42% 이상, 41% 이상, 40% 이상, 39% 이상, 38% 이상, 37% 이상, 36% 이상, 35% 이상, 34% 이상, 33% 이상, 32% 이상, 31% 이상, 31% 이상, 30% 이상, 29% 이상, 28% 이상, 27% 이상, 26% 이상 25% 이상, 24% 이상, 23% 이상, 22% 이상, 21% 이상, 20% 이상, 19% 이상, 18% 이상, 17% 이상, 16% 이상, 15% 이상, 14% 이상, 13% 이상, 12% 이상, 11% 이상, 또는 10% 이상을 제거하는 것을 추가로 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, DTM은 세포 물질이 실질적으로 없다. 특정 구체예에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, DTM은 TGF-β 생성 세포가 실질적으로 없다.
일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)의 90% 이상을 제거하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)의 95% 이상을 제거하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, 방법은 세절된 힘줄 조직에 존재하는 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)의 99% 이상을 제거하는 것을 추가로 포함한다. 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법의 일부 양태에서, 방법은 천연 힘줄 중의 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)의 중량으로 99% 이상, 98% 이상, 97% 이상, 96% 이상, 95% 이상, 94% 이상, 93% 이상, 92% 이상, 91% 이상, 90% 이상, 89% 이상, 88% 이상, 87% 이상, 86% 이상, 85% 이상, 84% 이상, 83% 이상, 82% 이상, 81% 이상, 80% 이상, 79% 이상, 78% 이상, 77% 이상, 76% 이상, 75% 이상, 74% 이상, 73% 이상, 72% 이상, 71% 이상, 70% 이상, 69% 이상, 68% 이상, 67% 이상, 66% 이상, 65% 이상, 64% 이상, 63% 이상, 62% 이상, 61% 이상, 60% 이상, 59% 이상, 58% 이상, 57% 이상, 56% 이상 55% 이상, 54% 이상, 53% 이상, 52% 이상, 51% 이상, 50% 이상, 49% 이상, 48% 이상, 47% 이상, 46% 이상, 45% 이상, 44% 이상, 43% 이상, 42% 이상, 41% 이상, 40% 이상, 39% 이상, 38% 이상, 37% 이상, 36% 이상, 35% 이상, 34% 이상, 33% 이상, 32% 이상, 31% 이상, 31% 이상, 30% 이상, 29% 이상, 28% 이상, 27% 이상, 26% 이상 25% 이상, 24% 이상, 23% 이상, 22% 이상, 21% 이상, 20% 이상, 19% 이상, 18% 이상, 17% 이상, 16% 이상, 15% 이상, 14% 이상, 13% 이상, 12% 이상, 11% 이상, 또는 10% 이상을 제거하는 것을 추가로 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명은 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법을 제공하고, DTM은 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA)이 실질적으로 없다.
다양한 방법, 예를 들어, Gilpin and Yang, Biomed. Res. Int. 2017: 9831534 (2017)에 의해 요약된 것이 당업계에 공지되어 있다. 많은 방법들이 공격적인 세제 추출 및 극단적인 비생리학적 pH에서 잡다한 프로테이스, 예를 들어 펩신으로 장기간 처리하는 것을 포함한다. 본 발명의 방법 및 공정은 생리학적 pH에서 활성인 덜 잡다한 프로테이스를 사용함으로써 당업계에 공지된 것과 상이하다. 이론에 얽매이지 않고, 본 발명의 방법 및 공정은 단백질 변성이 더 적고 탈세포화된 힘줄 기질에서 더 많은 기능적 성장 인자를 보존한다. 일부 양태에서, MMP2, MMP9, MMP14, 또는 이들의 조합이 본 발명의 탈세포화된 힘줄 기질 조성물 제조에 사용된다. MMP2, MMP9 및 MMP14를 포함하는 MMP 계열에 대한 표적 절단 부위는 Eckhard et al., Data Brief, 7: 299-310 (2017)에 의해 전체 프로테옴 접근법을 사용하여 매핑되었다.
DTM 하이드로젤
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 탈세포화된 힘줄 기질 하이드로젤을 제공한다. 하이드로젤은 온도 또는 pH를 조작함으로써 펩신-가공된 단량체 콜라겐의 고유한 중합 능력을 사용하여 생성될 수 있다. 이러한 접근법은 잘 알려져 있지만, 다소 예측 불가능하고, 예를 들어, Drake et al., Biochemistry 5:301-312 (1966)에 콜라겐의 중합 가능한 단백질분해 단편의 생성이 상세히 설명된다. Bahney et al., FASEB J, 25:1486-1496 (2011) 및 Ungerleider et al., Methods, 84:53-59 (2015)에 의해 교시된 것과 같은 다른 방법이 또한 잘 알려져 있다. 이러한 공지된 방법은 단백질 풍부 세포외 기질 조직에 적용될 때 특히 예측 불가능하다.
더욱 신뢰할 수 있고 더 잘 제어되는 가교는 카르보디이미드 가교제 화학을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구체예에서, 하이드로젤은 DTM 조성물을 혼합하고 카복실 반응성 가교제, 예를 들어, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드, "EDC"와 반응시켜 생성된다. EDC 가교는 산성 (예를 들어 약 pH 4.5) 조건에서 가장 효율적이고 외부 카복실 및 아민이 없는 완충액에서 가장 잘 수행된다. MES 완충액 (4-모르폴리노에탄설폰산)가 적합한 카르보디이미드 반응 완충액이다. 인산염 완충액 및 중성 pH (최대 7.2) 조건은 반응 화학과 상용성이지만 효율성이 낮고; 반응 용액에서 EDC의 양을 증가시키면 감소된 효율을 쉽게 보상할 수 있다. EDC는 N-하이드록시석신이미드(NHS) 또는 이의 수용성 유사체(설포-NHS)와 1:1로 혼합되어 가교를 더욱 향상시킨다. EDC는 NHS를 카복실에 결합시켜, 생리학적 pH에서 일차 아민에 대한 효율적인 접합을 허용하면서 O-아실리소우레아 중간체보다 상당히 더 안정한 NHS 에스터를 형성한다.
또 다른 양태에서, DTM 하이드로젤은 주사용 멸균 약제학적으로 허용 가능한 용액에서 DTM을 재구성하여 형성된다.
주사용 약제학적 조성물
한 양태에서, 본 발명은 힘줄 파열의 봉합 또는 치료에서 사용하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 힘줄 손상 위치에 직접 적용되는 DTM 하이드로젤을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 한 양태에서, 힘줄 손상 위치는 1도 파열이다. 또 다른 양태에서, 힘줄 손상 위치는 2도 파열이다. 한 양태에서, 힘줄 손상 위치는 3도 파열이다.
약제학적 조성물은 일반적으로 치료적 유효량의 DTM 하이드로젤을 제공하도록 제형화되고, 약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 불활성 고체 희석제 및 충전제를 포함하는 담체, 멸균 수용액 및 다양한 유기 용매를 포함하는 희석제, 투과 향상제, 가용화제 및 보조제를 추가로 포함한다.
본 개시내용의 조성물 제조에서, 탈세포화된 힘줄 기질을 포함하는 조성물은 부형제를 또한 포함할 수 있다. 적합한 부형제의 일부 예는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 검 아카시아, 칼슘 인산염, 알지네이트, 트라가칸트, 젤라틴, 칼슘 실리케이트, 미세결정질 셀룰로스, PEG, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 멸균 식염수, 시럽 및 메틸 셀룰로스를 포함한다. 제형은 추가로 다음을 포함할 수 있다: 윤활제, 예컨대 활석, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유; 습윤제; 유화제 및 현탁제; 보존제, 예컨대 메틸- 및 프로필하이드록시-벤조에이트; 감미제; 및 풍미제. 본 개시내용의 조성물은 당업계에 공지된 절차를 사용하여 환자에게 이식한 후 활성 성분(예를 들어, 성장 인자)의 신속, 지속 또는 지연 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다.
일부 경우에, 본원에 개시된 약제학적 조성물은 장기 보존을 제공하고, 강력한 활성 성분을 함유하는 제제를 벌크업하고, 약물 흡수를 촉진하고, 점도를 감소시키고, 풍미를 첨가하고, 또는 약제학적 조성물의 용해도를 향상시킬 수 있는 부형제를 포함할 수 있다. 부형제의 비제한적 예는 부착 방지제, 결합제(예를 들어, 수크로스, 락토스, 전분, 셀룰로스, 젤라틴, 또는 폴리에틸렌 글리콜), 코팅(예를 들어, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 또는 젤라틴), 붕해제, 활택제, 윤활제 또는 보존제(예를 들어, 산, 에스터, 페놀, 수은 화합물, 또는 암모늄 화합물)를 포함할 수 있다. 본 개시내용의 약제학적 조성물은 중량으로 또는 부피로 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 또는 약 50% 초과의 부형제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 부피로 5%의 부형제를 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 약제학적 조성물은 중량으로 8%의 부형제를 포함할 수 있다. 하나 이상의 비히클은 약제학적 조성물의 활성 성분에 기초하여 선택될 수 있는 것으로 고려된다.
특정 구체예에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 하나 이상의 가용화제를 포함할 수 있다. 본원에서 사용된 "가용화제"는 트리아세틴, 트리에틸시트레이트, 에틸 올레에이트, 에틸 카프릴레이트, 소듐 라우릴 설페이트, 소듐 도쿠세이트, 비타민 E TPGS, 디메틸아세트아마이드, N-메틸피롤리돈, N- 하이드록시에틸피롤리돈, 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 사이클로덱스트린, 에탄올, n-부탄올 이소프로필 알코올, 콜레스테롤, 담즙산 염, 폴리에틸렌 글리콜 200-600, 글리코푸롤, 트랜스큐톨, 프로필렌 글리콜, 및 디메틸 이소소르바이드 등과 같은 화합물을 포함한다. 본 개시내용의 약제학적 조성물은 중량으로 또는 부피로 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 또는 약 50% 초과의 가용화제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 부피로 10%의 가용화제를 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 약제학적 조성물은 중량으로 5%의 가용화제를 포함할 수 있다.
일부 구체예에서, 조성물은 안정화제를 포함한다. 일부 구체예에서, 안정화제는 예를 들어 지방산, 지방 알코올, 알코올, 장쇄 지방산 에스터, 장쇄 에테르, 지방산의 친수성 유도체, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 알코올, 탄화수소, 소수성 중합체, 수분 흡수 중합체, 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 안정화제의 아마이드 유사체가 또한 사용된다. 다른 유용한 조성물은 필요한 경우 화학적 안정성을 향상시키기 위해 하나 이상의 항산화제를 포함한다. 적합한 항산화제는 단지 예로서 아스코르브산 및 소듐 메타바이설파이트를 포함한다. 한 구체예에서, 항산화제는 금속 킬레이트제, 티올 함유 화합물 및 다른 일반적인 안정화제로부터 선택된다.
또 다른 유용한 조성물은 물리적 안정성을 향상시키기 위해 또는 다른 목적을 위해 하나 이상의 계면활성제를 포함한다. 적합한 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 지방산 글리세라이드 및 식물성 오일, 폴리옥시에틸렌, 수소화된 캐스터 오일, 폴리옥시에틸렌 알킬에터, 알킬페닐 에터, 옥톡시놀 10 및 옥톡시놀 40을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 개시된 조성물은 보존제를 포함한다. 본원에 기재된 조성물에 사용하기에 적합한 보존제는 벤조산, 붕산, p-하이드록시벤조에이트, 페놀, 염소화 페놀 화합물, 알코올, 사차 화합물, 사차 암모늄 화합물(예를 들어 벤잘코늄 클로라이드, 세틸트리메틸암모늄 브로마이드 또는 세틸피리디늄 클로라이드), 안정화된 이산화 염소, 수은제(예를 들어 메르펜 또는 티오메르살), 또는 이들의 혼합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구체예에서, 보존제는 메틸 파라벤이다. 일부 구체예에서, 메틸 파라벤은 중량으로 또는 부피로 약 0.05% 내지 약 1.0%, 약 0.1% 내지 약 0.2%의 농도이다.
일부 구체예에서, 본 개시내용의 조성물은 기제를 포함할 수 있고, 기제는 소듐 스테아릴 푸마레이트, 다이에탄올아민 세틸 설페이트, 이소스테아레이트, 폴리에톡실화 캐스터 오일, 벤잘코늄 클로라이드, 노녹실 10, 옥톡시놀 9, 소듐 라우릴 설페이트, 솔비탄 에스터 (솔비탄 모노라우레이트, 솔비탄 모노올리에이트, 솔비탄 모노팔미테이트, 솔비탄 모노스테아레이트, 솔비탄 세스퀴올리에이트, 솔비탄 트라이올리에이트, 솔비탄 트라이스테아레이트, 솔비탄 라우레이트, 솔비탄 올리에이트, 솔비탄 팔미테이트, 솔비탄 스테아레이트, 솔비탄 다이올리에이트, 솔비탄 세스퀴-이소스테아레이트, 솔비탄 세스퀴스테아레이트, 솔비탄 트라이-이소스테아레이트), 레시틴, 이들의 약제학적 허용 가능한 염, 이들의 조합, 또는 이들의 유도체를 포함할 수 있다.
한 구체예에서, DTM 하이드로젤 약제학적 조성물 중의 탈세포화된 힘줄 기질(DTM)의 농도는 약 0.2 mg/mL 내지 20 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 19 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 18 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 17 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 16 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 15 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 14 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 13 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 12 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 11 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 10 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 9 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 8 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 7 mg/mL; 0.2 mg/mL 내지 6 mg/mL; 0.3 mg/mL 내지 6 mg/mL; 0.4 mg/mL 내지 6 mg/mL; 0.5 mg/mL 내지 6 mg/mL; 0.6 mg/mL 내지 6 mg/mL; 0.7 mg/mL 내지 6 mg/mL; 0.8 mg/mL 내지 6 mg/mL; 0.9 mg/mL 내지 6 mg/mL; 1 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3 mg/mL 내지 6 mg/mL; 약 3 mg/mL; 약 4 mg/mL; 약 5 mg/mL; 및 약 6 mg/mL로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 구체예에서, DTM 하이드로젤 약제학적 조성물 중의 탈세포화된 힘줄 기질(DTM)의 농도는 약 1.0 mg/mL 내지 6 mg/mL; 1.1 mg/mL 내지 6 mg/mL; 1.2 mg/mL 내지 6 mg/mL; 1.3 mg/mL 내지 6 mg/mL; 1.4 mg/mL 내지 6 mg/mL; 1.5 mg/mL 내지 6 mg/mL; 1.6 mg/mL 내지 6 mg/mL; 1.7 mg/mL 내지 6 mg/mL; 1.8 mg/mL 내지 6 mg/mL; 1.9 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2.0 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2.1 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2.2 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2.3 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2.4 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2.5 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2.6 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2.7 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2.8 mg/mL 내지 6 mg/mL; 2.9 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3.0 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3.1 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3.2 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3.3 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3.4 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3.5 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3.6 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3.7 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3.8 mg/mL 내지 6 mg/mL; 3.9 mg/mL 내지 6 mg/mL; 4.0 mg/mL 내지 6 mg/mL; 4.1 mg/mL 내지 6 mg/mL; 4.2 mg/mL 내지 6 mg/mL; 4.3 mg/mL 내지 6 mg/mL; 4.4 mg/mL 내지 6 mg/mL; 4.5 mg/mL 내지 6 mg/mL; 4.6 mg/mL 내지 6 mg/mL; 4.7 mg/mL 내지 6 mg/mL; 4.8 mg/mL 내지 6 mg/mL; 4.9 mg/mL 내지 6 mg/mL; 5.0 mg/mL 내지 6 mg/mL; 5.1 mg/mL 내지 6 mg/mL; 5.2 mg/mL 내지 6 mg/mL; 5.3 mg/mL 내지 6 mg/mL; 5.4 mg/mL 내지 6 mg/mL; 5.5 mg/mL 내지 6 mg/mL; 5.6 mg/mL 내지 6 mg/mL; 5.7 mg/mL 내지 6 mg/mL; 5.8 mg/mL 내지 6 mg/mL; 및 6 mg/mL로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 구체예에서, 약제학적 조성물 중의 DTM 하이드로젤 백분율(%)은 독립적으로, 예를 들어, 약제학적 조성물의 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% 또는 0.0001% w/w, w/v 또는 v/v 미만이다.
조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 첨가제 및 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 그러한 첨가제 및 부형제는 제한 없이 점착 제거제, 소포제, 완충제, 중합체, 항산화제, 보존제, 킬레이트제, 점도조절제, 등장화제, 현탁제, 결합제, 충전제, 가소제, 윤활제 및 이들의 혼합을 포함한다.
에탄올, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 (및 이들의 적합한 혼합물), 사이클로덱스트린 유도체 및 식물성 오일이 또한 사용될 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산의 경우 필요한 입자 크기의 유지를 위해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물의 작용 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르프산, 티메로살에 의해 이루어질 수 있다.
조성물은 펩타이드를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 단백질을 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 아미노산을 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 물을 추가로 포함할 수 있다.
조성물은 적어도 하나의 성장 인자를 추가로 포함할 수 있다. 일부 경우에, 적어도 하나의 성장 인자는 인슐린 유사 성장 인자- 1, 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질-3, 혈관 내피 성장 인자(VEGF), 간세포 성장 인자(HGF), 태반 성장 인자(PLGF) 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 적어도 하나의 성장 인자는 생존력을 향상시킬 수 있고, 생성물의 안정성, 세포의 분화, 엄격성의 보존을 향상시킬 수 있고, 항염증을 감소시킬 수 있고 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 적어도 하나의 성장 인자는 조성물에 첨가될 수 있다. 적어도 하나의 성장 인자는 조성물의 하위성분에 첨가될 수 있다. 적어도 하나의 성장 인자는 점도 조절 성분, 복수의 단리된 줄기 세포, 단리된 유도 성분, 단리된 스캐폴딩 성분 또는 이들의 임의의 조합에 첨가될 수 있다. 예를 들어, 적어도 하나의 성장 인자가 숙주에게 이식 시 조성물과 숙주 조직의 통합을 향상시키기 위해 탈세포화된 힘줄 기질을 포함하는 본 개시내용의 조성물에 첨가될 수 있다. 적어도 하나의 성장 인자는 조성물 형성 전에 첨가될 수 있다. 적어도 하나의 성장 인자는 조성물 형성 후에 첨가될 수 있다.
조성물은 다음 중 적어도 하나를 추가로 포함할 수 있다: 케모카인 리간드 2, 대식세포 염증성 단백질- 1 (MIP- 1) 알파, MIP-1 베타, MIP-2, 베타-케모카인 리간드- 5, 베타-케모카인 리간드-20, 알파-케모카인 리간드- 14, 지질다당질 유도 알파- 케모카인, 과립구-대식세포 집락 자극 인자, 인터루킨 IL- 1 베타, 포볼 미리스테이트 아세테이트, 표피 성장 인자, 섬유모세포 성장 인자, 혈관 내피 성장 인자, 결합 조직 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자, 인슐린 유사 성장 인자, 신경 성장 인자, 간세포 성장 인자, 집락 자극 인자, 줄기 세포 인자, 각질형성세포 성장 인자, 과립구 집락 자극 인자, 과립구 대식세포 집락 자극 인자, 아교세포 유래 신경영양 인자, 섬모 신경영양 인자, 내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드, 상피 호중구 활성화 펩타이드, 에리트로포이에틴, 골형성 단백질, 뇌 유래 신경영양 인자, 전환 성장 인자 베타, 종양 괴사 인자 또는 이들의 임의의 조합. 조성물은 적어도 하나의 호르몬을 추가로 포함할 수 있다. 일부 경우에, 적어도 하나의 호르몬은 프로락틴 또는 렙틴일 수 있다.
일부 경우에, 치유와 관련된 여섯 가지 주요 성장 인자 계열(EGF, FGF, IGF, PDGF, TGF, 및 VEGF)이 있을 수 있다. 그러한 성장 인자는의 예는 혈소판 유도 성장 인자 (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C 및 PDGF-D), 인슐린 유사 성장 인자 I 및 II (IGF-I 및 IGF-II), 산성 및 염기성 섬유모세포 성장 인자 (aFGF 및 bFGF), 알파 및 베타 전환 성장 인자 (TGF-a 및 TGF-β (예를 들어, TGF-베타 1, TGF 베타 2, TGF 베타 3)), 표피 성장 인자 (EGF) 및 기타를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 성장 인자는 치유에 관여하는 세포 중 하나 이상의 유사분열을 자극할 수 있으며 조합될 수 있다.
본원에 개시된 조성물과 공동 투여되는 다른 양성 혈관신생제는 예를 들어, HGF, TNF-a, 안지오제닌, IL-8 등을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 추가 제제의 또 다른 예는 혈소판 유래 성장 인자 (PDGF) (예를 들어, 베카플레민 (rhPDGF-BB) 예컨대 REGRANEX®아데노신-A2A 수용체 작용제; 각질형성세포 성장 인자 (KGF-2, 레피페민; 락토페린 (LF); 티모신 베타-4 (Tβ4); 트롬빈 유래 활성화 수용체 펩타이드 (TP508; CHRYSALIN®아데노바이러스 벡터 인코딩 혈소판 유래 성장 인자 (PDGF-B); 자가 골수 줄기 세포 (BMSC); 및 조작된 생체 조직 이식편 (예를 들어, Apligraf 등)를 포함할 수 있다. 항생제 및 방부성 궤양 제제가 또한 조합될 수 있다. 면역억제 치료(예를 들어, 코르티코스테로이드, 방사선요법, 화학요법)는 본원에 개시된 조성물과 조합될 수 있다.
당업자는 추가 제제가 본원에 개시된 조성물과 공동투여되거나 별도로 투여될 수 있음을 이해할 것이다.
본 발명의 조성물은 상기 열거된 다양한 다른 성분과 함께 적절한 용매에 필요한 양으로 포함될 수 있고, 필요한 대로, 여과 멸균이 이어진다. 일반적으로, 분산액은 다양한 멸균된 활성 성분을 기본 분산매 및 위에 열거된 필요한 다른 성분을 포함하는 멸균 비히클에 혼입하여 제조된다.
다른 약제학적 조성물
설하, 협측, 직장, 골내, 안내, 비강, 경막외 또는 척주내 투여에 적합한 약제학적 조성물이 또한 본원에 기재된 조성물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제로부터 제조될 수 있다. 그러한 약제학적 조성물의 제조는 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, Anderson, et al., eds., Handbook of Clinical Drug Data, Tenth Edition, McGraw-Hill, 2002; and Pratt and Taylor, eds., Principles of Drug Action, Third Edition, Churchill Livingston, N.Y., 1990을 참조하고, 이들 각각은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 조성물은 또한 봉합사, 예를 들어, 봉합사 앵커와 같은 함침된 또는 코팅된 장치를 통해 전달될 수 있다. 그러한 투여 방법은 예를 들어 힘줄 부상 또는 부상의 예방 또는 개선에 도움이 될 수 있다. 본 발명의 조성물은 예를 들어 봉합사 또는 봉합사 앵커로부터 국소 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 본 발명의 화합물은 기질과 혼합된다. 그러한 기질은 중합체 기질일 수 있고, 화합물을 스텐트에 결합시키는 역할을 할 수 있다. 그러한 용도에 적합한 중합체 기질은 예를 들어 락톤계 폴리에스터 또는 코폴리에스터, 예컨대 폴리락타이드, 폴리카프로락톤글리콜라이드, 폴리오쏘에스터, 폴리안하이드라이드, 폴리아미노애시드, 폴리사카라이드, 폴리포스파젠, 폴리(에터-에스터) 공중합체 (예를 들어, PEO-PLLA); 폴리디메틸실록세인, 폴리(에틸렌-비닐아세테이트), 아크릴레이트계 중합체 또는 공중합체 (예를 들어, 폴리하이드록시에틸 메틸메타크릴레이트, 폴리비닐 피롤리돈), 플루오린화 중합체, 예컨대 폴리테트라플루오로에틸렌 및 셀룰로스 에스터; 및 폴리에터 에터 케톤(PEEK)을 포함한다. 금속 또는 생체복합 재료, 예를 들어 폴리(락트산)(PLA) 및 베타-트리칼슘 인산염(β-TCP)가 또한 적합하다. PLA/하이드록시아파타이트가 또한 사용될 수 있고, 예를 들어 Dorozhkin, Biomatter, 1:3-56 (2011)을 참조하라. 적합한 기질은 분해되지 않을 수 있거나 시간 경과에 따라 분해되어, 화합물 또는 화합물들을 방출할 수 있다. 본 발명의 조성물은 힘줄 부상 부위에 직접 및/또는 힘줄 손상 부위에 직접 적용될 수 있다. 일부 양태에서, 본 발명의 조성물은 힘줄 부상 부위에 인접하게 및/또는 힘줄 부상 부위에 이접하게 적용된다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 조성물은 재생이 필요한 힘줄에 적용된다.
DTM 하이드로젤은 딥/스핀 코팅, 스프레이 코팅, 딥-코팅 및/또는 브러시-코팅과 같은 다양한 방법에 의해 봉합사의 구조물, 봉합사 앵커, 또는 의료 기기에 적용될 수 있다. 화합물은 용매에 적용될 수 있고 용매는 증발되어 봉합사, 봉합사 앵커, 또는 의료 기기에 하이드로젤의 층을 형성할 수 있다. 대안적으로, 화합물은 봉합사의 본체, 봉합사 앵커, 또는 의료 기기에, 예를 들어 마이크로채널 또는 마이크로기공에 위치할 수 있다. 이식될 때, 화합물은 봉합사의 본체, 봉합사 앵커, 또는 의료 기기 밖으로 확산되어 힘줄과 접촉한다. 그러한 봉합사, 봉합사 앵커 또는 의료 기기는 그러한 마이크로기공 또는 마이크로채널을 포함하도록 제조된 봉합사, 봉합사 앵커 또는 의료 기기를 적합한 용매 중의 본 발명의 조성물의 용액에 담그고, 이어서 용매를 증발시켜 제조될 수 있다. 봉합사, 봉합사 앵커 또는 의료 기기의 표면에 있는 과잉 하이드로젤은 추가의 간단한 용매 세척을 통해 제거될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 화합물은 봉합사, 봉합사 앵커 또는 의료 기기에 공유적으로 연결될 수 있다. 생체내에서 분해되어, 본 발명의 화합물 방출을 유도하는 공유 링커가 사용될 수 있다. 에스터, 아마이드 또는 무수물 연결과 같은 임의의 생체불안정 연결이 그러한 목적을 위해 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 본 발명의 DTM 하이드로젤은 힘줄에 직접 적용된다. 일부 양태에서, 본 발명의 DTM 하이드로젤은 10-게이지 바늘 내지 25-게이지 바늘 범위의 외과용 또는 의료용 바늘을 사용하여 힘줄에 직접 적용된다. 바늘은 10-게이지, 11-게이지, 12-게이지, 13-게이지, 14-게이지, 15-게이지, 16-게이지, 18-게이지, 20-게이지, 22-게이지, 23-게이지, 24-게이지, 또는 25-게이지일 수 있다. 일부 양태에서, 바늘은 16-게이지 내지 20-게이지이다. DTM 하이드로젤의 점도는 특정 게이지 바늘; 예를 들어, 16-게이지 또는 20-게이지 바늘을 통한 전달을 위해 조성을 최적화하도록 조절될 수 있다.
본 발명의 DTM 하이드로젤의 유변학적 특성은 최적의 주사를 위해 특정한 의료용 또는 수술용 바늘 게이지와 일치될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 DTM 하이드로젤의 역학 점도는 약 0.05 Pa*s 내지 약 1.0 Pa*s이다.
본 발명은 또한 키트를 제공한다. 키트는 단독으로 또는 적합한 포장과 조합으로, 동결건조된 DTM 조성물, 및 카르보디이미드 가교 시약, 및 사용 지침, 임상적 연구 논의 및 부작용 목록을 포함할 수 있는 서면 자료를 포함한다. 일부 구체예에서, 키트는 조성물을 이를 필요로 하는 힘줄에 적용하기 위한 어플리케이터를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 키트는 혼합을 가능하게 하는 제거 가능한 부착물을 추가로 포함한다. 한 양태에서 키트는 동결건조된 DTM이 있는 주사기, 수성 재현탁 완충액이 있는 두 번째 주사기 및 주사기를 연결하여 두 주사기 사이의 혼합을 허용하는 혼합 커넥터를 포함한다. 그러한 키트는 과학 문헌 참고문헌, 패키지 삽입 자료, 임상 시험 결과 및/또는 이들의 요약과 같은 정보를 또한 포함할 수 있으며, 이는 조성물의 활성 및/또는 이점을 나타내거나 확립하고 및/또는 투약, 투여, 부작용, 약물 상호작용 또는 보건 관리 제공자에게 유용한 기타 정보를 설명한다. 그러한 정보는 다양한 연구, 예를 들어, 생체내 모델을 포함하는 실험 동물을 사용하는 연구 및 인간 임상 시험을 기반으로 하는 연구의 결과를 기반으로 할 수 있다.
힘줄 치료 방법
한 양태에서, 본 발명의 조성물은 힘줄 재생을 자극하기 위해 사용되고, 상기 방법은 (i) 본 발명에 따른 DTM 조성물을 약제학적으로 허용 가능한 담체에 재현탁시키는 단계; 및 (ii) 재현탁된 DTM 조성물을 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위에 적용하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, DTM 하이드로젤은 이를 필요로 하는 대상을 치료하기 직전에 제조되고, 방법은 (i) 본 발명에 따른 DTM 조성물을 약제학적으로 허용 가능한 담체에 재현탁시키는 단계; (ii) DTM 하이드로젤을 제조하는 단계; 및 (iii) DTM 하이드로젤을 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위에 적용하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위는 1도 파열이다. 일부 양태에서, 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위는 2도 파열이고; 또 다른 양태에서, 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위는 3도 파열이다. 일부 양태에서, 부위는 완전한 파열이다.
일부 양태에서, 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위는 급성 부상이 있는 부위이다. 일부 양태에서, 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위는 외측 상과염, 아킬레스건염, 비골건염, 슬개건염, 대퇴사두건염 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, DTM 하이드로젤은 카르보디이미드 화학을 사용하여 제조된다. 일부 양태에서, DTM 하이드로젤은 주사용 약제학적으로 허용 가능한 멸균 용액에서 DTM을 재구성하여 제조된다.
한 양태에서, 본 발명의 DTM 조성물은 단일 바늘 주사에 의해 봉합이 필요한 힘줄 부위에 적용된다. 한 양태에서, 본 발명의 DTM 조성물의 적용은 이미지 유도된다. 일부 양태에서, 본 발명의 DTM 조성물은 관절경을 사용하여 봉합이 필요한 힘줄 부위에 적용된다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 DTM 조성물은 개복 수술 과정에서 직접 봉합이 필요한 힘줄 부위에 적용된다.
일부 양태에서, 본 발명의 조성물은 이미자 유도 주사를 통해 하나 이상의 관절에 투여된다. X-선, 컴퓨터 단층촬영(CT) 또는 초음파는 관절 주사를 안내하는 유용한 영상화 방법이다.
다음 항목은 특정 구체예를 기술한다.
항목 1101. 기질 메탈로프로티네이스 (MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물, 여기서 특정 양의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 내지 약 106.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가짐. 항목 1102. 기질 메탈로프로티네이스 (MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물, 여기서 특정 양의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 내지 약 103.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가짐. 항목 1103. 기질 메탈로프로티네이스 (MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물, 여기서 특정 양의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.5 Pa 내지 약 104 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가짐. 항목 1104. 기질 메탈로프로티네이스 (MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물, 여기서 특정 양의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104 Pa 내지 약 104.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가짐. 항목 1105. 기질 메탈로프로티네이스 (MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물, 여기서 특정 양의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.5 Pa 내지 약 105 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가짐. 항목 1106. 기질 메탈로프로티네이스 (MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물, 여기서 특정 양의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105 Pa 내지 약 105.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가짐. 항목 1107. 기질 메탈로프로티네이스 (MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물, 여기서 특정 양의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.5 Pa 내지 약 106 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가짐. 항목 1108. 기질 메탈로프로티네이스 (MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물, 여기서 특정 양의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106 Pa 내지 약 106.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가짐.
항목 1201. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 1 ml 내지 약 7 ml인 조성물. 항목 1202. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 0 ml 초과 내지 약 1 ml인 조성물. 항목 1203. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 1 ml 내지 약 2 ml인 조성물. 항목 1204. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 2 ml 내지 약 3 ml인 조성물. 항목 1205. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 3 ml 내지 약 4 ml인 조성물. 항목 1206. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 4 ml 내지 약 5 ml인 조성물. 항목 1207. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 5 ml 내지 약 6 ml인 조성물. 항목 1208. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 6 ml 내지 약 7 ml인 조성물. 항목 1209. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 1 ml 내지 약 10 ml인 조성물. 항목 1210. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 1 ml인 조성물. 항목 1211. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 2 ml인 조성물. 항목 1212. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 3 ml인 조성물. 항목 1213. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 4 ml인 조성물. 항목 1214. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 5 ml인 조성물. 항목 1215. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 6 ml인 조성물. 항목 1216. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 7 ml인 조성물. 항목 1217. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 8 ml인 조성물. 항목 1218. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 9 ml인 조성물. 항목 1219. 항목 1101 내지 1108 중 어느 하나에 있어서, 유체의 양은 약 10 ml인 조성물.
항목 1301. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105 Pa 내지 약 106.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1302. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105 Pa 내지 약 105.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1303. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.1 Pa 내지 약 105.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1304. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.2 Pa 내지 약 105.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1305. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.3 Pa 내지 약 105.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1306. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.4 Pa 내지 약 105.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1307. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.5 Pa 내지 약 105.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1308. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.6 Pa 내지 약 105.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1309. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.7 Pa 내지 약 105.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1310. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.8 Pa 내지 약 105.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1311. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서 , 여기서 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시 , 상기 제제는 약 105.9 Pa 내지 약 106 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물 . 항목 1312. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106 Pa 내지 약 106.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1313. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106.1 Pa 내지 약 106.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1314. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106.2 Pa 내지 약 106.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1315. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106.3 Pa 내지 약 106.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1316. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106.4 Pa 내지 약 106.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
항목 1401. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.5 Pa 내지 약 105.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1402. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1403. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1404. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1405. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1406. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1407. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105 Pa 내지 약 105.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1408. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.1 Pa 내지 약 105.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1409. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.2 Pa 내지 약 105.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1410. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.3 Pa 내지 약 105.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1411. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.4 Pa 내지 약 105.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
항목 1501. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104 Pa 내지 약 105 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1501. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1502. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1503. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1504. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1505. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1506. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1507. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1508. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1509. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1510. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
항목 1601. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.5 Pa 내지 약 105 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1601. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1602. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1603. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1604. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1605. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1606. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1607. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1608. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1609. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1610. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1611. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1612. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1613. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1614. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1615.인 조성물 항목 중 어느 하나에 있어서 1101 내지 1219, 여기서을 포함하는 제제 내에서 제제화시 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물, 상기 제제는의 복소 탄성률 안정기를 가지는 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa.
항목 1701. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.5 Pa 내지 약 105.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1702. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1703. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1704. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1705. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1706. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1707. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1708. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1709. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1710. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1711. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1712. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1713. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1714. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1715. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1716. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1717. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105 Pa 내지 약 105.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1718. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.1 Pa 내지 약 105.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1719. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.2 Pa 내지 약 105.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1720. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.3 Pa 내지 약 105.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1721. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.4 Pa 내지 약 105.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
항목 1801. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 내지 약 104.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1802. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 내지 약 103.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1803. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.1 Pa 내지 약 103.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1804. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.2 Pa 내지 약 103.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1805. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.3 Pa 내지 약 103.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1806. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.4 Pa 내지 약 103.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1807. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1808. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1809. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1810. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1811. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1812. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1813. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1814. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1815. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1816. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
항목 1901. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 내지 약 105.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1902. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 내지 약 103.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1903. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.1 Pa 내지 약 103.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1904. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.2 Pa 내지 약 103.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1905. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.3 Pa 내지 약 103.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1906. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.4 Pa 내지 약 103.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1907. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1908. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1909. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1910. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1911. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1912. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1913. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1914. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1915. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1916. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1917. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1918. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1919. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1920. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1921. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1922. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105 Pa 내지 약 105.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1923. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.1 Pa 내지 약 105.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1924. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.2 Pa 내지 약 105.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1925. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.3 Pa 내지 약 105.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 1926. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.4 Pa 내지 약 105.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
항목 2100. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 내지 약 106.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2101. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 내지 약 103.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2102. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.1 Pa 내지 약 103.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2103. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.2 Pa 내지 약 103.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2104. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.3 Pa 내지 약 103.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2105. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.4 Pa 내지 약 103.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2106. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2107. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2108. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2109. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2110. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2111. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2112. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2113. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2114. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2115. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2116. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2117. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2118. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2119. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2120. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2121. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105 Pa 내지 약 105.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2122. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.1 Pa 내지 약 105.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2123. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.2 Pa 내지 약 105.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2124. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.3 Pa 내지 약 105.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2125. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.4 Pa 내지 약 105.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2126. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.5 Pa 내지 약 105.6 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2127. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.6 Pa 내지 약 105.7 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2128. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.7 Pa 내지 약 105.8 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2129. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.8 Pa 내지 약 105.9 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2130. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105.9 Pa 내지 약 106 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2131. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106 Pa 내지 약 106.1 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2132. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106.1 Pa 내지 약 106.2 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2133. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106.2 Pa 내지 약 106.3 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2134. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106.3 Pa 내지 약 106.4 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물. 항목 2135. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 106.4 Pa 내지 약 106.5 Pa의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
항목 2200. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105 Pa 내지 약 106.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2201. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105 Pa 내지 약 105.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2202. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.1 Pa 내지 약 105.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2203. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.2 Pa 내지 약 105.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2204. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.3 Pa 내지 약 105.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2205. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.4 Pa 내지 약 105.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2206. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.5 Pa 내지 약 105.6 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2207. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.6 Pa 내지 약 105.7 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2208. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.7 Pa 내지 약 105.8 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2209. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.8 Pa 내지 약 105.9 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2210. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.9 Pa 내지 약 106 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2211. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 106 Pa 내지 약 106.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2212. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 106.1 Pa 내지 약 106.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2213. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 106.2 Pa 내지 약 106.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2214. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 106.3 Pa 내지 약 106.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2215. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 106.4 Pa 내지 약 106.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물.
항목 2300. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.5 Pa 내지 약 106 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2301. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2302. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2303. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2304. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2305. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2306. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105 Pa 내지 약 105.1 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2307. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.1 Pa 내지 약 105.2 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2308. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.2 Pa 내지 약 105.3 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2309. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.3 Pa 내지 약 105.4 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2310. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.4 Pa 내지 약 105.5 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2311. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.5 Pa 내지 약 105.6 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2312. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.6 Pa 내지 약 105.7 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2313. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.7 Pa 내지 약 105.8 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2314. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.8 Pa 내지 약 105.9 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2315. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.9 Pa 내지 약 106 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물.
항목 2400. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104 Pa 내지 약 105.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2401. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2402. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2403. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2404. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2405. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2406. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2407. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2408. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2409. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2410. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2411. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105 Pa 내지 약 105.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2412. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.1 Pa 내지 약 105.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2413. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.2 Pa 내지 약 105.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2414. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.3 Pa 내지 약 105.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2415. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.4 Pa 내지 약 105.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물.
항목 2500. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.5 Pa 내지 약 105 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2501. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2502. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2503. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2504. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2505. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2506. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2507. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2508. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2509. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2510. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2511. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2512. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2513. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2514. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2515. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물.
항목 2600. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103 Pa 내지 약 105.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2601. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103 Pa 내지 약 103.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2602. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.1 Pa 내지 약 103.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2603. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.2 Pa 내지 약 103.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2604. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.3 Pa 내지 약 103.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2605. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.4 Pa 내지 약 103.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2606. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2607. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2608. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2609. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2610. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2611. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2612. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2613. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2614. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2615. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2616. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2617. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2618. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2619. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2620. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2621. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105 Pa 내지 약 105.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2622. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.1 Pa 내지 약 105.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2623. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.2 Pa 내지 약 105.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2624. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.3 Pa 내지 약 105.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2625. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.4 Pa 내지 약 105.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물.
항목 2700. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103 Pa 내지 약 105 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2701. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103 Pa 내지 약 103.1 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2702. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.1 Pa 내지 약 103.2 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2703. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.2 Pa 내지 약 103.3 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2704. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.3 Pa 내지 약 103.4 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2705. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.4 Pa 내지 약 103.5 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2706. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2707. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2708. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2709. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2710. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2711. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2712. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2713. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2714. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2715. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2716. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2717. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2718. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2719. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2720. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물.
항목 2800. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.5 Pa 내지 약 104.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2801. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.5 Pa 내지 약 102.6 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2802. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.6 Pa 내지 약 102.7 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2803. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.7 Pa 내지 약 102.8 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2804. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.8 Pa 내지 약 102.9 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2805. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.9 Pa 내지 약 103 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2806. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103 Pa 내지 약 103.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2807. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.1 Pa 내지 약 103.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2808. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.2 Pa 내지 약 103.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2809. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.3 Pa 내지 약 103.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2810. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.4 Pa 내지 약 103.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2811. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2812. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2813. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2814. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2815. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2816. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2817. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2818. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2819. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2820. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물.
항목 2900. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102 Pa 내지 약 104 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2901. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102 Pa 내지 약 102.1 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2902. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.1 Pa 내지 약 102.2 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2903. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.2 Pa 내지 약 102.3 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2904. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.3 Pa 내지 약 102.4 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2905. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.4 Pa 내지 약 102.5 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2906. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.5 Pa 내지 약 102.6 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2907. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.6 Pa 내지 약 102.7 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2908. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.7 Pa 내지 약 102.8 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2909. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.8 Pa 내지 약 102.9 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2910. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 102.9 Pa 내지 약 103 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2911. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103 Pa 내지 약 103.1 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2912. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.1 Pa 내지 약 103.2 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2913. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.2 Pa 내지 약 103.3 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2914. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.3 Pa 내지 약 103.4 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2915. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.4 Pa 내지 약 103.5 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2916. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2917. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2918. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2919. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 2920. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물.
항목 3000. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.5 Pa 내지 약 105.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3001. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3002. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3003. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3004. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3005. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3006. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104 Pa 내지 약 104.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3007. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3008. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3009. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3010. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3011. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3012. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3013. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3014. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3015. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3016. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105 Pa 내지 약 105.1 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3017. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.1 Pa 내지 약 105.2 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3018. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.2 Pa 내지 약 105.3 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3019. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.3 Pa 내지 약 105.4 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3020. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 105.4 Pa 내지 약 105 Pa의 저장 탄성률을 가지는 조성물.
항목 3100. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103 Pa 내지 약 105 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3101. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103 Pa 내지 약 103.1 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3102. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.1 Pa 내지 약 103.2 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3103. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.2 Pa 내지 약 103.3 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3104. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.3 Pa 내지 약 103.4 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3105. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.4 Pa 내지 약 103.5 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3106. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.5 Pa 내지 약 103.6 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3107. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.6 Pa 내지 약 103.7 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3108. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.7 Pa 내지 약 103.8 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3109. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.8 Pa 내지 약 103.9 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3110. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 103.9 Pa 내지 약 104 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3111. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104 Pa 내지 약 1041 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3112. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.1 Pa 내지 약 104.2 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3113. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.2 Pa 내지 약 104.3 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3114. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.3 Pa 내지 약 104.4 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3115. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.4 Pa 내지 약 104.5 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3116. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.5 Pa 내지 약 104.6 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3117. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.6 Pa 내지 약 104.7 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3118. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.7 Pa 내지 약 104.8 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3119. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.8 Pa 내지 약 104.9 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물. 항목 3120. 항목 1101 내지 1219 중 어느 하나에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 내지 약 102 rad/s의 각진동수에서 약 104.9 Pa 내지 약 105 Pa의 손실 탄성률을 가지는 조성물.
항목 3200. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 5 ° 내지 약 25 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3201. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 3 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3202. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 4 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3203. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 5 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3204. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 6 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3205. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 7 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3206. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 8 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3207. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 9 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3208. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 10 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3209. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 11 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3210. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 12 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3211. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 13 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3212. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 14 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3213. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 15 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3214. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 16 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3215. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 17 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3216. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 18 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3217. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 19 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3218. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 20 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3219. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 21 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3220. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 22 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3221. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 23 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3222. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 24 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3223. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 25 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3224. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 26 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3225. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 27 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3226. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 28 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3227. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 29 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물. 항목 3228. 항목 1101 내지 3120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 30 °의 위상각 안정기를 가지는 조성물.
항목 3300. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 50 Pa 내지 약 12,500 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물. 항목 3301. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 50 Pa 내지 약 250 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물. 항목 3302. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 250 Pa 내지 약 750 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물. 항목 3303. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 750 Pa 내지 약 1.500 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물. 항목 3304. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 1.500 Pa 내지 약 2.500 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물. 항목 3305. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 2.500 Pa 내지 약 3.500 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물. 항목 3306. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 3.500 Pa 내지 약 5.000 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물. 항목 3307. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 5.000 Pa 내지 약 12.500 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물. 항목 3308. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 50 Pa 내지 약 7.500 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물. 항목 3309. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 7.500 Pa 내지 약 10.000 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물. 항목 3310. 항목 1101 내지 3228 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 약 10.000 Pa 내지 약 12.500 Pa의 항복 응력을 가지는 조성물.
항목 3400. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 5 분 내지 약 60 분 경화되는 조성물. 항목 3401. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 1 분 내지 약 5 분 경화되는 조성물. 항목 3402. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 5 분 내지 약 10 분 경화되는 조성물. 항목 3403. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 10 분 내지 약 15 분 경화되는 조성물. 항목 3404. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 15 분 내지 약 20 분 경화되는 조성물. 항목 3405. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 20 분 내지 약 25 분 경화되는 조성물. 항목 3406. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 25 분 내지 약 30 분 경화되는 조성물. 항목 3407. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 30 분 내지 약 35 분 경화되는 조성물. 항목 3408. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 35 분 내지 약 40 분 경화되는 조성물. 항목 3409. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 40 분 내지 약 45 분 경화되는 조성물. 항목 3410. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 45 분 내지 약 50 분 경화되는 조성물. 항목 3411. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 50 분 내지 약 55 분 경화되는 조성물. 항목 3412. 항목 1101 내지 3310 중 어느 하나에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 55 분 내지 약 60 분 경화되는 조성물.
항목 3500. 항목 1101 내지 3412 중 어느 하나에 있어서, 유체는 인산염-완충 염수 (PBS)인 조성물.
항목 3600. 항목 1101 내지 3500 중 어느 하나에 있어서, 힘줄 조직은 인간 또는 동물 유래인 조성물.
항목 4000. 항목 1101 내지 3600 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 힘줄 조직의 DNase 용액과의 접촉을 포함하는 탈세포화 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 조성물.
항목 4010. 항목 4000에 있어서, 방법은 탈세포화 힘줄 조직의 메탈로프로티네이스 (MMP) 용액과의 접촉을 추가로 포함하는 조성물.
항목 4020. 항목 4000 또는 항목 4010에 있어서, 방법은 동결건조 단계를 추가로 포함하는 조성물.
항목 4030. 항목 4000 내지 4020 중 어느 하나에 있어서, 방법은 재구성 단계를 추가로 포함하는 조성물.
항목 4040. 항목 4000 내지 4030 중 어느 하나에 있어서, 방법은 세척 단계를 추가로 포함하는 조성물.
항목 4050. 항목 4000 내지 4040 중 어느 하나에 있어서, 방법은 여과 단계를 추가로 포함하는 조성물.
항목 4060. 항목 1101 내지 4050 중 어느 하나에 있어서, MMP은 콜라게네이스를 포함하는 조성물.
항목 5000. 항목 1101 내지 4060 중 어느 하나의 조성물을 포함하는 제제의 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절 방법, 이 방법은 일정 기간 동안의 상기 제제의 경화를 포함함.
항목 5100. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 30분인 방법. 항목 5101. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 5분 내지 약 10분인 방법. 항목 5102. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 10분 내지 약 15분인 방법. 항목 5103. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 15분 내지 약 20분인 방법. 항목 5104. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 20분 내지 약 25분인 방법. 항목 5105. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 25분 내지 약 30분인 방법. 항목 5106. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 30분 내지 약 35분인 방법. 항목 5107. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 35분 내지 약 40분인 방법. 항목 5108. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 40분 내지 약 45분인 방법. 항목 5109. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 45분 내지 약 50분인 방법. 항목 5110. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 50분 내지 약 55분인 방법. 항목 5111. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 55분 내지 약 60분인 방법. 항목 5112. 항목 5000에 있어서, 시간 기간이 약 60분 내지 약 120분인 방법.
항목 5200. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 한 자릿수 크기 정도 이내인 방법. 항목 5201. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 0.5 크기 정도 이내인 방법. 항목 5202. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 0.6 크기 정도 이내인 방법. 항목 5203. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 0.7 크기 정도 이내인 방법. 항목 5204. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 0.8 크기 정도 이내인 방법. 항목 5205. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 0.9 크기 정도 이내인 방법. 항목 5206. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 1 크기 정도 이내인 방법. 항목 5207. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 1.1 크기 정도 이내인 방법. 항목 5208. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 1.2 크기 정도 이내인 방법. 항목 5209. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 1.3 크기 정도 이내인 방법. 항목 5210. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 1.4 크기 정도 이내인 방법. 항목 5211. 항목 5000 또는 항목 5100에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 1.5 크기 정도 이내인 방법.
항목 6000. 이를 필요로 하는 대상체에서의 연골 재생, 뼈 재생, 또는 힘줄 부착부 재생의 자극 방법, 이 방법은 항목 1101 내지 5211 중 어느 하나의 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함함.
항목 6100. 이를 필요로 하는 대상에서 연골 조직, 뼈 조직, 또는 부착부 내 혈관신생의 자극 방법, 이 방법은 항목 1101 내지 5211 중 어느 하나의 조성물 또는 그의 제제를 대상에게 투여하는 것을 포함함.
항목 6200. 항목 6000 또는 항목 6100에 있어서, 상기 제제는 조성물 및 유체의 동결건조된 형태를 포함하는 방법.
항목 6300. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체인 방법. 항목 6301. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 0.5 g의 조성물에 대해 약 0.5 ml 내지 약 1 ml의 유체인 방법. 항목 6302. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 1 ml 내지 약 1.5 ml의 유체인 방법. 항목 6303. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 1.5 ml 내지 약 2 ml의 유체인 방법. 항목 6304. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 2 ml 내지 약 2.5 ml의 유체인 방법. 항목 6305. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 2.5 ml 내지 약 3 ml의 유체인 방법. 항목 6306. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 3 ml 내지 약 3.5 ml의 유체인 방법. 항목 6307. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 3.5 ml 내지 약 4 ml의 유체인 방법. 항목 6308. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 4 ml 내지 약 4.5 ml의 유체인 방법. 항목 6309. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 4.5 ml 내지 약 5 ml의 유체인 방법. 항목 6310. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 5 ml 내지 약 5.5 ml의 유체인 방법. 항목 6311. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 5.5 ml 내지 약 6 ml의 유체인 방법. 항목 6312. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 6 ml 내지 약 6.5 ml의 유체인 방법. 항목 6313. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 6.5 ml 내지 약 7 ml의 유체인 방법. 항목 6314. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 7 ml 내지 약 7.5 ml의 유체인 방법. 항목 6315. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 7.5 ml 내지 약 8 ml의 유체인 방법. 항목 6316. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 8 ml 내지 약 8.5 ml의 유체인 방법. 항목 6317. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 8.5 ml 내지 약 9 ml의 유체인 방법. 항목 6318. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 9 ml 내지 약 9.5 ml의 유체인 방법. 항목 6319. 항목 6200에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 9.5 ml 내지 약 10 ml의 유체인 방법.
항목 6400. 항목 6200 또는 6319에 있어서, 유체는 인산염-완충 염수 (PBS)인 방법.
항목 12001. 기질 메탈로프로티네이스 (MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물.
항목 12002. 항목 12001에 있어서, 항생제를 추가로 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물.
항목 12003. 항목 12001에 있어서, 멸균 수성 담체 용액을 추가로 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물.
항목 12004. 항목 12001-12003 중 어느 하나에 있어서, DTM은 단백질이 풍부하여 세절된 힘줄 조직에 존재하는 성장 인자의 50% 이상을 보유하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) .
항목 12005. 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물 제조 방법, 상기 방법은 힘줄 조직 표본 세절; 세절된 힘줄 조직 표본 탈세포화; 분쇄; 소화; 정지; 중화; 세척; 및 동결건조로부터 선택된 하나 이상의 단계를 포함함.
항목 12006. 항목 12005에 있어서, 소화 단계는 MMP-2, MMP-9, MMP-14 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 기질 메탈로프로테네이스(MMP)로 소화시키는 것을 포함하는 방법.
항목 12007. 힘줄 조직 표본 세절; 세절된 힘줄 조직 표본 탈세포화; 소화; 및 동결건조로부터 선택된 하나 이상의 단계를 포함하는 공정에 의해 제조된 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물.
항목 12008. 힘줄 조직 표본 세절; 세절된 힘줄 조직 표본 탈세포화; 분쇄; 소화; 정지; 중화; 세척; 및 동결건조로부터 선택된 하나 이상의 단계를 포함하는 공정에 의해 제조된 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물.
항목 12009. 항목 12007 또는 12008 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화 단계는 카오트로픽 염(chaotropic salt), 비이온성 세제, 양쪽성이온성 세제, 양이온성 세제, 음이온성 세제, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 포함하는 용액에 세절된 힘줄 조직 표본을 노출시키는 것을 포함하는 조성물.
항목 12010. 항목 12007 또는 12008 중 어느 하나에 있어서, 소화 단계는 기질 메탈로프로테네이스(MMP)를 포함하는 용액으로 소화시키는 것을 포함하는 조성물.
항목 12011. 항목 12010에 있어서, 메탈로프로테네이스(MMP)는 MMP-2, MMP-9, MMP-14, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 조성물.
항목 12012. 항목 12007 또는 12008 중 어느 하나에 있어서, 정지 및/또는 중화 단계는 TAPI-0, TAPI-1, TAPI-2, 마리마스타트, 포스포라미돈, 루테올린, PMSF, 펩스타틴 A, 류펩틴, E-64, 소듐 오르토바나데이트, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 프로테이스 억제제를 포함하는 용액으로 정지 및/또는 중화하는 것을 포함하는 조성물.
항목 12013. 힘줄 재생 자극 방법, 이 방법은 (i) 항목 12001 또는 12007에 따르는 DTM 조성물을 약제학적으로 허용 가능한 담체에 재현탁시키는 단계; 및 (ii) 재현탁된 DTM 조성물을 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위에 적용하는 단계를 포함함.
항목 12014. 항목 12001 또는 12004에 따르는 재현탁된 DTM 조성물, 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카르보디이미드 (EDC) 및 PEG-N-하이드록시석신이미드 (NHS) 에스터를 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 하이드로젤.
항목 12015. 소프트-캐스트 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 물체, 여기서 소프트-캐스트 물체는 본원에 기재된 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 생리학적 완충액에 재현탁시키는 단계; 항목 12001 또는 12004에 따르는 DTM 조성물을 PEG-N-하이드록시석신이미드(NHS) 에스터와 혼합하여 연질 하이드로젤을 생성하는 단계; 연질 하이드로젤을 삼차원 몰드로 옮기는 단계; 중합 반응을 경화시키는 단계; 및 중합 반응을 불활성화시키는 단계 중 하나 이상의 단계를 포함하는 공정에 의해 제조됨.
항목 12016. 재현탁된 항목 12001 또는 12007에 따르는 DTM 조성물을 포함하고, 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카보디이미드 (EDC) 및 (EDC) 커플링제와 함께 N-하이드록시석신이미드(NHS) 또는 N-하이드록시설포석신이미드(설포NHS)로부터 선택된 수용성 커플링제를 추가로 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 하이드로젤.
항목 12017. 대상의 힘줄 파열 치료 및/또는 힘줄 재생 자극 방법을 제공하고, 방법은 기질 메탈로프로테네이스(MMP) 또는 콜라게네이스 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 수득하는 단계; DTM 조성물을 약제학적으로 허용 가능한 담체에 재현탁시키는 단계; 및 재현탁된 DTM 조성물을 힘줄 재생 자극을 필요로 하는 힘줄 부위에 적용하는 단계를 포함함.
항목 12018. 천연 힘줄로부터 생성된 탈세포화된 힘줄 기질, 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 90 중량% 초과의 TGF-β를 포함함.
항목 12019. 항목 12018에 있어서, 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 90 중량% 초과의 TGF-β를 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12020. 항목 12018에 있어서, 탈세포화된 힘줄 기질은 천연 힘줄 중의 99 중량% 초과의 TGF-β를 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12021. 항목 12018 내지 12020 중 어느 하나에 있어서, 천연 힘줄 중의 5 중량% 미만의 세포 물질을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12022. 항목 12018 내지 12020 중 어느 하나에 있어서, 천연 힘줄 중의 2 중량% 미만의 세포 물질을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12023. 항목 12018 내지 12020 중 어느 하나에 있어서, 천연 힘줄 중의 1 중량% 미만의 세포 물질을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12024. 항목 12018 내지 12020 중 어느 하나에 있어서, 천연 힘줄 중의 0.1 중량% 미만의 세포 물질을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12025. 항목 12018 내지 12024 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화된 힘줄 기질은 TGF-β 생성 세포가 실질적으로 없는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12026. 항목 12018 내지 12025 중 어느 하나에 있어서, 천연 힘줄 중의 5 중량% 미만의 DNA을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12027. 항목 12018 내지 12025 중 어느 하나에 있어서, 천연 힘줄 중의 2 중량% 미만의 DNA을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12028. 항목 12018 내지 12025 중 어느 하나에 있어서, 천연 힘줄 중의 1 중량% 미만의 DNA을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12029. 항목 12018 내지 12025 중 어느 하나에 있어서, 천연 힘줄 중의 0.1 중량% 미만의 DNA을 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12030. 항목 12018 내지 12025 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화된 힘줄 기질은 DNA 가 실질적으로 없는 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12031. 힘줄로부터 탈세포화된 힘줄 기질(DTM) 조성물을 제조하는 방법, 방법은 힘줄을 탈세포화하여 탈세포화된 힘줄을 생성하는 단계; 탈세포화된 힘줄을 기질 메탈로프로테네이스(MMP)를 포함하는 효소 용액과 접촉시켜 소화되고 탈세포화된 힘줄을 생성하는 단계; 소화되고 탈세포화된 힘줄을 동결건조하여 동결건조된 힘줄을 생성하는 단계; 및 동결건조된 힘줄을 재구성하여 탈세포화된 힘줄 기질을 생성하는 단계를 포함함.
항목 12032. 항목 12031에 있어서, 탈세포화는 힘줄을 DNase 용액과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
항목 12033. 항목 12032에 있어서, DNase 용액은 용매의 밀리리터당 약 10 내지 약 100 단위의 DNase, 용매의 밀리리터당 약 25 내지 약 75 단위의 DNase, 용매의 밀리리터당 약 40 내지 약 60 단위의 DNase, 용매의 밀리리터당 약 40 내지 약 60 단위의 DNase, 또는 용매의 밀리리터당 약 50 단위의 DNase를 포함하는 방법.
항목 12034. 항목 12032 또는 12033 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화는 힘줄을 힘줄 1 그램당 약 4 밀리리터 내지 약 50 밀리리터의 DNase 용액과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
항목 12035. 항목 12034에 있어서, 탈세포화는 힘줄을 힘줄 1 그램당 약 4 밀리리터 내지 약 10 밀리리터의 DNase 용액과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
항목 12036. 항목 12034에 있어서, 탈세포화는 힘줄을 힘줄 1 그램당 약 10 밀리리터 내지 약 50 밀리리터의 DNase 용액과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
항목 12037. 항목 12034 내지 12036 중 어느 하나에 있어서, 접촉은 약 1 시간의 기간 동안 일어나고, 임의로 진탕기에서 일어나는 방법.
항목 12038. 항목 12031 내지 12037 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화는 힘줄을 인산염 완충 식염수로 세척하는 것을 추가로 포함하는 방법.
항목 12039. 항목 12031 내지 12038 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화는 힘줄을 여과하는 것을 추가로 포함하는 방법.
항목 12040. 항목 12031 내지 12039 중 어느 하나에 있어서, 동결건조는 소화되고 탈세포화된 힘줄을 영하 80 ℃에서 적어도 약 30 분 동안 동결시키는 것을 포함하는 방법.
항목 12041. 항목 12039에 있어서, 힘줄은 약 1 분 내지 약 15 분 동안 약 1500 G 내지 약 2500 G에서 원심분리를 사용하여 70 마이크로미터 스트레이너를 통해 여과하는 방법.
항목 12042. 항목 12031 내지 12041 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화는 힘줄을 여과하는 것을 추가로 포함하는 방법.
항목 12043. 제 5항에 있어서, 콜라게네이스는 콜라게네이스 I형, 콜라게네이스 III형, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
항목 12044. 항목 12043에 있어서 콜라게네이스 I형을 포함하고, 효소 용액 중의 콜라게네이스 I형의 농도는 밀리리터당 약 2 밀리그램인 방법.
항목 12045. 항목 12043에 있어서 콜라게네이스 III형을 포함하고, 효소 용액 중의 콜라게네이스 III형의 농도는 밀리리터당 약 1 밀리그램인 방법.
항목 12046. 항목 12031 내지 12045 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화된 힘줄은 힘줄 1 그램당 약 10 밀리리터 내지 약 50 밀리리터의 효소 용액과 접촉되는 방법.
항목 12047. 항목 12018 내지 12045 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화된 힘줄은 힘줄 1 그램당 약 5 밀리리터 내지 약 10 밀리리터의 효소 용액과 접촉되는 방법.
항목 12048. 항목 12031 내지 12047 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화된 힘줄은 약 24 시간 동안 효소 용액과 접촉되는 방법.
항목 12049. 항목 12031 내지 12047 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화된 힘줄은 약 12 시간 동안 효소 용액과 접촉되는 방법.
항목 12050. 항목12031 내지 12049 중 어느 하나에 있어서, 탈세포화된 힘줄은 약 37 ℃에서 효소 용액과 접촉되는 방법.
항목 12051. 항목 12031 내지 12050 중 어느 하나에 있어서, 재구성은 약 2 마이크로리터 내지 약 5 마이크로리터의 용매를 약 1 밀리그램의 동결건조된 힘줄과 혼합하는 것을 포함하는 방법.
항목 12052. 항목 12031 내지 12051 중 어느 하나에 따르는 방법에 따라 제조된 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12053. 항목 12031 내지 12051 중 어느 하나에 따르는 방법에 따라 제조된, 대상 내로의 이식을 위한 탈세포화된 힘줄 기질.
항목 12054. 항목 12031 내지 12051 중 어느 하나에 따르는 방법에 따라 제조된 탈세포화된 힘줄 기질 물질을 포함하는, 환자 내로의 이식을 위한 조직 재생 스캐폴드.
항목 12055. 항목 12018 내지 12030 및/또는 12052 내지 12054 중 어느 하나에 있어서, 부형제를 추가로 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 물질.
항목 12056. (i) 선행하는 항목 중 어느 하나의 재현탁된 DTM 조성물, 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카르보디이미드 (EDC) 및 PEG-N-하이드록시석신이미드 (NHS) 에스터를 포함하는 탈세포화된 힘줄 기질 (DTM) 조성물 또는 DTM 하이드로젤 및 (ii) 탈세포화된 또는 무력화된 연골 기질 (DCM) 조성물 또는 DCM 하이드로젤을 포함하는 조성물 .
항목 12057. 항목 12056에 있어서, DTM 조성물 또는 DTM 하이드로젤의 총 퍼센트 대 DCM 조성물 또는 DCM 하이드로젤의 총 퍼센트는 중량 기준 약 1:99, 중량 기준 약 5:95, 중량 기준 약 10:90, 중량 기준 약 15:85, 중량 기준 약 20:80, 중량 기준 약 25:75, 중량 기준 약 30:70, 중량 기준 약 35:65, 중량 기준 약 40:60, 중량 기준 약 45:55, 중량 기준 약 50:50, 중량 기준 약 55:45, 중량 기준 약 60:40, 중량 기준 약 65:35, 중량 기준 약 70:30, 중량 기준 약 75:25, 중량 기준 약 80:20, 중량 기준 약 85:15, 중량 기준 약 90:10, 중량 기준 약 95:5 중량 기준, 또는 약 99:1인 조성물.
항목 12058. 항목 12056에 있어서, DTM 조성물 또는 DTM 하이드로젤의 총 퍼센트 대 DCM 조성물 또는 DCM 하이드로젤의 총 퍼센트는 중량 기준 약 1:99 내지 중량 기준 약 99:1인 조성물.
항목 12059. 이를 필요로 하는 대상체에서의 연골 재생, 뼈 재생, 또는 힘줄 부착부 재생의 자극 방법, 이 방법은 선행하는 항목 중 어느 하나의 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함함.
항목 12060. 이를 필요로 하는 대상체에서 연골 조직, 뼈 조직, 또는 부착부 내 혈관신생의 자극 방법, 이 방법은 선행하는 항목 중 어느 하나의 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함함.
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실시예
본원에 포함된 구체예는 이제 다음 실시예를 참조하여 설명된다. 이러한 실시예는 단지 예시의 목적으로 제공되고 본원에 포함되는 개시내용은 이러한 실시예에 제한되는 것으로 해석되어서는 안되며, 오히려 본원에 제공된 교시의 결과로서 명백해지는 임의의 모든 변형을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
실시예 1 탈세포화된 힘줄 기질의 제조
인간 사체 아킬레스건은 인산염 완충 식염수(PBS), pH. 7.4로 세척된 다음, 건조, 지방 및 활막 조직이 힘줄 조직 표본으로부터 제거된다. 이후, 힘줄 조직 표본은 대략 1 내지 4 mm3 크기 조각으로 세절된 다음, 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척된다.
세절된 힘줄 조각이 1% w/v 소듐 도데실 설페이트(SDS)를 포함하는 탈세포화 용액에 침지되고, 적당히 교반된다. 세절된 물질은 잔류 SDS 및 세포 성분을 제거하기 위해 초순수를 여러 번 교환하여 조심스럽게 세척된다.
이후 물질이 급속 동결된 다음 분쇄되어 다양한 입자 크기를 갖는 비균질 물질을 생성한다. 이후 생성된 물질은 MMP 소화 완충액에 재현탁된다. 이 현탁액은 인큐베이션된다.
이후 정지 용액이 첨가되어 MMP 소화를 중단시키고; 이후 완충액이 중화 용액으로 교환된다. 이후 물질은 세척 완충액의 다회 완충액 교환으로 세척된 다음, 동결건조된다.
탈세포화는 천연 힘줄 출발 물질의 SYTO Green 11 (핵) 염색을 최종 DTM 생성물과 비교하여 분석된다. 탈세포화는 헤마토톡실린 및 에오신, 4',6-다이아미디노-2-페닐인돌(DAPI) 염색, 아가로스 겔 전기영동 및 잔여 DNA의 정량을 사용하여 추가로 확인된다. DTM 생성물은 핵 염색이 실질적으로 없다. 나머지 DNA가 약 2 ng/mL 이하로 존재한다.
MALDI-TOF 질량 분석법은 DTM 생성물 중의 TGF-β의 존재를 입증하기 위해 사용된다.
실시예 2 DTM 하이드로젤의 특징분석
DTM 하이드로젤은 본 발명의 DTM를 주사용 약제학적으로 허용 가능한 멸균 용액에 재현탁시켜 제조된다. 이후 Zuidema et al., J. Biomed. Mater. Res. B Appl. Biomater., 102:1063-73 (2014)에 따른 다음 방법이 생성된 DTM 하이드로젤 특징분석에 사용된다: (1) 하이드로젤의 겔화 시간을 결정하기 위한 시간 스위프. (2) 변형률에 대한 하이드로젤의 선형 점탄성 영역을 결정하기 위한 변형률 스위프. (3) 하이드로겔의 선형 평형 계수 안정기를 결정하기 위한 주파수 스위프. (4) 평형 계수 및 겔화 시간을 정확하게 보고하기 위해 변형률 및 주파수 스위프에서 얻은 값을 사용한 시간 스위프.
실시예 3 천연 성장 인자 프로파일 유지를 위한 DTM 가공
탈세포화 및 효소 가공 기술이 조직 재생을 촉진하기 위해 TGF-β 생활성을 보존하는 탈세포화된 힘줄 기질 퍼티를 생성하기 위해 개발되었다.
힘줄은 미흡한 재생 능력을 가지며 일반적으로 천연 유사 조직 구조보다는 흉터를 통해 치유되어 감소된 기계적 감소를 야기한다. 결과적으로, 회전근개 봉합과 같은 힘줄 봉합은 환자 나이, 파열 크기 및 기타 생물학적 요인에 따라 20 내지 90% 범위의 실패율을 갖는다. 더 강한 재생을 발생시켜 환자 결과를 개선하기 위해 힘줄 치유를 자극해야 하는 충족되지 않은 임상적 요구가 있다.
탈세포화된 세포외 기질(ECM)은 조직 고유의 단백질 및 성장 인자를 보유하고 또한 구조적 지지를 제공할 수 있기 때문에 조직 공학을 위한 재생 재료로서 흔히 활용되었다. 힘줄 리모델링을 구동하는 여러 성장 인자가 있고, 특히 전환 성장 인자 베타(TGF-β)가 재생 치유에서의 역할에 대해 연구되었다. TGF-β 신호전달은 발달 동안 힘줄의 형성에 중요한 것으로 나타났다. 부상 후, TGF-β는 일시적으로 조절되어 콜라겐 생성 및 혈관신생 자극에 의해 치유를 촉진한다. 또한, 외인성 TGF-β1 주사는 콜라겐 I형 및 III형 mRNA를 증가시키는 것으로 보고되었고, 봉합된 힘줄의 생체역학적 기능 증가가 또한 이 그룹에서 발견되었다.
목적 - (i) 탈세포화 기술 개발, (ii) 탈세포화된 힘줄을 효소적으로 소화시키는 방법 개발, 및 (iii) 탈세포화된 힘줄 기질(DTM)의 단백질 프로파일의 특징분석.
천연 힘줄 특징 분석 - 목표는 동종이식 생성물을 개발하기에 최적인 힘줄을 결정하는 것이었다. 슬개건 및 아킬레스건은 DNA 함량 및 천연 단백질 농도에 대해 특징분석되었다. 또한 각 원천(즉 근위 대 원위) 내에서 위치와 단백질 프로파일 간의 차이가 결정되었다. 도 1A-B 및 2A-B에 나타나는 바와 같이, 슬개골과 아킬레스건 사이에 현저한 차이가 발견되지 않았다. DNA 함량은 DNEasy 키트(Qiagen)를 사용하여 측정되었다. 총 단백질 함량은 BCA 키트(Thermo Scientific)를 사용하여 측정되었다. TGF-β는 힘줄 치유의 중추적인 성장 인자이므로, 각 힘줄 (슬개건 대 아킬레스건) 내의 사전가공된(천연) TGF-β 농도 및 이의 위치(근위, 중간, 원위)를 결정하는 것이 중요하다 (예를 들어, 도 2A-B 참조).
세제 없는 탈세포화 - 이 연구의 목적은 기존의 세제 기반 방법에 비해 더 온화하고 빠른 탈세포화 방법을 개발하는 것이었다. DNase는 흔히 긴 가공 시간(1-2 주)을 갖는 SDS 및 EDTA와 같은 세제와 비교되었다. 상이한 시간 및 농도의 DNase가 테스트되었다. 도 3에 나타난 바와 같이, DNase 50U를 사용한 1 시간의 탈세포는 천연 DNA 함량과 현저히 다른 것으로 결정되었고 기존의 방법과 동등한 것으로 나타났다.
콜라게네이스 소화는 단백질 함량을 최대화한다 - 효소적 소화는 탈세포화된 힘줄이 주사제 시스템 또는 퍼티와 같은 외과수술 친화적 형태로 조작될 수 있도록 한다. 효소적 소화는 성장 인자의 기능을 최대화하기 위해 수정되었다. 도 4에 나타난 바와 같이, 콜라게네이스 I, III 및 둘의 조합이 펩신 소화와 비교되었다. 모든 힘줄 샘플은 mg 조직당 μg 총 단백질(μg 단백질/mg 조직)로 측정되었다. 효소 용액을 제조하기 위해, 2 mg/1 mL PBS의 콜라게네이스 I (Life Technologies), 1 mg/1 mL PBS의 콜라게네이스 III(MP Biomedicals) 및 1 mg/1 mL 0.1 M HCl의 펩신(Sigma)이 사용되었다. 모든 샘플을 24 시간 동안 인큐베이션했다.
탈세포화된 힘줄 기질(DTM)은 TGF-β 단백질을 유지한다 - 탈세포화된 힘줄 기질(DTM)이 생활성을 유지하는지 확인하기 위해, 천연 조직의 TGF-β 수준을 가공된 생성물과 비교했다. TGF βI, II 및 III는 모두 힘줄 치유 및 봉합에 중요한 역할을 한다. 효소적 소화 및 최종 동결건조 단계 후, BCA 결과에 기반하여 샘플당 30 μg의 총 단백질이 측정되었다. 모든 DTM 샘플의 측정을 위해 TGF-β Milliplex 키트(Millipore Sigma)를 사용했다. 도 5에 나타나는 바와 같이, DTM의 최종 프로토타입은 TGFβ I, II 및 III을 보유한다. 도 6A-B에 나타나는 바와 같이, DTM 가공은 당겨지지 않고 연신되는 능력을 갖는 (도 6A) 탄성 특징을 용이하게 한다.
더 강한 재생을 발생시켜 환자 결과를 개선하기 위해 힘줄 치유를 자극해야 하는 충족되지 않은 임상적 요구가 있다. 힘줄 봉합에서 현재의 의료 표준은 부분적으로, 감소된 관절의 생체역학적 기능을 유발하는 과도한 흉터로 인해, 높은 실패율을 갖는다. 이 연구에서, 조직 재생을 촉진하기 위해 TGF-β 생활성을 보존하는 탈세포화된 힘줄 기질 퍼티를 생성하는 기술이 개발되었다. DTM에 대한 세포 반응에 초점을 맞춘 시험관내 분석 및 힘줄 봉합 촉진에서 DTM 효능을 추가로 특징분석하기 위한 생체내 회전근개 봉합 모델과 같은 추가 테스트가 수행되고 있다.
실시예 4 힘줄 탈세포화, & 효소적 소화 및 탈세포화된 힘줄 기질(DTM)의 재구성
목적은 기존의 세제 기반 방법에 비해 더 온화하고 빠른 탈세포화 방법을 개발하는 것이었다. DNase는 흔히 긴 가공 시간(1-2 주)을 갖는 SDS 및 EDTA와 같은 세제와 비교되었다. 상이한 시간 및 농도의 DNase가 테스트되었다. DNase 50U를 사용한 1 시간의 탈세포는 천연 DNA 함량과 현저히 다른 것으로 결정되었고 기존의 방법과 동등한 것으로 나타났다. DTM은 다음 절차에 따라 제조되었다.
힘줄 탈세포화 방법 - 먼저, 힘줄을 칭량하고 기록한다. 다음으로, 힘줄을 균질한 크기의 작은 조각으로 세절한다. 다음으로, 탈세포화된 세절된 조각을 DNase 용액에 넣는다 (예를 들어, 아래 표 참조; 0.5 g 힘줄/mL DNase 용액; DNase 용액: 1 mL 1X PBS 당 50 U DNase I; 2 그램 세절된 힘줄에 대해, 4 mL 1X PBS에 넣고 200 U DNase 첨가). 다음으로, 56 ℃에서 1 시간 동안 적당한 진탕과 함께 인큐베이션한다. 다음으로, DTM을 세척하기 위해, 초기 부피의 두 배의 1X PBS를 첨가한다 (1 mL DNase 용액이 첨가되는 경우, 2 mL의 1X PBS를 첨가한다). 다음으로, DTM을 70 um 셀 스트레이너에 넣고 2000 G에서 5-10 분에서 원심분리한다. 마지막으로, -80 ℃에서 30 분 이상 동결시키고, 튜브를 동결건조기에 넣는다.
Figure pct00001
효소적 소화 (주사제 DTM) - 먼저, 탈세포화된 힘줄을 칭량하고 기록한다. 다음으로, 주사제를 생성하기 위해, 0.02-0.10 g 힘줄을 칭량하고 1 mL 콜라게네이스 용액(1X PBS 중의 콜라게네이스 I형 @ 2 mg/mL, 콜라게네이스 III형 @ 1 mg/mL)을 첨가한다. 다음으로, 37 ℃에서 24 시간 동안 인큐베이션한다. 다음으로, DTM을 세척하기 위해, 초기 부피의 두 배의 1X PBS를 첨가한다 (1 mL 콜라게네이스 용액이 첨가되는 경우, 2 mL의 1X PBS를 첨가한다). 다음으로, DTM을 70 um 셀 스트레이너에 넣고 2000 G에서 5-10 분에서 원심분리한다. 다음으로, DTM을 1 mL의 PBS가 있는 새로운 미세원심분리기 튜브에 넣고, 30 초 동안 볼텍싱한다. 다음으로, 용액을 100 KDa 필터에 넣고, 12,000 G에서 5 분 동안 회전시킨다. 마지막으로, -80 ℃에서 30 분 이상 동결시키고, 튜브를 동결건조기에 넣는다.
효소적 소화 (퍼티 DTM) - 먼저, 탈세포화된 힘줄을 칭량하고 기록한다. 다음으로, 퍼티를 생성하기 위해, 0.10-0.20 g 힘줄을 칭량하고 1 mL 콜라게네이스 용액(1X PBS 중의 콜라게네이스 I형 @ 2 mg/mL, 콜라게네이스 III형 @ 1 mg/mL)을 첨가한다. 다음으로, 37 ℃에서 12 시간 동안 인큐베이션한다. 다음으로, DTM을 세척하기 위해, 초기 부피의 두 배의 1X PBS를 첨가한다 (1 mL 콜라게네이스 용액이 첨가되는 경우, 2 mL의 1X PBS를 첨가한다). 다음으로, DTM을 70 um 셀 스트레이너에 넣고 2000 G에서 5-10 분에서 원심분리한다. 다음으로, DTM을 1 mL의 PBS가 있는 새로운 미세원심분리기 튜브에 넣고, 30 초 동안 볼텍싱한다. 다음으로, 용액을 100 KDa 필터에 넣고, 12,000 G에서 5 분 동안 회전시킨다. 마지막으로, -80 ℃에서 30 분 이상 동결하고, 동결건조한다.
재구성 - 2-5 uL의 1X PBS / mg 힘줄을 첨가하고, 원하는 점조도에 도달할 때까지 추가 PBS를 첨가할 수 있다.
힘줄은 1 시간에 걸쳐 다양한 농도의 DNase (10U, 50U, 및 100U)를 사용하여 탈세포화되었다 (예를 들어, 도 7 참조). 1X PBS가 탈세포화 없음에 대해 대조군으로 사용되었다. DNA 농도는 DNEasy 키트(Qiagen)를 사용하여 결정되었다. 이 데이터는 50U 정도로 적은 DNase가 조직 탈세포화에 효과적임을 나타낸다. 도 8에 나타난 바와 같이, 50U의 DNase를 기존 세제, 1% SDS 및 0.1% EDTA와 비교했다. DNase 50U는 0.5 시간, 1 시간, 및 2 시간에 테스트된 반면, 표준 SDS 및 EDTA 프로토콜은 24-시간 탈세포화를 요구한다. DNA 농도는 DNEasy 키트(Qiagen, n=3)를 사용하여 결정되었다. 모둔 값은 탈세포화 없음으로 정규화되었다. Tukey의 HSD 다중 비교 사후 테스트는 DNase 대 SDS 및 EDTA에 의한 여러 상이한 시간의 DNase 처리 또는 탈세포화 사이에 유의한 차이가 없음을 나타낸다. 또한 다양한 탈세포 방법 및/또는 상이한 기간에 따라 슬개건 및 아킬레스건에 남은 DNA 퍼센트가 다음 표에 나타난다:
Figure pct00002
천연 힘줄은 동종이식 생성물을 개발하기에 최적인 힘줄을 결정하기 위해 특징분석되었다. 슬개건 및 아킬레스건은 DNA 함량 및 천연 단백질 농도에 대해 특징분석되었다. 본 발명자들은 또한 각 원천(즉 근위 대 원위) 내에서 위치와 단백질 프로파일 간의 차이를 결정하는 것을 목표로 했다. 힘줄의 상이한 영역 사이의 총 단백질 또는 TGFβ 함량에서 유의한 차이가 발견되지 않았다. 그러나, 아킬레스건이 더 높은 단백질 상대 함량을 가짐이 발견되었다. 아킬레스건 및 슬개건은 힘줄의 근위, 중심/중간, 원위 말단으로 이루어진 1/3 부분으로 분할되었다. (도 9A-D) 천연 힘줄의 총 단백질은 BCA 단백질 정량 키트(Thermo Scientific)를 사용하여 측정되었다. (도 9E-H) TGF-β는 TGF-β 자기 비드 패널 Milliplex 키트(Millipore Sigma, #TGFBMAG-64K-03)를 사용하여 측정되었다. ANOVA는 힘줄 영역 사이에 통계적으로 유의한 차이를 보이지 않으므로 힘줄 전체가 가공을 통해 사용될 수 있다. 두 상이한 힘줄을 비교할 때 (도 9D) 총 단백질은 상이하지 않지만 (P=0.93), (도 9H) TGF-β가 아킬레스건 및 슬개건에서 통계적으로 더 높다 (P = 0.0045).
Figure pct00003
도 10에 나타나는 바와 같이, 여과는 콜라게네이스 활성을 효과적으로 제거했다. 탈세포화된 힘줄은 DTM의 형태 인자를 개선하기 위해 콜라게네이스로 처리되었다. 100 kDa 필터는 최종 생성물에서 콜라게네이스 활성 제거에 매우 효과적이었다. ANOVA는 그룹 간에 유의한 차이가 있음을 나타낸다 (F (4, 22) =18.06, p<0.0001). 중요하게도, 천연 샘플과 100 kDa 여과된 샘플 사이의 유의한 콜라게네이스 활성 차이가 없다.
Figure pct00004
도 11에 나타난 바와 같이, 펩신으로 힘줄을 탈세포화하는 표준 방법보다 DTM에서 더 많은 생활성이 유지된다. 힘줄은 콜라게네이스 1형 (92.5 g 힘줄/g 콜라게네이스 1) 및 3형 (185 g 힘줄/ 1 g Col 3)을 포함하는 용액을 사용하여, 또는 이전에 공개된 방법(Farnebo et.al 2014, PMID: 24341855)이 주어진 펩신을 사용하여, 탈세포화 후 소화되었다. ANOVA는 F (3,11) =5.056, p=0.0193으로 그룹 간의 유의한 차이를 나타냈다. Tukey의 사후 HSD는 펩신이 현저히 적은 TGF-b를 가짐을 나타낸다 (P= 0.0249).
도 15에 나타난 바와 같이, 정규돠된 TGFb 함량은 두 가공 단계에 걸쳐 넷의 상이한 공여자로부터 네 가지 샘플에 걸쳐 있다. 각 공여자에 대해, 첫 번째 열은 천연 힘줄 중의 TGFb의 양을 나타내고, 두 번째 열은 탈세포화된 힘줄 중의 TGFb의 양을 나타내고, 세 번째 열은 소화된 힘줄 중의 TGFb의 양을 나타낸다. 가공 단계에 걸친 퍼센트 변화가 또한 다음 표에 기재된다 (퍼센트 증가는 천연 힘줄로부터 콜라게네이스 가공 후까지 측정된다):
Figure pct00005
상이한 표면에 플레이팅된 세포의 증식 차이가 조사되었다 (예를 들어, 도 12A-C 참조). 조직 배양 플레이트는 콜라겐 또는 DTM으로 코팅된 미처리 (대조군, "TC 처리") 상태로 남겨졌다. 일차 건세포(ZenBio #TEN-F)를 20,000 세포/웰로 플레이팅하고 및 플레이팅 후 (A) 48 시간 또는 (B) 7 일에 Presto Blue (Thermo Fisher)을 사용하여 세포 생존률을 정량했고, 현저하게 상이한 성장 속도가 발생했다 (C). (ANOVA = F (3,26) = 10.6, p<0.0001).
Figure pct00006
실시예 5 조작된 탈세포화된 힘줄 기질 퍼티에서 TGFβ의 보존은 재생을 촉진한다
재료 및 방법
힘줄 동종이식편
아킬레스건 및 슬개건 동종이식편을 MTF Biologics Non-Transplantable Tissue Program을 사용하여 Musculoskeletal Transplant Foundation(MTF, Edison, NJ)로부터 기증받았다. 이 연구에는 총 10명의 기증자(18세에서 61세 사이의 남성 5명, 여성 5명)가 사용되었다. 힘줄을 드라이 아이스에 전달하고 해동한 다음 영역 특성화를 위해 근위, 중간 및 원위 1/3로 해부했다. (도 23) 해부된 힘줄을 잘게 다져 분석 준비가 될 때까지 -80 °C에 보관했다; 모든 힘줄 조직에서 단 한 번의 동결-해동 주기만 수행되도록 주의했다.
힘줄 탈세포화
1시간 동안 고도로 특이적인 효소 탈세포화 용액 적용 후 세척 단계를 포함하는 특허 조직 처리 방법(DTM)을 사용하여 힘줄을 탈세포화했다. DTM 처리를, 이전에 발표된 프로토콜에 따르는 표준 탈세포화 세제 소듐 도데실 설페이트(SDS, 1%) 및 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA, 0.1%)과 비교했다. 모든 탈세포화 용액을 1X 인산염 완충 나트륨(PBS)에 희석했고, 처리되지 않은 힘줄(대조군)을 1X PBS에서만 배양했다. 제조사의 프로토콜에 따라 DNeasy Blood & Tissue Kit(Qiagen, Cat# 69506)를 사용하여 DNA를 분리했다. 분리된 DNA는 Tecan의 Infinite 200 Pro Plate 판독기(Cat# 30050303)로 판독한 260/280 비율을 사용하여 분석한 Tecan의 Nano Quant Plate로 측정했다.
단백질 단리 및 정량화
단백질 분리물을 얻기 위해, T-PER(Thermo Fisher, Cat# 78510)를 프로테아제 억제제 칵테일(1X)(Cell Signaling, Cat# 1861278)과 함께 힘줄 샘플에 첨가했다. 조직 균질기(IKA, Cat# UX-04720-51)를 사용하여 샘플을 균질화하고 단백질 추출을 위해 4°C에서 2시간 동안 두었다. 샘플은 70μm 셀 스트레이너를 통해 여과하고 10분 동안 12,000xg에서 회전시켜 정제했다. 표준 곡선을 생성하기 위해 소 혈청 알부민을 사용하여 제조업체의 프로토콜에 따라 이황화물 환원제 호환 마이크로플레이트 비신코닌산 분석(Micro-BCA, Thermo Fisher, Cat# 23252)을 사용하여 총 단백질을 정량화했다. 실험 값의 단백질 농도는 희석된 샘플 밀리리터당 단백질 마이크로그램 단위의 선형 모델을 사용하여 계산되었다. 힘줄 밀리그램당 단백질 농도는 Mettler Toledo New Classic ML 밀리그램 척도(Cat# ML104)를 사용하여 측정된, 분리 단백질을 만드는 데 사용된 샘플의 초기 건조 중량을 기준으로 했다.
TGFβ 단백질 분석
Milliplex Map TGFβ Magnetic Bead 3 Plex Kit(Millipore Sigma, #TGFBMAG-64K-03)를 사용하여 TGF를 정량화하기 위해 단백질 단리물을 사용했다. Luminex 200™ 기기 시스템(Luminex, Cat# LX200-XPON-IVD)을 사용하여 비드 패널의 제조업체 프로토콜에 따라 분석물을 검출했다. pg/mL을 계산하기 위해 데이터를 Milliplex Analyst 소프트웨어로 가져왔다. 총 단백질 삼십(30) mg을 TGFβ 분석을 위해 각 웰에 넣었고, 최종 출력은 샘플 mL당 TGFβ의 pg로 표시된다. 힘줄 mg당 TGFβ의 농도를 얻기 위해 출력 값에 희석 계수를 곱하고 단백질을 분리하는 데 사용된 샘플의 초기 중량과 다시 관련시켰다.
힘줄 소화
힘줄 퍼티를 생성하기 위해, 기계적 및 효소 처리, 여과 및 세척 단계를 포함하는 특허 공정이 개발되었다. 효소 분해의 불활성화는 Collagenase Activity Colorimetric Assay Kit(Abcam, Cat# ab196999)를 사용하여 검증되었다. 분리물을 활성이 0.35 U/mL인 콜라게네이스의 양성 대조군뿐만 아니라 콜라게네이스와 억제제로서 1,10-페난트롤린으로 구성된 음성 대조군과 비교했다. 반응 플레이트는 345nm의 흡광도에서 Tecan의 Infinite 200 Pro 플레이트 판독기를 사용하여 정량화되었다. 다음 방정식을 사용하여 제조업체 프로토콜에 따라 활성을 계산했다.
Figure pct00007
여기서:
ㅿOD = T1에서 T2로의 흡광도 변화, 배경 보정됨
ㅿT = 판독값 사이의 시간 변화(분)
0.2 = 반응 부피
D = 샘플 희석 계수
0.53 = FALGPA의 밀리몰 흡광 계수
V = 반응 웰에 추가된 샘플 부피(mL)
활성은 다시 샘플의 총 단백질과 관련되었으며 힘줄의 U/mg로 표현된다.
세포 증식 분석.
DTM 프로토콜에 따라 소화된 동결건조된 힘줄을 1X PBS에 0.03g/1mL의 농도로 재현탁하고 24웰 조직 배양 플레이트에 첨가했다. 콜라겐 코팅은 수성 아세트산에서 0.1 mg/1 mL 농도의 콜라겐 타입 1(Sigma, Cat# C-9791) 용액을 사용하여 수행되었다. 플레이트는 용액을 제거하기 전에 환기가 되는 생물안전 캐비넷에서 4시간 동안 건조되도록 두었다. 플레이트를 5분 동안 UV 살균하면서 밤새 계속 건조시켰다. 건세포는 (ZenBio, Cat# TEN-F)에서 구입하거나 CellTex에서 기증한 지방 유래 줄기 세포(ADSC)를 DMEM/F12(Thermo Fisher, Gibco, Cat# 11320033), 10% FBS(Thermo Fisher, Gibco Cat# 10437028), 1% 페니실린/스트렙토마이신(Genesee Scientific, GenClone, Cat# 25-512) 내에서 웰당 20,000개의 세포로 코팅된 웰에 플레이팅했다. 제조자의 프로토콜에 따라 Presto Blue Cell Viability Reagent(Thermo Fisher, Invitrogen, Cat# A13261)를 사용하여 2일 및 7일에 대사 활성을 측정했다. 0 내지 160,000개 세포/웰로 플레이팅된 세포로 표준 배가 곡선을 생성함으로써 흡광도 값을 세포의 알려진 값과 관련시켜 세포 수를 결정하였다. Presto Blue 염료를 세포에서 제거하고 모든 웰을 1X PBS로 세척했다. 그런 다음 RNeasy 제조업체 프로토콜에 따라 아래에 자세히 설명된 후속 RNA 분리를 위해 세포를 세포 용해 완충액에 넣었다. 코팅에 대한 세포 반응을 시각화하기 위해 생 세포 조직 이미저(Nikon Eclipse Ti 현미경, Andor Zyla sCMOS 카메라 포함, Cat# VSC-02457), Oko Lab CO2/O2 플레이트 챔버 및 공기 펌프(Cat # H201-T-UNIT-BL)를 사용하고, Peka Light Engine(Lumencor, Cat# 3-NII-FA) 으로 구동시켰다. 48시간 동안 2,880개의 이미지가 촬영되었으며 첫 번째 이미지와 마지막 이미지가 도 13에 표시된다.
분화 검정
건세포 및 ADSCs를 Cell Proliferation Assay에서 상술한 바와 같이 플레이트에 플레이팅하고 2일 또는 7일 동안 배양했다. 제조업체의 프로토콜에 따라 RNeasy Mini Kit(Qiagen, Cat# 74106)을 사용하여 플레이트에서 RNA를 분리했다. RNA 농도는 Tecan Infinite M200 Pro 플레이트 판독기에서 Nano Quant 플레이트를 사용하여 측정되었다. 제조업체의 프로토콜에 따라 ProFlex PCR 시스템(Applied Biosystems, Cat# 4483636)에서 qScript cDNA SuperMix(Quanta Bio, Cat# 95048)를 사용하여 RNA 250ng에서 cDNA를 역전사했다. 정량적 역전사 중합효소 연쇄 반응 (qRT-PCR)을 Scleraxis (Scx: 정방향 - CGAGAACACCCAAGCCCAAAC, Reverse - CTCCGAATCGCAGTCTTTCTGTC) 및 Tenomodulin (Tnmd: 정방향 - TGGGTGGTCCCTCAAGTGAAAGT, 역방향 - CTCGACGGCAGTAAATACAACAATA)의 발현을 측정하기 위해 StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Cat# 4376592) 상에서 수행했다. Scx 및 Tnmd 유전자 발현은 하우스키핑 유전자 글리세르알데하이드 3-포스페이트 탈수소효소(GAPDH: 정방향 - TGACGCTGGGGCTGGCATTG, 역방향 - GGCTGGTGGTCCAGGGGTCT)에 대해 정규화되었다. SYBR Green Master Mix(Thermo Fisher, Applied Biosystems, Cat# 4368577)를 사용하여 앰플리콘을 검출하고 PCR 열 주기를 SYBR 녹색 제조업체의 프로토콜에 따라 수행했다. 폴드 변화는 2(-ΔΔCt)를 사용하여 계산되었다.
유동측정
다양한 재구성 수준에서 DTM의 기계적 특성을 유변학적 테스트로 측정했다. DTM은 인간 DTM 1g당 1mL, 3mL, 5mL 및 7mL 또는 토끼 DTM 1g당 3mL로 재구성되었다. 테스트는 20mm 스크라이브 플레이트 측정 시스템이 장착된 연구용 레오미터(DHR2, TA Instruments)에서 수행되었으며 테스트 간격은 1100μm로 설정되었다. 모든 테스트는 37 °C에서 수행되었으며 노출된 샘플의 건조를 최소화하기 위해 솔벤트 트랩 커버를 사용했다. 37°C에서 60초의 평형 시간 후, 샘플을 100rad/sec에서 0.1rad/sec까지의 진동 주파수 스위프, 대수 스케일링, 0.1% 진동 변형, 주파수 10년당 4포인트에 노출시켰다. 진동 주파수 스위프 직후에 샘플을 1.0 Pa에서 100,000 Pa 범위의 진동 응력 스위프, 1 Hz 진동 주파수에 노출시켰다. 어떤 지점에서 진동 변형률이 1,500%를 초과하면 테스트가 즉시 종료되도록 단계 종료가 설정되었다. 모든 분석은 준비 직후와 준비 후 30분에 두 번에 걸쳐 수행되었다. 항복 응력 값은 시작 모델을 복소 탄성률 데이터에 맞춰 정량화했다. 이것은 샘플이 항복할 때 낮은 응력 안정기를 통과하는 하나의 직선과 변곡점을 통해 두 번째 직선을 피팅하는 것을 수반했다.
토끼 모델에서의 극상근 힘줄 봉합
8마리의 건강한 암컷 뉴질랜드 화이트 토끼(3-3.5kg, 초기 파열 당시 28주령)를 이 12주 연구에 사용했다. 토끼는 케타민/아세프로마진을 피하주사하여 마취하고 털을 깎은 후 절개부위를 반복적으로 세척하여 멸균하였다. 피부를 2-3 cm 절개하고 극상근 힘줄을 대결절에서 외과용 메스로 분리한 후 자발적인 재부착을 방지하기 위해 힘줄 자유단에 Penrose 드레인을 삽입하였다. 근막은 3-0 흡수성 편조 Vicryl 봉합사를 사용하여 봉합하고 상처는 매립 흡수성 4-0 Vicryl 봉합사로 피하 패턴으로 봉합했다. 토끼는 만성 힘줄 파열 모델을 개발하기 위해 6주 동안 규칙적인 활동을 허용했다. 6주 후, 토끼는 힘줄 봉합 수술을 받았다. 이전에 언급한 것과 동일한 마취 및 멸균 기술을 사용하여 Penrose를 식별 및 제거하고 2개의 골결찰 터널을 통해 극상근 힘줄을 대결절의 풋프린트에 고정했다. 대결절 풋프린트의 제조는 잔존 연조직을 세척하고 표면 피질골을 트리밍함으로써 행해져서, 출혈이 있는 연골하골을 얻었다. 고강도 봉합사(#2-0 FiberWire, Arthrex, Naples, FL, USA)를 골횡터널과 극상근 힘줄에 통과시킨 후 표준 방식으로 묶었다. 힘줄 봉합 수술 후, 한 그룹은 이전에 설명한 DTM 프로토콜에 따라 처리된 토끼 DTM(3mL 중 1g)을 골건 접합부 근처의 극상근 힘줄 아래에 배치했다(n=4). 대조군 동물은 봉합 절차만 받았다(n=4). 봉합 절차 8주 후에 동물을 안락사시켰다. 극상근과 힘줄이 있는 상완골과 견갑골 전체를 조직학적 분석을 위해 채취했다. 반대쪽 어깨도 수집되었다.
조직학적 분석
봉합 전용 그룹 및 봉합 + DTM 그룹의 극상근 힘줄을 1cm x 1cm 정사각형으로 절단하고 Neg-50(Richard-Allan Scientific, Cat# 6502)으로 냉동 매립했다. 절편을 6 μm로 자른 다음 4',6-디아미디노-2-페닐인돌(DAPI; Abcam, Cat# ab104139)이 포함된 Fluroshield Mounting Media로 염색했다. 토끼 어깨를 4% 파라포름알데히드(PFA)에서 2일 동안 고정하고 4주 동안 탈석회화하고 4°C에서 19% 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 용액에서 흔들어 용액을 격일로 교체했다. 1시간 주기로 설정된 Tissue-Tek VIP 6 AI Vacuum Infiltration Processor (Sakura, Cat# 6040)를 사용하여 파라핀 포매를 위해 어깨를 절단하고 처리했다. 뼈를 파라핀에 포매하면 절편을 6μm로 절단했다. 토끼 어깨의 Hall Brundt's Quadruple(HBQ) 염색을 수행하여 연골을 파란색으로, 뼈를 빨간색으로 시각화했다. 표준 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색은 Biospecimen Core Resource Standard Operating Procedure(H001, V4)에 따라 수행되어 기질 염색을 분홍색으로 시각화하고 핵은 진한 파란색/검은색으로 시각화했다.
통계적인 분석.
Graph Pad Prism 8을 사용하여 통계 분석을 수행하여 모든 데이터를 플로팅했다. 데이터는 각각의 공여자가 박스 및 휘스커 그래프에서 단일 점을 나타내도록 플로팅되었으며, 중심선은 중앙선을 나타내고, 제1 및 제3 사분위수는 각각 상자의 상단과 하단에 있다. 위스커는 관찰된 최고 및 최저 값까지 확장된다. 통계적 차이는 데이터 세트와 소정의 관계 정의 하에서 ANOVA, Tukey의 사후 비교 및 독립표본 t-검정에 의해 결정되었다.
탈세포화된 힘줄 기질 (DTM)을 위한 동종이식 소싱
아킬레스건과 슬개건은 가장 쉽게 이용 가능하고 풍부하며 접근 가능한 동종이식 힘줄 조직이다. 이 두 힘줄에 걸쳐 서로 다른 수준의 고유 생활성이 있는지 여부를 확인하기 위해 Multiplex (n=6-10 개별 기증자)을 사용하여 기질-결합 TGFβ 함량을 측정했다. 또한, 이러한 힘줄의 혈관성은 종종 "유역 영역"으로 설명되는 중앙 영역에서 감소하는 것으로 알려져 있기 때문에 기질 결합 TGFβ가 힘줄 내의 위치에 따라 달라지는지 이해하는 것을 목표로 했다. 아킬레스건과 슬개골 동종이식편은 전체 힘줄 길이를 1/3로 나누어 근위부, 중간부, 원위부로 육안으로 해부하였다(도 23). 그런 다음 각 영역 내의 힘줄을 잘게 자르고 총 단백질 및 TGFβ의 정량화를 위해 단백질 분리물로 분해했다. 아킬레스건과 슬개건 사이(도 16A, p=0.7413) 또는 힘줄 내의 근위부, 중간부, 원위부 사이(도 16B-C, p=0.368 및 p=0.9893)에서 총 단백질 함량의 유의한 차이는 발견되지 않았다. 그런 다음 단백질 분리 물 내에서 TGFβ 이소형을 분석하였고, 아킬레스건 또는 슬개건 내의 근위부, 중앙부 및 원위부 사이의 TGFβ 함량에서 유의한 차이는 확인되지 않았다. 그러나, TGFβ1 및 TGFβ2는 아킬레스건에 비해 슬개건에서 유의하게 더 높았다(도 16G-I, 각각 p=0.0137 및 p=0.0283). 힘줄의 TGFβ 함량은 성별에 따라 차등적으로 발현되지 않았다. (도17, p=0.7413).
탈세포화 단계는 세포 내용물을 효과적으로 제거한다
탈세포화 과정의 효능을 검증하기 위해, DTM에 대한 특정 효소 탈세포화 프로토콜을 24시간 동안 1% SDS 또는 0.1% EDTA를 사용하는 이전에 공개된 세제-기초 기술과 비교했다. DNEasy 혈액 및 조직 키트를 사용하여 DNA를 분리한 후 NanoQuant 플레이트 판독기를 사용하여 DNA 함량을 정량화했다. 모든 탈세포화 기술은 PBS에 비해 DNA를 효과적으로 제거했으며(도 17F, p<0.0001), Tukey의 HSD 다중 비교 사후 테스트로 SDS 또는 EDTA와 비교하여 DTM 공정을 사용하여 탈세포화 후 DNA 함량 간에 유의한 차이가 없음을 발견했다(도 17F, 각각 p=0.9852 및 p=0.4753). DNA 제거는 DAPI로 천연 또는 DTM 힘줄을 절편화하고 염색하여 조직학적으로 확인되었다. (도 17C, 17D).
힘줄 처리는 TGFβ 생활성을 유지하고 힘줄 퍼티를 생성한다.
DTM의 외과적 유용성을 향상시키기 위해, 결합된 아킬레스건과 슬개건으로 구성된 탈세포화된 건 동종이식편을 효소적으로 분해하여 치밀한 기질을 분해하고 성형가능한 형태 인자를 생성했다. 잔류 효소 활성은 여과 단계를 사용하여 제거되었다. (도 10A, p=0.1407) DTM 처리된 동종이식에서 주요 생물학적 성장 인자 TGFβ의 보유를 Multiplex를 사용하여 측정했다. 천연 힘줄에 비해 DTM 그룹의 TGFβ1(도 10B, p=0.5353) 또는 TGFβ2(도 10C, p=0.2891) 함량 간에는 유의한 차이가 발견되지 않았다. TGFβ3은 천연 힘줄에 비해 DTM에서 유의한 증가를 보였다(도 10D, p=0.0189).
DTM에 대한 최적화된 소화 프로토콜은 연신 및 개질될 수 있지만 구조적 무결성을 유지하는 가단성 퍼티를 생성했다(도 6A, 6B). DTM 제품의 유변학적 특성을 다양한 재구성 수준(1, 3, 5 또는 7mL PBS에 희석된 힘줄 1g)에 걸쳐 측정하여 샘플 강성과 구조 강도를 결정했다. 진동 응력은 샘플에 증가하는 힘(1.0 - 1000,0000 Pa)을 추가하고 힘이 제거된 후 샘플의 탄성을 측정하여 결정되었다. 진동 응력 스위프는 3 및 5mL 희석에서 중첩되는 기계적 특성과 함께 적용되는 전체 주파수 범위에 걸쳐 모든 희석에서 샘플이 탄성 우세 거동을 나타냄을 나타낸다. (도 6F) 예상대로 복잡한 탄성률 복소 탄성률 안정기(시료 강성) 및 항복 응력(시료 강도) 값은 희석이 증가함에 따라 감소했다. 표: DTM의 유변학적 특성 요약) 퍼티-유사 총 구조적 특성은 1-5mL PBS 내 1g의 희석액에서 유지되었으며, 7mL에서는 조직 퍼티의 포화 한계를 초과했다.
DTM의 유변학적 특성 요약
Figure pct00008
DTM은 세포 증식 및 경화증 및 테노모듈린(Tenomodulin) 발현을 촉진한다
DTM에 대한 세포 반응은 세포 증식 및 유전자 발현 분석을 사용하여 시험관 내에서 특성화되었다. 세포 증식은 DTM 코팅된 플레이트에서 배양된 건세포 및 ADSC 모두에 대해 Presto Blue Assay를 사용하여 측정되었으며 개별 세포 유형에 대한 표준 배양 조건과 다시 비교되었다. 건세포의 초기 파종 후 2일(도 13A, p=0.0217) 및 7일(도 13B, p=0.0004) 모두에서, DTM 코팅된 플레이트는 표준 배양 조건(콜라게네이스 코팅된 플레이트)에 비해 훨씬 더 많은 건세포를 가졌다. 48시간 동안 10분마다 촬영한 라이브 이미지를 사용하여 개별 코팅에 대한 건세포 활성 및 형태의 변화를 시각화했다. (도 13E-13J) 그럼에도 불구하고, 세포 플레이팅 시점과 48시간 후 촬영한 이미지는 표준 조직 배양(도 13H) 또는 콜라겐 코팅 플레이트(도 13I)과 비교하여 DTM에서 건세포가 더 빠르게 부착하고, 초점 부착이 증가했으며, 더욱 천연 유사 세포 형태를 나타낸다(도 13J). 시간 경과 비디오는 Presto Blue에 의해 정량화된 DTM 코팅에서 증가된 증식을 나타낸다(도 13A-B). 건세포와 유사하게, ADSC는 플레이팅 7일 후 대조군 조건에 비해 DTM 코팅된 플레이트 상에서 가속된 성장을 보였다(도 13D, p=0.0315).
DTM 대 대조군 플레이트에서의 배양 후 세포 표현형을 특성화하기 위해, Presto Blue 반응 및 qRT-PCR을 사용하여 측정된 건원성(tenogenic) 마커인 Tenomodulin(Tnmd) 및 Scleraxis(Scx)의 발현 이후 mRNA를 건세포 및 ADSC로부터 수집하였다. Tnmd 발현은 DTM-코팅된 플레이트에서 배양된 건세포 및 ADSC 모두에서 더 높은 경향을 보였으나, 이러한 경향은 배양 7일까지 유지되지 않았다. (도 24A-24B) 역으로, Scx 발현은 2일째에 두 세포 유형 모두에서 변하지 않았지만, 7일째에는 대조군에 비해 DTM에서 100-800배 더 높은 발현이 있었다(도 24C-24D).
DTM은 부착부의 재생을 개선하는 회전근개 봉합을 향상시킨다.
시험관내 생물활성이 재생 반응으로 해석되는지를 결정하기 위해, 뉴질랜드 백색 토끼에서 생체내 파일럿 연구가 실행되었다. 많은 RCR 실패는 만성 부상과 관련이 있기 때문에 만성 회전근 개 파열이 있는 토끼 모델을 사용했다. (도 14A) DTM을 받은 그룹에서 퍼티(3mL PBS에 희석된 1mg 토끼 DTM)를 큰 결절에 성형하고 극상근 힘줄을 대조군에서와 같이 대결절에 고정했다. (도 14B-14C) 힘줄-뼈 경계면에서의 HBQ 염색은 DTM이 접합부에서 석회화된 연골 전이의 형성을 촉진한다는 것을 나타낸다. (도 9D-E) 힘줄 자체 내에서 H&E 염색은 DTM으로 강화된 힘줄에서 증가된 세포질을 나타낸다. (도 9F-G).
논의
이 연구는 RCR 동안 힘줄 재생을 촉진하는 장기 목표를 가진 새로운 DTM 퍼티에서 생활성의 특성화를 설명한다. 대부분의 회전근개 파열은 어깨 관절의 기능 저하와 통증을 유발하기 때문에 외과적 봉합은 봉합이 가능한 것으로 보이는 전층 회전근개 파열에 대한 황금 표준 치료법으로 남아 있다. 불행하게도, RCR은 계속해서 높은 임상적 실패율을 보이며 대부분의 실패는 힘줄-뼈 경계면에서 발생한다. 수술 기술과 기구의 발전에도 불구하고, RCR 후 재파열은 특히 재파열률이 평균 50% 이상인 만성 회전근 개 파열에 대한 RCR의 경우 여전히 우려 사항으로 남아 있다. 회전근개 봉합술 후 좋지 않은 임상 결과를 초래하는 근본적인 요인은 성인 힘줄이 최소한의 재생 능력을 가지고 있고 섬유성 반흔 조직 형성을 통해 치유되어 부분적 또는 전체적 재파열로 이어지는 열악한 생체역학을 초래한다는 것이다. 기여 요인은 감소된 성장 인자 생체이용률, 봉합 부위의 혈관성 감소, 적절한 건 재생에 필요한 적절한 건 전구 세포의 부재를 포함한다.
RCR의 성공에 대한 힘줄 치유의 중요성을 감안할 때, 섬유증을 감소시키고 조직 재생을 촉진하기 위한 새롭고 쉽게 번역할 수 있는 접근법을 찾는 임상적 필요성이 남아 있다. 현재 RCR을 강화하도록 설계된 제품은 거의 없으며 임상 효능 연구를 통해 최소한의 이점만 보고되었다. 임상 실습에서 힘줄 동종이식편의 제한적인 사용은 아킬레스건, 슬개건 또는 대퇴사두근 건 동종이식편을 사용한 대규모 RCR 수술 6개월후 평가에서 MRI 평가에 의해 100% 이식편 실패를 보여주는 초기 연구의 결과일 가능성이 높다. 최근의 힘줄 동종이식 연구에서는 현대적인 외과적 기술이 기능적 개선을 가져올 수 있다고 시사하지만, MRI 이미지는 힘줄 동종이식의 조직 재생 불량과 10년에 57%의 구조적 실패율을 나타낸다. 힘줄 동종이식편의 대안으로 진피 및 소장 점막하 동종이식편이 RCR에 대해 테스트되었다. 이러한 동종이식편은 힘줄의 독립형 생체역학적 특성이 부족하지만 일부 초기 임상 데이터는 임상적 이점을 시사한다. 그러나 진피 동종이식편을 사용하여 미니 개방 대규모 RCR을 시행한 24명의 환자에 대한 3년 추적 조사에서 환자의 24%만이 "부분적으로 온전한" 봉합을 받은 것으로 나타났다. 다양한 유형의 동종이식편에 대한 RCR에 대한 대규모 임상 연구는 부족하며, 동종이식편으로의 조직 재성장 또는 부착부 구조의 재생에 대한 강력한 증거를 보여주는 연구는 없다.
이 연구에서, 힘줄-뼈 경계면에서 치유를 촉진하기 위해 탈세포화된 힘줄 동종이식 퍼티(DTM)를 형성하는 처리 기술이 개발되었다. 탈세포화는 동종이식편 및 질병 전파에 대한 호스트 염증 반응을 예방하는 중요한 단계로 간주된다. 기존의 힘줄 동종이식편 처리 기술과 달리, 힘줄 기질 고유의 생체 활성을 유지하기 위해 세제 없이 세포 내용물을 제거했다. 이전 연구에서는 세제-기초 방법이 힘줄의 연조직 기질에 가혹하고 치유 과정에 필수적인 단백질과 성장 인자를 제거한다는 것을 나타낸다. 또한, 힘줄 동종 이식편 탈세포화를 위한 세제-기초 처리 시간은 처리 시간이 24시간에서 시작하여 1주일 이상으로서 매우 길다. 특정 효소적 탈세포화 기술은 세포 제거에서 기존 세제(SDS 및 EDTA)만큼 효과적이었으며 처리 시간은 1시간만 필요했다.
전통적인 힘줄 동종이식편의 또 다른 문제는 형태 인자가 현대 관절경 외과적 RCR 기술을 사용하는 증강에 최적화되지 않고 세포가 봉합 동안 조밀한 천연 힘줄 구조에 침투하는 능력을 거의 나타내지 않는다는 것이다. 기계적 천공은 세포가 탈세포화된 힘줄 동종이식편으로 침투하는 것을 개선하는 것으로 나타난 전략 중 하나이다. 대안적으로, 펩신을 사용한 효소 소화는 일반적으로 외과적 적용 및 세포 이동을 위한 동종이식편 형태 인자를 개선하기 위해 힘줄, 근육 및 심장 조직을 소화하는 데 사용되었다. 그러나 펩신은 교원질 및 비교원질 기질 단백질을 무차별적으로 절단하여 천연 힘줄의 생체 활성을 변경하는 비특이적 효소이다. 여기서, 프로토콜은 기계적 및 효소 처리, 여과 및 세척을 위해 개발되어 천연 힘줄과 유사한 점탄성 특성을 가진 퍼티와 같은 힘줄 동종이식편을 생성한다.
DTM에 대한 중요한 설계 기준은 천연 힘줄 기질 내에서 발견되는 TGFβ 매개 생활성을 유지하는 것이었다. 최근의 기계론적 연구에서 TGFβ 신호가 신생아 힘줄 재생 동안 흉터 없는 치유와 성인의 섬유성 봉합 사이의 차등 경로인 것으로 밝혀졌기 때문에 이 성장 인자에 초점을 맞췄다. 흥미롭게도 발달 과정에서 TGFβ 계열을 제거하면 모든 힘줄이 완전히 손실된다. 신생아 봉합 동안 TGFβ는 건세포 모집, 증식 및 분화를 촉진한다. TGFβ는 콜라겐 생성 및 혈관 신생을 자극하여 치유를 촉진하도록 일시적으로 조절된다. 치료학적으로, 외인성 TGFβ1 주사는 콜라겐 유형 I 및 III mRNA를 증가시키고 RCR 후 생체역학적 기능을 향상시키는 것으로 보고되었다. 어떤 힘줄이 제품에 대한 최상의 동종이식 공급원이 될지 초기에 결정하기 위해 아킬레스건과 슬개건 모두에서 기질- 결합 TGFβ의 수준을 비교했다. 두 개의 힘줄 공급원과 힘줄의 일부 사이의 차이는 기능적으로 상당한 것으로 간주되지 않았다; 따라서 각 공급원의 전체 힘줄을 사용하여 DTM 제품을 생성했다. 또한, 기증자의 연령(18~61세)이나 성별에 관계없이 테스트한 모든 힘줄 동종이식편에는 TGFβ1-3이 포함되어 있는 것으로 나타났다.
임의의 특정 이론에 구애됨이 없이, DTM 제품 내에 TGFβ를 보존함으로써, 일반적으로 힘줄 동종이식에서 결여된 생활성이 유지될 수 있다. 구체적으로, 표준 배양 조건과 비교하여 시험관 내 DTM에서 배양할 때 건세포와 ADSC 모두의 세포 증식이 개선됨이 입증되었다. 유전자 분석은 또한 DTM이 두 세포 유형 모두에서 Scleraxis(Scx) 및 Tenomodulin(Tnmd)의 발현을 촉진한다고 제안했다. 이러한 힘줄-특이적 전사 인자는 건세포의 발달, 봉합 및 성숙과 관련되어 있으므로 테스트되었다. Scx는 힘줄 발달에 필요한 전사 인자이고, Tnmd는 건세포 증식 및 성숙에 필요한 당단백질 세트를 나타낸다. 쥐 모델에서 Scx와 Tnmd가 공동 발현되고 scleraxis가 힘줄 전구체와 건세포에서 발현되는 초기 유전자 마커로 작용하는 반면 tenomodulin은 건세포 성숙도를 나타내는 후기 유전자 마커로 작용하는 것으로 나타났다. 이 데이터는 임의의 특정 이론에 얽매이지 않고 처리 기술이 DTM에서 TGFβ 생활성을 유지하여 건세포 및 줄기 세포 증식, 분화 및 건세포 성숙을 촉진한다는 것을 함께 제안한다.
전임상 동물 연구는 힘줄 봉합을 위한 신규 기술의 효능을 입증하는 중요한 단계이다. 그러나 많은 정형외과 부상과 달리 설치류 모델은 RCR에 대한 적용 가능성이 제한적이다. 설치류 극상근은 더 작은 비율의 적용 범위를 가지며 인간에서 관찰되는 비가역적 지방 침윤 및 그에 따른 낮은 치유율이 부족하다. 그 결과, RCR의 효능을 탐색하기 위해 일반적으로 대형 동물 모델이 필요하며, 토끼와 양 모두 더 전환적으로 관련된 RCR 모델로 개발되었다. 중요하게도, 만성 부상 토끼 모델은 근육 위축, 지방 침윤 및 뼈 아치 아래로의 견갑하 힘줄의 이동을 나타내며, 이는 인간에서의 대량 파열과 매우 유사하다고 제안된다.
이러한 이유로, 만성 회전근개 부상의 토끼 모델을 사용하여 파일럿 연구를 수행하였다. 회전근개의 봉합 동안 DTM 퍼티를 대결절에 확장시키고 극상근 힘줄을 2개의 경골 터널을 통해 고강도 봉합사를 사용하여 대결절에 고정했다. 이 모델은 이전에 대규모 회전근개 부상과 유사한 만성 회전근개 파열과 일치하는 병리학적 변화를 허용하는 것으로 나타났다. 이 기술은 오늘날 퇴행률을 줄이기 위해 사용되는 현대 관절경 접근법과 유사하다. 컨트롤 봉합은 유사하지만 DTM을 적용하지 않았다. 8주간의 치유 후 조직학적 봉합을 평가했다. DTM 봉합 그룹에서 부착부의 개선된 조직학이 관찰되었다. 구체적으로, DTM 봉합 동물은 뼈-힘줄 경계면에서 석회화된 연골 영역과 함께 부착부에서 형성되는 종방향으로 배향된 콜라겐 섬유를 갖는 것으로 밝혀졌다. Gigante 등은 회전근개 파열의 발병기전을 보고하면서 일반적으로 비-파열 힘줄 부착부에서 보이는 석회화된 섬유연골과 비교할 때 회전근개 파열에서 연골형성 계통의 특징인 둥근 세포를 일관되게 발견했다. RCR 단독 그룹이 정상 부착부의 고도로 정렬된 석회화된 섬유연골 영역이 결여된 연골 세포와 표현형적으로 일치하는 세포를 갖는 것으로 나타났기 때문에 결과는 유사한 결과를 제시했다. 만성/대량 파열에서 RCR의 실패는 특히 석회화된 연골 영역이 결여된 기계적으로 약한 섬유혈관 흉터의 형성과 관련이 있다. 또한, RCR 단독에 비해 DTM 봉합 근처의 힘줄 영역에서 더 많은 세포가 관찰되었다. 이러한 관찰은 DTM이 세포 증식을 촉진한다는 것을 시사하는 시험관 내 데이터와 일치한다.
DTM은 더 나은 조직 재생을 촉진하기 위해 생체 활성을 유지할 수 있는 동종이식 가공에 대한 적응을 나타낸다. 힘줄 동종이식편을 DTM의 기초로 활용함으로써, 임상 실습에서 사용되는 이소성 조직(예: 진피 또는 장 점막하조직) 기준과 비교하여 힘줄의 조직-특이적 생체 활성을 유지하는 것을 목표로 했다.
실시예 6 탈세포화된 힘줄 기질(DTM)의 기계적 물성 측정 - 유변학적 조사
DTM(Decellularized Tendon Matrix) 퍼티의 최적의 재구성 농도를 설명하기 위해, 제안된 용매인 PBS에서 DTM의 다양한 농도의 생체역학적 특성을 유변학을 사용하여 정량화한다. 유변학 테스트는 예를 들어 다음에 따라 설계되고 결과가 해석될 수 있다: azom.com/article.aspx?ArticleID=10219, 이는 모든 목적을 위해 전체적으로 참조로 포함됨.
테스트되는 샘플은 1) 더 액체처럼 행동하는 샘플, 2) 최적 농도보다 액체가 더 많은 샘플, 3) 최적 농도에 있는 샘플, 4) 최적 농도보다 더 고체인 샘플, 및 5) 더 고체처럼 행동하는 샘플을 포함한다.
다양한 유변학 테스트가 수행된다. 예를 들어, 1) 전단 조건 범위에 걸친 점도, 여기서 제로 전단 점도는 정지 상태의 재료의 점도를 말하며 크리프에 대한 저항의 주요 결정 요인이며, 점도가 더 낮은 전단 응력에서 더 높을 때, 변형에 대한 더 높은 저항이 있음; 2) 겔 또는 기질의 강도를 측정하고 흐름을 시작하는 데 필요한 응력을 나타내는 항복 응력 테스트, 항복 응력 값이 높을수록 샘플이 더 안정함을 나타냄; 및 3) 점탄성 특성의 최적화, 여기서 재료의 점탄성 스펙트럼은 주파수 스위프을 수행함으로써 결정되며, 낮은 주파수에서 고체-유사 거동은 안정성을 나타냄. 낮은 위상 각은 재료가 액체가 아닌 고체로 거동함을 나타낸다.
여러 농도의 DTM을 테스트하고 각 샘플의 고체 대 액체 거동, 강도 및 안정성을 유변학 수행을 통해 특성화한다. 일반적으로 유변학적 테스트는 재료에 적용된 응력에 따른 변형량을 측정한다.
이 보고서는 취급 특성에 대한 유변학적 상관 관계를 확인하기 위해 제공된 5개의 연조직 제품 샘플에 대해 수행된 테스트를 설명한다. 조사된 주요 유변학적 특성은 낮은 응력 조건에서 샘플 강성과 구조 강도였다. 제공된 연구 샘플에는 다음과 같은 라벨이 지정되었다:
Figure pct00009
장비 & 방법
20mm 스크라이빙 플레이트 측정 시스템이 장착되고 시험 갭이 1100㎛로 설정된 연구용 레오미터(DHR2, TA Instruments)에서 시험을 수행했다. 시험은 37°C에서 수행되었다. 노출된 가장자리에서 시료의 건조를 최소화하기 위해 용매 트랩 덮개를 사용했다.
일치하는 바이알의 내용물을 조합하고 분석을 위해 레오미터에 분취량을 로딩하기 전에 60초 동안 와류 혼합기로 격렬하게 혼합하여 샘플을 재구성했다.
진동 주파수 스위프
37℃에서 60초의 평형화 시간 후, 샘플을 진동 주파수 스위프, 100 rad/s 내지 0.1 rad/s, 대수 스케일링, 0.1% 진동 변형률, 주파수 10 당 4 포인트에 노출시켰다.
진동 응력 스위프
진동 응력 스위프 발진 주파수 스위프 직후에 샘플을 1.0 Pa 내지 100,000 Pa 범위의 진동 응력 스위프, 1Hz 발진 주파수에 노출시켰다. 어떤 지점에서 진동 변형률이 1500%를 초과하면 테스트가 즉시 종료되도록 단계 종료가 설정되었다.
이러한 분석은 준비 직후 샘플에 대해 이중으로 수행된 다음 준비 후 30분 동안 반복되었다.
진동 응력 스위프: 도 25는 복소 탄성률(Pa) 대 진동 응력(Pa)을 도시한다; 도 26은 복소 탄성률(Pa) 대 진동 응력(Pa) - 모든 샘플을 도시한다; 도 27은 복소 탄성률(Pa) 대 진동 응력(Pa) - 토끼 샘플만을 도시한다; 도 28은 위상각(°) v 진동 응력(Pa)을 도시한다.
새로 제조된 재료의 안정기 값
Figure pct00010
경화된 물질의 안정기 값
Figure pct00011
새로 제조된 재료의 항복 응력
Figure pct00012
경화된 물질의 항복 응력
Figure pct00013
*항복 응력 값은 시작 모델을 복소 탄성률 데이터에 맞춰 정량화했다. 이것은 샘플이 항복할 때 낮은 응력 안정기를 통과하는 하나의 직선과 변곡점을 통해 두 번째 직선을 피팅하는 것을 수반했다.
진동 주파수 스위프: 도 29는 저장 탄성률(Pa) 및 손실 탄성률(Pa) v 각 주파수(rad/s) - 샘플 A를 도시한다; 도 30은 저장 탄성률(Pa) 및 손실 탄성률(Pa) 대 각진동수(rad/s) - 샘플 B를 도시한다; 도 31은 저장 탄성률(Pa) 및 손실 탄성률(Pa) v 각 주파수(rad/s) - 샘플 C를 도시한다; 도 32는 저장 탄성률(Pa) 및 손실 탄성률(Pa) v 각 주파수(rad/s) - 샘플 D를 도시한다; 도 33은 저장 탄성률(Pa) 및 손실 탄성률(Pa) v 각 주파수(rad/s) - 샘플 E를 도시한다.
일부 구체예에서, 진동 응력 스위프는 샘플이 낮은 응력 조건 하에서 잘 형성된 탄성 구조를 나타낸다는 것을 나타낸다. 일부 구체예에서, 복잡한 탄성률 복소 탄성률 안정기(시료 강성) 및 항복 응력(시료 강도) 값은 희석이 증가함에 따라 감소했다. 샘플 E - 농도 3ml/1g RABBIT 테스트 결과는 구조적 특성에서 샘플 C - 농도 5ml/1g 인간과 가장 유사함을 나타낸다. 진동 주파수 스위프의 결과는 진동 응력 스위프에 대해 나타난 결과와 상관관계가 있는 샘플에 대한 탄성률 값의 범위를 나타낸다. 샘플은 적용된 주파수의 전체 범위에 걸쳐 탄성 지배적인 거동을 나타낸다.
진동 응력 스위프
진동 응력 스위프 테스트는 샘플 전체에 존재하는 유연한 고체 구조의 강성과 강도의 간단한 정량화를 제공한다. 이 테스트는 샘플에 발생하는 변형 및/또는 흐름을 모니터링하면서 작은 증분 정현파(즉, 시계 방향과 시계 반대 방향) 전단 응력을 샘플에 적용하는 것을 수반한다. 테스트의 초기 단계에서 응력은 구조를 보존하기에 충분히 낮다. 이 구조의 존재는 낮은 값에서 위상각 안정기로 표시되는 지배적인 탄성 변형(점성 유동보다는)에 의해 드러난다. 위상각은 샘플의 탄성 또는 점성 응답의 상대적 우세를 나타내는 척도이며 이상적인 탄성 물질(즉, 완벽한 고체)의 경우 0°에서 이상적인 점성 물질(완벽한 액체)의 경우 90°까지이다. 이 단계에서 샘플 강성, 복소 탄성률도 안정기 값으로 유지된다. 테스트가 진행됨에 따라 가해진 응력이 증가하면서 항복 프로세스가 진행됨에 따라 결국 샘플 구조가 중단된다.
이는 탄성 응답의 손실(위상각 상승) 및 이에 수반되는 강성 감소(복소 탄성률 감소)로 나타난다.
진동 응력 스위프는 또한 적용된 응력의 함수로서 저장 탄성률(G') 및 손실 탄성률(G")로 나타낼 수 있다. 저장 및 손실 탄성률은 탄성 변형을 통해 에너지를 저장하거나 각 진동 변형 주기 동안 점성 흐름을 통해 에너지를 소산하는 재료의 각각의 능력을 측정한 것이다.
진동 주파수 스위프
진동 주파수 스위프는 샘플에 작은 정현파(시계 방향 다음 반시계 방향) 스트레인을 적용하고, 진동 주파수를 스위핑하고, 점탄성 정보를 얻을 수 있는 결과적인 응력 응답을 모니터링하는 것을 수반한다. 테스트는 다양한 변형 시간 척도에 걸쳐 점성 또는 탄성 거동의 상대적 비율을 식별하는 데 사용된다.
진동 주파수 스위프의 결과는 일반적으로 점탄성 v 저장(G') 및 손실 탄성률(G") v 주파수의 시간 척도 프로파일로 표시된다. 저장 및 손실 탄성률은 탄성 변형을 통해 에너지를 저장하거나 각 진동 변형 주기 동안 점성 흐름을 통해 에너지를 소산하는 재료의 각각의 능력을 측정한 것이다. 간단히 말해서 테스트는 재료의 "우세한 점탄성 응답"을 설정할 수 있다.REFERENCES
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Claims (40)

  1. 기질 메탈로프로티네이스 (MMP) 소화된 힘줄 조직을 포함하는 탈세포화 힘줄 기질 (DTM) 조성물 , 여기서 특정 유체의 양 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 및 약 106.5 Pa 사이의 복소 탄성률 안정기를 가짐.
  2. 제 1항에 있어서, 유체의 양은 약 1 ml 및 약 7 ml 사이인 조성물.
  3. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 105 Pa 및 약 106.5 Pa 사이의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
  4. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104.5 Pa 및 약 105.5 Pa 사이의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
  5. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 104 Pa 및 약 105 Pa 사이의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
  6. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.5 Pa 및 약 105 Pa 사이의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
  7. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 3 ml 및 약 5 ml 사이의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103.5 Pa 및 약 105.5 Pa 사이의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
  8. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 및 약 104.5 Pa 사이의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
  9. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 3 ml 및 약 7 ml 사이의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 및 약 105.5 Pa 사이의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
  10. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 1 ml 및 약 7 ml 사이의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 103 Pa 및 약 106.5 Pa 사이의 복소 탄성률 안정기를 가지는 조성물.
  11. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 및 약 102 rad/s 사이의 각진동수에서 약 105 Pa 및 약 106.5 Pa 사이의 저장 탄성률을 가지는 조성물.
  12. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 1 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 및 약 102 rad/s 사이의 각진동수에서 약 104.5 Pa 및 약 106 Pa 사이의 손실 탄성률을 가지는 조성물.
  13. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 및 약 102 rad/s 사이의 각진동수에서 약 104 Pa 및 약 105.5 Pa 사이의 저장 탄성률을 가지는 조성물.
  14. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 및 약 102 rad/s 사이의 각진동수에서 약 103.5 Pa 및 약 105 Pa 사이의 손실 탄성률을 가지는 조성물.
  15. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 및 약 102 rad/s 사이의 각진동수에서 약 103 Pa 및 약 105.5 Pa 사이의 저장 탄성률을 가지는 조성물.
  16. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 5 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 및 약 102 rad/s 사이의 각진동수에서 약 103 Pa 및 약 105 Pa 사이의 손실 탄성률을 가지는 조성물.
  17. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 및 약 102 rad/s 사이의 각진동수에서 약 102.5 Pa 및 약 104.5 Pa 사이의 저장 탄성률을 가지는 조성물.
  18. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 7 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 및 약 102 rad/s 사이의 각진동수에서 약 102 Pa 및 약 104 Pa 사이의 손실 탄성률을 가지는 조성물.
  19. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 및 약 102 rad/s 사이의 각진동수에서 약 103.5 Pa 및 약 105.5 Pa 사이의 저장 탄성률을 가지는 조성물.
  20. 제1항 또는 2항에 있어서, 약 3 ml의 유체 및 약 1 g의 조성물을 포함하는 제제 내에서 제제화시, 상기 제제는 약 10-1 rad/s 및 약 102 rad/s 사이의 각진동수에서 약 103 Pa 및 약 105 Pa 사이의 손실 탄성률을 가지는 조성물.
  21. 제 1 내지 20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 약 5° 및 약 25° 사이의 위상각 안정기를 가지는 조성물.
  22. 제 1 내지 21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 약 50 Pa 및 약 12,500 Pa 사이의 항복 응력을 가지는 조성물.
  23. 제1 내지 22 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 저장 탄성률, 손실 탄성률, 복소 탄성률, 위상각, 및/또는 항복 응력 중 어느 하나 측정 이전에 약 5 분 내지 약 60 분 경화되는 조성물.
  24. 제 1 내지 23항 중 어느 한 항에 있어서, 유체는 인산염-완충 염수 (PBS)인 조성물.
  25. 제 1 내지 24항 중 어느 한 항에 있어서, 힘줄 조직은 인간 또는 동물 유래인 조성물.
  26. 제 1 내지 25항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 힘줄 조직의 DNase 용액과의 접촉을 포함하는 탈세포화 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 조성물.
  27. 제 26항에 있어서, 방법은 탈세포화 힘줄 조직의 메탈로프로티네이스 (MMP) 용액과의 접촉을 추가로 포함하는 조성물.
  28. 제26 또는 27 항에 있어서, 방법은 동결건조 단계를 추가로 포함하는 조성물.
  29. 제 26 내지 28항 중 어느 한 항에 있어서, 방법은 재구성 단계를 추가로 포함하는 조성물.
  30. 제 26 내지 29항 중 어느 한 항에 있어서, 방법은 세척 단계를 추가로 포함하는 조성물.
  31. 제 26 내지 30항 중 어느 한 항에 있어서, 방법은 여과 단계를 추가로 포함하는 조성물.
  32. 제 1 내지 31항 중 어느 한 항에 있어서, MMP은 콜라게네이스를 포함하는 조성물.
  33. 제 1 내지 32항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 제제의 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절 방법, 이 방법은 일정 기간 동안의 상기 제제의 경화를 포함함.
  34. 제 33항에 있어서, 기간은 약 30 분인 방법.
  35. 제 33 또는 34항에 있어서, 저장 탄성률, 손실 탄성률, 및/또는 복소 탄성률의 조절은 1 크기 정도 이내인 방법.
  36. 이를 필요로 하는 대상에서 연골 재생, 뼈 재생, 또는 힘줄 부착부 재생의 자극 방법, 이 방법은 제 1 내지 32항 중 어느 한 항의 조성물 또는 그의 제제를 대상에게 투여하는 것을 포함함.
  37. 이를 필요로 하는 대상에서 연골 조직, 뼈 조직, 또는 부착부 내 혈관신생의 자극 방법, 이 방법은 제 1 내지 32항 중 어느 한 항의 조성물 또는 그의 제제를 대상에게 투여하는 것을 포함함.
  38. 제 36 또는 37항에 있어서, 상기 제제는 조성물 및 유체의 동결건조된 형태를 포함하는 방법.
  39. 제 38항에 있어서, 조성물에 대한 유체의 비는 약 1 g의 조성물에 대해 약 1 ml 내지 약 7 ml의 유체인 방법.
  40. 제 38 또는 39항에 있어서, 유체는 인산염-완충 염수 (PBS)인 방법.
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