KR20230017844A

KR20230017844A - 부갑상선기능저하증의 치료를 위한 pth 유사체

Info

Publication number: KR20230017844A
Application number: KR1020227045771A
Authority: KR
Inventors: 리차드 디 디마치; 파 장
Original assignee: 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코포레이션
Priority date: 2020-05-26
Filing date: 2021-05-25
Publication date: 2023-02-06
Also published as: MX2022014907A; IL298338A; WO2021242756A2; WO2021242756A3; AU2021278931A1; US20230285578A1; JP2023527356A; BR112022024058A2; EP4157324A2; CA3183120A1; EP4157324A4; CN115697380A

Abstract

본원에서는 투여 직후 과도한 작용을 최소화하면서 공지된 천연 부갑상선 호르몬 작용제 펩티드에 비해 연장된 작용 시간을 갖는 부갑상선 호르몬의 신규한 유도체가 제공된다. 그 신규한 부갑상선 호르몬 접합체를 포함하는 조성물은 부갑상선기능저하증 및 골다공증을 치료하는 데 사용될 수 있다.

Description

부갑상선기능저하증의 치료를 위한 PTH 유사체

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2020년 5월 26일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/030,004 및 2020년 6월 2일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/033,586에 대한 우선권을 주장하며, 이의 개시내용은 본원에 명백히 포함된다.

전자적으로 제출된 자료의 참조에 의한 포함

본 출원과 함께 제출되고 2021년 5월 24일에 생성된 "338101Final_ST25.txt"라는 명칭의 80 킬로바이트 acii(text) 파일로 확인되는 컴퓨터 판독 가능한 뉴클레오티드/아미노산 서열 목록이 전체가 참조로 포함된다.

배경

부갑상선은 부갑상선 호르몬(PTH)의 분비를 통해 혈중 칼슘을 매우 엄격한 범위(성인의 경우 8-10 mg/dL)로 제어한다. 뼈에 저장된 칼슘은 PTH에 반응하여 방출되어 중추 신경계 기능, 혈관 및 근육 수축, 효소 및 호르몬 분비, 혈액 응고를 지원한다. 기계적으로, PTH는 뼈로부터 방출될 칼슘 및 포스페이트를 집결시키고, 과도한 포스페이트를 제거하도록 신장에 신호를 보내며, 신장 내에서 칼슘의 세뇨관 재흡수를 최대화하면서, 신장 내에서 비타민 D의 생물학적 활성 형태의 생성을 자극함으로써 칼슘의 농도를 증가시킨다.

부갑상선기능저하증(히포 PT)은 PTH 생성이 불충분한 드문 질환이다. 히포 PT를 갖는 환자는 소변으로 너무 많은 칼슘을 배설하고, 혈액에 너무 많은 포스페이트를 갖고, 비정상적으로 낮은 뼈 순환을 갖는다. de2015년 1월에 식약청(FDA)이 NPS/시레(NPS/Shire)의 Natpara®(rhPTH)를 승인할 때까지, 부갑상선기능저하증은 호르몬 대체로 치료되지 않는 몇 안 되는 고전적인 내분비 질환 중 하나였다. Natpara®는 고용량 칼슘 및 비타민 D 보충제로 이루어진 표준 치료에 비해 약간의 효능만 제공한다. 그럼에도 불구하고 이 약물은 2015년 상업 출시 이후 좋은 반응을 얻었으며, 히포 PT 치료에 존재하는 상당한 충족되지 않은 필요성을 나타내었다.

히포 PT는 희귀 질환이기 때문에, 히포 PT를 위해 개발 중인 약물은 FDA 및 유럽 의약품청(EMA)으로부터 희귀 약물 지정 혜택을 받는다. 각각의 부상하는 경쟁자는 주로 혈청 칼슘을 정상화하고 불충분하게 관리된 질환의 장기적인 결과를 줄이기 위해 Natpara®보다 더 생리학적 방식으로 PTH를 복원하는 것을 목표로 한다. 경쟁자는 투여 경로, 역가, 투여 빈도 및 치료 지수를 포함하는 생성물 프로파일의 상당한 차이와 함께 PTH 정상화에 대한 접근 방식이 다르다. 본원에 개시된 조성물은, 1주일 내내 PTH의 생리학적 수준을 안전하게 회복 및 유지할, 히포 PT를 갖는 환자를 위한 주간 치료를 제공하며, 이는 환자에게 독특한 약리학적 이익 및 상당한 편의성을 제공한다.

히포 PT는 1차 질환 및 2차 질환으로 나눌 수 있다. 1차 질환은 유전적 원인으로 인해 부갑상선 내에 내재적 결함이 있을 때 발생한다. 유전적 원인으로 인한 히포 PT는 특히 드물며 전체 사례의 10% 미만을 일으키는 것으로 생각된다. 2차 또는 후천성 질환은 이전에 기능하던 부갑상선 기능이 손상, 파괴 또는 제거될 때 발생한다. 2차 질환은 지금까지 가장 흔하며 전체 사례의 약 90%를 유발한다.

후천성 히포 PT 사례의 적어도 75%는 부갑상선 및/또는 혈액 공급의 우발적 또는 불가피한 제거 또는 손상으로 인해 전방 경부 수술(즉, 두경부 악성종양에 대한 전체 갑상선 절제술 또는 급진적 경부 절제술)에 의해 발생한다. 갑상선 수술 후 일시적 히포 PT는 비교적 흔하며 갑상선 수술의 약 7-46%에서 발생한다. 일시적 히포 PT는 수술 후 몇 주 또는 몇 달 내에 해결된다. 만성 히포 PT는 드물며 경험 많은 내분비 외과 의사가 있고 사례량이 많은 수술 센터에서 0.9-1.6%의 비율로 발생한다. 그러나, 갑상선 수술 후 6.6%의 높은 비율이 보고되었으며, 이는 히포 PT를 초래하는 영구적인 손상을 피하는 데 전문성 및 경험의 중요성을 강조한다.

전방 경부 수술 후, 성인에서 히포 PT의 다음으로 가장 흔한 후천적 원인은 자가면역 질환인 것으로 생각된다. 이는 부갑상선 단독 또는 여러 내분비선에 영향을 미칠 수 있다. 자가면역 매개된 질환은 후천적 히포 PT의 10% 미만을 유발하는 것으로 추정된다. 다른 2차 원인은 전이성 질환 또는 철/구리 과부하, 이온화 방사선 노출로 인한 드문 침윤 장애를 포함하거나, 알려지지 않은 원인(특발성)일 수 있다.

미국에서 히포 PT 유병률의 추정치는 60,000명 내지 115,000명의 환자 범위이다. 전문가들은 대규모 건강 플랜 청구 데이터베이스를 기반으로 한 최상의 추정치는 77,000명의 환자이며 이 중 58,793명이 보험에 가입되어 있다고 제안한다. 다른 지역의 데이터는 매우 제한적이며 문서화된 추정치는 유럽의 경우 70,000 내지 267,000명, 일본의 경우 20,000명, 나머지 국가의 경우 30,000명이다.

만성 히포 PT는 암을 포함한 갑상선 질환의 발병 및 이의 치료, 특히 수술로 인해 증가하는 질환이다. 예컨대, 1996년과 2006년 사이에 미국에서 수행된 갑상선 절제술의 총 수는 66,864건에서 92,931건으로 39% 증가하였다. 매년 미국에서 수행되는 갑상선 절제술의 수는 이제 150,000건에 도달한 것으로 추정된다. 히포 PT에 의해 잠재적으로 영향을 받는 사람들의 수가 증가하고 있다. 갑상선 질환은 남성보다 여성에게 더 많은 영향을 미치기 때문에, 히포 PT를 갖는 환자의 70% 초과가 여성이다.

정상적인 생리학적 범위를 벗어나는 칼슘 수준을 갖는 대부분의 사람들은 메스꺼움을 느낀다. 신경 및 근육 기능에서 칼슘의 중요한 역할 때문에, 저칼슘혈증을 갖는 환자는 사지의 따끔거림 또는 작열감(감각이상), 근육 연축, 근육통, 비자발적 근육 수축(강직), 건조/거친 피부, 집중 또는 포커싱 불능, 불안 및/또는 우울을 경험할 수 있다. 심각하게 낮은 혈중 칼슘 수준은 생명을 위협하는 후두경련, 발작 또는 심장 부정맥을 유발할 수 있으며 IV 칼슘으로의 응급 치료가 필요하다. 히포 PT의 심각한 장기적 결과는 신석회증, 손상된 신장 기능/만성 신장 질환, 연조직 내 칼슘 침착, 지나치게 광물화된 뼈를 포함할 수 있다.

히포 PT는 전형적으로 임상 병력 및 실험실 시험을 통해 진단된다. 진단은 전형적으로 낮은/검출 불가능한 수준의 혈청 PTH 및 저칼슘혈증(총 혈청 칼슘이 정상 하한 미만으로 정의됨) 및 고인산혈증을 특징으로 한다. 활성화된 비타민 D 및 뼈 순환 마커의 수준도 전형적으로 정상의 낮은 부분에서 명백하게 낮은 범위에 있으며 칼슘 배설이 증가된다. 최근 경부 수술과 관련하여 이러한 실험실 결과는 히포 PT의 직접적인 진단으로 이어질 수 있다. 그러나, 히포 PT의 사례는 진단하기 매우 어려울 수 있으며, 특히 알려진 부갑상선 손상이 없는 경우에 그러하다.

히포 PT의 치료에 대한 명확한 지침이 없으므로, 치료는 경험 및 임상적 판단을 기반으로 한다. 일반적으로, 허용되는 만성 치료의 주요 목표는 혈청 총 칼슘(낮은 범위 내지 낮은 정상 범위), 혈청 인(높은 정상 범위), 24시간 소변 칼슘 배설(<7.5 mmol/d) 및 인산칼슘 생성물(4.4 mmol₂/L₂ 미만)을 허용 가능한 범위 내에서 유지하는 것이다.

표준 치료는 칼슘, 비타민 D 대사산물, 및 때때로 티아지드 이뇨제를 포함한다. 권장되는 칼슘 보충제는 탄산칼슘 및 칼슘 시트레이트이며, 필요한 양은 환자마다 크게(9배) 다르다. 1,25(OH)₂D₃(칼시트리올)은 비타민 D의 활성 대사산물이며 장 칼슘 흡수 효율을 개선하여 혈청 칼슘을 유지하는 데 도움을 준다. 칼시트리올은 또한 넓은(8배) 용량 범위에 걸쳐 투여된다. 원위 신세뇨관 칼슘 재흡수를 향상시킴으로써 티아지드 이뇨제(벤조티아디아진 부류 약물)는 히포 PT 치료에도 유용할 수 있다.

칼슘 및 비타민 D 보충제로 결핍된 칼슘을 보충하는 것이 간단하게 들릴 수 있지만 실제로는 잘 제어하기가 매우 어렵다. 대부분의 환자는 너무 높음과 너무 낮음 사이를 번갈아 가며 투여 수준에서 롤러코스터를 경험한다. 또한, 칼슘 및 비타민 D 보충제는 치료 결과를 갖는 근본적인 PTH 결핍을 회복시키는 데 아무런 도움이 되지 않는다.

히포 PT를 갖는 환자는 일상 생활의 질 및 간병인, 가족 및 친구의 삶에 심각하고 부정적인 영향을 미치는 무거운 질환 부담을 경험한다. NPS 파마슈티칼스(NPS Pharmaceuticals)는 히포 PT의 임상적, 사회적 및 경제적 영향을 평가하기 위해 374명의 환자 역학 연구인 파라독스(PARADOX)를 수행하였다. 데이터는 임상 전문가, 부갑상선기능저하증 협회 및 환자의 입력으로 개발된 30분 웹 기반 기구를 통해 수집되었다. 이 기구는 주로 이메일을 통해 6개월 이상 동안 히포 PT와 함께 살고 있는 미국의 성인을 포함하여 부갑상선기능저하증 협회 회원들에게 제공되었다. 결과는 하드커(Hadker) 등에 의해 엔도크린 프랙티스(Endocrine Practice)에 하기의 주요 하이라이트와 함께 발표되었다:

72%는 하기의 가장 빈번하게 보고되는 증상과 함께 매일 10가지 초과의 증상을 경험하였음:

신체적 증상: 피로(82%), 근육통/경련(78%), 감각이상(76%), 강직(70%), 관절 또는 뼈 통증(67%), 사지 통증 또는 약화(53%)

정서적 증상: 불안(59%) 및 우울증(53%)

인지 증상: 브레인 포그/정신적 무기력(72%), 집중 불능(65%), 기억 상실(61.5%) 및 수면 장애(57%)

79%는 입원 또는 응급실 방문을 요함

45%는 자신의 삶에 상당한 방해가 있다고 보고함

85%는 가사 활동을 수행할 수 없다고 보고함

20%는 고용 상태에서 질환과 연관된(부정적) 변화를 경험함.

다른 공개문헌에서도 히포 PT의 질환 부담을 확인하였다. 얼트(Arlt) 등이 잡지(European Journal of Endocrinology)에 발표한 횡단면 연구는 갑상선 수술 후 온전한 부갑상선 기능을 갖는 25명의 여성에 대해 칼슘 및 비타민 D 치료로 안정적으로 관리된 수술 후 히포 PT를 갖는 25명의 여성에서 검증된 설문지를 사용하여 웰빙 및 기분을 비교하였다. 히포 PT 환자는 게이센(Geissen) 불평 목록, 폰 제르센(von Zerssen) 증상 목록 및 증상 체크리스트-90에서 전반적인 불평 점수가 상당히 높았으며, 불안, 공포 불안 및 신체적 등가물에 대한 하위척도 점수가 증가하였다. 중요하게도, 히포 PT 치료에 대한 현재의 통상적인 표준 요법은 이러한 환자의 웰빙을 회복하지 못하였다.

작용 기간을 늘리거나 독성 효과를 줄이기 위해 주사된 약물의 방출 시간을 연장하는 것이 종종 바람직하다. 체내에서 쉽게 용해되는 제형은 일반적으로 빠르게 흡수되고, 약리학적 활성 생성물의 보다 바람직하고 점진적인 방출과는 대조적으로 이용 가능한 약물의 갑작스러운 폭발을 제공한다.

제어되고 연장된 방출의 약제학적 화합물을 제공하기 위한 다양한 시도가 있었지만, 이전에 개시된 기술은 최적의 연장된 방출 시간 달성, 안정성 및 효능 극대화, 독성 감소, 제조 시 재현성 최대화, 및 바람직하지 않은 매트릭스 물질에 의해 도입되는 원치 않는 물리적, 생화학적 또는 독성학적 영향의 제거와 같은 기술과 관련된 모든 문제를 극복하는 데 성공하지 못하였다. 따라서, 기존 의약품의 반감기를 안전하고 효율적으로 연장하고 용량별 및 환자별 치료 지수를 개선하는 제형이 필요하다. 이는 효능을 위한 용량과 독성 용량을 구분하기 위해 치료 지수가 좁은 약물에서 가장 중요하다. 인슐린 또는 갑상선 호르몬과 매우 유사한 PTH는 칼슘이 생리학적 범위를 약간 초과하면 급성 및 만성 유해 결과를 일으키는 약물로 인식된다.

연장된 방출 및 향상된 치료 지수를 제공하기 위한 메커니즘은 주사 부위에서 분자를 봉쇄하거나 약제의 프로드럭(또는 프로드러그) 유도체 형태의 사용을 포함하며, 프로드럭 유도체는 작용 개시를 지연시키고 약물의 반감기를 연장하도록 설계된다. 지연된 작용 개시는 프로드럭의 활성화 전에 프로드럭의 전신 분포를 허용한다는 점에서 유리하다. 따라서, 프로드럭을 투여하면 투여 시 피크 활성으로 인한 합병증을 제거할 수 있고 모 약물의 치료 지수를 증가시킬 수 있다.

또한, 펩티드 및 단백질 작용제의 수용체 인식 및 후속 프로세싱은 많은 펩티드 및 단백질 기반 약물의 주요 분해 경로이다. 따라서, 수용체에 대한 펩티드 약물의 결합은 생물학적 자극을 초래할 것이지만 또한 펩티드 또는 단백질의 효소적 분해를 통해 펩티드/단백질 유도된 약리학의 후속적 비활성화를 개시할 것이다. 따라서, 프로드럭을 사용하면 투여된 약물의 작용 시간을 지연시켜 활성화 전에 신체 전체에 고르게 분포되도록 할 수도 있다. 본 개시내용은 투여 직후 과도한 작용을 최소화하면서 PTH의 생물학적 작용을 안전하게 연장시키는 조성물 및 방법을 제공한다.

본 개시내용에 따라, PTH 펩티드는 이의 상응하는 수용체와의 상호작용을 방지하도록 변형될 수 있다. 보다 구체적으로, 본원에 개시된 바와 같이, PTH 펩티드는 제어된 방식으로의 방출을 위해 주사 부위에서 약물을 국소화하기 위한 데포 조성물로서, 및/또는 전신에 분포되지만 이의 수용체와 상호작용할 수 없는 프로드럭으로서 기능하는 복합체를 형성하기 위해 비효소적 자가 절단 디펩티드를 약물에 연결함으로써 가역적으로 변형될 수 있다. 또한, 이러한 PTH 펩티드의 프로드럭 유도체는 PTH 펩티드에 대한 지방-아실 또는 이산 기의 공유 연결에 의해 추가로 변형되어 체류 시간을 향상시키고 프로드럭의 체류 및 프로드럭 모이어티의 절단 시 기저 펩티드의 작용 기간을 연장시킬 수 있다.

유리하게는, 본 개시내용의 PTH 접합체는 투여 직후 과도한 작용을 최소화하면서 PTH의 생물학적 작용을 안전하게 연장한다. 따라서, 본원에 개시된 조성물은 삶을 변화시키는 결과를 가질 수 있는 칼슘의 과도한 상승의 위험 없이 혈청 칼슘을 안전하게 정상화하는 능력을 환자에게 제공한다. 이 기술은 약물 투여의 편의성을 증가시켜 요법 순응도를 높인다. 본원에 개시된 바와 같이, 본 개시내용의 PTH 유사체는 환자에게 매주 1회 투여를 가능하게 하는 연장된 작용 기간을 입증한다. 그러나, 환자에게 매일 투여하는 것도 환자의 혈청 칼슘 수준을 훨씬 더 정밀하게 제어할 수 있는 방법으로 생각된다.

본 발명의 조성물은 피하 투여와 같은 표준 경로를 사용하여 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 조성물은 PTH 접합체의 흡수를 충분히 증가시킬 수 있는 흡수 증강제와 함께 본 개시내용의 PTH 접합체의 공동 제제화에 의해 경구 전달용으로 제제화된다. 나트륨 N-[8-(2-히드록시벤조일)아미노]카프릴레이트(SNAC)는 펩티드, 예컨대 인슐린, GLP-1, 칼시토닌 및 다른 거대분자, 예컨대 헤파린을 포함한 다양한 스펙트럼의 분자의 투과성을 향상시키는 것으로 보고된 전달제이다. 한 실시양태에 따라, 경구 전달을 위한 약제학적 조성물이 제공되며, 조성물은 본 개시내용의 PTH 접합체 및 SNAC를 포함하고, 임의적으로 약제학적 조성물은 정제로 제제화된다.

한 실시양태에 따라, 예컨대 호모 사피엔스(homo sapiens)를 포함하는 온혈 포유동물에 투여될 때 유도체가 개선된 치료 지수 및 생체내 연장된 작용 시간을 갖는 부갑상선 호르몬의 아실화되고 접합된 유도체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 아미드 결합을 통한 자가 절단 디펩티드의 공유 연결에 의해 추가로 변형된 아실화된 31개 아미노산의 PTH 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 아미드 결합을 통한 자가 절단 디펩티드의 공유 연결에 의해 추가로 변형된 아실화된 32개 아미노산의 PTH 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 아미드 결합을 통한 자가 절단 디펩티드의 공유 연결에 의해 추가로 변형된 아실화된 33개 아미노산의 PTH 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 아미드 결합을 통한 자가 절단 디펩티드의 공유 연결에 의해 추가로 변형된 아실화된 34개 아미노산의 PTH 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 아미드 결합을 통한 자가 절단 디펩티드의 공유 연결에 의해 추가로 변형된 아실화된 38개 아미노산의 PTH 펩티드를 제공한다. 보다 구체적으로, 한 실시양태에서, 변형된 부갑상선 호르몬(PTH)은 각각 서열번호 2, 3 또는 30의 33, 34 또는 35개 아미노산의 펩티드이고, PTH 펩티드는 임의적으로 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 자가 절단 디펩티드의 공유 연결에 의해 추가로 변형된다.

한 실시양태에서, PTH 펩티드는

SVSEIQLMHX₁₀LGX₁₃HLX₁₆SX₁₈ERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 133);

SVSEIQLMHX₁₀LX₁₂KHLX₁₆X₁₇X₁₈ ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 134);

SVSEIQLMHX₁₀LGKHLX₁₆SX₁₈ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 135); 및

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)

로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고;

상기 식에서, Z는 X₃₃,X₃₃F, X₃₃FX₃₅, X₃₃FVX₃₅, X₃₃FVAX₃₅, X₃₃FVALX₃₅, X₃₃FVALGX₃₅, X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고, 임의적으로 Z는 X₃₃,X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고;

X₁₀ 및 X₁₆은 독립적으로 Asp, Gln 또는 Asn이고;

X₁₂는 Gly 또는 Aib이고;

X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;

X₁₈은 Met, Met(O), Leu, 또는 Nleu이고;

X₁₃, X₂₆, 및 X₂₇은 독립적으로 Arg, Glu, Asp 및 Lys로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₃₃ 및 X₃₅는 각각 아미노산의 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아실화된 아미노산을 포함하고, 임의적으로 그 아실화된 아미노산은 Lys, dLys, 오르니틴, Cys 및 호모시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

X₅₃은 Gln 또는 Asn이고, 임의적으로 단 X₁₂, X₁₆ 및 X₁₇ 중 1개 이하는 Aib이고, 임의적으로 C-말단 아미노산은 카르복시 말단을 아미드로 치환하도록 변형된다. 일부 실시양태에서, PTH 펩티드는 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합된 자가 절단 디펩티드를 추가로 포함하고, 임의적으로 자가 절단 디펩티드는 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 연결된다. 한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드는 구조 A-B를 포함하고,

상기 식에서, A는 아미노산, 임의적으로 임의적으로 스페이서를 통해 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아실화된 아미노산이고;

B는 N-알킬화된 아미노산이다. 특정 실시양태에서, PTH 펩티드는 엡실론-아실화된-Lys, 엡실론-아실화된-dLys, 오르니틴, 엡실론-아실화된 오르니틴, 시스테인, S-아실화된 시스테인, 호모시스테인 또는 S-아실화된 호모시스테인을 포함하고, 임의적으로 그 아실화된 아미노산은 PTH 펩티드의 C-말단 아미노산이다.

일부 실시양태에서, PTH 펩티드는 비천연 아미노산을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, PTH 펩티드는 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 보존적 치환이다. 일부 실시양태에서, 치환은 비보존적 아미노산으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 PTH 펩티드는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함한다. 본 발명의 PTH 펩티드에 사용하기 위한 비천연 아미노산의 비제한적 예는 벤조페논, 케톤, 요오다이드 또는 아지드 치환기를 함유하는 페닐알라닌 유도체; O-프로파길티로신; α-아미노카프릴산, O-메틸 티로신, O-니트로벤질 시스테인; 3-(나프탈렌-2-일아미노)-2-아미노-프로판산; p-아미노페닐알라닌 및 p-메톡시페닐알라닌과 같은 파라-치환된 페닐알라닌 유도체; 3-아미노티로신, 3-니트로티로신, 3,4-디히드록시페닐알라닌, 3-요오도티로신과 같은 메타-치환된 티로신 유도체; 페닐셀레노시스테인; p-보로노페닐알라닌; o-니트로벤질티로신; 2-아미노-6-((R)-테트라히드로푸란-2-카르복스아미도)헥산산, N-ε-D-프롤릴-L-리신 및 N-ε-사이클로펜틸옥시카르보닐-L-리신과 같은 아미드 및 카르바메이트 치환된 리신; N-ε-아크릴로일-L-리신; N-ε-[(1-(6-니트로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에톡시)카르보닐]-L-리신; 아지도 알라닌; 2-(4'-펜테닐)알라닌; 알라니날; 및 N-ε-(1-메틸사이클로프로-2-엔카르복스아미도)리신을 포함한다.

한 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 PTH 펩티드 및 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드, 임의적으로 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 결합된 자가 절단 디펩티드를 포함하는 PTH 접합체가 제공된다. 한 실시양태에서, 접합체는

SVSEIQLMHNLX₁₂X₁₃HLX₁₆X₁₇MERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 4),

SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 5),

SVSEIQLMHNLX₁₂KHLX₅₆X₁₇MERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 6);

SVSEIQLMHX₁₀LGKHLX₁₆SX₁₈ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 135); 및

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)

로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 PTH 펩티드를 포함하고;

상기 식에서, Z는 X₃₃F, X₅₃FX₃₅,X₃₃FX₃₅, 또는X₃₃이고 임의적으로 Z는 X₅₃FX₃₅ 또는 X₃₃이고;

X₁₀ 및 X₁₆은 독립적으로 Asp, Gln 또는 Asn이고;

X₁₂는 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Gly이고;

X₅₆은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Asn이고;

X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;

X₁₈은 Met, Met(O), 또는 Nleu이고;

X₁₃, X₂₆, 및 X₂₇은 독립적으로 Arg, Glu, Asp 및 Lys로 이루어진 군으로부터 선택되고, 임의적으로 X₁₃, X₂₆, 및 X₂₇은 독립적으로 Glu 및 Lys로부터 선택되고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₃₃및 X₃₅는 각각 아실화된 아미노산을 포함하고;

X₅₃은 Gln, Asp, Glu, 또는 Asn이고, 임의적으로 X₅₃은 Asn이고,

임의적으로 단 X₁₂, X₁₆ 및 X₁₇ 중 단지 하나는 Aib이고;

접합체의 자가 절단 디펩티드는 일반 구조 A-B-를 포함하고,

상기 식에서, A는 아실화된 아미노산이고;

B는 N-알킬화된 아미노산이고;

X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 상기 아실화된 아미노산은 임의적으로 스페이서를 통해 이의 아미노산 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아미노산이고, 자가 절단 디펩티드는 B와 PTH 펩티드의 1차 아민 사이의 아미드 결합의 형성을 통해 상기 PTH 펩티드에 연결되고, 임의적으로 1차 아민은 위치 13, 16, 19, 22, 또는 26에 존재하는 리신 치환의 측쇄, 또는 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 위치된다. 추가의 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드의 아미노산 "A"는 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산으로 아실화된 리신 잔기이다. 한 실시양태에서, A 및 B는 생리학적 조건 하에 표준 PBS 용액에서 적어도 약 24시간 내지 약 240시간, 약 48시간 내지 약 168시간, 약 48 내지 약 120시간, 또는 약 70 내지 약 120시간, 약 80 내지 약 120시간, 약 90 내지 약 120시간, 또는 약 100 내지 약 120시간의 상기 PTH 펩티드로부터 A-B의 화학적 절단 반감기(t1/2)를 제공하도록 선택된다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 PTH 접합체의 C-말단 아미노산은 천연 카르복실 기를 아미드로 치환하도록 변형될 수 있다.

한 실시양태에 따라, PTH의 접합체 유도체가 제공되며, 여기서 자가 절단 디펩티드는 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 결합되고, 추가로 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃-Z (서열번호 2), SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHFNX₃₅ (서열번호 15) 또는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃ (서열번호 2)의 서열을 포함하고,

상기 식에서, X₃₃ 및 X₃₅는 각각 독립적으로 아미노산의 측쇄가 C16-C20 지방산 또는 C16-C20 이산으로 아실화된 아미노산이고, 임의적으로 X₃₃ 및 X₃₅는 독립적으로 C16-C20 아실화된 리신, C16-C20 아실화된 오르니틴, C16-C20 아실화된 시스테인 및 C16-C20 아실화된 호모시스테인으로부터 선택되고, 임의적으로 X₃₃ 및 X₃₅는 둘 다 C16-C20 아실화된 Lys이고; Z는 F-R, FV-R FVA-R, FVAL-R, FVALG-R, 및 FVALGA-R로 이루어진 군으로부터 선택되고, R은 COOH 또는 CONH₂이고, 상기 자가 절단 디펩티드는 하기 구조의 디펩티드이고;

상기 식에서, R₁은 C₁-C₁₈ 알킬, (C₁-C₄ 알킬)OH, (C₁-C₄ 알킬)SH, (C₁-C₄ 알킬)COOH, 및 (C₁-C₄ 알킬)NH₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄이고, 임의적으로 C16-C20 지방산 또는 C16 -C20 이산이 상기 측쇄에 공유적으로 연결되고;

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₃은 C₁-C₄ 알킬이거나, R₄ 및 R₃은 이들이 부착된 원자와 함께, 예컨대 피롤리딘 고리를 포함하는 5 또는 6원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;

R₅는 NH₂이고, 단 R₄ 및 R₃은 이들이 부착된 원자와 함께, 예컨대 피롤리딘 고리를 포함하는 5 또는 6원 헤테로사이클릭 고리를 형성하는 경우, R₂는 H가 아니다. 한 실시양태에서, A, X₃₃ 및 X₃₅의 아실화된 아미노산은 독립적으로 하기 일반 구조를 갖는 아미노산으로부터 선택된다:

상기 식에서, n은 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, R₅₀은 NH-CO(CH₂)_14-20COOH, NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, S(CH₂)_14-20COOH, S-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, N=N=N-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COO, HC≡C-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COO, 및 CHO-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COO로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, A, X₃₃ 및 X₃₅의 아실화된 아미노산은 독립적으로 리신, d-리신, 오르니틴, 시스테인, 호모시스테인, 아지도알라닌, 2-(4'-펜테닐)알라닌 또는 알라니날로부터 선택되고, 상기 아실화된 아미노산의 측쇄는 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 임의적으로 아미노산 또는 디펩티드를 포함하는 스페이서를 통해 공유 연결된다. 한 실시양태에서, 스페이서는 감마 글루탐산을 포함한다. 한 실시양태에서, 임의적 스페이서는 2개의 감마 글루탐산을 포함하고, 임의적으로 2개의 감마 글루탐산은 개재하는 기능화된 PEG 중합체 [COCH₂(OCH₂CH₂)_kHN]q를 통해 서로 연결되며, k 및 q는 각각 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8로부터 선택되는 정수이다. 한 실시양태에서, 스페이서는 -{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-이다. 추가의 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드는 화학식 I의 구조를 가지며, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH이고; R₂ 및 R₈은 각각 H이고; R₄는 H 또는 CH₃이고; R₃은 CH₃이고; R₅는 NH₂이고, 임의적으로 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산은 D-입체화학 배열의 아미노산이고, 스페이서는 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kHN]q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1, 2, 4 또는 8이다. 한 실시양태에서, k는 2 또는 4이고, q는 1 또는 2이다.

한 실시양태에 따라, 바람직하게는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 순도 수준의 본원에 개시된 임의의 신규한 PTH 접합체를 포함하는 약제학적 조성물 및 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 이러한 조성물은 적어도 0.1 내지 10 mg/ml 이사의 농도로 본원에 개시된 바와 같은 PTH 접합체를 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 약제학적 조성물은 멸균되고 임의적으로 다양한 포장 용기 내에 저장되는 수용액을 포함한다. 다른 실시양태에서, 약제학적 조성물은 동결건조된 분말을 포함한다. 약제학적 조성물은 조성물을 환자에게 투여하기 위한 일회용 디바이스를 포함하는 키트의 일부로서 추가로 포장될 수 있다. 용기 또는 키트는 주위 실온 또는 냉장 온도에서 저장하도록 라벨링될 수 있다.

한 실시양태에 따라, 이를 필요로 하는 환자에서 부갑상선기능저하증을 치료하는 개선된 방법이 제공된다. 이 방법은 본 개시내용의 PTH 접합체를 부갑상선기능저하증의 제어에 치료학적으로 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함한다. 한 실시양태에서, PTH 펩티드는 높은 친화성으로 혈청 알부민에 결합하기에 충분한 크기의 지방산 또는 이산 기로 아실화되고, 추가로 PTH 펩티드는 자가 절단 디펩티드에 연결되고, 디펩티드의 아미노산은 높은 친화성으로 혈청 알부민에 결합하기에 충분한 크기의 지방산 또는 이산 기로 임의적으로 아실화된다.

한 실시양태에 따라, 이를 필요로 하는 환자에서 골다공증 또는 골감소증을 치료하는 개선된 방법이 제공된다. 이 방법은 본 개시내용의 PTH 접합체를 혈청 칼슘 수준의 제어에 치료학적으로 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함한다. 한 실시양태에서, PTH 펩티드는 높은 친화성으로 혈청 알부민에 결합하기에 충분한 크기의 지방산 또는 이산 기로 아실화되고, 자가 절단 디펩티드에 대한 연결에 의해 추가로 변형되고, 디펩티드의 아미노산은 높은 친화성으로 혈청 알부민에 결합하기에 충분한 크기의 지방-아실 기로 임의적으로 아실화된다.

도 1은 인간에서 칼슘 소변 배설 속도에 대한 Natpara®(서열번호 1)의 효과를 나타내는 그래프이다. 시간 경과에 따른 혈장 PTH 수준 및 칼슘 소변 배설 속도는 100 ug 용량의 Natpara®를 피하 투여한 후 표시된다. Natpara®는 칼슘 손실을 역전시키는 데 효과적이지만, 이 화합물은 작용 기간이 불충분하여 하루 중 단지 1/3만 혈청 칼슘 수준을 적절하게 제어하고 나머지 시간 동안은 과도하게 높고 낮다.
도 2a-2b는 PTH의 프로드럭을 형성하기 위한 디펩티드의 사용을 입증한다. 도 2a는 생물학적으로 활성화된 PTH 펩티드 및 디케토피페라진(DKP)을 형성하기 위해 PTH 접합체로부터 아미드 연결된 디펩티드를 절단하는 반응의 개략도이다. 도 2b는 화학적 절단이 농도 독립적이고 추가 성분(효소 또는 촉매)을 필요로 하지 않는 선형의 0차 반응임을 입증한다. 특정 pH 및 온도에서의 반응 속도는 특정 디펩티드의 함수이며, 30분 미만 내지 500시간 초과까지 조정될 수 있다.
도 3a 및 3b는 cAMP 생성의 루시퍼라제 리포터와 함께 PTH 수용체-1로 안정적으로 형질감염된 세포에서 PTH 수용체를 자극하는 PTH 유사체의 능력을 나타낸다. 도 3a는 서열번호 9, 10, 11 및 12에 대한 데이터를 제공하고, 도 3b는 서열번호 9, 12, 13 및 14에 대한 데이터를 제시한다. PTH 유사체의 아미노산 서열은 하기에 제공된다. 데이터는 35개 아미노산의 PTH 펩티드가 위치 35에서 아실화된 리신(측쇄에 연결된 C18 지방 이산 쇄를 가짐)의 부가에 의해 공유적으로 변형된 PTH 유사체는 PTH 수용체(서열번호 12)에서 높은 효능을 유지하는 반면, PTH(1-34)에 대한 아실화된 디펩티드의 부착(서열번호 10, 11 및 14)은 효능을 감소시키고, N-말단에서 아실화된 디펩티드의 부착 및 카르복시 말단 아미노산에서 아실화의 조합도 효능이 낮다는 것을 입증한다(서열번호 13).

도 4는 cAMP 생성의 루시퍼라제 리포터와 함께 PTH 수용체-1로 안정적으로 형질감염된 세포에서 PTH 수용체를 자극하는 33개 아미노산의 PTH 유사체(서열번호 2의 PTH 서열 포함)의 능력을 나타낸다. 서열번호 18은 PTH 수용체에서 PTH 활성을 감소시키는 위치 8에서 알라닌 치환을 포함하는 PTH 유사체이다. 데이터는 34개 아미노산의 PTH 유사체와 유사하게 33개 아미노산의 PTH 유사체의 C-말단에 지방산 쇄를 부가하면 모 화합물(서열번호 16)의 높은 효능을 유지하지만 카르복시 말단에서 지방-아실화를 갖는 디펩티드의 조합은 효능을 감소시킨다는 것을 입증한다(서열번호 17).

도 5a-5c는 72시간의 연장된 시간에 걸쳐 용량-반응 방식으로 혈청 칼슘 수준을 증가시키고(도 5a) 혈청 포스페이트를 감소시키는(도 5b) PTH 펩티드의 C-말단에 아실화된 아미노산을 포함하는 PTH 유사체에 대한 마우스에서의 생체내 효능을 입증하는 그래프이다. SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHK(γE-COC₁₆H₃₂CO₂H)F-OH (서열번호 102). 도 5c는 혈청 칼슘 수준을 증가시키는 추가의 아실화된 PTH 유사체(PTH(1-34), K33(ηE-이산C18) (서열번호 102); PTH(1-33), K33(ηE-이산C18) (서열번호 74); 및 PTH(1-33), K33(γE-(미니PEG)₂-γE-이산C18) (서열번호 77)의 마우스에서의 생체내 효능을 입증하는 그래프이다.
도 6a 및 6b는 지속 기간을 위해 설계되었지만 활성 약물로 전환될 수 없는 PTH 유사체를 사용하여 마우스에서 출현 및 소멸 시간을 결정하기 위한 약동학(PK) 연구로부터의 결과를 나타낸다. 각각의 화합물을 마우스에 100 nmol/kg SC 용량으로 피하 투여되었다. 도 6a는
(dK)GSVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHK (γE-(미니PEG)₂-γE-COC₁₆H₃₂CO₂H)-OH (서열번호 78);
(dK)GSVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHK (γE-(미니PEG)₂-γE-COC₁₈H₃₂CO₂H)-OH (서열번호 84); 및
(dK)(γE-(미니PEG)₂-γE-COC₁₆H₃₂CO₂H)G SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHK (γE-(미니PEG)₂-γE-COC₁₆H₃₂CO₂H)-OH (서열번호 79)에 대한 데이터를 나타낸다. 도 6b는 서열번호 78, 84 및 79에 대해 도 6a에서와 동일한 결과를 나타내지만 대수 형태로 표현된다. 도 6a 및 6b는 지방 아실 길이의 중요성 및 본 발명의 아실화된 PTH 유사체와 디아실화된 PTH 유사체 사이의 차이를 입증한다.
도 7a 및 7b는 25 nmol/kg으로 단일 피하 용량의 프로드럭 PTH 유사체가 투여된 원숭이에서 체류 시간을 결정하기 위한 약동학(PK) 연구로부터의 결과를 나타내고, PTH 펩티드는 낮은 효능 PTH 유사체를 생성하도록 위치 8에서 알라닌 치환으로 변형되었다. 도 7a는 단일 용량의 프로드럭(서열번호 94)의 투여 후 시간 경과에 따른 프로드럭 PTH 유사체 서열번호 94: PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18) dK_-1, N(Me)G₀; 및 이의 활성화된 형태 서열번호 93: PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18)의 검출된 수준을 입증하는 그래프이다. 도 7b는 단일 용량의 프로드럭(서열번호 95)의 투여 후 시간 경과에 따른 프로드럭 PTH 유사체 서열번호 95: PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18) dK^-1(γE-2xOEG-γE-이산C18), N(Me)G⁰ 및 이의 활성화된 형태: 서열번호 93: PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18)의 검출된 수준을 입증하는 그래프이다. 데이터는 연장된 기간에 걸쳐 비교적 일정한 양의 활성 형태를 생성하는 프로드럭 형태의 감소에 상응하는 시간 경과에 따른 활성 형태의 축적을 입증한다. 이중 지방 아실화된 프로드럭(서열번호 95)은 단일 지방 아실화된 프로드럭(서열번호 94)보다 더 오랜 기간 동안 지속되는 더 높은 농도를 달성한다.
도 7c는 도 7a에 제시된 동일한 약물 농도 결과를 로그 척도로 제시한 것이다.
도 7d는 도 7b에 제시된 동일한 약물 농도 결과를 로그 척도로 제시한 것이다.
도 8a-8c는, 도 8a에서 PTH(1-34), 본 발명의 PTH 작용제 서열번호 77; 도 8b에서 절단 가능하지 않은 프로드럭 서열번호 79; 도 8c에서 PTH(1-34), 및 절단 가능한 프로드럭 서열번호 87로의 처리에 반응하는, 실시예 11에 기술된 cAMP헌터 테리파리티드 바이오어세이(cAMPHunter Teriparitide Bioassay)에 사용된 CHO-K1 PTHR1 세포에서 사이클릭 AMP 생성의 기능적 반응을 나타낸다.
도 9a-9f는 8일 과정에 걸쳐 PBS 버퍼에서 본 발명의 PTH 프로드럭, 서열번호 87의 이의 활성 약물 형태, 서열번호 77로의 LCMS 결과를 나타낸다. 도 9a에서 0일에 유일한 피크인 7.3분 피크는 프로드럭을 나타내다. 도 9b에서 1일에 6.5분에 활성 약물 피크의 시작이 있다. 도 9c 및 9d에서 각각 2일 및 3일에 프로드럭보다 여전히 덜 활성인 약물이 있다. 도 9e 및 9f에서 각각 5일 및 8일에 프로드럭보다 더 활성인 약물이 있다.
도 10은 0차 반응 동역학에 피팅된 실시예 11로부터의 LCMS 검정 데이터의 그래프이다. LCMS 검정은 192시간에 걸쳐 프로드럭 서열번호 87의 활성 약물 서열번호 77로의 전환을 나타내고, 높은 선형 상관관계(R >0.99)로 112시간의 반감기를 나타낸다.
도 11은 다양한 인큐베이션 길이(본 발명의 펩티드 서열번호 87, 서열번호 77 또는 PTH(1-34)로 도 9a-9f에서 평가되는 바와 같이 0 내지 8일의 처리) 후 cAMP헌터 테리파리티드 바이오어세이로부터 CHO-K1 PTHR1 세포에서 사이클릭 AMP 생성의 기능적 반응을 나타낸다.
도 12는 펩티드 서열번호 77, 서열번호 109 및 서열번호 110으로 처리한 후 cAMP헌터 테리파리티드 바이오어세이로부터 CHO-K1 PTHR1 세포에서 사이클릭 AMP 생성의 기능적 반응을 나타낸다.
도 13a 및 13b는 펩티드(도 13a에서 서열번호 77, 서열번호 118, 및 서열번호 120; 및 도 13b에서 서열번호 77, 서열번호 122, 및 서열번호 124)로 처리한 후 cAMP헌터 테리파리티드 바이오어세이로부터 CHO-K1 PTHR1 세포에서 사이클릭 AMP 생성의 기능적 반응을 나타낸다.
도 14a 및 14b는 48시간의 기간에 걸쳐 비히클, 20 또는 40 nmol/kg의 PTH 유사체 서열번호 77로 처리한 후 마우스에서 절대적 혈청 칼슘 수준(도 14a) 및 칼슘 수준의 상대적 변화(도 14b)의 그래프이다.
도 15는 프로드럭 서열번호 87 및 활성 약물 서열번호 77을 투여한 후 1주 기간에 걸쳐 래트에서의 혈청 농도를 나타낸다. 프로드럭 또는 활성 약물 중 하나를 피하 주사로 단일 용량으로 투여하고, 1주일에 걸쳐 혈청 농도를 측정하였다. 프로드럭으로부터 유도되는 활성 약물의 양도 측정되었다(검은색 점선, 사각형 기호).
도 16a 및 16b는 프로드럭 서열번호 87을 30 또는 60 nmol/kg으로 피하 투여한 후 1주의 기간에 걸쳐 래트에서 절대적 혈청 포스페이트 농도 및 이의 변화를 나타낸다.
도 17a 및 17b는 프로드럭 서열번호 87을 30 또는 60 nmol/kg으로 피하 투여한 후 1주의 기간에 걸쳐 래트에서 절대적 혈청 포스페이트 농도 및 이의 변화를 나타낸다.
도 18a 및 18b는 비히클, 20 nmol/kg 활성 약물 서열번호 77, 20 nmol/kg 또는 40 nmol/kg 프로드럭 서열번호 87을 매일 피하 주사한 후 스프래그-다우리(Sprague-Dawley) 래트에서 혈청 칼슘 수준(도 18a) 및 혈청 포스페이트 수준(도 18b)의 변화 그래프이다.
도 19a 및 19b는 제0일에 시작하여 7회의 매일 피하 주사 후 래트에서 프로드럭 서열번호 87(도 19a) 및 활성 약물 서열번호 77(도 19b)의 혈청 농도의 그래프이며, 144시간에 걸쳐 상이한 시점에서 측정된다. 프로드럭 대 약물의 총 농도에는 4배의 차이가 있다.
도 20a 및 20b는 28일에 걸쳐 비히클(제0일에 시작), 4, 8, 및 12 nmol/kg 프로드럭 서열번호 87의 반복된 28회의 매일 용량으로 처리된 설치류에서의 칼슘 수준(도 20a) 및 제28일에 마지막 투여 후 세척 칼슘 수준(도 20b)을 나타내는 그래프이다.
도 21은 실시예 5에 상세히 기재된 바와 같이 28일에 걸친 반복 투여를 갖는 래트에서 프로드럭 서열번호 87의 다양한 시작 용량(4, 8 또는 12 nmol/kg)으로부터 프로드럭의 약물로의 전환의 LCMS에 의한 약동학적 분석이다. 실선은 프로드럭의 혈장 농도(nM)를 나타내고, 상응하는 점선은 활성 약물 서열번호 77의 혈장 농도이다.
도 22는 도 21의 더 작은 시간 부분의 LCMS에 의한 약동학적 분석이며, 이는 실시예 15로부터의 반복 투여의 중단 후 활성 약물(빈 데가 없는 막대) 및 프로드럭(흰색 점 막대)의 혈장 농도 수준 및 마지막 투여 후 시간(2, 7, 및 24)에 혈장 농도의 변화를 나타낸다.
도 23은 외과적으로 조작된 (샴(sham)) 대조군 래트 및 외과적 부갑상선 절제술을 받은 다른 래트와 함께 질환 모델 래트(이들은 이어 비히클 또는 10, 25, 또는 40 nmol/kg 프로드럭 서열번호 87로 처리됨)에서의 칼슘 혈장 농도의 그래프이다. 용량은 0, 24, 48, 72시간(마지막 투여)에 취한 측정 및 144시간(마지막 투여 후 72시간)에 취한 추가의 측정의 각각의 시간 전에 투여되었다.
도 24는 실시예 5에 기재된 바와 같이 샴 대조군과 함께 질환 모델 래트에서의 혈청 칼슘 수준을 나타내는 그래프이다. 래트에 비히클 또는 다양한 수준의 화합물, 10, 25 및 40 nmol/kg 프로드럭 서열번호 87을 10일에 걸쳐 매일 투여하였으며, 25일에 걸쳐 결정하였다.
도 25는 실시예 5에 기재된 바와 같이 샴 대조군과 함께 질환 모델 래트에서의 혈청 포스페이트 수준을 나타내는 그래프이다. 래트에 비히클 또는 다양한 수준의 화합물, 10, 25 및 40 nmol/kg 프로드럭 서열번호 87을 10일에 걸쳐 매일 투여하였으며, 25일에 걸쳐 결정하였다.
도 26a 및 26b는 다양한 농도의 프로드럭 서열번호 87(2.5, 3.75, 및 5.0 nmol/kg)로 피하 투여 후 원숭이에서 프로드럭 서열번호 87(도 26a) 및 활성 약물 서열번호 77(도 26b)의 혈청 농도에 대한 그래프이다. 프로드럭과 약물의 차이는 약 4배이다.

정의

본 발명을 설명하고 특허청구할 때, 하기 용어들은 하기에 제시된 정의에 따라 사용될 것이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 사용되는 용어 "PTH 펩티드"는 서열번호 7의 아미노산 서열, 또는 펩티드의 아미노산 치환, 부가, 결실 또는 번역 후 변형(예컨대, 메틸화, 아실화, 알킬화, 페길화 등)을 포함하는 서열번호 7의 아미노산 서열의 임의의 유사체를 포함하는 임의의 펩티드를 포함하며, 유사체는 환자에게 투여 시 혈액 내 증가된 칼슘을 자극한다.

본원에서 사용되는 용어 "약"은 10%로 명시된 값 또는 값의 범위보다 크거나 작은 것을 의미하지만 임의의 값 또는 값의 범위를 이러한 더 넓은 정의로만 제한하려는 의도는 아니다. 용어 "약"이 선행하는 각각의 값 또는 값의 범위는 또한 언급된 절대 값 또는 값의 범위의 실시양태를 포괄하도록 의도된다.

본원에서 사용되는 용어 "천연" 또는 "자연"은 자연에서 발견되는 상태를 정의한다. "천연 아미노산"은 자연 수단에 의해 생성되는 자연에 존재하는 아미노산이다.

본원에서 사용되는 용어 "아미노산"은 아미노 및 카르복실 작용기를 모두 함유하는 임의의 분자를 포함하며, 아미노 및 카르복실레이트 기는 동일한 탄소(알파 탄소)에 부착된다. 알파 탄소는 임의적으로 1개 또는 2개의 추가의 유기 치환기를 가질 수 있다. 아미노산은 3문자 코드, 1문자 코드 또는 경우에 따라 측쇄 명칭으로 지정될 수 있다. 예컨대, 알파 탄소에 부착된 사이클로헥산 기를 포함하는 비표준 아미노산은 "사이클로헥산" 또는 "사이클로헥실"이라고 한다. 본 개시내용의 목적을 위해, 입체화학을 명시하지 않는 아미노산의 지정은 아미노산의 L 또는 D 형태, 또는 라세미 혼합물을 포괄하는 것으로 의도된다. 그러나, 아미노산이 3문자 코드(예컨대, Lys) 또는 단일 문자(예컨대, K)로 지정되는 경우, 이러한 지정은 아미노산의 천연 L 형태를 지정하기 위한 것인 반면, D 형태는 3문자 코드 또는 단일 코드 앞에 소문자 d을 포함시켜 지정될 것이다(예컨대, dLys 또는 dK). 본원에서 사용되는 바와 같이, 특정 아미노산의 지정은 천연 아미노산 뿐만 아니라 천연 아미노산과 분자량은 상이하지만 천연 아미노산과 동등한 물리적 및 생물학적 특성을 갖는 임의의 동위원소적으로 농축된 유도체를 포괄하는 것으로 의도된다.

본원에서 사용되는 용어 "히드록실산"은 알파 탄소 아미노 기를 히드록실 기로 대체하도록 변형된 아미노산을 지칭한다.

본원에서 사용되는 용어 "비코딩(비표준) 아미노산"은 하기 20개 아미노산 중 임의의 것의 L-이성질체가 아닌 임의의 아미노산을 포괄한다: Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr.

"디펩티드"는 펩티드 결합을 통해 알파 아미노산 또는 알파 히드록실산을 또 다른 아미노산에 연결한 결과이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "화학적 절단"은 어떠한 추가 지정도 없이 공유 화학 결합을 파괴하는 비효소적 반응을 포괄한다.

"생체활성 펩티드"는 시험관내 및/또는 생체내에서 생물학적 효과를 발휘할 수 있는 펩티드를 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 펩티드에 대한 일반적인 언급은 변형된 아미노 및 카르복시 말단을 갖는 펩티드를 포괄하는 것으로 의도된다. 예컨대, 표준 아미노산을 지정하는 아미노산 서열은 N-말단 및 C-말단에서의 표준 아미노산 뿐만 아니라 N-말단에서의 상응하는 히드록실산 및/또는 말단 카르복실산 대신에 아미드기를 포함하도록 변형된 상응하는 C-말단 아미노산을 포괄하도록 의도된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "아실화된" 아미노산은 이것이 생성되는 수단에 관계없이 자연 발생 아미노산에 고유하지 않은 아실 기를 포함하는 아미노산이다. 아실화된 아미노산 및 아실화된 펩티드를 생성하는 예시적인 방법은 당업계에 공지되어 있고, 펩티드 또는 펩티드 합성에 포함되기 전에 아미노산을 아실화한 후 펩티드를 화학적으로 아실화하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아실 기는 펩티드가 (i) 순환계에서 긴 반감기, (ii) 지연된 작용 개시, (iii) 연장된 작용 기간, (iv) DPP-IV와 같은 프로테아제에 대한 개선된 내성, 및 (v) PTH에 대한 수용체에서의 변경된 효능 중 하나 이상을 갖도록 한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "알킬화된" 아미노산은 이것이 생성되는 수단에 관계없이 자연 발생 아미노산에 고유하지 않은 알킬 기를 포함하는 아미노산이다. 알킬화된 아미노산 및 알킬화된 펩티드를 생성하는 예시적인 방법은 당업계에 공지되어 있고, 펩티드 또는 펩티드 합성에 포함되기 전에 아미노산을 알킬화한 후 펩티드를 화학적으로 알킬화하는 것을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "프로드럭"는 약리학적 효과를 나타내기 전에 화학적 변형을 겪는 임의의 화합물로 정의된다.

본원에 사용된 "수용체"는 높은 친화성 상호작용으로 특정 분자를 인식하고 결합하여 세포에서 또는 숙주 유기체의 세포 및/또는 조직 상에서 (직접적으로 또는 간접적으로) 일부 생물학적 효과를 생성하는 분자이다. "세포 수용체"는 특정 분자를 인식하고 결합하여 세포에서 (직접적으로 또는 간접적으로) 일부 효과를 생성하는 세포 상 또는 내부의 분자이다.

본원에서 사용되는 용어 "동일성"은 2개 이상의 서열 사이의 유사성에 관한 것이다. 동일성은 동일한 아미노산 잔기의 수를 잔기의 총 수로 나눈 값에 100을 곱하여 백분율을 얻음으로써 측정된다. 따라서, 정확히 동일한 서열의 2개의 카피는 100% 동일성을 갖는 반면, 서로에 대해 아미노산 결실, 부가 또는 치환을 갖는 2개의 서열은 더 낮은 정도의 동일성을 갖는다. 당업자는 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool, Altschul et al. (1993) J. Mol. Biol. 215:403-410)와 같은 알고리즘을 사용하는 것과 같은 몇몇 컴퓨터 프로그램이 서열 동일성을 결정하는 데 이용 가능하다는 것을 인식할 것이다.

용어 "PTH 펩티드"는 천연 PTH에 대한 수용체에서 (작용제 또는 길항제로서) 생물학적 활성을 갖고 정렬된 부분에서 (서열번호 7)의 펩티드 서열과 적어도 70% 서열 동일성(예컨대, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%)을 공유하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드에 관한 것이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 포스페이트 완충된 식염수 용액, 물, 에멀젼, 예컨대 오일/물 또는 물/오일, 및 다양한 유형의 습윤제와 같은 임의의 표준 약제학적 담체를 포함한다. 이 용어는 또한 미국 연방 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 인간을 포함한 동물에 사용하기 위해 미국 약전에 나열된 임의의 작용제를 포괄한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "포스페이트 완충된 식염수" 또는 "PBS"는 염화나트륨 및 인산나트륨을 포함하는 수용액을 지칭한다. PBS의 상이한 제형은 당업자에게 공지되어 있지만, 본 개시내용의 목적을 위해 어구 "표준 PBS"는 137 mM NaCl, 10 mM 포스페이트, 2.7 mM KCl의 최종 농도 및 7.2-7.4의 pH를 갖는 용액을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 모 화합물의 생물학적 활성을 유지하고 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않지 않은 화합물의 염을 지칭한다. 본원에 개시된 많은 화합물은 아미노 및/또는 카르복실 기 또는 이와 유사한 기의 존재로 인해 산 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하는"은 특정 장애 또는 병태의 예방, 또는 특정 장애 또는 병태와 관련된 증상의 완화 및/또는 상기 증상의 방지 또는 제거를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 약물의 "유효량" 또는 "치료학적 유효량"은 무독성이지만 원하는 효과를 제공하기에 충분한 약물의 양을 지칭한다. "유효량" 은 개체의 나이 및 일반적인 상태, 투여 방식 등에 따라 대상체마다 또는 대상체 내에서 시간 경과에 따라 변할 것이다. 따라서, 정확한 "유효량"을 지정하는 것이 항상 가능한 것은 아니다. 그러나, 임의의 개별적인 경우에 적절한 "유효량"은 통상적인 실험을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.

용어 "비경구"는 소화관을 통하지 않고 피하, 근육내, 척수내 또는 정맥내와 같은 일부 다른 경로에 의한 것을 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 아미노산 "치환"은 하나의 아미노산 잔기가 상이한 아미노산 잔기로 치환된다는 것을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "보존적 아미노산 치환"은 본원에서 하기 5개 그룹 중 하나 내의 교환으로 정의된다:

I. 작은 지방족의 비극성 또는 약간 극성인 잔기:

Ala, Ser, Thr, Pro, Gly;

II. 극성의 음으로 하전된 잔기 및 이들의 아미드:

Asp, Asn, Glu, Gln;

III. 극성의 양으로 하전된 잔기:

His, Arg, Lys; 오르니틴(Orn)

IV. 큰 지방족의 비극성 잔기:

Met, Leu, Ile, Val, Cys, 노르루이신(Nle), 호모시스테인(hCys)

V. 큰 방향족 잔기:

Phe, Tyr, Trp, 아세틸 페닐알라닌, 나프틸알라닌(Nal)

본원에서 사용되는 바와 같이, 일반 용어 "폴리에틸렌 글리콜 쇄" 또는 "PEG 쇄"는 일반 화학식 H(OCH₂CH₂)_kOH(여기서, k는 적어도 2임)로 표시되는 분지쇄 또는 직쇄의 에틸렌 옥사이드 및 물의 축합 중합체의 혼합물을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "미니PEG" 또는 "OEG"는 하기 구조를 포함하는 기능화된 폴리에틸렌 화합물을 정의한다:

.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "페길화된" 및 유사 용어는 폴리에틸렌 글리콜 쇄를 화합물에 연결함으로써 천연 상태로부터 변형된 화합물을 지칭한다. "페길화된 폴리펩티드"는 폴리펩티드에 공유 결합된 PEG 쇄를 갖는 폴리펩티드이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "링커" 또는 "스페이서"는 2개의 개별 실체를 서로 결합시키는 결합, 분자 또는 분자 그룹이다. 링커는 2개의 실체의 최적 간격을 제공하거나 2개의 실체가 서로 분리되도록 하는 불안정한 연결을 추가로 제공할 수 있다. 불안정한 연결은 광절단성 기, 산 불안정성 모이어티, 염기 불안정성 모이어티 및 효소 절단성 기를 포함한다.

본원에 사용된 "이량체"는 링커를 통해 서로 공유 결합된 2개의 서브유닛을 포함하는 복합체이다. 용어 이량체는 어떠한 한정 언어 없이 사용될 때 동종이량체와 이종이량체를 모두 포괄한다. 동종이량체는 2개의 동일한 서브유닛을 포함하는 반면, 이종이량체는 2개의 서브유닛이 서로 실질적으로 유사하지만 상이한 2개의 서브유닛을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이 n이 1 내지 6일 수 있는 용어 "C₁-C_n 알킬"은 1개 내지 지정된 수의 탄소 원자를 갖는 분지형 또는 선형 알킬 기를 나타낸다. 전형적인 C₁-C₆ 알킬 기는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, 부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 C16-C20 지방산은 구조: -CO(CH₂)_15-18CH₃를 나타내고, 용어 C16-C20 이산은 구조: -CO(CH₂)₁₄₁₈COOH를 나타내고, 접두사 "C16-C20"은 지정에 의해 포괄된 화합물의 가변 총 탄소 수를 나타낸다. 예컨대, C18 이산은 구조: -CO(CH₂)₁₆COOH를 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 아실화된 아미노산에 대한 포괄적인 언급은 지방산으로 아실화된 측쇄를 갖는 아미노산 및 이산으로 아실화된 측쇄를 갖는 아미노산을 모두 포괄한다.

본원에 개시된 생리학적 조건은 약 35 내지 40℃의 온도 및 약 7.0 내지 약 7.4의 pH를 포함하도록 의도되며, 보다 전형적으로는 pH 7.2 내지 7.4 및 36 내지 38℃의 온도를 포함한다. 생리학적 pH 및 온도는 고도로 정의된 범위 내에서 인간에서 엄격하게 조절되기 때문에, 디펩티드/약물 복합체(프로드럭)로부터 약물로의 전환 속도는 높은 환자내 및 환자간 재현성을 나타낼 것이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "환자"는 추가 지정 없이 임의의 온혈 척추동물 가축(예컨대, 가축, 말, 고양이, 개 및 다른 애완동물을 포함하지만 이에 제한되지 않음) 및 인간을 포괄하는 것으로 의도되며, 의사의 직접적인 치료 하에 있지 않은 개체를 포함한다.

약어:

소문자 k = 리신의 d-이성질체

γE = 감마, 글루탐산의 l-이성질체

(미니PEG)₂= COCH₂OCH₂CH₂OCH₂CH₂NH

COC₁₆H₃₂CO₂H = (C18 이산)

(N-Me)G = 사르코신

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH (서열번호 7) = PTH

대문자 K = 리신의 l-이성질체

실시양태

한 실시양태에 따라, 부갑상선 호르몬(PTH)의 개선된 유사체 및 갑상선기능저하증 및 골다공증을 치료하는 방법이 제공된다. 보다 구체적으로, 본원에 개시된 PTH의 유사체는 천연 PTH 및 이의 공지된 활성 단편에 비해 개선된 치료 지수 및 연장된 작용 시간을 갖는다.

한 실시양태에 따라, 부갑상선 호르몬의 접합된 유도체 및 PTH 관련된 펩티드(PTHrp)의 접합 유도체가 제공되며, 여기서 유도체는 호모 사피엔스를 포함한 온혈 포유동물에게 투여 시 변형되지 않은 모 펩티드에 비해 생체내 연장된 작용 시간 및 개선된 치료 지수를 갖는다. 한 실시양태에서, 접합된 유도체는 N-말단 알파 아민에 연결된 임의적으로 아실화된 자가 절단 디펩티드 및 C-말단 아미노산에서의 아실화를 포함한다. 보다 구체적으로, 한 실시양태에서, 변형된 부갑상선 호르몬(PTH)은 각각 서열번호 2, 3 또는 30의 서열을 포함하거나 비교 서열의 정렬된 부분에서 서열번호 2, 3, 7 또는 30에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 97% 서열 동일성을 갖는 아미노산을 포함하는 33, 34 또는 35개 아미노산의 펩티드이고, (서열번호 7에 대해) 위치 13, 16, 19, 22, 26 및 33으로부터 선택되는 아미노산의 측쇄에 또는 C-말단 아미노산에 공유 연결된 지방산 또는 이산 기(예컨대, C16-C20 지방산 또는 C16-C20 이산 포함)를 가지며, 임의적으로 자가 절단 디펩티드의 공유 연결에 의해 추가로 변형된다. 자가 절단 디펩티드는 아미드 결합을 통해, 예컨대 (서열번호 7에 대해) 13, 16, 19, 22, 26 및 33으로부터 선택되는 위치의 아미노산에서를 포함하여, N-말단 알파 아민을 포함하는 PTH 펩티드의 임의의 1차 아민 또는 펩티드의 임의의 1차 아민 보유 측쇄에 연결될 수 있다. 자가 절단 디펩티드를 포함하는 아미노산의 측쇄는 비효소적 자가 절단 메커니즘을 통해 자가 절단 디펩티드가 제거될 때까지 PTH 펩티드의 활성을 보다 효율적으로 차단하기 위해 지방산 또는 이산 기 또는 다른 중합체에 임의적으로 연결될 수 있다. 한 실시양태에서, 디펩티드의 제1 아미노산은 C16-C20 지방산 또는 C16-C20 이산으로 아실화된 측쇄를 갖는다.

한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드는 PTH 펩티드의 아미노 말단, 임의적으로 N-말단 알파 아민에 아미드 결합을 통해 공유 연결되고, (서열번호 7에 대해)위치 13, 16, 19, 22, 26 및 33으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에서 또는 C-말단 아미노산으로서 아실화된 아미노산을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 개시된 PTH 접합체의 변형된 PTH 펩티드는

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH (서열번호 7),

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHN (서열번호 31),

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF (서열번호 32),

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFV (서열번호 33),

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVA (서열번호 34),

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVAL (서열번호 35),

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALG (서열번호 36), 및

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGA (서열번호 37)

로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하고;

상기 식에서, PTH 펩티드는 임의적으로 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에서 자가 절단 디펩티드의 공유 결합 및 서열번호 7, 31-37 중 어느 하나의 펩티드의 위치 13, 16, 19, 22, 26, 33 또는 C-말단 부분, 또는 이의 임의의 유사체의 상응하는 위치의 아미노산의 측쇄에 혈청 알부민에 결합하기에 충분한 크기의 아실 기(예컨대, C14-C22 지방산 또는 C14-C22 이산)의 연결에 의해 변형되고, 임의적으로 서열번호 7, 31-37의 펩티드는 13, 16, 19, 22, 26, 33으로부터 선택되는 1개 또는 2개의 위치 및 C-말단 아미노산에서 아실화된 리신 잔기의 치환을 포함한다. 한 실시양태에서, PTH의 접합체가 제공되고, 여기서 서열번호 7, 31-37 중 어느 하나의 PTH 펩티드는 PTH 펩티드의 위치 33의 천연 아미노산 및/또는 C-말단 아미노산, 또는 이의 임의의 유사체의 상응하는 위치의 천연 아미노산에 대해 아실화된 리신 치환에 의해 변형되고, 자가 절단 디펩티드는 PTH 펩티드의 N-말단 아미노산에 아미드 결합을 통해 공유 연결되고, 임의적으로 상기 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산은 아실화되고, 임의적으로 그 아실화된 아미노산은 C14-C20 지방산, C14-C20 이산, C16-C18 지방산 또는 C16-C18 이산을 포함한다.

본 개시내용에 따라, 자가 절단 디펩티드는 PTH 펩티드의 1차 아민에 연결된 2개의 아미노산의 조합을 포함하여 생리학적 조건 하에서 디펩티드는 비효소적 분해 메카니즘을 통해 자발적으로 절단되어 PTH 펩티드로부터 디펩티드를 방출할 것이다. 한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드의 아미노산 중 하나, 임의적으로 제1 아미노산은 공유 연결된 PTH의 활성을 추가로 억제하기 위해 C14-C20 지방산 또는 C14-C20 이산으로 아실화된다. 한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드는 (서열번호 7에 대해) PTH 펩티드의 위치 13, 16, 19, 22 또는 26의 아미노산의 측쇄에 위치된 1차 아민에 또는 N-말단 1차 아민에 연결된다. 따라서, 자가 절단 디펩티드의 존재는 화학적 절단이 PTH를 활성 형태로 방출할 때까지 접합체 형태가 이의 표적 수용체와 상호작용하는 능력을 지연시킨다. 본 개시내용에 따라, 본 개시내용의 PTH 접합체의 한 실시양태는 PTH(1-33), dK^-1(γE-(미니PEG)₂-γE- COC₁₆H₃₂CO₂H), N(Me)G⁰, K³³(γE-2xOEG-γE-이산C18)이고, 이의 완전한 구조는 k(X)(N-Me)GSVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHK(X)-OH (서열번호 87)이고,

상기식에서, k는 d-Lys이고;

X는 γE-(미니PEG)₂-γE-COC₁₆H₃₂CO₂H이고;

γE는 감마, 글루탐산의 l-이성질체이고;

(미니PEG)₂는 COCH₂OCH₂CH₂OCH₂CH₂NH이고;

COC₁₆H₃₂CO₂H는 C18 이산이고;

(N-Me)G는 사르코신이고;

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHK는 PTH (1-32; 서열번호 7) + K33이고;

K는 l-Lys이고;

-OH는 C-말단 아미노산이 말단 카르복실산을 갖는다는 것을 나타낸다.

특정 실시양태에서, 본 발명의 PTH 접합체의 분자량은 5873.9 달톤이다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 대체 모이어티가 접합체에서 하나 이상의 미니PEG에 사용되는 PTH 접합체를 제공한다. 비제한적인 예는 하기를 포함한다:

및

.

일부 실시양태에서, 본 발명은 Tyr(OPO₃H₂):

, Cys(SO₃H):

, M(O):

, M(O)₂:

및 γE:

중 하나 이상을 포함하는 PTH 펩티드를 제공한다.

유리하게는, 자가 절단 디펩티드의 절단 속도는 디펩티드 요소의 구조 및 입체화학, 및 또한 디케토피페라진 또는 디케토모르폴린 관련된 실체로의 절단을 유도하는 디펩티드 상에 존재하는 친핵체의 세기에 의존한다. 한 실시양태에서, 디펩티드의 선택된 구조에 기초하여, 디펩티드/약물 복합체의 비효소적 반감기(t1/2)는 생리학적 조건 하에서 1-720시간으로 선택될 수 있다. 본원에 개시된 바와 같은 생리학적 조건은 약 35 내지 40℃의 온도 및 약 7.0 내지 약 7.4의 pH를 포함하도록 의도되며, 보다 전형적으로는 pH 7.2 내지 7.4 및 36 내지 38℃의 온도를 포함한다. 생리학적 pH 및 온도는 고도로 정의된 범위 내에서 엄격하게 조절되기 때문에, 디펩티드/약물 복합체로부터 약물로 전환되는 속도는 높은 환자내 및 환자간 재현성을 나타낼 것이다. 화학적 전환 속도는 생체내 생물학적 작용의 시작 및 지속 시간을 결정할 것이다. 따라서, 본 개시내용의 투여된 PTH 유사체의 활성화는 추가의 화학적 첨가제 또는 효소에 의존하지 않는 분자내 화학 반응에 의존하며, 전환 속도는 디펩티드 치환기의 고유한 화학적 특성에 의해 제어된다.

한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드 요소는 아미드 연결을 통해 PTH 펩티드에 공유 결합되고, 디펩티드는 자가 절단 디펩티드의 아미노산 측쇄에 연결된 데포 중합체를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 2개 이상의 데포 중합체는 단일 자가 절단 디펩티드 요소에 연결된다. 한 실시양태에서, 데포 중합체는 생체적합성이고 공유 부착된 디펩티드를 갖는 PTH 펩티드가 주사 부위에 격리된 채로 남아 있고/있거나 환자에게 투여 시 이의 상응하는 수용체와 상호작용할 수 없는 충분한 크기를 갖도록 선택된다. 디펩티드의 후속 절단은 의도된 표적과 상호작용하도록 PTH 펩티드를 방출한다. 디펩티드 요소 상의 치환기의 상이한 조합의 선택은 원하는 시간 프레임에 걸쳐 약물을 방출하는 디펩티드/PTH 펩티드의 혼합물을 포함하는 주사 가능한 조성물의 제조를 가능하게 할 것이다. 적합한 데포 중합체는 덱스트란, 폴리락티드, 폴리글리콜리드, 카프롤락톤 기반 중합체, 폴리(카프롤락톤), 폴리무수물, 폴리아민, 폴리에스테르아미드, 폴리오르토에스테르, 폴리디옥사논, 폴리아세탈, 폴리케탈, 폴리카르보네이트, 폴리포스포에스테르, 폴리에스테르, 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리오르토카르보네이트, 폴리포스파젠, 숙시네이트, 폴리(말산), 폴리(아미노산), 폴리비닐피롤리돈, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리히드록시셀룰로스, 다당류, 키틴, 키토산, 히알루론산, 및 이들의 공중합체, 삼원공중합체 및 혼합물, 및 생분해성 중합체 및 이들의 공중합체(카프롤락톤 기반 중합체, 폴리카프롤락톤 및 폴리부틸렌 테레프탈레이트를 포함하는 공중합체 포함)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 데포 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 덱스트란, 폴리락트산, 폴리글리콜산 및 락트산과 글리콜산의 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택되고, 한 특정 실시양태에서, 데포 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다. 한 실시양태에서, 데포 중합체는 자가 절단 디펩티드 요소에 연결된 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 쇄를 포함하며, 데포 중합체(들)의 합한 분자량은 40,000 내지 80,000 달톤이다.

한 실시양태에 따라, 자가 절단 디펩티드 요소는 PTH의 활성 부위에서 아미드 연결을 통해 PTH 펩티드에 공유 결합되어 약물의 프로드럭 유도체를 형성한다. 한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산은 D-입체화학 배열이다. 한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산의 측쇄는 환자의 혈류에서 PTH 유사체의 체류를 향상시키는 모이어티에 공유 연결된다. 한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산에 연결된 체류 향상 모이어티는 환자에게 투여 시 혈청 알부민에 결합하기에 충분한 크기의 알킬 쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산의 측쇄는 14-30, 14-22, 16-20, 16, 18, 20 또는 22개의 탄소 원자를 포함하는 알킬 쇄에 공유 연결된다. 한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산은 D-입체화학 배열의 알킬화된 또는 아실화된 아미노산이다. 한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산은 14-30, 14-22, 16-20, 16, 18, 20 또는 22개의 탄소 원자 길이를 갖는 지방산 또는 지방 이산에 공유 연결된다.

한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드에 공유 연결된 PTH 펩티드의 접합체가 제공된다. 한 실시양태에서, 접합체는 A-B-Q의 일반 구조를 포함하며,

상기 식에서, A는 아미노산 또는 히드록실산이고, 임의적으로 아미노산 또는 히드록실산의 측쇄는 데포 중합체 또는 알킬 또는 아실 쇄에 공유 연결되고;

B는 N-알킬화된 아미노산이고;

Q는 본 개시내용에 따른 아실화된 또는 알킬화된 PTH 펩티드이고, 단 A가 비아실화된 아미노산인 경우 A는 D-입체화학 배열의 아미노산이다. 추가의 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 PTH 접합체에 대해, 상기 A-B 디펩티드의 A 또는 B 중 하나는, 예컨대 D-입체화학 배열의 아미노산을 포함하는 비코딩된 아미노산일 수 있다.

한 실시양태에 따라, 자가 절단 디펩티드 요소(A-B)는 하기 구조를 포함한다:

상기 식에서, R₁은 H, C₁-C₁₈ 알킬, C₂-C₁₈ 알케닐, (C₁-C₈ 알킬)OH, (C₁-C₈ 알킬)SH, (C₂-C₃ 알킬)SCH₃, (C₁-C₄ 알킬)CONH₂, (C₁-C₄ 알킬)COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH₂, (C₁-C₄ 알킬)NHC(NH₂ ⁺)NH₂, (C₀-C₄ 알킬)(C₅-C₆ 사이클로알킬),

로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄를 포함하고, 임의적으로 상기 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 탄소 쇄를 추가로 포함하고;

R₂및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₆ 알킬이고;

R₄는 H, C₁-C₁₈ 알킬, C₂-C₁₈ 알케닐, (C₁-C₈ 알킬)OH, (C₁-C₈ 알킬)SH, (C₂-C₃ 알킬)SCH₃, (C₁-C₄ 알킬)CONH₂, (C₁-C₄ 알킬)COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH₂, (C₁-C₄ 알킬)NHC(NH₂ ⁺)NH₂, (C₀-C₄ 알킬)(C₅-C₆ 사이클로알킬),

로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R₃은 C₁-C₈ 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R₄ 및 R₃은 이들이 부착된 원자와 함께 피롤리딘 또는 피페리딘 고리를 형성하고;

R₅는 NH₂ 또는 OH이고;

R₁₀은 H, OH 또는 NH₂이고, 단 R₄ 및 R₃은 이들이 부착된 원자와 함께 피롤리딘 고리를 형성하는 경우 R₁ 및 R₂는 H가 아니다.

상기 식에서, R₁은 C₁-C₁₈ 알킬, (C₁-C₈ 알킬)OH, (C₁-C₈ 알킬)SH, 및 (C₁-C₄ 알킬)COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄를 포함하고, 임의적으로 상기 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 추가로 포함하고;

R₂및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₆ 알킬이고;

로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R₃은 C₁-C₈ 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고 ;

R₅는 NH₂이고;

R₁₀은 H, OH 또는 NH₂이다.

상기 식에서, R₁은 C₁-C₁₈ 알킬, (C₁-C₈ 알킬)OH, (C₁-C₈ 알킬)SH, (C₁-C₄ 알킬)COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄, 및 임의적으로 스페이서를 통해 상기 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하고;

R₂및 R₈은 각각 H이고;

R₄는 H 및 C₁-C₈ 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬이고;

R₅는 NH₂이고, 상기 스페이서는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이다. 한 실시양태에서, k는 2 또는 4이고, q는 1 또는 2이다.

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH₂의 측쇄이고, 임의적으로 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산이 임의적으로 스페이서를 통해 상기 측쇄에 공유적으로 연결되고;

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬이고;

R₅는 NH₂이고, 상기 스페이서는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 R₁이 (C₁-C₄ 알킬)NH₂로 이루어지는 경우 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산은 D-입체화학 배열이다. 한 실시양태에서, k는 2 또는 4이고, q는 1 또는 2이다.

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₈ 알킬)-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₈ 알킬)S-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20 CH₃, (C₁-C₈ 알킬)-CO(CH₂)_14-20COOH (C₁-C₈ 알킬)S-CO(CH₂)_14-20COOH, 및 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R₂및 R₈은 각각 H이고;

R₄는 H, C₁-C₈ 알킬, (C₁-C₄ 알킬)OH, (C₁-C₄ 알킬)SH, (C₂-C₃ 알킬)SCH₃, (C₁-C₄ 알킬)CONH₂, (C₁-C₄ 알킬)COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH₂, (C₁-C₄ 알킬)NHC(NH₂ ⁺)NH₂, (C₁-C₄ 알킬)(C₅-C₆ 사이클로알킬),

로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, R₄ 및 R₃은 이들이 부착된 원자와 함께 피롤리딘 또는 피페리딘을 형성하고;

R₅는 NH₂이고;

R₁₀은 H, OH 또는 NH₂이고, 단 R₄ 및 R₃은 이들이 부착된 원자와 함께 피롤리딘 고리를 형성하는 경우 R₂는 H가 아니고, 임의적으로 상기 PTH 펩티드로부터의 A-B의 화학적 절단 반감기(t_1/2)는 생리학적 조건 하에 표준 PBS 용액에서 적어도 약 20 내지 240시간이다.

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)S-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20 CH₃, (C₁-C₄ 알킬)S-CO(CH₂)_14-20COOH, 및 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R₂및 R₈은 각각 H이고;

R₄는 H 및 C₁-C₈ 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R₅는 NH₂이고, 임의적으로 상기 PTH 펩티드로부터의 A-B의 화학적 절단 반감기(t_1/2)는 생리학적 조건 하에 표준 PBS 용액에서 적어도 약 48 내지 168시간이다. 하나의 추가 실시양태에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20 CH₃, 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH이고; R₂및 R₈은 각각 H이고; R₄는 H 또는 CH₃이고; R₃은 C₁-C₆ 알킬이고; R₅는 NH₂이다.

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH_3, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃ 및 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R₂및 R₈은 각각 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₄ 및 R₃은 이들이 부착된 원자와 함께 피페리딘 고리를 형성하고;

R₅는 NH₂이고, 임의적으로 상기 PTH 펩티드로부터의 A-B의 화학적 절단 반감기(t_1/2)는 생리학적 조건 하에 표준 PBS 용액에서 적어도 72 내지 144시간이고, 상기 스페이서는 감마 글루탐산 및 -[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q로부터 선택되는 하나 이상의 모이어티를 포함하고, 임의적으로 상기 스페이서는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 k는 2 또는 4이고, q는 1 또는 2이다. 하나의 추가 실시양태에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃ 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH이고; R₂및 R₈은 각각 H이고; R₄는 H 또는 CH₃이고; R₃은 C₁-C₆ 알킬이고; R₅는 NH₂이다.

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)₁₆COOH 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)₁₈COOH이고;

R₂ 및 R₈은 각각 H이고;

R₄는 H 또는 CH₃이고;

R₃은 CH₃이고;

R₅는 NH₂이고, 임의적으로 R₁은 (C₃-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)₁₆COOH이고,및 R₄는 CH₃이다.

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)₁₆COOH 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)₁₈COOH이고;

R₂ 및 R₈은 각각 H이고;

R₄는 H 또는 CH₃이고;

R₃은 CH₃이고;

R₅는 NH₂이고, 임의적으로 R₁은 (C₃-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)₁₆COOH이고, R₄는 CH₃이고, 상기 스페이서는 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산이고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 k는 2 또는 4이고, q는 1 또는 2이고, 임의적으로 k 및 q는 둘 다 2이다.

한 실시양태에서, 본 개시내용의 PTH 접합체의 PTH 펩티드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다:

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLA

PRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKSQX₃₅ (서열번호 20);

AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAEIRAX₃₅ (서열번호 96);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALX₃₅ (서열번호 21);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅ (서열번호 12);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHQFX₃₅ (서열번호 14);

SVSEIQLMHNLX₁₂X₁₃HLX₁₆X₁₇MERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 4);

SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 5);

SVSEIQLMHNLX₁₂KHLX₅₆X₁₇MERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 6);

SVSEIQLMHX₁₀LGKHLX₁₆SX₁₈ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 135);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDGH-Z (서열번호 22);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7);

SVSEIQLMHNLGEHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 23);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLREKLQDVH-Z (서열번호 24); 또는

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKELQDVH-Z (서열번호 25)

상기 식에서, Z는 X₃₃,X₃₃F, X₃₃FX₃₅, X₃₃FVX₃₅, X₃₃FVAX₃₅, X₃₃FVALX₃₅, X₃₃FVALGX₃₅, X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고, 임의적으로 Z는 X₃₃,X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅임의적으로 Z는 X₃₃F, X₅₃FX₃₅, 또는X₃₃이고;

X₁₀ 및 X₁₆은 독립적으로 Asp, Gln 또는 Asn이고;

X₁₂는 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Gly이고;

X₅₆은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Asn이고;

X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;

X₁₈은 Met, Met(O), 또는 Nleu이고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₃₃및 X₃₅은 각각 아실화된 또는 알킬화된 아미노산을 포함하고;

X₅₃은 Gln, Asp, Glu, 또는 Asn이고,임의적으로 X₅₃은 Gln 또는 Asn이거나 X₅₃은 Asn이고, 임의적으로 단 X₁₂, X₁₆ 및 X₁₇ 중 단지 하나는 Aib이고, 임의적으로 C-말단 아미노산은 카르복시를 아미드로 치환하도록 변형된다.

한 실시양태에서, 본 개시내용의 PTH 접합체의 PTH 펩티드는

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅ (서열번호 12);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHQFX₃₅ (서열번호 14);

SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 5);

SVSEIQLMHX₁₀LGKHLX₁₆SX₁₈ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 135);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDGH-Z (서열번호 22); 또는

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)

상기 식에서, Z는 X₃₃F, X₅₃FX₃₅, 또는X₃₃이고;

X₁₀ 및 X₁₆은 독립적으로 Asp, Gln 또는 Asn이고;

X₁₈은 Met, Met(O), 또는 Nleu이고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₃₃및 X₃₅은 각각 아실화된 또는 알킬화된 아미노산을 포함하고, 임의적으로 X₃₃은 아실화된 Lys이고, X₃₅는 아실화된 Cys이고;

X₅₃은 Gln, Asp, Glu, 또는 Asn이다.

한 실시양태에서, 본 개시내용의 PTH 접합체의 PTH 펩티드는

SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 5);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDGH-Z (서열번호 22); 또는

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)

상기 식에서, Z는 X₃₃F, X₅₃FX₃₅, 또는X₃₃이고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₃₃및 X₃₅은 각각 독립적으로 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)S-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)S-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)S-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, 또는 (C₁-C₄ 알킬)S-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃의 측쇄를 갖는 아미노산이고;

X₅₃은 Gln, Asp, Glu, 또는 Asn이고, 임의적으로 X₃₃ 및 X₃₅는 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH 및 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄를 갖는 아미노산이고, 스페이서는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이다. 한 실시양태에서, k는 2 또는 4이고, q는 1 또는 2이다.

한 실시양태에서, 개선된 치료 지수 및 개선된 생체내 체류 시간을 나타내는 PTH 펩티드 접합체가 제공되며, 여기서 접합체는

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAG

SQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKSQX₃₅ (서열번호 20);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALX₃₅ (서열번호 21);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅ (서열번호 12);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHQFX₃₅ (서열번호 14);

SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 5);

SVSEIQLMHNLX₁₂KHLX₅₆X₁₇MERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 6);

SVSEIQLMHX₁₀LGKHLX₁₆SX₁₈ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 135);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDGH-Z (서열번호 22);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7);

SVSEIQLMHNLGEHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 23);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLREKLQDVH-Z (서열번호 24); 또는

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKELQDVH-Z (서열번호 25)

상기 식에서, Z는 X₃₃,X₃₃F, X₃₃FX₃₅, X₃₃FVX₃₅, X₃₃FVAX₃₅, X₃₃FVALX₃₅, X₃₃FVALGX₃₅, X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고, 임의적으로 Z는 X₃₃,X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고,임의적으로 Z는 X₃₃F, X₅₃FX₃₅, 또는X₃₃이고;

X₁₀ 및 X₁₆은 독립적으로 Asp, Gln 또는 Asn이고;

X₁₂는 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Gly이고;

X₅₆은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Asn이고;

X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;

X₁₈은 Met, Met(O), 또는 Nleu이고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₅₃은 Gln, Asp, Glu, 또는 Asn이고, 임의적으로 단 X₁₂, X₁₆ 및 X₁₇ 중 단지 하나는 Aib이고;

상기 자가 절단 디펩티드는 일반 구조 A-B-를 포함하고;

상기 식에서, A는 아실화된 또는 알킬화된 아미노산이고;

B는 N-알킬화된 아미노산이고;

X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 상기 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 임의적으로 스페이서를 통해 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 탄소 쇄를 포함하는 아미노산이고, 상기 자가 절단 디펩티드는 B와 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민 사이의 아미드 결합의 형성을 통해 상기 PTH 펩티드에 연결된다. 한 실시양태에서, A 및 B는 생리학적 조건 하에 표준 PBS 용액에서 적어도 약 24시간 내지 약 96시간, 또는 약 48 내지 약 96시간, 또는 약 72 내지 약 120시간의 상기 PTH 펩티드로부터의 A-B의 화학적 절단 반감기(t1/2)를 제공하도록 선택된다.

한 실시양태에서, PTH 펩티드/PTHrP 및 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되며, 여기서 디펩티드는 임의적으로 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 상기 PTH/PTHr 펩티드에 공유 결합되고, PTH/PTHr 펩티드는

SRRLKRAVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAEIRATSEVSPNS KPSPNTKNHPVRFGSDDEGRYLTQETNKVETYKEQPLKTPGKKKKGKPG KRKEQEKKKRRTRSAWLDSGVTGSGLEGDHLSDTSTTSLELDSRRH-X₃₃ (서열번호 39);

SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 5);

SVSEIQLMHNLX₁₂KHLX₅₆X₁₇MERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 6); 및

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)

X₁₂는 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Gly이고;

X₅₆은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Asn이고;

X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₃₃및 X₃₅은 각각 아실화된 아미노산을 포함하고, 임의적으로 X₃₃ 및 X₃₅는 독립적으로 하기 일반 구조를 갖는 아미노산으로부터 선택되고;

상기 식에서, n은 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, R₅₀은 NH₂, COOH 또는 SH이고, 임의적으로 X₃₃ 및 X₃₅의 아실화된 아미노산은 독립적으로 리신, 오르니틴, 시스테인 또는 호모시스테인으로부터 선택되고, 상기 아실화된 아미노산의 측쇄는 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결되고;

X₅₃은 Gln 또는 Asn이고, 임의적으로 단 X₁₂, X₁₆ 및 X₁₇ 중 단지 하나는 Aib이고;

상기 자가 절단 디펩티드는 일반 구조 A-B-를 포함하고;

상기 식에서, A는 아미노산 또는 아실화된 아미노산이고, 임의적으로 상기 아미노산은 시스테인 또는 리신으로부터 선택되고, 상기 시스테인 또는 리신의 측쇄는 임의적으로 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산을 아미노산 측쇄에 연결하는 스페이서를 통해 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 임의적으로 연결되고;

B는 N-알킬화된 아미노산이고, 임의적으로 B는 N-메틸 글리신 또는 N-메틸 알라닌이다.

한 실시양태에서, X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 아실화된 아미노산은 임의적으로 스페이서를 통해 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아미노산이고, 상기 자가 절단 디펩티드는 B와 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민 사이의 아미드 결합의 형성을 통해 상기 PTH 펩티드에 연결된다. 임의적으로 A는 D-입체화학 배열이다. 한 실시양태에서, PTH 펩티드 및 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되며, 여기서 디펩티드는 임의적으로 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합되고,

PTH 펩티드는

SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 5);

SVSEIQLMHNLX₁₂KHLX₅₆X₁₇MERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 6);

SVSEIQLMHX₁₀LGKHLX₁₆SX₁₈ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 135); 및

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)

상기 식에서, Z는 X₃₃, X₃₃F, X₅₃FX₃₅r이고;

X₁₀ 및 X₁₆은 독립적으로 Asp, Gln 또는 Asn이고;

X₁₂는 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Gly이고;

X₅₆은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Asn이고;

X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;

X₁₈은 Met, Met(O), 또는 Nleu이고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₃₃ 및 X₃₅은 각각 아실화된 아미노산을 포함하고, 임의적으로 X₃₃ 및 X₃₅는 독립적으로 시스테인, 호모시스테인, 오르니틴 또는 리신으로부터 선택되고, 상기 시스테인, 호모시스테인, 오르니틴 또는 리신의 측쇄는 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결되고;

상기 자가 절단 디펩티드는 일반 구조 A-B-를 포함하고;

상기식에서, A는 시스테인 또는 리신으로부터 임의적으로 선택되는 아실화된 아미노산이고, 상기 시스테인 또는 리신의 측쇄는 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결되고;

B는 N-알킬화된 아미노산이고, 임의적으로 B는 N-메틸 글리신 또는 N-메틸 알라닌이고;

X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 상기 아실화된 아미노산은 임의적으로 스페이서를 통해 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아미노산이고, 상기 자가 절단 디펩티드는 B와 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민 사이의 아미드 결합의 형성을 통해 상기 PTH 펩티드에 연결된다. 임의적으로 A는 D-입체화학 배열이다.

한 실시양태에서, PTH 펩티드 및 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되며, 여기서 디펩티드는 임의적으로 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합되고,

PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7), 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환에 의해 서열번호 7과 상이한 펩티드의 서열을 포함하고;

상기 식에서, Z는 X₃₃F, NFX₃₅, 또는X₃₃이고;

X₃₃ 및 X₃₅는 각각 독립적으로 아미노산의 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아미노산이고, 임의적으로 X₃₃ 및 X₃₅는 독립적으로 시스테인 또는 리신으로부터 선택되고, 상기 시스테인 또는 리신의 측쇄는 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결되고;

X₅₃은 Gln 또는 Asn이고, 자가 절단 디펩티드는 하기 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 C₁-C₈ 알킬, (C₁-C₄ 알킬)OH, (C₁-C₄ 알킬)SH, (C₁-C₄ 알킬)COOH, 및 (C₁-C₄ 알킬)NH₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄, 및 임의적으로 C16-C30 탄소 쇄를 포함하고, 상기 C16-C30 탄소 쇄는 존재하는 경우 임의적으로 스페이서를 통해 상기 측쇄에 공유 연결되고;

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬이거나, R₃ 및 R₄는 이들이 부착된 원자와 함께 피페리딘 고리를 형성하고;

R₅는 NH₂이다.

한 실시양태에서, PTH 펩티드 및 본원에 개시된 임의의 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되며, 여기서 디펩티드는 임의적으로 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합되고,

PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7), 또는 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환에 의해 서열번호 7과 상이한 펩티드의 서열을 포함하고;

상기 식에서, Z는 X₃₃,X₃₃F, X₃₃FX₃₅, X₃₃FVX₃₅, X₃₃FVAX₃₅, X₃₃FVALX₃₅, X₃₃FVALGX₃₅, X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고, 임의적으로 Z는 X₃₃,X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고, 임의적으로Z는 X₃₃, X₅₃X₃₅, 또는 X₅₃FX₃₅이고;

X₃₃ 및 X₃₅는 각각 독립적으로 아미노산의 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 탄소 쇄를 포함하는 아미노산이고, 임의적으로 X₃₃ 및 X₃₅는 독립적으로 시스테인 또는 리신으로부터 선택되고, 상기 시스테인 또는 리신의 측쇄는 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결되고;

X₅₃은 Gln 또는 Asn이다. 한 실시양태에서, 자가 절단 디펩티드는 하기 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄, 및 임의적으로 C16-C30 탄소 쇄를 포함하고, 상기 C16-C30 탄소 쇄는 존재하는 경우 임의적으로 스페이서를 통해 상기 측쇄에 공유 연결되고;

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₅는 NH₂이다.

한 실시양태에서, PTH 펩티드 및 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되고, 여기서 디펩티드는 임의적으로 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합되고,

상기 식에서, Z는 X₃₃,X₃₃F, X₃₃FX₃₅, X₃₃FVX₃₅, X₃₃FVAX₃₅, X₃₃FVALX₃₅, X₃₃FVALGX₃₅, X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고, 임의적으로 Z는 X₃₃,X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고, 임의적으로 Z는 X₃₃, X₅₃X₃₅, 또는 X₅₃FX₃₅이고;

X₃₃ 및 X₃₅는 각각 독립적으로 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄를 포함하는 아미노산이고;

X₅₃은 Asn이고, 자가 절단 디펩티드는 하기 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, 및 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₅는 NH₂이고, 임의적으로 제1 아미노산은 D-입체화학 배열이다. 추가의 실시양태에서, R₂ 및 R₈은 둘 다 H이고, R₃ 및 R₄는 독립적으로 C₁-C₄ 알킬이다.

한 실시양태에서, PTH 펩티드 및 자가 절단 디펩티드를 포함하는 PTH 접합체가 제공되며, 여기서 디펩티드는 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합되고, 상기 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)의 서열을 포함하고;

상기 식에서, Z는 X₃₃,X₃₃F, X₃₃FV, NX₃₅, 또는 NFX₃₅이고;

X₃₃ 및 X₃₅는 각각 독립적으로 아미노산의 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C20 탄소 쇄를 포함하는 아미노산(임의적으로 리신 또는 오르니틴)이고, 임의적으로 X₃₃ 및 X₃₅는 독립적으로 리신 측쇄에 공유 연결된 C16-C20 지방산 또는 C16-C20 이산을 포함하는 리신 산이고, 임의적으로 X₃₃ 및 X₃₅는 독립적으로 구조 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]CO(CH₂)_14-20COOH를 갖는 측쇄를 포함하는 아미노산이고;

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH₂의 측쇄 및 임의적으로 C16-C20 탄소 쇄를 포함하고, 상기 C16-C20 탄소 쇄는 존재하는 경우 임의적으로 스페이서를 통해 상기 측쇄에 공유 연결되고, 임의적으로 측쇄는 임의적으로 스페이서를 통해 C16-C20 지방산 또는 C16-C20 이산으로 아실화되고,

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬이고;

R₅는 NH₂이고, 임의적으로 단 R₁이 상기 C16-C20 탄소 쇄가 없는 경우 화학식 I의 디펩티드의 제1 아미노산은 D-입체화학 배열이다.

한 실시양태에서, PTH 펩티드 및 자가 절단 디펩티드를 포함하는 PTH 접합체가 제공되며, 여기서 디펩티드는 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합되고, PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)의 서열을 포함하고; 상기 식에서, Z는 X₃₅,NX₃₅, 또는 NFX₃₅이고; X₃₅는 구조 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]CO(CH₂)_14-20COOH, 임의적으로 (C₄ 알킬)NH-[스페이서]CO(CH₂)_14-20COOH를 갖는 측쇄를 포함하는 아미노산이고, 상기 디펩티드는 구조 A-B를 포함하고, 상기 식에서, A는 Lys, 엡실론 아실화된 Lys, 엡실론 아실화된 dLys 또는 dLys이고, B는 N-메틸 글리신(사르코신)이고, 임의적으로 A의 아실화된 Lys, 또는 아실화된 dLys는 구조 (C₄ 알킬)NH-[스페이서]CO(CH₂)_14-20COOH를 갖는 측쇄를 포함하고, 상기 스페이서는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산 이량체 또는 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 k는 2 또는 4이고, q는 2이고, 임의적으로 스페이서는 하기 구조를 갖는 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂-NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂-NH-감마 글루탐산이다:

.

한 실시양태에서, PTH 펩티드 및 자가 절단 디펩티드를 포함하는 PTH 접합체가 제공되며, 여기서 디펩티드는 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합되고, PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)의 서열을 포함하고; 상기 식에서, Z는 X₃₅,NX₃₅, 또는 NFX₃₅이고; X₃₅는 구조 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]CO(CH₂)_14-20COOH, 임의적으로 (C₄ 알킬)NH-[스페이서]CO(CH₂)_14-20COOH를 갖는 측쇄를 포함하는 아미노산이고, 상기 디펩티드는 구조 A-B를 포함하고, 상기 식에서 A는 L 또는 D 입체화학 배열의 아미노산이고, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]CO(CH₂)_14-20COOH, 임의적으로 (C₄ 알킬)NH-[스페이서]CO(CH₂)_14-20COOH의 측쇄 구조를 포함하고, B는 N-메틸 글리신(사르코신)이고, 상기 스페이서는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산 이량체 또는 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 k는 2 또는 4이고, q는 2이고, 임의적으로 스페이서는 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH]₂-감마 글루탐산이다.

본원에 개시된 임의의 접합체 실시양태에 따라, 접합체의 스페이서는 존재하는 경우 아미노산 또는 디펩티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 스페이서의 아미노산은 감마 글루탐산이다. 한 실시양태에서, 스페이서는 폴리에틸렌 글리콜 중합체에 의해 분리된 2개의 아미노산을 포함한다. 본원에 개시된 임의의 접합체 실시양태에 따라, 스페이서는 구조: 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산을 포함할 수 있고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이다. 한 실시양태에서, k는 2 또는 4이고, q는 1 또는 2이다. 한 실시양태에서, k는 2이고, q는 2 또는 4이다. 한 실시양태에서, k는 2이고, q는 2이다. 한 실시양태에서, k는 2이고, q는 4이다. 한 실시양태에서, k는 2이고, q는 8이다. 한 실시양태에서, k는 2 또는 4이고, q는 1이다. 한 실시양태에서, k는 2이고, q는 1이다. 한 실시양태에서, k는 4이고, q는 1이다. 한 실시양태에서, k는 8이고, q는 1이다. 한 실시양태에서, k는 1이고, q는 2 내지 8 또는 2 내지 4로부터 선택되는 정수이다. 한 실시양태에서, k는 2이고 q는 2 내지 8 또는 2 내지 4로부터 선택되는 정수이다. 한 실시양태에서, k는 2이고, q는 1이다.

한 실시양태에서, 접합체의 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃ (서열번호 2) 또는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅ (서열번호 26)의 서열을 포함하고;

상기 식에서, X₃₃ 및 X₃₅는 각각 독립적으로 아미노산의 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 탄소 쇄를 포함하는 아미노산이고, 임의적으로 X₃₃및 X₃₅는 각각 독립적으로 임의적으로 스페이서를 통해 C16-C20 지방산 또는 C16-C20 이산으로 아실화된 측쇄를 포함하는 아미노산이고, 자가 절단 디펩티드는 하기 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]CO(CH₂)_14-20COOH 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]CO(CH₂)_14-20CH₃이고;

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬이고;

R₅는 NH₂이고, 임의적으로 R₂ 및 R₈은 둘 다 H이고, R₄는 H 또는 CH₃이다.

한 실시양태에서, PTH 접합체는 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 결합된 자가 절단 가능한 디펩티드를 포함하고, 여기서 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃ (서열번호 2) 또는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅ (서열번호 26)의 서열을 포함하고;

상기 식에서, X₃₃ 및 X₃₅는 각각 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되는 구조를 갖는 측쇄를 포함하는 아미노산이고, 스페이서는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산 이량체 또는 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 k는 2이고, q는 2이고;

자가 절단 디펩티드는 하기 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되는 구조이고, 스페이서는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산 이량체 또는 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 1-8 또는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고;

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬이고;

한 실시양태에서, PTH 접합체는 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 결합된 자가 절단 가능한 디펩티드를 포함하고, 여기서 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃ (서열번호 2)의 서열을 포함하고;

상기 식에서, X₃₃은 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되는 구조를 갖는 측쇄를 포함하는 아미노산이고, 스페이서는 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산이고, k는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1 또는 2이고, 임의적으로 k 및 q는 둘 다 2이고;

자가 절단 디펩티드는 하기 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되는 구조이고, 스페이서는 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산이고, k는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1 또는 2이고, 임의적으로 k 및 q는 둘 다 2이고;

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬이고;

R₅는 NH₂이고, 임의적으로 R₂ 및 R₈은 둘 다 H이고, R₃은 C₁-C₃ 알킬이고, R₄는 H 또는 CH₃이다.

한 실시양태에서, PTH 펩티드 및 아미드 결합을 통해 PTH 펩티드의 N 말단 알파 아민에 공유 결합된 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되며, 여기서 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z의 아미노산 서열을 포함하고;

상기 식에서, Z는 X₃₃F, X₅₃FX₃₅, 또는X₃₃이고;

X₃₃및 X₃₅은 각각 독립적으로 시스테인, 호모시스테인, 오르니틴, d-리신 또는 리신을 포함하고, 시스테인, 호모시스테인, 오르니틴, d-리신 또는 리신 잔기의 측쇄는 C14-C30 탄소 쇄로 아실화되거나 알킬화되고;

X₅₃은 Gln 또는 Asn이고;

상기 자가 절단 디펩티드는 하기 일반 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 C₁-C₄ 알킬)SH, 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄, 및 상기 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 탄소 쇄를 포함하는 중합체 쇄이고;

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬이고;

R₅는 NH₂이고, 임의적으로 R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH이고; R₂ 및 R₈은 각각 H이고; R₄는 H이고; R₃은 CH₃이고; R₅는 NH₂이다.

한 실시양태에 따라, PTH 펩티드 및 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되며, 여기서 디펩티드는 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 연결되고, 추가로 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃ 또는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅의 아미노산 서열을 포함하고;

상기 식에서, X₃₃ 및 X₃₅는 각각 (C₁-C₄ 알킬)NH-감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산-CO(CH₂)_14-20COOH의 측쇄를 포함하는 아미노산이고;

상기 자가 절단 디펩티드는 하기 일반 구조를 포함한다:

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산-CO(CH₂)_14-20COOH이고;

R₂ 및 R₈은 각각 H이고;

R₄는 H 또는 CH₃이고;

R₃은 C₁-C₃ 알킬이고;

R₅는 NH₂이고;

k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8로부터 선택되는 정수이고;

q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 R₄는 H이고, k는 2 또는 4이고, q는 1 또는 2이고, 임의적으로 K는 2이고, q는 2이다.

한 실시양태에 따라, PTH 펩티드 및 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되며, 여기서 디펩티드는 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 결합되고, PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅의 아미노산 서열을 포함하고;

상기 식에서, X₃₅는 (C₁-C₄ 알킬)NH-감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산-CO(CH₂)_14-20COOH의 측쇄를 포함하는 아미노산이고;

상기 자가 절단 디펩티드는 하기 일반 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 (C₄ 알킬)NH-감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산-CO(CH₂)_14-20COOH이고;

R₂, R₄및 R₈은 각각 H이고;

R₃은 CH₃이고;

R₅는 NH₂이고;

k는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고;

q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 k는 1 또는 2이고, q는 1, 2 또는 4이고, 임의적으로 k 및 q는 둘 다 2이다.

한 실시양태에 따라, PTH 펩티드 및 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되며, 여기서 디펩티드는 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 결합되고, PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃의 아미노산 서열을 포함하고;

상기 식에서, X₃₃은 (C₁-C₄ 알킬)NH-감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산-CO(CH₂)_14-20COOH의 측쇄를 포함하는 아미노산이고;

상기 자가 절단 디펩티드는 하기 일반 구조를 포함하고;

R₂, R₄및 R₈은 각각 H이고;

R₃은 CH₃이고;

R₅는 NH₂이고;

k는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고;

한 실시양태에 따라, 본 발명은 서열번호 77, 78, 79, 84, 87, 95, 102, 108, 110, 127, 또는 128을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 PTH 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, PTH 펩티드는 서열번호 87, 95, 108, 127, 또는 128로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 PTH 펩티드는 77 또는 87로부터 선택된다. 한 실시양태에서, PTH 펩티드는 서열번호 77이다. 또 다른 실시양태에서, PTH 펩티드는 서열번호 87이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 표 2에 나열된 PTH 펩티드를 포괄한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열에서 하나의 리신에 대해 만들어진 오르니틴 치환을 갖는 표 2로부터의 PTH 펩티드를 포괄한다. 또 다른 실시양태에서, 하나 초과의 리신에 대해 치환된 하나 초과의 오르니틴을 갖는 표 2로부터의 PTH 펩티드가 본원에 제공된다.

일부 실시양태에 따라, 본 발명은 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 때 1주 후에 프로드럭에 대해 절반 이하의 활성 약물을 제공하는 PTH 펩티드 프로드럭을 제공한다. 일부 실시양태에 따라, 본 발명은 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 때 1주 후에 프로드럭에 대해 1/3 이하의 활성 약물을 제공하는 PTH 펩티드 프로드럭을 제공한다. 일부 실시양태에 따라, 본 발명은 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 때 1주 후에 프로드럭에 대해 1/4 이하의 활성 약물을 제공하는 PTH 펩티드 프로드럭을 제공한다.

본 개시내용은 또한 본 개시내용의 PTH 접합체가 임의적으로 공유 결합을 통해 및 임의적으로 링커를 통해 추가의 접합체 모이어티에 연결된 다른 접합체를 포괄한다. 연결은 공유 화학 결합, 정전기, 수소, 이온, 반 데르 발스 또는 소수성 또는 친수성 상호작용과 같은 물리적 힘에 의해 달성될 수 있다. 비오틴-아비딘, 리간드/수용체, 효소/기질, 핵산/핵산 결합 단백질, 지질/지질 결합 단백질, 세포 부착 분자 파트너; 또는 서로에 대해 친화성을 갖는 임의의 결합 파트너 또는 이의 단편을 포함하는 다양한 비공유 커플링 시스템이 이용될 수 있다.

개시된 PTH 펩티드 접합체는 상응하는 모 PTH에 대해 이전에 기재된 임의의 용도에 적합한 것으로 여겨진다. 따라서, PTH 접합체는 불충분한 수준의 PTH와 관련된 임의의 질환 또는 병태(부갑상선기능저하증), 또는 골다공증과 같은 PTH 요법에 반응하는 질환을 치료하기 위해 환자에게 투여될 수 있다. 한 실시양태에 따라, 부갑상선기능저하증을 치료 또는 예방하거나 부갑상선기능저하증과 관련된 의학적 병태를 완화시키기에 효과적인 양으로 본원에 기재된 임의의 것에 따른 조성물 또는 접합체를 이러한 요법을 필요로 하는 환자에게 투여하는 부갑상선기능저하증의 치료 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 투여 경로는 피하를 포함한 비경구이다. 다른 실시양태에서, 투여 경로는 경구이다. 또 다른 실시양태에서, 투여 경로는 폐이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 PTH 펩티드는 에어로졸, 미스트 또는 분말 제형으로 흡입된다. 본원에 기재된 흡입 약제학적 조성물은 적합한 추진제, 예컨대 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 가스를 사용하여 가압 팩 또는 네뷸라이저로부터 에어로졸 스프레이 제공의 형태로 전달될 수 있다. 이러한 방법은 미국 특허 번호 6,468,798호(전체가 참조로 본원에 포함됨)에 기재된 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, PTH 펩티드의 용량 단위는 계량된 양을 전달하기 위한 밸브를 제공함으로써 결정된다.

본 개시내용의 특정 실시양태에서, 골다공증의 치료 방법이 기재된다. 이 방법은 이를 필요로 하는 환자에게 본 개시내용의 임의의 PTH 접합체를 투여하는 단계를 포함하며, 임의적으로 PTH 접합체는 단기 작용 PTH 작용제(예컨대, 서열번호 7의 PTH 펩티드, 또는 서열번호 31-37의 임의의 것)와 함께 투여된다. 한 실시양태에서, 환자에게 본 개시내용의 PTH 접합체 및 테리파라티드(Forteo®), 서열번호 7, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 및 칼시토닌으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제2 성분을 포함하는 조성물이 투여된다. 한 실시양태에서, 골다공증 또는 골감소증을 치료하는 방법은 본 개시내용의 PTH 접합체를 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 매일 피하 주사 또는 매일 경구 투여함으로써 투여하는 단계를 포함한다.

일부 실시양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체는 골다공증을 갖는다. 일부 실시양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체는 골감소증을 갖는다. 특정 실시양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체는 폐경후 여성이다. 일부 실시양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체는 글루코코르티코이드 유도된 골다공증을 갖는다. 특정 실시양태에서, 치료를 필요로 하는 대상체는 글루코코르티코이드 유도성 골감소증을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 골다공증 치료를 필요로 하는 대상체를 본 개시내용의 PTH 접합체로 매일 피하 주사함으로써 치료하는 단계를 포함하는, 골다공증의 치료 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 골다공증 치료를 필요로 하는 대상체를 격일로 본 개시내용의 PTH 접합체로 피하 주사함으로써 치료하는 단계를 포함하는, 골다공증의 치료 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 PTH 접합체로 매주 또는 매월 피하 주사에 의해 골다공증의 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 단계를 포함하는, 골다공증의 치료 방법을 제공한다.

본원에 개시된 접합체를 포함하는 약제학적 조성물은 제제화되어 표준 약제학적으로 허용되는 담체 및 당업자에게 공지된 투여 경로를 사용하여 환자에게 투여될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은 또한 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 본원에 개시된 하나 이상의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물을 포괄한다.

한 실시양태에 따라, 바람직하게는 멸균되고 바람직하게는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 순도 수준의 본원에 개시된 임의의 신규한 디펩티드/PTH 펩티드 복합체, 및 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 이러한 조성물은 본원에 개시된 바와 같은 디펩티드/PTH 펩티드 접합체를 함유할 수 있으며, 생성된 활성제는 적어도 0.1-10 mg/ml 이상의 농도로 존재한다. 한 실시양태에서, 약제학적 조성물은 멸균되고 임의적으로 다양한 용기 내에 저장되는 수용액을 포함한다. 본원에 개시된 화합물은 주사용으로 준비된 미리 제제화된 용액을 제조하기 위해 한 실시양태에 따라 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 약제학적 조성물은 동결건조된 분말을 포함한다. 약제학적 조성물은 조성물을 환자에게 투여하기 위한 일회용 디바이스를 포함하는 키트의 일부로서 추가로 포장될 수 있다. 용기 또는 키트는 주위 실온 또는 냉장 온도에서 저장하도록 라벨링될 수 있다.

한 실시양태에 따라, PTH 접합체의 개시된 프로드럭 형태가 환자의 혈액/혈청/혈장에서 활성 PTH의 최적화된 수준을 제공하도록 선택되는 약제학적 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 PTH 접합체 펩티드 중 하나의 프로드럭 형태를 이를 필요로 하는 환자에게 처음 투여한 후, 프로드럭의 혈장 농도는 적어도 48-96시간 동안 방출된 약물의 농도보다 더 높게 유지된다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 PTH 접합체 펩티드 중 하나의 프로드럭 형태로 초기 투여 후, 프로드럭의 혈장 농도는 적어도 120시간 동안 활성 약물의 혈장 농도보다 높다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 펩티드는 이를 필요로 하는 환자에게 투여되고 활성 펩티드의 혈장 농도는 초기 투여 후 48-120시간에 정점에 이른다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 PTH 접합체 펩티드 중 하나의 프로드럭 형태는 이를 필요로 하는 환자에게 투여되고 활성 펩티드의 혈장 농도는 투여 후 1주일에 이의 Cmax의 75% 초과로 유지된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 PTH 접합체 펩티드 중 하나의 프로드럭 형태는 이를 필요로 하는 환자에게 투여되고 생성된 활성 펩티드의 혈장 농도는 투여 후 10일에 이의 Cmax의 50% 초과로 유지된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 PTH 접합체 펩티드 중 하나의 프로드럭 형태는 이를 필요로 하는 환자에게 투여되고 생성된 활성 펩티드의 혈장 농도는 투여 후 2주에 이의 Cmax의 25% 초과로 유지된다.

본 개시내용의 PTH 접합체는 단독으로 또는 다른 적합한 성분과 조합하여 임의의 공지된 표준 경로를 이용하여 환자에게 투여될 수 있다.

비경구 투여에 적합한 제형은 수성 및 비수성, 등장성 멸균 주사 용액을 포함하며, 이는 항산화제, 버퍼, 정균제, 및 제형이 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질, 및 현탁제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액, 가용화제, 증점제, 안정화제 및 보존제를 함유할 수 있다. 용어 "비경구"는 소화관을 통하지 않고 피하, 근육내, 척수내 또는 정맥내와 같은 일부 다른 경로를 의미한다. 본 개시내용의 유사체는, 약제학적으로 허용되는 계면활성제, 예컨대 비누 또는 세제, 현탁제, 예컨대 펙틴, 카르보머, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 또는 카르복시메틸셀룰로스, 또는 유화제 및 다른 약제학적 애주번트의 첨가와 함께 또는 없이, 물, 식염수, 수성 덱스트로스 및 관련된 슈가 용액, 알콜, 예컨대 에탄올 또는 헥사데실 알콜, 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜, 디메틸술폭시드, 글리세롤, 케탈, 예컨대 2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-메탄올, 에테르, 폴리(에틸렌글리콜) 400, 오일, 지방산, 지방산 에스테르 또는 글리세리드, 또는 아세틸화된 지방산 글리세리드를 포함하는 약제학적 담체, 예컨대 멸균 액체 또는 액체의 혼합물 중의 생리학적으로 허용되는 희석제와 함께 투여될 수 있다.

본 개시내용의 화합물의 투여는 단기 작용 PTH 또는 PTH 유사체와 조합하여 수행될 수 있다. 본 개시내용의 펩티드는 상대적으로 짧은 생물학적 반감기의 PTH 화합물과 순차적으로 또는 공동 투여로 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다.

다른 실시양태에서, 본 개시내용의 화합물은 단독으로 또는 다른 작용제, 예컨대 칼시토닌, 비스포스포네이트, SERM(예컨대, 랄록시펜), 호르몬 대체 요법(HRT), 칼슘, 비타민 D1, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 D4 및 에스트로겐을 포함하는 뼈 흡수 억제제와 조합하여 투여될 수 있다. 본 개시내용의 화합물은 또 다른 작용제와 공동 투여될 수 있다. 대안적으로, 본 개시내용의 화합물은 또 다른 작용제와 함께 순차적으로 투여될 수 있다; 예컨대, 본 개시내용의 화합물은 1주 내지 1년의 기간 동안 단독으로 투여된 후 상기 화합물과 함께 또는 상기 화합물의 부재하에 또 다른 작용제를 투여한다.

한 실시양태에 따라, 본 개시내용의 PTH 접합체 및 칼시토닌, 비스포스포네이트, SERM(예컨대, 랄록시펜), 호르몬 대체 요법(HRT), 칼슘, 비타민 D1, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 D4 및 에스트로겐을 포함하는 하나 이상의 뼈 흡수 억제제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 한 실시양태에서, 이러한 조성물은 골감소증 또는 골다공증을 치료하기 위해 환자에게 투여되며, 임의적으로 약제학적 조성물은 경구 투여용으로 제제화된다.

경구 투여에 적합한 제형은 (a) 물, 식염수 또는 오렌지 주스와 같은 희석제에 용해된 유효량의 본 발명의 유사체와 같은 액체 용액; (b) 고체 또는 과립으로서 각각 활성 성분의 미리 결정된 양을 함유하는 캡슐, 사쉐, 정제, 로젠지 및 트로키; (c) 분말; (d) 적절한 액체 중의 현탁액; 및 적합한 에멀젼으로 이루어질 수 있다. 한 실시양태에 따라, 경구 투여에 적합한 제형은 본 개시내용의 PTH 접합체 및 나트륨 N-[8-(2-히드록시벤조일)아미노]카프릴레이트(SNAC)와 같은 흡수 증강제를 포함한다. 나트륨 N-[8-(2-히드록시벤조일)아미노]카프릴레이트(SNAC)는 단백질, 예컨대 인슐린, 칼시토닌 및 다른 거대분자, 예컨대 헤파린을 포함하는 다양한 스펙트럼의 분자의 투과성을 향상시키는 것으로 보고된 전달제이다. 한 실시양태에 따라, 약제학적 조성물은 경구 전달을 위해 제공되고, 조성물은 본 개시내용의 PTH 접합체 및 SNAC를 포함하고, 최적으로 약제학적 조성물은 정제로 제제화된다.

본원에 기재된 모든 치료 방법, 약제학적 조성물, 키트 및 다른 유사한 실시양태는 디펩티드/PTH 펩티드 복합체가 이의 모든 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다는 것을 고려한다.

한 실시양태에서, 키트에는 디펩티드/PTH 펩티드 복합체 조성물을 환자에게 투여하기 위한 디바이스가 제공된다. 키트는 다양한 용기, 예컨대 바이알, 튜브, 병 등을 추가로 포함할 수 있다. 바람직하게는, 키트는 또한 사용 지침도 포함할 것이다. 한 실시양태에 따라, 키트의 디바이스는 에어로졸 분배 디바이스이며, 조성물은 에어로졸 장치 내에 미리 포장된다. 또 다른 실시양태에서, 키트는 주사기 및 바늘을 포함하고, 한 실시양태에서 프로드럭 조성물은, 예컨대 29-31 크기를 갖는 낮은 게이지 바늘을 사용하여 주사기 또는 주사 펜 내에 미리 포장된다.

한 실시양태에 따라, 서열번호 31, 32 또는 33의 서열, 또는 13, 16, 19, 22, 26 및 33으로부터 선택되는 1개 또는 2개의 위치에서 리신 치환에 의해 서열번호 31, 32 또는 33과 상이한 서열을 포함하는 변형된 PTH 펩티드가 제공되고, 상기 변형된 PTH 펩티드는 13, 16, 19, 22, 26 및 33으로부터 선택되는 1개 또는 2개의 위치에 아실화된 아미노산을 포함하고, 임의적으로 그 아실화된 아미노산은 임의적으로 스페이서를 통해 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 C16-C20 지방산 또는 C16-C20 이산을 갖고, PTH 펩티드는 PTH 펩티드의 N-말단에 아미드 결합을 통해 공유 연결된 디펩티드 A-B를 추가로 포함하고, 상기 식에서 A는 아미노산(예컨대, Lys, 오르니틴, 시스테인 또는 호모시스테인), 임의적으로 D-입체화학 배열의 아미노산, 및 임의적으로 아실화된 아미노산이고; B는 N-알킬화된 아미노산, 임의적으로 N-메틸 글리신 또는 N-메틸 알라닌이다.

실시양태 1에 따라, PTH 펩티드 및 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합된 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되고, 임의적으로 자가 절단 디펩티드는 아미드 결합을 통해 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 연결되고,

상기 PTH 펩티드는

SVSEIQLMHX₁₀LX₁₂KHLX₅₆X₁₇X₁₈ ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 134);

SVSEIQLMHX₁₀LGKHLX₁₆SX₁₈ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 135); 및

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)

X₁₀ 및 X₁₆은 독립적으로 Asp, Gln 또는 Asn이고;

X₁₂는 Gly 또는 Aib이고;

X₅₆은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Asn이고;

X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;

X₁₈은 Met, Met(O), Leu, 또는 Nleu이고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₅₃은 Gln 또는 Asn이고, 임의적으로 단 X₁₂, X₁₆ 및 X₁₇ 중 1개 이하는 Aib이고, 임의적으로 C-말단 아미노산은 카르복시 말단을 아미드로 치환하도록 변형되고;

상기 자가 절단 디펩티드는 구조 A-B를 포함하고,

B는 N-알킬화된 아미노산이다.

실시양태 2에 따라, A가 Lys, dLys, 엡실론-아실화된- Lys, 엡실론-아실화된-dLys, 오르니틴, 엡실론-아실화된 오르니틴, 시스테인, S-아실화된 시스테인, 호모시스테인 및 S-아실화된 호모시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 임의적으로 A가 Lys, dLys, 아실화된-Lys 및 아실화된-dLys로 이루어진 군으로부터 선택되는 실시양태 1의 접합체가 제공된다. 또 다른 실시양태에서, A가 dLys인 실시양태 1의 접합체가 제공된다. 또 다른 실시양태에서, A가 엡실론-아실화된-dLys인 실시양태 1의 접합체가 제공된다. 또 다른 실시양태에서, A가 l-Lys 또는 엡실론-아실화된 l-Lys로부터 선택되는 실시양태 1의 접합체가 제공된다.

실시양태 3에 따라, Z가 Lys이고; X₁₀ 및 X₁₆이 Asn이고; X₁₃, X₂₆, 및 X₂₇이 Lys이고; X₁₇이 Ser이고; X₁₈이 Met이고; X₃₁이 Val이고; X₃₃이 Lys이고; A가 dLys이고, 측쇄가 감마 Glu-COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-감마 Glu 스페이서를 통해 COC₁₆H₃₂CO₂H로 아실화되고, B가 n-메틸 글리신인 실시양태 1 또는 2의 접합체가 제공된다.

실시양태 4에 따라, PTH 펩티드 및 임의적으로 PTH 단백질의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합된 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되고, 여기서 상기 PTH 펩티드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고;

I)

SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 5);

SVSEIQLMHNLX₁₂KHLX₅₆X₁₇MERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 6); 및

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)

상기 식에서, Z는 X₃₃,X₃₃F, X₃₃FX₃₅, X₃₃FVX₃₅, X₃₃FVAX₃₅, X₃₃FVALX₃₅, X₃₃FVALGX₃₅, X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고; 임의적으로 Z는 X₃₃ X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고;

X₁₂는 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Gly이고;

X₅₆은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Asn이고;

X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₃₃ 및 X₃₅는 각각 아미노산의 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아실화된 아미노산을 포함하고;

X₅₃은 Gln 또는 Asn이고, 임의적으로 단 X₁₂, X₁₆ 및 X₁₇ 중 단지 하나는 Aib이고, 임의적으로 C-말단 아미노산은 카르복시 말단을 아미드로 치환하도록 변형되고; 또는 상기 PTH 펩티드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고;

II)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₅ (서열번호 2);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅ (서열번호 12);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHQFX₃₅ (서열번호 14);

SVSEIQLMHNLX₁₂X₁₃HLX₁₆X₁₇MERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁HN (서열번호 103);

SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁HN (서열번호104);

SVSEIQLMHNLX₁₂KHLX₁₆X₁₇MERVEWLRKKLQDVHN (서열번호 105);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHN (서열번호 106)

상기 식에서, X₁₂는 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Gly이고;

X₁₆은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Asn이고;

X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₃₅는 임의적으로 스페이서를 통해 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아실화된 아미노산이고;

서열번호 2, 12, 14, 103, 104, 105, 106 또는 107의 PTH 펩티드는 서열번호 103, 104, 105, 106 또는 107의 펩티드의 위치 13, 16, 19, 22, 26, 33 중 어느 하나 또는 C-말단 아미노산에서 임의적으로 스페이서를 통해 C14-C20 지방산 또는 C14-C20 이산으로 아실화된 리신으로의 치환으로 변형되고;

상기 자가 절단 디펩티드는 구조 A-B를 포함하고,

상기 식에서, A는 아미노산, 임의적으로 D-입체화학 배열의 아미노산이고, 임의적으로 "A" 아미노산의 측쇄는 임의적으로 스페이서를 통해 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산으로 아실화되고;

B는 N-알킬화된 아미노산, 임의적으로 N-(C₁-C₄) 알킬화된 글리신, N-메틸 글리신 또는 N-메틸 알라닌이고; 임의적으로 단 X_33, X₃₅에서의 아실화된 아미노산 및 화학식 I의 디펩티드의 "A" 아미노산은 동일하거나 상이하고, 임의적으로 X₃₃, X₃₅에서의 아미노산 및 화학식 I의 디펩티드의 "A" 아미노산은 둘 다 리신이지만 스페이서, 입체화학 또는 리신 측쇄에 부착된 아실화 기가 상이하고, 임의적으로 "A"는 엡실론-아실화된 dLys이고, X₃₃, 및 X₃₅는 각각 엡실론-아실화된 Lys이고, 임의적으로 아실화 기는 스페이서를 통해 임의적으로 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산이다.

실시양태 5에 따라, 접합체의 아실화된 아미노산 각각이 스페이서를 통해 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하고, 스페이서가 감마 글루탐산, 및 COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 링커 모이어티를 포함하고, k가 1-8의 범위로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 단 A가 비아실화된 아미노산인 경우 A는 D-입체화학 배열의 아미노산인 실시양태 1-2 및 4 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 6에 따라, A가 Lys, dLys, 아실화된- Lys, 아실화된-dLys, 오르니틴, 아실화된 오르니틴, 시스테인, 아실화된 시스테인, 호모시스테인 및 아실화된 호모시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 임의적으로 A가 Lys, dLys, 아실화된-Lys 및 아실화된-dLys로 이루어진 군으로부터 선택되는 실시양태 1의 접합체가 제공된다.

실시양태 7에 따라, Z가 X₃₃,X₅₃X₃₅, 또는 X₅₃FX₃₅인 실시양태 1-6 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 8에 따라, PTH 펩티드 및 임의적으로 PTH 단백질의 N-말단 알파 아민에서 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합된 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되며, 여기서 상기 PTH 펩티드는

SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 5);

SVSEIQLMHNLX₁₂KHLX₅₆X₁₇MERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 6);

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7); 및

1, 2 또는 3개의 아미노산 치환에 의해 서열번호 7의 펩티드와 상이한 펩티드

상기 식에서, Z는 X₃₃F, X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, 또는X₃₃이고;

X₁₂는 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Gly이고;

X₅₆은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Asn이고;

X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;

X₃₁은 Gly 또는 Val이고;

X₃₃및 X₃₅는 각각 아실화된 아미노산을 포함하고;

X₅₃은 Gln 또는 Asn이고;

상기 자가 절단 디펩티드는 일반 구조 A-B-를 포함하고;

상기 식에서, A는 아미노산 또는 아실화된 아미노산이고, 임의적으로 아미노산 또는 아실화된 아미노산은 D-입체화학 배열이고;

B는 N-알킬화된 아미노산이고;

X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 상기 아실화된 아미노산은 독립적으로 아미노산의 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아미노산으로부터 선택되고, 상기 자가 절단 디펩티드는 B와 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파아민 사이 또는 위치 13, 16, 19, 22, 26 및 33 중 어느 하나에서 아미드 결합의 형성을 통해 상기 PTH 펩티드에 연결되고, X₃₃, X₃₅ 및 A의 아실화된 아미노산의 상기 임의적 스페이서는 독립적으로 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이고;

단 A가 비아실화된 아미노산인 경우 A는 D-입체화학 배열의 아미노산이다.

실시양태 9에 따라, 상기 PTH 펩티드가 서열 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)을 포함하고;

X₃₃및 X₃₅는 각각 독립적으로 아미노산의 산 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아미노산이고;

X₅₃은 Asn이고, 단 X_33, X₃₅에서의 아실화된 아미노산 및 화학식 I의 디펩티드의 "A" 아미노산은 동일하거나 상이하고, 임의적으로 X₃₃, X₃₅에서의 아미노산 및 화학식 I의 디펩티드의 "A" 아미노산은 각각 리신이지만 스페이서 또는 리신 측쇄에 부착된 아실화 기가 상이하고, 임의적으로 X₃₃, X₃₅에서의 아실화된 아미노산 및 화학식 I의 디펩티드의 "A" 아미노산은 동일한 실시양태 8의 접합체가 제공된다.

실시양태 10에 따라, 상기 PTH 펩티드가 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃ (서열번호 16) 또는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅ (서열번호 12)의 서열을 포함하고;

상기 식에서, X₃₃및 X₃₅는 각각 독립적으로 아미노산의 산 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아미노산인 실시양태 4-9 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 11에 따라, A, X₃₃ 및 X₃₅의 아실화된 아미노산이 독립적으로 시스테인, 호모시스테인, 오르니틴 및 리신으로부터 선택되고, 상기 시스테인, 호모시스테인, 오르니틴 또는 리신의 측쇄가 임의적으로 감마 글루탐산 연결을 포함하는 스페이서를 통해 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 공유 연결되는 실시양태 1-10 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 12에 따라, A, X₃₃ 및 X₃₅의 아실화된 아미노산이 각각 리신 또는 d-리신이고, 상기 리신 또는 d-리신의 측쇄가 임의적으로 감마 글루탐산 연결을 포함하는 스페이서를 통해 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 공유 연결되는 실시양태 1-11 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 13에 따라, A가 Lys, dLys, 엡실론-아실화된-Lys 및 엡실론-아실화된-dLys로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 자가 절단 디펩티드가 B 아미노산의 카르복시 말단을 통해 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 연결되는 실시양태 1-12 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 14에 따라, X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 상기 아실화된 아미노산이 스페이서를 통해 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하고, X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 스페이서는 독립적으로 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, (Xaa)-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산, 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산으로부터 선택되고;

상기 식에서, Xaa는 Arg, Tyr(OPO₃H₂), 및 hCys(SO₃H)로부터 선택되고;

k는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수이고;

q는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 k는 2이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되고, 임의적으로 스페이서는 -{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-인 실시양태 1-13 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 15에 따라, 상기 스페이서가 구조: 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산를 포함하고;

상기 식에서, k는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수이고;

q는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 k는 2, 4, 6 또는 8이고, q는 1이고, 임의적으로 k는 2 또는 4이고, q는 2 또는 4이고, 임의적으로 k는 2 또는 4이고, q는 1이고, 임의적으로 k는 2이고, q는 1-8의 범위로부터 선택되고, 임의적으로 k는 2이고, q는 2인 실시양태 1-14 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 16에 따라, A-B가 하기 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 C₁-C₈ 알킬, (C₁-C₄ 알킬)OH, (C₁-C₄ 알킬)SH, (C₁-C₄ 알킬)COOH, 및 (C₁-C₄ 알킬)NH₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄를 포함하고, 임의적으로 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산은 임의적으로 상기 스페이서를 통해 상기 측쇄에 공유 연결되고;

R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;

R₃은 C₁-C₆ 알킬이고;

R₅는 NH₂이고, 상기 스페이서는 아미노산 또는 디펩티드를 포함하는 실시양태 1-15 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 17에 따라, 상기 스페이서가 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1 또는 2이고, 임의적으로 스페이서가 -{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-인 실시양태 1-16 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 18에 따라, 상기 PTH 펩티드로부터의 A-B의 화학적 절단 반감기(t_1/2)가 생리학적 조건 하에 표준 PBS 용액에서 적어도 약 48 내지 168시간인 실시양태 1-17 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 19에 따라, 상기 PTH 펩티드로부터의 A-B의 화학적 절단 반감기(t_1/2)가 생리학적 조건 하에 표준 PBS 용액에서 적어도 약 70 내지 140시간인 실시양태 1-17 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 20에 따라, 상기 PTH 펩티드로부터의 A-B의 화학적 절단 반감기(t_1/2)가 생리학적 조건 하에 표준 PBS 용액에서 적어도 약 90 내지 120시간인 실시양태 1-17 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 21에 따라,

R₁이 (C₁-C₄ 알킬)NH이고;

R₂ 및 R₈이 각각 H이고;

R₄가 H 또는 CH₃이고;

R₃이 CH₃이고;

R₅가 NH₂인 실시양태 16의 접합체가 제공된다.

실시양태 22에 따라,

R₁이 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃이고;

R₂ 및 R₈이 각각 H이고;

R₄가H 또는 CH₃이고;

R₃이 CH₃이고;

R₅가 NH₂이고, 상기 [스페이서]는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수인 실시양태 16의 접합체가 제공된다.

실시양태 23에 따라, R₁이 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH이고, k는 2 또는 4이고, q는 1, 2 또는 4이고, 임의적으로 k 및 q는 둘 다 2인 실시양태 22의 접합체가 제공된다.

실시양태 24에 따라, R₁이 (C₄ 알킬)NH-[감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산]-CO(CH₂)_14-20COOH이고, k는 2 -4이고, q는 1 또는 2인 실시양태 22의 접합체가 제공된다.

실시양태 25에 따라, 절단 가능한 디펩티드의 제1 아미노산이 D-입체화학 배열의 아미노산인 실시양태 1-24 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 26에 따라, PTH 펩티드 및 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 연결된 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체가 제공되고, 여기서 상기 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃ (서열번호 16), SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅(서열번호 12), 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환에 의해 서열번호 16 또는 서열번호 12의 펩티드와 상이한 펩티드의 아미노산 서열을 포함하고;

상기 식에서, X₃₃ 및 X₃₅는 각각 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃ 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃의 측쇄를 포함하는 아미노산이고;

상기 자가 절단 디펩티드는 하기 일반 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃ 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃이고;

R₂ 및 R₈은 각각 H이고;

R₄는 H 또는 CH₃이고;

R₃은 C₁-C₃ 알킬이고;

R₅는 NH₂이고, 상기 스페이서는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산--[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1 또는 2이고, 임의적으로 C-말단 아미노산은 카르복시 말단을 아미드로 치환하도록 변형된다.

실시양태 27에 따라, 상기 PTH 펩티드가 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅(서열번호 12)의 아미노산 서열을 포함하고;

상기 식에서, X₃₅는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산]-CO(CH₂)_14-20COOH의 측쇄를 포함하는 아미노산이고, 임의적으로 X₃₅는 (C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-CO(CH₂)_14-20COOH의 측쇄를 포함하는 아미노산이고;

상기 자가 절단 디펩티드가 하기 일반 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-[감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산]-CO(CH₂)_14-20COOH이고;

R₂, R₄및 R₈은 각각 H이고;

R₃은 CH₃이고;

R₅는 NH₂이고;

q는 2 또는 4이고;

k는 2이고, 임의적으로 q는 2이고, 임의적으로 R₁은 (C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-CO(CH₂)_14-20COOH이고, 임의적으로 단 X₃₅에서의 아실화된 아미노산 및 화학식 I의 디펩티드의 "A" 아미노산은 이고, 임의적으로 X₃₅에서의 아미노산 및 화학식 I의 디펩티드의 "A" 아미노산은 둘다 리신이지만 스페이서, 입체화학 또는 리신 측쇄에 부착된 아실 기가 상이하고, 임의적으로 A는 엡실론-아실화된 dLys이고, X₃₅는 엡실론-아실화된 Lys이고, 임의적으로 C-말단 아미노산은 카르복시 말단을 아미드로 치환하도록 변형되는 실시양태 26의 접합체가 제공된다.

실시양태 28에 따라, 상기 PTH 펩티드가 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃(서열번호 16)의 아미노산 서열을 포함하고;

상기 식에서, X₃₃은 (C₁-C₄ 알킬)NH-[감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산]-CO(CH₂)_14-20COOH의 측쇄를 포함하는 아미노산, 임의적으로 (C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-CO(CH₂)_16-18COOH의 측쇄를 포함하는 아미노산이고;

상기 자가 절단 디펩티드가 하기 일반 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-[감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산]-CO(CH₂)_14-20COOH, 임의적으로 (C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-CO(CH₂)_16-18COOH이고;

R₂, R₄및 R₈은 각각 H이고;

R₃은 CH₃이고;

R₅는 NH₂이고;

q는 2이고;

k는 2 또는 4인 실시양태 26의 접합체가 제공된다.

실시양태 29에 따라, 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산이 D-입체화학 배열이고, 임의적으로 상기 스페이서가 존재하는 경우 -{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-인 실시양태 1-28 중 어느 하나의 접합체가 제공된다.

실시양태 30에 따라, 실시양태 1-29 중 어느 하나의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.

실시양태 31에 따라, 상기 조성물이 나트륨 N[8-(2-히드록시베노일)아미노 카프릴레이트]를 추가로 포함하고, 임의적으로 조성물이 정제 형태로 제제화되는, 경구 전달용으로 제제화되는 실시양태 30의 약제학적 조성물이 제공된다.

실시양태 32에 따라, 서열번호 7, 서열번호 31, 또는 서열번호 32의 펩티드 및 임의적으로 칼시토닌을 추가로 포함하는 실시양태 30 또는 31의 약제학적 조성물이 제공된다.

실시양태 33에 따라, 치료를 필요로 하는 환자에게 실시양태 30, 31 및 32 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 부갑상선기능저하증을 치료하는 방법이 제공된다.

실시양태 34에 따라, 정맥내, 피하 또는 근육내 전달을 위해 제제화된 실시양태 30의 액체 약제학적 조성물이 제공된다.

실시양태 35에 따라, 치료를 필요로 하는 환자에게 실시양태 30, 31 및 32 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 골다공증 또는 골감소증을 치료하는 방법이 제공된다.

실시양태 36에 따라, 조성물이 매일, 격일로, 1주당 1회 또는 2주마다 1회 투여되는 실시양태 33-35 중 어느 하나에 따른 방법이 제공된다.

실시양태 37에 따라, 조성물이 경구 투여되는 실시양태 33 및 35-36 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

실시양태 38에 따라, 조성물이 폐 전달을 통해 투여되는 실시양태 33 및 35-36 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

실시양태 37에 따라, 부갑상선기능저하증을 치료하거나 부갑상선기능저하증과 관련된 증상을 완화하기 위한 실시양태 1-29의 접합체 중 어느 하나의 용도가 제공된다.

실시예 1: (PBS에서) 모델 디펩티드 절단 속도의 결정

특정 헥사펩티드(HSRGTF-NH₂; 서열번호 28)를 아미드 결합을 통해 헥사펩티드에 연결된 다양한 디펩티드의 반감기를 결정하기 위한 모델 펩티드로 사용하였다. 헥사펩티드를 펩티드 합성기에서 조립하고, Boc 보호된 사르코신 및 리신을 모델 펩티드 결합된 수지에 연속적으로 첨가하여 펩티드 A(Lys-Sar-HSRGTF-NH₂; 서열번호 29)를 생성하였다. 펩티드 A를 HF로 절단하고 분취용 HPLC로 정제하였다.

HPLC를 사용한 분취용 정제:

실리카 기반 1 x 25 cm Vydac C18(5 μ 입자 크기, 300 A° 공극 크기) 컬럼에서 HPLC 분석을 이용하여 정제를 수행하였다. 사용된 기구는 워터스 어쏘시에이츠(Waters Associates) 모델 600 펌프, 인젝터 모델 717 및 UV 검출기 모델 486이었다. 모든 샘플에 대해 230 nm의 파장이 사용되었다. 용매 A는 증류수 중에 10% CH₃CN/0.1% TFA를 함유하고, 용매 B는 CH₃CN 중에 0.1% TFA를 함유하였다. 선형 구배를 사용하였다(2시간 내에 0에서 100% B). 유속은 10 ml/분이었고, 분획 크기는 4 ml였다. ~150 mg의 조 펩티드로부터 30 mg의 순수한 펩티드를 수득하였다.

펩티드 A를 PBS 버퍼에 1 mg/ml의 농도로 용해시켰다. 용액을 37℃에서 인큐베이션하였다. 분석을 위해 5시간, 8시간, 24시간, 31시간 및 47시간에 샘플을 수집하였다. 동일한 부피의 0.1% TFA로 pH를 낮춤으로써 디펩티드 절단을 켄칭하였다. 절단 속도는 LC-MS로 정성적으로 모니터링하고, HPLC로 정량적으로 연구하였다. 피크 심플 크로마토그래피(Peak Simple Chromatography) 소프트웨어를 사용하여 프로드럭 및 모 모델 펩티드에 대한 체류 시간 및 상대적 피크 면적을 정량화하였다.

질량 분광측정을 이용한 분석

질량 스펙트럼은 표준 ESI 이온 소스와 함께 사이엑스(Sciex) API-III 전자분무 사중극자 질량 분광계를 사용하여 수득되었다. 사용된 이온화 조건은 하기와 같다: 양이온 모드의 ESI; 이온 분무 전압, 3.9kV; 오리피스 포텐셜, 60 V. 사용된 분무 및 커튼 가스는 0.9 L/분의 질소 유속이었다. 질량 스펙트럼은 600-1800 톰슨스(Thompsons)로부터 단계당 0.5 Th 및 2 msec 드웰 시간으로 기록되었다. 샘플(약 1 mg/mL)을 1% 아세트산을 갖는 50% 수성 아세토니트릴에 용해시키고, 외부 주사기 펌프에 의해 5 μL/분의 속도로 도입하였다. PBS에 용해된 펩티드는 분석 전에 제조자(Millipore Corporation, Billerica, MA)에서 제공한 지침에 따라 0.6 μL C4 수지를 함유하는 ZipTip 고체상 추출 팁을 사용하여 탈염되었다.

HPLC를 이용한 분석

HPLC 분석은 214 nm의 UV 검출기 및 150 mm x 4.6 mm C8 Vydac 컬럼이 장착된 베크만 시스템 골드 크로마토그래피(Beckman System Gold Chromatography) 시스템을 사용하여 수행되었다. 유속은 1 ml/분이었다. 용매 A는 증류수 중에 0.1% TFA를 함유하고, 용매 B는 90% CH₃CN 중에 0.1% TFA를 함유하였다. 선형 구배를 사용하였다(10분 내에 0%에서 30%B). 데이터는 피크 심플 크로마토그래피 소프트웨어를 사용하여 수집 및 분석되었다.

절단의 초기 속도는 각각의 프로드럭으로부터 디펩티드의 해리에 대한 속도 상수를 측정하기 위해 사용되었다. 프로드럭 및 모델 모 펩티드의 농도는 각각의 상이한 수집 시간에 대한 각각의 피크 면적 'a' 및 'b'에 의해 결정되었다. 프로드럭의 0차 해리 속도 상수는 다양한 시간 간격에서 프로드럭 농도의 로그를 플로팅하여 결정되었다. 이 플롯의 기울기는 속도 상수 'k'를 제공한다. 다양한 프로드럭의 절단에 대한 반감기는 수학식 t_1/2 = .693/k를 이용하여 계산되었다. 이러한 실험에서 생성된 결과는 표 1에 제시되어 있다.

실시예 2: PTH 접합체의 합성

PTH 펩티드 유사체는 ABI-433A 펩티드 합성기 및 Fmoc/Oxyma/DIC 커플링 프로토콜을 이용하여 0.1 mmol Fmoc-Lys(Mtt)-Wang 수지에서 조립되었다. Fmoc-Sar-OH 및 Boc-D-Lys(Boc)-OH는 천연 제1 아미노산(Ser¹)의 N-말단에 순차적으로 커플링되었다. Lys³³의 Mtt 측쇄를 탈보호시키고, 생성된 유리 아민을 추가 연장에 사용하였다. 이 아민을 Fmoc-Glu-OtBu와 순차적으로 커플링시키고, Fmoc-NH-PEG₂-CH₂COOH,이어서 Fmoc-Glu-OtBu 및 마지막으로 옥타데칸디오익산 모노-tert-부틸 에스테르를 2회 반복 첨가하였다. 2.5% TIS, 2.5% 2-메르캅토에탄올, 2.5% 아니솔 및 2.5% H₂O를 함유하는 TFA 용액으로 실온에서 2시간 동안 완만하게 교반하면서 처리함으로써 합성 수지로부터 펩티드를 화학적으로 제거하였다. 수지를 여과로 제거하고, 냉각 에테르(50 ml)를 첨가하여 펩티드를 침전시켰다. 펩티드 침전물을 원심분리에 의해 수집하고, 냉각 에테르(3 x 50 ml)로 세척하였다.

불순한 펩티드는 분취용 역상 HPLC 컬럼(Kinetex® 5 μm C8 100 Å LC 컬럼 250 X 21.2 mm, 10-50% 수성 ACN(0.1% TFA), 15 mL/분의 유속)으로 정제되었다. 순수한 펩티드를 분석 LCMS로 평가하고, 풀링된 분획을 동결건조하여 최종 생성물을 백색 솜털 고체로 제공하였다.

2개의 상이한 구조를 갖는 지방 아실화가 사용된 경우에 마지막 리신에서 디펩티드-프로드럭의 측쇄는 Boc-D-Lys(Fmoc)-OH로 커플링되었다. 리신 Fmoc 측쇄는 표준 염기 처리에 의해 탈보호되었다. 지방산 측쇄의 조립은 Lys³³에 대해 기재된 바와 같이 발생하였다. Lys³³에 두 번째이지만 상이한 지방산을 위치시키기 위해, 보호된 펩티드 수지는 Lys³³의 Mtt 측쇄가 다음에 탈보호되고 추가의 화학적 연장을 위해 리신 측쇄가 사용되는 모노-지방 아실화된 펩티드 유사체에 대해 상기 기재된 바와 같이 추가로 사용되었다.

동일한 구조의 이중 지방 아실화가 N 및 C-말단 리신 잔기에 사용된 펩티드 유사체의 경우, 마지막 아미노산은 Boc-D-Lys(Fmoc)-OH로 추가되었다. 수지의 전체 조립 후 Fmoc 및 Mtt 보호기를 제거하여 측쇄가 상기 기재된 일반적인 커플링 절차에 의해 동시에 연장되도록 하였다.

페길화

펩티드 [Cys³⁵]-PTH(1-35)는 ABI-433A 펩티드 합성기 및 Fmoc/Oxyma/DIC 커플링 프로토콜을 이용하여 0.1 mmol 링크(Rink) 아미드 수지에서 조립되었다. 지방 아실화에 사용되는 펩티드의 제조에서 이전에 기재된 바와 같은 TFA 절단 및 에테르 침전은 불순한 Cys³⁵-펩티드를 제공하였으며, 이는 분취용 HPLC에 의해 정제되었다. 티올 접합은 1 mM EDTA 및 10 mM TCEP를 함유하는 100 mM 나트륨 시트레이트 버퍼, pH 4.0에서 수행되었다. 과량의 40k 말레이미도, 메톡시 PEG를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 비반응된 PEG 시약은 SP-세파로스 수지 및 버퍼 A로 20 mM 나트륨 아세테이트 pH 4.0 및 버퍼 B로 1 M NaCl을 함유하는 동일한 버퍼를 갖는 선형 염 구배를 사용하는 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 제거되었다. 풀링된 분획을 C2 SPE 카트리지로 탈염시키고 동결건조시켜 원하는 페길화된 PTH를 제공하였다. 본 개시내용에 따라 제조된 화합물의 목록이 표 2에 제공된다.

실시예 3: 절단 반감기의 평가

PTH 프로드럭을 PBS 버퍼에 용해시키고, pH 7.4를 얻도록 조정하였다. 생성된 용액을 37℃에서 인큐베이션하였다. 분취량은 설계된 시점에서 취하여 LC-MS로 분석하였다. 페노메넥스 키네텍스(Phenomenex Kinetex) C8 2.6 μ 100A(75×4.6 mm) 컬럼이 장착된 아질런트 1260 인피니티(Agilent 1260 Infinity) 기구를 사용하여 분석을 수행하였다. 1 mL/분의 유속 및 10분에 걸쳐 0.1% 트리플루오로아세트산과 함께 물 중 10% - 80% 아세토니트릴의 구배. 데이터는 214 nm에서의 흡수를 사용하여 수집되었다. 양성 모드 MS 데이터는 아질런트 6120 사중극자(Agilent 6120 Quadrupole) LC/MS로 수득되었다. 프로드럭 및 약물의 농도는 상대적 피크 면적에 의해 결정되었다. 프로드럭의 0차 해리 속도 상수는 다양한 시점에서 프로드럭 농도의 로그를 플로팅하여 결정되었다. 이 플롯의 기울기는 속도 상수 'k'를 제공한다. 절단 반감기는 수학식 t_1/2= 0.693/k에 기초하여 계산되었다. 표 3은 본 개시내용의 PTH 접합체의 다양한 실시양태의 절단 반감기를 나타낸다.

실시예 4: 생물검정 실험 설계: cAMP 검출을 위한 루시퍼라제 기반 리포터 유전자 검정

cAMP를 유도하는 각각의 PTH 유사체 또는 프로드럭의 능력은 반딧불이 루시퍼라제 기반 리포터 검정으로 측정되었다. 유도되는 cAMP 생성은 이의 수용체에 결합하는 PTH에 정비례한다. PTH1 수용체 및 cAMP 반응 요소에 연결된 루시퍼라제 유전자로 공동 형질감염된 HEK293 세포를 생물검정에 사용하였다. 결과는 도 3a, 3b, 4 및 표 4에 나타나 있다.

세포는 0.3% 피틀클론(FetalClone) III(HyClone, Logan, UT)이 보충된 듈베코 최소 필수 배지(Dulbecco Minimum Essential Medium) (Gibco, Life Technologies, Grand Island, NY)에서 16시간 배양하여 혈청을 제거시킨 다음, 96 웰 "코스타(Costar) 3610" 검정 플레이트(Corning, Kennebunk, ME)에서 37℃, 5% CO₂에서 5시간 동안 PTH 유사체 또는 프로드럭의 연속 희석액과 함께 인큐베이션되었다. 인큐베이션 종료 시, 50 μL의 스테디-라이트 플러스(Steady-Lite Plus) (PerkinElmer, Waltham, MA)를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 간단히 교반하고, 4분 동안 인큐베이션하고, 엔스파이어(EnSpire) 알파 다중 모드 플레이트 판독기(PerkinElmer, Waltham, MA)에서 광 출력을 측정하였다. 유효 50% 농도(EC50)는 오리진(Origin) 2019b 소프트웨어(OriginLab, Northampton, MA)를 사용하여 계산되었다.

실시예 5: 정상 래트에서 약리학 평가

비히클 및 화합물 서열번호 102(20, 40 및 80 nmol/kg의 용량)를 6마리 래트(성별: 암컷; 스트레인: 스프래그 다우리; 평균 체중: 267.3 g; 나이: 20-22주령, 식단: 표준 식사)의 4개 그룹에 피하 주사하였다. 래트의 각각의 그룹은 주사 직전 및 6, 24, 48 및 72시간 후에 채혈되었다. 혈액을 회전시키고, 혈청을 수집하여 -20℃에서 저장하였다. 칼슘 및 인 농도는 제조자의 지침에 따라 상업적으로 이용 가능한 검정을 이용하여 결정되었다. 결과는 도 5a 및 5b에 나타나 있다.

실시예 6: 정상 마우스에서 약리학 평가

비히클 및 화합물 서열번호 102, 서열번호 74 및 서열번호 77(각각 20 또는 40 nmol/kg 용량)을 8마리 마우스(성별: 수컷; 스트레인: C57Bl6/J; 평균 체중: 24.8 g; 나이: 8-10주령; 식단: 표준 식사)의 7개의 그룹에 피하 주사하였다. 마우스의 각각의 그룹은 주사 직전 및 24시간 및 48시간 후에 채혈되었다. 혈액을 원심분리하고, 혈청을 수집하여 -20℃에 저장하였다. 제조자의 지침에 따라 상업적으로 이용 가능한 검정을 이용하여 칼슘 농도를 결정하였다. 결과는 도 5c에 나타나 있으며, 이는 혈청 칼슘 수준을 감소시키는 PTH 펩티드의 C-말단에 아실화된 아미노산을 포함하는 PTH 유사체에 대한 마우스에서의 생체내 효능을 입증한다.

실시예 7: 정상 마우스에서 약동학적 평가 - LCMS에 의한 혈장 펩티드 농도 측정

화합물 서열번호 78, 서열번호 79 및 서열번호 84를 마우스(성별: 수컷; 스트레인: C57Bl6/J; 평균 체중: 34.8 g; 나이: 42-44주령, 식단: 표준 식사)에서 100 nmol/kg의 용량으로 피하 주사하였다. 각각의 화합물을 20마리의 마우스에 주사하고, 1, 4, 8, 24 및 48시간에 각각의 처리로부터 4마리의 마우스로부터 EDTA-코팅된 튜브에 혈액을 수집하였다. 원심분리 후, 혈장을 수집하여 -20℃에서 저장하였다.

분석 당일 cd-1 마우스 혈장으로의 연속 희석으로 표준 곡선 샘플을 제조하였다. 표준 곡선 및 연구 샘플의 분취량(40 μl)을 96 웰 플레이트로 옮기고, 160 μl의 메탄올:아세토니트릴(ACN) (1:1, v/v) 내부 표준 용액과 혼합하였다. 10분의 원심분리 후, 상청액을 산성화된(0.1% 포름산) ACN:물(3:1, v/v)로 2배 희석하고, LC-MS/MS로 분석하였다.

시마주(Shimadzu) CBM-20A 넥세라(Nexera) UPLC 시스템 및 CTC PAL 오토샘플러는 LC-MS/MS 시스템의 프론트 엔드를 구성하였다. 크로마토그래피는 아커코어(Accurcore) C8 컬럼, 2.6 μm, 2.1 mm X 30 mm(Thermo 17226-032130) 및 ACN 중의 0.1% 포름산(aq) 및 0.1% 포름산의 이원 구배 프로그램을 기반으로 하였다. 이동상 용매 A는 미세 여과된 물:포름산(1000:1 v/v)으로 이루어졌고, 용매 B는 ACN:포름산(1000:1)으로 이루어졌다. 유속은 0.8 ml/분이었고, 컬럼 온도는 주위 온도였으며, 주입 부피는 5 μl였다. 2-니들 린스는 ACN:물(25:75, v/v) 및 0.1% 포름산 중의 ACN:이소프로판올:아세톤(5:4:1, v/v/v)이었다. 구배 사이클은 0.75분에 65% B까지 선형 증가와 함께 15% B(농도)에서 시작되었다. 칼럼을 0.25분 동안 98% B로 세척하고, 1.20분의 획득 시간 동안 초기 % B로 돌아갔다. 초기 % B의 재평형화를 포함하여 각각의 주입에 대한 총 사이클 시간은 약 3분이었다. 각각의 실행의 처음 0.3분은 웨이스트로 돌렸다.

질량 분광측정 데이터는 양이온화 모드에서 사이엑스 API 6500 + 삼중-사중극자 질량 분광계(모델 5060743-J)를 제어하는 어낼리스트(Analyst) 소프트웨어를 사용하여 생성되었다. 각각의 시험 항목 및 내부 표준(IS)에 대한 다중 반응 모니터링(MRM), 충돌 에너지, 디클러스터링 포텐셜 및 충돌 종료 포텐셜 설정이 표 5에 제공된다. 시간 경과에 따른 각각의 유사체의 농도는 도 6a 및 6b에 나타나 있다.

실시예 8: PTH 유사체: 단일 피하 투여 후 시노몰구스 원숭이에서의 비교 약동학

시노몰구스 원숭이에게 단일 피하 투여 후 PTH 유사체의 약동학적 프로파일 및 혈청 칼슘 및 인의 약력학적 반응 평가를 조사하였다. 총 6마리의 원숭이가 이 시험에 사용되었다. 연구 시작 시 나이가 2-4세 범위이고 체중이 적어도 2.5 kg인 수컷 2마리 및 암컷 4마리의 총 6마리의 원숭이를 이 시험에 사용하였다.

실험 설계: 투여 경로, 빈도 및 기간

동물을 하기 표 6에 나타난 바와 같이 그룹에 할당하였다. 동물에게 피하 주사로 투여하였다. 용량 투여는 시차를 두었다. 그룹 1 수컷에게 1회 투여하고, 나머지 2마리의 그룹 1 암컷 및 모든 그룹 2 동물에게 약 4일 후에 1회 투여하였다. 각각의 동물에 대해 투여 첫날을 연구일(SD) 1로 지정하였다. 용량 부피는 0.3 mL/kg이었다. 동물의 가장 최근에 기록된 체중을 기준으로 개별 용량 부피를 계산하였다. 동물을 관찰하고, 데이터를 표 7에 나타난 바와 같이 기록하였다.

투여 전 및 투여 후 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 및 192시간에 모든 동물로부터 적어도 0.5 mL의 혈액 샘플을 수집하였다. 동물은 수집 전에 금식하지 않았다. 혈액은 대퇴 정맥 (또는 또 다른 적절한 부위)을 통해 수집되었다. 혈액 샘플은 5 ± 3℃(젖은 얼음 또는 동등한 것)에서 유지되었고, 각각의 혈액 샘플 수집 후 1시간 이내에 5 ± 3℃에서 원심분리되었다. 생성된 혈장을 튜브로 옮긴 후, 분석할 때까지 -75 ± 15℃를 유지하도록 설정된 조건 하에 저장하였다.

약동학적 평가

약동학적 평균 농도-시간 데이터는 투여 경로에 따라 비구획 방법(Phoenix® WinNonlin® 버전 7.0 이상)을 이용하여 분석되었다. 하기 파라미터는 가능할 때마다 데이터가 허용하는 대로 계산되었다: Cmax, Tmax 및 AUC. 기술 통계는 포에닉스 윈논린(Phoenix WinNonlin)을 사용하여 생성되었다.

결과

PTH 유사체의 약동학을 평가하는 동안 원숭이 연구에서 사망률을 최소화하기 위해 저효능 알라닌 치환된 PTH 작용제 서열번호 93 PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18)을 이의 2개의 프로드럭 형태로 연구하였다: dK-1, N(Me)G0을 갖는 서열번호 94 PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18) 및 dK-1(γE-2xOEG-γE-이산C18), N(Me)G0을 갖는 서열번호 95 PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18)을 원숭이에게 투여하였다. 위치 8을 알라닌으로 치환하면 시험관내 효능이 거의 100배 감소한다.

이들 약동학(PK) 연구로부터의 결과는 도 7a 및 7b에 제공되고, 투여된 프로드럭 형태 및 이의 활성 약물 형태(디펩티드 프로드럭 요소의 생체내 비효소적 절단 후에 생성됨)의 농도는 시간 경과에 따라 측정되었다. 원숭이에게 25 nmol/kg로단일 피하 용량의 프로드럭 PTH 유사체를 투여하고(도 7a에서 서열번호 94 및 도 7b에서 펩티드 19), 프로드럭 서열번호 94 및 서열번호 95의 농도를 이들의 상응하는 절단 생성물, 서열번호 93("약물")과 함께 투여 후 다음 192시간에 걸쳐 측정하였다.

구체적으로, 도 7a는 단일 용량의 프로드럭(서열번호 94)의 투여 후 시간 경과에 따른 프로드럭 PTH 유사체 서열번호 94 PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18) dK^-1, N(Me)G⁰; 및 이의 활성화된 형태 서열번호 93 PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18)의 검출 수준을 나타내는 그래프이다. 도 7b는 단일 용량의 프로드럭(서열번호 95)의 투여 후 시간 경과에 따른 프로드럭 PTH 유사체 서열번호 95 PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18) dK^-1(γE-2xOEG-γE-이산C18), N(Me)G^{0 및} 이의 활성화된 형태: 서열번호 93 PTH(1-33), A8, K33(γE-2xOEG-γE-이산C18)의 검출 수준을 나타내는 그래프이다. 데이터는 프로드럭 형태의 감소에 상응하는 시간 경과에 따른 활성 형태의 축적을 입증하며, 연장된 기간에 걸쳐 비교적 일정한 양의 활성 형태를 생성한다.

실시예 9: 서열번호 77의 20 또는 40 nM/kg을 피하 투여한 후 24시간 및 48시간에 측정된 C57BL/6J 마우스에서의 혈청 칼슘 수준

암컷 C57BL/6J 마우스를 3개 그룹(그룹당 n=8)에 무작위로 할당하고, 비히클(멸균 PBS 용액) 또는 PBS 중 서열번호 77(20 또는 40 nmol/kg)을 1회 피하 주사하였다. 서열번호 77은 PBS, pH 7.4에서 150 μM의 농도로 제조되었다. 투여 직전(0시간) 및 투여 후(24시간 및 48시간) 혈청 칼슘 결정을 위해 꼬리 열상을 통해 각각의 마우스로부터 혈액 샘플을 수집하였다.

혈청 Ca 농도는 제조자의 권장 사항(Calcium LiquiColor #10155, Stanbio Laboratory)에 따라 상업적으로 이용 가능한 비색 검정을 이용하여 결정되었다. Ca 검정은 색 시약(Cat. No. 0156) 및 Ca 표준(10 mg/dl; Cat. No. 0157)을 함유한다. 650 nm 파장에서 흡광도(Ab)를 측정하였다. 제조자 선형성은 15 mg/dl까지 제공된다. 결과는 하기와 같이 계산되었다: Ab(미지)/Ab(표준) x 10. 대조군 및 처리군에 대해 0, 24 및 48시간에 혈청 칼슘 수준을 기록하였고, 표 8-10에 요약되어 있다. 40 nmol/kg으로 단일 피하 용량의 서열번호 77을 받은 마우스는 대조군 또는 20 nmol/kg으로 서열번호 77을 받은 마우스에 비해 처리 후 24 및 48시간에 상당히 증가된 혈청 Ca 수준을 나타내었다(도 14a). 이 차이는 초기 기준선 수준을 고려할 때 24시간에 통계적으로 유의하였다(도 14b). 40 nmol/kg의 용량 투여 후 24시간에 혈청 Ca가 증가하였다. 2.4105 nmol/uL(9.6421 mg/dl)의 시작 수준으로부터 0.631 nmol/uL(2.524 mg/dl)의 증가는 26.2% 더 높은 농도를 나타낸다.

각각의 연구 그룹에 대한 혈청 Ca 수준의 백분율 변화는 표 11에 요약되어 있다. 40 nmol/kg 용량 그룹에 대한 혈청 Ca 수준 증가는 20 nmol/kg 서열번호 77의 더 낮은 용량에서의 증가(13.8%)의 거의 두 배였다. 이 용량에서, 2.2704 nmol/ul(9.0816 mg/dl)의 수준으로부터 시작하여 0.3131 nmol/ul(1.252 mg/dl)의 증가가 있었다. 비히클 처리 시 혈청 Ca의 증가는 서열번호 77로 처리된 그룹보다 적었다. 비히클 그룹 동물에 대한 9.7%의 혈청 Ca 증가는 2.2512 nmol/uL(9.0049 mg/dl) 수준으로부터 시작하여 0.2174 nmol/uL(0.898 mg/dl)의 값을 나타낸다. 모든 처리에서 혈청 Ca는 처리 후 48시간에 거의 시작 수준으로 돌아갔다.

실시예 10: 서열번호 77 또는 서열번호 87의 단일 개별 피하 투여 후 스프래그 다우리 래트에서의 혈청 칼슘, 무기 포스페이트, 체중, 음식 섭취 및 약물 수준

이 실험은 암컷 스프래그-다우리 래트에서 30 또는 60 nmol/kg의 부갑상선 호르몬 유사체 프로드럭 서열번호 87을 피하 주사한 후 혈청 칼슘 및 무기 인의 프로파일을 측정하였다. 또한, 프로드럭 서열번호 87의 약동학(PK) 및 이의 활성 서열번호 77로의 전환을 30 nmol/kg 서열번호 87을 받은 그룹에서 측정하고, 30 nmol/kg 서열번호 77을 받은 래트 그룹과 비교하였다. 암컷 스프래그-다우리 래트를 그룹당 5 또는 6마리 래트로 4개 그룹에 무작위로 분배하였다. 서열번호 87 및 서열번호 77의 동결건조 분말 및 희석제 PBS로부터 제형을 제조하여 PBS 중의 서열번호 77의 50 μM 용액 및 PBS 중의 서열번호 87의 100 μM 및 50 μM 용액을 수득하고, 이들은 투여하는 동안 젖은 얼음에서 유지하였다. 투여 부피는 체중을 기준으로 하고, 투여 전에 기록하였다. 각각의 대상체에게 비히클(멸균 PBS 용액; n=6), 서열번호 77(30 nmol/kg; n=5) 또는 서열번호 87(30 또는 60 nmol/kg; 각각 n= 5 및 6)을 1회 피하 주사하였다. 투여 직전(0시간) 및 투여 후(24, 48, 72, 96, 120 및 168시간) 꼬리 열상을 통해 각각의 래트로부터 혈액 샘플을 수집하였다. 이들 샘플은 비히클 및 모든 서열번호 87 처리된 동물에서 혈청 칼슘 및 무기 인 측정에 사용되었다. 서열번호 87 및 서열번호 77 30 nmol/kg 그룹에서 PK 결정을 위해 별도의 혈액 샘플을 채혈하고, 추가 혈액 샘플을 이들 두 PK 그룹에서 2시간 및 7시간에 수집하였다. 데이터는 도 15, 16a, 16b, 17a 및 17b 및 표 12 및 13에 요약되어 있다.

혈청 서열번호 87 및 서열번호 77의 측정은 LCMS에 의해 수행되었다. 약동학적 결과는 도 15에 요약되어 있다. 서열번호 77 및 서열번호 87은 30 nmol/kg에서 단일 투여 후 혈장 농도가 증가하는 것으로 관찰되었다. PTH 작용제의 프로드럭 형태(서열번호 87)는 상대적 농도가 48시간에 1/3, 72시간에 2/3 감소된 24시간에서의 Cmax를 입증하였고, 1주일에 기준선 값으로 돌아갔다. 서열번호 77은 N-말단 디펩티드의 생체내 전환 및 방출을 통해 서열번호 87의 투여 후에 관찰되었다. 이는 서열번호 87의 20%보다 약간 낮은 농도에서 24시간에 정점에 이른다. 이는 48시간에 거의 동일한 수준으로 유지되었고, 72시간에 서열번호 87에 필적하는 농도로 유지되었고, 1주일에 기준선으로 돌아갔다. 서열번호 87과 동일한 30 nmol/kg 용량으로 투여한 후 서열번호 77 혈청 농도에 대한 유사한 PK-분석은 투여 후 2시간에 100 nM 초과의 농도로 더 빠른 출현을 나타내었고, 7시간에 정점에 이르렀고, 24시간 동안 지속되었지만 48시간에 Cmax가 약 1/3 및 96시간에 기준선 수준으로 감소하였다. 피크 대 최저 비율은, 제1일 내의 서열번호 77의 농도를 96시간에 대하여 비교할 때, 펩티드의 직접 투여에 의해 달성되었는지 또는 서열번호 87로부터의 전환 결과에 의해 달성되었는지에 따라 차이가 있음을 입증하였다.

결과는 서열번호 87이 시험관내 결정과 일치하는 속도로 생체내에서 서열번호 77로 전환되고 지방 아실화된 펩티드가 영장류에 비해 청소율이 가속화되는 래트에서 펩티드가 거의 1주일 동안 유지됨을 입증한다. 프로드럭 및 약물을 LCMS로 측정할 수 있는 용량에서 혈청 칼슘 및 인의 변화는 생리학적 범위 내에 있었고 래트에게 불리한 영향을 미치지 않았다.

혈청 칼슘 및 무기 인 측정

꼬리 열상을 통해 수집된 혈액 샘플은 제조자의 권장 사항(Stanbio laboratory: Calcium LiquiColor #10155; Phosphorous Liqui-UV, #0830)에 따라 상업적으로 이용 가능한 비색 검정을 이용하여 혈청 중 총 칼슘(Ca) 및 무기 인(Pi) 측정에 사용되었다. 96 웰 플레이트 분광광도계(SpectraMax M5, Molecular Devices)를 검출에 사용하였다. 혈청 Ca 및 Pi는 0, 1, 2, 4, 5 및 7일에 측정되었다. Ca의 경우 650 nm, Pi의 경우 340 nm에서 흡광도(Ab)를 측정하였다. 제조자 선형성은 Ca의 경우 15 mg/dl, Pi의 경우 10 mg/dl까지 제공된다. 결과는 하기와 같이 계산되었다. Ab(미지)/Ab(표준) x10.

혈청 칼슘은 48시간 내지 96시간의 시간 범위에서 비히클 처리에 비해 상당히 증가하는 것으로 관찰되었고, 120 및 240시간에서 대조군 값에 필적하는 수준으로 돌아갔다(도 16a, 16b 및 표 12). 서열번호 87의 투여 후 혈청 칼슘의 측정은 생리학적 범위 내에서 증가를 입증하였으며, 3일에 정점에 이르렀다. 가장 낮은 용량의 펩티드는 더 높은 용량에 비해 통계적으로 유의하지 않은 약간 향상된 증가를 제공하였다.

비히클 처리와 비교하여 평가된 경우에만 통계적으로 유의한 혈청 포스페이트 수준의 더 작은 증가가 있었다. 이러한 차이는 비히클 처리된 래트에서 더 낮은 시작 농도에 기인하였다(도 17a, 17b 및 표 13).

실시예 11: LCMS 및 시험관내 검정에 의한 프로드럭 및 이의 약물로의 전환 검정

약물 형태에 대비한 프로드럭의 생물활성 평가는 회사(Eurofins-Discover Rx Corporation win a cAMP Hunter® Teriparatide Bioassay (95-0118Y2))와 계약된 독점 상업적 검정에서 수행되었다. 각각의 개별 펩티드 또는 인큐베이션 조건에 대해 작용제 모드에서 11-포인트 용량 곡선을 수행하였다. 모든 샘플은 각각의 용량에서 3중으로 실행되었다. 표 14의 결과는 도 8a-8c에 제시되어 있으며, 이들은 서열번호 87이 높은 nM 효능의 완전한 PTH 작용제이고(도 8a), 서열번호 79에서 구성된 것과 같은 절단 가능하지 않는 디펩티드(도 8b) 또는 서열번호 77에서 구성된 것과 같은 디펩티드(도 8c)로의 서열번호 87의 연장은 PTH 효능작용을 불활성화시킨다는 결론을 지지한다.

프로드럭의 약물로의 전환 평가는 방법론이 실시예 3에 제시된 LC-MS 분석에 의해 결정되었다. 피크 면적 및 프로드럭 백분율의 계산은 표 15에 나타나 있다. 개별 크로마토그래피 스펙트럼은 도 9a 및 9b에 나타나 있다. 반응 속도의 계산은 실험 결과를 0차 수학식에 피팅하여 수행되었으며, 0.9988의 R2 값으로 높은 상관 적합도를 나타낸다(도 10).

프로드럭의 약물로의 전환 평가는 회사(Eurofins-Discover Rx Corporation win a cAMP Hunter® Teriparatide Bioassay (95-0118Y2))와 계약된 독점 상업적 검정에서 추가로 수행되었다. 각각의 개별 펩티드 또는 인큐베이션 조건에 대해 작용제 모드에서 11-포인트 용량 곡선을 수행하였다. 모든 샘플은 각각의 용량에서 3중으로 실행되었다. LCMS에 의해 상대적 프로드럭/약물 농도에 대해 평가된 동일한 인큐베이션 샘플의 분석(도 9a-9f 및 도 10)은 cAMP Hunter® 테리파라티드 바이오어세이(cAMP Hunter® Teriparatide Bioassay)를 이용하여 수행되었다. 표 16의 결과는 도 11에 제시되어 있고, 이들은 LCMS에 의한 상기 결정된 바와 같은 결론을 지지한다.

실시예 12: 시험관내 검정에 의한 Met(0) 및 탈아미드화된 유사체의 검정

산화에 의해 메티오닌 술폭시드로 부위 특이적으로 변형되거나(서열번호 109 및 110) 천연 Asn 또는 Gln으로부터 각각의 카르복실산 Asp 또는 Glu로 탈아미드화된(서열번호 1118, 120, 122 및 124) PTH 유사체의 생물활성의 평가는 회사(Eurofins-Discover Rx Corporation win a cAMP Hunter® Teriparatide Bioassay (95-0118Y2))와 계약된 독점 상업적 검정에서 수행되었다. 각각의 농도의 각각의 개별 펩티드에 대해 작용제 모드에서 11-포인트 용량 곡선을 수행하였다. 모든 샘플은 각각의 용량에서 3중으로 실행되었다. 결과는 표 17, 18 및 19 및 도 12, 13a 및 13b에 나타나 있다.

실시예 13: 20 nmol/kg의 서열번호 77, 20 또는 40 nmol/kg의 서열번호 87을 반복 피하 투여한 후 스프래그 다우리 래트에서의 혈청 칼슘, 포스페이트, 체중, 음식 섭취 및 약물 수준

이 실험은 스프래그-다우리 래트에서 혈청 칼슘 및 포스페이트에 대한 서열번호 77 및 서열번호 87의 매일 반복 투여의 효과를 측정하였다. 암컷 스프래그-다우리 래트를 표 20에 기재된 바와 같이 단일 또는 이중 수용하고, 무작위로 4개 그룹(그룹당 n=5-6)으로 할당한 후, 체중을 재었다.

비히클(멸균 0.9% NaCl 용액; n=5), 서열번호 77(20 nmol/kg; n=6) 또는 서열번호 87(20 또는 40 nmol/kg; 각각 n=5 및 6)을 7일 동안 1일 1회 래트에 피하 주사하였다. 처리를 중단한 후, 동물을 제9일 및 제11일(세척 기간)에 모니터링하였다.

상업적으로 이용 가능한 비색 검정을 이용하여 혈청 중의 총 칼슘(Ca) 및 무기 인(Pi) 결정을 위해 비히클, 서열번호 77 또는 서열번호 87 투여 전(0시간) 및 투여 후(1, 2, 3, 4, 7일)에 혈청 칼슘 및 포스페이트 분석을 위한 모든 동물로부터 꼬리 열상을 통해 혈액 샘플을 수집하였다. 체중 및 음식 섭취는 제0, 1, 3, 5 및 7일에 측정되었다. Ca는 제0, 1, 2, 3, 4, 7, 9 및 11일에 측정되었다. Pi는 제9일 및 제11일을 제외하고는 동일한 샘플에서 결정되었다. 혈청 서열번호 87 및 서열번호 77의 측정은 LCMS에 의해 수행되었으며, 데이터는 도 18a 및 18b에 나타나 있다.

혈청 Ca 수준은 처리 기간 동안 3개의 처리군 모두에서 점진적으로 증가하였고, 세척 기간이 끝나면 초기 값으로 돌아갔다(도 18a). 혈청 Pi의 변화는 서열번호 77 그룹의 수준이 비히클 및 40 nmol/kg으로 처리된 서열번호 87 래트의 수준과 유의하게 다른 제3일을 제외하고는 유의하게 다르지 않았다(도 18b).

서열번호 77 및 서열번호 87의 혈장 수준은 투여 후 용량 비례 증가를 입증하였다(도 19a 및 19b). 각각의 펩티드는 4회의 매일 투여 후 정상 상태 수준에 도달하였다. 서열번호 77의 상대적 농도는 서열번호 87 수준의 약 1/4이었다. 프로드럭 서열번호 87의 투여로부터 유도되었을 때 정상 상태에서 서열번호 77의 상대적 농도는 서열번호 77의 직접 투여에 의해 달성된 것의 약 70%였다.

실시예 14: 서열번호 87의 4, 8 또는 12 nmol/kg의 피하 투여 후 스프래그 다우리 래트에서의 혈청 칼슘, 체중 및 음식 섭취 측정

이 실험은 암컷 스프래그-다우리 래트에서 28일 동안 4, 8 및 12 nmol/kg의 서열번호 87을 매일 반복 투여한 효과를 측정하였다. 체중 및 음식 섭취의 변화도 측정되었다.

래트를 4개 그룹(n=10)에 무작위로 분배하고, 비히클 또는 서열번호 87(4, 8, 12 nmol/kg)을 21일 동안 1일 1회 피하 주사하였다. 체중 및 음식 섭취를 제0일(펩티드 투여 직전), 제1, 3, 7, 10, 14, 17, 21, 24, 28, 31, 및 35일에 측정하였다. 상업적으로 이용 가능한 비색 검정을 이용하여 혈청 중의 총 Ca 결정을 위해 꼬리 열상을 통해 혈액 샘플을 수집하였다. 서열번호 87 및 생성된 약물 서열번호 77의 약동학적 측정을 위해 혈청 샘플을 수집하였다.

비히클 처리된 동물을 포함한 연구의 모든 래트는 272.6 gm의 시작 체중을 기준으로 2% 이하의 약간의 총 체중 증가를 경험하였다. 누적 음식 섭취는 비히클 처리된 래트와 비교할 때 체중의 상대적 증가와 일치하는 크기만큼 용량 비례적으로 증가되었다.

비히클 대조군을 포함한 모든 처리된 래트에서, 연구 과정 동안 혈청 Ca의 증가가 있었다(도 20a). 절대적 증가는 비히클, 4, 8 및 12 nmol/kg 처리된 래트에 대해 각각 0.636, 1.356, 1.452 및 2.072 mg/dL였다. 모든 혈청 Ca 수준은 정상 범위 내에서 유지되었으며, 백분율 증가에 따라 비히클 처리된 래트는 6.6%였다. 14.7%, 16.7% 및 23%의 증가가 서열번호 87(각각 4, 8, 12 nmol/kg)의 증가하는 용량에 대해 기록되었다. 이 용량 범위에서 Ca의 상대적 증가는, 4 nmol/kg으로부터 12 nmol/kg으로 용량이 3배 증가해도 혈청 Ca의 상대적 증가는 2배 미만(56% 증가)으로 나타났으므로, 용량 증가에 비례하지 않았다. 제34일에, 모든 서열번호 87 래트에서 혈청 Ca 수준은 농도가 감소하였다(도 20b). 비히클 처리된 동물은 변하지 않았으며, Ca 수준은 연구 개시에 비해 6.9% 증가하였다. 낮은 용량으로 처리된 래트는 연구 시작에 비해 혈청 Ca가 6.9% 증가한 것으로 나타났다. 중간 및 높은 용량 래트는 각각 11.7% 및 12.2%의 증가된 혈청 Ca를 나타내었다. 모든 동물은 건강해 보였다.

서열번호 87 및 후속적인 서열번호 77, 혈장 농도의 매주 결정은 정상 상태 수준이 매일 투여에 의해 달성된 후 제7일에 시작되었다. 생성된 약물(서열번호 77)보다 4배 높은 3개의 투여 용량 중 임의의 것에서 프로드럭(서열번호 87)과 함께 두 펩티드에서 용량 비례 증가가 있었다. 3가지 용량에 걸쳐 2개의 펩티드의 절대적 및 상대적 농도는 매일 반복 투여하면서 7-28일의 기간 동안 유지되었다. 이후 7일의 과정에 걸쳐 이들 두 펩티드의 소멸을 LCMS로 모니터링되었다. 마지막 투여 후 처음 24시간의 기간에, 각각의 펩티드의 혈장 농도는 투여 후 2, 7 및 24시간에 측정되었다. 결과는 일단 일정한 농도가 달성되면 각각의 후속 용량에서 1일 약물 노출에 거의 변화가 없음을 입증하였다. 이들 결과는 도 21 및 도 22에 나타나 있다.

실시예 15: 서열번호 87의 15, 25, 또는 40 nmol/kg의 반복 피하 투여 후 부갑상선 절제된 스프래그-다우리 래트에서 혈청 칼슘 수준 측정

이 실험은 외과적으로 부갑상선을 제거한 암컷 스프래그-다우리 래트의 혈청 및 소변 칼슘에 대한 부갑상선 호르몬 유사체 프로드럭, 서열번호 87의 반복 피하 주사 후 혈청 칼슘의 프로파일을 측정하였다. 래트를 5개 그룹에 무작위로 분배하고, 연속 4일 동안 비히클(멸균 0.9% NaCl 용액; n=6) 또는 서열번호 87(10, 25, 40 nmol/kg; n=8)을 피하 주사하였다. 2개의 개별 비히클 처리된 래트 그룹을 연구하였다. 제1 대표 대조군 래트는 나머지 래트처럼 외과적으로 관리되었지만 부갑상선은 제거되지 않았다(샴 대조군). 제2 비히클 대조군은 서열번호 87 처리된 래트와 동일한 방식으로 외과적으로 관리된 래트를 나타내었다. 수술 후 및 시험 1주 전에 모든 래트를 특정 칼슘 농도의 규정된 식단에 두었다.

제조자의 권장 사항(Stanbio Laboratory: Calcium LiquiColor #0155)에 따라 상업적으로 이용 가능한 비색 검정을 이용하여 혈청 중의 총 칼슘(Ca) 측정을 위해 비히클 또는 서열번호 87 투여 전(0시간) 및 투여 후(24, 48, 72, 96, 144시간) 꼬리 열상을 통해 혈액 샘플을 수집하였다. 96 웰 플레이트 분광광도계(SpectraMax M5, Molecular Devices)를 검출에 사용하였다. 칼슘 검정은 색 시약(Cat. No. 0156) 및 칼슘 표준(10 mg/dL; Cat. No. 0157)을 함유하였다. 650 nm 파장에서 흡광도(Ab)를 측정하였다. 제조자는 15 mg/dL까지의 선형성을 제공하였다. 혈청 칼슘은 주사 직전(시간 0시간), 이어서 24, 48, 72 및 96시간에 측정되었다. 결과(mg/dL)는 하기와 같이 계산되었다: Ab(미지)/Ab(표준) x 10.

샴 대조군 래트는 비히클 처리된 PTx-래트에 비해 현저하게 증가된 시작 혈청 칼슘을 입증하였다. 시작 칼슘 수준은 PTx 래트의 비히클 대조군에서의 1.085 nmol/ul와 비교하여 1.495 nmol/ul이었다. 이는 37.8%로 비교적 높은 농도를 나타내었다. 두 대조군 사이의 차이는 두 대조군 모두에서 거의 0.3nmol/ul의 증가가 있었지만 실험 과정을 통해 대체로 유지되었다. 서열번호 87 처리된 래트는 2개의 비히클 대조군의 중간인 혈청 칼슘 농도에서 처리를 시작하였으며, 처리군 10, 25, 40 nmol/kg에 대해 1.185, 1.354 및 1.251 nmol/ul였다. 이는 비히클 처리군을 구성하는 비교 가능한 PTx-래트보다 각각 9.2%, 24.8% 및 15.3% 높은 수준을 나타내었다. 48시간 후 및 제3 투여 직전에, PTx-처리된 래트에서 40 nmol/kg의 가장 높은 용량이 샴 대조군 래트의 용량을 약간 초과하는 명확한 용량 반응이 관찰되었다. 이 관계는 25 nmol/kg의 중간 용량이 샴 대조군 래트와 근소하게 상이한 72시간에 유지되었다. 마지막 투여 후 72시간인 144시간에, PTx-래트는 계속해서 혈청 칼슘의 용량 비례 차이를 나타내었다. PTx-비히클 처리된 래트의 시작 수준과 중간 용량 그룹 사이의 차이는 이 요법 기간 동안 2배가 되었고, 가장 높은 용량 그룹의 경우 샴 대조군을 0.2 nmol/ml 초과로 초과하는 지점까지 3배 초과로 증가하였다. 결과는 도 23에 나타나 있다.

실시예 16: 서열번호 87의 15, 25, 또는 40 nmol/kg의 반복 피하 투여 후 부갑상선 절제된 스프래그-다우리 래트에서 혈청 및 소변 칼슘 수준 측정

이 실험은 외과적으로 부갑상선이 제거된 암컷 스프래그-다우리 래트에서 부갑상선 호르몬 유사체 프로드럭, 서열번호 87의 반복 피하 주사 후 혈청 칼슘의 프로파일을 측정하였다. 래트를 5개 그룹에 무작위로 분배하고, 연속 10일 동안 비히클 또는 서열번호 87(10, 25, 40 nmol/kg; n=8)을 피하 주사하였다. 2개의 개별 비히클 처리된 래트 그룹을 연구하였다. 제1 대표 대조군 래트는 나머지 래트처럼 외과적으로 관리되었지만 부갑상선은 제거되지 않았다(샴 대조군). 제2 비히클 대조군은 서열번호 87 처리된 래트와 동일한 방식으로 외과적으로 관리된 래트를 나타내었다. 수술 후 및 시험 1주 전에 모든 래트를 특정 칼슘 농도의 규정된 식단에 두었다.

제조자의 권장 사항(Stanbio Laboratory: Calcium LiquiColor #0155)에 따라 상업적으로 이용 가능한 비색 검정을 이용하여 혈청 중의 총 칼슘(Ca) 측정을 위해 꼬리 열상을 통해 혈액 샘플을 수집하였다. 96 웰 플레이트 분광광도계(SpectraMax M5, Molecular Devices)를 검출에 사용하였다. 칼슘 검정은 색 시약(Cat. No. 0156) 및 칼슘 표준(10 mg/dL; Cat. No. 0157)을 함유하였다. 650 nm 파장에서 흡광도(Ab)를 측정하였다. 제조자는 15 mg/dL까지의 선형성을 제공하였다. 혈청 칼슘은 주사 직전(시간 0시간), 이어서 24, 48, 72 및 96시간에 측정되었다. 결과(mg/dL)는 하기와 같이 계산되었다: Ab(미지)/Ab(표준) x 10.

샴 대조군 래트는 비히클 처리된 PTx-래트에 비해 현저하게 증가된 시작 혈청 칼슘을 입증하였다. 시작 칼슘 수준은 PTx 래트의 비히클 대조군의 4.66 mg/Dl과 비교하여 5.896 mg/dl였다. 이는 26.5%의 상대적으로 높은 농도를 나타내었다. 이들 두 대조군 사이의 차이는 실험 과정 동안 대체로 유지되었다. 서열번호 87 처리된 래트는 2개의 비히클 대조군의 중간인 혈청 칼슘 농도, 즉 처리군 10, 25, 40 nmol/kg에 대해 4.5, 5.028 및 5.108 mg/dl에서 처리를 시작하였다(도 24). 이는 각각 최저 용량 그룹에서 3.4%의 감소된 수준 및 중간 용량 및 보다 높은 용량 그룹에서 7.9% 및 9.6%의 증가된 수준을 나타내었다. 2일 후 및 3차 투여 직전에, 모든 서열번호 87 처리된 래트는 샴 대조군 래트와 사실상 동일한 혈청 칼슘 수준을 나타내었다. 4일 및 7일에, 중간 및 높은 용량 PTx-래트는 샴 대조군 래트에서 관찰된 것과 일치하거나 초과하는 혈청 칼슘 수준을 나타내었다. 서열번호 87로 처리된 래트에서 용량 비례 차이가 있었으며, 가장 높은 용량의 래트는 크기가 가장 크고 가장 낮은 용량의 래트는 혈청 칼슘이 가장 낮았다. PTx-처리된 래트는 제10일 및 제11일까지 샴 처리된 래트와 유사한 증가된 혈청 칼슘을 유지하였다. 제14일에 및 그 이후 제21일까지, PTx-래트는 비히클 처리된 래트를 포함하여 서로 일치하는 혈청 칼슘 수준으로 돌아갔다. 이러한 칼슘 값은 연구 시작 시 0일에 존재했던 차이와 같이 샴 래트에 비해 제21일에 혈청 칼슘이 동일하게 감소되었다.

포스페이트 수준의 결정은 혈청 칼슘과 거의 동일한 시간에 샘플링하여 수행되었으며 세척 기간의 마지막 날만 상이하였다. 서열번호 87에 대한 반응은 이전에 혈청 칼슘에 대해 기술된 것과 유사하였지만 포스페이트는 비히클로 처리된 PTx-랫트에 비해 각각의 용량에서 감소하였다(도 25). 처리 시간이 증가함에 따라 서열번호 87 처리된 래트에서의 포스페이트 수준은 샴 대조군 래트와 일치하였다. 샴 대조군 래트는 비히클 처리된 PTx-래트에 비해 현저하게 감소된 시작 혈청 포스페이트를 입증하였다. 시작 포스페이트 수준은, PTx 래트의 비히클 대조군의 11.317 mg/dl과 비교하여, 7.003 mg/dl였다. 이는 38.1%의 상대적으로 낮은 농도를 나타내었다. 두 대조군 사이의 차이는 실험 과정 동안 유지되었다. 서열번호 87 처리된 래트는 2개의 비히클 대조군의 중간인 혈청 포스페이트 농도, 즉 처리군 10, 25, 40 nmol/kg에 대해 각각 11.412, 10.673 및 8.152 mg/dl에서 처리를 시작하였다. 이는 낮은 용량에서 각각 1.0% 증가하고 중간 및 높은 용량에서 5.7% 및 28% 감소된 수준을 나타내었다. 7일 후, 모든 서열번호 87 PTx-처리된 래트는 샴 대조군 래트에 필적하는 혈청 포스페이트 수준을 나타내었다. 효능은 최종 투여된 용량 후 1일인 제10일에서의 관찰까지 완전히 유지되었다. 2주 후, 중간 및 높은 용량 래트는 비교적 감소된 포스페이트 수준을 나타낸 반면, 가장 낮은 용량 래트는 10일에 최저치에 비해 증가되었다. 연구 개시 25일 후, 모든 PTx-래트는 샴 대조군 래트와 비교하여 증가된 포스페이트를 갖는 그룹으로 정렬되었다.

실시예 17: 단일 피하 용량의 서열번호 87의 투여 후 시노몰구스 원숭이에서의 비교 약동학

PTH 유사체 서열번호 87의 약동학적 프로파일은 실시예 8에 상세히 기재된 방법론에 의해 시노몰구스 원숭이에게 단일 피하 용량 투여 후 연구되었다. 총 3마리의 원숭이가 각각의 시험 용량에서 사용되었다. 원숭이는 연구 초기에 2-4세의 나이 범위였으며 체중은 적어도 2.5 kg이었다. 용량 부피는 0.3 mL/kg이었다. 동물의 가장 최근에 기록된 체중을 기준으로 개별 용량 부피를 계산하였다.

투여 전 및 투여 후 6, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216, 240, 264, 336시간에 모든 동물로부터 적어도 0.5 mL의 혈액 샘플을 수집하였다. 동물은 수집 전에 금식하지 않았다. 혈액은 대퇴 정맥 (또는 또 다른 적절한 부위)을 통해 수집되었다. 혈액 샘플은 5 ± 3℃(젖은 얼음 또는 동등한 것)에서 유지되었고, 각각의 혈액 샘플 수집 후 1시간 이내에 5 ± 3℃에서 원심분리되었다. 생성된 혈장을 튜브로 옮긴 후, 분석할 때까지 -75 ± 15℃를 유지하도록 설정된 조건 하에 저장하였다.

약동학적 평가

약동학적 평균 농도-시간 데이터는 투여 경로에 따라 비구획 방법(Phoenix® WinNonlin® 버전 7.0 이상)을 이용하여 분석되었다. 하기 파라미터는 가능할 때마다 데이터가 허용하는 대로 계산되었다: Cmax, Tmax 및 AUC. 기술 통계는 포에닉스 윈논린을 사용하여 생성되었다.

결과

이들 약동학(PK) 연구로부터의 결과는 도 26a 및 26b에 제공되고, 투여된 프로드럭 형태 및 이의 활성 약물 형태(디펩티드 프로드럭 요소의 생체내 비효소적 절단 후에 생성됨)의 농도는 시간 경과에 따라 측정되었다. 원숭이에게 2.5, 3.75 및 5 nmol/kg의 단일 피하 용량의 프로드럭 PTH 유사체 서열번호 87를 투여하고, 상응하는 절단 생성물, 서열번호 77("약물")과 함께 프로드럭(서열번호 87, 도 26a)의 농도를 투여 후 다음 336시간에 걸쳐 측정하였다. 서열번호 87의 농도는 용량 비례 증가가 있었고, 24시간에 정점에 이르고, 1주일 후까지 시작 농도로 돌아오지 않았다(도 26a). 서열번호 87로부터 전환된 펩티드 서열번호 77은 48-72시간에 정점에 이르고, 이의 농도는 1주일에 평가할 때 Cmax 농도의 약 2/3로 유지된다. 서열번호 77의 농도는 투여 후 2주에도 시작 농도에 비해 상승된 상태를 유지하였다(도 26b).

SEQUENCE LISTING <110> Indiana University Research and Technology Corp. DiMarchi, Richard Zhang, Fa <120> PTH ANALOGS FOR THE TREATMENT OF HYPOPARATHYROIDISM <130> 32993-338101 <150> 63/030,004 <151> 2020-05-26 <150> 63/033,586 <151> 2020-06-15 <160> 135 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 84 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser 35 40 45 Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu 50 55 60 Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys 65 70 75 80 Ala Lys Ser Gln <210> 2 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is any acylated amino acid <400> 2 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 3 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> Xaa at position 34 is any acylated amino acid <400> 3 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Xaa <210> 4 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa at position 12 is isobutyric acid (Aib) or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa at position 13 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa at position 16 is isobutyric acid (Aib) or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa at position 17 is amino isobutyric acid (Aib) or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> Xaa at position 26 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> Xaa at position 27 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> Xaa at position 31 is Gly or Val <400> 4 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Xaa Xaa His Leu Xaa 1 5 10 15 Xaa Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Xaa Leu Gln Asp Xaa His 20 25 30 <210> 5 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa at position 13 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> Xaa at position 26 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> Xaa at position 27 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> Xaa at position 31 is Gly or Val <400> 5 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Xaa His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Xaa Leu Gln Asp Xaa His 20 25 30 <210> 6 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa at position 12 is isobutyric acid (Aib) or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa at position 16 is isobutyric acid (Aib) or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa at position 17 is amino isobutyric acid (Aib) or Ser <400> 6 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Xaa Lys His Leu Xaa 1 5 10 15 Xaa Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 <210> 7 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 <210> 8 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is any acylated amino acid <400> 8 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa Phe <210> 9 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe <210> 10 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is acylated dLys <400> 10 Xaa Gly Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 11 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is acylated dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is N-methyl Gly <400> 11 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 12 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is an acylated Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> C-terminal carboxyl group replaced with an amide <400> 12 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 13 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is acylated dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is N-methyl Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> Xaa at position 37 is an acylated Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> C-terminal carboxyl group replaced with an amide <400> 13 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe Xaa 35 <210> 14 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is acylated dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is N-methyl Gly <400> 14 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Gln Phe 35 <210> 15 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is any acylated amino acid <400> 15 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 16 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is an acylated Lys <400> 16 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 17 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is acylated dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is N-methyl Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is an acylated Lys <400> 17 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 18 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is an acylated Lys <400> 18 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Ala His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 19 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is an acylated Lys <400> 19 Xaa Gly Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 20 <211> 85 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (85)..(85) <223> Xaa at position 85 is an acylated amino acid <400> 20 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser 35 40 45 Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu 50 55 60 Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys 65 70 75 80 Ala Lys Ser Gln Xaa 85 <210> 21 <211> 38 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> Xaa at position 38 is an acylated amino acid <400> 21 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Val Ala Leu Xaa 35 <210> 22 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Gly His 20 25 30 <210> 23 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Glu His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 <210> 24 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Glu Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 <210> 25 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Glu Leu Gln Asp Val His 20 25 30 <210> 26 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is any acylated amino acid <400> 26 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 27 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is an acylated dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is an acylated Lys <400> 27 Xaa Gly Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 28 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> model hexpeptide for prodrug studies <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is His, d-His or N-methyl-His <400> 28 Xaa Ser Arg Gly Thr Phe 1 5 <210> 29 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> model hexpeptide for prodrug studies <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is Sarcosine <400> 29 Lys Xaa His Ser Arg Gly Thr Phe 1 5 <210> 30 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is any acylated amino acid <400> 30 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 31 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn <210> 32 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe <210> 33 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Val 35 <210> 34 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Val Ala 35 <210> 35 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Val Ala Leu 35 <210> 36 <211> 38 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Val Ala Leu Gly 35 <210> 37 <211> 39 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala 35 <210> 38 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> Xaa at position 34 is K(gamma-glu-COC16H32CO2H)F-OH <400> 38 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Xaa <210> 39 <211> 147 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Ser Arg Arg Leu Lys Arg Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp 1 5 10 15 Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His 20 25 30 Leu Ile Ala Glu Ile His Thr Ala Glu Ile Arg Ala Thr Ser Glu Val 35 40 45 Ser Pro Asn Ser Lys Pro Ser Pro Asn Thr Lys Asn His Pro Val Arg 50 55 60 Phe Gly Ser Asp Asp Glu Gly Arg Tyr Leu Thr Gln Glu Thr Asn Lys 65 70 75 80 Val Glu Thr Tyr Lys Glu Gln Pro Leu Lys Thr Pro Gly Lys Lys Lys 85 90 95 Lys Gly Lys Pro Gly Lys Arg Lys Glu Gln Glu Lys Lys Lys Arg Arg 100 105 110 Thr Arg Ser Ala Trp Leu Asp Ser Gly Val Thr Gly Ser Gly Leu Glu 115 120 125 Gly Asp His Leu Ser Asp Thr Ser Thr Thr Ser Leu Glu Leu Asp Ser 130 135 140 Arg Arg His 145 <210> 40 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is dAla that has an amide substituted for the native carboxyl group <400> 40 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 41 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser 1 5 10 15 Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His Asn 20 25 30 Phe <210> 42 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Gly Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe <210> 43 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Ala Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe <210> 44 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is a dLys having its side chain acylated with COC16H32CO2H) via a gamma Glu spacer <400> 44 Xaa Gly Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 45 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is a dLys having its side chain acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is Sarcosine (n-methyl Glycine) <400> 45 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 46 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is a dLys having its side chain acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-isopropyl-Glycine <400> 46 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 47 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys <400> 47 Xaa Gly Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 48 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is a Lys having its side chain acylated with COC16H32CO2H) via a gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-isopropyl-Glycine <400> 48 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 49 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is a dLys having its side chain acylated with COC16H32CO2H) via a gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-isopropyl-Glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa at position 3 is dSer <400> 49 Xaa Xaa Xaa Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 50 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is a dLys having its side chain acylated with COC16H32CO2H) via a gamma Glu spacer <400> 50 Xaa Pro Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 51 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is a Lys having its side chain acylated with COC16H32CO2H) via a gamma Glu spacer <400> 51 Xaa Pro Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 52 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is a Lys having its side chain acylated with COC16H32CO2H) via a gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is Sarcosine (n-methyl Glycine) <400> 52 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 53 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is a Lys having its side chain acylated with COC16H32CO2H) via a gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl-Alanine <400> 53 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 54 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is a Lys having its side chain acylated with COC16H32CO2H) via a gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl-Alanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is Pipecolic acid (piperidine-2-carboxylic acid) <400> 54 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe 35 <210> 55 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Gln Phe <210> 56 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 56 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 57 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is Sarcosine (n-methyl-Glysine) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> Xaa at position 37 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 57 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe Xaa 35 <210> 58 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is Sarcosine (n-methyl-Glysine) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> Xaa at position 37 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein th eside chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 58 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe Xaa 35 <210> 59 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn <210> 60 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is aspartic acid wherein the carboxy terminus is replace with an amide <400> 60 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 61 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is Sarcosine (n-methyl-Glysine) <400> 61 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Gln Phe 35 <210> 62 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Met Glu Arg Val 1 5 10 15 Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Gly His Asn Phe 20 25 <210> 63 <211> 38 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> Xaa at position 38 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 63 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Val Ala Leu Xaa 35 <210> 64 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 64 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Arg His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Arg Arg Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 65 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> Xaa at position 37 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 65 Xaa Gly Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Asn Phe Xaa 35 <210> 66 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 66 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Glu Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 67 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 67 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Glu Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 68 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 68 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Glu His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 69 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> Xaa at position 20 is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 69 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Xaa Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 70 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa at position 17 is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 70 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Xaa Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg His Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 71 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa at position 16 is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 71 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Xaa 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 72 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa at position 12 is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys that has an amide substituted for the native carboxyl group wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 72 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Xaa Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe Xaa 35 <210> 73 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 73 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Glu His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Glu Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa Phe <210> 74 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 74 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Glu His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Glu Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 75 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 75 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Gln <210> 76 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a (gamma Glu)3x spacer <400> 76 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Glu His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Glu Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 77 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side 3hain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 77 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 78 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 78 Xaa Gly Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 79 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 79 Xaa Gly Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 80 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position2 is Sarcosine (n-methyl-Glycine) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 80 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 81 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position2 is n-isopropylGlycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 81 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 82 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position2 is n-imethyl-Glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 82 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 83 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side 3hain is acylated with COC16H32CO2H via a lysine-gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 83 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 84 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 84 Xaa Gly Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 85 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COCH3 <400> 85 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 86 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC15CH31 via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 86 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 87 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 87 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 88 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 88 Ser Val Ser Glu Ile Gln Ala Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Lys <210> 89 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Ala His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Lys <210> 90 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 90 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Ala Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn <210> 91 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Ala Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Lys <210> 92 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Ala Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Lys <210> 93 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 93 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Ala His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 94 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 94 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Ala His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 95 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 95 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Ala His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 96 <211> 38 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> Xaa at position 38 is an acylated amino acid <400> 96 Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp 1 5 10 15 Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His Thr 20 25 30 Ala Glu Ile Arg Ala Xaa 35 <210> 97 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Met 1 5 10 15 Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His Asn Phe 20 25 30 <210> 98 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe <210> 99 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99 Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Met Glu Arg Val 1 5 10 15 Glu Trp Leu Arg Glu Lys Leu Gln Asp Val His Asn Phe 20 25 <210> 100 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Glu Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe <210> 101 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Glu Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe <210> 102 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu spacer <400> 102 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa Phe <210> 103 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa at position 12 is amino isobutyric acid (Aib) or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa at position 13 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa at position 16 is amino isobutyric acid (Aib) or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa at position 16 is amino isobutyric acid (Aib) or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> Xaa at position 26 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> Xaa at position 27 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> Xaa at position 31 is Gly or Val <400> 103 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Xaa Xaa His Leu Xaa 1 5 10 15 Xaa Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Xaa Leu Gln Asp Xaa His 20 25 30 Asn <210> 104 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa at position 13 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> Xaa at position 26 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> Xaa at position 27 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> Xaa at position 31 is is Gly or Val <400> 104 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Xaa His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Xaa Leu Gln Asp Xaa His 20 25 30 Asn <210> 105 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa a position 16 is amino isobutyric acid (Aib) or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa a position 16 is amino isobutyric acid (Aib) or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa a position 17 is amino isobutyric acid (Aib) or Ser <400> 105 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Xaa Lys His Leu Xaa 1 5 10 15 Xaa Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn <210> 106 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn <210> 107 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 107 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Ala His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 108 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 108 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 109 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa at position 8 is Met wherein the side chain is oxidized to form a sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 109 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 110 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Xaa at position 18 is Met wherein the side chain is oxidized to form a sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 110 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 111 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a Tyr(OPO3H2)-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <400> 111 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 112 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a homoCysr(SO3H)-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <400> 112 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 113 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a Arg-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <400> 113 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 114 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a Arg-(miniPEG)2-Tyr(OPO3H2)-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <400> 114 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 115 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a Tyr(OPO3H2)-(miniPEG)2-Tyr(OPO3H2)-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <400> 115 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 116 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a Tyr(OPO3H2)-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a Tyr(OPO3H2)-gamma Glu-(miniPEG)2-gamma Glu spacer <400> 116 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 117 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 117 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Glu Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 118 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 118 Ser Val Ser Glu Ile Glu Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 119 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 119 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asp Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 120 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 120 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asp Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 121 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 121 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asp Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 122 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 122 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asp 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 123 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 123 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Glu Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 124 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa at position 33 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 124 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Glu Asp Val His 20 25 30 Xaa <210> 125 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Xaa at position 18 is iso-aspartic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 125 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Xaa Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 126 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa at position 12 is iso-aspartic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 126 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Xaa Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 127 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa at position 10 is Met wherein the side chain is oxidized to form a sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 127 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 128 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> Xaa at position 20 is Met wherein the side chain is oxidized to form a sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 128 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 129 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 129 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Ala Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe <210> 130 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 130 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Phe Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe <210> 131 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 131 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Trp Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 Asn Phe <210> 132 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa at position 1 is dLys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 is n-methyl glycine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> Xaa at position 20 is Met wherein the side chain is oxidized to form a sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa at position 35 is Lys wherein the side chain is acylated with COC16H32CO2H via a gamma Glu-(MINIPEG)2-gamma Glu spacer <400> 132 Xaa Xaa Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Val Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp 20 25 30 Val His Xaa 35 <210> 133 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa at position 10 is Asp, Gln or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa at position 13 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa at position 16 is Asp, Gln or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Xaa at position 18 is Met, Met(O), Leu, or Nleu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> Xaa at position 26 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> Xaa at position 27 is Arg, Glu, Asp or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> Xaa at position 31 is Gly or Val <400> 133 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Xaa Leu Gly Xaa His Leu Xaa 1 5 10 15 Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Xaa Leu Gln Asp Xaa His 20 25 30 <210> 134 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa at position 10 is Asp, Gln or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa at position 12 is isobutyric acid (Aib) or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa at position 16 is isobutyric acid (Aib) or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa at position 17 is amino isobutyric acid (Aib) or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Xaa at position 18 is Met, Met(O), Leu, or Nleu <400> 134 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Xaa Leu Xaa Lys His Leu Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30 <210> 135 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa at position 10 is Asp, Gln or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa at position 16 is Asp, Gln or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Xaa at position 18 is Met, Met(O), Leu, or Nleu <400> 135 Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Xaa Leu Gly Lys His Leu Xaa 1 5 10 15 Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His 20 25 30

Claims

PTH 펩티드, 및 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합된 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체:
상기 PTH 펩티드는
SVSEIQLMHX₁₀LGX₁₃HLX₁₆SX₁₈ERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 133);
SVSEIQLMHX₁₀LX₁₂KHLX₅₆X₁₇X₁₈ ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 134);
SVSEIQLMHX₁₀LGKHLX₁₆SX₁₈ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 135); 및
SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)
로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고;
상기 식에서, Z는 X₃₃,X₃₃F, X₃₃FX₃₅, X₃₃FVX₃₅, X₃₃FVAX₃₅, X₃₃FVALX₃₅, X₃₃FVALGX₃₅, X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고, 임의적으로 Z는 X₃₃,X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅이고;
X₁₀ 및 X₁₆은 독립적으로 Asp, Gln 또는 Asn이고;
X₁₂는 Gly 또는 Aib이고;
X₅₆은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Asn이고;
X₁₇은 아미노 이소부티르산(Aib) 또는 Ser이고;
X₁₈은 Met, Met(O), Leu, 또는 Nleu이고;
X₁₃, X₂₆, 및 X₂₇은 독립적으로 Arg, Glu, Asp 및 Lys로 이루어진 군으로부터 선택되고;
X₃₁은 Gly 또는 Val이고;
X₃₃ 및 X₃₅는 각각 아미노산의 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아실화된 아미노산을 포함하고, 임의적으로 그 아실화된 아미노산은 Lys, dLys, 오르니틴, Cys 및 호모시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
X₅₃은 Gln 또는 Asn이고, 임의적으로 단 X₁₂, X₁₆ 및 X₁₇ 중 1개 이하는 Aib이고, 임의적으로 C-말단 아미노산은 카르복시 말단을 아미드로 치환하도록 변형되고;
상기 자가 절단 디펩티드는 구조 A-B를 포함하고,
상기 식에서, A는 아미노산이고;
B는 N-알킬화된 아미노산이다.
제1항에 있어서, Z는 X₃₃,X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, X₅₃FVX₃₅, X₅₃FVAX₃₅, X₅₃FVALX₃₅, 또는 X₅₃FVALGX₃₅인 접합체.
PTH 펩티드, 및 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드에 공유 결합된 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체:
상기 PTH 펩티드는
SVSEIQLMHNLGX₁₃HLNSMERVEWLRX₂₆X₂₇LQDX₃₁H-Z (서열번호 5);
SVSEIQLMHX₁₀LGKHLX₁₆SX₁₈ERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 135);
SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7); 및
1, 2 또는 3개의 아미노산 치환에 의해 서열번호 7의 펩티드와 상이한 펩티드
로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고;
상기 식에서, Z는 X₃₃F, X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, 또는X₃₃이고;
X₁₀ 및 X₁₆은 독립적으로 Asp, Gln 또는 Asn이고;
X₁₈은 Met, Met(O), Leu, 또는 Nleu이고;
X₁₃, X₂₆, 및 X₂₇은 독립적으로 Arg, Glu, Asp 및 Lys로 이루어진 군으로부터 선택되고;
X₃₁은 Gly 또는 Val이고;
X₃₃및 X₃₅는 각각 아실화된 아미노산을 포함하고;
X₅₃은 Gln 또는 Asn이고;
상기 자가 절단 디펩티드는 일반 구조 A-B-를 포함하고;
상기 식에서, A는 아미노산 또는 아실화된 아미노산이고;
B는 N-알킬화된 아미노산이고;
X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 상기 아실화된 아미노산은 독립적으로 아미노산의 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아미노산으로부터 선택되고, 상기 자가 절단 디펩티드는 B와 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민 사이의 아미드 결합의 형성을 통해 상기 PTH 펩티드에 연결되고, 추가로 X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 상기 임의적 스페이서는 감마 글루탐산 및 COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 링커 모이어티를 포함하고, k는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수이고;
단, A가 비아실화된 아미노산인 경우, A는 D-입체화학 배열의 아미노산인 접합체.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PTH 펩티드는 서열 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH-Z (서열번호 7)를 포함하고,
상기 식에서, Z는 X₃₃F, X₅₃X₃₅, X₅₃FX₃₅, 또는X₃₃이고;
X₃₃및 X₃₅는 각각 독립적으로 아미노산의 산 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하는 아미노산이고;
X₅₃은 Asn인 접합체.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃ (서열번호 16) 또는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅ (서열번호 12)의 서열을 포함하고,
상기식에서, X₃₃ 및 X₃₅는 각각 독립적으로 아미노산의 측쇄에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결된 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산을 포함하는 아미노산인 접합체.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, A는 Lys, dLys, 아실화된-Lys 및 아실화된-dLys로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 자가 절단 디펩티드는 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 연결되는 것인 접합체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 상기 아실화된 아미노산은 스페이서를 통해 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산을 포함하고, X₃₃, X₃₅ 및 A 각각의 스페이서는 독립적으로 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, (Xaa)-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산으로부터 선택되고,
상기 식에서, Xaa는 Arg, Tyr(OPO₃H₂), 및 hCys(SO₃H)로부터 선택되고;
k는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수이고;
q는 1-8의 범위에서 선택되는 정수이고, 임의적으로 k는 2이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 것인 접합체.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, A, X₃₃ 및 X₃₅의 아실화된 아미노산은 독립적으로 시스테인, 호모시스테인, 오르니틴 리신 및 d-리신으로부터 선택되고, 상기 시스테인, 호모시스테인, 오르니틴 리신 또는 d-리신의 측쇄는 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 임의적으로 스페이서를 통해 공유 연결되며, A, X₃₃ 및 X₃₅ 각각의 임의적 스페이서는 감마 글루탐산 연결을 포함하는 것인 접합체.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, A, X₃₃ 및 X₃₅의 아실화된 아미노산은 각각 독립적으로 리신 또는 d-리신으로부터 선택되고, 상기 리신 또는 d-리신의 상기 측쇄는 C16-C22 지방산 또는 C16-C22 이산에 임의적으로 감마 글루탐산 연결을 포함하는 스페이서를 통해 공유 연결되는 것인 접합체.
제9항에 있어서, A의 아실화된 아미노산은 d-리신이고, X₃₃ 및 X₃₅는 각각 리신인 접합체.
제9항 또는 제10항에 있어서, A, X₃₃ 및 X₃₅의 상기 스페이서는 각각 독립적으로 구조: 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산을 포함하는 화합물로부터 선택되고, 상기 식 중에서 k는 2, 4 또는 8로부터 선택되는 정수이고, q는 1, 2, 4 또는 8로부터 선택되는 정수인 접합체.
제11항에 있어서, k는 2이고, q는 2 또는 4인 접합체.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, A-B는 하기 구조를 포함하는 것인 접합체:

상기 식에서, R₁은 C₁-C₈ 알킬, (C₁-C₄ 알킬)OH, (C₁-C₄ 알킬)SH, (C₁-C₄ 알킬)COOH, 및 (C₁-C₄ 알킬)NH₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 측쇄를 포함하고, 임의적으로 C16-C30 지방산 또는 C16-C30 이산은 상기 측쇄에 임의적으로 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 스페이서를 통해 공유 연결되고,
k는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수이고;
q는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수이고, 임의적으로 k는 2이고, q는 1-8의 범위로부터 선택되고;
R₂, R₄및 R₈은 독립적으로 H 또는 C₁-C₄ 알킬이고;
R₃은 C₁-C₆ 알킬이고;
R₅는 NH₂이다.
제13항에 있어서, 상기 PTH 펩티드로부터 A-B의 화학적 절단 반감기(t_1/2)는 생리학적 조건 하에 표준 PBS 용액에서 적어도 약 48 내지 168시간인 접합체.
제13항에 있어서,
R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH이고;
R₂ 및 R₈는 각각 H이고;
R₄는 H 또는 CH₃이고;
R₃은 CH₃이고;
R₅는 NH₂인 접합체
제13항에 있어서,
R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃이고;
R₂ 및 R₈는 각각 H이고;
R₄는 H 또는 CH₃이고;
R₃은 CH₃이고;
R₅는 NH₂이고, 상기 [스페이서]는 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 연결 모이어티이고, 상기 식 중에서 k는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-8의 범위로부터 선택되는 정수인 접합체.
제16항에 있어서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH이고, 상기 [스페이서]는 구조 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산을 포함하는 연결 모이어티이고, k는 2 또는 4이고, q는 1, 2 또는 4인 접합체.
제16항에 있어서, R₁은 (C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH- COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-CO(CH₂)_14-20COOH인 접합체.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 절단 가능한 디펩티드의 제1 아미노산은 D-입체화학 배열의 아미노산인 접합체.
PTH 펩티드, 및 아미드 결합을 통해 상기 PTH 펩티드의 N-말단 알파 아민에 공유 연결된 자가 절단 디펩티드를 포함하는 접합체:
상기 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃ (서열번호 16), SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅(서열번호 12), 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환에 의해 서열번호 16 또는 서열번호 12의 펩티드와 상이한 펩티드의 아미노산 서열을 포함하고,
상기 식에서, X₃₃ 및 X₃₅는 각각 (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃ 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃의 측쇄를 포함하는 아미노산이고;
상기 자가 절단 디펩티드는 하기 일반 구조를 포함하고;

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20COOH, (C₁-C₄ 알킬)NH-CO(CH₂)_14-20CH₃ 또는 (C₁-C₄ 알킬)NH-[스페이서]-CO(CH₂)_14-20CH₃이고;
R₂ 및 R₈은 각각 H이고;
R₄는 H 또는 CH₃이고;
R₃은 C₁-C₃ 알킬이고;
R₅는 NH₂이고, R₁, X₃₃ 및 X₃₅의 상기 스페이서는 각각 독립적으로 감마 글루탐산, 감마 글루탐산-감마 글루탐산 디펩티드, 및 감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산으로 이루어진 군으로부터 선택되고, k는 2-4의 범위로부터 선택되는 정수이고, q는 1-4의 범위로부터 선택되는 정수이다.
제20항에 있어서, 상기 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFX₃₅(서열번호 12)의 아미노산 서열을 포함하고,
상기 식에서, X₃₅는 (C₁-C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-CO(CH₂)_14-20COOH의 측쇄를 포함하는 아미노산이고;
상기 자가 절단 디펩티드는 하기 일반 구조를 포함하는 것인 접합체:

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-CO(CH₂)_14-20COOH이고;
R₂, R₄및 R₈은 각각 H이고;
R₃은 CH₃이고;
R₅는 NH₂이다.
제19항에 있어서, 상기 PTH 펩티드는 SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHX₃₃(서열번호 16)의 아미노산 서열을 포함하고,
상기 식에서, X₃₃은 (C₁-C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_k-NH]_q-감마 글루탐산}-CO(CH₂)_14-20COOH의 측쇄를 포함하는 아미노산이고;
상기 자가 절단 디펩티드는 하기 일반 구조를 포함하는 것인 접합체:

상기 식에서, R₁은 (C₁-C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)_kNH]_q-감마 글루탐산}-CO(CH₂)_16-18COOH이고;
R₂, R₄및 R₈은 각각 H이고;
R₃은 CH₃이고;
R₅는 NH₂이고;
q는 2 또는 4이고;
k는 2이다.
제22항에 있어서,
X₃₃은 (C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-CO(CH₂)₁₆COOH의 측쇄를 포함하는 아미노산이고;
R₁은 (C₄ 알킬)NH-{감마 글루탐산-[COCH₂(OCH₂CH₂)₂NH-COCH₂(OCH₂CH₂)₂]NH-감마 글루탐산}-CO(CH₂)₁₆COOH인 접합체.
제21항, 제22항 및 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 자가 절단 디펩티드의 제1 아미노산은 D-입체화학 배열인 접합체.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
제25항에 있어서, 상기 조성물은 나트륨 N[8-(2-히드록시벤오일)아미노카프릴레이트]를 추가로 포함하고, 임의적으로 조성물은 정제 형태로 제제화되는 것인, 경구 전달용으로 제제화된 약제학적 조성물.
제25항 또는 제26항에 있어서, 서열번호 7, 서열번호 31, 또는 서열번호 32의 펩티드 및 임의적으로 칼시토닌을 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
부갑상선기능저하증을 치료하는 방법으로서, 제23항, 제24항 및 제25항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 유효량을 그러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
골다공증 또는 골감소증을 치료하는 방법으로서, 제22항, 제23항 및 제24항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 유효량을 그러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
제28항 또는 제29항에 있어서, 조성물은 1주당 1회 투여되는 것인 방법.
제28항 또는 제29항에 있어서, 조성물은 매일 투여되는 것인 방법.
제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 경구 투여되는 것인 방법.
부갑상선기능저하증을 치료하기 위한 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
골다공증 또는 골감소증을 치료하기 위한 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.