KR20220156444A - Photoreactive micelle complex for prevention or treatment of inflammatory or infectious diseases - Google Patents

Photoreactive micelle complex for prevention or treatment of inflammatory or infectious diseases Download PDF

Info

Publication number
KR20220156444A
KR20220156444A KR1020220056682A KR20220056682A KR20220156444A KR 20220156444 A KR20220156444 A KR 20220156444A KR 1020220056682 A KR1020220056682 A KR 1020220056682A KR 20220056682 A KR20220056682 A KR 20220056682A KR 20220156444 A KR20220156444 A KR 20220156444A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
acid
photoreactive
micelle complex
methylene blue
complex
Prior art date
Application number
KR1020220056682A
Other languages
Korean (ko)
Inventor
한선미
장준근
이혜명
이용덕
Original Assignee
주식회사 디알나노
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 디알나노 filed Critical 주식회사 디알나노
Publication of KR20220156444A publication Critical patent/KR20220156444A/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/5415—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. phenothiazine, chlorpromazine, piroxicam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6907—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a microemulsion, nanoemulsion or micelle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/06—Radiation therapy using light
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/06—Radiation therapy using light
    • A61N5/0613—Apparatus adapted for a specific treatment
    • A61N5/062—Photodynamic therapy, i.e. excitation of an agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

The present invention relates to a photoreactive micelle complex for the treatment of inflammatory diseases. More particularly, the present invention provides a photoreactive micelle complex for preventing or treating inflammatory diseases or infectious diseases having a core-shell structure that can act locally and has synergistic antibacterial and antiviral effects when irradiated with light by including (i) a core comprising methylene blue and an organic acid ionically bonded to the methylene blue, and (ii) a shell surrounding the core in the form of micelles made of fatty acids.

Description

염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 광반응성 마이셀 복합체{PHOTOREACTIVE MICELLE COMPLEX FOR PREVENTION OR TREATMENT OF INFLAMMATORY OR INFECTIOUS DISEASES}Photoreactive micelle complex for prevention or treatment of inflammatory or infectious diseases

본 발명은 염증성 질환 또는 감염성 질환 치료용 광반응성 마이셀 복합체 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 메틸렌 블루 및 상기 메틸렌 블루에 이온 결합한 유기산을 포함하는 코어; 및 지방산으로 이루어진 마이셀 형태로 상기 코어를 감싸는 쉘;을 포함하여 광 조사 시 항균 또는 항 바이러스 효과가 상승하고, 이를 통해 부비동염 등 염증성 질환 또는 균, 바이러스에 의한 감염성 질환의 치료 또는 예방에 사용되는 코어-쉘 구조의 광반응성 마이셀 복합체에 관한 것이다.The present invention relates to a photoreactive micelle complex for treating inflammatory or infectious diseases and a method for preparing the same, and more particularly, to a core comprising methylene blue and an organic acid ionically bonded to the methylene blue; And a shell surrounding the core in the form of micelles made of fatty acids; antibacterial or antiviral effects increase upon light irradiation, including a core used for the treatment or prevention of inflammatory diseases such as sinusitis or infectious diseases caused by bacteria or viruses. -It relates to a photoreactive micelle complex with a shell structure.

최근 생활방식의 변화에 의해 급성 전염성 질환에서 만성 염증질환으로 질병패턴이 바뀌고 있다. 염증은 외부에서 독소 등의 물질이 체내에 들어왔을 때, 우리 몸에서 일어나는 방어기작으로서, 환경 내 세균, 곰팡이 등이 단기간 침입으로 급성 염증이 발생하고, 환경 내에 존재하는 미생물, 알레르겐 등의 원인물질이 지속적으로 우리 몸에 흡수되면, 만성 염증이 발생하게 된다. 최근, 비감염성 원인 인자로 인식되었던 만성 염증질환의 발생에 감염성 원인 인자의 중요성이 부각되고 있다. Recently, the disease pattern is changing from an acute infectious disease to a chronic inflammatory disease due to lifestyle changes. Inflammation is a defense mechanism that occurs in our body when substances such as toxins enter the body from the outside. If this is continuously absorbed into our body, chronic inflammation occurs. Recently, the importance of infectious causative factors has been highlighted in the development of chronic inflammatory diseases that were recognized as non-infectious causative factors.

감염성 질환은 균, 세균, 바이러스 등의 외래물이 혈액, 체액 및 조직 내에 출현하여 서식하기 시작하면서 발병하는 질환으로서, 이들의 정확한 동정 및 적절한 치료가 이루어지지 않을 경우, 생명을 잃을 수 있는 질병이다. 위생 수준의 향상에 따라서 감염질환의 유병율은 대체로 감소하는 것으로 보이나, 항생제 투여의 오남용, 이식에 따른 면역 억제제 사용의 증가, 항암 치료로 인한 면역력 감소, 당뇨, 고혈압 등 기저질환 보유자의 증가 등으로 치명적인 결과를 초래하는 감염질환의 위협은 증가되는 상황이다. Infectious diseases are diseases that develop when foreign substances such as germs, bacteria, and viruses appear and begin to colonize in blood, body fluids, and tissues. . The prevalence of infectious diseases seems to generally decrease as hygiene standards improve, but it is fatal due to the misuse and abuse of antibiotics, the increase in the use of immunosuppressants following transplantation, the decrease in immunity due to chemotherapy, and the increase in the number of people with underlying diseases such as diabetes and hypertension. The threat of consequential infectious diseases is increasing.

특히 감염질환은 대부분 감염부위의 염증반응을 수반하며, 그 중의 일부는 전신 염증반응을 일으켜 치명적인 결과를 초래하기도 한다. 또한 감염에 의하여 감염성 환자는 사망에 이를 수 있어 최대한 빠르게 적절한 항생제 치료를 시작하는 것이 중요하므로 정확한 진단 및 치료는 감염성 환자의 생존을 위해 필수적이다.In particular, most infectious diseases accompany an inflammatory response at the site of infection, and some of them cause a systemic inflammatory response, leading to fatal results. In addition, since infection can lead to death of an infectious patient, it is important to start appropriate antibiotic treatment as soon as possible, so accurate diagnosis and treatment are essential for the survival of infectious patients.

한편, 염증 반응은 손상이나 박테리아, 곰팡이, 바이러스 등 외부 물질에 의해 자극되어 각종 염증 매개 인자 및 면역 세포에 의한 효소의 활성화, 염증 매개물질 분비, 체액 침윤, 세포의 이동, 조직 파괴 등 일련의 복합적인 생리 적 반응이 일어나는 것을 말하며, 이로 인해 홍반, 부종, 발열, 통증 등과 같은 증상이 수반된다. 염증 반응은 외부 감염원을 제거하고 손상된 조직을 재생하여 생명체의 기능을 회복시키는 작용을 하지만, 항원이 제거되지 않거나, 내부 물질이 원인이 되는 등 염증 반응이 과도하거나 지속적으로 일어나면 오히려 점막 손상, 조직 파 괴 등이 일어나고, 암, 염증성 피부 질환, 관절염 등을 초래하기도 한다. On the other hand, the inflammatory response is stimulated by damage or external substances such as bacteria, fungi, and viruses, and is a series of complex factors such as activation of enzymes by various inflammatory mediators and immune cells, secretion of inflammatory mediators, body fluid infiltration, cell migration, and tissue destruction. It refers to the occurrence of an abnormal physiological response, which is accompanied by symptoms such as erythema, edema, fever, and pain. The inflammatory response removes external sources of infection and regenerates damaged tissues to restore the function of life. It can cause lumps, cancer, inflammatory skin diseases, and arthritis.

염증성질환의 일예로 비염 또는 부비동염이 있으며, 이 중 부비동염이란 부비동 내부를 덮고 있는 점막에 염증이 생기는 것을 통칭하는 것으로 대부분 비염에서 속발하며, 비염 없이 부비동염만 단독으로 발생하는 경우는 거의 없기 때문에 '비부비동염'이라 부르는 것이 더 정확한 표현이다. 비부비동염은 우리 주변에서 매우 흔하게 접할 수 있는 질환 중의 하나로, 정상적인 성인은 매년 수차례 감기에 걸리는데, 87%에서 부비동이 침범되며 이 중 0.5-2%는 급성 세균성 비부비동염으로 진행되고, 이렇게 부비동 내 부에 화농성 액체가 고인 경우를 흔히 '축농증'이라고 한다. 비부비동염은 이환 기간에 따라 급성, 아급성, 그리고 만성 비부비동염으로 분류된다. 만성 부비동염(CRS)의 주요 병인은 지속적인 염증이며, 만성 부비동염은 콧물, 안면통, 후각 감퇴와 질병의 내시경적 신호 또는 CT 스캔 변화 중 어느 하나와 같은 증상 중 둘 이상이 최소 8-12주로 야기되는 비강 및 부비강의 염증으로 정의된다.An example of an inflammatory disease is rhinitis or sinusitis. Among them, sinusitis is a common term for inflammation of the mucous membrane covering the inside of the sinuses. Most of them are secondary to rhinitis. It would be more accurate to call it 'sinusitis'. Rhinosinusitis is one of the most common diseases around us. Normal adults catch a cold several times a year. In 87%, the sinuses are invaded, and 0.5-2% of them progress to acute bacterial rhinosinusitis. If purulent fluid accumulates in the part, it is often called 'sinusitis'. Rhinosinusitis is classified into acute, subacute, and chronic rhinosinusitis according to the duration of the disease. The main etiology of chronic sinusitis (CRS) is persistent inflammation, chronic sinusitis is a condition that causes at least 8-12 weeks of two or more of the following symptoms: runny nose, facial pain, loss of smell, and either endoscopic signs of disease or CT scan changes. and inflammation of the sinuses.

국내에서 부비동염의 발병율은 전체인구의 6.95%에 달하며 이는 공중 보건 문제뿐만 아니라 치료를 위한 사회 경제적 비용의 증가를 초래하고 있다. 하지만 부비동염을 포함하는 염증성질환, 세균 등에 의한 감염증의 예방 또는 치료하기 위한 메틸렌블루의 효과에 대해서는 알려진 바가 없어, 이에 대한 연구가 필요한 실정이다.In Korea, the incidence of sinusitis reaches 6.95% of the total population, which causes an increase in social and economic costs for treatment as well as public health problems. However, there is no known effect of methylene blue for the prevention or treatment of inflammatory diseases including sinusitis, infections caused by bacteria, etc., and research on this is required.

본 발명의 목적은 메틸렌 블루를 이용하여 염증성 질환 또는 균/바이러스에 의한 감염성 질환의 치료 또는 예방용 광반응성 마이셀 복합체를 제공하는 것이다.An object of the present invention is to provide a photoreactive micelle complex for the treatment or prevention of inflammatory diseases or infectious diseases caused by bacteria/viruses using methylene blue.

본 발명의 다른 목적은 상기 마이셀 복합체의 비강 투여 방법을 제공하고, 상기 마이셀 복합체와 상승효과(시너지 효과)를 나타낼 수 있는 빛의 파장을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for intranasal administration of the micelle complex, and to provide a wavelength of light that can exhibit a synergistic effect (synergistic effect) with the micelle complex.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 마이셀 복합체, 이를 포함하는 약학 조성물의 분사장치 및 발광장치를 포함하여 부비동염 등의 염증성 질환 또는 균/바이러스에 의한 감염성 질환의 치료 및 예방에 사용될 수 있는 치료 키트를 제공함에 있다. Another object of the present invention is to provide a treatment kit that can be used for the treatment and prevention of inflammatory diseases such as sinusitis or infectious diseases caused by bacteria / viruses, including the micelle complex, an injection device and a light emitting device of a pharmaceutical composition containing the same is in

상술한 과제를 해결하기 위해, 본 발명의 염증성 질환 또는 균/바이러스에 의한 감염성 질환의 치료 또는 예방용 광반응성 마이셀 복합체는, (i) 메틸렌 블루 및 상기 메틸렌 블루에 이온 결합한 유기산을 포함하는 코어; 및 (ii) 지방산으로 이루어진 마이셀 형태로 상기 코어를 감싸는 쉘;을 포함할 수 있다.In order to solve the above problems, the photoreactive micelle complex for the treatment or prevention of inflammatory diseases or infectious diseases caused by bacteria / viruses of the present invention includes (i) methylene blue and a core comprising an organic acid ionically bonded to the methylene blue; and (ii) a shell surrounding the core in the form of micelles made of fatty acids.

본 발명에서 코어-쉘 구조의 광반응성 마이셀 복합체는 50 내지 500nm, 100 내지 600 nm, 또는 100 내지 500nm의 크기로 형성될 수 있다. In the present invention, the photoreactive micelle complex of the core-shell structure may be formed in a size of 50 to 500 nm, 100 to 600 nm, or 100 to 500 nm.

본 발명에서, 상기 염증성 질환에는 부비동염, 비염, 류마티스 관절염(Rheumatoid Arthritis), 자가면역성 뇌척수염(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis), 천식 (Asthma), 피부염(Dermititis) 및 건선 (Psoriasis)이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면 본 발명의 염증성 질환은 부비동염 또는 비염이다. In the present invention, the inflammatory diseases include, but are not limited to, sinusitis, rhinitis, rheumatoid arthritis, experimental autoimmune encephalomyelitis, asthma, dermititis, and psoriasis. . According to a preferred embodiment of the present invention, the inflammatory disease of the present invention is sinusitis or rhinitis.

본 발명에서, 감염성 질환은 인플루엔자, 수족구병, 메티실린내성황색포도알균 감염증, 다제내성농녹균 감염증, 급성호흡기감염증, 사람유두종바이러스 등이 포함될 수 있으나 이에한정되는 것은 아니며, 바람직하게는 인플루엔자 또는 급성호흡기감염증이 포함된다. 본 발명의 상기 인플루엔자에는 인플루엔자A, 인플루엔자B, 인플루엔자C, 인플루엔자D 타입이 모두 포함될 수 있으며, 가장 바람직하게는 H1N1, H2N2 또는 H3N2이다.In the present invention, the infectious disease may include, but is not limited to, influenza, hand, foot and mouth disease, methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection, multi-drug-resistant pyorrhea infection, acute respiratory infection, human papillomavirus, etc., preferably influenza or acute Respiratory infections included. The influenza of the present invention may include all types of influenza A, influenza B, influenza C, and influenza D, and most preferably H1N1, H2N2 or H3N2.

본 발명에 따른 조성물의 투여방법은 특별히 특정되는 것은 아니나 비강 투여되는 것이 가장 바람직하며, 비강 분무 투여될 수 있다.The administration method of the composition according to the present invention is not particularly specified, but it is most preferable that it is administered intranasally, and nasal spray administration may be administered.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 코어를 이루는 유기산은 메틸렌 블루와 1 ~ 10 : 1의 몰비로 결합할 수 있다. 본 발명의 상기 유기산에는 탄소수가 10 내지 20인 카복실산, 탄소수가 10 내지 20인 방향족 카복실산 또는 이들의 염이 포함될 수 있으며, 바람직하게는, 살리실산, 올레산, 인돌아세트산, 데옥시콜산 및 이들의 염이 포함될 수 있다. 본 발명의 가장 바람직한 일 실시예에 따르면 상기 코어를 이루는 유기산은 살리실산 또는 살리실산 소듐(Sodium salicylate)이다.According to one embodiment of the present invention, the organic acid constituting the core may be combined with methylene blue in a molar ratio of 1 to 10:1. The organic acid of the present invention may include carboxylic acids having 10 to 20 carbon atoms, aromatic carboxylic acids having 10 to 20 carbon atoms, or salts thereof, and preferably, salicylic acid, oleic acid, indoleacetic acid, deoxycholic acid, and salts thereof are used. can be included According to a most preferred embodiment of the present invention, the organic acid constituting the core is salicylic acid or sodium salicylate.

본 발명의 상기 지방산은 탄소수가 10 내지 20인 지방산, 유기지방산인 것이 바람직하며, 상기 지방산에는 올레산(Oleic acid), 팔미트산(Palmitic acid), 팔미톨레산(Palmitoleic acid), 스테아르산(Stearic acid), 엘라이드산(Elaidic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 바크센산(Vaccenic acid), α-엘레오스테아린산(α-Eleostearic acid), 푸닉산(Punicic acid) 자카릭산(Jacaric acid), 아라키돈산 (Arachidonic acid), 파울린산(Paullinic acid), 곤돌산(Gondoic acid) 및 이들의 염이 포함될 수 있다. 본 발명의 가장 바람직한 일 실시예에 따르면 상기 지방산은 올레산 또는 올레산 소듐(Sodium oleate)이다.The fatty acid of the present invention is preferably a fatty acid having 10 to 20 carbon atoms or an organic fatty acid, and the fatty acids include oleic acid, palmitic acid, palmitoleic acid, and stearic acid. acid), Elaidic acid, Linoleic acid, Vaccenic acid, α-Eleostearic acid, Punicic acid, Jacaric acid, Arachidone Arachidonic acid, Paulinic acid, Gondoic acid and salts thereof may be included. According to a most preferred embodiment of the present invention, the fatty acid is oleic acid or sodium oleate.

본 발명의 복합체 및 이를 포함하는 조성물은 광 조사 시 상승효과(시너지 효과)가 발생하여 항균 및 항바이러스 효과가 상승하며, 상기 조사되는 광의 파장은 500nm 내지 700nm, 600nm 내지 700nm, 또는 600 내지 700nm 인 것이 바람직하다.The composite of the present invention and the composition containing the same have a synergistic effect (synergistic effect) when irradiated with light, resulting in increased antibacterial and antiviral effects, and the wavelength of the irradiated light is 500 nm to 700 nm, 600 nm to 700 nm, or 600 to 700 nm it is desirable

본 발명의 다른 실시예에 따르면, 상기 마이셀 복합체를 포함하는 감염성 질환 또는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 제공된다. 상기 약학조성물은 비강에 분무 투여될 수 있으며, 분사장치 및 발광장치와 함께 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 키트로 이용될 수 있다. 상기 발광장치는 마이셀 복합체의 활성 파장인 500 내지 700 nm 파장의 광을 발하는 것이 바람직하다.According to another embodiment of the present invention, a pharmaceutical composition for preventing or treating an infectious disease or an inflammatory disease comprising the micelle complex is provided. The pharmaceutical composition may be administered by spraying into the nasal cavity, and may be used as a kit for preventing or treating inflammatory diseases or infectious diseases together with a spraying device and a light emitting device. The light emitting device preferably emits light with a wavelength of 500 to 700 nm, which is the active wavelength of the micelle complex.

본 발명은 또한, (i) 메틸렌 블루 및 상기 메틸렌 블루에 이온 결합한 유기산을 포함하는 코어; 및 (ii) 지방산으로 이루어진 마이셀 형태로 상기 코어를 감싸는 쉘;을 포함하는 코어-쉘 구조 광반응성 마이셀 복합체의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용도를 제공한다.The present invention also provides a core comprising (i) methylene blue and an organic acid ionically bonded to the methylene blue; And (ii) a shell surrounding the core in the form of micelles made of fatty acids; provides a use for preventing or treating inflammatory diseases or infectious diseases of a core-shell structure photoreactive micelle complex comprising a.

본 발명에 따라 제조된 염증성 질환 또는 균/바이러스에 의한 감염성 질환의 예방/치료용 광 반응성 약학 조성물은 메틸렌 블루를 포함하는 마이셀 복합체를 포함하여 국소적으로 작용할 수 있는 이점이 있다.The light-reactive pharmaceutical composition for preventing/treating inflammatory diseases or infectious diseases caused by fungi/viruses prepared according to the present invention has the advantage of being able to act locally by including a micelle complex containing methylene blue.

본 발명에 따르면, 상기 마이셀 복합체 또는 이를 포함하는 약학 조성물의 비강 투여 방법이 제공되고, 상기 마이셀 복합체와 반응하여 상승효과(시너지 효과)를 갖는 빛의 파장이 제공된다.According to the present invention, a method for nasal administration of the micelle complex or a pharmaceutical composition containing the same is provided, and a wavelength of light having a synergistic effect (synergistic effect) by reacting with the micelle complex is provided.

본 발명은 또한, 본 발명의 마이셀 복합체를 포함하는 조성물, 분사장치 및 발광장치를 포함하는 치료 키트를 제공하여 부비동염 등의 염증성 또는 균/바이러스 감염성 질환 치료 및 비강을 통한 균/바이러스 감염 예방에 간편하며 효과적으로 사용될 수 있다.The present invention also provides a treatment kit including a composition containing the micelle complex of the present invention, an injection device, and a light emitting device to treat inflammatory or bacterial/viral infectious diseases such as sinusitis and to prevent bacterial/viral infection through the nasal cavity. and can be used effectively.

도 1는 메틸렌블루의 비화학적 소수화 및 이를 이용한 코어 복합체(MB-core complex)의 형성을 나타낸 모식도이다.
도 2는 메틸렌블루와 본 발명에 따라 제조된 코어 복합체(MB-core complex)의 친수성 정도를 관찰한 이미지이다.
도 3은 메틸렌블루와 본 발명에 따라 제조된 코어 복합체(MB-core complex)의 흡광 스펙트럼을 나타낸다.
도 4의 A는 전자현미경(TEM)을 이용하여 본 발명에 따라 제조된 마이셀 복합체를 관찰한 이미지이며, 도 4의 B는 입도분석기 측정에 의한 수분산 나노입자의 입자크기 분포 그래프, 도 4의 C는 제타전위 측정에 의한 수분산 나노입자의 제타전위 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따라 코어 복합체(MB-Core complex)를 이용하여 제조된 마이셀 복합체(수분산 나노입자)의 구성 모식도이다.
도 6의 A는 메틸렌블루와 비교하여 메틸렌블루 (MB)를 함유한 마이셀복합체의 인간코점막상피세포 내 흡수가 향상된 것을 나타낸 시험결과 이미지이며, 도 6의 B는 인간코점막상피세포 내 흡수가 향상된 것을 정량적 실험으로 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 메틸렌블루와 비교하여 본 발명에 따라 제조된 메틸렌블루 (MB)를 함유한 마이셀 복합체의 암세포 내 흡수가 향상된 것을 나타낸 시험결과 그래프이다.
도 8의 A는. 메틸렌블루 (MB)를 함유한 본 발명에 따라 제조된 마이셀 복합체를 흡수한 인간코점막상피세포에 633nm 광조사를 했을 때 세포 내 ROS 발생을 확인한 실험결과 이미지이며, 도 8의 B는 660nm 레이저로 메틸렌블루 (MB)를 함유한 마이셀 복합체에 광조사를 했을 때 singlet oxygen이 발생하는 것을 확인한 그래프이다.
도 9의 A는 인간코점막상피세포 in vitro 세균(S.aureus) 감염 모델에서 본 발명에 따라 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체의 광역동 치료 시 항균 효과를 나타내는 것을 확인한 이미지이며, 도 9의 B는 광역동치료 조건에서 세포독성이 없는 것을 확인한 그래프이다.
도 10은 인간코점막상피세포 in vitro 바이러스 (influenza A virus) 감염 모델에서 메틸렌블루 (MB)함유 마이셀 복합체의 광역동 치료 시 항바이러스 효과를 나타내는 것을 확인한 이미지이다. 도 10의 A는 바이러스 유전자 중 PA 유전자의 감소를 확인하였으며, 도 10의 B는 인간폐암세포주 (A549) in vitro 감염모델에서 바이러스 유전자 중 M2 유전자의 감소를 확인한 결과, 도 10의 C는 바이러스 정량 결과 (plaque assay)를 나타낸다.
도 11은 본 발명의 일 실시예에 따라 인간코점막상피세포 in vivo 바이러스 (influenza A virus) 감염 모델에서 메틸렌블루 (MB)함유 마이셀 복합체의 광역동 치료 1회 실시 후 감염에 의한 폐염증 및 부종 억제를 확인한 이미지이다.
도 12는 본 발명의 일 실시예에 따라, 원숭이 세포주 (Vero e6) in vitro 바이러스 (ZIKA, VACV, AaPV) 감염모델에서 메틸렌블루 (MB)함유 마이셀 복합체의 광역동 치료 시 항바이러스 효과를 나타내는 것을 확인한 이미지이다.
도 13은 본 발명의 일 실시예에 따라, 원숭이 세포주 (Vero e6) in vitro 바이러스 (SARS-CoV-2) 감염 모델에서 메틸렌블루 (MB)함유 마이셀 복합체의 광역동 치료 시 항바이러스 효과를 도 13의 A는 W strain (후안바이러스주), 도 13의 B는 Delta strain (델타변이주)에서 나타내는 것을 확인한 이미지이다.
도 14는 본 발명의 일 실시예에 따라, 인간폐암세포주 (Calu-3) in vitro 바이러스 (SARS-CoV-2) 감염 모델에서 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체의 광역동 치료 시 항바이러스 효과를 W stain (후안바이러스주)에서 나타내는 것을 확인한 이미지이다.1 is a schematic diagram showing the non-chemical hydrophobization of methylene blue and the formation of a core complex (MB-core complex) using the same.
Figure 2 is an image of the observed hydrophilicity of methylene blue and the core complex (MB-core complex) prepared according to the present invention.
Figure 3 shows the absorption spectrum of methylene blue and the core complex (MB-core complex) prepared according to the present invention.
Figure 4A is an image of the micelle complex prepared according to the present invention using an electron microscope (TEM), and Figure 4B is a particle size distribution graph of water-dispersed nanoparticles measured by a particle size analyzer, Figure 4 C is a graph of zeta potential of water-dispersed nanoparticles by zeta potential measurement.
5 is a schematic diagram of the configuration of a micelle complex (water-dispersible nanoparticles) prepared using a core complex (MB-Core complex) according to an embodiment of the present invention.
Figure 6A is a test result image showing that the absorption in human nasal mucosal epithelial cells of the micelle complex containing methylene blue (MB) is improved compared to methylene blue, and B in Figure 6 is the absorption in human nasal mucosal epithelial cells It is a graph showing the result of confirming the improvement by quantitative experiment.
Figure 7 is a graph of test results showing that the absorption of the micellar complex containing methylene blue (MB) prepared according to the present invention is improved in cancer cells compared to methylene blue.
A in Figure 8. This is an experimental result image confirming intracellular ROS generation when human nasal mucosal epithelial cells that absorbed the micelle complex prepared according to the present invention containing methylene blue (MB) were irradiated with 633 nm light, and FIG. This is a graph confirming that singlet oxygen is generated when the micelle complex containing methylene blue (MB) is irradiated with light.
9A is an image confirming that the methylene blue (MB)-containing micelle complex prepared according to the present invention exhibits an antibacterial effect during photodynamic treatment in a human nasal mucosal epithelial cell in vitro bacterial (S. aureus) infection model. 9B is a graph confirming that there is no cytotoxicity under photodynamic therapy conditions.
10 is an image confirming that the antiviral effect is exhibited upon photodynamic treatment of a micelle complex containing methylene blue (MB) in an in vitro virus (influenza A virus) infection model of human nasal mucosal epithelial cells. Figure 10A confirms the reduction of the PA gene among viral genes, Figure 10B confirms the reduction of the M2 gene among viral genes in the human lung cancer cell line (A549) in vitro infection model, and Figure 10C shows virus quantification Results (plaque assay) are shown.
FIG. 11 shows pulmonary inflammation and edema caused by infection after one photodynamic treatment with a micelle complex containing methylene blue (MB) in a human nasal mucosal epithelial cell in vivo virus (influenza A virus) infection model according to an embodiment of the present invention. This is an image confirming suppression.
Figure 12 shows the antiviral effect upon photodynamic treatment of methylene blue (MB)-containing micellar complexes in a monkey cell line (Vero e6) in vitro virus (ZIKA, VACV, AaPV) infection model according to an embodiment of the present invention. This is a verified image.
Figure 13 shows the antiviral effect upon photodynamic treatment of a micelle complex containing methylene blue (MB) in a monkey cell line (Vero e6) in vitro virus (SARS-CoV-2) infection model according to an embodiment of the present invention. A is an image confirming that it is represented by W strain (Huan virus strain) and B in FIG. 13 is Delta strain (delta mutant strain).
Figure 14 shows the antiviral effect upon photodynamic treatment of methylene blue (MB)-containing micellar complexes in a human lung cancer cell line (Calu-3) in vitro virus (SARS-CoV-2) infection model according to an embodiment of the present invention. It is an image confirming what is shown in W stain (Huan virus strain).

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명한다. 본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 후술되어 있는 실시 예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 게시되는 실시 예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 수 있으며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 게시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다. 명세서 전체에 걸쳐 동일 참조 부호는 동일 구성 요소를 지칭한다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail. The advantages and features of the present invention and the embodiments described below will become clear with reference to the embodiments that achieve them. However, the present invention is not limited to the embodiments disclosed below, but may be implemented in various different forms, and only the present embodiments make the disclosure of the present invention complete, and common knowledge in the art to which the present invention belongs It is provided to fully inform the holder of the scope of the invention, and the present invention is only defined by the scope of the claims. Like reference numbers designate like elements throughout the specification.

다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다. 또 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 명백하게 특별히 정의되어 있지 않는 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다. 본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다.Unless otherwise defined, all terms (including technical and scientific terms) used in this specification may be used in a meaning commonly understood by those of ordinary skill in the art to which the present invention belongs. In addition, terms defined in commonly used dictionaries are not interpreted ideally or excessively unless explicitly specifically defined. Terminology used herein is for describing the embodiments and is not intended to limit the present invention. In this specification, singular forms also include plural forms unless specifically stated otherwise in a phrase.

본 명세서에서, '마이셀 복합체'는 수분산 나노입자라 지칭될 수 있으며, (i) 메틸렌 블루 및 상기 메틸렌 블루에 이온 결합한 유기산을 포함하는 코어; 및 (ii) 지방산으로 이루어진 마이셀 형태로 상기 코어를 감싸는 쉘;을 포함하는 코어-쉘 구조의 복합체를 의미한다. 또한, 본 명세서에서 '코어 복합체'는 상기 마이셀 복합체의 코어를 이루는 메틸렌 블루 및 상기 메틸렌 블루에 이온 결합한 유기산의 복합체를 의미한다.In the present specification, the 'micelle complex' may be referred to as water-dispersible nanoparticles, (i) a core containing methylene blue and an organic acid ionically bonded to the methylene blue; And (ii) a shell surrounding the core in the form of micelles made of fatty acids; means a core-shell structured complex comprising a. In addition, in the present specification, the 'core complex' refers to a complex of methylene blue constituting the core of the micelle complex and an organic acid ionically bonded to the methylene blue.

본 발명에서 상기 메틸렌 블루와 유기산은 결합하여 코어 복합체를 형성하며, 코어 복합체의 외부에 지방산이 마이셀 형태로 결합되어 마이셀 복합체를 형성한다. 본 발명의 상기 마이셀 복합체 또는 이를 포함하는 조성물은, 비강에 분사된 후 빛을 조사하여 항균 또는 항 바이러스의 상승효과(시너지 효과)를 나타내며 이를 통해 치료 또는 예방의 효과를 낼 수 있다. 특히, 본 발명의 조성물은 부비동염 또는 비염의 치료를 위해 비강 투여 용법으로 국소적 사용이 가능하다. In the present invention, the methylene blue and the organic acid are combined to form a core complex, and fatty acids are combined in the form of micelles on the outside of the core complex to form a micelle complex. The micelle complex of the present invention or a composition containing the same is sprayed into the nasal cavity and then irradiated with light to show a synergistic effect (synergistic effect) of antibacterial or antiviral effects, thereby providing a therapeutic or preventive effect. In particular, the composition of the present invention can be used topically in a nasal administration regimen for the treatment of sinusitis or rhinitis.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 코어를 이루는 유기산은 메틸렌 블루와 1 ~ 10 : 1의 몰비로 결합할 수 있다. 본 발명의 상기 유기산에는 탄소수가 10 내지 20인 카복실산, 탄소수가 10 내지 20인 방향족 카복실산 또는 이들의 염이 포함될 수 있으며, 바람직하게는, 살리실산, 올레산, 인돌아세트산, 데옥시콜산 및 이들의 염이 포함될 수 있다. 본 발명의 가장 바람직한 일 실시예에 따르면 상기 코어를 이루는 유기산은 살리실산 또는 살리실산 소듐(Sodium salicylate)이다.According to one embodiment of the present invention, the organic acid constituting the core may be combined with methylene blue in a molar ratio of 1 to 10:1. The organic acid of the present invention may include carboxylic acids having 10 to 20 carbon atoms, aromatic carboxylic acids having 10 to 20 carbon atoms, or salts thereof, and preferably, salicylic acid, oleic acid, indoleacetic acid, deoxycholic acid, and salts thereof are used. can be included According to a most preferred embodiment of the present invention, the organic acid constituting the core is salicylic acid or sodium salicylate.

본 발명의 상기 지방산은 탄소수가 10 내지 20인 지방산, 유기지방산인 것이 바람직하며, 상기 지방산에는 올레산(Oleic acid), 팔미트산(Palmitic acid), 팔미톨레산(Palmitoleic acid), 스테아르산(Stearic acid), 엘라이드산(Elaidic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 바크센산(Vaccenic acid), α-엘레오스테아린산(α-Eleostearic acid), 푸닉산(Punicic acid) 자카릭산(Jacaric acid), 아라키돈산 (Arachidonic acid), 파울린산(Paullinic acid), 곤돌산(Gondoic acid) 및 이들의 염이 포함될 수 있다. 본 발명의 가장 바람직한 일 실시예에 따르면 상기 지방산은 올레산 또는 올레산 소듐(Sodium oleate)이다.The fatty acid of the present invention is preferably a fatty acid having 10 to 20 carbon atoms or an organic fatty acid, and the fatty acids include oleic acid, palmitic acid, palmitoleic acid, and stearic acid. acid), Elaidic acid, Linoleic acid, Vaccenic acid, α-Eleostearic acid, Punicic acid, Jacaric acid, Arachidone Arachidonic acid, Paulinic acid, Gondoic acid and salts thereof may be included. According to a most preferred embodiment of the present invention, the fatty acid is oleic acid or sodium oleate.

본 발명에 따른 상기 마이셀 복합체는 20 nm 내지 500 nm, 50 nm 내지 500 nm, 100 nm 내지 600 nm 또는 100내지 500nm의 크기로 제조될 수 있다.The micelle complex according to the present invention may be prepared in a size of 20 nm to 500 nm, 50 nm to 500 nm, 100 nm to 600 nm, or 100 to 500 nm.

본 발명의 일 실시예에 따른 마이셀 복합체의 제조 방법은 다음과 같다. 메틸렌 블루와 sodium salicylate를 칭량하여 RB에 1:1 농도비율로 넣고 D.W를 넣는다. 상기 혼합물을 80℃에서 교반한다(stirring). 교반에 따른 혼합물의 반응 후 용액 냉각(2~3 h)후 상층액을 여과포를 이용하여 감압 여과하여 제거한다. 고체물질을 진공오븐(25 내지 30 ℃) 안에서 약 5일동안 건조하여 Methylene blue-salicylate complex (MBS)를 얻는다. 합성된 MBS (20 mg)와 Sodium Oleate(100 mg), D.W를 1:5:0.05 의 비율로 RB에 넣고 상온 교반한다. 2차로 앞서 넣은 D.W를 최소 0.2 에서 최대 0.45의 비율로 추가로 넣고 2시간 상온 교반한다. 불순물을 여과포를 이용하여 감압여과하여 제거한다. A method for producing a micelle complex according to an embodiment of the present invention is as follows. Weigh methylene blue and sodium salicylate and add them to RB in a 1:1 concentration ratio and add D.W. The mixture is stirred at 80°C. After the reaction of the mixture by stirring, the solution is cooled (2-3 h), and the supernatant is removed by filtering under reduced pressure using a filter cloth. The solid material is dried in a vacuum oven (25 to 30 ℃) for about 5 days to obtain Methylene blue-salicylate complex (MBS). The synthesized MBS (20 mg), sodium oleate (100 mg), and D.W were added to RB at a ratio of 1:5:0.05 and stirred at room temperature. Secondly, D.W, which was previously added, is additionally added at a minimum ratio of 0.2 to a maximum of 0.45 and stirred at room temperature for 2 hours. The impurities are removed by filtration under reduced pressure using a filter cloth.

즉, 본 발명에 따른 마이셀 복합체는, 코어 복합체(MB-core complex (MBS))가 내부에 존재하며 외부에 지방산으로 이루어진 마이셀 형태의 쉘이 둘러싸는 형태로 구성될 수 있다. That is, the micelle complex according to the present invention may be composed of a core complex (MB-core complex (MBS)) present inside and surrounded by a micelle-type shell made of fatty acids on the outside.

본 발명에서 "염증성 질환"은 균 또는 바이러스에 의해 발생하는 질환을 포함하며, 건선, 아토피피부염, 피부근염, 원형 탈모증, 이영양성 수포성 표피박리증, 피부 경화증 및 결막염 등이 포함될 수 있으나, 가장 바람직하게는 부비동염 또는 비염을 의미한다.In the present invention, "inflammatory disease" includes diseases caused by bacteria or viruses, and may include psoriasis, atopic dermatitis, dermatomyositis, alopecia areata, dystrophic epidermolysis bullosa, scleroderma and conjunctivitis, but the most preferred It means sinusitis or rhinitis.

본 발명에서 "감염성 질환"은 균 또는 바이러스에 의해 발생하는 질환을 포함하며, 인플루엔자, 수족구병, 메티실린내성황색포도알균 감염증, 다제내성농녹균 감염증, 급성호흡기감염증, 사람유두종바이러스 등이 포함될 수 있으나, 가장 바람직하게는 인플루엔자 또는 급성호흡기감염증을 의미한다.In the present invention, "infectious disease" includes diseases caused by bacteria or viruses, and may include influenza, hand-foot-and-mouth disease, methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection, multi-drug-resistant pyogenes infection, acute respiratory infection, human papillomavirus, and the like. However, it most preferably means influenza or acute respiratory infections.

본 발명에서 "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 경구 투여, 복강 내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여, 강내 투여, 복강내 투여, 경막 내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 일 회 투여될 수도 있고, 또는 일정한 시간 간격을 두고 2회, 3회 또는 그 이상으로 투여될 수도 있다. 본 발명에 따르는 경우 가장 바람직한 투여 방법은 비강 투여이다.In the present invention, "administration" means introducing the composition of the present invention to a patient by any suitable method, and the administration route of the composition of the present invention may be administered through any general route as long as it can reach the target tissue. The composition of the present invention may be administered orally, intraperitoneally, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally, intranasally, intrapulmonaryly, rectalally, intracavitarily, intraperitoneally, intrathecally, It is not limited to this. The pharmaceutical composition according to the present invention may be administered once, or may be administered twice, three times or more at regular time intervals. The most preferred method of administration when according to the present invention is intranasal administration.

본 발명의 염증성 질환의 종류나 투여 형태, 그리고 치료 효과 등을 고려하여 당업자에게 통상적으로 알려진 다양한 방법에 따라 본 발명에 따른 약학 조성물을 적절히 투여할 수 있으며, 바람직하게는 일일 1회 또는 일정한 시간 간격을 두고 일일 2회 이상 투여될 수 있다. The pharmaceutical composition according to the present invention can be appropriately administered according to various methods commonly known to those skilled in the art in consideration of the type, dosage form, and therapeutic effect of the inflammatory disease of the present invention, preferably once a day or at regular time intervals. It can be administered twice or more per day.

본 발명의 조성물(MB-core complex 기준)의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따 라 그 범위가 다양할 수 있으나, 바람직하게는 0.0005 내지 100 g/kg/day이며, 보다 바람직하게는 0.001 내지 0.1 mg/kg/day이다. 1일 4회, 성인 남자 80kg, 최소 용량 0.1ug/mL 기준으로, 1회 100uL 사용하는 것이 가장 바람직하다.The dosage of the composition of the present invention (based on the MB-core complex) may vary depending on the patient's weight, age, sex, health condition, diet, administration time, administration method, excretion rate, and severity of the disease. , preferably 0.0005 to 100 g/kg/day, more preferably 0.001 to 0.1 mg/kg/day. It is most preferable to use 100uL once, 4 times a day, based on an adult male of 80kg and a minimum dose of 0.1ug/mL.

본 발명에 따른 염증성질환 치료용 광반응성 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용 액의 형태로 사용될 수 있으나, 가장 바람직하게는 에어로졸 형태로 분사되어 사용될 수 있다.The photoreactive composition for treating inflammatory diseases according to the present invention is in the form of oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, external preparations, suppositories and sterile injection solutions, respectively, according to conventional methods. It can be used as, but most preferably it can be used by spraying in the form of an aerosol.

또한, 본 발명의 광반응성 마이셀 복합체는 조성물에 포함되어, 의약품, 의약외품, 화장품으로도 사용될 수 있다. 본 발명의 의약외품 조성물은 외용제, 산제, 살균소독제, 치약제, 연고제, 로션제, 스프레이, 밴드 또는 패취(patch) 등을 예시할 수 있으나 이에 특별히 제한되는 것은 아니며, 의약외품의 제제화 방법, 용량, 이용방법, 구성성분 등은 당해 기술분야에 공지된 통상의 기술로부터 당업자에 의해 적절히 선택될 수 있다.In addition, the photoreactive micelle complex of the present invention can be included in a composition and used as a pharmaceutical, quasi-drug, or cosmetic. The quasi-drug composition of the present invention may be exemplified by external preparations, powders, disinfectants, toothpastes, ointments, lotions, sprays, bands, or patches, but is not particularly limited thereto, and the formulation method, dosage, and use of quasi-drugs Methods, components, and the like can be appropriately selected by a person skilled in the art from conventional techniques known in the art.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for explaining the present invention in more detail, and it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited by these examples according to the gist of the present invention. .

[실시예 1][Example 1]

Methylene blue 복합체의 소수화 확인Confirmation of hydrophobicity of Methylene blue complex

본 발명의 Methylene blue 복합체의 친수성 정도를 확인하고자 친수성인 메틸렌블루를 MB-core complex형태로 소수화시킨뒤 물/유기층(클로로포름) 혼합용매내에서 메틸렌블루의 친수성/소수성된 정도를 비교하는 실험을 진행하였다.In order to confirm the degree of hydrophilicity of the Methylene blue complex of the present invention, the hydrophilic methylene blue was hydrophobized in the form of MB-core complex, and then an experiment was conducted to compare the degree of hydrophilicity / hydrophobicity of methylene blue in a mixed solvent of water / organic layer (chloroform) did

10mL용량의 vial 2개를 준비하고 #1 vial에는 Free MB 3mg을 #2 vial에는 MB-core complex 3mg를 넣었다. 이후, 각 vial에 물과 클로로포름을 각각 3mL씩 넣고, Free MB 또는 MB-core complex가 용매에 잘 녹을 수 있도록 충분히 shaking하였다. 각 vial의 물/유기층(클로로포름)으로의 메틸렌블루의 이동을 육안으로 확인하였다. Two 10mL vials were prepared, and 3mg of Free MB was added to #1 vial and 3mg of MB-core complex to #2 vial. Thereafter, 3 mL of water and chloroform were added to each vial, and shaken sufficiently so that Free MB or MB-core complex could be well dissolved in the solvent. The migration of methylene blue to the water/organic layer (chloroform) of each vial was visually confirmed.

도 1은, 메틸렌블루의 비화학적 소수화를 나타낸 모식도이다. 친수성인 메틸렌블루를 소수화 시키는 방법으로 본 발명의 일 실시예에 따라 화학적 합성 없이 소수화 및 나노입자화 시킨 메틸렌블루를 제조하고, 이에 대한 특성분석을 진행하였다. 그 결과, 도 2와 같이 기존 메틸렌블루는 물층에 녹아있는 반면, 본 발명에 따라 제조된 코어 복합체(MB-Core complex, 도 2의 2)의 경우 메틸렌블루의 소수화가 이뤄져 클로로포름층 즉, 지용성 용매에 잘 녹는 것을 확인할 수 있다.1 is a schematic diagram showing non-chemical hydrophobicity of methylene blue. As a method of hydrophobizing the hydrophilic methylene blue, according to an embodiment of the present invention, a hydrophobic and nanoparticle methylene blue was prepared without chemical synthesis, and the characterization was conducted. As a result, as shown in FIG. 2, while the existing methylene blue is dissolved in the water layer, in the case of the core complex (MB-Core complex, 2 in FIG. 2) prepared according to the present invention, the hydrophobicity of methylene blue is achieved to form a chloroform layer, that is, an oil-soluble solvent It can be seen that it dissolves well in

[실시예 2][Example 2]

MB-core complex의 흡광스펙트럼 분석Absorption spectrum analysis of MB-core complex

메탄올에 용해되어있는 MB-Core complex(소수화 메틸렌블루; 본 발명의 코어 복합체)의 흡광도를 측정하였다. 도 5는 코어 복합체(MB-core complex)의 흡광스펙트럼을 나타낸다. 도 5를 참조하면 본 발명에 따른 코어 복합체의 흡광스펙트럼은 650nm 내지 670nm사이에서 피크를 나타낸다. The absorbance of MB-Core complex (hydrophobized methylene blue; core complex of the present invention) dissolved in methanol was measured. 5 shows an absorption spectrum of the core complex (MB-core complex). Referring to Figure 5, the absorption spectrum of the core composite according to the present invention shows a peak between 650nm and 670nm.

[실시예 3][Example 3]

코어 복합체(MB-core complex)의 합성 및 Methylene blue 마이셀 복합체의 제조Synthesis of MB-core complex and preparation of Methylene blue micelle complex

메틸렌 블루와 sodium salicylate 를 칭량하여 round bottle (RB)에 1:1 농도비율로 넣고 D.W를 넣는다. 상기 혼합물을 80℃에서 교반한다(stirring). 교반에 따른 혼합물의 반응 후 용액 냉각(2~3 h)후 상층액을 여과포를 이용하여 감압 여과하여 제거한다. 고체물질을 진공오븐(25 내지 30 ℃) 안에서 약 5일동안 건조하여 Methylene blue-salicylate complex (MBS)를 얻는다. 합성된 MBS (20 mg)와 Sodium Oleate(100 mg), D.W를 1:5:0.05 의 비율로 RB에 넣고 상온 교반한다. 2차로 앞서 넣은 D.W를 최소 0.2 에서 최대 0.45의 비율로 추가로 넣고 2시간 상온 교반한다. 불순물을 여과포를 이용하여 감압여과하여 제거하여 수용액에 분산된 나노입자를 얻는다. 생성된 나노입자는, 도 5의 최종 생성물과 같이 MB-core complex (MBS, 본 발명에서 코어 복합체)가 내부에 존재하며 Sodium oleate 또는 지방산, 지방산염이 마이셀 형태로 상기 코어의 외부를 둘러싸는 코어-쉘 구조이다.Weigh methylene blue and sodium salicylate, put them in a round bottle (RB) at a concentration ratio of 1:1, and add D.W. The mixture is stirred at 80°C. After the reaction of the mixture by stirring, the solution is cooled (2-3 h), and the supernatant is removed by filtering under reduced pressure using a filter cloth. The solid material is dried in a vacuum oven (25 to 30 ℃) for about 5 days to obtain Methylene blue-salicylate complex (MBS). The synthesized MBS (20 mg), sodium oleate (100 mg), and D.W were added to RB at a ratio of 1:5:0.05 and stirred at room temperature. Secondly, D.W, which was previously added, is additionally added at a minimum ratio of 0.2 to a maximum of 0.45 and stirred at room temperature for 2 hours. Impurities are removed by filtration under reduced pressure using a filter cloth to obtain nanoparticles dispersed in an aqueous solution. The resulting nanoparticles have an MB-core complex (MBS, core complex in the present invention) inside, as in the final product of FIG. -shell structure

본 발명에 따라 제조된 코어 복합체(소수화된 MB-core complex)를 양친성 고분자 또는 유기지방산, 유기지방산염 surfactant를 이용하여 마이셀 복합체를 제조하고, 마이셀 복합체의 크기는 Zetasisernano ZS(Malvern Instruments, UK)를 사용하여 측정하였다. The core complex (hydrophobized MB-core complex) prepared according to the present invention was prepared by using an amphiphilic polymer, organic fatty acid, or organic fatty acid surfactant to prepare a micelle complex, and the size of the micelle complex was determined by Zetasisernano ZS (Malvern Instruments, UK) was measured using

도 4의 A는 전자현미경(TEM)을 이용하여 본 발명에 따라 제조된 마이셀 복합체를 관찰한 이미지이고, 도 4의 B는 입도분석기 측정에 의한 수분산 마이셀 복합체의 입자크기 분포 그래프이며, 도 4의 C는 제타전위 측정에 의한 수분산 나노입자의 제타전위 측정 그래프이다.Figure 4 A is an image of the micelle complex prepared according to the present invention using an electron microscope (TEM), and Figure 4 B is a particle size distribution graph of the water-dispersed micelle complex measured by a particle size analyzer, Figure 4 C in is a graph of zeta potential measurement of water-dispersed nanoparticles by zeta potential measurement.

도 5는 본 발명의 복합체(MB-Core complex)를 이용하여 제조된 마이셀 복합체의 구성 모식도이다. 도 4를 참조하면 본 발명에 따라 마이셀 복합체가 형성되었으며, 상기 마이셀 복합체는 50 내지 500 nm (약 200nm)의 직경을 가진 구형으로 형성되는 확인할 수 있다.Figure 5 is a schematic diagram of the composition of the micelle complex prepared using the complex (MB-Core complex) of the present invention. Referring to Figure 4, the micelle complex was formed according to the present invention, it can be confirmed that the micelle complex is formed in a sphere having a diameter of 50 to 500 nm (about 200 nm).

코어 복합체(MB-Core complex) 단독 또는 surfactant 단독으로 측정 시, 입자사이즈 측정이 불가하거나 사이즈가 고르게 측정되지 않는 결과를 보이고 제타전위 측정이 되지 않는 결과를 보이므로, 코어 복합체(MB-Core complex)를 사용한 마이셀 복합체의 경우 수계환경에서 안정적으로 분산되어있는 것을 알 수 있다.When measuring the core complex (MB-Core complex) alone or surfactant alone, it is impossible to measure the particle size or the size is not measured evenly, and the result is that the zeta potential is not measured. Therefore, the MB-Core complex In the case of the micelle complex using , it can be seen that it is stably dispersed in an aqueous environment.

[실시예 4][Example 4]

4-1. Methylene blue 나노입자의 인간코점막상피세포 흡수 평가 4-1. Evaluation of human nasal mucosal epithelial cell uptake of methylene blue nanoparticles

비강으로 뇌내에 치료물질을 전달을 하기 위한 첫번째 관문인 비강 내 점막상피세포에 물질 흡수가 원활히 이루어지는지 확인하기 위해 세포내 물질 uptake 확인 실험을 수행하였다.Intracellular material uptake confirmation experiment was performed to confirm whether the material is absorbed smoothly into mucosal epithelial cells in the nasal cavity, which is the first gateway for delivering the therapeutic material into the brain through the nasal cavity.

인간코점막상피세포 (Normal human nasal epithelial cells, NHNE)에 본 발명에 따라 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체를 농도별로 처리하여 5분간 배양한 뒤 씻어내고 공초점현미경으로 확인하였으며, 기존 메틸렌블루와 세포내 흡수를 비교하기 위하여 대조군으로 메틸렌블루 처리 세포도 함께 이미징하여 확인하였다(도 6의 A). Normal human nasal epithelial cells (NHNE) were treated with the methylene blue (MB)-containing micelle complex prepared according to the present invention according to concentration, incubated for 5 minutes, washed, and confirmed with a confocal microscope. In order to compare blue and intracellular uptake, as a control, methylene blue-treated cells were also imaged and confirmed (Fig. 6A).

또한 물질을 흡수한 세포를 용해하여 용해물의 형광측정값에 단백질측정값으로 정량하여 세포내 흡수량을 정량적으로 분석하였다 (도 6의 B).In addition, cells that absorbed the material were lysed, and the amount of intracellular uptake was quantitatively analyzed by quantifying the fluorescence measurement value of the lysate with the protein measurement value (FIG. 6B).

상세한 실험방법은 다음과 같다. The detailed experimental method is as follows.

인간코점막상피세포 (Narmal human nasal epithelial cells, NHNE)를 12 well plate에 실험 전 날 준비해 놓은 후 다음날 Free MB와 MB-core complex 1과 2를 메틸렌블루 기준으로 1 uM을 배양액에 넣어 1분, 5분, 15분, 30분 세포와 배양하였다. 기준 배양 시간 후에 배양액을 제거한 후 PBS를 이용하여 세포를 세척하여 주었다. 트립신을 넣어 37℃ 배양기에 1분간 넣어 반응시켜 세포를 플레이트에서 떼어낸다. 새로운 배양액을 넣어 트립신을 중화시키고 1.5ml 튜브에 세포를 모아 넣어주었다. 원심분리기를 이용하여 세포를 펠렛 상태로 만들고 1%SDS 용액을 넣어 세포를 용해하여 얻은 용해액의 형광(580nm/690nm)을 측정한다. 남은 세포용해액을 이용하여 전체 추출된 세포의 단백질 양을 구하여, 형광값 대비 얻어진 메틸렌블루의 양을 세포의 1ug 단백질양으로 정량하여 도 6의 B에 도식화하였다.Human nasal epithelial cells (Narmal human nasal epithelial cells, NHNE) were prepared the day before the experiment in a 12 well plate, and the next day, Free MB and MB-core complex 1 and 2 were added to the culture medium at 1 uM based on methylene blue for 1 minute, Cells were incubated for 5 minutes, 15 minutes, and 30 minutes. After the standard culture time, the culture medium was removed and the cells were washed with PBS. Put trypsin into a 37°C incubator for 1 minute to react and remove the cells from the plate. A new culture medium was added to neutralize trypsin, and the cells were collected and put into a 1.5ml tube. Cells are pelleted using a centrifugal separator, and the cells are lysed by adding 1% SDS solution, and fluorescence (580 nm/690 nm) of the obtained lysate is measured. Using the remaining cell lysate, the amount of protein in the total extracted cells was obtained, and the amount of methylene blue obtained relative to the fluorescence value was quantified as the amount of protein per 1 μg of the cells, and was plotted in FIG. 6B.

도 6은 본 발명에 따라 제조된 나노입자의 인간코점막상피세포의 세포 흡수 시험결과이다. 도 6을 참조하면 매우 낮은 흡수율을 보이는 기존 메틸렌블루에 반해 본 발명에 따른 마이셀 복합체를 처리했을 때 세포내로 흡수가 크게 증가한 것을 확인할 수 있다. 약물전달 입자의 마이셀 복합체 형태가 세포 내부에 빠르게 흡수되어 빠른 시간내에 효과적으로 효능을 낼 수 있음을 알 수 있다.6 is a test result of cell absorption of nanoparticles prepared according to the present invention by human nasal mucosal epithelial cells. Referring to FIG. 6, it can be seen that the absorption into the cells greatly increased when the micelle complex according to the present invention was treated, as opposed to the conventional methylene blue showing a very low absorption rate. It can be seen that the micelle complex form of the drug delivery particles is quickly absorbed into the cells and can effectively produce efficacy within a short time.

4-2. Methylene blue 마이셀 복합체의 암세포 내 물질 전달4-2. Intra-cancer cell mass delivery of Methylene blue micelle complex

비정상적인 세포 내 전달이 용이한지 확인하기 위해 암세포내 물질 uptake 확인 실험을 수행하였다. In order to confirm whether abnormal intracellular delivery was easy, an experiment was performed to confirm uptake of substances in cancer cells.

피부암 세포주인 A431세포주에 본 발명에 따라 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MB2001,)를 처리하여 배양한 뒤 씻어내고 세포를 용해하여 메틸렌블루의 양을 확인하였으며, 기존 메틸렌블루와 세포내 흡수를 비교하기 위하여 대조군으로 메틸렌블루(Free MB)를 동일농도로 처리하여 메틸렌블루의 양을 확인하였다. The A431 cell line, a skin cancer cell line, was treated with the methylene blue (MB)-containing micelle complex (MB2001,) prepared according to the present invention, cultured, washed, and the cells were lysed to confirm the amount of methylene blue, and the existing methylene blue and intracellular To compare absorption, methylene blue (Free MB) was treated at the same concentration as a control to confirm the amount of methylene blue.

상세한 실험방법은 다음과 같다. The detailed experimental method is as follows.

A431 세포주를 12 well plate에 실험 전 날 준비해 놓은 후 다음날 Free MB와 본 발명에 따른 마이셀 복합체(MBSD)1과 2를 메틸렌블루 기준으로 5 uM, 30uM을 배양액에 넣어 1시간 세포와 배양하였다. 기준 배양 시간 후에 배양액을 제거한 후 PBS를 이용하여 세포를 세척하여 주었다. 트립신을 넣어 37℃ 배양기에 1분간 넣어 반응시켜 세포를 플레이트에서 떼어낸다. 새로운 배양액을 넣어 트립신을 중화시키고 1.5ml 튜브에 세포를 모아 넣어주었다. 원심분리기를 이용하여 세포를 펠렛 상태로 만들고 1% SDS 용액을 넣어 세포를 용해하여 얻은 용해액의 형광(580nm/690nm)을 측정한다. 남은 세포용해액을 이용하여 전체 추출된 세포의 단백질 양을 구하여, 형광값 대비 얻어진 메틸렌블루의 양을 세포의 1ug 단백질양으로 정량하여 도 7에 도식화하였다.The A431 cell line was prepared in a 12-well plate the day before the experiment, and the next day, 5 uM and 30 uM of the micellar complex (MBSD) 1 and 2 according to the present invention were added to the culture medium and cultured with the cells for 1 hour. After the standard culture time, the culture medium was removed and the cells were washed with PBS. Put trypsin into a 37°C incubator for 1 minute to react and remove the cells from the plate. A new culture medium was added to neutralize trypsin, and the cells were collected and put into a 1.5ml tube. Cells are pelleted using a centrifuge, and the cells are lysed by adding 1% SDS solution, and the fluorescence (580 nm/690 nm) of the obtained lysate is measured. The protein amount of the total extracted cells was obtained using the remaining cell lysate, and the amount of methylene blue obtained in comparison to the fluorescence value was quantified as the amount of protein per 1 μg of the cells, and is illustrated in FIG. 7 .

도 7은 본 발명에 따라 제조된 나노입자의 비정상세포(암세포)의 흡수 시험결과이다. 도 7을 참조하면 Free MB 대비 본 발명에 따른 마이셀 복합체(MBSD)에서 메틸렌블루의 세포내 측정된 양이 많은 것을 확인할 수 있다. 7 is a test result of absorption of nanoparticles prepared according to the present invention by abnormal cells (cancer cells). Referring to Figure 7, it can be seen that the measured intracellular amount of methylene blue is higher in the micellar complex (MBSD) according to the present invention compared to free MB.

Free MB 대비 마이셀 복합체(MBSD)에서 세포내로 더욱 많이 유입 되었음을 확인할 수 있으며, 이는 Free MB형태에서 마이셀 복합체의 형성이 잘 이루어졌음을 확인할 수 있는 결과이다. It can be confirmed that more of the micelle complex (MBSD) was introduced into the cells than the free MB, which is a result confirming that the formation of the micelle complex was well performed in the free MB form.

4-3. Methylene blue 마이셀 복합체의 인간코점막상피세포 내 ROS 발생 및 in vitro 나노입자의 singlet oxygen 발생능 평가 4-3. Evaluation of ROS generation in human nasal mucosal epithelial cells of methylene blue micelle complex and singlet oxygen generating ability of in vitro nanoparticles

본 발명에 따른 Methylene blue 마이셀 복합체가 600~700nm 대 파장의 빛, 바람직하게는 633nm의 빛과 반응하여 ROS를 발생시켜 감염원을 제거하므로, 세포 내 흡수된 나노입자에 633nm 빛을 조사하여 발생하는 ROS를 측정하였고, 시험관 상에서 다양한 광조사장비를 사용하여 물질과 반응시켰을 때 singlet oxygen이 발생하는 것을 확인하였다. Since the Methylene blue micelle complex according to the present invention reacts with light of a wavelength of 600 to 700 nm, preferably 633 nm, to generate ROS to remove infectious agents, ROS generated by irradiating 633 nm light to nanoparticles absorbed in cells was measured, and it was confirmed that singlet oxygen was generated when reacted with a material using various light irradiation equipment in a test tube.

인간코점막상피세포 (Normal human nasal epithelial cells, NHNE)에 본 발명에 따라 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체를 1uM 처리하여 5분 배양한 뒤 씻어내고 633nm 광조사장치로 1J/cm2의 광을 조사하였다. 광조사 직후, ROS 측정 염색시약인 CellROX를 세포에 5uM 처리하여 30분 배양한 뒤 PBS로 씻어낸 다음 공초점현미경으로 확인하였다. Normal human nasal epithelial cells (NHNE) were treated with 1uM of the methylene blue (MB)-containing micellar complex prepared according to the present invention, incubated for 5 minutes, washed, and then washed with a 633nm light irradiator at 1J/cm 2 light was irradiated. Immediately after light irradiation, cells were treated with CellROX, a staining reagent for measuring ROS, at 5uM, incubated for 30 minutes, washed with PBS, and then observed under a confocal microscope.

시험관상에서 singlet oxygen의 발생을 측정한 상세한 실험방법은 다음과 같다. The detailed experimental method for measuring the generation of singlet oxygen in vitro is as follows.

Singlet oxygen 생성물과의 반응을 위한 시약 조성으로 120uM RNO, 0.03M Histidine을 사용하여 본 발명에 따라 제조한 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체와 혼합한 뒤 Quartz cuvette에 넣고 광을 1분간 조사 후 350nm~750nm의 흡광스펙트럼을 측정한다. RNO는 singlet oxygen과 반응하여 형광이 사라지므로 RNO가 측정되지 않을 때까지 1분 간격으로 빛 조사 후 흡광스펙트럼 측정하는 것을 반복한다. RNO의 흡광도인 440nm의 λmax의 감소되는 값의 기울기로 quantum yield를 계산한다. 기준물질인 Free MB의 quantum yield를 기준으로 Free MB의 RNO 흡광도 감소 기울기 식과 마이셀 복합체의 기울기 값을 비례식으로 quantum yield를 계산한다. As a reagent composition for the reaction with the singlet oxygen product, 120uM RNO and 0.03M Histidine were mixed with the micelle complex containing methylene blue (MB) prepared according to the present invention, put into a quartz cuvette, and irradiated with light for 1 minute, followed by 350nm~ The absorption spectrum at 750 nm is measured. Since RNO reacts with singlet oxygen and the fluorescence disappears, repeat the measurement of absorbance spectrum after light irradiation at 1-minute intervals until RNO is not measured. Calculate the quantum yield with the slope of the decreasing value of λmax at 440 nm, which is the absorbance of RNO. Based on the quantum yield of free MB, which is the reference material, the quantum yield is calculated by the proportional formula of the RNO absorbance reduction slope of free MB and the slope of the micelle complex.

도 8은 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체에 빛을 조사했을때, 세포 내/외에서 ROS와 singlet oxygen을 생성하는 것을 확인한 결과이다. 8 is a result confirming that ROS and singlet oxygen are generated inside/outside the cells when light is irradiated on the micelle complex containing methylene blue (MB).

세포내에서 빛 조사에 의해 메틸렌블루 (MB)나노입자의 활성이 발생하며, 이로 인해 ROS가 생성되는 것을 확인하였다. 이는 메틸렌블루를 활성시키는 것으로 알려져있는 633 nm 파장의 광조사기를 이용한 실험으로, 1J/cm2이라는 낮은 총 광조사량에서 충분한 ROS가 생성되었음을 확인하였다. 이는 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체가 기존 메틸렌블루 (Free MB)에 비해 훨씬 적은양의 메틸렌블루를 사용함에 있어서 더 높은 흡수력을 확인함과 동시에, 이와 같은 흡수량에서 감염원을 제거할 수 있는 충분한 ROS가 발생하여 다양한 감염원을 보다 효과적으로 제거할 수 있을 것이라는 것을 알 수 있다. It was confirmed that methylene blue (MB) nanoparticles were activated by light irradiation in cells, and ROS were generated thereby. This was an experiment using a 633 nm wavelength light irradiator known to activate methylene blue, and it was confirmed that sufficient ROS was generated at a low total light irradiation amount of 1J/cm 2 . This confirms that the micelle complex containing methylene blue (MB) prepared by the present invention has a higher absorption capacity in using a much smaller amount of methylene blue than the existing methylene blue (Free MB), and at the same time, at such an absorption amount, It can be seen that sufficient ROS to be removed will be generated and various infectious agents will be more effectively removed.

메틸렌블루는 600~700nm 파장대 빛에서 활성화되므로 시험관내 실험에서 메틸렌블루 (MB)함유 마이셀 복합체에 660nm 파장의 레이저를 사용하여 singlet oxygen 생성능을 확인하였다. 레이저를 사용했을때에도 singlet oxygen이 생성되는 것을 확인하였고, 이러한 결과는 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB)함유 마이셀 복합체가 다양한 광조사기와 함께 적용될 수 있음을 보여준다. Since methylene blue is activated by light in the wavelength range of 600 to 700 nm, the ability to generate singlet oxygen was confirmed by using a 660 nm wavelength laser on the micelle complex containing methylene blue (MB) in an in vitro experiment. It was confirmed that singlet oxygen was generated even when a laser was used, and these results show that the micelle complex containing methylene blue (MB) prepared according to the present invention can be applied with various light irradiators.

[실시예 5][Example 5]

Methylene blue 마이셀 복합체의 광반응성 항균/ 항바이러스 효과 확인 Confirmation of photoreactive antibacterial/antiviral effect of Methylene blue micelle complex

5-1. Methylene blue 마이셀 복합체의 황색포도상구균 감염 인간코점막상피세포 내 광반응성 항균효과5-1. Photoreactive antibacterial effect of Methylene blue micelle complex in Staphylococcus aureus-infected human nasal mucosal epithelial cells

인간코점막상피세포 (Normal human nasal epithelial cells, NHNE)을 호흡기 감염균인 황색포도상구균 (S.aureus)에 감염 시켜 배양한 뒤 본 발명에 따라 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD) 및 Free MB를 동일 농도로 처리하여 씻어내고 광원조사 유무에 따른 균 사멸 정도를 확인하였으며 기존 황색포도상구균만을 감염 처리한 세포와 비교하기 위하여 대조군으로 사용하였고, 상세한 실험방법은 다음과 같다. Normal human nasal epithelial cells (NHNE) are infected with Staphylococcus aureus (S.aureus), a respiratory infectious agent, and then cultured, and methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) prepared according to the present invention and Free MB was treated with the same concentration and washed, and the degree of fungal death was confirmed according to the presence or absence of light irradiation. Only Staphylococcus aureus was used as a control group to compare with infected cells. The detailed experimental method is as follows.

NHNE 세포를 12 well plate에 실험 전 날 준비해 놓은 후 다음날 Staphylococcus aureus균을 세포수 대비 0.5 배를 넣어 2시간 동안 감염시킨 후 PBS를 이용하여 2번 세척하였다. Free MB와 마이셀 복합체(MBSD)를 메틸렌블루 기준으로 1 uM을 배양액에 넣어 세포와 30분 동안 배양한 후 633 nm (1J/cm2)의 광을 조사한다. 광 조사 후, PBS로 2번 세척한 후 0.5 % 트립톤 엑스-100용액을 이용하여 세포를 용해하였다. 여기서 얻은 용해액을 PBS에 희석하여 고체배지에 접종 후 18시간 배양하여 다음날 생성된 콜로니의 개수를 확인하였다.NHNE cells were prepared the day before the experiment in a 12-well plate, and the next day, Staphylococcus aureus was infected with 0.5 times the number of cells for 2 hours, and then washed twice with PBS. 1 uM of free MB and micellar complex (MBSD) based on methylene blue was added to the culture medium and incubated with the cells for 30 minutes, followed by irradiation with 633 nm (1J/cm 2 ) light. After light irradiation, the cells were washed twice with PBS and then lysed using 0.5% Tryptone X-100 solution. The lysate obtained here was diluted in PBS, inoculated on a solid medium, and then cultured for 18 hours, and the number of colonies generated the next day was confirmed.

도 9은 본 발명에 따라 제조된 나노입자의 인간코점막상피세포의 세포 흡수 시험결과이다. 도 9를 참조하면 Free MB 대비 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)에서 광 조사 시 활성화된 메틸렌블루에 의하여 황색포도상구균이 사멸되었음을 확인할 수 있다. 메틸렌블루 (MB)를 함유한 마이셀 복합체(MBSD, MB2001)를 농도별로 처리하고 빛 조사 유무에 따른 항균력을 colony forming assay를 통해 확인하였다. 9 is a test result of cellular absorption of nanoparticles prepared according to the present invention by human nasal mucosal epithelial cells. Referring to FIG. 9, it can be confirmed that Staphylococcus aureus was killed by methylene blue activated upon light irradiation in the micelle complex (MBSD) containing methylene blue (MB) compared to free MB. The micellar complex (MBSD, MB2001) containing methylene blue (MB) was treated by concentration, and the antibacterial activity according to the presence or absence of light irradiation was confirmed through colony forming assay.

도 9의 B는 균감염 모델에서 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)의 항균력을 확인하는 실험조건에서 세포독성이 없음을 확인한 결과이다. Figure 9B is a result confirming that there is no cytotoxicity in the experimental conditions for confirming the antibacterial activity of methylene blue (MB)-containing micelle complex (MBSD) in a fungal infection model.

메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)와 Free MB를 농도별로 세포에 처리하여 1시간동안 함께 배양한 다음 PBS로 세척하였다. 이후 광조사를 하지 않거나 1, 5 10J/cm2으로 각각 광조사를 시행한 뒤, CCK-8 시약을 사용하여 세포 생존율을 측정하였고, 균감염 실험 조건인 1시간동안 Free MB 기준 1uM 물질 처리 후 1J/cm2의 광조사 조건에서 세포 독성이 없는 것을 확인하였다. Cells were treated with methylene blue (MB)-containing micelle complex (MBSD) and Free MB at different concentrations, incubated together for 1 hour, and then washed with PBS. Thereafter, light irradiation was not performed or light irradiation was performed at 1, 5 and 10J/cm 2 respectively, and cell viability was measured using CCK-8 reagent. It was confirmed that there was no cytotoxicity under the light irradiation condition of 1J/cm 2 .

따라서 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)와 633nm 광조사에 의해서 인간코점막상피세포에 독성이 없으면서 호흡기 감염균을 효과적으로 사멸시키는 것을 확인하였다. Therefore, it was confirmed that the methylene blue (MB)-containing micelle complex (MBSD) prepared according to the present invention and 633 nm light irradiation effectively kill respiratory tract infections without toxicity to human nasal mucosal epithelial cells.

5-2. Methylene blue 나노입자의 광반응성 항바이러스 효과 5-2. Photoreactive antiviral effect of Methylene blue nanoparticles

5-2-1. 인간코점막상피세포, 인간폐암세포주, 사람유래 점막상피세포에서의 확인5-2-1. Identification in human nasal mucosal epithelial cells, human lung cancer cell lines, and human-derived mucosal epithelial cells

인간코점막상피세포 (Normal human nasal epithelial cells, NHNE)에 Influenza A 바이러스를 감염시킨 뒤, 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 농도별로 처리하여 광조사 유무에 따른 항바이러스 효과를 유전자 증폭 기술을 사용하여 바이러스 유전자인 PA 유전자의 감소 정도로 확인하였다.(도 10의 A) After infecting normal human nasal epithelial cells (NHNE) with Influenza A virus, the methylene blue (MB)-containing micelle complex (MBSD) prepared according to the present invention is treated by concentration, The antiviral effect was confirmed by the degree of reduction of the PA gene, which is a viral gene, using gene amplification technology (FIG. 10A).

인간폐암세포주 (A549)에 Influenza A 바이러스를 감염시킨 뒤, 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 농도별로 처리하여 광조사 유무에 따른 항바이러스 효과를 유전자 증폭 기술을 사용하여 바이러스 유전자인 M2 유전자의 감소 정도로 확인하였다. (도 10의 B)After infecting human lung cancer cell line (A549) with Influenza A virus, the methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) prepared according to the present invention is treated by concentration to obtain antiviral effects depending on the presence or absence of light irradiation using gene amplification technology was used to confirm the degree of reduction of the M2 gene, a viral gene. (B in Fig. 10)

사람유래 점막상피세포 apical의 배양 희석액을 MDCK 세포에 처리하여 intact 세포에 crystal violet을 염색하였으며, influenza A virus에 감염되어 주변으로 확산되고, 주변 세포가 죽어 plaque를 형성하는 것을 확인하였다 (도 10의 C).MDCK cells were treated with a culture dilution of human-derived mucosal epithelial cell apical, and intact cells were stained with crystal violet. C).

도 10은 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)의 광역동치료 시행에 의한 항바이러스 효과를 influenza A 바이러스에 대하여 다양한 세포주에서 유전자증폭기술과 plaque assay를 통해 확인한 결과이다. 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)의 광역동치료에 의하여 효과적으로 influenza A 바이러스를 억제하는 것을 확인하였다. 10 is a result of confirming the antiviral effect of the photodynamic therapy of the methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) prepared according to the present invention through gene amplification technology and plaque assay in various cell lines against influenza A virus. . It was confirmed that influenza A virus was effectively inhibited by photodynamic therapy with methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD).

5-2-2. in vivo 감염모델에서 항바이러스 효과 확인5-2-2. Confirmation of antiviral effect in in vivo infection model

in vivo 감염모델에서 항바이러스 효과 확인을 위하여 influenza A 바이러스를 비강으로 감염시킨 생쥐 모델에 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 비강으로 점적 투여한 뒤 1회 광역동치료를 실시하고 일주일 뒤 폐 조직을 적출하여 H&E 염색을 시행하였다. 광역동치료 실시를 하지 않고 바이러스만 감염된 생쥐의 폐의 면역세포 침윤에 의한 빨간색 염색정도와 비교하여 광역동치료를 실시한 생쥐의 폐는 무처리군과 유사한 수준의 염색정도를 보였고, 바이러스 감염에 의해 발생되는 기관 주변의 면역세포 침윤에 의한 빨간색 염색증가나 기관 주변의 부종에 의한 하얗게 나타나는 병변이 거의 없고 대조군과 유사한 수준으로 평가되었다. In order to confirm the antiviral effect in an in vivo infection model, intranasal drip administration of methylene blue (MB)-containing micelle complex (MBSD) prepared according to the present invention to a mouse model infected with influenza A virus intranasally, followed by a single wide-dynamic One week after the treatment, lung tissues were removed and H&E staining was performed. Compared to the degree of red staining caused by immune cell infiltration in the lungs of mice infected with only virus without photodynamic therapy, the lungs of mice treated with photodynamic therapy showed a similar level of staining to that of the untreated group. There were almost no lesions that appeared white due to increased red staining due to immune cell infiltration around the trachea or edema around the trachea, and were evaluated at a level similar to that of the control group.

도 11은 Influenza A 바이러스를 생쥐에 감염시킨 in vivo 감염 모델에서 감염 1일차에 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 비강으로 1회 점적 투여 후 광역동치료를 실시하였을 때 바이러스 감염에 의한 폐 염증 및 부종을 억제한 것을 확인할 수 있다.FIG. 11 is an in vivo infection model in which mice were infected with Influenza A virus. On the first day of infection, when a single instillation of methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) was administered intranasally and photodynamic therapy was performed, the result of viral infection It can be confirmed that lung inflammation and edema were suppressed.

5-2-3. 지카바이러스, 천연두바이러스 (VACV), AaPV 감염모델에서 항바이러스 효과 확인5-2-3. Confirmation of antiviral effect in Zika virus, smallpox virus (VACV), and AaPV infection models

원숭이 섬유세포주 (Vero e6)를 사용하여 지카바이러스, 천연두바이러스 (VACV), AaPV를 각각 감염시킨 모델을 만들어, 다양한 바이러스 감염 모델에서 항바이러스 효과를 확인하였다. 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 각 바이러스 감염 세포에 농도별로 처리하여 광역동치료 실시에 따른 항바이러스 효과를 유전자 증폭 기술을 사용하여 바이러스 유전자의 감소 정도로 확인하였다. ZIKA 바이러스는 NS1유전자의 감소정도를 확인하였고 (도 12의 A), VACV 바이러스는 E9L 유전자의 감소정도를 확인 (도 12의 B), AaPV 바이러스는 L 유전자의 감소정도를 확인하였다 (도 12의 C). Zika virus, smallpox virus (VACV), and AaPV infection models were created using a monkey fibroblast cell line (Vero e6), respectively, and antiviral effects were confirmed in various viral infection models. Each virus-infected cell was treated with the methylene blue (MB)-containing micelle complex (MBSD) prepared according to the present invention at each concentration, and the antiviral effect of photodynamic therapy was confirmed by the degree of reduction of viral genes using gene amplification technology. . The ZIKA virus confirmed the reduction of the NS1 gene (FIG. 12A), the VACV virus confirmed the reduction of the E9L gene (FIG. 12B), and the AaPV virus confirmed the reduction of the L gene (FIG. 12 C).

도 12에서는 원숭이 섬유세포주인 Vero e6를 이용하여 ZIKA, VACV, AaPV를 감염시킨 후 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 처리하고 광역동치료를 실시한 후 유전자증폭 기술을 이용하여 각 바이러스의 지표 유전자의 감소 정도를 확인하였다. 도 12를 참조하면 바이러스마다 최적의 작용 농도는 상이하나 종에 관계없이 실험을 수행한 모든 바이러스종에서 메틸렌블루 (MB) 함유 나노입자의 광역동치료에 의해 항바이러스 효과가 있는 것을 확인할 수 있다.In FIG. 12, after infecting ZIKA, VACV, and AaPV using monkey fibroblast cell line Vero e6, treating methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) prepared according to the present invention, performing photodynamic therapy, and then gene amplification technology The degree of reduction of the indicator gene of each virus was confirmed using . Referring to FIG. 12, although the optimal working concentration is different for each virus, it can be confirmed that the photodynamic therapy of methylene blue (MB)-containing nanoparticles has an antiviral effect in all virus species tested regardless of the species.

5-2-4. SARS-CoV-2 감염모델에서 항바이러스 효과 확인5-2-4. Confirmation of antiviral effect in SARS-CoV-2 infection model

원숭이 섬유세포주 (Vero e6)를 이용하여 코로나19 감염증 유발 바이러스인 SARS-CoV-2를 감염시킨 모델을 만들어 항바이러스 효과를 확인하였다. 변이주에 대한 효과를 확인하기 위하여 후안 바이러스주 (도 13의 A)와 델타 바이러스주 (도 13의 B)를 각각 사용하였다. 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 각 바이러스 감염 세포에 농도별로 처리하여 광조사 유무에 따른 항바이러스 효과를 유전자 증폭 기술을 사용하여 바이러스 유전자의 감소 정도로 확인하였고, western blot 실험을 수행하여 바이러스 단백질의 감소 정도를 확인하였다. An antiviral effect was confirmed by making a model infected with SARS-CoV-2, a virus that causes COVID-19 infection, using a monkey fibroblast cell line (Vero e6). In order to confirm the effect on the mutant strain, the Juan virus strain (FIG. 13A) and the delta virus strain (FIG. 13B) were used, respectively. Each virus-infected cell was treated with the methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) prepared according to the present invention at each concentration, and the antiviral effect according to the presence or absence of light irradiation was confirmed by the degree of reduction of viral genes using gene amplification technology, A western blot experiment was performed to confirm the degree of reduction of viral proteins.

인간폐암세포주 (Calu-3)를 이용하여 코로나19감염증 유발 바이러스인 SARS-CoV-2를 감염시킨 모델을 만들어 항 바이러스 효과를 확인하였다. Using a human lung cancer cell line (Calu-3), a model infected with SARS-CoV-2, a virus that causes COVID-19 infection, was created and the antiviral effect was confirmed.

도 13은 원숭이 섬유세포주인 Vero e6를 이용하여 SARS-CoV-2 (후안/델타 변이주)를 감염시킨 후 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 처리하고 광역동치료 실시 후 유전자증폭기술로 바이러스 유전자의 감소를 확인하였고, western blot 실험을 통하여 바이러스 단백질 또한 감소하는 것을 확인한 결과이다. 즉, 도 11, 12 결과와 함께 도 13 결과는 본 발명 물질의 광역동치료에 의해 바이러스 종과 변이주에 관계없이 universal anti infection 효과를 가지는 것을 보여준다. 13 is a monkey fiber cell line, Vero e6, infected with SARS-CoV-2 (Huan/Delta mutant), treated with methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) prepared according to the present invention, and photodynamic therapy After implementation, the reduction of viral genes was confirmed by gene amplification technology, and it was confirmed that viral proteins were also reduced through western blot experiments. That is, the results of FIG. 13 together with the results of FIGS. 11 and 12 show that the photodynamic therapy of the substance of the present invention has a universal anti-infection effect regardless of the virus species and mutant strains.

도 14는 인간폐암세포주인 Calu-3를 이용하여 SARS-CoV-2 (후안 바이러스주)를 감염시킨 후 본 발명에 의해 제조된 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)을 처리하고 광역동치료를 실시한 후 유전자증폭 기술로 바이러스 유전자의 감소를 확인한 결과이다. 따라서 인간세포에서 코로나-19감염증의 예방/치료효과를 확인할 수 있다. 14 is a human lung cancer cell line, Calu-3, infected with SARS-CoV-2 (Huan virus strain), treated with methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) prepared by the present invention, and photodynamic therapy This is the result of confirming the reduction of the virus gene by gene amplification technology after conducting. Therefore, it is possible to confirm the preventive/therapeutic effect of COVID-19 infection in human cells.

[실시예 6][Example 6]

Methylene blue 마이셀 복합체의 생체적합성 확인Confirmation of biocompatibility of Methylene blue micelle complex

6-1. 생체적합성 확인 16-1. Confirmation of biocompatibility 1

생체적합성 시험을 위해 생리식염수에 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 포함한 시험물을 사용하여 마우스 섬유아세포 (L-929)를 이용한 세포독성시험 (한천확산법)을 수행하였다. 해당 결과는 하기 표 1 및 표 2와 같으며, 시험물과 반응한 세포의 반응도가 없음 (None)으로 확인하였다. (시험번호: GM21-00768)For the biocompatibility test, a cytotoxicity test (agar diffusion method) was performed using mouse fibroblasts (L-929) using a test material containing methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) in physiological saline. The results are shown in Tables 1 and 2 below, and it was confirmed that there was no reactivity of the cells reacted with the test material (None). (Test number: GM21-00768)

시험군
Plate notest group
plate no 반응등급 (Grade)Reaction Grade (Grade) 시험물질test substance 양성대조물질positive control substance 음성대조물질negative control substance 1One 00 33 00 00 22 00 33 00 00

등급Rating 반응도reactivity 반응 부위(zone)에 대한 설명Description of the reaction zone 00 없음 (none)none 검체의 밑 부분이나 주변에 세포의 이상 및 탈색이 발견되는 부위(zone)가 없음There is no zone where cell abnormalities and discoloration are found at the bottom or around the sample 1One 아주미약 (Slight)Slight 검체 밑에 약간의 변형되거나 퇴화한 세포가 있음Some deformed or degenerated cells under the specimen 22 미약 (Mild)Mild 세포의 이상 및 탈색 부위가 검체의 바로 밑에 한함Abnormal cells and areas of discoloration are limited to the lower part of the specimen 33 중증도 (Moderate)Moderate 세포의 이상 및 탈색 부위가 검체의 주변 1.0cm까지 확장Abnormal and depigmented areas of cells extend up to 1.0 cm around the sample 44 심함 (Severe)Severe 세포의 이상 및 탈색 부위가 검체 검체의 주변 1.0츠 이상까지 확장Cell abnormalities and depigmentation areas extend to more than 1.0 cm around the sample

6-2. 생체적합성 확인 26-2. Confirmation of biocompatibility 2

생체적합성 시험을 위해 생리식염수에 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 포함한 시험물을 사용하여 New Zealand White 토끼를 이용한 피내반응시험을 수행하였다. 수컷 New Zealand White 토끼 3 마리의 피내에 멸균생리식염수와 면실유를 이용하여 용출한 시험액 및 대조액을 각각의 부위별로 5 개소에 0.2 ㎖ 씩을 투여 하였다. 이 후 일반증상, 사망률, 체중변화 및 피내반응을 평가하였다. 시험결과, 시험액 및 대조액 투여와 관련된 일반증상, 사망동물 및 체중변화는 관찰되지 않았다. 멸균생리식염수 시험액 및 대조액 투여 후 24 ± 2, 48 ± 2 및 72 ± 2 시간의 피내 반응의 평균 점수의 차이가 “0.5”, 면실유 시험액 및 대조액 투여 후 24 ± 2, 48± 2 및 72 ± 2 시간의 피내반응의 평균 점수의 차이가 “0.1”로 산출되었다. For the biocompatibility test, an intradermal reaction test using New Zealand White rabbits was performed using a test product containing methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) in physiological saline. 0.2 ml each of the test solution and control solution eluted using sterile physiological saline and cottonseed oil was administered intradermally to 3 male New Zealand White rabbits at 5 locations for each site. Then, general symptoms, mortality, weight change, and intradermal reaction were evaluated. As a result of the test, general symptoms related to the administration of the test solution and control solution, no dead animals and weight changes were observed. After administration of sterile physiological saline test solution and control solution, the difference in average score of intradermal response at 24 ± 2, 48 ± 2, and 72 ± 2 hours was “0.5”, and after administration of cottonseed oil test solution and control solution, 24 ± 2, 48 ± 2, and 72 ± 2 The difference in the average score of the intradermal response over time was calculated as “0.1”.

위와 같이 New Zealand White 토끼를 이용한 피내반응시험 결과, 생리식염수에 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 포함한 시험액은 피내반응이 없는 것으로 확인하였다. (시험번호: GM21-00375)As a result of the intradermal reaction test using New Zealand White rabbits as described above, it was confirmed that the test solution containing micelle complex (MBSD) containing methylene blue (MB) in physiological saline did not have an intradermal reaction. (Test number: GM21-00375)

6-2. 생체적합성 확인 36-2. Confirmation of biocompatibility 3

생체적합성 시험을 위해 생리식염수에 메틸렌블루 (MB) 함유 마이셀 복합체(MBSD)를 포함한 시험물을 사용하여 Hartley계 기니픽을 이용하여 피부감작성시험을 수행하였다. 본 시험에서 시험 물질은 용출조건에 따라 용출한 용출액으로 투여하였으며, 극성용매는 멸균생리식염수, 비극성용매는 면실유를 각각사용하였다. 피내유도단계, 국소유도단계 및 유발단계를 순차적으로 실시한 후 용출액 투여에 따른 피부감작성 반응을 평가하였다. 시험결과, 실험기간 중 시험물질 투여에 따른 일반증상 및 사망동물이 관찰되지 않았고 체중변화의 이상이 관찰되지 않았다. 시험군 (극성/비극성 용매)의 경우, 첩포 제거 후 24 ± 2, 48 ± 2 시간째 투여부위를 관찰한 결과 모든 동물에서 Magnusson and Kligman 0 등급을 나타내었다. 따라서 시험액은 최종 감작률 0%인 감작성 비유발 물질로 평가되었다. (시험번호: GM21-00376)For the biocompatibility test, a skin sensitization test was performed using Hartley-based guinea pigs using a test product containing methylene blue (MB)-containing micellar complex (MBSD) in physiological saline. In this test, the test substance was administered as an eluent eluted according to the elution conditions, and sterile physiological saline was used as the polar solvent and cottonseed oil was used as the non-polar solvent, respectively. After the intradermal induction step, the local induction step, and the induction step were sequentially performed, the skin sensitization response according to the administration of the eluate was evaluated. As a result of the test, during the test period, general symptoms and dead animals were not observed due to the administration of the test substance, and no abnormalities in body weight change were observed. In the case of the test group (polar/non-polar solvent), the administration site was observed at 24 ± 2 and 48 ± 2 hours after removing the patch, and all animals showed Magnusson and Kligman 0 grades. Therefore, the test solution was evaluated as a non-sensitizing substance with a final sensitization rate of 0%. (Test number: GM21-00376)

이상 본 발명의 실시예들을 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다.Although the embodiments of the present invention have been described above, those skilled in the art to which the present invention belongs will understand that the present invention can be implemented in other specific forms without changing the technical spirit or essential features. Therefore, the embodiments described above should be understood as illustrative in all respects and not limiting.

Claims (18)

(i) 메틸렌 블루 및 상기 메틸렌 블루에 이온 결합한 유기산을 포함하는 코어; 및
(ii) 지방산으로 이루어진 마이셀 형태로 상기 코어를 감싸는 쉘;을 포함하는 코어-쉘 구조의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 광반응성 마이셀 복합체.(i) a core comprising methylene blue and an organic acid ionically bonded to the methylene blue; and
(ii) a shell surrounding the core in the form of micelles made of fatty acids; a core-shell structure comprising a photoreactive micelle complex for preventing or treating inflammatory diseases or infectious diseases. 제1 항에 있어서,
상기 염증성 질환은 부비동염 또는 비염인, 광반응성 마이셀 복합체.According to claim 1,
The inflammatory disease is sinusitis or rhinitis, a photoreactive micelle complex. 제1 항에 있어서,
상기 감염성 질환은 인플루엔자 감염증 또는 급성호흡기감염증인, 광반응성 마이셀 복합체.According to claim 1,
The infectious disease is an influenza infection or an acute respiratory infection, a photoreactive micelle complex. 제1 항에 있어서,
상기 복합체는 비강 투여되는 것인, 광반응성 마이셀 복합체.According to claim 1,
Wherein the complex is nasally administered, the photoreactive micelle complex. 제1 항에 있어서,
상기 유기산은 탄소수가 10 내지 20인 카복실산, 탄소수가 10 내지 20인 방향족 카복실산 및 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 어느 하나의 산인, 광반응성 마이셀 복합체.According to claim 1,
The organic acid is at least one acid selected from the group consisting of carboxylic acids having 10 to 20 carbon atoms, aromatic carboxylic acids having 10 to 20 carbon atoms, and salts thereof, the photoreactive micelle complex. 제1 항에 있어서,
상기 지방산은 탄소수가 10 내지 20인, 광반응성 마이셀 복합체.According to claim 1,
The fatty acid is a carbon number of 10 to 20, photoreactive micelle complex. 제1 항에 있어서,
상기 지방산은 올레산(Oleic acid), 팔미트산(Palmitic acid), 팔미톨레산(Palmitoleic acid), 스테아르산(Stearic acid), 엘라이드산(Elaidic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 바크센산(Vaccenic acid), α-엘레오스테아린산(α-Eleostearic acid), 푸닉산(Punicic acid) 자카릭산(Jacaric acid), 아라키돈산 (Arachidonic acid), 파울린산(Paullinic acid), 곤돌산(Gondoic acid) 및 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 어느 하나의 산인, 광반응성 마이셀 복합체.According to claim 1,
The fatty acids include oleic acid, palmitic acid, palmitoleic acid, stearic acid, elaidic acid, linoleic acid, and vaccenic acid. acid), α-Eleostearic acid, Punicic acid, Jacaric acid, Arachidonic acid, Paulinic acid, Gondolic acid and At least one acid selected from the group consisting of salts thereof, the photoreactive micelle complex. 제1 항에 있어서,
상기 유기산은 메틸렌 블루와 1 ~ 10 : 1의 몰비로 결합하여 코어를 형성하는,광반응성 마이셀 복합체.According to claim 1,
The organic acid is methylene blue and 1 to 10: to form a core by combining at a molar ratio of 1, Photoreactive micelle complex. 제1 항에 있어서,
500nm 내지 700nm 파장의 광 조사 시 항균 또는 항바이러스 효과가 상승하는, 광반응성 마이셀 복합체.According to claim 1,
When irradiated with light of 500 nm to 700 nm wavelength, the antibacterial or antiviral effect is increased, the photoreactive micelle complex. 제1 항에 있어서,
상기 마이셀 복합체는 50 내지 500 nm의 크기인, 광반응성 마이셀 복합체. According to claim 1,
The micelle complex has a size of 50 to 500 nm, a photoreactive micelle complex. 제1 항의 광반응성 마이셀 복합체를 포함하는, 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases or infectious diseases, comprising the photoreactive micelle complex of claim 1. 제11 항에 있어서,
상기 약학 조성물은 비강 투여되는 것인, 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.According to claim 11,
The pharmaceutical composition is a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases or infectious diseases that are administered intranasally. 제11 항에 있어서,
상기 염증성 질환은 부비동염 또는 비염인, 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.According to claim 11,
The inflammatory disease is a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of sinusitis or rhinitis, inflammatory disease or infectious disease. 제11 항에 있어서,
상기 감염성 질환은 인플루엔자 또는 급성호흡기감염증인, 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.According to claim 11,
The infectious disease is a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of influenza or acute respiratory infections, inflammatory diseases or infectious diseases. 제11항의 약학 조성물;
상기 조성물의 분사장치; 및
500 내지 700 nm 파장의 광을 발하는 발광 장치;를 포함하는 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용 키트.The pharmaceutical composition of claim 11;
an injector for the composition; and
A light emitting device emitting light of 500 to 700 nm wavelength; Inflammatory disease or infectious disease prevention or treatment kit comprising a. (i) 메틸렌 블루 및 상기 메틸렌 블루에 이온 결합한 유기산을 포함하는 코어; 및
(ii) 지방산으로 이루어진 마이셀 형태로 상기 코어를 감싸는 쉘;을 포함하는 코어-쉘 구조 광반응성 마이셀 복합체의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용도.(i) a core comprising methylene blue and an organic acid ionically bonded to the methylene blue; and
(ii) a shell surrounding the core in the form of micelles made of fatty acids; core-shell structure comprising a photoreactive micelle complex for prevention or treatment of inflammatory diseases or infectious diseases. 제16 항에 있어서,
상기 염증성 질환은 부비동염 또는 비염인, 광반응성 마이셀 복합체의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용도.According to claim 16,
The inflammatory disease is sinusitis or rhinitis, for preventing or treating inflammatory diseases or infectious diseases of the photoreactive micelle complex. 제16 항에 있어서,
상기 감염성 질환은 인플루엔자 또는 급성호흡기감염증인, 광반응성 마이셀 복합체의 염증성 질환 또는 감염성 질환의 예방 또는 치료용도.According to claim 16,
The infectious disease is influenza or acute respiratory infections, inflammatory diseases or infectious diseases of the photoreactive micelle complex for prevention or treatment.
KR1020220056682A 2021-05-17 2022-05-09 Photoreactive micelle complex for prevention or treatment of inflammatory or infectious diseases KR20220156444A (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20210063574 2021-05-17
KR1020210063574 2021-05-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220156444A true KR20220156444A (en) 2022-11-25

Family

ID=84141708

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020220056682A KR20220156444A (en) 2021-05-17 2022-05-09 Photoreactive micelle complex for prevention or treatment of inflammatory or infectious diseases

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR20220156444A (en)
WO (1) WO2022245032A1 (en)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070123520A1 (en) * 2005-11-16 2007-05-31 Bioenvision, Inc. Methylene blue therapy of avian influenza
KR101673260B1 (en) * 2016-05-19 2016-11-07 한국과학기술연구원 Methylene Blue Nanoparticle for Bioimaging and Photodynamic Therapy and Use Thereof
KR101988240B1 (en) * 2017-02-27 2019-06-12 주식회사 디알나노 Methylene blue complex for treating skin disease and its use thereof
US10987329B1 (en) * 2020-04-22 2021-04-27 Nadimpally Satyavarahala Raju Combination therapy for coronavirus infections including the novel corona virus (COVID-19)

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022245032A1 (en) 2022-11-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Xu et al. Ferroptosis/pyroptosis dual-inductive combinational anti-cancer therapy achieved by transferrin decorated nanoMOF
Zhou et al. Targeting ferroptosis synergistically sensitizes apoptotic sonodynamic anti-tumor nanotherapy
Barreto et al. Local administration of gold nanoparticles prevents pivotal pathological changes in murine models of atopic asthma
Du et al. Development of nose-to-brain delivery of ketoconazole by nanostructured lipid carriers against cryptococcal meningoencephalitis in mice
Pourhajibagher et al. Photoexcitation triggering via semiconductor Graphene Quantum Dots by photochemical doping with Curcumin versus perio-pathogens mixed biofilms
JP2001513760A (en) Mitochondrial protection method and composition therefor
EP3366294B1 (en) Methylene blue complex for treating skin disease and its use thereof
US20180042971A1 (en) Topical halobacteria extract composition for treating radiation skin tissue damage
US9572777B2 (en) Topical pharmaceutical composition comprising nanonized silver sulfadiazine
Manconi et al. Eco-scalable baicalin loaded vesicles developed by combining phospholipid with ethanol, glycerol, and propylene glycol to enhance skin permeation and protection
Khan et al. Potential cytotoxicity of silver nanoparticles: Stimulation of autophagy and mitochondrial dysfunction in cardiac cells
Yan et al. Effects of hydroxyl radicals produced by a zinc phthalocyanine photosensitizer on tumor DNA
Du et al. Oxygen-deficient titanium dioxide-loaded black phosphorus nanosheets for synergistic photothermal and sonodynamic cancer therapy
Gao et al. Hyaluronic acid/serotonin-decorated cerium dioxide nanomedicine for targeted treatment of ulcerative colitis
EP3746057B1 (en) Dapansutrile for preventing or treating alzheimer's disease
Xu et al. A biomimetic nanodrug self-assembled from small molecules for enhanced ferroptosis therapy
KR20220156444A (en) Photoreactive micelle complex for prevention or treatment of inflammatory or infectious diseases
EP3860620B1 (en) Formulation comprising ozonised oil in the treatment of a tumour
CN112516294A (en) Application of cerium oxide nano stabilizer in preparation of medicine for preventing allergic diseases and medicine composition for preventing allergic diseases
Ghaemi et al. Photodynamic therapy-mediated extirpation of cutaneous-resistant dermatophytosis with Ag@ ZnO nanoparticles: an efficient therapeutic approach for onychomycosis
Liu et al. In Situ Nitric Oxide Gas Nanogenerator Reprograms Glioma Immunosuppressive Microenvironment
CN109731105B (en) Nasal cavity nano autophagy inducer for preventing and treating early neurodegenerative diseases and preparation method thereof
EP2072584B1 (en) Phthalocyanine dyes, their preparation and use
JPWO2005084665A1 (en) Metalloporphyrin complex-embedded niosomes, method for producing the same, and pharmaceuticals using the same
Li et al. Ultrasmall Cortex Moutan Nanoclusters for the Therapy of Pneumonia and Colitis