KR20220145861A - 암 및 종양을 치료하기 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

암 및 종양을 치료하기 위한 조성물 및 방법 Download PDF

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김경순
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오블라토 인코포레이티드
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Abstract

조성물을 이용하여 암 또는 종양을 개체에서 치료하는 방법을 제공한다. 조성물은 2,4-다이설포닐 α-페닐 tert-부틸 니트론 (2,4-ds-PBN) 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 포함하며, 치료학적 유효량은 암 또는 종양의 증식을 감소시킨다

Description

암 및 종양을 치료하기 위한 조성물 및 방법
관련 출원에 대한 교차-참조
본 출원은 2020년 2월 24일자 미국 가출원 번호 62/980,645에 대해 우선권을 주장하며, 그 전체 내용이 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
발명의 기술
본 발명의 개시 내용은 암 및 종양의 발생을 저해하기 위한 기술에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명의 개시 내용은 암 및 종양의 발생을 저해하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.
암은 개체의 기타 부위/조직에 침범하여 심각한 기능장애를 유발할 가능성이 있을 수 있는 비정상적인 세포 증식을 수반하는 일군의 질병이다. 예를 들어, 폐암은 폐에서의 비정상적인 세포 증식으로 기원하는 유형의 암이다. 폐암에는 차별적으로 치료할 수 있는 2가지 주요 유형이 존재한다. 첫번째 유형은 비-소 세포성 폐암 (NSCLC)이다. NSCLC는 진행될 때까지 느리게 증식해 비교적 적은 수의 증상을 유발한다. NSCLC의 서브타입은 선암종, 편평 세포암, 선편평세포 암종, 육종양 암종 및 거대 세포 암종을 포함할 수 있다. 2번째 유형은 소 세포성 폐암 (SCLC)이다. SCLC는 NSCLC 보다 더 빠르게 증식하여 다른 조직으로 퍼질 수 있다. 이러한 빠른 증식 속도로 인해, SCLS를 치료하기 위해 화학요법 및 방사선을 적용할 수 있다. NSCLC는 공격성이 약할 수 있지만, NSCLC가 진행될 때까지 증상이 거의 없어 후기 단계에서야 진단되어, 예후가 치명적일 수 있다.
암 세포는 통제 불가하게 증식해 종양으로 지칭되는 덩어리를 형성할 수 있다. 암은 사망의 주요 요인 중 하나로, 전세계적으로 사망자 6명 중 약 1명의 원인이다. 암 및/또는 종양 형성은 개체의 유전자 인자와 외부 인자 (예를 들어, 물리적 발암원, 화학적 발암원 및 생물학적 발암원) 간의 상호작용의 결과일 수 있다. 암의 분자 기전에 대한 이해의 진전으로, 현재 이용가능한 항암 및/또는 항종양 요법들에는 일부 부작용이 존재한다. 2,4-다이설포닐 α-페닐 tert-부틸 니트론 (2,4-ds-PBN)은 설치류 신경교종 모델에서 교모세포종 (GBM) 종양 증식을 억제하고, GBM 치료용 다른 항암제의 민감성을 높일 수 있지만, 다른 종양 및/또는 암의 치료에 대해서는 치료학적 효과가 확인된 바 없다.
이에, 2,4-ds-PBN을 이용해 암 또는 종양 (예를 들어, NSCLC)을 치료하기 위한 개선된 기술이 요구되고 있다.
Guanjai Dai et al., Myricanol Induces Apoptotic Cell Death and Anti-Tumor Activity in Non-Small Cell Lung Carcinoma in Vivo, International Journal of Molecular Sciences. 2015 Jan.; 16(2): 2717-2731. Rhyu JJ et al., Dual effects of human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells in human lung adenocarcinoma A549 xenografts and colorectal adenocarcinoma HT-29 xenografts in mice, Oncology Reports. 2015 Oct.; 34(4): 1733-1744. Towner, et al., OKN-007 Increases temozolomide (TMZ) Sensitivity and Suppresses TMZ-Resistant Glioblastoma (GBM) Tumor Growth, Translational Oncology, 2019 Feb.; 12(2): 320-335. Towner, et al., Regression of glioma tumor growth in F98 and U87 rat glioma models by the Nitrone OKN-007, Neuro Oncology 2013 Jan.; 15(3): 330-340.
본 발명은 암 또는 종양을 치료하기 위한 약학적 조성물 및 방법을 제공한다. 개체에서 암 또는 종양의 치료 방법은 2,4-다이설포닐 α-페닐 tert-부틸 니트론 (2,4-ds-PBN) 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 치료학적 유효량은 암 또는 종양의 증식을 낮출 수 있다.
특정 구현예에서, 암은 비-소 세포성 폐 암종일 수 있다.
특정 구현예에서, 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 약 5 mg/체중 kg/일 (day) 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일일 수 있다
특정 구현예에서, 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 개체에 정맥내 주사 또는 동맥내 주사를 통해 전달할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 장내 투여 또는 경구 투여를 통해 개체에 투여할 수 있다.
특정 구현예에서, 방법은 암 또는 종양의 면적, 부피 또는 이들의 조합을 측정하는 것을 더 포함할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 암 부피 또는 종양 부피는 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여한 후 적어도 약 50% 감소한다. 비-제한적인 구현예들에서, 암 또는 종양의 증식은 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여한 후 적어도 약 40% 감소한다.
특정 구현예에서, 본 방법은 세포자살성 암 세포 또는 세포자살성 종양 세포의 수를 측정하는 것을 더 포함할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 세포자살성 암 세포 또는 세포자살성 종양 세포의 수는 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여한 후 적어도 약 15% 감소한다.
특정 구현예에서, 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 주당 적어도 1회로 개체에 투여할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 방법은 항암제 또는 항종양제를 치료학적 유효량으로 개체에 투여하는 것을 더 포함할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 항암제/항종양제는 화학치료제, 방사선 치료제, 사이토카인, 항-혈관신생제, 티로신 키나제 저해제 (TKI), 세포자살-유도제, 항암 항체, 면역치료제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 방법은 추가 요법의 투여를 더 포함할 수 있다. 추가 요법은 항종양 요법, 항암 요법, 화학요법, 표적 요법, 면역요법, 방사선 요법, 고주파 절제 요법, 수술, 종양 치료 분야 (TTFields) 기구를 이용한 요법 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명은 2,4-다이설포닐 α-페닐 tert-부틸 니트론 (2,4-ds-PBN) 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 포함하는 개체에서 암 또는 종양을 치료하기 위한 약학적 조성물을 제공하며, 치료학적 유효량은 암 또는 종양의 증식을 감소시키는 양으로 존재할 수 있다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물은 경구 투여 또는 장내 투여를 위한 정제, 환제, 캡슐제, 겔, 액체, 시럽, 슬러리 또는 현탁제 형태일 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 경구 투여 또는 장내 투여를 위한 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일일 수 있다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물은 정맥내 주사 또는 동맥내 주사용 용액 또는 액체 형태일 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 정맥내 주사 또는 동맥내 주사를 위한 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일일 수 있다.
특정 구현예에서, 암은 비-소 세포성 폐 암종일 수 있다.
도 1은 음성 대조군, OKN-007 (150 mg/kg, 300 mg/kg 또는 600 mg/kg) 또는 시스플라틴 (2 mg/kg)의 투여 후 종양 부피를 나타낸 그래프를 도시한다. 각 포인트는 독립적인 실험 10종의 평균값 ± 표준편차 (S.D.)를 표시한다. ##는 스틸의 t-검정에 따른 음성 대조군 대비 p-값이 0.01 미만 (p<0.01)인 경우를 표시한다. **는 듀넷의 t-검정에 따른 음성 대조군 대비 p-값이 0.01 미만 (p<0.01)인 경우를 표시한다.
도 2는 음성 대조군, OKN-007 (150 mg/kg, 300 mg/kg 또는 600 mg/kg) 또는 시스플라틴 (2 mg/kg)의 투여 후 종양 무게를 나타낸 그래프를 도시한다. 각 포인트는 독립적인 실험 10종의 평균값 ± 표준편차 (S.D.)를 표시한다. **는 듀넷의 t-검정에 따른 음성 대조군 대비 p-값이 0.01 미만 (p<0.01)인 경우를 표시한다.
도 3은 음성 대조군, OKN-007 (150 mg/kg, 300 mg/kg 또는 600 mg/kg) 또는 시스플라틴 (2 mg/kg)의 투여 후 관찰 기간 종료 시점에 A549 종양-보유 누드 마우스의 사진을 도시한다.
도 4는 음성 대조군 또는 OKN-007 (150 mg/kg)의 투여 후 관찰 기간 종료 시점에 A549 종양-보유 누드 마우스에서 적출한 종양의 사진을 도시한다. 음성 대조군 (G1)에서 종양 크기 및 부피는 시간에 따라 증가한다. OKN-007 (150 mg/kg) 처리 군 (G2)에서는 음성 대조군 (G1)과 비교해 종양 부피 및 크기에 통계학적으로 유의한 감소가 확인된다.
도 5는 음성 OKN-007 (300 또는 600 mg/kg)의 투여 후 관찰 기간 종료 시점에 A549 종양-보유 누드 마우스에서 적출한 종양의 사진을 도시한다. OKN-007 (300 mg/kg) 처리 군 (G3) 및 OKN-007 (600 mg/kg) 처리 군 (G4)에서는 음성 대조군 (G1)과 비교해 종양 부피 및 크기에 통계학적으로 유의한 감소가 확인된다.
도 6은 시스플라틴 (2 mg/kg)의 투여 후 관찰 기간 종료 시점에 A549 종양-보유 누드 마우스에서 적출한 종양의 사진을 도시한다. 양성 대조군으로서, 시스플라틴 (2 mg/kg) 처리 군 (G5)에서는 음성 대조군과 비교해 종양 부피 및 크기에 통계학적으로 유의한 감소가 확인된다.
도 7은 음성 대조군-처리 군 (G1)으로부터 회수한 종양의 헤마톡실린 및 에오신 (H&E) 염색 및 말단 데옥시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제 dUTP 닉 엔드 라벨링 (TUNEL) 분석 사진을 도시한다. 종양의 괴사는 H&E 염색 이미지에 의해 평가하고, 종양 세포의 세포자살은 TUNEL 분석 이미지에 의해 평가한다.
도 8은 OKN-007 (150 mg/kg) 처리 군 (G2)에서 회수한 H&E 염색 및 TUNEL 분석 사진을 도시한다. OKN-007 (150 mg/kg) 처리 군 (G2)에서는 음성 대조군 (G1)과 비교해 종양에서 세포자살성 세포 (화살 표시)의 현저한 수적 증가가 확인된다.
도 9는 OKN-007 (300 mg/kg) 처리 군 (G3)으로부터 회수한 종양의 H&E 염색 및 TUNEL 분석 사진을 도시한다. OKN-007 (300 mg/kg) 처리 군 (G3)에서는 음성 대조군 (G1)과 비교해 종양에서 세포자살성 세포 (화살 표시)의 현저한 수적 증가가 확인된다.
도 10은 OKN-007 (600 mg/kg) 처리 군 (G4)으로부터 회수한 종양의 H&E 염색 및 TUNEL 분석 사진을 도시한다. OKN-007 (600 mg/kg) 처리 군 (G4)에서는 음성 대조군 (G1)과 비교해 종양에서 세포자살성 세포 (화살 표시)의 현저한 수적 증가가 확인된다.
도 11은 시스플라틴 (2 mg/kg) 처리 군 (G5)으로부터 회수한 종양의 H&E 염색 및 TUNEL 분석 사진을 도시한다. 양성 대조군으로서 시스플라틴 (2 mg/kg) 처리 군 (G5)에서는 음성 대조군 (G1)과 비교해 종양에서 세포자살성 세포 (화살 표시)의 현저한 수적 증가가 확인된다.
본원에 개시된 내용에 대한 상세 설명은 명확하게 하기 위해 아래 하위 섹션으로 나뉘지만, 이로 제한되는 것은 아니다:
I. 정의;
II. 약학적 조성물; 및
III. 이용 방법.
I. 정의
본 명세서에서 사용되는 용어들은 개시된 내용의 맥락 및 각 용어가 사용된 구체적인 맥락에서 일반적으로 당해 기술 분야에서의 통상적인 의미를 가진다. 일부 용어들은 개시된 내용의 조성물 및 방법의 기술에서 실무자에게 추가적인 지침을 제공하기 위해 아래에서 또는 본 명세서의 도처에서 논의된다.
본원에서, 청구항 및/또는 명세서에서 용어 "포함하는"과 함께 사용되는 경우에 용어 "a" 또는 "an"은 "하나"를 의미할 수 있지만, "하나 이상의", "적어도 하나" 및 "하나 또는 하나 보다 많은"의 의미로도 양립한다. 아울러, 용어 "가지는", "비롯하여", "함유하는" 및 "포함하는"은 상호 호환적이며, 당해 기술 분야의 당업자라면 이들 용어들을 개방적인 의미로 이해할 것이다.
용어 "약" 또는 "대략"은 당해 기술 분야의 당업자에 의해 결정되는 바와 같이 구체적인 수치에 대한 허용가능한 오차 범위 내인 것을 의미하며, 이는 수치가 측정 또는 결정되는 방식에 따라, 즉 측정 시스템의 한계에 따라 부분적으로 결정될 것이다. 예를 들어, "약"은 당업계에서 당업계의 관행에 따른 표준편차 3 이상을 의미할 수 있다. 대안적으로 "약"은 주어진 값에 대해 최대 20%, 바람직하게는 최대 10%, 더 바람직하게는 최대 5%, 보다 더 바람직하게는 최대 1%의 범위를 의미할 수 있다. 대안적으로, 특히 생물학적 시스템 또는 공정과 관련하여, 이 용어는 수치의 한자리수 이내, 바람직하게는 5배 이내, 더 바람직하게는 2배 이내를 의미할 수 있다.
본원에서, 용어 "투여하는"은 임의의 적절한 경로 (예를 들어, 전신 투여, 경구 투여 및 정맥내 투여)를 의미할 수 있다.
본원에서, 용어 "물질"은 효과를 발생시키거나 또는 발생시킬 수 있는 실체를 의미하며, 비-제한적으로, 화학제, 약제, 생물제제, 소형 유기 분자, 항체, 핵산, 펩타이드 및 단백질을 포괄할 것이다.
"항암 효과" 또는 "항종양 효과"는 응집된 암 세포 덩어리의 감소, 암 세포 증식 속도 감소, 암 진행 감소, 암 세포 증식 감소, 종양 덩어리 감소, 종양 부피 감소, 종양 세포 증식 감소, 종양 증식 속도 감소 및/또는 종양 전이 감소 중 하나 이상을 의미한다. 특정 구현예에서, 항암 효과는 암으로 진단된 환자에서 완전한 반응, 부분 반응, 안정한 질환 (진행 또는 재발되지 않음), 향후 재발 반응 또는 무진행성 생존을 지칭할 수 있다.
본원에서, "항암제" 또는 "항종양제"는 항암 효과를 가진 임의의 분자, 화합물, 화학제 또는 조성물일 수 있다. 항암제는 비-제한적으로 화학치료제, 방사선 치료제, 사이토카인, 항-혈관신생제, 티로신 키나제 저해제 (TKI), 세포자살-유도제, 항암 항체 및/또는 면역 시스템의 활성을 촉진하는 물질을 포함한다. 특정 구현예에서, 항암제는 방사선 치료제일 수 있다. 특정 구현예에서, 항암제는 면역치료제일 수 있다. 특정 구현예에서, 항암제는 화학치료제일 수 있다. 본 발명의 개시 내용에 따라 이용가능한 항암제에 대한 다른 비-제한적인 예로는 종양-항원 기반의 백신 및 키메라 항원 수용체 T 세포가 있다.
본원에서, 용어 "공동-투여한다"는 본원에 기술된 조성물이 부가적인 요법과 동시에, 부가적인 요법의 투여 직전 또는 투여 직후에 투여되는 것을 의미한다. 본 발명의 조성물은 단독으로 투여할 수 있거나, 또는 제2 조성물/치료학적 물질과 함께 개체에 공동-투여할 수 있다. 공동-투여는 조성물을 각각 분리하여 또는 제2 조성물/치료학적 물질과 조합하여 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 의미한다. 아울러, 제1 물질과 제2 물질은 하나 이상의 조성물로 분리하여 제형화하거나 또는 함께 제형화할 수 있다.
본원에서, "포함한다", "포함하는", "함유하는" 및 "가지는" 등은 미국 특허법에 따라 부여된 의미를 가질 수 있으며, "포괄한다", "비롯하여" 등을 의미할 수 있으며; "로 필수적으로 구성되는" 또는 "필수적으로 구성된다" 등은 미국 특허법에 따라 부여된 의미를 가지며, 용어는 개방형으로, 언급된 기본적인 또는 새로운 특징이 언급된 것 이상의 존재에 의해 변경되지 않은 한 언급된 것 이상의 존재를 허용하지만, 선행 기술의 구현예는 제외한다.
본원에서, "병행 투여 (concurrent administration)"는 적어도 부분적으로 투여 기간이 중복되는 것을 포함한다. 예를 들어, 2가지 물질 (예, 본원에 기술된 임의의 조성물들)이 병행하여 투여되는 경우, 이의 투여는 특정한 요망되는 시간 내에 이루어진다. 조성물들의 투여는 같은 날 시작하고 끝날 수 있다. 또한, 2가지 조성물이 같은 날 적어도 1회로 투여되는 한, 한 조성물의 투여가 제2 조성물의 투여보다 하루(수일) 앞설 수 있다. 마찬가지로, 2가지 조성물이 같은 날 적어도 1회로 투여되는 한, 한 조성물의 투여는 제2 조성물의 투여 이후로 연장될 수 있다. 조성물들은 병행 투여를 포함하기 위해 매일 같은 시간에 투여하여야 하는 것은 아니다.
본원에서, 용어 "질환"은 세포, 조직 또는 장기의 정상적인 기능을 손상시키거나 또는 방해하는 임의의 병태 또는 장애를 지칭한다.
용어 "검출" 또는 "검출하는"은 직접 검출 및 간접 검출을 비롯한 임의의 검출 수단을 포함한다.
용어 "투여량"은 주어진 기간 동안 총량으로, 예를 들어 ㎍/kg/hr, ㎍/kg/일, mg/kg/일 또는 mg/kg/hr과 같이 표시된 제형을 망라하는 것으로 의도된다. 투여량은 구체적인 투여량 용법에 따라 투여되는 성분의 양이다. "용량"은 단위 부피 또는 중량으로 포유류에 투여되는 물질의 양, 예를 들어 물질의 mg으로 표시되는 절대 단위 용량이다. 용량은 제형 내 물질의 농도, 예를 들어, 몰/리터 (M), 중량/부피 (m/v) 또는 중량/중량 (m/m)에 따라 정해진다. 구체적인 투여량은 제형의 용량 또는 용량들의 투여 용법으로부터 비롯되므로, 이 2가지 용어는 서로 밀접하게 연관되어 있다. 구체적인 의미는 어떤 경우든 문맥으로부터 자명해질 것이다.
물질의 "유효량" 또는 "치료학적 유효량"은 원하는 치료학적 또는 예방학적 결과, 예를 들어 개체에서 암 치료를 달성하는데 필요한 기간 동안 및 투여량에서 효과적인 양을 지칭한다. 치료학적 유효량은 1회 이상의 투여로 투여할 수 있다.
본원에서 "개인" 또는 "개체"는 인간 또는 인간을 제외한 동물과 같은 척추동물, 예를 들어, 포유류이다. 포유류로는 비-제한적으로 인간, 영장류, 농장 동물, 경기 동물, 설치류 및 애완 동물을 포함한다. 인간을 제외한 동물 개체에 대한 비-제한적인 예로는 마우스, 랫, 햄스터 및 기니아피그와 같은 설치류; 토끼; 개; 고양이; 양; 돼지; 염소; 소; 말; 및 유인원 및 원숭이와 같은 인간을 제외한 영장류를 포함한다.
본원에서, 용어 "저해하는", "소거하는", "낮추는", "감소시키는", "방지하는" 또는 이들 용어에 대한 임의의 변형어는 원하는 결과를 달성하기 위한 임의의 측정가능한 감소 또는 완전한 저해를 포괄한다.
용어 "이를 필요로 하는"은 질병, 예를 들어 암을 가지고 있는 것으로 확인되거나 또는 의심되는 또는 발병 위험이 있는 개체일 것이다.
본원에서, "액체"는 액체 상태의 조성물로 이루어진 투약 형태이다. 액체는 부을 수 있으며; 실온에서 흐르고 용기에 따라 달라진다. 액체는 뉴턴 또는 유사가소성 (pseudoplastic) 거동을 나타낸다. 특정 구현예에서, 본원에서 "반-액체"는 액체 및 다른 제형 (즉, 현탁물, 에멀젼, 용액, 크림, 겔, 젤리 등) 2가지 특성을 가질 수 있다.
본원에서, "약제학적으로 허용가능한 담체"는 생리학적으로 적합한 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항세균제, 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포괄한다. 담체의 유형은 의도한 투여 경로에 기초해 선택할 수 있다. 약제학적인 활성 물질에 대한 이러한 매질 및 물질의 사용은 당해 기술 분야에서 잘 알려져 있다.
본원에서, 용어 "예방한다", "예방하는" 또는 "예방", "예방학적 치료" 등은 장애 또는 병태를 앓고 있지는 않지만 발병 위험이 있거나 발병되기 쉬운 개체에서 장애 또는 병태의 발병 가능성을 낮추는 것을 의미한다. 예방은 완전하거나 (즉, 증상을 검출할 수 없음) 또는 증상의 비-치료시 발생할 수 있는 증상보다 적은, 부분적일 수도 있다. 이들 용어는 또한 예방학적인 해택을 포함한다. 예방할 질환 또는 병태의 경우, 조성물은 특정 질환이 발병할 위험이 있는 환자 또는 질환의 생리학적 증상 하나 이상이 보고된 환자에게, 심지어 이 질환에 대한 진단이 행해질 수 없더라도, 투여할 수 있다.
본원에서, "용액"은 용매 또는 상호 혼화성 용매들의 혼합물에 하나 이상의 화학적 물질이 용해된, 맑고, 균질한 액체 투약 형태이다. 용액은 적절한 용매 또는 상호 혼화성 용매들의 혼합물에 하나 이상의 화학적 물질이 용해된 액체 제제이다. 용액에 약물 물질 분자들이 균일하게 분산되어 있어, 투약 형태로서 용액의 이용은 일반적으로 투여시 균일한 투여량과 용액을 희석 또는 달리 혼합하는 경우에는 우수한 정확성을 제공해준다.
본원에서, "치료" (및 "치료한다" 또는 "치료하는"과 같은 문법적인 변형어)는 치료 중인 개체의 자연적인 과정을 변형시키기 위한 시도로서 임상적인 중재를 의미하며, 임상 병리의 과정 중에 또는 예방을 위해 수행할 수 있다. 요망되는 치료 효과로는, 비-제한적으로, 생존 연장, 질환의 재발 방지, 증상의 경감, 질환의 임의의 직접적인 또는 간접적인 병리학적 결과의 소실, 전이 방지, 질환의 진행 속도 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화 및 관해 또는 예후 개선을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명에 개시된 내용의 항체를 이용해 질환 발생을 지연시키거나 또는 질환, 예를 들어 암 및/또는 종양의 진행을 늦춘다.
본원에서, "순차적인 투여"는 2가지 물질 (예를 들어, 본원에 기술된 조성물들)의 투여가 같은 날 분리하여 이루어지거나 또는 같은 날 이루어지지 않는 (예를 들어, 연속일로 이루어짐) 것을 포함한다.
본원에 기술된 바와 같이, 달리 지칭되지 않은 한, 임의의 농도 범위, 범위 %, 비율 범위 또는 정수 범위는 언급된 범위에 속하는 임의의 정수 수치와, 적절한 경우 이의 분율 (예, 정수 값의 1/4 및 1/100)을 포괄하는 것으로 이해하여야 한다.
II. 약학적 조성물
본 발명은 암 또는 종양의 증식을 낮추기 위한 2,4-다이설포닐 알파-페닐 tert-부틸 니트론 (2,4-ds-PBN) 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
특정 구현예에서, 2,4-ds-PBN은 하기 식 I의 산 형태로 고체로서 또는 낮은 pH 조건에서 용액 중에 존재할 수 있다:
Figure pct00001
비-제한적인 구현예들에서, 2,4-ds-PBN은 더 높은 pH 조건에서 하기 식 II 또는 식 III의 이온화된 염 형태로 존재할 수 있다:
Figure pct00002
Figure pct00003
일부 구현예에서, 식 III에서 X는 약제학적으로 허용가능한 양이온일 수 있다. 예를 들어, 양이온은 소듐, 포타슘 또는 암모늄과 같은 1가 물질일 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 양이온은 단독으로 다가 양이온이거나 또는 약제학적으로 허용가능한 1가 음이온과 조합된 양이온일 수 있다. 예를 들어, 약제학적으로 허용가능한 1가 음이온은 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 하이드록실, 나이트레이트, 설포네이트, 아세테이트, 타르트레이트, 옥살레이트, 숙시네이트, 팔모에이트 또는 유사 음이온과 조합한 칼슘, 이러한 음이온과 조합한 마그네슘, 이러한 음이온과 조합한 아연 등을 함유할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 유리 산 및 소듐 염, 포타슘 염, 칼슘 염, 마그네슘 염 또는 암모늄 염이 바람직할 수 있다.
특정 구현예에서, 2,4-ds-PBN은 2-단계 반응 순서로 제조할 수 있다. 예를 들어, 활성화된 아연/아세트산 촉매 또는 알루미늄/수은 아말감 촉매와 같은 적절한 촉매를 이용해 터셔리 부틸 나이트레이트 (2-메틸-2-니트로프로판)를 대응되는 n-하이드록실아민으로 변환할 수 있다. 이 반응은 약 0.5 내지 12시간, 특히 약 2시간 내지 6시간 동안, 또는 약 15-100℃의 온도에서 아연 촉매의 경우 알코올/물 혼합물 또는 알루미늄 아말감 촉매의 경우 에테르/물 혼합물과 같은 액체 반응 매질 중에 수행될 수 있다. 신선하게 합성한 하이드록실아민은 4-포르밀-1,3-벤젠다이설폰산과 반응시킬 수 있으며, 이때 아민은 약간 과량으로 사용된다. 이러한 반응은 비슷한 온도 조건에서 이루어질 수도 있다. 반응은 약 10시간 내지 약 24시간에 완료될 수 있다. 2가지 반응을 통해 합성된 물질은 유리 산일 수 있으며, 분자량 337.3 g/mole로 특정된다. 일부 구현예에서, 합성된 물질은 가열시 분해되는 백색 분말 물질일 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 합성된 물질은 수 용해성 > 1 g/ml 및 하기 D2O에서의 1H NMR 스펙트럼을 특징으로 할 수 있다: 8.048 ppm (dd, 8.4, 1.7 Hz); 8.836 ppm (d, 8.4 Hz); 8.839 ppm (d, 1.7 Hz); 8.774 ppm (s).
매질 중의 유리 산을 염기, 예를 들어, 포타슘 염의 경우 KOH 등과 혼합하여, 다양한 염을 쉽게 합성할 수 있다.
특정 구현예에서, 개시된 조성물은 개선된 수송 효율을 가질 수 있다. 예를 들어, 2,4-ds-PBN은 혈액/뇌 장벽을 통한 개선된 수송 효율을 제공할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명에 개시된 내용으로 이용하기 적합한 약학적 조성물은 활성 성분, 예를 들어, 2,4-ds-PBN가 치료학적 유효량으로 함유된 조성물을 망라할 수 있다. 활성 성분의 치료학적 유효량은 활성 성분, 사용 조성물, 암 및/또는 종양 및 이의 중증도, 치료할 개체의 나이, 체중 등에 따라 달라질 수 있다. 특정 구현예에서, 개체에 하나 이상의 조성물의 1회 또는 다회 투여로 개시된 조성물을 치료학적 유효량으로 제공할 수 있으며, 이는 환자에 필요하고 용인되는 투여량 및 빈도에 따라 달라질 수 있다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물에서 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 적어도 약 5 mg/체중 kg/일, 적어도 약 10 mg/체중 kg/일, 적어도 약 20 mg/체중 kg/일, 적어도 약 50 mg/체중 kg/일, 적어도 약 100 mg/체중 kg/일, 적어도 약 200 mg/체중 kg/일, 적어도 약 300 mg/체중 kg/일, 적어도 약 400 mg/체중 kg/일, 적어도 약 500 mg/체중 kg/일, 적어도 약 600 mg/체중 kg/일, 적어도 약 700 mg/체중 kg/일, 적어도 약 800 mg/체중 kg/일, 적어도 약 900 mg/체중 kg/일 또는 적어도 약 1,000 mg/체중 kg/일일 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 유효량은 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 400 mg/체중 kg/일, 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 300 mg/체중 kg/일, 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 200 mg/체중 kg/일, 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 100 mg/체중 kg/일, 약 20 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 50 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 50 mg/체중 kg/일 내지 약 600 mg/체중 kg/일, 약 50 mg/체중 kg/일 내지 약 400 mg/체중 kg/일, 약 50 mg/체중 kg/일 내지 약 200 mg/체중 kg/일, 약 60 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 70 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 80 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 90 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 100 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 200 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 300 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 400 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 500 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 600 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 700 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 800 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 900 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 800 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 700 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 600 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 400 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 300 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 200 mg/체중 kg/일, 또는 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 100 mg/체중 kg/일일 수 있다.
활성 화합물 (예를 들어, 2,4-ds-PBN)을 함유한 약학적 조성물은, 당해 기술 분야의 당업자들이 통례적인 기준을 적용해 선택할 수 있는 바와 같이, 생리학적으로 적절한 비히클을 함유할 수 있다. 본원에 개시된 내용으로 이용할 수 있는 적절한 약제학적으로 허용가능한 비히클은 활성 성분, 예를 들어 2,4-ds-PBN의 생물학적 활성의 효능을 간섭하지 않는 특징을 가지며, 투여 환자에게 독성이 아닌 것이다. 비-제한적인 구현예들에서, 적절한 약제학적 비히클은 포스페이트-완충화된 염수 용액, 물, 유제, 예를 들어 오일/물 유제, 다양한 유형의 습윤제 및 무균 용액을 망라할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 비히클에 대한 추가적인 비-제한적인 예로는 겔, 생체흡수성 매트릭스 물질, 저해제 및/또는 임의의 다른 적절한 비히클을 함유한 이식 요소, 전달 또는 분산 수단 및 재료를 망라한다. 이러한 약제학적으로 허용가능한 비히클은 통례적인 방법에 의해 제형화할 수 있으며, 개체에 투여할 수 있다. 특정 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 비히클은 완충제, 예를 들어 포스페이트, 사이트레이트 및 기타 유기 산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 (예, 비-제한적으로, 옥타데실 다이메틸 벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 부틸 또는 벤질 알코올, 알킬 파라벤, 예를 들어 메틸 또는 프로필파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 사이클로헥사놀, 3-펜탄올 및 m-크레졸); 저 분자량 (잔기 약 10개 미만의) 폴리펩타이드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트제, 예를 들어 EDTA; 당, 예를 들어 슈크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예를 들어 소듐; 금속 착물 (예, Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 망라할 수 있다. 특정 구현예에서, 적절한 약제학적으로 허용가능한 비히클은 물, 식염수, 포스페이트-완충화된 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 또는 이들의 조합 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물은 경구 투여용으로 제형화할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 투여용으로 적합한 당해 기술 분야에서 잘 알려진 약제학적으로 허용가능한 담체를 이용해 제형화할 수 있다. 이러한 담체는 약학적 조성물을 치료할 환자에 경구 또는 코 흡입용 정제, 환제, 캡슐제, 액체, 겔, 시럽제, 슬러리, 현탁제 등으로 제형화할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 약학적 조성물은 고체 투약 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 정제는 즉시-방출 정제일 수 있다. 대안적으로 또는 아울러, 정제는 연장 또는 제어 방출형 정제일 수 있다. 고체 투약 제형은 즉시 방출 부분과 연장 또는 제어 방출 부분 둘다를 함유할 수 있다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물은 장-코팅 정제 (enteric-coated tablet) 또는 장-코팅 캡슐제로 제형화할 수 있다. 예를 들어, 2,4-ds-PBN은 하나 이상의 코팅 층으로 장내용으로 코팅할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 장용 코팅 (enteric coating)을 위한 코팅 재료로는 지연-방출성 장용 폴리머를 포함할 수 있다. 지연-방출 장용 폴리머로 적합한 예로는, 비-제한적으로 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로스 아세테이트 트리멜리테이트, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 프탈레이트, 폴리비닐 아세테이트 프탈레이트, 카르복시메틸에틸셀룰로스, 공중합된 메타크릴산/메타크릴산 메틸 에스테르, 예를 들어, 상품명 EUDRAGIT® L12.5, L100, EUDRAGIT® S12.5, S100으로 알려진 재료, 또는 장용 코팅을 달성하기 위해 사용되는 유사 화합물을 포함할 수 있다. 공중합된 메타크릴산/메타크릴산 메틸 에스테르는 3가지 서브클래스의 화합물: 메타크릴산 코폴리머 타입 A, 메타크릴산 코폴리머 타입 B 및 메타크릴산 코폴리머 타입 C를 함유할 수 있다. 다양한 타입의 코폴리머는 메타크릴산:메타크릴산 메틸 에스테르의 비율이 다양한 화합물을 지칭한다. 예를 들어, 메타크릴산 코폴리머 타입 A는 메타크릴산:메타크릴산 메틸 에스테르의 비율이 대략 1:1이고, 타입 B는 대략 1:2, 그리고 타입 C는 타입 A와 비율은 비슷하지만, 계면활성제와 같은 추가적인 성분을 함유할 수 있다. 예를 들어, 상품명 EUDRAGIT® L 30D-55, EUDRAGIT® L100-55, EUDRAGIT® S100, EUDRAGIT® 제제 4110D (Rohm Pharma); EUDAGRITO FS 30D; AQUATERIC®, AQUACOAT® CPD 30 (FMC); KOLLICOAT MAE® 30D 및 30DP (BASF); 및 EASTACRYL® 30D (Eastman Chemical)로 판매되는 폴리머를 비롯하여, 수성 콜로이드 폴리머 분산물 또는 재-분산물 역시 이용할 수 있다. 일부 구현예에서, 지연-방출성 장용 폴리머는 메타크릴산 코폴리머 타입 A를 포함할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 지연-방출성 장용 폴리머는 메타크릴산 코폴리머 타입 A와 메타크릴산 코폴리머 타입 B의 혼합물을 포함할 수 있다. 당해 기술 분야의 당업자라면, 본 발명의 범위로부터 이탈하지 않으면서 지연-방출성 폴리머에 추가적인 성분을 첨가할 수 있음을 알 것이다. 예를 들어, 지연-방출성 폴리머 층의 물리적 특성을 개선하기 위해 지연-방출성 장용 폴리머에 가소제를 첨가할 수 있다. 가소제에 대한 비-제한적인 예로는 트리에틸 사이트레이트, 아세틸 트리에틸 사이트레이트, 트리부틸 사이트레이트, 아세틸 트리부틸 사이트레이트, 트리헥실 사이트레이트, 아세틸 트리헥실 사이트레이트, 트리옥틸 사이트레이트, 아세틸 트리옥틸 사이트레이트, 부티릴 트리헥실 사이트레이트, 아세틸 부티릴 트리헥실 사이트레이트, 트리메틸 사이트레이트, 아세틸화된 모노글리세라이드, 알킬 설폰산 페닐 에스테르 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 가소제는 트리에틸 사이트레이트를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 개시된 장용 폴리머는 pH 민감하지 않은 기타 공지된 코팅 제품과 혼합하여 변형할 수 있다. 이러한 코팅 제품에 대한 예로는 현재 상품명 EUDRAGIT® 및 EUDRAGIT® RL로 판매되는, 트리메틸암모니오에틸 메타크릴레이트 클로라이드가 적은 비율로 함유된 중성 메타크릴산 에스테르; 상품명 EUDRAGIT® NE30D 및 EUDRAGIT® NE30으로 시판되는 임의의 관능기가 없는 중성 에스테르 분산제; 및 기타 pH-독립적인 코팅 제품을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 부가적인 변형 층이 장용 코팅 층 위에 부가될 수 있다. 이러한 변형 층은 장용 코팅 층을 통한 물의 침투율을 감소시켜 약물 방출의 지체 시간 (lag time)을 늘리기 위해 장용 코팅 후 연속적으로 코팅할 수 있는, 물 침투 장벽 층 (반투과성 폴리머)을 포함할 수 있다. 당해 기술 분야의 당업자에게 공지된 제어-방출 코팅제는 물 또는 적절한 유기 용매 중의 폴리머 용액을 이용한 유동층 코팅 또는 팬 코팅과 같은 코팅 기술에 의해, 또는 수성 폴리머 분산제를 이용함으로써, 이러한 목적으로 이용할 수 있다. 예를 들어, 제어 방출형 폴리머에 대한 다음과 같은 비-제한적인 목록을 본 발명에서 이용할 수 있다: 셀룰로스 아세테이트, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로스 아세테이트 프로피오네이트, 에틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 셀룰로스 프로피오네이트 (저, 중간 또는 고 분자량), 셀룰로스 아세테이트 프로피오네이트, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로스 트리아세테이트, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸 메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실 메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌) 저 밀도, 폴리(에틸렌) 고 밀도, 폴리(프로필렌), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸렌 테레프탈레이트), 폴리(비닐 이소부틸 에테르), 폴리(비닐 아세테이트), 폴리(비닐 클로라이드), 폴리우레탄, 에틸셀룰로스 수성 분산제, 예를 들어 AQUACOAT® 및 SURELEASE®, 폴리(부틸 메타크릴레이트, (2-다이메틸아미노에틸) 메타크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트), 폴리(메타크릴산, 메틸 메타크릴레이트), 폴리(메타크릴산, 에틸아크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, 메타크릴산), 폴리(에틸아크릴레이트, 메틸메타크릴레이트, 트리메틸암모니오에틸 메타크릴레이트 클로라이드), 폴리(에틸아크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트), 폴리(메타크릴산, 에틸아크릴레이트), 타입 A 메타크릴산 코폴리머, 타입 B 메타크릴산 코폴리머, 타입 C 메타크릴산 코폴리머, 메타크릴산 코폴리머 분산제, 수성 아크릴 폴리머 분산제, (EUDRAGIT® 화합물), OPADRY®, 지방산 및 이의 에스테르, 왁스, 제인, 및 수성 폴리머 분산제, 예를 들어 EUDRAGIT® RS 및 RL 30D, EUDRAGIT® NE 30D, 셀룰로스 아세테이트 라텍스. 전술한 폴리머와 친수성 폴리머, 예를 들어 하이드록시에틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스 (KLUCEL®, Hercules Corp.), 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 (METHOCEL®, Dow Chemical Corp.) 및 폴리비닐피롤리돈의 조합이 병합될 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 제어 방출형 폴리머는 에틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 및 이들의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 제어 방출형 폴리머는 에틸셀룰로스와 하이드록시프로필 메틸셀룰로스의 에틸셀룰로스:하이드록시프로필 메틸셀룰로스 약 0.1 내지 약 10 비율, 약 0.2 내지 약 5 비율, 약 0.5 내지 약 3 비율 및 약 1 내지 약 2 비율의 조합을 포함할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 제어 방출형 폴리머는 에틸셀룰로스 수성 분산제와 하이드록시프로필 메틸셀룰로스의 에틸셀룰로스 수성 분산제:하이드록시프로필 메틸셀룰로스 약 0.1 내지 약 10 비율, 약 0.1 내지 약 5 비율, 약 0.5 내지 약 4 비율 및 약 1.5 내지 약 3 비율의 조합을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 코팅 층은 생리학적 환경에서 pH 약 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1 또는 7.2보다 높은 pH에서, 그리고 이들 수치 사이의 수치 또는 범위의 pH에서 용해될 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 코팅 층은 생리학적 환경에서 pH 약 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1 또는 7.2보다 낮은 pH, 그리고 이들 수치 사이의 수치 또는 범위의 pH에서 2,4-ds-PBN의 분비를 방지할 수 있다. 생리학적 환경은, 예를 들어, 미국 약전 (USP)의 장용 코팅 정제에 대한 붕해 검사의 요건에 따라 재현할 수 있다.
특정 구현예에서, 제제에 대한 코팅은 당해 기술 분야에서 공지된 코팅 기법 (예, 분무, 유동층, 침지 튜브 또는 침지 베드 기법)에 의해 달성할 수 있다.
비-제한적인 구현예들에서, 본 발명의 약학적 조성물은 비경구 투여용으로 적합한 당해 기술 분야에 잘 알려진 약제학적으로 허용가능한 담체를 이용해 제형화할 수 있다. 용어 "비경구 투여" 및 "비경구 투여한다"는, 본원에서, 장 및 국소 투여 이외의 다른 투여 방식, 통상적으로 주사에 의한 투여 방식을 지칭하며, 비-제한적으로, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 관절낭내, 안와내, 심장내, 진피내, 복막내, 경기관내, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다. 예를 들어, 비-제한적으로, 본 발명의 약학적 조성물은 생리 식염수와 같은 약제학적으로 허용가능한 담체 중에 환자에게 정맥내 투여할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명은 본원에 개시된 저해제를 포함하는 비경구 약학적 조성물을 제공한다.
비-제한적인 구현예들에서, 개시된 조성물은 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 함유할 수 있으며, 여기서 치료학적 유효량은 암 또는 종양의 증식을 낮추는 양으로 존재할 수 있으며, 암은 비-소 세포성 폐 암종일 수 있으며, 약학적 조성물은 경구 투여 또는 장내 투여를 위한 정제, 환제, 캡슐제, 겔, 액체, 시럽 또는 현탁제 형태일 수 있으며, 경구 투여 또는 장내 투여를 위한 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일일 수 있으며, 조성물은 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 캡슐화할 수 있으며 지정된 pH 범위에서 용해될 수 있는 하나 이상의 코팅 층을 포함할 수 있거나, 또는 대안적으로 약학적 조성물은 정맥내 주사 또는 동맥내 주사용 용액 또는 액체의 형태일 수 있으며, 정맥내 주사 또는 동맥내 주사를 위한 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일일 수 있다.
III. 방법
본 발명은 개체에서 암 또는 종양을 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 암 또는 종양의 증식을 낮추기 위해 2,4-다이설포닐 α-페닐 tert-부틸 니트론 (2,4-ds-PBN)을 치료학적 유효량으로 포함하는 조성물의 투여를 포함한다.
특정 구현예에서, 조성물을 유효량으로 투여해, 표적 종양 또는 표적 암의 발생, 재발, 전파, 증식, 전이 또는 혈관형성을 치료 또는 방지할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 종양 또는 암의 증식이 적어도 약 1%, 적어도 약 3%, 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65% 또는 적어도 약 70% 감소할 수 있다.
비-제한적인 구현예들에서, 조성물을 유효량으로 투여하여, 종양 및/또는 암의 면적, 부피 또는 이들의 조합을 감소시킬 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 종양 및/또는 암 부피가 적어도 약 1%, 적어도 약 3%, 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65% 또는 적어도 약 70% 감소할 수 있다. 예를 들어, 약학적 조성물을 표적 암 및/또는 표적 종양에 전달한 후 비-소 세포성 폐 암종의 부피가 약 70% 감소할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 방법은 암 또는 종양의 부피를 측정함으로써 조성물의 효능을 평가하는 것을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 각 종양의 최장 직경 (a)과 최소 직경 (b)을 종양 및/또는 암 면적 또는 부피 추정을 위해 주당 적어도 1회, 2회, 3회, 4회, 8회, 12회, 18회 또는 24회 또는 그 보다 더 높은 빈도로 측정할 수 있다.
특정 구현예에서, 조성물을 유효량으로 투여하여, 표적 종양 및/또는 암 세포의 세포자살 또는 괴사를 높일 수 있다. 예를 들어, 표적 종양 및/또는 암의 세포자살 또는 괴사 활성의 등급이 높아질 수 있다. 등급은 표적 종양 및/또는 표적 암의 히스토그램 면적 (예를 들어, 약 1 mm2) 당 양성 세포의 수로 결정할 수 있다. 세포자살 또는 괴사 등급은 양성 세포의 평균 계수를 계산하여 결정할 수 있으며, 대응되는 중증도 (예를 들어, 최소, 경미, 중간, 현저 및 심각)로 등급을 나눌 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 표적 암 및/또는 표적 종양의 사전 결정된 총 수 또는 평균 값이 개시된 조성물의 투여 후 감소할 수 있다. 예를 들어, 세포자살 세포의 평균 계수 값이 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 110%, 적어도 약 120% 또는 적어도 약 130% 증가할 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물을 유효량으로 투여해 표적 종양의 세포자살을 높일 수 있거나, 및/또는 암 세포는 세포자살 세포의 평균 계수 값이 약 130% 증가할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 방법은 세포자살성 암 세포 또는 세포자살 종양 세포를 계수함으로써 조성물의 효능을 평가하는 것을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 표적 종양 또는 암을 환자로부터 입수하고, 헤마톡실린 & 에오신 (H&E) 염색 및 TUNEL 염색을 위해 준비할 수 있다. 수득한 암/종양의 괴사는 H&E 염색에 의해 평가할 수 있으며, 수득한 암/종양의 세포자살은 지정된 면적 (예를 들어, 1 mm2) 당 TUNEL 양성 염색 세포의 수에 의해 평가할 수 있다. 일부 구현예에서, 종양 및/또는 암의 세포자살은 양성 세포의 평균 수치를 계산하여 결정할 수 있으며, 대응되는 중증도 (예를 들어, 최소, 경미, 중간, 현저 및 심각)로 등급을 나눌 수 있다.
특정 구현예에서, 표적 암은 비-소 세포성 폐 암종 및 고형 암 (예를 들어, 위암, 대장암, 유방암, 등)일 수 있다.
투여량 용법
예를 들어, 비-제한적으로, 본 개시 내용의 투여는 경구 투여, 전신 투여, 정맥내 투여 또는 표적 조직으로의 국소 주사일 수 있다. 경구 투여의 예로는 암 또는 종양의 증식을 줄이기 위해 정제, 환제, 캡슐제, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제 등의 형태로 개체의 입을 통해 2,4-ds-PBN 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 함유한 조성물을 개체에 전달하는 것을 포함할 수 있다. 전신 투여의 예로는 암 또는 종양의 증식을 낮추기 위한 2,4-ds-PBN 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 함유한 조성물의 정맥내, 복막내, 근육내 또는 피하 주사, (구강 또는 비강) 흡입, 경피, 좌제 또는 관장 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 전신 투여, 정맥내 투여 또는 표적 암 또는 종양으로의 국소 주사용 용액 형태일 수 있다.
특정 구현예에서, 개체에서 암 또는 종양을 치료하기 위해 다음과 같은 투여량 용법을 이용할 수 있다. 비-제한적인 구현예에서, 경구 투여용 조성물은 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 적어도 약 5 mg/체중 kg/일, 적어도 약 10 mg/체중 kg/일, 적어도 약 20 mg/체중 kg/일, 적어도 약 50 mg/체중 kg/일, 적어도 약 100 mg/체중 kg/일, 적어도 약 200 mg/체중 kg/일, 적어도 약 300 mg/체중 kg/일, 적어도 약 400 mg/체중 kg/일, 적어도 약 500 mg/체중 kg/일, 적어도 약 600 mg/체중 kg/일, 적어도 약 700 mg/체중 kg/일, 적어도 약 800 mg/체중 kg/일, 적어도 약 900 mg/체중 kg/일 또는 적어도 약 1000 mg/체중 kg/일로 함유할 수 있다. 비-제한적인 구현예에서, 경구 투여를 위한 유효량은 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 400 mg/체중 kg/일, 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 300 mg/체중 kg/일, 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 200 mg/체중 kg/일, 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 100 mg/체중 kg/일, 약 20 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 50 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 50 mg/체중 kg/일 내지 약 600 mg/체중 kg/일, 약 50 mg/체중 kg/일 내지 약 400 mg/체중 kg/일, 약 50 mg/체중 kg/일 내지 약 200 mg/체중 kg/일, 약 60 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 70 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 80 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 90 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 100 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 200 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 300 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 400 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 500 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 600 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 700 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 800 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 900 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 800 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 700 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 600 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 400 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 300 mg/체중 kg/일, 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 200 mg/체중 kg/일 또는 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 100 mg/체중 kg/일일 수 있다.
특정 구현예에서, 조성물은 조성물의 개시된 용량을 개체에 매일 1-4회로 경구 투여함으로써 개체에 투여할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 1일 1, 2, 3 또는 4번 적용할 수 있다. 특정 구현예에서, 조성물은 조성물의 개시된 용량을 매일 1회, 매일 2회, 매일 3회 또는 매일 4회로 개체에 투여함으로써 적용할 수 있다. 예를 들어, 비-제한적으로, 조성물은 조성물의 개시된 용량을 표적 조직에, 예를 들어 오전, 정오 및 저녁을 비롯하여, 매일 3번 투여함으로써 적용할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 개시된 조성물은 특정 기간 동안 여러개로 분할한 적절한 양으로 투여할 수 있다.
특정 구현예에서, 전신 투여, 정맥내 투여 또는 국소 주사용 조성물은 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 적어도 약 10 mg/체중 kg/일, 적어도 약 20 mg/체중 kg/일, 적어도 약 30 mg/체중 kg/일, 적어도 약 40 mg/체중 kg/일, 적어도 약 50 mg/체중 kg/일, 적어도 약 60 mg/체중 kg/일, 적어도 약 70 mg/체중 kg/일, 적어도 약 80 mg/체중 kg/일, 적어도 약 90 mg/체중 kg/일, 적어도 약 100 mg/체중 kg/일, 적어도 약 200 mg/체중 kg/일, 적어도 약 300 mg/체중 kg/일, 적어도 약 400 mg/체중 kg/일 또는 적어도 약 500 mg/체중 kg/일로 포함할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 전신 투여, 정맥내 투여 또는 국소 주사용 유효량은 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 20 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 30 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 40 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 50 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 60 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 70 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 80 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 90 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 100 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 200 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 300 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 20 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일, 약 20 mg/체중 kg/일 내지 약 400 mg/체중 kg/일, 약 20 mg/체중 kg/일 내지 약 300 mg/체중 kg/일, 약 20 mg/체중 kg/일 내지 약 200 mg/체중 kg/일, 약 20 mg/체중 kg/일 내지 약 100 mg/체중 kg/일, 약 60 mg/체중 kg/일 내지 약 400 mg/체중 kg/일, 약 60 mg/체중 kg/일 내지 약 300 mg/체중 kg/일 또는 약 60 mg/체중 kg/일 내지 약 200 mg/체중 kg/일일 수 있다.
특정 구현예에서, 전신 투여, 정맥내 투여 또는 국소 주사용 조성물은 생리학적 수성 완충제 중의 액체 용액 또는 현탁제로 제조할 수 있다.
전신 투여, 정맥내 투여 또는 국소 주사용 조성물은 전신, 정맥내 또는 표적 영역으로의 국소 적용용으로 준비된 조성물을 주당 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회 또는 7회 전달함으로써 표적 암 및/또는 표적 종양으로 투여할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 약학적 조성물은 주당 1회 또는 주당 2회, 또는 주당 3회, 주당 4회 또는 주당 5회로 전달할 수 있다.
특정 구현예에서, 투여되는 투여량은 투여 경로, 수여체의 나이, 건강 및 체중, 증상의 특성과 정도, 병용 치료제의 종류, 치료 빈도 및 원하는 효과 등의 공지된 인자들에 따라 달라질 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 개시된 투여량 용법은 개체의 필요성 및 조성물 투여를 감독하거나 투여하는 사람의 전문가적 판단에 따라 조정할 수 있다. 예를 들어, 본원에 언급된 병태 (예, 비-소 세포성 폐 암종)를 치료하는데 저 용량이 충분한 활성을 제공하지 못할 경우, 조성물의 투여량을 높일 수 있다. 대안적으로, 질환 (예, 비-소 세포성 폐 암종)이 완화되어 더 이상 검출가능하지 않거나 또는 소거된다면, 조성물의 투여량을 줄일 수 있다.
특정 구현예에서, 개시된 조성물은 1회로 또는 여러번으로 나누어 개체에 투여할 수 있다.
특정 구현예에서, 개시된 치료제의 지속 기간은 약 1일 내지 약 5년일 수 있다. 특정 구현예에서, 개시된 치료제의 지속 기간은 약 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년 또는 적어도 약 5년일 수 있다. 특정 구현예에서, 조성물은 암/종양이 더 이상 검출되지 않을 때까지 투여할 수 있다.
공동-투여
특정 구현예에서, 본원에 개시된 조성물은 단독으로 또는 하나 이상의 요법과 조합하여 사용할 수 있다. 예를 들어, 비-제한적으로, 본 발명의 방법은 개시된 조성물과 하나 이상의 항종양 또는 항암 요법의 투여를 포함할 수 있다. 본원에서, "와 조합하여"는 개시된 조성물과 하나 이상의 요법을 치료 용법 또는 계획의 일부로서 개체에 투여할 수 있는 것을 의미한다. 특정 구현예에서, 조합하여 사용한다는 것이 조성물 및 하나 이상의 부가적인 요법을 위한 물질을 투여하기 전 물리적으로 조합하거나, 이들을 동일한 경로로 투여하거나 또는 이들을 동일한 시간대에 걸쳐 투여하여야 하는 것은 아니다. 특정 구현예에서, 부가적인 용법을 위한 물질은 개시된 조성물에 앞서 투여할 수 있다. 특정 구현예에서, 부가적인 용법을 위한 물질은 개시된 조성물을 투여한 후 투여할 수 있다. 특정 구현예에서, 부가적인 용법을 위한 물질은 개시된 조성물과 동시에 투여할 수 있다. 부가적인 요법에 대한 비-제한적인 예로는, 비-제한적으로, 항종양 치료, 항암 치료, 화학요법, 표적 요법, 면역요법, 방사산, 고주파 절제, 수술, 종양 치료 분야 (TTFields) 기구를 이용한 요법 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 부가적인 요법을 위한 물질로는 시스플라틴, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 (vincristine), 토포테칸 (topotecan), 페메트렉세드, 게피티닙 (gefitinib), 에를로티닙 (erlotinib), 다코미티닙 (dacomitinib), 오시메르티닙 (osimertinib), 니볼루맵 (nivolumab), 펨브롤리주맵 (Pembrolizumab), 아테졸리주맵 (atezolizumab), 두르발루맵 (durvalumab), 화학치료제, 방사선 치료제, 사이토카인, 항-혈관신생제, 티로신 키나제 저해제 (TKI), 세포자살-유도제, 항암 항체, 표적 약물 및/또는 면역 시스템의 활성을 촉진하는 제제, 예를 들어 비-제한적으로, 사이토카인, 예컨대 비-제한적으로, 인터루킨 2 (IL-2), 인터페론, 항-CTLA4 항체, 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체, 면역 체크포인트 저해제, 면역 세포 요법 제제, 치료 항체, 항암 백신 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 항암제는 탁산, 플라티늄-기반의 제제, 안트라사이클린, 안트라퀴논, 알킬화제, HER2 표적 요법, 비노렐빈 (vinorelbine), 뉴클레오시드 유사체, 익사베필론 (ixabepilone), 에리불린 (eribulin), 시타라빈 (cytarabine), 호르몬 요법, 메토트렉세이트 (methotrexate), 카페시타빈 (capecitabine), 라파티닙 (lapatinib), 5-FU, 에토포시드 (etoposide) 또는 이들의 임의 조합일 수 있다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 부가적인 요법과 조합한 개시된 조성물의 투여는, 표적 종양 및/또는 암 증식을 낮추거나 또는 방지하는데 조합 또는 상승적인 효과를 유도할 수 있다. 예를 들어, 비-제한적으로, 표적 암 및/또는 표적 종양의 면적 및 부피 증식에 대한 상승적인 감소는, 개시된 조성물과 부가적인 용법의 조합을 개체에 투여할 경우에, 이루어질 수 있다. 비-제한적인 구현예들에서, 개시된 조성물은 표적 종양 및/또는 암의 증식을 억제할 수 있으며, 표적 종양 및/또는 암 치료를 위한 부가적인 요법에 대한 민감성을 높일 수 있다.
비-제한적인 구현예들에서, 필요한 개체에서 암 또는 종양을 치료하기 위한 개시된 조성물은 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여하고, 암 또는 종양의 부피, 면적 또는 이의 조합을 측정하고, 세포자살성 암 세포 또는 세포자살성 종양 세포를 계수하고, 항암제 또는 항종양제를 치료학적 유효량으로 개체에 투여하고, 추가적인 요법을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 치료학적 유효량은 암 또는 종양의 증식을 감소시킬 수 있으며, 암은 비-소 세포성 폐 암종일 수 있으며, 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 약 20 mg/체중 kg/일 내지 약 1,200 mg/체중 kg/일일 수 있으며, 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량은 정맥내 주사 또는 동맥내 주사를 통해 개체에 전달할 수 있거나, 또는 대안적으로 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염은 치료학적 유효량으로 장내 투여 또는 경구 투여를 통해 개체에 전달할 수 있으며, 암 부피 또는 종양 부피는 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여한 후 적어도 약 50% 감소할 수 있으며, 암 또는 종양의 증식은 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여한 후 적어도 약 40% 감소할 수 있으며, 세포자살성 암 세포 또는 세포자살성 종양 세포의 수는 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여한 후 적어도 약 15% 증가할 수 있으며, 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염은 치료학적 유효량으로 개체에 주당 1회 이상으로 전달할 수 있으며, 항암제/항종양제는 화학치료제, 면역치료제, 사이토카인, 항-혈관신생제, 티로신 키나제 저해제 (TKI), 세포자살-유도제, 항암 항체 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 추가 요법은 항-종양 요법, 항암 요법, 화학요법, 표적 요법, 면역요법, 방사선 요법, 고주파 절제 요법, 수술, 종양 치료 분야 (TTFields) 기구를 이용한 요법 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
실시예들
본 발명에 개시된 내용은 아래 실시예를 참조하여 더 잘 이해될 것이며, 실시예는 개시된 내용에 대한 예로 제공될 뿐 제한되는 것은 아니다.
실시예: 누드 마우스에 이종이식된 인간 폐암 세포주 A549에 대한 OKN-007의 항-발암 효과
옆구리에 피하 이식된 인간 A549 폐암 이종이식편을 가진 누드 마우스에서 경구 투여 후 OKN-007의 항암 효과를 분석하였다.
재료 및 방법:
검사 물질은 2,4-다이설포닐 α-페닐 tert-부틸 니트론 (2,4-ds-PBN, 다이소듐 4-[(Z)-[tert-부틸(옥시도)아자늄일리덴]메틸]벤젠-1,3-다이설포네이트)으로 지칭되는, 분자식 C11H13NO7S2·Na2의 OKN-007이다.
양성 물질은 분자식 Pt (NH3)2Cl2의 Cis-다이아민플라티늄 (II) 다이클로라이드 (시스플라틴)이다.
식염수를 음성 대조군으로 사용하였다.
검사 물질의 준비: 검사 물질을 필요한 양으로 시험관에 넣었다. 비히클을 소량 첨가하여 혼합하였다. 비히클을 점진적으로 첨가하여, 원하는 농도 (예를 들어, 15, 30 및 60 mg/mL)로 만들었다.
양성 대조군의 준비: 양성 대조군 물질을 필요한 양으로 시험관에 넣었다. 식염수를 소량 첨가해 혼합하였다. 식염수를 점진적으로 첨가하여, 원하는 농도 (예를 들어, 0.2 mg/mL)로 만들었다.
인간 폐암 세포주, A549를 이용하였다.
배양 배지: 소 태아 혈청 (FBS), 페니실린-스트렙토마이신 (페니실린 10,000 unit/mL 및 스트렙토마이신 10,000 ㎍/mL) 및 RPMI1640을 표 1에 나타낸 바와 같이 100 mL로 혼합하였다.
명칭 함량 (mL)
FBS (Lot No.: 1982135, Gibco, U.S.A) 10
페니실린-스트렙토마이신 (Lot No.: 2019315, Gibco, U.S.A.) 1
RPMI1640 (0000704247, Lonza, U.S.A.) 89
총 부피 100
표 1. 배양 배지.
세포 배양물 준비: 냉동 세포를 수조에서 해동하였다. 세포를 배지가 든 시험관에 넣고, 원심분리 (1,000 rpm, 5분)하여 상층액을 제거하였다. 배양 배지에 다시 현탁한 후, 세포를 세포 배양 플라스크에 넣고, 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 배양하였다. 세포가 배양 용기에서 70 - 80% 컨플루언시로 증식되면 1:5의 비율로 서브-배양하였다. 세포주 이식 당일에 배양한 세포를 원심분리 (1,000 rpm, 5분)하여 상층액을 제거하고, D-PBS로 세포 현탁물을 준비하였다. 그 후, 세포 현탁물을 마트리겔과 1:1 비율 (5x107 세포/mL)로 혼합하였다.
BALB/c 누드 마우스, CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlOri, SPF를 이용하였다. 동물 수령시 성별, 수, 나이 및 체중 범위: 마우스 (65마리)는 5주령의 수컷이었으며, 수령시 체중은 약 14.5 - 19.6 g이었다.
투여 개시 시점에 동물의 성별, 수, 나이 및 체중: 마우스 (50마리)는 7주령의 수컷이었으며, 투여 개시 시점에 체중은 약 18.4 - 24.0 g이었다.
세포 이식: 격리-적응 기간 후, 건강한 동물에서 체중 측정 및 세포 이식을 수행하였다. 동물 모두 매주 임상 징후를 관찰하였다. 준비한 세포 (1x107 세포/0.2 mL) 현탁물을 우측 옆구리에 1회용 주사기를 사용해 피하 주사하였다. 이식 및 생착 기간 동안 매일 1회로 동물에서 임상 징후를 관찰하였다.
군 할당: 세포를 이식한 후, 동물 65마리에서 각 종양의 크기를 모니터링하였다. 종양 부피가 87 - 112 mm3에 도달하면, 50마리를 평균 종양 부피 약 99 mm3의 해당 군으로 할당하였다. 종양 부피를 토대로 동물을 선별하여, 5개의 군으로 무작위 할당하였다 (10마리/군).
투여 경로: 경구 투여. 검사 물질의 임상 적용이 경구이기에, 투여 경로는 경구였다.
투여 방법 및 빈도: 음성 대조군 및 검사 물질의 경우, 1회용 주사기를 사용해 4주간 매일 1회로 총 28회 경구 투여로 수행하였다. 양성 대조군의 경우, 1회용 주사기를 사용해 4주간 매주 1회로 총 4번 복막내 투여로 수행하였다.
군 경로 용량 (mg/kg) 투여 부피 (mL/kg) 동물 수 (동물 번호)
G1 음성 대조군 P.O. 0 10 10 (1101-1110)
G2 검사 물질 1 P.O. 150 10 10 (1201-1210)
G3 검사 물질 2 P.O. 300 10 10 (1301-1310)
G4 검사 물질 3 P.O. 600 10 10 (1401-1410)
G5 양성 대조군 I.P. 2 10 10 (1501-1510)
표 II. 군 할당.
투여 경로: 검사 물질의 용량 수준은 150, 300 및 600 mg/kg으로 정하였다. 양성 대조군 물질의 용량 수준은 2 mg/kg으로 정하였다. 투여 부피는 모든 군들에서 10 mL/kg으로 정하였으며, 개별 용량은 투여 직전의 동물 체중을 토대로 계산하였다.
종양 부피 측정: 각 종양의 최장 직경 (a)과 최소 직경 (b)을 관찰 기간 동안 주당 2회로 캘리퍼를 사용해 측정하였다. 종양 부피 (TV)를 다음 식에 따라 주당 2번 계산하였다: TV (mm3) = (a (mm) x b2 (mm2))/2. 각 동물에 투여하기 전 종양의 부피는 군 할당 시점에 측정한 값으로 설정하였다.
종양 제거 및 체중 측정: 관찰 기간 후, 이소플루란 흡입을 통해 동물을 안락사하였다. 종양을 적출한 후, 적출한 종양의 무게를 기록하였다. 종양 증식 저해율 (IR)을 다음의 식으로 계산하였다: IR (%) = (1 - T/C) x 100, 여기서, T는 검사 물질 군 및 양성 물질 군의 평균 종양 무게이고, C는 음성 대조군의 평균 종양 무게이다.
조직병리학적 검사: 적출한 종양을 10% 중성 완충화된 포르말린 용액 (10% 중성 완충화된 포르말린)에서 고정하였다. 종양을 일정 두께 (약 3 mm)로 절단한 다음, 이를 일반적인 공정으로 처리하여, 파라핀으로 포매한 다음 4-5 ㎛ 크기로 자르고, 조직 단편을 헤마톡실린 및 에오신 (H&E)과 TUNEL로 염색하였다. IHC (면역조직화학) 슬라이드를 4-5 ㎛ 크기로 잘라 준비하여, 협력업체로 이송하였다 (음성 대조군 (G1), 검사 물질 2 (G3, 동물 ID 번호: 1301, 1302, 1303, 1307, 1310), 검사 물질 3 (G4, 동물 ID 번호:1401, 1402, 1404, 1408, 1409)).
헤마톡실린 및 에오신 (H&E) 염색 결과 확인: 종양 괴사를 종양 전체 단편의 괴사 수준에 따라 등급을 매겨 평가하였다 (±, +, ++, +++, ++++). 핵의 붕괴 또는 소실 및 세포질의 호산성 변화 등의 형태학적 변화를 통해 괴사를 평가하였다. 종양 괴사의 정도는 다음과 같이 괴사 면적 %에 의해 결정하였다.
중증도 비율 (%)
최소 (±) 0 ~ 15
경미 (+) 15 ~ 45
중간 (++) 45 ~ 70
현저 (+++) 70 ~ 85
심각 (++++) 85~
표 3. 괴사 등급.
TUNEL 염색 결과 확인: 세포자살의 등급 (±, +, ++, +++, ++++)을 매기기 위해 종양의 전체 단면에 대해 조직학적 평가 후, 유핵 갈색 염색 세포는 양성 세포로 판독하여 양성 세포의 수를 계수하였다. 종양의 세포자살은 히스토그램 면적 (1 mm2) 당 양성 세포의 수에 의해 결정하였다. 양성 세포의 평균 개수를 계산하여 종양의 세포자살을 결정하였으며, 대응되는 중증도로 등급을 매겼다. 세포자살이 발생한 양성 세포의 개수를 단위 면적 (1 mm2) 당 양성 세포의 수를 측정하여 결정하였다.
중증도 세포자살 수
최소 (±) 5 ~ 10
경미 (+) 11 ~ 20
중간 (++) 21 ~ 30
현저 (+++) 31 ~ 40
심각 (++++) 41 ~
표 4. 세포자살 등급
통계학적 분석: 체중, 종양 부피, 종양 무게 및 조직병리학적 검사 등의 데이터에 대해 통계학적 프로그램 (Version 9.3, SAS Institute Inc., U.S.A.)을 이용해 통계학적 분석을 수행하였다. 등분산 검정에 바틀릿 검정을 적용하였다 (유의성 수준: 0.05). 균질한 데이터에 일원 분산 분석 (ANOVA)을 채택하였다. 유의한 경우, 다중 비교를 위해 듀넷의 t-검정을 적용하였다 (유의성 수준: 0.05 및 0.01, 단측). 재정의된 균질한 데이터에 크루스칼-왈리스 검정을 채택하였다. 유의한 경우, 다중 비교를 위해 스틸 검정을 적용하였다 (유의성 수준: 0.05 및 0.01, 단측).
결과
종양 부피 변화 (도 1, 3, 4, 5, 6 및 표 5): 음성 대조군 (G1)의 경우, 평균 종양 부피는 대조군 투여하기 전 및 투여한 후 29일차에 99 내지 1576 mm3였으며, 경시적으로 증가하는 경향이 관찰되었다 (도 1, 3 및 4)
군/용량 (mg/kg) 종양 부피 (mm3)
투여 후 경과 시간 (일수)
1 5 8 12 15 19 22 26 29
G1
0		 평균 99 160 248 366 531 735 897 1235 1576
S.D. 8 13 14 33 52 80 138 185 287
N 10 10 10 10 10 10 10 10 10
G2
150		 평균 99 152 200 240 243 306 376 466 603
S.D. 8 14 35 66 54 92 130 183 254
N 10 10 10 10 10 10 10 10 10
## ## ** ** ** ** **
G3
300		 평균 99 146 172 182 212 254 310 390 460
S.D. 8 16 14 24 54 90 131 177 228
N 10 10 10 10 10 10 10 10 10
## ## ** ** ** ** **
G4
600		 평균 99 149 176 179 209 249 288 331 407
S.D. 8 13 13 26 46 86 121 159 210
N 10 10 10 10 10 10 10 10 10
## ## ** ** ** ** **
G5
2		 평균 99 152 171 176 199 250 314 385 481
S.D. 8 11 26 37 51 79 127 152 216
N 10 10 10 10 10 10 10 10 10
## ## ** ** ** ** **
표 5. 관찰 기간 동안의 평균 종양 부피.
표 5에서, G1은 음성 대조군을 의미한다. G2, G3 및 G4는 OKN-007 처리 군을 의미한다. G5는 시스플라틴-처리 군을 의미한다. S.D는 표준편차를 의미한다. N은 동물의 수를 의미한다. ## p<0.01은 스틸 검정에 따른 음성 대조군 (G1) 대비 유의한 차이를 의미한다. ** p<0.01은 듀넷의 t-검정에 따른 음성 대조군 (G1) 대비 유의한 차이를 의미한다.
150 mg/kg 검사 물질 1 (OKN-007) 군 (G2)의 경우, 평균 종양 부피가 99 내지 603 mm3 범위로 감소하였으며, 모든 용량 수준들에서 특정 측정 시점에 음성 대조군 (G1) 대비 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다 (p<0.01: 투여 후 8일부터 29일까지). 도 1 및 4를 참조한다.
300 mg/kg 검사 물질 2 (OKN-007) 군 (G3)의 경우, 평균 종양 부피가 99 내지 460 mm3 범위로 감소하였으며, 모든 용량 수준들에서 특정 측정 시점에 음성 대조군 (G1) 대비 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다 (p<0.01: 투여 후 8일부터 29일까지). 도 1 및 5를 참조한다.
600 mg/kg 검사 물질 3 (OKN-007) 군 (G4)의 경우, 평균 종양 부피가 99 내지 407 mm3 범위로 감소하였으며, 모든 용량 수준들에서 특정 측정 시점에 음성 대조군 (G1) 대비 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다 (p<0.01: 투여 후 8일부터 29일까지). 도 1 및 5를 참조한다.
2 mg/kg 양성 대조군 (시스플라틴) 군 (G5)의 경우, 평균 종양 부피가 99 내지 481 mm3 범위로 감소하였으며, 모든 용량 수준들에서 특정 측정 시점에 음성 대조군 (G1) 대비 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다 (p<0.01: 투여 후 8일부터 29일까지). 도 1 및 6을 참조한다.
종양 무게 및 증식 저해율 (도 2, 3, 4, 5, 6 및 표 6): 29일에 종양을 적출해 무게를 측정하였다. 음성 대조군 (G1)의 경우, 평균 종양 무게는 0.92 g이었다 (종양 증식 저해율 (IR): 0.0%).
군/용량 (mg/kg) 종양 무게 (g) IR (%)
G1
0		 평균
S.D.
N		 0.92
0.34
10		 0.0
G2
150		 평균
S.D.
N		 0.47
0.28
10
** 		48.9
G3
300		 평균
S.D.
N		 0.43
0.27
10
** 		53.3
G4
600		 평균
S.D.
N		 0.38
0.24
10
** 		58.7
G5
2		 평균
S.D.
N		 0.37
0.27
10
** 		59.8
표 6. 종양 무게의 평균 데이터 및 종양 증식 저해율.
표 6에서, G1은 음성 대조군을 의미한다. G2, G3 및 G4는 OKN-007 처리 군을 의미한다. G5는 시스플라틴-처리 군을 의미한다. S.D는 표준편차를 의미한다. IR은 하기 등식을 참조한다: (종양 증식 저해율, %) = (1 - T/C) x 100, 여기서 T는 검사 물질 군 및 양성 물질 군의 평균 종양 무게이고, C는 음성 대조군에서의 평균 종양 무게이다. ** p<0.01은 듀넷의 t-검정에 따른 음성 대조군 (G1) 대비 유의한 차이를 의미한다. 도 2를 참조한다.
150 mg/kg 검사 물질 1 (OKN-007) 군 (G2)의 경우, 평균 종양 무게는 0.47 g이었다 (종양 증식 저해율 (IR): 48.9%). 음성 대조군과 2군 간에 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다. 도 2를 참조한다.
300 mg/kg 검사 물질 2 (OKN-007) 군 (G3)의 경우, 평균 종양 무게는 0.43 g이었다 (종양 증식 저해율 (IR): 53.3%). 음성 대조군과 3군 간에 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다. 도 2를 참조한다.
600 mg/kg 검사 물질 3 (OKN-007) 군 (G4)의 경우, 평균 종양 무게는 0.38 g이었다 (종양 증식 저해율 (IR): 58.7%). 음성 대조군과 4군 간에 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다. 도 2를 참조한다.
2 mg/kg 양성 대조군 (시스플라틴) 군 (G5)의 경우, 평균 종양 무게는 0.37 g이었다 (종양 증식 저해율 (IR): 59.8%). 음성 대조군과 5군 간에 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다. 도 2를 참조한다.
조직병리학적 검사 (표 7, 도 7-11): 적출한 고정된 종양을 특정 두께 (예 3 mm)로 자른 후 일반적인 조직 처리에 따라 처리하여, 파라핀으로 포매하여 블록을 만들고, 4-5 ㎛ 크기의 조직 단편으로 준비하였다. 그런 후, 헤마톡실린 및 에오신 (H&E) 염색 및 TUNEL 염색을 수행하였다.
적출한 종양의 괴사를 H&E 염색에 의해 평가하였다. 그 결과, 모든 처리 군들에서 종양 괴사의 중증도가 대부분 최소 중증도로 관찰되어 괴사 등급은 최소, 경미 및 중간 중증도가 배정되었다. 검사 물질 군들 (G2, G3 및 G4)과 양성 대조군 (시스플라틴)(G5) 간의 괴사 중증도는 음성 대조군 (G1)과 비교해 유의한 차이가 없었다.
세포자살은 TUNEL 분석으로 검증하였으며, 세포자살 세포를 그에 따라 계수하였다. 그 결과, 음성 대조군 (G1)과 비교해 모든 투여 군들에서 세포자살이 증가하였다. 세포자살이 모든 투여 군들에서 증가하였다.
군/용량
(mg/kg)		 N 세포자살 괴사
계수 수치*
(No./mm2)		 ± + ++ +++ ++++ ± + ++ +++ ++++
G1 / 0 10 65.3±27.7 9 1 0 0 0 5 4 1 0 0
G2 / 150 10 79.6±20.8## 9 1 0 0 0 5 3 2 0 0
G3 / 300 10 91.5±32.2## 8 2 0 0 0 7 2 1 0 0
G4 / 600 10 149.9±59.5## 3 5 2 0 0 6 2 2 0 0
G5 / 2 10 87.5±50.6 8 2 0 0 0 6 2 2 0 0
표 7. 조직병리학적 결과 요약.
표 7에서, G1은 음성 대조군을 의미한다. G2, G3 및 G4는 OKN-007 처리 군을 의미한다. G5는 시스플라틴-처리 군을 의미한다. S.D는 표준편차를 의미한다. N은 동물 수를 의미한다. ## p<0.01은 스틸 검정에 따른 음성 대조군 (G1) 대비 유의한 차이를 의미한다. *은 군 평균±S.D를 의미한다. ±는 최소 등급을 의미한다. +는 경미한 등급을 의미하고, ++는 중간 등급을 의미하고, +++는 현저한 등급을 의미하고, ++++는 심각한 등급을 의미한다. 괴사는 H&E 염색 분석으로 결정한다. 세포자살은 TUNEL 분석으로 결정한다.
음성 대조군 (G1)에서 평균 세포자살 수치는 65.3±27.7이었다. 도 7 및 표 7을 참조한다.
150 mg/kg 검사 물질 1 (OKN-007) 군 (G2)의 경우, 평균 세포자살 수치는 79.6±29.8이었다. 음성 대조군 (G1)에 대해 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다 (p<0.01). 도 8 및 표 7을 참조한다.
300 mg/kg 검사 물질 2 (OKN-007) 군 (G3)의 경우, 평균 세포자살 수치는 91.5±32.2였다. 음성 대조군 (G1)에 대해 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다 (p<0.01). 도 9 및 표 7을 참조한다.
600 mg/kg 검사 물질 3 (OKN-007) 군 (G4)의 경우, 평균 세포자살 수치는 149.9±59.5이었다. 음성 대조군 (G1)에 대해 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다 (p<0.01). 도 10 및 표 7을 참조한다.
2 mg/kg 양성 대조군 (시스플라틴)(G5)의 경우, 평균 세포자살 수치는 87.5±50.6이었다. 음성 대조군 (G1)에 대해 통계학적으로 유의한 차이가 없었다. 도 11 및 표 7을 참조한다.
그 결과, 음성 대조군 (G1)과 비교해, 검사 물질 600 mg/kg을 입을 통한 위관 영양법 (G4)으로 투여한 마우스가 전체 군들 중에서 세포자살 수치가 가장 높았으며, 그 다음은 300 mg/kg 검사 물질 군 (G3), 2 mg/kg 양성 대조군 (시스플라틴) 군 (G5) 및 150 mg/kg 검사 물질 군 (G2)이었다.
고찰
본 실험의 목적은 옆구리에 피하 이식된 인간 A549 폐암 이종이식편을 보유한 누드 마우스에서 경구 투여 후 검사 물질 OKN-007의 생체내 항암 효과를 평가하는 것이었다.
본 실험에서 수행된 인간 종양 이종이식 시스템은, 누드 마우스가 T-림프구의 결핍으로 인해 면역 거부 반응이 약한 것으로 알려져 있어, 암 요법의 실험 연구에 유용한 모델을 제공해준다.
종양 저해 효능은 종양 부피 및 무게를 측정하여 평가하였다. 종양 부피 및 무게 값이 음성 대조군 대비 감소하고 그 결과가 통계학적으로 유의한 것으로 간주된 경우에는, 검사 물질은 항-종양 요법에 유효한 것으로 간주하였다.
종양 부피의 경우, 음성 대조군 (G1)과 비교해, 최소부터 최대 종양 부피의 순서는 600 mg/kg 검사 물질 군 (G4), 300 mg/kg 검사 물질 군 (G3), 2 mg/kg 양성 대조군 (시스플라틴) 군 (G5), 및 150 mg/kg 검사 물질 군 (G2)이었다. 종양 부피는 종양 면적과 상관관계가 성립한다. 예를 들어, 종양 부피 감소와 관련한 데이터와 마찬가지로, OKN-007 처리 후 종양 면적 및/또는 종양 증식 면적은 감소한다.
종양 무게의 경우, 2 mg/kg 양성 대조군 (시스플라틴) 군 (G5)이 가장 낮았다. 이는, 양성 대조군이 종양 증식에 대해 종양 증식 저해 효과가 있다는 것을 의미한다. 다음으로 낮은 종양 무게는 600 mg/kg 검사 물질 군 (G4), 300 mg/kg 검사 물질 군 (G3), 150 mg/kg 검사 물질 군 (G2)이었으며, 음성 대조군이 가장 높았다.
종양 증식 저해율과 관련하여, 음성 대조군 (0.0% 저해)과 비교해, 최대에서 최저 순서는 2 mg/kg 양성 대조군 (시스플라틴) 군 (G5)(59.8% 저해)였으며, 그 다음으로 600 mg/kg 검사 물질 군 (G4) (58.7% 저해), 300 mg/kg 검사 물질 군 (G3) (53.5% 저해) 및 150 mg/kg 검사 물질 군 (G2) (48.9% 저해)이었다.
아울러, 전체 실험 군들에서 적출한 종양에 대한 통계학적 분석 및 무게 측정 데이터는 통계학적으로 유의한 것으로 간주되었다.
세포자살을 TUNEL 분석으로 평가하였으며, 분석 결과 음성 대조군과 비교해 모든 투여 군들에서 세포자살이 증가하였다. 음성 대조군과 비교해 600 mg/kg 검사 물질 군 (G4)이 전체 군들에서 세포자살 활성 수준이 가장 높았으며, 그 다음이 300 mg/kg 검사 물질 군 (G3), 2 mg/kg 양성 대조군 (시스플라틴) 군 (G5) 및 150 mg/kg 검사 물질 군 (G2)이었다. 양성 대조군을 제외한 검사 군들 모두 통계학적으로 유의한 것으로 간주되었다.
검사 물질의 종양 증식 저해 효과는 용량-의존적인 것으로 결정되었으며, 검사 물질은 종양 증식 저해 효과를 가진 것으로 간주되었다.
결론적으로, 종양 증식에 대한 검사 물질 (OKN-007)의 용량-의존적인 저해 효과가 누드 마우스의 인간 폐암 A549 이종이식편에서 관찰되었다. 임상적으로 관련한 항암 및/또는 항종양 효과를 유도하기 위해 인간 적용에 OKN-007을 임상적으로 적절한 양으로 사용할 수 있다. 예를 들어, OKN-007은 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일 범위의 농도에서 인간 개체에 전신, 정맥내 또는 국소 투여로 이용할 수 있다. OKN-007은 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일 농도 범위로 인간 개체에 경구 또는 장 투여로 이용할 수 있다.
* * *
본 명세서에 인용된 모든 특허, 특허 출원, 간행물, 제품 설명서 및 프로토콜은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 용어가 상충하는 경우 본 발명을 우선한다.
기술된 본 발명의 내용은 전술한 혜택 및 이점을 달성하도록 잘 계획된 것이 자명할 것이나, 본원에 개시된 내용이 본원에 기술된 구체적인 구현예들에 의해 그 범위가 한정되는 것은 아니다. 개시된 내용은 이의 사상으로부터 벗어나지 않으면서 쉽게 수정, 변형 및 변경될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 당해 기술 분야의 당업자라면 일상적인 실험을 넘어서지 않고도 본원에 기술된 구체적인 구현예들에 대한 여러가지 균등물을 인지하거나 또는 알아낼 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 첨부된 청구항에 의해 망라되는 것으로 의도된다.
다양한 간행물들과 핵산 및 아미노산 서열 등재 번호가 본원에서 인용되며, 이들 내용과 전체 서열은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.

Claims (21)

  1. 2,4-다이설포닐 α-페닐 tert-부틸 니트론 (2,4-ds-PBN) 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여하는 것을 포함하고, 상기 치료학적 유효량이 암 또는 종양의 증식을 감소시키는, 치료가 필요한 개체에서 암 또는 종양을 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 암이 비-소 세포성 폐 암종인, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량이 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량이 정맥내 주사 또는 동맥내 주사를 통해 개체에 전달되는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량이 장내 투여 또는 경구 투여를 통해 개체에 전달되는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암 또는 종양의 부피, 면적 또는 이들의 조합을 측정하는 것을 더 포함하는, 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 암 부피 또는 종양 부피가 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여한 후 적어도 약 50% 감소하는, 방법.
  8. 제6항에 있어서,
    상기 암 또는 종양의 증식이 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여한 후 적어도 약 40% 감소하는, 방법.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    세포자살성 암 세포 또는 세포자살성 종양 세포의 수를 측정하는 것을 더 포함하는, 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 세포자살성 암 세포 또는 세포자살성 종양 세포의 수가 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 투여한 후 적어도 약 15% 증가하는, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량이 개체에 주당 1회 이상으로 전달되는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    항암제 또는 항종양제를 치료학적 유효량으로 개체에 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 항암제 또는 항종양제가 화학치료제, 면역치료제, 사이토카인, 항-혈관신생제, 티로신 키나제 저해제 (TKI), 세포자살-유도제, 항암 항체 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    추가 요법의 투여를 더 포함하고, 상기 추가 요법이 항종양 요법, 항암 요법, 화학요법, 표적 요법, 면역요법, 방사선 요법, 고주파 절제 요법, 수술, 종양 치료 분야 (TTFields) 기구를 이용한 요법 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  15. 2,4-다이설포닐 α-페닐 tert-부틸 니트론 (2,4-ds-PBN) 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 치료학적 유효량으로 포함하며, 상기 치료학적 유효량이 암 또는 종양의 증식을 감소시키는 양으로 존재하는, 개체에서 암 또는 종양을 치료하기 위한 약학적 조성물.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 약학적 조성물이 경구 투여 또는 장내 투여를 위한 정제, 환제, 캡슐제, 겔, 액체, 시럽, 슬러리 또는 현탁제 형태인, 약학적 조성물.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량이 약 5 mg/체중 kg/일 내지 약 1,000 mg/체중 kg/일인, 약학적 조성물.
  18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물이 하나 이상의 코팅 층을 포함하고, 하나 이상의 코팅 층이 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 캡슐화하고 있으며, 지정된 pH 범위에서 용해되는, 약학적 조성물.
  19. 제15항에 있어서,
    상기 약학적 조성물이 정맥내 주사 또는 동맥내 주사용 용액 또는 액체 형태인, 약학적 조성물.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 2,4-ds-PBN 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료학적 유효량이 약 10 mg/체중 kg/일 내지 약 500 mg/체중 kg/일인, 약학적 조성물.
  21. 제15항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암이 비-소 세포성 폐 암종인, 약학적 조성물.
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