KR20220110537A - 항-trem2 항체 사용 방법 - Google Patents

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일라리아 타시
아르논 로젠탈
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산티아고 비베로스 살라자르
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알렉터 엘엘씨
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Abstract

본 명세서는 질환 예방, 질환에 걸릴 위험을 줄이고, 또는 질환 치료가 이를 필요로 하는 개체에서 이를 위해 항-TREM2 항체의 사용에 전반적으로 관계한다.

Description

항-TREM2 항체 사용 방법
관련 출원들에 대한 교차-참조
본 출원은 2019년 12월 5일자로 제출된 U.S. 가출원 번호 62/944,298 및 2020년 4월 3일자로 제출된 U.S. 가출원 번호 63/005,110을 우선권으로 주장하며, 이의 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다.
ASCII 텍스트 화일로 서열 목록 제출
ASCII 텍스트 파일로 다음과 같이 제출된 내용은 전체 내용이 본원에 참조자료로 편입된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독 가능 형태 (CRF)(화일명: 735022003240SEQLIST.TXT, 기록일: 2020년 12월 2일, 크기: 88 KB).
본 명세서의 분야
본 명세서는 항-TREM2 항체의 치료요법적 용도에 관계한다.
본 명세서의 배경
축삭 회전타원체 및 색소침착된 신경아교세포를 동반한 성인-발병 백색질뇌병증 (ALSP), 소아-발병 백색질뇌병증은 희귀한 드문 치명적인 신경 질환으로, 앓고 있는 개체의 중추 신경계의 "백질"을 변경시킨다 (Freeman et al. (2009) "Adult onset leukodystrophy with neuroaxonal spheroids: Clinical, neuroimaging and neuropathologic observations." Brain Pathol. 19(1): 39-47 PMID: 18422757; Rademakers et al. (2011) "Mutations in the colony stimulating factor 1 receptor (CSF1R) gene cause hereditary diffuse leukoencephalopathy with spheroids." Nat Genet 44(2):200-205 PMID: 22197934; Oosterhof et al. (2019) "Homozygous Mutations in CSF1R Cause a Pediatric-Onset Leukoencephalopathy and Can Result in Congenital Absence of Microglia." Am J Hum Genet 104(5):936-947. PMID: 30982608). 이전에, ALSP는 두 가지 별개 병태, 즉, 유전성 미만성 백색질뇌병증(HDLS) 및 가족성 색소성 정색성 백색질뇌병증(POLD)로 간주되었다. 그러나, HDLS와 POLD가 있는 환자들은 모두 착색된 신경교 세포와 회전타원체를 가질 수 있으며, HDLS와 POLD는 ALSP에 포괄되는 동일한 질병 스펙트럼의 일부로 간주된다 (Nicholson et al. (2013) “CSF1R mutations link POLD and HDLS as a single disease entity.”Neurology 80(11): 1033-1040. PMID: 23408870).
ALSP 및 소아-발병 백색질뇌병증 환자들은 특징적으로 소위 회전타원체로 불리는 뇌의 축삭에 부종을 갖는다. 최근 연구에 따르면, ALSP 및 소아-발병 백색질뇌병증에 연계된 CSF1R 유전자의 돌연변이가 있다(Rademakers et al. (2011); Nicholson et al. (2013); Oosterhof et al. (2019); Guo et al. (2019) “Bi-allelic CSF1R Mutations Cause Skeletal Dysplasia of Dysosteosclerosis-Pyle Disease Spectrum and Degenerative Encephalopathy with Brain Malformation.”Am J Hum Genet. 104(5):925-935. PMID: 30982609).
인간 CSF1R 유전자는 콜로니-자극 인자 1 수용체 (CSF1R)로 불리는 단백질을 인코드한다. 동종이량체 당단백질인 콜로니-자극 인자-1 (CSF-1)은 CSF1R에 대한 일차 리간드다 (Sherr et al. (1988) "Colony-stimulating factor-1 receptor (c-fms)." J Cell Biochem 38(3):179-187 PMID: 2852667). CSF1R은 유형 III 티로신 키나제 성장 인자 수용체로써, PDGF 수용체 패밀리에 속한다. 상기 수용체 패밀리의 구성원은 면역글로불린-유사 도메인, 막경유 도메인, 및 단백질 키나제 도메인으로 구성된 단백질 구조를 갖는다. 특히, CSF1R은 고도로 글리코실화된 세포외 리간드-결합 도메인, 막경유 도메인, 및 세포내 단백질 티로신-키나제 도메인으로 구성된다. CSF1R은 대식세포를 비롯한 각종 세포 유형의 외측 막에서 발견되며, 콜로니 자극 인자-1 (CSF-1)의 성장 인자 수용체로 작용한다 (Pridans et al. (2013) "CSF1R mutations in hereditary diffuse leukoencephalopathy with spheroids are loss of function." Sci Rep 3: 3012 PMID: 24145216; Ridge et al. (1990) "FMS mutations in myelodysplastic, leukemic, and normal subjects." 87(4): 1377-1380 PMID: 2406720; Oosterhof et al; Rademaker et al). CSF1R을 통한 신호전달은 미세신경아교 세포를 비롯한 대식세포의 증식 및 발달을 조절하는 것으로 나타났다. 특히, CSF1R 신호전달은 뇌의 미세신경아교세포를 비롯한, 대부분의 성숙한 대식세포의 생성을 담당할 수 있다. CSF1R 결핍은 뇌의 미세아교세포 발달에 부정적인 영향을 미친다 (Swerdlow et al. (2009) "Autosomal dominant subcortical gliosis presenting as frontotemporal dementia." Neurology 72(3):260-267 PMID: 19153373; Baba et al. (2006) "Hereditary diffuse leukoencephalopathy with spheroids: clinical, pathologic and genetic studies of a new kindred" Acta Neuropathol 111(4):300-311. PMID: 16523341; Oosterhof et al.; Rademaker et al.; Guo et al., 2019).
현재 ALSP, 소아-발병 백색질뇌병증 및 관련 질환들을 앓고 있는 환자를 위한 효과적인 치료 옵션이 없다. 사용 가능한 치료법은 이 질환을 치료하는 것이 아니라, 이 질환의 증상들을 관리하는 것이다. 따라서, ALSP, 소아-발병 백색질뇌병증, 및 관련 질환들을 앓고 있는 환자에 대한 치료 옵션을 제공하고, 그 결과를 개선하기 위한 새로운 치료법이 당업계에 필요하다.
특허 출원 및 공보를 비롯한, 본원에 인용된 모든 참고 문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 명세서의 요약
본 명세서는 CSF1R-결핍 질환이 있는 개체를 치료하는 방법에 일반적으로 관련되며, 이 방법은 이 개체에게 TREM2 단백질에 결합하는 항체를 투여하는 것을 포함하며, 여기에서 상기 항체는 효현제(agonist)다.
본 명세서의 특정 측면들은 효현제인 항-TREM2 항체가 CSF1R 억제제 존재 하에서 성장한 인간 대식 세포 및 대조군 IgG와 비교하였을 때, CSF1R 억제제 존재하에서 성장한 인간 대식세포의 생존성을 상당히 개선시켰다는 발견에 적어도 일부분 기초한다 (가령, 실시예 2 참고).
따라서, 한 측면에서, 본 명세서는 CSF1R-결핍 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공하며, 이 방법은 이를 필요로 하는 개체에게 치료요법적으로 효과량의 TREM2 단백질에 결합하는 항체를 투여하는 것을 포함하며, 이때 상기 항체는 효현제이며, 이때 상기 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 유도한다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드를 TREM2 단백질에 결합시킴으로써 유도된 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드가 TREM2 단백질에 결합하는 것을 차단시키지 않고, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드가 TREM2 단백질에 결합하는 것을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드는 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 대장균(E. coli) 세포, 아폽토시스 세포, 핵산, 음이온성 지질, 음이온성 지질, APOE, APOE2, APOE3, APOE4, 음이온성 APOE, 음이온성 APOE2, 음이온성 APOE3, 음이온성 APOE4, 지질화된 APOE, 지질화된 APOE2, 지질화된 APOE3, 지질화된 APOE4, 쌍성이온성 지질, 음전하를 띤 인지질, 포스파티딜세린, 설파타이드, 포스파티딜콜린, 스핑고미엘린, 막 인지질, 지질화된 단백질, 단백질 지질, 지질화된 펩티드, 지질화된 아밀로이드 베타 펩티드, 및 이들의 임의의 조합. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 TREM2의 세포 표면 클러스터링 부재 하에서 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 TREM2의 세포 표면 클러스터링을 유도함으로써 또는 유지시킴으로써, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다.
일부 구체예들에서, 상기 TREM2 단백질은 포유류 단백질 또는 인간 단백질이다. 일부 구체예들에서, 상기 TREM2 단백질은 야생형 단백질, 자연 발생적 변이체, 또는 질환 변이체다.
일부 구체예들에서, 상기 항체에 의해 유도되는 또는 강화되는 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: (a) DAP12에 TREM2 결합; (b) DAP12 인산화; (c) Syk 키나제의 활성화; (d) IFN-β, IL-1α, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, CD86, MCP-1/CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCR2, CXCL-10, Gata3, IL-20 패밀리 구성원, IL-33, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, CSF-1, OPN, CD11c, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, 및 IL-23으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 전-염증성 매개체의 변조(modulation), 임의선택적으로 이때 상기 변조는 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼(Kupffer) 세포, 및 미세신경아교 세포로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 세포에서 발생하고; (e) DAP12/TREM2 복합체로 Syk의 회동; (f) 하나 또는 그 이상의 TREM2-의존적 유전자들의 활성 증가, 임의선택적으로 이때 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2-의존적 유전자들은 활성화된 T-세포 (NFAT) 전사 인자의 핵 인자로 구성되며; (g) 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 미세신경아교세포, M1 미세신경아교세포, 활성화된 M1 미세신경아교세포, 및 M2 미세신경아교세포, 또는 이의 임의의 조합들의 증가된 생존; (h) CD83, CD86 MHC 클라스 II, CD40, 및 이의 임의의 조합으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 자극 분자들의 변조된 발현, 임의선택적으로 이때 CD40은 수지상 세포, 단핵구, 대식세포, 또는 이의 임의의 조합에서 발현되며, 및 임의선택적으로 이때 상기 수지상 세포는 골수-유래된 수지상 세포를 포함하고; (i) 기억력 증가; 그리고 (j) 인지 결핍 감소.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 CSF1 부재 하에서 배양된 대식세포 생존을 촉진시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 생체내에서 가용성 TREM2의 혈장 수준을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 TREM2의 분열을 차단시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 처리를 받지 않은 개체 또는 대조군 항체로 처리된 개체와 비교하였을 때, 개체에서 CSF1R의 발현을 유도하고 또는 CSF1R의 수준을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, CSF1R의 발현 유도 또는 CSF1R의 수준 증가는 해당 개체의 뇌에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 개체로부터 얻은 샘플에서 CSF1R의 수준을 측정하는 단계를 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 뮤린 항체, 인간화된 항체, 이중특이적 항체, 다가(multivalent) 항체, 콘쥬게이트화된 항체, 또는 키메라 항체다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 단일클론성 항체다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 124-153내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 124-153에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 129-153내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 129-153에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 140-149내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 140-149에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 149-157내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 149-157에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 153-162내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 153-162에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들에서 하나 또는 그 이상의 아미노산에 결합한다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 1의 D140, L141, W142, F143, P144, E151, D152, H154, E156, 및 H157로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열 식별 번호: 1의 D140, L141, W142, F143, P144, E151, D152, H154, E156, 및 H157로 구성된 군에서 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유류 TREM2 단백질 상의 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기에 결합한다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 그리고 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 이때 HVR-H1은 아미노산 서열 YAFSSQWMN (서열 식별 번호: 34)을 포함하고, HVR-H2는 아미노산 서열 RIYPGGGDTNYAGKFQG (서열 식별 번호: 35)을 포함하고, HVR-H3은 아미노산 서열 ARLLRNQPGESYAMDY (서열 식별 번호: 31)을 포함하고, HVR-L1은 아미노산 서열 RSSQSLVHSNRYTYLH (서열 식별 번호: 41)을 포함하고, HVR-L2는 아미노산 서열 KVSNRFS (서열 식별 번호: 33)을 포함하고, 그리고 HVR-L3은 아미노산 서열 SQSTRVPYT (서열 식별 번호: 32)을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 식별 번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 그리고 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 이때 HVR-H1은 아미노산 서열 YAFSSDWMN (서열 식별 번호: 36)을 포함하고, HVR-H2는 아미노산 서열 RIYPGEGDTNYARKFHG (서열 식별 번호: 37)을 포함하고, HVR-H3은 아미노산 서열 ARLLRNKPGESYAMDY (서열 식별 번호: 38)을 포함하고, HVR-L1은 아미노산 서열 RTSQSLVHSNAYTYLH (서열 식별 번호: 39)을 포함하고, HVR-L2는 아미노산 서열 KVSNRVS (서열 식별 번호: 40)을 포함하고, 그리고 HVR-L3은 아미노산 서열 SQSTRVPYT (서열 식별 번호: 32)을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 식별 번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 단편이며, 상기 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편이다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 IgG 클라스, IgM 클라스, 또는 IgA 클라스의 항체다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 IgG 클라스의 항체이며, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소형(isotype)을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 인간 IgG1 아이소형을 갖고, Fc 영역에서 잔기 위치 P331S 및 E430G에 아미노산 치환을 포함하며, 이때 잔기 번호매김은 EU 번호매김에 따른다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 다음을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 43의 아미노산을 포함하는 중쇄, 및 서열 식별 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는 (b) 서열 식별 번호: 44의 아미노산을 포함하는 중쇄, 및 서열 식별 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 다음을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 45의 아미노산을 포함하는 중쇄, 및 서열 식별 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는 (b) 서열 식별 번호: 46의 아미노산을 포함하는 중쇄, 및 서열 식별 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
일부 구체예들에서, 상기 개체는 인간이다. 일부 구체예들에서, CSF1R-결핍 질환은 축삭 회전타원체 및 색소침착된 아교세포를 동반한 성인-발병 백색질뇌병증 (ALSP)이다. 일부 구체예들에서, CSF1R-결핍 질환은 소아-발병 백색질뇌병증이다.
일부 구체예들에서, 상기 개체는 CSF1R 유전자에 돌연변이가 있다. 일부 구체예들에서, 상기 돌연변이는 세포내 단백질 티로신 키나제 도메인을 인코딩하는 CSFR1 유전자의 일부분에 있다. 일부 구체예들에서, 상기 돌연변이는 CSFR1 유전자의 엑손 11-21중 임의의 하나에 있다. 일부 구체예들에서, 상기 개체는 CSFR1 유전자에서 상기 돌연변이에 있어서 이형접합성이다. 일부 구체예들에서, 상기 개체는 CSFR1 유전자에서 상기 돌연변이에 있어서 동형접합성이다.
일부 구체예들에서, 상기 개체는 백색질뇌병증, 축삭 손상, 축삭 회전타원체, 미엘린 손상, 수초(myelin sheaths) 상실, 신경아교종, 자가형광 지질-가득한 대식세포, 및 축삭 파괴로 구성된 군에서 선택된 특징적 질환이 있거나, 또는 이러한 질환에 걸릴 위험에 처해있다. 일부 구체예들에서, 상기 개체는 대뇌백질의 이상, 행동변화, 치매, 파킨슨병, 발작, 운동 실어증, 필기불능증, 계산불능증, 행위상실증, 운동완만증, 느린 움직임, 중추 신경계 수초탈락, 낙담, 우울, 전두엽 치매, 신경아교종, 반사-과다, 반사-증가, 족저신전반응, 편마비, 사지마비, 백색질뇌병증, 기억 손상, 건망증, 기억 상실, 기억력 문제, 기억력 저하, 무언증, 말을 하지 못함, 소리를 낼 수 없음, 중추신경계의 신경세포 소실, 뇌세포 소실, 자세 불안정, 균형 장애, 빠른 진행성, 경직, 근육 경직, 발끌림 보행(shuffling gait), 종종 걸음(shuffled walk), 피라미드 징후, 경련, 비-자발적 근육 강직, 비자발적 근육 수축, 비자발적 근육 경련, 성격 문제, 집행 기능 장애로 구성된 군에서 선택된 증상이 있거나, 또는 이러한 증상을 갖게 될 위험에 처해 있다.
일부 구체예들에서, 상기 개체는 전두측두엽 치매(FTD), 피질기저 증후군(CBS), 피질기저 퇴행(CBD), 알츠하이머 질환(AD), 다발성 경화증(MS), 피질하 경색을 동반한 비-정형 대뇌 상염색체 우성 동맥병증, 백색질뇌병증 (CADASIL), 및 파킨슨 질환 (PD)으로 구성된 군에서 선택된 질환을 가진다.
한 측면에서, 본 명세서는 항-TREM2 항체를 투여받은 개체의 치료를 모니터링하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 하나 또는 그 이상의 투여분량의 항-TREM2 항체를 제공받기 전과 제공받은 후, 해당 개체로부터 얻은 샘플 안에 CSF1R의 수준을 측정하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 이 샘플 안에 있는CSF1R의 수준을 기초하여, 해당 개체에서 항-TREM2 항체의 활성을 평가하는 단계를 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 샘플은 해당 개체의 뇌척수액 또는 해당 개체의 혈액에서 얻은 샘플이다.
상기 기재된 다양한 구체예들의 특성 중 하나, 일부 또는 전부는 본 발명의 다른 구체예들을 형성하기 위해 조합될 수 있음을 이해해야 한다. 본 발명의 이들 및 다른 측면은 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명의 이들 및 다른 구체예들은 하기의 상세한 설명에 의해 추가로 설명된다.
도면의 간단한 설명
도 1은 M-CSF의 회수 후, 인간 대식세포 생존력에서 항-TREM2 효현성 항체의 효과를 보여준다. 특히, 도 1은 M-CSF의 회수 후, 인간 대식세포의 세포 생존력에서 배수 변화를 보여준다. 채워진 삼격형은 M-CSF (50 ng/mL) 단독으로 처리된 인간 대식세포를 나타내고, 개방 삼각형은 IgG1 (10μg/mL)로 처리된 인간 대식세포를 나타내고, 개방 원은 AL2p-58 huIgG1 PSEG (1μg/mL)으로 처리된 인간 대식세포를 나타내고, 그리고 닫힌 원은 AL2p-58 huIgG1 PSEG (10μg/mL) 인간 대식세포를 나타낸다. N = 각 치료에 대한 3명의 공여자; 오차 막대는 평균(SEM)의 표준 오차를 나타낸다.
도 2는 CSF1-수용체 (CSF1R) 억제 후, 인간 대식세포 생존력에서 항-TREM2 효현성 항체의 효과를 보여준다. 특히, 도 2는 CSF1R 억제제 (PLX3397)로 처리된 인간 대식세포의 세포 생존력에서 배수 변화를 보여준다. 닫힌 삼각형은 IgG1 (10μg/mL) 단독으로 처리된 인간 대식세포를 나타내고, 열린 삼각형은 PLX3397 (30 nM) 단독으로 처리된 인간 대식세포를 나타내고, 열린 원은 AL2p-58 huIgG1 PSEG (10μg/mL) 단독으로 처리된 인간 대식세포를 나타내고, 그리고 채워진 원은 PLX3397 (30 nM) 및 AL2p-58 huIgG1 PSEG (10μg/mL)으로 처리된 인간 대식세포를 나타낸다. N = 각 치료에 대한 3명의 공여자; 오차 막대는 평균(SEM)의 표준 오차를 나타낸다.
도 3은 인간이 아닌 영장류에서 CSF1R의 발현 단백질에 대한 항-TREM2 효현성 항체의 효과를 보여준다. 대조군 IgG로 처리한 후 또는 농도를 증가시키면서 AL2p-58 huIgG1 PSEG로 처리한 후, 전두엽의 샘플에서 CSF1R 단백질 발현에 있어서 변화를 나타내며; p 값은 스튜던트(students) t-검정으로 산출되었다.
도 4는 AL2p-58 huIgG1 또는 대조군을 투여받은 인간이 아닌 영장류의 전두엽 및 해마에서 CSF1R 단백질의 농도를 보여준다. 인간이 아닌 영장류에게 총 5회 투여분량 (N = 그룹당 5 마리)으로 주당 일회 대조군 또는 AL2p-58 huIgG1을 정맥내로 투여하였다. AL2p-58 huIgG1 또는 대조군을 5회차 투여 후 48 시간 시점에서 전두엽 (좌측 패널) 및 해마 (우측 패널)에서 CSF1R 단백질의 농도 (CSF1R 단백질 ng/총 단백질 mg)가 제공된다.
본 명세서의 상세한 설명
TREM2의 효현제를 투여함으로써, CSF1R 신호전달의 결핍 또는 기타 결함과 관련된 장애 및 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 이러한 질환 또는 장애에는 CSF1R에서 돌연변이와 연합된 질환, 이를 테면, 소아-발병 백색질뇌병증; 축삭 회전타원체 및 색소침착된 아교세포를 동반한 성인-발병 백색질뇌병증 (ALSP); 회전타원체를 갖는 백색질뇌병증, 회전타원체를 갖는 미만성 유전; 신경축삭 회전타원체를 갖는 성인-발병 백질영양증; 신경축삭 회전타원체를 갖는 상염색체 우성 백색질뇌병증; 축삭 회전타원체를 갖는 유전성 미만성 백색질뇌병증(HDLS); 신경축삭 대뇌백질위축증; 색소성 정색성 대뇌백질위축증; 그리고 가족성 색소성 정색성 백색질뇌병증 (POLD)이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. TREM2의 효현제에는 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 유도하는, 및/또는 하나 또는 그 이상의 리간드가 TREM2에 결합함으로써 유도되는 하나 또는 그 이상의 활성을 강화시키는 항-TREM2 항체가 내포된다. 예를 들면, 항-TREM2 효현성 항체는 가용성 TREM2를 감소시킬 수 있고, 비장 티로신 키나제 (Syk) 인산화를 유도할 수 있고, TREM2가 DAP12에 결합을 유도할 수 있고, DAP12 인산화를 유도할 수 있고, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및 미세신경아교성 세포 (미세신경아교세포)의 증식, 생존, 및/또는 기능을 증가시킬 수 있고, 또는 TREM2-의존적 유전자들의 활성 및/또는 발현을 증가시킬 수 있다.
정의
본원에 이용된 바와 같이, 용어 “방지하는”에는 특정 질환, 장애, 또는 병태에 걸릴 소향이 있거나, 의심되거나, 또는 발병할 위험이 있지만, 그러나 아직 해당 질환, 장애, 또는 병태로 진단을 받지 않은 개체에서 이러한 질환, 장애, 또는 병태 발병을 지연하는 것을 비롯하여, 이러한 질환, 장애, 또는 병태의 발생 또는 재발에 대하여 예방을 제공하는 것이 내포된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 질환, 장애, 또는 병태가 발병할 "위험이 있는(at risk)" 개체는 검출가능한 질환 또는 질환의 증상을 갖거나 또는 갖지 않을 수 있으며, 본 명세서에 기재된 치료 방법 전, 검출가능한 질환 또는 질환의 증상을 나타내거나 또는 나타내지 않을 수 있다. "위험에 처한"이란 개체가 본 명세서에 기재되고, 당업계에 공지된 바와 같이, 특정 질환, 장애 또는 병태의 발병과 상관관계가 있는 측정가능한 매개변수인 하나 또는 그 이상의 위험 인자를 갖는다는 것을 의미한다. 하나 또는 그 이상 위험 인자를 갖는 개체는 하나 또는 그 이상 위험 인자를 보유하지 않는 개체보다 특정 질환, 장애 또는 병태의 발병 가능성이 더 높다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료(treatment)"는 임상 병리 과정 동안 치료되는 개체의 자연적 과정을 변경시키도록 기획된 임상적 개입을 의미한다. 치료의 바람직한 효과에는 특정 질환, 장애 또는 병태의 진행 속도 감소, 병리학적 상태의 개선 또는 완화, 또는 개선된 예후가 내포된다. 예를 들어, 특정 질환, 장애 또는 병태와 관련된 하나 또는 그 이상의 증상이 완화되거나 또는 사라진 경우, 개체는 성공적으로 "치료"된다.
특정 구체예들에서, "효과량"이란 필요한 치료 또는 예방 결과 달성에 필요한 투여량 및 필요한 시간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 효과량은 한 번 또는 그 이상의 투여로 제공될 수 있다. 본 명세서의 효과량은 질환 상태, 개체의 연령, 성별, 및 체중과 같은 인자, 및 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 치료의 능력에 따라 달라질 수 있다. 효과량이란 해당 치료의 임의의 독성 또는 해로운 효과를 능가하는 양을 또한 말한다. 예방적 사용의 경우, 유익하거나 또는 원하는 결과에는 해당 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동적 증상, 합병증 및 중간 병리학적 표현형을 비롯한, 해당 질환의 발병 동안 해당 질환의 위험 제거 또는 감소, 중증도 감소 또는 질환 발병 지연이 내포된다. 치료요법적 사용의 경우, 유익하거나 원하는 결과에는 해당 질환으로 인한 하나 또는 그 이상의 증상 감소, 해당 질환으로 고통받는 사람들의 삶의 질 향상, 해당 질환 치료에 필요한 다른 약물의 복용량 감소, 또다른 약물의 효과 향상, 이를 테면, 해당 질환을 해당 질환의 진행 지연, 및/또는 생존의 연장과 같은 임상 결과가 내포된다. 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 효과량은 직접 또는 간접적으로 예방적 또는 치료요법적 처리를 이루는데 충분한 양이다. 임상 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물의 효과량은 또다른 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물과 함께 달성되거나 또는 달성되지 않을 수 있다. 따라서, "효과량"은 하나 또는 그 이상의 치료요법제를 투여하는 맥락에서 고려될 수 있으며, 단일 제제가 주어진 효과량에서 만약 하나 또는 그 이상의 다른 제제와 함께 병용한다는 경우, 원하는 결과가 되거나, 또는 이를 성취할 수 있다.
치료, 예방 또는 위험 감소를 목적으로 하는 "개체"는 인간, 가축 및 농장 동물, 동물원, 스포츠 또는 애완 동물, 이를 테면, 개, 말, 토끼, 소, 돼지, 햄스터, 저빌, 쥐, 흰 족제비, 쥐, 고양이 및 이와 유사한 것들을 비롯한, 포유동물로 분류되는 모든 동물을 의미한다. 일부 구체예들에서, 상기 개체는 인간이다.
본원에 사용된 바와 같이, 또다른 화합물 또는 조성물과 "병용하여(in conjunction)" 투여하는 것은 동시 투여 및/또는 상이한 시간에서의 투여가 내포된다. 병용 투여는 또한 상이한 투여 빈도 또는 간격을 포괄하고, 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로를 사용하는 것을 비롯한, 공동-제형로서의 투여 또는 별개의 조성물로서의 투여를 또한 포괄한다.
용어 “면역글로불린” (Ig)은 본원에서 “항체”와 호환 사용된다. 본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로 단일클론 항체, 다중클론 항체, 적어도 두 개의 무손상 항체로부터 형성된 다중특이성 항체 (예를 들어, 이중특이성 항체), 그리고 원하는 항원 결합 활성을 나타내는 한, 항체 단편을 포괄한다.
기본 4-쇄 항체 단위는 2 개의 동일한 경쇄 (L)와 2 개의 동일한 중쇄(H)로 구성된 이종사량체(heterotetrameric)의 당단백질이다. VH와 VL의 쌍형성(pairing)은 함께 하나의 항원-결합 부위를 형성한다. 항체의 상이한 클라스의 구조 및 성질은 가령, Basic and Clinical Immunology, 8th Ed., Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6을 참고한다.
임의의 척추동물 종으로부터의 L 쇄는 그들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 카파(“κ”) 및 람다(“λ”)라고 불리는 2 개의 명확하게 구별되는 유형 중 하나로 할당될 수 있다. 이들 중쇄 (CH)의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 면역글로블린은 상이한 클래스(classes) 또는 아이소형으로 할당될 수 있다. 면역글로블린에는 5 가지 클래스가 있다: 차례로, 알파 (“α"), 델타 (“δ”), 입실론 (“ε”), 감마 (“γ”) 및 뮤 (“μ”) 로 명시된 중쇄를 갖는 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM. γ 및 α 클래스는 CH 서열 및 기능에서 상대적으로 작은 차이에 근거하여 추가로 서브클래스로 분류되는데, 가령, 인간은 다음의 서브클래스(아이소형)를 발현시킨다: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2. 상이한 부류의 면역 글로불린의 하위단위 구조 및 3 차원 배열은 잘 알려져 있고, 예를 들면, Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders Co., 2000)에서 전반적으로 기술된다.
"고유 항체"란 통상 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질로써, 2개의 동일한 경쇄 (L)와 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된다. 각 경쇄는 한 개 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연계되며,이황화 결합의 수는 상이한 면역글로불린 아이소형의 중쇄 간에 가변적이다. 각 중쇄와 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 쇄-내 이황화 결합 다리를 갖는다. 각 중쇄는 한 단부에 가변 도메인 (VH)과 이어서 몇 개의 불변 도메인을 갖는다. 각 경쇄는 한 단부에 가변 도메인(VL)과 이의 다른 단부에 불변 도메인을 갖고; 상기 경쇄의 불변 도메인은 상기 중쇄의 제 1 불변 도메인과 나란히 있으며, 경쇄 가변 도메인은 해당 중쇄의 가변 도메인과 나란히 있다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성한다고 여겨진다.
“단리된(isolated)” 항체, 이를 테면, 본 명세서의 단리된 항-TREM2 항체는 이들의 생성 환경 (가령, 자연적으로 또는 재조합적으로) 구성요소로부터 확인된, 분리된 및/또는 회수된 것이다. 바람직하게는, 상기 단리된 폴리펩티드는 이의 생산 환경으로부터 다른 모든 성분과 실질적으로 연합되지 않는다. 생산 환경, 이를 테면, 재조합 형질감염된 세포로부터 발생된 오염 성분들은 항체의 연구, 진단 또는 치료요법적 용도를 전형적으로 간섭하는 물질이며, 그리고 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성(proteinaceous) 용질을 함유할 수 있다. 바람직한 구체예들에서, 상기 폴리펩티드는 다음에 의해 정제될 것이다: (1) 예를 들면, Lowry 방법에 의해 측정할 때 항체 중량의 95%, 그리고 일부 구체예들에서, 중량의 99% 이상; (2) 스피닝 컵 서열분석장치(sequenator)를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 얻는데 충분한 정도로 정제되거나, 또는 (3) Coomassie 블루 또는, 바람직하게는 실버 착색을 이용하여, 비-환원 또는 환원 조건 하에 SDS-PAGE에 의한 상동성으로 정제될 것이다.
항체, 본 명세서의 항-TREM2 항체의 “가변 영역” 또는 “가변 도메인”이란 당해 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 차례로 “VH” 및 “VL”로 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 상기 항체의 대부분의 가변 부분 (동일 클래스의 다른 항체와 비교하여)이고, 상기 항원 결합 부위를 함유한다.
용어 “가변(variable)”이란 가변 도메인의 특정 세그먼트(segments)이 항체, 이를 테면, 본 명세서의 항-TREM2 항체 간에 순열이 광범위하게 다르다는 사실을 의미한다. 상기 가변 도메인은 항원 결합을 매개하고, 이의 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 나타낸다. 그러나, 가변성(variability)은 가변 도메인의 전체 폭에 걸쳐 고르게 분포되지 않는다. 대신, 이것은 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두에서 초가변 영역 (HVRs)이라고 불리는 3개의 세그먼트에 집중된다. 가변 도메인의 더 보존된 부분들은 프레임워크 영역 (FR)이라고 불린다. 고유의(native) 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 각각은 베타-시트 형태를 채택한 4 개의 FR 영역, 이에 연결된 3 개의 HVRs, 이때, 이들은 루프 연결되며, 그리고 일부 경우에는 베타-시트 구조의 일부를 형성한다. 각 쇄의 HVRs는 FR 영역에 의해 서로 근접하게 유지되고, 다른 쇄의 HVRs와 함께 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다 (Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991) 참고). 상기 불변 도메인은 항체가 항원 결합에 직접적으로 관여하지 않지만, 다양한 작동체(effector) 기능, 이를 테면, 항체-의존적 세포성 세포독성에서 항체에 참여와 같은 기능을 나타낸다.
용어 “단일클론성 항체”는 본 발명에서 이용된 바와 같이, 실질적으로 동질성 항체의 집단으로부터 수득한 항체, 이를 테면, 단일클론성 본 명세서의 항-TREM2 항체를 지칭하며, 이때, 이러한 집단을 포함하는 개별 항체는 자연 발생적 돌연변이 및/또는 소량으로 존재할 수 있는 해독-후 변형(가령, 이성체화, 아미드화, 등등) 경우를 제외하고 동일하다. 단일클론성 항체는 단일 항원 부위로 지향되는 매우 특이적이다. 상이한 결정인자 (에피토프)에 대항하는 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다클론 항체 조제물과 대조적으로, 각 단클론 항체는 상기 항원 상의 단일 결정인자를 지향한다. 이들의 특이성에 추가하여, 단일클론 항체는 이들이 다른 면역 글로불린에 의해 실질적으로 오염되지 않은 하이브리도마 배양에 의해 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어 “단일클론성(monoclonal)"은 실질적으로 동질성 항체 집단으로부터 수득된 것으로서의 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로서 해석되어서는 안된다. 예를 들면, 본 발명에 따라 이용될 단일클론성 항체는 예를 들면, 하이브리도마 방법 (가령, Kohler and Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14 (3):253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2d ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)), 재조합 DNA 방법 (가령, U.S. 특허 번호 4,816,567 참고), 파아지-디스플레이 기술 (가령, Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 101(34):12467-472 (2004); 그리고 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004) 참고), 효모 제시 기술 (가령, WO2009/036379A2; WO2010105256; WO2012009568, 및 Xu et al., Protein Eng. Des. Sel., 26(10): 663-70 (2013) 참고), 그리고 인간 면역글로불린 좌 모두 또는 일부, 또는 인간 면역글로불린 서열을 인코딩하는 유전자들의 모두 또는 일부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 만드는 기술(가령, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993); U.S. 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 그리고 5,661,016; Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14:845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14:826 (1996); 그리고 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)참고)을 비롯한 다양한 기술에 의해 만들어질 수 있다.
용어 “전장(full-length) 항체”, “무손상(intact) 항체”, 또는 “전체(whole) 항체”는 호환되며, 항체 단편과는 대조적으로, 실질적으로 무손상 형태의 항체, 이를 테면, 본 명세서의 항-TREM2 항체를 지칭한다. 특히, 전체 항체에는 Fc 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 것들이 내포된다. 불변 도메인은 고유의 서열 불변 도메인 (가령, 인간 고유의 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체들일 수 있다. 일부 경우들에서, 상기 무손상 항체는 하나 또는 그 이상의 작동체 기능을 가질 수 있다.
“항체 단편” 은 무손상 항체의 일부분, 바람직하게는 무손상 항체의 항원 결합 및/또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편들; 디아바디(diabodies); 선형(linear) 항체 (U.S. 특허 번호 5,641,870, 실시예 2; Zapata et al., Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995) 참고); 단일-쇄 항체 분자 그리고 항체 단편들에서 형성된 다중특이성 항체들이 내포된다.
항체, 이를 테면, 본 명세서의 항-TREM2 항체의 파파인 절단으로 2개의 동일한 항원-결합 단편들, 소위 “Fab”단편들, 그리고 잔류 “Fc” 단편들을 만드는데, 이는 쉽게 결정화하는 능력을 반영한다. 상기 Fab 단편은 H 쇄의 가변 영역 도메인 (VH)과 함께 전체 L 쇄, 그리고 하나의 중쇄의 제 1 불변 도메인(CH1)으로 구성된다. 각 Fab 단편은 항원 결합에 있어서 단가(monovalent), 즉, 단일 항원-결합 부위를 갖는다. 항체의 펩신 처리로 항원 결합 및 가교를 할 수 있는 두 개의 디술파이드 연계된 Fab 단편들에 대충 대응하는 단일의 큰 F(ab')2 단편이 생성된다. Fab'단편들은 이 항체 힌지 영역의 하나 또는 그 이상의 시스테인을 함유하는 CH1 도메인의 카르복시 말단에서 몇 개의 추가 잔기를 보유함으로써, Fab 단편들과는 상이하다. Fab'-SH는 본원에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리(free) 티올기를 갖는 Fab'에 대한 명칭이다. F(ab')2 항체 단편들은 본래 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생성될 수 있다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 알려져 있다.
Fc 단편은 디술파이드에 의해 함께 유지된 양쪽 H 사슬의 카르복시-말단 부분을 포함한다. 항체의 작동체 기능은 특정 유형의 세포에서 발견되는 Fc 수용체들(FcR)에 의해 인지되는 Fc 영역에 있는 서열에 의해 결정된다.
“Fv"는 완벽한 항원-인지 및 -결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 단단하게, 비-공유적 연합된 하나의 중쇄- 및 하나의 경쇄-가변 영역 도메인으로 된 이량체로 구성된다. 이들 2개의 도메인 폴딩으로부터 6개의 초가변 루프 (H 및 L 쇄로부터 각각 3개 루프)가 발생되며, 이들은 항원 결합에 대한 아미노산 잔기를 제공하고, 당해 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 심지어 단일 가변 도메인 (항원에 대해 특이적인 단지 3개의 HVRs만을 포함하는 Fv의 절반)은 전체 결합 부위보다는 더 낮은 친화력을 갖지만, 여전히 항원을 인지하고, 결합하는 능력을 가질 수 있다.
또한 “sFv” 또는 “scFv”으로도 약칭되는 “단일-쇄 Fv”는 단일 폴리펩티드 쇄에 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편들이다. 바람직하게는, 상기 sFv 폴리펩티드는 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 더 포함하고, 이는 상기 sFv가 항원 결합을 위한 바람직한 구조를 만들게 한다. sFv에 관한 리뷰는
Figure pct00001
in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-VerLAG-3, New York, pp. 269-315 (1994)를 참고한다.
항체, 이를 테면, 본 명세서의 항-TREM2 항체의 “기능성 단편들”은 무손상 항체의 일부분, 일반적으로 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역, 또는 변형된 FcR 결합 능력을 유지하거나, 또는 갖는 항체의 Fc 영역을 포함한다.
용어 “디아바디(diabodies)”란 VH 와 VL 도메인 사이에 짧은 링커(약 5-10 잔기)를 이용하여 sFv 단편들 (앞 단락 참고)를 구축함으로써 만들어지는 작은 항체 단편들을 지칭하며, 가변 도메인에서 쇄-내(intra-chain) 쌍형성이 아니라 쇄-간(inter-chain) 쌍형성이 이루어지고, 이로 인하여 이가(bivalent) 단편, 즉, 2개의 항원-결합 부위를 갖는 단편이 초래된다. 디아바디는 예를 들면, EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 90:6444-48 (1993)에 더 상세하게 기술된다.
본원에 이용된 바와 같이, “키메라 항체”는 항체, 이를 테면, 키메라 본 명세서의 항-TREM2 항체를 지칭하는데, 이때 중쇄 및/또는 경쇄의 부분은 특정 종으로부터 유래된 항체 또는 특정 항체 부류 또는 아류에 속하는 항체에서 상응하는 서열과 동일하거나, 또는 유사하며, 한편, 이 쇄(들)의 나머지는 또다른 종으로부터 유래된 항체 또는 또다른 항체 부류 또는 아류에 속하는 항체, 뿐만 아니라 이러한 항체의 단편(이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내기만 한다면)에 있는 대응하는 서열과 동일하거나 또는 유사하다 (U.S. 특허 번호 4,816,567; Morrison et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 81:6851-55 (1984)). 키메라 항체에는 이 항체의 가변 영역은 뮤린 항체로부터 유래되며, 불변 영역은 인간 항체로부터 유래된 항체들이 내포된다. 본원에 이용된 바와 같이, “인간화된 항체”는 “키메라 항체”의 부분집합(subset)이다.
비-인간 (가령, 뮤린) 항체의 “인간화된” 형태, 이를 테면, 본 명세서의 항-TREM2 항체의 인간화된 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체다. 한 구체예에서, 인간화된 항체는 수령자의 HVR의 잔기가 비-인간 종 (공여자 항체) 이를 테면, 원하는 특이성, 친화력 및/또는 능력을 보유한 마우스, 렛, 토끼 또는 비-인간 영장류의 HVR의 잔기로 대체된, 인간 면역글로불린 (수령자 항체)이다. 일부 경우들에서, "FR" 잔기는 대응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 더욱이, 인간화된 항체는 수령자 항체 또는 기증자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 수행능, 이를 테면, 결합 친화력을 더 개선하기 위하여 만들어질 수 있다. 일반적으로, 상기 인간화된 항체는 실질적으로 최소한 하나의, 그리고 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 것이고, 이때 초가변 루프의 모든 또는 실질적으로 모든 것은 비-인간 면역글로블린 서열에 대응하며, FR의 모든 또는 실질적으로 모든 것은 인간 면역글로블린의 서열에 대응하고, FR 영역은 항체 수행능, 이를 테면, 결합 친화력, 이성체화(isomerization), 면역원성, 및 이와 유사한 것들을 개선시키는 하나 또는 그 이상의 개별 FR 잔기 치환을 포함할 수도 있다. FR에서 이들 아미노산 치환의 수는 전형적으로 H 쇄에서 6개를 넘지 않고, L 쇄에서 3개를 넘지 않는다. 상기 인간화된 항체는 임의선택적으로 면역글로블린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부분, 전형적으로 인간 면역글로블린의 것을 포함할 것이다. 더욱 상세한 내용은 가령, Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 그리고 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)을 참고한다. 예를 들면, Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); 그리고 U.S. 특허 번호 6,982,321 및 7,087,409을 또한 참고한다.
“인간 항체”는 항체, 이를 테면, 본 명세서의 항-TREM2 항체에 상응하는 아미노산 서열을 보유하고, 및/또는 본원에 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기술을 사용하여 제조된 아미노산 서열을 보유하는 항체다. 인간 항체의 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 특이적으로 배제한다. 인간 항체는 파아지-디스플레이 라이브러리를 포함한, 당분야에 공지된 다양한 기술을 이용하여 만들어질 수 있다. Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). 인간 단클론 항체를 제조하는데 Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)에 기술된 방법 또한 이용가능하다. vvan Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-74 (2001) 또한 참고. 인간 항체는 항원 시험감염(challenge)에 반응하여, 이러한 항체를 생산하도록 변형되었으나, 이의 내생적 좌는 불능화된, 예를 들면, 면역화된 제노마우스(xenomice),와 같은 유전자 삽입 동물에 상기 항원을 투여하여 만들어질 수 있다(가령, XENOMOUSETM기술에 대해 U.S. 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 참고). 예를 들면, 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통하여 만들어진 인간 항체는 Li et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)를 또한 참고한다. 대안적으로, 인간 항체는 효모 라이브러리 및 예를 들면, WO2009/036379A2; WO2010105256; WO2012009568; 그리고 Xu et al., Protein Eng. Des. Sel., 26(10): 663-70 (2013)에 기술된 방법을 사용하여 제조할 수도 있다.
용어 “초가변 영역” 또는 “HVR”이 본원에서 이용될 때, 항체-가변 도메인, 이를 테면, 본 명세서의 항-TREM2 항체의 항체-가변 도메인 영역을 지칭하며, 서열에서 초가변적이고, 및/또는 구조적으로 특정된 루프를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체들은 6개의 HVRs: VH에 3개 (H1, H2, H3), 및 VL에 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. 고유 항체에서, H3 및 L3은 6개의 HVRs 중 가장 다양성을 나타내며, 특히 H3은 항체에 미세한 특이성을 부여하는 독특한 역할을 하는 것으로 여겨진다. 가령, Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003) 참고). 실제로, 중쇄만으로 구성된 자연 발생 낙타과 항체는 경쇄가 없을 때, 기능적이고 안정적이다. 가령, Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993) and Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996) 참고.
많은 HVR 묘사가 사용되고 있으며, 본 명세서에 포괄되어있다. 일부 구체예들에서, HVRs는 서열 다양성에 기초하며, 가장 일반적으로 사용되는 Kabat 상보성-결정 영역 (CDRs)일 수 있다(Kabat et al., supra). 일부 구체예들에서, HVRs는 Chothia CDRs일 수 있다. Chothia는 대신, 구조 루프(structural loops)의 위치를 나타낸다 (Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). 일부 구체예들에서, HVRs는 AbM HVRs일 수 있다. AbM HVRs은 Kabat CDRs와 Chothia 구조 루프 사이의 절충을 나타내며, Oxford Molecular's AbM 항체-모델링 소프트웨어가 이용된다. 일부 구체예들에서, HVRs는 “접촉” HVRs일 수 있다. "접촉" HVRs은 이용 가능한 복합 결정 구조의 분석에 기초한다. 이들 각 HVRs의 잔기는 하기에 표시된다.
루프 Kabat AbM Chothia 접촉
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (Kabat 번호매김)
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (Chothia 번호매김)
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101
HVRs는 다음과 같이 "연장된 HVRs"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2), 및 89-97 또는 89-96 (L3), 그리고 VH에서 26-35(H1), 50-65 또는 49-65 (H2)(바람직한 구체예), 및 93-102, 94-102, 또는 95-102 (H3). 가변 도메인 잔기들은 이들 연장된 HVR 정의 각각에 대해 Kabat et al., supra에 따라 번호매김된다.
“프레임워크” 또는 “FR” 잔기는 본원에서 정의된 바와 같이, HVR 잔기이외의 가변 도메인 잔기들이다.
구절 “Kabat와 같은 가변 도메인 잔기 번호매김” 또는 “Kabat와 같은 아미노산 위치 번호매김”, 및 이의 변형은 Kabat et al., supra에서 항체의 편집의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 사용되는 번호매김 시스템을 말한다. 이 번호매김 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR에 상응하는 몇 개의 또는 추가 아미노산, 또는 이보다 짧은 삽입체를 함유할 수 있다. 예를 들면, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 다음에 단일 아미노산 삽입 (Kabat에 따라, 잔기 52a)과 중쇄 FR 잔기 82 다음에 삽입된 잔기 (가령, Kabat에 따라, 잔기 82a, 82b, 및 82c, 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 Kabat 번호매김은 항체 서열의 상동성 영역에서 "표준" Kabat 번호가 매겨진 서열의 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다.
Kabat 번호매김 시스템은 가변 도메인에서 잔기를 언급할 때 일반적으로 이용된다(대략적으로, 경쇄의 잔기 1-107과 중쇄의 잔기 1-113)(가령, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). “EU 번호매김 시스템”, “EU 번호매김” 또는 “EU 색인”은 면역글로블린 중쇄 불변 영역에서 잔기를 언급할 때 일반적으로 사용된다 (가령, Kabat et al., supra 보고된 EU 색인). “Kabat에서와 같은 EU 색인”이란 상기 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 번호매김을 지칭한다. 항체의 가변 도메인에서 잔기 번호에 대한 언급은 Kabat 번호 매기기 시스템에 의한 잔기 번호 매기기를 의미한다. 항체의 불변 도메인에 있는 잔기 번호에 대한 언급은 EU 번호매김 시스템에 의한 잔기 번호매김을 의미한다 (가령, US 특허 공개 번호. 2010-280227).
본원에 이용된 바와 같이, “수용체 인간 프레임워크”는 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 콘센수스 프레임워크로부터 유래된 VL 프레임워크 또는 VH 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크다. 인간 면역글로블린 프레임워크 또는 인간 콘센수스 프레임워크로부터 "유래된(derived from)" 수용체 인간 프레임워크는 이의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 기존의 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 구체예들에서, 기존 아미노산 변화의 수는 10 또는 그 미만, 9 또는 그 미만, 8 또는 그 미만, 7 또는 그 미만, 6 또는 그 미만, 5 또는 그 미만, 4 또는 그 미만, 3 또는 그 미만, 또는 2 또는 그 미만이다. 기존 아미노산 변화가 VH에 존재하는 경우, 바람직하게는 이러한 변화는 위치 71H, 73H 및 78H 중 3개, 2개 또는 하나에서만 발생하고; 예를 들어, 이들 위치들에서 아미노산 잔기는 71A, 73T 및/또는 78A일 수 있다. 한 구체예에서, 상기 VL 수용체 인간 프레임워크는 상기 VL 인간 면역글로블린 프레임워크 서열 또는 인간 콘센수스 프레임워크 서열의 서열과 동일하다.
“인간 콘센수스 프레임워크(human consensus framework)”는 인간 면역글로블린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선별에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산 잔기를 제시하는 프레임워크다. 일반적으로, 인간 면역글로블린 VL 또는 VH 서열의 선별은 가변적 도메인 서열들의 하위집단으로부터 선별된다. 일반적으로, 서열의 하위군은 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)에서와 같은 하위군이다. VL 경우, 상기 하위군는 Kabat et al., supra에서와 같이, 하위군 카파 I, 카파 II, 카파 III 또는 카파 IV일 수 있다. 추가적으로, VH의 경우, 상기 하위군은 Kabat et al., supra에서와 같이, 가령, 하위군 I, 하위군 II, 또는 하위군 III일 수 있다.
가령, 본 명세서의 본 명세서의 항-TREM2 항체의 명시된 위치에서 "아미노산 변형"이란 명시된 잔기의 치환 또는 결손, 또는 이러한 명시된 잔기에 인접하게 적어도 한 개의 아미노산 잔기의 삽입을 지칭한다. 명시된 잔기에 "인접하게" 삽입된다는 의미는 이의 하나 내지 두 개 잔기 이내 삽입을 의미한다. 상기 삽입은 명시된 잔기의 N-말단 또는 C-말단에 있을 수 있다. 본원에서 선호되는 아미노산 변형은 치환이다.
“친화력-발달된(matured)”항체, 이를 테면, 본 명세서의 친화력 발달된 항-TREM2 항체는 이의 하나 또는 그 이상의 HVRs에서 하나 또는 그 이상의 변경(alterations)을 갖는 항체로써, 이로 인하여 이러한 변경(들)을 보유하지 않은 부모계 항체와 비교하였을 때, 항원에 대한 당해 항체의 친화력의 개선을 초래한다. 한 구체예에서, 친화력-발달된 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화력을 갖는다. 친화력 발달된 항체는 당업계에 공지된 방법에 의해 제조된다. 예를 들면, Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)는 VH- 및 VL-도메인 셔플링(shuffling)에 의해 친화력 발달(maturation)을 설명한다. HVR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이생성은 예를 들면, Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); 그리고 Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)에서 기술된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 “특이적으로 결합한다"란 측정가능한, 그리고 재생가능한 상호작용, 이를 테면, 표적과 항체 간의, 이를 테면, 항-TREM2와 TREM2 사이의 결합을 지칭하며, 이는 생물학적 분자를 포함한 이질적(heterogeneous) 집단 존재 하에 표적의 존재를 확정한다. 예를 들면, 항체, 이를 테면, 표적 또는 이 표적의 에피토프에 특이적으로 결합하는 본 명세서의 항-TREM2 항체는 가령, 다른 무관한 표적 또는 에피토프에 결합하는 것보다 더 큰 친화력 또는 결합력(avidity)으로 이 표적 또는 에피토프에 선호적으로 결합하는 항체다. 제 1 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 제 2 표적에 특이적으로 결합하거나 또는 결합하지 않을 수 있음을 또한 이해할 것이다. 이와 같이, “특이적 결합”이 배타적인 결합을 반드시 요구하는 것은 아니다(비록 이러한 것을 포함할 지라도). 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 적어도 약 10 3 M -1 또는 10 4 M -1, 때로 약 10 5 M -1 또는 10 6 M -1의 연합 상수를 가질 수 있고, 다른 경우들에서 약 10 6 M -1 또는 10 7 M -1, 약 10 8 M -1 ~10 9 M -1, 또는 약 10 10 M -1 ~ 10 11 M -1 또는 그 이상을 가질 수 있다. 다양한 면역검정법 포멧을 이용하여 특정 단백질과의 특이적 면역반응성을 갖는 항체를 선별할 수 있다. 예를 들면, 고형-상(phase) ELISA 면역검정법은 단백질과의 특이적 면역반응성을 갖는 단일클론 항체를 선별하는데 이용된다. 가령, 특정 면역 반응성을 결정하는 데 사용할 수 있는 면역 분석 형식 및 조건에 대한 설명은 Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York, 또는 Vashist and Luong (2018) Handbook of immunoassay Technologies, Approaches, Performances, and Applications, Academic Press를 참고한다.
본원에 이용된 바와 같이, 항체는 항체가 두 단백질 중 하나에 결합하여 두 단백질 간의 상호작용을 방해, 감소 또는 완전히 제거할 때, 두 단백질 간의 "상호작용을 저해시킨다".
“효현성” 항체는 표적에 결합할 때, 이 표적의 하나 또는 그 이상의 활성 또는 기능을 유도(가령, 증가시키는) 항체다.
“길항성” 항체 또는 “차단” 항체는 항체가 항원에 결합한 후, 하나 또는 그 이상의 결합 짝에게 항원 결합을 줄이거나, 또는 제거하는(가령, 감소시키고) 항체, 및/또는 항체가 항원에 결합한 후, 이 항원의 하나 또는 그 이상의 활성 또는 기능을 줄이거나, 또는 제거하는 (가령, 감소시키는) 항원이다. 일부 구체예들에서, 길항성 항체, 또는 차단 항체는 하나 또는 그 이상의 결합 짝에 대해 항원 결합을 실질적으로 또는 완전하게 저해시키거나, 및/또는 이 항원의 하나 또는 그 이상의 활성 또는 기능을 실질적으로 또는 완전하게 저해시킨다.
항체 "작동체 기능”이란 생물학적 활성이 항체의 Fc 영역 (고유한 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인되며, 항체의 아이소타입에 의해 가변적이다.
본원에서 용어 “Fc 영역” 은 고유의-서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 비롯한, 면역글로블린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 이용된다. 면역글로블린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 약간씩 변화될 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 보통 중쇄의 아미노산 잔기 Cys226, 또는 Pro230으로부터 이의 카르복실-말단까지 이어지는 것으로 특정된다. Fc 영역의 C-말단 리신(EU 번호매김 시스템에 따라 잔기 447)은 예를 들면, 상기 항체의 생산 또는 정제 과정 동안, 또는 상기 항체의 중쇄를 인코딩하는 핵산의 재조합적 작제에 의해 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, 제거될 K447 잔기가 없는 항체 집단 및 K447 잔기가 있거나 또는 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용하기 위한 적합한 고유의-서열 Fc 영역에는 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4가 내포된다.
“고유 서열 Fc 영역”은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 고유 서열 인간 Fc 영역은 고유 서열 인간 IgG1 Fc 영역 (비-A 및 A 동종이형); 고유 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 고유 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 고유 서열 인간 IgG4 Fc 영역 뿐만 아니라 이들의 자연발생 변이체를 포함한다.
“변이체 Fc 영역”은 적어도 하나의 아미노산 변형, 바람직하게는 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환(들)에 의해서 선천적 서열 Fc 영역의 것과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 선천적 서열 Fc 영역 과 비교하여 선천적 서열 Fc 영역 내에 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들면, 약 1개 내지 약 10개 아미노산 치환, 그리고 바람직하게는 약 1개 내지 약 5개 아미노산 치환을 갖는다. 본원에서 변이체 Fc 영역은 바람직하게는, 선천적 서열 Fc 영역과 적어도 약 80% 상동성, 그리고 가장 바람직하게는 그것과 적어도 약 90% 상동성, 더욱 바람직하게는 그것과 적어도 약 95% 상동성을 소유할 것이다.
“Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 설명한다. 바람직한 FcR은 고유의 서열 인간 FcR이다. 더욱이, 선호되는 FcR은 IgG 항체 (감마 수용체)에 결합하고, 대립유전자 변이체 및 이들 수용체의 대체 스플라이스된 형태를 비롯한 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII 서브클래스 수용체들을 포함하고, FcγRII 수용체들은 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하는데, 이들은 이들의 세포질 도메인에서 주로 상이한 유사 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 이의 세포질 도메인 안에 면역수용체 티로신-기반의 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 이의 세포질 도메인 안에 면역수용체 티로신-기반의 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다 (가령, M.
Figure pct00002
, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997) 참고. FcRs는 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); 그리고 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)에서 검토된다. 다른 FcRs는 본원에서 "FcR"이라는 용어에 의해 포괄된다. FcRs는 항체의 혈청 반감기를 또한 증가시킬 수 있다.
생체내 FcR에 대한 결합 및 인간 FcR 고-친화력 결합 폴리펩티드의 혈청 반감기는 가령, 인간 FcR를 발현시키는 이식유전자를 가진(transgenic) 마우스 또는 형질감염된 인간 세포 계통, 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드가 투여된 영장류에서 분석될 수 있다. WO 2004/42072 (Presta)는 FcRs에 결합을 개선 또는 감소시키는 항체 변이체를 기술한다. 가령, Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001) 또한 참고.
본원에 이용된 바와 같이, 펩티드, 폴리펩티드 또는 항체 서열에 대하여 “아미노산 서열 동일성 백분율(%)” 및 "상동성(homology)"은 참고 서열 및 후보 서열들을 배열하고, 필요에 따라 최대 백분율의 서열 동일성을 획득하기 위하여 갭을 도입한 후, 특정 펩티드, 또는 폴리펩티드 서열에 있는 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에 있는 아미노산 잔기의 백분율로 지칭되며, 임의의 보존 치환은 서열 동일성 부분으로 간주되지 않는다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 정렬은 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 MEGALIGNTM (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계의 기술 범위 내에 있는 다양한 방법으로 성취될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체-길이에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한, 당분야에 공지된 임의의 알고리즘을 포함하여, 정렬을 측정하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다.
“단리된” 핵산 분자, 가령, 이를 테면, 본 명세서의 항-TREM2 항체를 인코딩하는 핵산 분자는 그것이 생성된 환경에서 통상적으로 관련된 최소한 하나의 오염 분자로부터 확인되고, 그리고 이로부터 분리된 핵산 분자이다. 바람직하게는, 상기 단리된 핵산은 이의 생산 환경과 연합된 모든 다른 성분들과 연합되지 않는다. 본원의 폴리펩티드 및 항체를 인코드하는 단리된 핵산 분자는 세포에서 자연적으로 존재하는 핵산과는 구별된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “벡터”는 그것이 연계되어 있는 또다른 핵산을 전달할 수 있는 핵산 분자를 지칭하고자 한다. 벡터의 한 가지 유형은 "플라스미드"로써, 이는 추가적인 DNA 세그먼트가 결찰될 수 있는 원형 이중 가닥으로 된 DNA를 의미한다. 또다른 유형의 벡터는 파아지 벡터다. 또다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이며, 여기서 추가 DNA 세그먼트는 바이러스 게놈에 결찰될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포에서 자율 복제할 수 있다 (예를 들어, 박테리아 복제 원점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터 (예를 들어, 비-에피솜성 포유동물 벡터)는 숙주 세포에 도입될 때, 당해 숙주 세포의 게놈에 통합될 수 있으며, 이로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 특정 벡터는 이들이 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터를 본 명세서에서 “재조합 발현 벡터" (또는 간단히 "발현 벡터")라고 지칭한다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용한 발현 벡터는 흔히 플라스미드 형태다. 본 명세서에서 "플라스미드" 및 "벡터"는 플라스미드가 가장 일반적으로 사용되는 벡터 형태이므로, 서로 혼용될 수 있다.
본원에서 호환적으로 사용되는 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체를 지칭하며, DNA 및 RNA가 내포된다. 이 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 이의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 중합효소 또는 합성 반응에 의해 중합체 안으로 혼입될 수 있는 임의의 물질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 메틸화된 뉴클레오티드 및 그의 유사체와 같은 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오티드 구조에 대한 변형은 중합체의 조립 전 또는 후에 부여될 수 있다. 뉴클레오티드 서열은 비-뉴클레오티드 구성요소들에 의해 중단될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 합성 후에 만들어진 변형(들), 예를 들어 표지에 대한 콘쥬게이션을 포함할 수 있다. 기타 변형에는 예를들면, "캡(cap)"; 자연 발생적 뉴클레오티드중 하나 또는 그 이상이 유사체로 치환; 그리고 뉴클레오티드-간 변형 이를 테면, 예를 들면, 비하전된 링키지 (가령, 메틸 포스포네이트, 포스포트라이에스터, 포스포라미데이트, 카바메이트, 등)를 갖는 것, 하전된 링키지 (가령, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 등)를 갖는 것, 펜던트 모이어티, 이를 테면, 예를 들어, 단백질(가령, 뉴클레아제, 독소, 항체, 신호 펩티드, 플라이-L-리신, 등)를 함유하는 것들, 삽입물 (가령, 아크리딘, 소랄렌, 등)을 갖는 것, 킬레이터 (가령, 금속, 방사능활성 금속, 붕소, 산화성 금속 등)을 갖는 것, 알킬레이터를 함유하는 것, 그리고 변형된 링키지 (가령, 알파 아노머 핵산, 등) 뿐만 아니라 변형되지 않은 형태의 폴리뉴클레오티드(들)이 내포될 수 있다. 또한, 당(sugars)에 통상적으로 존재하는 임의의 히드록실기는 포스포네이트기 또는 포스페이트기로 대체될 수 있고; 표준 보호 그룹에 의해 보호되거나; 또는 추가 뉴클레오티드에 추가 칭키지를 분비하기 위해 활성화되거나, 또는 고체 또는 반-고체 지지체에 콘쥬게이트될 수도 있다. 5' 및 3' 말단 OH는 인산화될 수 있거나, 또는 아민 또는 1 내지 20개의 탄소 원자의 유기 캡핑 그룹(organic capping group) 모이어티로 치환될 수 있다. 다른 히드록실도 표준 보호기로 유도체화될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 예를 들면, 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴-, 2'-플루오르- 또는 2'-아지도-리보스, 카르보사이클 당 유사체, α-아노머 당, 에피머 당, 이를 테면, 아라비노스, 자일로스 또는 릭소스, 피라노스 당, 푸라노스 당, 세도헵툴로스, 비환형 유사체 및 염기 뉴클레오시드 유사체, 이를 테면, 메틸 리보시드를 비롯하여 당분야에 일반적으로 알려진 리보스 또는 데옥시리보스 당의 유사체 형태를 또한 함유할 수 있다. 하나 또는 그 이상의 포스포디에스테르 링키지는 대안적인 링키지 기에 의해 대체될 수 있다. 대안적인 링키지 기에는 포스페이트는 P(O)S (“티오에이트”), P(S)S (“디티오에이트”), (O)NR2 (“아미데이트”), P(O)R, P(O)OR', CO 또는 CH2 (“포름아세탈”)으로 대체되며, 이때 각 R 또는 R'은 독립적으로 H이거나 또는 치환된 또는 치환안된 알킬 (1-20개의 C) 임의선택적으로 에테르 (-O-) 링키지, 아릴, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐 또는 아랄딜인, 구체예들이 내포되나, 이에 국한되지는 않는다. 폴리뉴클레오티드의 모든 링키지가 동일할 필요는 없다. 상기 설명은 RNA 및 DNA를 포함하여 본원에 언급 된 모든 폴리 뉴클레오티드에 적용된다.
"숙주 세포"에는 벡터(들) 또는 다른 외인성 핵산, 예를 들어, 폴리뉴클레오티드 삽입물(들)을 함유할 수 있거나, 또는 함유하는 개별 세포 또는 세포 배양물이 내포된다. 일부 구체예들에서, 상기 벡터 또는 기타 외인성 핵산은 숙주 세포의 게놈에 통합된다. 숙주 세포에는 단일 숙주 세포의 자손이 내포되며, 이들 자손은 자연적, 우발적 또는 의도적 돌연변이로 인해 원래의 부모 세포와 필연적으로 완전히 동일하지 않을 수 있다(형태 또는 게놈 DNA 보체에서). 숙주 세포에는 본 발명의 폴리뉴클레오티드(들)로 생체내 형질감염된 세포들이 내포된다.
“담체”는 본 명세서에서 이용된 바와 같이, 사용된 투여량 및 농도로 세포 또는 포유 동물에 노출될 때 비독성인 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제를 포함한다. 종종 생리학적으로 허용되는 담체는 수성 pH 완충용액이다. 생리학적으로 수용가능한 담체의 예로는 완충액, 이를 테면, 인산염, 시트르산염, 및 다른 유기산; 아스코르브산을 포함하는 항산화제; 저분자량 (약 10개 미만의 아미노산 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 이를 테면, 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로블린; 친수성 폴리머 이를 테면, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 이를 테면, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 그리고 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린이 포함된 기타 탄수화물; 킬레이트 물질들, 이를 테면 EDTA; 슈가 알코올, 이를 테면, 만니톨, 또는 솔비톨; 염-형성 카운터-이온, 이를 테면, 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 이를 테면, TWEEN™, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 PLURONICS™이 내포된다.
본원에서 사용되는 용어 "약(about)"은 본 발명의 기술 분야의 숙련된 기술자에게 널리 공지된 바와 같이, 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 지칭한다. 본원의 값 또는 매개변수에 대한 "약(about)"의 지칭은 그 값 또는 매개변수 그 자체(per se)에 관한 구체예들을 포함 (및 설명)한다.
본 명세서와 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수(“a“, "an”및 “the”)형은 다른 명시적인 언급이 없는 한, 복수 개념을 포함한다는 것으로 주지되어야 한다. 예를 들면, "항체"에 대한 언급은 몰 양과 같은 하나 내지 많은 항체에 대한 언급이며, 당업자에게 공지된 등가물을 포함한다.
본 명세서에 기술된 본 발명의 구체예는 측면들 및 구체예들을 포함하는(comprising), "~로 구성되는(consisting)" 및 "본질적으로 ~구성되는(consisting essentially of)" 것들이 내포되는 것으로 이해된다.
본 명세서의 방법
본 명세서는 CSF1R-결핍 질환을 갖는 개체를 치료하고, 이를 예방하거나, 이에 걸릴 위험을 줄이는 방법들을 제공하여, 이 방법은 이를 필요로 하는 개체에게 치료요법적으로 효과량의 TREM2 단백질에 결합하는 항체를 투여하는 것을 포함하며, 여기에서 상기 항체는 효현제이다.
본원에 이용된 바와 같이, “CSF1R-결핍 질환”은 CSF1R 신호전달에서 결핍 또는 기타 결함으로 인한 임의의 질환, 장애 또는 병태를 지칭한다. 특정 구체예들에서, 상기 질환, 장애 또는 병태는 “야생형” 기능을 갖는 또는 정상 범위 안에 있는 것으로 간주되는 기능을 갖는 것으로 간주되는 CSF1R 단백질과 비교하였을 때, 감소된 기능을 갖는 CSF1R 단백질이 연루된다. 일부 구체예들에서, CSF1R-결핍 질환은 병에 걸린 개체의 CSF1R 유전자에 돌연변이를 특징으로 한다. 상기 돌연변이는 전형적으로 이 병에 걸린 개체에서 CSF1R의 기능을 감소시키는 결과를 초래한다. 상기 돌연변이는 예를 들면, 미스센스 돌연변이, 인델(indel), 또는 절두된 단백질 산물을 만들게 되는 돌연변이를 비롯한, 임의의 유형일 수 있다.
이론에 결부되지 않고, TREM2를 작용시키는 것은 CSF1R-결핍 질환을 갖는 개체에서 CSF1R 결핍의 효과를 개선할 것으로 본다. 특정 구체예들에서, 본원에서 기술된 TREM2 항체는 CSF1R 결핍을 보상하거나, 또는 그렇지 않으면, 이러한 결핍을 구제하기 위해, CSF1R의 하류 신호전달을 활성화하거나 또는 증가시킬 수 있다. 특정 구체예들에서, 본원에서 기술된 TREM2 항체는 신호전달에서 결핍된 CSF1R의 발현을 유도하거나 또는 증가시킬 수 있고, 이때 이러한 CSF1R의 양 증가로 충분한 양의 신호전달이 초래된다.
CSF1R-결핍 질환에는 소아-발병 백색질뇌병증 및 축삭 회전타원체 및 색소침착된 아교세포를 동반한 성인-발병 백색질뇌병증 (ALSP)이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 일부 구체예들에서, CSF1R-결핍 질환은 ALSP이다. 일부 구체예들에서, CSF1R-결핍 질환은 소아-발병 백색질뇌병증이다.
축삭 회전타원체 및 색소침착된 아교세포를 동반한 성인-발병 백색질뇌병증
일부 구체예들에서, 본 명세서는 ALSP를 갖는 개체를 치료하고, 이를 예방하거나, 이에 걸릴 위험을 줄이는 방법들을 제공하여, 이 방법은 이를 필요로 하는 개체에게 치료요법적으로 효과량의 TREM2 단백질에 결합하는 항체를 투여하는 것을 포함하며, 여기에서 상기 항체는 효현제이다.
축삭 회전타원체 및 색소침착된 아교세포를 동반한 성인-발병 백색질뇌병증 (ALSP)는 뇌의 특정 영역에 변화를 특징으로 하는 상염색체 우성 신경 병태다. ALSP는 CSF1R을 인코딩하는 유전자에서 돌연변이로 인한 것이다. 뇌의 백질에 손상인 “백색질뇌병증”은 ALSP의 전형적인 특징이다. 또한, 회전 타원체라고 불리는 부기(swelling)로 인한 축삭 손상은 ALSP의 또 다른 일반적인 특징이다. 추가적인 ALSP 질환의 공통적인 특징에는 미엘린 손상, 수초(myelin sheaths) 상실, 신경아교종, 자가형광 지질-가득한 대식세포, 및 축삭 파괴가 내포된다. 또한, 수초와 축삭의 손상은 ALSP를 앓고 있는 개체의 수많은 신경 징후와 증상에 기여하는 것으로 보고 있다 (Oosterhof et al; Rademaker et al, Guo et al, 2019).
ALSP의 공통적인 증상에는 다음의 것들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다: 대뇌백질의 이상, 행동변화, 치매, 파킨슨병, 발작, 운동 실어증, 필기불능증, 계산불능증, 행위상실증, 운동완만증, 느린 움직임, 중추 신경계 수초탈락, 낙담, 우울, 전두엽 치매, 신경아교종, 반사-과다, 반사-증가, 족저신전반응, 편마비, 사지마비, 백색질뇌병증, 기억 손상, 건망증, 기억 상실, 기억력 문제, 기억력 저하, 무언증, 말을 하지 못함, 소리를 낼 수 없음, 중추신경계의 신경세포 소실, 뇌세포 소실, 자세 불안정, 균형 장애, 빠른 진행성, 경직, 근육 경직, 발끌림 보행, 종종 걸음, 피라미드 징후, 경련, 비-자발적 근육 강직, 비자발적 근육 수축, 비자발적 근육 경련, 성격 문제, 집행 기능 장애로 구성된 군에서 선택된 증상이 있거나, 또는 이러한 증상을 갖게 될 위험에 처해 있다.
이전에, 현재 ALSP로 불리는 이 질환은 두 가지 상이한 질환, 축삭 회전타원체 (HDLS)를 갖는 유전성 미만성 백색질뇌병증 및 가족성 색소성 정색성 백색질뇌병증 (POLD)으로 간주되었다. 게다가, 임상의는 착색된 신경아교 세포는 HDLS가 아닌, POLD의 특징이라고 믿었다. 더욱이, 임상의는 회전타원체는 POLD가 아닌 HDLS의 특징이라고 믿었다. 그러나, 각 질병의 임상 및 병리학적 특징에 대한 자세한 분석은 HDLS 및 POLD 환자가 착색된 신경아교 세포 및 회전 타원체를 나타내는 것으로 나타났다. 따라서, HDLS와 POLD는 이제 ALSP에 포괄되는 동일한 질병 스펙트럼의 일부로 간주된다 (Nicholson et al. (2013)).
ALSP의 예시적인 대체 이름에는 회전타원체를 갖는 백색질뇌병증, 미만성 유전; 신경축삭 회전타원체를 갖는 성인-발병 백질영양증; 신경축삭 회전타원체를 갖는 상염색체 우성 백색질뇌병증; 축삭 회전타원체 (HDLS)를 갖는 유전성 미만성 백색질뇌병증; 신경축삭 대뇌백질위축증; 색소성 정색성 대뇌백질위축증; 그리고 가족성 색소성 정색성 백색질뇌병증 (POLD)이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
일부 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 축삭 회전타원체 및 색소침착된 아교세포를 동반한 성인-발병 백색질뇌병증 (ALSP)을 예방하고, 이의 위험을 감소시키고, 및/또는 이를 치료할 수 있다. 일부 구체예들에서, 항-TREM2 항체의 투여로 축삭 회전타원체 및 색소침착된 아교세포를 동반한 성인-발병 백색질뇌병증 (ALSP)이 있는 개체에서 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 유도한다. 이론에 결부되지 않고, TREM2의 작용으로 ALSP를 갖는 개체에서 CSF1R의 효과를 감소시킬 것으로 본다.
소아-발병 백색질뇌병증
소아-발병 백색질뇌병증은 CSF1R 유전자에서 돌연변이로 인한 희귀성 치명적 신경 질환이다. 소아-발병 백색질뇌병증은 다음이 내포된 뚜렷한 소아 표현형을 특징으로 한다: 1) 발달성 퇴행, 2) 발병 시 운동 능력 문제, 3) 간질, 그리고 4) 인지 저하. 최근 조사에 따르면, CSF1R 유전자의 이형접합성 돌연변이에 의해 유발되는 ALSP와 비교하여, 소아-발병 백색질뇌병증을 앓고 있는 개체는 CSF1R 유전자에 동형접합성 돌연변이가 있음을 보여준다. 또한, 소아-발병 백색질뇌병증이 있는 개체는 ALSP와 중첩되는 많은 신경영상적 특징을 가지고 있지만, ALSP를 가진 개체에는 나타나지 않는 뚜렷한 신경영상적 특징도 있다 (Oosterhof et al. (2019)).
일부 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체의 투여로 소아-발병 백색질뇌병증을 예방하고, 이의 위험을 감소시키고, 및/또는 이를 치료할 수 있다. 일부 구체예들에서, 항-TREM2 항체의 투여로 소아-발병 백색질뇌병증이 있는 개체에서 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 유도한다. 이론에 결부되지 않고, TREM2의 작용으로 소아-발병 백색질뇌병증을 갖는 개체에서 CSF1R의 효과를 감소시킬 것으로 본다.
CSF1R 돌연변이
일부 구체예들에서, CSF1R-결핍 질환이 있는 개체는 CSF1R 유전자에 돌연변이가 있다. 전술한 바와 같이, 인간 CSF1R 유전자는 콜로니 자극 인자 1 수용체 (CSF1R)를 인코드한다. CSF1R은 다음 이름 중 하나로 지칭될 수도 있다: C-FMS, CD115, CD115 항원, CSF-1 수용체, CSF-1R, CSF1R_인간, CSFR, FIM2, FMS, FMS 원-종양형성유전자, CSF-1-R, M-CSF-R, BANDDOS, v-FMS, 및 c-FMS 원-종양형성유전자. CSF1R 유전자의 염색체 위치는 5q32이며, 염색체 5에서 이의 분자 위치는 염기쌍 150,053,291 ~ 150,113,372이다. 더욱이, CSF1R 유전자에 대한 GenBank 식별자는 NG_012303이다.
CSF1R 단백질은 유형 III 티로신 키나제 성장 인자 수용체로써, 이는 PDGF 수용체 패밀리에 속한다. 특히, CSF1R은 고도로 글리코실화된 세포외 리간드-결합 도메인, 막경유 도메인, 및 세포내 단백질 티로신 키나제 도메인으로 구성된다. CSF1R은 미세신경아교세포를 비롯한, 단핵 식작용 세포의 생존, 증식, 분화 및 기능을 조절하는 사이토카인인 CSF-1에 대한 수용체로 작용하는 세포 표면 수용체다. CSF-1이 CSF1R에 결합으로 수용체 동종이량체가 형성되고, 세포질 도메인에서 몇 개의 티로신 잔기가 자가-인산화된다.
당업계에 공지된 임의의 시퀀싱 방법을 사용하여, CSF1R 유전자의 돌연변이를 확인할 수 있다. 예를 들면, CSF1R 돌연변이 식별에 사용할 수 있는 시퀀싱 방법의 목록에는 Sanger 시퀀싱, 전체 엑솜 시퀀싱 및 차세대 시퀀싱이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
일부 구체예들에서, 상기 CSF1R 유전자의 돌연변이는 세포내 단백질 티로신 키나제 도메인을 인코딩하는 유전자의 일부분에 있다. 일부 구체예들에서, 상기 CSF1R 유전자에서 돌연변이는 엑손 11-21중 임의의 하나에 있다. 일부 구체예들에서, CSF1R-결핍 질환이 있는 개체는 CSF1R 유전자에 돌연변이에 대해 이형접합성이다. 일부 구체예들에서, CSF1R-결핍 질환이 있는 개체는 CSF1R 유전자에 돌연변이에 대해 동형접합성이다. 일부 구체예들에서, 상기 CSF1R 유전자의 돌연변이는 면역글로불린-유사 도메인을 인코딩하는 유전자의 일부분에 있다. 일부 구체예들에서, 상기 CSF1R 유전자의 돌연변이는 막경유 도메인을 인코딩하는 유전자의 일부분에 있다. 일부 구체예들에서, 상기 CSF1R 유전자의 돌연변이는 조절 막근접 도메인을 인코딩하는 유전자의 일부분에 있다.
CSF1R 유전자에서 예시적인 돌연변이에는 다음이 내포되나, 이에 국한되지 않는다: c.1754-2A>G (p.G585_K619delinsA), c.1766G>A (p.G589E), c1897G>A (p.E633K), c.2297T>C (p.M766T), c.2308G>C (p.A770P), c.2320-2A>G (pC774_N814del), c.2324T>A (p.I775N), c.2381T>C (p.I794T), c.2442+5G>C (p.C774_N814delinsQGLQSHVGPSLPSSSPQAQ), c.2509G>T (p.D837Y), c.2546_2548delTCT (p.F849del), c.2546T>C (p.F849S), c.2603T>C (p.L868P), c.2624T>C (p.M875T), 및 c.2632C>A (p.P878T) (Oosterhof et al; Rademaker et al.).
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체 투여로 CSF1R의 돌연변이 변이체로 야기되는 CSF1R-결핍 질환을 예방, 이의 위험을 감소시키거나, 및/또는 치료할 수 있다. 일부 구체예들에서, 항-TREM2 항체 투여로 CSF1R의 돌연변이 변이체로 야기되는 CSF1R-결핍 질환을 갖는 개체에서 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성이 유도될 수 있다.
동반이환(Comorbidities)
CSF1R-결핍 질환이 있는 개체들은 추가적인 질환들, 이를 테면, 예를 들면, 전두측두엽 치매(FTD), 피질기저 증후군(CBS), 피질기저 퇴행(CBD), 알츠하이머 질환(AD), 다발성 경화증(MS), 피질하 경색을 동반한 비-정형 대뇌 상염색체 우성 동맥병증, 백색질뇌병증 (CADASIL), 및 파킨슨 질환 (PD)을 앓거나 또는 이러한 질환으로 추가 진단을 받았을 수도 있다.
TREM2 단백질
본 명세서는 CSF1R-결핍 질환을 갖는 개체를 치료하고, 이를 예방하거나, 이에 걸릴 위험을 줄이는 방법들을 제공하여, 이 방법은 개체에게 TREM2 단백질에 결합하는 항체를 투여하는 것을 포함하며, 여기에서 상기 항체는 효현제이다.
골수 세포-2(TREM2)에 발현되는 트리거(triggering) 수용체는 TREM-2, TREM2a, TREM2b, TREM2c, 골수 세포-2a에 발현되는 트리거 수용체 및 단핵구-2에 발현되는 트리거 수용체로 다양하게 지칭된다. TREM2는 230개의 아미노산 막 단백질이다. TREM2는 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 파골세포, 및 미세신경아교세포들을 비롯한, 그러나 이에 국한되지 않은 골수 계통 세포 상에서 주로 발현되는 면역글로불린-유사 수용체다. 일부 구체예들에서, TREM2는 DAP12와 함께 수용체 신호전달 복합체를 형성한다. 일부 구체예들에서, TREM2는 DAP12 (ITAM 도메인 어뎁터 단백질)를 통하여 인산화되고, 신호전달한다. 일부 구체예들에서, TREM2 신호전달로 PI3K 또는 기타 세포내 신호의 하류 활성화가 초래된다. 골수 세포에서, Toll-유사 수용체 (TLR) 신호는 예를 들어, 감염 반응의 맥락에서 TREM2 활성의 활성화에 중요하다. TLRs은 또한 병리학적 염증 반응, 가령, 대식세포 및 수지상 세포에서 발현되는 TLRs에서 중요한 역할을 한다.
본 명세서의 TREM2 단백질에는 다음의 것들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다: 인간 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. Q9NZC2; 서열 식별 번호: 1), 및 비-인간 포유류 TREM2 단백질, 이를 테면, 마우스 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. Q99NH8; 서열 식별 번호: 2), 렛(rat) TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. D3ZZ89; 서열 식별 번호: 3), 붉은털 원숭이 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. F6QVF2; 서열 식별 번호: 4), 시노물구스 원숭이 TREM2 단백질 (NCBI 기탁 번호. XP_015304909.1; 서열 식별 번호: 5), 말 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. F7D6L0; 서열 식별 번호: 6), 돼지 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. H2EZZ3; 서열 식별 번호: 7), 그리고 개 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. E2RP46; 서열 식별 번호: 8). 본원에 이용된 바와 같이 “TREM2 단백질”은 야생형 서열과 자연 발생적 변이체 서열 모두를 지칭한다.
일부 구체예들에서, 인간 TREM2 아미노산 서열의 예시는 하기 서열 식별 번호: 1에서 제시된다:
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일부 구체예들에서, 인간 TREM2는 신호 펩티드가 내포된 전구-단백질이다. 일부 구체예들에서, 인간 TREM2는 발달된(mature) 단백질이다. 일부 구체예들에서, 상기 발달된 TREM2 단백질에는 신호 펩티드가 내포되지 않는다. 일부 구체예들에서, 상기 발달된 TREM2 단백질은 세포 상에서 발현된다. 일부 구체예들에서, TREM2는 인간 TREM2 (서열 식별 번호: 1)의 아미노산 잔기 1-18에 위치한 신호 펩티드; 인간 TREM2 (서열 식별 번호: 1)의 아미노산 잔기 29-112에 위치한 세포외 면역글로불린-유사 가변-유형 (IgV) 도메인; 인간 TREM2 (서열 식별 번호: 1)의 아미노산 잔기 113-174에 위치한 추가적인 세포외 서열; 인간 TREM2 (서열 식별 번호: 1)의 아미노산 잔기 175-195에 위치한 막경유 도메인; 그리고 인간 TREM2 (서열 식별 번호: 1)의 아미노산 잔기 196-230에 위치한 세포내 도메인을 함유한다. 상기 TREM2 분열 부위는 히스티딘 157의 C-말단 측에서 발생하는 것으로 확인되었고(WO2018/015573 참고), 해당 부위의 분열로 TREM2 세포외 도메인의 관련 부분을 흘려보내게 되고, TREM2의 해당 부분에 해당하는 가용성 TREM2(sTREM2)의 증가로 감지할 수 있다.
인간 TREM2의 막경유 도메인은 DAP12(TREM2, TREM1 및 기타 관련 IgV 패밀리 구성원들로부터 신호전달을 변환하는 주요 어댑터 단백질)의 아스파라긴산과 상호작용할 수 있는 아미노산 잔기 186에 리신을 함유한다.
항-TREM2 항체
본 명세서의 특정 측면들은 TREM2 단백질에 결합하는 항체 (가령, 단일클론성 항체)에 관계하며, 여기에서 이 항-TREM2 항체는 효현제다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항체는 발달된 TREM2 단백질에 결합한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항체는 발달된 TREM2 단백질에 결합하며, 이때 상기 발달된 TREM2 단백질은 세포에서 발현된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항체는 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 피부의 랑게르한스 세포, 인간 쿠퍼 세포, 인간 미세신경아교세포, 및 이의 임의의 조합에서 선택된 하나 또는 그 이상의 인간 세포 상에 발현된 TREM2 단백질에 결합한다.
활성을 유도하고 및/또는 리간드-유도된 활성을 강화시키는 항-TREM2 항체
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 유도하는 효현성 항체다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 세포 상에서 발현된 TREM2 단백질에 결합한 후, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 유도한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드가 TREM2 단백질에 결합하는 것을 경쟁하거나, 저해하거나, 또는 그렇지 않으면 차단시키는 것 없이, TREM2 단백질에 결합한다. TREM2 리간드의 예로는 다음이 내포되나, 이에 국한되지 않는다: 대장균(E. coli) 세포, 아폽토시스 세포에 의해 발현된 TREM2 리간드, 핵산, 음이온성 지질, 음이온성 지질, APOE, APOE2, APOE3, APOE4, 음이온성 APOE, 음이온성 APOE2, 음이온성 APOE3, 음이온성 APOE4, 지질화된 APOE, 지질화된 APOE2, 지질화된 APOE3, 지질화된 APOE4, 쌍성이온성 지질, 음전하를 띤 인지질, 포스파티딜세린, 설파타이드, 포스파티딜콜린, 스핑고미엘린, 막 인지질, 지질화된 단백질, 단백질 지질, 지질화된 펩티드, 및 지질화된 아밀로이드 베타 펩티드. 따라서, 특정 구체예들에서, 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드는 대장균(E. coli) 세포, 아폽토시스 세포, 핵산, 음이온성 지질, 음이온성 지질, 쌍성이온성 지질, 음전하를 띤 인지질, 포스파티딜세린(PS), 설파타이드, 포스파티딜콜린, 스핑고미엘린(SM), 막 인지질, 지질화된 단백질, 단백질 지질, 지질화된 펩티드, 및 지질화된 아밀로이드 베타 펩티드를 포함한다.
본 명세서의 방법에 이용된 항-TREM2 항체는 효현성 항체다. 일부 구체예들에서, TREM2 단백질에 결합하는 본 명세서의 항체에는 에피토프 특이성으로 인하여 TREM2에 결합하고, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 활성화시키는 효현성 항체가 내포될 수 있다. 일부 구체예들에서, 이러한 항체는 TREM2 상에 있는 리간드-결합 부위에 결합할 수 있고, 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 작용을 모방하거나, 또는 리간드-결합 부위가 아닌 하나 또는 그 이상의 도메인에 결합함으로써 TREM2를 자극하여 신호를 변환시킬 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 TREM2에 리간드와의 결합을 경쟁하지 않거나, 또는 리간드 결합을 차단시키지 않는다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 부가적으로 작용하거나, 또는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드와 함께 공조작용하여, 하기에서 제시된 바와 같이, 하나 이상의 TREM2 활성을 활성화시키거나, 및/또는 강화시킨다.
본 명세서의 효현성 항-TREM2 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 동시 결합 차단 없이, TREM2에 결합하는 능력을 도시할 수 있다. 본 명세서의 항-TREM2 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드와 함께 부가적 및/또는 공조적 기능적 상호작용을 더 도시할 수 있다. 따라서, 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체에 결합할 때, 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드와 조합된 TREM2의 최대 활성은 리간드 단독의 포화 농도 또는 상기 항체 단독의 포화 농도에 노출될 때, TREM2의 최대 활성보다 더 크다(가령, 강화된다). 추가적으로, 주어진 농도의 TREM2 리간드에서 TREM2의 활성은 상기 항체 존재 하에서 더 클 수 있다(가령, 더 강화될 수 있다).
따라서, 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 TREM2 단백질에 결합하였을 때, 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드와 함께 부가 효과를 가지고 있어 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드와 공조하여 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 이 항체 부재 하에서 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 유도하는 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 능력과 비교하였을 때, 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 유도하는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 효능을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 TREM2의 세포 표면 클러스터링 부재 하에서 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 TREM2의 세포 표면 클러스터링을 유도하거나, 또는 유지시킴으로써, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 B 세포 및 미세신경아교 세포를 비롯한, 그러나 이에 국한되지 않는 하나 또는 그 이상의 면역 세포 상에서 발현된 하나 또는 그 이상의 Fc-감마 수용체에 의해 클러스트화된다. 일부 구체예들에서, TREM2 단백질에 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 결합에 의해 유도된 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성 강화는 수지상 세포, 골수-유래된 수지상 세포, 단핵구, 미세신경아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 및 쿠퍼 세포를 비롯한, 그러나, 이에 국한되지 않은 일차 세포, 또는 세포 계통 상에서 측정된다.
특정 구체예들에서, TREM2 단백질에 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 결합에 의해 유도된 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시키는 본 명세서의 항-TREM2 항체는 이들 항-TREM2 항체 부재 하에서, TREM2 단백질에 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 결합에 의해 유도된 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성 수준과 비교하였을 때, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 적어도 2-배, 적어도 3-배, 적어도 4-배, 적어도 5-배, 적어도 6-배, 적어도 7-배, 적어도 8-배, 적어도 9-배, 적어도 10-배, 적어도 11-배, 적어도 12-배, 적어도 13-배, 적어도 14-배, 적어도 15-배, 적어도 16-배, 적어도 17-배, 적어도 18-배, 적어도 19-배, 적어도 20-배 또는 그 이상으로 증가를 유도한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체에 의해, 및/또는 본 명세서의 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드 유도되거나 및/또는 강화될 수 있는 TREM2 활성에는 다음이 내포되나, 이에 국한되지 않는다: DAP12에 TREM2 결합; DAP12 인산화; Syk 키나제의 활성화; IFN-β, IL-1α, IL-1β, TNF-α,YM-1, IL-6, IL-8, CRP, CD86, MCP-1/CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCR2, CXCL-10, Gata3, Rorc, IL-20 패밀리 구성원, IL-33, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, CSF-1, MHC-II, OPN, CD11c, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, 및 IL-23으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 전-염증성 매개체의 변조, 임의선택적으로 여기에서 상기 변조는 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및 미세신경아교 세포로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 세포에서 일어나고; Syk, ZAP70, 또는 이 둘 모두가 DAP12/TREM2 복합체로의 회동; 하나 또는 그 이상의 TREM2-의존적 유전자들의 활성 증가, 임의선택적으로 여기에서 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2-의존적 유전자들은 활성화된 T-세포 (NFAT) 전사 인자의 핵 인자를 포함하고; 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 미세신경아교세포, M1 미세신경아교세포, 활성화된 M1 미세신경아교세포, 및 M2 미세신경아교세포, 또는 이의 임의의 조합의 생존 증가; CD83, CD86 MHC 클라스 II, CD40, 및 이의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 자극 분자들의 변조된 발현, 임의선택적으로 여기에서 CD40은 수지상 세포, 단핵구, 대식세포, 또는 이의 임의의 조합 상에서 발현되며, 및 임의선택적으로 여기에서 상기 수지상 세포는 골수-유래된 수지상 세포를 포함하고; 기억력 증가; 그리고 인지 결핍 감소. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 개체에게 투여될 때, 기억력을 증가시키고 및/또는 인지 결손을 감소시킨다.
Syk 인산화
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 세포에서 발현되는 TREM2 단백질에 결합한 후, 비장 티로신 키나제 (Syk) 인산화를 유도할 수 있다.
비장 티로신 키나제 (Syk)는 여러 기질을 인산화시킴으로써 TREM2의 하류에서 기능하고, 세포 활성화 및 염증 과정을 유도하는 신호 복합체의 형성을 촉진하는 세포내 신호전달 분자다.
일부 구체예들에서, Syk 활성화를 유도하는 효현성 TREM2 항체의 능력은 마우스 대식세포를 배양하고, 세포 추출물에서 Syk 단백질의 인산화 상태를 측정함으로써 결정된다. 일부 구체예들에서, 야생형 (WT) 마우스, TREM2 녹아웃 (KO) 마우스, 그리고 기능을 하는 Fc 수용체 공통 감마 쇄 유전자의 발현이 결여된 마우스의 골수-유래된 대식세포 (BMDM) (FcgR KO; REF: Takai T 1994. Cell 76(3):519-29)를 1% 혈청 RPMI에서 4 시간 동안 굶주리게 하고, 그 다음 PBS-EDTA가 있는 조직 배양 접시에서 꺼내고, PBS로 세척하고, 그리고 계수하였다. 일부 구체예들에서, 이들 세포에 전장 TREM2 항체, 또는 대조군 항체로 얼음 상에서 15분 동안 피복시켰다. 일부 구체예들에서, 차가운 PBS로 세척 후, 세포를 염소 항-인간 IgG 존재 하에서 표시된 시간 동안 37℃에서 항온처리하였다. 일부 구체예들에서, 자극 후, 세포를 용해 완충액 (1% v/v NP-40%, 50 Mm Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1.5 mM MgCl2, 10% 글리세롤, 여기에 프로페아제 및 포스파타제 억제제가 더해짐)으로 용해시키고, 이어서 16,000 g에서 10분 동안 4℃에서 원심분리시켜, 불용성 물질을 제거하였다. 일부 구체예들에서, 그 다음, 용해물은 항-Syk 항체 (BMDM의 경우 N-19, 또는 인간 DCs의 경우 4D10, Santa Cruz Biotechnology)로 면역침전시켰다. 일부 구체예들에서, 침전된 단백질을 SDS-PAGE를 통하여 분획화시키고, PVDF 막으로 이동시키고, 항-포스포티로신 항체 (4G10, Millipore)로 프로브시켰다. 일부 구체예들에서, 모든 기질이 적절하게 면역침전되었는지 확인하기 위해, 면역블롯은 항-Syk 항체(BMDM의 경우 Abcam) 또는 항-Syk(인간 DCs의 경우 Novus Biological)로 재-프로브된다. 일부 구체예들에서, 시각화는 강화된 화학발광 (ECL) 시스템(GE healthcare)으로 수행하였다((가령, Peng et al., (2010) Sci Signal., 3(122): ra38)에서 설명된 바와 같이).
DAP12 결합 및 인산화
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 TREM2가 DAP12에 결합하는 것을 유도할 수 있다. 다른 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 세포에서 발현된 TREM2 단백질에 결합한 후, DAP12 인산화를 유도할 수 있다. 다른 구체예들에서, TREM2-매개된 DAP12 인산화는 하나 또는 그 이상의 SRC 패밀리 티로신 키나제에 의해 유도된다. Src 패밀리 티로신 키나제의 예시에는 Src, Syk, Yes, Fyn, Fgr, Lck, Hck, Blk, Lyn, 및 Frk가 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
DAP12는 TYRO 단백질 티로신 키나제-결합 단백질, TYROBP, KARAP, 및 PLOSL로 다양하게 지칭된다. DAP12는 이의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반된 활성화 모티프 (ITAM)을 함유하는 막경유 신호전달 단백질이다. 특정 구체예들에서, 항-TREM2 항체는 이의 ITAM 모티프에서 DAP12 인산화를 유도할 수 있다. 단백질 인산화, 이를 테면, DAP12 인산화를 결정하는 당분야에 공지된 임의의 방법이 이용될 수 있다.
일부 구체예들에서, DAP12는 SRC 패밀리 키나제에 의해 포스포릴화되어, Syk 키나제, ZAP70 키나제, 또는 이 둘 모두가 DAP12/TREM2 복합체로 회합되고 이의 활성화를 초래한다.
일부 구체예들에서, DAP12 활성화를 유도하는 TREM2 항체의 능력은 마우스 대식세포를 배양하고, 세포 추출물에서 DAP12 단백질의 인산화 상태를 측정함으로써 결정된다. 일부 구체예들에서, 항체로 자극하기 전, 마우스 야생형 (WT) 골수-유래된 대식세포 (BMDM) 및 TREM2 녹아웃 (KO) BMDM는 4 시간 동안 1% 혈청 RPMI에서 굶긴다. 일부 구체예들에서, 15×106 세포를 15 분 동안 얼음 위에서 전장 TREM2 항체 또는 대조군 항체와 함께 항온처리하였다. 일부 구체예들에서, 세포를 세척하고, 세포를 염소 항-인간 IgG 존재 하에서 표시된 시간 동안 37℃에서 항온처리하였다. 일부 구체예들에서, 자극 후, 세포를 용해 완충액 (1% v/v n-도데실-β-D-말토시드, 50 Mm Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1.5 mM MgCl2, 10% 글리세롤, 여기에 프로페아제 및 포스파타제 억제제가 더해짐)으로 용해시키고, 이어서 16,000 g에서 10분 동안 4℃에서 원심분리시켜, 불용성 물질을 제거하였다. 일부 구체예들에서, 세포 용해물은 제 2 TREM2 항체 (R&D Systems)와 함께 면역침전된다. 일부 구체예들에서, 침전된 단백질을 SDS-PAGE를 통하여 분획화시키고, PVDF 막으로 이동시키고, 항-포스포티로신 Ab (4G10, Millipore)로 프로브시켰다. 일부 구체예들에서, 이 막을 벗겨내고, 항-DAP12 항체 (Cells Signaling, D7G1X)로 재-프로브시킨다. 일부 구체예들에서, TREM2 면역침전에 이용된 각 세포 용해물은 대조군 항체 (항-액틴, Santa Cruz)에 의해 표시된 단백질과 동량을 함유한다.
TREM2 발현 세포의 증식, 생존 및 기능
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 세포에서 발현된 TREM2 단백질에 결합 후, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및 미세신경아교 세포 (미세신경아교세포)의 증식, 생존 및/또는 기능을 증가시킬 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 하나 또는 그 이상의 타고난 면역 세포의 성장(가령, 증식 및/또는 생존)을 저해하지 않는다.
미세신경아교 세포는 뇌와 척수의 상주하는 대식세포인 신경아교세포 유형으로, 중추신경계(CNS)에서 활성 면역 방어의 첫 번째이자 주요 형태로 작용한다. 미세신경아교 세포는 뇌 안의 전체 신경아교 세포 집단의 20%를 구성한다. 미세신경아교 세포는 플라크, 손상된 뉴런 및 감염원을 찾기 위해 CNS를 지속적으로 청소한다. 뇌와 척수는 혈액-뇌 장벽(이것은 대부분의 감염이 취약한 신경 조직에 도달하는 것을 방지한다)으로 알려진 일련의 내피 세포에 의해 신체의 나머지 부분과 분리되어 있다는 점에서 "면역 특혜받은(immune privileged)" 기관으로 간주된다. 감염원이 뇌에 직접 도입되거나 또는 혈액-뇌 장벽을 통과하는 경우, 미세신경아교 세포는 민감한 신경 조직을 손상시키기 전, 염증을 감소시키고, 감염원을 파괴하기 위해 신속하게 반응해야만 한다. 신체의 나머지 부분에서 항체를 사용할 수 없기 때문에 (혈액 뇌 장벽을 통과할 만큼 작은 항체는 거의 없다), 미세신경아교세포는 외부이물질을 인지하고, 이를 집어 삼킬 수 있어야 하며, T-세포를 활성화시키는 항원-제시 세포로 작용할 수 있어야만 한다. 이 프로세스는 잠재적으로 치명적인 손상을 방지하기 위해 신속하게 수행되어야 하기 때문에, 미세신경아교 세포는 CNS의 작은 병리학적 변화에도 극도로 민감하다. 그들은 세포외 칼륨의 작은 변화에도 반응하는 독특한 칼륨 채널을 가짐으로써, 부분적으로 이러한 감도를 얻는다.
본원에 이용된 바와 같이, 본 명세서의 대식세포에는 M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및 M2 대식세포가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 본원에 이용된 바와 같이, 본 명세서의 미세신경아교 세포에는 M1 미세신경아교 세포, 활성화된 M1 미세신경아교 세포, 및 M2 미세신경아교 세포가 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 수지상 세포, 단핵구, 및/또는 대식세포 상에서 CD83 및/또는 CD86의 발현을 증가시킬 수 있다.
본원에 이용된 바와 같이, 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, 및/또는 미세신경아교세포의 증식, 생존, 및/또는 기능 비율에는 만약 본 명세서의 항-TREM2 항체로 치료된 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경아교세포의 증식, 생존, 및/또는 기능 비율이 해당 항-TREM2 항체로 치료받지 않은 대응하는 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경아교세포의 증식, 생존, 및/또는 기능 비율보다 크다면, 증가된 발현이 내포될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 대상체의 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경아교세포의 증식, 생존, 및/또는 기능 비율을 예를 들면, 해당 항-TREM2 항체로 치료받지 않은 대응하는 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경아교세포의 증식, 생존, 및/또는 기능 비율과 비교하였을 때, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200% 증가시킬 수 있다. 다른 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 대상체의 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경아교세포의 증식, 생존, 및/또는 기능 비율을 예를 들면, 해당 항-TREM2 항체로 치료받지 않은 대응하는 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및/또는 미세신경아교세포의 증식, 생존, 및/또는 기능 비율과 비교하였을 때, 적어도 1.5 배, 적어도 1.6 배, 적어도 1.7 배, 적어도 1.8 배, 적어도 1.9 배, 적어도 2.0 배, 적어도 2.1 배, 적어도 2.15 배, 적어도 2.2 배, 적어도 2.25 배, 적어도 2.3 배, 적어도 2.35 배, 적어도 2.4 배, 적어도 2.45 배, 적어도 2.5 배, 적어도 2.55 배, 적어도 3.0 배, 적어도 3.5 배, 적어도 4.0 배, 적어도 4.5 배, 적어도 5.0 배, 적어도 5.5 배, 적어도 6.0 배, 적어도 6.5 배, 적어도 7.0 배, 적어도 7.5 배, 적어도 8.0 배, 적어도 8.5 배, 적어도 9.0 배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10 배 증가시킬 수 있다.
일부 구체예들에서, 시험관-내 세포 생존을 유도하거나 또는 향상시키는 항-TREM2 항체의 능력을 평가하기 위해, FcgRI, FcgRIII, 및 FceRI 수용체의 감마 쇄 소단위 결핍 대식세포(Fcgr1KO 마우스, REF: Takai T, Li M, Sylvestre D, Clynes R, Ravetch J. (1994). Cell, 76:519-529)는 플레이트-결합된 항-TREM2 항체의 존재 하에 배양되었고, 세포 생존율은 세포가 준-최적 성장 조건에서 배양될 때 결정된다. 일부 구체예들에서, FcgR1 KO 마우스(Taconic, 모델 584)로부터의 뮤린 골수 전구 세포는 경골 및 대퇴골 골수 세포를 차가운 PBS로 플러싱하여 얻는다. 일부 구체예들에서, PBS로 1회 세척한 후, 적혈구를 ACK 용해 완충액(Lonza)을 사용하여 용해시키고, PBS로 2회 세척하였고, 표시된 양의 M-CSF(Peprotech)와 함께, RPMI 완전 배지(10% FCS, Pen/Strep, Gln, neAA)에서 0.5x106개 세포/ml로 현탁시켜, 대식세포를 생산한다. 일부 구체예들에서, 골수-유래된 대식세포의 세포 생존력을 분석하기 위해, 세포를 위와 같이 준비하고, 2일 동안 비-조직 배양 처리된 플레이트에서 준-최적 양의 M-CSF(10ng/ml)와 함께 96웰 플레이트에 2.5x104/200μl로 플레이팅한다. 일부 구체예들에서, 그런 다음, 세포를 ToxGlo™키트(Promega)를 사용하여 정량화하고, 세포 생존율의 척도로 발광성을 결정한다. 일부 구체예들에서, 모든 실험은 항-TREM2 항체 또는 아이소형 대조군 항체의 존재 또는 부재 하에 수행된다.
TREM2-의존적 유전자 발현
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 TREM2-의존적 유전자, 이를 테면, 전사 인자의 활성화된 T-세포 (NFAT) 패밀리의 핵 인자의 하나 또는 그 이상의 전사 인자의 활성 및/또는 발현을 증가시킬 수 있다.
일부 구체예들에서, 마우스 또는 인간의 TREM2-의존적 유전자들을 활성화시키는 가용성 전장 항-TREM2 항체의 능력은 NFAT (활성화된 T-세포의 핵 인자) 프로모터의 제어 하에서 루시퍼라제 리포터 유전자를 이용하여 평가된다. 일부 구체예들에서, 마우스 흉선 림프종 T 림프구로부터 유래된 세포 계통 BW5147.G.1.4 (ATCC®TIB48™)에 마우스 TREM2 및 DAP12, 그리고 Cignal Lenti NFAT-루시퍼라제 바이러스 (Qiagen)를 감염시킨다. 일부 구체예들에서, 대안으로, BW5147.G.1.4 세포 계통에 인간 TREM2/DAP12 융합 단백질, 그리고 Cignal Lenti NFAT-루시퍼라제 바이러스 (Qiagen)를 감염시킨다. 일부 구체예들에서, 신호전달을 위한 양성 대조군으로써, PMA (0.05 ug/ml) 및 이오노마이신 (0.25 uM)을 함께 추가한다. 일부 구체예들에서, 세포는 가용성 항-TREM2 항체 및 아이소형 대조군 항체와 함께 6 시간 동안 항온처리되며, 루시퍼라제 활성은 각 웰에 OneGlo Reagent (Promega)를 추가하고, 실온에서 플레이트 쉐이커 상에서 3분간 항온처리하여 측정된다. 일부 구체예들에서, 루시퍼라제 신호는 BioTek 플레이트 판독기를 이용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, 상기 세포들은 내생성 리간드의 존재로 인해, 또는 자발적인 수용체 응집으로 인해, 강장성(tonic) TREM2-의존적 신호 전달을 나타내고, 이것은 TREM2 신호전달로 이어진다.
일부 구체예들에서, 상기 TREM2 단백질에 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 결합에 의해 유도된 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성의 강화는 예를 들면, 시험관내 세포 분석을 이용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성의 증가는 본원에 기술된 또는 당분야에 공지된, 임의의 적합한 시험관내 세포-기반 분석 또는 임의의 적합한 생체내 모델을 이용하여 측정될 수 있는데, 예를 들면, TREM2-의존적 유전자 발현을 측정하기 위한 루시퍼라제-기반된 리포터 분석을 이용하여, 하류 신호전달 짝, 이를 테면, Syk의 TREM2-유도된 인산화에서 증가를 측정하는 웨스턴 블랏 분석을 이용하여, 또는 유동 세포분석법을 이용하여, 이를 테면, TREM2 활성화의 마커의 세포 표면 수준에서 변화를 측정하기 위해, 형광-활성화된 세포 분류(FACS)를 이용하여 측정될 있다. 본원에 기술된 또는 당분야에 공지된 임의의 시험관내 세포-기반 분석 또는 적합한 생체내 모델을 이용하여 TREM2와 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드 간의 상호작용(가령, 결합)을 측정한다.
일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성에서 증가는 시험관내 세포-기반 분석에 의해 측정된다. 일부 구체예들에서, 시험관-내 세포 생존을 유도하는 항-TREM2 항체의 능력을 평가하기 위해, FcgRI, FcgRIII, 및 FceRI 수용체의 감마 쇄 소단위 결핍 대식세포(Fcgr1KO mice, REF: Takai T, Li M, Sylvestre D, Clynes R, Ravetch J. (1994).Cell, 76:519-529)는 플레이트-결합된 항-TREM2 항체의 존재 하에 배양되었고, 세포 생존율은 세포가 준-최적 성장 조건에서 배양될 때 결정된다. 일부 구체예들에서, FcgR1 KO 마우스(Taconic, 모델 584)로부터의 뮤린 골수 전구 세포는 경골 및 대퇴골 골수 세포를 차가운 PBS로 플러싱하여 얻는다. 일부 구체예들에서, PBS로 1회 세척한 후, 적혈구를 ACK 용해 완충액(Lonza)을 사용하여 용해시키고, PBS로 2회 세척하였고, 표시된 양의 M-CSF(Peprotech)와 함께, RPMI 완전 배지(10% FCS, Pen/Strep, Gln, neAA)에서 0.5x106개 세포/ml로 현탁시켜, 대식세포를 생산한다. 일부 구체예들에서, 골수-유래된 대식세포의 세포 생존력을 분석하기 위해, 세포를 위와 같이 준비하고, 2일 동안 비-조직 배양 처리된 플레이트에서 준-최적 양의 M-CSF(10ng/ml)와 함께 96웰 플레이트에 2.5x104/200μl로 플레이팅한다. 일부 구체예들에서, 그런 다음, 세포를 ToxGlo™키트(Promega)를 사용하여 정량화하고, 세포 생존율의 척도로 발광성을 결정한다. 일부 구체예들에서, 모든 실험은 항-TREM2 항체 또는 아이소형 대조군 항체의 존재 또는 부재 하에 수행된다.
일부 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성에서 증가는 생체내 세포-기반 분석에 의해 측정된다. 일부 구체예들에서, 생체내 면역 세포의 수를 증가시키는 항-TREM2 항체의 능력을 평가하기 위해, C57Bl6 마우스에게 항-TREM2 항체 또는 마우스 IgG1 아이소형 대조군 항체를 복강내(IP) 주사하고, 뇌에 있는 면역 세포 수는 FACS에 의해 정량화된다. 일부 구체예들에서, 그룹당 3~4마리의 마우스에게 40mg/kg의 항-TREM2 항체 또는 아이소형 대조군 항체 mIgG1 (clone MOPC-21, Bioxcell)을 IP 주사한다. 일부 구체예들에서, 48시간 후, 전체 뇌를 수거하고, PBS로 헹구고, 1mg/ml의 콜라게나제를 함유한 PBS에서 37℃에서 항온처리하고, 세포 여과기를 통해 처리하여 단일 세포 현탁액을 얻는다. 일부 구체예들에서, 그 다음, 세포를 항-CD45-PerCp-Cy7, 항-CD11b-PerCP-Cy5.5, 항-Gr1-FITC 항체 및 세포 생존력 염료 (Life Technologies, Cat# L34957)와 함께 얼음 상에서 30 분 동안 항온처리하고, 그 다음 차가운 FACS 완충액으로 2회 세척한다. 일부 구체예들에서, 그 다음, 4% PFA-고정된 샘플을 FACS에 의해 분석한다. 일부 구체예들에서, BD FACSCanto™II 세포측정기(Becton Dickinson)에서 데이터를 수집하고, FlowJo 소프트웨어로 분석한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 상기 TREM2 리간드를 이의 EC50 농도에서 이용할 때, 항-TREM2 항체 부재 하에서 상기 TREM2 단백질에 TREM2 리간드의 결합에 의해 유도된 TREM2-의존적 유전자 전사 수준과 비교하였을 때, 약 0.5 nM ~ 약 50 nM, 또는 50 nM 이상 범위의 농도로 이용될 때, 리간드-유도된 TREM2-의존적 유전자 전사가 약 1.5-배 ~ 약 6-배, 또는 6-배 이상으로 증가를 유도한다면, 상기 TREM2 단백질에 TREM2 리간드의 결합에 의해 유도된 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 리간드-유도된 TREM2-의존적 유전자 전사에 있어서 증가는 약 0.5 nM ~ 약 50 nM, 또는 50 nM 이상 범위 농도로 이용될 때, 상기 TREM2 리간드가 이의 EC50 농도로 이용될 때, 항-TREM2 항체 부재 하에서 상기 TREM2 단백질에 TREM2 리간드의 결합에 의해 유도된 TREM2-의존적 유전자 전사 수준과 비교하였을 때, 적어도 1.5-배, 적어도 2-배, 적어도 3-배, 적어도 4-배, 적어도 5-배, 적어도 6-배, 적어도 7-배, 적어도 8-배, 적어도 9-배, 적어도 10-배, 적어도 11-배, 적어도 12-배, 적어도 13-배, 적어도 14-배, 적어도 15-배, 적어도 16-배, 적어도 17-배, 적어도 18-배, 적어도 19-배, 적어도 20-배 또는 그 이상이다.
일부 구체예들에서, 상기 항-TREM2 항체는 적어도 0.5 nM, 적어도 0.6 nM, 적어도 0.7 nM, 적어도 0.8 nM, 적어도 0.9 nM, 적어도 1 nM, 적어도 2 nM, 적어도 3 nM, 적어도 4 nM, 적어도 5 nM, 적어도 6 nM, 적어도 7 nM, 적어도 8 nM, 적어도 9 nM, 적어도 10 nM, 적어도 15 nM, 적어도 20 nM, 적어도 25 nM, 적어도 30 nM, 적어도 35 nM, 적어도 40 nM, 적어도 45 nM, 적어도 46 nM, 적어도 47 nM, 적어도 48 nM, 적어도 49 nM, 또는 적어도 50 nM의 농도로 이용된다. 일부 구체예들에서, 상기 TREM2 리간드는 포스파티딜세린 (PS)이다. 일부 구체예들에서, 상기 TREM2 리간드는 스핑고미엘린 (SM)이다. 일부 구체예들에서, 하나 이상의 TEM2 활성에 있어서 증가는 본원에서 기술된 또는 당분야에 공지된 임의의 적합한 시험관내 세포-기반 분석 또는 적합한 생체내 모델에 의해 측정될 수 있다. 일부 구체예들에서, 루시퍼라제-기반된 리포터 분석을 이용하여, 예를 들면, WO2017/062672 및 WO2019/028292에서 기술된 바와 같은 항체의 존재 하에서, 그리고 이 항체의 부재 하에서, 리간드-유도된 TREM2-의존적 유전자 발현의 배수 증가를 측정한다.
본원에 이용된 바와 같이, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 본원에 기술된 또는 당분야에 공지된 임의의 시험관 분석 또는 세포-기반 배양 분석을 이용하여 항체 포화 농도에서 TREM2에 대한 리간드 결합이 20% 미만으로 감소한다면, 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드와 TREM2 간에 상호작용(가령, 결합)과 경쟁하지 않거나, 이를 저해하지 않거나, 또는 그렇지 않으면 차단하지 않는다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 본원에 기술된 또는 당분야에 공지된 임의의 시험관 분석 또는 세포-기반 배양 분석을 이용하여 항체 포화 농도에서 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드와 TREM2 간의 상호작용(가령, 결합)을 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만으로 저해한다.
가용성 TREM2를 감소시키는 항-TREM2 항체
일부 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 가용성 TREM2 (sTREM2)를 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 세포의 세포 표면으로부터 세포외 샘플로 "발산되는(가령, 흘러내리는)" sTREM2의 수준을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 이러한 항체는 TREM2의 영역에 결합하여, TREM2의 분열을 차단시킨다. 이러한 구체예들에서, 상기 항체는 TREM2의 분열 부위인, His157을 포함하는 영역에 결합한다.
항-TREM2 항체에 의한 TREM2의 분열의 저해 정도는 항-TREM2 항체 부재 하에서 sTREM2의 양과 비교하였을 때, 항-TREM2 항체 존재 하에서 가용성 TREM2 (sTREM2)의 양과 음의 상관관계가 있다. 예를 들면, 항-TREM2 항체는 전술한 항-TREM2 항체 존재 하에서, sTREM2의 양이 가령, sTREM2의 ELISA-기반된 정량화에 의해 분석하였을 때, 항-TREM2 항체 부재 하에서, sTREM2 양의 0-90%, 바람직하게는 0-80%, 더욱 바람직하게는 0-70%, 더욱 더 바람직하게는 0-60%, 더욱 더 바람직하게는 0-50%, 그리고 더욱 더 바람직하게는 0-20%이라면, TREM2의 분열을 저해하는 항-TREM2 항체로 간주될 수 있다.
일부 구체예들에서, 항-TREM2 항체는 처리된 샘플 안에 있는 sTREM2의 양이 대조군 값과 비교하여, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 그 이상으로 감소된다면, sTREM2 수준을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 항-TREM2 항체는 처리된 샘플 안에 있는 sTREM2의 양이 대조군 값과 비교하여, 적어도 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배 또는 그 이상 감소한다면, sTREM2 수준을 감소시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 대조군 값은 처리안된 샘플 (가령, 항-TREM2 항체로 처리되지 않았던 TREM2-발현시키는 세포의 상청액, 또는 항-TREM2 항체로 처리되지 않았던 대상체의 샘플) 또는 적절한 비-TREM2-결합 항체로 처리된 샘플 안에 있는 sTREM2의 양이다.
일부 구체예들에서, sTREM2 발산은 유체, 가령, 혈액, 혈장, 혈청, 소변, 또는 뇌척수액을 포함하는 샘플을 이용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, 상기 샘플은 뇌척수액을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 샘플은 세포 배양물의 상청액 (가령, TREM2를 내생적으로 발현시키는 일차 세포 또는 세포 계통, 이를 테면, TREM2를 발현시키도록 공작된 인간 대식세포, 또는 일차 세포 또는 세포 계통의 상청액)을 포함한다.
일부 구체예들에서, 샘플 안에 있는 sTREM2 수준은 면역분석을 이용하여 측정된다. 면역분석은 당분야에 공지되어 있으며, 여기에는 효소 면역분석 (EIA) 이를 테면, 효소 다중화된 면역분석 (EMIA), 효소 연계된 면역흡착성 분석 (ELISA), 미립자 효소 면역분석 (MEIA), 면역조직화학 (IHC), 면역세포화학, 모세관 전기영동 면역분석 (CEIA), 방사능면역분석 (RIA), 면역형광, 화학발광 면역분석 (CL), 및 전기화학발광 면역분석 (ECL)이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 일부 구체예들에서, sTREM2 수준은 ELISA 분석을 이용하여 측정된다.
일부 구체예들에서, ELISA 분석을 이용하여 세포 배양 상청액에서 sTREM2 수준을 정량화시킬 수 있다. 일부 구체예들에서, 인간 sTREM2에 대한 ELISA는 Meso Scale Discovery SECTOR Imager 2400를 이용하여 수행된다. 일부 구체예들에서, 스트렙타아비딘-피복된 96-웰 플레이트를 4℃에서, PBS 안에 0.5% 소의 혈청 알부민 (BSA) 및 0.05% Tween 20(pH 7.4) (차단 완충액)에서 하룻밤 동안 차단시킨다. 일부 구체예들에서, 플레이트를 차단 완충액에서 희석시킨 바이오티닐화된 다중클론성 염소 항-인간 TREM2 포획 항체 (0.25 mg/ml; R&D Systems)와 함께 실온에서 1 시간 동안 교반시킨다. 일부 구체예들에서, 플레이트는 PBS에서 0.05% Tween 20 (세척 완충액)으로 후속적으로 4회 세척하고, 그리고 프로테아제 억제제 (Sigma)가 보충된, PBS에서 0.25% BSA 및 0.05% Tween 20 (pH 7.4)(분석 완충액)에서 1:4로 희석된 샘플과 함께 실온에서 2시간 동안 항온처리한다. 일부 구체예들에서, 재조합 인간 TREM2 단백질 (Holzel Diagnostika)을 분석 완충액으로 2-배 연속 희석하고, 표준 곡선에 사용한다 (농도 범위, 4000 ~ 62.5 pg/ml). 일부 구체예들에서, 플레이트를 5 분간 세척 완충액으로 세척한 후, 차단 완충액에서 희석된 마우스 단일클론성 항-TREM2 항체 (1 mg/ml; Santa Cruz Biotechnology; B-3)와 함께 실온에서 1 시간 동안 항온처리한다. 일부 구체예들에서, 3회의 추가 세척 단계 후, 플레이트를 SULFO-TAG-라벨된 항-마우스 이차 항체 (1:1000; Meso Scale Discovery)와 함께 항온처리하고, 암(dark) 상태에서 1 시간 동안 항온처리한다. 일부 구체예들에서, 플레이트를 세척 완충액으로 3회 세척하고, 이어서 PBS에서 2회 세척 단계 후, Meso Scale Discovery Read 완충액을 추가하여 현상시킨다(developed). 일부 구체예들에서, 전기화학적 자극 후, 620 nm에서의 발광은 Meso Scale Discovery SECTOR Imager 2400 판독기를 사용하여 측정된다. 일부 구체예들에서, 분비되는 sTREM2의 수준을 정량화하기 위해, 생물학적 리플리케이트로부터 조건화 배지를 이중 분석한다. 일부 구체예들에서, sTREM2 표준 곡선은 5-매개변수 로지스틱 피팅을 통해, MasterPlex ReaderFit 소프트웨어(MiraiBio Group, Hitachi Solutions America)를 사용하여 생성된다. 일부 구체예들에서, 후속적으로 sTREM2 수준은 웨스턴 블롯에서 정량화된 미-발달 TREM2의 수준으로 정규화된다.
일부 구체예들에서, sTREM2는 세포의 TREM2 수용체의 비활성 변이체일 수 있다. 일부 구체예들에서, sTREM2는 대상체의 말초, 이를 테면, 대상체의 혈장, 또는 뇌에 존재할 수 있고, 항-TREM2 항체를 격리시킬 수 있다. 이렇게 격리된 항체는 세포 안에 존재하는 예를 들면, 세포의 TREM2 수용체에 결합하여, 이를 활성화시킬 수 없을 것이다. 따라서, 특정 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체 , 이를 테면, 본 명세서의 항-TREM2 효현성 항체는 가용성 TREM2에 결합하지 않는다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체, 이를 테면, 본 명세서의 항-TREM2 효현성 항체는 생체내 TREM2에 결합하지 않는다. 일부 구체예들에서, 가용성 TREM2에 결합하지 않는 본 명세서의 항-TREM2 효현성 항체에는 TREM2 상의 에피토프에 결합할 수 있는데, 예를 들면, sTREM2에 함유되지 않은 세포성 TREM2의 세포외 도메인의 일부분, 예를 들면, 아미노산 잔기 161-175 안에 있는 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 내포될 수 있거나; TREM2의 막경유 부분에 또는 이 부근에 존재할 수 있거나; 또는 TREM2의 막경유 부분이 내포될 수 있다.
TREM2 클러스터링에 영향을 주는 항체
생체내에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 다중 잠재적 메카니즘에 의해 수용체를 활성화시킬 수 있다. 일부 구체예들에서, 효현제인 본 명세서의 항-TREM2 항체는 적절한 에피토프 특이성으로 인하여, 플레이트 상에 결합된, 또는 Fcg 수용체들을 통하여 클러스트화된 이차 항체와 클러스트 없이, 용액 안에 TREM2를 활성화시키는 능력을 보유한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 이들의 독특한 구조로 인하여, 수용체들을 클러스트화시키는 고유의 능력, 또는 클러스트화된 입체형태에 수용체들을 유지시키는 능력을 갖는 인간 항체의 아이소형, 이를 테면, IgG2를 갖고, 이로 인하여 Fc 수용체에 결합없이, 수용체, 이를 테면, TREM2를 활성화시킨다(가령,　White　et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148).
특정 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 TREM2를 활성화시키고, 신호를 전환시키기 위해, 이들 세포 표면 상에서 클러스트링을 유도하거나, 또는 유지시킬 수 있다. 특정 구체예들에서, 적절한 에피토프 특이성을 갖는 항-TREM2 효현성 항체는 세포 표면 상에서 TREM2의 클러스트링을 유도하거나, 또는 유지시킬 수 있고, 및/또는 TREM2를 활성화시킬 수 있다. 일부 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 124-153내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 124-153에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 129-153내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 129-153에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 140-149내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 140-149에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 149-157내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 149-157에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 153-162내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 153-162에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들에서 하나 또는 그 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 서열 식별 번호: 1의 D140, L141, W142, F143, P144, E151, D152, H154, E156, 및 H157로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열 식별 번호: 1의 D140, L141, W142, F143, P144, E151, D152, H154, E156, 및 H157로 구성된 군에서 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유류 TREM2 단백질 상의 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 인접 세포 상에서 Fcg 수용체에 결합함으로써, 수용체 (가령, TREM2)를 클러스트시킨다. 상기 항체의 불변 IgG Fc 부분이 Fcg 수용체에 결합함으로써 이들 항체의 응집이 유도되고, 다시 이들 항체는 이들 가변 여역을 통하여 결합되는 수용체를 응집시킨다 (Chu et al (2008) Mol Immunol , 45:3926-3933; 그리고 Wilson et al., (2011) Cancer Cell 19, 101-113). 당분야의 당업자에 공지된 임의의 적합한 분석 (이를 테면, WO2017/062672 및 WO2019/028292에 기술된 분석들)을 이용하여 항체 클러스터링을 결정할 수 있다.
다른 기전들을 또한 이용하여 수용체 (가령, TREM2)클러스터링할 수 있다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 함께 가교된 항체 단편들 (가령, Fab 단편들)을 이용하여 상기에서 기술된 바와 같이, Fcg 수용체에 결합하는 Fc 영역을 갖는 항체들과 유사한 방식으로 수용체 (가령, TREM2)를 클러스트시킬 수 있다. 일부 구체예들에서, 가교된 항체 단편들 (가령, Fab 단편들)은 이들이 세포 표면 상에서 수용체 클러스터링을 유도하고, 그리고 해당 표적 (가령, TREM2) 상에 있는 적절한 에피토프에 결합한다면, 이들은 효현성 항체로 기능을 할 수 있다.
표적화된 수용체를 활성화시키기 위해 FcgR 수용체에 결합하는 것에 의존적인 항체는 FcgR 결합을 제거하도록 공작된 경우, 이의 효현성 활성을 상실할 수 있다 (가령, Wilson et al., (2011) Cancer Cell 19, 101-113; Armour at al., (2003) Immunology 40 (2003) 585-593); 그리고 White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148 참고). 이와 같이, 적절한 에피토프 특이성을 갖는 본 명세서의 항-TREM2 항체는 상기 항체가 Fc 도메인을 보유할 때, TREM2를 활성화시킬 수 있다.
예시적인 항체 Fc 아이소형 및 변형들은 하기 표 A에서 제공된다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 하기 표 A에 열거된 Fc 아이소형을 갖는다.
표 A: Fc 감마 수용체에 결합할 수 있는 예시적인 항체 Fc 아이소형
Figure pct00004
Figure pct00005
일부 구체예들에서, 상기 항체는 IgG 클라스, IgM 클라스, 또는 IgA 클라스의 항체다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소형을 갖는다.
인간에서 Fcg 활성화 수용체 I, IIA, IIC, IIIA, IIIB를 및/또는 마우스에서 Fcg 활성화 수용체 I, III 및 IV에 결합하는 인간 IgG1 또는 IgG3 아이소형을 갖고, 이의 돌연변이를 갖는 항체 (가령, Strohl (2009) Current Opinion in Biotechnology 2009, 20:685-691)는 생체내 효현성 항체로 또한 작용할 수 있을 뿐만 아니라, ADCC와 관련된 효과와 연합될 수 있다. 그러나, 이러한 Fcg 수용체는 억제성 Fcg 수용체 FcgRIIB와 비교하였을 때 (가령, White, et al., (2013) Cancer Immunol. Immunother. 62, 941-948; 그리고 Li et al., (2011) Science 333(6045):1030-1034 참고) 생체내 항체 결합에 대한 이용가능성이 떨어지는 것으로 보인다.
특정 구체예들에서, 상기 항체는 IgG2 아이소형을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 인간 IgG2 불변 영역을 함유한다. 일부 구체예들에서, 상기 인간 IgG2 불변 영역에는 Fc 영역이 내포된다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성, DAP12 활성을 유도하고, 또는 이둘은 모두 Fc 수용체에 결합과는 독립적이다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합한다. 특정 구체예들에서, 상기 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)이며, 이는 ADCC를 최소화시키거나 또는 제거한다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 하나 또는 그 이상의 변형을 함유한다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 (가령, 동일한 아이소형의 야생형 Fc 영역과 비교하여) 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환을 함유한다. 일부 구체예들에서, 상기 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환은 V234A (Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A (Cole et al. (1999) Transplantation, 68:563-571), H268Q, V309L, A330S, P331S (US 2007/0148167; Armour et al. (1999) Eur J Immunol 29: 2613-2624; Armour et al. (2000) The Haematology Journal 1(Suppl.1):27; Armour et al. (2000) The Haematology Journal 1(Suppl.1):27), C232S, 및/또는 C233S (White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148), S267E, L328F (Chu et al., (2008) Mol Immunol, 45:3926-3933), M252Y, S254T, 및/또는 T256E로부터 선택되며, 여기에서 아미노산 위치는 EU 번호매김 조약에 따른다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 C127S 아미노산 치환을 함유하는 중쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 아이소형을 보유하며, 여기에서 상기 아미노산 위치는 EU 번호매김 조약에 따른다 (White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al., (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762; 그리고 WO2008079246).
일부 구체예들에서, 상기 항체는 C214S 아미노산 치환을 함유하는 카파 경쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 아이소형을 보유하며, 여기에서 상기 아미노산 위치는 EU 번호매김 조약에 따른다 (White et al.,(2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al., (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762; 그리고 WO2008079246).
특정 구체예들에서, 상기 항체는 IgG1 아이소형을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 마우스 IgG1 불변 영역을 함유한다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 함유한다. 일부 구체예들에서, 상기 인간 IgG1 불변 영역에는 Fc 영역이 내포된다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합한다. 특정 구체예들에서, 상기 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)이다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 하나 또는 그 이상의 변형을 함유한다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 (가령, 동일한 아이소형의 야생형 Fc 영역과 비교하여) 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환을 함유한다. 일부 구체예들에서, 상기 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환은 N297A (Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23:403-411), D265A (Shields et al. (2001) R. J. Biol. Chem. 276, 6591-6604), L234A, L235A (Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984; Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A (Alegre et al. (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al. (2000) Cell Immunol, 200:16-26),C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E (McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), P331S (Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA 2008, 105:20167-20172), S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, 및/또는 T256E에서 선택되며, 여기에서 상기 아미노산 위치는 EU 번호매김 조약에 따른다.
일부 구체예들에서, 상기 항체에는 IgG2 아이소형 중쇄 불변 도메인 1(CH1) 및 힌지 영역이 내포된다 (White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148). 특정 구체예들에서, IgG2 아이소형 CH1 및 힌지 영역은 아미노산 서열 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP (서열 식별 번호: 42)을 함유한다. 일부 구체예들에서, 상기 항체 Fc 영역은 S267E 아미노산 치환, L328F 아미노산 치환, 또는 이 둘 모두, 및/또는 N297A 또는 N297Q 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 상기 아미노산 위치는 EU 번호매김 조약에 따른다.
특정 구체예들에서, 상기 항체는 IgG4 아이소형을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 인간 IgG4 불변 영역을 함유한다. 일부 구체예들에서, 상기 인간 IgG4 불변 영역에는 Fc 영역이 내포된다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합한다. 특정 구체예들에서, 상기 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)이다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 하나 또는 그 이상의 변형을 함유한다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 (가령, 동일한 아이소형의 야생형 Fc 영역과 비교하여) 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환을 함유한다. 일부 구체예들에서, 상기 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환은 L235A, G237A, S228P, L236E (Reddy et al., (2000) J Immunol,164:1925-1933), S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T, 및/또는 T256E에서 선택되며, 여기에서 상기 아미노산 위치는 EU 번호매김 조약에 따른다.
특정 구체예들에서, 상기 항체는 하이브리드 IgG2/4 아이소형을 갖는다. 일부 구체예들에서, 상기 항체에는 EU 번호매김에 따라 인간 IgG2의 아미노산 118 ~ 260을 함유하는 아미노산 서열, 그리고 EU 번호매김에 따라, 인간 IgG4의 아미노산 261-447을 함유하는 아미노산 서열이 내포된다 (WO 1997/11971; WO 2007/106585).
특정 구체예들에서, 상기 항체는 마우스 IgG4 불변 영역을 함유한다 (Bartholomaeus, et al. (2014). J. Immunol. 192, 2091-2098).
일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 A330L, L234F; L235E, 또는 P331S (EU 번호매김에 따른); 그리고 이의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 추가적인 아미노산 치환을 더 함유한다.
특정 구체예들에서, 상기 항체는 상기 Fc 영역에서 C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, E345R, E430G, S440Y, 및 이의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치에 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 위치 E430G, L243A, L235A, 및 P331S에 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 위치 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 위치 E430G 및 P331S에 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 위치 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 위치 E430G 및 K322A에 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 위치 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 위치 E430G, A330S, 및 P331S에 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 위치 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 위치 E430G, K322A, A330S, 및 P331S에 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 위치 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 위치 E430G, K322A, 및 A330S에 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 위치 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 위치 E430G, K322A, 및 P331S에 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 위치 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 위치 S267E 및 L328F에 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 위치 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 위치 C127S에 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 위치 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 일부 구체예들에서, 상기 Fc 영역은 위치 E345R, E430G 및 S440Y에 아미노산 치환을 함유하고, 여기에서 잔기 위치 번호매김은 EU 번호매김에 따른다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 인간 IgG1 아이소형을 갖고, Fc 영역에서 잔기 위치 P331S 및 E430G에 아미노산 치환을 포함하며, 이때 잔기 번호매김은 EU 번호매김에 따른다. 잔기 위치 P331S 및 E430G에 아미노산 치환을 포함하는 Fc 영역을 “PSEG”로 칭할 수 있다.
IgG 추가 돌연변이
일부 구체예들에서, 본원에서 기술된 하나 또는 그 이상의 IgG1 변이체는 보체 활성화를 제거하기 위해, A330L 돌연변이 (Lazar et al., (2006) Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010), 또는 하나 또는 그 이상의 L234F, L235E, 및/또는 P331S 돌연변이 (Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA, 105:20167-20172)와 조합될 수 있고, 여기에서 상기 아미노산 위치는 EU 번호매김 조약에 따른다. 일부 구체예들에서, 본원에서 기술된 IgG 변이체는 인간 혈청에서 항체 반감기를 강화시키기 위해 하나 또는 그 이상의 돌연변이 (가령, EU 번호매김 조약에 따라 M252Y, S254T, T256E 돌연변이)와 조합될 수 있다(Dall'Acqua et al., (2006) J Biol Chem, 281:23514-23524; 그리고 Strohl e al., (2009) Current Opinion in Biotechnology, 20:685-691).
일부 구체예들에서, 본 명세서의 IgG4 변이체는 항체 안정화를 강화시키기 위해, EU 번호매김 조약에 따른 S228P 돌연변이 (Angal et al., (1993) Mol Immunol, 30:105-108) 및/또는 하나 또는 그 이상의 돌연변이(Peters et al., (2012) J Biol Chem. 13;287(29):24525-33에서 기술된)와 조합될 수 있다.
예시적인 항-TREM2 항체
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 높은 친화력으로 TREM2에 결합하고, 효현제이며, 그리고 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 유도한다. 일부 구체예들에서, 상기 항-TREM2 항체는 단리된 항체 부재 하에서 TREM2 단백질에 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 결합에 의해 유도된 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성과 비교하였을 때, TREM2 단백질에 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 결합에 의해 유도된 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 항-TREM2 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드가 TREM2 단백질에 결합을 경쟁하거나, 또는 이러한 결합을 차단시키지 않고, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 인간화된 항체, 이중특이적 항체, 다가 항체, 또는 키메라 항체다. 이러한 항체의 예시적인 설명은 본 명세서에서 찾아볼 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 제 1 항원과 제 2 항원을 인지하는 이중특이적 항체다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 인간 TREM2에 결합하거나, 또는 포유류 (가령, 비-인간 포유류) TREM2 단백질, 마우스 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. Q99NH8), 렛(rat) TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. D3ZZ89), 붉은털 원숭이 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. F6QVF2), 시노물구스 원숭이 TREM2 단백질 (NCBI 기탁 번호. XP_015304909.1), 말의 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. F7D6L0), 돼지 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. H2EZZ3), 및 개 TREM2 단백질 (Uniprot 기탁 번호. E2RP46)을 비롯한, 그러나 이에 국한되지 않은 이의 호모로그(homolog)에 결합한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 인간 TREM2에 특이적으로 결합한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 시노물구스 원숭이 TREM2에 특이적으로 결합한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 인간 TREM2 및 시노물구스 원숭이 TREM2에 모두 특이적으로 결합한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 본 명세서의 TREM2의 적어도 한 가지 활성을 유도한다.
항-TREM2 항체-결합 영역
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 124-153내 하나 또는 그 이상의 아미노산, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 124-153에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 129-153내 하나 또는 그 이상의 아미노산, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 129-153에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 140-149내 하나 또는 그 이상의 아미노산, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 140-149에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 149-157내 하나 또는 그 이상의 아미노산 , 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 149-157에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기; 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 153-162내 하나 또는 그 이상의 아미노산, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 153-162에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 D140, L141, W142, F143, P144, E151, D152, H154, E156, 및 H157중 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열 식별 번호: 1의 D140, L141, W142, F143, P144, E151, D152, H154, E156, 및 H157로 구성된 군에서 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유류 TREM2 단백질 상의 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기에 결합한다.
항-TREM2 항체 경쇄 및 중쇄 가변 영역
일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법에 이용되는 항-TREM2 항체는 WO2019/028292에 기술되며, 이는 본원의 참고자료에 편입된다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 방법에 이용되는 항-TREM2 항체는 다음의 TREM2 활성중 하나 또는 그 이상을 유도하거나, 또는 강화시킨다: DAP12에 TREM2 결합; DAP12 인산화; Syk 키나제의 활성화; IFN-β, IL-1α, IL-1β, TNF-α,YM-1, IL-6, IL-8, CRP, CD86, MCP-1/CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCR2, CXCL-10, Gata3, Rorc, IL-20 패밀리 구성원, IL-33, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, CSF-1, MHC-II, OPN, CD11c, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, 및 IL-23으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 전-염증성 매개체의 변조, 임의선택적으로 여기에서 상기 변조는 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및 미세신경아교 세포로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 세포에서 일어나고; Syk, ZAP70, 또는 이 둘 모두가 DAP12/TREM2 복합체로의 회동; 하나 또는 그 이상의 TREM2-의존적 유전자들의 활성 증가, 임의선택적으로 여기에서 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2-의존적 유전자들은 활성화된 T-세포 (NFAT) 전사 인자의 핵 인자를 포함하고; 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 미세신경아교세포, M1 미세신경아교세포, 활성화된 M1 미세신경아교세포, 및 M2 미세신경아교세포, 또는 이의 임의의 조합의 생존 증가; CD83, CD86 MHC 클라스 II, CD40, 및 이의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 자극 분자들의 변조된 발현, 임의선택적으로 여기에서 CD40은 수지상 세포, 단핵구, 대식세포, 또는 이의 임의의 조합 상에서 발현되며, 및 임의선택적으로 여기에서 상기 수지상 세포는 골수-유래된 수지상 세포를 포함하고; 기억력 증가; 그리고 인지 결핍 감소. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 개체에게 투여될 때, 기억력을 증가시키고 및/또는 인지 결손을 감소시킨다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 다음중 하나 또는 그 이상을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 34에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 식별 번호: 35에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 식별 번호: 31에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 이때 상기 경쇄 가변 도메인은 다음중 하나 또는 그 이상을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 41에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 식별 번호: 33에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 식별 번호: 32에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 다음중 하나 또는 그 이상을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 36에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 식별 번호: 37에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 식별 번호: 38에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 이때 상기 경쇄 가변 도메인은 다음중 하나 또는 그 이상을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 39에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 식별 번호: 40에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 식별 번호: 32에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 영역은 아미노산 서열 YAFSSDWMN (서열 식별 번호: 36)을 포함하는 HVR-H1, 아미노산 서열 RIYPGEGDTNYARKFHG (서열 식별 번호: 37)을 포함하는 HVR-H2, 아미노산 서열 ARLLRNKPGESYAMDY (서열 식별 번호: 38)을 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 그리고 상기 경쇄 가변 영역은 아미노산 서열 RTSQSLVHSNAYTYLH (서열 식별 번호: 39)을 포함하는 HVR-L1, 아미노산 서열 KVSNRVS (서열 식별 번호: 40)을 포함하는 HVR-L2, 및 아미노산 서열 SQSTRVPYT (서열 식별 번호: 32)을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 영역은 아미노산 서열 YAFSSQWMN (서열 식별 번호: 34)을 포함하는 HVR-H1, 아미노산 서열 RIYPGGGDTNYAGKFQG (서열 식별 번호: 35)을 포함하는 HVR-H2, 아미노산 서열 ARLLRNQPGESYAMDY (서열 식별 번호: 31)을 포함하는 HVR-H3을 포함하고, 그리고 상기 경쇄 가변 영역은 아미노산 서열 RSSQSLVHSNRYTYLH (서열 식별 번호: 41)을 포함하는 HVR-L1, 아미노산 서열 KVSNRFS (서열 식별 번호: 33)을 포함하는 HVR-L2, 및 아미노산 서열 SQSTRVPYT (서열 식별 번호: 32)을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 영역은 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4로부터 선택된 하나, 둘, 셋, 또는 네개 프레임워크 영역을 포함하고, 이때: VH FR1은 서열 식별 번호: 9-11로 구성된 군에서 선택된 서열을 포함하고, VH FR2는 서열 식별 번호: 12 및 13로 구성된 군에서 선택된 서열을 포함하고, VH FR3은 서열 식별 번호: 14 및 15로 구성된 군에서 선택된 서열을 포함하고, 그리고 VH FR4는 서열 식별 번호: 16의 서열을 포함하고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역은 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4에서 선택된 하나, 둘, 셋 또는 네개 프레임워크 영역을 포함하고, 이때: L FR1은 서열 식별 번호: 17-20으로 구성된 군에서 선택된 서열을 포함하고, VL FR2는 서열 식별 번호: 21 및 22로 구성된 군에서 선택된 서열을 포함하고, VL FR3은 서열 식별 번호: 23 및 24로 구성된 군에서 선택된 서열을 포함하고, 그리고 VL FR4는 서열 식별 번호: 25 및 26으로 구성된 군에서 선택된 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 항체 AL2p-47의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 28의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는 상기 경쇄 가변 도메인은 항체 AL2p-47의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 29의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-47의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 28의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 항체 AL2p-47의 HVR-H1 아미노산 서열, HVR-H2 아미노산 서열, 및 HVR-H3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-47의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 29의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 경쇄 가변 도메인은 항체 AL2p-47의 HVR-L1 아미노산 서열, HVR-L2 아미노산 서열, 및 HVR-L3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-47의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 28의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖고, 치환 (가령, 기준 서열에 대해 보존성 치환, 삽입, 또는 결손)을 함유하는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함하지만, 그러나 이들 서열을 포함하는 상기 항-TREM2 항체는 TREM2에 결합하는 이의 능력은 유지한다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 AL2p-47의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 28의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 10개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 AL2p-47의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 28의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 5개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs 밖의 영역 (즉, FR 영역)에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 치환, 삽입, 또는 결손은 FR 영역에서 일어난다. 임의선택적으로, 상기 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-47의 VH 서열 또는 서열 식별 번호: 28 (이 서열의 해독-후 변형이 내포됨)을 포함한다. 특정 구체예에서, VH는 (a) 항체 AL2p-47의 HVR-H1 아미노산 서열, (b) 항체 AL2p-47의 HVR-H2 아미노산 서열, 및 (c) 항체 AL2p-47의 HVR-H3 아미노산 서열에서 선택된 하나, 둘 또는 세 개의 HVRs을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-47의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 29의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖고, 치환 (가령, 기준 서열에 대해 보존성 치환, 삽입, 또는 결손)을 함유하는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함하지만, 그러나 이들 서열을 포함하는 상기 항-TREM2 항체는 TREM2에 결합하는 이의 능력은 유지한다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 AL2p-47의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 29의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 10개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 AL2p-47의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 29의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 5개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs 밖의 영역 (즉, FR 영역)에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 치환, 삽입, 또는 결손은 FR 영역에서 일어난다. 임의선택적으로, 상기 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-47의 VL 서열 또는 서열 식별 번호: 29 (이 서열의 해독-후 변형이 내포됨)을 포함한다. 특정 구체예에서, VL는 (a) 항체 AL2p-47의 HVR-L1 아미노산 서열, (b) 항체 AL2p-47의 HVR-L2 아미노산 서열, 및 (c) 항체 AL2p-47의 HVR-L3 아미노산 서열에서 선택된 하나, 둘 또는 세 개의 HVRs을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 식별 번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 항체 AL2p-58의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 27의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는 상기 경쇄 가변 도메인은 항체 AL2p-58의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 30의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-58의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 27의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 항체 AL2p-58의 HVR-H1 아미노산 서열, HVR-H2 아미노산 서열, 및 HVR-H3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-58의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 30의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 경쇄 가변 도메인은 항체 AL2p-58의 HVR-L1 아미노산 서열, HVR-L2 아미노산 서열, 및 HVR-L3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-58의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 27의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖고, 치환 (가령, 기준 서열에 대해 보존성 치환, 삽입, 또는 결손)을 함유하는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함하지만, 그러나 이들 서열을 포함하는 상기 항-TREM2 항체는 TREM2에 결합하는 이의 능력은 유지한다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 AL2p-58의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 27의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 10개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 AL2p-58의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 27의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 5개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs 밖의 영역 (즉, FR 영역)에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 치환, 삽입, 또는 결손은 FR 영역에서 일어난다. 임의선택적으로, 상기 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-58의 VH 서열 또는 서열 식별 번호: 27 (이 서열의 해독-후 변형이 내포됨)을 포함한다. 특정 구체예에서, VH는 (a) 항체 AL2p-58의 HVR-H1 아미노산 서열, (b) 항체 AL2p-58의 HVR-H2 아미노산 서열, 및 (c) 항체 AL2p-58의 HVR-H3 아미노산 서열에서 선택된 하나, 둘 또는 세 개의 HVRs을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-58의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 30의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖고, 치환 (가령, 기준 서열에 대해 보존성 치환, 삽입, 또는 결손)을 함유하는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함하지만, 그러나 이들 서열을 포함하는 상기 항-TREM2 항체는 TREM2에 결합하는 이의 능력은 유지한다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 AL2p-58의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 30의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 10개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 AL2p-58의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 30의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 5개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs 밖의 영역 (즉, FR 영역)에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 치환, 삽입, 또는 결손은 FR 영역에서 일어난다. 임의선택적으로, 상기 항-TREM2 항체는 항체 AL2p-58의 VL 서열 또는 서열 식별 번호: 30 (이 서열의 해독-후 변형이 내포됨)을 포함한다. 특정 구체예에서, VL는 (a) 항체 AL2p-58의 HVR-L1 아미노산 서열, (b) 항체 AL2p-58의 HVR-L2 아미노산 서열, 및 (c) 항체 AL2p-58의 HVR-L3 아미노산 서열에서 선택된 하나, 둘 또는 세 개의 HVRs을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 식별 번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 43의 아미노산을 포함하는 중쇄, 및 서열 식별 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하거나; 또는 서열 식별 번호: 44의 아미노산을 포함하는 중쇄, 및 서열 식별 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 45의 아미노산을 포함하는 중쇄, 및 서열 식별 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하거나; 또는 서열 식별 번호: 46의 아미노산을 포함하는 중쇄, 및 서열 식별 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 다음중 하나 또는 그 이상을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 50에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 식별 번호: 51에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 식별 번호: 52에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 이때 상기 경쇄 가변 도메인은 다음중 하나 또는 그 이상을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 53에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 식별 번호: 54에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 식별 번호: 55에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 다음중 하나 또는 그 이상을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 58에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 식별 번호: 59에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 식별 번호: 60에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 이때 상기 경쇄 가변 도메인은 다음중 하나 또는 그 이상을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 61에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 식별 번호: 62에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 식별 번호: 63에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 다음중 하나 또는 그 이상을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 66에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 식별 번호: 67에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 식별 번호: 68에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 이때 상기 경쇄 가변 도메인은 다음중 하나 또는 그 이상을 포함한다: (a) 서열 식별 번호: 69에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 식별 번호: 70에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 식별 번호: 71에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 항체 42E8.H1의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 56의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는 상기 경쇄 가변 도메인은 항체 42E8.H1의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 57의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 42E8.H1의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 56의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 항체 42E8.H1의 HVR-H1 아미노산 서열, HVR-H2 아미노산 서열, 및 HVR-H3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 42E8.H1의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 57의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 경쇄 가변 도메인은 항체 42E8.H1의 HVR-L1 아미노산 서열, HVR-L2 아미노산 서열, 및 HVR-L3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 항-TREM2 항체는 항체 42E8.H1의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 56의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖고, 치환 (가령, 기준 서열에 대해 보존성 치환, 삽입, 또는 결손)을 함유하는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함하지만, 그러나 이들 서열을 포함하는 상기 항-TREM2 항체는 TREM2에 결합하는 이의 능력은 유지한다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 42E8.H1의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 56의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 10개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 42E8.H1의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 56의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 5개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs 밖의 영역 (즉, FR 영역)에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 치환, 삽입, 또는 결손은 FR 영역에서 일어난다. 임의선택적으로, 상기 항-TREM2 항체는 항체 42E8.H1의 VH 서열 또는 서열 식별 번호: 56 (이 서열의 해독-후 변형이 내포됨)을 포함한다. 특정 구체예에서, VH는 (a) 항체 42E8.H1의 HVR-H1 아미노산 서열, (b) 항체 42E8.H1의 HVR-H2 아미노산 서열, 및 (c) 항체 42E8.H1의 HVR-H3 아미노산 서열에서 선택된 하나, 둘 또는 세 개의 HVRs을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 42E8.H1의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 57의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖고, 치환 (가령, 기준 서열에 대해 보존성 치환, 삽입, 또는 결손)을 함유하는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함하지만, 그러나 이들 서열을 포함하는 상기 항-TREM2 항체는 TREM2에 결합하는 이의 능력은 유지한다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 42E8.H1의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 57의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 10개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 42E8.H1의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 57의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 5개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs 밖의 영역 (즉, FR 영역)에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 치환, 삽입, 또는 결손은 FR 영역에서 일어난다. 임의선택적으로, 상기 항-TREM2 항체는 항체 42E8.H1의 VL 서열 또는 서열 식별 번호: 57 (이 서열의 해독-후 변형이 내포됨)을 포함한다. 특정 구체예에서, VL는 (a) 항체 42E8.H1의 HVR-L1 아미노산 서열, (b) 항체 42E8.H1의 HVR-L2 아미노산 서열, 및 (c) 항체 42E8.H1의 HVR-L3 아미노산 서열에서 선택된 하나, 둘 또는 세 개의 HVRs을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 식별 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 항체 RS9.F6의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 64의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는 상기 경쇄 가변 도메인은 항체 RS9.F6의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 65의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 RS9.F6의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 64의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 항체 RS9.F6의 HVR-H1 아미노산 서열, HVR-H2 아미노산 서열, 및 HVR-H3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 RS9.F6의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 65의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 경쇄 가변 도메인은 항체 RS9.F6의 HVR-L1 아미노산 서열, HVR-L2 아미노산 서열, 및 HVR-L3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 항-TREM2 항체는 항체 RS9.F6의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 64의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖고, 치환 (가령, 기준 서열에 대해 보존성 치환, 삽입, 또는 결손)을 함유하는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함하지만, 그러나 이들 서열을 포함하는 상기 항-TREM2 항체는 TREM2에 결합하는 이의 능력은 유지한다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 RS9.F6의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 64의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 10개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 RS9.F6의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 64의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 5개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs 밖의 영역 (즉, FR 영역)에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 치환, 삽입, 또는 결손은 FR 영역에서 일어난다. 임의선택적으로, 상기 항-TREM2 항체는 항체 RS9.F6의 VH 서열 또는 서열 식별 번호: 64 (이 서열의 해독-후 변형이 내포됨)을 포함한다. 특정 구체예에서, VH는 (a) 항체 RS9.F6의 HVR-H1 아미노산 서열, (b) 항체 RS9.F6의 HVR-H2 아미노산 서열, 및 (c) 항체 RS9.F6의 HVR-H3 아미노산 서열에서 선택된 하나, 둘 또는 세 개의 HVRs을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 항체 RS9.F6의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 65의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖고, 치환 (가령, 기준 서열에 대해 보존성 치환, 삽입, 또는 결손)을 함유하는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함하지만, 그러나 이들 서열을 포함하는 상기 항-TREM2 항체는 TREM2에 결합하는 이의 능력은 유지한다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 RS9.F6의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 65의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 10개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 상기 항체 RS9.F6의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 또는 서열 식별 번호: 65의 아미노산 서열에서 총 1 ~ 5개 아미노산이 치환되었거나, 삽입되었거나, 및/또는 결손되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs 밖의 영역 (즉, FR 영역)에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 치환, 삽입, 또는 결손은 FR 영역에서 일어난다. 임의선택적으로, 상기 항-TREM2 항체는 항체 RS9.F6의 VL 서열 또는 서열 식별 번호: 65 (이 서열의 해독-후 변형이 내포됨)을 포함한다. 특정 구체예에서, VL는 (a) 항체 RS9.F6의 HVR-L1 아미노산 서열, (b) 항체 RS9.F6의 HVR-L2 아미노산 서열, 및 (c) 항체 RS9.F6의 HVR-L3 아미노산 서열에서 선택된 하나, 둘 또는 세 개의 HVRs을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 식별 번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 도메인은 서열 식별 번호: 72의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는 상기 경쇄 가변 도메인은 서열 식별 번호: 73의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 항-TREM2 항체는 서열 식별 번호: 72의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖고, 치환 (가령, 기준 서열에 대해 보존성 치환, 삽입, 또는 결손)을 함유하는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함하지만, 그러나 이들 서열을 포함하는 상기 항-TREM2 항체는 TREM2에 결합하는 이의 능력은 유지한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 72의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 72의 아미노산 서열에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs 밖의 영역 (즉, FR 영역)에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 치환, 삽입, 또는 결손은 FR 영역에서 일어난다. 임의선택적으로, 상기 항-TREM2 항체는 서열 식별 번호: 72의 VH 서열 (이 서열의 해독-후 변형이 내포됨)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 서열 식별 번호: 73의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일성을 갖고, 치환 (가령, 기준 서열에 대해 보존성 치환, 삽입, 또는 결손)을 함유하는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함하지만, 그러나 이들 서열을 포함하는 상기 항-TREM2 항체는 TREM2에 결합하는 이의 능력은 유지한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 73의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 73의 아미노산 서열에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs 밖의 영역 (즉, FR 영역)에서 일어난다. 일부 구체예들에서, 상기 치환, 삽입, 또는 결손은 FR 영역에서 일어난다. 임의선택적으로, 상기 항-TREM2 항체는 서열 식별 번호: 73 (이 서열의 해독-후 변형이 내포됨)의 VL 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 서열 식별 번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 식별 번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 효현성 항체는 AL2p-58 huIgG1 PSEG이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 항-TREM2 효현성 항체는 AL2p-47 huIgG1이다.
표 B: 서열
Figure pct00006
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Figure pct00008
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Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
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본 명세서의 임의의 항체는 세포 계통에 의해 만들어질 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 세포 계통은 포유류 세포 계통일 수 있다. 특정 구체예들에서, 상기 세포 계통은 하이브리도마 세포 계통일 수 있다. 다른 구체예들에서, 상기 세포 계통은 효모 세포 계통일 수 있다. 항체 생산에 적합한, 당분야에 공지된 임의의 세포 계통을 이용하여 본 명세서의 항체를 만들 수 있다. 항체 생산을 위한 예시적인 세포 계통은 본 명세서 전반에 걸쳐 기술된다.
항체 단편들
본 명세서의 특정 측면들은 인간 TREM2, 인간 TREM2의 자연 발생적 변이체, 및 인간 TREM2의 질환 변이체중 하나 또는 그 이상에 결합하는 항체 단편들에 관계한다. 일부 구체예들에서, 상기 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편이다.
항체 프레임워크
본원에 기술된 임의의 항체에는 프레임워크가 더 내포되어 있다. 일부 구체예들에서, 상기 프레임워크는 인간 면역글로불린 프레임워크이다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 항체 (가령, 항-TREM2 항체)는 상기 구체예들중 임의의 것에서와 같이 HVRs을 포함하며, 수용체 인간 프레임워크, 가령, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 콘센수스 프레임워크를 더 포함한다. 인간 면역글로불린 프레임워크는 인간 항체의 일부분일 수 있고, 또는 비-인간 항체는 하나 또는 그 이상의 내생성 프레임워크를 인간 프레임워크 영역(들)로 대체시킴으로써 인간화시킬 수 있다. 인간화에 이용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: “베스트-피트(best-fit)”방법을 이용하여 선별된 프레임워크 영역 (예로써, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993) 참고); 경쇄 또는 중쇄 가변적 영역의 특정 하위 집단의 인간항체의 콘센수스 서열로부터 유도된 프레임워크영역 (see, 예로써, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 그리고 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)); 인간 성숙 (체세포적으로 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역 (예로써, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008) 참고); 그리고 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유도된 프레임워크 영역(예로써, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996) 참고).
항체 조제물
본 명세서의 항-TREM2 항체는 다중클론성 항체, 단일클론성 항체, 인간화된 항체와 키메라 항체, 인간 항체, 항체 단편들 (가령, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 및 F(ab')2), 이중특이적 항체 및 다중특이적 항체, 다가 항체, 라이브러리 유래된 항체, 변형된 작동체 기능을 갖는 항체, 항체 일부분을 함유하는 융합 단백질, 그리고 항원 인지 부위, 이를 테면, 본 명세서의 TREM2 단백질의 아미노산 잔기를 갖는 에피토프, 항체의 당화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체, 및 공유적으로 변형된 항체를 비롯한 면역글로불린 분자의 임의의 기타 변형된 입체형태를 포괄한다. 상기 항-TREM2 항체는 인간, 뮤린, 렛(rat), 또는 임의의 기타 기원 (키메라 항체 또는 인간화된 항체를 비롯하여)의 항체일 수 있다.
(1) 다중클론성 항체
다중클론성 항체, 이를 테면, 항-TREM2 다중클론성 항체는 일반적으로 동물에서 관련 항원과 어쥬번트(adjuvant)의 다중 피하(sc) 또는 복강내(ip) 주사에 의해 생성된다. 면역화될 종에서 면역원이 되는 단백질, 가령, 키홀 림페트 헤모시아닌 (KLH), 혈청 알부민, 소의 티로글로불린, 또는 대두 트립신 억제제, 이중-기능을 하는 또는 유도체화제, 에 관련 항원 (가령, 본 명세서의 정제된 또는 재조합 TREM2 단백질)을 가령, 말레이미도벤조일 설포숙신이미드 에스테르(시스테인을 통한 접합), N-하이드록시숙신이미드(라이신을 통한), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물, SOCl2, 또는 R1N=C=NR을 이용하여, 콘쥬게이트시키는 것이 유용할 수 있는데, 여기에서 R 및 R1은 독립적으로 저급 알킬 그룹이다. 이용될 수 있는 어쥬번트의 예는 Freund의 컴플리트 어쥬번트, 및 MPL-TDM 어쥬번트 (모노포르포릴 리피드 A, 합성 트레할로스 디코리노미코레이트)를 포함한다. 면역화 프로토콜은 과도한 실험없이, 당업자에 의해 선택될 수 있다.
가령, 100μg (토끼의 경우) 또는 5μg (마우스의 경우)의 단백질 또는 콘쥬게이트에 3 용적의 Freund의 컴플리트 어쥬번트를 복합시키고, 이 용액을 다수 부위로 피하내 주사함으로써, 해당 동물들이 원하는 항원, 면역원성 콘쥬게이트, 또는 유도체들에 대항하여 면역화된다. 한 달 후, 동물은 여러 부위에 피하 주사를 통해 Freund의 컴플리트 어쥬번트에 있는 펩티드 또는 콘쥬게이트의 원래 양의 1/5에서 1/10의 양으로 부스터샷을 받았다. 7-14일 후, 해당 동물로부터 채혈하고, 혈청에서 항체 역가를 분석한다. 역가가 정점 안정(plateaus)될 때까지, 동물을 부스팅시킨다. 콘쥬게이트는 재조합-세포 배양에서 융합 단백질로 만들어질 수 있다. 또한, 응집제 이를 테면, 백반(alum)이 면역 반응을 강화시키는데 적합하다.
(2) 단일클론성 항체
단일클론성 항체, 이를 테면, 항-TREM2 단일클론성 항체는 실질적으로 동질성 항체의 집단으로부터 수득한 항체, 가령, 이러한 집단을 포함하는 개별 항체는 자연 발생적 돌연변이 및/또는 소량으로 존재할 수 있는 해독-후 변형(가령, 이성체화, 아미드화) 경우를 제외하고 동일하다. 따라서, 수식어 "단일클론성"은 다른 별개 항체들의 혼합물이 아닌 것을 항체 특징으로 나타낸다.
예를 들면, 항-TREM2 단일클론성 항체는
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et al., Nature, 256:495 (1975)에서 처음으로 기술된 하이브리도마 방법, 또는 재조합 DNA 방법 (U.S. 특허 번호 4,816,567)에 의해 만들어질 수 있다.
이 하이브리도마 방법에서, 마우스, 햄스터 또는 다른 적절한 숙주 동물은 상기에서 기술된 바와 같이, 면역화제로 면역화되어, 면역접종에 이용되는 단백질(가령, 본 명세서의 정제된 또는 재조합 TREM2 단백질)에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유도한다. 대안으로, 림프구는 시험관에서 면역접종될 수 있다. 그 다음, 림프구를 불사화된 세포 계통, 이를 테면, 골수종 세포, 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적절한 융합제를 사용하여 불멸화된 세포주와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성시킨다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)).
이들 하이브리도마 세포가 배양되는 배양 배지는 원하는 항원에 대항하여 지향된 단일클론 항체의 존재에 대해 분석될 수 있는데 (가령, 본 명세서의 TREM2 단백질), 가령, 면역침전 또는 시험관내 결합 분석, 이를 테면, 방사능면역분석 (RIA) 또는 효소-연계된 분석 (ELISA)에 의해 결정될 수 있다. 이러한 기술 및 분석은 당 업계에 공지되어 있다.
원하는 특이성, 친화성 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포를 확인된 후, 클론은 서브클로닝될 수 있고, 서브클론에 의해 분비되는 모노클로날 항체는 통상적인 면역글로불린 정제 절차, 이를 테면, 예를 들면, 단백질 A-세파로스 크로마토그래피, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 친화성 크로마토그래피, 그리고 상기 기재된 바와 같은 기타 방법에 의해 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 분리시킬 수 있다.
항-TREM2 단일클론성 항체는 가령, 상기에서 기술된 바와 같이, 재조합 DNA 방법에 의해 또한 만들어질 수 있다. 단일클론 항체를 인코딩하는 DNA는 통상적인 절차 (가령, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 프로브를 이용함으로써)를 이용하여 용이하게 단리되고, 그리고 서열화될 수 있다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 선호되는 공급원으로 작용한다. 일단 단리된 DNA를 발현 벡터에 넣은 다음, 면역글로블린 단백질을 생성하지 않는 숙주 세포, 예를 들면, 대장균 세포, 유인원(simian) COS 세포, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 골수종 세포와 같은 숙주-세포로 형질 감염시켜, 이러한 재조합 숙주-세포에서 단일클론성 항체를 합성할 수 있다. 상기 항체를 인코드하는 DNA의 박테리아내 재조합 발현에 관한 검토 자료에는 Skerra et al., Curr. Opin. Immunol., 5:256-262 (1993) 및 Pl
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ckthun, Immunol. Revs. 130:151-188 (1992)을 내포된다.
특정 구체예들에서, 항-TREM2 항체는 McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990)에 기재된 기술을 사용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) 및 Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)는 파아지 라이브러리로부터 차례로 뮤린 항체 및 인간 항체의 단리에 대해 기술하였다. 후속 공개는 쇄 셔플링(Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992)), 뿐만 아니라 복합 감염 및 매구 큰 파아지 라이브러리 구축을 위한 전략으로써 복합 감염 및 생체내 조합에 의한 고친화력(나노몰 ("nM") 범위) 인간 항체 생산을 기술한다 (Waterhouse et al., Nucl. Acids Res., 21:2265-2266 (1993)).
항체 또는 이의 단편들을 인코딩하는 DNA는 예를 들면, 상동성 뮤린 서열의 위치에 인간 중쇄-불면 도메인과 경쇄-불변 도메인의 코딩 서열을 치환시키거나(U.S. 특허 번호. 4,816,567; Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)), 또는 면역글로불린 코딩 서열에 비-면역글로불린 폴리펩티드의 코딩 서열의 전부 또는 일부를 공유적으로 결합시킴으로써, 또한 변형될 수 있다. 전형적으로, 이러한 비-면역글로불린 폴리펩티드는 항체의 불변 도메인으로 대체되거나, 또는 이들 폴리펩티드는 항체의 한 개 항원-복합 부위의 가변 도메인으로 치환됨으로써 항원에 대한 특이성을 갖는 한 개 항원-복합 부위, 그리고 상이한 항원에 대한 특이성을 갖는 또다른 항원-복합 부위를 포함하는 이가(bivalent) 키메라 항체가 창출된다.
(3) 인간화된 항체
본 명세서의 항-TREM2 항체 또는 이의 단편들에는 인간화된 또는 인간 항체가 더 내포될 수 있다. 인간이-아닌 (가령, 뮤린) 항체들의 "인간화된(humanized)" 형태는 인간이-아닌 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편들 (이를 테면, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, F(ab')2 또는 항체들의 기타 항원-결합 하위서열)이다. 인간화된 항체에는 수령자의 상보성 결정 영역(CDR)의 잔기가 원하는 특이성, 친화력, 그리고 능력(capacity)을 보유한, 인간이-아닌 종 (공여자 항체) 이를 테면 마우스, 렛(rat) 또는 토끼의 CDR 잔기로 대체된, 인간 면역글로불린 (수령자 항체)이 내포된다. 일부 경우에서, 인간 면역글로블린의 Fv 프레임워크 영역 잔기는 대응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 인간화 항체들은 수령자 항체 또는 수입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 인간화된 항체는 실질적으로 최소한 하나의, 그리고 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 수 있는데, 이때 CDR 영역의 모든 또는 실질적으로 모든 것은 비-인간 면역글로블린에 대응하며, FR 영역의 모든 또는 실질적으로 모든 것은 인간 면역글로블린의 서열에 대응한다. 상기 인간화된 항체는 최적으로 면역글로블린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부분, 전형적으로 인간 면역글로블린의 것을 포함할 것이다. Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988) and Presta, Curr. Opin. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992).
비-인간 항-TREM2 항체를 인간화시키는 특정 방법들이 당업계에 공지되어 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 비-인간 원천으로부터 도입된 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 보유한다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 대개 “수입(import)”잔기라고 하며, “수입(import)”가변 도메인으로부터 전형적으로 취해진다. 인간화는 Winter와 그의-동료, Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)가 실행한 방법에 따라 설치류 CDRs 또는 CDR 서열을 인간 항체의 대응하는 서열로의 대체를 통하여, 본질적으로 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 인간화된 항체는 키메라 항체 (U.S. 특허 번호 4,816,567)이며, 이때 무손상 인간 가변 도메인보다 실질적으로 적은 수가 비-인간 종의 상응하는 서열로 대체되었다. 실제, 인간화된 항체들은 전형적으로 이의 일부 CDR 잔기들과 일부 FR 잔기들이 설치류 항체들의 유사 부위의 잔기로 대체된, 인간 항체들이다.
이러한 인간화된 항체를 만드는데 이용되는 인간의 중쇄와 경쇄 모두의 가변성 도메인의 선택은 면역원성에 영향을 줄 수 있다. 소위 "베스트-피트(best-fit)" 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열을 공지된 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝한다. 설치류의 서열과 가장 가까운 인간 서열은 인간화된 항체에 대한 인간 프레임워크(FR)로 선택될 수 있다. Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987). 또다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위 군의 모든 인간 항체의 컨센서스(consensus) 서열로부터 유도된 특정 프레임워크을 사용한다. 몇 가지 상이한 인간화된 항체에 대하여 동일한 프레임워크가 이용될 수 있다. Carter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993).
인간화된 항체는 바람직하게는 항원 및 기타 유리한 생물학적 특성에 대해 높은 친화성을 유지한다. 이 목적을 이루기 위하여, 선호되는 가지 방법에 따라, 인간화 항체는 부모 서열 및 인간화된 서열의 3 차원 모델을 사용하여, 부모 서열 및 다양한 개념적 인간화 생성물을 분석하는 공정에 의해 제조된다. 3-차원 면역글로불린 모델은 일반적으로 이용 가능하며 당업자에게 익숙하다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3-차원 형태적 구조를 설명하고, 표시하는 컴퓨터 프로그램이 이용 가능하다. 이러한 디스플레이의 검사는 후보 면역글로불린 서열의 기능에서 잔기의 가능한 역할의 분석, 가령, 후보 면역글로블린이 이의 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이러한 방식으로, FR 잔기는 수용체 및 수입 서열로부터 선택되고 결합되어, 표적 항원 또는 표적 항원들 (가령, 본 명세서의 TREM2 단백질)에 대한 증가된 친화력과 같은 원하는 항체 특성이 달성된다. 일반적으로, CDR 잔기는 항원 결합에 영향을 미치는데 직접적이고 가장 실질적으로 관여한다.
다양한 형태의 인간화된 항-TREM2 항체가 고려된다. 예를 들면, 상기 인간화된 항-TREM2 항체는 항체 단편, 이를 테면, Fab, 또는 무손상 항체, 이를 테면, 무손상 IgG1 항체일 수 있다.
(4) 항체 단편들
특정 구체예들에서, 온전체 항-TREM2 항체보다는 항-TREM2 항체 단편들을 이용하는 것이 유익하다. 일부 구체예들에서, 더 작은 단편 크기는 빠른 제거와 더 나은 뇌 침투를 가능하게 한다.
항체 단편의 생산을 위한 다양한 기술이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질 분해 절단을 통해 유도되었다 (가령, Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Method. 24:107-117 (1992); 그리고 Brennan et al., Science 229:81 (1985) 참고). 그러나, 이들 단편들은 예를 들면, 본 명세서의 항-TREM2 항체를 인코딩하는 핵산을 이용하여 재조합 숙주-세포에 의해 이제는 직접적으로 만들어질 수 있다. Fab, Fv, 및 scFv 항체 단편은 대장균에서 발현되고, 이로부터 분비될 수 있고, 따라서 더 많은 양의 이들 단편을 간단히 생산하게 된다. 항-TREM2 항체 단편들은 상기에서 논의된 항체 파아지 라이브러리로부터 또한 단리될 수 있다. 대안으로, Fab'-SH 단편은 대장균으로부터 직접 회수될 수 있고, 화학적으로 결합되어 F(ab')2 단편을 만들 수 있다 (Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). 또다른 방법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주-세포 배양으로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 생체내 반감기가 증가된 Fab 및 F(ab')2 항체 단편들이 U.S. 특허 번호 5,869,046에서 기술된다. 다른 구체예들에서, 선택 항체는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다. WO 93/16185; U.S. 특허 번호 5,571,894 및 U.S. 특허 번호 5,587,458 참고. 상기 항-TREM2 항체 단편은 “선형 항체” (가령, U.S. 특허 5,641,870에서 기술된 바와 같은)일 수도 있다. 이러한 선형 항체 단편들은 단일특이적이거나 또는 이중특이적일 수 있다.
(5) 이중특이적 항체 및 다중특이적 항체
이중특이적 항체 (BsAbs)는 동일한 또는 또다른 단백질 (가령, 하나 또는 그 이상의 본 명세서의 TREM2 단백질) 상에 있는 것들을 비롯하여, 적어도 두 개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 항체다. 대안적으로, BsAb의 한 부분은 표적 TREM2 항원에 결합하도록 무장될 수 있고, 또다른 부분은 제2 단백질에 결합하는 암(arm)과 복합될 수 있다. 이러한 항체들은 전장 항체 또는 항체 단편들 (가령, F(ab')2 이중특이적 항체)로부터 유래될 수 있다.
(6) 작동체 기능 공작
본 명세서의 항-TREM2 항체를 변형시켜 작동체 기능을 변형시키거나, 및/또는 이 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 것 또한 바람직할 수 있다. 예를 들면, 불변 영역 상의 Fc 수용체 결합 부위를 변형 또는 돌연변이시켜, 특정 Fc 수용체, 이를 테면, FcγRI, FcγRII, 및/또는 FcγRIII에 대한 결합 친화력을 제거하거나 또는 감소시켜, 항체-의존적 세포-매개된 세포독성을 줄일 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 작동체 기능은 이들 항체의 Fc 영역 (가령, IgG의 CH 2 도메인)의 N-글리코실화를 제거함으로써 손상된다. 일부 구체예들에서, 상기 작동체 기능은 이를 테면, PCT WO 99/58572 및 Armour et al., Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddy et al., J. Immunology 164:1925-1933 (2000)에서 기술된 바와 같이, 인간 IgG의 233-236, 297, 및/또는 327-331와 같은 영역을 변형시킴으로써 손상된다. 다른 구체예들에서, 항체-의존적 세포-매개된 세포독성 및 항체-의존적 세포의 식작용(phagocytosis)을 비롯한 체액 반응의 활성화 없이, 인접 세포들 상에서 TREM2 항체의 클러스터링을 증가시키기 위해, ITIM-함유하는 FcgRIIb (CD32b)를 지향하는 발견 선택성이 증가되도록 작동체 기능을 변형시키기 위하여 본 명세서의 항-TREM2 항체를 변형시키는 것 또한 바람직할 수 있다.
이들 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들면, U.S. 특허 5,739,277에 기술된 바와 같이, 하나의 구조(salvage) 수용체 결합 에피토프가 항체 (특히, 항체 단편)에 통합될 수 있다. 본원에 이용된 바와 같이, 용어 “구조(salvage) 수용체 결합 에피토프”는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기 증가를 담당하는 IgG 분자 (가령, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다.
(7) 기타 아미노산 서열 변형
본 명세서의 항-TREM2 항체 또는 이의 단편들에는 의 아미노산 서열 변형 또한 고려된다. 예를 들면, 이들 항체 또는 항체 단편들의 상기 결합 친화력 및/또는 다른 생물학적 성질들을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체 또는 항체 단편들의 아미노산 서열 변이체는 적절한 뉴클레오티드 변화를 이들 항체 또는 항체 단편들을 인코딩하는 핵산으로 도입시킴으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 만들어질 수 있다. 이러한 변형에는 예를 들면, 이 항체의 아미노산 서열 안에 잔기의 결손 및/또는 삽입 및/또는 잔기의 치환이 내포된다. 만일 최종 구조체가 바람직한 특징(즉, 본 명세서의 TREM2 단백질에 결합하고, 물리적으로 상호작용하는 능력)을 보유한다면, 최종 구조체에 결손, 삽입, 및 치환의 임의의 조합이 있을 수 있다. 상기 아미노산 변화는 상기 항체의 해독-후 처리를 변경시킬 수 있는데, 이를 테면 당화 부위의 수 또는 위치를 또한 변경시킬 수 있다.
돌연변이유발을 위한 선호되는 위치인 항-TREM2 항체의 특정 잔기 또는 영역들을 식별하는데 유용한 방법은 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 지칭되며, Cunningham and Wells in Science, 244:1081-1085 (1989)에 기재되어 있다. 여기에서, 표적 잔기들의 잔기 또는 그룹 (가령, 하전된 잔기, 이를 테면, arg, asp, his, lys, 및 glu)들이 식별되고, 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체되어, 상기 아미노산들과 표적 항원 간의 상호작용에 영향을 준다. 그런 다음, 치환에 대한 기능적 민감성을 나타내는 이들 아미노산 위치는 치환 부위에 또는 치환 부위에 대한 추가 또는 다른 변이체를 도입함으로써 개선된다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입하는 부위는 미리 정해져 있지만, 돌연변이 자체의 성질은 미리 정해져 있을 필요는 없다. 예를 들면, 주어진 부위에서 돌연변이의 성능을 분석하기 위해, 알라닌 스캐닝 또는 무작위 돌연변이유발은 표적 코돈 또는 영역에서 수행되고, 발현된 항체 변이체는 원하는 활성에 대해 스크리닝된다.
아미노산 서열 삽입은 1개 잔기에서 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 길이 범위의 아미노("N")-말단 융합 및/또는 카르복시("C")-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예로는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체 또는 세포독성 폴리펩티드에 융합된 항체가 내포된다. 상기 항체 분자의 다른 삽입 변이체들은 효소에, 또는 상기 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드에 항체의 N-말단 또는 C-말단의 융합이 내포된다.
변이체의 또다른 유형은 아미노산 치환 변이체다. 이들 변이체는 해당 항체에서 상이한 잔기에 의해 대체된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 갖는다. 치환 돌연변이유발에 대한 가장 큰 관심 부위는 초가변 영역을 포함하지만, FR 변경도 고려된다. 보존적 치환들은 하기 표 C에서 "바람직한 치환"이라는 제목하에 나타낸다. 상기 치환이 생물학적 활성의 변화를 초래하는 경우, 표 C에서 "예시적 치환"으로 표시된 또는 아미노산 부류와 관련하여 아래에서 추가로 설명되는 보다 실질적인 변화가 도입될 수 있으며 생성물을 선별검사할 수 있다. 표 C: 아미노산 치환
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항체의 생물학적 성질에 있어서의 실질적인 변형은 (a) 시트 또는 나선 형태와 같이 치환 영역에서 폴리펩티드 기본골격의 구조, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측부의 벌크(bulk) 유지에 대한 효과가 현저하게 다른 치환체를 선택함으로써 달성된다. 자연적으로 발생하는 잔기들은 공통의 사슬 특성에 기초하여 그룹으로 나누어진다:
(1) 소수성: 노르류신, met, ala, val, leu, ile;
(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;
(3) 산성: asp, glu;
(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;
(5) 사슬 배향에 영향을 주는 잔기들: gly, pro; 그리고
(6) 방향족: trp, tyr, phe.
비-보존성 치환들은 한 클래스의 멤버를 또다른 클래스로 교환을 수반한다.
상기 항체의 적절한 형태에 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기는 일반적으로, 세린과 같은 또 다른 아미노산으로 치환되어 분자의 산화 안정성을 향상시키고 비정상적인 가교 결합을 방지할 수 있다. 반대로, 안정성을 향상시키기 위해 시스테인 결합 (들)을 항체에 첨가할 수 있다 (특정 여기에서 상기 항체는 항체 단편, 이를 테면, Fv 단편이다).
치환 변이체의 특별히 바람직한 유형은 부모 항체 (가령, 인간화된 또는 인간 항-TREM2 항체)의 하나 또는 그 이상의 초가변 영역 잔기의 치환이 관련된다. 일반적으로, 추가 개발을 위해 선택된 생성된 변이체(들)는 이들이 생성되는 부모 항체에 비해 개선된 생물학적 특성을 가질 것이다. 이러한 치환 변이체를 생성하는 편리한 방법은 파지 디스플레이를 사용한 친화성 발달이 관련된다. 간단히 말해서, 여러 초가변 영역 부위(가령, 6-7개 부위)가 돌연변이되어, 각 부위에서 가능한 모든 아미노 치환이 생성된다. 이렇게 생성된 항체 변이체는 각 입자 내에 패키징된 M13의 유전자 III 생성물에 대한 융합체로서, 필라멘트성 파아지 입자로부터 일가(monovalent) 방식으로 표시된다. 그 다음, 상기 파아지-디스플레이된 변이체들은 본원에서 기술된 이들의 생물학적 활성 (가령, 결합 친화력)에 대해 스크리닝된다. 변형을 위한 후보 초가변 영역 부위를 식별해내기 위해, 항원 결합에 크게 기여하는 초가변 영역 잔기를 식별해내 위한 알라닌 스캐닝 돌연변이유발을 수행할 수 있다. 대안으로, 또는 추가로, 상기 항체와 항원 (가령, 본 명세서의 TREM2 단백질) 간의 접촉 점을 식별해내기 위해, 항원-항체 복합체의 결정 부조를 분석하는 것이 유익할 수 있다. 이러한 접촉 잔기들과 이웃하는 잔기들은 본원에 기술된 기술에 따른 치환용 후보들이다. 일단 그러한 변이체가 생성되면, 변이체 패널은 본원에 기재된 바와 같이 스크리닝되고, 한 가지 또는 그 이상의 관련 분석에서 우수한 특성을 갖는 항체들이 추가 개발을 위해 선택될 수 있다. 친화력 발달(maturation)은 이를 테면, 예를 들면, WO2009/036379A2; WO2010105256; WO2012009568; 그리고 Xu et al., Protein Eng. Des. Sel., 26(10): 663-70 (2013)에서 기술된 바와 같이, 효소 제시 기술을 이용하여 또한 수행될 수 있다.
상기 항체의 아미노산 변이체의 또다른 유형은 이 항체의 원래 글리코실화 패턴을 변경시킨다. 변경이란 항체에서 발견되는 하나 또는 그 이상의 탄수화물 모이어티를 결실시키고 및/또는 이 항체에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위를 추가하는 것을 의미한다.
항체들의 당화는 전형적으로 N-연계된 또는 O-연계된 당화다. N-연계된이란 탄수화물 모이어티가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착되는 것을 의미한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 탄수화물 모이어티를 아스파라긴 측쇄에 효소적으로 부착하기 위한 인지 서열이다. 따라서, 폴리펩티드에서 이러한 트리펩티드 서열의 존재로 잠재적인 글리코실화 부위가 창출된다. O-연계된 당화란 히드록시아미노산, 가장 일반적으로는 세린 또는 트레오닌으로의 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토오스 또는 자일로스의 부착을 의미하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신이 또한 사용될 수 있다.
상기 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 상기-기술된 트리펩티드 서열중 하나 또는 그 이상을 함유하도록 (N-연계된 글리코실화 부위) 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편리하게 이루어진다. 이러한 변경은 하나 또는 그 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 상기 원래 항체(O-연계된 당화 부위의 경우)에 추가 또는 치환시켜 만들 수도 있다.
(8) 기타 항체 변형
본 명세서의 항-TREM2 항체, 또는 이의 단편들에는 은 당분야에 공지된 비-단백질성 모이어티를 추가로 함유하도록 추가 변형될 수 있거나, 또는 당분야에 공지된, 그리고 바로 이용가능한, 상이한 유형의 약물 콘쥬게이트들을 함유하도록 추가 변형될 수 있다. 바람직하게는, 이들 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 물-가용성 중합체들이다. 물 가용성 폴리머의 비-제한적인 예로는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 코폴리머, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1, 3-디옥소란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레 무수물 코폴리머, 폴리아미노산 (호모폴리머 또는 무작위 코폴리머), 그리고 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 호모폴리머, 폴리프로필렌 산화물/에틸렌 산화물 코-폴리머, 폴리옥시에틸화된 폴리올 (예로써, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이의 혼합물이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드는 물에서의 안정성으로 인하여, 제작에서 장점을 가질 수 있다. 이 중합체는 임의의 분자량일 수 있고, 분지형 또는 비-분지형일 수 있다. 상기 항체에 부착된 폴리머의 수는 가변적일 수 있으며, 하나 이상의 폴리머가 부착된 경우, 이들은 동일하거나 또는 상이한 분자들일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 항체 유도체가 규정된 상태 등에 치료에 사용될 것인지 여부에 관계없이, 개선되는 항체의 특정 특성 또는 기능을 포함하는, 고려사항에 근거하여 결정될 수 있다. 이러한 기술 및 기타 적합한 제형은 하기에 개시되어 있다: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Alfonso Gennaro, Ed., Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000).
약물 콘쥬게이션은 생물학적 활성 세포독성 (항암) 페이로드 또는 약물을 특정 종양 마커(가령, 이상적으로는, 종양 세포 안에서만 또는 종양 세포 상에서만 발견되는 단백질)를 특이적으로 표적으로 하는 항체에 결합하는 것과 관련된다. 항체는 이러한 단백질을 체내에서 추적하여, 암세포 표면에 부착한다. 항체와 표적 단백질(항원) 사이의 생화학적 반응은 종양 세포에서 신호를 촉발시키고, 그 다음 세포독소와 함께 항체를 흡수하거나 또는 내재화시킨다. ADC가 내재화된 후, 이 세포 독성 약물이 방출되어 암을 사멸시킨다. 이러한 표적화로 인해, 이상적으로는 이 약물은 부작용이 적고, 다른 화학요법제보다 치료 범위가 더 넓다. 항체를 접합하는 기술은 당업계에 공지되어 있다 (가령, Jane de Lartigue, OncLive July 5, 2012; ADC Review on antibody-drug conjugates; 및 Ducry et al., (2010). Bioconjugate Chemistry 21 (1): 5-13).
(9) 결합 분석 및 기타 분석
본 명세서의 항-TREM2 항체는 가령, 공지된 방법 이를 테면, ELISA, 웨스턴 블랏, 등등에서 항원 결합 활성에 대해 테스트된다.
항체가 결합하는 에피토프를 멥핑하는 상세한 예시적인 방법들은 Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,”in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)에서 제공된다.
핵산, 벡터, 및 숙주 세포
본 명세서의 항-TREM2 항체는 재조합 방법 및 조성물을 사용하여, 예를 들어 U.S. 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서의 임의의 항-TREM2 항체를 인코드하는 뉴클레오티드 서열을 갖는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 상기 항-TREM2 항체의 VL을 함유하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 함유하는 아미노산 서열(예로써, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 인코드할 수 있다. 일부 구체예들에서, 이러한 핵산을 함유하는 하나 또는 그 이상의 벡터 (가령, 발현 벡터)가 제공된다. 일부 구체예들에서, 이러한 핵산을 함유하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 일부 구체예들에서, 상기 숙주 세포는 다음을 함유한다 (가령, 다음의 것으로 형질도입되었다): (1) 상기 항체의 VL을 함유하는 아미노산 서열과 상기 항체의 VH를 함유하는 아미노산 서열을 인코드하는 핵산이 포함된 벡터, 또는 (2) 상기 항체의 VL을 함유하는 아미노산 서열을 인코드하는 핵산을 함유하는 제 1 벡터와 상기 항체의 VH를 함유하는 아미노산 서열을 인코드하는 핵산을 함유하는 제 2 벡터. 일부 구체예들에서, 숙주 세포는 진핵생물, 예를 들어 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 림프구양 세포 (예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 본 명세서의 숙주 세포는 단리된 세포, 시험관내 배양 세포, 및 생체외 배양 세포들이 또한 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
본 명세서의 항-TREM2 항체를 만드는 방법이 제공된다. 일부 구체예들에서, 상기 방법에는 상기 항-TREM2 항체의 발현에 적합한 조건 하에, 이 항체를 인코드하는 핵산을 함유하는 본 명세서의 숙주 세포를 배양하는 것이 내포된다. 일부 구체예들에서, 상기 항체는 상기 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 후속적으로 회수된다.
본 명세서의 항-TREM2 항체의 재조합적 생산을 위해, 상기 항-TREM2 항체를 인코드하는 핵산이 단리되고, 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 또는 그 이상의 벡터에 삽입된다. 이러한 핵산은 통상적인 과정 (예로써, 상기 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코드하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 이용하여)을 이용하여 단리 및 서열화될 수 있다.
본 명세서의 임의의 항-TREM2 항체, 또는 본 명세서에서 기술된 이의 단편들 폴리펩티드 (항체를 비롯한)를 인코딩하는 핵산 서열을 함유하는 적합한 벡터에는 클로닝 벡터 및 발현 벡터가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 적합한 클로닝 벡터는 표준 기술에 따라 작제될 수 있거나, 또는 당업계에서 이용가능한 다수의 클로닝 벡터로부터 선택될 수 있다. 선택된 클로닝 벡터는 사용하고자 하는 숙주 세포에 따라 다양할 수 있지만, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로 자가-복제 능력이 있고, 특정 제한 엔도뉴클레아제에 대한 단일 표적을 보유할 수 있으며, 및/또는 벡터를 함유하는 클론 선택에 이용될 수 있는 마커의 유전자를 운반할 수 있다. 적합한 예시에는 플라스미드 및 박테리아 바이러스, 가령, pUC18, pUC19, Bluescript (가령, pBS SK+) 및 이의 유도체들, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파아지 DNAs, 및 셔틀 벡터, 이를 테면, pSA3 및 pAT28이 내포된다. 이들 벡터 및 기타 많은 클로닝 벡터는 BioRad, Strategene 및 Invitrogen과 같은 상용 공급업체에서 구할 수 있다.
발현 벡터는 일반적으로, 본 명세서의 핵산을 함유하는 복제가능한 폴리뉴클레오티드 구조체다. 발현 벡터는 에피솜(episomes) 또는 염색체 DNA의 통합 부분으로서 숙주 세포에서 복제될 수 있다. 적합한 발현 벡터에는 플라스미드, 아데노바이러스, 아데노-연합된 바이러스, 레트로바이러스를 비롯한 바이러스 벡터들, 코스미드 및 PCT 공개 번호 WO 87/04462에서 기술된 발현 벡터(들)이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 벡터 성분은 일반적으로, 다음 중에서 한 가지 또는 그 이상을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다: 신호 서열, 복제 기점, 하나 또는 그 이상의 마커 유전자; 적합한 전사 제어 요소들 (이를 테면, 프로모터, 인헨서 및 종료자). 발현 (가령, 해독)을 위해, 리보솜 결합 부위, 번역 개시 부위 및 정지 코돈과 같은 하나 이상의 번역 제어 요소도 일반적으로 필요하다.
관심대상의 핵산을 함유하는 벡터는 전기천공, 염화칼슘, 염화루비듐, 인산 칼슘, DEAE-덱스트란 또는 기타 기질을 사용한 형질감염; 미세-발사체 투하; 리포펙션; 및 감염 (예: 이때 벡터가 백시니아 바이러스와 같은 감염성 제제인 경우)을 포함한 여러 적절한 수단중 임의의 수단에 의해 숙주 세포로 도입시킬 수 있다. 벡터 또는 폴리뉴클레오티드 도입의 선택은 종종 숙주 세포의 특징에 따라 달라진다. 일부 구체예들에서, 상기 벡터는 본 명세서의 항-TREM2 항체를 인코딩하는 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열을 함유하는 핵산을 함유한다.
항체-인코딩된 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포에는 원핵 세포 또는 진핵 세포들이 내포된다. 예를 들면, 본 명세서의 항-TREM2 항체는 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우 박테리아에서 생성될 수 있다. 박테리아에서 항체 단편들과 폴리펩티드의 발현의 경우 (가령, U.S. 특허 번호 5,648,237, 5,789,199, 및 5,840,523; 그리고 대장균에서 항체 단편들의 발현에 대해 설명하는 Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254). 발현 후, 항체는 박테리아 세포 페이스트로부터 가용성 분획으로 분리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.
원핵세포에 추가적으로, 진핵 미생물, 이를 테면 섬유성 곰팡이 또는 효모는 항체-인코딩 벡터의 적절한 클로닝 또는 발현 숙주이며, 글리코실화 경로가 “인간화되고", 결과적으로 부분적으로 또는 온전하게 인간 글리코실화 패턴을 가진 항체를 생산하는 곰팡이 및 효모 균주가 포함된다.(가령, Gerngross Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004); 그리고 Li et al. Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)).
척추동물 세포들 또한 숙주로 이용될 수 있다. 예를 들면, 현탁액에서 성장하도록 개조시킨 포유동물 세포주들이 유용할 수 있다. 유용한 포유류 숙주 세포주의 다른 예로는 SV40에 의해 형질변환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7); 인간 배아 신장 세포주 (예로써, Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)에서 설명된 293 또는 293 세포들); 아기 햄스터 신장 세포들 (BHK); 마우스 세르톨리 세포들 (예로써, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)에서 설명된 TM4 세포들); 원숭이 신장 세포들 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포들 (VERO-76); 인간 경부 암종 세포들 (HELA); 갯과 신장 세포들 (MDCK; 버팔로 렛 간 세포들 (BRL 3A); 인간 폐 세포들 (W138); 인간 간 세포들 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 예로써, Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)에서 설명된 TRI 세포들; MRC 5 세포들; 그리고 FS4 세포들이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포계통에는 DHFR- CHO 세포들 (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))을 포함하는 중국 헴스터 난소(CHO) 세포 (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 그리고 골수종 세포계통, 이를 테면 Y0, NS0 및 Sp2/0이 내포된다. 항체 생산에 적합한 특정 포유류 숙주 세포주의 검토는 예로써, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)를 참고한다.
약제학적 조성물 및 제형
본 명세서의 항-TREM2 항체, 및 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다. 일부 구체예들에서, 생리학적으로 수용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제에서 본 명세서의 항-TREM2 항체를 포함하는 제약 조성물이 본원에서 제공된다(Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, Pa.). 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제는 이들이 사용된 용량 및 농도에서 수령자에게 무-독성이다.
각종 구체예들에서, 항-TREM2 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 약제학적으로 수용가능한 담체와 함께 제형으로 제공된다 (가령, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000)). 비경구 투여에 적합한 제형에는 수성 및 비-수성의, 등장성 멸균 주사 용액이 내포되는데, 이것은 항산화제, 완충제, 정균제 및 제형을 의도된 수용자의 혈액과 등장성으로 만드는 용질, 현탁제, 가용화제, 증점제, 안정제 및 보존제를 포함할 수 있다.
약제학적 투여량(dosage) 및 투여
항-TREM2 항체는 비경구, 폐내, 비강내, 종양내, 병변내 투여, 뇌척수내, 두개내, 척수내, 활막내, 척추강내, 경구, 국소 또는 흡입 경로를 비롯한 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입에는 근육내, 볼루스(bolus)로서의 정맥내 투여 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입, 동맥-내, 관절내, 복강내 또는 피하 투여가 내포된다. 일부 구체예들에서, 상기 투여는 정맥내 투여다. 일부 구체예들에서, 상기 투여는 피하 투여다. 투여(dosing)는 부분적으로 투여가 잠시 동안인지 또는 만성적인지에 따라, 예를 들면, 주사, 이를 테면, 정맥 또는 피부아래 주사에 의한 것일 수 있다. 다양한 시점에 걸쳐 단일 투여 또는 다중 투여, 볼루스 투여, 그리고 펄스 주입을 비롯한, 그러나 이에 국한되지 않는 다양한 투약 일정이 고려된다.
질환의 방지 또는 치료를 위하여, 항-TREM2 항체의 적절한 용량은 상기에서 정의된 바와 같이 치료될 질환의 유형, 특정 항체, 질환의 심각성 및 과정, 상기 항체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지의 여부, 기존 치료, 환자의 임상적 병력 그리고 상기 항체에 대한 반응, 그리고 주치의의 판단에 따라 달라질 것이다. 상기 항체는 한 번에 또는 일련의 치료 일정에 걸쳐 환자에게 적절하게 투여된다.
키트/제조 물품
본 명세서는 본 명세서의 단리된 항체 (가령, 본원에서 기술된 항-TREM2 항체), 또는 이의 기능을 하는 단편을 함유하는 키트를 또한 제공한다. 본 명세서의 키트에는 정제된 본 명세서의 항체를 포함하는 한 개 또는 그 이상의 용기들이 내포될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 키트에는 본 명세서의 방법에 따른 사용 설명서가 추가 내포된다. 일부 구체예들에서, 이들 지침은 본 명세서의 방법에 따라 다음에서 선택된 질환, 장애, 또는 손상을 갖는 개체에서 이를 예방, 이에 대한 위험을 감소, 또는 치료하기 위해, 본 명세서의 단리된 항체 (가령, 본 명세서의 항-TREM2 항체)를 투여하는 설명을 포함한다: 소아-발병 백색질뇌병증; 축삭 회전타원체 및 색소침착된 아교세포를 동반한 성인-발병 백색질뇌병증 (ALSP); 회전타원체를 갖는 백색질뇌병증, 회전타원체를 갖는 미만성 유전; 신경축삭 회전타원체를 갖는 성인-발병 백질영양증; 신경축삭 회전타원체를 갖는 상염색체 우성 백색질뇌병증; 축삭 회전타원체를 갖는 유전성 미만성 백색질뇌병증(HDLS); 신경축삭 대뇌백질위축증; 색소성 정색성 대뇌백질위축증; 그리고 가족성 색소성 정색성 백색질뇌병증 (POLD).
일부 구체예들에서, 상기 지침은 예를 들면, 개체, 조직 샘플, 또는 세포에서 TREM2를 어떻게 검출하는 지에 대한 설명을 포함한다. 상기 키트는 해당 개체가 해당 질환을 갖는지, 그리고 이 질환 단계를 확인하는 것을 기반으로, 치료에 적합한 개체를 선별하는 설명을 더 포함할 수 있다.
일부 구체예들에서, 상기 키트에는 본 명세서의 또다른 항체 (가령, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 한 개의 항체, 억제성 사이토킨에 특이적으로 결합하는 적어도 한 개의 항체, 및/또는 자극 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 한 개의 효현성 항체) 및/또는 적어도 하나의 자극 사이토킨이 더 내포될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 기트에는 본 명세서의 단리된 항체 (가령, 본 명세서에서 기술된 항-TREM2 항체)와 조합된 항체 및/또는 자극 사이토킨의 사용 지침, 항체 및/또는 자극 사이토킨과 조합된 본 명세서의 단리된 항체의 사용 지침, 또는 본 명세서의 임의의 방법에 따른 본 명세서의 단리된 항체, 그리고 항체 및/또는 자극 사이토킨의 사용 지침이 더 내포될 수 있다.
이러한 지침에는 일반적으로 의도된 치료를 위한 투여량, 투약 일정 및 투여 경로에 대한 정보가 내포된다. 상기 용기는 단위 투여분량(doses), 벌크 패키지(예: 다중-투여분량 패키지) 또는 하위-단위 투여분량일 수 있다. 본 명세서의 키트에 제공된 지침은 일반적으로 라벨 또는 패키지 삽입물(가령, 키트에 포함된 종이 시트)에 작성된 지침이지만 기계 판독 가능 지침(가령, 자기 또는 광학 저장 디스크에 포함된 지침)은 또한 허용된다.
라벨 또는 패키지 삽입물에는 이 조성물이 본 명세서의 질환의 치료에 이용된다는 것이 명시되어 있다. 여기에 설명된 방법들중 임의의 하나를 실행하기 위한 지침이 제공될 수 있다.
본 명세서의 키트는 적합한 포장에 담겨 있다. 적합한 포장은 바이알, 병, 자르(jars),가요성 포장 (예를 들어, 밀봉된 Mylar 또는 비닐 봉지) 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 흡입기, 비강 투여 장치(가령, 분무기) 또는 미니펌프와 같은 주입 장치와 같은 특정 장치와 조합하여 사용하기 위한 패키지도 고려된다. 키트는 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들면, 상기 용기는 피하 주사 바늘이 뚫을 수 있는 마개를 가진 정맥 용액 주머니 또는 바이알일 수 있다). 상기 용기는 멸균 접근 포트를 또한 가질 수 있다 (예를 들면, 상기 용기는 피하 주사 바늘이 뚫을 수 있는 마개를 가진 정맥 용액 주머니 또는 바이알일 수 있다). 상기 조성물 안에 적어도 하나의 활성제는 본 명세서의 단리된 항체 (가령, 본원에서 기술된 항-TREM2 단백질). 상기 용기는 제2 약제학적 활성제를 추가로 포함할 수 있다.
키트는 임의선택적으로 완충제 및 해석 정보와 같은 추가 구성 요소를 제공할 수 있다. 일반적으로, 상기 키트는 용기, 그리고 용기상에 또는 이에 연합된 라벨 또는 패키지 삽입물(들)을 포함한다.
본 명세서는 하기 실시예들을 참조하면 더욱 충분히 이해될 것이다. 이들은 하지만, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본 명세서 전체에 걸친 모든 인용은 참고로 명시적으로 포함된다.
바이오마커
특정 구체예들에서, CSF1R 수준은 본원에서 기술된 TREM2 항체의 활성에 대한 바이오마커로 이용된다. 특정 구체예들에서, 대상체에게 투여되는 TREM2 항체는 치료를 받지 않은 대상체 또는 대조군 항체 또는 플라시보로 처리받은 대상체와 비교하여, CSF1R 발현을 상당히 유도하거나, 또는 CSF1R 수준을 상당히 증가시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 TREM2 항체는 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 TREM2 항체는 CSF1R RNA 수준을 가령, 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80, 90% 또는 100% 증가시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 TREM2 항체는 CSF1R 단백질 수준을 가령, 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80, 90% 또는 100% 증가시킨다. 특정 구체예들에서, CSF1R RNA 또는 단백질 수준은 예를 들면, 뇌척수액에서 검출하였을 때, 뇌에서 증가된다. 특정 구체예들에서, CSF1R RNA 또는 단백질 수준은 전두엽에서 증가된다. 특정 구체예들에서, CSF1R RNA 또는 단백질 수준은 해마에서 증가된다. 특정 구체예들에서, CSF1R RNA 또는 단백질 수준은 혈장에서 증가된다. 특정 구체예들에서, CSF1R RNA 또는 단백질 수준은 항-TREM2 효현성 항체의 활성에 대한 바이오마커로 이용된다. 특정 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 CSF1R RNA 수준을 가령, 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80, 90% 또는 100% 증가시킨다. 특정 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 CSF1R 단백질 수준을 가령, 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80, 90% 또는 100% 증가시킨다. 특정 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 예를 들면, 뇌척수액에서 검출하였을 때, 뇌에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 전두엽에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 해마에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서, 항-TREM2 효현성 항체는 혈장에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다.
특정 구체예들에서, CSF1R RNA 또는 단백질 수준은 AL2p-58 huIgG1 PSEG 활성에 대한 바이오마커로 이용된다. 특정 구체예들에서, AL2p-58 huIgG1 PSEG는 CSF1R RNA 수준을 가령, 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80, 90% 또는 100% 증가시킨다. 특정 구체예들에서, AL2p-58 huIgG1 PSEG는 CSF1R 단백질 수준을 가령,10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80, 90% 또는 100% 증가시킨다. 특정 구체예들에서, AL2p-58 huIgG1 PSEG는 예를 들면, 뇌척수액에서 검출하였을 때, 뇌에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서 AL2p-58 huIgG1 PSEG는 전두엽에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서, AL2p-58 huIgG1 PSEG는 해마에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서, AL2p-58 huIgG1 PSEG는 혈장에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다.
특정 구체예들에서, CSF1R RNA 또는 단백질 수준은 AL2p-47 huIgG1 활성에 대한 바이오마커로 이용된다. 특정 구체예들에서, AL2p-47 huIgG1은 CSF1R RNA 수준을 가령, 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80, 90% 또는 100% 증가시킨다. 특정 구체예들에서, AL2p-47 huIgG1은 CSF1R 단백질 수준을 가령, 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80, 90% 또는 100% 증가시킨다. 특정 구체예들에서, AL2p-47 huIgG1은 예를 들면, 뇌척수액에서 검출하였을 때, 뇌에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서 AL2p-47 huIgG1은 전두엽에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서, AL2p-47 huIgG1은 해마에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서, AL2p-47 huIgG1은 혈장에서 CSF1R RNA 또는 단백질 수준을 증가시킨다.
본원에서 기술된 치료 방법들의 일부 구체예들에서, 상기 방법은 해당 개체로부터 얻은 샘플에서 CSF1R의 수준을 측정하는 단계를 포함한다. 상기 샘플은 상기 개체의 뇌척수액의 혈액으로부터 유래될 수 있다. RNA CSF1R의 수준 또는 단백질 CSF1R의 수준은 당분야의 당업자에게 공지된 임의의 기술에 의해 측정될 수 있다. 일부 구체예들에서, CSF1R의 수준은 항-TREM2 항체 투여 전과 후에 측정되고, CSF1R의 수준의 차이가 산출된다. 일부 구체예들에서, 항-TREM2 항체의 투여-후 CSF1R의 수준이 증가하는 경우, 이 항-TREM2 항체는 개체에서 활성인 것으로 간주된다. 일부 구체예들에서, 항-TREM2 항체의 투여-후 CSF1R의 수준이 증가되지 않는 경우, 이 항-TREM2 항체는 개체에서 비-활성인 것으로 간주된다.
본 명세서는 항-TREM2 항체를 투여받은 개체의 치료를 모니터링하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 하나 또는 그 이상의 투여분량의 항-TREM2 항체를 제공받기 전과 제공받은 후, 해당 개체로부터 얻은 샘플 안에 CSF1R의 수준을 측정하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 AL2p-58 huIgG1 PSEG를 투여받은 개체의 치료를 모니터링하는 것이다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 AL2p-47 huIgG1를 투여받은 개체의 치료를 모니터링하는 것이다. 일부 구체예들에서, 상기 샘플은 해당 개체의 뇌척수액 또는 해당 개체의 혈액에서 얻은 샘플이다. 일부 구체예들에서, 상기 방법은 이 샘플 안에 있는 CSF1R의 수준을 기초하여, 해당 개체에서 항-TREM2 항체의 활성을 평가하는 단계를 더 포함한다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 항-TREM2 항체 투여-후 CSF1R의 수준이 증가하는 경우, 이 항-TREM2 항체는 개체에서 활성인 것으로 간주되며, 그리고 일부 구체예들에서, 항-TREM2 항체 투여 후 CSF1R의 수준이 증가하지 않으면, 이 항-TREM2 항체는 개체에서 비-활성인 것으로 간주된다.
실시예
실시예 1: CSF1 중단-후, 인간 대식세포 생존율
CSF1 중단-후, 인간 대식세포의 생존을 유지시키는 항-TREM2 효현성 항체의 능력을 평가하기 위해, RosetteSep Human Monocyte Enrichment Protoco(Stem Cell Technologies)를 사용하여 인간 단핵구를 전혈에서 단리했다. 인간 단핵구 유래된 대식세포를 준비하기 위해, 단핵구를 계수하고, RPMI 완전 배지(Glutamax, 페니실린/스트렙토마이신, 비-필수 아미노산, 나트륨-피루베이트 및 10% 열 불-활성화된 소의 태아 혈청이 보충된 RPMI) 및 50ng/ml M-CSF(Peprotech)에 도말했다. 6일 후, 분화된 단핵구(대식세포)를 수거하였고, M-CSF가 포함된 RPMI 완전 배지에서 1.0 x 105 개 세포/웰의 밀도로 96-웰 플레이트에 도말시켰다. 세포를 밤새 회복되도록 두었다. 7일 차 시점에, 세포 배지를 무-혈청 RPMI 배지로 교체하였고, 세포를 M-CSF(50 ng/mL) 단독으로만, IgG1 (10μg/mL), AL2p-58 huIgG1 PSEG (1μg/mL), 또는 AL2p-58 huIgG1 PSEG (10μg/mL)로 처리하였다. 세포 생존력은 M-CSF 중단-후 각각의 다음 날에 CellTiter-Glo 발광성 생존력 분석(Promega)을 사용하여 정량화되었다.
도 1에 도시된 바와 같이, AL2p-58 huIgG1 PSEG (10μg/mL)로 처리된 인간 대식 세포는 M-CSF 단독으로 (50 ng/mL), IgG1 (10μg/mL), 또는 AL2p-58 huIgG1 PSEG (1μg/mL)로 처리된 세포와 비교하였을 때, 세포 생존역을 상당히 증가시켰다. 특히, AL2p-58 huIgG1 PSEG를 10μg/mL로 처리하면 M-CSF 단독 처리와 비교하였을 때, 세포 생존력을 상당히 개선시켰다.
실시예 2: CSF1R 억제 후, 인간 대식세포 세포 생존력 및 생존
실시예 1에 제시된 결과는 항-TREM2 효현성 항체를 사용한 치료가 M-CSF1의 중단-후, 인간 대식세포의 생존을 유지할 수 있음을 입증하였다. 그러나, M-CSF1은 수용체 CSF1R의 유일한 하나의 리간드다. 본 실시예에서, 수용체 CSF1R 자체가 억제될 때, 인간 대식세포의 생존에 대한 항-TREM2 효현성 항체의 효과를 조사하기 위한 실험을 수행하였다.
CSF1R 억제-후, 인간 대식세포의 생존 유지를 위한 항-TREM2 항체의 능력을 평가하기 위해, CSF1R 억제제 PLX3397 존재 하에서, 세포-생존력 및 생존을 강화시키는 AL2p-58 huIgG1 PSEG의 능력을 테스트하였다 (DeNardo et al., Cancer Discov (2011) 1(1):54-67. 22039576); Peng, et al., J. of Exp Canc Res (2019) 38(1):372. PMID: 31438996). CSF1 중단 실험과 유사하게, 인간 유래된 대식세포를 6일차 시점에 96-웰 플레이트 상에 도말하였고, 7일차 시점에 모두다 RPMI 완전 배지에서 IgG1, PLX3397 (30 nM), AL2p-58 huIgG1 PSEG (10μg/mL) 또는 PLX3397 및 AL2p-58 huIgG1 PSEG의 조합으로 처리하였다. 세포 생존력은 각각의 다음 날에 CellTiter-Glo 발광성 생존력 분석(Promega)을 사용하여 정량화되었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, AL2p-58 huIgG1 PSEG로 처리하면 CSF1R 억제 존재 하에서 인간 대식세포의 생존이 지속되었다. 특히, 도 2에서 제시된 데이터는 PLX3397 (CSF1R 억제제)로 처리된 인간 대식세포는 세포 생존력을 감소시켰음을 보여주었다. 그러나, PLX3397로 처리된 세포는 AL2p-58 huIgG1 PSEG로 처리되었을 때, 세포 생존율이 크게 개선되었다. 더욱이, 이들 데이터에서 PLX3397 및 AL2p-58 huIgG1 PSEG 모두로 처리된 인간 대식세포는 CSF1R 억제 (가령, IgG1로 처리하거나 또는 AL2p-58 huIgG1 PSEG 단독으로 처리하는 경우)를 겪지 않은 세포의 세포 생존력 수준과 유사한 수준을 가졌다.
실시예 3: 인간이 아닌 영장류에서 항-TREM2 효현성 항체는 CSF1R 단백질 발현을 증가시킨다.
인간이 아닌 영장류를 대조군 IgG로 처리하였거나, 또는 농도를 증가시키면서 AL2p-58 huIgG1 PSEG 항체로 처리하였다. 전두엽 샘플 안에 CSF1R 단백질 수준을 측정하였다. 도 3에 나타낸 바와 같이, AL2p-58 huIgG1 PSEG는 대조군 처리와 비교하였을 때, 전두엽에서 CSF1R 단백질 발현을 증가시켰다. 연구에 사용된 AL2p-58 huIgG1 PSEG의 최저 농도보다 12.5x 더 높은 AL2p-58 huIgG1 PSEG의 최고 농도는 표시된 대조군과 비교하여, 통계적으로 유의미한 CSFR1 수준의 증가를 초래했다. 전두엽과 비교하여, 해마에서 CSFR1의 증가가 관찰되었지만, 비교가능한 연구에서 AL2p-58 huIgG1 PSEG로 처리된 인간이 아닌 영장류에서는 일관되게 관찰되지 않았고, 이것은 AL2p-58 huIgG1 PSEG가 다른 부분에 비해 뇌의 특정 부분에서 CSF1R 수준에 더 많은 영향을 미칠 수 있음을 나타낸다.
실시예 4: 항-TREM2 항체는 인간이 아닌 영장류의 전두엽 및 해마에서 CSF1R 수준을 증가시킨다.
이 실시예는 인간이 아닌 영장류 (시노물구스 원숭이)의 전두엽 및 해마에서 CSF1R 단백질의 수준에 대한 AL2p-58 huIgG1의 효과를 평가한 실험 결과를 설명한다. AL2p-58 huIgG1은 야생형 IgG1에 포함된 Fc를 갖는 항-TREM2 항체 AL2p-58 huIgG1 PSEG의 변이체다.
시노물구스 원숭이에게 매주 투여분량의 대조군 또는 항-TREM2 항체 AL2p-58 huIgG1을 총 5회 투여분량으로 정맥내 주사하였다 (투여 그룹당 N=5 마리). 다섯번째 투여-후 48시간 시점에서, 뇌 조직을 채취하였고, 상응하는 용해물에서 CSF1R 단백질 발현에 대해 분석하였다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 인간이 아닌 영장류의 전두엽 및 해마에서 CSF1R 단백질 수준은 대조군-처리된 동물과 비교하여, 항-TREM2 항체 AL2p-58 huIgG1 투여-후, 유의미적으로 증가되었다.
SEQUENCE LISTING <110> ALECTOR LLC <120> METHODS OF USE OF ANTI-TREM2 ANTIBODIES <130> 73502-20032.40 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 63/005,110 <151> 2020-04-03 <150> US 62/944,298 <151> 2019-12-05 <160> 145 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 230 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Glu Pro Leu Arg Leu Leu Ile Leu Leu Phe Val Thr Glu Leu Ser 1 5 10 15 Gly Ala His Asn Thr Thr Val Phe Gln Gly Val Ala Gly Gln Ser Leu 20 25 30 Gln Val Ser Cys Pro Tyr Asp Ser Met Lys His Trp Gly Arg Arg Lys 35 40 45 Ala Trp Cys Arg Gln Leu Gly Glu Lys Gly Pro Cys Gln Arg Val Val 50 55 60 Ser Thr His Asn Leu Trp Leu Leu Ser Phe Leu Arg Arg Trp Asn Gly 65 70 75 80 Ser Thr Ala Ile Thr Asp Asp Thr Leu Gly Gly Thr Leu Thr Ile Thr 85 90 95 Leu Arg Asn Leu Gln Pro His Asp Ala Gly Leu Tyr Gln Cys Gln Ser 100 105 110 Leu His Gly Ser Glu Ala Asp Thr Leu Arg Lys Val Leu Val Glu Val 115 120 125 Leu Ala Asp Pro Leu Asp His Arg Asp Ala Gly Asp Leu Trp Phe Pro 130 135 140 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Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 51 Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Arg Thr Ile Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 52 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 52 Ala Arg Trp Asn Gly Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 53 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 53 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ile Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 54 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 54 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 55 Ser Gln Thr Thr His Ala Leu Phe Thr 1 5 <210> 56 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 56 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu 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His Thr Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Gln 85 90 95 Thr Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110 Lys <210> 130 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 130 Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe Tyr 1 5 <210> 131 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 131 Ile Arg Asn Lys Ala Tyr Gly Tyr Thr Thr 1 5 10 <210> 132 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 132 Ala Arg Ile Gly Ile Asn Tyr Gly Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 1 5 10 15 <210> 133 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 133 Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Glu Ser Asn Gln Asp Tyr 1 5 10 <210> 134 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 134 Gly Ala Ser 1 <210> 135 <211> 9 <212> PRT <213> 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Leu Ile Asn Gln Ser Pro Ala Ser Leu Thr Val Ser Thr Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Glu Asn Lys Gln Asp Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Phe Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Asn Ile Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Gln 85 90 95 Thr Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110 Lys

Claims (44)

  1. CSF1R-결핍 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 있어서, 이 방법은 이를 필요로 하는 개체에게 치료요법적으로 효과량의 TREM2 단백질에 결합하는 항체를 투여하는 것을 포함하며, 이때 상기 항체는 효현제이며, 이때 상기 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 유도하는, 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 이때 상기 항체는 TREM2 단백질에 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드의 결합에 의해 유도된 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성 강화을 강화시키는, 방법.
  3. 청구항 2에 있어서, 이때 상기 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드가 TREM2 단백질에 결합하는 것을 차단시키지 않고, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시키는, 방법.
  4. 청구항 2 또는 청구항 3에 있어서, 이때 상기 항체는 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드가 TREM2 단백질에 결합을 강화시키는, 방법.
  5. 청구항 3-4중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2 리간드는 다음으로 구성된 군에서 선택되는, 방법: 대장균(E. coli) 세포, 아폽토시스 세포, 핵산, 음이온성 지질, 음이온성 지질, APOE, APOE2, APOE3, APOE4, 음이온성 APOE, 음이온성 APOE2, 음이온성 APOE3, 음이온성 APOE4, 지질화된 APOE, 지질화된 APOE2, 지질화된 APOE3, 지질화된 APOE4, 쌍성이온성 지질, 음전하를 띤 인지질, 포스파티딜세린, 설파타이드, 포스파티딜콜린, 스핑고미엘린, 막 인지질, 지질화된 단백질, 단백질 지질, 지질화된 펩티드, 지질화된 아밀로이드 베타 펩티드, 및 이들의 임의의 조합.
  6. 청구항 2-5중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 TREM2의 세포 표면 클러스터링 부재 하에서 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시키는, 방법.
  7. 청구항 2-5중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 TREM2의 세포 표면 클러스터링을 유도하거나, 또는 유지시킴으로써, 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성을 강화시키는, 방법.
  8. 청구항 1-7중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 TREM2 단백질은 포유류 단백질 또는 인간 단백질인, 방법.
  9. 청구항 8에 있어서, 이때 상기 TREM2 단백질은 야생형 단백질, 자연 발생적 변이체, 또는 질환 변이체인, 방법.
  10. 청구항 1-9중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체에 의해 유도되는 또는 강화되는 하나 또는 그 이상의 TREM2 활성은 다음으로 구성된 군에서 선택되는, 방법:
    a. DAP12에 TREM2 결합;
    b. DAP12 인산화;
    c. Syk 키나제의 활성화;
    d. IFN-β, IL-1α, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, CD86, MCP-1/CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCR2, CXCL-10, Gata3, IL-20 패밀리 구성원, IL-33, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, CSF-1, OPN, CD11c, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, 및 IL-23으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 전-염증성 매개체의 변조(modulation), 임의선택적으로 이때 상기 변조는 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, 및 미세신경아교 세포로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 세포에서 발생하고;
    e. DAP12/TREM2 복합체로 Syk의 회동;
    f. 하나 또는 그 이상의 TREM2-의존적 유전자들의 활성 증가, 임의선택적으로 이때 상기 하나 또는 그 이상의 TREM2-의존적 유전자들은 활성화된 T-세포 (NFAT) 전사 인자의 핵 인자를 포함하고;
    g. 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼(Kupffer) 세포, 미세신경아교세포, M1 미세신경아교세포, 활성화된 M1 미세신경아교세포, 및 M2 미세신경아교세포, 또는 이의 임의의 조합의 생존 증가;
    h. CD83, CD86 MHC 클라스 II, CD40, 및 이의 임의의 조합으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 자극 분자들의 변조된 발현, 임의선택적으로 이때 CD40은 수지상 세포, 단핵구, 대식세포, 또는 이의 임의의 조합 상에서 발현되며, 그리고 임의선택적으로 이때 상기 수지상 세포는 골수-유래된 수지상 세포를 포함하고;
    i. 기억력 증가; 그리고
    j. 인지 결핍 감소.
  11. 청구항 1-10중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 CSF1 부재 하에서 배양된 대식세포 생존을 촉진시키는, 방법.
  12. 청구항 1-11중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 생체내에서 가용성 TREM2의 혈장 수준을 감소시키는, 방법.
  13. 청구항 1-12중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 TREM2의 분열을 차단시키는, 방법.
  14. 청구항 1-13중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 처리를 받지 않은 개체 또는 대조군 항체로 처리된 개체와 비교하였을 때, 해당 개체에서 CSF1R의 발현을 유도하고 또는 CSF1R의 수준을 증가시키는, 방법.
  15. 청구항 14에 있어서, 이때 CSF1R의 발현 유도 또는 CSF1R의 수준 증가는 해당 개체의 뇌에서 일어나는, 방법.
  16. 청구항 1-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 해당 개체로부터 얻은 샘플에서 CSF1R의 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 방법.
  17. 청구항 1-16중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 뮤린 항체, 인간화된 항체, 이중특이적 항체, 다가(multivalent) 항체, 콘쥬게이트화된 항체, 또는 키메라 항체인, 방법.
  18. 청구항 1-17중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 단일클론성 항체인, 방법.
  19. 청구항 1-18중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 124-153내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 124-153에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 129-153내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 129-153에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 140-149내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 140-149에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 149-157내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 149-157에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들; 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 153-162내, 또는 서열 식별 번호: 1의 아미노산 잔기 153-162에 대응하는 TREM2 단백질 상의 아미노산 잔기들에서 하나 또는 그 이상의 아미노산에 결합하는, 방법.
  20. 청구항 1-19중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 서열 식별 번호: 1의 D140, L141, W142, F143, P144, E151, D152, H154, E156, 및 H157로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열 식별 번호: 1의 D140, L141, W142, F143, P144, E151, D152, H154, E156, 및 H157로 구성된 군에서 선택된 아미노산 잔기에 대응하는 포유류 TREM2 단백질 상의 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기에 결합하는, 방법.
  21. 청구항 1-20중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 그리고 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 이때 HVR-H1은 아미노산 서열 YAFSSQWMN (서열 식별 번호: 34)을 포함하고, HVR-H2는 아미노산 서열 RIYPGGGDTNYAGKFQG (서열 식별 번호: 35)을 포함하고, HVR-H3은 아미노산 서열 ARLLRNQPGESYAMDY (서열 식별 번호: 31)을 포함하고, HVR-L1은 아미노산 서열 RSSQSLVHSNRYTYLH (서열 식별 번호: 41)을 포함하고, HVR-L2는 아미노산 서열 KVSNRFS (서열 식별 번호: 33)을 포함하고, 그리고 HVR-L3은 아미노산 서열 SQSTRVPYT (서열 식별 번호: 32)을 포함하는, 방법.
  22. 청구항 1-21중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 서열 식별 번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 식별 번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  23. 청구항 1-20중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 그리고 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 이때 HVR-H1은 아미노산 서열 YAFSSDWMN (서열 식별 번호: 36)을 포함하고, HVR-H2는 아미노산 서열 RIYPGEGDTNYARKFHG (서열 식별 번호: 37)을 포함하고, HVR-H3은 아미노산 서열 ARLLRNKPGESYAMDY (서열 식별 번호: 38)을 포함하고, HVR-L1은 아미노산 서열 RTSQSLVHSNAYTYLH (서열 식별 번호: 39)을 포함하고, HVR-L2는 아미노산 서열 KVSNRVS (서열 식별 번호: 40)을 포함하고, 그리고 HVR-L3은 아미노산 서열 SQSTRVPYT (서열 식별 번호: 32)을 포함하는, 방법.
  24. 청구항 1-20 또는 23중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 서열 식별 번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 식별 번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  25. 청구항 1-24중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 단편이며, 이때 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편인, 방법.
  26. 청구항 1-24중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 IgG 클라스, IgM 클라스, 또는 IgA 클라스의 항체인, 방법.
  27. 청구항 26에 있어서, 이때 상기 항체는 IgG 클라스의 항체이며, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소형을 갖는, 방법.
  28. 청구항 27에 있어서, 이때 상기 항체는 인간 IgG1 아이소형을 갖고, Fc 영역에서 잔기 위치 P331S 및 E430G에 아미노산 치환을 포함하며, 이때 잔기 번호매김은 EU 번호매김에 따른, 방법.
  29. 청구항 1-22중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 다음을 포함하는, 방법:
    a. 서열 식별 번호: 43의 아미노산을 포함하는 중쇄, 그리고 서열 식별 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    b. 서열 식별 번호: 44의 아미노산을 포함하는 중쇄, 그리고 서열 식별 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
  30. 청구항 1-20 또는 23-24중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 항체는 다음을 포함하는, 방법:
    a. 서열 식별 번호: 45의 아미노산을 포함하는 중쇄, 그리고 서열 식별 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    b. 서열 식별 번호: 46의 아미노산을 포함하는 중쇄, 그리고 서열 식별 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
  31. 청구항 1-30중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 개체는 인간인, 방법.
  32. 청구항 1-31중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CSF1R-결핍 질환은 축삭 회전타원체 및 색소침착된 아교세포를 동반한 성인-발병 백색질뇌병증 (ALSP)인, 방법.
  33. 청구항 1-31중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CSF1R-결핍 질환은 소아-발병 백색질뇌병증인, 방법.
  34. 청구항 1-33중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 개체는 CSF1R 유전자에 돌연변이를 갖는, 방법.
  35. 청구항 34에 있어서, 이때 상기 돌연변이는 세포내 단백질 티로신 키나제 도메인을 인코딩하는 CSFR1 유전자의 일부분에 있는, 방법.
  36. 청구항 34에 있어서, 이때 상기 돌연변이는 CSFR1 유전자의 엑손 11-21중 임의의 하나에 존재하는, 방법.
  37. 청구항 34-36중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 개체는 CSFR1 유전자에서 돌연변이에 대한 이형접합체인, 방법.
  38. 청구항 34-36중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 개체는 CSFR1 유전자에서 돌연변이에 대한 동형접합체인, 방법.
  39. 청구항 1-38, 이때 상기 개체는 백색질뇌병증, 축삭 손상, 축삭 회전타원체, 미엘린 손상, 수초(myelin sheaths) 상실, 신경아교종, 자가형광 지질-가득한 대식세포, 및 축삭 파괴로 구성된 군에서 선택된 특징적 질환이 있거나, 또는 이러한 질환에 걸릴 위험에 처해있는, 방법.
  40. 청구항 1-39중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 개체는 대뇌백질의 이상, 행동변화, 치매, 파킨슨병, 발작, 운동 실어증, 필기불능증, 계산불능증, 행위상실증, 운동완만증, 느린 움직임, 중추 신경계 수초탈락, 낙담, 우울, 전두엽 치매, 신경아교종, 반사-과다, 반사-증가, 족저신전반응, 편마비, 사지마비, 백색질뇌병증, 기억 손상, 건망증, 기억 상실, 기억력 문제, 기억력 저하, 무언증, 말을 하지 못함, 소리를 낼 수 없음, 중추신경계의 신경세포 소실, 뇌세포 소실, 자세 불안정, 균형 장애, 빠른 진행성, 경직, 근육 경직, 발끌림 보행(shuffling gait), 종종 걸음(shuffled walk), 피라미드 징후, 경련, 비-자발적 근육 강직, 비자발적 근육 수축, 비자발적 근육 경련, 성격 문제, 집행 기능 장애로 구성된 군에서 선택된 증상이 있거나, 또는 이러한 증상을 갖게 될 위험에 처해 있는, 방법.
  41. 청구항 1-40중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 개체는 전두측두엽 치매(FTD), 피질기저 증후군(CBS), 피질기저 퇴행(CBD), 알츠하이머 질환(AD), 다발성 경화증(MS), 피질하 경색을 동반한 비-정형 대뇌 상염색체 우성 동맥병증, 백색질뇌병증 (CADASIL), 및 파킨슨 질환 (PD)으로 구성된 군에서 선택된 질환을 갖는, 방법.
  42. 본 명세서는 항-TREM2 항체를 투여받은 개체의 치료를 모니터링하는 방법에 있어서, 이 방법은 하나 또는 그 이상의 투여분량의 항-TREM2 항체를 제공받기 전과 제공받은 후, 해당 개체로부터 얻은 샘플 안에 CSF1R의 수준을 측정하는 것을 포함하는, 방법.
  43. 청구항 42에 있어서, 이 샘플 안에 있는CSF1R의 수준을 기초하여, 해당 개체에서 항-TREM2 항체의 활성을 평가하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  44. 청구항 42 또는 43에 있어서, 이때 상기 샘플은 대상 개체의 뇌척수액 또는 대상 개체의 혈액에서 유래된, 방법.
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