KR20220062305A - 키메라 공자극 수용체 및 이의 방법 및 용도 - Google Patents

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KR20220062305A
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KR1020227009624A
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조나단 브람슨
필립 마빈
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맥마스터 유니버시티
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Abstract

본원은 종양 괴사 인자 수퍼패밀리 구성원의 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 및 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 가진 키메라 공자극 수용체(CCR) 분자를 기술한다. CCR을 발현하는 T 세포를 가진 약학 조성물, 및 암의 치료를 위한 이러한 T 세포의 방법 및 용도도 제공한다.

Description

키메라 공자극 수용체 및 이의 방법 및 용도
관련 출원
본원은 2019년 9월 16일에 출원된 미국 가특허출원 제62/900,911호로부터 우선권의 이익을 주장하고, 이 가특허출원의 내용은 전체적으로 참고로 포함된다.
분야
본원은 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리로부터 유래한 키메라 수용체에 관한 것이다. 구체적으로, 본원은 면역 세포를 공자극할 수 있는 키메라 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 수용체, 및 암의 치료를 위한 이의 관련 방법 및 용도에 관한 것이다.
면역 감시는 변형된 세포에 대해 신체를 지속적으로 모니터링하는 면역 시스템의 능력이다. 암은 이 시스템을 우회하고 면역 조절을 피할 수 있다. T 세포는 면역 감시 및 암 조절에 중요한 역할을 하는 것으로 여겨진다. 지난 수십 년에 걸쳐, 종양에 반응하고 종양을 박멸하는 T 세포의 선천적 능력을 활용하려는 요법이 개발되어 왔다. 첫 번째 접근법은 큰 수를 수득하기 위해 시험관내에서 증폭되고 환자 내로 재주입되는 자가 천연 생성 종양 침윤 림프구를 사용하였다. 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 T 세포를 단리하고 변형된 T 세포 수용체를 발현하도록 T 세포를 조작함으로써 이 접근법을 개선하였다. 다른 접근법은 제한된 효능으로 표적화된 이중특이적 항체를 사용하여 생체내에서 T 세포를 자극하거나 전향하는 데 초점을 맞추었다.
세포독성 T 림프구(CTL)는 T 세포 수용체(TCR), 세포독성 이펙터 분자 및 분비된 사이토카인을 통해 형질전환되었고/되었거나 바이러스에 감염된 세포의 식별 및 제거를 매개한다. 천연 TCR 성숙은 MHC 의존적 TCR 상호작용을 통해 항원을 인식하기 위해 여러 라운드의 선택을 거친다. MHC-TCR 상호작용은 T 세포 활성화를 시작하고, 종양 세포에 작용하여 감작하고 아폽토시스를 유도하는 이펙터 분자의 방출을 야기한다. 암 세포는 종종 MHC 펩타이드 제시 기구의 손상을 가짐으로써, 항원 제시의 하향조절을 초래한다. 항원의 손실, 및 이에 따른 형질전환된 세포의 인식은 적응 면역 반응을 약화시킨다. 비-MHC 제한된 합성 항원 수용체를 보유하는 조작된 T 세포의 사용은 적응 면역 시스템이 존재량(burden)을 제거하기에 충분한 강력한 반응을 생성하지 못하는 종양을 표적화하는 전략을 제공한다. 비-MHC 제한된 합성 항원 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR), 삼작용성 항원 수용체(TAC)뿐만 아니라 항원 결합 후 T 세포를 활성화시킬 수 있는 다른 수용체도 포함하는 신규 부류의 T 세포 활성화 수용체를 포함한다. 그의 천연 TCR 이외에 이 신규 합성 항원 수용체를 발현하도록 조작된 T 세포는 신규 항원을 표적화하고 종양-항원 상호작용 시 인식 및 T 세포 활성화를 매개하는 능력을 획득한다. 흥미롭게도, 이 수용체는 천연 TCR 레퍼토리를 넘는 에피토프를 표적화하여, 항원 선택을 탄수화물 및 당지질과 같은 분자로 확장하는 능력을 허용한다. 조작된 T 세포 요법은 비-MHC 제한된 종양 항원을 표적화하는 그의 능력, PBMC 수득 용이성, 및 아고니스트 항체의 전신 투여에 비해 증가된 안전성 때문에 암 요법에 대한 흥미로운 접근법을 제공한다. CAR-조작된 T 세포의 임상적 성공은 이 신규 부류의 세포 약물의 실현 가능성과 치료 효능을 확립하였다.
공자극/공억제 신호는 TCR 라이게이션과 동시에 발생하고 T 세포 기능을 조절하는 신호이다. 공자극/공억제 신호의 유형 및 강도는 적응 면역 반응의 진행을 좌우한다. 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 및 리간드는 핵심 공자극/공억제 분자이다. TNFRSF의 구성원은 다수의 방식들로 T 세포의 반응을 매개한다. 염증 환경에 따라, TNFRSF에 의해 전파된 신호는 항원에 대한 반응으로 기억 반응 동안 미감작 T 세포로부터 생성된 기억 T 세포로의 이펙터의 분화를 자극할 수 있거나 억제할 수 있다. T 세포는 미감작, 이펙터 및 기억 단계를 포함하는 각각의 반응 단계에서 고유 활성화 또는 생존 신호를 수신하고; 공자극 신호는 이 반응들을 유도하는 주성분이다. 흥미롭게도, 공자극 신호는 공억제 신호를 제한하는 동안 T 세포 반응을 유도하는 데 사용될 수 있다. 그러나, 이 반응들이 어떻게 조정되는지는 완전히 이해되지 않는다. 여러 TNFRSF들의 발현이 T 세포 활성화 후 유도되고 이 분자들의 발현이 비편재적이라는 것이 밝혀졌으며, 이것은 이 분자들이 상이한 집단들에서 면역 반응을 조절하는 역할을 할 수 있음을 암시한다. 또한, 선천적 신호(세균 리간드) 및 적응 신호(전구염증성 사이토카인)를 비롯한 다양한 자극들이 항원 제시 세포(APC)에 의한 TNFRSF 리간드의 발현을 촉진할 수 있다. 따라서, TNFRSF는 적응 면역 반응의 각각의 단계에서 T 세포에서의 수용체 발현 및 다른 면역 세포에서의 그의 리간드 발현 둘 다를 통해 T 세포 면역을 조절하는 데 기여한다.
본 발명자들은 상이한 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 수용체로부터의 기능적 도메인으로 구성된 키메라 공자극 수용체(Chimeric Costimulatory Receptor)(CCR)가 TNFRSF 리간드에 의해 야기된 신호전달을, T 세포 자극 반응을 비롯한 원하는 반응으로 재프로그래밍할 수 있음을 입증하였다.
따라서, 일부 실시양태에서, 본원은 (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF)의 구성원의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산을 개시한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 TNFRSF의 상이한 구성원들로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 사멸 도메인을 가진 TNFRSF 구성원의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 종양 괴사 인자 수용체 1(TNFR1), 종양 괴사 인자 수용체 2(TNFR2), Fas 수용체, 사멸 도메인 4(DR4), 사멸 도메인 5(DR5), 사멸 도메인 3(DR3), 사멸 도메인 6(DR6), 외배엽 이형성증 수용체(EDAR), 엑토디스플라신(Ectodysplasin) A2 수용체(XEDAR), TROY 또는 신경 성장 인자 수용체(NGFR)의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR2의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 Fas의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 DR4의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 DR5의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 2와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드이다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인은 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드는 직접적 및/또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 직접적 및/또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된다.
일부 실시양태에서, 본원은 (a) 종양 괴사 인자 수용체 1의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산도 개시한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드이다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인은 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드는 직접적 및/또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된다.
일부 실시양태에서, 본원은 (a) 종양 괴사 인자 수용체 2의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산도 개시한다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드이다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인은 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드는 직접적 및/또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 직접적 및/또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된다.
일부 실시양태에서, 본원은 (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 6(TNFRSF6; Fas)의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산을 추가로 개시한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 2와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포질 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인이다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드이다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인은 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드는 직접적 및/또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 직접적 및/또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된다.
일부 실시양태에서, 본원은 본원에 기재된 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산에 의해 코딩된 폴리펩타이드도 개시한다.
일부 실시양태에서, 본원은 서열번호 7과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드를 추가로 개시한다.
일부 실시양태에서, 본원은 서열번호 8과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드도 개시한다.
일부 실시양태에서, 본원은 서열번호 9와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드를 추가로 개시한다.
일부 실시양태에서, 본원은 서열번호 10과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드를 추가로 개시한다.
추가로, 일부 실시양태에서, 본원은 본원에 기재된 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산을 발현하거나 본원에 개시된 폴리펩타이드를 포함하는 T 세포를 개시한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포 또는 감마-델타 T 세포이다.
일부 실시양태에서, 본원은 (a) 본원에 개시된 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산; 및 (b) 표적 특이적 리간드를 인식할 수 있는 조작된 T 세포 수용체(TCR) 또는 합성 항원 수용체 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 핵산을 포함하는, (예를 들면, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한) T 세포도 개시한다. 일부 실시양태에서, 표적 특이적 리간드는 암 세포의 항원에 결합한다. 일부 실시양태에서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드는 키메라 항원 수용체(CAR), T 세포 항원 커플러(Coupler)(TAC) 또는 BiTE(이중특이적 T 세포 인게이저(Engager))이다. 일부 실시양태에서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드는 T 세포 항원 커플러(TAC)이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포 또는 감마-델타 T 세포이다.
일부 실시양태에서, 본원은 (a) (i) 종양 괴사 인자 수용체 1로부터의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드, (ii) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드, 및 (iii) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산; 및 (b) 표적 특이적 리간드를 인식할 수 있는 조작된 T 세포 수용체(TCR) 또는 합성 항원 수용체 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 핵산을 포함하는, (예를 들면, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한) T 세포도 개시한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인은 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 표적 특이적 리간드는 암 세포의 항원에 결합한다. 일부 실시양태에서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드는 키메라 항원 수용체(CAR), T 세포 항원 커플러(TAC) 또는 BiTE(이중특이적 T 세포 인게이저)이다. 일부 실시양태에서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드는 T 세포 항원 커플러(TAC)이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포 또는 감마-델타 T 세포이다.
일부 실시양태에서, 본원은 (a) (i) 종양 괴사 인자 수용체 2로부터의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드, (ii) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드, 및 (iii) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산; 및 (b) 표적 특이적 리간드를 인식할 수 있는 조작된 T 세포 수용체(TCR) 또는 합성 항원 수용체 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 핵산을 포함하는, (예를 들면, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한) T 세포도 개시한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인은 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 표적 특이적 리간드는 암 세포의 항원에 결합한다. 일부 실시양태에서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드는 키메라 항원 수용체(CAR), T 세포 항원 커플러(TAC) 또는 BiTE(이중특이적 T 세포 인게이저)이다. 일부 실시양태에서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드는 T 세포 항원 커플러(TAC)이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포 또는 감마-델타 T 세포이다.
일부 실시양태에서, 본원은 (a) (i) Fas 수용체로부터의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드, (ii) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드, 및 (iii) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산; 및 (b) 표적 특이적 리간드를 인식할 수 있는 조작된 T 세포 수용체(TCR) 또는 합성 항원 수용체 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 핵산을 포함하는, (예를 들면, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한) T 세포도 개시한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산의 제3 폴리뉴클레오타이드는 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인은 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 표적 특이적 리간드는 암 세포의 항원에 결합한다. 일부 실시양태에서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드는 키메라 항원 수용체(CAR), T 세포 항원 커플러(TAC) 또는 BiTE(이중특이적 T 세포 인게이저)이다. 일부 실시양태에서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드는 T 세포 항원 커플러(TAC)이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포 또는 감마-델타 T 세포이다.
일부 실시양태에서, 본원은 암의 치료를 필요로 하는 개체에서 암을 치료하는 방법으로서, (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산을 포함하는 면역 세포를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 TNFRSF의 상이한 구성원으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 사멸 도메인을 가진 TNFRSF 구성원의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1, TNFR2, Fas, DR4, DR5, DR3, DR6, EDAR, XEDAR, TROY 또는 NGFR의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 조작된 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 천연 킬러 세포(NK 세포)이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 대식세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 종양 침윤 림프구(TIL)이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 단핵구이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 B 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 본원에 개시된 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 암은 백혈병 또는 림프종이다. 일부 실시양태에서, 암은 혼합형 백혈병(MLL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 림프모구성 백혈병(ALL), B 대세포 림프종, 미만성 B 대세포 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 고등급 B 세포 림프종, 또는 소포성 림프종으로부터 비롯된 B 대세포 림프종이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암, 유방암, 결장암, 다발성 골수종, 교모세포종, 위암, 난소암, 위장암, 대장암, 요로상피암, 자궁내막암 또는 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 결장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다. 일부 실시양태에서, 암은 교모세포종이다. 일부 실시양태에서, 암은 위암이다. 일부 실시양태에서, 암은 난소암이다. 일부 실시양태에서, 암은 위장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 요로상피암이다. 일부 실시양태에서, 암은 자궁내막암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다.
일부 실시양태에서, 본원은 (a) (i) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드, (ii) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드, 및 (iii) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 면역 세포; 및 (b) 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 개시한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 TNFRSF의 상이한 구성원으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 사멸 도메인을 가진 TNFRSF 구성원의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1, TNFR2, Fas, DR4, DR5, DR3, DR6, EDAR, XEDAR, TROY 또는 NGFR의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR2의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 Fas의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인은 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포, 천연 킬러 세포(NK 세포), 대식세포, 종양 침윤 림프구(TIL), 단핵구 또는 B 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 본원에 개시된 면역 세포이다.
일부 실시양태에서, 본원은 (a) 본원에 개시된 키메라 공자극 수용체(CCR); 및 (b) 포유동물 세포에서 작용하는 프로모터를 포함하는 벡터 구축물을 개시한다.
일부 실시양태에서, 본원은 본원에 개시된 벡터 구축물에 의해 형질감염된 단리 또는 조작된 T 림프구, 천연 킬러 세포, 대식세포, 종양 침윤 림프구 또는 단핵구를 개시한다.
본원의 다른 특징 및 장점은 하기 상세한 설명으로부터 명확해질 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 구체적인 예는 본원의 실시양태들을 표시하지만 예시로써만 제공되고, 청구범위는 이 실시양태들에 의해 제한되지 않아야 하나, 전체로서 본 설명과 일치하는 가장 넓은 해석을 부여받아야 함을 이해해야 한다.
본원의 실시양태들은 첨부된 도면을 참고함으로써 이하에 더 상세히 기재될 것이다.
도 1: TNFR1-4-1BB 키메라 공자극 수용체의 원리.
천연 T 세포 수용체(TCR)의 환경에서 TNFR1-4-1BB 키메라 공자극 수용체(CCR)의 이론적 생물학의 예시. TCR의 라이게이션 후 활성화된 T 세포에 의해 분비된 TNFα는 TNFα의 생성을 유발하고, 이것은 CCR을 라이게이션시킬 것이고 향상된 생존으로 이어지는 다운스트림 경로의 활성화를 촉진할 것이다.
도 2a 및 2b: 키메라 공자극 수용체(CCR) 디자인.
도 2a는 전체 길이 천연 TNFR1 수용체(a), 절두된 비-신호전달 세포질 도메인과 함께 천연 TNFR1의 세포외 도메인 및 막횡단 도메인 둘 다를 함유하는 TNF-차단제 수용체(b), 및 4-1BB의 세포질 공자극 신호전달 도메인에 연결된 TNFR1의 세포외 도메인 및 막횡단 도메인을 함유하는 키메라 공자극 수용체(c)를 비교한다.
도 2b는 전체 길이 천연 Fas 수용체(a), 절두된 비-신호전달 세포질 도메인과 함께 천연 Fas의 세포외 도메인 및 막횡단 도메인 둘 다를 함유하는 Fas-TRUNC 수용체(b), 및 4-1BB 또는 BAFFR의 세포질 공자극 신호전달 도메인에 연결된 Fas의 세포외 도메인 및 막횡단 도메인을 함유하는 Fas-키메라(c)를 비교한다.
도 3: TNFR1-4-1BB는 NFκB 프로모터의 발현을 향상시킨다.
3x NFκB 인핸서 요소의 조절 하에서 루시퍼라제(luciferase) 리포터 유전자를 사용하여 TNFR 융합 수용체 신호전달 활성을 평가하였다. 도 2a의 TNFR 융합 수용체를 NFκB-루시퍼라제 리포터 플라스미드와 함께 HEK293TM 세포주 내로 따로 도입하였다. TNFR 융합 수용체에 대한 리간드인 증가하는 농도의 TNFα 하에서 루시퍼라제 활성을 측정하였다. 천연 TNFR1 수용체를 보유하는 HEK293TM 세포는 NFκB 리포터 활성의 용량 의존적 증가를 나타내었다. TNF-차단제 수용체는 증가하는 TNFα 리간드에 대한 반응으로 제거된 리포터 활성을 나타내었다. TNFR1-4-1BB CCR은 모든 농도의 TNFα에서 향상된 NFκB 리포터 활성을 나타내었다.
도 4: CCR 자극 시 IκBα의 시간 의존적 분해.
IκBα의 분해는 활성 NFκB의 방출을 유발한다. 신호전달 도메인을 함유하지 않는 TNFR1-4-1BB CCR 또는 TNF-차단제 수용체를 발현하도록 Jurkat 세포주를 형질도입하였다(도 2a 참조). Jurkat 세포를 0분, 5분, 15분, 30분 및 45분 동안 20 ng/㎖ TNFα로 자극하였다. CCR을 갖도록 조작된 Jurkat 세포는 조작되지 않은 야생형 세포에 비해 IκBα의 증가된 분해를 가진다. TNF-차단제 수용체는 평가된 모든 시점들에서 IκBα 분해를 제거하였다(n=4).
도 5: p38의 시간 의존적 인산화.
p38 MAPK의 인산화 및 활성화는 p38 유전자의 상향조절을 유발한다. 신호전달 도메인을 함유하지 않는 CCR 또는 TNF-차단제 수용체를 발현하도록 Jurkat 세포주를 형질도입하였다(도 2a 참조). Jurkat 세포를 0분, 5분, 15분, 30분 및 45분 동안 20 ng/㎖ TNFα로 자극하였다. CCR을 갖도록 조작된 Jurkat 세포는 조작되지 않은 야생형 세포에 비해 p38의 증가된 인산화를 가진다. TNF-차단제 수용체는 평가된 모든 시점들에서 p38 인산화를 제거하였거나 방해하였다(n=1).
도 6a 및 6b: 일차 인간 T 세포 서브세트에서 TNFR1-4-1BB CCR의 표면 발현.
항-CD3/항-CD28 비드로 자극하고 IL2 및 IL7에서 생장시킨 인간 PBMC를 TNFR1-4-1BB CCR로 조작하였다. 배양 14일째 날, 조작된 세포를 CCR에 대해 염색하고 유세포분석으로 평가하였다. 도 6a는 CD4+ T 세포를 표시하고; 도 6b는 CD8+ T 세포를 표시한다.
도 7: 시험관내에서 TNFR1-4-1BB CCR 형질도입된 일차 인간 T 세포의 생장률.
항-CD3/항-CD28 비드로 자극하고 IL2 및 IL7에서 생장시킨 인간 PBMC를 TNFR1-4-1BB CCR로 조작하였다. 14일 배양 기간에 걸쳐 생존 세포 총수를 기록하였다.
도 8a 및 8b: 사이토카인 회수 후 TNFR1-4-1BB CCR을 발현하는 T 세포의 생존.
도 8a는 보충된 성장 인자 없이 항-CD3만으로 자극시킨 T 세포를 보여준다. 도 8b는 보충된 사이토카인 없이 TNFα만으로 자극시킨 T 세포를 보여준다.
도 9: TNFR1-4-1BB CCR 자극은 사이토카인 프로파일을 변경시킨다.
배양 14일째 날, TNFR1-4-1BB CCR을 갖도록 조작된 T 세포를 항-CD3 자극 후 사이토카인 생성에 대해 시험하였다. 세포를 골지 수송 억제제(GolgiPlug®)의 존재 하에서 4시간 동안 항-CD3 코팅된 플레이트에서 인큐베이션하였다. 세포를 염색하고 세포내 사이토카인 생성에 대해 유세포분석으로 평가하였다.
도 10: 2A 발현 시스템을 갖도록 조작된 TAC + CCR T 세포의 표현형.
0일째 날, T 세포를 항-CD3/항-CD28 비드로 활성화시켰다. 1일 후, 골수종 단백질인 BCMA에 대해 유도된 TAC 수용체를 보유하는 렌티바이러스, 또는 피코르나바이러스 2A 서열에 의해 분리된 TNFR1-4-1BB CCR과 함께 동일한 TAC 수용체(TAC+CCR)를 코딩하는 렌티바이러스를 사용하여 T 세포를 형질도입하였다. 2일마다 새로운 배지를 첨가하면서 IL2 및 IL7을 가진 배양물에서 세포를 유지하였다. 배양 14일째 날, 유세포분석에 의한 표면 TAC 및 CCR의 염색 및 검출을 수행하였다. 2A 시스템에서 TAC의 표면 단백질 수준은 단일 발현 시스템보다 더 낮았다. 2A 조작된 T 세포의 표면에서 TNFR1-4-1BB CCR 단백질을 검출하였다.
도 11: TAC+CCR T 세포는 BCMA+ 종양 세포 표적의 용해를 나타낸다.
T 세포는 시험관내 종양 표적의 용해를 매개하였다. T 세포를, 24시간 동안 루시퍼라제 효소를 발현하는 KMS11 종양 표적과 함께 공인큐베이션하였다. 루시퍼라제 활성을 종양 세포 용해의 척도로서 사용하였다. UT(조작되지 않은) T 세포는 KMS11 종양 표적의 검출 불가능한 종양 용해를 나타내었다. T 세포는 도 10에 기재된 바와 같이 TAC 또는 TAC+CCR을 갖도록 조작되었다. 조작된 T 세포 집단 둘 다가 24시간 어세이에 걸쳐 종양 표적의 유사한 용해를 나타내었다.
도 12: CCR 조작된 TAC T 세포는 자극 시 더 적은 염증성 사이토카인을 생성한다.
조작된 T 세포를 골지 수송 억제제(Golgi Plug)의 존재 하에서 KMS11 종양 표적과 함께 공인큐베이션하였다. 4시간 공인큐베이션 후, 세포를 세포내 사이토카인 생성에 대해 염색하였다. 사이토카인 IL2, TNFα 및 IFNγ를 평가하였다. TAC T 세포는 그의 동족 리간드의 인식 후 TNFα 및 IFNγ를 용이하게 생성한다. TNFR1-4-1BB CCR을 공발현하는 TAC T 세포는 더 적은 사이토카인 분비 세포를 제공하는 듯하다.
도 13a 및 13b: TAC + CCR 조작된 T 세포의 증식 및 농후화.
도 13a는 증식하는 조작된 T 세포의 희석 피크를 도시하는 CellTrace™ 바이올렛(Violet) 히스토그램을 보여준다. 도 13b는 CD4 T 세포 및 CD8 T 세포의 분열 지수 및 증식 지수의 정량을 보여준다. 데이터 점은 페어링된 증식 어세이를 표시한다. 분열 지수는 분열하는 세포에 의해 형성된 T 세포의 평균 수를 표시한다. 증식 어세이는 초기 세포에 의해 형성된 T 세포의 평균 수를 표시한다. BCMA 특이적 TAC 및 TNFR1-4-1BB CCR을 발현하도록 조작된 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포(TAC + COSTIM)는 BCMA 특이적 TAC만을 발현하는 T 세포(TAC)에 비해 더 높은 분열 지수 값을 나타내었다. BCMA 특이적 TAC 및 TNFR1-4-1BB CCR을 발현하도록 조작된 CD4+ T 세포(TAC + COSTIM)는 BCMA 특이적 TAC만을 발현하는 CD4+ T 세포(TAC)보다 더 높은 증식 지수 값을 나타내었다(*p<0.05).
도 14: TNFRSF 스크린을 위한 항-CD3 자극된 증식
항-CD3/항-CD28 비드로 자극하고 IL2 및 IL7에서 생장시킨 PBMC를 TNFR1-4-1BB CCR, TNF-차단제 및 NGFR(형질도입 대조군)로 조작하였다. 배양 14일째 날, 조작된 세포를 5일 동안 플레이트 결합된 항-CD3 자극 후 증식에 대해 평가하였다. 세포를 CellTrace™ 바이올렛으로 표지부착시켰고, 생성 피크를 유세포분석으로 평가하였다. 플레이트에 결합된 항-CD3은 모든 군들에서 CD4 T 세포 및 CD8 T 세포 둘 다의 증식을 자극하였다. 조작된 TNFR1-4-1BB CCR을 갖도록 조작된 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포는 NGFR 또는 TNF-차단제 조작된 세포보다 더 잘 증식하였다.
도 15: CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 TNFRSF CCR 조작 효능.
항-CD3/항-CD28 비드로 자극하고 IL2 및 IL7에서 생장시킨 PBMC를 Y 축에 나열된 TNFRSF CCR 구축물로 조작하였다. 배양 14일째 날, 벌크 세포 집단을 조작 효율에 대해 평가하였다. 세포를 유전자 카세트에 포함된 형질도입 마커인 NGFR에 대해 염색하였다. 세포를 림프구/단일 세포/CD4+ 또는 CD8+/NGFR+에 대해 게이팅하였다(N=1 내지 5).
도 16: CCR의 평균 형광 강도.
항-CD3/항-CD28 비드로 자극하고 IL2 및 IL7에서 생장시킨 PBMC를 Y 축에 나열된 TNFRSF CCR 스크린 구축물로 조작하였다. 배양 14일째 날, 조작된 세포를 CCR 표면 발현에 대해 평가하였다. 세포를 CCR의 세포외 부분(TNFR1)에 대해 염색하였다. 집단 게이팅된 림프구/단일 세포/CD4+ 또는 CD8+/NGFR+에 대한 CCR MFI를 계산하였다. CCR MFI는 실험간 배치(batch) 효과를 보정하기 위해 원래의 TNFR1-4-1BB CCR(OG4-1BB) MFI로 정규화된 상태로 보고된다(N=1 내지 5).
도 17: CCR T 세포의 생장.
항-CD3/항-CD28 비드로 자극하고 IL2 및 IL7에서 생장시킨 PBMC를 Y 축에 나열된 TNFRSF CCR 스크린 구축물로 조작하였다. 이틀마다 새로운 배지 및 사이토카인을 배양물에 공급하였다. 배양 14일째 날, 벌크 세포 집단에 대해 생존 세포 총수를 기록하였다. 배양을 105개의 PBMC로 시작하였다. NGFR-형질도입된 대조군은 붉은 색으로 표시되어 있다(N=1 내지 5).
도 18: CD4 CCR T 세포 증식
항-CD3/항-CD28 비드로 자극하고 IL2 및 IL7에서 생장시킨 PBMC를 Y 축에 나열된 TNFRSF CCR 스크린 구축물로 조작하였다. 배양 14일째 날, 조작된 세포를 5일 동안 플레이트 결합된 항-CD3으로 자극한 후 증식에 대해 평가하였다. 세포를 CellTrace™ 바이올렛으로 표지부착시켰고, 생성 피크를 유세포분석으로 평가하였다. 증식을 FCS Express® 증식 모델링으로 정량하였고 증식 지수로 표시한다. NGFR 형질도입 마커만을 갖도록 조작된 대조군 세포를 식별한다(붉은 선). 세포 집단을 생존 세포/림프구/단일 세포/CD4+/NGFR+에 대해 게이팅하였다. NGFR-형질도입된 대조군은 붉은 색으로 표시되어 있다.
도 19: CD8 CCR T 세포 증식 스크린
항-CD3/항-CD28 비드로 자극하고 IL2 및 IL7에서 생장시킨 PBMC를 Y 축에 나열된 TNFRSF CCR 스크린 구축물로 조작하였다. 배양 14일째 날, 조작된 세포를 5일 동안 플레이트 결합된 항-CD3으로 자극한 후 증식에 대해 평가하였다. 세포를 CellTrace™ 바이올렛으로 표지부착시켰고, 생성 피크를 유세포분석으로 평가하였다. 증식을 FCS Express® 증식 모델링으로 정량하였고 증식 지수로 표시한다. NGFR 형질도입 마커만을 갖도록 조작된 대조군 세포를 식별한다(붉은 선). 세포 집단을 생존 세포/림프구/단일 세포/CD8+/NGFR+에 대해 게이팅하였다. NGFR-형질도입된 대조군은 붉은 색으로 표시되어 있다.
도 20: CCR 스크린 구축물에 대한 클러스터링 중심의 상관관계 히트맵(Heatmap).
TNFRSF CCR 조작된 T 세포의 표현형 및 기능 데이터를 주성분 분석(PCA) 및 K-평균 클러스터링으로 분석하였다. 클러스터링 중심의 상관관계 히트맵은 유사한 속성을 가진 CCR을 함께 분류한다. 상이한 막횡단 도메인 및 신호전달 도메인은 계통도에서 분류를 나타내기 위해 상이한 색상으로서 표시되어 있다. 분석에서 확인된 군은 추가 연구에 중요한 CCR을 강조하는 데 기여한다.
도 21a 및 21b: CCR T 세포의 증식
항-CD3/항-CD28 비드로 자극하고 IL2 및 IL7에서 생장시킨 PBMC를 TNFR1-4-1BB, TNFR1-BAFFR, TNF-차단제 또는 NGFR(형질도입 대조군)로 조작하였다. 배양 14일째 날, 조작된 세포를 5일 동안 플레이트 결합된 항-CD3으로 자극한 후 증식에 대해 평가하였다. 세포를 CellTrace™ 바이올렛으로 표지부착시켰고, 생성 피크를 유세포분석으로 평가하였다. 증식을 FCS Express® 증식 모델링으로 정량하였고 증식 지수로 표시한다. 표시된 값은 기증자 내에서 NGFR(형질도입 대조군)로 정규화된다. 모든 조건들에서, 플레이트 결합된 항-CD3 자극은 CD4 T 세포 서브세트 및 CD8 T 세포 서브세트 둘 다에서 증식을 야기하였다. 도 21a는 TNFR-BAFFR 및 TNFR1-4-1BB CCR을 갖도록 조작된 CD4 T 세포가 5일에 걸쳐 NGFR 또는 TNF-차단제 조작된 세포보다 더 잘 증식하였음을 보여준다. 도 21b는 TNFR-BAFFR 및 TNFR1-4-1BB CCR을 갖도록 조작된 CD8 T 세포가 5일에 걸쳐 NGFR 또는 TNF-차단제 조작된 세포보다 더 잘 증식하였음을 보여준다(*=p<0.05).
도 22a 및 22b: CCR 조작된 T 세포의 세포내 사이토카인 생성
배양 14일째 날, CCR 수용체를 갖도록 조작된 T 세포를 항-CD3 자극 후 사이토카인 생성에 대해 시험하였다. 세포를 골지 수송 억제제(GolgiPlug®)의 존재 하에서 4시간 동안 항-CD3 코팅된 플레이트에서 인큐베이션하였다. 세포를 염색하고 세포내 사이토카인 생성에 대해 유세포분석으로 평가하였다. 도 22a는 자극 시 높은 퍼센트의 T 세포가 IFNγ를 분비함을 보여준다. 4-1BB/BAFFR CCR 또는 TNF-차단제를 갖도록 조작된 T 세포는 NGFR 형질도입된 대조군에 비해 IFNγ 생성을 변경시키지 않았다. 도 22b는 항-CD3 자극 시 높은 퍼센트의 531(NGFR 형질도입된 대조군) 조작된 T 세포가 TNFα를 생성함을 보여준다. TNF-차단제, BAFFR 또는 4-1BB CCR을 갖도록 조작된 세포는 CD4+ T 세포 서브세트 및 CD8+ T 세포 서브세트 둘 다에서 자극 후 TNFα를 발현하는 T 세포를 감소된 양으로 가진다.
도 23a 내지 23c: TNFR 융합 구축물
PCR 및 pCCL 벡터 내로의 라이게이션을 위한 TNFR 융합 구축물의 대표적인 도표. 도 23a는 TNFR 융합체의 특징규명에 있어서 대조군 수용체로서 사용하기 위해 전체 길이 TNFR1 천연 수용체를 클로닝하였음을 보여준다. 도 23b는 TNFR1 수용체의 세포외 도메인 및 막횡단 도메인 둘 다를 4-1BB의 세포내 신호전달 도메인과 융합시켜 공자극 TNFR1-4-1BB CCR 수용체를 생성함으로써 CCR 수용체를 클로닝하였음을 보여준다. 도 23c는 우성 음성 수용체로서 사용하기 위해 세포질 신호전달 도메인을 제거하도록 천연 TNFR1 수용체를 절두하였고 TNF-차단제 수용체로서 명명하였음을 보여준다.
도 24: Fas-키메라 T 세포에서의 조작 효율
도 2b에 기재된 바와 같이 절두된 Fas(FasR-TRUNC)를 코딩하는 렌티바이러스, 또는 Fas의 세포외 도메인 및 막횡단 도메인과 4-1BB 또는 BAFF-R의 세포질 도메인을 포함하는 Fas-키메라(각각 Fas-41BB 및 Fas-BAFFR)를 코딩하는 렌티바이러스를 사용하여, 항-CD3/항-CD28 비드에 의해 활성화된 인간 PBMC를 형질도입하였다. 대조군으로서, NGFR을 코딩하는 렌티바이러스를 사용하여 PBMC를 형질도입하였다. 이틀마다 새로운 배지를 첨가하면서 세포를 IL2/IL7에서 생장시켰다. 배양 14일째 날, 세포를 수거하고 유세포분석을 통해 형질도입 효율에 대해 염색하였다. 도표의 X 축은 명명된 수용체를 발현하도록 조작된 T 세포를 도시한다(n=3, 독립적인 실험).
도 25a 및 25b: Fas-키메라 조작된 T 세포의 표면 발현.
도 2b에 기재된 바와 같이 절두된 Fas(FasR-TRUNC)를 코딩하는 렌티바이러스, 또는 Fas의 세포외 도메인 및 막횡단 도메인과 4-1BB 또는 BAFF-R의 세포질 도메인을 포함하는 Fas-키메라(각각 Fas-41BB 및 Fas-BAFFR)를 코딩하는 렌티바이러스를 사용하여, 항-CD3/항-CD28 비드에 의해 활성화된 인간 PBMC를 형질도입하였다. 대조군으로서, NGFR을 코딩하는 렌티바이러스를 사용하여 PBMC를 형질도입하였다. 이틀마다 새로운 배지를 첨가하면서 세포를 IL2/IL7에서 생장시켰다. 배양 14일째 날, 세포를 수거하고 유세포분석을 통해 Fas에 대해 염색하였다. 도 25a: 기준 발현을 초과하여 Fas를 표시하는 % NGFR 양성 세포로서 도시된, Fas-키메라 조작된 T 세포에서의 Fas 및 NGFR 발현의 점 도표. 도 25b: 조작된 T 세포에서의 Fas 발현(MFI)의 막대 도표. NGFR 초과의 Fas 발현은 변형된 Fas 수용체의 간접적 척도이다. X 축은 명명된 수용체를 발현하도록 조작된 T 세포를 도시한다((n=3), 독립적인 실험).
도 26: 초기 증폭 동안 Fas-키메라 T 세포의 생장.
도 2b에 기재된 바와 같이 절두된 Fas(FasR-TRUNC)를 코딩하는 렌티바이러스, 또는 Fas의 세포외 도메인 및 막횡단 도메인과 4-1BB 또는 BAFF-R의 세포질 도메인을 포함하는 Fas-키메라(각각 Fas-41BB 및 Fas-BAFFR)를 코딩하는 렌티바이러스를 사용하여, 항-CD3/항-CD28 비드에 의해 활성화된 인간 PBMC를 형질도입하였다. 대조군으로서, NGFR을 코딩하는 렌티바이러스를 사용하여 PBMC를 형질도입하였다. 이틀마다 새로운 배지로 보충된 IL2/IL7에서 세포를 생장시켰다. 배양 14일째 날, 세포 증폭을 생존 세포 총수로서 측정하였다. X 축은 명명된 수용체를 발현하도록 조작된 T 세포를 도시한다((n=3), 독립적인 실험).
도 27: Fas 조작된 T 세포의 증식.
항-CD3/항-CD28 비드에 의해 활성화된 인간 PBMC를, 변형된 Fas 수용체(Fas-TRUNC, Fas-4-1BB, Fas-BAFFR)를 발현하거나 수용체를 발현하지 않도록(NGFR) 조작하였다. 조작된 T 세포를 CellTrace™ 바이올렛으로 표지부착시키고 항-CD3으로 자극하고 4일 동안 배양하였다. 증식을 FCS Express® 증식 모델링으로 정량하였고 조작되지 않은 세포로 정규화된 증식 지수로 표시한다. X 축은 CD8(도 27a) 또는 CD4(도 27b)를 발현하도록 조작된 자극된 T 세포를 도시한다(n=3, 독립적인 실험).
도 28: FasL의 존재 하에서 Fas-키메라 T 세포의 생존율
항-CD3/항-CD28 비드에 의해 활성화된 인간 PBMC를, 변형된 Fas 수용체(Fas-TRUNC, Fas-4-1BB, Fas-BAFFR)를 발현하거나 수용체를 발현하지 않도록(NGFR) 조작하였다. 조작된 T 세포를 증가하는 농도의 FasL의 존재 하에서 배양하였다. 48시간 후 AlamarBlue로 생존율을 측정하였다(n=3 반복실험, 3회 독립적인 실험을 대표하는 도면).
도 29: 증식하는 Fas 조작된 T 세포의 AlamarBlue 어세이.
항-CD3/항-CD28 비드에 의해 활성화된 인간 PBMC를, 변형된 Fas 수용체(Fas-TRUNC, Fas-4-1BB, Fas-BAFFR)를 발현하거나 수용체를 발현하지 않도록(NGFR) 조작하였다. 조작된 T 세포를 CellTrace™ 바이올렛으로 표지부착시키고 항-CD3으로 자극하고 증가하는 농도의 FasL(X 축)의 존재 또는 부재 하에서 4일 동안 배양하였다. 증식을 AlamarBlue로 측정하였다. 범례: 명명된 수용체를 갖도록 조작된 T 세포. (n=3 반복실험, 3회 독립적인 실험을 대표함).
정의
본원에서 사용된 용어 "세포"는 단일 세포뿐만 아니라 복수의 세포들도 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "T 세포"는 세포 매개 면역에서 중추적인 역할을 하는 림프구의 한 유형을 지칭한다. T 림프구로서도 지칭되는 T 세포는 세포 표면 상에서의 T 세포 수용체(TCR)의 존재에 의해 B 세포 및 천연 킬러 세포와 같은 다른 림프구와 구별될 수 있다. T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 기억 T 세포, 조절 T 세포 및 천연 킬러 T 세포를 포함하나 이들로 제한되지 않는, 상이한 기능을 가진 T 세포들의 여러 서브세트들이 있다. 일부 실시양태에서, T 세포는 조작된 T 세포이다.
용어 "조작된 TCR" 또는 "조작된 T 세포 수용체"는 그의 천연 생성 형태로부터 변형된 임의의 TCR을 의미한다. 조작된 TCR은 TCR이 특정 항원(예를 들면, 네오항원)을 인식할 수 있게 하는, 알파 및/또는 베타 쇄 또는 감마 및/또는 델타 쇄의 변형(상기 언급된 쇄들 중 임의의 쇄의 대체를 포함함)을 가질 수 있다. 조작된 TCR은 항원 인식 도메인(예를 들면, 항체, scFv, DARPin)의 추가를 포함하는, 임의의 CD3 서브유닛(예를 들면, TRuC 수용체의 경우 CD3ε)의 변형을 가질 수 있다. 조작된 TCR은 알파 및/또는 베타 쇄 또는 감마 및/또는 델타 쇄의 막횡단 도메인에 연결된 항원 인식 도메인(예를 들면, 항체, scFv, DARPin)을 가질 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "폴리뉴클레오타이드" 및/또는 "핵산 서열" 및/또는 "핵산"은 염기, 당 및 당간 결합(골격)으로 구성된 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드 단량체의 서열을 지칭한다. 상기 용어는 비천연 생성 단량체 또는 이의 일부를 포함하는 변형 또는 치환된 서열도 포함한다. 본원의 핵산 서열은 데옥시리보핵산 서열(DNA) 또는 리보핵산 서열(RNA)일 수 있고 아데닌, 구아닌, 사이토신, 타이미딘 및 우라실을 포함하는 천연 생성 염기를 포함할 수 있다. 서열은 변형된 염기도 함유할 수 있다. 이러한 변형된 염기의 예는 아자 및 데아자 아데닌, 구아닌, 사이토신, 타이미딘 및 우라실; 및 잔틴 및 하이포잔틴을 포함한다. 본 개시내용의 핵산은 생물학적 유기체로부터 단리될 수 있거나, 실험실 유전자 재조합 방법에 의해 형성될 수 있거나, 핵산을 생성하기 위한 화학적 합성 또는 다른 공지된 프로토콜에 의해 수득될 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "단리된 폴리뉴클레오타이드" 또는 "단리된 핵산 서열"은 재조합 DNA 기법에 의해 생성될 때 세포 물질 또는 배양 배지, 또는 화학적으로 합성될 때 화학적 전구체 또는 다른 화학물질을 실질적으로 결여하는 핵산을 지칭한다. 단리된 핵산은 이 핵산의 기원이 되는 핵산을 천연적으로 플랭킹하는 서열(즉, 핵산의 5' 및 3' 말단에 위치된 서열)도 실질적으로 결여한다. 용어 "핵산"은 DNA 및 RNA를 포함하기 위한 것이고 이중 가닥 또는 단일 가닥일 수 있고, 센스 또는 안티센스 가닥을 나타낸다. 추가로, 용어 "핵산"은 상보적 핵산 서열을 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "재조합 핵산" 또는 "조작된 핵산"은 생물학적 유기체에서 발견되지 않는 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 예를 들면, 재조합 핵산은 자연에서 발견되지 않을 서열을 생성하기 위한 실험실 유전자 재조합(예컨대, 분자 클로닝) 방법에 의해 형성될 수 있다. 재조합 핵산은 핵산을 생성하기 위한 화학적 합성 또는 다른 공지된 프로토콜에 의해 생성될 수도 있다. 달리 표시되어 있지 않은 한, 이 단락 및 다른 단락에 기재된 정의 및 실시양태는 당분야에서 숙련된 자에 의해 이해될 바와 같이 이들이 적합한 것으로 본원에 기재된 본원의 모든 실시양태들 및 양태들에 적용될 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "폴리펩타이드" 또는 "단백질"은 핵산에 의해 코딩된 아미노산들에 상응하는 아미노산들의 쇄를 기술한다. 이 개시내용의 폴리펩타이드 또는 단백질은 통상적으로 2개 내지 약 30개 아미노산의 아미노산 쇄를 기술하는 펩타이드일 수 있다. 본원에서 사용된 용어 단백질은 30개 초과의 아미노산을 가진 아미노산 쇄도 기술하고 단백질의 단편 또는 도메인, 또는 전체 길이 단백질일 수 있다. 나아가, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 단백질은 선형 아미노산 쇄를 지칭할 수 있거나, 기능적 단백질로 프로세싱되고 폴딩된 아미노산 쇄를 지칭할 수 있다. 그러나, 펩타이드와 단백질의 구별과 관련하여 30은 임의 숫자이고, 상기 용어들은 아미노산 쇄에 대해 교환 가능하게 사용될 수 있음을 이해해야 한다. 본 개시내용의 단백질은 천연적으로 생성된 경우 세포로부터의 단백질의 단리 및 정제에 의해 수득될 수 있고/있거나, 효소적(예를 들면, 단백질분해) 절단에 의해 수득될 수 있고/있거나, 본 개시내용의 단백질 또는 단편을 코딩하는 핵산의 발현에 의해 재조합적으로 수득될 수 있다. 본 개시내용의 단백질 및/또는 단편은 단백질 및 단편을 생성하기 위한 화학적 합성 또는 다른 공지된 프로토콜에 의해 수득될 수도 있다.
용어 "단리된 폴리펩타이드"는 재조합 DNA 기법에 의해 생성될 때 세포 물질 또는 배양 배지, 또는 화학적으로 합성될 때 화학적 전구체 또는 다른 화학물질을 실질적으로 결여하는 폴리펩타이드를 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "벡터"는 핵산을 세포의 내부로 전달하는 데 사용될 수 있는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 한 실시양태에서, 벡터는 세포에서 발현될 핵산에 작동 가능하게 연결된 발현 조절 서열(예를 들면, 프로모터)을 포함하는 발현 벡터이다. 당분야에서 공지되어 있는 벡터는 플라스미드, 파지, 코스미드 및 바이러스를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.
용어 "수용자", "개체", "대상체", "숙주" 및 "환자"는 본원에서 교환 가능하게 사용되고 진단, 치료 또는 요법을 원하는 임의의 포유동물 대상체, 특히 인간을 지칭한다. 치료 목적을 위한 "포유동물"은 인간, 가축 및 농장 동물, 및 실험실, 동물원, 스포츠 또는 반려 동물, 예컨대, 개, 말, 고양이, 소, 양, 염소, 돼지, 마우스, 래트, 토끼, 기니 피그, 원숭이 등을 포함하는, 포유동물로서 분류된 임의의 동물을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 포유동물은 인간이다. 이 용어들 중 어느 것도 의료진의 감독을 요구하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료", "치료하는" 등은 효과를 수득하기 위해 작용제를 투여하거나 시술을 수행하는 것을 의미한다. 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다는 관점에서 예방적 효과일 수 있고/있거나, 질환 및/또는 질환의 증상에 대한 부분적 또는 완전한 치유를 달성한다는 관점에서 치료적 효과일 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "치료"는 포유동물, 특히 인간에서 질환 또는 장애(예를 들면, 암)를 치료하는 것을 포함할 수 있고, (a) 질환(예를 들면, 원발성 질환과 관련될 수 있거나 원발성 질환에 의해 야기될 수 있는 질환을 포함함)에 걸리기 쉬울 수 있으나 아직 질환을 가진 것으로서 진단되지 않은 대상체에서 질환 또는 질환의 증상이 발생하는 것을 예방하는 것; (b) 질환을 억제하는 것, 즉 그의 발생을 정지시키는 것; 및 (c) 질환을 경감시키는 것, 즉 질환의 퇴행을 야기하는 것을 포함한다. 치료는 경감; 관해; 증상의 감소; 또는 환자가 질환 상태를 더 잘 견딜 수 있게 만드는 것; 퇴행 또는 감퇴 속도의 늦춤; 또는 퇴행의 최종 점을 덜 쇠약하게 만드는 것과 같은 임의의 객관적 또는 주관적 파라미터를 비롯한, 암의 치료 또는 호전 또는 예방에 있어서 성공의 임의의 징후를 지칭할 수 있다. 증상의 치료 또는 호전은 의사에 의한 검사의 결과를 비롯한 하나 이상의 객관적 또는 주관적 파라미터에 근거할 수 있다. 따라서, 용어 "치료"는 질환(예를 들면, 암)과 관련된 증상 또는 상태의 발생을 예방하거나, 지연시키거나, 완화시키거나, 정지시키거나 억제하기 위한 본 발명의 화합물 또는 작용제의 투여를 포함한다. 용어 "치료 효과"는 대상체에서 질환, 질환의 증상 또는 질환의 부작용의 감소, 제거 또는 예방을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 문맥이 달리 명시하지 않은 한, 단수형 용어는 복수형을 포함한다. 따라서, 예를 들면, "항체"의 언급은 복수의 항체들을 포함하고, 일부 실시양태에서 "항체"의 언급은 다수의 항체들을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 문맥이 달리 명시하지 않은 한, 모든 수치 값 또는 수치 범위는 이러한 범위 내에 있거나 이러한 범위를 포함하는 전체 정수, 및 범위 내에 있거나 범위를 포함하는 값 또는 정수의 분수를 포함한다. 따라서, 예를 들면, 90% 내지 100% 범위의 언급은 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 95%, 96%, 97% 등뿐만 아니라, 91.1%, 91.2%, 91.3%, 91.4%, 91.5% 등, 92.1%, 92.2%, 92.3%, 92.4%, 92.5% 등도 포함한다. 또 다른 예에서, 1배 내지 5,000배 범위의 언급은 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 11배, 12배, 13배, 14배, 15배, 16배, 17배, 18배, 19배, 20배 등뿐만 아니라, 1.1배, 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배 등, 2.1배, 2.2배, 2.3배, 2.4배, 2.5배 등도 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "약" 숫자는 그 숫자를 포함하고 그 숫자보다 10% 더 낮은 숫자부터 그 숫자보다 10% 더 높은 숫자에 이르는 범위를 지칭한다. "약" 범위는 그 범위의 하한보다 10% 더 낮은 하한부터 그 범위의 상한보다 10% 더 높은 상한까지 걸쳐 있는 범위를 지칭한다.
"퍼센트(%) 동일성"은 2개의 서열들(뉴클레오타이드 또는 아미노산)이 정렬 시 동일한 위치에서 동일한 잔기를 갖는 정도를 의미한다. 예를 들면, "아미노산 서열은 서열번호 Y와 X% 동일하다"는 이 아미노산 서열이 서열번호 Y와 % 동일함을 의미하고 이 아미노산 서열에서 X%의 잔기가 서열번호 Y로 개시된 서열의 잔기와 동일한 것으로서 상술된다. 일반적으로, 이러한 계산을 위해 컴퓨터 프로그램이 이용된다. 서열의 쌍을 비교하고 정렬하는 예시적인 프로그램은 ALIGN(Myers and Miller, 1988), FASTA(Pearson and Lipman, 1988; Pearson, 1990) 및 gapped BLAST(Altschul et al., 1997), BLASTP, BLASTN, 또는 GCG(Devereux et al., 1984)를 포함한다.
본원의 범위를 이해함에 있어서, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "포함하는"과 이의 파생어는 언급된 특징, 요소, 성분, 군, 정수 및/또는 단계의 존재를 특정하나, 다른 언급되지 않은 특징, 요소, 성분, 군, 정수 및/또는 단계의 존재를 배제하지 않는 개방형 용어이다. 상기 설명은 유사한 의미를 가진 단어, 예컨대, 용어 "비롯한", "가진" 및 이들의 파생어에도 적용된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "구성된" 및 이의 파생어는 언급된 특징, 요소, 성분, 군, 정수 및/또는 단계의 존재를 특정하나, 다른 언급되지 않은 특징, 요소, 성분, 군, 정수 및/또는 단계의 존재를 배제하는 폐쇄형 용어이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "본질적으로 구성된"은 언급된 특징, 요소, 성분, 군, 정수 및/또는 단계의 존재뿐만 아니라, 특징, 요소, 성분, 군, 정수 및/또는 단계의 기본 특성(들) 및 신규 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 특징, 요소, 성분, 군, 정수 및/또는 단계의 존재도 특정하기 위한 것이다.
본원에서 사용된 정도의 용어, 예컨대, "실질적으로", "약" 및 "대략"은 최종 결과가 유의미하게 변화되지 않도록 수식된 용어의 합리적인 편차 양을 의미한다. 이 정도의 용어들은 이 편차가 그에 의해 수식된 단어의 의미를 부정하지 않을 경우 수식된 용어의 적어도 ±5%의 편차를 포함하는 것으로서 해석되어야 한다.
본원에서 사용된 용어 "및/또는"은 나열된 항목들이 개별적으로 또는 조합되어 존재하거나 사용됨을 의미한다. 사실상, 이 용어는 나열된 항목들 중 "적어도 하나" 또는 "하나 이상"이 사용되거나 존재함을 의미한다.
키메라 공자극 수용체(CCR)
일부 실시양태에서, 본원은 (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF)의 구성원의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산을 개시한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 TNFRSF의 상이한 구성원으로부터 유래한다.
일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFRSF의 구성원의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 TNFRSF의 상이한 구성원으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 사멸 도메인을 가진 TNFRSF 구성원의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1, TNFR2, Fas, DR4, DR5, DR3, DR6, EDAR, XEDAR, TROY 또는 NGFR의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR2의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 Fas의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 DR4의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 DR5의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 DR3의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 DR6의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 EDAR의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 XEDAR의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TROY의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 NGFR의 세포외 도메인을 코딩한다.
종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF)는 세포외 시스테인 풍부 도메인을 통해 종양 괴사 인자(TNF)에 결합하는 능력을 특징으로 하는 사이토카인 수용체의 단백질 수퍼패밀리이다. TNFR1, TNFR2, Fas, DR4, DR5, DR3, DR6, EDAR, XEDAR, TROY 또는 NGFR을 포함하는 TNFR 수퍼패밀리의 27개 구성원들이 있다.
종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 1A(TNFRSF1A) 및 CD120a로서도 공지되어 있는 종양 괴사 인자 수용체 1(TNFR1)은 종양 괴사 인자 알파(TNFα)에 결합하는 막 결합된 수용체이다. TNFR1은 전사 인자 NF-κB를 활성화시키고 아폽토시스를 매개하고 염증의 조절제로서 작용한다.
종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 1B(TNFRSF1B) 및 CD120b로서도 공지되어 있는 종양 괴사 인자 수용체 2(TNFR2)는 종양 괴사 인자 알파(TNFα)에 결합하는 막 결합된 수용체이다.
Fas, FasR, 아폽토시스 항원 1(APO-1 또는 APT), 분화의 클러스터 95(CD95) 또는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 6(TNFRSF6)으로서도 공지되어 있는 Fas 수용체는 인간에서 FAS 유전자에 의해 코딩된 단백질이다. 단백질의 7개 동형체(isoform)로 번역되는 다수의 Fas 스플라이스 변이체들이 확인되었다. 아폽토시스 유도 Fas 수용체는 동형체 1로 불리고 1형 막횡단 단백질이다. 다른 동형체들 중 대다수는 통상적으로 질환의 상태와 관련된 희귀 일배체형이다. Fas의 임의의 적합한 동형체가 본원에 개시된 실시양태와 함께 사용될 것으로 예상된다.
TRAIL 수용체 1(TRAILR1) 및 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 10A(TNFRSF10A)로서도 공지되어 있는 사멸 도메인 4(DR4)는 TRAIL에 결합하고 아폽토시스를 매개하는 TNF 수용체 수퍼패밀리의 세포 표면 수용체이다.
TRAIL 수용체 2(TRAILR2) 및 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 10B(TNFRSF10B)로서도 공지되어 있는 사멸 도메인 5(DR5)는 TRAIL에 결합하고 아폽토시스를 매개하는 TNF 수용체 수퍼패밀리의 세포 표면 수용체이다.
종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 25(TNFRSF25)로서도 공지되어 있는 사멸 도메인 3(DR3)은 아폽토시스 신호전달 및 분화를 매개하는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 세포 표면 수용체이다. 이의 유일하게 알려진 TNFSF 리간드는 TNF 유사 단백질 1A(TL1A)이다.
종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 21(TNFRSF21)로서도 공지되어 있는 사멸 도메인 6(DR6)은 JNK 및 NF-κB 경로를 활성화시키는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 세포 표면 수용체이다.
외배엽 이형성증 수용체(EDAR)는 TNF 수용체 수퍼패밀리의 구성원이다. 이것은 외배엽 분화의 과정에서 핵심 역할을 한다.
엑토디스플라신 A2 수용체(XEDAR; 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 27)는 인간에서 EDA2R 유전자에 의해 코딩된 단백질이다. EDA-A1 및 EDA-A2는 무한성 외배엽 이형성증(EDA) 유전자에 의해 코딩된 엑토디스플라신의 2개 동형체이다.
TROY(종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 19, TNFRSF19)는 TNF 수용체 수퍼패밀리의 구성원이다. 이 수용체는 배아 발생 동안 고도로 발현된다. 이것은 TNF 수용체 관련 인자(TRAF) 패밀리 구성원과 상호작용하고 세포에서 과다발현되었을 때 c-Jun N-말단 키나제(JNK) 신호전달 경로를 활성화시키는 것으로 밝혀졌다. 이 수용체는 캐스파제 독립적 기작으로 아폽토시스를 유도할 수 있고, 배아 발생에서 필수적인 역할을 하는 것으로 생각된다.
NGFR(저친화성 신경 성장 인자 수용체; 신경 성장 인자 수용체; TNFR 수퍼패밀리 구성원 16); LNGFR; p75 뉴로트로핀(neurotrophin) 수용체)은 종양 괴사 인자 수용체(TNF 수용체) 수퍼패밀리의 구성원이다. 이것은 생존하고 분화하도록 신경 세포를 자극하는 단백질 성장 인자의 패밀리인 뉴로트로핀의 두 가지 수용체 유형들 중 하나이다.
일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 1에 따른 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 이 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 1에 따른 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 2에 따른 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 이 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 2에 따른 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다.
Figure pct00001
일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 CD28, CD28T, OX-40, 4-1BB/CD137, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, 프로그래밍된 사멸(Programmed Death)-1(PD-1), 유도성 T 세포 공자극제(ICOS), 림프구 기능 관련 항원-1(LFA-1, CD1-CD18), CD247, CD276(B7-H3), LIGHT(TNFSF14), NKG2C, Ig 알파(CD79a), DAP-10, ICAM-1, B7-H3, CDS, ICAM-1, GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM(LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80(KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8알파, CD8베타, IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1(CD226), SLAMF4(CD244, 2B4), CD84, CD96(Tactile), CEACAM1, CRT AM, Ly9(CD229), CD160(BY55), PSGL1, CD100(SEMA4D), CD69, SLAMF6(NTB-A, Ly108), SLAM(SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME(SLAMF8), SELPLG(CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp 또는 CD19a로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩한다.
일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다.
일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 3에 따른 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 이 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 3에 따른 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 4에 따른 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 이 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 4에 따른 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다.
Figure pct00002
일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 TNFR 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 막횡단 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 세포질 공자극 신호전달 도메인과 상이한 분자로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 세포질 공자극 신호전달 도메인과 동일한 분자로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 및 TWEAK로부터 선택된 동일한 공자극 분자로부터 유래한다.
일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 5에 따른 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 이 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 5에 따른 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 6에 따른 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 이 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 6에 따른 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다.
Figure pct00003
단일 분자
일부 실시양태에서, CCR은 단일 분자이다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 임의의 적합한 링커는 본원에 개시된 분자와 함께 사용될 것으로 예상된다. 일부 실시양태에서, 링커는 소분자이다. 일부 실시양태에서, 링커는 펩타이드 링커이다.
일부 실시양태에서, CCR은 서열번호 7에 따른 아미노산 서열을 가진다. 일부 실시양태에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 7에 따른 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, CCR은 서열번호 8에 따른 아미노산 서열을 가진다. 일부 실시양태에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 8에 따른 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, CCR은 서열번호 9에 따른 아미노산 서열을 가진다. 일부 실시양태에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 9에 따른 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, CCR은 서열번호 10에 따른 아미노산 서열을 가진다. 일부 실시양태에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 10에 따른 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 가진 올리고펩타이드를 코딩한다.
Figure pct00004
면역 세포
일부 실시양태에서, 본원은 (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산을 포함하는 면역 세포를 개시한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 TNFRSF의 상이한 구성원으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 사멸 도메인을 가진 TNFRSF 구성원의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1, TNFR2, Fas, DR4, DR5, DR3, DR6, EDAR, XEDAR, TROY 또는 NGFR의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포(예를 들면, 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포, 감마-델타 T 세포)이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 조작된 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 천연 킬러 세포(NK 세포)이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 대식세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 종양 침윤 림프구(TIL)이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 단핵구이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 B 세포이다.
T 세포
일부 실시양태에서, 본원은 (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산을 포함하는 T 세포를 개시한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 TNFRSF의 상이한 구성원으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 사멸 도메인을 가진 TNFRSF 구성원의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1, TNFR2, Fas, DR4, DR5, DR3, DR6, EDAR, XEDAR, TROY 또는 NGFR의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩한다.
일부 실시양태에서, T 세포는 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포 또는 감마-델타 T 세포이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 표적 특이적 리간드를 인식할 수 있는 조작된 T 세포 수용체(TCR) 또는 합성 항원 수용체 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드는 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 일부 실시양태에서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드는 T 세포 항원 커플러(TAC)를 코딩한다.
일부 실시양태에서, CAR은 항원 결합 도메인, 막횡단 도메인 및 세포내 신호전달 도메인(예를 들면, 공자극 도메인 및/또는 일차 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 T 세포 수용체의 알파 또는 베타, CD28, CD3 엡실론, CD3 제타, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 및 CD154로 구성된 군으로부터 선택된 막횡단 도메인이다. 일부 실시양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD28, CD28T, OX-40, 4-1BB/CD137, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, 프로그래밍된 사멸-1(PD-1), 유도성 T 세포 공자극제(ICOS), 림프구 기능 관련 항원-1(LFA-1, CD1-CD18), CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD247, CD276(B7-H3), LIGHT(TNFSF14), NKG2C, Ig 알파(CD79a), DAP-10, Fc 감마 수용체, MHC 클래스 1 분자, TNF 수용체 단백질, 면역글로불린 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), 활성화 NK 세포 수용체, BTLA, Toll 리간드 수용체, ICAM-1, B7-H3, CDS, ICAM-1, GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM(LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80(KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8알파, CD8베타, IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1(CD226), SLAMF4(CD244, 2B4), CD84, CD96(Tactile), CEACAM1, CRT AM, Ly9(CD229), CD160(BY55), PSGL1, CD100(SEMA4D), CD69, SLAMF6(NTB-A, Ly108), SLAM(SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME(SLAMF8), SELPLG(CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp 또는 CD19a로부터 유래한 신호전달 도메인이다.
일부 실시양태에서, TAC는 항원 결합 도메인, TCR 복합체와 관련된 단백질에 결합하는 도메인, 및 세포질 도메인과 막횡단 도메인을 포함하는 T 세포 공수용체 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, TCR 복합체와 관련된 단백질은 CD3이다. 일부 실시양태에서, TAC는 공자극 도메인 및/또는 활성화 도메인을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 세포질 도메인은 CD4 세포질 도메인이고, 막횡단 도메인은 CD4 막횡단 도메인이다. 일부 실시양태에서, TAC는 항원 결합 도메인, CD3 결합 도메인, 및 CD4 세포질 도메인 및 CD4 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3 항원 결합 도메인은 UCHT1로부터 유래한다.
일부 실시양태에서, 조작된 TCR은 T 세포 수용체(TCR) 융합 단백질(TFP)이다. 일부 실시양태에서, TFP는 (a) 세포외 도메인의 적어도 일부; (b) 세포내 신호전달 도메인으로부터의 자극 도메인을 포함하는 세포내 도메인; 및 (c) 항원 결합 도메인(예를 들면, scFv)을 포함하는 적어도 하나의 조작된 CD3 쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 도메인 및 세포내 도메인은 CD3α, CD3β, CD3γ, CD3δ 또는 CD3ε으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 조작된 CD3 쇄는 막횡단 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포외 도메인, 막횡단 도메인 및 세포내 도메인은 CD3ε으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 조작된 CD3 쇄는 TCR의 적어도 하나의 천연 생성 CD3ε 쇄를 대체한다.
일부 실시양태에서, 조작된 TCR은 키메라 항체-T 세포 수용체(TCR) 구축물(caTCR)이다. 일부 실시양태에서, caTCR은 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈, 및 적어도 하나의 TCR 관련 신호전달 분자를 동원할 수 있는 T 세포 수용체 모듈(TCRM)을 포함한다. 일부 실시양태에서, TCRM은 제1 TCR 막횡단 도메인(TCR-TM)을 포함하는 제1 TCR 도메인(TCRD) 및 제2 TCR-TM을 포함하는 제2 TCRD를 포함하고, 이때 TCR-TM은 적어도 하나의 TCR 관련 신호전달 분자의 동원을 용이하게 한다. 일부 실시양태에서, 제1 TCR-TM은 T 세포 수용체(예컨대, αβ TCR 또는 γδ TCR)의 막횡단 도메인들 중 하나로부터 유래하고, 제2 TCR-TM은 T 세포 수용체의 다른 막횡단 도메인으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, TCR은 αβ TCR이고, 제1 TCR-TM 및 제2 TCR-TM은 TCR α 및 β 서브유닛 막횡단 도메인으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, TCR은 γδ TCR이고, 제1 TCR-TM 및 제2 TCR-TM은 TCR γ 및 δ 서브유닛 막횡단 도메인으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, TCRD 및 TCR-TM은 항체로부터 유래한 F(ab)에 융합된다. 일부 실시양태에서, TCRD 및 TCR-TM은 항체의 F(v) 부분으로부터 유래한 단일 쇄 항체(scFv)에 융합된다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 암 세포의 항원에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원은 암 세포에서 차등적으로 발현된다. 일부 실시양태에서, 항원은 암 세포에서 상향조절된다. 일부 실시양태에서, 항원은 표면 항원이고 MHC에 의해 제시되지 않는다. 일부 실시양태에서, 항원은 MHC/펩타이드 복합체이다.
일부 실시양태에서, 항원은 HER2(erbB-2), B 세포 성숙 항원(BCMA), CD19, 알파태아단백질(AFP), 암배아 항원(CEA), CA-125, MUC-1, 상피 종양 항원(ETA), 티로시나제(tyrosinase), 흑색종 관련 항원(MAGE), 전립선 특이적 항원(PSA), 신경교종 관련 항원, β-인간 융모 고나도트로핀, 티로글로불린, RAGE-1, MN-CA IX, 인간 텔로머라제(telomerase) 역전사효소, RU1, RU2(AS), 장 카르복실 에스터라제(esterase), mut hsp70-2, M-CSF, 프로스타제(prostase), PAP, NY-ESO-1, LAGE-1a, p53, 프로스테인(prostein), PSMA, 서비빈(survivin) 및 텔로머라제, 전립선 암종 종양 항원-1(PCTA-1), ELF2M, 호중구 엘라스타제(elastase), CD22, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체 및 메소텔린(mesothelin)이다. 일부 실시양태에서, 항원은 HER2, BCMA 또는 CD19이다. 일부 실시양태에서, 항원은 HER2이다. 일부 실시양태에서, 항원은 BCMA이다. 일부 실시양태에서, 항원은 CD19이다.
사용 방법
일부 실시양태에서, 본원은 암의 치료를 필요로 하는 개체에서 암을 치료하는 방법으로서, (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산을 포함하는 면역 세포를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 TNFRSF의 상이한 구성원으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 사멸 도메인을 가진 TNFRSF 구성원의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1, TNFR2, Fas, DR4, DR5, DR3, DR6, EDAR, XEDAR, TROY 또는 NGFR의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포(예를 들면, 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포, 감마-델타 T 세포)이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 조작된 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 천연 킬러 세포(NK 세포)이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 대식세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 종양 침윤 림프구(TIL)이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 단핵구이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 B 세포이다.
일부 실시양태에서, 암은 고형 암 또는 액형 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 암종, 모세포종, 흑색종, 육종, 혈액암 또는 림프계 악성종양이다.
일부 실시양태에서, 암은 백혈병 또는 림프종이다. 일부 실시양태에서, 암은 혼합형 백혈병(MLL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 림프모구성 백혈병(ALL), B 대세포 림프종, 미만성 B 대세포 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 고등급 B 세포 림프종, 또는 소포성 림프종으로부터 비롯된 B 대세포 림프종이다.
일부 실시양태에서, 암은 폐암, 유방암, 결장암, 다발성 골수종, 교모세포종, 위암, 난소암, 위장암, 대장암, 요로상피암, 자궁내막암 또는 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 결장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다. 일부 실시양태에서, 암은 교모세포종이다. 일부 실시양태에서, 암은 위암이다. 일부 실시양태에서, 암은 난소암이다. 일부 실시양태에서, 암은 위장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 대장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 요로상피암이다. 일부 실시양태에서, 암은 자궁내막암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다.
약학 조성물
일부 실시양태에서, 본원은 (a) (i) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드, (ii) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드, 및 (iii) (예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 면역 세포; 및 (b) 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 개시한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 TNFRSF의 상이한 구성원으로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 사멸 도메인을 가진 TNFRSF 구성원의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1, TNFR2, Fas, DR4, DR5, DR3, DR6, EDAR, XEDAR, TROY 또는 NGFR의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR1의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 TNFR2의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 Fas의 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 제3 폴리뉴클레오타이드는 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인은 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인은 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드는 직접적 또는 간접적으로(예를 들면, 링커를 통해) 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포(예를 들면, 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포, 감마-델타 T 세포), 천연 킬러 세포(NK 세포), 대식세포, 종양 침윤 림프구(TIL), 단핵구 또는 B 세포이다.
본원에 개시된 약학 조성물은 유효량의 면역 세포가 약학적으로 허용되는 담체와 혼합물로 조합되도록 대상체에게 투여되는 약학적으로 허용되는 조성물의 그 자체로 공지된 제조 방법에 의해 제조된다. 적합한 담체는 예를 들면, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., USA, 2000)]에 기재되어 있다. 이에 근거할 때, 상기 조성물은, 배타적이지는 않지만, 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 함께 존재하고 적합한 pH 및 생리학적 유체와 동등한 삼투압을 가진 완충된 용액에 함유되어 있는 물질의 용액을 포함한다.
적합한 약학적으로 허용되는 담체는 약학 조성물의 생물학적 활성의 효과를 방해하지 않는 본질적으로 화학적 불활성 및 무독성 조성물을 포함한다. 적합한 약학 담체의 예는 물, 식염수 용액, 글리세롤 용액, N-(1(2,3-디올레일옥시)프로필)N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드(DOTMA), 디올레실포스포티딜-에탄올아민(DOPE) 및 리포좀을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 이러한 조성물은 환자에게 직접 투여하기 위한 형태를 제공하도록 적합한 양의 담체와 함께 치료 유효량의 화합물을 함유한다.
약학 조성물은 치료될(또는 예방될) 질환에 적절한 방식으로 투여된다. 적절한 용량이 임상시험에 의해 결정되지만, 투여의 양 및 빈도는 환자의 상태, 및 환자의 질환의 유형과 중증도와 같은 요인에 의해 결정된다. "면역학적 유효량", "항-종양 유효량", "종양 억제 유효량" 또는 "치료 유효량"이 표시될 때, 투여될 본 발명의 조성물의 정확한 양은 연령, 체중, 종양 크기, 감염 정도 또는 전이의 개별 차이, 및 환자(대상체)의 상태를 고려함으로써 의사에 의해 결정된다.
약학 조성물이 "실질적으로 결여한다"라는 것은 예를 들면, 검출 가능한 수준의 오염물질, 예를 들면, 내독소, 마이코플라스마, 복제 적격 렌티바이러스(RCL), p24, VSV-G 핵산, HIV gag, 잔류 항-CD3/항-CD28 코팅된 비드, 마우스 항체, 풀링된 인간 혈청, 소 혈청 알부민, 소 혈청, 배양 배지 성분, 벡터 팩키징 세포 또는 플라스미드 성분, 세균, 진균, 마이코플라스마, IL-2 및 IL-7로 구성된 군으로부터 선택된 검출 가능한 수준의 오염물질이 없음을 표시한다.
일부 실시양태에서, 약학 조성물은 1회 또는 다회, 예를 들면, 매일, 매주, 2주마다, 또는 매월, 매시간 투여되거나, 약학 조성물은 치료되는 암의 재발, 재귀 또는 진행 시 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 약학 조성물은 정맥내 또는 주입을 포함하나 이들로 제한되지 않는 임의의 적합한 방법에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 약학 조성물은 면역요법에서 통상적으로 공지되어 있는 주입 기법을 이용함으로써 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 약학 조성물은 종양, 림프절 또는 감염 부위 내로 직접 주사된다.
실시예
하기 비제한적 실시예는 본원을 예시한다:
실시예 1. 키메라 공자극 수용체
전술된 바와 같이, 공자극 및 공억제는 T 세포 활성화, 증식 및 지속을 조절하기 위해 TCR 신호전달과 동시에 작동한다. TNFRSF 신호전달을 통한 T 세포 반응의 조절은 각각의 수용체가 독특한 생물학적 효과를 부여하기 때문에 T 세포 요법에 있어서 관심을 끈다. 더욱이, TNFRSF의 구조 생물학에서의 유사성을 고려할 때, TNFRSF에 기반한 키메라 공자극 수용체(CCR)의 생성을 통해 TNFRSF에 의한 공억제(즉, 억제 신호전달)를 공자극(즉, 자극 신호전달) 쪽으로 전향시킬 수 있어야 한다. 실제로, 선행 보고는 TNFRSF 구성원이 신호전달을 전향시키기 위해 교체될 수 있는 모듈식 도메인을 가진다는 것을 확립하였다.
항-종양 T 세포는 고수준의 TNFα를 생성하지만, 실험 데이터는 천연 TNFα 신호전달이 T 세포 면역을 제한함을 암시한다. TNFR1 매개 TNFα 신호전달은 T 세포의 증폭 및 기능을 제한하는 세포 사멸을 야기한다. 따라서, 항원 자극에 대한 반응으로 TNFα의 정교화 후 T 세포 기능을 향상시키는 키메라 TNFR1을 통해 TNFα 생물학을 전향시키는 것을 고려하는 것은 흥미롭다. T 세포 자극을 향한 TNFR1 신호전달의 전향은 TNFR1 세포내 신호전달 도메인을 또 다른 TNFRSF로부터의 공자극 도메인으로 교체함으로써 달성될 수 있었다. 원칙적으로, TNFα가 국소 환경에서 다른 세포(예를 들면, 대식세포)에 의해 생성될 수 있다는 것도 가능하지만, 이러한 키메라 공자극 수용체(CCR)를 위한 자극은 동족 항원의 인식 후 T 세포에 의해 생성된 TNFα를 통해 자가분비 및 측분비로 전달될 것이다. CAR 분야에서 공자극 도메인을 사용한 최근 성공은 T 세포에서 가장 유망한 특성을 가진 것으로서 4-1BB의 공자극 신호전달 도메인을 가리킨다. 4-1BB 공자극 도메인을 가진 CAR 조작된 T 세포는 기억 마커의 증가, 높은 지속성 및 아네르기(anergy)에 대한 내성을 표시한다. CD19 항원에 대해 유도된 4-1BB CAR을 사용한 임상시험은 환자 내로의 주입 시 인상적인 증식 및 6개월 동안 고수준에서의 지속성을 입증하였다. 따라서, 공자극 신호전달을 제공하는, 4-1BB의 세포질 도메인에 연결된, TNFα에 결합하는, TNFR1의 세포외 도메인을 가진 CCR은 강력한 개념 증명을 제공해야 한다(도 1). 물론, TNFR1 기반 CCR은 4-1BB의 세포질 도메인 및 다른 TNFRSF의 세포질 도메인, 또는 이들의 조합으로 제한되지 않을 것이고 훨씬 더 강력한 결과를 제공할 수 있다.
TNFR1-4-1BB CCR이 TNFα 신호전달을 전향시킬 수 있다는 가설을 다루기 위해, 4-1BB의 세포내 신호전달 도메인에 연결된 TNFR1 수용체의 TNFα 결합 세포외 도메인 및 막횡단 도메인으로 구성된 융합 수용체를 구축하였다(도 2a). 대조군으로서, 사이토카인에 결합하나 어떠한 신호도 전달하지 않을 TNF-차단제 수용체도 생성하였다(도 2a).
실험 방법
클로닝
전체 길이 TNFR1 코딩 서열을 gBlocks 유전자 단편(IDT)으로서 주문하고 PCR로 증폭하여, 제한 부위 AscI 및 NheI을 추가함으로써 pCCL 전달 벡터 내로 라이게이션시켰다. PCR 프라이머에 의해 추가된, TNFR 세포외 도메인과 4-1BB 세포내 도메인의 중첩 말단을 사용하여 스티치(stitch) PCR 증폭을 통해 공자극 TNFR1-4-1BB 융합체를 생성하였다. 제한 부위 AscI 및 NheI을 추가하는 프라이머를 사용한 이 생성물의 증폭은 pCCL 전달 벡터 내로의 라이게이션을 허용하였다.
실시예 2. 키메라 공자극 수용체의 특징규명
TNFRSF 공자극 도메인의 활성화는 NFκB 경로의 다운스트림 활성화를 야기하여, 염증, 생존 및 증식을 포함하는 NFκB 관련 유전자의 전사를 향상시킨다. TNFR1-4-1BB CCR이 NFκB 관련 유전자의 전사를 향상시키는지를 확인하기 위해, 초파리 루시퍼라제 유전자의 전사가 2개의 NFκB 인핸서 영역들에 의해 조절되는 리포터 시스템을 사용하였다. 리포펙타민(Lipofectamine)을 통해 NFκB 유도 루시퍼라제 리포터 및 (i) 전체 길이 TNFR1, (ii) TNF-차단제 및 (iii) TNFR1-4-1BB CCR 중 하나로 HEK293TM 세포를 형질감염시켰다(도 2a). 그 후, 형질감염된 세포를 재조합 인간 TNFα로 자극하였다. 루시퍼라제 기질인 D-루시페린을 배양물에 첨가하였고, 루시퍼라제 존재도의 직접적인 척도인 발광을 발광측정법으로 정량하였다. 이 데이터는 루시퍼라제 리포터 활성의 증가에 의해 입증된 바와 같이 TNFR1-4-1BB CCR(도 3, 직선)의 발현이 야생형 TNFR1(도 3, 큰 쇄선)에 비해 NFκB 트랜스활성화를 향상시켰음을 보여준다. 우성 음성 TNF-차단제(도 2b) 수용체의 발현은 TNFα를 통해 NFκB 신호전달을 없앤다(도 3, 짧은 쇄선). 그러나, 이 데이터는 NFκB 트랜스활성화가 TNFα의 부재 하에서 관찰되었기 때문에 TNFR1-4-1BB가 HEK293TM 세포에서 항시적으로 활성을 나타낸다는 것도 암시한다.
NFκB 경로의 활성화는 유비퀴틴-프로테아좀(ubiquitin-proteasome) 경로의 활성화를 매개하는 데 관여하는 여러 키나제들의 활성화를 수반하는 복잡한 신호전달 캐스케이드로부터 비롯된다. NFκB 신호전달의 핵심 억제제인 κB의 억제제(IκB)는 중요한 NFκB 인자를 격리시키고 NFκB 활성화 시 유비퀴틴-프로테아좀 경로를 통해 분해되도록 표적화된다. IκB의 분해는 NFκB 전사 인자를 활성화시켜 유전자 전사를 향상시킨다. CCR의 활성화가 IκB의 분해를 야기하는지를 확인하기 위해, 웨스턴 블롯을 수행하였다. TNFR1-4-1BB CCR의 명확한 항시적 활성화는 HEK293TM 세포에서의 발현에 기인할 수 있기 때문에, 이 실험의 경우, 렌티바이러스 형질도입을 통해 TNFR1 및 변이체 TNFR1 수용체를 T 세포주인 Jurkat 내로 도입하였다. TNFα를 사용한 자극 시, TNFR1-4-1BB CCR에 의해 형질도입된 Jurkat 세포는 IκB의 시간 의존적 분해를 보여주었고; 분해 속도는 조작되지 않은(WT) Jurkat 모세포에 비해 향상되었고, 이것은 TNFR1-4-1BB CCR의 강력한 효과를 입증한다(도 4). 절두된 비-신호전달 세포질 도메인을 가진 TNF-차단제 수용체는 TNFα에 의해 자극된 IκBα 분해를 제거하였고(도 4), 이것은 TNFR1-4-1BB CCR에 의한 IκB의 향상된 분해가 세포질 도메인에 기인하였음을 시사한다. 야생형 TNFR1은 야생형 TNFR1의 독성 효과로 인해 Jurkat 세포에서 과다발현될 수 없었다.
4-1BB 신호전달은 MAPK 신호전달 경로를 활성화시키는 것으로 밝혀졌다. p38 MAPK의 인산화 및 활성화는 다운스트림 전사 인자의 활성화를 유발한다. TNFR1-4-1BB CCR 및 TNF-차단제 조작된 Jurkat 세포의 TNFα 자극 후 인-p38 단백질 수준을 평가하였다. TNFα를 사용한 자극은 조작되지 않은 WT 세포 및 TNFR1-41BB CCR을 갖도록 조작된 세포 둘 다에서 인-p38 수준의 유도를 유도하였다. 인-p38 수준은 자극 후 5분에서 그의 피크에 도달하였다. 피크 반응은 조작되지 않은(WT) Jurkat 세포에 비해 TNFR1-4-1BB CCR을 갖도록 조작된 Jurkat 세포에서 더 높았다(도 5). IκB의 사용 시 관찰된 결과와 유사하게, TNF-차단제 수용체의 발현은 p38 인산화를 제거하였다(도 5).
이 결과는 TNFR1-4-1BB CCR이 T 세포에서 TNFα 신호전달을 향상된 NFκB 신호전달 쪽으로 전향시킬 수 있음을 명확히 입증한다.
제3세대 자가 불활성화 렌티바이러스 발현 시스템을 사용하여, 도 2a 내지 2c의 수용체들 중 하나를 안정하게 발현하도록 일차 T 세포를 조작하였다. 염색 및 유세포분석을 통해 형질도입된 T 세포를 수용체의 표면 발현에 대해 평가하였다. TNFR1-4-1BB CCR의 발현은 CD8+ T 세포 서브유닛 및 CD4+ T 세포 서브유닛 둘 다에서 명확하였고, 이때 형질도입률은 CD4+ T 세포에서 더 높은 것으로 인지되었다(도 6a 및 6b). T 세포의 활성화 및 형질도입 후, 14일에 걸쳐 일차 배양물의 생장을 추적하였다. T 세포에서의 TNFR1-4-1BB CCR의 발현은 시험관내에서 세포의 생장에 영향을 미치지 않았고, 이것은 형질도입된 T 세포가 TNFR1-4-1BB CCR의 도입을 용인하였음을 암시한다(도 7).
TNFRSF 공자극은 T 세포에서 생존 신호전달을 향상시켜 지속성을 개선하는 것으로 밝혀졌다. TNFR1-4-1BB CCR에 의해 제공된 4-1BB 공자극은 형질도입된 T 세포에게 향상된 생존 특성을 제공할 것으로 예상된다. 일차 인간 T 세포를 TNFR1-4-1BB CCR로 형질도입하고 14일 동안 IL2 및 IL7 성장 인자에서 생장시켰다. 14일째 날, 세포를 사이토카인으로부터 제거하고 신호 1(항-CD3) 또는 신호 2(TNFα)로 자극하였고, 생존 세포 수를 4일 동안 추적하였다. T 세포로부터의 성장 인자의 제거는 대조군 T 세포 배양물의 아폽토시스 및 사멸을 야기한다. 그러나, TNFR1-4-1BB CCR에 의해 형질도입된 T 세포는 자극 조건 둘 다에서 더 우수한 생존을 나타내었고(도 8a 및 8b), 이것은 TNFR1-4-1BB CCR의 TNFα 자극이 조작된 T 세포로의 생존 신호전달을 향상시켜 항-아폽토시스 경로를 상향조절함을 암시한다. 이 데이터는 항-CD3 자극된 T 세포가 TNFR1-4-1BB CCR 생존 신호전달을 자극하기에 충분한 수준의 TNFα를 분비한다는 것도 암시한다.
신호 1(항-CD3)에 의해 자극된, TNFR1-4-1BB CCR 형질도입된 T 세포는 TNFα 및 IFNγ 둘 다를 분비하도록 활성화된다. CCR T 세포의 사이토카인 프로파일은 대조군 세포에 비해 IFNγ 생성을 향해 편향된다(도 9).
그 다음, TNFR1-4-1BB CCR의 기대되는 기능을 고려하여, CCR의 발현이 합성 항원 수용체를 통한 T 세포 활성화의 환경에서 공자극 활성을 제공할지를 확인하였다. 이를 위해, CCR을 BCMA에 특이적인 TAC 수용체(BCMA-TAC)와 공발현시켰다. 2A 펩타이드에 의해 분리된 TNFR1-4-1BB CCR 또는 TNF-차단제와 함께 TAC 수용체를 발현하는 렌티바이러스를 구축하였다(도 10).
2A 발현 시스템 하에서 BCMA-TAC 및 TNFR1-4-1BB CCR의 발현이 TAC 기능을 방해하지 않는다는 것을 보장하기 위해, 항-종양 활성을 평가하는 기능 어세이를 수행하였다. TAC 조작된 T 세포 및 TAC+CCR 조작된 T 세포를, 루시퍼라제를 발현하는 BCMA 양성 KMS11 세포와 24시간 동안 공배양하였다. 사멸 활성을 KMS11 표적의 발광의 감소로 측정하였다. TAC+CCR T 세포는 TAC T 세포와 유사한 사멸 활성을 나타내고(도 11), 이것은 2A 발현 시스템이 기능적 수용체 발현을 야기함을 시사한다. T 세포 활성화 및 세포독성이 TAC 수용체만을 통해 매개되기 때문에, 4-1BB-CCR에 의해 제공된 추가 신호는 시험관내 사멸 어세이에 영향을 미칠 것으로 예상되지 않았다.
활성화된 T 세포는 분비된 사이토카인을 비롯한 여러 가용성 매개자들을 통해 세포독성 및 전구염증성 신호전달을 매개한다. 항원 양성 종양 세포 표적과 공배양한 후 시험관내 세포내 사이토카인 어세이에서 IFNγ 및 TNFα의 발현을 평가하였다. 항원 맞물림 시, TAC 조작된 T 세포 및 TAC+CCR 조작된 T 세포 둘 다가 IFNγ 및 TNFα를 발현하였다. CD4+ TAC+CCR T 세포 및 CD8+ TAC+CCR T 세포 둘 다에서 사이토카인 발현의 감소가 관찰되었다는 것은 흥미롭다(도 12). 임상에서, CAR 조작된 T 세포의 사용은 부분적으로 사이토카인 폭풍을 통해 매개된, 환자에 대한 고위험 독성을 나타낸다. CCR의 발현과 함께 항원 맞물림 후 T 세포에 의해 분비된 사이토카인의 감소는 항-종양 활성을 유지하면서 CAR T 세포 독성을 감소시키는 효과적인 수단일 수 있다.
TAC 조작된 T 세포에서 CCR 발현의 기능적 결과를 확인하기 위해, 항원 양성 종양 표적과 공배양한 후 T 세포 분열을 추적하기 위해 증식 어세이를 수행하였다. 항원 맞물림 및 T 세포 활성화 시, T 세포는 빠른 분열 및 증식을 겪음으로써, 딸세포를 생성하여 항-종양 활성을 매개한다. TAC 단독, TAC+CCR 및 TAC+TNF-차단제를 갖도록 조작된 T 세포를 증식 어세이에서 비교하였다. 7일 증식 어세이 후, 4-1BB-CCR을 갖도록 조작된 CD4+ TAC T 세포 및 CD8+ TAC T 세포 둘 다가 향상된 증식을 나타내었다(도 13a 및 13b). 효과는 CD8+ T 세포에 비해 CD4+ T 세포에서 더 현저하다. TNF-차단제를 갖도록 조작된 T 세포는 TAC 단독에 비해 증식에 부정적으로 영향을 미쳤다. 데이터는 CCR의 발현이 TAC T 세포의 증식 능력을 향상시키는 매개 신호임을 암시한다. TAC 조작과 TAC+CCR 조작 사이에 증식 및 분열 지수를 비교하여, TAC+CCR이 TAC T 세포의 증식을 향상시킴을 관찰하였다. 이 값들은 TAC+CCR이 TAC T 세포 단독보다 평균 30% 내지 50% 더 많은 증식 세포를 생성한다는 것도 보여준다.
TNFRSF는 증식, 생존 및 기억 발생을 향상시킬 수 있는 4-1BB, OX40 및 CD27을 비롯한, T 세포를 공자극하는 것으로 알려진 여러 분자들을 함유한다. 원형 TNFR1-4-1BB CCR에 의해 수득된 유망한 결과를 고려하여, 다른 공자극 도메인이 동등한 또는 더 큰 활성을 가질지를 확인하고자 하였다. 대안적 TNFRSF 공자극 신호는 독특한 특성을 가진 TAC 조작된 T 세포를 유도하여 항-종양 활성을 개선할 수 있다. 평가하기 위해 18개의 세포내 도메인들을 선택하였고(표 1에 나열됨), (표 1에 나타낸 바와 같이) 일련의 TNFRSF CCR들을 디자인하였고, 이때 막횡단 도메인은 TNFR1 또는 각각의 TNFRSF로부터 유래하였다.
TNFRSF CCR의 유용성을 스크리닝하기 위해, 플레이트에 결합된 항-CD3(OKT3)을 사용한 자극 후 조작된 T 세포의 증식을 향상시키는 CCR의 능력을 평가하였다.
스크린의 유용성을 확인하기 위해, 원래의 TNFR1-4-1BB, TNF-차단제 또는 대조군 수용체(절두된 NGFR)를 갖도록 T 세포를 조작하였고 플레이트에 결합된 항-CD3으로 활성화시켰다(도 14). 선행 데이터와 일치하게, 상기 스크린은 대조군(절두된 NGFR)에 비해 TNFR1-4-1BB CCR에 의한 증식 향상 및 TNF-차단제의 억제 효과를 확인하였다. 따라서, 플레이트에 결합된 CD3은 TNFRSF 공자극 수용체의 스크리닝을 위한 유효 어세이이다.
표 1에 기재된 합성 TNFR1-CCR에 대한 cDNA를 GenScript로 합성하고 렌티바이러스 벡터 내로 서브클로닝하였다. 항-CD3/항-CD28 비드에 의해 자극된 PBMC를 CCR로 렌티바이러스 조작하고 14일 동안 IL2 및 IL7에서 생장시켰고, 이 시점에서 플레이트에 결합된 항-CD3을 사용한 자극 후 전체 생장, 조작 효율, 수용체 발현 및 증식에 대해 T 세포를 평가하였다. 모든 렌티바이러스들에 포함된 형질도입 마커(NGFR)에 의해 평가되었을 때, CCR을 사용한 인간 PBMC의 조작 효율은 15% 내지 85%이었다(도 15). 표면 상의 수용체의 양을 평가하기 위해 조작된 세포를 세포외 TNFR1 도메인에 대한 항체로 염색하였다. CCR의 표면 발현은 배경보다 0% 내지 1500% 더 높았다(도 16). 벌크 CCR 조작된 배양물의 배수 증폭은 대조군의 50% 내지 450%이었다(도 17). 조작된 14일째 날 T 세포를 항-CD3 자극 후 5일 증식 어세이에서 평가하였다. CCR 조작된 T 세포의 증식은 CD4 T 세포 서브세트(도 18) 및 CD8 T 세포 서브세트(도 19) 둘 다에서 1(증식 없음) 내지 15(단일 세포로부터 생성된 평균 15개의 세포)이었다. CCR의 증식 스크린에 대한 양성 히트 역치를 공자극 신호를 받지 않은 NGFR 형질도입 대조군의 증식 지수로 설정하였다. CCR을 갖도록 조작된 CD4 T 세포의 증식은 CD8 T 세포보다 더 현저한 증식에 대한 효과를 나타내었다. 가장 잘 증식하는 CCR CD4 세포는 NGFR 조작된 세포보다 75% 더 잘 증식한 반면, 가장 잘 증식하는 CCR CD8 T 세포는 상응하는 NGFR 조작된 세포보다 60% 더 잘 증식하였다.
클러스터링 알고리즘을 이용하여, 디자인된 구축물로부터의 다원적 스크리닝 결과를 분석함으로써 CCR 조작된 T 세포들 사이의 유사성을 평가하였다. 클러스터링 알고리즘에 포함된 데이터는 CD4+ T 세포 서브세트 및 CD8+ T 세포 서브세트 둘 다의 표면 발현, 조작 효율 및 증식이었다. 먼저 주성분 분석을 이용하여 데이터 차원을 감소시켰고, K-평균 클러스터링 방법을 이용하여 중심을 계산하였다. 상관관계 히트 맵은 구축물들 사이의 유사성을 기술한다(도 20). 계통도의 분류는 유사한 속성을 가진 수용체들을 확인한다. 상부 군은 더 높은 표면 발현, 배양물의 개선된 생장 및 향상된 증식을 나타낸 4-1BB 및 BAFFR CCR을 함유한다. 중간 군은 CCR 발현이 없고 생장에 최소한으로 영향을 미치고 증식을 향상시키지 않는 NGFR 형질도입된 대조군을 함유한다. 중간 군은 CCR 발현을 거의 갖지 않고 생장을 최소한으로 개선하고 증식을 약간 향상시키는 원래의 4-1BB CCR도 함유한다. 하부 군은 배양물 생장을 늦추고 증식에 부정적으로 영향을 미치는 것으로 입증된 TNF-차단제, LIGHT 및 FAS 공자극 도메인을 함유한다. 이 군들이 공자극 도메인에 대한 통찰력을 제공하고 증식 스크린으로부터 양성 히트와 함께 클러스터링된 상부 군의 구성원들을 강조하는 다중파라미터 클러스터링에 근거하여 형성되었다는 것은 흥미롭다. 이 군의 모든 수용체들이 증식의 향상을 제공하는 것은 아니지만, 이들은 여전히 추구할 가치가 있을 수 있다. 공자극 수용체는 증식을 향상시킬 뿐만 아니라 세포독성 기능 및 생존과 지속성도 향상시킨다. 이 공자극 군의 수용체들은 증식 이외의 다른 공자극 성질에 대한 잠재력을 가질 수 있다.
중심의 클러스터링으로부터 생성된 TNFRSF CCR의 군의 평가는 바람직한 기능적 속성을 가진 조작된 T 세포를 보여주었다. 4-1BB 및 BAFFR 공자극 신호전달 도메인을 가진 CCR은 PBMC의 개선된 증폭, 높은 조작 효율 및 개선된 증식 능력을 나타내었다. 4-1BB 및 BAFFR 도메인의 유용성을 입증하기 위해, 3명의 PBMC 기증자를 이용하여 증식 어세이에서 TNFR1-4-1BB 및 TNFR-BAFFR 구축물을 실행하였다(도 21a 및 21b). 선택된 구축물은 스크린 결과에 필적할만하게 수행하였고, 이것은 대조군 수용체에 비해 향상된 증식을 입증한다. 이 데이터는 스크린 데이터의 신뢰성을 제공하였을 뿐만 아니라 조작된 T 세포의 공자극을 위한 4-1BB 및 BAFFR 신호전달 도메인의 사용에 있어서 잠재력도 확인시켜준다. 세포독성 T 세포의 중요한 기능은 활성화 후 사이토카인의 분비이다. TNFR1-4-1BB 및 TNFR-BAFFR 조작된 T 세포를 항-CD3 자극 후 사이토카인 생성에 대해 평가하였고(도 22a 및 22b), 이때 필적할만한 수준의 IFN-γ 생성 세포가 관찰되었으나, 아마도 TNF-α가 CCR에 결합하기 때문에 감소된 수준의 TNF-α 생성 세포가 관찰되었다.
논의
T 세포 활성화는 복잡한 잘 조정된 신호전달 캐스케이드의 결과이다. TCR 복합체, 공수용체, 어댑터 분자의 완전한 동원뿐만 아니라 공자극 분자 및 공억제 분자의 통합도 활성화된 T 세포 프로그래밍의 유도를 유발하는 수용체 신호 강도의 합산을 야기한다. TCR은 이 회로의 중요한 성분이다. TCR은 T 세포 세포독성의 초점을 병원체의 독특한 에피토프로 향하게 한다. T 세포 항원 커플러(TAC)를 비롯한 합성 항원 수용체의 개발은 T 세포의 세포독성을 새로운 표적으로 향하게 하는 능력으로 이어져; 향상된 종양 감시 및 항-종양 활성을 가진 인간 면역 시스템을 용도 변경하였다. TAC 분자는 2-신호 가설의 신호 1을 전달한다. 조작된 세포 내에서 신호 2의 개입은 T 세포 활성화를 위한 더 강한 자극을 유도할 수 있다. T 세포 활성화 키메라 수용체의 성공은 조작된 세포에서 독특한 특성을 유도하기 위해 신규 키메라 공자극 수용체를 개발한다는 생각을 상상한다. CD28, 4-1BB 및 OX40을 비롯한 공자극 수용체는 활성화, 증식 및 세포독성 기능을 촉진하는 제2 신호를 활성화된 T 세포에게 제공하는 잘 기재된 수용체이다. 전술된 바와 같이, 활성화된 T 세포에 의해 분비된 리간드 TNFα의 조절 하에서 공자극을 제공할 수 있는 키메라 공자극 수용체(CCR)를 개발하였다. 이 디자인 방법론의 이면에 있는 영감은 T 세포 활성화 후에만 공자극을 제공하는 것이었다. 이 연구는 활성화된 T 세포가 풍부한 TNFα를 분비한다는 것을 발견하였다. 원칙적으로, 분비된 TNFα는 CCR에 결합하고 이를 자극해야 한다. 초기 CCR 구축물 디자인은 TNFRSF의 공자극 분자인 4-1BB를 함유하였다. CCR은 별개의 수용체로서 공자극 신호를 조작하므로, 모든 형태의 T 세포 요법(예를 들면, 조작된 T 세포, TIL), NK 세포 적용 및 조작된 단핵구 요법을 비롯한 많은 세포 요법들에 걸쳐 유용하다. 이 프로젝트에서 CCR은 단독으로 발현될 때 또는 TAC 수용체와 함께 발현될 때 향상된 증식 능력과 변경된 사이토카인 생성을 나타낸다. CCR 조작된 T 세포에서 관찰된 향상된 증식은 고정된 종양 덩어리의 억제 미세환경을 극복하는 데 요구된 적응 우위를 제공할 수 있고, 이것은 입양 T 세포 전달 분야에 계속 도전과제를 제시한다. CCR T 세포의 변경된 사이토카인 생성 프로파일은 증식, 세포독성 또는 생존에 대한 손상을 초래하지 않는 것으로 보인다. 심지어, 감소된 사이토카인 생성은 조작된 T 세포의 투여 후 환자에게 독성을 덜 나타내는 것으로 입증될 수 있다. 현재, 환자에서 CAR T 세포의 주입 및 증폭은 변경된 사이토카인 생성 프로파일을 갖도록 T 세포를 조작함으로써 완화될 수 있는 사이토카인 폭풍으로 인한 독성을 초래한다.
4-1BB CCR을 포함할 때 발견된 T 세포 증식의 개선은 조작된 T 세포의 공자극에 있어서 넓은 TNFRSF 패밀리로부터 유래한 다른 공자극 도메인의 유용성의 분석으로 이어진다. TNFR1-키메라 플랫폼 내에서 TNFRSF 공자극 신호전달 도메인의 증식 스크린은 T 세포 기능을 향상시킬 잠재력을 가진 CCR의 다양한 성질들을 보여주었다. 특히, 이 스크린은 전형적으로 T 세포의 공자극제로서 생각되지 않는 BAFF-R 공자극 도메인의 유용성을 보여주었다. 중요하게는, 이 다양한 CCR들의 유용성은 적용에 따라 상이할 수 있기 때문에, 생성된 CCR의 전체 집합체가 귀중하다. 목표는 생체내 항-종양 활성이 향상된 TAC+CCR T 세포 생성물을 생성하는 것이다. 향후 방향은 조작된 T 세포에 대한 CCR의 효과를 계속 평가하는 것을 포함할 것이다. 실제로, 이 데이터의 결과는 본원에 기재된 CCR 디자인이 억제 신호 및/또는 사멸 신호를 매개하는 임의의 TNFRSF를 통한 신호전달을 T 세포로 전향시키는 데 이용될 수 있음을 암시한다. 추가 반복의 예로서, FasL 및 TRAIL 둘 다가 활성화 후 T 세포 사멸을 촉진할 수 있기 때문에, FAS(TNFRSF6)의 세포외 도메인을 사용하여 FasL(TNFSF6)로부터의 사멸 신호전달을 파괴하거나 DR4/DR5(TNFRSF10A/B)를 사용하여 TRAIL(TNFSF10)로부터의 사멸 신호전달을 파괴하는 CCR을 디자인할 수 있다. CCR 조작된 T 세포는 향상된 증식을 가진 것으로 입증되었고; 항후 작업은 이 공자극된 T 세포의 사이토카인 생성 프로파일을 확인할 것이다. CCR 신호전달에 의해 변경된 유전자 경로를 조사하고 인간 T 세포에서 증식의 조절제를 발견하는 것은 흥미로울 것이다.
실험 방법
T 세포 생장
말초 혈액 단핵 세포를 건강한 기증자로부터 제공받고 IL-2(100U/ ㎖) 및 IL-7(10 ng/㎖)로 보충된 RPMI 배양 배지에서 항-CD3 및 항-CD28 자기 비드로 자극한다. 1일 후, 제3세대 렌티바이러스 벡터 및 팩키징 시스템을 사용하여 세포를 형질도입하였다. 이틀마다 IL-2 및 IL-7을 첨가하면서 T 세포 배양물을 1x106개 세포/㎖로 유지한다. 14일 배양 후, CD4/CD8, 키메라 수용체, NGFR(형질도입 마커)에 대해 T 세포를 특징규명한다.
렌티바이러스 생성
리포펙타민 2000 형질감염 시약(Life Technologies)을 사용하여 팩키징 플라스미드 pRSV-Rev, pMDLg-pRRE, pMD2.G, 및 pCCL 전달 플라스미드로 HEK293T 세포를 형질감염시킴으로써 렌티바이러스를 제조하였다. 입자를 28,000 RPM에서 한외원심분리로 농축하였다. 바이러스의 희석 및 HEK293T 세포의 형질도입으로 바이러스 역가를 측정하였다. 형질도입된 HEK293T 세포를 유세포분석으로 %NGFR+(형질도입 마커)에 대해 정량하였고, 역가를 형질도입 유닛(TU/㎖)으로 계산하였다.
단백질 수준의 측정(웨스턴 블롯)
프로테아제 억제제 칵테일(1:100)(Sigma Aldrich)을 가진 용해 완충제(150 mM NaCl, 0.5% 데옥시콜산나트륨, 0.1% SDS, 50 mM Tris, 1% Triton X100, pH 8.0)에서 조직 균질화기를 이용하여 얼음 상에서 T 세포를 균질화한 후, 4℃에서 15분 동안 9,000xg에서 원심분리하였다. 샘플 단백질 농도를 비신코닌산 어세이(Sigma Aldrich)로 측정하였다. 2-머캡토에탄올을 가진 Laemmli 완충제를 샘플에 첨가한 후, 5분 동안 95℃에서 가열 변성시켰다. 10% SDS-PAGE 겔을 통해 샘플을 전기영동하고 90분 동안 일정한 350 mA에서 니트로셀룰로스 막으로 습식 전달하였다. 막을 4℃에서 TBST 중의 5%(w/v) 탈지유 차단제로 하룻밤 동안 차단하였다. 막을 실온에서 2시간 동안 진탕하면서 일차 항체(2% 차단제를 가진 TBST로 1:1000 희석)와 함께 인큐베이션하였다. 막을 TBST로 3회 세척하고 형광 접합된 이차 항체(2% 탈지유 차단제를 가진 TBST로 1:5000 희석)와 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 막을 TBST로 3회 세척하였다.
유세포분석 표면 염색
T 세포를 수거하고 1500 rpm에서 펠렛화하고 원형질막 단백질에 대한 형광 표지 항체와 함께 30분 동안 인큐베이션하였다. T 세포를 FACS 완충제(1% BSA, 1x PBS, 2.5 mM EDTA)로 세척하고 펠렛화하였다. T 세포를 300 ㎕ FACS 완충제에 현탁하고 여과한 후, 유세포분석기에서 실행하였다. 유세포분석기는 표지부착된 항체에 대한 정면 산란, 측면 산란 및 적절한 형광 채널을 기록한다. FlowJo V10 소프트웨어를 이용하여 세포분석기 데이터를 분석하고 산점도로서 표시하였다.
시험관내 세포내 사이토카인 생성
T 세포를 수거하고 37℃에서 4시간 동안 항원 양성 종양 세포주로 자극하였다. GolgiPlug 및 GolgiStop 시약(BD Bioscience)을 첨가하여 사이토카인의 T 세포 분비를 방해하였다. 4시간 후, 0.02 M EDTA를 첨가하여 자극을 중단시키고 15분 동안 실온에서 인큐베이션한다. 세포를 수거하고 세척한 후 원심분리하고 염색하였다. 세포를 고정시키고 투과 가능하게 만든 후 TNF-알파, IFN-감마 및 IL-2에 대한 형광 표지부착된 항체로 염색함으로써 세포내 사이토카인을 평가하였다. 형광을 유세포분석으로 평가하고 FlowJo V10 소프트웨어로 분석하였다.
시험관내 세포독성
T 세포를 수거하고 16시간 내지 18시간 동안 8 내지 0.25의 표적에 대한 이펙터의 비로 루시퍼라제 발현 항원 양성 종양 세포주와 공인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, D-루시페린을 배양물에 첨가하고 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트 판독기에서 발광을 판독한다. 발광의 양은 웰 내의 종양 세포의 생존율과 상관관계를 가진다. 데이터는 표적에 대한 이펙터의 비에 걸쳐 작도되어 있다.
증식 어세이
T 세포를 수거하고 1500 rpm에서 펠렛화하고 37℃에서 20분 동안 PBS 중의 1:1000 CellTrace™ 바이올렛 염료에 재현탁하여, 1 x 106개 세포/㎖로 세포를 염색하였다. T 세포 배지를 염료 부피의 4:1로 첨가하고 37℃에서 인큐베이션하여 남은 CellTrace™ 염료를 켄칭한다. 염색된 세포를 1500 rpm에서 펠렛화하고 사이토카인을 갖지 않은 24웰 플레이트에 0.5 x 106개 세포/㎖로 플레이팅하기 위해 T 세포 배지에 재현탁한다. 종양 표적을 1:2 이펙터:표적 비로 웰에 첨가한다. CCR의 단일 발현을 위해, 세포를 10 ㎍/㎖ 항-CD3(OKT3 클론)으로 코팅된 플레이트로 자극한다. 5일 또는 7일 동안 T 세포를 추적하여, 세포 수 및 생존율을 기록한다. 5일째 또는 7일째 날, 세포를 수거하고 유세포분석을 위해 염색한다. CellTrace™ 바이올렛 희석 피크는 분열된 T 세포를 표시하고, 이로부터 증식의 척도를 계산할 수 있다.
실시예 3: Fas-키메라 공자극 수용체
TNFRSF, Fas 또는 CD95는 T 세포 아폽토시스의 중요한 조절제이다. FasL의 발현은 T 세포 및 종양에서 입증되었다. Fas-FasL 상호작용은 동족살해를 초래하는, FasL 발현 T 세포와 Fas 발현 T 세포의 상호작용을 통해 활성화된 T 세포의 사멸을 촉진할 수 있다. 종양의 FasL와 Fas 발현 T 세포의 상호작용도 종양 특이적 T 세포의 세포 사멸과 연관되어 있다. 사멸 신호는 캐스파제-8 및 캐스파제-10을 동원하여 사멸 유도 신호전달 복합체(DISC)를 형성하는 어댑터 단백질인 사멸 도메인을 가진 FADD 또는 Fas 관련 단백질과 상호작용하는 Fas 수용체의 세포질 도메인을 통해 매개된다. DISC는 캐스파제-8/캐스파제-10을 절단하고 활성화시켜 이펙터 캐스파제를 유발함으로써 아폽토시스를 매개한다.
Fas의 세포질 영역의 제거는 세포 사멸 신호를 약화시킬 것으로 예상되는 우성 음성 수용체를 야기할 것이다. 4-1BB 또는 BAFFR의 세포질 도메인에 의한 Fas 세포질 도메인의 대체는 사멸 신호를 억제하고 이 신호를, T 세포 생존을 향상시킬 수 있는 공자극 신호로 대체할 것으로 예상될 것이다.
도 2b에 나타낸 바와 같이 Fas 수용체의 세포외 도메인이 4-1BB 또는 BAFFR의 세포질 도메인에 연결되어 있는 Fas-키메라를 생성하였다.
Fas-키메라 공자극 수용체의 조작 및 발현
Fas-키메라 또는 Fas-TRUNC를 발현하는 렌티바이러스로 일차 인간 T 세포를 형질도입하였다. 대조군으로서, Fas 수용체를 코딩하지 않는 대조군 렌티바이러스(NGFR)로 일차 인간 T 세포를 형질도입하였다. 모든 렌티바이러스 벡터들은 NGFR의 발현에 근거하여 형질도입 효율을 측정할 수 있도록 NGFR을 발현하였다. 조작된 T 세포를 위한 모든 구축물들은 NGFR 형질도입 마커 발현에 근거할 때 대조군 바이러스에 필적할만한 40% 내지 50%의 효율을 나타내었다(도 24).
천연 Fas에 대한 항체를 사용하여 Fas-키메라를 세포 표면에서 검출하였다. 상기 인지된 바와 같이, 조작되지 않은 T 세포는 배양 기간의 14일째 날에 고수준의 Fas를 발현한다. 평균 형광 강도에 의해 평가되었을 때, 4-1BB 및 BAFFR 공자극 도메인을 함유하는 Fas-키메라를 발현하도록 형질도입된 T 세포는 천연 Fas 수준보다 더 높은 Fas 발현 수준을 나타내었다(도 25). 평균 형광 강도에 의해 평가되었을 때, Fas-4-1BB 및 Fas-BAFFR 키메라의 세포 표면 발현은 NGFR 대조군의 1.35 x 104에 비해 4.9 x 104 및 7.9 x 104이었다. 흥미롭게도, Fas-TRUNC 수용체는 NGFR 수준보다 약간 더 높은 수준으로 발현되었다(MFI=2.0 x 104).
Fas-키메라를 발현하도록 조작된 T 세포는 제조 과정 동안 NGFR 대조군에 비해 필적할만한 속도로 생장하였고, 이것은 변형된 Fas 수용체의 발현이 제조 기간 동안 T 세포 생장에 영향을 미치지 않음을 시사한다(도 26).
변형된 Fas 수용체는 증식을 향상시킨다.
변형된 Fas 수용체의 발현이 T 세포 증식에 영향을 미치는지를 확인하기 위해, Fas-TRUNC, Fas-4-1BB 또는 Fas-BAFFR을 발현하는 렌티바이러스로 일차 인간 T 세포를 조작하였다. NGFR만을 발현하는 렌티바이러스로 대조군 T 세포를 조작하였다. T 세포 수용체에 대한 대리 자극으로서 아고니스트 CD3 항체를 사용하여 조작된 T 세포를 자극하였다. 변형된 Fas 수용체를 갖도록 조작된 모든 T 세포들은 대조군 NGFR T 세포에 비해 향상된 증식을 나타내었다. Fas-4-1BB 또는 Fas-BAFFR을 갖도록 조작된 T 세포는 Fas-TRUNC와 동등하게 증식하였고, 이것은 Fas 신호의 억제가 추가 공자극 신호전달을 요구하지 않으면서 증식을 향상시키는 데 충분하였음을 암시한다(도 27).
Fas-키메라는 외생성 FasL 신호전달을 극복한다.
Fas-키메라는 FasL의 아폽토시스 신호를 전향시키도록 디자인되었다. Fas-키메라가 FasL로부터의 아폽토시스를 차단할 수 있는지를 확인하기 위해, 조작된 T 세포를 가용성 삼량체 FasL로 자극하였고, 대사 염료인 AlamarBlue를 사용하여 48시간 후 생존율을 평가하였다. FasL에의 대조군 세포의 노출은 농도가 증가함에 따라 감소된 T 세포 생존율을 야기하였다. 대조군 T 세포(NGFR)는 외생성 FasL의 존재 하에서 생존율의 용량 의존적 손실을 나타내었다. 변형된 Fas 수용체를 갖도록 조작된 모든 T 세포들은 외생성 FasL의 존재 하에서 대조군 세포에 비해 향상된 생존율을 나타내었다. Fas-BAFFR을 갖도록 조작된 T 세포는 외생성 FasL에 대한 가장 큰 내성을 나타내었고, 이것은 공자극 도메인이 T 세포 생존에 유리함을 시사한다(도 28).
Fas-키메라는 FasL의 존재 하에서 증식을 향상시킨다.
변형된 Fas 수용체를 갖도록 조작된 T 세포가 사이토카인 회수 후 FasL 매개 세포 사멸로부터 보호되었기 때문에, 변형된 Fas 수용체를 갖도록 조작된 T 세포의 증식에 대한 외생성 FasL의 영향을 확인하고자 하였다. 변형된 Fas 수용체를 갖도록 조작된 T 세포를 항-CD3으로 활성화시켰고 3일 후 AlamarBlue를 통해 세포 밀도를 평가하였다. 외생성 FasL의 존재는 대조군 T 세포의 밀도를 낮추었다(도 29). Fas-TRUNC 수용체를 갖도록 조작된 T 세포를 사용하였을 때 세포 밀도의 유사한 감소가 관찰되었다. 그러나, 공자극 신호전달 도메인을 함유하는 Fas-키메라를 발현하도록 조작된 T 세포는 NGFR 대조군 조작된 T 세포에 비해 500 및 1000 ng/㎖ FasL의 존재 하에서 향상된 증식을 보여주었다(도 29). Fas-BAFFR을 발현하도록 조작된 T 세포는 FasL의 농도가 증가함에 따라 증식을 향상시키는 능력을 나타낸 반면, Fas-4-1BB를 갖도록 조작된 T 세포는 외생성 FasL에 의해 영향을 받지 않았다(도 29).
본원은 실시예를 참고함으로써 기재되어 있지만, 청구범위는 실시예에 기재된 실시양태에 의해 제한되어서는 안 되고, 전체로서 본 설명과 일치하는 가장 넓은 해석이 부여되어야 함을 이해해야 한다.
모든 간행물들, 특허들 및 특허출원들은 각각의 개별 간행물, 특허 또는 특허출원이 전체적으로 참고로 포함되는 것으로 구체적 및 개별적으로 표시된 것처럼 동일한 정도로 전체적으로 본원에 참고로 포함된다. 본원에서 용어가 본원에 참고로 포함된 문헌과 상이하게 정의된 것으로 발견되는 경우, 본원에서 제공된 정의가 그 용어에 대한 정의로서 사용되어야 한다.
Figure pct00005
표 1은 키메라 공자극 수용체 스크린을 위한 구축물 디자인을 보여준다. TNFR 융합 수용체는 시험관내에서 조작된 T 세포의 기능적 향상을 나타내므로, TNFR 수퍼패밀리 내에서 신규 공자극 도메인을 추구하는 것은 관심을 끈다. 공자극 스크린은 TNFR1 세포외 도메인과 TNFRSF 구성원의 공자극 신호전달 도메인 사이의 융합체의 T 세포 공자극 기능을 평가하도록 디자인된다. 상기 표는 스크린에서 각각의 구축물에 사용된 막횡단 및 공자극 도메인을 기술한다. 상기 표는 디자인된 CCR이 캐스파제 캐스케이드를 신호전달하는 것으로 알려진 고전적인 사멸 도메인을 함유하는지도 나열한다.
SEQUENCE LISTING <110> McMaster University <120> CHIMERIC COSTIMULATORY RECEPTORS AND METHODS AND USES THEREOF <130> 13888-P59885PC00 <140> PCT/CA2020/051245 <141> 2020-09-16 <150> US 62/900,911 <151> 2019-09-16 <160> 10 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 210 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 1 Gly Leu Ser Thr Val Pro Asp Leu Leu Leu Pro Leu Val Leu Leu Glu 1 5 10 15 Leu Leu Val Gly Ile Tyr Pro Ser Gly Val Ile Gly Leu Val Pro His 20 25 30 Leu Gly Asp Arg Glu Lys Arg Asp Ser Val Cys Pro Gln Gly Lys Tyr 35 40 45 Ile His Pro Gln Asn Asn Ser Ile Cys Cys Thr Lys Cys His Lys Gly 50 55 60 Thr Tyr Leu Tyr Asn Asp Cys Pro Gly Pro Gly Gln Asp Thr Asp Cys 65 70 75 80 Arg Glu Cys Glu Ser Gly Ser Phe Thr Ala Ser Glu Asn His Leu Arg 85 90 95 His Cys Leu Ser Cys Ser Lys Cys Arg Lys Glu Met Gly Gln Val Glu 100 105 110 Ile Ser Ser Cys Thr Val Asp Arg Asp Thr Val Cys Gly Cys Arg Lys 115 120 125 Asn Gln Tyr Arg His Tyr Trp Ser Glu Asn Leu Phe Gln Cys Phe Asn 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Claims (226)

  1. (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(Chimeric Costimulatory Receptor)(CCR) 핵산.
  2. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드가 TNFRSF의 상이한 구성원으로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  3. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 사멸 도메인을 가진 TNFRSF 구성원의 세포외 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  4. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 TNFR1, TNFR2, Fas, DR4, DR5, DR3, DR6, EDAR, XEDAR, TROY 또는 NGFR의 세포외 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  5. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 TNFR1의 세포외 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  6. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 TNFR2의 세포외 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  7. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 Fas의 세포외 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  8. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 DR4의 세포외 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  9. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 DR5의 세포외 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  10. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  11. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 2와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  12. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  13. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  14. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  15. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  16. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  17. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  18. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  19. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  20. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  21. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  22. 제1항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  23. 제1항에 있어서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  24. 제1항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  25. 제1항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  26. 제1항에 있어서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인이 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  27. 제1항에 있어서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인이 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  28. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  29. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  30. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및/또는 제2 폴리뉴클레오타이드가 링커에 의해 간접적으로 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  31. 제1항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및/또는 제3 폴리뉴클레오타이드가 링커에 의해 간접적으로 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  32. (a) 종양 괴사 인자 수용체 1(TNFR1)의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  33. 제32항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  34. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  35. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  36. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  37. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  38. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  39. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  40. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  41. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  42. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  43. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  44. 제32항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  45. 제32항에 있어서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  46. 제32항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  47. 제32항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  48. 제32항에 있어서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인이 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  49. 제32항에 있어서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인이 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  50. 제32항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  51. 제32항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  52. 제32항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및/또는 제2 폴리뉴클레오타이드가 링커에 의해 간접적으로 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  53. 제32항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및/또는 제3 폴리뉴클레오타이드가 링커에 의해 간접적으로 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  54. (a) 종양 괴사 인자 수용체 2(TNFR2)의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  55. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  56. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  57. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  58. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  59. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  60. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  61. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  62. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  63. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  64. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  65. 제54항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  66. 제54항에 있어서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  67. 제54항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  68. 제54항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  69. 제54항에 있어서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인이 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  70. 제54항에 있어서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인이 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  71. 제54항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  72. 제54항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  73. 제54항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및/또는 제2 폴리뉴클레오타이드가 링커에 의해 간접적으로 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  74. 제54항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및/또는 제3 폴리뉴클레오타이드가 링커에 의해 간접적으로 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  75. (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 6(TNFRSF6; Fas)의 세포외 도메인을 코딩하는 제1 폴리뉴클레오타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 폴리뉴클레오타이드; 및 (c) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 코딩하는 제3 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  76. 제75항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 2와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  77. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  78. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  79. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  80. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  81. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  82. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  83. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  84. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  85. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  86. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  87. 제75항에 있어서, 제3 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  88. 제75항에 있어서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  89. 제75항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  90. 제75항에 있어서, 제2 폴리뉴클레오타이드가 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 올리고펩타이드를 코딩하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  91. 제75항에 있어서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인이 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  92. 제75항에 있어서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인이 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  93. 제75항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제2 폴리뉴클레오타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  94. 제75항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및 제3 폴리뉴클레오타이드가 직접적으로 및/또는 간접적으로 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  95. 제75항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및/또는 제2 폴리뉴클레오타이드가 링커에 의해 간접적으로 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  96. 제75항에 있어서, 제1 폴리뉴클레오타이드 및/또는 제3 폴리뉴클레오타이드가 링커에 의해 간접적으로 제2 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  97. (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원의 세포외 도메인을 포함하는 제1 올리고펩타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 포함하는 제2 올리고펩타이드; 및 (c) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 포함하는 제3 올리고펩타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  98. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및 제3 올리고펩타이드가 TNFRSF의 상이한 구성원으로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  99. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 사멸 도메인을 가진 TNFRSF 구성원의 세포외 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  100. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 TNFR1, TNFR2, Fas, DR4, DR5, DR3, DR6, EDAR, XEDAR, TROY 또는 NGFR의 세포외 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  101. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 TNFR1의 세포외 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  102. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 TNFR2의 세포외 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  103. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 Fas의 세포외 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  104. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 DR4의 세포외 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  105. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 DR5의 세포외 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  106. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  107. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 서열번호 2와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  108. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  109. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  110. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  111. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  112. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  113. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  114. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  115. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  116. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  117. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  118. 제97항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  119. 제97항에 있어서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  120. 제97항에 있어서, 제2 올리고펩타이드가 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  121. 제97항에 있어서, 제2 올리고펩타이드가 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  122. 제97항에 있어서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인이 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  123. 제97항에 있어서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인이 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  124. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및 제2 올리고펩타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제3 폴리뉴클레오타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  125. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및 제3 올리고펩타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제2 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  126. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및/또는 제2 올리고펩타이드가 링커에 의해 간접적으로 제3 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  127. 제97항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및/또는 제3 올리고펩타이드가 링커에 의해 간접적으로 제2 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  128. (a) 종양 괴사 인자 수용체 1(TNFR1)의 세포외 도메인을 포함하는 제1 올리고펩타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 포함하는 제2 올리고펩타이드; 및 (c) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 포함하는 제3 올리고펩타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  129. 제128항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  130. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  131. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  132. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  133. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  134. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  135. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  136. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  137. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  138. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  139. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  140. 제128항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  141. 제128항에 있어서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  142. 제128항에 있어서, 제2 올리고펩타이드가 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  143. 제128항에 있어서, 제2 올리고펩타이드가 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  144. 제128항에 있어서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인이 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  145. 제128항에 있어서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인이 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  146. 제128항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및 제2 올리고펩타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제3 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  147. 제128항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및 제3 올리고펩타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제2 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  148. 제128항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및/또는 제2 올리고펩타이드가 링커에 의해 간접적으로 제3 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  149. 제128항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및/또는 제3 올리고펩타이드가 링커에 의해 간접적으로 제2 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  150. (a) 종양 괴사 인자 수용체 2(TNFR2)의 세포외 도메인을 포함하는 제1 올리고펩타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 포함하는 제2 올리고펩타이드; 및 (c) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 포함하는 제3 올리고펩타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  151. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  152. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  153. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  154. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  155. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  156. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  157. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  158. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  159. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  160. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  161. 제150항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  162. 제150항에 있어서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  163. 제150항에 있어서, 제2 올리고펩타이드가 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  164. 제150항에 있어서, 제2 올리고펩타이드가 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  165. 제150항에 있어서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인이 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  166. 제150항에 있어서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인이 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  167. 제150항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및 제2 올리고펩타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제3 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  168. 제150항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및 제3 올리고펩타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제2 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  169. 제150항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및/또는 제2 올리고펩타이드가 링커에 의해 간접적으로 제3 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  170. 제150항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및/또는 제3 올리고펩타이드가 링커에 의해 간접적으로 제2 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  171. (a) 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 6(TNFRSF6; Fas)의 세포외 도메인을 포함하는 제1 올리고펩타이드; (b) 막횡단 도메인 폴리펩타이드를 포함하는 제2 올리고펩타이드; 및 (c) 세포질 공자극 신호전달 도메인 폴리펩타이드를 포함하는 제3 올리고펩타이드를 포함하는 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  172. 제171항에 있어서, 제1 올리고펩타이드가 서열번호 2와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  173. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리(TNFRSF) 구성원으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  174. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  175. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 BAFFR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  176. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 4-1BB로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  177. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 CD27로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  178. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 HVEM으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  179. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 OX40으로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  180. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 GITR로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  181. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 TACI로부터의 세포질 공자극 신호전달 도메인을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  182. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 서열번호 3과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  183. 제171항에 있어서, 제3 올리고펩타이드가 서열번호 4와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  184. 제171항에 있어서, 막횡단 도메인 폴리펩타이드가 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 구성원으로부터의 막횡단 도메인 폴리펩타이드인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  185. 제171항에 있어서, 제2 올리고펩타이드가 서열번호 5와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  186. 제171항에 있어서, 제2 올리고펩타이드가 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산.
  187. 제171항에 있어서, 막횡단 도메인 및 세포질 공자극 신호전달 도메인이 동일한 공자극 신호전달 단백질로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  188. 제171항에 있어서, 막횡단 도메인 및 공자극 신호전달 도메인이 4-1BB, BAFFR, OX40, CD27, CD40, GITR, HVEM, OX40, RELT, TACI, TROY 또는 TWEAK로부터 유래한 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  189. 제171항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및 제2 올리고펩타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제3 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  190. 제171항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및 제3 올리고펩타이드가 직접적 및/또는 간접적으로 제2 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  191. 제171항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및/또는 제2 올리고펩타이드가 링커에 의해 간접적으로 제3 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  192. 제171항에 있어서, 제1 올리고펩타이드 및/또는 제3 올리고펩타이드가 링커에 의해 간접적으로 제2 올리고펩타이드에 연결된 것인 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  193. 서열번호 7과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  194. 서열번호 8과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  195. 서열번호 9와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  196. 서열번호 10과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 키메라 공자극 수용체(CCR) 폴리펩타이드.
  197. 제1항 내지 제96항 중 어느 한 항에 따른 핵산을 포함하는 T 세포.
  198. 제197항에 있어서, 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포 또는 감마-델타 T 세포인 T 세포.
  199. 제197항에 있어서, 표적 특이적 리간드를 인식할 수 있는 조작된 T 세포 수용체(TCR) 또는 합성 항원 수용체 폴리펩타이드를 코딩하는 제2 핵산을 추가로 포함하는 T 세포.
  200. 제197항에 있어서, 표적 특이적 리간드가 암 세포의 항원에 결합하는 것인 T 세포.
  201. 제197항에 있어서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드가 키메라 항원 수용체(CAR), T 세포 항원 커플러(TAC) 또는 BiTE인 T 세포.
  202. 제197항에 있어서, 합성 항원 수용체 폴리뉴클레오타이드가 T 세포 항원 커플러(TAC)인 T 세포.
  203. 제97항 내지 제194항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩타이드를 포함하는 T 세포.
  204. 제203항에 있어서, 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 조절 T 세포 또는 감마-델타 T 세포인 T 세포.
  205. 제203항에 있어서, 표적 특이적 리간드를 인식할 수 있는 조작된 T 세포 수용체(TCR) 또는 합성 항원 수용체 폴리펩타이드를 추가로 포함하는 T 세포.
  206. 제203항에 있어서, 표적 특이적 리간드가 암 세포의 항원에 결합하는 것인 T 세포.
  207. 제203항에 있어서, 합성 항원 수용체 폴리펩타이드가 키메라 항원 수용체(CAR), T 세포 항원 커플러(TAC) 또는 BiTE인 T 세포.
  208. 제203항에 있어서, 합성 항원 수용체 폴리펩타이드가 T 세포 항원 커플러(TAC)인 T 세포.
  209. 암의 치료를 필요로 하는 개체에서 암을 치료하는 방법으로서, 제197항 내지 제208항 중 어느 한 항에 따른 T 세포를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  210. 제209항에 있어서, 암이 백혈병 또는 림프종인 방법.
  211. 제209항에 있어서, 암이 혼합형 백혈병(MLL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 림프모구성 백혈병(ALL), B 대세포 림프종, 미만성 B 대세포 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 고등급 B 세포 림프종, 또는 소포성 림프종으로부터 비롯된 B 대세포 림프종인 방법.
  212. 제209항에 있어서, 암이 폐암, 유방암, 결장암, 다발성 골수종, 교모세포종, 위암, 난소암, 위장암, 대장암, 요로상피암, 자궁내막암 또는 흑색종인 방법.
  213. 제209항에 있어서, 암이 폐암인 방법.
  214. 제209항에 있어서, 암이 유방암인 방법.
  215. 제209항에 있어서, 암이 결장암인 방법.
  216. 제209항에 있어서, 암이 다발성 골수종인 방법.
  217. 제209항에 있어서, 암이 교모세포종인 방법.
  218. 제209항에 있어서, 암이 위암인 방법.
  219. 제209항에 있어서, 암이 난소암인 방법.
  220. 제209항에 있어서, 암이 위장암인 방법.
  221. 제209항에 있어서, 암이 대장암인 방법.
  222. 제209항에 있어서, 암이 요로상피암인 방법.
  223. 제209항에 있어서, 암이 자궁내막암인 방법.
  224. 제209항에 있어서, 암이 흑색종인 방법.
  225. (a) 제197항 내지 제208항 중 어느 한 항에 따른 T 세포; 및 (b) 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
  226. (a) 제1항 내지 제96항 중 어느 한 항에 따른 키메라 공자극 수용체(CCR) 핵산; 및 (b) 포유동물 세포에서 작용하는 프로모터를 포함하는 벡터 구축물.
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