KR20220021136A - Oral composition comprising milk exosome containing therapeutic and method for manufacturing thereof - Google Patents
Oral composition comprising milk exosome containing therapeutic and method for manufacturing thereof Download PDFInfo
- Publication number
- KR20220021136A KR20220021136A KR1020200101570A KR20200101570A KR20220021136A KR 20220021136 A KR20220021136 A KR 20220021136A KR 1020200101570 A KR1020200101570 A KR 1020200101570A KR 20200101570 A KR20200101570 A KR 20200101570A KR 20220021136 A KR20220021136 A KR 20220021136A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- composition
- milk
- therapeutic agent
- exosomes
- present
- Prior art date
Links
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 148
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 130
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 title claims abstract description 94
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 title claims abstract description 94
- 239000008267 milk Substances 0.000 title claims abstract description 94
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 69
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 65
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 48
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 23
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 20
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 claims description 17
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 claims description 17
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 16
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 12
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 12
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 12
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 claims description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 8
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 claims description 7
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 7
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 7
- 108020004417 Untranslated RNA Proteins 0.000 claims description 7
- 102000039634 Untranslated RNA Human genes 0.000 claims description 7
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 claims description 6
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 108091006091 regulatory enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 5
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 5
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 claims description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 4
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 4
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 4
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 3
- -1 iRNA Proteins 0.000 claims 2
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 26
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 20
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 8
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 6
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 6
- 102100032187 Androgen receptor Human genes 0.000 description 5
- 101710095342 Apolipoprotein B Proteins 0.000 description 5
- 102100040202 Apolipoprotein B-100 Human genes 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 230000037440 gene silencing effect Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 102000030169 Apolipoprotein C-III Human genes 0.000 description 3
- 108010056301 Apolipoprotein C-III Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 108091007767 MALAT1 Proteins 0.000 description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 3
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010068597 Bulbospinal muscular atrophy congenital Diseases 0.000 description 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 108090000079 Glucocorticoid Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100033417 Glucocorticoid receptor Human genes 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 208000037262 Hepatitis delta Diseases 0.000 description 2
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 2
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000027747 Kennedy disease Diseases 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 2
- 208000006269 X-Linked Bulbo-Spinal Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 108091007428 primary miRNA Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 102100026152 1-acyl-sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase epsilon Human genes 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 241001416153 Bos grunniens Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000691569 Homo sapiens 1-acyl-sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase epsilon Proteins 0.000 description 1
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108091033773 MiR-155 Proteins 0.000 description 1
- 108091062140 Mir-223 Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 1
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000014450 RNA Polymerase III Human genes 0.000 description 1
- 108010078067 RNA Polymerase III Proteins 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000283011 Rangifer Species 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010390 abdominal obesity-metabolic syndrome 1 Diseases 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003006 anti-agglomeration agent Substances 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229960004676 antithrombotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- TZRFSLHOCZEXCC-HIVFKXHNSA-N chembl2219536 Chemical compound N1([C@H]2C[C@@H]([C@H](O2)COP(O)(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)S[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)S[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)S[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)S[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)S[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2CO)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OCCOC)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OCCOC)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)SP(O)(=O)OC[C@H]2O[C@H](C[C@@H]2SP(O)(=O)OC[C@H]2O[C@H](C[C@@H]2SP(O)(=O)OC[C@H]2O[C@H](C[C@@H]2SP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H]([C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OCCOC)SP(O)(=O)OC[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)SP(O)(=O)OC[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)OCCOC)SP(O)(=O)OC[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)SP(O)(=O)OC[C@H]2[C@H](O)[C@@H]([C@H](O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)C=C(C)C(N)=NC1=O TZRFSLHOCZEXCC-HIVFKXHNSA-N 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- FDJOLVPMNUYSCM-UVKKECPRSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2,7, Chemical compound [Co+3].N#[C-].C1([C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)[N-]\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O FDJOLVPMNUYSCM-UVKKECPRSA-L 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000010262 intracellular communication Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 208000011661 metabolic syndrome X Diseases 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091007426 microRNA precursor Proteins 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 235000021243 milk fat Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 108091060283 mipomersen Proteins 0.000 description 1
- 229960004778 mipomersen Drugs 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000002487 multivesicular body Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 235000020200 pasteurised milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 239000006208 topical dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/5005—Wall or coating material
- A61K9/5063—Compounds of unknown constitution, e.g. material from plants or animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
Abstract
Description
본 명세서는 치료제가 봉입된 우유 엑소좀을 포함하는 경구형 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.The present specification relates to an oral composition comprising milk exosomes encapsulated in a therapeutic agent and a method for preparing the same.
세포외소포체(extracellular vesicles)는 세포에서 분비되는 수 nm에서 수 ㎛에 이르는 미세한 크기의 입자를 지칭하며, 종래에는 이러한 세포외소포체가 세포에서 분비되는 찌꺼기로 여겨졌으나, 최근에는 세포외소포체들이 임상학적으로 의미있게 여겨지며, 다양한 연구가 진행되고 있다. 세포외소포체는 미세소포체라고 지칭된다. 미세소포체는 혈장, 소변, 모유, 양수 등 넓은 범위에서 존재하며, 생체 내에서 중요한 기능을 가 지고 있다. 특히, 기능성 단백질, RNA 및 항원을 포함하는 세포외 미세소포체는 세포내의 소통의 새로운 방식으로 사용된다. 세포외소포체는 유래된 세포의 성질 및 상태에 따라 특이적인 유전물질과 생체활성 인자들이 포함되어 있는 것으로 알려지고 있으며, 엑소좀은 기본적으로 세포로부터 유래한 것이기 때문에 다른 나노입자와는 달리 생체 친화적이고, 내부나 표면에 약물이나 생물학적 활성성분을 담지하거나 표지할 수 있다는 점 때문에 약물 전달체나 화장품이나 의약품의 원료 물질로 사용하고자 하는 시도가 지속적으로 이루어지고 있다. Extracellular vesicles (extracellular vesicles) refer to particles with a microscopic size ranging from a few nm to several μm secreted from cells. It is considered scientifically meaningful, and various studies are being conducted. The extracellular vesicles are referred to as microvesicles. Microvesicles exist in a wide range of plasma, urine, breast milk, and amniotic fluid, and have important functions in vivo. In particular, extracellular microvesicles containing functional proteins, RNAs and antigens are used as new modes of intracellular communication. It is known that the extracellular vesicle contains specific genetic material and bioactive factors depending on the nature and state of the cell from which it is derived. However, due to the fact that drugs or biologically active ingredients can be loaded or labeled inside or on the surface, attempts to use them as drug carriers or raw materials for cosmetics or pharmaceuticals are continuously being made.
하지만, 비경제적인 생산성 (고비용, 저수율), 효율적인 치료제 담지 기술의 부재 등으로 개발에 어려움을 겪고 있으며, 세포외소포체의 투여경로를 다양화하기 어렵고, 특히 경구 투여할 경우 물질의 안정성과 안전성을 확보할 수 없다는 점이 개발의 허들로 지적된다.However, development is difficult due to uneconomical productivity (high cost, low yield) and lack of efficient therapeutic agent loading technology. The fact that it cannot be done is pointed out as a hurdle in development.
상기와 같은 문제를 해결하기 위하여, 본 발명자들은 최적의 방법을 통해 우유 엑소좀을 분리하고 상기 우유 엑소좀의 내부에 치료제를 봉입한 조성물에 대한 연구를 하여, 본 발명을 완성하였다.In order to solve the above problems, the present inventors have isolated the milk exosomes through an optimal method and conducted a study on a composition in which a therapeutic agent is encapsulated in the milk exosomes, thereby completing the present invention.
이에 본 발명은 우유 엑소좀; 및 우유 엑소좀 내부에 봉입된 치료제를 포함하는 조성물에 있어서, 상기 조성물은 경구형 제형인, 조성물을 제공하고자 한다.Accordingly, the present invention is a milk exosome; And in a composition comprising a therapeutic agent encapsulated inside the milk exosome, the composition is an oral dosage form, to provide a composition.
또한, 본 발명은 상기와 같은 조성물을 약학 조성물로 제공하고자 한다.In addition, the present invention is to provide the composition as described above as a pharmaceutical composition.
또한, 본 발명은 상기와 같은 조성물을 약학 조성물 중 특히 백신 조성물로 제공하고자 한다.In addition, the present invention is to provide such a composition as a vaccine composition in particular among pharmaceutical compositions.
또한, 본 발명은 상기와 같은 조성물을 건강기능식품 조성물로 제공하고자 한다.In addition, the present invention is to provide the composition as described above as a health functional food composition.
또한, 본 발명은 상기 조성물의 제조 방법을 제공하고자 한다.In addition, the present invention is to provide a method for preparing the composition.
본 발명의 목적은 이상에서 언급한 목적으로 제한되지 않는다. 본 발명의 목적은 이하의 설명으로 보다 분명해질 것이며, 특허청구범위에 기재된 수단 및 그 조합으로 실현될 것이다.The object of the present invention is not limited to the object mentioned above. The objects of the present invention will become more apparent from the following description, and will be realized by means and combinations thereof described in the claims.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기의 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides the following composition.
본 발명의 일측면은 우유 엑소좀; 및 우유 엑소좀 내부에 봉입된 치료제;를 포함하는 조성물에 있어서, 상기 조성물은 경구형 제형인, 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention is milk exosomes; and a therapeutic agent encapsulated inside the milk exosomes, wherein the composition is an oral dosage form, providing a composition.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 치료제는 전기천공법(Electroporation)으로 우유 엑소좀 내로 봉입되며, 상기 전기천공법은 300 내지 700 v의 전압,및 7 내지 13의 펄스의 조건에서 봉입되는, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the therapeutic agent is encapsulated into milk exosomes by electroporation, wherein the electroporation method is encapsulated under the conditions of a voltage of 300 to 700 v, and a pulse of 7 to 13, the composition provides
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 치료제는 항체, 호르몬, 대사조절 효소, 면역조절 효소, 인터페론, 인터루킨, 성장 조절 효소 및 백신 중에서 선택된 어느 하나인, 조성물을 제공한다. In one aspect of the present invention, the therapeutic agent is any one selected from antibodies, hormones, metabolic regulatory enzymes, immunomodulatory enzymes, interferon, interleukin, growth regulatory enzymes and vaccines, it provides a composition.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 치료제는 단일 가닥 DNA, 이중 가닥 DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, 안티센스 RNA 및 LNA 중에서 선택된 어느 하나 이상의 핵산인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the therapeutic agent is any one or more nucleic acids selected from single-stranded DNA, double-stranded DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, antisense RNA and LNA, it provides a composition.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 치료제는 펩타이드 또는 단백질인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the therapeutic agent is a peptide or protein, provides a composition.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 동결 건조한 제형인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the composition provides a freeze-dried formulation, the composition.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함하는, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the composition provides a composition further comprising a pharmaceutically acceptable carrier.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 우유 엑소좀은 직경이 30 nm 내지 300 nm 이며, 상기 치료제는 siRNA 또는 mRNA 이며; 상기 조성물은 백신용 조성물이며, 상기 조성물은 대상에게 경구로 투여되는 것인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the milk exosomes have a diameter of 30 nm to 300 nm, and the therapeutic agent is siRNA or mRNA; The composition is a composition for a vaccine, and the composition provides a composition that is orally administered to a subject.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the composition provides a pharmaceutical composition, the composition.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 건강기능식품 조성물인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the composition provides a health functional food composition, the composition.
본 발명의 다른 측면은 상기 본 발명의 일측면에 따른 조성물의 제조 방법에 있어서, (a) 우유로부터 원심분리 및 여과를 통해 우유 엑소좀을 분리하는 단계; 및 (b) 분리된 우유 엑소좀에 치료제를 전기천공법으로 봉입하는 단계;를 포함하는, 조성물의 제조 방법을 제공한다.Another aspect of the present invention provides a method for preparing a composition according to an aspect of the present invention, comprising the steps of: (a) separating milk exosomes from milk through centrifugation and filtration; And (b) encapsulating a therapeutic agent in the separated milk exosomes by electroporation; it provides a method for producing a composition comprising a.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 (b) 단계에서 전기천공법은 300 내지 700 v의 전압, 및 7 내지 13의 펄스의 조건에서 치료제를 우유 엑소좀 내로 봉입하는, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the electroporation method in step (b) provides a method for preparing a composition, wherein the therapeutic agent is encapsulated into milk exosomes under the conditions of a voltage of 300 to 700 v, and a pulse of 7 to 13. .
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 (a) 단계에서의 우유는 인간, 소, 양, 염소, 산양, 낙타, 버팔로 및 야크 유래 우유인, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the milk in step (a) is human, cow, sheep, goat, goat, camel, buffalo and yak-derived milk, it provides a method for producing a composition.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 (a) 단계에서의 우유는 초유(colostrum)인, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the milk in step (a) is colostrum (colostrum), it provides a method for producing a composition.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 (a) 단계는 1 내지 8 ℃에서, 2000 내지 130,000 g의 힘으로 10분 내지 7시간 동안 원심분리하며, 포어 사이즈가 0.01 um 내지 1 um 인 여과막을 통하여 여과하는, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, in step (a), centrifugation is performed at 1 to 8 ° C. with a force of 2000 to 130,000 g for 10 minutes to 7 hours, and filtration through a filtration membrane having a pore size of 0.01 um to 1 um It provides a method for preparing the composition.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 (a) 단계는 2 내지 6 ℃에서, 초유의 우유를 2000 내지 4000 g의 힘으로 15분 내지 45분 동안 원심분리하는 제 1 원심분리 단계; 제 1 원심분리 단계 이후 10,000 내지 14,000 g의 힘으로 30분 내지 90분 동안 원심분리하는 제 2 원심분리 단계; 제 2 원심분리 단계 이후 30,000 내지 40,000 g의 힘으로 30분 내지 90분 동안 원심분리하는 제 3 원심분리 단계; 제 3 원심분리 단계 이후 60,000 내지 80,000 g의 힘으로 150분 내지 210분 동안 원심분리하는 제 4 원심분리 단계; 제 4 원심분리 단계 이후 포어 사이즈가 0.7 um 내지 0.9 um 인 여과막을 통하여 여과하는 제 1 여과 단계; 제 1 여과 단계 이후 포어 사이즈가 0.4 um 내지 0.5 um 인 여과막을 통하여 여과하는 제 2 여과 단계; 제 2 여과 단계 이후 포어 사이즈가 0.1 um 내지 0.3 um 인 여과막을 통하여 여과하는 제 3 여과 단계; 및 제 3 여과 단계 이후 90,000 내지 120,000 g의 힘으로 30 분 내지 90 분 동안 원심분리하는 제 5 원심분리 단계;를 포함하는, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the step (a) comprises a first centrifugation step of centrifuging colostrum milk at 2 to 6 ° C. with a force of 2000 to 4000 g for 15 minutes to 45 minutes; a second centrifugation step of centrifuging for 30 minutes to 90 minutes at a force of 10,000 to 14,000 g after the first centrifugation step; a third centrifugation step of centrifuging for 30 to 90 minutes with a force of 30,000 to 40,000 g after the second centrifugation step; a fourth centrifugation step of centrifuging for 150 minutes to 210 minutes at a force of 60,000 to 80,000 g after the third centrifugation step; A first filtration step of filtering through a filtration membrane having a pore size of 0.7 um to 0.9 um after the fourth centrifugation step; a second filtration step of filtering through a filtration membrane having a pore size of 0.4 um to 0.5 um after the first filtration step; A third filtration step of filtering through a filtration membrane having a pore size of 0.1 um to 0.3 um after the second filtration step; And after the third filtration step, a fifth centrifugation step of centrifuging for 30 minutes to 90 minutes with a force of 90,000 to 120,000 g; provides a method for preparing a composition comprising a.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 방법은 (b) 단계 이후 치료제가 봉입된 우유 엑소좀 조성물을 동결 건조 하는 단계를 추가로 포함하는, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the method provides a method for preparing a composition, further comprising the step of freeze-drying the milk exosome composition encapsulated in the therapeutic agent after step (b).
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 치료제는 단일 가닥 DNA, 이중 가닥 DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, 안티센스 RNA 및 LNA 중에서 선택된 어느 하나 이상의 핵산인, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the therapeutic agent is any one or more nucleic acids selected from single-stranded DNA, double-stranded DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, antisense RNA, and LNA, it provides a method for preparing a composition.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 치료제는 펩타이드 또는 단백질인, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the therapeutic agent is a peptide or protein, provides a method for preparing a composition.
본 발명의 일측면에 따른 조성물 또는 본 발명의 다른 측면에 따라 제조된 조성물은 pH 변화에 따라 안정적인 엑소좀 사이즈 변화를 유지한다.A composition according to one aspect of the present invention or a composition prepared according to another aspect of the present invention maintains a stable exosome size change according to a change in pH.
본 발명의 일측면에 따른 조성물 또는 본 발명의 다른 측면에 따라 제조된 조성물은 장기 보관시에도 안정적인 사이즈를 유지한다.The composition according to one aspect of the present invention or the composition prepared according to another aspect of the present invention maintains a stable size even during long-term storage.
본 발명의 일측면에 따른 조성물 또는 본 발명의 다른 측면에 따라 제조된 조성물은 우유 엑소좀의 반복적인 동결 및 해동 후에도 안정적인 입자 크기 및 모양을 유지 한다.The composition according to one aspect of the present invention or the composition prepared according to another aspect of the present invention maintains a stable particle size and shape even after repeated freezing and thawing of milk exosomes.
본 발명의 일측면에 따른 조성물 또는 본 발명의 다른 측면에 따라 제조된 조성물은 경구형 제형으로 투여가능하다.The composition according to one aspect of the present invention or the composition prepared according to another aspect of the present invention can be administered as an oral dosage form.
본 발명의 일측면에 따른 조성물 또는 본 발명의 다른 측면에 따라 제조된 조성물은 경구형 제형으로 투여하는 경우 생체 이용률이 우수하다.The composition according to one aspect of the present invention or the composition prepared according to another aspect of the present invention has excellent bioavailability when administered as an oral dosage form.
본 발명의 일측면에 따른 조성물 또는 본 발명의 다른 측면에 따라 제조된 조성물은 우유 엑소좀의 특성을 변화시키지 않고 안정적으로 목적하는 치료제를 엑소좀에 투여하기 때문에 치료 효능이 우수하다.The composition according to one aspect of the present invention or the composition prepared according to another aspect of the present invention has excellent therapeutic efficacy because the desired therapeutic agent is stably administered to the exosomes without changing the properties of the milk exosomes.
본 발명의 일측면에 따른 조성물 또는 본 발명의 다른 측면에 따라 제조된 조성물은 경구 투여시에 치료제의 표적 세포로의 전달 효율이 우수하다.The composition according to one aspect of the present invention or the composition prepared according to another aspect of the present invention has excellent delivery efficiency of a therapeutic agent to a target cell when administered orally.
본 발명의 일측면에 따른 조성물 또는 본 발명의 다른 측면에 따라 제조된 조성물은 우유 엑소좀을 포함하며, 우유 엑소좀은 생체 외 세포로부터 추출하는 엑소좀에 비해 그 수율이 매우 높고, 현저히 저렴한 제조단가를 가진다.The composition according to one aspect of the present invention or the composition prepared according to another aspect of the present invention includes milk exosomes, and milk exosomes have a very high yield and significantly cheaper production compared to exosomes extracted from cells in vitro. have a price
본 발명의 일측면에 따른 조성물 또는 본 발명의 다른 측면에 따라 제조된 조성물은 우유 엑소좀을 포함하며, 우유 엑소좀은 세포 엑소좀에 비해 면역 거부 반응 등 부작용이 거의 없어 높은 안전성을 가진다.The composition according to one aspect of the present invention or the composition prepared according to another aspect of the present invention includes milk exosomes, and milk exosomes have high safety because they have few side effects, such as immune rejection, compared to cell exosomes.
본 발명의 효과는 이상에서 언급한 효과로 한정되지 않는다. 본 발명의 효과는 이하의 설명에서 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 할 것이다.The effects of the present invention are not limited to the above-mentioned effects. It should be understood that the effects of the present invention include all effects that can be inferred from the following description.
도 1은 본원발명 실시예 1의 우유 엑소좀의 분리 방법이다.
도 2는 본원발명 실시예 2-1의 결과이다.
도 3은 본원발명 실시예 2-2의 결과이며, 도 3a는 FBS 엑소좀, 도 3b는 실시예 1의 엑소좀이다.
도 4는 본원발명 실시예 2-3에서, 동결 해동 안정성을 투과전자현미경으로 촬영한 사진이다.
도 5는 본원발명 실시예 2-3에서, 동결 해동 안정성을 동적 산란 분석을 통해 입도 분포를 분석한 결과이다.
도 6는 본원발명 실시예 2-3에서, 동결/해동 시의 결과이다.
도 7은 본원발명 실시예 3에서 경구 투여 후 시간별 혈액 채취 결과이다.
도 8은 본원발명 실시예 3에서 경구 투여 후 FMT 결과이다.
도 9은 본원발명 실시예 3에서 경구 투여 후 소장 적출 후 공초점 현미경으로 Cy5.5 레이블링된 우유 유래 엑소좀을 확인한 결과이다.
도 10은 본원발명 실시예 4에서 전기천공을 도입할 경우의 최적의 조건을 확인한 결과이다.
도 11은 본원발명 실시예 4에서 siRNA 봉입된 엑소좀이 유전자 침묵 효과가 일어나는지를 확인한 결과이다.1 is a method for separating milk exosomes of Example 1 of the present invention.
2 is a result of Example 2-1 of the present invention.
Figure 3 is the result of Example 2-2 of the present invention, Figure 3a is the FBS exosome, Figure 3b is the exosome of Example 1.
4 is a picture taken with a transmission electron microscope for freeze-thaw stability in Example 2-3 of the present invention.
5 is a result of analyzing the particle size distribution through dynamic scattering analysis for freeze-thaw stability in Example 2-3 of the present invention.
6 is a result of freezing/thawing in Example 2-3 of the present invention.
7 is a blood sampling result for each hour after oral administration in Example 3 of the present invention.
8 is an FMT result after oral administration in Example 3 of the present invention.
9 is a result of confirming the Cy5.5-labeled milk-derived exosomes under a confocal microscope after oral administration in Example 3 of the present invention after small intestine extraction.
10 is a result confirming the optimal conditions when introducing electroporation in Example 4 of the present invention.
11 is a result confirming whether the gene silencing effect occurs in the siRNA-encapsulated exosomes in Example 4 of the present invention.
달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 성분, 반응 조건, 성분의 함량을 표현하는 모든 숫자, 값 및/또는 표현은, 이러한 숫자들이 본질적으로 다른 것들 중에서 이러한 값을 얻는 데 발생하는 측정의 다양한 불확실성이 반영된 근사치들이므로, 모든 경우 "약"이라는 용어에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 기재에서 수치범위가 개시되는 경우, 이러한 범위는 연속적이며, 달리 지적되지 않는 한 이러한 범 위의 최소값으로부터 최대값이 포함된 상기 최대값까지의 모든 값을 포함한다. 더 나아가, 이러한 범위가 정수를 지칭하는 경우, 달리 지적되지 않는 한 최소값으로부터 최대값이 포함된 상기 최대값까지를 포함하는 모든 정수가 포함된다.Unless otherwise specified, all numbers, values, and/or expressions expressing ingredients, reaction conditions, and amounts of ingredients used herein refer to a variety of measures that may occur in obtaining such values, among others, in which such numbers are inherently different. Since they are approximations reflecting uncertainty, it should be understood as being modified by the term “about” in all cases. Also, where the disclosure discloses numerical ranges, such ranges are continuous and inclusive of all values from the minimum to the maximum inclusive of the range, unless otherwise indicated. Furthermore, when such ranges refer to integers, all integers inclusive from the minimum to the maximum inclusive are included, unless otherwise indicated.
본 명세서에 있어서, 범위가 변수에 대해 기재되는 경우, 상기 변수는 상기 범위의 기재된 종료점들을 포함하는 기재된 범위 내의 모든 값들을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들면, "5 내지 10"의 범위는 5, 6, 7, 8, 9, 및 10의 값들뿐만 아니라 6 내지 10, 7 내지 10, 6 내지 9, 7 내지 9 등의 임의의 하위 범위를 포함하고, 5.5, 6.5, 7.5, 5.5 내지 8.5 및 6.5 내지 9 등과 같은 기재된 범위의 범주에 타당한 정수들 사이의 임의의 값도 포함하는 것으로 이해될 것이다. 또한 예를 들면, "10% 내지 30%"의 범위는 10%, 11%, 12%, 13% 등의 값들과 30%까지를 포함하는 모든 정수들뿐만 아니라 10% 내지 15%, 12% 내지 18%, 20% 내지 30% 등의 임의의 하위 범위를 포함하고, 10.5%, 15.5%, 25.5% 등과 같이 기재된 범위의 범주 내의 타당한 정수들 사이의 임의의 값도 포함하는 것으로 이해될 것이다.In this specification, when a range is described for a variable, the variable will be understood to include all values within the stated range including the stated endpoints of the range. For example, a range of “5 to 10” includes the values of 5, 6, 7, 8, 9, and 10, as well as any subranges such as 6 to 10, 7 to 10, 6 to 9, 7 to 9, etc. It will be understood to include any value between integers that are appropriate for the scope of the recited range, such as 5.5, 6.5, 7.5, 5.5 to 8.5 and 6.5 to 9, and the like. Also for example, ranges from "10% to 30%" include values of 10%, 11%, 12%, 13%, etc. and all integers up to and including 30%, as well as 10% to 15%, 12% to It will be understood to include any subranges such as 18%, 20% to 30%, etc., as well as any value between reasonable integers within the scope of the recited ranges, such as 10.5%, 15.5%, 25.5%, and the like.
이하, 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 우유로부터 분리된 엑소좀에 백신 및 치료제가 될 수 있는 단백질, 핵산과 같은 치료제 혹은 물질을 봉입함으로서 생체 내 다양한 환경 및 면역 반응을 피해 높은 효율로 안전하고 용이하게 전달할 수 있는 경구 투여형 약물 전달체 및 이의 제조방법을 제공하고자 한다.The present invention is an oral dosage form that can be safely and easily delivered with high efficiency avoiding various environments and immune responses in vivo by encapsulating therapeutic agents or substances such as proteins and nucleic acids that can be vaccines and therapeutic agents in exosomes isolated from milk An object of the present invention is to provide a drug delivery system and a method for preparing the same.
이하, 본 발명의 다양한 측면에 대하여 설명한다.Hereinafter, various aspects of the present invention will be described.
본 발명의 일측면은 우유 엑소좀; 및 우유 엑소좀 내부에 봉입된 치료제;를 포함하는 조성물에 있어서, 상기 조성물은 경구형 제형인, 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention is milk exosomes; and a therapeutic agent encapsulated inside the milk exosomes, wherein the composition is an oral dosage form, providing a composition.
본 명세서에서 용어 "엑소좀(exosome)"은 많은 어쩌면 혈액, 소변, 및 세포배양의 배양배지를 포함하는 모든 생물학적 액체에 존재할지 모르는 세포-유래의 소포(vesicle)로 세포외 소포(extracellular vesicle) 또는 소수포(microvesicle)라고도 불리운다. 엑소좀은 다소포체(multivesicular body)가 세포막과 융합할 때 세포로부터 분비되거나 세포막을 통해 직접 분비된다. As used herein, the term “exosome” refers to many cell-derived vesicles that may be present in any biological liquid, including possibly blood, urine, and the culture media of cell cultures, which are extracellular vesicles. Also called microvesicles. Exosomes are secreted from the cell when the multivesicular body fuses with the cell membrane or directly through the cell membrane.
"엑소좀" 이라고 하는 용어는 "미세소포" , "리포좀" , "엑소좀형 입자" , "엑소좀형 소포" , "나노 벡터" , "아키솜(archeosome)" , "락토솜(lactosome)" , "세포 외 소포(extracellular vesicle)", "아르고솜(argosome)", "아포토시스 소체(apoptotic body)" 및 "엑소좀형 소포(exosome-like vesicle)"으로 불릴 수 있다.The term "exosome" refers to "microvesicle", "liposome", "exosome-like particle", "exosome-like vesicle", "nano vector", "archeosome", "lactosome", It may be called "extracellular vesicle", "argosome", "apoptotic body" and "exosome-like vesicle".
일구현예에서, 본원발명의 엑소좀은 20 nm 내지 500 nm의 직경이다. 일부 실시예에서는 엑소좀은 30 nm 내지 190 nm 또는 25 nm 내지 180 nm의 크기이다. 일부 실시예에서는 엑소좀은 30 nm 내지 170 nm의 크기이다. 일부 실시예에서는 엑소좀은 40 nm 내지 160 nm의 크기이다. 일부 실시예에서는 엑소좀은 50 nm 내지 150nm 또는 60 nm 내지 140 nm, 70 nm 내지 130 nm, 80 nm 내지 120 nm 또는 90nm 내지 110 nm의 직경이다. 일부 실시예에서는 엑소좀은 약 20 nm, 25 nm, 30 nm, 35 nm, 50 nm, 75 nm, 100 nm, 110 nm, 125 nm 또는 150 nm의 직경이다. 일부 실시예에서는 우유에서 단리 또는 유도된 엑소좀 조성물 또는 복수의 엑소좀 중의 평균 엑소좀 크기는 약 20 nm, 약 25 nm, 약 30 nm, 약 35 nm, 약 50 nm, 약 75 nm, 약 100 nm, 약 110 nm, 약 125 nm 또는 약 150 nm;또는 20 nm 내지 200 nm, 25 nm 내지 250 nm, 30 nm 내지 180 nm, 40 nm 내지 170 nm, 50 nm 내지 160 nm, 50 nm 내지 150 nm, 60 nm 내지 140 nm, 70 nm 내지 130 nm, 80 nm 내지 120 nm 또는 90 nm 내지 110 nm의 평균 직경이다.In one embodiment, the exosomes of the present invention have a diameter of 20 nm to 500 nm. In some embodiments, the exosomes are between 30 nm and 190 nm or between 25 nm and 180 nm in size. In some embodiments, the exosomes are between 30 nm and 170 nm in size. In some embodiments, the exosomes are between 40 nm and 160 nm in size. In some embodiments, exosomes are 50 nm to 150 nm or 60 nm to 140 nm in diameter, 70 nm to 130 nm, 80 nm to 120 nm or 90 nm to 110 nm in diameter. In some embodiments, the exosomes are about 20 nm, 25 nm, 30 nm, 35 nm, 50 nm, 75 nm, 100 nm, 110 nm, 125 nm, or 150 nm in diameter. In some embodiments, the average exosome size of the composition or plurality of exosomes isolated or derived from milk is about 20 nm, about 25 nm, about 30 nm, about 35 nm, about 50 nm, about 75 nm, about 100 nm, about 110 nm, about 125 nm, or about 150 nm; or 20 nm to 200 nm, 25 nm to 250 nm, 30 nm to 180 nm, 40 nm to 170 nm, 50 nm to 160 nm, 50 nm to 150 nm , 60 nm to 140 nm, 70 nm to 130 nm, 80 nm to 120 nm or 90 nm to 110 nm.
본 명세서에서 "우유(milk)"는 영양을 아이에게 제공하기 위해 성숙한 포유동물의 유선에 의해 생산되는 단백질, 지방, 락토스 및 비타민 및 미네랄을 함유하는 불투명한 액체이다. 일구현예에서는 "우유"는 초유를 추가로 포함한다. 초유(colostrum)는 분만 직후, 즉 분만 후 4 내지 5일 까지 포유동물의 유선에 의해 분비되는 액체로서, 항체 및 미네랄이 풍부한 액체이다.As used herein, "milk" is an opaque liquid containing proteins, fats, lactose, and vitamins and minerals produced by the mammary gland of a mature mammal to provide nutrition to the child. In one embodiment, "milk" further includes colostrum. Colostrum is a liquid secreted by the mammary gland of a mammal immediately after delivery, that is, from 4 to 5 days after delivery, and is a liquid rich in antibodies and minerals.
"우유 유래" 또는 "초유 유래"가 우유 또는 초유 유래의 엑소좀으로 사용될 경우, 이는 상기 유래 환경에서 단리되었거나 또는 다른 방법으로 조작된 엑소좀이며, 따라서, 천연의 산물이 아닌 엑소좀 혹은 미세소포를 가리킨다. 이것에 관해 "우유 유래 엑소좀" 및 "초유 유래 엑소좀"이라고 하는 용어는 본 명세서에서는 우유 또는 초유에서 단리 혹은 분리된 엑소좀에 관해 각각 "우유 엑소좀" 또는 "초유 엑소좀"이라고 하는 어구와 호환적으로 사용된다. 또한 일부 실시예에서는 "우유 유래"라고 하는 용어는 본원발명의 일부 구현예를 설명하기 위해 "우유에서 단리되었다" 또는 "우유에서 분리되었다"라고 하는 용어와 호환적으로 사용된다.When “milk derived” or “colostrum-derived” is used as milk or colostrum-derived exosomes, they are exosomes isolated from the originating environment or otherwise engineered, and, therefore, exosomes or microvesicles that are not natural products. points to In this regard, the terms “milk exosome” and “colostrum-derived exosome” are used herein as the phrase “milk exosome” or “colostrum exosome” for exosomes isolated or isolated from milk or colostrum, respectively. used interchangeably with Also, in some embodiments, the term “derived from milk” is used interchangeably with the terms “isolated from milk” or “isolated from milk” to describe some embodiments of the present invention.
일부 실시예에서는 본 발명은 치료제를 봉입한 엑소좀을 제공한다. 본 명세서에서 사용될 경우, "치료제를 봉입한 엑소좀"에 관한 "봉입했다"라고 하는 용어는 엑소좀의 내측에 봉입된;엑소좀의 지질막과 회합한 또는 그 안에 부분적으로 포매(embedding)된(즉 엑소좀의 내부 내측에 부분적으로 돌출된);지질막 및 관련 성분의 외측 부분과 회합 또는 결합한(즉 엑소좀의 외측에 부분적으로 돌출되었거나 또는 완전하게 외측에 있다);또는 엑소좀의 지질막 내에 전체적으로 배치된(즉 지질막 내에 전체적으로 포함된다) 하나 또는 그것을 초과하는 치료제를 가지는 엑소좀을 가리킨다. 따라서, 일부 실시예에서는 치료제는 엑소좀의 내측에 봉입되어 있다. 일부 실시예에서는 치료제는 엑소좀의 지질막과 회합하고 있거나 또는 그 안에 부분적으로 포매되어 있다(즉 엑소좀의 내부 내측에 부분적으로 돌출되어 있다). 일부 실시예에서는 치료제는 지질막의 외측 부분과 회합 또는 결합되어 있다(즉 엑소좀의 외측에 부분적으로 돌출되어 있다). 일부 실시예에서는 치료제는 엑소좀의 지질막 내에 전체적으로 배치되어 있다(즉 지질막 내에 전체적으로 포함된다). 일부 실시예에서는 엑소좀은 단일 치료제가 부하되어 있다. 일부 실시예에서는 엑소좀은 2개의(또는 그것을 초과한다) 다른 치료제가 봉입되어 있다. 일부 실시예에서는 엑소좀은 2개 또는 그것을 초과하는 분자 또는 복사의 단일 치료제 또는 2개의(또는 그것을 초과한다) 다른 치료제가 봉입되어 있다. 일부 실시예에서는 엑소좀은 3개 또는 그것을 초과하는 분자 또는 복사의 단일 치료제 또는 2개의(또는 그것을 초과한다) 다른 치료제가 봉입되어 있다. 일부 실시예에서는 엑소좀은 2~5개의 분자 또는 복사의 단일 치료제 또는 2개의(또는 그것을 초과한다) 다른 치료제가 봉입되어 있다. 일부 실시예에서는 엑소좀 또는 그 의약 조성물은 1 내지 4,000개, 10 내지 4,000개, 50 내지 3,500개, 100 내지 3,000개, 200 내지 2,500개, 300 내지 1,500개, 500 내지 1,200개, 750 내지 1,000개, 1 내지 2,000개, 1 내지 1,000개, 1 내지 500개, 10 내지 400개, 50 내지 300개, 1 내지 250개, 1 내지 100개, 2 내지 50개, 2 내지 25개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 3 내지 50개, 3 내지 25개, 3 내지 25개, 3 내지 10개, 4 내지 50개, 4 내지 25개, 4 내지 15개, 4 내지 10개, 5 내지 50개, 5 내지 25개, 5 내지 15개 또는 5 내지 10개의 분자 또는 복사의 단일 치료제 또는 2개의(또는 그것을 초과한다) 다른 치료제가 봉입되어 있다.In some embodiments, the present invention provides an exosome encapsulating a therapeutic agent. As used herein, the term "encapsulated" with respect to "exosome encapsulated with a therapeutic agent" refers to encapsulated inside the exosome; associated with or partially embedded in the lipid membrane of the exosome ( i.e. partially protruding inside the inner side of the exosome); associated with or associated with the outer part of the lipid membrane and related components (i.e., partially protruding or completely outside the outer side of the exosome); or entirely within the lipid membrane of the exosome. Refers to an exosome having one or more therapeutic agents disposed within (ie entirely contained within the lipid membrane). Accordingly, in some embodiments, the therapeutic agent is encapsulated inside the exosome. In some embodiments, the therapeutic agent is associated with or partially embedded in the lipid membrane of the exosome (ie, partially protrudes from the inside of the exosome). In some embodiments, the therapeutic agent is associated with or associated with an outer portion of the lipid membrane (ie, partially protrudes on the outer side of the exosome). In some embodiments, the therapeutic agent is disposed entirely within the lipid membrane of the exosome (ie, entirely contained within the lipid membrane). In some embodiments, the exosomes are loaded with a single therapeutic agent. In some embodiments, the exosomes contain two (or more) different therapeutic agents. In some embodiments, exosomes are encapsulated with two or more molecules or copies of a single therapeutic agent or two (or more) different therapeutic agents. In some embodiments, exosomes contain three or more molecules or copies of a single therapeutic agent or two (or more) different therapeutic agents. In some embodiments, exosomes are encapsulated with 2-5 molecules or copies of a single therapeutic agent or two (or more) different therapeutic agents. In some embodiments, exosomes or pharmaceutical compositions thereof are 1 to 4,000, 10 to 4,000, 50 to 3,500, 100 to 3,000, 200 to 2,500, 300 to 1,500, 500 to 1,200, 750 to 1,000 , 1 to 2,000, 1 to 1,000, 1 to 500, 10 to 400, 50 to 300, 1 to 250, 1 to 100, 2 to 50, 2 to 25, 2 to 15 , 2 to 10, 3 to 50, 3 to 25, 3 to 25, 3 to 10, 4 to 50, 4 to 25, 4 to 15, 4 to 10, 5 to 50 , 5 to 25, 5 to 15 or 5 to 10 molecules or copies of a single therapeutic agent or two (or more) other therapeutic agents are encapsulated.
일부 실시예에서는 엑소좀은 미세소포, 리포좀, 엑소좀, 엑소좀형 입자 또는 소포, 유지방구 피막, 나노 벡터, 아키오솜, 락토좀, 세포외소포, 아르고솜, 아포토시스 소체, 엑소좀형 소포, 미립자에서 선택된다. 일부 실시예에서는 엑소좀은 우유 유래 엑소좀이다. 일부 실시예에서는 우유 유래 엑소좀은 소, 인간, 버팔로, 염소, 양, 낙타, 로바, 말, 순록, 무스 또는 야크 유래의 우유 또는 초유에서 유래한다(예를 들면 단리, 분리 또는 조작된다). 일부 실시예에서는 우유는 소에서 유래한다.In some embodiments, exosomes are microvesicles, liposomes, exosomes, exosome-type particles or vesicles, milk fat capsule, nano vectors, akiosomes, lactosomes, extracellular vesicles, argosomes, apoptotic vesicles, exosome-type vesicles, microparticles is chosen In some embodiments, the exosome is an exosome derived from milk. In some embodiments, milk-derived exosomes are derived (eg, isolated, isolated, or engineered) from milk or colostrum from bovine, human, buffalo, goat, sheep, camel, robar, horse, reindeer, moose, or yak. In some embodiments, the milk is from cattle.
다양한 치료제는 본 발명에 의한 미세소포 내로의 봉입에 적합하다. 일부 실시예에서는 치료제는 생물 제제이다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 iRNA, siRNA, miRNA, mRNA, ncRNA 또는 다른 올리고뉴클레오타이드 치료제에서 선택된다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 호르몬(예를 들면 어느 조직에 의해 생산되고 혈류에 의해 다른 조직에 운반되어 생리학적 활성, 예를 들면 성장 또는 대사를 일으키는 성장 호르몬, 부갑상선 호르몬 또는 인슐린 또는 다른 물질, 예를 들면 펩타이드 또는 스테로이드);인터페론(예를 들면 바이러스 감염 및 기타 자극에 응답해 세포에 의해 통상 생산되는 단백질);인터류킨(예를 들면 사이토카인 단백질, 예를 들면 다른 면역 세포의 분열 및 분화의 유도에 관여하는 것 등;성장 인자(예를 들면 비타민 B12 등의 물질 또는 성장, 예를 들면 세포 성장을 촉진하는 인터류킨);단일 클론 항체(mAb);폴리펩타이드, 예를 들면 10개 또는 그것을 초과하는 50개 미만의 아미노산을 함유하는 펩타이드;단백질, 예를 들면 50개 또는 그것을 초과하는 아미노산을 함유하는 단백질, 또는 약 10 kD 내지 약 30 kD, 또는 약 30 kD 내지 약 150또는 약 300 kD의 질량을 가지는 단백질;백신;진단제;항혈전 용해제;독소;또는 항독소에서 선택된다.A variety of therapeutic agents are suitable for inclusion into microvesicles according to the present invention. In some embodiments, the therapeutic agent is a biologic. In some embodiments, the biologic is selected from iRNA, siRNA, miRNA, mRNA, ncRNA or other oligonucleotide therapeutics. In some embodiments, the biologic is a hormone (eg, growth hormone, parathyroid hormone or insulin or other substance produced by one tissue and transported by the bloodstream to another tissue to cause a physiological activity, eg, growth or metabolism, eg. eg peptides or steroids); interferons (eg proteins normally produced by cells in response to viral infections and other stimuli); interleukins (eg cytokine proteins eg inducing division and differentiation of other immune cells) growth factors (e.g. substances such as vitamin B 12 or interleukins that promote growth, e.g., cell growth); monoclonal antibodies (mAbs); polypeptides, e.g. 10 or more a peptide containing less than 50 amino acids; It is selected from a protein having a vaccine; a vaccine; a diagnostic agent; an antithrombotic agent; a toxin; or an antitoxin.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 치료제는 전기천공법(Electroporation)으로 우유 엑소좀 내로 봉입되며, 상기 전기천공법은 300 내지 700 v의 전압,및 7 내지 13의 펄스의 조건에서 봉입되는, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the therapeutic agent is encapsulated into milk exosomes by electroporation, wherein the electroporation method is encapsulated under the conditions of a voltage of 300 to 700 v, and a pulse of 7 to 13, the composition provides
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 치료제는 항체, 호르몬, 대사조절 효소, 면역조절 효소, 인터페론, 인터루킨, 성장 조절 효소 및 백신 중에서 선택된 어느 하나인, 조성물을 제공한다. In one aspect of the present invention, the therapeutic agent is any one selected from antibodies, hormones, metabolic regulatory enzymes, immunomodulatory enzymes, interferon, interleukin, growth regulatory enzymes and vaccines, it provides a composition.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 치료제는 단일 가닥 DNA, 이중 가닥 DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, 안티센스 RNA 및 LNA 중에서 선택된 어느 하나 이상의 핵산인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the therapeutic agent is any one or more nucleic acids selected from single-stranded DNA, double-stranded DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, antisense RNA and LNA, it provides a composition.
마이크로 RNA(miRNA) 일부 실시예에서는 치료제는 miRNA이다. 당업자에 의해 인식되도록, miRNA는 이들의 생물학적으로 활성한 형태로 약17 내지 약 25 뉴클레오타이드 염기(nt) 길이의 저분자 비코드 RNA이다. 일부 실시예에서는 miRNA는 17 내지 25nt 길이이다. miRNA는 표적 mRNA 번역을 감소시킴으로써 전사 후적으로 유전자 발현을 조절한다. miRNA는 음의 조절 인자로서 기능한다고 생각된다. 일반적으로 3개 형태 miRNA가 있는:일차 miRNA(프리 miRNA), 미성숙 miRNA(프레 miRNA) 및 성숙 miRNA. 일차 miRNA는 약수백 염기 내지 1 kb 초과의 스템 루프 구조 전사 산물로서 발현된다. 프리 miRNA 전사 산물은 Drosha에 의해 핵 내에서 절단된다. Drosha는 서로 차이의 절단으로 RNA 이중 사슬을 절단해, 5'인산 및 3'말단의 2 nt의 오버행이 남는다. 절단 산물인 미성숙 miRNA(프레 miRNA)는 약60 내지 약 110 nt 길이이며 접혀 헤어핀 구조가 형성된다. 프레 miRNA는 Ran-GTP 및 에크스포틴 5에 의해 핵에서 세포질로 수송된다. 프레 miRNA는 Dicer 라고 칭해지는 다른 RNaseII 엔도뉴클레아제에 의해 세포질 내에서 추가로 프로세싱된다. Dicer는 5'인산 및 3'오버행을 인식하고 스템-루프 접합부에서 루프를 절단하고, miRNA 이중 사슬을 형성한다. miRNA 이중 사슬은 RNA 유도성 사이렌싱 복합체(RISC)에 결합하고 안티센스 가닥이 우선적으로 분해되고 센스 가닥 성숙 miRNA가 RISC를 그 표적 부위로 유도한다. 그것은 , 약17 내지 약 25 nt 길이의 생물학적으로 활성한 형태의 miRNA인 성숙 miRNA이다. 일부 실시예에서는 본 개시 주제의 미세소포에 의해 봉입되는 miRNA는 miR-155(이것은 T세포 및 B세포 성숙 및 선천성 면역 반응의 조절 인자로서 작용하는 것이 공지이거나) 또는 miR-223(이것은 호중구 증식 및 활성화의 조절 인자로서 공지이다)에서 선택된다. Micro RNA (miRNA) In some embodiments, the therapeutic agent is a miRNA. As will be appreciated by those of ordinary skill in the art, miRNAs in their biologically active form are small molecule noncoding RNAs of about 17 to about 25 nucleotide bases (nt) in length. In some embodiments, the miRNA is between 17 and 25 nt in length. miRNAs regulate gene expression post-transcriptionally by reducing target mRNA translation. miRNAs are thought to function as negative regulators. There are generally three forms of miRNAs: primary miRNA (pre-miRNA), immature miRNA (pre-miRNA) and mature miRNA. Primary miRNAs are expressed as stem-loop structural transcription products of about a few hundred bases to greater than 1 kb. Free miRNA transcripts are cleaved in the nucleus by Drosha. Drosha cleaves the double-stranded RNA by differential cleavage, leaving a 5' phosphate and 2 nt overhang at the 3' end. The cleavage product, immature miRNA (pre-miRNA), is about 60 to about 110 nt in length and folds to form a hairpin structure. Pre-miRNA is transported from the nucleus to the cytoplasm by Ran-GTP and
저분자 간섭 RNA(siRNA) 일부 실시예에서는 치료제는 siRNA이다. 저분자 간섭 RNA 또는 사이렌싱 RNA라고도 하는 소분자 간섭 RNA(siRNA)는(miRNA와 같은 길이의)20~25염기 대 길이의 이중가닥 RNA 분자의 클래스이다. siRNA는 일반적으로 RNA 간섭(RNAi) 경로를 통해 이들의 생물학적 효과를 발휘한다. siRNA는 일반적으로 리보뉴클레아제 Dicer에 의한보다 긴 사슬 전구체 RNA의 효소적 개열에 의해 생산되는 2 뉴클레오타이드의 오버행을 가진다. siRNA는 RNA 간섭(RNAi) 경로를 통한 파괴를 위해 이들의 RNA를 타겟팅함으로써 특정 유전자 발현을 제한할 수 있다. 그것은, 전사 후에 mRNA를 분해하고 번역을 방해함으로써 상보적 뉴클레오티드 배열을 가지는 특정 유전자 발현을 방해한다. siRNA는 또한 RNAi 관련 경로에 있어서 항바이러스 기구로서 작용할 수 있거나, 또는 게놈의 크로마틴 구조의 형성에 있어서 역할을 할 수 있다.Small Molecular Interfering RNA (siRNA) In some embodiments, the therapeutic agent is an siRNA. Small molecule interfering RNA (siRNA), also known as small molecule interfering RNA or silencing RNA, is a class of double-stranded RNA molecules of 20 to 25 bases in length (same length as miRNA). siRNAs exert their biological effects generally through the RNA interference (RNAi) pathway. siRNAs generally have overhangs of 2 nucleotides produced by enzymatic cleavage of the longer-chain precursor RNA by the ribonuclease Dicer. siRNAs can restrict specific gene expression by targeting their RNA for destruction via the RNA interference (RNAi) pathway. It disrupts expression of specific genes with complementary nucleotide sequences by disrupting translation and degradation of mRNA after transcription. siRNAs may also act as antiviral machinery in RNAi-associated pathways, or may play a role in the formation of chromatin structures of the genome.
치료제는 또한 mRNA, 안티센스 RNA, 또는 본 명세서에 기재되는 다른 핵산 및 이들의 유사체에서 선택될 수 있다.The therapeutic agent may also be selected from mRNA, antisense RNA, or other nucleic acids described herein and analogs thereof.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 치료제는 펩타이드 또는 단백질인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the therapeutic agent is a peptide or protein, provides a composition.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 동결 건조한 제형인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the composition provides a freeze-dried formulation, the composition.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함하는, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the composition provides a composition further comprising a pharmaceutically acceptable carrier.
상기 약학적으로 허용되는 담체는 부형제, 희석제 또는 보조제를 의미한다. 담체의 예로는 락토오스, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 검, 알긴산 염, 젤라틴, 인산칼슘, 규산 칼슘, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 생리 식염수, PBS와 같은 완충액, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 마그네슘 스테아레이트 및 미네랄 오일로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 조성물은 충진제, 항-응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 포함할 수 있다.The pharmaceutically acceptable carrier means an excipient, diluent or adjuvant. Examples of carriers include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, polyvinylpyrrolidone, physiological saline, buffers such as PBS, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. The composition may include a filler, an anti-agglomeration agent, a lubricant, a wetting agent, a flavoring agent, an emulsifier, a preservative, and the like.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 우유 엑소좀은 직경이 30 nm 내지 300 nm 이며, 상기 치료제는 siRNA 또는 mRNA 이며; 상기 조성물은 백신용 조성물이며, 상기 조성물은 대상에게 경구로 투여되는 것인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the milk exosomes have a diameter of 30 nm to 300 nm, and the therapeutic agent is siRNA or mRNA; The composition is a composition for a vaccine, and the composition provides a composition that is orally administered to a subject.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the composition provides a pharmaceutical composition, the composition.
상기 약학적 조성물은 통상적인 방법에 따라 임의의 제형으로 제조될 수 있다. 상기 조성물은 예를 들어 경구 투여형(예: 분말, 정제, 캡슐, 시럽, 환제 및 과립으로 제제화될 수 있다. 상기 조성물은 또한 전신 투여제형 또는 국소 제형으로 제제화될 수 있다. 유효물질의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질환의 중증도, 약물 형태, 투여 경로 및 투여 간격에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택 될 수있다. 이러한 투여량은 예를 들어 약 0.001 mg/kg 체중 내지 약 100 mg/kg 체중, 약 0.01 mg/kg 체중 내지 약 10 mg/kg 체중 또는 약 0.1 mg/kg 체중 내지 약 1 mg/kg 체중의 범위일 수 있다. 투여는 하루에 한 번, 하루에 여러 번, 일주일에 한 번, 2 주에 한 번, 3 주에 한 번, 4 주에 한 번 또는 일 년에 한 번 수행될 수 있다.The pharmaceutical composition may be prepared in any dosage form according to a conventional method. The composition may be formulated, for example, in oral dosage forms (eg powders, tablets, capsules, syrups, pills and granules). The composition may also be formulated in systemic dosage forms or topical dosage forms. Preferred administration of active substances The amount varies depending on the patient's condition and body weight, disease severity, drug form, administration route and administration interval, but can be appropriately selected by those skilled in the art.This dosage is, for example, about 0.001 mg/kg body weight to about 100 mg/kg body weight, about 0.01 mg/kg body weight to about 10 mg/kg body weight, or about 0.1 mg/kg body weight to about 1 mg/kg body weight.Dosage is once a day, several times a day, It can be done once a week, once every two weeks, once every three weeks, once every four weeks or once a year.
일부 실시예에서는 생물 제제는 질환 또는 상태, 예를 들면 폐, 눈, 간 또는 바이러스성 질환 또는 상태의 치료, 예방 또는 개선에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 국제공개 제2009/073809호, 국제공개 제2006/020768호 또는 국제공개 제2006/078278호에 개시되어 있는 iRNA 또는 올리고뉴클레오타이드 또는 그 유사체에서 선택된다.In some embodiments, the biologic is useful for the treatment, prevention or amelioration of a disease or condition, such as a lung, eye, liver, or viral disease or condition. In some embodiments, the biologic is selected from an iRNA or an oligonucleotide or an analog thereof disclosed in WO 2009/073809, WO 2006/020768 or WO 2006/078278.
일부 실시예에서는 생물 제제는 고콜레스테롤 혈증 또는 고지혈증의 치료, 예방 또는 개선에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 국제공개 제2012/058693호, 국제공개 제2011/038031호, 국제공개 제2011/028938호, 국제공개 제2010/148013호, 국제공개 제2011/053994호, 국제공개 제2007/134161호, 국제공개 제2009/134487호, 국제공개 제2015/123264호, 국제공개 제2011/029016호, 국제공개 제2009/129465호 또는 국제공개 제2009/111658호에 개시되어 있는 iRNA 또는 올리고뉴클레오타이드 또는 그 유사체에서 선택된다.In some embodiments, the biologic is useful for the treatment, prevention or amelioration of hypercholesterolemia or hyperlipidemia. In some embodiments, the biologic is International Publication No. 2012/058693, International Publication No. 2011/038031, International Publication No. 2011/028938, International Publication No. 2010/148013, International Publication No. 2011/053994, International Publication No. iRNA disclosed in 2007/134161, International Publication No. 2009/134487, International Publication No. 2015/123264, International Publication No. 2011/029016, International Publication No. 2009/129465 or International Publication No. 2009/111658 or oligonucleotides or analogs thereof.
일부 실시예에서는 생물 제제는 의약품으로서 및 소정의 유전자 발현을 저해하기 위한 방법에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 국제공개 제2000/044895호에 개시되어 있는 iRNA 또는 올리고뉴클레오타이드 또는 그 유사체에서 선택된다.In some embodiments, the biologic is useful as a pharmaceutical and in a method for inhibiting expression of a given gene. In some embodiments, the biologic is selected from the iRNA or oligonucleotide or analog thereof disclosed in WO 2000/044895.
일부 실시예에서는 생물 제제는 C형 간염 바이러스(HCV) 감염증의 치료, 예방 또는 개선에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 미국 특허 제 8,273,868호에 개시되어 있는 iRNA 또는 올리고뉴클레오타이드 또는 그 유사체에서 선택된다.In some embodiments, the biologic is useful for treating, preventing, or ameliorating a hepatitis C virus (HCV) infection. In some embodiments, the biologic is selected from an iRNA or oligonucleotide or analog thereof disclosed in US Pat. No. 8,273,868.
일부 실시예에서는 생물 제제는 B형 간염 바이러스(HBV), HCV 또는 D형 간염 바이러스(HDV) 감염증의 치료, 예방 또는 개선에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 예를 들면 적어도 2개의 다른 RNA 폴리머라제 III 프로모터를 포함한 수식 HBV 타겟팅 올리고뉴클레오타이드 또는 발현 구축물이며 각 프로모터는 RNA 이펙터 분자를 코딩하는 핵산 서열로 작동 가능하게 연결되었다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 피험체에 있어서의 유전자의 발현을 검출하는 방법 또는 과민증 반응을 경감시키는 방법에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 표적 배열과 상동한 배열을 포함한 부분 이중가닥 RNA 분자이다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 완전 이중가닥 RNA이다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 미국 특허 제 9,352,048호, 미국 특허출원공개 제2015/0119445호, 미국 특허 제 8,350,021호, 유럽 특허출원공개 제 1833967호, 유럽 특허출원공개 제 2316942호, 미국 특허출원공개 제2012/0028348호, 미국 특허 제 7,985,581호, 유럽 특허출원공개 제 2169072호, 유럽 특허출원공개 제 1784492호, 미국 특허출원공개 제2016/0122759호, 유럽 특허출원공개 제 2994167호, 국제공개 제2014/182661호, 미국 특허출원공개 제2014/0275211호, 유럽 특허출원공개 제 2723865호, 국제공개 제2012/177906호, 유럽 특허출원공개 제 1171586호, 유럽 특허출원공개 제 1171586호, 유럽 특허출원공개 제 1597351호, 유럽 특허출원공개 제 1597351호, 국제공개 제2016/077321호 또는 국제공개 제2016/077349호에 개시되어 있는 iRNA 또는 올리고뉴클레오타이드 또는 그 유사체에서 선택된다.In some embodiments, the biologic is useful for treating, preventing, or ameliorating a hepatitis B virus (HBV), HCV, or hepatitis D virus (HDV) infection. In some embodiments, the biologic is a modified HBV targeting oligonucleotide or expression construct comprising, for example, at least two different RNA polymerase III promoters, each promoter being operably linked with a nucleic acid sequence encoding an RNA effector molecule. In some embodiments, the biologic is useful in a method of detecting the expression of a gene or of alleviating a hypersensitivity reaction in a subject. In some embodiments, the biologic is a partial double-stranded RNA molecule comprising a sequence homologous to the target sequence. In some embodiments, the biologic is a fully double-stranded RNA. In some embodiments, the biologic is disclosed in U.S. Patent No. 9,352,048, U.S. Patent Application Publication No. 2015/0119445, U.S. Patent No. 8,350,021, European Patent Application Publication No. 1833967, European Patent Application Publication No. 2316942, U.S. Patent Application Publication No. 2012/0028348, US Patent No. 7,985,581, European Patent Application Publication No. 2169072, European Patent Application Publication No. 1784492, US Patent Application Publication No. 2016/0122759, European Patent Application Publication No. 2994167, International Publication No. 2014/ 182661, US Patent Application Publication No. 2014/0275211, European Patent Application Publication No. 2723865, International Publication No. 2012/177906, European Patent Application Publication No. 1171586, European Patent Application Publication No. 1171586, European Patent Application Publication No. 1597351, European Patent Application Publication No. 1597351, International Publication No. 2016/077321 or International Publication No. 2016/077349 iRNA or oligonucleotide or an analog thereof.
일부 실시예에서는 생물 제제는 단일가닥 RNA 바이러스, 예를 들면 HCV의 복제 모듈레이트에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 이중가닥 RNA 매개성 유전자 사이렌싱(RNAi)을 통해 바이러스 복제를 모듈레이트하기 위한 방법 및 조성물에 유용하고 항바이러스 방법 및 조성물은 단일가닥 RNA 바이러스의 역쇄복제 중간체를 우선적으로 타겟팅한다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 이중가닥(ds) RNA 이펙터 분자 및 하나 또는 그것을 초과하는 이펙터 상보체를 포함한다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 피험체의 조직에 있어서의 유전자의 활성에 대해 분석하기 위한 방법 및 RNAi 컴퍼턴트(competent) 시스템의 선택 dsRNA 이펙터 분자에 의한 표적 뉴클레오티드 서열의 dsRNA 매개성 사이렌싱 또는 저해를 평가하기 위한 방법에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 미국 특허 제 9,198,927호, 미국 특허출원공개 제2010/0267805호, 유럽 특허출원공개 제 2325314호, 유럽 특허출원공개 제 1797185호, 유럽 특허출원공개 제 2772541호, 미국 특허출원공개 제2015/0315593호, 미국 특허 제 8,987,227호, 미국 특허 제 8,614,198호, 미국 특허출원공개 제2014/0141512호, 미국 특허출원공개 제2010/0324117호, 유럽 특허출원공개 제 2173900호, 미국 특허출원공개 제2012/0028348호, 미국 특허 제 7,985,581호, 유럽 특허출원공개 제 2169072호, 유럽 특허출원공개 제 1784492호, 미국 특허출원공개 제2016/0122759호, 유럽 특허출원공개 제 2994167호, 국제공개 제2014/182661호, 미국 특허출원공개 제2014/0275211호, 유럽 특허출원공개 제 2723865호, 국제공개 제2012/177906호, 미국 특허출원공개 제2012/0046478호, 유럽 특허출원공개 제 2068886호, 국제공개 제2008/042973호, 유럽 특허출원공개 제 1597351호 또는 유럽 특허출원공개 제 1597351호에 개시되어 있는 iRNA 또는 올리고뉴클레오타이드 또는 그 유사체에서 선택된다. In some embodiments, the biologic is useful for modulating the replication of a single-stranded RNA virus, such as HCV. In some embodiments, the biologic is useful in methods and compositions for modulating viral replication via double-stranded RNA mediated gene silencing (RNAi), wherein the antiviral methods and compositions preferentially target the reverse-stranded replication intermediate of a single-stranded RNA virus. target In some embodiments, the biologic comprises a double-stranded (ds) RNA effector molecule and one or more effector complements. In some embodiments, the biologic comprises a method for assaying for activity of a gene in a tissue of a subject and dsRNA-mediated silencing or inhibition of a target nucleotide sequence by a selected dsRNA effector molecule of an RNAi competent system. It is useful as a method for evaluation. In some embodiments, the biologic is disclosed in U.S. Patent No. 9,198,927, U.S. Patent Application Publication No. 2010/0267805, European Patent Application Publication No. 2325314, European Patent Application Publication No. 1797185, European Patent Application Publication No. 2772541, U.S. Patent Application Publication No. 2015/0315593, U.S. Patent No. 8,987,227, U.S. Patent No. 8,614,198, U.S. Patent Application Publication No. 2014/0141512, U.S. Patent Application Publication No. 2010/0324117, European Patent Application Publication No. 2173900, U.S. Patent Application Publication No. 2012/0028348, US Patent No. 7,985,581, European Patent Application Publication No. 2169072, European Patent Application Publication No. 1784492, US Patent Application Publication No. 2016/0122759, European Patent Application Publication No. 2994167, International Publication No. 2014/182661, US Patent Application Publication No. 2014/0275211, European Patent Application Publication No. 2723865, International Publication No. 2012/177906, US Patent Application Publication No. 2012/0046478, European Patent Application Publication No. 2068886, International iRNA or oligonucleotides or analogs thereof disclosed in Publication No. 2008/042973, European Patent Application Publication No. 1597351 or European Patent Application Publication No. 1597351.
일부 실시예에서는 생물 제제는 안드로겐 수용체 매개성 질환의 치료, 예방 또는 개선에 유용하다. 특정 실시예에서는 안드로겐 수용체 매개성 질환은 케네디병이며 피험체는 케네디병과 관련된 안드로겐 수용체(AR) 유전자의 돌연변이, 예를 들면 CAG 트리뉴클레오타이드 반복의 확대를 가진다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 AR에 타겟팅되는 안티센스 화합물이다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 키네신(kinsesin) 형 1을 타겟팅한다. 일부 실시예에서는 질환은 암 또는 과잉 증식성 장애, 예를 들면 전립선암 (예를 들면 거세 저항성 전립선암 ) 또는 유방암, 난소암, 위암 및 방광암이다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 동물의 핵 내 지지 RNA(nrRNA) 또는 피루브산 키나제 M전사 산물의 발현을 감소시키거나, 또는 동물의 핵 내 지지 RNA 또는 피루브산 키나제 M전사 산물과 관련된 질환 또는 장애의 증후 처치, 개선, 지연 또는 경감에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 전이 관련폐선암전사 산물-1(MALAT-1) RNA 및/또는 단백질의 발현을 감소시킨다. 일부 실시예에서는 MALAT-1 발현의 감소는 암 , 예를 들면 결장암 , 장 암 , 폐암(예를 들면 비소세포 폐암), 간암 및/또는 전립선암을 치료한다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 유럽 특허출원공개 제 2991661호, 유럽 특허출원공개 제 2906225호, 유럽 특허출원공개 제 2906226호, 유럽 특허출원공개 제 2794880호, 유럽 특허출원공개 제 2253706호, 국제공개 제2016/061263호 또는 유럽 특허출원공개 제 2595664호에 개시되어 있는 iRNA, 올리고뉴클레오타이드 또는 그 유사체에서 선택된다.In some embodiments, the biologic is useful for treating, preventing, or ameliorating an androgen receptor mediated disease. In a specific embodiment, the androgen receptor mediated disorder is Kennedy's disease and the subject has a mutation in the androgen receptor (AR) gene associated with Kennedy's disease, eg, an enlargement of a CAG trinucleotide repeat. In some embodiments, the biologic is an antisense compound that is targeted to AR. In some embodiments, the biologic targets kinsesin
일부 실시예에서는 생물 제제는 염증성 질환, 심혈관 질환 또는 대사성 질환, 장애 또는 상태의 치료, 예방 또는 개선에 유용하다. 예시적인 질환, 장애 및 상태로서는 후레드리크손 I형 지질 이상증, FCS 및 LPLD;및 췌장염, 심혈관 질환 및 대사장애를 들 수 있다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 후레드리크손 I형 지질 이상증, FCS 또는 LPLD를 가지는 환자의 HDL 레벨을 증가시키고 및/또는 TG 대 HDL의 비율을 개선하고 혈장 지질 및 혈장 포도당을 감소시킨다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 아폴리포 단백질 CIII(ApoCIII)를 감소시켜 ApoCIII와 관련된 질환, 장애 또는 상태를 치료, 예방 또는 개선한다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 아폴리포 단백질 B(ApoB) 또는 AGPAT5를 타겟팅한다. 일부 실시예에서는 아폴리포 단백질 B(ApoB)를 타겟팅하는 생물 제제로서는 미포메르센 및 ApoB를 타겟팅하는 다른 안티센스 화합물을 들 수 있다. 예시적인 생물 제제로서는 결합체 올리고머 화합물, 예를 들면 고친화성 뉴클레오타이드 수식을 포함한 짧은 안티센스 화합물, 또는 다른 iRNA 또는 올리고뉴클레오타이드 또는 그 유사체, 예를 들면 유럽 특허출원공개 제 2015758호, 유럽 특허출원공개 제 2458006호, 유럽 특허출원공개 제 2991656호, 유럽 특허출원공개 제 2956176호, 유럽 특허출원공개 제 2701713호, 유럽 특허출원공개 제 2521556호, 유럽 특허출원공개 제 2408796호 또는 국제공개 제2016/077704호에 개시되어 있는 것을 들 수 있다.In some embodiments, the biologic is useful for the treatment, prevention or amelioration of an inflammatory disease, cardiovascular disease or metabolic disease, disorder or condition. Exemplary diseases, disorders and conditions include predrixone type I dyslipidemia, FCS and LPLD; and pancreatitis, cardiovascular disease and metabolic disorders. In some embodiments, the biologic increases HDL levels and/or improves the ratio of TG to HDL and decreases plasma lipids and plasma glucose in patients with predrixone type I dyslipidemia, FCS or LPLD. In some embodiments, the biologic reduces apolipoprotein CIII (ApoCIII) to treat, prevent, or ameliorate a disease, disorder or condition associated with ApoCIII. In some embodiments, the biologic targets apolipoprotein B (ApoB) or AGPAT5. In some embodiments, biologics that target apolipoprotein B (ApoB) include mipomersen and other antisense compounds that target ApoB. Exemplary biologic agents include conjugate oligomeric compounds, such as short antisense compounds with high affinity nucleotide modifications, or other iRNAs or oligonucleotides or analogs thereof, such as European Patent Application Publication No. 2015758, European Patent Application Publication No. 2458006 , European Patent Application Publication No. 2991656, European Patent Application Publication No. 2956176, European Patent Application Publication No. 2701713, European Patent Application Publication No. 2521556, European Patent Application Publication No. 2408796 or International Publication No. 2016/077704 what has been done can be heard.
일부 실시예에서는 생물 제제는 열충격단백질과 관련된 질환 및 상태의 치료, 예방 또는 개선에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 당뇨병, 비만증, 대사증후군 X, 고혈당증 또는 고지혈증의 치료, 예방 또는 개선에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 (i) 동물의 혈중 포도당 레벨의 감소, (ii) 글루코코르티코이드 수용체와 관련된 질환 또는 상태를 가지는 동물의 처치, (iii) 동물에 있어서의 혈중 지질 레벨의 감소, 또는 (iv) 동물에 있어서의 체지방량의 감소에 유용하다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 글루코코르티코이드 수용체의 발현을 모듈레이트한다. 일부 실시예에서는 생물 제제는 유럽 특허출원공개 제 2363480호 또는 국제공개 제2016/077837호에 개시되어 있는 iRNA 또는 올리고뉴클레오타이드 또는 그 유사체에서 선택된다. 일부 실시예에서는 질환 또는 상태는 uORF 함유 유전자, 예를 들면 국제공개 제2016/077837호의 표 1 및 2에 개시되어 있는 것에 관련된다.In some embodiments, the biologic is useful for the treatment, prevention, or amelioration of diseases and conditions associated with heat shock protein. In some embodiments, the biologic is useful for the treatment, prevention or amelioration of diabetes, obesity, metabolic syndrome X, hyperglycemia or hyperlipidemia. In some embodiments, the biologic comprises (i) a decrease in blood glucose levels in the animal, (ii) treatment of an animal having a disease or condition associated with a glucocorticoid receptor, (iii) a decrease in blood lipid levels in the animal, or ( iv) It is useful for reducing the amount of body fat in an animal. In some embodiments, the biologic modulates expression of a glucocorticoid receptor. In some embodiments, the biologic is selected from iRNAs or oligonucleotides or analogs thereof as disclosed in European Patent Application Publication No. 2363480 or International Publication No. 2016/077837. In some embodiments, the disease or condition is related to a uORF containing gene, such as disclosed in Tables 1 and 2 of International Publication No. 2016/077837.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 건강기능식품 조성물인, 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, the composition provides a health functional food composition, the composition.
본 발명의 다른 측면은 상기 본 발명의 일측면에 따른 조성물의 제조 방법에 있어서, (a) 우유로부터 원심분리 및 여과를 통해 우유 엑소좀을 분리하는 단계; 및 (b) 분리된 우유 엑소좀에 치료제를 전기천공법으로 봉입하는 단계;를 포함하는, 조성물의 제조 방법을 제공한다.Another aspect of the present invention provides a method for preparing a composition according to an aspect of the present invention, comprising the steps of: (a) separating milk exosomes from milk through centrifugation and filtration; And (b) encapsulating a therapeutic agent in the separated milk exosomes by electroporation; it provides a method for producing a composition comprising a.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 (b) 단계에서 전기천공법은 300 내지 700 v의 전압, 및 7 내지 13의 펄스의 조건에서 치료제를 우유 엑소좀 내로 봉입하는, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the electroporation method in step (b) provides a method for preparing a composition, wherein the therapeutic agent is encapsulated into milk exosomes under the conditions of a voltage of 300 to 700 v, and a pulse of 7 to 13. .
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 (a) 단계에서의 우유는 인간, 소, 양, 염소, 산양, 낙타, 버팔로 및 야크 유래 우유인, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the milk in step (a) is human, cow, sheep, goat, goat, camel, buffalo and yak-derived milk, it provides a method for producing a composition.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 (a) 단계에서의 우유는 초유(colostrum)인, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the milk in step (a) is colostrum (colostrum), it provides a method for producing a composition.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 (a) 단계는 1 내지 8 ℃에서, 2000 내지 130,000 g의 힘으로 10분 내지 7시간 동안 원심분리하며, 포어 사이즈가 0.01 um 내지 1 um 인 여과막을 통하여 여과하는, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, in step (a), centrifugation is performed at 1 to 8 ° C. with a force of 2000 to 130,000 g for 10 minutes to 7 hours, and filtration through a filtration membrane having a pore size of 0.01 um to 1 um It provides a method for preparing the composition.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 (a) 단계는 2 내지 6 ℃에서, 초유의 우유를 2000 내지 4000 g의 힘으로 15분 내지 45분 동안 원심분리하는 제 1 원심분리 단계; 제 1 원심분리 단계 이후 10,000 내지 14,000 g의 힘으로 30분 내지 90분 동안 원심분리하는 제 2 원심분리 단계; 제 2 원심분리 단계 이후 30,000 내지 40,000 g의 힘으로 30분 내지 90분 동안 원심분리하는 제 3 원심분리 단계; 제 3 원심분리 단계 이후 60,000 내지 80,000 g의 힘으로 150분 내지 210분 동안 원심분리하는 제 4 원심분리 단계; 제 4 원심분리 단계 이후 포어 사이즈가 0.7 um 내지 0.9 um 인 여과막을 통하여 여과하는 제 1 여과 단계; 제 1 여과 단계 이후 포어 사이즈가 0.4 um 내지 0.5 um 인 여과막을 통하여 여과하는 제 2 여과 단계; 제 2 여과 단계 이후 포어 사이즈가 0.1 um 내지 0.3 um 인 여과막을 통하여 여과하는 제 3 여과 단계; 및 제 3 여과 단계 이후 90,000 내지 120,000 g의 힘으로 30 분 내지 90 분 동안 원심분리하는 제 5 원심분리 단계;를 포함하는, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the step (a) comprises a first centrifugation step of centrifuging colostrum milk at 2 to 6 ° C. with a force of 2000 to 4000 g for 15 minutes to 45 minutes; a second centrifugation step of centrifuging for 30 minutes to 90 minutes at a force of 10,000 to 14,000 g after the first centrifugation step; a third centrifugation step of centrifuging for 30 to 90 minutes with a force of 30,000 to 40,000 g after the second centrifugation step; a fourth centrifugation step of centrifuging for 150 minutes to 210 minutes at a force of 60,000 to 80,000 g after the third centrifugation step; A first filtration step of filtering through a filtration membrane having a pore size of 0.7 um to 0.9 um after the fourth centrifugation step; a second filtration step of filtering through a filtration membrane having a pore size of 0.4 um to 0.5 um after the first filtration step; A third filtration step of filtering through a filtration membrane having a pore size of 0.1 um to 0.3 um after the second filtration step; And after the third filtration step, a fifth centrifugation step of centrifuging for 30 minutes to 90 minutes with a force of 90,000 to 120,000 g; provides a method for preparing a composition comprising a.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 방법은 (b) 단계 이후 치료제가 봉입된 우유 엑소좀 조성물을 동결 건조 하는 단계를 추가로 포함하는, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the method provides a method for preparing a composition, further comprising the step of freeze-drying the milk exosome composition encapsulated in the therapeutic agent after step (b).
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 치료제는 단일 가닥 DNA, 이중 가닥 DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, 안티센스 RNA 및 LNA 중에서 선택된 어느 하나 이상의 핵산인, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the therapeutic agent is any one or more nucleic acids selected from single-stranded DNA, double-stranded DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, antisense RNA, and LNA, it provides a method for preparing a composition.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 치료제는 펩타이드 또는 단백질인, 조성물의 제조 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the therapeutic agent is a peptide or protein, provides a method for preparing a composition.
이하, 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 예시에 불과하며, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through specific examples. The following examples are only examples to help the understanding of the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto.
실시예 1. 밀크 엑소좀의 분리Example 1. Isolation of milk exosomes
본 발명자들은 하기와 같은 방법으로 우유로부터 엑소좀을 분리하였다.The present inventors isolated exosomes from milk in the following way.
시중에 판매되는 저온 살균 유통 우유를 3,000 g에서 30분간 원심분리한 후, 12,000 g에서 1시간, 35,000 g에서 1시간 그리고 70,000 g에서 3시간 순차 초원심분리를 수행하였다. After centrifugation of commercially available pasteurized milk for 30 minutes at 3,000 g, sequential ultracentrifugation was performed at 12,000 g for 1 hour, at 35,000 g for 1 hour, and at 70,000 g for 3 hours.
그런 다음 0.8 μm 필터로 1차 여과를 하고, 0.45 μm 필터로 2차 여과를 한 후, 0.2 μm 필터로 3차 여과를 하였다. 여과액을 100,000 g로 1시간 동안 초원심분리를 한 후 펠렛을 회수하여 단백질 분해효소 억제제(Roche)를 포함하는 PBS에 재현탁하였다(도 1). Then, primary filtration was performed with a 0.8 μm filter, secondary filtration was performed with a 0.45 μm filter, and third filtration was performed with a 0.2 μm filter. After ultracentrifuging the filtrate at 100,000 g for 1 hour, the pellet was recovered and resuspended in PBS containing a protease inhibitor (Roche) (FIG. 1).
상기 과정은 4℃ 에서 수행되었다.The process was carried out at 4°C.
비교예로는 일반 동물세포(마우스 골수 유래 대식 세포) 유래 엑소좀을 사용하였다.As a comparative example, exosomes derived from general animal cells (macrophages derived from mouse bone marrow) were used.
상기 우유로부터 분리된 엑소좀은 비교예와 같은 BCA 단백질 분석키트(Bio-Rad)를 이용하여 분리된 엑소좀의 단백질 농도를 측정하였다.For the exosomes isolated from the milk, the protein concentration of the separated exosomes was measured using a BCA protein analysis kit (Bio-Rad) as in Comparative Example.
실시예 2. 밀크 엑소좀의 특성Example 2. Characteristics of milk exosomes
실시예 2-1. 엑소좀의 입자 크기 비교Example 2-1. Particle Size Comparison of Exosomes
본 발명자들은 이어서 본 발명의 일 실시예에 따라 분리된 엑조솜의 입도를 동적 광산란(dynamic light scattering, DLS) 분석 장치(Malvern zetasizer nano ZS, UK)을 이용하여 분석하는 한편, 투과 전자현미경으로 생성된 엑소좀을 촬영하였다(도 2). The present inventors then analyze the particle size of the exosomes separated according to an embodiment of the present invention using a dynamic light scattering (DLS) analyzer (Malvern zetasizer nano ZS, UK), while generating with a transmission electron microscope The exosomes were photographed (FIG. 2).
도 2에서 C-Ex는 비교예 엑소좀, Milk-Ex는 실시예 1의 우유 엑소좀이다.In FIG. 2, C-Ex is the exosome of Comparative Example, and Milk-Ex is the milk exosome of Example 1.
그 결과 도 2에 나타난 바와 같이 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 우유 유래 엑소좀은 대조군 엑소좀과 유사하게 그 크기가 68.05 nm 내외의 상당히 좁은 스펙트럼을 갖고 있는 것으로 나타났고, 형태 역시 대조군 엑소좀과 큰 차이가 없는 것으로 확인되었다.As a result, as shown in Figure 2, the milk-derived exosomes prepared according to an embodiment of the present invention were found to have a fairly narrow spectrum with a size of about 68.05 nm similar to the control exosomes, and the shape was also the control exo. It was confirmed that there was no significant difference from moth.
실시예 2-2. 엑소좀의 pH 변화에 따른 안정성 확인Example 2-2. Confirmation of stability according to pH change of exosomes
본 발명자들은 우유 유래 엑소좀의 pH 변화에 따른 안정성을 확인하기 위해, 대조군인 FBS 유래 엑소좀과 우유 유래 엑소좀을 pH7 중성상태에서 pH2 산성 상태로 변화 시켰고, 다시 pH7중성 상태로 변화 시킨 후, 각 엑소좀의 입도를 동적 광산란 분석 장치를 이용하여 확인하였다. The present inventors changed the control group, FBS-derived exosomes and milk-derived exosomes, from pH7 neutral state to pH2 acidic state, to confirm the stability of milk-derived exosomes according to the pH change, and then changed to pH7 neutral state again The particle size of each exosome was confirmed using a dynamic light scattering analyzer.
FBS(Fetal bovine serum) 유래 엑소좀은 세포 배양에 사용 되는 소태아 혈청으로부터 분리한 엑소좀이다.Fetal bovine serum (FBS)-derived exosomes are exosomes isolated from fetal bovine serum used for cell culture.
실험 결과는 도 3a 및 3b와 같았다. 도 3a는 FBS 엑소좀, 도 3b는 본원발명 실시예 1의 엑소좀이다.The experimental results were as shown in FIGS. 3A and 3B. Figure 3a is a FBS exosome, Figure 3b is an exosome of Example 1 of the present invention.
FBS 유래 엑소좀의 사이즈는 우유 유래 엑소좀에 비해 넓은 범위로 분포하며 그 형태 및 사이즈가 변화하였으나 우유 유래 엑소좀은 사이즈 변동 없이 유지 됨을 확인하였다.The size of the FBS-derived exosomes was distributed in a wider range compared to the milk-derived exosomes, and although the shape and size were changed, it was confirmed that the milk-derived exosomes were maintained without size change.
실시예 2-3. 엑소좀의 동결 해동 안정성 분석Example 2-3. Freeze-thaw stability analysis of exosomes
본 발명자들은 실시예 1에 의해 분리된 우유 유래 엑소좀과 대조군 엑소좀인 대식 세포 유래 엑소좀과의 보관 안정성 특히 동결 후 해동시 안정성 항목을 평가하고자 하였다.The present inventors tried to evaluate the storage stability of the milk-derived exosomes isolated by Example 1 and the macrophage-derived exosomes, which are control exosomes, especially when thawing after freezing.
이를 위해 대조군 엑소좀과 실시예 1에서 분리된 우유 유래 엑소좀을 -85℃에서 동결시킨 후 상온에서 해동한 후 투과 전자 현미경 촬영을 하였고, 해동된 엑소좀을 다시 -85℃에서 2차 동결한 후 상온에서 해동시킨 후 투과 전자현미경을 촬영을 하였고(도 4), 동적 산란 분석을 통해 입도분포를 분석하였다(도 5).To this end, the control exosomes and the milk-derived exosomes isolated in Example 1 were frozen at -85°C, thawed at room temperature, and then transmitted electron microscopy was performed, and the thawed exosomes were second frozen at -85°C again. After thawing at room temperature, a transmission electron microscope was taken (FIG. 4), and particle size distribution was analyzed through dynamic scattering analysis (FIG. 5).
그 결과, 도 5에서 확인되는 바와 같이, 대조군 엑소좀은 1차 동결후 해동시 이미 엑소좀 간의 응집현상이 발생하여 원래의 엑소좀 형태를 상실한 반면, 본 발명의 일 실시예에 따라 분리된 우유 유래 엑소좀의 경우 2차 동결/해동시에도 원형을 그대로 유지하고 있음을 확인할 수 있었다. As a result, as confirmed in Figure 5, the control exosomes lost the original exosome form due to aggregation between exosomes already occurred upon thawing after the first freezing, whereas milk separated according to an embodiment of the present invention In the case of the derived exosomes, it was confirmed that the original shape was maintained even during the second freezing/thawing.
또한 이러한 우유 유래 엑소좀은 동결건조 후, 다시 PBS에 녹였을 경우에도 그 사이즈를 유지 하는 것을 확인하였다(도 6).In addition, it was confirmed that these milk-derived exosomes maintain their size even when lyophilized and then dissolved in PBS again (FIG. 6).
실험 결과는 도 6과 같았다. 동결 건조 전 후 엑소좀의 사이즈 변화는 거의 없었고, 무게를 측정해 본 결과 단백질 정량으로 동결 건조 전 엑소좀의 무게 45mg은 동결 건조 후에도 42.5mg 이었다.(2L 기준)The experimental results were as shown in FIG. 6 . There was almost no change in the size of exosomes before and after freeze-drying, and as a result of measuring the weight, 45 mg of exosomes before freeze-drying as a protein quantification was 42.5 mg even after freeze-drying (based on 2L).
실시예 3. 경구 제형의 제조Example 3. Preparation of oral dosage form
본 발명자는 우유 유래 엑소좀의 경구 제형 가능성을 확인하기 위해 Cy5.5가 레이블링 된 우유 유래 엑소좀 및 대조군 FBS 유래 엑소좀을 Balb/c 7주령 마우스에 경구로 투여 하여 혈액 중 각 엑소좀의 농도를 시간별로 측정하였다. 엑소좀은 약 1mg를 투여 하였으며, 투여 후 15분, 30분, 1시간, 4시간의 시간 별로 혈액을 채취하였다. To confirm the possibility of oral formulation of milk-derived exosomes, the present inventors orally administered Cy5.5-labeled milk-derived exosomes and control FBS-derived exosomes to Balb/c 7-week-old mice to determine the concentration of each exosome in the blood. was measured by time. About 1 mg of exosomes was administered, and blood was collected every 15 minutes, 30 minutes, 1 hour, and 4 hours after administration.
실험 결과는 도 7과 같았다.The experimental results were as shown in FIG. 7 .
실험결과 Cy5.5만 경구투여한 그룹에서는 혈액에서 발견되지 않았으며, 우유 유래 엑소좀이 대조군 엑소좀 대비 높은 농도로 장시간 유지 되는 것을 확인하였다.As a result of the experiment, it was not found in the blood in the group to which only Cy5.5 was orally administered, and it was confirmed that the milk-derived exosomes were maintained at a higher concentration than the control exosomes for a long time.
또한, 본 발명자들은 이렇게 경구 투여한 엑소좀이 소장에서 발견되는지를 확인하기 위해 형광 분자 단층 촬영(fluorescence molecular tomographic, FMT)를 이용하여 엑소좀의 생체 내 분포 위치를 시간별로 확인하였다. In addition, the present inventors used fluorescence molecular tomography (FMT) to confirm whether orally administered exosomes are found in the small intestine, and the in vivo distribution positions of the exosomes were confirmed by time.
실험 결과는 도 8과 같았다.The experimental results were as shown in FIG. 8 .
또한, 동물 모델에서의 소장을 적출하여 파라핀 블락을 만든 후 박절(Sectioning)하여 공초점 현미경(Confocal microscopy)에서 Cy5.5가 레이블링 된 우유 유래 엑소좀을 확인하였다. In addition, the small intestine was extracted from the animal model to make a paraffin block, and then sectioned to confirm Cy5.5-labeled milk-derived exosomes by confocal microscopy.
실험 결과는 도 9와 같았다.The experimental results were as shown in FIG. 9 .
3차원형광 분자 단층 촬영 결과 우유 유래 엑소좀은 위를 무사히 통과형 소장에 도달 하는 것을 확인하였으나, 대조군 엑소좀은 분해 되어 소장에 거의 도달 하지 못하는 것을 확인하였다. 또한, 파라핀 박절을 통한 조직 분석을 통해 소장 융털에서 우유 유래 엑소좀이 발견되는 것을 확인하였다.As a result of 3D fluorescence molecular tomography, it was confirmed that milk-derived exosomes safely passed through the stomach and reached the small intestine, but it was confirmed that the control exosomes were decomposed and hardly reached the small intestine. In addition, it was confirmed that milk-derived exosomes were found in the villi of the small intestine through tissue analysis through paraffin sections.
실시예 4. 전기천공을 이용한 치료제의 도입Example 4. Introduction of a therapeutic agent using electroporation
본 발명자는 이어서 경구 제형화가 가능한 우유 유래 엑소좀에 전기천공법(Electroporation)을 이용하여 siRNA를 봉입하고자 다양한 조건들을 통해 조건을 최적화 하였다. The present inventors then optimized the conditions through various conditions to encapsulate the siRNA using the electroporation method in milk-derived exosomes that can be formulated orally.
실험 결과는 도 10과 같았다.The experimental results were as shown in FIG. 10 .
500V, 10 pulse 상태에서 엑소좀의 크기가 변하지 않는 것을 확인하였다.(도 10)It was confirmed that the size of the exosomes did not change in the 500V, 10 pulse state. (FIG. 10)
또한, 상기 siRNA(CD47)가 봉인된 우유 유래 엑소좀이 세포에 흡수 되어 유전자 침묵(gene silenceing) 효과가 일어나는지 실시간 중합효소연쇄반응(qRT-PCR)을 통해 확인하였다. In addition, it was confirmed by real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) whether the siRNA (CD47)-sealed milk-derived exosomes were absorbed into the cells and a gene silencing effect occurred.
Cell type은 CT26을 사용하였고, 기기는 Gene Pulser Xcell Electroporation Systems_Bio-rad를 사용하였다.The cell type was CT26, and the device was Gene Pulser Xcell Electroporation Systems_Bio-rad.
실험 결과는 도 11과 같았다.The experimental results were as shown in FIG. 11 .
공초점 현미경을 통해 형광 레이블링 된 우유 유래 엑소좀이 uptake 되는 것을 확인하였으며, siRNA가 봉입 된 우유 유래 엑소좀 그룹이 대조군 대비 약 40% 유전자 침묵 효과를 가지는 것을 확인하였으며, 이는 siRNA 전달체로 상용화 된 리포펙타민3000(Lipofectamine 3000)과 유사하게 높은 효율로 유전자 침묵 효과임을 확인하였다.It was confirmed that fluorescence-labeled milk-derived exosomes were uptaken through confocal microscopy, and it was confirmed that the milk-derived exosome group containing siRNA had about 40% gene silencing effect compared to the control group, which was commercialized as an siRNA carrier. Similar to
이상, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징으로 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예는 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.In the above, embodiments of the present invention have been described with reference to the accompanying drawings, but those of ordinary skill in the art to which the present invention pertains can practice the present invention in other specific forms without changing its technical spirit or essential features. You can understand that there is Therefore, it should be understood that the embodiments described above are illustrative in all respects and not restrictive.
Claims (19)
상기 조성물은 경구형 제형인, 조성물.
milk exosomes; And a therapeutic agent encapsulated inside the milk exosome; In a composition comprising:
The composition is an oral dosage form.
상기 치료제는 전기천공법(Electroporation)으로 우유 엑소좀 내로 봉입되며,
상기 전기천공법은 300 내지 700 v의 전압,및
7 내지 13의 펄스의 조건에서 봉입되는, 조성물.
The method of claim 1,
The therapeutic agent is encapsulated into milk exosomes by electroporation,
The electroporation method is a voltage of 300 to 700 v, and
Encapsulated under conditions of a pulse of 7 to 13, the composition.
상기 치료제는 항체, 호르몬, 대사조절 효소, 면역조절 효소, 인터페론, 인터루킨, 성장 조절 효소 및 백신 중에서 선택된 어느 하나인, 조성물.
The method of claim 1,
The therapeutic agent is any one selected from antibodies, hormones, metabolic regulatory enzymes, immunomodulatory enzymes, interferon, interleukin, growth regulatory enzymes and vaccines, the composition.
상기 치료제는 단일 가닥 DNA, 이중 가닥 DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, 안티센스 RNA 및 LNA 중에서 선택된 어느 하나 이상의 핵산인, 성물.
The method of claim 1,
The therapeutic agent is any one or more nucleic acids selected from single-stranded DNA, double-stranded DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, antisense RNA and LNA.
상기 치료제는 펩타이드 또는 단백질인, 조성물.
The method of claim 1,
The therapeutic agent is a peptide or protein, composition.
상기 조성물은 동결 건조한 제형인, 조성물.
The method of claim 1,
The composition is a freeze-dried formulation.
상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함하는, 조성물.
The method of claim 1,
The composition further comprises a pharmaceutically acceptable carrier.
상기 우유 엑소좀은 직경이 30 nm 내지 300 nm 이며,
상기 치료제는 siRNA 또는 mRNA 이며;
상기 조성물은 백신용 조성물이며,
상기 조성물은 대상에게 경구로 투여되는 것인, 조성물.
The method of claim 1,
The milk exosomes have a diameter of 30 nm to 300 nm,
The therapeutic agent is siRNA or mRNA;
The composition is a composition for a vaccine,
Wherein the composition is administered orally to the subject.
상기 조성물은 약학 조성물인, 조성물.
The method of claim 1,
The composition is a pharmaceutical composition.
상기 조성물은 건강기능식품 조성물인, 조성물.
The method of claim 1,
The composition is a health functional food composition, composition.
(a) 우유로부터 원심분리 및 여과를 통해 우유 엑소좀을 분리하는 단계; 및
(b) 분리된 우유 엑소좀에 치료제를 전기천공법으로 봉입하는 단계;를 포함하는, 조성물의 제조 방법.
11. The method for preparing the composition of any one of claims 1 to 10,
(a) separating milk exosomes from milk through centrifugation and filtration; and
(b) encapsulating a therapeutic agent in the separated milk exosomes by electroporation; comprising, a method for producing a composition.
상기 (b) 단계에서 전기천공법은 300 내지 700 v의 전압, 및 7 내지 13의 펄스의 조건에서 치료제를 우유 엑소좀 내로 봉입하는, 조성물의 제조 방법.
12. The method of claim 11,
In the step (b), the electroporation method encapsulates the therapeutic agent into the milk exosomes under the conditions of a voltage of 300 to 700 v, and a pulse of 7 to 13, a method for producing a composition.
상기 (a) 단계에서의 우유는 인간, 소, 양, 염소, 산양, 낙타, 버팔로 및 야크 유래 우유인, 조성물의 제조 방법.
12. The method of claim 11,
The milk in step (a) is human, cow, sheep, goat, goat, camel, buffalo and yak-derived milk, a method for producing a composition.
상기 (a) 단계에서의 우유는 초유(colostrum)인, 조성물의 제조 방법.
14. The method of claim 13,
The milk in step (a) is colostrum (colostrum), a method for producing a composition.
상기 (a) 단계는 1 내지 8 ℃에서, 2000 내지 130,000 g의 힘으로 10분 내지 7시간 동안 원심분리하며, 포어 사이즈가 0.01 um 내지 1 um 인 여과막을 통하여 여과하는, 조성물의 제조 방법.
12. The method of claim 11,
The step (a) is centrifuged at 1 to 8 ℃, with a force of 2000 to 130,000 g for 10 minutes to 7 hours, and filtering through a filtration membrane having a pore size of 0.01 um to 1 um, a method for producing a composition.
상기 (a) 단계는 2 내지 6 ℃에서,
초유의 우유를 2000 내지 4000 g의 힘으로 15분 내지 45분 동안 원심분리하는 제 1 원심분리 단계;
제 1 원심분리 단계 이후 10,000 내지 14,000 g의 힘으로 30분 내지 90분 동안 원심분리하는 제 2 원심분리 단계;
제 2 원심분리 단계 이후 30,000 내지 40,000 g의 힘으로 30분 내지 90분 동안 원심분리하는 제 3 원심분리 단계;
제 3 원심분리 단계 이후 60,000 내지 80,000 g의 힘으로 150분 내지 210분 동안 원심분리하는 제 4 원심분리 단계;
제 4 원심분리 단계 이후 포어 사이즈가 0.7 um 내지 0.9 um 인 여과막을 통하여 여과하는 제 1 여과 단계;
제 1 여과 단계 이후 포어 사이즈가 0.4 um 내지 0.5 um 인 여과막을 통하여 여과하는 제 2 여과 단계;
제 2 여과 단계 이후 포어 사이즈가 0.1 um 내지 0.3 um 인 여과막을 통하여 여과하는 제 3 여과 단계; 및
제 3 여과 단계 이후 90,000 내지 120,000 g의 힘으로 30 분 내지 90 분 동안 원심분리하는 제 5 원심분리 단계;를 포함하는, 조성물의 제조 방법.
17. The method of claim 16,
The step (a) is at 2 to 6 ℃,
a first centrifugation step of centrifuging colostrum milk at a force of 2000 to 4000 g for 15 to 45 minutes;
a second centrifugation step of centrifuging for 30 minutes to 90 minutes at a force of 10,000 to 14,000 g after the first centrifugation step;
a third centrifugation step of centrifuging for 30 to 90 minutes with a force of 30,000 to 40,000 g after the second centrifugation step;
a fourth centrifugation step of centrifuging for 150 minutes to 210 minutes at a force of 60,000 to 80,000 g after the third centrifugation step;
A first filtration step of filtering through a filtration membrane having a pore size of 0.7 um to 0.9 um after the fourth centrifugation step;
a second filtration step of filtering through a filtration membrane having a pore size of 0.4 um to 0.5 um after the first filtration step;
A third filtration step of filtering through a filtration membrane having a pore size of 0.1 um to 0.3 um after the second filtration step; and
After the third filtration step, a fifth centrifugation step of centrifuging for 30 minutes to 90 minutes with a force of 90,000 to 120,000 g; A method for preparing a composition comprising a.
상기 방법은 (b) 단계 이후 치료제가 봉입된 우유 엑소좀 조성물을 동결 건조 하는 단계를 추가로 포함하는, 조성물의 제조 방법.
12. The method of claim 11,
The method further comprises the step of freeze-drying the milk exosome composition in which the therapeutic agent is encapsulated after step (b).
상기 치료제는 단일 가닥 DNA, 이중 가닥 DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, 안티센스 RNA 및 LNA 중에서 선택된 어느 하나 이상의 핵산인, 조성물의 제조 방법.
12. The method of claim 11,
The method for producing a composition, wherein the therapeutic agent is any one or more nucleic acids selected from single-stranded DNA, double-stranded DNA, iRNA, siRNA, shRNA, mRNA, ncRNA, antisense RNA, and LNA.
상기 치료제는 펩타이드 또는 단백질인, 조성물의 제조 방법.
The method of claim 1,
The therapeutic agent is a peptide or protein, the method of producing a composition.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020200101570A KR102461502B1 (en) | 2020-08-13 | 2020-08-13 | Oral composition comprising milk exosome containing therapeutic and method for manufacturing thereof |
| PCT/KR2021/010702 WO2022035243A1 (en) | 2020-08-13 | 2021-08-12 | Oral composition comprising milk exosomes encapsulating therapeutic agent, and method for producing same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020200101570A KR102461502B1 (en) | 2020-08-13 | 2020-08-13 | Oral composition comprising milk exosome containing therapeutic and method for manufacturing thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20220021136A true KR20220021136A (en) | 2022-02-22 |
| KR102461502B1 KR102461502B1 (en) | 2022-11-02 |
Family
ID=80248036
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020200101570A KR102461502B1 (en) | 2020-08-13 | 2020-08-13 | Oral composition comprising milk exosome containing therapeutic and method for manufacturing thereof |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102461502B1 (en) |
| WO (1) | WO2022035243A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023191606A1 (en) * | 2022-03-28 | 2023-10-05 | 경북대학교 산학협력단 | Ophthalmic topical drug delivery system based on extracellular vesicles collected from placenta-derived amniotic epithelial cells |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024015441A1 (en) * | 2022-07-13 | 2024-01-18 | Abbott Laboratories | Bovine milk exosomes for delivering vitamin k2 and increasing bioavailability |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20160006974A (en) | 2014-07-10 | 2016-01-20 | 주식회사 파리크라상 | Method and apparatus for manufacturing coffee |
| EP3192518A1 (en) * | 2014-09-09 | 2017-07-19 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Anti-inflammatory agent |
| KR20180005546A (en) * | 2016-07-06 | 2018-01-16 | 인천대학교 산학협력단 | Pahrmaceutical composition using drug-loaded exosome or nanovesicle |
| KR20180055994A (en) | 2016-11-17 | 2018-05-28 | 주식회사 토모큐브 | Apparatus and Method for Diffraction Optical Tomography of Structured Illumination using Digital Micromirror Device |
| KR20180116163A (en) * | 2017-04-14 | 2018-10-24 | 서울대학교산학협력단 | A Method for Reducing Differentiation or Activity of Th17 Cells Comprising EID3 or EID3 Expressing MSC-Exosome |
| WO2019236873A1 (en) * | 2018-06-06 | 2019-12-12 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Extracellular vesicles and methods of using |
| WO2020018926A1 (en) * | 2018-07-19 | 2020-01-23 | Intrexon Corporation | Exosome delivery of skin care peptides |
| EP3620519A1 (en) * | 2018-09-04 | 2020-03-11 | F. Hoffmann-La Roche AG | Use of isolated milk extracellular vesicles for delivering oligonucleotides orally |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110177544A (en) * | 2016-11-29 | 2019-08-27 | 普尔泰克健康有限公司 | For delivering the excretion body of therapeutic agent |
-
2020
- 2020-08-13 KR KR1020200101570A patent/KR102461502B1/en active IP Right Grant
-
2021
- 2021-08-12 WO PCT/KR2021/010702 patent/WO2022035243A1/en active Application Filing
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20160006974A (en) | 2014-07-10 | 2016-01-20 | 주식회사 파리크라상 | Method and apparatus for manufacturing coffee |
| EP3192518A1 (en) * | 2014-09-09 | 2017-07-19 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Anti-inflammatory agent |
| KR20180005546A (en) * | 2016-07-06 | 2018-01-16 | 인천대학교 산학협력단 | Pahrmaceutical composition using drug-loaded exosome or nanovesicle |
| KR20180055994A (en) | 2016-11-17 | 2018-05-28 | 주식회사 토모큐브 | Apparatus and Method for Diffraction Optical Tomography of Structured Illumination using Digital Micromirror Device |
| KR20180116163A (en) * | 2017-04-14 | 2018-10-24 | 서울대학교산학협력단 | A Method for Reducing Differentiation or Activity of Th17 Cells Comprising EID3 or EID3 Expressing MSC-Exosome |
| WO2019236873A1 (en) * | 2018-06-06 | 2019-12-12 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Extracellular vesicles and methods of using |
| WO2020018926A1 (en) * | 2018-07-19 | 2020-01-23 | Intrexon Corporation | Exosome delivery of skin care peptides |
| EP3620519A1 (en) * | 2018-09-04 | 2020-03-11 | F. Hoffmann-La Roche AG | Use of isolated milk extracellular vesicles for delivering oligonucleotides orally |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023191606A1 (en) * | 2022-03-28 | 2023-10-05 | 경북대학교 산학협력단 | Ophthalmic topical drug delivery system based on extracellular vesicles collected from placenta-derived amniotic epithelial cells |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2022035243A1 (en) | 2022-02-17 |
| KR102461502B1 (en) | 2022-11-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Exosomes, a new star for targeted delivery | |
| Zhang et al. | Recent advances in exosome-mediated nucleic acid delivery for cancer therapy | |
| Kim et al. | Plant-derived exosome-like nanoparticles and their therapeutic activities | |
| Ke et al. | Exosomes as natural delivery carriers for programmable therapeutic nucleic acid nanoparticles (NANPs) | |
| JP6023126B2 (en) | Composition that suppresses expression of target gene | |
| KR20180135451A (en) | Methods of providing single stranded RNA | |
| AU2016251415B9 (en) | C/EBP alpha saRNA compositions and methods of use | |
| JP2022542389A (en) | Nanomaterials containing bound lipids and uses thereof | |
| EP4087406A1 (en) | Vesicle compositions for oral delivery | |
| KR102461502B1 (en) | Oral composition comprising milk exosome containing therapeutic and method for manufacturing thereof | |
| JP2022518207A (en) | Drug delivery system containing oxidized cholesterol | |
| Wang et al. | Extracellular vesicles as an emerging drug delivery system for cancer treatment: Current strategies and recent advances | |
| TWI818225B (en) | Double-stranded RNA that inhibits expression of complement C5 | |
| EP3620519A1 (en) | Use of isolated milk extracellular vesicles for delivering oligonucleotides orally | |
| Moloudizargari et al. | The therapeutic triad of extracellular vesicles: As drug targets, as drugs, and as drug carriers | |
| WO2023001894A9 (en) | Extracellular vesicles from microalgae, their preparation, and uses | |
| Tan et al. | Skimmed bovine milk-derived extracellular vesicles isolated via “Salting-Out”: characterizations and potential functions as Nanocarriers | |
| WO2023144127A1 (en) | Extracellular vesicles from microalgae, their biodistribution upon administration, and uses | |
| WO2020017590A1 (en) | LIPID PARTICLE CONTAINING A-TYPE CpG OLIGODEOXYNUCLEOTIDE | |
| US20200101016A1 (en) | Compositions and methods for producing exosome loaded therapeutics for treating cardiovascular disease | |
| JP5952197B2 (en) | Composition that suppresses expression of target gene | |
| WO2023232976A1 (en) | Extracellular vesicles from genetically-modified microalgae containing endogenously-loaded cargo, their preparation, and uses | |
| Li et al. | Zhifeng Deng, Xianghang Luo, Hui Qian, and Yang Wang | |
| Dilsiz | Exosomes as new generation vehicles for drug delivery systems | |
| WO2023133527A2 (en) | Extracellular vesicles loaded with viral particles for cargo delivery |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| X701 | Decision to grant (after re-examination) |