KR20220012790A - Agents for treating exosome-mediated disorders - Google Patents
Agents for treating exosome-mediated disorders Download PDFInfo
- Publication number
- KR20220012790A KR20220012790A KR1020210009344A KR20210009344A KR20220012790A KR 20220012790 A KR20220012790 A KR 20220012790A KR 1020210009344 A KR1020210009344 A KR 1020210009344A KR 20210009344 A KR20210009344 A KR 20210009344A KR 20220012790 A KR20220012790 A KR 20220012790A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- botulinum toxin
- cancer
- composition
- tumor
- exosome
- Prior art date
Links
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 56
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 claims abstract description 114
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 claims abstract description 111
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 82
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 49
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 7
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 21
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 16
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 11
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 10
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 9
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 7
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 5
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 claims description 5
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000008040 ionic compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 2
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 44
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 23
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 20
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 17
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 11
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 11
- 101710138657 Neurotoxin Proteins 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 10
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 10
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 10
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 9
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 8
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 8
- 108700014852 coretox Proteins 0.000 description 8
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 6
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 6
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 6
- -1 sucrose) Chemical class 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- IXHADCPJRQNDGG-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-chloroethyl)amino]-1-(4-phenylphenyl)propan-1-one Chemical group C1=CC(C(=O)CCN(CCCl)CCCl)=CC=C1C1=CC=CC=C1 IXHADCPJRQNDGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 4
- 101100382092 Clostridium botulinum D phage ntnha gene Proteins 0.000 description 4
- 101100004794 Clostridium botulinum ant gene Proteins 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 108010057266 Type A Botulinum Toxins Proteins 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 4
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 4
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 3
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 3
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 3
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 3
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 3
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 3
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 2
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 2
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 2
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- 102000002698 KIR Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010043610 KIR Receptors Proteins 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 2
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 2
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 2
- 229950002916 avelumab Drugs 0.000 description 2
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229960004716 idoxuridine Drugs 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 210000002487 multivesicular body Anatomy 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 2
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710117542 Botulinum neurotoxin type A Proteins 0.000 description 1
- 206010006143 Brain stem glioma Diseases 0.000 description 1
- 238000011749 CBA mouse Methods 0.000 description 1
- 206010007953 Central nervous system lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940122558 EGFR antagonist Drugs 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000289 Esophageal Achalasia Diseases 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000021309 Germ cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000008454 Hyperhidrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010061252 Intraocular melanoma Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010052178 Lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000032271 Malignant tumor of penis Diseases 0.000 description 1
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 description 1
- 208000034176 Neoplasms, Germ Cell and Embryonal Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000000693 Neurogenic Urinary Bladder Diseases 0.000 description 1
- 206010029279 Neurogenic bladder Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 206010030136 Oesophageal achalasia Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000010133 Oligodendroglioma Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940124060 PD-1 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 229940123751 PD-L1 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 229940121678 PD-L2 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 208000000821 Parathyroid Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010034299 Penile cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940049937 Pgp inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000007913 Pituitary Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000005746 Pituitary adenoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061538 Pituitary tumour benign Diseases 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000004350 Strabismus Diseases 0.000 description 1
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000023915 Ureteral Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046392 Ureteric cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046431 Urethral cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046458 Urethral neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000012931 Urologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000005969 Uveal melanoma Diseases 0.000 description 1
- 201000003761 Vaginal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010047741 Vulval cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010079650 abobotulinumtoxinA Proteins 0.000 description 1
- 201000000621 achalasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024447 adrenal gland neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000003474 anti-emetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940044684 anti-microtubule agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002111 antiemetic agent Substances 0.000 description 1
- 229940125683 antiemetic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000003886 aromatase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940046844 aromatase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 206010005159 blepharospasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000744 blepharospasm Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 229940089093 botox Drugs 0.000 description 1
- 231100001103 botulinum neurotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 229940094657 botulinum toxin type a Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 230000008568 cell cell communication Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000024207 chronic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 229940098753 dysport Drugs 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002121 endocytic effect Effects 0.000 description 1
- 201000003914 endometrial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001343 fallopian tube carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002748 glycoprotein P inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000003667 hormone antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000037315 hyperhidrosis Effects 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 1
- 208000026045 malignant tumor of parathyroid gland Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 201000002575 ocular melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 208000021310 pituitary gland adenoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 208000016800 primary central nervous system lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108010074523 rimabotulinumtoxinB Proteins 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 206010039667 schwannoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 1
- 201000002314 small intestine cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 1
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 206010062261 spinal cord neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000030968 tissue homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000007888 toxin activity Effects 0.000 description 1
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 1
- 201000011294 ureter cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014001 urinary system disease Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 201000004916 vulva carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000013013 vulvar carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 229940055760 yervoy Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
- A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
본 개시는 엑소좀-매개된 질환의 치료제에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 유효성분으로 보툴리눔 독소를 포함하는 엑소좀-매개된 질환, 예를 들어 암 치료제에 관한 것이다.The present disclosure relates to a therapeutic agent for an exosome-mediated disease, and more particularly, to an exosome-mediated disease containing botulinum toxin as an active ingredient, for example, a therapeutic agent for cancer.
엑소좀(exosomes)은 세포외 소낭(extracellular vesicles)의 일종으로, 대략 직경 100 ㎚의 크기를 갖는다. 이들은 지질 이중막으로 둘러싸여 있으며 대부분의 세포로부터 분비된다. 엑소좀은 엔도사이틱 시스템(endocytic system) 내에서 ILV(intraluminal membrane vesicle)로 생성되며 세포막과 MVB(multivesicular body)의 융합 동안 분비된다. 엑소좀이 세포-세포 소통(cell-cell communication)을 조절하여 조직 항상성(homeostasis) 유지에 기여하는 것으로 보고된 바 있다. 암 세포로부터 방출된 엑소좀은 암 진행에 관여한다. 증식성 암 세포는 (ⅰ) 혈관신생을 이용한 암 조직의 확장, (ⅱ) 이동 및 침투 능력 획득, 및 (ⅲ) 면역 세포로부터의 공격을 회피하는 능력 획득, 및 궁극적으로 전이성 병변(metastatic lesion)의 형성을 나타낸다. 지금까지의 연구 결과는 엑소좀이 이들 과정의 각각에 관여하고 있음을 보여준다. 국제공개 WO2010/056337호는 대상으로부터 혈액 등과 같은 생물학적 시료 내에서 분리된 엑소좀을 정량하여 다양한 암을 검출 및 진단하는 방법을 개시하고 있다.Exosomes are a type of extracellular vesicles, and have a size of approximately 100 nm in diameter. They are surrounded by a lipid bilayer and are secreted by most cells. Exosomes are generated as an intraluminal membrane vesicle (ILV) within the endocytic system and are secreted during the fusion of the cell membrane and the multivesicular body (MVB). It has been reported that exosomes contribute to maintaining tissue homeostasis by regulating cell-cell communication. Exosomes released from cancer cells are involved in cancer progression. Proliferative cancer cells (i) expand cancer tissue using angiogenesis, (ii) acquire the ability to migrate and invade, and (iii) acquire the ability to evade attack from immune cells, and ultimately metastatic lesion indicates the formation of Research results to date show that exosomes are involved in each of these processes. International Publication No. WO2010/056337 discloses a method for detecting and diagnosing various cancers by quantifying exosomes isolated from a biological sample such as blood from a subject.
보툴리눔 독소(Botulinum neurotoxin, BoNT)는 혐기성 박테리아 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)의 폴리펩티드 생성물로서, 신경세포에 특이적으로 작용하는 독성물질이다. 보툴리눔 독소는 본래 치사를 일으키는 독성 물질이지만, 연축성 사경(cervical dystonia: CD), 안검경련(blepharospasm), 다한증(hyperhidrosis), 사시(strabismus), 이완불능(achalasia), 신경성 방광(neurogenic bladder), 비뇨기 질환(urologic disease), 편두통(migraine) 등의 치료를 위해 사용되고 있다.Botulinum toxin (Botulinum neurotoxin, BoNT) is a polypeptide product of the anaerobic bacterium Clostridium botulinum , and is a toxic substance that specifically acts on nerve cells. Botulinum toxin is a toxic substance that intrinsically causes lethality, but it has been shown to be associated with various types of diseases such as celiac disease (CD), blepharospasm, hyperhidrosis, strabismus, achalasia, neurogenic bladder, It is used to treat urologic disease, migraine, and the like.
국제공개 WO2006/025976호는 보툴리눔 독소를 암 또는 그 근처에 국소 투여하여 과형성(hyperplastic) 조직, 낭포(cysts) 및 신생물(neoplasms)과 같은 비정형 조직을 치료하는 방법을 개시하고 있다. 또한, 국제공개 WO2010/062955호는 신생물 근처의 비-신생성 부위(non-neoplastic area)에 치료 유효량의 보툴리눔 독소를 항암 약물이나 항암 요법과 병용 투여하되, 치료 유효량의 보툴리눔 독소가 신생물을 투과(penetrate)하지 않는, 신생물의 성장이나 전이를 저해하는 방법을 개시하고 있다.International Publication No. WO2006/025976 discloses a method for treating atypical tissues such as hyperplastic tissues, cysts and neoplasms by topical administration of botulinum toxin to or near cancer. In addition, International Publication No. WO2010/062955 discloses that a therapeutically effective amount of botulinum toxin is administered in combination with an anticancer drug or anticancer therapy to a non-neoplastic area near a neoplasm, but a therapeutically effective amount of botulinum toxin is A non-penetrate method for inhibiting the growth or metastasis of a neoplasm is disclosed.
보툴리눔 독소의 엑소좀 분비 억제나 엑소좀-매개된 질환의 치료 효과에 대해서는 알려진 바 없었다.It was not known about the suppression of exosome secretion of botulinum toxin or the therapeutic effect of exosome-mediated diseases.
본 개시의 제1 목적은 유효성분으로 보툴리눔 독소를 포함하는, 엑소좀-매개된 질환을 치료하기 위한 조성물을 제공하는 것이다.A first object of the present disclosure is to provide a composition for treating an exosome-mediated disease, comprising a botulinum toxin as an active ingredient.
본 개시의 제2 목적은 치료 유효량의 보툴리눔 독소를 이를 필요로 하는 대상에게 투여하여 엑소좀-매개된 질환을 치료하는 방법을 제공하는 것이다.A second object of the present disclosure is to provide a method for treating an exosome-mediated disease by administering a therapeutically effective amount of a botulinum toxin to a subject in need thereof.
본 개시의 제3 목적은 엑소좀-매개된 질환 치료제로 사용하기 위한 보툴리눔 독소를 제공하는 것이다.A third object of the present disclosure is to provide a botulinum toxin for use as a therapeutic agent for exosome-mediated diseases.
본 개시의 제4 목적은 보툴리눔 독소의 엑소좀-매개된 질환 치료제로서의 사용에 관한 것이다. A fourth object of the present disclosure relates to the use of botulinum toxin as a therapeutic agent for exosome-mediated diseases.
본 개시의 제1 측면은 유효성분으로 보툴리눔 독소를 포함하는, 엑소좀-매개된 질환을 치료하기 위한 조성물에 관한 것이다.A first aspect of the present disclosure relates to a composition for treating an exosome-mediated disease, comprising a botulinum toxin as an active ingredient.
본 개시의 제2 측면은 치료 유효량의 보툴리눔 독소를 이를 필요로 하는 대상에게 투여하여 엑소좀-매개된 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.A second aspect of the present disclosure relates to a method of treating an exosome-mediated disease by administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of a botulinum toxin.
본 개시의 제3 측면은 엑소좀-매개된 질환 치료제로 사용하기 위한 보툴리눔 독소에 관한 것이다.A third aspect of the present disclosure relates to a botulinum toxin for use as a therapeutic agent for exosome-mediated diseases.
본 개시의 제4 측면은 보툴리눔 독소의 엑소좀-매개된 질환 치료제로서의 사용에 관한 것이다. A fourth aspect of the present disclosure relates to the use of botulinum toxin as a therapeutic agent for exosome-mediated diseases.
본 개시에 따르면, 보툴리눔 독소 또는 이를 포함하는 조성물은 엑소좀 분비를 억제함으로써 엑소좀-매개된 질환, 예를 들어 암, 예를 들어 전이성 암, 예를 들어 고형암의 치료제로 유용할 수 있다.According to the present disclosure, a botulinum toxin or a composition comprising the same may be useful as a therapeutic agent for an exosome-mediated disease, for example, a cancer, for example, a metastatic cancer, for example, a solid cancer by inhibiting exosome secretion.
도 1은 마우스 악성 흑색종 이식 모델에서 보툴리눔 독소 투여 후 경시적인 종양 성장을 보여주는 그래프이다.
도 2는 마우스 악성 흑색종 이식 모델에서 보툴리눔 독소 투여 후 투여 용량 별 폐 전이성 병소의 수를 보여주는 그래프이다.
도 3는 마우스 악성 흑색종 이식 모델에서 보툴리눔 독소 투여 후 투여 용량 별 혈액 내 CCL2(1)), IL-6(2)), 및 TNF(3)) 수치를 나타낸 그래프이다.
도 4는 마우스 유선 종양 이식 모델에서 보툴리눔 독소 투여 후 경시적인 종양 성장을 보여주는 그래프이다.
도 5는 마우스 유선 종양 이식 모델에서 보툴리눔 독소 투여 후 투여 용량 별 혈액 내 엑소좀 수를 나타낸 그래프이다.
도 6는 마우스 및 인간 종양 세포주에서 보툴리눔 독소의 농도별 처리에 의한 성장 저해 효과를 보여주는 그래프이다.
도 7은 마우스 흑색종에서 보툴리눔 독소의 처리에 의한 엑소좀 감소 효과를 보여주는 그래프이다.
도 8은 인간 췌장암 세포주에서 보툴리눔 독소의 처리에 의한 엑소좀 감소 효과를 보여주는 그래프이다.
도 9는 인간 종양 세포주에서 보툴리눔 독소의 농도별 처리에 의한 성장 저해 효과를 보여주는 그래프이다.1 is a graph showing tumor growth over time after administration of botulinum toxin in a mouse malignant melanoma transplantation model.
2 is a graph showing the number of lung metastatic lesions by dose after administration of botulinum toxin in a mouse malignant melanoma transplant model.
FIG. 3 is a graph showing CCL2(1)), IL-6(2)), and TNF(3)) levels in blood for each dose administered after botulinum toxin administration in a mouse malignant melanoma transplant model.
4 is a graph showing tumor growth over time after administration of botulinum toxin in a mouse mammary gland tumor transplantation model.
5 is a graph showing the number of exosomes in blood for each dose administered after botulinum toxin administration in a mouse mammary gland tumor transplantation model.
6 is a graph showing the growth inhibitory effect of each concentration of botulinum toxin treatment in mouse and human tumor cell lines.
7 is a graph showing the effect of reducing exosomes by treatment with botulinum toxin in mouse melanoma.
8 is a graph showing the effect of reducing exosomes by treatment with botulinum toxin in a human pancreatic cancer cell line.
9 is a graph showing the growth inhibitory effect of each concentration of botulinum toxin in a human tumor cell line.
본 명세서에서 사용되는, 용어 '보툴리눔 독소(botulinum toxin)'는 모든 혈청형(serotype) 및 이것의 변이체 또는 융합 단백질을 포함하여 세균 또는 재조합에 의해 생성되는 보툴리눔 독소 단백질 분자를 의미한다.As used herein, the term 'botulinum toxin' refers to a botulinum toxin protein molecule produced by bacteria or recombinantly, including all serotypes and variants or fusion proteins thereof.
클로스트리디움 보툴리눔 균주는 면역학적으로 구별되는 신경독소(타입 A-G)를 생산한다. 타입 A-G 신경독소(NTX)의 분자량(molecular masses)은 약 150 kDa(7S)이다. 산성 조건을 갖는 배양 배지 및 식품에서, NTX는 비독성 성분과 결합하여 PTX(progenitor toxins)라고 불리는 큰 복합체를 형성한다. 900 kDa(19S), 500 kDa(16S) 및 300 kDa(12S)의 분자량을 갖는 PTX가 발견된다. 12S 독소는 NTX와 헤마글루티닌 활성을 갖지 않는 비독성 성분(nontoxic nonhemagglutinin; NTNH로 명명)으로 이루어지며, 19S 및 16S 독소는 NTX, NTNH 및 헤마글루티닌으로 이루어진다. 타입 A 균주는 3가지 형태의 독소(19S, 16S 및 12S)를 생산한다. 타입 B, C 및 D 균주는 16S와 12S 독소를 생산한다. 알칼리 조건에서, PTX는 NTX와 비독성 성분으로 해리되고, 19S 및 16S 독소는 NTX와 NTNH 및 헤마글루티닌의 비독성 성분(복합체)으로 해리되며, 12S 독소는 NTX와 NTNH로 해리된다. 본 명세서에서, 보툴리눔 독소는 상기한 어떠한 형태의 것일 수도 있으며, 예를 들어 19S, 16S, 12S, 또는 7S의 분자량을 갖는 것일 수 있다.The Clostridium botulinum strain produces immunologically distinct neurotoxins (types A-G). The molecular masses of type A-G neurotoxin (NTX) are about 150 kDa (7S). In culture media and foods with acidic conditions, NTX combines with non-toxic components to form large complexes called progenitor toxins (PTX). PTX with molecular weights of 900 kDa (19S), 500 kDa (16S) and 300 kDa (12S) are found. 12S toxin consists of NTX and a nontoxic nonhemagglutinin (named NTNH) having no hemagglutinin activity, and 19S and 16S toxin consists of NTX, NTNH and hemagglutinin. Type A strains produce three types of toxins (19S, 16S and 12S). Type B, C and D strains produce 16S and 12S toxins. Under alkaline conditions, PTX dissociates into NTX and non-toxic components, 19S and 16S toxins dissociate into NTX and NTNH and non-toxic components (complex) of hemagglutinin, and 12S toxins dissociate into NTX and NTNH. In the present specification, the botulinum toxin may be of any of the above-described forms, for example, may have a molecular weight of 19S, 16S, 12S, or 7S.
보툴리눔 독소는 보툴리눔 독소 유도체를 포함한다. 보툴리눔 독소 유도체는 보툴리눔 독소 활성을 갖는 천연 보툴리눔 독소 또는 재조합 원형 보툴리눔 독소의 일부 또는 일부 사슬 상에 하나 이상의 화학적 또는 기능적 변형을 포함하는 유도체일 수 있다. 예를 들어, 보툴리눔 독소 유도체는 결실, 변형 또는 치환된 하나 이상의 아미노산을 갖는 변형된 독소일 수 있다. 보툴리눔 독소는 재조합 펩티드, 융합 단백질, 또는 예를 들어, 상이한 독소 혈청형의 서브유닛 또는 도메인으로부터 제조된 하이브리드 신경독소일 수 있다. 보툴리눔 독소는 또한 독소 활성을 갖는 전체 분자의 일부일 수 있으며, 이것의 조합 또는 컨쥬게이션된 분자, 예를 들어, 융합 단백질의 일부로서 이용될 수 있다.Botulinum toxin includes botulinum toxin derivatives. The botulinum toxin derivative may be a part of a natural botulinum toxin having activity or a recombinant prototype botulinum toxin or a derivative comprising one or more chemical or functional modifications on a partial chain. For example, the botulinum toxin derivative may be a modified toxin having one or more amino acids deleted, modified or substituted. The botulinum toxin may be a recombinant peptide, a fusion protein, or a hybrid neurotoxin prepared, for example, from subunits or domains of different toxin serotypes. The botulinum toxin may also be a part of a whole molecule having a toxin activity, and may be used in combination or as part of a conjugated molecule, for example, a fusion protein.
'투여' 또는 '투여하는 것'은 제약 조성물 또는 유효성분을 대상에게 제공하는 단계를 의미한다. 제약 조성물은 다양한 적절한 경로를 통하여 투여될 수 있다.'Administering' or 'administering' refers to a step of providing a pharmaceutical composition or an active ingredient to a subject. The pharmaceutical composition may be administered via a variety of suitable routes.
'제약 조성물'은 유효성분이 보툴리눔 독소일 수 있는 제제를 의미한다. '제제'라는 용어는 보툴리눔 신경독소 유효성분 이외에 적어도 1종의 추가적인 성분, 예를 들면 알부민(인간 혈청 알부민 또는 재조합 인간 알부민) 및/또는 소듐 클로라이드가 제약 조성물 중에 존재한다는 것을 의미한다. 제약 조성물은 인간 환자와 같은 대상에의 투여에 적합한 제제이다. 제약 조성물은 동결건조된 형태, 예를 들면 식염수 또는 물을 사용한 동결건조된 제약 조성물의 재구성 후 형성되는 용액, 또는 재구성을 필요로 하지 않는 용액 형태일 수 있다. 제약 조성물은 액체 또는 고체일 수 있다. 제약 조성물에는 동물 유래 단백질 및/또는 알부민이 없을 수 있다.“Pharmaceutical composition” means a formulation in which the active ingredient may be botulinum toxin. The term 'formulation' means that in addition to the active ingredient, at least one additional ingredient is present in the pharmaceutical composition, such as albumin (human serum albumin or recombinant human albumin) and/or sodium chloride. A pharmaceutical composition is a formulation suitable for administration to a subject, such as a human patient. The pharmaceutical composition may be in lyophilized form, for example a solution formed after reconstitution of the lyophilized pharmaceutical composition with saline or water, or in the form of a solution that does not require reconstitution. Pharmaceutical compositions may be liquid or solid. The pharmaceutical composition may be free of animal-derived proteins and/or albumin.
'치료 유효량'은 유의성 있는 부정적이거나 불리한 부작용을 야기하지 않으면서 질환, 장애 또는 이상을 치료하는 데에 요구되는 작용제, 예를 들어 보툴리눔 독소 또는 보툴리눔 독소를 포함하는 제약 조성물의 수준, 양 또는 농도를 의미한다.'therapeutically effective amount' means the level, amount or concentration of a pharmaceutical composition comprising an agent, e.g., botulinum toxin or botulinum toxin, required to treat a disease, disorder or condition without causing significant adverse or adverse side effects do.
'치료하다', '치료하는 것' 또는 '치료'는 예컨대 상처를 입거나 손상된 조직의 치유, 또는 기존의 것이거나 인지된 질환, 장애 또는 이상을 변경, 변화, 강화, 개선, 개량 및/또는 미화하는 것에 의해, 원하는 치료상의 결과를 달성하도록 하는, 질환, 장애 또는 이상의 경감 또는 감소(일부 감소, 상당한 감소, 거의 완전한 감소 및 완전한 감소 포함), 해결 또는 예방(일시적이거나 영구적인 것)을 의미한다. 본 명세서에서, '치료'는 예방을 포함하는 개념이다. '예방'은 질병, 장애 또는 질환의 발병의 지연을 의미한다. 질병, 장애 또는 질환의 발병이 예정된 기간 동안 지연된 경우 예방은 완전한 것으로 간주될 수 있다.'Treat', 'treating' or 'treatment' refers to, for example, healing of wounded or damaged tissue, or altering, altering, enhancing, ameliorating, ameliorating and/or modifying an existing or recognized disease, disorder or condition. means alleviation or reduction (including partial reduction, significant reduction, near-complete reduction and complete reduction), resolution or prevention (temporary or permanent) of a disease, disorder or condition, by beautification, so as to achieve a desired therapeutic outcome do. As used herein, 'treatment' is a concept including prevention. By 'prevention' is meant delaying the onset of a disease, disorder or condition. Prevention may be considered complete if the onset of the disease, disorder or condition is delayed for a predetermined period.
본 개시는 보툴리눔 독소 또는 이를 포함하는 조성물이 엑소좀 분비를 억제함으로써 엑소좀-매개된 질환, 예를 들어 암, 예를 들어 전이성 암, 예를 들어 고형암의 치료제로 유용할 수 있음을 발견한 것에 기초한 것이다.The present disclosure responds to the discovery that botulinum toxin or a composition comprising the same may be useful as a therapeutic agent for exosome-mediated diseases, such as cancer, for example, metastatic cancer, for example, solid cancer by inhibiting exosome secretion. it is based
본 개시의 일 측면에 따르면, 보툴리눔 독소 또는 이를 포함하는 조성물은 엑소좀-매개된 질환을 치료하기 위한 것일 수 있다.According to one aspect of the present disclosure, a botulinum toxin or a composition comprising the same may be for treating an exosome-mediated disease.
구체예에서, 엑소좀-매개된 질환은 암, 바이러스 감염, 신경 질환 또는 류마티스성 질환일 수 있으며, 특히 엑소좀-매개된 질환은 암일 수 있다.In an embodiment, the exosome-mediated disease may be cancer, a viral infection, a neurological disease or a rheumatic disease, and in particular the exosome-mediated disease may be cancer.
구체예에서, 암은 전이성 암(metastatic cancer)일 수 있다.In an embodiment, the cancer may be metastatic cancer.
구체예에서, 암은 고형암(solid tumor)일 수 있다. 고형암의 비제한적인 예들은 유방암, 폐암, 두부 또는 경부암, 대장암, 식도암, 후두암, 위암, 간암, 췌장암, 골암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부근암, 결장암, 유방암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, CNS 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌종양, 예를 들어 신경교종(예: 성상세포종(astrocytoma), 교모세포종(glioblastoma), 핍지교종(oligodendroglioma) 상의세포종(ependymoma), 배아세포종, 수막종, 뇌간신경교종, 뇌하수체 선종, 신경초종, 선천성종양, 두개인두종, 전이성 뇌종양을 포함할 수 있다. 예를 들어, 고형암은 흑색종, 유방암, 폐암, 췌장암, 뇌종양 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 것일 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다.In an embodiment, the cancer may be a solid tumor. Non-limiting examples of solid cancer include breast cancer, lung cancer, head or neck cancer, colorectal cancer, esophageal cancer, laryngeal cancer, stomach cancer, liver cancer, pancreatic cancer, bone cancer, skin cancer, skin or intraocular melanoma, uterine cancer, ovarian cancer, rectal cancer, perianal cancer, Colon cancer, breast cancer, fallopian tube carcinoma, endometrial carcinoma, cervical carcinoma, vaginal carcinoma, vulvar carcinoma, Hodgkin's disease, small intestine cancer, endocrine adenocarcinoma, thyroid cancer, parathyroid cancer, adrenal cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, penile cancer, prostate cancer , chronic or acute leukemia, lymphocytic lymphoma, bladder cancer, kidney or ureter cancer, renal cell carcinoma, renal pelvic carcinoma, CNS tumor, primary CNS lymphoma, spinal cord tumor, brain tumor, such as glioma (eg, astrocytoma) , glioblastoma, oligodendroglioma, ependymoma, germ cell tumor, meningioma, brainstem glioma, pituitary adenoma, schwannoma, congenital tumor, craniopharyngoma, metastatic brain tumor. For example, solid cancer may be one or more selected from the group consisting of melanoma, breast cancer, lung cancer, pancreatic cancer, brain tumor and prostate cancer, but is not limited thereto.
일 태양에서, 보툴리눔 독소는 혈청형에 제한 없이 사용 가능하며, 타입 A, B, C, D, E, F, G, H, 또는 이들의 조합, 예를 들어 타입 A를 사용할 수 있다.In one embodiment, the botulinum toxin can be used without limitation of serotype, and type A, B, C, D, E, F, G, H, or a combination thereof, for example type A, can be used.
일 태양에서, 보툴리눔 독소를 포함하는 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.In one aspect, the composition comprising botulinum toxin may further comprise one or more pharmaceutically acceptable excipients or additives.
약제학적으로 허용되는 부형제 또는 첨가제는 안정화제, 이온 화합물(ionic compound), 계면활성제, 완충제, 동결건조 보호제, 또는 이들의 조합, 예를 들어 아미노산(예를 들어 메티오닌), 염(예를 들어 NaCl), 완충액, 비이온성 계면활성제(예를 들어 폴리소르베이트, 예를 들어 폴리소르베이트 20), 당(예를 들어 백당 등과 같은 다이사카라이드), 당 알코올(예를 들어 소르비톨), 또는 이들의 조합일 수 있다.Pharmaceutically acceptable excipients or additives include stabilizers, ionic compounds, surfactants, buffers, lyophilization protectants, or combinations thereof, such as amino acids (eg methionine), salts (eg NaCl). ), buffers, nonionic surfactants (e.g. polysorbate, e.g. polysorbate 20), sugars (e.g. disaccharides such as sucrose), sugar alcohols (e.g. sorbitol), or their It can be a combination.
상기 조성물은 알부민 또는 동물 유래 성분이나 폴리사카라이드를 포함하지 않는 것일 수 있다.The composition may not contain albumin or animal-derived components or polysaccharides.
상기 조성물은 예를 들어 WO2009-008595 A1 또는 WO2012-134240 A2에 개시되어 있는 것들을 포함하며, 상기 특허의 내용은 그 전체로 본 명세서에서 참조로 인용된다.Said compositions include, for example, those disclosed in WO2009-008595 A1 or WO2012-134240 A2, the contents of which are incorporated herein by reference in their entirety.
상기 조성물은 상업적으로 입수가능한 보툴리눔 독소 함유 제약 조성물을 제한 없이 포함하며, 예를 들어 보톡스(BOTOX)®(인간 혈청 알부민 및 염화나트륨과의 보툴리눔 독소 타입 A 신경독소 복합체)(알러간, 인코포레이티드(Allergan, Inc.: 미국 캘리포니아주 얼바인)), 디스포트(DYSPORT)®(사용 전 0.9% 염화나트륨으로 재구성되는 분제로서, 제제 중 인간 혈청 알부민 및 락토스와의 클로스트리디움 보툴리눔 타입 A 독소 헤마글루티닌 복합체)(입센 리미티드(Ipsen Limited: 영국 버크셔)), 미오블록(MYOBLOC)™(보툴리눔 독소 타입 B, 인간 혈청 알부민, 숙신산 나트륨, 및 염화나트륨을 포함하는 주사액(약 pH 5.6))(솔스티스 뉴로사이언시즈, 인크.(Solstice Neurosciences, Inc.: 미국 캘리포니아주 사우스 샌프란시스코)), 메디톡신®(클로스트리디움 보툴리눔독소 A형, 사람혈청알부민 및 염화나트륨을 포함하는 동결건조 분말 제제)(㈜메디톡스, 한국), 이노톡스®(클로스트리디움 보툴리눔독소 A형, L-메티오닌, 폴리소르베이트20, 염화나트륨 및 주사용수를 포함하는 액상 제제)(㈜메디톡스, 한국), 코어톡스®(클로스트리디움 보툴리눔독소 A형(150kD), 폴리소르베이트20, 백당 및 염화나트륨을 포함하는 동결건조 분말 제제)(㈜메디톡스, 한국)를 포함할 수 있다. 구체예에서, 상기 조성물은 메디톡신®, 이노톡스®, 코어톡스® 또는 이들의 하나 이상의 조합일 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다.The compositions include, without limitation, commercially available pharmaceutical compositions containing botulinum toxin, such as, for example, BOTOX® (botulinum toxin type A neurotoxin complex with human serum albumin and sodium chloride) (Allergan, Inc.) (Allergan, Inc.: Irvine, CA, USA)), DYSPORT® (a powder reconstituted with 0.9% sodium chloride prior to use, Clostridium Botulinum Type A Toxin hemaggluti with human serum albumin and lactose in the formulation. nin complex) (Ipsen Limited (Berkshire, UK)), MYOBLOC™ (injection solution containing botulinum toxin type B, human serum albumin, sodium succinate, and sodium chloride (approximately pH 5.6)) (Solstice Neuroscience) Seeds, Inc. (Solstice Neurosciences, Inc.: South San Francisco, CA)), Medytoxin® (a freeze-dried powder formulation containing Clostridium botulinum toxin type A, human serum albumin and sodium chloride) (Medytox, Korea) , Innotox® (clostridium botulinum toxin type A, L-methionine,
일 태양에서, 상기 조성물은 고체 또는 액체 제제, 예를 들어 동결건조 분말, 액상, 또는 프리필드 시린지(pre-filled syringe) 제제 등 어떠한 형태로도 제제화될 수 있다.In one embodiment, the composition may be formulated in any form, such as a solid or liquid formulation, for example, a lyophilized powder, a liquid, or a pre-filled syringe formulation.
일 태양에서, 상기 조성물은 국소로 투여하기 위한 제제일 수 있다. 예를 들어, 국소 투여는 종양 내 투여 또는 종양 주변 투여일 수 있으며, 전형적으로 보툴리눔 독소 수용액의 종양 내 주사(intratumoral injection) 또는 종양 주변 주사(peritumoral injection)에 의해 이루어질 수 있다. 예를 들어, 제제는 피하 또는 연부조직으로 투여될 수 있다.In one embodiment, the composition may be a formulation for topical administration. For example, topical administration may be intratumoral administration or peritumoral administration, and typically may be accomplished by intratumoral injection or peritumoral injection of an aqueous botulinum toxin solution. For example, the formulation may be administered subcutaneously or soft tissue.
일 태양에서, 보툴리눔 독소의 치료 유효량은 약 0.01 U/㎏ 내지 약 100 U/㎏, 약 0.1 U/㎏ 내지 약 100 U/㎏, 약 0.2 U/㎏ 내지 약 100 U/㎏, 약 0.2 U/㎏ 내지 약 50 U/㎏, 약 0.2 U/㎏ 내지 약 30 U/㎏, 약 0.2 U/㎏ 내지 약 10 U/㎏, 약 0.2 U/㎏ 내지 약 1 U/㎏이다. 다른 태양에서, 체중 60 ㎏ 성인 기준으로 약 1 U 내지 약 10,000 U, 약 1 U 내지 약 5,000 U, 약 1 U 내지 약 2,500 U, 약 1 U 내지 약 1,000 U, 약 1 U 내지 약 500 U, 약 1 U 내지 약 300 U, 약 1 U 내지 약 200 U, 약 10 U 내지 약 200 U, 약 10 U 내지 약 100 U, 약 10 U 내지 약 50 U일 수 있다.In one aspect, a therapeutically effective amount of botulinum toxin is about 0.01 U/kg to about 100 U/kg, about 0.1 U/kg to about 100 U/kg, about 0.2 U/kg to about 100 U/kg, about 0.2 U/kg kg to about 50 U/kg, from about 0.2 U/kg to about 30 U/kg, from about 0.2 U/kg to about 10 U/kg, from about 0.2 U/kg to about 1 U/kg. In another aspect, based on an adult weighing 60 kg, from about 1 U to about 10,000 U, from about 1 U to about 5,000 U, from about 1 U to about 2,500 U, from about 1 U to about 1,000 U, from about 1 U to about 500 U, about 1 U to about 300 U, about 1 U to about 200 U, about 10 U to about 200 U, about 10 U to about 100 U, about 10 U to about 50 U.
본 명세서에서 사용되는, "유닛", "unit(s)", 또는 "U"라는 용어는 보툴리눔 독소 주사를 맞은 마우스 중 50%를 사멸시킨 보툴리눔 독소의 양으로서 정의되는, LD50 용량을 지칭하는 것으로, 호환 가능하게 사용된다.As used herein, the term "unit", "unit(s)", or "U" refers to a LD 50 dose, defined as the amount of botulinum toxin that killed 50% of mice that received a botulinum toxin injection. As such, they are used interchangeably.
일 태양에서, 보툴리눔 독소 또는 이를 포함하는 조성물은 엑소좀 분비가 증가된 대상에서 사용할 수 있다.In one embodiment, botulinum toxin or a composition comprising the same can be used in subjects with increased exosome secretion.
일 태양에서, 엑소좀-매개된 질환을 치료하는 방법은 하기 단계를 포함하는 것일 수 있다:In one aspect, a method of treating an exosome-mediated disease may comprise the steps of:
1) 대상으로부터 수득된 생물학적 시료에서 분비된 엑소좀을 정량하는 단계; 및,1) quantifying the exosomes secreted from the biological sample obtained from the subject; and,
2) 엑소좀 분비가 증가된 대상에게 치료 유효량의 보툴리눔 독소 또는 이를 포함하는 조성물을 투여하는 단계.2) administering a therapeutically effective amount of a botulinum toxin or a composition comprising the same to a subject with increased exosome secretion.
분비된 엑소좀은 당업계에 알려져 있는 통상적인 방법에 따라, 대상의 생물학적 시료, 예를 들어 혈액으로부터 분리하여 정량할 수 있으며, 시료의 종류, 분리 및 정량 방법에 특별한 제한이 있는 것은 아니다.The secreted exosomes can be separated and quantified from a biological sample of a subject, for example, blood according to a conventional method known in the art, and there is no particular limitation on the type of sample, separation and quantification method.
보툴리눔 독소 또는 이를 포함하는 조성물이 투여되는 대상은 인간이나 동물, 예를 들어 인간, 돼지, 개, 고양이, 소, 말, 쥐 등을 제한 없이 포함할 수 있다.The subject to which the botulinum toxin or a composition comprising the same is administered may include, without limitation, a human or an animal, for example, a human, a pig, a dog, a cat, a cow, a horse, a rat, and the like.
일 태양에서, 보툴리눔 독소 또는 이를 포함하는 조성물은 1종 이상의 다른 약물 또는 요법과 병용 투여될 수 있다. 본 명세서에서, "병용 투여"는 사전에 투여된 치료제가 체내에서 여전히 유효한 동안 제2 치료제가 투여되도록 하는 2종 이상의 상이한 치료제의 임의의 형태를 가리킨다. 예를 들어, 2종의 치료제는 대상에서 동시에 유효하며, 이는 2종의 치료제의 상승 효과를 포함할 수 있다. 상이한 치료제는 동일한 제제 또는 별개의 제제로 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.In one aspect, botulinum toxin or a composition comprising the same may be administered in combination with one or more other drugs or therapies. As used herein, "combination administration" refers to any form of two or more different therapeutic agents that allow a second therapeutic agent to be administered while the previously administered therapeutic agent is still effective in the body. For example, two therapeutic agents are simultaneously effective in a subject, which may include a synergistic effect of the two therapeutic agents. The different therapeutic agents may be administered simultaneously or sequentially in the same formulation or in separate formulations.
구체예에서, 보툴리눔 독소 또는 이를 포함하는 조성물은 다른 치료제, 예를 들어 항암제, 항바이러스제, 사이토카인 또는 면역 작용제와 병용 투여될 수 있다.In an embodiment, botulinum toxin or a composition comprising the same may be administered in combination with other therapeutic agents, for example, anticancer agents, antiviral agents, cytokines, or immune agents.
보툴리눔 독소 또는 이를 포함하는 조성물은 화학치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 화학치료제의 비제한적인 예는 알킬화제, 나이트로소우레아제, 항대사물질, 항암 항생제, 식물-기원 알칼로이드, 토포아이소머라제 저해제, 호르몬 약물, 호르몬 길항제, 백혈구감소증(호중구감소증) 치료 약물, 혈소판감소증 치료 약물, 항구토제, 아로마타제 저해제, P-당단백질 저해제, 백금 착물 유도체, 다른 면역치료 약물 및 다른 항암 약물을 포함한다. 병용 투여될 수 있는 예시적인 세포독성제는 항미세소관 작용제, 토포아이소머라제 저해제, 항대사물질, 유사분열 저해제, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알카로이드, 인터칼레이팅제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 작용제, 아포토시스를 촉진하는 작용제, 프로테오좀 저해제 및 방사선(국소 또는 전신 조사)을 포함한다. 추가적인 치료제의 비제한적인 예는 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 융합 단백질, 핵산 분자, 소분자, 모방 작용제, 합성 약물, 무기 분자 및 유기 분자를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.The botulinum toxin or a composition comprising the same may be administered in combination with a chemotherapeutic agent. Non-limiting examples of chemotherapeutic agents include alkylating agents, nitrosourases, antimetabolites, anticancer drugs, plant-derived alkaloids, topoisomerase inhibitors, hormonal drugs, hormone antagonists, leukopenia (neutropenia) therapeutic drugs, thrombocytopenia. therapeutic drugs, antiemetics, aromatase inhibitors, P-glycoprotein inhibitors, platinum complex derivatives, other immunotherapeutic drugs, and other anticancer drugs. Exemplary cytotoxic agents that may be administered in combination include anti-microtubule agents, topoisomerase inhibitors, antimetabolites, mitotic inhibitors, alkylating agents, anthracyclines, vinca alkaloids, intercalating agents, and may interfere with signal transduction pathways. agents that promote apoptosis, proteosome inhibitors, and radiation (local or systemic irradiation). Non-limiting examples of additional therapeutic agents include, but are not limited to, peptides, polypeptides, proteins, fusion proteins, nucleic acid molecules, small molecules, mimetic agents, synthetic drugs, inorganic molecules, and organic molecules.
보툴리눔 독소 또는 이를 포함하는 조성물은 면역요법제와 병용하여 투여될 수 있다. 일 태양에서, 면역요법제는 당업계에 알려져 있는 어떠한 물질이나 요법도 사용 가능하며, 사이토카인, 암 백신, 단일클론 항체, 비사이토카인 보조제, 면역 세포(T 세포, NK 세포, 수지상 세포, B 세포 등), 면역관문 억제제를 포함할 수 있다. 구체예에서, 면역요법제는 면역관문 억제제이다. 면역관문 억제제는 펩티드, 항체, 핵산 분자 및 소형 분자를 포함한다. 예를 들어, 면역관문 억제제는 대상에서 CD8+ T 세포의 증식성, 이동성, 지속성 및/또는 세포독성 활성, 및 특히 대상의 CD8+ T 세포의 종양 침윤성을 증강시키기 위해 투여될 수 있다. 전형적으로, 면역관문 억제제는 활성화된 T 림프구, 예를 들어 세포독성 T 림프구-연관 단백질 4(CTLA4) 및 프로그램된 세포사멸 1(PD-1), 또는 살해 세포 면역글로불린-유사 수용체(KIR) 패밀리의 다양한 구성원과 같은, NK 세포에 의해 발현되는 면역억제성 수용체를 차단하는 길항제이거나, 이들 수용체의 주요 리간드, 예를 들어 PD-1 리간드 CD274(PD-L1 또는 B7-H1로 가장 잘 알려짐)를 차단하는 길항제이다. 예를 들어, 면역관문 억제제는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 구체적으로, 면역관문 억제제는 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-L2 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-TIM-3 항체, 항-LAG3 항체, 항-IDO1 항체, 항-TIGIT 항체, 항-B7H3 항체, 항-B7H4 항체, 항-BTLA 항체, 및 항-B7H6 항체, 및 이의 항원-결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다. 보다 구체적으로, 면역관문 억제제는 이필리무맙(Ipilimumab)(여보이®, BMS/오노), 트레멜리무맙(Tremelimumab)(아스트라제네카), 아테졸리주맙(atezolizumab)(티쎈트릭®, 로슈), 니볼루맙(nivolumab)(옵디보®, BMS/오노), 펨브롤리주맙(Pembrolizumab)(키트루다®, MSD), 아벨루맙(Avelumab)(바벤시오®, 화이자/독일머크), 더발루맙(Durvalumab)(임핀지®, 아스트라제네카/메드이뮨), 및 이의 항원-결합 단편 중에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다.The botulinum toxin or a composition comprising the same may be administered in combination with an immunotherapeutic agent. In one embodiment, the immunotherapeutic agent may use any substance or therapy known in the art, and may include cytokines, cancer vaccines, monoclonal antibodies, non-cytokine adjuvants, immune cells (T cells, NK cells, dendritic cells, B cells, etc.), and immune checkpoint inhibitors. In an embodiment, the immunotherapeutic agent is an immune checkpoint inhibitor. Immune checkpoint inhibitors include peptides, antibodies, nucleic acid molecules and small molecules. For example, an immune checkpoint inhibitor may be administered to enhance the proliferative, migratory, persistence and/or cytotoxic activity of CD8+ T cells in a subject, and particularly tumor invasiveness of CD8+ T cells in a subject. Typically, checkpoint inhibitors are activated T lymphocytes, such as cytotoxic T lymphocyte-associated protein 4 (CTLA4) and programmed cell death 1 (PD-1), or the killer cell immunoglobulin-like receptor (KIR) family. antagonists that block immunosuppressive receptors expressed by NK cells, such as various members of It is a blocking antagonist. For example, an immune checkpoint inhibitor is an antibody or antigen-binding fragment thereof. Specifically, the checkpoint inhibitor is an anti-PD-1 antibody, an anti-PD-L1 antibody, an anti-PD-L2 antibody, an anti-CTLA-4 antibody, an anti-TIM-3 antibody, an anti-LAG3 antibody, an anti-IDO1 antibody. antibody, anti-TIGIT antibody, anti-B7H3 antibody, anti-B7H4 antibody, anti-BTLA antibody, and anti-B7H6 antibody, and antigen-binding fragment thereof. More specifically, immune checkpoint inhibitors include Ipilimumab (Yervoy®, BMS/Ono), Tremelimumab (AstraZeneca), atezolizumab (Tecentric®, Roche), and nivolumab (nivolumab) (Opdivo®, BMS/Ono), Pembrolizumab (Keytruda®, MSD), Avelumab (Bavencio®, Pfizer/Merck Germany), Durvalumab ( Imfinzi®, AstraZeneca/MedImmune), and antigen-binding fragments thereof may be at least one selected from, but not limited to.
다른 치료제는 CTLA-4 길항제, PD-1 길항제, PD-L1 길항제, PD-L2 길항제, 또는 EGFR 길항제를 포함할 수 있다.The other therapeutic agent may include a CTLA-4 antagonist, a PD-1 antagonist, a PD-L1 antagonist, a PD-L2 antagonist, or an EGFR antagonist.
이하 본 개시를 실시예를 들어 보다 상세히 설명하나, 이는 본 개시를 설명하기 위한 것일 뿐 그 범위를 어떤 식으로든지 제한하고자 하는 것은 아니다.Hereinafter, the present disclosure will be described in more detail with reference to examples, but this is only for explaining the present disclosure and is not intended to limit the scope in any way.
실시예 1: 마우스 악성 흑색종 이식 모델에서 보툴리눔 독소의 항암 효능 시험Example 1: Anticancer efficacy test of botulinum toxin in mouse malignant melanoma transplantation model
수컷 6주령 C57BL/6(구입처: 오리엔트바이오) 마우스를 구입하여 1주간 순화 및 검역 후 7주령 마우스를 실험에 사용하였다. 사료는 멸균된 실험동물용 고형사료(R40-10, SAFE, France)를 자유 급이하였으며, 음수는 상수도수를 고온고압멸균(autoclave)하여 자유 급이하였다. 순화, 검역 및 실험기간 동안 마우스는 온도 23±3 ℃, 상대습도 55±15%, 조명시간 12시간(오전8시~오후8시), 환기횟수 15회/시간 및 조도 150~300 Lux로 설정된 특정-병원체-부재 조건하에서 사육되었다. 본 실험은 ㈜메디톡스 동물실험윤리위원회의 검토 및 승인(A-2020-004) 후 수행되었다.Male 6-week-old C57BL/6 (place of purchase: Orient Bio) mice were purchased, acclimatized and quarantined for 1 week, and 7-week-old mice were used for the experiment. For feed, sterilized solid feed for laboratory animals (R40-10, SAFE, France) was freely fed, and negative water was fed freely by autoclaving tap water at high temperature. During the period of acclimatization, quarantine, and experiment, the mouse was set at a temperature of 23±3 ℃, relative humidity of 55±15%, illumination time of 12 hours (8:00 am to 8:00 pm), ventilation frequency of 15 times/hour, and illumination intensity of 150 to 300 Lux. Raised under specific-pathogen-free conditions. This experiment was conducted after review and approval (A-2020-004) by the Animal Experimental Ethics Committee of Medytox Co., Ltd.
B16-F10 마우스 악성 흑색종 세포주(KCLB No.: 80008)를 한국세포주은행(KCLB: Korean Cell Line Bank)으로부터 수득하였다. B16-F10 세포를 10% FBS(CAT No.: 10082-147, Gibco) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(CAT No.: 15140-122, Gibco) 함유 DMEM 배지(CAT No.: 11965-092, Gibco)에서 37 ℃, 5% CO2 조건으로 인큐베이터에서 배양하였다. 마취된 C57BL/6 마우스 우측 옆구리에 주사기를 이용하여 5×105 세포를 0.1 ㎖ 이식하였다.A B16-F10 mouse malignant melanoma cell line (KCLB No.: 80008) was obtained from the Korean Cell Line Bank (KCLB). B16-F10 cells were cultured in DMEM medium (CAT No.: 11965-092, Gibco) containing 10% FBS (CAT No.: 10082-147, Gibco) and 1% penicillin-streptomycin (CAT No.: 15140-122, Gibco). ) at 37 °C, 5% CO 2 Conditions were incubated in an incubator. Using a syringe, 0.1 ml of 5×10 5 cells were transplanted into the right flank of anesthetized C57BL/6 mice.
비히클로서 보툴리눔 독소 조제에 사용된 멸균 생리식염수(Lot No.: M8T7AF3, 대한약품공업)를 사용하였으며, 보툴리눔 독소로는 100 units 코어톡스(Lot No.: NSA19007A, 메디톡스)를 사용하였다. 아래 표 1에 나타낸 바에 따라 각 시험물질을 조제하여 각 군에 투여하였다.As a vehicle, sterile physiological saline solution (Lot No.: M8T7AF3, Korea Pharmaceutical Industry Co., Ltd.) used for botulinum toxin preparation was used, and 100 units Coretox (Lot No.: NSA19007A, Medytox) was used as the botulinum toxin. As shown in Table 1 below, each test substance was prepared and administered to each group.
마우스 악성 흑색종 이식 후 8일째 체중 및 종양 크기를 측정하여 평균 약 55 ㎣ 크기에서 마우스를 시험군에 따라 각 그룹 당 10마리씩 시험군간 차이가 없게 무작위 배정하였다. 종양 이식 후 8일째 체중을 바탕으로 비히클 및 보툴리눔 독소를 시험군 구성에 따라 종양 내로 투여하였다. 종양 이식 후 주 2회 종양 크기를 측정하였다. 종양 크기는 버니어 캘리퍼로 측정하였고 측정치를 사용해 다음의 식을 이용하여 종양 부피를 계산하였다.On the 8th day after transplantation of mouse malignant melanoma, the body weight and tumor size were measured, and the mice were randomly assigned to each group at an average size of about 55
종양 부피(㎣)=(W2×L)/2Tumor volume (mm3)=(W 2 ×L)/2
W(㎜)=너비(종양의 단축), L(㎜)=종양의 길이(종양의 장축)W (mm) = width (short axis of tumor), L (mm) = length of tumor (long axis of tumor)
종양성장 억제율(TGI; tumor growth inhibition)(%)=(1-평균종양크기시험군/평균종양크기비히클)×100Tumor growth inhibition (TGI; tumor growth inhibition) (%) = (1-Mean tumor size test group / Mean tumor size vehicle )×100
종양 이식 후 19일째, 종양의 크기가 2000 ㎣에 도달하기 전 생존 개체의 혈액을 EDTA 튜브를 이용하여 채취하였고 모든 동물을 안락사하였다. 폐 전이 분석을 위해 폐 조직 적출 후 무게를 측정하고 폐 전이성 병소의 수를 측정하였다. 혈액 내 염증성 사이토카인 CCL2(C-C Motif Chemokine Ligand 2), IL-6(interleukin 6), TNF(tumor necrosis factor)을 BD CBA mouse inflammation kit(Cat No.: 552364, Lot No.: 0031162, BD)을 이용하여 측정하였다. Graphpad Prism(version 7.05, GraphPad Software Inc., CA, USA)을 그래프 제시에 사용하였으며, SPSS software(version 25.0, SPSS Inc., IL, USA)를 통계 분석에 사용하였다. 모수 데이터는 양측(two-tailed) t-검정을 수행하였고 비모수 데이터는 Mann-Whitney 검정 통계분석을 유의 수준 p = 0.05에서 수행하였다.On the 19th day after tumor transplantation, before the tumor size reached 2000
종양 성장 억제율 측정 결과를 표 2 및 도 1에 나타내었다.The measurement results of the tumor growth inhibition rate are shown in Table 2 and FIG. 1 .
(평균 ㎣±SEM)Average tumor size 1)
(average ㎣±SEM)
1) 종양 이식 후 18일째의 결과, ** p<0.01, vs. 비히클. 양측 t-검정. 1) Results on
표 2 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 마우스 악성 흑색종 이식 후 18일째, 1.5 units/㎏ 보툴리눔 독소 단독 종양 내 투여에 의해 평균 1150 ㎣의 종양 크기와 33%의 종양 성장 억제율을 보였으며, 5 units/㎏ 투여군에서는 평균 1336 ㎣, 22%, 15 units/㎏ 투여군에서는 평균 1195 ㎣, 30%, 50 units/㎏ 투여군에서는 평균 682 ㎣, 60% 종양 성장 억제율을 보였다.As shown in Table 2 and FIG. 1 , on the 18th day after mouse malignant melanoma transplantation, intratumoral administration of 1.5 units/kg botulinum toxin alone showed an average tumor size of 1150
폐 전이성 병소 수 측정 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 1.5, 15, 50 units/㎏ 투여군에서 비히클 투여군 대비 폐 전이성 병소의 수가 유의적으로 감소되었다.The results of measuring the number of lung metastatic lesions are shown in FIG. 2 . As shown in FIG. 2 , the number of lung metastatic lesions was significantly reduced in the 1.5, 15, and 50 units/kg administration groups compared to the vehicle administration group.
혈액 내 염증성 사이토카인 분석 결과는 도 3에 나타내었다. 도 3에 나타낸 바와 같이, CCL2는 15 units/㎏ 투여군에서 비히클 투여군 대비 감소되었으며, TNF 는 5, 50 units/㎏ 투여군에서 유의적으로 감소되었다. 혈액 내 IL-6 또한 보툴리눔 독소 투여에 의해 감소된 것이 확인되었다.The results of analysis of inflammatory cytokines in blood are shown in FIG. 3 . As shown in FIG. 3 , CCL2 was decreased in the 15 units/kg administration group compared to the vehicle administration group, and TNF was significantly reduced in the 5 and 50 units/kg administration groups. It was confirmed that IL-6 in the blood was also reduced by administration of botulinum toxin.
실시예 2: 마우스 유선 종양 이식 모델에서 보툴리눔 독소의 항암 효능 시험Example 2: Anticancer efficacy test of botulinum toxin in mouse mammary tumor transplantation model
암컷 6주령 BALB/C 마우스(구입처: 오리엔트바이오)를 구입하여 1주간 순화 및 검역 후 7주령 마우스를 실험에 사용하였다. 사료, 음수, 사육조건은 실시예 1과 같다. 본 실험은 ㈜메디톡스 동물실험윤리위원회의 검토 및 승인(A-2020-004) 후 수행되었다.After purchasing a 6-week-old female BALB/C mouse (place of purchase: Orient Bio), acclimatization and quarantine for 1 week, 7-week-old mice were used for the experiment. Feed, drinking water, and breeding conditions are the same as in Example 1. This experiment was conducted after review and approval (A-2020-004) by the Animal Experimental Ethics Committee of Medytox Co., Ltd.
4T1 마우스 유선 암종 세포주(ATCC® CRL-2539™)를 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection: ATCC)으로부터 수득하였다. 4T1 세포를 10% FBS(CAT No.: 10082-147, Gibco) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(CAT No.: 15140-122, Gibco) 함유 RPMI-1640 배지(CAT No.: LM011-51, Welgene)에서 37 ℃, 5% CO2 조건으로 인큐베이터에서 배양하였다. 마취된 암컷 BALB/C 마우스 4번째 우측 유방 내 지방층에 주사기를 이용하여 5×105 세포를 0.05 ㎖ 이식하였다.The 4T1 mouse mammary carcinoma cell line (ATCC® CRL-2539™) was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC). 4T1 cells were cultured in RPMI-1640 medium (CAT No.: LM011-51, Welgene) containing 10% FBS (CAT No.: 10082-147, Gibco) and 1% penicillin-streptomycin (CAT No.: 15140-122, Gibco). ) at 37 °C, 5% CO 2 Conditions were incubated in an incubator. 0.05 ml of 5×10 5 cells were transplanted into the fat layer in the fourth right breast of anesthetized female BALB/C mice.
비히클로서 보툴리눔 독소 조제에 사용된 멸균 생리식염수(Lot No.: M8T7AF3, 대한약품공업)를 사용하였으며, 보툴리눔 독소로서 100 units 코어톡스(Lot No.: NSA19007A, 메디톡스)를 사용하였다. 표 3에 나타낸 바에 따라 각 시험물질을 조제하여 각 군에 투여하였다.As a vehicle, sterile physiological saline (Lot No.: M8T7AF3, Daehan Pharmaceutical Co., Ltd.) used for botulinum toxin preparation was used, and 100 units Coretox (Lot No.: NSA19007A, Medytox) was used as the botulinum toxin. As shown in Table 3, each test substance was prepared and administered to each group.
마우스 유선 암종 이식 후 5일째 체중 및 종양 크기를 측정하여 평균 약 69 ㎣ 크기에서 마우스를 시험군에 따라 각 그룹 당 10마리씩 시험군간 차이가 없게 무작위 배정하였다. 종양 이식 후 5일째 체중을 바탕으로 비히클 및 보툴리눔 독소를 시험군 구성에 따라 종양 내로 투여하였다. 종양 이식 후 주 2회 종양 크기를 측정하였다. 종양 크기는 실시예 1에 기재된 방법과 동일하게 측정하였다. 종양 이식 후 21일째, 종양의 크기가 1000 ㎣에 도달하기 전에 생존 개체의 혈액을 채취하였고 모든 동물을 안락사하였다. 혈액 내 엑소좀을 Exoquick exosome precipitation solution(Cat No.: EXOQ20A-1, Lot No.: 200107-001, System Biosciences)을 이용하여 분리하였고 ExoELISA-ULTRA Complete Kit(Cat No.: EXEL-ULTRA-CD63-1, Lot No.: 200226-002, System Biosciences)을 이용해 측정하였다. 실시예 1과 동일하게 통계처리를 수행하였다.On the 5th day after transplantation of mouse mammary gland carcinoma, the body weight and tumor size were measured, and the mice were randomly assigned to each group at an average size of about 69
종양 성장 억제율 측정 결과를 표 4 및 도 4에 나타내었다.The measurement results of the tumor growth inhibition rate are shown in Table 4 and FIG. 4 .
(평균 ㎣±SEM)Average tumor size 1)
(average ㎣±SEM)
1) 종양 이식 후 21일째의 결과, * p<0.05, vs. 비히클. . 양측 t-검정. 1) Results on
표 4 및 도 4에 나타낸 바와 같이, 마우스 유선 종양 이식 후 21일째, 1.5 units/㎏ 보툴리눔 독소 단독 종양 내 투여에 의해 평균 916 ㎣의 종양 크기와 7%의 종양 성장 억제율을 보이며, 5 units/㎏ 투여군에서는 평균 773 ㎣ 및 22%, 15 units/㎏ 투여군에서는 평균 776 ㎣ 및 22%, 50 units/㎏ 투여군에서는 평균 833 ㎣ 및 16% 종양 성장 억제율을 보였다.As shown in Table 4 and FIG. 4, on the 21st day after mouse mammary tumor transplantation, 1.5 units/kg botulinum toxin alone intratumoral administration showed an average tumor size of 916
혈액 내 엑소좀의 수 측정 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 15, 50 units/㎏ 보툴리눔 독소 투여군에서 비히클 군 대비 혈액 내 엑소좀의 수가 유의적으로 감소되었다.The results of measuring the number of exosomes in the blood are shown in FIG. 5 . As shown in FIG. 5 , the number of exosomes in the blood was significantly reduced in the 15 and 50 units/kg botulinum toxin administration group compared to the vehicle group.
실시예 3: 보툴리눔 독소의 종양 세포주 증식 억제 효과 시험Example 3: Botulinum toxin tumor cell line proliferation inhibitory effect test
B16-F10 마우스 악성 흑색종 세포주(KCLB No.: 80008), A549 인간 폐암세포주(KCLB No.: 10185), SNU324(KCLB No.: 00324), Capan-2(KCLB No.: 30080) 인간 췌장암 세포주를 한국세포주은행(KCLB: Korean Cell Line Bank)으로부터 수득하였다. B16-F10 세포를 10% FBS(CAT No.: 10082-147, Gibco) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(CAT No.: 15140-122, Gibco) 함유 DMEM 배지(CAT No.: 11965-092, Gibco)에서 37 ℃, 5% CO2 조건으로 인큐베이터에서 배양하였다. A549 세포주는 10%, 1% 페니실린-스트렙토마이신 함유 RPMI1640(CAT No.: LM011-51, Welgene Inc.) 배지에서 SNU324 및 Capan-2 세포주는 10% FBS, 25mM HEPES(CAT No.: 15630-080, Gibco) 함유 RPMI1640 배지에서 37 ℃, 5% CO2 조건으로 인큐베이터에서 배양하였다. 인간 종양 세포주를 사용하는 본 실험은 ㈜메디톡스 기관생명윤리위원회의 심의면제(IRB-2020-002) 후 수행되었다.B16-F10 mouse malignant melanoma cell line (KCLB No.: 80008), A549 human lung cancer cell line (KCLB No.: 10185), SNU324 (KCLB No.: 00324), Capan-2 (KCLB No.: 30080) human pancreatic cancer cell line was obtained from the Korean Cell Line Bank (KCLB). B16-F10 cells were cultured in DMEM medium (CAT No.: 11965-092, Gibco) containing 10% FBS (CAT No.: 10082-147, Gibco) and 1% penicillin-streptomycin (CAT No.: 15140-122, Gibco). ) at 37 °C, 5% CO 2 Conditions were incubated in an incubator. The A549 cell line was in RPMI1640 (CAT No.: LM011-51, Welgene Inc.) medium containing 10%, 1% penicillin-streptomycin, SNU324 and Capan-2 cell lines were 10% FBS, 25 mM HEPES (CAT No.: 15630-080). , Gibco) in RPMI1640 medium containing 37 ℃, 5% CO 2 It was cultured in an incubator under conditions. This experiment using a human tumor cell line was performed after being exempted from deliberation (IRB-2020-002) by the Institutional Bioethics Committee of Medytox Co., Ltd.
보툴리눔 독소로서 100 units 코어톡스(Lot No.: NSA19007A 또는 NSA19004, 메디톡스)가 사용되었으며, 양성 대조물질로 독소루비신(LOT No.: DROTK-GP, TCI)이 사용되었다.100 units Coretox (Lot No.: NSA19007A or NSA19004, Medytox) was used as a botulinum toxin, and doxorubicin (LOT No.: DROTK-GP, TCI) was used as a positive control material.
보툴리눔 독소의 종양 세포 증식에 대한 효과를 알아보고자 CCK8 proliferation assay(Cell Counting Kit-8, CK04, Dojindo)를 사용하였다. 구체적으로, 96-웰 플레이트(Cat No.: 167008, Thermo Fisher)에 1 웰 당 5×103 cells/0.1 ㎖ 씩 세포를 분주하고 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 24시간 뒤 각 웰의 배지를 제거한 뒤 보툴리눔 독소를 0.016~250 U/㎖ 농도로 종양 세포주 배양에 사용되는 배지에 희석하여 처리하였고, 10 ㎍/㎖ 독소루비신을 처리하였다. 최초 처리 시점을 기준으로 6시간 뒤 각 웰의 배지를 제거한 뒤 동일한 시험물질을 각 웰에 재처리하였다. 최초 보툴리눔 독소 처리 시점을 기준으로 24시간 동안 인큐베이터에서 배양하였다. 총 24시간 배양한 뒤 각 웰에 CCK-8 시약을 10 ㎕씩 처리하고 3시간 동안 추가 배양한 뒤, SpectraMax i3(Model No.: 10192-220, Molecular Devices)를 이용하여 450 ㎚에서 흡광도를 측정하여 증식율(proliferation rate)을 비교하였다. 증식율은 아래 식을 이용하여 계산하였다.To investigate the effect of botulinum toxin on tumor cell proliferation, CCK8 proliferation assay (Cell Counting Kit-8, CK04, Dojindo) was used. Specifically, cells were seeded in a 96-well plate (Cat No.: 167008, Thermo Fisher) at a rate of 5×10 3 cells/0.1 ml per well and cultured in an incubator for 24 hours. After 24 hours, after removing the medium from each well, botulinum toxin was diluted in the medium used for tumor cell line culture at a concentration of 0.016-250 U/ml, and treated with 10 μg/ml doxorubicin. After 6 hours from the time of the initial treatment, the medium from each well was removed, and the same test substance was re-treated into each well. It was cultured in an incubator for 24 hours from the time of initial botulinum toxin treatment. After incubation for a total of 24 hours, 10 μl of CCK-8 reagent was treated in each well, and after additional incubation for 3 hours, absorbance was measured at 450 nm using SpectraMax i3 (Model No.: 10192-220, Molecular Devices). to compare the growth rate (proliferation rate). The growth rate was calculated using the following equation.
각 농도 당 96-웰 플레이트의 4 웰씩 사용하여 이에 대한 평균값을 결과로 나타내었으며, 총 3개 플레이트에 대해 반복적으로 실험을 수행하였다. 통계분석은 실시예 1과 동일하게 수행하였다.For each concentration, 4 wells of a 96-well plate were used, and the average value thereof was shown as a result, and the experiment was repeated for a total of 3 plates. Statistical analysis was performed in the same manner as in Example 1.
그 결과를 도 6에 나타내었다. 도 6에서와 같이, 보툴리눔 독소에 의해 종양 세포의 성장이 유의적으로 저해되는 것으로 나타났다. 마우스 흑색종 세포주(B16-F10)에서는 0.4, 2, 50 U/㎖ 보툴리눔 독소 처리군에서 유의적으로 성장이 저해되었으며, 인간 폐암 세포주(A549)에서는 2, 50, 250 U/㎖ 보툴리눔 독소 처리군에서, 인간 췌장암(SNU324) 세포주에서는 0.08~50 U/㎖ 처리군에서, 인간 췌장암(Capan-2) 세포주에서는 0.4~50 U/㎖ 보툴리눔 독소 처리군에서 유의적인 성장 저해 효과가 관찰되었다.The results are shown in FIG. 6 . As shown in FIG. 6 , the growth of tumor cells was significantly inhibited by botulinum toxin. In the mouse melanoma cell line (B16-F10), growth was significantly inhibited in the 0.4, 2, and 50 U/ml botulinum toxin treated groups, and in the human lung cancer cell line (A549), 2, 50, and 250 U/ml botulinum toxin treated groups In the human pancreatic cancer (SNU324) cell line, a significant growth inhibitory effect was observed in the 0.08-50 U/ml treatment group and in the human pancreatic cancer (Capan-2) cell line 0.4-50 U/ml botulinum toxin treatment group.
실시예 4: 보툴리눔 독소의 마우스 흑색종 세포주에서 엑소좀 감소 효과 시험Example 4: Exosome reduction effect test of botulinum toxin in mouse melanoma cell line
B16-F10 마우스 악성 흑색종 세포주(KCLB No.: 80008)를 한국세포주은행(KCLB: Korean Cell Line Bank)으로부터 수득하였다. B16-F10 세포를 10% 엑소좀이 제거된 FBS(CAT No.: A2720801, Gibco) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(CAT No.: 15140-122, Gibco)을 함유하는 DMEM 배지(CAT No.: 11965-092, Gibco)에서 37 ℃, 5% CO2 조건으로 인큐베이터에서 배양하였다.A B16-F10 mouse malignant melanoma cell line (KCLB No.: 80008) was obtained from the Korean Cell Line Bank (KCLB). B16-F10 cells were cultured in DMEM medium (CAT No.: 15140-122, Gibco) containing 10% exosome-depleted FBS (CAT No.: A2720801, Gibco) and 1% penicillin-streptomycin (CAT No.: 15140-122, Gibco). 11965-092, Gibco) in 37 ℃, 5% CO 2 Conditions were cultured in an incubator.
보툴리눔 독소로서 100 units 코어톡스(Lot No.: NSA19004, 메디톡스)가 사용되었다.100 units Coretox (Lot No.: NSA19004, Medytox) was used as a botulinum toxin.
6-웰 플레이트(Cat No.: 140675, Thermo Fisher)에 1 웰 당 8×105 cells/2 ㎖ 씩 총 6개 웰에 세포를 분주하고 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 24시간 뒤 각 웰의 배지를 제거한 뒤 보툴리눔 독소를 10 U/㎖ 농도로 종양 세포주 배양에 사용되는 배지에 희석하여 처리하였고, 대조군의 경우 동량의 배지를 처리하였다. 최초 처리 시점을 기준으로 6시간 뒤 각 웰의 배지를 제거한 뒤 동일한 시험물질을 각 웰에 재처리하였다. 최초 보툴리눔 독소 처리 시점을 기준으로 24시간 동안 인큐베이터에서 배양하였다. 24시간 배양 후 각 웰 당 배지에 대해 엑소좀을 측정하였다. 배지 내 엑소좀은 ExoQuick-TC exosome precipitation solution(Cat No.: EXOTC50A-1, Lot No.: 191231-002, System Biosciences)을 이용해 분리하였고 ExoELISA-ULTRA Complete Kit(Cat No.: EXEL-ULTRA-CD63-1, Lot No.: 200226-002, System Biosciences)을 이용해 측정하였다.In a 6-well plate (Cat No.: 140675, Thermo Fisher), 8×10 5 cells/2 ㎖ per well were seeded in a total of 6 wells and cultured for 24 hours in an incubator. After 24 hours, the medium from each well was removed, and botulinum toxin was diluted in the medium used for tumor cell line culture at a concentration of 10 U/ml, and the same amount of medium was treated for the control group. After 6 hours from the time of the initial treatment, the medium from each well was removed, and the same test substance was re-treated into each well. It was cultured in an incubator for 24 hours from the time of initial botulinum toxin treatment. After culturing for 24 hours, exosomes were measured for each well of the medium. Exosomes in the medium were isolated using ExoQuick-TC exosome precipitation solution (Cat No.: EXOTC50A-1, Lot No.: 191231-002, System Biosciences), and ExoELISA-ULTRA Complete Kit (Cat No.: EXEL-ULTRA-CD63) -1, Lot No.: 200226-002, System Biosciences).
그 결과를 도 7에 나타내었다. 도 7에서와 같이, 10 U/㎖ 보툴리눔 독소에 의해 마우스 흑색종에서 엑소좀 감소 효과가 있는 것으로 확인되었다.The results are shown in FIG. 7 . As shown in FIG. 7 , it was confirmed that 10 U/ml botulinum toxin had an effect of reducing exosomes in mouse melanoma.
실시예 5: 보툴리눔 독소의 인간 췌장암 세포주에서 엑소좀 감소 효과 시험Example 5: Testing the effect of botulinum toxin on reducing exosomes in human pancreatic cancer cell lines
SNU324 인간 췌장암 세포주(KCLB No.: 00324)를 한국세포주은행(KCLB: Korean Cell Line Bank)으로부터 수득하였다. SNU324 세포를 10% 엑소좀이 제거된 FBS(CAT No.: A2720801, Gibco) 및 10% FBS, 25mM HEPES(CAT No.: 15630-080, Gibco)를 함유하는 RPMI-1640 배지(CAT No.: LM011-51, Gibco)에서 37 ℃, 5% CO2 조건으로 인큐베이터에서 배양하였다. 인간 종양 세포주를 사용하는 본 실험은 ㈜메디톡스 기관생명윤리위원회의 심의면제 (IRB-2020-002) 후 수행되었다.The SNU324 human pancreatic cancer cell line (KCLB No.: 00324) was obtained from the Korean Cell Line Bank (KCLB). SNU324 cells were cultured in RPMI-1640 medium (CAT No.: 15630-080, Gibco) containing 10% exosome-free FBS (CAT No.: A2720801, Gibco) and 10% FBS, 25 mM HEPES (CAT No.: 15630-080, Gibco). LM011-51, Gibco) was cultured in an incubator at 37 °C, 5% CO 2 conditions. This experiment using a human tumor cell line was conducted after being exempted from deliberation by the Institutional Bioethics Committee of Medytox Co., Ltd. (IRB-2020-002).
보툴리눔 독소로서는 100 units 코어톡스(Lot No.: NSA19004, 메디톡스)가 사용되었다.As the botulinum toxin, 100 units Coretox (Lot No.: NSA19004, Medytox) was used.
6-웰 플레이트(Cat No.: 140675, Thermo Fisher)에 1 웰 당 1.2×106 cells/2 ㎖ 씩 총 6개 웰에 세포를 분주하고 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 24시간 뒤 각 웰의 배지를 제거한 뒤 보툴리눔 독소를 10 U/㎖ 농도로 종양 세포주 배양에 사용되는 배지에 희석하여 처리하였고, 대조군의 경우 동량의 배지를 처리하였다. 최초 처리 시점을 기준으로 6시간 뒤 각 웰의 배지를 제거한 뒤 동일한 시험물질을 각 웰에 재처리하였다. 최초 보툴리눔 독소 처리 시점을 기준으로 24시간 동안 인큐베이터에서 배양하였다. 24시간 배양 후 각 웰 당 배지에 대해 엑소좀을 측정하였다. 배지 내 엑소좀은 ExoQuick-TC exosome precipitation solution(Cat No.: EXOTC50A-1, Lot No.: 191231-002, System Biosciences)을 이용해 분리하였고 ExoELISA-ULTRA Complete Kit(Cat No.: EXEL-ULTRA-CD63-1, Lot No.: 200226-002, System Biosciences)을 이용해 측정하였다.In a 6-well plate (Cat No.: 140675, Thermo Fisher), 1.2×10 6 cells/2 ㎖ per well were seeded in a total of 6 wells and cultured for 24 hours in an incubator. After 24 hours, the medium from each well was removed, and botulinum toxin was diluted in the medium used for tumor cell line culture at a concentration of 10 U/ml, and the same amount of medium was treated for the control group. After 6 hours from the time of the initial treatment, the medium from each well was removed, and the same test substance was re-treated into each well. It was cultured in an incubator for 24 hours from the time of initial botulinum toxin treatment. After culturing for 24 hours, exosomes were measured for each well of the medium. Exosomes in the medium were isolated using ExoQuick-TC exosome precipitation solution (Cat No.: EXOTC50A-1, Lot No.: 191231-002, System Biosciences), and ExoELISA-ULTRA Complete Kit (Cat No.: EXEL-ULTRA-CD63) -1, Lot No.: 200226-002, System Biosciences).
그 결과를 도 8에 나타내었다. 측정된 엑소좀 수에 대해 시험군과 대조군간 양측 t-검정을 사용하여 계산하였다(*p<0.05). 도 8에서와 같이, 10 U/㎖ 보툴리눔 독소에 의해 인간 췌장암 세포주에서 엑소좀 감소 효과가 있는 것으로 확인되었다.The results are shown in FIG. 8 . The measured number of exosomes was calculated using a two-tailed t-test between the test group and the control group (*p<0.05). As shown in FIG. 8 , it was confirmed that 10 U/ml botulinum toxin had an effect of reducing exosomes in human pancreatic cancer cell lines.
실시예 6: 보툴리눔 독소의 종양 세포주 증식 억제 효과 시험Example 6: Test of botulinum toxin tumor cell line proliferation inhibitory effect
인간 뇌암 세포주 U87MG(KCLB No.: 30014) 및 PC3(KCLB No.: 21435) 인간 전립선암 세포주를 한국세포주은행(KCLB: Korean Cell Line Bank)으로부터 수득하였다. U87MG 세포주는 DMEM(CAT No.: LM007-01, Welgene) 및 PC3 세포주는 RPMI-1640(CAT No.: LM011-01, Welgene)에 10% FBS(CAT No.: 10082-147, Gibco) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(CAT No.: 15140-122, Gibco)을 함유하는 배지에서 37 ℃, 5% CO2 조건으로 인큐베이터에서 배양하였다. 인간 종양 세포주를 사용하는 본 실험은 ㈜메디톡스 기관생명윤리위원회의 심의면제(IRB-2020-015) 후 수행되었다.Human brain cancer cell lines U87MG (KCLB No.: 30014) and PC3 (KCLB No.: 21435) human prostate cancer cell lines were obtained from the Korean Cell Line Bank (KCLB). U87MG cell line in DMEM (CAT No.: LM007-01, Welgene) and PC3 cell line in RPMI-1640 (CAT No.: LM011-01, Welgene) in 10% FBS (CAT No.: 10082-147, Gibco) and 1 % Penicillin-streptomycin (CAT No.: 15140-122, Gibco) in a medium containing 37 ℃, 5% CO 2 Conditions were cultured in an incubator. This experiment using a human tumor cell line was performed after being exempted from deliberation by the Institutional Bioethics Committee (IRB-2020-015) of Medytox Co., Ltd.
보툴리눔 독소로서는 100 units 코어톡스(Lot No.: NSA19007A 또는 NSA19004, 메디톡스)가 사용되었으며 양성 대조물질로 독소루비신(LOT No.: DROTK-GP, TCI)이 사용되었다.As the botulinum toxin, 100 units Coretox (Lot No.: NSA19007A or NSA19004, Medytox) was used, and doxorubicin (LOT No.: DROTK-GP, TCI) was used as a positive control.
보툴리눔 독소의 종양 세포 증식에 대한 효과를 알아보고자 CCK8 proliferation assay(Cell Counting Kit-8, CK04, Dojindo)를 사용하였다. 96-웰 플레이트(Cat No.: 167008, Thermo Fisher)에 1 웰 당 5×103 cells/0.1 ㎖씩 세포를 분주하고 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 24시간 뒤 각 웰의 배지를 제거한 뒤 보툴리눔 독소를 0.016 ~ 50 U/㎖ 농도로 종양 세포주 배양에 사용되는 배지에 희석하여 처리하거나, 10 ㎍/㎖ 독소루비신을 처리하였다. 최초 처리 시점을 기준으로 6시간 뒤 각 웰의 배지를 제거한 뒤 동일한 시험물질을 각 웰에 재 처리하였다. 최초 보툴리눔 독소 처리 시점을 기준으로 24시간 동안 인큐베이터에서 배양하였다. To investigate the effect of botulinum toxin on tumor cell proliferation, CCK8 proliferation assay (Cell Counting Kit-8, CK04, Dojindo) was used. Cells were seeded in a 96-well plate (Cat No.: 167008, Thermo Fisher) at an amount of 5×10 3 cells/0.1 ml per well and cultured in an incubator for 24 hours. After 24 hours, after removing the medium from each well, botulinum toxin was diluted in the medium used for tumor cell line culture at a concentration of 0.016-50 U/ml, or treated with 10 μg/ml doxorubicin. After 6 hours from the initial treatment time, the medium was removed from each well, and the same test substance was re-treated in each well. It was cultured in an incubator for 24 hours from the time of initial botulinum toxin treatment.
총 24시간 배양한 뒤 각 웰에 CCK-8 시약을 10 ㎕씩 처리하고 3시간 동안 추가 배양한 뒤, SpectraMax i3(Model No.: 10192-220, Molecular Devices)를 이용하여 450 ㎚에서 흡광도를 측정하여 증식율(proliferation rate)을 비교하였다. 증식율은 아래 식을 이용하여 계산하였다.After incubation for a total of 24 hours, 10 μl of CCK-8 reagent was treated in each well, and after additional incubation for 3 hours, absorbance was measured at 450 nm using SpectraMax i3 (Model No.: 10192-220, Molecular Devices). to compare the growth rate (proliferation rate). The growth rate was calculated using the following equation.
각 농도 당 96-웰 플레이트의 4 웰씩 사용하여 이에 대한 평균값을 결과로 나타내었으며, 총 3개 플레이트에 대해 반복적으로 실험을 수행하였다. Graphpad Prism(version 7.05, GraphPad Software Inc., CA, USA)은 그래프 제시에 사용되었으며 SPSS software(version 25.0, SPSS Inc., IL, USA) 또는 Excel(2013, MS, USA)에 의해 통계 분석에 사용되었다. 모수 데이터는 양측(two-tailed) t-검정을 수행하였고 비모수 데이터는 Mann-Whitney 검정 통계분석을 유의 수준 p = 0.05에서 수행되었다.For each concentration, 4 wells of a 96-well plate were used, and the average value thereof was shown as a result, and the experiment was repeated for a total of 3 plates. Graphpad Prism (version 7.05, GraphPad Software Inc., CA, USA) was used for graph presentation and used for statistical analysis by SPSS software (version 25.0, SPSS Inc., IL, USA) or Excel (2013, MS, USA) became For parametric data, a two-tailed t-test was performed, and for non-parametric data, statistical analysis was performed using Mann-Whitney test at the significance level p = 0.05.
그 결과를 도 9에 나타내었다. 측정된 종양 성장율에 대해 시험군과 대조군간 양측 t-검정을 사용하여 계산하였다(*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001). 도 9에서와 같이, 보툴리눔 독소에 의해 인간 뇌종양, 전립선암 세포의 성장이 유의적으로 저해되는 것으로 나타났다. 인간 뇌종양 세포주(U87MG)에서는 0.016 ~ 50 U/㎖ 처리군에서, 인간 전립선암(PC3) 세포주에서는 0.4 ~ 50 U/㎖ 처리군에서 유의적인 성장 저해 효과가 관찰되었다.The results are shown in FIG. 9 . The measured tumor growth rate was calculated using a two-tailed t-test between the test group and the control group (*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001). As shown in FIG. 9 , the growth of human brain tumor and prostate cancer cells was significantly inhibited by botulinum toxin. A significant growth inhibitory effect was observed in the human brain tumor cell line (U87MG) in the 0.016-50 U/ml treatment group, and in the human prostate cancer (PC3) cell line in the 0.4-50 U/ml treatment group.
Claims (15)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/KR2021/009224 WO2022019583A1 (en) | 2020-07-23 | 2021-07-19 | Therapeutic agent for exosome-mediated disease |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020200091701 | 2020-07-23 | ||
KR20200091701 | 2020-07-23 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20220012790A true KR20220012790A (en) | 2022-02-04 |
Family
ID=80268234
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020210009344A KR20220012790A (en) | 2020-07-23 | 2021-01-22 | Agents for treating exosome-mediated disorders |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR20220012790A (en) |
-
2021
- 2021-01-22 KR KR1020210009344A patent/KR20220012790A/en not_active Application Discontinuation
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Fallon et al. | The immunocytokine NHS-IL12 as a potential cancer therapeutic | |
Argilés et al. | The pivotal role of cytokines in muscle wasting during cancer | |
Nakano et al. | Glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B (GPNMB) as a novel neuroprotective factor in cerebral ischemia–reperfusion injury | |
CN108883187A (en) | Combination therapy with SMC for cancer treatment | |
US9474783B2 (en) | HIP/PAP protein and derivatives thereof for use in treating cancer | |
ES2962526T3 (en) | PAR-4 secretagogues for cancer treatment | |
US20230414712A1 (en) | Pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising recombinant stabilized galectin 9 protein | |
EP4324841A1 (en) | Cell-penetrating peptide, anti-cancer peptide, and pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, comprising same | |
US11919854B2 (en) | P2RX7 modulators in therapy | |
KR20220012790A (en) | Agents for treating exosome-mediated disorders | |
CN114555624A (en) | Anti-inflammatory agents | |
JP2020506923A (en) | Method of treatment | |
US20180147198A1 (en) | Combinations of pfkfb3 inhibitors and immune checkpoint inhibitors to treat cancer | |
WO2022019583A1 (en) | Therapeutic agent for exosome-mediated disease | |
KR20210127137A (en) | Neuronal Oxide Synthase Inhibitors for Immunotherapy | |
US20230256064A1 (en) | Cancer therapeutic agent | |
KR20220012791A (en) | Agents for treating cancers | |
Li et al. | Attenuated Salmonella carrying siRNA-CD24 improved the effect of oxaliplatin on HCC | |
KR20220012809A (en) | Agents for treating cancers | |
US20220339233A1 (en) | Compositions and methods for preventing recurrence of cancer | |
US20220323391A1 (en) | Combination of a chemotherapeutic agent and alpha-lactoglubulin-oleic acid complex for cancer therapy | |
KR20230061434A (en) | Combination of rubinectedin and an immune checkpoint inhibitor | |
CN107073009A (en) | Contain NecroX as the composition for being used to preventing or treating catarrh of active ingredient | |
Mendoza-Rodríguez et al. | Helminth-derived molecules improve 5-fluorouracil treatment on experimental colon tumorigenesis | |
US20190083556A1 (en) | Analytical methods and arrays for use in the same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
E902 | Notification of reason for refusal |