KR20210075033A - Photoprotective compositions containing Malassezia-derived compounds and/or chemical analogs thereof - Google Patents

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마이클 아인지거
앤 마리 심슨
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마이클 아인지거
앤 마리 심슨
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Abstract

본 발명은 피부 색소침착을 조절하고 대상체에서 UV에 의한 피부 손상, 홍반, 피부 노화, 일광 화상 및 과색소침착을 치료 또는 예방하기 위한 화합물, 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법은 일반적으로 말라세진 및 인디루빈을 포함하는 말라세지아-유래 화합물, 및/또는 이의 화학적 유사체를 포함한다. 본원에 개시된 화합물 및 조성물의 다른 적용은 과색소침착 장애로 인한 과색소침착 개선, 멜라닌세포 아폽토시스 유도 및 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성, 멜라닌생성, 멜라닌 생산, 멜라노솜 생물발생, 멜라노솜 이동, 멜라닌세포 활성 및 멜라닌 농도의 조절을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.The present invention relates to compounds, compositions and methods for modulating skin pigmentation and for treating or preventing UV-induced skin damage, erythema, skin aging, sunburn and hyperpigmentation in a subject. The compounds, compositions and methods of the invention generally include Malassezia-derived compounds, including malassezine and indirubin, and/or chemical analogs thereof. Other applications of the compounds and compositions disclosed herein include improving hyperpigmentation due to hyperpigmentation disorders, inducing melanocyte apoptosis and aryl hydrocarbon receptor (AhR) activity, melanogenesis, melanin production, melanosome biogenesis, melanosome migration, melanin including, but not limited to, regulation of cellular activity and melanin concentration.

Description

말라세지아-유래 화합물 및/또는 이의 화학적 유사체를 함유하는 광보호 조성물Photoprotective compositions containing Malassezia-derived compounds and/or chemical analogs thereof

관련 출원에 대한 상호 참조CROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS

본 발명은 2018년 4월 12일에 출원된 미국 가출원 번호 62/656,769, 2018년 5월 7일에 출원된 미국 가출원 번호 62/668,007, 2018년 6월 15일에 출원된 미국 가출원 번호 62/685,800, 2018년 6월 19일에 출원된 미국 가출원 번호 62/686,912, 2018년 8월 24일에 출원된 미국 가출원 번호 62/722,412 및 2018년 10월 8일에 출원된 미국 가출원 번호 62/742,657에 대한 이익을 주장한다. 전술한 출원의 전체 내용은 참조로서 포함된다.This invention relates to U.S. Provisional Application No. 62/656,769, filed on April 12, 2018, U.S. Provisional Application No. 62/668,007, filed on May 7, 2018, and U.S. Provisional Application No. 62/685,800, filed on June 15, 2018 , U.S. Provisional Application No. 62/686,912, filed on June 19, 2018, U.S. Provisional Application No. 62/722,412, filed on August 24, 2018, and U.S. Provisional Application No. 62/742,657, filed on October 8, 2018 claim interests. The entire contents of the foregoing application are incorporated by reference.

발명의 분야field of invention

본 발명은 말라세지아(Malassezia) 효모에 의해 생성되거나 이로부터 유래된 화합물 및 이의 화학적 유사체에 관한 것이다. 본 발명의 화합물 및 상기 화합물을 함유하는 조성물은 다른 유익한 특성 중에서 광보호 특성을 갖는다. 본 발명의 화합물 및 조성물을 사용하는 방법도 고려된다.The present invention relates to compounds produced by or derived from Malassezia yeast and chemical analogs thereof. The compounds of the present invention and compositions containing said compounds have photoprotective properties, among other beneficial properties. Methods of using the compounds and compositions of the present invention are also contemplated.

발명의 배경background of the invention

전 세계의 사람들은 피부 브라이트닝제를 사용하여 안티에이징 효과 생성, 일광 손상 교정 및 아름다움의 특정 문화적 기준 충족을 포함하는 다양한 미용적 목표를 달성한다. 시판되는 많은 피부 브라이트닝 제품은 다양한 정도로 효과적이지만 일부는 암과 관련이 있는 유해 성분을 함유하고 있다. 따라서, 현재 판매 중인 제제보다 더 높은 수준의 안전성 및/또는 효능을 나타내는 새로운 피부 브라이트닝제 및 제형에 대한 요구가 존재한다.People all over the world use skin brightening agents to achieve a variety of cosmetic goals, including creating anti-aging effects, correcting sun damage, and meeting certain cultural standards of beauty. Many skin brightening products on the market are effective to varying degrees, but some contain harmful ingredients that have been linked to cancer. Accordingly, there is a need for new skin brightening agents and formulations that exhibit a higher level of safety and/or efficacy than currently marketed formulations.

말라세지아는 인간 피부의 정상 플로라에서 흔히 발견되는 친지성 효모 속이다. 말라세지아는 어루러기(전풍), 지루성 피부염 및 아토피성 피부염을 포함하는 여러 피부 질환의 원인이 된다.Malassezia is a genus of lipophilic yeast commonly found in the normal flora of human skin. Malassezia is responsible for a number of skin diseases including tinea dermatitis, seborrheic dermatitis and atopic dermatitis.

M. 푸르푸르(M. furfur)의 자연 서식지는 상면 표피이다. 그러나, 자외선에 노출되면 자연 서식지의 유기체가 파괴된다. 따라서, 유기체의 생존을 위해 UV 여과제가 필요할 수 있다. 유기체에 의해 생성되는 2개의 그러한 UV-여과 인돌이 확인되었다: 피티리아시트린(pityriacitrin) 및 피티리아락톤(pityrialactone). 문헌[Mayser et al., 2002]에 처음 기술된 피티리아시트린은 M. 푸르푸르에 의해 합성된다. 이것은 UVA, UVB 및 UVC 스펙트럼에서 광범위한 흡수를 나타내는 안정한 황색 친지성 화합물이다. 파라코쿠스(Paracoccus) 속으로부터 유사한 화합물이 분리되어 UV 보호제로 특허를 받았다. (Zhang et al., 2018). The natural habitat of M. furfur is the upper epidermis. However, exposure to UV light destroys organisms in their natural habitat. Thus, UV filters may be needed for survival of the organism. Two such UV-filtering indoles produced by organisms have been identified: pityriacitrin and pityrialactone. Phythyriacitrin , first described in Mayser et al ., 2002, is synthesized by M. furfur. It is a stable yellow lipophilic compound with broad absorption in the UVA, UVB and UVC spectra. A similar compound from the genus Paracoccus has been isolated and patented as a UV protectant. (Zhang et al ., 2018).

Gambichler 등(2007)은 시험관내 및 생체내 시험 방법을 사용하여 인간에서 피티리아시트린의 UV 보호 효과를 조사하였다. 피티리아시트린 크림 및 비히클의 분광광도법은 290-400 nm 파장 범위에서 수행되었다. UV 투과율 및 일광 차단 지수("SPF")는 다양한 크림 제형에 대해 평가되었다. 비색계를 사용하여, 저자는 건강한 대상체의 크림-보호 및 비보호 피부의 조사 후 홍반 및 색소침착을 평가하였다. UVB 및 UVA 투과는 피티리아시트린 농도가 증가함에 따라 감소하였다. 1.25, 2.5 및 5%의 피티리아시트린 농도의 증가는 SPF가 각각 1.4, 1.5 및 1.7로 약간 증가하는 것과 관련이 있었다. 생체내 시험은 시험관내에서 측정된 피티리아시트린 5% 크림의 SPF 타당성을 확인시켜 주었다. 전반적으로, 피티리아시트린의 UV 보호 효과는 매우 약했으며, 이는 피티리아시트린이 일광 노출 후 백색 어루러기 병변에서의 저색소침착의 발생에 열등한 보조인자일 뿐일 수 있음을 시사한다.Gambichler et al. (2007) investigated the UV protection effect of phytriacitrin in humans using in vitro and in vivo test methods. Spectrophotometry of phythyriacitrin cream and vehicle was performed in the 290-400 nm wavelength range. UV transmittance and sun protection factor (“SPF”) were evaluated for various cream formulations. Using a colorimeter, the authors assessed erythema and pigmentation after irradiation of cream-protected and unprotected skin of healthy subjects. UVB and UVA transmission decreased with increasing phythyriacitrin concentration. Increases in phytyriacitrin concentrations of 1.25, 2.5, and 5% were associated with slight increases in SPF of 1.4, 1.5 and 1.7, respectively. In vivo testing confirmed the validity of the SPF of phytriacitrin 5% cream measured in vitro. Overall, the UV protective effect of phythyriacitrin was very weak, suggesting that phythyriacitrin may only be an inferior cofactor in the development of hypopigmentation in white wart lesions after sun exposure.

피티리아시트린의 UV 여과 효과에 대한 추가 연구가 인간 피부 마이크로플로라에 대해 수행되었다. (Machowinski et al., 2006). 저자는 피티리아시트린이 캔디다 알비칸스(Candida albicans) 및 스타필로코쿠스(staphylococci)에 대한 UV-보호 효과를 가지며 시험된 범위 내에서 독성이 없음을 확인하였다. 피티리아락톤의 UV 보호 특성은 효모 모델에서도 확인되었다.(Mayser et al., 2003). 피티리아락톤은 우드 등 검사에서 어루러기의 황색 형광을 담당하는 것으로 보인다.Further studies on the UV filtration effect of phytriacitrin were performed on human skin microflora. (Machowinski et al ., 2006). The authors confirmed that Pythyriacitrin had a UV-protective effect against Candida albicans and staphylococci and was not toxic within the tested range. The UV protection properties of phytrialactone were also confirmed in a yeast model (Mayser et al. , 2003). Phythirialactone appears to be responsible for the yellow fluorescence of warts in Wood et al.

어루러기는 색소침착 수준을 국소적으로 변화시키는 말라세지아 과성장에 의해 초래되는 비전염성 피부 질환이다. 말라세지아 효모는 멜라닌 및 트립토판-유래 인돌 색소를 합성하는 2개의 대사 경로를 가지고 있다. 말라세진(Malassezin) 및 인디루빈(Indirubin)은 말라세지아 과성장의 탈색소침착 특징에 기여할 수 있는 말라세지아의 트립토판 대사산물이다.Rigidity is a non-communicable skin disease caused by Malassezia overgrowth that locally alters the level of pigmentation. Malassezia yeast has two metabolic pathways to synthesize melanin and tryptophan-derived indole pigments. Malassezin and Indirubin are tryptophan metabolites of Malassezia that may contribute to the depigmentation characteristics of Malassezia overgrowth.

본원에 개시된 발명은 안전하고 효과적인 피부 브라이트닝 및 피부 다크닝 조성물의 기초로서 말라세지아 효모에 의해 생성되거나 이로부터 유래된 화합물, 예를 들어, 말라세진, 인디루빈 및 이의 화학적 유사체를 사용한다. 말라세진, 인디루빈 및 이의 화학적 유사체를 포함하는 광보호 조성물도 본원에 개시된다.The invention disclosed herein uses compounds produced by or derived from the Malassezia yeast, such as malassezin, indirubin and chemical analogs thereof, as the basis of safe and effective skin brightening and skin darkening compositions. Also disclosed herein are photoprotective compositions comprising malassezine, indirubin and chemical analogs thereof.

발명의 개요Summary of invention

본 발명의 한 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.One embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. The compound is a chemical analog of the compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.Another embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. The compound is a chemical analog of the compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌세포 활성을 조절하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanocyte activity. The compound is a chemical analog of the compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.A further embodiment of the present invention is a compound for functionalizing the arylhydrocarbon receptor (AhR). The compound is a chemical analog of the compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 구체예는 과색소침착 장애로 인한 과색소침착을 개선하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다. Another embodiment of the present invention is a compound for ameliorating hyperpigmentation due to a hyperpigmentation disorder. The compound is a chemical analog of the compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌 생산을 조절하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanin production. The compound is a chemical analog of the compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 멜라노솜 생물발생을 조절하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanosome biogenesis. The compound is a chemical analog of the compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 구체예는 멜라노솜 이동을 조절하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.Another embodiment of the present invention is a compound for modulating melanosome migration. The compound is a chemical analog of the compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 상기 조성물은 말라세지아 효모 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises Malassezia yeast and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier.

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 상기 조성물은 말라세지아 효모로부터 분리되거나 분리 가능한 화합물 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound isolated or separable from Malassezia yeast and a cosmetic or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier.

본 발명의 다른 구체예는 조성물이다. 상기 조성물은 본원에 개시된 유사체를 포함하는 임의의 화합물 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다.Another embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises any compound comprising an analog disclosed herein and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier.

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for modulating melanocyte activity in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for functionalizing an arylhydrocarbon receptor (AhR) in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 과색소침착 장애로 인한 과색소침착을 개선할 필요가 있는 대상체에서 과색소침착을 개선하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a method for ameliorating hyperpigmentation in a subject in need thereof due to a hyperpigmentation disorder. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌 생산을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for modulating melanin production in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라노솜 생물발생을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanosome biogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라노솜 이동을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanosome migration in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the present invention is a compound. The compound is a compound having the structure of formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00001
Figure pct00001

상기 식에서,In the above formula,

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택되고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 메틸이다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl, and R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 , at least one of R8, R9, R10 and R11 is methyl.

본 발명의 추가 구체예는 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound. The compound is a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00002
Figure pct00002

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택되고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 적어도 하나는 메틸이다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl, and R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 , at least one of R9 and R10 is methyl.

본 발명의 추가 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. The compound is a compound having the structure of formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00003
Figure pct00003

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 다른 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. The compound is a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00004
Figure pct00004

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. The compound is a compound having the structure of formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00005
Figure pct00005

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. The compound is a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00006
Figure pct00006

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 다른 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the invention is a compound for functionalizing the aryl hydrocarbon receptor (AhR). The compound is a compound having the structure of formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00007
Figure pct00007

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for functionalizing the arylhydrocarbon receptor (AhR). The compound is a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00008
Figure pct00008

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다: A further embodiment of the present invention is a composition. A composition comprises a compound having the structure of Formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier:

Figure pct00009
Figure pct00009

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 다른 구체예는 조성물이다. 조성물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다:Another embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier:

Figure pct00010
Figure pct00010

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of Formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00011
Figure pct00011

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00012
Figure pct00012

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:Another embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of Formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00013
Figure pct00013

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00014
Figure pct00014

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:Another embodiment of the invention is a method for functionalizing an arylhydrocarbon receptor (AhR) in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of Formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00015
Figure pct00015

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for functionalizing an arylhydrocarbon receptor (AhR) in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00016
Figure pct00016

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

본 발명의 한 구체예는 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:One embodiment of the present invention is a compound. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00017
Figure pct00017

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서, Ra가 수소인 경우, Y는 CR5R6이고, R13 및 R14는 둘 모두 수소이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 R16이거나; R5는 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성한다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 ; wherein when R a is hydrogen, Y is CR 5 R 6 , R 13 and R 14 are both hydrogen, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , at least one of R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is R 16 ; R 5 is selected from the group consisting of hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3-6 cycloalkyl.

본 발명의 다른 구체예는 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the present invention is a compound. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00018
Figure pct00018

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이며; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이며; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 적어도 하나는 수소가 아니다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; At least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 is not hydrogen.

본 발명의 추가 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다: A further embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00019
Figure pct00019

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이며; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00020
Figure pct00020

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00021
Figure pct00021

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다: A further embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00022
Figure pct00022

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00023
Figure pct00023

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00024
Figure pct00024

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다: A further embodiment of the present invention is a compound for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00025
Figure pct00025

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이거나; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00026
Figure pct00026

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다. wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the present invention is a compound for modulating aryl hydrocarbon receptor (AhR) activity. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00027
Figure pct00027

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌생성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다: A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanogenesis. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00028
Figure pct00028

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이거나; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌생성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanogenesis. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00029
Figure pct00029

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌생성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the present invention is a compound for regulating melanogenesis. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00030
Figure pct00030

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌 농도를 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다: A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanin concentration. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00031
Figure pct00031

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌 농도를 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanin concentration. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00032
Figure pct00032

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이며; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌 농도를 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the present invention is a compound for regulating melanin concentration. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00033
Figure pct00033

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염을 포함한다: A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00034
Figure pct00034

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염을 포함한다:A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00035
Figure pct00035

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 조성물이다. 조성물은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물을 포함한다:Another embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound selected from the group consisting of:

Figure pct00036
Figure pct00036

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다: A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00037
Figure pct00037

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이거나; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00038
Figure pct00038

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다. wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다:Another embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a compound selected from the group consisting of:

Figure pct00039
Figure pct00039

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다: A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00040
Figure pct00040

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이거나; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00041
Figure pct00041

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다:Another embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound selected from the group consisting of:

Figure pct00042
Figure pct00042

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다: A further embodiment of the invention is a method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00043
Figure pct00043

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이거나; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00044
Figure pct00044

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다:Another embodiment of the invention is a method for modulating aryl hydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound selected from the group consisting of:

Figure pct00045
Figure pct00045

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다: A further embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00046
Figure pct00046

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이거나; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00047
Figure pct00047

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다:Another embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound selected from the group consisting of:

Figure pct00048
Figure pct00048

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다: A further embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00049
Figure pct00049

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이거나; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00050
Figure pct00050

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다:Another embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound selected from the group consisting of:

Figure pct00051
Figure pct00051

본 발명의 한 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:One embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. A compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00052
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Figure pct00052
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본 발명의 다른 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. A compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00053
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Figure pct00053
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본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity. A compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00054
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Figure pct00054
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본 발명의 추가 구체예는 멜라닌생성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanogenesis. A compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00055
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Figure pct00055
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본 발명의 다른 구체예는 멜라닌 농도를 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the present invention is a compound for regulating melanin concentration. A compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00056
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Figure pct00056
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본 발명의 추가 구체예는 화합물을 포함하는 조성물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a composition comprising a compound. A compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00057
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Figure pct00057
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본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물, 즉, 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, i.e., a compound having the structure: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof:

Figure pct00058
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Figure pct00058
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본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물, 즉, 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:Another embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, i.e., a compound having the structure: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof:

Figure pct00059
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Figure pct00059
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물, 즉, 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, i.e., a compound having the structure: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof:

Figure pct00060
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Figure pct00060
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물, 즉, 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다: A further embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, i.e., a compound having the structure: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof:

Figure pct00061
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Figure pct00061
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본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물, 즉, 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:Another embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, i.e., a compound having the structure: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof:

Figure pct00062
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Figure pct00062
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본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition for brightening the skin. The composition comprises one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.Another embodiment of the present invention is a composition for inducing melanocyte apoptosis. The composition comprises one or more compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity. The composition comprises one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌생성을 조절하기 위한 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition for modulating melanogenesis. The composition comprises one or more compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌 농도를 조절하기 위한 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.Another embodiment of the present invention is a composition for regulating melanin concentration. The composition comprises one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 조성물, 즉, 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a composition, i.e., a composition comprising one or more compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof. do.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 조성물, 즉, 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a composition, i.e., a composition comprising one or more compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof. do.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 조성물, 즉, 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for modulating aryl hydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with a composition, i.e., a composition comprising one or more compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof. do.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 조성물, 즉, 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with a composition, i.e., a composition comprising one or more compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof. do.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 조성물, 즉, 표 5 또는 도 130에 열거된 하나 이상의 화합물을 포함하는 조성물, 또는 이의 화학적 유사체. 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises administering to the subject a composition, ie, a composition comprising one or more compounds listed in Table 5 or FIG. contacting with a composition comprising a crystalline form, a hydrate, or a pharmaceutically or cosmetically acceptable salt.

본 발명의 다른 구체예는 조성물이다. 상기 조성물은 말라세지아 효모 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다.Another embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises Malassezia yeast and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier.

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제, 또는 담체를 포함한다:A further embodiment of the present invention is a composition. A composition comprises a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent, or carrier:

Figure pct00063
Figure pct00063

상기 식에서, In the above formula,

X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이거나; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제, 또는 담체를 포함한다:A further embodiment of the present invention is a composition. A composition comprises a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent, or carrier:

Figure pct00064
Figure pct00064

상기 식에서,In the above formula,

R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 열거된 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제, 또는 담체를 포함한다.Another embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent, or carrier do.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 UV에 의한 피부 손상을 치료 또는 예방하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a method for treating or preventing UV-induced skin damage in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 UV에 의한 홍반을 치료 또는 예방하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for treating or preventing UV-induced erythema in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 UV에 의한 피부 노화를 치료 또는 예방하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the present invention is a method for treating or preventing UV-induced skin aging in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 일광 화상을 치료 또는 예방하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for treating or preventing sunburn in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 UV에 의한 과색소침착을 치료 또는 예방하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a method for treating or preventing UV-induced hyperpigmentation in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하는 방법이다. 이러한 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method of modulating melanin concentration in a subject. Such methods include contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

특허 또는 출원 파일에는 컬러로 작성된 적어도 하나의 도면이 포함되어 있다. 요청하고 필요한 요금을 지불하면 사무실에서 유색 도면과 함께 본 특허 또는 특허 출원 공보 사본을 제공할 것이다.
도 1a는 피부의 구성요소 층의 개략도이다. 삽입된 다이어그램은 표피와 진피의 세포 구성을 보여준다. 도 1b는 저색소침착-유발제의 잠재적 작용 메커니즘을 보여주는 개략도이다.
도 2는 말라세진 및 말라세진 유도체에 대한 일련의 합성 도식이다: 도 2a: 말라세진 및 인돌로[3,2-b] 카르바졸; 도 2b: 화합물 I 및 IV; 도 2c: 화합물 II.
도 3a는 MeWo 및 WM115 세포에서 본 발명의 특정 화합물에 대한 아넥신 V 유도의 EC50 값을 보여주는 요약 차트이다. 도 3b-3m은 다양한 농도의 열거된 화합물에의 노출 후 아넥신 V로 표지된 MeWo(도 3b-3g) 또는 WM115(도 3h-3m) 세포의 백분율을 보여주는 선 그래프이다.
도 4a-4d는 6, 24, 48 및 72시간 동안 다양한 농도의 열거된 화합물에 노출된 후 MeWo 및 WM115 세포에서 상대적 아넥신 V 수준(%)을 보여주는 차트이다. 도 4e-4j는 도 4a-4d의 결과를 보여주는 히스토그램이다. 도 4k 및 4l은 제시된 농도의 열거된 화합물에 6시간 노출 후 아넥신 V로 표지된 MeWo(도 4k) 및 WM115(도 4l) 세포의 백분율을 보여주는 히스토그램이다.
도 5a-5k는 다양한 농도의 CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO 및 스타우로스포린으로의 6시간 처리 후 MeWo 세포 형태를 보여주는 현미경 사진이다.
도 6a-6k는 다양한 농도의 CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO 및 스타우로스포린으로의 24시간 처리 후 MeWo 세포 형태를 보여주는 현미경 사진이다.
도 7a-7k는 다양한 농도의 CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO 및 스타우로스포린으로의 48시간 처리 후 MeWo 세포 형태를 보여주는 현미경 사진이다.
도 8a-8k는 다양한 농도의 CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO 및 스타우로스포린으로의 72시간 처리 후 MeWo 세포 형태를 보여주는 현미경 사진이다.
도 9a-9k는 다양한 농도의 CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO 및 스타우로스포린으로의 6시간 처리 후 WM115 세포 형태를 보여주는 현미경 사진이다.
도 10a-10k는 다양한 농도의 CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO 및 스타우로스포린으로의 24시간 처리 후 WM115 세포 형태를 보여주는 현미경 사진이다.
도 11a-11k는 다양한 농도의 CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO 및 스타우로스포린으로의 48시간 처리 후 WM115 세포 형태를 보여주는 현미경 사진이다.
도 12a-12k는 다양한 농도의 CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO 및 스타우로스포린으로의 72시간 처리 후 WM115 세포 형태를 보여주는 현미경 사진이다.
도 13a-13d는 6, 24, 48 및 72시간 동안 다양한 농도의 CV-8684(도 13a), CV-8685(도 13b), CV-8688(도 13c) 또는 스타우로스포린(도 13d)으로 처리한 후 남아 있는 생존 MeWo 및 WM115 세포의 백분율을 보여주는 차트이다. CellTiter-Glo®를 사용하여 세포 생존력을 검정하였다. 도 13e-13j는 도 13a-13d의 결과를 보여주는 히스토그램이다. 도 13k는 열거된 농도의 말라세진, 인돌로카르바졸, 화합물 II 및 스타우로스포린에 24, 48 및 72시간 동안 노출시킨 후 생존 MeWo 및 WM115 세포의 백분율을 비교하는 요약 차트이다.
도 14a-14d는 다양한 농도의 CV-8684(도 14a), CV-8685(도 14b), CV-8688(도 14c) 또는 스타우로스포린(도 14d)으로 6, 24, 48 및 72시간 동안 처리한 후 MeWo 및 WM115 세포로부터 락테이트 데하이드로게나제("LDH") 방출 수준을 보여주는 차트이다. 도 14e-14j는 도 14a-도14d의 결과를 보여주는 히스토그램이다. 도 14k 및 14l은 MeWo(도 14k) 및 WM115(도 14l) 세포를 열거된 농도의 말라세진, 카르바졸, 화합물 II 및 스타우로스포린에 24시간 동안 노출시킨 후 락테이트 데하이드로게나제 수준을 보여주는 히스토그램이다.
도 15a-15e는 다양한 농도의 오메프라졸(도 15a), CV-8684(도 15b), CV-8685(도 15c), CV-8686(도 15d) 및 CV-8688(도 15e)에 노출시 AhR-반응성 루시퍼라제 리포터 유전자 플라스미드로 안정적으로 형질감염된 HepG2 세포에서 아릴탄화수소 수용체("AhR") 활성화의 원시 데이터 및 선 그래프를 보여준다. 도 15f는 시험된 각 화합물에 대한 EC50 값을 보여준다.
도 16a-16k는 미처리(도 16a), 멸균 탈이온수(도 16b), 1% 코직산(도 16c), 0.2% DMSO(도 16d), 0.05% DMSO(도 16e), 200 μM CV-8684(도 16f), 50 μM CV-8684(도 16g), 200 μM CV-8686(도 16h), 50 μM CV-8686(도 16i), 200 μM CV-8688(도 16j) 및 50 μM CV-8688(도 16k)에 노출된 후 0일 또는 7일째에 MelanoDerm™ 매트릭스의 사진이다.
도 17a-17k는 미처리(도 17a), 멸균 탈이온수(도 17b), 1% 코직산(도 17c), 0.2% DMSO(도 17d), 0.05% DMSO(도 17e), 200 μM CV-8684(도 17f), 50 μM CV-8684(도 17g), 200 μM CV-8686(도 17h), 50 μM CV-8686(도 17i), 200 μM CV-8688(도 17j) 및 50 μM CV-8688(도 17k)에 노출된 후 0일 또는 7일째에 MelanoDerm™ 매트릭스의 15X 배율 현미경사진이다.
도 18a-18f는 미처리(도 18a), DMSO(도 18b), 페닐티오우레아("PTU")(도 18c) 및 화합물 II 2.5μM(도 18d), 5μM(도 18e) 및 10 μM(도 18f)에 노출된 제브라피시의 사진이다. 빨간색 화살표는 정상적인 멜라닌 세포를 나타낸다.
도 19a-19f는 미처리(도 19a), DMSO(도 19b), 페닐티오우레아("PTU")(도 19c) 및 화합물 II 0.3μM(도 19d), 1μM(도 19e) 및 3 μM(도 19f)에 노출된 제브라피시의 사진이다. 빨간색 화살표는 정상적인 멜라닌 세포를 나타낸다. 노란색 화살표는 비정상적으로 작은 멜라닌세포를 나타낸다.
도 20은 나열된 조건에 노출된 후 피부 색소 침착이 감소된 제브라피시의 수와 백분율을 보여주는 요약 차트이다. 마지막 6개 행은 다양한 농도의 화합물 II의 효과를 보여준다.
도 21a-21e는 미처리(도 21a), DMSO(도 21b), PTU(도 21c), 0.5μM(도 21d) 및 1.5μM(도 21e)로 처리된 제브라피시의 사진이다. 하단 패널에는 색 구성표 인버젼(color scheme inversion) 영역이 포함된다.
도 22a 및 22b는 도 21a-21e에 예시된, 지브라피시 배아의 사진으로부터 착색된 픽셀/mm3(도 22a) 및 총 픽셀(도 22b)에 의해 측정된 착색 밀도를 보여주는 히스토그램이다.
도 23a-23c는 DMSO(도 23a), RPMI 매질(도 23b) 및 DMEM(도 23c) 중 CV-8684의 질량 스펙트럼이다. 도 23d-23f는 DMSO(도 23d), RPMI 매질(도 23e) 및 DMEM(도 23f) 중 CV-8686의 질량 스펙트럼이다. 도 23g-23i는 DMSO(도 23g), RPMI 매질(도 23h) 및 DMEM(도 23i) 중 CV-8688의 질량 스펙트럼이다. 도 23j는 2시간 인큐베이션 후 나열된 용매에 남아있는 시험 화합물의 퍼센트를 보여주는 요약 차트이다.
도 24a-24s는 본 발명의 말라세진 유도체에 대한 합성 도식을 보여준다: 도 24a:화합물 C(CV-8802); 도 24b:화합물 K(CV-8803); 도 24c:화합물 A(CV-8804); 도 24d:화합물 E(AB12508); 도 24e:화합물 A5(CV-8819); 도 24f:화합물 H(AB12509); 도 24g:화합물 B(CV-8877); 도 24h:화합물 B10; 도 24i:화합물 AB11644; 도 24j:O52(AB12976); 도 24k:말라세지아 인돌 A(AB17011); 도 24l:피티리아시트린(AB17014); 도 24m:AB17151; 도 24n:화합물 VI(AB17225); 도 24o:말라세지아락트산(AB17227); 도 24p:AB12507; 도 24q:화합물 V(AB17219); 도 24r:화합물 VIII(AB17220) 및 도 24s:화합물 VII(AB17221).
도 25a-25d는 제시된 처리제에의 노출 후 6시간(도 25a), 24시간(도 25b), 48시간(도 25c) 및 72시간(도 25d)에서 아넥신 V-양성 세포의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 26a-26d는 제시된 처리제에의 노출 후 6시간(도 26a), 24시간(도 26b), 48시간(도 26c) 및 72시간(도 26d)에서 카스파제 3/7의 배수 유도(fold induction)를 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 27a-27b는 AB12508(화합물 E)에 노출된 후 MeWo(도 27a) 및 WM115(도 27b) 세포에 대한 잔여 세포 생존력 백분율을 보여준다.
도 28a-28b는 미공지된 조성물에 노출된 후 MeWo(도 28a) 및 WM115(도 28b) 세포에 대한 잔여 세포 생존력 백분율을 보여준다.
도 29a-29b는 CV-8803(화합물 K)에 노출된 후 MeWo(도 29a) 및 WM115(도 29b) 세포에 대한 잔여 세포 생존력 백분율을 보여준다.
도 30a-30b는 CV-8804(화합물 A)에 노출된 후 MeWo(도 30a) 및 WM115(도 30b) 세포에 대한 잔여 세포 생존력 백분율을 보여준다.
도 31a-31b는 CV-8684(말라세진)에 노출된 후 MeWo(도 31a) 및 WM115(도 31b) 세포에 대한 잔여 세포 생존력 백분율을 보여준다.
도 32a-32b는 CV-8685(인돌로[3,2-b]카르바졸)에 노출된 후 MeWo(도 32a) 및 WM115(도 32b) 세포에 대한 잔여 세포 생존력 백분율을 보여준다.
도 33a-33b는 CV-8686(화합물 I)에 노출된 후 MeWo(도 33a) 및 WM115(도 33b) 세포에 대한 잔여 세포 생존력 백분율을 보여준다.
도 34a-34b는 CV-8688(화합물 II)에 노출된 후 MeWo(도 34a) 및 WM115(도 34b) 세포에 대한 잔여 세포 생존력 백분율을 보여준다.
도 35a-35b는 스타우로스포린에 노출된 후 MeWo(도 35a) 및 WM115(도 35b) 세포에 대한 잔여 세포 생존력 백분율을 보여준다.
도 36a는 다양한 농도의 오메프라졸에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 36b는 도 36a로부터의 데이터의 선 그래프를 나타내고, 삽입물은 측정된 EC50을 나타낸다.
도 37a는 다양한 농도의 CV-8684(말라세진)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 37b는 도 37a로부터의 데이터의 선 그래프를 나타내고, 삽입물은 측정된 EC50을 나타낸다.
도 38a는 다양한 농도의 CV-8685(인돌로[3,2-b]카르바졸)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 38b는 도 38a로부터의 데이터의 선 그래프를 나타내고, 삽입물은 측정된 EC50을 나타낸다.
도 39a는 다양한 농도의 CV-8686(화합물 I)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 39b는 도 39a로부터의 데이터의 선 그래프를 나타내고, 삽입물은 측정된 EC50을 나타낸다.
도 40a는 다양한 농도의 미공지된 조성물에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 40b는 도 40a로부터의 데이터의 선 그래프를 나타내고, 삽입물은 측정된 EC50을 나타낸다.
도 41a는 다양한 농도의 CV-8803(화합물 K)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 41b는 도 41a로부터의 데이터의 선 그래프를 나타내고, 삽입물은 측정된 EC50을 나타낸다.
도 42a는 다양한 농도의 CV-8804(화합물 A)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 42b는 도 42a로부터의 데이터의 선 그래프를 나타내고, 삽입물은 측정된 EC50을 나타낸다.
도 43a는 다양한 농도의 AB12508(화합물 E)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 43b는 도 43a로부터의 데이터의 선 그래프를 나타내고, 삽입물은 측정된 EC50을 나타낸다.
도 44a는 다양한 농도의 CV-8688(화합물 II)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 44b는 도 44a로부터의 데이터의 선 그래프를 나타내고, 삽입물은 측정된 EC50을 나타낸다.
도 45a는 다양한 농도의 오메프라졸에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 45b는 도 45a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 46a는 다양한 농도의 미공지된 조성물에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 46b는 도 46a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 47a는 다양한 농도의 2,3,7,8-테트라클로로디벤조디옥신(TCDD)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 47b는 도 47a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 48a는 다양한 농도의 CV-8819(화합물 A5)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 48b는 도 48a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 49a는 다양한 농도의 CV-8684(말라세진)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 49b는 도 49a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 50a는 다양한 농도의 AB12508(화합물 E)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 50b는 도 50a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 51a는 다양한 농도의 CV-8686(화합물 I)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 51b는 도 51a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 52a는 다양한 농도의 AB12509(화합물 H)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 52b는 도 52a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 53a는 다양한 농도의 CV-8688(화합물 II)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 53b는 도 53a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 54a는 다양한 농도의 CV-8877(화합물 B)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 54b는 도 54a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 55a는 다양한 농도의 CV-8685(인돌로[3,2-b]카르바졸)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 55b는 도 55a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 56a는 다양한 농도의 화합물 B10에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 56b는 도 56a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 57a는 다양한 농도의 CV-8687(화합물 IV)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 57b는 도 57a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 58a는 다양한 농도의 오메프라졸에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 58b는 도 58a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 59a는 다양한 농도의 TCDD에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 59b는 도 59a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 60a는 다양한 농도의 말라세진 전구체에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 60b는 도 60a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 61a는 다양한 농도의 AB11644에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 61b는 도 61a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 62a는 다양한 농도의 3-메틸콜란트렌(3-MC)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 62b는 도 62a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 63a는 다양한 농도의 AB12976(O52)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 63b는 도 63a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 64a는 다양한 농도의 AB17011(말라세지아 인돌 A)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 64b는 도 64a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 65a는 다양한 농도의 AB17014(피티리아시트린)에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 65b는 도 65a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 66a는 다양한 농도의 AB17151에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 66b는 도 66a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 67a는 다양한 농도의 AB17225에 노출시 HepG2-AhR-루시페라제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값을 보여준다. 도 67b는 도 67a로부터의 데이터의 선 그래프를 보여준다.
도 68은 다양한 농도의 제시된 화합물로 처리된 MelanoDerm™ 기질에서 확인된 MTT 생존력 데이터를 보여주는 표이다.
도 69는 다양한 농도의 제시된 화합물로 처리된 MelanoDerm™ 기질에서 확인된 멜라닌 농도 데이터를 보여주는 표이다.
도 70은 CV-8686(화합물 I) 및 AB11644에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 지정된 날에 촬영한 대표적인 거시적 사진 이미지이며, 여기에서 샘플은 제시된 처리제에 노출되었다.
도 71은 CV-8686(화합물 I) 및 AB11644에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 지정된 날에 촬영한 대표적인 현미경(15X) 사진 이미지이며, 여기에서 샘플은 제시된 처리제에 노출되었다.
도 72는 CV-8686(화합물 I) 및 코직산에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 지정된 날에 촬영한 대표적인 현미경(15X) 사진 이미지이며, 여기에서 샘플은 제시된 처리제에 노출되었다.
도 73은 CV-8686(화합물 I) 및 코직산에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 지정된 날에 촬영한 대표적인 거시적 사진 이미지이며, 여기에서 샘플은 제시된 처리제에 노출되었다.
도 74는 CV-8686(화합물 I) 및 코직산에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 지정된 날에 촬영한 대표적인 거시적 사진 이미지이며, 여기에서 샘플은 제시된 처리제에 노출되었다.
도 75는 다양한 농도의 제시된 화합물로 처리된 MelanoDerm™ 기질에서 확인된 평균 조직 생존력 및 멜라닌 농도 데이터를 보여주는 표이다. 스폰서 지정란이 비어 있는 경우 샘플은 미공지된 조성물이다.
도 76은 제시된 처리제에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 지정된 날에 촬영한 대표적인 거시적 사진 이미지를 보여준다.
도 77은 제시된 처리제에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 처리 후 7일째에 촬영한 대표적인 거시적 사진 이미지를 보여준다. 화합물 명칭이 비어 있는 경우 샘플은 미공지된 조성물이다.
도 78은 제시된 처리제에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 지정된 날에 촬영한 대표적인 현미경(15X) 사진 이미지를 보여준다.
도 79는 제시된 처리제에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 지정된 날에 촬영한 대표적인 현미경(15X) 사진 이미지를 보여준다. 화합물 명칭이 비어 있는 경우 샘플은 미공지된 조성물이다.
도 80-87은 제시된 처리제에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 7일째에 촬영한 대표적인 거시적 사진 이미지를 보여준다. 도 85에서 화합물 명칭이 비어 있는 경우 샘플은 미공지된 조성물이다.
도 88은 다양한 농도의 제시된 화합물로 처리된 MelanoDerm™ 기질에서 확인된 평균 조직 생존력 및 멜라닌 농도 데이터를 보여주는 표이다.
도 89a-89x는 제시된 처리 후 B16 멜라닌세포의 생존력 퍼센트 및 멜라닌 변화 퍼센트의 히스토그램을 보여준다. 도 89m-89n에서 화합물 명칭이 비어 있는 경우 샘플은 미공지된 조성물이다.
도 90a, 90c 및 90e는 스타우로스포린에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 90a), MeWo 세포(도 90c) 및 WM115 세포(도 90e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 90b, 90d 및 90f는 스타우로스포린에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 90b), MeWo 세포(도 90d) 및 WM115 세포(도 90f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 91a, 91c 및 91e는 화합물 H(AB12509)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 91a), MeWo 세포(도 91c) 및 WM115 세포(도 91e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 91b, 91d 및 91f는 화합물 H (AB12509)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 91b), MeWo 세포(도 91d) 및 WM115 세포(도 91f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 92a, 92c 및 92e는 말라세진(CV-8684)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 92a), MeWo 세포(도 92c) 및 WM115 세포(도 92e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 92b, 92d 및 92f는 말라세진(CV-8684)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 92b), MeWo 세포(도 92d) 및 WM115 세포(도 92f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 93a, 93c 및 93e는 화합물 B(CV-8877)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 93a), MeWo 세포(도 93c) 및 WM115 세포(도 93e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 93b, 93d 및 93f는 화합물 B(CV-8877)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 93b), MeWo 세포(도 93d) 및 WM115 세포(도 93f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 94a, 94c 및 94e는 화합물 I(CV-8686)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 94a), MeWo 세포(도 94c) 및 WM115 세포(도 94e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 94b, 94d 및 94f는 화합물 I(CV-8686)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 94b), MeWo 세포(도 94d) 및 WM115 세포(도 94f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 95a, 95c 및 95e는 화합물 B10에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 95a), MeWo 세포(도 95c) 및 WM115 세포(도 95e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 95b, 95d 및 95f는 화합물 B10에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 95b), MeWo 세포(도 95d) 및 WM115 세포(도 95f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 96a, 96c 및 96e는 화합물 II(CV-8688)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 96a), MeWo 세포(도 96c) 및 WM115 세포(도 96e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 96b, 96d 및 96f는 화합물 II(CV-8688)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 96b), MeWo 세포(도 96d) 및 WM115 세포(도 96f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 97a, 97c 및 97e는 말라세진 전구체에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 97a), MeWo 세포(도 97c) 및 WM115 세포(도 97e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 97b, 97d 및 97f는 말라세진 전구체에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 97b), MeWo 세포(도 97d) 및 WM115 세포(도 97f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 98a, 98c 및 98e는 인돌로[3,2-b]카르바졸(CV-8685)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 98a), MeWo 세포(도 98c) 및 WM115 세포(도 98e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 98b, 98d 및 98f는 인돌로[3,2-b]카르바졸(CV-8685)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 98b), MeWo 세포(도 98d) 및 WM115 세포(도 98f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 99a, 99c 및 99e는 AB17151에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 99a), MeWo 세포(도 99c) 및 WM115 세포(도 99e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 99b, 99d 및 99f는 AB17151에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 99b), MeWo 세포(도 99d) 및 WM115 세포(도 99f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 100a, 100c 및 100e는 화합물 IV(CV-8687)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 100a), MeWo 세포(도 100c) 및 WM115 세포(도 100e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 100b, 100d 및 100f는 화합물 IV(CV-8687)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 100b), MeWo 세포(도 100d) 및 WM115 세포(도 100f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 101a, 101c 및 101e는 AB17011에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 101a), MeWo 세포(도 101c) 및 WM115 세포(도 101e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 101b, 101d 및 101f는 AB17011에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 101b), MeWo 세포(도 101d) 및 WM115 세포(도 101f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 102a, 102c 및 102e는 AB11644에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 102a), MeWo 세포(도 102c) 및 WM115 세포(도 102e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 102b, 102d 및 102f는 AB11644에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 102b), MeWo 세포(도 102d) 및 WM115 세포(도 102f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 103a, 103c 및 103e는 AB17014에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 103a), MeWo 세포(도 103c) 및 WM115 세포(도 103e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 103b, 103d 및 103f는 AB17014에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 103b), MeWo 세포(도 103d) 및 WM115 세포(도 103f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 104a, 104c 및 104e는 미공지된 조성물에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 104a), MeWo 세포(도 104c) 및 WM115 세포(도 104e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 104b, 104d 및 104f는 미공지된 조성물에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 104b), MeWo 세포(도 104d) 및 WM115 세포(도 104f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 105a, 105c 및 105e는 AB17225에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 105a), MeWo 세포(도 105c) 및 WM115 세포(도 105e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 105b, 105d 및 105f는 AB17225에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 105b), MeWo 세포(도 105d) 및 WM115 세포(도 105f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 106a, 106c 및 106e는 화합물 A5(CV-8819)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 106a), MeWo 세포(도 106c) 및 WM115 세포(도 106e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 106b, 106d 및 106f는 화합물 A5(CV-8819)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 106b), MeWo 세포(도 106d) 및 WM115 세포(도 106f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 107a, 107c 및 107e는 AB12976에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 107a), MeWo 세포(도 107c) 및 WM115 세포(도 107e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 107b, 107d 및 107f는 AB12976에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 107b), MeWo 세포(도 107d) 및 WM115 세포(도 107f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 108a, 108c 및 108e는 화합물 E(AB12508)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 아넥신 V-양성 B16F1 세포(도 108a), MeWo 세포(도 108c) 및 WM115 세포(도 108e)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다. 도 108b, 108d 및 108f는 화합물 E(AB12508)에의 노출 후 6, 24, 48 및 72시간째에 프로피듐 아이오다이드(PI)-양성 B16F1 세포(도 108b), MeWo 세포(도 108d) 및 WM115 세포(도 108f)의 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 109a, 109b 및 109c는 스타우로스포린에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 110a, 110b 및 110c는 말라세진(CV-8684)에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 111a, 111b 및 111c는 화합물 I(CV-8686)에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 112a, 112b 및 112c는 화합물 II(CV-8688)에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 113a, 113b 및 113c는 인돌로[3,2-b]카르바졸(CV-8685)에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 114a, 114b 및 114c는 화합물 IV(CV-8687)에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 115a, 115b 및 115c는 AB11644에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 116a, 116b 및 116c는 미공지된 화합물에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 117a, 117b 및 117c는 화합물 A5(CV-8819)에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 118a, 118b 및 118c는 화합물 E(AB12508)에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 119a, 119b 및 119c는 화합물 H(AB12509)에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 120a, 120b 및 120c는 화합물 B(CV-8877)에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 121a, 121b 및 121c는 화합물 B10에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 122a, 122b 및 122c는 말라세진 전구체에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 123a, 123b 및 123c는 AB17151에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 124a, 124b 및 124c는 AB17011에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 125a, 125b 및 125c는 AB17014에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 126a, 126b 및 126c는 AB17225에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 127a, 127b 및 127c는 AB12976에 노출된 후 6, 24, 48 및 72시간째에 각각 B16F1 세포, MeWo 세포 및 WM115 세포에 대한 비히클 대조군과 비교하여 카스파제 3/7 유도 백분율을 포함하는 데이터 표를 보여준다.
도 128-129는 다양한 농도의 제시된 시험 물품으로 처리된 MelanoDerm™ 기질을 사용한 별도의 실험에서 확인된 평균 조직 생존력 및 멜라닌 농도 데이터를 보여주는 표이다.
도 130은 말라세지아에 의해 생성된 화합물을 보여준다.
도 131-132는 다양한 농도의 제시된 시험 물품/시험 조성물로 처리된 MelanoDerm™ 기질을 사용한 별도의 실험에서 확인된 평균 조직 생존력 및 멜라닌 농도 데이터를 보여주는 표이다.
도 133a-133b는 AB17590(도 133a) 및 AB17653, AB17654, AB17655, AB17656, AB17657 및 AB17658(도 133b)에 대한 합성 도식을 보여준다.
도 134는 피부 유형 IV 환자를 위한 피부 치료 템플릿을 보여주는 개략도이다. 값은 mJ/cm2로 주어진 영역에 대한 UV 선량을 나타낸다.
도 135는 피부 유형 I-VI에 대한 Dualight 스케일을 보여주는 표이다.
도 136은 7일 조사 후 8일째에 멜라닌 및 홍반의 Mexameter MX 16 측정을 보여주는 표이다.
도 137은 14일 조사 후 15일째에 멜라닌 및 홍반의 Mexameter MX 16 측정을 보여주는 표이다.
도 138은 다양한 정도의 홍반과 관련된 수치 값의 홍반 스케일을 나타내는 표이다.
도 139는 도 7에 도시된 피부 트리트먼트 템플릿에 따라 다양한 수준의 UV 조사 24시간 후 대상체의 피부를 보여주는 사진이다. 최소 홍반 선량("MED")은 조사 24시간 후 120mJ UVB였다.
도 140은 7일째 대상체의 피부에 시험 부위를 보여주는 사진이다.
도 141은 120mJ UVB로 조사한지 24시간 후 8일째의 대상체의 피부에 있는 테스트 부위를 보여주는 사진이다.
도 142는 추가 1주일의 말라세진 치료 후 14일째에 대상체의 피부에 테스트 부위를 보여주는 사진이다. 처리 영역에 120mJ UVB를 투여하였다.
도 143은 120mJ UVB로 조사한 지 24시간 후 15일째의 대상체의 피부에 있는 테스트 부위를 보여주는 사진이다. 7일 및 9일 동안 비히클 부위의 홍반을 관찰한다. 또한 14일, 10일 및 8일 동안 말라세진 1%-처리 부위에서 최소 내지 경미한 홍반을 관찰하고, 1일 및 3일째에 미량 홍반이 나타난다.A patent or application file contains at least one drawing in color. Upon request and payment of the required fee, the office will provide a copy of this patent or patent application publication with colored drawings.
1A is a schematic diagram of the component layers of the skin. The inset diagram shows the cellular composition of the epidermis and dermis. 1B is a schematic diagram showing the potential mechanism of action of hypopigmentation-inducing agents.
Figure 2 is a series of synthetic schemes for malassezine and its derivatives: Figure 2a: malassezine and indolo[3,2-b]carbazole; Figure 2b: compounds I and IV; Figure 2c: Compound II.
3A is a summary chart showing EC 50 values of Annexin V induction for certain compounds of the invention in MeWo and WM115 cells. 3B-3M are line graphs showing the percentage of MeWo ( FIGS. 3B-3G ) or WM115 ( FIGS. 3H-3M ) cells labeled with annexin V after exposure to various concentrations of the listed compounds.
4A-4D are charts showing the relative annexin V levels (%) in MeWo and WM115 cells after exposure to various concentrations of the listed compounds for 6, 24, 48 and 72 hours. Figures 4e-4j are histograms showing the results of Figures 4a-4d. 4K and 4L are histograms showing the percentage of MeWo (FIG. 4K) and WM115 (FIG. 4L) cells labeled with annexin V after 6 h exposure to the listed compounds at the indicated concentrations.
5A-5K are photomicrographs showing MeWo cell morphology after 6 hours treatment with various concentrations of CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO and staurosporin.
6A-6K are photomicrographs showing MeWo cell morphology after 24 hours treatment with various concentrations of CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO and staurosporin.
7A-7K are photomicrographs showing MeWo cell morphology after 48 hours treatment with various concentrations of CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO and staurosporin.
8A-8K are photomicrographs showing MeWo cell morphology after 72 hours treatment with various concentrations of CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO and staurosporin.
9A-9K are photomicrographs showing WM115 cell morphology after 6 hours treatment with various concentrations of CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO and staurosporin.
10A-10K are photomicrographs showing WM115 cell morphology after 24 hours treatment with various concentrations of CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO and staurosporin.
11A-11K are photomicrographs showing WM115 cell morphology after 48 hours treatment with various concentrations of CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO and staurosporin.
12A-12K are photomicrographs showing WM115 cell morphology after 72 hours of treatment with various concentrations of CV-8684, CV-8685, CV-8688, DMSO and staurosporin.
13A-13D show treatment with various concentrations of CV-8684 (FIG. 13A), CV-8685 (FIG. 13B), CV-8688 (FIG. 13C) or staurosporin (FIG. 13D) for 6, 24, 48 and 72 hours. chart showing the percentage of viable MeWo and WM115 cells remaining after Cell viability was assayed using CellTiter-Glo®. 13E-13J are histograms showing the results of FIGS. 13A-13D. 13K is a summary chart comparing the percentages of viable MeWo and WM115 cells after exposure to the listed concentrations of malassezine, indolocarbazole, compound II and staurosporin for 24, 48 and 72 hours.
14A-14D show treatment with various concentrations of CV-8684 (FIG. 14A), CV-8685 (FIG. 14B), CV-8688 (FIG. 14C) or staurosporin (FIG. 14D) for 6, 24, 48 and 72 hours. Chart showing the levels of lactate dehydrogenase (“LDH”) release from MeWo and WM115 cells after treatment. 14E-14J are histograms showing the results of FIGS. 14A-14D. 14K and 14L show lactate dehydrogenase levels after exposure of MeWo (FIG. 14K) and WM115 (FIG. 14L) cells to the listed concentrations of malassezine, carbazole, compound II and staurosporin for 24 hours. is a histogram.
15A-15E show AhR- upon exposure to various concentrations of omeprazole (FIG. 15A), CV-8684 (FIG. 15B), CV-8685 (FIG. 15C), CV-8686 (FIG. 15D) and CV-8688 (FIG. 15E). Raw data and line graphs of arylhydrocarbon receptor (“AhR”) activation in HepG2 cells stably transfected with a reactive luciferase reporter gene plasmid are shown. Figure 15f shows the EC 50 values for each compound tested.
16A-16K show untreated (FIG. 16A), sterile deionized water (FIG. 16B), 1% kojic acid (FIG. 16C), 0.2% DMSO (FIG. 16D), 0.05% DMSO (FIG. 16E), 200 μM CV-8684 (FIG. 16E). 16f), 50 μM CV-8684 (FIG. 16G), 200 μM CV-8686 (FIG. 16H), 50 μM CV-8686 (FIG. 16I), 200 μM CV-8688 (FIG. 16J) and 50 μM CV-8688 (FIG. 16H) 16k) is a photograph of the MelanoDerm™ matrix on day 0 or 7 after exposure.
17A-17K are untreated (FIG. 17A), sterile deionized water (FIG. 17B), 1% kojic acid (FIG. 17C), 0.2% DMSO (FIG. 17D), 0.05% DMSO (FIG. 17E), 200 μM CV-8684 (FIG. 17f), 50 μM CV-8684 (FIG. 17G), 200 μM CV-8686 (FIG. 17H), 50 μM CV-8686 (FIG. 17I), 200 μM CV-8688 (FIG. 17J) and 50 μM CV-8688 (FIG. 17H) 17k) at 15X magnification micrographs of MelanoDerm™ matrix on day 0 or 7 after exposure.
18A-18F show untreated (FIG. 18A), DMSO (FIG. 18B), phenylthiourea ("PTU") (FIG. 18C) and Compound II 2.5 μM (FIG. 18D), 5 μM (FIG. 18E) and 10 μM (FIG. 18F). ) is a photograph of a zebrafish exposed to Red arrows indicate normal melanocytes.
19A-19F show untreated (FIG. 19A), DMSO (FIG. 19B), phenylthiourea ("PTU") (FIG. 19C) and Compound II 0.3 μM (FIG. 19D), 1 μM (FIG. 19E) and 3 μM (FIG. 19F). ) is a photograph of a zebrafish exposed to Red arrows indicate normal melanocytes. Yellow arrows indicate abnormally small melanocytes.
20 is a summary chart showing the number and percentage of zebrafish with reduced skin pigmentation after exposure to the listed conditions. The last six rows show the effect of various concentrations of compound II.
21A-21E are photographs of zebrafish treated with untreated (FIG. 21A), DMSO (FIG. 21B), PTU (FIG. 21C), 0.5 μM (FIG. 21D) and 1.5 μM (FIG. 21E). The bottom panel contains a color scheme inversion area.
22A and 22B are histograms showing the pigmentation density measured by colored pixels/mm 3 ( FIG. 22A ) and total pixels ( FIG. 22B ) from photographs of zebrafish embryos, illustrated in FIGS. 21A-21E .
23A-23C are mass spectra of CV-8684 in DMSO (FIG. 23A), RPMI medium (FIG. 23B) and DMEM (FIG. 23C). 23D-23F are mass spectra of CV-8686 in DMSO (FIG. 23D), RPMI medium (FIG. 23E) and DMEM (FIG. 23F). 23G-23I are mass spectra of CV-8688 in DMSO (FIG. 23G), RPMI medium (FIG. 23H) and DMEM (FIG. 23I). 23J is a summary chart showing the percentage of test compound remaining in the listed solvents after a 2 hour incubation.
Figures 24a-24s show synthetic schemes for the malassezine derivatives of the present invention: Figure 24a: Compound C (CV-8802); 24B: Compound K (CV-8803); Figure 24c: Compound A (CV-8804); 24D: Compound E (AB12508); Figure 24E: Compound A5 (CV-8819); Figure 24F: Compound H (AB12509); Figure 24G: Compound B (CV-8877); Figure 24H: Compound B10; Figure 24i: Compound AB11644; 24J:O52 (AB12976); Figure 24K: Malassezia indole A (AB17011); Figure 24L: Phythyriacitrin (AB17014); Figure 24M: AB17151; Figure 24N: Compound VI (AB17225); Figure 24o: Malassezialactic acid (AB17227); Figure 24p: AB12507; Figure 24q: Compound V (AB17219); Figure 24R: Compound VIII (AB17220) and Figure 24S: Compound VII (AB17221).
25A-25D include the percentage of annexin V-positive cells at 6 hours ( FIG. 25A ), 24 hours ( FIG. 25B ), 48 hours ( FIG. 25C ) and 72 hours ( FIG. 25D ) after exposure to the indicated treatment agents. Show the data table.
Figures 26A-26D show fold induction of caspase 3/7 at 6 hours (Figure 26A), 24 hours (Figure 26B), 48 hours (Figure 26C) and 72 hours (Figure 26D) after exposure to the indicated treatment agents. ) is shown in the data table.
Figures 27A-27B show the percentage residual cell viability for MeWo (Figure 27A) and WM115 (Figure 27B) cells after exposure to AB12508 (Compound E).
28A-28B show the percentage of residual cell viability for MeWo (FIG. 28A) and WM115 (FIG. 28B) cells after exposure to an unknown composition.
29A-29B show the percentage of residual cell viability for MeWo (FIG. 29A) and WM115 (FIG. 29B) cells after exposure to CV-8803 (Compound K).
30A-30B show the percentage of residual cell viability for MeWo (FIG. 30A) and WM115 (FIG. 30B) cells after exposure to CV-8804 (Compound A).
31A-31B show the percentage of residual cell viability for MeWo (FIG. 31A) and WM115 (FIG. 31B) cells after exposure to CV-8684 (malassezine).
32A-32B show the percentage of residual cell viability for MeWo (FIG. 32A) and WM115 (FIG. 32B) cells after exposure to CV-8685 (indolo[3,2-b]carbazole).
33A-33B show the percentage of residual cell viability for MeWo (FIG. 33A) and WM115 (FIG. 33B) cells after exposure to CV-8686 (Compound I).
34A-34B show the percentage of residual cell viability for MeWo (FIG. 34A) and WM115 (FIG. 34B) cells after exposure to CV-8688 (Compound II).
35A-35B show the percentage of residual cell viability for MeWo (FIG. 35A) and WM115 (FIG. 35B) cells after exposure to staurosporin.
Figure 36A shows AhR activity readings from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of omeprazole. FIG. 36B shows a line graph of the data from FIG. 36A , with insets representing the measured EC50s.
37A shows AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8684 (malassezine). FIG. 37B shows a line graph of the data from FIG. 37A , with insets representing the measured EC50s.
38A shows AhR activity readouts from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8685 (indolo[3,2-b]carbazole). FIG. 38B shows a line graph of the data from FIG. 38A , with insets representing the measured EC50s.
39A shows AhR activity readouts from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8686 (Compound I). FIG. 39B shows a line graph of the data from FIG. 39A , with insets representing the measured EC50s.
40A shows AhR activity readings from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of an unknown composition. FIG. 40B shows a line graph of the data from FIG. 40A , with insets representing measured EC50s.
41A shows AhR activity readings from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8803 (Compound K). FIG. 41B shows a line graph of the data from FIG. 41A , with insets representing measured EC50s.
42A shows AhR activity readouts from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8804 (Compound A). FIG. 42B shows a line graph of the data from FIG. 42A , with insets representing the measured EC50.
43A shows AhR activity readouts from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of AB12508 (Compound E). FIG. 43B shows a line graph of the data from FIG. 43A , with insets representing the measured EC50s.
44A shows AhR activity readouts from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8688 (Compound II). FIG. 44B shows a line graph of the data from FIG. 44A , with insets representing measured EC50s.
45A shows AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of omeprazole. 45B shows a line graph of the data from FIG. 45A.
Figure 46A shows AhR activity readings from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of an unknown composition. Figure 46b shows a line graph of the data from Figure 46a.
47A shows AhR activity readings from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzodioxin (TCDD). 47B shows a line graph of the data from FIG. 47A.
Figure 48A shows AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8819 (Compound A5). 48B shows a line graph of the data from FIG. 48A.
49A shows AhR activity readings from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8684 (malassezine). 49B shows a line graph of the data from FIG. 49A.
50A shows AhR activity readouts from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of AB12508 (Compound E). 50B shows a line graph of the data from FIG. 50A.
51A shows AhR activity readouts from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8686 (Compound I). 51B shows a line graph of the data from FIG. 51A.
52A shows AhR activity readouts from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of AB12509 (Compound H). 52B shows a line graph of the data from FIG. 52A.
Figure 53A shows AhR activity readings from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8688 (Compound II). Figure 53b shows a line graph of the data from Figure 53a.
54A shows AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8877 (Compound B). 54B shows a line graph of the data from FIG. 54A.
Figure 55A shows AhR activity readings from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8685 (indolo[3,2-b]carbazole). FIG. 55B shows a line graph of the data from FIG. 55A.
Figure 56A shows AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of Compound B10. Figure 56b shows a line graph of the data from Figure 56a.
Figure 57A shows AhR activity readings from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of CV-8687 (Compound IV). 57B shows a line graph of the data from FIG. 57A.
58A shows AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of omeprazole. 58B shows a line graph of the data from FIG. 58A.
59A shows AhR activity readings from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of TCDD. 59B shows a line graph of the data from FIG. 59A.
Figure 60A shows AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of malassezine precursor. Figure 60B shows a line graph of the data from Figure 60A.
Figure 61A shows AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of AB11644. Figure 61b shows a line graph of the data from Figure 61a.
62A shows AhR activity readings from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of 3-methylcholanthrene (3-MC). 62B shows a line graph of the data from FIG. 62A.
63A shows AhR activity readouts from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of AB12976 (O52). 63B shows a line graph of the data from FIG. 63A.
64A shows AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of AB17011 (Malassezia indole A). 64B shows a line graph of the data from FIG. 64A.
Figure 65A shows AhR activity readings from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of AB17014 (phytyriacitrin). 65B shows a line graph of the data from FIG. 65A.
Figure 66A shows AhR activity readings from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of AB17151. Figure 66b shows a line graph of the data from Figure 66a.
67A shows AhR activity readouts from a HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to various concentrations of AB17225. 67B shows a line graph of the data from FIG. 67A.
68 is a table showing MTT viability data identified in MelanoDerm™ substrates treated with various concentrations of the indicated compounds.
69 is a table showing melanin concentration data identified in MelanoDerm™ substrates treated with various concentrations of the indicated compounds.
70 is a representative macroscopic photographic image taken on designated days of MelanoDerm™ samples exposed to CV-8686 (Compound I) and AB11644, wherein the samples were exposed to the indicated treatments.
71 is a representative microscopy (15X) photographic image taken on designated days of MelanoDerm™ samples exposed to CV-8686 (Compound I) and AB11644, wherein the samples were exposed to the indicated treatments.
FIG. 72 is a representative microscopic (15X) photographic image of a MelanoDerm™ sample exposed to CV-8686 (Compound I) and kojic acid, taken on designated days, wherein the sample was exposed to the indicated treatment.
73 is a representative macroscopic photographic image taken on designated days of MelanoDerm™ samples exposed to CV-8686 (Compound I) and kojic acid, wherein the samples were exposed to the indicated treatments.
74 is a representative macroscopic photographic image taken on designated days of MelanoDerm™ samples exposed to CV-8686 (Compound I) and kojic acid, wherein the samples were exposed to the indicated treatments.
75 is a table showing mean tissue viability and melanin concentration data identified in MelanoDerm™ substrates treated with various concentrations of the indicated compounds. If the Sponsor Designation field is blank, the sample is an unknown composition.
76 shows representative macroscopic photographic images taken on designated days of MelanoDerm™ samples exposed to the indicated treatments.
77 shows representative macroscopic photographic images taken 7 days after treatment of MelanoDerm™ samples exposed to the indicated treatments. If the compound name is blank, the sample is an unknown composition.
78 shows representative microscopic (15X) photographic images taken on designated days of MelanoDerm™ samples exposed to the indicated treatments.
79 shows representative microscopic (15X) photographic images taken on designated days of MelanoDerm™ samples exposed to the indicated treatments. If the compound name is blank, the sample is an unknown composition.
80-87 show representative macroscopic photographic images taken on day 7 of MelanoDerm™ samples exposed to the indicated treatments. If the compound name in FIG. 85 is blank, the sample is an unknown composition.
88 is a table showing mean tissue viability and melanin concentration data identified in MelanoDerm™ substrates treated with various concentrations of the indicated compounds.
89A-89X show histograms of percent viability and percent melanin change of B16 melanocytes after the indicated treatments. In Figures 89m-89n, if the compound name is blank, the sample is an unknown composition.
Figures 90A, 90C and 90E show annexin V-positive B16F1 cells (Figure 90A), MeWo cells (Figure 90C) and WM115 cells (Figure 90E) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to staurosporin. Display a table of data containing percentages. Figures 90B, 90D and 90F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (Figure 90B), MeWo cells (Figure 90D) and WM115 cells at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to staurosporin. (FIG. 90F) shows a table of data including percentages.
91A, 91C and 91E show annexin V-positive B16F1 cells (FIG. 91A), MeWo cells (FIG. 91C) and WM115 cells (FIG. 91E) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound H (AB12509). Show a table of data containing the percentage of 91B, 91D and 91F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 91B), MeWo cells (FIG. 91D) and WM115 at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound H (AB12509). A table of data including the percentage of cells ( FIG. 91F ) is shown.
Figures 92A, 92C and 92E show annexin V-positive B16F1 cells (Figure 92A), MeWo cells (Figure 92C) and WM115 cells (Figure 92C) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to malassezine (CV-8684). 92e) is shown in the data table. 92B, 92D and 92F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 92B), MeWo cells (FIG. 92D) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to malassezine (CV-8684). and the percentage of WM115 cells ( FIG. 92F ).
Figures 93A, 93C and 93E show annexin V-positive B16F1 cells (Figure 93A), MeWo cells (Figure 93C) and WM115 cells (Figure 93C) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound B (CV-8877). 93e) is shown in the data table. 93B, 93D and 93F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 93B), MeWo cells (FIG. 93D) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound B (CV-8877). and the percentage of WM115 cells ( FIG. 93F ).
Figures 94A, 94C and 94E show annexin V-positive B16F1 cells (Figure 94A), MeWo cells (Figure 94C) and WM115 cells (Figure 94C) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound I (CV-8686). 94e) is shown in the data table. 94B, 94D and 94F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 94B), MeWo cells (FIG. 94D) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound I (CV-8686). and the percentage of WM115 cells ( FIG. 94F ).
Figures 95A, 95C and 95E show the percentage of Annexin V-positive B16F1 cells (Figure 95A), MeWo cells (Figure 95C) and WM115 cells (Figure 95E) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound B10. Shows the data table it contains. Figures 95B, 95D and 95F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (Figure 95B), MeWo cells (Figure 95D) and WM115 cells (Figure 95D) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound B10. 95f) is shown in the data table.
96A, 96C and 96E show annexin V-positive B16F1 cells ( FIG. 96A ), MeWo cells ( FIG. 96C ) and WM115 cells ( FIG. 96A ) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound II (CV-8688). 96e) is shown in the data table. 96B, 96D and 96F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 96B), MeWo cells (FIG. 96D) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to compound II (CV-8688). and the percentage of WM115 cells ( FIG. 96F ).
Figures 97A, 97C and 97E show annexin V-positive B16F1 cells (Figure 97A), MeWo cells (Figure 97C) and WM115 cells (Figure 97E) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to malassezine precursors. Display a table of data containing percentages. 97B, 97D and 97F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 97B), MeWo cells (FIG. 97D) and WM115 cells at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to malassezine precursors. (FIG. 97F) shows a table of data including percentages.
98A, 98C and 98E show annexin V-positive B16F1 cells ( FIG. 98A ), MeWo cells 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to indolo[3,2-b]carbazole (CV-8685). (FIG. 98C) and data tables including percentages of WM115 cells (FIG. 98E) are shown. 98B, 98D and 98F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to indolo[3,2-b]carbazole (CV-8685) ( FIG. 98b), MeWo cells (FIG. 98D) and WM115 cells (FIG. 98F) are shown in the data table.
Figures 99A, 99C and 99E include the percentage of Annexin V-positive B16F1 cells (Figure 99A), MeWo cells (Figure 99C) and WM115 cells (Figure 99E) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17151. show the data table. 99B, 99D and 99F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 99B), MeWo cells (FIG. 99D) and WM115 cells (FIG. 99F) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17151. ) shows a table of data containing percentages of
Figures 100A, 100C and 100E show annexin V-positive B16F1 cells (Figure 100A), MeWo cells (Figure 100C) and WM115 cells (Figure 100C) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound IV (CV-8687). A table of data containing the percentages of 100e) is shown. 100B, 100D and 100F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells ( FIG. 100B ), MeWo cells ( FIG. 100D ) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound IV (CV-8687). and the percentage of WM115 cells ( FIG. 100F ).
Figures 101A, 101C and 101E include the percentage of Annexin V-positive B16F1 cells (Figure 101A), MeWo cells (Figure 101C) and WM115 cells (Figure 101E) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17011. show the data table. 101B, 101D and 101F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 101B), MeWo cells (FIG. 101D) and WM115 cells (FIG. 101F) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17011. ) shows a table of data containing percentages of
Figures 102A, 102C and 102E include the percentages of Annexin V-positive B16F1 cells (Figure 102A), MeWo cells (Figure 102C) and WM115 cells (Figure 102E) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB11644. show the data table. 102B, 102D and 102F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells ( FIG. 102B ), MeWo cells ( FIG. 102D ) and WM115 cells ( FIG. 102F ) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB11644. ) shows a table of data containing percentages of
103A, 103C and 103E include the percentage of Annexin V-positive B16F1 cells ( FIG. 103A ), MeWo cells ( FIG. 103C ) and WM115 cells ( FIG. 103E ) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17014. show the data table. 103B, 103D and 103F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 103B), MeWo cells (FIG. 103D) and WM115 cells (FIG. 103F) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17014. ) shows a table of data containing percentages of
104A, 104C and 104E show annexin V-positive B16F1 cells (FIG. 104A), MeWo cells (FIG. 104C) and WM115 cells (FIG. 104E) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to an unknown composition. Show a table of data containing the percentage of 104B, 104D and 104F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 104B), MeWo cells (FIG. 104D) and WM115 at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to an unknown composition. A table of data including the percentage of cells ( FIG. 104F ) is shown.
105A, 105C and 105E include the percentages of Annexin V-positive B16F1 cells ( FIG. 105A ), MeWo cells ( FIG. 105C ) and WM115 cells ( FIG. 105E ) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17225. show the data table. 105B, 105D and 105F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 105B), MeWo cells (FIG. 105D) and WM115 cells (FIG. 105F) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17225. ) shows a table of data containing percentages of
Figures 106A, 106C and 106E show annexin V-positive B16F1 cells (Figure 106A), MeWo cells (Figure 106C) and WM115 cells (Figure 106C) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound A5 (CV-8819). 106e) is shown in the data table. 106B, 106D and 106F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells ( FIG. 106B ), MeWo cells ( FIG. 106D ) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound A5 (CV-8819). and the percentage of WM115 cells ( FIG. 106F ).
Figures 107A, 107C and 107E include the percentage of Annexin V-positive B16F1 cells (Figure 107A), MeWo cells (Figure 107C) and WM115 cells (Figure 107E) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB12976. show the data table. 107B, 107D and 107F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 107B), MeWo cells (FIG. 107D) and WM115 cells (FIG. 107F) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB12976. ) shows a table of data containing percentages of
108A, 108C and 108E show annexin V-positive B16F1 cells (FIG. 108A), MeWo cells (FIG. 108C) and WM115 cells (FIG. 108E) at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound E (AB12508). Show a table of data containing the percentage of 108B, 108D and 108F show propidium iodide (PI)-positive B16F1 cells (FIG. 108B), MeWo cells (FIG. 108D) and WM115 at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound E (AB12508). A table of data including the percentage of cells ( FIG. 108F ) is shown.
109A, 109B and 109C show the percentage of caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to staurosporin. Show the data table.
Figures 110a, 110b and 110c show caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to malassezine (CV-8684). Display a data table containing percentages.
111A, 111B and 111C show caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound I (CV-8686). Display a data table containing percentages.
112A, 112B and 112C show caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to compound II (CV-8688). Display a data table containing percentages.
113A, 113B and 113C show vehicle controls for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to indolo[3,2-b]carbazole (CV-8685), respectively. A table of data is shown including the percentage of caspase 3/7 induction compared to .
114A, 114B and 114C show caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound IV (CV-8687). Display a table of data containing percentages.
115A, 115B and 115C are data tables including the percentage of caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB11644. shows
116A, 116B and 116C include percentage caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to unknown compound. show the data table.
117A, 117B and 117C show caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound A5 (CV-8819). Display a table of data containing percentages.
118A, 118B and 118C show the percentage of caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound E (AB12508). Shows the data table it contains.
119A, 119B and 119C show the percentage of caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound H (AB12509). Shows the data table it contains.
Figures 120A, 120B and 120C show caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound B (CV-8877). Display a table of data containing percentages.
121A, 121B and 121C are data including percentage caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to Compound B10. show the table
122A, 122B and 122C show the percentage of caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to malassezine precursors. Show the data table.
123A, 123B and 123C are data tables including the percentage of caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17151. shows
124A, 124B and 124C are data tables including the percentage of caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17011. shows
125A, 125B and 125C are data tables including the percentage of caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17014. shows
126A, 126B and 126C are data tables including the percentage of caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB17225. shows
127A, 127B and 127C are data tables including the percentage of caspase 3/7 induction compared to vehicle control for B16F1 cells, MeWo cells and WM115 cells, respectively, at 6, 24, 48 and 72 hours after exposure to AB12976. shows
128-129 are tables showing mean tissue viability and melanin concentration data identified in separate experiments with MelanoDerm™ substrates treated with various concentrations of the indicated test articles.
130 shows compounds produced by Malassezia.
131-132 are tables showing mean tissue viability and melanin concentration data found in separate experiments using MelanoDerm™ substrates treated with various concentrations of the indicated test articles/test compositions.
133A-133B show synthetic schemes for AB17590 (FIG. 133A) and AB17653, AB17654, AB17655, AB17656, AB17657 and AB17658 (FIG. 133B).
134 is a schematic diagram showing a skin treatment template for skin type IV patients. Values represent UV dose for a given area in mJ/cm 2 .
135 is a table showing the Dualight scale for skin types I-VI.
136 is a table showing Mexameter MX 16 measurements of melanin and erythema on day 8 after irradiation for 7 days.
137 is a table showing Mexameter MX 16 measurements of melanin and erythema at 15 days after 14-day irradiation.
138 is a table showing the erythema scale of numerical values associated with various degrees of erythema.
FIG. 139 is a photograph showing the skin of a subject after 24 hours of UV irradiation at various levels according to the skin treatment template shown in FIG. 7 . The minimum erythema dose (“MED”) was 120 mJ UVB 24 hours after irradiation.
140 is a photograph showing a test site on the skin of a subject on day 7;
141 is a photograph showing a test site on the skin of a subject on the 8th day after 24 hours of irradiation with 120mJ UVB.
142 is a photograph showing a test site on a subject's skin on day 14 after an additional week of malassezine treatment. 120 mJ UVB was administered to the treatment area.
143 is a photograph showing a test site on the skin of a subject on the 15th day after 24 hours of irradiation with 120 mJ UVB. Observe for erythema at the vehicle site for 7 and 9 days. In addition, minimal to mild erythema was observed at the malassezin 1%-treated site for days 14, 10 and 8, and trace erythema appeared on days 1 and 3.

발명의 상세한 설명DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

본 발명의 한 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.One embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. A compound is a chemical analog of a compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물은 하기 화학식 (I)의 구조를 갖는다:In one aspect of this embodiment, the compound produced by yeast Malassezia has the structure of Formula (I):

Figure pct00065
Figure pct00065

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 말라세진의 화학적 유사체이다.In another aspect of this embodiment, the compound is a chemical analog of malassezine.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.Another embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. A compound is a chemical analog of a compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물은 하기 화학식 (I)의 구조를 갖는다:In one aspect of this embodiment, the compound produced by yeast Malassezia has the structure of Formula (I):

Figure pct00066
Figure pct00066

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 말라세진의 화학적 유사체이다.In another aspect of this embodiment, the compound is a chemical analog of malassezine.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌세포 활성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanocyte activity. A compound is a chemical analog of a compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물은 하기 화학식 (I)의 구조를 갖는다:In one aspect of this embodiment, the compound produced by yeast Malassezia has the structure of Formula (I):

Figure pct00067
Figure pct00067

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 말라세진의 화학적 유사체이다.In another aspect of this embodiment, the compound is a chemical analog of malassezine.

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화(agonizing)시키기 위한 화합물이다. 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.A further embodiment of the present invention are compounds for agonizing aryl hydrocarbon receptors (AhR). A compound is a chemical analog of a compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물은 하기 화학식 (I)의 구조를 갖는다:In one aspect of this embodiment, the compound produced by yeast Malassezia has the structure of Formula (I):

Figure pct00068
Figure pct00068

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 말라세진의 화학적 유사체이다.In another aspect of this embodiment, the compound is a chemical analog of malassezine.

본 발명의 다른 구체예는 과색소침착 장애에 의해 초래된 과색소침착을 개선하기 위한 화합물이다. 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.Another embodiment of the present invention is a compound for ameliorating hyperpigmentation caused by hyperpigmentation disorders. A compound is a chemical analog of a compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물은 하기 화학식 (I)의 구조를 갖는다:In one aspect of this embodiment, the compound produced by yeast Malassezia has the structure of Formula (I):

Figure pct00069
Figure pct00069

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 말라세진의 화학적 유사체이다.In another aspect of this embodiment, the compound is a chemical analog of malassezine.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌 생산을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanin production. A compound is a chemical analog of a compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물은 하기 화학식 (I)의 구조를 갖는다:In one aspect of this embodiment, the compound produced by yeast Malassezia has the structure of Formula (I):

Figure pct00070
Figure pct00070

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 말라세진의 화학적 유사체이다.In another aspect of this embodiment, the compound is a chemical analog of malassezine.

본 발명의 추가 구체예는 멜라노솜 생물발생을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanosome biogenesis. A compound is a chemical analog of a compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물은 하기 화학식 (I)의 구조를 갖는다:In one aspect of this embodiment, the compound produced by yeast Malassezia has the structure of Formula (I):

Figure pct00071
Figure pct00071

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 말라세진의 화학적 유사체이다.In another aspect of this embodiment, the compound is a chemical analog of malassezine.

본 발명의 다른 구체예는 멜라노솜 이동을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물의 화학적 유사체, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다.Another embodiment of the present invention is a compound for modulating melanosome migration. A compound is a chemical analog of a compound produced by Malassezia yeast, or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 말라세지아 효모에 의해 생성된 화합물은 하기 화학식 (I)의 구조를 갖는다:In one aspect of this embodiment, the compound produced by yeast Malassezia has the structure of Formula (I):

Figure pct00072
Figure pct00072

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 말라세진의 화학적 유사체이다.In another aspect of this embodiment, the compound is a chemical analog of malassezine.

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 말라세지아 효모 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises Malassezia yeast and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier.

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 말라세지아 효모로부터 분리되거나 분리가능한 화합물 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound isolated or isolates from Malassezia yeast and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier.

본 발명의 다른 구체예는 조성물이다. 조성물은 유사체를 포함하는 본원에 개시된 임의의 화합물, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다.Another embodiment of the present invention is a composition. Compositions include any compound disclosed herein, including analogs, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent, or carrier.

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하는 방법이다. 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 활성을 조절하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for modulating melanocyte activity in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for functionalizing an arylhydrocarbon receptor (AhR). The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 과색소침착의 개선이 필요한 대상체에서 과색소침착 장애에 의해 초래된 과색소침착을 개선하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a method for ameliorating hyperpigmentation caused by a hyperpigmentation disorder in a subject in need thereof. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌 생산을 조절하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for modulating melanin production in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라노솜 생물발생을 조절하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanosome biogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라노솜 이동을 조절하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanosome migration in a subject. The method comprises contacting the subject with any compound or composition disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the present invention is a compound. The compound is a compound having the structure of formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00073
Figure pct00073

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택되고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 메틸이다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl, and R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 , at least one of R8, R9, R10 and R11 is methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00074
Figure pct00074

본 발명의 추가 구체예는 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound. The compound is a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00075
Figure pct00075

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택되고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 적어도 하나는 메틸이다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl, and R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 , at least one of R9 and R10 is methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는다:In one aspect of this embodiment, the compound has the structure:

Figure pct00076
Figure pct00076

본 발명의 추가 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. The compound is a compound having the structure of formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00077
Figure pct00077

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00078
Figure pct00078

본 발명의 다른 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. The compound is a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00079
Figure pct00079

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00080
Figure pct00080

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. The compound is a compound having the structure of formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00081
Figure pct00081

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00082
Figure pct00082

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다: A further embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. The compound is a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00083
Figure pct00083

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00084
Figure pct00084

본 발명의 다른 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the invention is a compound for functionalizing the aryl hydrocarbon receptor (AhR). The compound is a compound having the structure of formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00085
Figure pct00085

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00086
Figure pct00086

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다: A further embodiment of the present invention is a compound for functionalizing the arylhydrocarbon receptor (AhR). The compound is a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00087
Figure pct00087

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00088
Figure pct00088

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다:A further embodiment of the present invention is a composition. A composition comprises a compound having the structure of Formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier:

Figure pct00089
Figure pct00089

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00090
Figure pct00090

본 발명의 다른 구체예는 조성물이다. 조성물은 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다: Another embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound having the structure of formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier:

Figure pct00091
Figure pct00091

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00092
Figure pct00092

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of Formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00093
Figure pct00093

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00094
Figure pct00094

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of Formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00095
Figure pct00095

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00096
Figure pct00096

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:Another embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of Formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00097
Figure pct00097

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00098
Figure pct00098

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of Formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00099
Figure pct00099

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00100
Figure pct00100

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for functionalizing an arylhydrocarbon receptor (AhR) in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of Formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00101
Figure pct00101

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 and R11 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00102
Figure pct00102

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR)를 작용화시키기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 하기 화학식 (III)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for functionalizing an arylhydrocarbon receptor (AhR) in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of Formula (III): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00103
Figure pct00103

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 and R10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and methyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In one aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00104
Figure pct00104

본 발명의 한 구체예는 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:One embodiment of the present invention is a compound. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00105
Figure pct00105

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서, Ra가 수소인 경우, Y는 CR5R6이고, R13 및 R14는 둘 모두 수소이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 R16이거나; R5는 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성한다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 ; wherein when R a is hydrogen, Y is CR 5 R 6 , R 13 and R 14 are both hydrogen, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , at least one of R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is R 16 ; R 5 is selected from the group consisting of hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3-6 cycloalkyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00106
Figure pct00106

이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6은 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O 또는 CH(C3H5)이다. Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or C(=O)-O-(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; 각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하며; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00107
Figure pct00107

Figure pct00108
Figure pct00108

본 발명의 다른 구체예는 화합물이다. 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the present invention is a compound. A compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00109
Figure pct00109

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이며; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이며; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 적어도 하나는 수소가 아니다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered heterocycle forming a reel; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; At least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 is not hydrogen.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00110
Figure pct00110

이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is chosen

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are hydrogen. .

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 하나는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8 및 R9 중 하나는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

바람직하게는, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1, 2, 3 또는 4개가 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1, 2, 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00111
Figure pct00111

본 발명의 추가 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00112
Figure pct00112

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이며; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00113
.
Figure pct00113
.

이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6은 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O 또는 CH(C3H5)이다. Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or C(=O)-O-(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; 각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00114
Figure pct00114

이 구체예의 추가 양태에서, Ra가 수소인 경우, Y는 CR5R6이고, R13 및 R14는 둘 모두 수소이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 R16이거나; R5는 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성한다.In a further aspect of this embodiment, when R a is hydrogen, then Y is CR 5 R 6 , R 13 and R 14 are both hydrogen, and R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , at least one of R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is R 16 ; R 5 is selected from the group consisting of hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3-6 cycloalkyl.

본 발명의 추가 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식을 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. A compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00115
Figure pct00115

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00116
.
Figure pct00116
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이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is chosen

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are hydrogen. .

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 하나는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8 및 R9 중 하나는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1, 2, 3 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In another aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1, 2, 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In a further aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00117
Figure pct00117

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 적어도 하나는 수소가 아니다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 is not hydrogen.

본 발명의 다른 구체예는 피부를 브라이트닝하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the present invention is a compound for brightening the skin. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00118
Figure pct00118

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00119
Figure pct00119

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00120
.
Figure pct00120
.

이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6은 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O 또는 CH(C3H5)이다. Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or C(=O)-O-(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; 각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하며; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이며; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00121
Figure pct00121

Figure pct00122
Figure pct00122

이 구체예의 추가 양태에서, Ra가 수소인 경우, Y는 CR5R6이고, R13 및 R14는 둘 모두 수소이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 R16이거나; R5는 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성한다.In a further aspect of this embodiment, when R a is hydrogen, then Y is CR 5 R 6 , R 13 and R 14 are both hydrogen, and R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , at least one of R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is R 16 ; R 5 is selected from the group consisting of hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3-6 cycloalkyl.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이며, 화합물은 하기 화학식을 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis, wherein the compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00123
Figure pct00123

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered heterocycle forming a reel; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00124
.
Figure pct00124
.

이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is chosen

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are hydrogen. .

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 하나는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8 및 R9 중 하나는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1, 2, 3 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In another aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1, 2, 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In a further aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00125
Figure pct00125

Figure pct00126
Figure pct00126

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 적어도 하나는 수소가 아니다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 is not hydrogen.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기의 화합물로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00127
.
Figure pct00127
.

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00128
Figure pct00128

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00129
.
Figure pct00129
.

이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6은 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O 또는 CH(C3H5)이다.Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O or CH(C 3 H 5 ).

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.Preferably, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or C(=O)-O-(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; 각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00130
Figure pct00130

Figure pct00131
Figure pct00131

이 구체예의 추가 양태에서, Ra가 수소인 경우, Y는 CR5R6이고, R13 및 R14는 둘 모두 수소이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 R16이거나; R5는 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성한다.In a further aspect of this embodiment, when R a is hydrogen, then Y is CR 5 R 6 , R 13 and R 14 are both hydrogen, and R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , at least one of R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is R 16 ; R 5 is selected from the group consisting of hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3-6 cycloalkyl.

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식을 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity. A compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00132
Figure pct00132

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다. wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00133
.
Figure pct00133
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이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is chosen

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are hydrogen. .

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 하나는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8 및 R9 중 하나는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1, 2, 3 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In another aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1, 2, 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In a further aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00134
Figure pct00134

Figure pct00135
Figure pct00135

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 적어도 하나는 수소가 아니다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 is not hydrogen.

본 발명의 다른 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the present invention is a compound for modulating aryl hydrocarbon receptor (AhR) activity. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00136
Figure pct00136

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌생성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanogenesis. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00137
Figure pct00137

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00138
.
Figure pct00138
.

이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6은 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O 또는 CH(C3H5)이다. Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or C(=O)-O-(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; 각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기의 화합물로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00139
Figure pct00139

Figure pct00140
Figure pct00140

이 구체예의 추가 양태에서, Ra가 수소인 경우, Y는 CR5R6이고, R13 및 R14는 둘 모두 수소이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 R16이거나; R5는 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성한다.In a further aspect of this embodiment, when R a is hydrogen, then Y is CR 5 R 6 , R 13 and R 14 are both hydrogen, and R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , at least one of R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is R 16 ; R 5 is selected from the group consisting of hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3-6 cycloalkyl.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌생성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식을 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanogenesis. A compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00141
Figure pct00141

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered heterocycle forming a reel; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00142
.
Figure pct00142
.

이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is chosen

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are hydrogen. .

이 구체예의 다른 양태에서, R5 및 R10 중 하나는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In another aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8 및 R9 중 하나는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1, 2, 3 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1, 2, 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00143
,
Figure pct00143
,

Figure pct00144
Figure pct00144

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 적어도 하나는 수소가 아니다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 is not hydrogen.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌생성을 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the present invention is a compound for regulating melanogenesis. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00145
Figure pct00145

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌 농도를 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanin concentration. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00146
Figure pct00146

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00147
.
Figure pct00147
.

이 구체예의 또 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가의 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6은 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O 또는 CH(C3H5)이다. Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or C(=O)-O-(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; 각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00148
Figure pct00148

Figure pct00149
Figure pct00149

이 구체예의 추가 양태에서, Ra가 수소인 경우, Y는 CR5R6이고, R13 및 R14는 둘 모두 수소이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 R16이거나; R5는 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성한다.In a further aspect of this embodiment, when R a is hydrogen, then Y is CR 5 R 6 , R 13 and R 14 are both hydrogen, and R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , at least one of R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is R 16 ; R 5 is selected from the group consisting of hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3-6 cycloalkyl.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌 농도를 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기 화학식을 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanin concentration. A compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00150
Figure pct00150

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하거나; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00151
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Figure pct00151
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이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is chosen

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are hydrogen. .

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 하나는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8 및 R9 중 하나는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1, 2, 3 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In another aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1, 2, 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In a further aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00152
Figure pct00152

Figure pct00153
Figure pct00153

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 적어도 하나는 수소가 아니다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 is not hydrogen.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌 농도를 조절하기 위한 화합물이다. 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the present invention is a compound for regulating melanin concentration. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00154
Figure pct00154

본 발명의 추가 구체예는 화합물을 포함하는 조성물이다. 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a composition comprising a compound. A compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00155
Figure pct00155

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00156
.
Figure pct00156
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이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen, R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3 - 6 cycloalkyl, or O- (C 1-4 alkyl), or; R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6은 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O 또는 CH(C3H5)이다. Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or C(=O)-O-(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; 각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00157
Figure pct00157

Figure pct00158
Figure pct00158

본 발명의 추가 구체예는 화합물을 포함하는 조성물이다. 화합물은 하기 화학식을 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a composition comprising a compound. A compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00159
Figure pct00159

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00160
.
Figure pct00160
.

이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is chosen

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are hydrogen. .

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 하나는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8 및 R9 중 하나는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1, 2, 3 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In another aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1, 2, 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In a further aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00161
Figure pct00161

본 발명의 다른 구체예는 화합물을 포함하는 조성물이다. 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the invention is a composition comprising the compound. The compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00162
Figure pct00162

본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00163
Figure pct00163

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ; R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00164
.
Figure pct00164
.

이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6는 조합되어 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6은 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O 또는 CH(C3H5)이다. Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or C(=O)-O-(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; 각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6은 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00165
Figure pct00165

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 방법은 대상체를 하기 화학식을 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다:A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00166
Figure pct00166

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로 선택되고; R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하거나; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 화학식 (II)에 따를 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II), or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00167
.
Figure pct00167
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이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is chosen

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are hydrogen. .

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 하나는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8 및 R9 중 하나는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1, 2, 3 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In another aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1, 2, 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In a further aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00168
.
Figure pct00168
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본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기로 구성된 구으로부터 선택된다:Another embodiment of the invention is a method for brightening skin in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is selected from the spheres consisting of:

Figure pct00169
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Figure pct00169
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00170
Figure pct00170

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O, 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16, 또는 OR16로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14, 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6는 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16, 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa, 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐, 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실, 및 OR16로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O, or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 , or OR 16 . become; R 13 , R 14 , and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 , and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 in combination are an oxo (=O) group or C 3 -6 to form cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a , and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl, or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00171
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Figure pct00171
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이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6는 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6는 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O, 또는 CH(C3H5)이다.Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O, or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11 각각은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH, 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH, or C(=O)—O—(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH, 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH, or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11, 및 R13 각각은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6는 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기를 형성하고; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 in combination form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00172
Figure pct00172

Figure pct00173
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Figure pct00173
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00174
Figure pct00174

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9, 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3는 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3는 조합하여 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합하여 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐, 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 , and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO ; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 are 5 or 6 membered heterocycles in combination forming a reel; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 are 5 or 6 membered heterocycle in combination forming a reel; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl, or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00175
.
Figure pct00175
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이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are independently from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is selected from

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10 중 1개 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are is hydrogen

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 1개는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, 및 R9 중 1개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 , and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10 중 1개, 2개, 3개, 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In another aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1 , 2 , 3 , or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen to be.

이 구체예의 추가 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In a further aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00176
.
Figure pct00176
.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉하는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00177
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Figure pct00177
.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00178
Figure pct00178

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O, 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16, 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14, 및 R15은 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6는 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16, 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa, 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐, 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실, 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O, or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 , or OR 16 . become; R 13 , R 14 , and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 , and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 in combination are an oxo (=O) group or C 3 -6 to form cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a , and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl, or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00179
.
Figure pct00179
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이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6는 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6는 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O, 또는 CH(C3H5)이다.Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O, or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11 각각은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH, 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH, or C(=O)—O—(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH, 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH, or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11, 및 R13 각각은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6는 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기를 형성하고; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 in combination form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00180
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Figure pct00180
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체와 화합물을 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting a subject with a compound, wherein the compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00181
Figure pct00181

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9, 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3는 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3는 조합하여 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합하여 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐, 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 , and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO ; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 are 5 or 6 membered heterocycles in combination forming a reel; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 are 5 or 6 membered heterocycle in combination forming a reel; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl, or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00182
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Figure pct00182
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이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are independently from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is selected from

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10 중 1개 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are is hydrogen

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 1개는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, 및 R9 중 1개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 , and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10 중 1개, 2개, 3개, 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In another aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1 , 2 , 3 , or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen to be.

이 구체예의 추가 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In a further aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00183
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Figure pct00183
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본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the invention is a method for modulating aryl hydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00184
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Figure pct00184
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00185
Figure pct00185

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O, 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16, 또는 OR16로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14, 및 R15은 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6는 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16, 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa, 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐, 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실, 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O, or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 , or OR 16 . become; R 13 , R 14 , and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 , and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 in combination are an oxo (=O) group or C 3 -6 to form cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a , and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl, or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00186
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Figure pct00186
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이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6는 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6는 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O, 또는 CH(C3H5)이다.Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O, or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11 각각은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH, 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH, or C(=O)—O—(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH, 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH, or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고; Y는 CR5R6이고; R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11, 및 R13 각각은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6는 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기를 형성하고; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 in combination form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00187
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Figure pct00187
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00188
Figure pct00188

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9, 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3는 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3는 조합하여 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합하여 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐, 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 , and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO ; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 are 5 or 6 membered heterocycles in combination forming a reel; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 are 5 or 6 membered heterocycle in combination forming a reel; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl, or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00189
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Figure pct00189
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이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are independently from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is selected from

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10 중 1개 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are is hydrogen

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 하나는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, 및 R9 중 1개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 , and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10 중 1개, 2개, 3개, 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In another aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1 , 2 , 3 , or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen to be.

이 구체예의 추가 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In a further aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00190
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Figure pct00190
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본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00191
.
Figure pct00191
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00192
Figure pct00192

상기 식에서, X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O, 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16, 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14, 및 R15은 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6는 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16, 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa, 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐, 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실, 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다.wherein X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O, or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 , or OR 16 . become; R 13 , R 14 , and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 , and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 in combination are an oxo (=O) group or C 3 -6 to form cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a , and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl, or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, and OR 16 .

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00193
.
Figure pct00193
.

이 구체예의 다른 양태에서, X는 NH이다.In another aspect of this embodiment, X is NH.

이 구체예의 추가 양태에서, Y는 CR5R6이고; R5는 수소이고, R6는 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기를 형성한다.In a further aspect of this embodiment, Y is CR 5 R 6 ; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group.

바람직하게는, CR5R6는 CH2, CHCH3, CHOCH3, C=O, 또는 CH(C3H5)이다.Preferably, CR 5 R 6 is CH 2 , CHCH 3 , CHOCH 3 , C=O, or CH(C 3 H 5 ).

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11 중 적어도 하나는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 is C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R2는 C1-4 알킬이다.Preferably, R 2 is C 1-4 alkyl.

보다 바람직하게는, R2는 메틸이다.More preferably, R 2 is methyl.

이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11 각각은 수소이다.In another aspect of this embodiment, each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH, 또는 C(=O)-O-(C1-4 알킬)이다.Preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH, or C(=O)—O—(C 1-4 alkyl).

보다 바람직하게는, R12는 CHO, CH2OH, 또는 CO2CH3이다.More preferably, R 12 is CHO, CH 2 OH, or CO 2 CH 3 .

이 구체예의 추가 양태에서, X는 NH이고;Y는 CR5R6이고; R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11, 및 R13 각각은 수소이고; R2는 수소 또는 C1-4 알킬이고; R5는 수소이고, R6는 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬, 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기를 형성하고; R12는 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-4 알킬이다.In a further aspect of this embodiment, X is NH; Y is CR 5 R 6 ; each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , and R 13 is hydrogen; R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl; R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 in combination form an oxo (=O) group; R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; R a is hydrogen or C 1-4 alkyl.

이 구체예의 다른 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In another aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00194
.
Figure pct00194
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00195
Figure pct00195

상기 식에서, R1, R4, R5, R6, R9, 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3는 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3는 조합하여 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합하여 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐, 또는 C2-9 알키닐이다.wherein R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 , and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO ; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 are 5 or 6 membered heterocycles in combination forming a reel; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 are 5 or 6 membered heterocycle in combination forming a reel; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl, or C 2-9 alkynyl.

이 구체예의 한 양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)에 따른 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염이다:In one aspect of this embodiment, the compound is a compound having a structure according to formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:

Figure pct00196
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Figure pct00196
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이 구체예의 다른 양태에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.In another aspect of this embodiment, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are independently from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. is selected from

바람직하게는, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10 중 1개 또는 2개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.Preferably, one or two of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are C 1-4 alkyl and the remaining groups are is hydrogen

이 구체예의 추가 양태에서, R5 및 R10 중 1개는 C1-4 알킬이고, 다른 하나는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 5 and R 10 is C 1-4 alkyl and the other is hydrogen.

이 구체예의 추가 양태에서, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, 및 R9 중 1개는 C1-4 알킬이고, 나머지 기는 수소이다.In a further aspect of this embodiment, one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 7 , R 8 , and R 9 is C 1-4 alkyl and the other groups are hydrogen.

이 구체예의 다른 양태에서, R11 및 R12는 각각 수소이고; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10 중 1개, 2개, 3개 또는 4개는 메틸이고, 나머지 기는 수소이다.In another aspect of this embodiment, R 11 and R 12 are each hydrogen; 1 , 2 , 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen .

이 구체예의 추가 양태에서, 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:In a further aspect of this embodiment, the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00197
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Figure pct00197
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본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:Another embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is selected from the group consisting of:

Figure pct00198
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Figure pct00198
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본 발명의 일 구체예는 피부 브라이트닝을 위한 화합물이다. 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:One embodiment of the present invention is a compound for skin brightening. The compound is a compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00199
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Figure pct00199
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본 발명의 다른 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the present invention is a compound for inducing melanocyte apoptosis. The compound is a compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00200
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Figure pct00200
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본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity. The compound is a compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00201
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Figure pct00201
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본 발명의 추가 구체예는 멜라닌생성을 조절하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a compound for modulating melanogenesis. The compound is a compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00202
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Figure pct00202
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본 발명의 다른 구체예는 멜라닌 농도를 조절하기 위한 화합물이다. 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the present invention is a compound for regulating melanin concentration. The compound is a compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00203
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Figure pct00203
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본 발명의 추가 구체예는 화합물을 포함하는 조성물이다. 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the present invention is a composition comprising a compound. The compound is a compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

Figure pct00204
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Figure pct00204
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본 발명의 추가 구체예는 대상체의 피부 브라이트닝을 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin of a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof:

Figure pct00205
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Figure pct00205
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본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof:

Figure pct00206
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Figure pct00206
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof:

Figure pct00207
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Figure pct00207
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:A further embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof:

Figure pct00208
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Figure pct00208
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본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 화합물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염이다:Another embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof:

Figure pct00209
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Figure pct00209
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본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 상기 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 조성물은 하기 화학식의 구조를 갖는 제1 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염; 및 하기 화학식의 구조를 갖는 제2 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다:In one aspect of this embodiment, the composition comprises a first compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof; and a second compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof;

Figure pct00210
Figure pct00210

Figure pct00211
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Figure pct00211
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin in a subject. The method comprises contacting the subject with one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 대상체는 하기 화학식의 구조를 갖는 제1 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염; 및 하기 화학식의 구조를 갖는 제2 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉된다:In one aspect of this embodiment, the subject comprises a first compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof; and a second compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof;

Figure pct00212
Figure pct00212

Figure pct00213
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Figure pct00213
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본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 대상체는 하기 화학식의 구조를 갖는 제1 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염; 및 하기 화학식의 구조를 갖는 제2 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉된다:In one aspect of this embodiment, the subject comprises a first compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof; and a second compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof;

Figure pct00214
Figure pct00214

Figure pct00215
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Figure pct00215
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 대상체는 하기 화학식의 구조를 갖는 제1 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염; 및 하기 화학식의 구조를 갖는 제2 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉된다:In one aspect of this embodiment, the subject comprises a first compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof; and a second compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof;

Figure pct00216
Figure pct00216

Figure pct00217
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Figure pct00217
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본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 대상체는 하기 화학식의 구조를 갖는 제1 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염; 및 하기 화학식의 구조를 갖는 제2 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉된다:In one aspect of this embodiment, the subject comprises a first compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof; and a second compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof;

Figure pct00218
Figure pct00218

Figure pct00219
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Figure pct00219
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본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

이 구체예의 한 양태에서, 대상체는 하기 화학식의 구조를 갖는 제1 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염; 및 하기 화학식의 구조를 갖는 제2 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염과 접촉된다:In one aspect of this embodiment, the subject comprises a first compound having the structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof; and a second compound having a structure of the formula: or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof;

Figure pct00220
Figure pct00220

Figure pct00221
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Figure pct00221
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본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 피부 브라이트닝용 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition for skin brightening. The composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.Another embodiment of the present invention is a composition for inducing melanocyte apoptosis. The composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity. The composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 멜라닌생성을 조절하기 위한 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the present invention is a composition for modulating melanogenesis. The composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 구체예는 멜라닌 농도를 조절하기 위한 조성물이다. 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.Another embodiment of the present invention is a composition for regulating melanin concentration. The composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 조성물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for brightening the skin in a subject. The method comprises contacting the subject with a composition, wherein the composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof. do.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 조성물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with a composition, wherein the composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof. do.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 조성물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for modulating aryl hydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with a composition, wherein the composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof. do.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 조성물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with a composition, wherein the composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof. do.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 조성물과 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with a composition, wherein the composition comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof. do.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 표 7에 나열된 화합물을 포함한다.In a preferred embodiment, the composition of the present invention comprises a compound listed in Table 7.

다른 바람직한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 표 8에 나열된 화합물을 포함한다.In another preferred embodiment, the composition of the present invention comprises a compound listed in Table 8.

추가의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 표 9에 나열된 화합물을 포함한다.In a further preferred embodiment, the composition of the present invention comprises a compound listed in Table 9.

추가의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 표 10에 나열된 화합물을 포함한다.In a further preferred embodiment, the composition of the present invention comprises a compound listed in Table 10.

다른 바람직한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 표 11에 나열된 화합물을 포함한다.In another preferred embodiment, the composition of the present invention comprises a compound listed in Table 11.

추가의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 방법은 대상체를 표 7에 나열된 화합물을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.In a further preferred embodiment, the method of the invention comprises contacting the subject with a composition comprising a compound listed in Table 7.

추가의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 방법은 대상체를 표 8에 나열된 화합물을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.In a further preferred embodiment, the method of the invention comprises contacting the subject with a composition comprising a compound listed in Table 8.

다른 바람직한 구체예에서, 본 발명의 방법은 대상체를 표 9에 나열된 화합물을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.In another preferred embodiment, the method of the invention comprises contacting the subject with a composition comprising a compound listed in Table 9.

추가의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 방법은 대상체를 표 10에 나열된 화합물을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.In a further preferred embodiment, the method of the present invention comprises contacting the subject with a composition comprising a compound listed in Table 10.

추가의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 방법은 대상체를 표 11에 나열된 화합물을 포함하는 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.In a further preferred embodiment, the method of the invention comprises contacting the subject with a composition comprising a compound listed in Table 11.

본 발명의 다른 구체예는 조성물이다. 상기 조성물은 말라세지아 효모 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다.Another embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises Malassezia yeast and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier.

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 상기 조성물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다:A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier:

Figure pct00222
Figure pct00222

상기 식에서,In the above formula,

X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 공유 결합, CR5R6, O, 또는 NR15이고; R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16, 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고; R13, R14, 및 R15은 독립적으로 수소 또는 R16이고; R5 및 R6는 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16, 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 구으로부터 선택되거나, R5 및 R6는 조합하여 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하고; R12는 수소, -CORa, 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고; 각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐, 또는 C2-9 알키닐이고; Ra는 수소, 하이드록실, 및 OR16로 구성된 군으로부터 선택된다.X is selected from the group consisting of NR 14 and O; Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O, or NR 15 ; R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 , or OR 16 . become; R 13 , R 14 , and R 15 are independently hydrogen or R 16 ; R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 , and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 in combination are an oxo (=O) group or C 3 -6 to form cycloalkyl; R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a , and R 16 ; each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl, or C 2-9 alkynyl; R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, and OR 16 .

본 발명의 추가 구체예는 조성물이다. 상기 조성물은 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다:A further embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier:

Figure pct00223
Figure pct00223

상기 식에서,In the above formula,

R1, R4, R5, R6, R9, 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고; R2 및 R3는 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3는 조합하여 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고; R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합하여 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고; R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이고; 각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐, 또는 C2-9 알키닐이다.R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 , and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO; R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 are 5 or 6 membered heterocycles in combination forming a reel; R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 are 5 or 6 membered heterocycle in combination forming a reel; R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ; each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl, or C 2-9 alkynyl.

본 발명의 다른 구체예는 조성물이다. 상기 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염, 및 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 또는 담체를 포함한다.Another embodiment of the present invention is a composition. The composition comprises a compound listed in Table 5 or FIG. 130 or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, and a cosmetically or pharmaceutically acceptable vehicle, diluent or carrier.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 임의의 조성물은 대상체에서 UV-유도 홍반을 예방한다.In a preferred embodiment, any of the compositions of the present invention prevent UV-induced erythema in a subject.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 임의의 조성물은 대상체에서 표피 멜라닌을 감소시킨다.In a preferred embodiment, any of the compositions of the present invention reduce epidermal melanin in a subject.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 임의의 조성물은 대상체에서 광보호 또는 UV-보호 효과를 생성한다.In a preferred embodiment, any of the compositions of the present invention produce a photoprotective or UV-protective effect in a subject.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 임의의 조성물은 UV를 여과하거나, 흡수하거나, 반사한다.In a preferred embodiment, any of the compositions of the present invention filters, absorbs or reflects UV.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 임의의 조성물은 과색소침착을 예방하고/하거나 색소침착저하를 촉진한다.In a preferred embodiment, any of the compositions of the present invention prevent hyperpigmentation and/or promote hypopigmentation.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 임의의 조성물은 자외선 차단제, 광보호제 및/또는 UV-보호제이다.In a preferred embodiment, any of the compositions of the present invention are sunscreens, photoprotectants and/or UV-protective agents.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 UV-유도 피부 손상을 치료하거나 예방하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for treating or preventing UV-induced skin damage in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 UV-유도 홍반을 치료하거나 예방하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for treating or preventing UV-induced erythema in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 피부의 UV-유도 노화를 치료하거나 예방하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for treating or preventing UV-induced aging of the skin in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 일광화상을 치료하거나 예방하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for treating or preventing sunburn in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 UV-유도 과색소침착을 치료하거나 예방하는 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for treating or preventing UV-induced hyperpigmentation in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 피부를 브라이트닝하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for brightening skin in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for inducing melanocyte apoptosis in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 다른 구체예는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.Another embodiment of the invention is a method for modulating melanogenesis in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

본 발명의 추가 구체예는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법이다. 상기 방법은 대상체를 본원에 개시된 임의의 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.A further embodiment of the invention is a method for modulating melanin concentration in a subject. The method comprises contacting the subject with any of the compositions disclosed herein.

정의Justice

본원에서 사용되는 용어 "화합물"은 하나 이상의 화학 결합에 의해 연결되는 2개 이상의 원자를 나타낸다. 본 발명에서, 화학 결합은 공유 결합, 이온 결합, 수소 결합 및 반 데르 발스 상호작용을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 공유 결합은 단일, 이중 및 삼중 결합을 포함한다. 본 발명의 화합물은 유기 분자를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.As used herein, the term “compound” refers to two or more atoms joined by one or more chemical bonds. In the present invention, chemical bonds include, but are not limited to, covalent bonds, ionic bonds, hydrogen bonds, and van der Waals interactions. Covalent bonds of the present invention include single, double and triple bonds. Compounds of the present invention include, but are not limited to, organic molecules.

본 발명의 유기 화합물/분자는 작용기가 있거나 없는 선형, 분지형 및 고리형 탄화수소를 포함한다. 알킬, 알케닐, 알키닐 또는 알콕시와 같은 화학 모이어티와 함께 사용되는 경우 용어 "Cx-y"는 사슬 내에 x 내지 y개의 탄소를 함유하는 기를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, 용어 "Cx-y 알킬"은 트리플루오로메틸 및 2,2,2-트리플루오로에틸 등과 같은 할로알킬기를 포함하는 사슬 내에 x 내지 y개의 탄소를 함유하는 직쇄 알킬 및 분지쇄 알킬기를 포함하는 치환되거나 비치환된 포화 탄화수소 기를 의미한다. 용어 "Cx-y 알케닐" 및 "Cx-y 알키닐"은 상기 기재된 길이 및 알킬에 대한 가능한 치환에 있어서 유사하지만 적어도 하나의 이중 또는 삼중 결합을 각각 함유하는 치환되거나 비치환된 불포화 지방족 기를 나타낸다.The organic compounds/molecules of the present invention include linear, branched and cyclic hydrocarbons with or without functional groups. The term “C xy ” when used in conjunction with a chemical moiety such as alkyl, alkenyl, alkynyl or alkoxy is meant to include groups containing from x to y carbons in the chain. For example, the term "C xy alkyl" refers to straight and branched chain alkyl groups containing x to y carbons in the chain, including haloalkyl groups such as trifluoromethyl and 2,2,2-trifluoroethyl, and the like. substituted or unsubstituted saturated hydrocarbon groups comprising The terms “C xy alkenyl” and “C xy alkynyl” refer to substituted or unsubstituted unsaturated aliphatic groups that are similar in length and possible substitution for alkyl as described above but contain at least one double or triple bond, respectively.

본원에서 사용되는 용어 "지방족"은 방향족 고리를 함유하지 않는 탄소 및 수소 원자로 구성되는 기를 의미한다. 따라서, 지방족 기는 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 카르보사이클릴 기를 포함한다.As used herein, the term “aliphatic” refers to a group consisting of carbon and hydrogen atoms that do not contain an aromatic ring. Thus, aliphatic groups include alkyl, alkenyl, alkynyl, and carbocyclyl groups.

본원에서 사용되는 용어 "알킬"은 비고리형 선형 및 분지형 탄화수소 기를 의미하고, 예를 들어, "C1-C20 알킬"은 1-20개의 탄소를 갖는 알킬기를 나타낸다. 알킬기는 선형 또는 분지형일 수 있다. 알킬기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 이소펜틸 tert-펜틸헥실, 이소헥실 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 개시의 이점이 주어지면 다른 알킬기는 당업자에게 용이하게 명백할 것이다. 알킬기는 비치환되거나 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 알킬기는 할로겐, -CO2R', -COOH, -CN, -OH, -OR', -NH2, -NHR', -N(R')2, -SR' 또는 -SO2R' 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 독립적으로 선택되는 치환기)으로 치환될 수 있고, 여기서 R'의 각각의 예는 독립적으로 C1-C3 알킬이다. 구체예에서, 알킬은 비치환된다. 구체예에서, 알킬은 치환(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 치환기로 치환)된다. 예를 들어, 용어 "하이드록시알킬"은 하이드록실 (-OH) 치환기를 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 알킬기를 나타내고, -CH2OH와 같은 기를 포함한다.As used herein, the term “alkyl” refers to acyclic linear and branched hydrocarbon groups, eg, “C 1 -C 20 alkyl” refers to an alkyl group having 1-20 carbons. Alkyl groups may be linear or branched. Examples of alkyl groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl tert-pentylhexyl, isohexyl, and the like. Other alkyl groups will be readily apparent to those skilled in the art given the benefit of the present disclosure. Alkyl groups may be unsubstituted or substituted with one or more substituents as described herein. For example, an alkyl group may be halogen, -CO 2 R', -COOH, -CN, -OH, -OR', -NH 2 , -NHR', -N(R') 2 , -SR' or -SO 2 may be substituted with one or more of R' (eg, 1, 2, 3, 4, 5, or 6 independently selected substituents), wherein each instance of R' is independently C 1 -C 3 is alkyl. In an embodiment, the alkyl is unsubstituted. In embodiments, the alkyl is substituted (eg, substituted with 1, 2, 3, 4, 5, or 6 substituents as described herein). For example, the term “hydroxyalkyl” refers to an alkyl group as described herein that includes a hydroxyl (—OH) substituent and includes groups such as —CH 2 OH.

본원에서 사용되는 "알케닐"은 사슬을 따라 임의의 안정한 지점에서 발생할 수 있는 하나 이상의 불포화 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 임의의 선형 또는 분지형 탄화수소 사슬을 의미하며, 예를 들어, "C2-C20 알케닐"은 2-20개의 탄소를 갖는 알케닐기를 나타낸다. 예를 들어, 알케닐기는 프로프-2-에닐, 부트-2-에닐, 부트-3-에닐, 2-메틸프로프-2-에닐, 헥스-2-에닐, 헥스-5-에닐, 2,3-디메틸부트-2-에닐 등을 포함한다. 구체예에서, 알케닐은 1, 2, 또는 3개의 탄소-탄소 이중 결합을 포함한다. 구체예에서, 알케닐은 단일 탄소-탄소 이중 결합을 포함한다. 구체예에서, 다수의 이중 결합(예를 들어, 2 또는 3개)은 컨쥬게이션된다. 알케닐기는 비치환되거나 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 알케닐기는 할로겐, -CO2R', -CN, -OH, -OR', -NH2, -NHR', -N(R')2, -SR' 또는 -SO2R' 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 독립적으로 선택되는 치환기)으로 치환될 수 있고, 여기서 R'의 각각의 예는 독립적으로 C1-C3 알킬이다. 구체예에서, 알케닐은 비치환된다. 구체예에서, 알케닐은 치환(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 치환기로 치환)된다.As used herein, "alkenyl" means any linear or branched hydrocarbon chain having one or more unsaturated carbon-carbon double bonds that may occur at any stable point along the chain, for example, "C 2 - "C 20 alkenyl" refers to an alkenyl group having 2-20 carbons. For example, an alkenyl group is prop-2-enyl, but-2-enyl, but-3-enyl, 2-methylprop-2-enyl, hex-2-enyl, hex-5-enyl, 2, 3-dimethylbut-2-enyl, and the like. In embodiments, alkenyl contains 1, 2, or 3 carbon-carbon double bonds. In an embodiment, alkenyl comprises a single carbon-carbon double bond. In an embodiment, multiple double bonds (eg, 2 or 3) are conjugated. An alkenyl group may be unsubstituted or substituted with one or more substituents as described herein. For example, an alkenyl group may be a halogen, -CO 2 R', -CN, -OH, -OR', -NH 2 , -NHR', -N(R') 2 , -SR' or -SO 2 R' may be substituted with one or more of (eg, 1, 2, 3, 4, 5, or 6 independently selected substituents), wherein each instance of R' is independently C 1 -C 3 alkyl . In an embodiment, the alkenyl is unsubstituted. In an embodiment, the alkenyl is substituted (eg, substituted with 1, 2, 3, 4, 5, or 6 substituents as described herein).

본원에서 사용되는 "알키닐"은 사슬을 따라 임의의 안정한 지점에서 발생하는 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 선형 또는 분지형 입체형태의 임의의 탄화수소 사슬을 의미하며, 예를 들어, "C2-C20 알키닐"은 2-20개의 탄소를 갖는 알키닐기를 나타낸다. 알키닐기의 예는 프로프-2-이닐, 부트-2-이닐, 부트-3-이닐, 펜트-2-이닐, 3-메틸펜트-4-이닐, 헥스-2-이닐, 헥스-5-이닐 등을 포함한다. 구체예에서, 알키닐은 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함한다. 알키닐기는 비치환되거나 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 알키닐기는 할로겐, -CO2R', -CN, -OH, -OR', -NH2, -NHR', -N(R')2, -SR' 또는 -SO2R' 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 독립적으로 선택되는 치환기)로 치환될 수 있으며, 여기서 R'의 각각의 예는 독립적으로 C1-C3 알킬이다. 구체예에서, 알키닐은 비치환된다. 구체예에서, 알키닐은 치환(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 치환기로 치환)된다.As used herein, "alkynyl" means any hydrocarbon chain in linear or branched conformation having one or more carbon-carbon triple bonds occurring at any stable point along the chain, e.g., "C 2 -C 20 alkynyl" refers to an alkynyl group having 2-20 carbons. Examples of alkynyl groups include prop-2-ynyl, but-2-ynyl, but-3-ynyl, pent-2-ynyl, 3-methylpent-4-ynyl, hex-2-ynyl, hex-5-ynyl etc. In an embodiment, alkynyl contains one carbon-carbon triple bond. An alkynyl group may be unsubstituted or substituted with one or more substituents as described herein. For example, an alkynyl group may be a halogen, -CO 2 R', -CN, -OH, -OR', -NH 2 , -NHR', -N(R') 2 , -SR' or -SO 2 R' may be substituted with one or more of (eg, 1, 2, 3, 4, 5, or 6 independently selected substituents), wherein each instance of R' is independently C 1 -C 3 alkyl . In an embodiment, the alkynyl is unsubstituted. In embodiments, alkynyl is substituted (eg, substituted with 1, 2, 3, 4, 5, or 6 substituents as described herein).

본원에서 사용되는 용어 "사이클로알킬"은 비방향족, 포화, 사이클릭 기, 예를 들어, "C3-C10 사이클로알킬"을 의미한다. 구체예에서, 사이클로알킬은 모노사이클릭이다. 구체예에서, 사이클로알킬은 폴리사이클릭(예를 들어, 바이사이클릭 또는 트리사이클릭)이다. 폴리사이클릭 사이클로알킬기에서, 개별적 고리는 융합되거나, 브릿징되거나, 스피로사이클릭일 수 있다. 사이클로알킬기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 노르보르나닐, 바이사이클로[3.2.1]옥타닐, 옥타하이드로-펜탈레닐, 및 스피로[4.5]데카닐 등을 포함한다. 용어 "사이클로알킬"은 용어 "카르보사이클"과 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 사이클로알킬기는 비치환되거나 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 사이클로알킬기는 할로겐, -CO2R', -CN, -OH, -OR', -NH2, -NHR', -N(R')2, -SR' 또는 -SO2R' 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 독립적으로 선택되는 치환기)으로 치환될 수 있으며, 여기서 R'의 각각의 예는 독립적으로 C1-C3 알킬이다. 구체예에서, 사이클로알킬은 비치환된다. 구체예에서, 사이클로알킬은 치환(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 치환기로 치환)된다.As used herein, the term “cycloalkyl” refers to a non-aromatic, saturated, cyclic group, eg, “C 3 -C 10 cycloalkyl”. In an embodiment, cycloalkyl is monocyclic. In an embodiment, cycloalkyl is polycyclic (eg, bicyclic or tricyclic). In polycyclic cycloalkyl groups, the individual rings may be fused, bridged, or spirocyclic. Examples of the cycloalkyl group include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, norbornanyl, bicyclo[3.2.1]octanyl, octahydro-pentalenyl, spiro[4.5]decanyl, and the like. The term “cycloalkyl” may be used interchangeably with the term “carbocycle”. A cycloalkyl group may be unsubstituted or substituted with one or more substituents as described herein. For example, a cycloalkyl group may be halogen, -CO 2 R', -CN, -OH, -OR', -NH 2 , -NHR', -N(R') 2 , -SR' or -SO 2 R' may be substituted with one or more of (eg, 1, 2, 3, 4, 5, or 6 independently selected substituents), wherein each instance of R' is independently C 1 -C 3 alkyl . In an embodiment, the cycloalkyl is unsubstituted. In embodiments, cycloalkyl is substituted (eg, substituted with 1, 2, 3, 4, 5, or 6 substituents as described herein).

본원에서 사용되는 용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다.As used herein, the term “halogen” means fluorine, chlorine, bromine or iodine.

본원에서 사용되는 "방향족 화합물", "방향족" 또는 "방항족 고리"를 함유하는 화합물은 아릴 또는 헤테로아릴 화합물이다. 본원에서 사용되는 용어 "아릴"은 고리의 각각의 원자가 탄소인 치환되거나 비치환된 단일-고리 방향족 기를 포함한다. 바람직하게는, 고리는 3원 내지 8원 고리, 보다 바람직하게는 6원 고리이다. 용어 "아릴"은 또한 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 고리에 공통인 2개 이상의 사이클릭 고리를 갖는 폴리사이클릭 고리 시스템을 포함하며, 여기서 고리 중 적어도 하나는 방향족이고, 예를 들어, 다른 사이클릭 고리는 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 아릴기는 벤젠, 나프탈렌, 페난트렌, 페놀, 아닐린 등을 포함한다. 용어 "헤테로아릴"은 치환되거나 비치환된 방향족 단일 고리 구조, 바람직하게는 3원 내지 8원 고리, 보다 바람직하게는 5원 내지 7원 고리, 더욱 보다 바람직하게는 5원 내지 6원 고리를 포함하고, 이의 고리 구조는 적어도 하나의 헤테로원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자, 보다 바람직하게는 1개 또는 2개의 헤테로원자를 포함한다. 용어"헤테로아릴"은 또한 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 고리에 공통인 2개 이상의 사이클릭 고리를 갖는 폴리사이클릭 고리 시스템을 포함하며, 여기서 고리 중 적어도 하나는 헤테로방향족이고, 예를 들어, 다른 사이클릭 고리는 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 헤테로아릴기는, 예를 들어, 피롤, 푸란, 티오펜, 인돌, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 및 피리미딘 등을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 특정 화합물은 적어도 1개, 바람직하게는 2개의 인돌기뿐만 아니라 적어도 1개의 알데하이드기를 포함한다.As used herein, an “aromatic compound,” “aromatic,” or a compound containing an “aromatic ring” is an aryl or heteroaryl compound. As used herein, the term “aryl” includes substituted or unsubstituted single-ring aromatic groups wherein each atom of the ring is carbon. Preferably, the ring is a 3- to 8-membered ring, more preferably a 6-membered ring. The term "aryl" also includes polycyclic ring systems having two or more cyclic rings in which two or more carbons are common to two adjacent rings, wherein at least one of the rings is aromatic, e.g., between the other The click ring can be cycloalkyl, cycloalkenyl, cycloalkynyl, aryl, heteroaryl, and/or heterocyclyl. Aryl groups include benzene, naphthalene, phenanthrene, phenol, aniline, and the like. The term "heteroaryl" includes substituted or unsubstituted aromatic single ring structures, preferably 3 to 8 membered rings, more preferably 5 to 7 membered rings, even more preferably 5 to 6 membered rings. and its ring structure contains at least one heteroatom, preferably 1 to 4 heteroatoms, more preferably 1 or 2 heteroatoms. The term "heteroaryl" also includes polycyclic ring systems having two or more cyclic rings in which two or more carbons are common to two adjacent rings, wherein at least one of the rings is heteroaromatic, e.g., Other cyclic rings may be cycloalkyl, cycloalkenyl, cycloalkynyl, aryl, heteroaryl, and/or heterocyclyl. Heteroaryl groups include, for example, pyrrole, furan, thiophene, indole, imidazole, oxazole, thiazole, pyrazole, pyridine, pyrazine, pyridazine, pyrimidine, and the like. Preferably, certain compounds of the present invention contain at least one, preferably two indole groups as well as at least one aldehyde group.

용어 "치환된"은 백본의 하나 이상의 탄소에서 수소 원자를 대체하는 적어도 하나의 치환기를 갖는 모이어티를 의미한다. "치환" 또는 "~로 치환된"은 상기 치환이 치환된 원자 및 치환기의 허용 원자가에 따르고, 치환이, 예를 들어, 재배열, 고리화, 제거 등과 같은 변환을 자발적으로 겪지 않는 안정한 화합물을 생성한다는 암시적 단서를 포함하는 것이 이해될 것이다. 허용되는 치환기는 하나 이상일 수 있고, 적절한 유기 화합물에 대해 동일하거나 상이할 수 있다.The term “substituted” means a moiety having at least one substituent replacing a hydrogen atom at one or more carbons of the backbone. "Substitution" or "substituted with" refers to a stable compound in which the substitution is dependent on the permissible valences of the atom and substituent substituted, and the substitution does not spontaneously undergo transformation such as rearrangement, cyclization, elimination, etc. It will be understood to include the implicit clue of creating. Permissible substituents may be one or more and may be the same or different for appropriate organic compounds.

본원에서 사용되는 용어 "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릭"은 적어도 하나의 헤테로원자를 함유하는 모노사이클릭, 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 고리 시스템을 의미한다. 헤테로원자는 산소, 질소 및 황을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.As used herein, the term “heterocycle” or “heterocyclic” refers to a monocyclic, bicyclic or tricyclic ring system containing at least one heteroatom. Heteroatoms include, but are not limited to, oxygen, nitrogen and sulfur.

모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리는, 예를 들어, 적어도 하나의 헤테로원자를 함유하는 3원, 4원, 5원, 6원, 7원, 8원, 9원, 또는 10원 고리로 구성된다. 모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리의 대표적 예는 아제티디닐, 아제파닐, 아지리디닐, 디아제파닐, 1,3-디옥사닐, 1,3-디옥솔라닐, 1,3-디티올라닐, 1,3-디티아닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 이소티아졸리닐, 이소티아졸리디닐, 이속사졸리닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 옥사디아졸리닐, 옥사디아졸리디닐, 옥사졸리닐, 옥사졸리디닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피라닐, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 피롤리닐, 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로티에닐, 티아디아졸리닐, 티아디아졸리디닐, 티아졸리닐, 티아졸리디닐, 티오모르폴리닐, 1,1-디옥시도티오모르폴리닐(티오모르폴리닐 설폰), 티오피라닐, 및 트리티아닐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.A monocyclic heterocyclic ring consists of, for example, a 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, or 10-membered ring containing at least one heteroatom. Representative examples of monocyclic heterocyclic rings are azetidinyl, azepanyl, aziridinyl, diazepanyl, 1,3-dioxanyl, 1,3-dioxolanyl, 1,3-dithiolanyl, 1,3-dithianyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, isothiazolinyl, isothiazolidinyl, isoxazolinyl, isoxazolidinyl, morpholinyl, oxadiazolinyl, oxadiazolidinyl , oxazolinyl, oxazolidinyl, piperazinyl, piperidinyl, pyranyl, pyrazolinyl, pyrazolidinyl, pyrrolinyl, pyrrolidinyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydrothienyl, thiadiazolinyl , thiadiazolidinyl, thiazolinyl, thiazolidinyl, thiomorpholinyl, 1,1-dioxidothiomorpholinyl (thiomorpholinyl sulfone), thiopyranyl, and tritianyl, It is not limited thereto.

바이사이클릭 헤테로사이클릭 고리는, 비제한적인 예로, 원위 아릴 고리에 융합된 모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리 또는 원위 사이클로알킬 고리에 융합된 모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리 또는 원위 사이클로알케닐 고리에 융합된 모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리 또는 원위 모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리에 융합된 모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리, 또는 원위 모노사이클릭 헤테로아릴 고리에 융합된 모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리이다. 바이사이클릭 헤테로사이클릭 고리의 대표적 예는 1,3-벤조디옥솔릴, 1,3-벤조디티올릴, 2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥시닐, 2,3-디하이드로-1-벤조푸라닐, 2,3-디하이드로-1-벤조티에닐, 2,3-디하이드로-1H-인돌릴, 및 1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀리닐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.A bicyclic heterocyclic ring may include, but is not limited to, a monocyclic heterocyclic ring fused to a distal aryl ring or a monocyclic heterocyclic ring fused to a distal cycloalkyl ring or a distal cycloalkenyl ring fused to a distal cycloalkenyl ring. a monocyclic heterocyclic ring or a monocyclic heterocyclic ring fused to a distal monocyclic heterocyclic ring, or a monocyclic heterocyclic ring fused to a distal monocyclic heteroaryl ring. Representative examples of bicyclic heterocyclic rings are 1,3-benzodioxolyl, 1,3-benzodithiolyl, 2,3-dihydro-1,4-benzodioxinyl, 2,3-dihydro- 1-benzofuranyl, 2,3-dihydro-1-benzothienyl, 2,3-dihydro-1H-indolyl, and 1,2,3,4-tetrahydroquinolinyl, Not limited.

트리사이클릭 헤테로사이클릭 고리는, 비제한적인 예로, 페닐기에 융합된 바이사이클릭 헤테로사이클릭 고리 또는 사이클로알킬기에 융합된 바이사이클릭 헤테로사이클릭 고리 또는 사이클로알케닐기에 융합된 바이사이클릭 헤테로사이클릭 고리 또는 또 다른 모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리에 융합된 바이사이클릭 헤테로사이클릭 고리이다. 트리사이클릭 헤테로사이클릭 고리의 대표적 예는 2,3,4,4a,9,9a-헥사하이드로-1H-카르바졸릴, 5a,6,7,8,9,9a-헥사하이드로디벤조[b,d]푸라닐, 및 5a,6,7,8,9,9a-헥사하이드로디벤조[b,d]티에닐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.Tricyclic heterocyclic rings include, but are not limited to, a bicyclic heterocyclic ring fused to a phenyl group or a bicyclic heterocyclic ring fused to a cycloalkyl group or a bicyclic heterocyclic ring fused to a cycloalkenyl group. A bicyclic heterocyclic ring fused to a click ring or another monocyclic heterocyclic ring. Representative examples of tricyclic heterocyclic rings are 2,3,4,4a,9,9a-hexahydro-1H-carbazolyl, 5a,6,7,8,9,9a-hexahydrodibenzo[b ,d]furanyl, and 5a,6,7,8,9,9a-hexahydrodibenzo[b,d]thienyl.

본 발명의 헤테로사이클은, 비제한적인 예로, 알케닐, 알콕시, 알콕시알킬, 알콕시알키닐, 알콕시카르보닐, 알콕시카르보닐알킬, 알콕시-NH=C(알킬)―, 알킬, 알킬카르보닐, 알킬카르보닐알킬, 알킬카르보닐옥시, 알킬설포닐, 알킬티오, 알키닐, 아릴, 아릴알콕시, 아릴알킬, 아릴카르보닐, 아릴옥시, 카르복시, 카르복시알킬, 시아노, 시아노알킬, 사이클로알킬, 카르보닐, 사이클로알킬알킬, 포르밀, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시, 하이드록시알킬, 하이드록시사이클로알킬, 머캅토, 니트로, 옥소, 및 페닐로부터 독립적으로 선택되는 치환기로 치환될 수 있다.Heterocycles of the present invention include, but are not limited to, alkenyl, alkoxy, alkoxyalkyl, alkoxyalkynyl, alkoxycarbonyl, alkoxycarbonylalkyl, alkoxy-NH=C(alkyl)—, alkyl, alkylcarbonyl, alkyl Carbonylalkyl, alkylcarbonyloxy, alkylsulfonyl, alkylthio, alkynyl, aryl, arylalkoxy, arylalkyl, arylcarbonyl, aryloxy, carboxy, carboxyalkyl, cyano, cyanoalkyl, cycloalkyl, car and may be substituted with a substituent independently selected from bornyl, cycloalkylalkyl, formyl, halogen, haloalkyl, hydroxy, hydroxyalkyl, hydroxycycloalkyl, mercapto, nitro, oxo, and phenyl.

본원에서 사용되는 "피부 색소침착 조절" 및 이의 문법적 변형은 일반적으로 본 발명의 화합물 및 조성물의 피부 브라이트닝뿐만 아니라 피부 다크닝 효과를 나타낸다.As used herein, "control skin pigmentation" and grammatical variations thereof generally refer to the skin brightening as well as skin darkening effects of the compounds and compositions of the present invention.

본원에서 사용되는 "피부 브라이트닝" 및 이의 문법적 변형은 일반적으로 피부 색소침착의 임의의 실제 또는 인지된 감소를 나타낸다. 피부 브라이트닝 방법은 노화, 일광 노출 또는 과색소침착 장애로부터 발생하는 피부의 과색소침착 영역의 색소침착을 감소시키는 데 사용되었다. 예를 들어, 대상체의 피부에 대한 본 발명의 화합물 및 조성물의 적용은 피부가 상기 적용 전보다 더 밝거나 더 희게 보이도록 색소침착을 감소시킬 수 있다. 피부 색소침착은, 예를 들어, 본 루샨 크로마틱 스케일(von Luschan chromatic scale), 피츠패트릭(Fitzpatrick) 피부 유형결정 시험(Fitzpatrick et al., 1988) 및 테일러(Taylor) 과색소침착 스케일(Taylor et al., 2005) 및 반사율 분광광도법 방법(Zonios, et al., 2001)을 사용한 시각적 평가를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 방식으로 평가될 수 있다. 예를 들어, 피츠패트릭 피부 유형결정 시험은 6개 유형의 피부(I-VI)를 포함하며, 유형 V 이하가 되는 유형 VI 피부는 본원에서 사용되는 바와 같이 "브라이트닝화"된 것이다. 하기에 추가로 논의되는 바와 같이, 피부 브라이트닝은 멜라닌세포 활성의 조절, 멜라닌세포 아폽토시스의 유도, 또는 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성의 조절, 멜라닌생성, 멜라닌소체 생물발생, 멜라닌소체 전달 또는 멜라닌 농축을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 현상으로 인해 발생할 수 있다.As used herein, "skin brightening" and grammatical variations thereof generally refer to any actual or perceived reduction in skin pigmentation. Skin brightening methods have been used to reduce pigmentation in hyperpigmented areas of the skin resulting from aging, sun exposure or hyperpigmentation disorders. For example, application of the compounds and compositions of the present invention to the skin of a subject can reduce pigmentation such that the skin appears brighter or whiter than before said application. Skin pigmentation is described, for example, on the von Luschan chromatic scale, the Fitzpatrick skin typing test (Fitzpatrick et al ., 1988) and the Taylor hyperpigmentation scale (Taylor et al.) al ., 2005) and reflectance spectrophotometric methods (Zonios, et al ., 2001) can be evaluated in a number of ways, including, but not limited to, visual evaluation. For example, the Fitzpatrick Skin Typing Test includes six types of skin (I-VI), and type VI skin that goes below type V is "brightened" as used herein. As discussed further below, skin brightening may result in modulation of melanocyte activity, induction of melanocyte apoptosis, or modulation of aryl hydrocarbon receptor (AhR) activity, melanogenesis, melanosome biogenesis, melanosome transport or melanin enrichment. It can be caused by a number of phenomena including, but not limited to.

마찬가지로, 본원에서 사용되는 "피부 다크닝" 및 이의 문법적 변형은 일반적으로 피부 색소침착에서의 임의의 실제 또는 인지된 증가를 나타낸다. 예를 들어, 색소침착저하 장애로부터 발생하는 피부의 저색소침착 영역의 색소침착을 증가시키기 위해 피부 다크닝 방법이 사용되었다. 예를 들어, 대상체의 피부에 대한 본 발명의 화합물 및 조성물의 적용은 피부가 상기 적용 전보다 더 어둡게 보이도록 색소침착을 증가시킬 수 있다.Likewise, as used herein, "skin darkening" and grammatical variations thereof generally refer to any actual or perceived increase in skin pigmentation. For example, skin darkening methods have been used to increase pigmentation in hypopigmented areas of the skin resulting from hypopigmentation disorders. For example, application of the compounds and compositions of the present invention to the skin of a subject may increase pigmentation such that the skin appears darker than before such application.

본 발명의 특정 화합물은 말라세지아 효모에 의해 생성되거나, 이로부터 유래되거나, 이로부터 분리되거나, 이로부터 분리 가능하다. 말라세지아 효모는 말라세지아 속의 효모이며, 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa), 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta), 말라세지아 푸르푸르(Malassezia furfur), 말라세지아 심포디알리스(Malassezia sympodialis), 말라세지아 슬로오피아에(Malassezia slooffiae), 말라세지아 옵투사(Malassezia obtusa), 말라세지아 파키더마티스(Malassezia pachydermatis), 말라세지아 더마티스(Malassezia dermatis), 말라세지아 자포니카(Malassezia japonica), 말라세지아 나나(Malassezia nana), 말라세지아 야마토엔시스(Malassezia yamatoensis), 말라세지아 에퀸(Malassezia equine), 말라세지아 카프라에(Malassezia caprae), 및 말라세지아 쿠니쿨리(Malassezia cuniculi)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다(Gueho, et al., 1996; Gaitanis, et al., 2013). 말라세지아 효모는 정상적인 인간 피부 균무리의 일부이며, 전형적으로 병원성 효과를 발생시키지 않는다. 그러나, 말라세지아 효모는 어루러기(과색소침착 및 저색소침착 변종 둘 모두), 지루성 피부염, 비듬, 아토피 피부염, 말라세지아 모낭염, 건선, 및 융합성 및 망상 유두종증을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 질병을 유발할 수 있다(Gaitanis, et al., 2013).Certain compounds of the present invention are produced by, derived from, isolated from, or isolate from, Malassezia yeast. Malassezia yeast is a yeast of the genus Malassezia, Malassezia globosa , Malassezia restricta , Malassezia furfur , Malassezia sympodialis ( Malassezia sympodialis ), Malassezia slooffiae , Malassezia obtusa , Malassezia pachydermatis , Malassezia dermatis , Malassezia japonica (Malassezia japonica), do three Zia Nana (Malassezia nana), dry aged Jia Yamato N-Sys (Malassezia yamatoensis), dry aged Jia ekwin (Malassezia equine), do the three Gia Capra (Malassezia caprae), and do three Zia Province Cooley ( Malassezia cuniculi ), but are not limited thereto (Gueho, et al ., 1996; Gaitanis, et al ., 2013). Malassezia yeast is part of the normal human skin flora and typically does not produce pathogenic effects. However, Malassezia yeast includes, but is not limited to, dandruff (both hyperpigmented and hypopigmented variants), seborrheic dermatitis, dandruff, atopic dermatitis, Malassezia folliculitis, psoriasis, and confluent and reticulomatous papillomatosis. It can cause a number of diseases that are not present (Gaitanis, et al ., 2013).

본원에서 사용되는 용어 "화학적 유사체"는 모 화합물과 구조적으로 관련되고, 상이한 작용기 또는 치환기를 함유하는 화합물을 나타낸다. 예를 들어, 본 발명의 모 화합물은 말라세진 및 인디루빈을 포함하며, 말라세진 및 인디루빈의 화학적 유사체는 말라세진 및 인디루빈과 각각 구별되는 특정한 작용기 및 치환기를 함유한다. 본 발명의 화학적 유사체는 화장용 또는 약학적 용도에 적합한 약동학 프로파일을 포함하는 제공된 모 화합물에 비한 유의한 이점을 가질 수 있다. 일부 구체예에서, 화학적 유사체는 하나 이상의 화학적 반응에 의해 모 화합물로부터 생성된다. 다른 구체예에서, 모 화합물에서 유래하지 않는 대안적 합성 반응식이 사용되어 본 발명의 화학적 유사체를 생성할 수 있다.As used herein, the term “chemical analog” refers to a compound that is structurally related to the parent compound and contains different functional groups or substituents. For example, the parent compound of the present invention includes malassezine and indirubin, and the chemical analogs of malassezine and indirubin contain specific functional groups and substituents distinct from malassezine and indirubin, respectively. The chemical analogs of the present invention may have significant advantages over a given parent compound comprising a pharmacokinetic profile suitable for cosmetic or pharmaceutical use. In some embodiments, a chemical analog is produced from a parent compound by one or more chemical reactions. In other embodiments, alternative synthetic schemes not derived from the parent compound may be used to generate the chemical analogs of the invention.

본 발명의 화합물은 수명 주기의 과정에 걸쳐 말라세지아 효모가 적절한 성장 조건하에서 화합물을 합성하거나, 분비하거나, 축적하거나, 달리 생성하는 경우 말라세지아 효모에 의해 생성된다. 말라세지아 효모는 이들의 성장 배지에 보충되는 것에 따라 상이한 화합물을 분비한다(Nazzaro-Porro, et al., 1978). 본 발명은 임의의 성장 조건하에서 말라세지아 효모에 의해 생성되는 임의의 화합물을 포함하지만, 바람직한 화합물은, 예를 들어, 말라세진, 인디루빈 및 이들의 화학적 유사체를 포함한다.The compounds of the present invention are produced by Malassezia yeast when the Malassezia yeast synthesizes, secretes, accumulates, or otherwise produces the compound under appropriate growth conditions over the course of its life cycle. Malassezia yeasts secrete different compounds as they are supplemented with their growth medium (Nazzaro-Porro, et al ., 1978). Although the present invention includes any compound produced by Malassezia yeast under any growth conditions, preferred compounds include, for example, malassezin, indirubin and chemical analogs thereof.

본 발명의 화합물은 효모의 수명 주기의 과정에 걸쳐 언제든지 화합물이 효모 상에 또는 내에 존재하는 경우 말라세지아 효모로부터 유래된다.A compound of the present invention is derived from Malassezia yeast when the compound is present on or in yeast at any time over the course of the yeast's life cycle.

말라세진은 본 발명의 말라세지아 효모에 의해 생성되는 화합물의 한 예이다. 2-(1H-인돌-3-일메틸)-1H-인돌-3-카르브알데하이드로도 공지된 말라세진은 원래 말라세지아 푸르푸르에서 분리된 트립토판 대사물이다. 말라세진은 세포 성장, 분화 및 유전자 발현과 관련된 수용체인 아릴탄화수소 수용체(AhR)의 공지된 효능제이다(Wille et al., 2001). 말라세진은 또한 일차 인간 멜라닌세포에서 아폽토시스를 유도한다(Kramer, et al., 2005). 최근에, 말라세진의 특정한 화학적 유사체는 유사체의 AhR 효능제 활성을 시험한 윈스톤-맥퍼슨(Winston-McPherson)과 동료들에 의해 합성되었다(Winston-McPherson, et al., 2014).Malassezin is an example of a compound produced by the Malassezia yeast of the present invention. Malassezine, also known as 2-(1 H -indol-3-ylmethyl)-1 H -indole-3-carbaldehyde, is a tryptophan metabolite originally isolated from Malassezia furfur. Malassezine is a known agonist of the aryl hydrocarbon receptor (AhR), a receptor involved in cell growth, differentiation and gene expression (Wille et al., 2001). Malassezin also induces apoptosis in primary human melanocytes (Kramer, et al., 2005). Recently, specific chemical analogues of malassezine were synthesized by Winston-McPherson and colleagues who tested the analogues' AhR agonist activity (Winston-McPherson, et al ., 2014).

인디루빈은 본 발명의 말라세지아 효모에 의해 생성되는 화합물의 또 다른 예이다. 인디루빈은 말라세지아 푸르푸르로부터 분리된 대사물이다. 인디루빈은 세포 성장, 분화 및 유전자 발현과 관련된 수용체인 아릴탄화수소 수용체(AhR)의 공지된 효능제이다.Indirubin is another example of a compound produced by the Malassezia yeast of the present invention. Indirubin is a metabolite isolated from Malassezia furfur. Indirubin is a known agonist of the aryl hydrocarbon receptor (AhR), a receptor involved in cell growth, differentiation and gene expression.

본원에서 사용되는 용어 "멜라닌세포"는 일반적으로 티로시나제 및 멜라닌소체 내에서 멜라닌 색소를 합성하는 표피의 수지상 세포를 나타낸다. 본 발명의 멜라닌세포는 하기 중 하나 이상을 포함하나 이에 제한되지는 않는 특정 유전자의 상향조절을 나타낸다: 티로시나제(안피부 백색증 IA), 소안구증-관련 전사 인자, 알파-2-마크로글로불린, 티로시나제-관련 단백질 1, 용질 담체 패밀리 16, GS3955 단백질, v-kit Hardy-Zuckerman 4 고양이 육종, 안구 백색증 1, Rag D 단백질, 글리코게닌 2, G-단백질-결합 수용체, 패밀리 C, 안피부 백색증 II, 식도암 결실 1(deleted in esophageal cancer 1), 멜란-A, SRY-박스 10, ATPase, 클래스 V, 유형 10C, 기질 금속단백분해효소 1, 잠재 전환 성장 인자 베타 b, ATP-결합 카세트, 서브-패밀리 C, 하이드록시프로스타글란딘 데하이드로게나제 15, 막횡단 7 상과 일원 1, 글루타미닐-펩티드 사이클로트랜스페라제, 및 리(Lee)와 동료에 의해 확인된 다른 유전자(Lee, et al., 2013).As used herein, the term "melanocytes" generally refers to dendritic cells of the epidermis that synthesize tyrosinase and melanin pigments within melanosomes. The melanocytes of the present invention exhibit upregulation of certain genes including, but not limited to, one or more of the following: tyrosinase (ophthalmic albinism IA), microophthalmos-associated transcription factor, alpha-2-macroglobulin, tyrosinase- Related protein 1, solute carrier family 16, GS3955 protein, v-kit Hardy-Zuckerman 4 feline sarcoma, ocular albinism 1, Rag D protein, glycogenin 2, G-protein-coupled receptor, family C, ophthalmic albinism II, esophageal cancer deleted in esophageal cancer 1, melan-A, SRY-box 10, ATPase, class V, type 10C, matrix metalloproteinase 1, latent transforming growth factor beta b, ATP-binding cassette, sub-family C , hydroxyprostaglandin dehydrogenase 15, transmembrane superfamily member 1, glutaminyl-peptide cyclotransferase, and other genes identified by Lee and colleagues (Lee, et al ., 2013) .

많은 다른 세포 유형과 마찬가지로 멜라닌세포는 프로그램된 세포 사멸 또는 아폽토시스를 겪는다. 멜라닌세포 아폽토시스 경로는 당업자에게 공지되어 있으며(Wang, et al., 2014), 아폽토시스 경로는 일반적으로 엘모어(Elmore)에 의해 검토되었다(Elmore, 2007). 본 발명의 화합물 또는 조성물은, 예를 들어, 특정 아폽토시스 촉진 신호 전달 경로의 활성화를 유발하거나 멜라닌세포에서 특정한 항-아폽토시스 경로의 억제를 유발함으로써 멜라닌세포 아폽토시스를 "유도"한다. 본 발명의 화합물 또는 조성물은 경로의 신호전달 분자와 직접적으로 상호작용하거나 경로 내에서 전형적으로 기능하지 않는 하나 이상의 중간 분자와의 직접 상호작용을 통해 경로의 분자와 간접적으로 상호작용함으로써 아폽토시스-관련 경로를 직접 활성화/억제할 수 있음이 구상된다.Melanocytes, like many other cell types, undergo programmed cell death or apoptosis. The melanocyte apoptotic pathway is known to those skilled in the art (Wang, et al ., 2014), and the apoptotic pathway has been generally reviewed by Elmore (Elmore, 2007). A compound or composition of the invention “induces” melanocyte apoptosis, for example, by causing activation of certain pro-apoptotic signaling pathways or inhibition of certain anti-apoptotic pathways in melanocytes. A compound or composition of the present invention interacts directly with a signaling molecule of the pathway or indirectly interacts with a molecule of the pathway through direct interaction with one or more intermediate molecules that do not typically function within the pathway, thereby affecting apoptosis-related pathways. It is envisioned that it can directly activate/inhibit.

멜라닌세포 활성은 멜라닌세포 아폽토시스 유도 또는 멜라닌세포 유전자 발현, 세포 운동성, 세포 성장, 멜라닌 생성, 멜라닌소체 생물발생 또는 멜라닌소체 전달 변경을 포함하나 이에 제한되지는 않는 본 발명에서 고려되는 다수의 방식으로 조절될 수 있다.Melanocyte activity is modulated in a number of ways contemplated herein, including but not limited to inducing melanocyte apoptosis or altering melanocyte gene expression, cell motility, cell growth, melanogenesis, melanosome biogenesis or melanosome transmission. can be

본원에서 사용되는 용어 "조절하다", "조절하는" 및 이들의 문법적 변형은 생물학적 활성 또는 현상의 원하는 수준으로의 조정을 나타낸다. 본 발명의 "조절"은 생물학적 활성 또는 현상의 수준을 증가시키거나 감소시키는 조정을 포함하는 것이 구상된다.As used herein, the terms “modulate”, “modulating” and grammatical variations thereof refer to modulation of a biological activity or phenomenon to a desired level. "Modulation" of the present invention is envisioned to include modulation that increases or decreases the level of a biological activity or phenomenon.

본원에서 사용되는 용어 "효능제", "효능화하는" 및 이들의 문법적 변형은 하나 이상의 생물학적 활성을 촉발시키거나(예를 들어, 개시하거나 촉진함), 부분적으로 또는 완전히 향상시키거나, 자극하거나, 활성화시키는 분자를 나타낸다. 본 발명의 효능제는 수용체와 상호작용하고 이를 활성화시킴으로써 상기 수용체에 특징적인 생리학적 또는 약리학적 반응을 개시할 수 있다. 본 발명의 효능제는 천연 발생 물질뿐만 아니라 합성 물질을 포함한다.As used herein, the terms “agonist,” “agonize,” and grammatical variations thereof, refer to triggering (eg, initiating or promoting), partially or fully enhancing, stimulating, or stimulating one or more biological activities. , represents the activating molecule. An agonist of the present invention may initiate a physiological or pharmacological response characteristic of a receptor by interacting with and activating the receptor. Agonists of the present invention include naturally occurring substances as well as synthetic substances.

본원에서 사용되는 용어 "길항제", "길항하는" 및 이들의 문법적 변형은 하나 이상의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 억제하거나, 저해하거나, 비활성화시키는 분자를 나타낸다. 본 발명의 길항제는 효능제와 동일한 부위의 수용체에 경쟁적으로 결합할 수 있으나, 활성 형태의 수용체에 의해 개시되는 세포 내 반응을 활성화시키지 않는다. 본 발명의 길항제는 효능제 또는 부분적 효능제의 세포 내 반응을 억제할 수 있다.As used herein, the terms “antagonist”, “antagonizing” and grammatical variations thereof refer to a molecule that partially or fully inhibits, inhibits, or inactivates one or more biological activities. Antagonists of the invention can competitively bind receptors at the same site as the agonist, but do not activate an intracellular response initiated by the active form of the receptor. Antagonists of the invention may inhibit the intracellular response of an agonist or partial agonist.

본 발명의 아릴탄화수소 수용체(AhR)는 본원에 기재된 바와 같이 대상체에 자연적으로 존재하는 임의의 아릴탄화수소 수용체이다. 아릴탄화수소 수용체는 당업자에게 공지되어 있다(Noakes, 2015). 아릴탄화수소 수용체의 효능제는 트립토판-관련 화합물, 예를 들어, 키누레닌, 키누렌산, 신나바린산, 및 6-포르밀인돌로[3,2-b] 카르바졸(FICZ)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 말라세진은 또한 아릴 탄화수소 수용체 효능제로 공지되어 있다(Wille, et al., 2001).An aryl hydrocarbon receptor (AhR) of the invention is any aryl hydrocarbon receptor naturally present in a subject as described herein. Arylhydrocarbon acceptors are known to those skilled in the art (Noakes, 2015). Agonists of arylhydrocarbon receptors include tryptophan-related compounds such as kynurenine, kynulenic acid, cinnavaric acid, and 6-formylindolo[3,2-b]carbazole (FICZ), but include Not limited. Malassezine is also known as an aryl hydrocarbon receptor agonist (Wille, et al ., 2001).

본원에서 사용되는 바와 같이, 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법은, 예를 들어, 과색소침착 장애에 의해 영향을 받은 영역에서 과색소침착의 수준을 감소시키거나, 추가 과색소침착을 늦추거나, 추가 과색소침착이 발생하는 것을 방지함으로써 과색소침착 장애에 의해 유발되는 과색소침착을 개선시키는 데 사용될 수 있다. 그러나, 모든 대상체가 특정한 투여 프로토콜, 요법 또는 과정에 반응하지 않을 수 있으므로, 과색소침착 장애에 의해 유발된 과색소침착을 개선시키는 것은 각각의 모든 대상체 또는 대상체 집단에서 원하는 생리학적 반응 또는 결과가 달성되는 것을 필요로 하지 않는다. 따라서, 제공된 대상체 또는 대상체 집단은 투여에 반응하지 않거나 부적절하게 반응할 수 있으나, 다른 대상체 또는 대상체 집단은 반응할 수 있으므로, 이들의 과색소침착 장애에서의 개선을 경험할 수 있다.As used herein, the compounds, compositions and methods of the present invention can reduce the level of hyperpigmentation, slow further hyperpigmentation, for example, in an area affected by a hyperpigmentation disorder; It can be used to ameliorate hyperpigmentation caused by hyperpigmentation disorders by preventing further hyperpigmentation from occurring. However, as not all subjects may respond to a particular administration protocol, regimen, or course of administration, ameliorating hyperpigmentation caused by a hyperpigmentation disorder is achieved in each and every subject or population of subjects in order to achieve the desired physiological response or outcome. don't need to be Thus, a given subject or population of subjects may not respond or respond inadequately to administration, while other subjects or populations of subjects may respond and thus experience an improvement in their hyperpigmentation disorder.

본원에서 사용되는 용어 "과색소침착"은 과도한 어두운 색의 실제 또는 인지된 피부 장애이다. 예를 들어, 피부 손상은 연령, 과도한 일광 노출, 또는 어두운 피부 영역을 발생시키는 질병 또는 질환으로 인한 실제일 수 있다. 어두운 피부 영역은 반점, 얼룩 또는 어두운 색의 비교적 큰 영역의 형태일 수 있다. 피부 손상은 또한, 예를 들어, 개인이 자신의 피부 색조가 너무 어둡다는 지각으로 인식될 수 있다. 개인은 피부 색조를 밝게하고 싶은 미용적 욕구를 가질 수 있다.As used herein, the term “hyperpigmentation” is an actual or perceived skin disorder of excessive dark color. For example, skin damage may be real due to age, excessive sun exposure, or a disease or condition that causes dark skin areas. Dark skin areas may be in the form of spots, blotches, or relatively large areas of dark color. Skin damage may also be perceived, for example, as an individual's perception that their skin tone is too dark. An individual may have a cosmetic desire to lighten skin tone.

과색소침착 장애는 과색소침착이 주요 증상인 장애뿐만 아니라 과색소침착이 이차 증상으로 발생하는 장애이다. 본 발명의 과색소침착 장애는 선천성 과색소침착 장애 및 후천성 과색소침착 장애를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 선천성 과색소침착 장애는 표피 과색소침착(모반 세포 모반, 스피츠 모반, 및 얼룩 모반), 진피 과색소침착(청색 모반, 오타(Ohta) 모반, 진피 흑색증, 이토(Ito) 모반, 및 몽골 반점), 주근깨, 망상 말단색소침착(acropigmentation reticularis), 스피첸피그먼트(Spitzenpigment)/말단색소침착, 및 흑색점증(전신 흑색점증, LEOPARD 증후군, 유전적 패턴화 흑색점증, 카니 복합체(Carney complex), 포이츠-예거 증후군(Peutz-Jeghers syndrome), 로기어-훈지커-바란 증후군(Laugier-Hunziker-Baran syndrome), 및 크론크하이트-카나다 증후군(Cronkhite-Canada syndrome))을 수반하는 것을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다(Yamaguchi, et al., 2014). 본 발명의 후천성 과색소침착 장애는 노인성 흑색점(senile lentigines)/흑색점, 기미/간반, 리일 흑피증, 입술 멜라닌성 반점, 음경/외음질 흑색증, 기타무라 안면 모낭성 홍색흑피증(erythromelanosis follicularis faciei Kitamura), UV-유발 색소침착(태닝 및 색소침착 페탈로이드 악크니카(petaloides actinica)), 염증 후 색소침착(마찰 흑색종 및 잿빛 피부병), 화학물질/약물-유발 색소침착(폴리염화 바이페닐, 비소, 5-FU, 블레오마이신, 사이클로포스파미드, 메토트렉세이트, 클로르프로마진, 페니토인, 테트라사이클린, 및 클로로퀸), 색소성 경계선, 및 외래 물질 침착(예를 들어, 카로틴, 은, 금, 수은, 비스무트, 및 타투)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 전신 장애와 관련된 과색소침착은 대사/효소 장애(혈색소증, 윌슨병, 고셔병, 니만-픽병, 아밀로이드증, 갈색증, 흑색가시세포증, 및 지연 피부 포르피린증), 내분비 장애(애디슨병, 쿠싱 증후군, 및 갑상선기능항진증), 영양 장애(펠라그라, 비타민 B12 결핍, 엽산 결핍, 부랑자병(vagabond's disease), 및 색소성 양진), 비만세포증, 콜라겐 질병, 간 기능장애, 및 신장 기능장애를 포함한다. 과색소침착은 또한 감염성 질병(홍역, 매독, 및 말라세지아 푸르푸르) 및 증후군(폰 레클링하우젠병, 소토스 증후군, POEMS 증후군, 네겔리 증후군, 칸투 증후군, 맥쿤-올브라이트 증후군, 왓슨 증후군, 및 블룸 증후군)과 관련될 수 있다(Yamaguchi, et al., 2014).Hyperpigmentation disorder is a disorder in which hyperpigmentation is a primary symptom as well as a disorder in which hyperpigmentation is a secondary symptom. The hyperpigmentation disorders of the present invention include, but are not limited to, congenital hyperpigmentation disorders and acquired hyperpigmentation disorders. The congenital hyperpigmentation disorders of the present invention include epidermal hyperpigmentation (nevus cell nevus, Spitz nevus, and nevus speckle), dermal hyperpigmentation (blue nevus, Ohta nevus, dermal melanosis, Ito nevus, and Mongolian spots), freckles, acropigmentation reticularis, Spitzenpigment/apical pigmentation, and lentigo (systemic nigricans, LEOPARD syndrome, genetic patterned lentigo, Carney complex) complex), Peutz-Jeghers syndrome, Laugier-Hunziker-Baran syndrome, and Cronkhite-Canada syndrome). including, but not limited to (Yamaguchi, et al ., 2014). Acquired hyperpigmentation disorders of the present invention are senile lentigines/melanoma, melasma/cattle melasma, leil melanosis, lip melanosis, penile/vulvovaginal melanosis, and Kitamura facial erythromelanosis follicularis. faciei Kitamura), UV-induced pigmentation (tanning and pigmented petaloides actinica), post-inflammatory pigmentation (friction melanoma and ashy dermatosis), chemical/drug-induced pigmentation (polychlorinated biphenyls) , arsenic, 5-FU, bleomycin, cyclophosphamide, methotrexate, chlorpromazine, phenytoin, tetracycline, and chloroquine), pigmentary borderline, and foreign substance deposition (e.g., carotene, silver, gold, mercury) , bismuth, and tattoo). Hyperpigmentation associated with systemic disorders is associated with metabolic/enzyme disorders (hemochromatosis, Wilson's disease, Gaucher's disease, Niemann-Pick disease, amyloidosis, pheochromocytosis, acanthosis nigricans, and delayed cutaneous porphyria), endocrine disorders (Addison's disease, Cushing's syndrome, and thyroid). hyperactivity), nutritional disorders (pellagra, vitamin B12 deficiency, folic acid deficiency, vagabond's disease, and hyperpigmentation), mastocytosis, collagen disease, liver dysfunction, and renal dysfunction. Hyperpigmentation is also associated with infectious diseases (measles, syphilis, and Malassezia purpur) and syndromes (von Recklinghausen disease, Sotos syndrome, POEMS syndrome, Negelli syndrome, Cantu syndrome, McCun-Albright syndrome, Watson syndrome, and Bloom syndrome) (Yamaguchi, et al ., 2014).

멜라닌은 피부 및 모발에 색을 제공하는 천연 생성 색소이다. 피부의 개략도는 도 1a에 제시된다. 멜라닌은 멜라닌생성으로 공지된 과정에 의해 멜라닌소체로 공지된 소기관에서 멜라닌세포에 의해 생성된다. 본 발명의 화합물 또는 조성물은, 예를 들어, 멜라닌소체 생물발생을 조절하고, 효소 수준에서 멜라닌 합성을 직접적 또는 간접적으로 억제함으로써 대상체에서 멜라닌 생성(a/k/a 멜라닌생성)을 조절한다.Melanin is a naturally occurring pigment that gives color to skin and hair. A schematic of the skin is presented in FIG. 1A . Melanin is produced by melanocytes in organelles known as melanosomes by a process known as melanogenesis. A compound or composition of the invention modulates melanogenesis (a/k/a melanogenesis) in a subject, for example, by modulating melanosome biogenesis and directly or indirectly inhibiting melanin synthesis at the enzymatic level.

멜라닌소체 생물발생은 4개의 단계를 통해 발생한다: 단계 I은 본질적으로 비-색소 액포인 전-멜라닌소체(pre-melanosome)를 특징으로 한다. 단계 II에서, 전-멜라닌소체는 단계 III에서 멜라닌이 침착되는 줄무늬가 발달한다. 단계 IV는 멜라닌 함량이 풍부한 성숙한 멜라닌소체를 발생시킨다. 본 발명의 화합물 및 조성물은 이들 단계의 일부 또는 전부를 정상적으로 촉진하는 생물학적 과정을 억제하거나 약화시킴으로써 멜라닌소체 생물발생을 조절한다(Wasmeier, et al., 2008).Melanosome biogenesis occurs through four stages: Stage I is characterized by pre-melanosomes, which are essentially non-pigmented vacuoles. In stage II, pre-melanosomes develop streaks in which melanin is deposited in stage III. Stage IV gives rise to mature melanosomes rich in melanin content. The compounds and compositions of the present invention modulate melanosome biogenesis by inhibiting or attenuating biological processes that normally promote some or all of these steps (Wasmeier, et al ., 2008).

멜라닌 합성은 주로 티로시나제, 티로시나제 관련 단백질-1 및 도파크롬 상호변이효소의 3개의 효소를 포함한다. 이들 효소의 세포 내 트래피킹에 영향을 미치는 추가 인자는 BLOC-1, OA1, 및 SLC45A2를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 화합물 및 조성물은, 예를 들어, 임의의 이들 효소 또는 인자의 활성을 억제하거나 약화시킴으로써 멜라닌 생성을 조절할 수 있다(Yamaguchi, et al., 2014).Melanin synthesis mainly involves three enzymes: tyrosinase, tyrosinase-related protein-1 and dopachrome mutase. Additional factors affecting intracellular trafficking of these enzymes include, but are not limited to, BLOC-1, OA1, and SLC45A2. The compounds and compositions of the present invention can modulate melanogenesis by, for example, inhibiting or attenuating the activity of any of these enzymes or factors (Yamaguchi, et al ., 2014).

일단 멜라닌소체가 형성되고, 멜라닌이 합성되면, 멜라닌소체는 표피 멜라닌세포에서 피부 및 모발 각질세포로 옮겨질 필요가 있다. 멜라닌소체는 멜라닌세포의 핵 근처에서 시작되어 미세관 및 액틴 필라멘트를 따라 멜라닌세포의 주변으로 운반된다. 본 발명의 화합물 및 조성물은 멜라닌소체의 핵주위 영역으로부터 멜라닌세포 주변으로, 그리고 인접한 각질세포로의 운반을 발생시키는 임의의 생물학적 과정을 방해함으로써 멜라닌소체 전달을 조절한다. 멜라닌 합성, 멜라닌 운반 및 멜라닌세포 아폽토시스의 개략도가 도 1b에 제시된다.Once melanosomes are formed and melanin is synthesized, melanosomes need to be transferred from epidermal melanocytes to skin and hair keratinocytes. Melanosomes originate near the nucleus of melanocytes and are transported to the periphery of melanocytes along microtubules and actin filaments. The compounds and compositions of the present invention modulate melanosome transport by interfering with any biological process that results in transport from the perinuclear region of melanosomes to the periphery of melanocytes and to adjacent keratinocytes. A schematic of melanin synthesis, melanin transport and melanocyte apoptosis is presented in FIG. 1B .

멜라닌 농도는, 예를 들어, 멜라닌생성을 증가시키거나 감소시키거나, 대상체에서 멜라닌 분해를 촉진하거나 대상체로부터의 제거를 촉진함으로써 조절될 수 있다.Melanin concentration can be modulated, for example, by increasing or decreasing melanogenesis, promoting the breakdown of melanin in the subject, or promoting clearance from the subject.

본 발명의 말라세지아 효모로부터 분리된 화합물은 분리 전에 반드시 말라세지아 효모에 존재하거나 말라세지아 효모에 의해 생성된다. 따라서, 말라세지아 효모로부터 분리된 화합물은 실제 효모 세포로부터 유래된다. 세포 물질로부터 화합물을 추출하기 위한 표준 프로토콜은 당업자에게 공지되어 있다.The compound isolated from Malassezia yeast of the present invention must be present in or produced by Malassezia yeast prior to isolation. Thus, compounds isolated from Malassezia yeast are derived from actual yeast cells. Standard protocols for extracting compounds from cellular material are known to those skilled in the art.

말라세지아 효모로부터 분리 가능한 화합물은 실제 효모 세포로부터 유래될 필요가 없다. 대신, 실제 효모 세포의 참여 없이 효모에서 생성된 화합물을 생성시키기 위해 합성 반응이 사용될 수 있다. 유기 합성 반응은 당업자에게 널리 공지되어 있으며, 이와 관련하여 사용될 수 있다.Compounds isolated from Malassezia yeast need not be derived from actual yeast cells. Instead, synthetic reactions can be used to produce compounds produced in yeast without the participation of actual yeast cells. Organic synthesis reactions are well known to those skilled in the art and can be used in this regard.

본원에서 사용되는 용어 "표피 멜라닌"은 표피에서 생성되거나, 표피로 운반되거나, 표피에서 달리 발견되는 멜라닌을 나타낸다.As used herein, the term “epidermal melanin” refers to melanin produced in, transported to, or otherwise found in the epidermis.

본원에서 사용되는 용어 "감소시키다" 및 이의 문법적 변형은 제공된 생물학적 현상 또는 종의 수준을 감소시키는 것을 의미한다. 예를 들어, 본 발명의 화합물 및 조성물은 대상체에서 표피 멜라닌을 감소시키며, 이는 본 발명의 화합물 및 조성물이 대상체에서 표피 멜라닌 수준의 감소를 유도하는 것을 의미한다. 용어 "감소시키다" 및 이의 문법적 변형은, 예를 들어, 제공된 현상 또는 종의 수준을 적어도 5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 또는 100%만큼 감소시키는 것을 의미할 수 있다.As used herein, the term “reduce” and grammatical variations thereof means to reduce the level of a given biological phenomenon or species. For example, the compounds and compositions of the invention reduce epidermal melanin in a subject, meaning that the compounds and compositions of the invention induce a decrease in epidermal melanin levels in the subject. The term “reduce” and grammatical variations thereof can mean, for example, reducing the level of a given phenomenon or species by at least 5%, 10%, 25%, 50%, 75%, or 100%.

본원에서 사용되는 용어 "접촉" 및 이의 문법적 변형은 2개 이상의 물질을 이들이 상호작용할 수 있을만큼 충분히 근접하게 만드는 것을 나타낸다. 따라서, 예시 목적으로만, 본 발명의 화합물은, 예를 들어, 멜라닌세포 표면 상의 수용체와 상호작용함으로써 멜라닌세포와 접촉할 수 있다. 유사하게, 본 발명의 조성물은, 예를 들어, 대상체의 피부에 직접 적용함으로써 인간 대상체와 접촉할 수 있다.As used herein, the term "contact" and grammatical variations thereof refers to bringing two or more substances sufficiently close to enable them to interact. Thus, for illustrative purposes only, compounds of the present invention may contact melanocytes, for example, by interacting with receptors on the surface of melanocytes. Similarly, a composition of the present invention may be contacted with a human subject, for example, by applying directly to the subject's skin.

본원에서 사용되는 "대상체"는 포유동물 세포, 조직, 유기체 또는 이들의 집단을 의미한다. 본 발명의 대상체는 바람직하게는 인간 세포, 조직 및 존재를 포함하는 인간이나, 그렇지 않으면 영장류, 농장 동물, 가축, 실험실 동물 등을 포함한다. 농업 동물의 일부 예는 소, 돼지, 말, 염소 등을 포함한다. 가축의 일부 예는 개, 고양이 등을 포함한다. 실험실 동물의 일부 예는 영장류, 래트, 마우스, 토끼, 기니아 피그 등을 포함한다.As used herein, “subject” refers to a mammalian cell, tissue, organism, or population thereof. Subjects of the present invention preferably include humans, including human cells, tissues and organisms, but otherwise include primates, farm animals, livestock, laboratory animals, and the like. Some examples of agricultural animals include cattle, pigs, horses, goats, and the like. Some examples of livestock include dogs, cats, and the like. Some examples of laboratory animals include primates, rats, mice, rabbits, guinea pigs, and the like.

본원에서 사용되는 과색소침착 장애에 의해 유발되는 과색소침착의 개선을 "필요로 하는" 대상체는 실제 또는 인지된 개선이 필요한 대상체를 포함한다.As used herein, a subject "in need" of improvement in hyperpigmentation caused by a hyperpigmentation disorder includes a subject in need of actual or perceived improvement.

본원에서 사용되는 용어 "치료하다", "치료하는", "치료" 및 이들의 문법적 변형은 개인 대상체를 상기 대상체, 예를 들어, 환자에서 생리학적 반응 또는 결과를 획득하는 것이 요망되는 프로토콜, 요법, 과정 또는 치료에 적용시키는 것을 의미한다. 특히, 본 발명의 방법 및 조성물은 질병 증상의 발달을 늦추거나, 질병 또는 질환의 발병을 지연시키거나, 질병 발달의 진행을 중단시키는 데 사용될 수 있다. 그러나, 모든 치료된 대상체가 특정 치료 프로토콜, 요법, 과정 또는 치료에 반응하지 않을 수 있으므로, 치료는 각각의 및 모든 대상체 또는 대상체 집단, 예를 들어, 환자 집단에서 원하는 생리학적 반응 또는 결과가 달성되는 것을 요구하지 않는다. 따라서, 제공된 대상체 또는 대상체 집단, 예를 들어, 환자 집단은 치료에 대해 반응하지 않거나 부적절하게 반응할 수 있다.As used herein, the terms "treat", "treating", "treatment" and grammatical variations thereof refer to a protocol, regimen, in which it is desired to obtain a physiological response or result in an individual subject, e.g., a patient. , means to apply to a course or treatment. In particular, the methods and compositions of the present invention can be used to slow the development of disease symptoms, delay the onset of a disease or disorder, or halt the progression of disease development. However, since not all treated subjects may respond to a particular treatment protocol, regimen, course, or treatment, treatment may be such that the desired physiological response or outcome is achieved in each and every subject or subject population, e.g., a patient population. do not ask for Thus, a given subject or population of subjects, eg, a patient population, may not respond or respond inadequately to treatment.

본원에서 사용되는 용어 "예방하다", "예방하는", "예방" 및 이들의 문법적 변형은 본 발명의 화합물이 투여시에 가능하게는 장애 또는 질병을 갖는 것으로 진단되지 않았으나, 일반적으로 장애 또는 질병이 발달할 것으로 예상되거나, 장애 또는 질병에 대해 증가된 위험이 있는 환자에 투여되는 경우에 유용함을 의미한다. 예를 들어, 본 발명의 화합물 및 조성물은 장애 또는 질병 증상의 발생을 늦추거나, 장애 또는 질병의 발병을 지연시키거나, 개인이 장애 또는 질병을 전혀 발생시키지 않도록 예방한다. 예방은 또한 연령, 가족력, 유전적 또는 염색체 이상, 및/또는 장애 또는 질병에 대한 하나 이상의 생물학적 마커의 존재로 인해 장애 또는 질병에 걸리기 쉬운 것으로 생각되는 개체로의 본 발명의 화합물의 투여를 포함한다.As used herein, the terms "prevent", "preventing", "prevention" and grammatical variations thereof mean that a compound of the present invention has not been possibly diagnosed as having a disorder or disease when administered, but is generally a disorder or disease. It is meant to be useful when administered to a patient who is expected to develop or at an increased risk for a disorder or disease. For example, the compounds and compositions of the present invention delay the onset of symptoms of a disorder or disease, delay the onset of the disorder or disease, or prevent an individual from developing the disorder or disease at all. Prophylaxis also includes administration of a compound of the invention to an individual thought to be predisposed to a disorder or disease due to age, family history, genetic or chromosomal abnormality, and/or the presence of one or more biological markers for the disorder or disease. .

본원에서 사용되는 용어 "촉진하다" 및 이의 문법적 변형은 발생을 가능하게 하거나, 향상시키거나, 허용하거나, 촉진시키거나, 발생시키거나, 장려하거나, 유도하거나, 달리 돕는 것을 의미한다.As used herein, the term “facilitating” and grammatical variations thereof means enabling, enhancing, permitting, facilitating, causing, encouraging, inducing, or otherwise assisting in the occurrence.

본원에서 사용되는 용어 "생성시키다" 및 이의 문법적 변형은 특정 결과가 일어나거나, 발생하거나, 존재하도록 하는 것을 의미한다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 화합물 및 조성물은 대상체에서 광보호 또는 UV-보호 효과를 생성시킨다.As used herein, the term "generate" and grammatical variations thereof means that a particular result occurs, occurs, or causes to exist. By way of non-limiting example, the compounds and compositions of the present invention produce a photoprotective or UV-protective effect in a subject.

본원에서 사용되는 용어 "홍반"은 피부의 발적을 나타낸다. 홍반은 표재성 모세혈관의 팽창 및/또는 자극에 의해 야기될 수 있다. 용어 "UV-유도 홍반"은 UV 노출의 결과로서 발생하는 피부 발적을 나타낸다. 본원에서 사용되는 "일광화상" 및 이의 문법적 변형은 햇빛 또는 인공 UV 소스(예를 들어, 태닝 베드)에 대한 노출에 의해 야기되는 UV-유도 홍반을 나타낸다.As used herein, the term “erythema” refers to redness of the skin. Erythema may be caused by dilation and/or irritation of superficial capillaries. The term “UV-induced erythema” refers to redness of the skin that occurs as a result of UV exposure. As used herein, "sunburn" and grammatical variations thereof refer to UV-induced erythema caused by exposure to sunlight or an artificial UV source (eg, a tanning bed).

본원에서 사용되는 용어 "과색소침착"은 일반적으로 색소침착이 피부의 인접한 영역의 것보다 큰 피부의 영역(예를 들어, 색소 반점, 검버섯, 모반 등)을 나타낸다. 본 발명의 과색소침착은 멜라닌세포 과다활동에 의한 부위 과색소침착, 양성 멜라닌세포 과다활성 및 증식에 의한 다른 국소화된 과색소침착, 질병-관련 과색소침착, 및 광선민감화, 유전자 구성, 화학적 섭취 또는 다른 노출(예를 들어, UV 노출), 연령 및 병변 후 반흔형성으로 인한 것과 같은 우발적 과색소침착을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 사용되는 "UV-유도 과색소침착"은 천연 또는 인공 UV에 대한 노출에 의해 야기되는 임의의 과색소침착을 나타낸다.As used herein, the term "hyperpigmentation" generally refers to areas of the skin (eg, pigment spots, age spots, birthmarks, etc.) where the pigmentation is greater than that of adjacent areas of the skin. The hyperpigmentation of the present invention is localized hyperpigmentation due to melanocyte hyperactivity, other localized hyperpigmentation due to benign melanocyte hyperactivity and proliferation, disease-related hyperpigmentation, and photosensitization, genetic makeup, chemical uptake or accidental hyperpigmentation such as due to other exposure (eg, UV exposure), age, and post-lesion scarring. As used herein, “UV-induced hyperpigmentation” refers to any hyperpigmentation caused by exposure to natural or artificial UV.

본원에서 사용되는 용어 "색소침착저하"는 일반적으로 색소침착이 인접한 피부 영역의 것보다 적은 피부의 영역을 나타낸다. 본 발명의 색소침착저하는 백반증, 탈색소, 백색잔비늘증, 국소 색소침착저하, 염증 후 색소침착저하, 얼룩백색증, 백색증, 어루러기, 광선민감도, 루시즘(leucism), 멜라닌저하증, 아토피피부염, 건선 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.As used herein, the term "hypopigmentation" generally refers to areas of the skin that have less pigmentation than those of adjacent skin areas. The hypopigmentation of the present invention is vitiligo, depigmentation, ichthyosis, local hypopigmentation, post-inflammatory hypopigmentation, mottled albinism, albinism, pruritus, photosensitivity, leucism, hypomelanosis, atopic dermatitis, psoriasis, and the like.

본원에서 사용되는 "UV-유도 피부 손상"은 UVA, UVB 및 UVC를 포함하는 UV에 대한 노출로부터 생성되는 피부 손상을 의미한다. 본 발명의 UV-유도 피부 손상은 주름, 과색소침착, 형성이상증, 광선각화증, 및 피부암을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.As used herein, "UV-induced skin damage" means skin damage resulting from exposure to UV, including UVA, UVB and UVC. UV-induced skin damage of the present invention includes, but is not limited to, wrinkles, hyperpigmentation, dysplasia, actinic keratosis, and skin cancer.

본원에서 사용되는 "피부의 UV-유도 노화"는 UVA, UVB 및 UVC를 포함하는 UV에 대한 노출로부터 발생하는 피부 노화를 의미한다. 본 발명의 UV-유도 피부 노화는 자체가, 예를 들어, 전체적으로 또는 부분적으로 UV 노출에 의해 야기되는 피부의 주름, 잔주름, 검버섯, 모반, 건조, 희박, 또는 감소된 탄성, 고르지 않은 피부색, 및 피부 광채, 질감, 탄력, 견고성, 처짐, 및 깨끗함에서의 기타 감소로 나타난다.As used herein, "UV-induced aging of the skin" refers to skin aging that results from exposure to UV, including UVA, UVB and UVC. The UV-induced skin aging of the present invention is itself caused, for example, in whole or in part by UV exposure, wrinkles, fine lines, age spots, birthmarks, dryness, sparseness, or reduced elasticity, uneven skin color, and It manifests itself as a decrease in skin radiance, texture, elasticity, firmness, sagging, and other reductions in cleanness.

본 발명의 화합물 및 조성물의 효과를 기재하기 위해 사용되는 경우 본원에서 사용되는 용어 "광보호" 및 이의 문법적 변형은 본원에 기재된 화합물 및 조성물이 빛, 특히 일광에 의해 야기되는 손상을 예방하고/하거나 완화시키는 것을 의미한다. 마찬가지로, 본 발명의 "광보호제"는 빛, 특히 일광에 의해 야기되는 손상을 예방하고/하거나 완화시키는 본원에 기재된 화합물 및 조성물이다.As used herein, the term "photoprotection" and grammatical variations thereof when used to describe the effects of the compounds and compositions of the present invention means that the compounds and compositions described herein prevent and/or prevent damage caused by light, particularly sunlight. means to alleviate. Likewise, “photoprotective agents” of the present invention are the compounds and compositions described herein that prevent and/or mitigate damage caused by light, particularly sunlight.

본 발명의 화합물 및 조성물의 효과를 기재하기 위해 사용되는 경우 본원에서 사용되는 용어 "UV-보호" 및 이의 문법적 변형은 본원에 기재된 화합물 및 조성물이 자외선("UV") 빛에 의해 야기되는 손상을 예방하고/하거나 완화시키는 것을 의미한다. 마찬가지로, 본 발명의 "UV-보호제"는 UV에 의해 야기되는 손상을 예방하고/하거나 완화시키는 본원에 기재된 화합물 및 조성물이다. 본 발명의 자외선은, 예를 들어, UVA(320-240 nm), UVB(290-320 nm) 및 UVC(200-290 nm)를 포함한다.The term "UV-protection" and grammatical variations thereof, as used herein when used to describe the effects of the compounds and compositions of the present invention, means that the compounds and compositions described herein protect against damage caused by ultraviolet ("UV") light. means to prevent and/or alleviate. Likewise, “UV-protective agents” of the present invention are compounds and compositions described herein that prevent and/or mitigate damage caused by UV. Ultraviolet rays of the present invention include, for example, UVA (320-240 nm), UVB (290-320 nm) and UVC (200-290 nm).

본원에서 사용되는 용어 "필터" 및 이의 문법적 변형은 UV를 차단하거나, 반사하거나, 흡수하거나, 산란하는 것을 의미한다. 본 발명의 "일광차단제"는 UV를 차단하거나, 반사하거나, 흡수하거나, 산란시키는 본 발명의 모든 화합물 및 조성물을 포함한다.As used herein, the term “filter” and grammatical variations thereof means to block, reflect, absorb, or scatter UV. "Sunscreen agents" of the present invention include all compounds and compositions of the present invention that block, reflect, absorb or scatter UV.

본원에서 사용되는 용어 "흡수하다" 및 이의 문법적 변형은 UV를 취하거나 UV를 열 에너지로 변환하는 것을 의미한다. 비제한적인 예로, 본 발명의 화합물 및 조성물은 UV를 흡수할 수 있고, 결과로서, 열 에너지를 이의 주변으로 방출할 수 있다.As used herein, the term “absorb” and grammatical variations thereof means taking UV or converting UV into thermal energy. By way of non-limiting example, the compounds and compositions of the present invention can absorb UV and, as a result, can radiate thermal energy to its surroundings.

UV의 맥락에서 사용되는 경우 본원에서 사용되는 용어 "반사하다" 및 이의 문법적 변형은 UV를 흡수하지 않고 UV를 다시 던지거나 튕기는 것을 의미한다.The term "reflect" and grammatical variations thereof, as used herein when used in the context of UV, means not absorbing the UV but throwing it back or bouncing it back.

본원에서 사용되는 용어 "조성물"은 본 발명의 하나 이상의 화합물을 포함하는 존재물뿐만 아니라 본 발명의 하나 이상의 화합물과 다른 성분의 조합으로부터 직접적 또는 간접적으로 발생하는 임의의 존재물을 의미한다. 본 발명의 조성물은, 예를 들어, 시험관 내 또는 생체 내 연구 시약으로 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 미용 또는 약학적 효과를 위해 인간 또는 비-인간 대상체의 피부에 직접 적용될 수 있다. 추가로, 본 발명의 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 화합물 중 하나 이상, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함한다.As used herein, the term “composition” means an entity comprising one or more compounds of the present invention, as well as any entity that arises directly or indirectly from the combination of one or more compounds of the present invention with other components. The compositions of the present invention can be used, for example, as research reagents in vitro or in vivo. The compositions of the present invention may also be applied directly to the skin of a human or non-human subject for cosmetic or pharmaceutical effect. Additionally, the composition of the present invention comprises one or more of the compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof.

본 발명의 조성물은 시험관 내 및 생체 내 적용 둘 모두를 위해 임의의 바람직하고 효과적인 방식으로 투여될 수 있다: 경구 섭취 또는 비경구 또는 복강내, 피하, 국소, 피내, 흡입, 폐내, 직장, 질, 설하, 근내, 정맥내, 동맥내, 척수강내 또는 림프내와 같은 임의의 적절한 방식의 기타 투여. 또한, 본 발명의 조성물은 다른 조성물과 함께 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 필요에 따라 캡슐화되거나 위 또는 다른 분비물에 대해 달리 보호될 수 있다.The compositions of the present invention may be administered in any desired and effective manner for both in vitro and in vivo applications: oral ingestion or parenteral or intraperitoneal, subcutaneous, topical, intradermal, inhalation, intrapulmonary, rectal, vaginal, Other administration in any suitable manner, such as sublingual, intramuscular, intravenous, intraarterial, intrathecal or intralymphatic. In addition, the composition of the present invention may be administered together with other compositions. The compositions of the present invention may be encapsulated or otherwise protected against gastric or other secretions as desired.

본 발명의 조성물은 하나 이상의 화장용 또는 약학적으로 허용되는 담체 및 선택적으로 하나 이상의 다른 화합물, 성분 및/또는 물질과 혼합된 하나 이상의 활성 성분을 포함한다. 선택된 투여 경로에 관계 없이, 본 발명의 화합물 및 조성물은 당업자에게 공지된 통상적인 방법에 의해 화장용 또는 약학적으로 허용되는 투여 형태로 제형화된다.The compositions of the present invention comprise one or more active ingredients in admixture with one or more cosmetically or pharmaceutically acceptable carriers and optionally one or more other compounds, ingredients and/or substances. Irrespective of the route of administration selected, the compounds and compositions of the present invention are formulated into cosmetically or pharmaceutically acceptable dosage forms by conventional methods known to those skilled in the art.

화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 및 담체는 당 분야에 널리 공지되어 있으며, 과도한 독성, 비상용성, 불안정성, 자극, 알레르기 반응 등이 없이 인간 및 비-인간의 조직과의 접촉에 적합한 물질을 포함한다. 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 및 담체는, 예를 들어, 본 발명의 화합물 및 조성물이 인간 또는 비-인간 대상체에게 적용되거나, 섭취되거나, 주사되거나, 달리 투여되는 경우 안정적이고 생체 이용 가능하게 유지되는 화장품 또는 약제의 국소, 경구, 복막 또는 피하 투여를 위해 통상적으로 사용할 수 있는 임의의 실질적으로 비독성인 물질을 포함한다. 국소 적용에 적합한 화장용 또는 약학적으로 허용되는 담체는 당업자에게 공지되어 있으며, 화장용 또는 약학적으로 허용되는 액체, 크림, 오일, 로션, 연고, 젤 또는 고체, 예를 들어, 통상적인 화장용 나이트 크림, 파운데이션 크림, 선탠 로션, 자외선 차단제, 핸드 로션, 메이크업 및 메이크업 베이스, 마스크 등을 포함한다. 선택된 투여 형태 및 의도된 투여 경로에 적합한 담체는 당 분야에 널리 공지되어 있으며, 선택된 투여 형태 및 투여 방법을 위해 허용되는 담체는 당 분야의 일반적인 기술을 사용하여 결정될 수 있다.Cosmetic or pharmaceutically acceptable vehicles, diluents and carriers are well known in the art and are materials suitable for contact with human and non-human tissues without undue toxicity, incompatibility, instability, irritation, allergic reaction, etc. includes Cosmetic or pharmaceutically acceptable vehicles, diluents and carriers are stable and bioavailable, for example, when the compounds and compositions of the present invention are applied, ingested, injected, or otherwise administered to a human or non-human subject. and any substantially non-toxic substances that are commonly available for topical, oral, peritoneal or subcutaneous administration of cosmetics or medicaments that remain possible. Cosmetic or pharmaceutically acceptable carriers suitable for topical application are known to the person skilled in the art and are cosmetic or pharmaceutically acceptable liquids, creams, oils, lotions, ointments, gels or solids, for example, for conventional cosmetic use. night creams, foundation creams, suntan lotions, sunscreens, hand lotions, makeup and makeup bases, masks, and the like. Suitable carriers for the selected dosage form and intended route of administration are well known in the art, and acceptable carriers for the selected dosage form and method of administration can be determined using routine techniques in the art.

본 발명의 조성물은 향수, 에스트로겐, 비타민 A, C 및 E, 알파-하이드록시 또는 알파-케토산, 예를 들어, 피루브산, 락트산 또는 글리콜산, 라놀린, 바셀린, 알로에 베라, 메틸 또는 프로필 파라벤, 색소 등을 포함하는 화장품에 통상적인 다른 성분을 함유할 수 있다. 본 발명의 비제한적인 화장용 또는 약학적으로 허용되는 비히클, 희석제 및 담체는 당(예를 들어, 락토스, 수크로스, 만니톨, 및 소르비톨), 전분, 셀룰로스 제조물, 칼슘 포스페이트(예를 들어, 디칼슘 포스페이트, 트리칼슘 포스페이트 및 칼슘 하이드로겐 포스페이트), 소듐 시트레이트, 물, 수용액(예를 들어, 염수, 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 덱스트로스 주사액, 덱스트로스 및 염화나트륨 주사액, 락테이트화 링거 주사액), 알콜(예를 들어, 에틸 알콜, 프로필 알콜, 및 벤질 알콜), 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 폴리에틸렌 글리콜), 유기 에스테르(예를 들어, 에틸 올레에이트 및 트리글리세라이드), 생물분해성 중합체(예를 들어, 폴리락티드-폴리글리콜리드, 폴리(오르토에스테르), 및 폴리(무수물)), 탄성중합체 매트릭스, 리포솜, 미세구, 오일(예를 들어, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자, 참깨, 목화씨, 및 땅콩), 코코아 버터, 왁스(예를 들어, 좌약 왁스), 파라핀, 실리콘, 활석, 실리실레이트 등을 포함한다.The composition of the present invention may contain perfume, estrogen, vitamins A, C and E, alpha-hydroxy or alpha-keto acids such as pyruvic acid, lactic acid or glycolic acid, lanolin, petrolatum, aloe vera, methyl or propyl parabens, pigments It may contain other ingredients conventional in cosmetics, including the like. Non-limiting cosmetic or pharmaceutically acceptable vehicles, diluents and carriers of the present invention include sugars (eg, lactose, sucrose, mannitol, and sorbitol), starches, cellulose preparations, calcium phosphates (eg, di calcium phosphate, tricalcium phosphate and calcium hydrogen phosphate), sodium citrate, water, aqueous solutions (e.g., saline, sodium chloride injection, Ringer's injection, dextrose injection, dextrose and sodium chloride injection, lactated Ringer's injection), Alcohols (eg, ethyl alcohol, propyl alcohol, and benzyl alcohol), polyols (eg, glycerol, propylene glycol, and polyethylene glycol), organic esters (eg, ethyl oleate and triglycerides), biodegradable polymers (e.g., polylactide-polyglycolides, poly(orthoesters), and poly(anhydrides)), elastomeric matrices, liposomes, microspheres, oils (e.g., corn, germ, olive, castor, sesame, cottonseed, and peanut), cocoa butter, waxes (eg, suppository waxes), paraffin, silicone, talc, silycylate, and the like.

본 발명의 조성물은 선택적으로 화장품 조성물에 일반적으로 사용되는 추가 성분 및/또는 물질을 함유할 수 있다. 이들 성분 및 물질은 당 분야에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, (1) 충전제 또는 증량제, 예를 들어, 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및 실리식산; (2) 결합제, 예를 들어, 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 수크로스 및 아카시아; (3) 보습제, 예를 들어, 글리세롤; (4) 붕해제, 예를 들어, 아가-아가, 칼슘 카르보네이트, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트, 소듐 전분 글리콜레이트, 가교된 소듐 카르복시메틸 셀룰로스 및 소듐 카르보네이트; (5) 용해 지연제, 예를 들어, 파라핀; (6) 흡수 촉진제, 예를 들어, 4차 암모늄 화합물; (7) 습윤제, 예를 들어, 세틸 알콜 및 글리세롤 모노스테아레이트;(8) 흡수제, 예를 들어, 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예를 들어, 활석, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 및 소듐 라우릴 설페이트; (10) 현탁제, 예를 들어, 에톡실화된 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미정질 셀룰로스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트래거캔쓰; (11) 완충제; (12) 부형제, 예를 들어, 락토스, 유당, 폴리에틸렌 글리콜, 동물성 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 코코아 버터, 전분, 트래거캔쓰, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리식산, 활석, 살리실레이트, 아연 옥사이드, 알루미늄 하이드록시드, 칼슘 실리케이트, 및 폴리아미드 분말; (13) 비활성 희석제, 예를 들어, 물 또는 다른 용매; (14) 보존제; (15) 계면활성제; (16) 분산제; (17) 방출 제어제 또는 흡수 지연제, 예를 들어, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 기타 중합체 매트릭스, 생물분해성 중합체, 리포솜, 미세구, 알루미늄 모노스테아레이트, 젤라틴, 및 왁스; (18) 불투명화제; (19) 애쥬번트; (20) 습윤제; (21) 유화제 및 현탁제; (22) 가용화제 및 유화제, 예를 들어, 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일(특히, 목화씨유, 땅콩유, 옥수수유, 배아유, 올리브유, 피마자유 및 참기름), 글리세롤, 테트라하이드로푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르; (23) 추진제, 예를 들어, 클로로플루오로하이드로카본 및 휘발성 비치환 탄화수소, 예를 들어, 부탄 및 프로판; (24) 항산화제; (25) 제형을 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 하는 제제, 예를 들어, 당 및 염화나트륨; (26) 증점제; (27) 코팅 물질, 예를 들어, 레시틴; 및 (28) 감미제, 향미제, 착색제, 향료 및 보존제를 포함한다. 상기 각각의 성분 또는 물질은 제형의 다른 성분과 양립 가능하고 대상체에게 해를 끼치지 않는다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 선택된 투여 형태 및 의도된 투여 경로에 적합한 성분 및 물질은 당 분야에 널리 공지되어 있으며, 선택된 투여 형태 및 투여 방법에 대해 허용되는 성분 및 물질은 당 분야의 일반적인 기술을 사용하여 결정될 수 있다.The compositions of the present invention may optionally contain additional ingredients and/or substances commonly used in cosmetic compositions. These ingredients and substances are well known in the art and include, for example, (1) fillers or extenders such as starch, lactose, sucrose, glucose, mannitol and silicic acid; (2) binders such as carboxymethylcellulose, alginates, gelatin, polyvinyl pyrrolidone, hydroxypropylmethyl cellulose, sucrose and acacia; (3) humectants such as glycerol; (4) disintegrants such as agar-agar, calcium carbonate, potato or tapioca starch, alginic acid, certain silicates, sodium starch glycolate, cross-linked sodium carboxymethyl cellulose and sodium carbonate; (5) dissolution retardants such as paraffin; (6) absorption enhancers such as quaternary ammonium compounds; (7) wetting agents, such as cetyl alcohol and glycerol monostearate; (8) absorbents, such as kaolin and bentonite clay; (9) lubricants such as talc, calcium stearate, magnesium stearate, solid polyethylene glycols, and sodium lauryl sulfate; (10) suspending agents, for example, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol and sorbitan esters, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar-agar and tragacanth; (11) buffers; (12) excipients such as lactose, lactose, polyethylene glycol, animal and vegetable fats, oils, waxes, paraffin, cocoa butter, starch, tragacanth, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silicic acid, talc , salicylate, zinc oxide, aluminum hydroxide, calcium silicate, and polyamide powder; (13) an inert diluent such as water or other solvents; (14) preservatives; (15) surfactants; (16) dispersants; (17) release controlling or absorption delaying agents, such as hydroxypropylmethyl cellulose, other polymer matrices, biodegradable polymers, liposomes, microspheres, aluminum monostearate, gelatin, and waxes; (18) opacifying agents; (19) adjuvants; (20) wetting agents; (21) emulsifying and suspending agents; (22) solubilizing and emulsifying agents, for example, ethyl alcohol, isopropyl alcohol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, oils (especially cottonseed) fatty acid esters of oil, peanut oil, corn oil, germ oil, olive oil, castor oil and sesame oil), glycerol, tetrahydrofuryl alcohol, polyethylene glycol and sorbitan; (23) propellants such as chlorofluorohydrocarbons and volatile unsubstituted hydrocarbons such as butane and propane; (24) antioxidants; (25) agents that render the formulation isotonic with the blood of the intended recipient, such as sugars and sodium chloride; (26) thickeners; (27) coating materials such as lecithin; and (28) sweetening, flavoring, coloring, flavoring and preservative agents. Each of the above ingredients or substances must be “acceptable” in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation and not harming the subject. Components and materials suitable for the selected dosage form and intended route of administration are well known in the art, and acceptable ingredients and materials for the selected dosage form and method of administration can be determined using routine techniques in the art.

경구 투여에 적합한 본 발명의 조성물은 캡슐, 카세제, 환약, 정제, 분말, 과립, 수성 또는 비-수성 액체 중 용액 또는 현탁액, 수중유 또는 유중수 액체 에멀젼, 엘릭서 또는 시럽, 파스틸, 볼루스, 연질약 또는 페이스트의 형태일 수 있다. 이들 제형은 당 분야에 공지된 방법, 예를 들어, 통상적인 팬-코팅, 혼합, 과립화 또는 동결건조 공정에 의해 제조될 수 있다.Compositions of the present invention suitable for oral administration include capsules, cachets, pills, tablets, powders, granules, solutions or suspensions in aqueous or non-aqueous liquids, oil-in-water or water-in-oil liquid emulsions, elixirs or syrups, pastilles, boluses , may be in the form of an emollient or paste. These formulations can be prepared by methods known in the art, for example, by conventional pan-coating, mixing, granulating or lyophilizing processes.

경구 투여를 위한 고체 투여 형태(캡슐, 정제, 환약, 당의정, 분말, 과립 등)는, 예를 들어, 활성 성분(들)을 하나 이상의 화장용 또는 약학적으로 허용되는 담체 및 선택적으로 하나 이상의 충전제, 증량제, 결합제, 보습제, 붕해제, 용해 지연제, 흡수 촉진제, 습윤제, 흡수제, 윤활제 및/또는 착색제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 적합한 부형제를 사용하여 연질 및 경질 충전 젤라틴 캡슐에서 충전제로 사용될 수 있다. 정제는 선택적으로 하나 이상의 보조 성분과 함께 압축 또는 성형에 의해 제조될 수 있다. 압축 정제는 적합한 결합제, 윤활제, 비활성 희석제, 보존제, 붕해제, 계면활성제 또는 분산제를 사용하여 제조될 수 있다. 성형된 정제는 적합한 기계에서의 성형에 의해 제조될 수 있다. 정제 및 다른 고체 투여 형태, 예를 들어, 캡슐, 환약 및 과립은 선택적으로 스코어링되거나, 코팅 및 외피, 예를 들어, 장용 코팅 및 화장품 제형화 분야에 널리 공지된 다른 코팅과 함께 제조될 수 있다. 이들은 또한 활성 성분의 느린 또는 제어된 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다. 이들은, 예를 들어, 박테리아 보유 필터를 통한 여과에 의해 멸균될 수 있다. 이들 조성물은 또한 선택적으로 불투명화제를 함유할 수 있으며, 위장관의 특정 부분에서, 선택적으로 지연된 방식으로 활성 성분을 단독으로 또는 우선적으로 방출하는 조성물일 수 있다. 활성 성분은 또한 미세캡슐화된 형태일 수 있다.Solid dosage forms for oral administration (capsules, tablets, pills, dragees, powders, granules, etc.) may contain, for example, the active ingredient(s) in one or more cosmetically or pharmaceutically acceptable carriers and optionally one or more fillers. , extenders, binders, humectants, disintegrants, dissolution delaying agents, absorption enhancers, wetting agents, absorbents, lubricants and/or coloring agents. Solid compositions of a similar type may be employed as fillers in soft and hard filled gelatin capsules using suitable excipients. Tablets may be prepared by compression or molding, optionally with one or more accessory ingredients. Compressed tablets may be prepared using suitable binders, lubricants, inert diluents, preservatives, disintegrating agents, surfactants or dispersing agents. Molded tablets may be made by molding in a suitable machine. Tablets and other solid dosage forms such as capsules, pills and granules can be optionally scored or prepared with coatings and shells such as enteric coatings and other coatings well known in the cosmetic formulating art. They may also be formulated to provide slow or controlled release of the active ingredient. They may be sterilized, for example, by filtration through a bacteria-retaining filter. These compositions may also optionally contain opacifying agents and may be of a composition which releases the active ingredient alone or preferentially, optionally in a delayed manner, in a particular part of the gastrointestinal tract. The active ingredient may also be in microencapsulated form.

경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭서를 포함한다. 액체 투여 형태는 당 분야에서 일반적으로 사용되는 적합한 비활성 희석제를 함유할 수 있다. 비활성 희석제 이외에, 경구 조성물은 또한 애쥬번트, 예를 들어, 습윤제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 향미제, 착색제, 향수 및 보존제를 포함할 수 있다. 현탁액은 현탁제를 함유할 수 있다.Liquid dosage forms for oral administration include cosmetic or pharmaceutically acceptable emulsions, microemulsions, solutions, suspensions, syrups and elixirs. Liquid dosage forms may contain suitable inert diluents commonly used in the art. In addition to inert diluents, oral compositions may also contain adjuvants such as wetting agents, emulsifying and suspending agents, sweetening, flavoring, coloring, perfuming and preservative agents. Suspensions may contain suspending agents.

직장 또는 질 투여를 위한 본 발명의 조성물은 하나 이상의 활성 성분(들)을 실온에서 고체이나 체온에서 액체여서 직장 또는 질강에서 녹아 활성 화합물을 방출하는 하나 이상의 적합한 비자극 담체를 혼합함으로써 제조될 수 있는 좌약으로 제공될 수 있다. 질 투여에 적합한 본 발명의 조성물은 또한 당 분야에서 적절한 것으로 공지된 상기 화장용 또는 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는 페서리, 탐폰, 크림, 젤, 페이스트, 포움 또는 스프레이 제형을 포함한다.The compositions of the present invention for rectal or vaginal administration may be prepared by mixing one or more active ingredient(s) with one or more suitable non-irritating carriers which are solid at room temperature but liquid at body temperature and dissolve in the rectal or vaginal cavity to release the active compound. can be provided as Compositions of the present invention suitable for vaginal administration also include pessaries, tampons, creams, gels, pastes, foams or spray formulations containing such cosmetic or pharmaceutically acceptable carriers as are known in the art to be suitable.

국소 또는 경피 투여를 위한 투여 형태는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 젤, 용액, 패치, 점적, 에멀젼, 현탁액, 에어로졸 및 흡입제를 포함한다. 임의의 원하는 통상적인 비히클, 보조제 및 선택적으로 추가 활성 성분이 제형에 첨가될 수 있다.Dosage forms for topical or transdermal administration include powders, sprays, ointments, pastes, creams, lotions, gels, solutions, patches, drops, emulsions, suspensions, aerosols and inhalants. Any desired conventional vehicles, adjuvants and optionally additional active ingredients may be added to the formulation.

바람직한 보조제는 보존제, 항산화제, 안정화제, 가용화제, 비타민, 착색제, 냄새 개선제, 필름 형성제, 증점제 및 보습제를 포함하는 군으로부터 유래된다.Preferred adjuvants are derived from the group comprising preservatives, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, colorants, odor improvers, film formers, thickeners and humectants.

용액 및 에멀젼은 통상적인 비히클, 예를 들어, 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들어, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸 글리콜, 오일, 특히 목화씨유, 땅콩유, 옥수수유, 올리브유, 피마자유 및 참기름, 글리세롤 지방산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 또는 이들 물질의 혼합물을 포함할 수 있다.Solutions and emulsions are prepared in conventional vehicles, for example solvents, solubilizers and emulsifiers, for example water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3 -butyl glycol, oils, in particular cottonseed oil, peanut oil, corn oil, olive oil, castor oil and sesame oil, glycerol fatty acid esters, fatty acid esters of polyethylene glycol and sorbitan, or mixtures of these substances.

에멀젼은 다양한 형태로 존재할 수 있다. 따라서, 이들은, 예를 들어, 유중수(W/O) 유형 또는 수중유(O/W) 유형의 에멀젼 또는 마이크로에멀젼, 또는, 예를 들어, 수중유중수(W/O/W) 유형의 다중 에멀젼일 수 있다.Emulsions can exist in a variety of forms. Thus, they are, for example, emulsions or microemulsions of the water-in-oil (W/O) type or of the oil-in-water (O/W) type, or, for example, multiples of the water-in-oil (W/O/W) type. It may be an emulsion.

본 발명에 따른 조성물은 또한 유화제가 없는 분산 제조물 형태일 수 있다. 이들은, 예를 들어, 수분산액 또는 피커링 에멀젼일 수 있다.The compositions according to the invention may also be in the form of dispersion preparations without emulsifiers. They may be, for example, aqueous dispersions or Pickering emulsions.

현탁액은 통상적인 비히클, 예를 들어, 액체 희석제, 예를 들어, 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜, 현탁 매질, 예를 들어, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르, 미정질 셀룰로스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트래거캔쓰, 또는 이들 물질의 혼합물을 포함할 수 있다.Suspensions can be prepared in conventional vehicles, for example, liquid diluents, for example, water, ethanol or propylene glycol, suspending media, for example, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol esters and polyoxyethylene sorbitan esters. , microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar-agar and tragacanth, or mixtures of these materials.

페이스트, 연고, 젤 및 크림은 통상적인 비히클, 예를 들어, 동물성 및 식물성 지방, 왁스, 파라핀, 전분, 트래거캔쓰, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리식산, 활석 및 아연 옥사이드, 또는 이들 물질의 혼합물을 포함할 수 있다.Pastes, ointments, gels and creams can be prepared using conventional vehicles such as animal and vegetable fats, waxes, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silicic acid, talc and zinc oxide, or mixtures of these substances.

안면 및 바디 오일은 통상적인 비히클, 예를 들어, 합성 오일, 예를 들어, 지방산 에스테르, 지방 알콜, 실리콘 오일, 천연 오일, 예를 들어, 식물성 오일 및 오일성 식물 추출물, 파라핀 오일, 라놀린유, 또는 이들 물질의 혼합물을 포함할 수 있다.Facial and body oils can be prepared using conventional vehicles, such as synthetic oils such as fatty acid esters, fatty alcohols, silicone oils, natural oils such as vegetable oils and oily plant extracts, paraffin oil, lanolin oil, or mixtures of these substances.

스프레이는 통상적인 추진제, 예를 들어, 클로로플루오로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르를 포함할 수 있다.Sprays may contain conventional propellants such as chlorofluorocarbons, propane/butane or dimethyl ether.

비경구 투여에 적합한 본 발명의 조성물은 적합한 항산화제, 완충제, 제형을 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 하는 용질, 또는 현탁제 또는 증점제를 함유할 수 있는 하나 이상의 화장용 또는 약학적으로 허용되는 멸균 등장성 수성 또는 비-수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 또는 사용 직전에 멸균 주사 가능 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 분말과 함께 하나 이상의 화합물을 포함한다. 예를 들어, 코팅 물질의 사용에 의하고, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의하고, 계면활성제의 사용에 의해 적절한 유동성이 유지될 수 있다. 이들 조성물은 또한 적합한 애쥬번트, 예를 들어, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 등장화제를 포함하는 것이 또한 바람직할 수 있다. 또한, 흡수를 지연시키는 제제의 포함에 의해 주사 가능한 화장용 형태의 연장된 흡수가 발생될 수 있다.Compositions of the present invention suitable for parenteral administration may contain suitable antioxidants, buffers, solutes to render the formulation isotonic with the blood of the intended recipient, or one or more cosmetically or pharmaceutically acceptable agents which may contain suspending or thickening agents. sterile isotonic aqueous or non-aqueous solutions, dispersions, suspensions or emulsions, or sterile powders which may be reconstituted immediately prior to use into sterile injectable solutions or dispersions. Proper fluidity can be maintained, for example, by the use of coating materials, by the maintenance of the required particle size in the case of dispersions, and by the use of surfactants. These compositions may also contain suitable adjuvants such as wetting, emulsifying and dispersing agents. It may also be desirable to include isotonic agents. In addition, prolonged absorption of the injectable cosmetic form may be brought about by the inclusion of agents which delay absorption.

일부 경우에, 효과를 연장시키기 위해, 피하 또는 근내 주사로부터의 흡수를 늦추는 것이 바람직하다. 이는 불량한 수 용해도를 갖는 결정질 또는 무정형 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다.In some cases, in order to prolong the effect, it is desirable to slow the absorption from subcutaneous or intramuscular injection. This can be achieved by the use of a liquid suspension of crystalline or amorphous material with poor water solubility.

이후, 활성제/약물의 흡수 속도는 용해 속도에 좌우되며, 이는 차례로 결정 크기 및 결정질 형태에 좌우될 수 있다. 대안적으로, 비경구 투여된 조성물의 지연된 흡수는 활성 조성물을 오일 비히클에 용해시키거나 현탁시킴으로써 달성될 수 있다. 주사 가능한 데포 형태는 생물분해성 중합체에서 활성 성분의 미세캡슐 매트릭스를 형성시킴으로써 제조될 수 있다. 활성 성분 대 중합체의 비율 및 사용되는 특정 중합체의 특성에 따라, 활성 성분 방출 속도가 제어될 수 있다. 데포 주사가능 제형은 또한 신체 조직과 양립되는 리포솜 또는 마이크로에멀젼 내에 약물을 포획함으로써 제조된다. 주사 가능한 물질은, 예를 들어, 박테리아 보유 필터를 통한 여과에 의해 멸균될 수 있다.The rate of absorption of the active agent/drug then depends on the rate of dissolution, which in turn may depend on the crystal size and crystalline form. Alternatively, delayed absorption of a parenterally administered composition may be achieved by dissolving or suspending the active composition in an oil vehicle. Injectable depot forms can be prepared by forming microcapsule matrices of the active ingredient in biodegradable polymers. Depending on the ratio of active ingredient to polymer and the nature of the particular polymer employed, the rate of active ingredient release can be controlled. Depot injectable formulations are also prepared by entrapping the drug in liposomes or microemulsions that are compatible with body tissues. Injectables can be sterilized, for example, by filtration through a bacteria-retaining filter.

본 발명의 조성물은 단위 용량 또는 다중 용량 밀봉 용기, 예를 들어, 앰풀 및 바이알에 제공될 수 있으며, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어, 주사용수의 첨가만을 요구하는 동결건조된 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 상기 기재된 유형의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.The compositions of the present invention may be presented in unit-dose or multi-dose sealed containers, such as ampoules and vials, and stored in a lyophilized state requiring only the addition of a sterile liquid carrier, e.g., water for injection, immediately prior to use. can be Extemporaneous injection solutions and suspensions may be prepared from sterile powders, granules and tablets of the type described above.

본 발명에서, 용어 "결정질 형태"는 화합물의 결정 구조를 의미한다. 화합물은 상이한 구조적, 물리적, 약리학적 또는 화학적 특징을 가질 수 있는 하나 이상의 결정질 형태로 존재할 수 있다. 상이한 결정질 형태는 핵형성, 성장 동역학, 응집 및 파손의 변화를 사용하여 획득될 수 있다. 핵형성은 상-전이 에너지 장벽이 극복되어 입자가 과포화 용액으로부터 형성되는 경우에 발생한다. 결정 성장은 결정의 존재하는 표면 상의 화합물의 침착에 의해 야기되는 결정 입자의 확대이다. 핵형성 및 성장의 상대 속도는 형성되는 결정의 크기 분포를 결정한다. 핵형성 및 성장 둘 모두를 위한 열역학적 추진력은 열역학적 평형으로부터의 편차로 정의되는 과포화이다. 응집은 2개 이상의 입자(예를 들어, 결정)가 함께 붙어 더 큰 결정 구조를 형성함을 통한 더 큰 입자의 형성이다.As used herein, the term “crystalline form” refers to the crystal structure of a compound. A compound may exist in one or more crystalline forms, which may have different structural, physical, pharmacological or chemical characteristics. Different crystalline forms can be obtained using changes in nucleation, growth kinetics, aggregation and breakage. Nucleation occurs when the phase-transition energy barrier is overcome and particles are formed from a supersaturated solution. Crystal growth is the enlargement of crystal grains caused by the deposition of compounds on the existing surface of the crystal. The relative rates of nucleation and growth determine the size distribution of the crystals formed. The thermodynamic driving force for both nucleation and growth is supersaturation, defined as the deviation from thermodynamic equilibrium. Agglomeration is the formation of larger particles through which two or more particles (eg, crystals) stick together to form a larger crystal structure.

본원에서 사용되는 용어 "수화물"은 분자 복합체 내에 물을 함유하는 화합물의 고체 또는 반고체 형태를 의미한다. 물은 일반적으로 화합물에 대해 화학량론적 양으로 존재한다.As used herein, the term “hydrate” refers to a solid or semi-solid form of a compound that contains water in a molecular complex. Water is generally present in stoichiometric amounts with respect to the compound.

본원에서 사용되는 "화장용 또는 약학적으로 허용되는 염"은 화합물이 이의 산 또는 염기 염을 제조함으로써 변형되는 본원에 개시된 화합물의 유도체를 나타낸다. 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염의 예는 아민과 같은 염기성 잔기의 무기 또는 유기산 염; 카르복실산과 같은 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 상기 염은 암모니아, L-아르기닌, 베타인, 베네타민, 벤자틴, 칼슘 하이드록시드, 콜린, 데아놀, 디에탄올아민 (2,2'-이미노비스(에탄올)), 디에틸아민, 2-(디에틸아미노)-에탄올, 2-아미노에탄올, 에틸렌디아민, N-에틸-글루카민, 하이드라바민, 1H-이미다졸, 리신, 마그네슘 하이드록시드, 4-(2-하이드록시에틸)-모르폴린, 피페라진, 포타슘 하이드록시드, 1-(2-하이드록시-에틸)-피롤리딘, 소듐 하이드록시드, 트리에탄올아민 (2,2',2"-니트릴로트리스(에탄올)), 트로메트-아민, 아연 하이드록시드, 아세트산, 2.2-디클로로-아세트산, 아디프산, 알긴산, 아스코르브산, L-아스파르트산, 벤젠설폰산, 벤조산, 2,5-디하이드록시벤조산, 4-아세트아미도-벤조산, (+)-캄포르산, (+)-캄포르-10-설폰산, 탄산, 신남산, 시트르산, 사이클라민산, 데칸산, 도데실황산, 에탄-1,2-디설폰산, 에탄설폰산, 2-하이드록시-에탄설폰산, 에틸렌디아모노테트라아세트산, 포름산, 푸마르산, 갈라카르산, 겐티스산, D-글루코헵톤산, D-글루콘산, D-글루쿠론산, 글루탐산, 글루탄트산, 글루타르산, 2-옥소-글루타르산, 글리세로-포스포르산, 글리신, 글리콜산, 헥산산, 히푸르산, 브롬화수소산, 염산 이소부티르산, DL-락트산, 락토비온산, 라우르산, 리신, 말레산, (-)-L-말산, 말론산, DL-만델산, 메탄설폰산, 갈락타르산, 나프탈렌-1,5-디설폰산, 나프탈렌-2-설폰산, 1-하이드록시-2-나프토산, 니코틴산, 질산, 옥탄산, 올레산, 오로트산, 옥살산, 팔미트산, 파모산(엠본산), 인산, 프로피온산, (-)-L-피로글루탐산, 살리실산, 4-아미노-살리실산, 세박산, 스테아르산, 숙신산, 황산, 탄닌산, (+)-L-타르타르산, 티오시안산, p-톨루엔설폰산 및 운데실렌산으로부터의 염을 포함한다. 추가의 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염은 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 포타슘, 소듐, 아연 등과 같은 금속으로부터의 양이온으로 형성될 수 있다.As used herein, "cosmetic or pharmaceutically acceptable salt" refers to a derivative of a compound disclosed herein in which the compound is modified by preparing an acid or base salt thereof. Examples of cosmetically or pharmaceutically acceptable salts include inorganic or organic acid salts of basic moieties such as amines; alkali or organic salts of acidic residues such as carboxylic acids; and the like. For example, the salt may be ammonia, L-arginine, betaine, benetamine, benzathine, calcium hydroxide, choline, theanol, diethanolamine (2,2'-iminobis(ethanol)), diethyl Amine, 2-(diethylamino)-ethanol, 2-aminoethanol, ethylenediamine, N-ethyl-glucamine, hydrabamine, 1H-imidazole, lysine, magnesium hydroxide, 4-(2-hydroxyl) Ethyl)-morpholine, piperazine, potassium hydroxide, 1-(2-hydroxy-ethyl)-pyrrolidine, sodium hydroxide, triethanolamine (2,2',2"-nitrilotris(ethanol) )), trometh-amine, zinc hydroxide, acetic acid, 2.2-dichloro-acetic acid, adipic acid, alginic acid, ascorbic acid, L-aspartic acid, benzenesulfonic acid, benzoic acid, 2,5-dihydroxybenzoic acid, 4-acetamido-benzoic acid, (+)-camphoric acid, (+)-camphor-10-sulfonic acid, carbonic acid, cinnamic acid, citric acid, cyclamic acid, decanoic acid, dodecylsulfuric acid, ethane-1, 2-disulfonic acid, ethanesulfonic acid, 2-hydroxy-ethanesulfonic acid, ethylenediamonotetraacetic acid, formic acid, fumaric acid, galacaric acid, gentisic acid, D-glucoheptonic acid, D-gluconic acid, D-gluconic acid Curonic acid, glutamic acid, glutamic acid, glutaric acid, 2-oxo-glutaric acid, glycero-phosphoric acid, glycine, glycolic acid, hexanoic acid, hippuric acid, hydrobromic acid, hydrochloric acid isobutyric acid, DL-lactic acid , lactobionic acid, lauric acid, lysine, maleic acid, (-)-L-malic acid, malonic acid, DL-mandelic acid, methanesulfonic acid, galactaric acid, naphthalene-1,5-disulfonic acid, naphthalene-2 -Sulphonic acid, 1-hydroxy-2-naphthoic acid, nicotinic acid, nitric acid, octanoic acid, oleic acid, orotic acid, oxalic acid, palmitic acid, pamoic acid (embonic acid), phosphoric acid, propionic acid, (-)-L- salts from pyroglutamic acid, salicylic acid, 4-amino-salicylic acid, sebacic acid, stearic acid, succinic acid, sulfuric acid, tannic acid, (+)-L-tartaric acid, thiocyanate, p-toluenesulfonic acid and undecylenic acid. Additional cosmetically or pharmaceutically acceptable salts may be formed with cations from metals such as aluminum, calcium, lithium, magnesium, potassium, sodium, zinc, and the like.

본 발명의 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 본원에 개시된 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 상기 염은 물 또는 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴 또는 이들의 혼합물과 같은 유기 희석제에서 충분한 양의 적절한 염기 또는 산과 이들 화합물의 유리산 또는 염기 형태를 반응시킴으로써 제조될 수 있다.The cosmetic or pharmaceutically acceptable salts of the present invention may be synthesized from the compounds disclosed herein containing a basic or acidic moiety by conventional chemical methods. In general, the salts can be prepared by reacting the free acid or base form of these compounds with a sufficient amount of the appropriate base or acid in water or an organic diluent such as ether, ethyl acetate, ethanol, isopropanol or acetonitrile or mixtures thereof. .

본 발명의 화합물 및 조성물은 시험관 내 및 생체 내 적용 둘 모두를 위해 화장용 또는 약학적 조성물에 포함될 수 있음이 구상된다.It is envisioned that the compounds and compositions of the present invention may be included in cosmetic or pharmaceutical compositions for both in vitro and in vivo applications.

표 5 또는 도 130에 나열된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함하는 본 발명의 화합물 및 조성물은 본 발명의 피부 색소침착 조절 목적을 달성하기 위해 대상체에 공동 투여될 수 있음이 구상된다.The compounds and compositions of the present invention comprising one or more compounds listed in Table 5 or FIG. 130, or chemical analogs, crystalline forms, hydrates, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salts thereof, provide for the purpose of controlling skin pigmentation of the present invention. It is envisioned that they may be co-administered to a subject to achieve

본 발명의 조성물은 표 5 또는 도 130에 나열된 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함할 수 있는 것이 또한 구상된다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 말라세진 또는 이의 화학적 유사체와 함께 인디루빈 또는 이의 화학적 유사체를 포함할 수 있다.It is also envisioned that the compositions of the present invention may include one or more compounds listed in Table 5 or Figure 130, or a chemical analog, crystalline form, hydrate, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salt thereof. For example, the composition of the present invention may comprise indirubin or a chemical analog thereof along with malacetin or a chemical analog thereof.

추가로, 본 발명의 화합물은 말라세지아에 의해 생성되는 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함하는 것이 구상된다. 또한, 본 발명의 조성물 및 방법은 말라세지아에 의해 생성되는 하나 이상의 화합물, 또는 이의 화학적 유사체, 결정질 형태, 수화물, 또는 약학적 또는 화장용으로 허용되는 염을 포함할 수 있는 것이 구상된다. 예를 들어, 말라세지아에 의해 생성되거나, 이로부터 유래되는 화합물은 도 130에 제시된 화합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.Additionally, it is envisioned that the compounds of the present invention include compounds produced by Malassezia, or chemical analogs, crystalline forms, hydrates, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salts thereof. It is also envisioned that the compositions and methods of the present invention may include one or more compounds produced by Malassezia, or chemical analogs, crystalline forms, hydrates, or pharmaceutically or cosmetically acceptable salts thereof. For example, compounds produced by or derived from Malassezia include, but are not limited to, the compounds shown in FIG. 130 .

본 발명의 방법은 본원에 기재된 피부 색소침착 조절 목적을 달성하기 위해 본 발명의 2개 이상의 화합물 및/또는 조성물을 공동 투여하는 것을 포함할 수 있는 것이 추가로 구상된다.It is further envisioned that the methods of the present invention may comprise co-administering two or more compounds and/or compositions of the present invention to achieve the purpose of controlling skin pigmentation described herein.

본 발명의 공동 투여되는 화합물 및 조성물은, 예를 들어, 실질적으로 동시에 또는 차례로 대상체와 접촉할 수 있다.The co-administered compounds and compositions of the present invention may, for example, be contacted with a subject substantially simultaneously or sequentially.

하나 이상의 말라세지아 유래 화합물 또는 이의 화학적 유사체를 함유하는 본 발명의 조성물은 평균 조직 생존력, 멜라닌 농도, 피부 브라이트닝, 피부 다크닝, 멜라닌세포 아폽토시스의 유도, 및 아릴탄화수소(AhR) 활성, 멜라닌생성 또는 멜라닌 농도의 조절을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 효능 기준에 대해 성분 화합물 단독에 비한 상승작용적 효과를 나타낼 수 있다.Compositions of the present invention containing one or more Malassezia-derived compounds or chemical analogs thereof can be used to determine average tissue viability, melanin concentration, skin brightening, skin darkening, induction of melanocyte apoptosis, and aryl hydrocarbon (AhR) activity, melanogenesis or It may exhibit a synergistic effect compared to the component compound alone for a variety of efficacy criteria, including, but not limited to, modulation of melanin concentration.

본원에서 사용되는 용어는 특정 구체예를 설명하기 위한 것이며, 제한하려는 의도는 아니다. 본 명세서 및 첨부된 청구항에서 사용되는 바와 같은 단수 형태는 문맥상 명백히 달리 지시되지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다.The terminology used herein is for the purpose of describing particular embodiments and is not intended to be limiting. As used in this specification and the appended claims, the singular forms include plural referents unless the context clearly dictates otherwise.

본원에서 수치 범위의 인용에 대하여, 동일한 정밀도를 갖는 이러한 범위 사이의 각 개재 숫자가 명시적으로 고려된다. 예를 들어, 6 내지 9의 범위에 대하여, 6 및 9 이외에 숫자 7 및 8이 고려되며, 6.0 내지 7.0의 범위에 대하여, 숫자 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6,9, 및 7.0이 명시적으로 고려된다.For recitation of numerical ranges herein, each intervening number between such ranges with the same precision is expressly contemplated. For example, for the range 6 to 9, in addition to 6 and 9, the numbers 7 and 8 are contemplated, and for the range 6.0 to 7.0, the numbers 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8 , 6, 9, and 7.0 are explicitly contemplated.

본 발명의 방법을 추가로 예시하기 위해 하기 실시예가 제공된다. 이러한 실시예는 단지 예시일 뿐, 어떠한 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하도록 의도되지 않는다.The following examples are provided to further illustrate the method of the present invention. These examples are illustrative only and are not intended to limit the scope of the present invention in any way.

실시예Example

실시예 1Example 1

물질 및 방법Substances and methods

말라세지아에 의해 생성된 화합물의 분리Isolation of compounds produced by Malassezia

말라세진은 예를 들어, 문헌[Wille et al., 2001]에서 개략된 절차를 이용하여 분리된다. 이러한 프로토콜은 하기에서 간단하게 개략된다.Malassezine is described, for example, in Wille et al. , 2001] using the outlined procedure. This protocol is briefly outlined below.

배지badge

Tween 80(30 mL), 사이클로헥시미드(0.5 g), 클로람페니콜(0.05 g), 아가(20 g), 및 1000 mL 혼합물을 위해 충분한 부피의 물로 이루어진 배지를 멸균시키고, 50℃에서 0.3 g%의 농도로 0.3% 멸균 여과된 L-트립토판과 혼합하였다. 10 mL 부분을 10 cm 페트리 디시에 붓고, 0.1 M HCl을 사용하여 pH를 5.5로 조정하였다.Sterilize medium consisting of Tween 80 (30 mL), cycloheximide (0.5 g), chloramphenicol (0.05 g), agar (20 g), and a volume of water sufficient for a 1000 mL mixture, 0.3 g% at 50°C It was mixed with 0.3% sterile filtered L-tryptophan at a concentration of. A 10 mL portion was poured into a 10 cm Petri dish and the pH was adjusted to 5.5 with 0.1 M HCl.

말라세지아 푸르푸르를 배양하고 M. 푸르푸르에 의해 생성된 화합물을 분리함Culturing Malassezia furfur and isolating compounds produced by M. furfur

말라세지아 푸르푸르를 상기에 기술된 배지에 면봉으로 닦아내고, 30℃에서 14일 동안 인큐베이션하였다. 페트리 디시의 내용물을 퓨레로 만들고, 12시간 동안 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 유리솜으로 여과하고, 증발 건조시키고, 메탄올에 용해하였다. 이후에, 추출물을 용리액으로서 메탄올과 함께 Sephadex LH-20 상에서 크로마토그래피에 의해 분별하였다. 톨루엔:에틸 포르메이트:포름산(10:5:3)과 함께 분취용 박막 크로마토그래피로 추가 분리를 수행하였다. 주요 구역을 물과 에틸 아세테이트로 분별하였다. 분획을 고려되는 활성에 대해 분석하였다. 고려되는 분획으로부터의 화합물을 HPLC에 의해 분리하였다.Malassezia furfur was wiped with a swab in the medium described above and incubated at 30° C. for 14 days. The contents of the Petri dish were purified and extracted with ethyl acetate for 12 hours. The extract was filtered through glass wool, evaporated to dryness and dissolved in methanol. The extracts were then fractionated by chromatography on Sephadex LH-20 with methanol as eluent. Further separation was performed by preparative thin layer chromatography with toluene:ethyl formate:formic acid (10:5:3). The main zone was partitioned between water and ethyl acetate. Fractions were analyzed for the activity considered. Compounds from the fractions considered were isolated by HPLC.

말라세진 및 말라세진의 화학적 유사체의 합성Synthesis of malacetin and its chemical analogues

말라세진을 문헌[Wille et al., 2001]에 기술된 프로토콜에 따라 합성하였다. 말라세진의 화학적 유사체를 신규한 합성 프로토콜뿐만 아니라, 문헌[Winston-McPherson, et al., 2014]에 기술된 프로토콜에 따라 합성하였다.Malassezine was synthesized according to the protocol described in Wille et al., 2001. Chemical analogues of malassezine were synthesized according to the protocol described in Winston-McPherson, et al., 2014, as well as a novel synthetic protocol.

스크리닝 프로토콜screening protocol

당업자에게 공지된 스크리닝 프로토콜 및 신규한 스크리닝 방법 둘 모두를 이용하여 효과적인 피부 브라이트닝 화합물을 평가하였다. 예를 들어, 말라세진 및 이의 화학적 유사체를 상기에 기술된 바와 같이, 티로시나아제 생물학적 검정에 의해 평가하였다. 아릴 탄화수소 수용체(AhR) 결합 검정을 포함하는, 시험관내 세포 및 생체내 조직 모델 둘 모두를 포함하는 다른 스크리닝 프로토콜을 이용하였다.Effective skin brightening compounds were evaluated using both screening protocols and novel screening methods known to those skilled in the art. For example, malacetin and its chemical analogs were evaluated by tyrosinase bioassay, as described above. Other screening protocols were used, including both in vitro cellular and in vivo tissue models, including aryl hydrocarbon receptor (AhR) binding assays.

티로시나아제 생물학적 검정Tyrosinase Biological Assay

티로시나아제 생물학적 검정을 문헌[Wille et al., 2001]에 기술된 바와 같이 수행하였다. 간단하게, L-DOPA를 티로시나아제 효소와 혼합하였다. 1분에 걸쳐 소광(extinction)을 측정하였으며, 이는 도파퀴논의 형성을 지시한다. 예를 들어, 상기에 논의된 분획을 사용하여, 이러한 분획을 DMSO 중에 용해시키고, 대조군으로서 순수한 DMSO와 함께, 티로시나아제 반응에 직접적으로 첨가하였다. 티로시나아제 억제 활성을 대조군과 비교하여 소광 증가가 감소된 것으로서 측정하였다.Tyrosinase bioassays were performed as described in Wille et al., 2001. Briefly, L-DOPA was mixed with the tyrosinase enzyme. Extinction was measured over 1 min, indicating the formation of dopaquinone. For example, using the fractions discussed above, these fractions are dissolved in DMSO and added directly to the tyrosinase reaction, along with pure DMSO as a control. Tyrosinase inhibitory activity was measured as decreased increase in quenching compared to control.

아릴 탄화수소 수용체 결합 검정 Aryl Hydrocarbon Receptor Binding Assay

AhR 결합 검정을 예를 들어, 문헌[Song, et al., 2002]에 기술된 프로토콜에 따라 수행하였다. 간단하게, 인간 및 뮤린 AhR을 예를 들어, TnT 고속-결합 망상 적혈구 용해물 시스템 반응(Promega, Madison, WI)을 이용하여 생체내에서 발현시켰다. 수용체 리간드 결합 연구는 문헌[Karchner, et al., 1999]에 기술된 바와 같이 수크로오스 구배에 대한 침강 속도(velocity sedimentation)를 이용한다.AhR binding assays were performed, for example, according to the protocol described in Song, et al., 2002. Briefly, human and murine AhRs were expressed in vivo using, for example, the TnT fast-associated reticulocyte lysate system reaction (Promega, Madison, WI). Receptor ligand binding studies utilize the velocity sedimentation of sucrose gradients as described by Karchner, et al., 1999.

EROD 검정EROD test

본 발명의 화합물, 조성물, 및 제형을 또한 당업자에게 공지된 에톡시레소루핀-O-데에틸라아제(EROD) 검정을 이용하여 평가하였다[Donato, et al., 1993; Whyte, et al., 2000; Wille et al., 2001].Compounds, compositions, and formulations of the present invention were also evaluated using the ethoxyresorufin-O-deethylase (EROD) assay known to those of skill in the art [Donato, et al. , 1993; Whyte, et al. , 2000; Wille et al. , 2001].

멜라닌세포 아폽토시스 검정Melanocyte Apoptosis Assay

멜라닌세포에서 아폽토시스-유도 활성에 대해 후보 화합물을 평가하였다. 인간 멜라닌세포 성장 보충물(HMGS)(Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA) 또는 표피 세포 기저 배지(ATCC, Manassas, VA)가 보충된 배지 254에 인간 표피 멜라닌세포를 배양하였다. 인간 멜라닌세포 성장 배지의 추가 성분은 인슐린(5 ㎍/ml), 아스코르브산(50 ㎍/ml), L-글루타민(6 mM), 에피네프린(1.0 μM), 및 칼슘 클로라이드(0.2 mM)를 포함할 수 있지만, 이로 제한되지 않는다. 인간 멜라닌세포 배양물을 37℃에서 5% CO2 중에서 유지시켰다.Candidate compounds were evaluated for apoptosis-inducing activity in melanocytes. Human epidermal melanocytes were cultured in medium 254 supplemented with human melanocyte growth supplement (HMGS) (Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA) or epidermal cell basal medium (ATCC, Manassas, VA). Additional components of human melanocyte growth medium may include insulin (5 μg/ml), ascorbic acid (50 μg/ml), L-glutamine (6 mM), epinephrine (1.0 μM), and calcium chloride (0.2 mM). can, but is not limited to. Human melanocyte cultures were maintained at 37° C. in 5% CO 2 .

후보 화합물을 DMSO 중에 희석하고, 멜라닌세포 배양물에 직접적으로 혼합하였다. 동일한 부피의 순수한 DMSO를 대조군으로서 사용하였다. 당업자에게 공지된 세포독성 검정을 제조업체 설명서에 따라 수행하였다. 본 발명에서 사용되는 세포독성 검정은 CellTox™ 그린 세포독성 검정, Apo-ONE 형광 카스파아제 검정, ApoTox-Glo™ 검정, 및 카스파아제-Glo® 검정(Promega, Madison, WI)을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 문헌[Kramer, et al., 2005]에 기술된 검정을 포함하는, 당업자에게 공지된 표준 FACS 또는 현미경 검정을 이용하여 형광 검출을 달성하였다.Candidate compounds were diluted in DMSO and mixed directly into melanocyte cultures. An equal volume of pure DMSO was used as a control. Cytotoxicity assays known to those skilled in the art were performed according to the manufacturer's instructions. Cytotoxicity assays for use in the present invention include, but are not limited to, CellTox™ Green Cytotoxicity Assay, Apo-ONE Fluorescent Caspase Assay, ApoTox-Glo™ Assay, and Caspase-Glo® Assay (Promega, Madison, WI). doesn't happen Kramer, et al. , 2005], fluorescence detection was achieved using standard FACS or microscopic assays known to those of skill in the art.

아넥신을 위한 FACS 분석 및 카스파아제-9 발현을 위한 웨스턴 블롯을 포함하는 아폽토시스를 평가하는 추가 수단을 이용하였다. 웨스턴 블롯팅을 당업자에게 공지된 방법에 따라 수행하였다.Additional means of assessing apoptosis were used, including FACS analysis for annexins and Western blots for caspase-9 expression. Western blotting was performed according to methods known to those skilled in the art.

마우스 이종이식 검정Mouse Xenograft Assay

인간 피부의 마우스 이종이식 모델을 당해 분야에 공지된 프로토콜에 따라 생성하였다[Black, et al., 1985; Manning et al., 1973; Reed, et al., 1973; Plenat, et al., 1992; Scott et al., 1998; Otulakowski, et al., 1994]. 일단 확립되면, 마우스 이종이식 모델을 본 발명의 화합물에 노출시키고, 침착 변화를 대조군과 비교하여 관찰하였다. 피부 침착 변화를 Fitzpatrick 피부 타입 시험 및 Taylor 과색소침착 스케일(Taylor, et al., 2005)을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 당업자에게 공지된 다양한 침착 스케일을 이용하여 피부 침착 변화를 평가하였다.Mouse xenograft models of human skin were generated according to protocols known in the art [Black, et al. , 1985; Manning et al. , 1973; Reed, et al. , 1973; Plenat, et al. , 1992; Scott et al. , 1998; Otulakowski, et al. , 1994]. Once established, mouse xenograft models were exposed to the compounds of the present invention and changes in deposition were observed compared to controls. Changes in skin deposition were assessed using a variety of deposition scales known to those skilled in the art, including, but not limited to, the Fitzpatrick Skin Type Test and the Taylor Hyperpigmentation Scale (Taylor, et al., 2005).

인간 검정human black

본 발명의 화합물, 조성물, 및 제형을 인간에, 예를 들어, 인간 피부 상에 적용하고, 대조 물질과 비교하였다. 피부 침착 변화를 Fitzpatrick 피부 타입 시험 및 Taylor 과색소침착 스케일을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 당업자에게 공지된 다양한 침착 스케일을 이용하여 평가하였다.The compounds, compositions, and formulations of the present invention are applied to humans, eg, on human skin, and compared to a control material. Skin deposition changes were assessed using various deposition scales known to those skilled in the art, including, but not limited to, the Fitzpatrick Skin Type Test and the Taylor Hyperpigmentation Scale.

실시예 2Example 2

말라세진 및 이의 유사체의 생화학적 타겟Biochemical Targets of Malassezine and Analogs thereof

본 발명의 화합물 및 조성물은 말라세진과 유사한 예를 들어, 티로시나아제 억제 및 AhR 효능제 활성을 나타낼 것으로 예상된다. 본 발명의 화합물 및 조성물은 예를 들어, 말라세진에 비해 더욱 강력한 티로시나아제 억제 및 더욱 강력한 AhR 효능작용을 나타낼 것으로 예상된다. 마찬가지로, 본 발명의 특정 화합물 및 조성물은 말라세진보다 덜 효과적인 티로시나아제 억제제 및 AhR 효능제인 것으로 예상된다. 이러한 화합물, 조성물, 및 제형은 더욱 강력한 화합물과 비교하여 더욱 유리한 독성 프로파일을 가질 수 있다.The compounds and compositions of the present invention are expected to exhibit, for example, tyrosinase inhibition and AhR agonist activity similar to malacetin. The compounds and compositions of the present invention are expected to exhibit more potent tyrosinase inhibition and more potent AhR agonism than, for example, malassezin. Likewise, certain compounds and compositions of the present invention are expected to be less effective tyrosinase inhibitors and AhR agonists than malassezine. Such compounds, compositions, and formulations may have a more favorable toxicity profile compared to more potent compounds.

실시예 3Example 3

시험관내 효능In vitro efficacy

본 발명의 화합물 및 조성물이 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하고 적어도 말라세진 정도로 강력하게 멜라닌세포 활성, 멜라닌 생산, 멜라노솜 생물발생, 및/또는 멜라노솜 전이를 조절할 것으로 예상된다. 또한, 본 발명의 특정 화합물 및 조성물이 이러한 생물학적 과정에 말라세진보다 덜 강력하게 영향을 미칠 것으로 고려된다. 이러한 화합물 및 조성물은 더욱 강력한 종에 비해 더 유리한 독성 프로파일을 가질 수 있다.It is expected that the compounds and compositions of the present invention induce melanocyte apoptosis and modulate melanocyte activity, melanin production, melanosome biogenesis, and/or melanosome metastasis, at least as potently as malassezine. It is also contemplated that certain compounds and compositions of the present invention will affect these biological processes less potently than malacetin. Such compounds and compositions may have a more favorable toxicity profile compared to more potent species.

실시예 4Example 4

생체내 효능In vivo efficacy

본 발명의 화합물 및 조성물이 피부를 브라이트닝하고 과색소침착 장애로 인한 과색소침착을 개선시키는 데 적어도 말라세진 정도로 효과적일 것으로 예상된다. 또한, 예를 본 발명의 화합물 및 조성물이 들어, 반감기 및 흡수의 측면에서 유리한 약동학적 프로파일을 나타낼 것으로 예상된다. 특정 화합물은 더 긴 반감기를 나타낼 것인 반면, 다른 화합물은 더 짧은 반감기를 나타낼 것이다. 유사하게, 특정 화합물은 상이한 흡수 프로파일을 나타낼 것이며, 일부 화합물은 완전히 흡수하는 데 더 긴 시간이 소요되며, 다른 화합물은 완전히 흡수하는 데 더 적은 시간이 소요된다.It is expected that the compounds and compositions of the present invention will be at least as effective as malacetin in lightening the skin and improving hyperpigmentation due to hyperpigmentation disorders. It is also expected that, for example, the compounds and compositions of the present invention will exhibit favorable pharmacokinetic profiles in terms of, for example, half-life and absorption. Certain compounds will exhibit longer half-lives, while others will exhibit shorter half-lives. Similarly, certain compounds will exhibit different absorption profiles, with some compounds taking longer to fully absorb and others taking less time to fully absorb.

실시예 5Example 5

말라세진 및 말라세진 유도체의 합성Synthesis of Malacetin and Malacetin Derivatives

말라세진("CV-8684") 및 이의 환형화된 유도체 인돌로[3,2-b] 카바졸("CV-8685")을 도 2a에 도시된 반응식에 따라 합성하였다.Malassezine (“CV-8684”) and its cyclized derivative indolo[3,2-b]carbazole (“CV-8685”) were synthesized according to the scheme shown in FIG. 2A .

3차-부틸 (2-아이오도페닐)카바메이트, 화합물 1의 합성Synthesis of tert-butyl (2-iodophenyl) carbamate, compound 1

0℃에서 테트라하이드로푸란(250 mL) 중 2-아이오도-아닐린(25.0 g, 0.114 mol)의 용액에 LiHMDS(251.0 mL, THF 중 1 M, 0.251 mol)를 40분에 걸쳐 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 0℃에서 30분 교반 후에, THF(50 mL) 중 BOC 무수물(27.0 g, 0.125 mol)의 용액을 40분에 걸쳐 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 주변 온도로 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 포화된 NH4Cl(250 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 유기층을 분리하고, 물(150 mL)로 세척하였다. 합한 수성층을 에틸 아세테이트(2 x 150 mL)로 추출하고, 층을 분리하였다. 에틸 아세테이트 층을 본래 유기층과 합하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 오일로서 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(0 내지 5% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 1을 담황색 액체(29.0 g, 80%)로서 수득하였다.LiHMDS (251.0 mL, 1 M in THF, 0.251 mol) in a solution of 2-iodo-aniline (25.0 g, 0.114 mol) in tetrahydrofuran (250 mL) at 0 °C was brought to an internal temperature of 5 °C over 40 min. It was added slowly while keeping it below. After 30 min stirring at 0 °C, a solution of BOC anhydride (27.0 g, 0.125 mol) in THF (50 mL) was added slowly over 40 min maintaining the internal temperature below 5 °C. The reaction mixture was warmed to ambient temperature and stirred for 1 h. Saturated NH 4 Cl (250 mL) was added to quench the reaction. The organic layer was separated and washed with water (150 mL). The combined aqueous layers were extracted with ethyl acetate (2 x 150 mL) and the layers were separated. The ethyl acetate layer was combined with the original organic layer and concentrated in vacuo to give a brown oil. The crude compound was purified by column chromatography (0-5% ethyl acetate/hexanes). Compound 1 was obtained as a pale yellow liquid (29.0 g, 80%).

화합물 2의 합성Synthesis of compound 2

구리 아이오다이드(0.95 g, 10% mol) 및 PdCl2(PPh3)4(1.75 g, 5% mol)를 주변 온도에서 트리에틸아민(200 mL) 중 화합물 1(16.0 g, 0.05 mol), 프로파르길 메틸 에테르(4.25 g, 0.06 mol)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 2시간에 걸쳐 주변 온도에서 교반 후에, 반응을 완료하였다(10% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함). 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(300 mL)로 희석하고, 반응 혼합물을 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 오일로서 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(10% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 2을 담황색 액체(13.0 g, 99%)로서 수득하였다.Copper iodide (0.95 g, 10% mol) and PdCl 2 (PPh 3 ) 4 (1.75 g, 5% mol) were mixed with compound 1 (16.0 g, 0.05 mol) in triethylamine (200 mL) at ambient temperature, To a degassed solution of propargyl methyl ether (4.25 g, 0.06 mol) was added. After stirring at ambient temperature over 2 h, the reaction was complete (monitored by TLC using 10% ethyl acetate/hexanes). The reaction mixture was diluted with ethyl acetate (300 mL) and the reaction mixture was washed with water, saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered off and concentrated in vacuo to give as a brown oil. The crude compound was purified by column chromatography (10% ethyl acetate/hexanes). Compound 2 was obtained as a pale yellow liquid (13.0 g, 99%).

화합물 3의 합성Synthesis of compound 3

오븐-건조 플라스크에 디옥산(120 mL) 중 PtCl2(0.26 g, 0.001 mol), Na2CO3(1.6 g, 0.015 mol), 인돌(2.32 g, 0.02 mol) 및 화합물 2(2.6 g, 0.01 mol)를 첨가하였다. 플라스크를 질소로 탈기시키고, 시일링하고, 밤새 100℃로 가열하였다. 반응을 완료한 후에(10% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하고, 반응 혼합물을 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 오일로서 수득하였다. PtCl 2 (0.26 g, 0.001 mol), Na 2 CO 3 (1.6 g, 0.015 mol), indole (2.32 g, 0.02 mol) and compound 2 (2.6 g, 0.01) in dioxane (120 mL) in an oven-dried flask mol) was added. The flask was degassed with nitrogen, sealed and heated to 100° C. overnight. After completion of the reaction (monitored by TLC using 10% ethyl acetate/hexanes), the solvent was evaporated under reduced pressure. The reaction mixture was diluted with ethyl acetate (200 mL) and the reaction mixture was washed with water, saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered off and concentrated in vacuo to give as a brown oil.

상이한 배치에서 화합물 2(2.6 g, 0.01 mol)를 사용하여 이러한 반응을 반복하였다. 두 배치 미정제 화합물 모두를 합하고, 컬럼 크로마토그래피(10% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 3을 밝은 갈색 고체(3.8 g, 55%)로서 수득하였다.This reaction was repeated using compound 2 (2.6 g, 0.01 mol) in different batches. Both batches of crude compounds were combined and purified by column chromatography (10% ethyl acetate/hexanes). Compound 3 was obtained as a light brown solid (3.8 g, 55%).

화합물 4의 합성Synthesis of compound 4

칼륨 카르보네이트(4.6 g, 0.0329 mol)를 주변 온도에서 메탄올(150 mL) 및 물(50 mL) 혼합물 중 화합물 3(3.8 g, 0.0109 mol)의 용액에 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 밤새 환류 가열하였다. 반응을 완료한 후에(20% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 주변 온도까지 냉각시키고, 용매를 진공 중에서 농축하였다. 잔류물을 에틸아세테이트(200 mL)에서 취하고, 물 및 염수로 세척하고, 이후에 건조시키고(소듐 설페이트), 여과하고, 용매를 진공 중에서 농축하여 갈색 고체로서 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(20% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 4를 오렌지색 고체(2.2 g, 81%)로서 수득하였다.Potassium carbonate (4.6 g, 0.0329 mol) was added to a solution of compound 3 (3.8 g, 0.0109 mol) in a mixture of methanol (150 mL) and water (50 mL) at ambient temperature. The resulting suspension was heated to reflux overnight. After completion of the reaction (monitored by TLC using 20% ethyl acetate/hexanes), the reaction mixture was cooled to ambient temperature and the solvent was concentrated in vacuo. The residue was taken up in ethyl acetate (200 mL), washed with water and brine, then dried (sodium sulfate), filtered and the solvent concentrated in vacuo to give a brown solid. The crude compound was purified by column chromatography (20% ethyl acetate/hexanes). Compound 4 was obtained as an orange solid (2.2 g, 81%).

화합물 말라세진(CV-8684)의 합성Synthesis of compound malacetin (CV-8684)

아르곤 하, 0℃에서 건조된 100 mL 2구 둥근바닥 플라스크에, 디메틸포름아미드(20 mL)를 첨가하였다. POCl3(0.75 g, 0.0048 mol)을 10분에 걸쳐 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 0℃에서 30분 교반 후에, 디메틸포름아미드(5 mL) 중 화합물 4(1.0 g, 0.004 mol)의 용액을 10분에 걸쳐 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 밤새 교반하였다. 반응을 완료한 후에(20% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함). 반응 혼합물을 소듐 바이카르보네이트 수용액(150 mL)에 붓고, 1시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 고체로서 수득하였다. 미정제 화합물 컬럼 크로마토그래피(0 내지 20% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 말라세진(CV-8684)을 연한 핑크색 고체(0.82 g, 74%)로서 수득하였다.To a 100 mL two-necked round-bottom flask dried at 0°C under argon, dimethylformamide (20 mL) was added. POCl 3 (0.75 g, 0.0048 mol) was added slowly over 10 minutes maintaining the internal temperature below 5°C. After stirring at 0° C. for 30 minutes, a solution of compound 4 (1.0 g, 0.004 mol) in dimethylformamide (5 mL) was added slowly over 10 minutes maintaining the internal temperature below 5° C. The resulting mixture was stirred overnight at ambient temperature. After completion of the reaction (monitored by TLC using 20% ethyl acetate/hexanes). The reaction mixture was poured into aqueous sodium bicarbonate solution (150 mL) and stirred for 1 hour. The resulting mixture was extracted with ethyl acetate (2 x 100 mL). The organic layers were combined, washed with water, saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered off and concentrated in vacuo to give a brown solid. The crude compound was purified by column chromatography (0-20% ethyl acetate/hexanes). The compound malacetin (CV-8684) was obtained as a pale pink solid (0.82 g, 74%).

HPLC 순도: 97.8% (면적%). 1H-NMR, 13C 스펙트럼은 이러한 구조와 일치한다. ESI-MS: C18H15N2O에 대한 이론치(M + H)+: 275, 실험치: 275.2HPLC purity: 97.8% (area %). 1 H-NMR, 13 C spectrum is consistent with this structure. ESI-MS: theoretical value for C 18 H 15 N 2 O (M + H) + : 275, empirical value: 275.2

화합물 인돌로[3,2-b] 카바졸(CV-8685)의 합성 Synthesis of compound indolo[3,2-b]carbazole (CV-8685)

진한 HCl(0.25 mL)을 주변 온도에서 테트라하이드로푸란(120 mL) 중 말라세진(0.75 g)의 용액에 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 밤새 환류 가열하였다. 반응을 완료한 후에(40% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 주변 온도까지 냉각시키고, 1시간 동안 교반하였다. 고형물을 여과하고, 테트라하이드로푸란(20 mL)으로 세척하고, 건조시켜 인돌로[3,2-b] 카바졸(CV-8685)을 담황색 고체(0.55 g, 78 %)로서 수득하였다.Concentrated HCl (0.25 mL) was added to a solution of malacetin (0.75 g) in tetrahydrofuran (120 mL) at ambient temperature. The resulting mixture was heated to reflux overnight. After completion of the reaction (monitored by TLC using 40% ethyl acetate/hexanes), the reaction mixture was cooled to ambient temperature and stirred for 1 h. The solid was filtered, washed with tetrahydrofuran (20 mL) and dried to give indolo[3,2-b]carbazole (CV-8685) as a pale yellow solid (0.55 g, 78%).

HPLC 순도: 96.22% (면적%). 1H-NMR, 13C 스펙트럼은 이러한 구조와 일치한다. ESI-MS: C18H13N2에 대한 이론치(M + H)+: 257, 실험치: 257.5.HPLC purity: 96.22% (area %). 1 H-NMR, 13 C spectrum is consistent with this structure. ESI-MS: theoretical (M + H) + : 257 for C 18 H 13 N 2 , empirical: 257.5.

화합물 I("CV-8686") 및 화합물 IV("CV-8687")를 도 2b에 도시된 반응식에 따라 합성하였다.Compound I (“CV-8686”) and compound IV (“CV-8687”) were synthesized according to the scheme shown in FIG. 2B .

화합물 5의 합성Synthesis of compound 5

오븐-건조 플라스크에 디옥산(250 mL) 중 PtCl2(1.0 g, 0.0038 mol), Na2CO3(6.1 g, 0.057 mol), 6-메틸 인돌(10.0 g, 0.076 mol) 및 화합물 2(10.0 g, 0.038 mol)를 첨가하였다. 플라스크를 질소로 탈기시키고, 시일링하고, 밤새 100℃로 가열하였다. 반응을 완료한 후에(10% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(400 mL)로 희석하고, 반응 혼합물을 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 오일로서 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(10% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 5를 밝은 갈색 고체(6.5 g, 47%)로서 수득하였다. PtCl 2 (1.0 g, 0.0038 mol), Na 2 CO 3 (6.1 g, 0.057 mol), 6-methyl indole (10.0 g, 0.076 mol) and compound 2 (10.0) in dioxane (250 mL) in an oven-dried flask g, 0.038 mol) was added. The flask was degassed with nitrogen, sealed and heated to 100° C. overnight. After completion of the reaction (monitored by TLC using 10% ethyl acetate/hexanes), the solvent was evaporated under reduced pressure. The reaction mixture was diluted with ethyl acetate (400 mL) and the reaction mixture was washed with water, saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered off and concentrated in vacuo to give as a brown oil. The crude compound was purified by column chromatography (10% ethyl acetate/hexanes). Compound 5 was obtained as a light brown solid (6.5 g, 47%).

화합물 6의 합성Synthesis of compound 6

칼륨 카르보네이트(7.4 g, 0.054 mol)를 주변 온도에서 메탄올(150 mL) 및 물(50 mL) 혼합물 중 화합물 5(6.5 g, 0.018 mol)의 용액에 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 밤새 환류 가열하였다. 반응을 완료한 후에(20% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 주변 온도까지 냉각시키고, 용매를 진공 중에서 농축하였다. 잔부를 에틸아세테이트(200 mL) 중에 취하고, 물 및 염수로 세척하고, 이후에 건조시키고(소듐 설페이트), 여과하고, 용매를 진공 중에서 농축하여 갈색 고체로서 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(20% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 6을 오렌지색 고체(3.3 g, 72%)로서 수득하였다.Potassium carbonate (7.4 g, 0.054 mol) was added to a solution of compound 5 (6.5 g, 0.018 mol) in a mixture of methanol (150 mL) and water (50 mL) at ambient temperature. The resulting suspension was heated to reflux overnight. After completion of the reaction (monitored by TLC using 20% ethyl acetate/hexanes), the reaction mixture was cooled to ambient temperature and the solvent was concentrated in vacuo. The residue was taken up in ethyl acetate (200 mL), washed with water and brine, then dried (sodium sulfate), filtered and the solvent concentrated in vacuo to give a brown solid. The crude compound was purified by column chromatography (20% ethyl acetate/hexanes). Compound 6 was obtained as an orange solid (3.3 g, 72%).

화합물 화합물 I(CV-8686)의 합성Synthesis of compound compound I (CV-8686)

0℃에서 아르곤 하에서의 건조된 100 mL 2구 둥근바닥 플라스크에 디메틸포름아미드(20 mL)를 첨가하였다. POCl3(0.6 g, 0.0038 mol)을 10분에 걸쳐 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 0℃에서 30분 교반 후에, 디메틸포름아미드(5 mL) 중 화합물 6(1.0 g, 0.0038 mol)의 용액을 10분에 걸쳐 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 밤새 교반하였다. 반응을 완료한 후에(20% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 소듐 바이카르보네이트 수용액(150 mL)에 붓고, 1시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 고체로서 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(0 내지 20% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 I(CV-8686)을 연한 핑크색 고체(0.84 g, 75%)로서 수득하였다.Dimethylformamide (20 mL) was added to a dried 100 mL two-necked round-bottom flask at 0°C under argon. POCl 3 (0.6 g, 0.0038 mol) was added slowly over 10 minutes maintaining the internal temperature below 5°C. After stirring at 0° C. for 30 minutes, a solution of compound 6 (1.0 g, 0.0038 mol) in dimethylformamide (5 mL) was added slowly over 10 minutes maintaining the internal temperature below 5° C. The resulting mixture was stirred overnight at ambient temperature. After completion of the reaction (monitored by TLC using 20% ethyl acetate/hexanes), the reaction mixture was poured into aqueous sodium bicarbonate solution (150 mL) and stirred for 1 hour. The resulting mixture was extracted with ethyl acetate (2 x 100 mL). The organic layers were combined, washed with water, saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered off and concentrated in vacuo to give a brown solid. The crude compound was purified by column chromatography (0-20% ethyl acetate/hexanes). Compound I (CV-8686) was obtained as a pale pink solid (0.84 g, 75%).

HPLC 순도: 97.01% (면적%). 1H-NMR, 13C 스펙트럼은 이러한 구조와 일치한다. ESI-MS: C19H17N2O에 대한 이론치(M + H)+: 289, 실험치: 289.1HPLC purity: 97.01% (area %). 1 H-NMR, 13 C spectrum is consistent with this structure. ESI-MS: theoretical value for C 19 H 17 N 2 O (M + H) + : 289, empirical value: 289.1

화합물 화합물 IV(CV-8687)의 합성Synthesis of compound compound IV (CV-8687)

진한 HCl(0.3 mL)을 주변 온도에서 테트라하이드로푸란(125 mL) 중 화합물 I(1.0 g)의 용액에 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 밤새 환류 가열하였다. 반응을 완료한 후에(40% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 주변 온도까지 냉각시키고, 1시간 동안 교반하였다. 고형물을 여과하고, 테트라하이드로푸란(20 mL)으로 세척하고, 건조시켜 화합물 IV(CV-8687)를 담황색 고체(0.84 g, 89%)로서 수득하였다.Concentrated HCl (0.3 mL) was added to a solution of compound I (1.0 g) in tetrahydrofuran (125 mL) at ambient temperature. The resulting mixture was heated to reflux overnight. After completion of the reaction (monitored by TLC using 40% ethyl acetate/hexanes), the reaction mixture was cooled to ambient temperature and stirred for 1 h. The solid was filtered, washed with tetrahydrofuran (20 mL) and dried to give compound IV (CV-8687) as a pale yellow solid (0.84 g, 89%).

HPLC 순도: 98.4% (면적%). 1H-NMR, 13C 스펙트럼은 이러한 구조와 일치한다. ESI-MS: C19H15N2에 대한 이론치(M + H)+: 271, 실험치: 271.3.HPLC purity: 98.4% (area %). 1 H-NMR, 13 C spectrum is consistent with this structure. ESI-MS: theoretical value for C 19 H 15 N 2 (M + H) + : 271, empirical value: 271.3.

화합물 II("CV-8688")를 도 2c에 도시된 반응식에 딸 k합성하였다.Compound II (“CV-8688”) was synthesized with daughter k in the scheme shown in FIG. 2C.

화합물 7의 합성Synthesis of compound 7

구리 아이오다이드(0.53 g, 10% mol) 및 PdCl2(PPh3)4(1.0 g, 5% mol)를 주변 온도에서 트리에틸아민(150 mL) 중 화합물 1(9.0 g, 0.03 mol), 3-메톡시-1-부틴(2.8 g, 0. 035 mol)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 주변 온도에서 2시간에 걸쳐 교반한 후에, 반응을 완료하였다(10% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(300 mL)로 희석하고, 반응 혼합물을 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 오일로서 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(10% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 7을 담황색 액체(7.0 g, 90%)로서 수득하였다.Copper iodide (0.53 g, 10% mol) and PdCl 2 (PPh 3 ) 4 (1.0 g, 5% mol) were mixed with compound 1 (9.0 g, 0.03 mol) in triethylamine (150 mL) at ambient temperature, To a degassed solution of 3-methoxy-1-butyne (2.8 g, 0.035 mol) was added. After stirring at ambient temperature over 2 h, the reaction was complete (monitored by TLC using 10% ethyl acetate/hexanes), the reaction mixture was diluted with ethyl acetate (300 mL), the reaction mixture was diluted with water, Washed with saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered off and concentrated in vacuo to give as a brown oil. The crude compound was purified by column chromatography (10% ethyl acetate/hexanes). Compound 7 was obtained as a pale yellow liquid (7.0 g, 90%).

화합물 8의 합성Synthesis of compound 8

오븐-건조 플라스크에 디옥산(250 mL) 중 PtCl2(0.68 g, 0.0025 mol), Na2CO3(4.0 g, 0.038 mol), 인돌(6.0 g, 0.05 mol) 및 화합물 7(10.0 g, 0.025 mol)을 첨가하였다. 플라스크를 질소로 탈기시키고, 시일링하고, 밤새 100℃로 가열하였다. 반응을 완료한 후에(10% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(400 mL)로 희석하고, 반응 혼합물을 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 오일로서 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(10% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 8을 밝은 갈색 고체(3.5 g, 77%)로서 수득하였다. PtCl 2 (0.68 g, 0.0025 mol), Na 2 CO 3 (4.0 g, 0.038 mol), indole (6.0 g, 0.05 mol) and compound 7 (10.0 g, 0.025) in dioxane (250 mL) in an oven-dried flask mol) was added. The flask was degassed with nitrogen, sealed and heated to 100° C. overnight. After completion of the reaction (monitored by TLC using 10% ethyl acetate/hexanes), the solvent was evaporated under reduced pressure. The reaction mixture was diluted with ethyl acetate (400 mL) and the reaction mixture was washed with water, saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered off and concentrated in vacuo to give as a brown oil. The crude compound was purified by column chromatography (10% ethyl acetate/hexanes). Compound 8 was obtained as a light brown solid (3.5 g, 77%).

화합물 9의 합성Synthesis of compound 9

칼륨 카르보네이트(3.8 g, 0.027 mol)를 주변 온도에서 메탄올(75 mL) 및 물(25 mL) 혼합물 중 화합물 8(3.3 g, 0.0091 mol)의 용액에 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 밤새 환류 가열하였다. 반응을 완료한 후에(20% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 주변 온도까지 냉각시키고, 용매를 진공 중에서 농축하였다. 잔부를 에틸아세테이트(200 mL)에서 취하고, 물 및 염수로 세척하고, 이후에 건조시키고(소듐 설페이트), 여과하고, 용매를 진공 중에서 농축하여 갈색 고체로서 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(20% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 9를 오렌지색 고체(2.1 g, 88%)로서 수득하였다.Potassium carbonate (3.8 g, 0.027 mol) was added to a solution of compound 8 (3.3 g, 0.0091 mol) in a mixture of methanol (75 mL) and water (25 mL) at ambient temperature. The resulting suspension was heated to reflux overnight. After completion of the reaction (monitored by TLC using 20% ethyl acetate/hexanes), the reaction mixture was cooled to ambient temperature and the solvent was concentrated in vacuo. The residue was taken up in ethyl acetate (200 mL), washed with water and brine, then dried (sodium sulfate), filtered and the solvent was concentrated in vacuo to give a brown solid. The crude compound was purified by column chromatography (20% ethyl acetate/hexanes). Compound 9 was obtained as an orange solid (2.1 g, 88%).

화합물 화합물 II(CV-8688)의 합성Synthesis of compound compound II (CV-8688)

0℃에서 아르곤 하에서의 건조된 100 mL 2구 둥근바닥 플라스크에, 디메틸포름아미드(20 mL)를 첨가하였다. POCl3(0.76 g, 0.005 mol)을 10분에 걸쳐 내부 온도를 5℃ 미만을 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 0℃에서 30분 교반 후에, 디메틸포름아미드(5 mL) 중 화합물 9(1.3 g, 0.005 mol)의 용액을 10분에 걸쳐 내부 온도를 5℃ 미만을 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 주변 온도에서 밤새 교반하였다. 반응을 완료한 후에(20% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 소듐 바이카르보네이트 수용액(150 mL)에 붓고, 1시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 고체로서 수득하였다. 미정제 화합물을 클로로포름(25 mL) 중에 결정화하였다. 화합물 II(CV-8688)를 연한 핑크색 고체(0.81 g, 53%)로서 수득하였다.To a dried 100 mL two-necked round-bottom flask at 0° C. under argon, dimethylformamide (20 mL) was added. POCl 3 (0.76 g, 0.005 mol) was added slowly over 10 minutes maintaining the internal temperature below 5°C. After stirring at 0° C. for 30 minutes, a solution of compound 9 (1.3 g, 0.005 mol) in dimethylformamide (5 mL) was added slowly over 10 minutes maintaining the internal temperature below 5° C. The resulting mixture was stirred overnight at ambient temperature. After completion of the reaction (monitored by TLC using 20% ethyl acetate/hexanes), the reaction mixture was poured into aqueous sodium bicarbonate solution (150 mL) and stirred for 1 hour. The resulting mixture was extracted with ethyl acetate (2 x 100 mL). The organic layers were combined, washed with water, saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered off and concentrated in vacuo to give a brown solid. The crude compound was crystallized in chloroform (25 mL). Compound II (CV-8688) was obtained as a pale pink solid (0.81 g, 53%).

HPLC 순도: 98.94% (면적%). 1H-NMR, 13C 스펙트럼은 이러한 구조와 일치한다. ESI-MS: C19H17N2O에 대한 이론치(M + H)+: 289, 실험치: 289.0.HPLC purity: 98.94% (area %). 1 H-NMR, 13 C spectrum is consistent with this structure. ESI-MS: theoretical (M + H) + : 289 for C 19 H 17 N 2 O, empirical: 289.0.

실시예 6Example 6

세포 모폴로지cell morphology

다양한 처리 후 통상적인 세포 모폴로지는 도 5a-5k, 6a-6k, 7a-7k, 8a-8k, 9a-9k, 10a-10k, 11a-11k, 및 12a-12k에 도시되어 있다. en 세포주 모두의 모폴로지는 100 μM의 CV-8684 및 CV-8688뿐만 아니라 6시간의 스타우로스포린 처리에 유의미하게 영향을 받았다. CV-8685는 100 μM에서 WM115에만 영향을 미치는 것으로 나타났다.Typical cell morphologies after various treatments are shown in Figures 5a-5k, 6a-6k, 7a-7k, 8a-8k, 9a-9k, 10a-10k, 11a-11k, and 12a-12k. The morphologies of both en cell lines were significantly affected by treatment with 100 μM of CV-8684 and CV-8688, as well as 6 h of staurosporine treatment. CV-8685 was shown to only affect WM115 at 100 μM.

실시예 7Example 7

말라세진 및 말라세진 유도체의 아폽토시스-유도 활성 - 예비 아넥신 V 검정Apoptosis-Inducing Activity of Malassezine and Malassezine Derivatives - Preliminary Annexin V Assay

물질 및 시약Substances and reagents

아넥신 V-FITC 검정 키트를 Beyotime Biotechnology로부터 구매하였으며, RPMI 1640 배지 및 둘베코 변형 이글 배지("DMEM")를 Gibco로부터 구매하였으며, 우태아혈청("FBS")을 Invitrogen로부터 구매하였으며, 안정화된 항생제 항진균제 용액(100x)을 Sigma로부터 구매하였으며, 0.25% 트립신-EDTA(1X), 페놀 레드를 Invitrogen으로부터 구매하였다.Annexin V-FITC assay kit was purchased from Beyotime Biotechnology, RPMI 1640 medium and Dulbecco's modified Eagle medium ("DMEM") were purchased from Gibco, and fetal bovine serum ("FBS") was purchased from Invitrogen, stabilized Antibiotics Antifungal solution (100x) was purchased from Sigma, 0.25% trypsin-EDTA (1X), phenol red was purchased from Invitrogen.

세포 배양물cell culture

MeWo(ATCC® HTB-65™) 및 WM115(ATCC® CRL-1675) 세포를 ATCC(Manassas, VA)로부터 구매하였고, 하기에서 유지시켰다: MeWo의 경우: 10% FBS가 보충된 DMEM; WM115의 경우: 10% FBS(10% FBS, 1% 안정화된 항생제 항진균제 용액)가 보충된 RPMI 1640.MeWo (ATCC® HTB-65™) and WM115 (ATCC® CRL-1675) cells were purchased from ATCC (Manassas, VA) and maintained in: For MeWo: DMEM supplemented with 10% FBS; For WM115: RPMI 1640 supplemented with 10% FBS (10% FBS, 1% stabilized antibiotic antifungal solution).

연구 요약Study Summary

아폽토시스의 중간 단계에서, 포스파티딜세린("PS")을 세포막의 내부 소엽에서 외부 소엽으로 전위시켜, PS를 세포외 환경에 노출시켰으며, 여기서, 이를 검출할 수 있다. 고 형광 아넥신 V 컨쥬게이트는 PS의 외부화를 연구하기 위한 빠르고 신뢰성 있는 검출 방법을 제공한다.In the intermediate stage of apoptosis, phosphatidylserine (“PS”) is translocated from the inner lobule to the outer lobule of the cell membrane, exposing PS to the extracellular environment, where it can be detected. High fluorescence annexin V conjugates provide a fast and reliable detection method to study the externalization of PS.

제1 연구 세트 동안에, MeWo 및 WM115 세포 둘 모두를 100 μM로부터 출발하여 3-배 희석으로 10회 용량으로 시험 화합물로 처리하였다. 스타우로스포린을 양성 대조군으로서 사용하였다. 6시간 처리 후, 세포 아폽토시스를 아넥신 V 검정을 이용하여 평가하였다. 평가된 시험 화합물은 CV-8684, CV-8685, CV-8686, CV-8687, 및 CV-8688이었다.During the first study set, both MeWo and WM115 cells were treated with test compounds in 10 doses in 3-fold dilutions starting at 100 μM. Staurosporine was used as a positive control. After 6 h treatment, cell apoptosis was assessed using the Annexin V assay. The test compounds evaluated were CV-8684, CV-8685, CV-8686, CV-8687, and CV-8688.

검정 절차Assay procedure

세포 시딩을 위해, 세포를 수확하고, 세포수를 Countess® 세포 카운터를 이용하여 결정하였다. 이후에, 세포를 배양 배지로 요망되는 밀도까지 희석하였다. 웰 당 40 ㎕의 세포 현택액을 384-웰 플레이트(Corning 3712 - 투명 바닥 플레이트)에서 요망되는 수의 웰에 첨가하였다. 최종 세포 밀도는 6,000개 세포/웰이었다. 플레이팅 후에, 플레이트를 37℃ 및 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다.For cell seeding, cells were harvested and cell number determined using a Countess® cell counter. The cells were then diluted with culture medium to the desired density. 40 μl of cell suspension per well was added to the desired number of wells in a 384-well plate (Corning 3712—clear bottom plate). The final cell density was 6,000 cells/well. After plating, the plates were incubated overnight at 37° C. and 5% CO 2 .

화합물 소스 플레이트를 제조하기 위해, 각 시험 화합물을 DMSO 중에 10 mM 스톡까지 용해하였다. 3배 일련 희석을 EVO200™ 액체 핸들러(TECAN)를 이용하여 10개 농도의 시험 화합물을 생성하였다. 0.1% DMSO을 비히클(음성) 대조군으로서 사용하였다. 이후에, 화합물 소스 플레이트를 실온에서 1분 동안 1,000 RPM으로 회전시키고, 플레이트 쉐이커를 이용하여 2분 동안 교반하였다.To prepare compound source plates, each test compound was dissolved in DMSO to a 10 mM stock. Three-fold serial dilutions were made using an EVO200™ liquid handler (TECAN) to yield 10 concentrations of test compound. 0.1% DMSO was used as vehicle (negative) control. Then, the compound source plate was rotated at 1,000 RPM for 1 minute at room temperature, and stirred for 2 minutes using a plate shaker.

화합물 처리를 위해, 40 nL의 화합물을 액체 핸들러 Echo550(LabCyte Inc.)을 이용하여 화합물 소스 플레이트에서 384-웰 배양 플레이트로 옮겼다. 6시간 인큐베이션 후에, 플레이트를 검출을 위해 인큐베이터로부터 제거하였다.For compound treatment, 40 nL of compound was transferred from the compound source plate to a 384-well culture plate using a liquid handler Echo550 (LabCyte Inc.). After a 6 hour incubation, the plate was removed from the incubator for detection.

사전 아넥신 V 검정을 위해, 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고, 실온에서 15분 동안 평형화하였다. 이후에, 배양 배지를 제거하였다. 20 ㎕의 사전-혼합된 아넥신 V-FITC 및 Hoechst33342 염료 작업 용액을 각 웰에 첨가하였다. 이후에, 세포를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 시일링하고, 1분 동안 1,000 RPM으로 원심분리하여 버블을 제거하였다. 그 후에, 플레이트를 Acumen eX3 플레이트 판독기를 이용하여 판독하였다. 상대 활성을 하기 수학식에 따라 계산하였으며: 활성 (%) = 100% x (카운트아넥신 V / 카운트전체 세포), EC50을 GraphPad Prism(v. 5.01)을 이용하여 계산하였다.For the pre-annexin V assay, the plate was removed from the incubator and equilibrated for 15 min at room temperature. Thereafter, the culture medium was removed. 20 μl of pre-mixed Annexin V-FITC and Hoechst33342 dye working solution was added to each well. The cells were then incubated for 20 minutes at room temperature. The plate was sealed and centrifuged at 1,000 RPM for 1 minute to remove bubbles. The plates were then read using an Acumen eX3 plate reader. Relative activity was calculated according to the following equation: activity (%) = 100% x (count annexin V / count total cells ), EC 50 was calculated using GraphPad Prism (v. 5.01).

결과result

상기에서 논의된 사전 스크린에서, CV-8688은 MeWo 세포의 아넥신 V 염색을 현저하게 증가시켰으며, EC50은 908.57 nM이었다. 양성 대조군인 스타우로스포린은 두 세포주 모두에서 아넥신 V 염색을 크게 증가시켰다(도 3a 내지 도 3m).In the prior screen discussed above, CV-8688 significantly increased Annexin V staining of MeWo cells, with an EC 50 of 908.57 nM. The positive control, staurosporin, significantly increased the annexin V staining in both cell lines ( FIGS. 3A to 3M ).

실시예 8Example 8

말라세진 및 말라세진 유도체의 아폽토시스-유도 활성 - 아넥신 V 검정을 이용한 추가 평가Apoptosis-Inducing Activity of Malassezine and Malassezine Derivatives - Further Evaluation Using Annexin V Assay

연구 요약Study Summary

아폽토시스에 대한 시험 화합물의 영향을 추가로 조사하기 위해, MeWo 및 WM115 세포 둘 모두에 대해 아폽토시스의 상이한 단계를 다루는 다중 판독을 수행하였다. 두 세포 타입 모두를 시험 화합물로 3개 용량(100 μM, 10 μM, 및 1 μM)으로 처리하였다. 스타우로스포린을 양성 대조군으로서 사용하였다. 요망되는 처리 기간(6, 24, 48, 또는 72시간) 후에, 시험 화합물에 노출 후 아넥신 V 결합을 나타내는 세포의 백분율을 측정함으로써 아폽토시스를 평가하였다. 평가된 시험 화합물은 CV-8684, CV-8685, 및 CV-8688이었다.To further investigate the effect of test compounds on apoptosis, multiple reads covering different stages of apoptosis were performed on both MeWo and WM115 cells. Both cell types were treated with test compound in three doses (100 μM, 10 μM, and 1 μM). Staurosporine was used as a positive control. After the desired treatment period (6, 24, 48, or 72 hours), apoptosis was assessed by determining the percentage of cells exhibiting Annexin V binding following exposure to the test compound. The test compounds evaluated were CV-8684, CV-8685, and CV-8688.

검정 절차Assay procedure

세포 시딩을 하기를 제외하고 상기에 논의된 바와 같이 수행하였다: 최종 세포 밀도는 6시간 및 24시간 검출을 위해 4,000개 세포/웰이었으며, 48시간 및 72시간 검출을 위해 2,000개 세포/웰이 사용되었다. 각 시점을 위해, 384-웰 투명 바닥 플레이트(Corning 3712) 및 솔리드 백색 바닥 플레이트(Corning 3570)를 준비하였다. 플레이트를 상기에 논의된 바와 같이 인큐베이션하였다.Cell seeding was performed as discussed above with the following exceptions: final cell densities were 4,000 cells/well for 6 h and 24 h detection and 2,000 cells/well for 48 h and 72 h detection. became For each time point, a 384-well clear bottom plate (Corning 3712) and a solid white bottom plate (Corning 3570) were prepared. Plates were incubated as discussed above.

화합물 소스 플레이트의 제조를 위해, 각 시험 화합물을 DMSO 중에 10 mM 스톡까지 용해하였다. 2개의 추가 농도를 1 mM 및 0.1 mM까지의 10배 희석에 의해 생성하였다. 스타우로스포린을 양성 대조군으로서 사용하였고, 1% DMSO를 비히클(음성) 대조군으로서 사용하였다. 화합물 소스 플레이트를 1분 동안 실온에서 1,000 RPM으로 회전시키고, 플레이트 쉐이커를 이용하여 2분 동안 교반하였다.For the preparation of compound source plates, each test compound was dissolved in DMSO to a 10 mM stock. Two additional concentrations were generated by 10-fold dilutions to 1 mM and 0.1 mM. Staurosporine was used as a positive control and 1% DMSO was used as a vehicle (negative) control. The compound source plate was rotated at 1,000 RPM at room temperature for 1 minute and stirred for 2 minutes using a plate shaker.

400 nL의 시험 화합물을 Echo550 액체 핸들러를 이용하여 화합물 소스 플레이트에서 384-웰 배양 플레이트로 옮겼다. 6, 24, 48, 및 72시간 후에, 플레이트를 검출을 위해 인큐베이터로부터 제거하였다.400 nL of test compound was transferred from the compound source plate to a 384-well culture plate using an Echo550 liquid handler. After 6, 24, 48, and 72 hours, the plates were removed from the incubator for detection.

아넥신 V 검정을 위해, 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고, 실온에서 15분 동안 평형화하였다. 배양 배지를 제거하고, 세포를 PBS로 2회 세척하였다. 20 ㎕의 사전-혼합된 아넥신 V-FITC 작업 용액을 각 웰에 첨가하였다. 세포를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 Acumen eX3을 이용하여 판독하여 FITC-양성 세포의 수를 카운팅하였다. 상대 활성을 하기 수학식에 따라 계산하였다: 상대 활성 (%) = 100% x (카운트샘플 / 카운트비히클)For the Annexin V assay, the plates were removed from the incubator and equilibrated for 15 minutes at room temperature. The culture medium was removed and the cells were washed twice with PBS. 20 μl of pre-mixed Annexin V-FITC working solution was added to each well. Cells were incubated for 20 minutes at room temperature. Plates were read using an Acumen eX3 to count the number of FITC-positive cells. Relative activity was calculated according to the following equation: Relative Activity (%) = 100% x (Count Samples / Count Vehicle )

결과result

CV-8684는 MeWo 및 WM115 세포 둘 모두에 대한 6시간의 처리 후 시험된 최고 농도에서 아폽토시스를 유도하였다. CV-8685는 WM115에 대한 24시간 처리로 유도 효과를 나타낸 반면, 48시간 처리는 두 세포 타입 모두에서 아폽토시스를 유도하는 것으로 나타났다. 최종적으로, CV-8688은 두 세포 타입 모두에서 용량-의존 방식으로 처리 6시간 내에 유도 효과를 나타내었다(도 4a 내지 도 4l).CV-8684 induced apoptosis at the highest concentration tested after 6 h of treatment on both MeWo and WM115 cells. CV-8685 showed an inducing effect on WM115 with 24 h treatment, whereas 48 h treatment was shown to induce apoptosis in both cell types. Finally, CV-8688 showed an inducing effect within 6 hours of treatment in a dose-dependent manner in both cell types ( FIGS. 4A to 4L ).

실시예 9Example 9

말라세진 및 말라세진 유도체에 대한 노출 후 세포 생존력 - CellTiter-Glo® 검정Cell Viability After Exposure to Malassezine and Malassezine Derivatives - CellTiter-Glo® Assay

검정 절차Assay procedure

CellTiter-Glo® 2.0 검정을 Promega로부터 구매하였다. 세포 시딩, 화합물 소스 플레이트의 제조, 및 시험 화합물에 대한 세포의 노출을 실시예 8에 기술된 바와 같이 수행하였다.CellTiter-Glo® 2.0 assay was purchased from Promega. Cell seeding, preparation of compound source plates, and exposure of cells to test compounds were performed as described in Example 8.

CellTiter-Glo® 검정을 위해, 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고, 실온에서 15분 동안 평형화하였다. CellTiter-Glo® 시약을 해동하고, 실험 전에 실온까지 평형화하였다. 40 ㎕의 CellTiter-Glo® 시약을 이후에 검출을 위해 각 웰에 첨가하였다(배양 배지에 대해 1:1 비율로). 이후에 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하고, EnSpire(PerkinElmer) 플레이트 판독기를 이용하여 판독하였다. 잔류 활성을 하기 수학식에 따라 계산하였다: 잔류 활성 (%) = 100% x (Lum샘플 - Lumbkg) / (Lum비히클 - Lumbkg).For the CellTiter-Glo® assay, the plates were removed from the incubator and equilibrated for 15 minutes at room temperature. CellTiter-Glo® reagent was thawed and equilibrated to room temperature prior to experimentation. 40 μl of CellTiter-Glo® reagent was then added to each well for detection (in a 1:1 ratio to culture medium). Plates were then incubated for 30 min at room temperature and read using an EnSpire (PerkinElmer) plate reader. Residual activity was calculated according to the following equation: Residual activity (%) = 100% x (Lum sample - Lum bkg ) / (Lum vehicle - Lum bkg ).

결과result

CV-8684는 시험된 두 세포주 모두에서 세포 생존력의 용량-의존적 억제를 나타내었으며, 억제 효과는 MeWo 세포에서 더욱 강력하게 나타났다. CV-8685는 단지 24시간 처리 후에만 용량-의존 방식으로 WM115 세포 생존력에 대해 억제 효과를 나타내었다. CV-8688은 용량-의존 방식으로 두 세포 타입 모두의 생존력을 억제하였다. 양성 대조군인 스타우로스포린은 24시간 처리 후 두 세포주 모두에서 세포 생존력의 100% 억제를 발휘하였다(도 13a 내지 도 13k).CV-8684 showed a dose-dependent inhibition of cell viability in both cell lines tested, with the inhibitory effect being more potent in MeWo cells. CV-8685 showed an inhibitory effect on WM115 cell viability in a dose-dependent manner only after 24 h of treatment. CV-8688 inhibited the viability of both cell types in a dose-dependent manner. The positive control, staurosporin, exerted 100% inhibition of cell viability in both cell lines after 24 h treatment ( FIGS. 13A to 13K ).

실시예 10Example 10

말라세진 및 말라세진 유도체의 세포독성 - 락테이트 데하이드로게나아제 방출 검정Cytotoxicity of Malassezine and Malassezine Derivatives - Lactate Dehydrogenase Release Assay

연구 요약Study Summary

LDH 검정은 세포독성 및 세포분해에 대한 바이오마커로서 손상된 세포로부터 배지로 방출되는 락테이트 데하이드로게나아제("LDH")를 정량적으로 측정한다.The LDH assay quantitatively measures lactate dehydrogenase (“LDH”) released from damaged cells into the medium as a biomarker for cytotoxicity and cytolysis.

검정 절차Assay procedure

CytoTox-ONE™ 균일 막 무결정 검정을 Promega로부터 구매하였다. 세포 시딩, 화합물 소스 플레이트의 제조, 및 시험 화합물에 대한 세포의 노출을 실시예 8에 기술된 바와 같이 수행하였다.CytoTox-ONE™ Uniform Film Amorphous Assay was purchased from Promega. Cell seeding, preparation of compound source plates, and exposure of cells to test compounds were performed as described in Example 8.

LDH 방출 검정을 위해, 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고, 실온에서 15분 동안 평형화하였다. 이후에, 플레이트를 1분 동안 1,000 RPM으로 원심분리하였다. 20 ㎕의 세포 배양 배지를 신규한 384-웰 검정색 고체 솔리드 플레이트로 옮겼다. 이후에, 20 ㎕의 CytoTOX-ONE™을 각 웰에 첨가하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 그 후에, 10 ㎕의 정지 용액을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 1분 동안 500 rpm으로 교반하였다. 플레이트를 EnSpire 상에서 560 nm의 여기 파장 및 590 nm의 방출 파장을 이용하여 판독하였다. 상대 활성을 하기 수학식에 따라 계산하였다: 상대 활성 (%) = 100% x (Lum샘플 - Lumbkg) / (Lum비히클 - Lumbkg).For the LDH release assay, the plates were removed from the incubator and equilibrated for 15 minutes at room temperature. The plate was then centrifuged at 1,000 RPM for 1 minute. 20 μl of cell culture medium was transferred to a new 384-well black solid solid plate. Then, 20 μl of CytoTOX-ONE™ was added to each well and incubated for 10 minutes at room temperature. After that, 10 μl of stop solution was added to each well and the plate was stirred at 500 rpm for 1 minute. The plate was read on EnSpire using an excitation wavelength of 560 nm and an emission wavelength of 590 nm. Relative activity was calculated according to the following equation: Relative activity (%) = 100% x (Lum sample - Lum bkg ) / (Lum vehicle - Lum bkg ).

결과result

CV-8684는 72시간 인큐베이션 후 세포주에서 유의미한 방출을 유도하지 않았다. CV-8685눈 24시간 처리 후 MeWO 세포가 아닌 WM115 세포로부터 LDH 방출에 대한 용량-의존적 유도 효과를 나타내었다. CV-8688은 시험된 최고 농도에서 LDH 방출을 유도하였다(도 14a 내지 도 14l).CV-8684 did not induce significant release in cell lines after 72 h incubation. CV-8685 eyes showed a dose-dependent induction effect on LDH release from WM115 cells but not MeWO cells after 24 h treatment. CV-8688 induced LDH release at the highest concentrations tested ( FIGS. 14A-14L ).

실시예 11Example 11

말라세진 및 말라세진 유도체의 아릴탄화수소 수용체 활성화 가능성Possibility of activating aryl hydrocarbon receptors of malassezine and its derivatives.

검정 절차Assay procedure

HepG2-AhR-Luc 세포를 Pharmaron으로부터 구매하였으며, One-Glo 루시페라아제 검정 시스템을 Promega로부터 구매하였으며, DMEM을 Hyclone으로부터 구매하였으며, 페니실린/스트립토마이신을 Solabio로부터 구매하였다.HepG2-AhR-Luc cells were purchased from Pharmaron, One-Glo luciferase assay system was purchased from Promega, DMEM was purchased from Hyclone, and penicillin/stryptomycin was purchased from Solabio.

고함량 글루코오스 및 L-글루타민을 갖는 DMEM뿐만 아니라 10% FBS를 보충함으로써 안정하게 트랜스펙션된 HepG2 세포에 대한 배양 배지를 제조하였다.Culture medium for stably transfected HepG2 cells was prepared by supplementing 10% FBS as well as DMEM with high glucose and L-glutamine.

HepG2-AhR-Luc 세포를 T-75 플라스크에서 37℃, 5% CO2, 및 95% 상대 습도에서 배양하였다. 세포를 분리 및 분할 전에 80 내지 90% 컨플루언스에 도달하게 하였다.HepG2-AhR-Luc cells were cultured in T-75 flasks at 37° C., 5% CO 2 , and 95% relative humidity. Cells were allowed to reach 80-90% confluence prior to isolation and division.

배양된 세포를 5 mL PBS로 세정하였다. PBS를 흡입하고, 1.5 mL 트립신을 플라스크에 첨가하고, 세포를 37℃에서 대략 5분 동안 또는 세포가 분리되거 부유될 때까지 인큐베이션하였다. 과량의 혈청-함유 배지를 첨가함으로써 트립신을 비활성화시켰다.The cultured cells were washed with 5 mL PBS. PBS was aspirated, 1.5 mL trypsin was added to the flask, and cells were incubated at 37° C. for approximately 5 minutes or until cells detached or floated. Trypsin was inactivated by adding an excess of serum-containing medium.

세포 현탁액을 원뿔형 튜브로 옮기고, 세포를 펠렛화하기 위해 10분 동안 120 g으로 원심분리하였다. 세포를 적절한 밀도로 시딩 배지에 재현탁하였다. 40 ㎕의 세포를 384-웰 배양 플레이트로 옮겼다(5 x 103개의 세포/웰). 플레이트를 인큐베이터에서 37℃에서 24시간 동안 배치하였다.The cell suspension was transferred to a conical tube and centrifuged at 120 g for 10 min to pellet the cells. Cells were resuspended in seeding medium at the appropriate density. 40 μl of cells were transferred to a 384-well culture plate (5×10 3 cells/well). Plates were placed in an incubator at 37° C. for 24 hours.

이후에, 시험 화합물 및 오메프라졸 양성 대조군의 스톡 용액을 제조하였다. 40 nL의 화합물 용액을 Echo550을 이용하여 검정 플레이트로 옮겼다. 이후에, 플레이트를 화합물 처리를 위해 인큐베이터에 다시 배치하였다.Then, stock solutions of test compound and omeprazole positive control were prepared. 40 nL of the compound solution was transferred to the assay plate using an Echo550. Thereafter, the plate was placed back into the incubator for compound treatment.

이후에, 24시간 처리 후, 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고, 주변 온도에서 냉각하였다. 배양 배지와 동일한 30 ㎕ One-Glo 시약을 각 웰에 첨가하였다. 세포를 적어도 3분 동안 용해하고, 이후에, 광도계에서 측정하였다.Thereafter, after 24 hours of treatment, the plates were removed from the incubator and cooled at ambient temperature. 30 μl One-Glo reagent identical to the culture medium was added to each well. Cells were lysed for at least 3 minutes and then measured in a photometer.

용량 반응을 XLfit에서 비-선형 회귀 분석을 이용하여 그래프화하고, EC50 값을 또한 계산하였다.Dose response was graphed using non-linear regression analysis in XLfit and EC 50 values were also calculated.

결과result

AhR-루시페라아제 검정 결과는 도 15a 내지 도 15f에 도시되어 있다.The AhR-luciferase assay results are shown in FIGS. 15A-15F .

실시예 12Example 12

MelanoDerm™ 검정MelanoDerm™ Black

연구 요약Study Summary

본 연구의 목적은 후속 연구를 위한 용량 선택을 위해 반복 노출 후 MelanoDerm™ 피부 모델에 대한 시험 물품의 잠재적 진피 자극을 평가하는 것이다. 독성은 음성/용매 대조군-처리 조직에 비해 시험 물품-처리 조직에서 MTT(3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드)의 상대적 전환을 측정함으로써 결정될 것이다.The purpose of this study was to evaluate the potential dermal irritation of the test article on the MelanoDerm™ skin model after repeated exposure for dose selection for follow-up studies. Toxicity measures the relative conversion of MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) in test article-treated tissues compared to negative/solvent control-treated tissues will be decided by

MatTek Corporation(Ashland, MA)에서 제공된 MelanoDerm™ 피부 모델은 본 연구에서 사용될 것이다. MelanoDerm™ 조직은 정상, 인간-유래 표피 케라티노사이트(NHEK) 및 멜라닌 세포(NHM)로 이루어지며, 이는 인간 표피의 다층, 고도로 분화된 모델을 형성하기 위해 배양된 것이다. 공동-배양물 내의 NHM은 자발적인 멜라닌생성을 거쳐 다양한 수준의 침착의 조직을 초래한다. 배양물을 세포 배양 삽입물 상에서 공기-액체 계면에서 성장시켜, 피부 조절제를 국소 적용하였다. MelanoDerm™ 모델은 생체내-유사 모폴로지 및 초구조적 특징을 나타낸다. MelanoDerm™ 조직의 기저 세포 층에서 국소화된 NHM은 수지상이고, 조직의 층을 점진적으로 집단화하는 멜라닌 과립을 자발적으로 생성한다. 이에 따라, 음성 대조군에 비해 멜라닌의 생성을 억제하거나 자극시킬 수 있는 물질을 스크리닝하기 위해 시험 시스템을 사용할 수 있다.The MelanoDerm™ skin model provided by MatTek Corporation (Ashland, MA) will be used in this study. MelanoDerm™ tissue consists of normal, human-derived epidermal keratinocytes (NHEK) and melanocytes (NHM), which have been cultured to form a multilayered, highly differentiated model of the human epidermis. NHMs in co-cultures undergo spontaneous melanogenesis resulting in tissue of varying levels of deposition. Cultures were grown at the air-liquid interface on cell culture inserts to apply skin conditioning agents topically. The MelanoDerm™ model exhibits in vivo-like morphology and ultrastructural features. NHMs localized in the basal cell layer of MelanoDerm™ tissue are dendritic and spontaneously produce melanin granules that progressively aggregate the layers of the tissue. Accordingly, the test system can be used to screen for substances capable of inhibiting or stimulating the production of melanin compared to negative controls.

이러한 연구의 실험 설계는 가능한 경우 순 시험 물품(및/또는 적절한 경우 투약 용액)의 pH의 결정 및 반복 노출 후 상대 조직 생존력을 결정하기 위한 최종 검정으로 이루어진다. MelanoDerm™ 피부 모델은 총 7일 동안 시험 물품에 노출될 것이다. 시험 물품은 48시간 마다(이전 처리로부터 48±2시간의 시간프레임내에) MelanoDerm™ 피부 모델에 국소적으로 적용될 것이다. 시험 물품의 독성은 대조군 및 시험 물품-처리된 조직에서 MTT의 NAD(P)H-의존적 미소체 효소 감소(및 MTT의 숙시네이트 데하이드로게나아제 감소에 의해, 더 적은 정도로)에 의해 결정될 것이다[Berridge et al., 1996]. 데이터는 상대 생존(음성 대조군에 대한 MTT 변환)의 형태로 제공될 것이다.The experimental design of these studies consists, where possible, of the determination of the pH of the net test article (and/or the dosing solution, if appropriate) and a final assay to determine relative tissue viability after repeated exposure. The MelanoDerm™ skin model will be exposed to the test article for a total of 7 days. The test article will be topically applied to the MelanoDerm™ skin model every 48 hours (within a time frame of 48±2 hours from the previous treatment). The toxicity of the test article will be determined by the NAD(P)H-dependent microsomal enzyme reduction of MTT (and, to a lesser extent, by the succinate dehydrogenase reduction of MTT) in control and test article-treated tissues [ Berridge et al. , 1996]. Data will be presented in the form of relative survival (MTT conversion to negative control).

물질matter

MelanoDerm™ 유지 배지(EPI-100-LLMM) 및 MelanoDerm™ 피부 모델(MEL-300-A)을 MatTek Corporation에서 공급하였다. 1% 코지산(멸균, 탈이온수에서 제조됨) 및 MTT(3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드)을 Sigma에서 공급하였다. 2 mM L-글루타민(MTT 첨가 배지)을 함유한 둘베코 변형 이글 배지(DMEM)를 Quality Biological에서 공급하였다. 이소프로판올을 Aldrich에서 공급하였다. 멸균 Ca++ 및 Mg++ 부재 둘베코 포스페이트 완충 염수(CMF-DPBS)를 Invitrogen 또는 등가물에서 공급하였다. 멸균 탈이온수를 Quality Biological 또는 등가물에서 공급하였다. DMSO를 CiVenti Chem에서 공급하였다.MelanoDerm™ maintenance medium (EPI-100-LLMM) and MelanoDerm™ skin model (MEL-300-A) were supplied by MatTek Corporation. 1% kojic acid (prepared in sterile, deionized water) and MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) were supplied by Sigma. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) containing 2 mM L-glutamine (MTT-added medium) was supplied from Quality Biological. Isopropanol was supplied from Aldrich. Sterile Ca ++ and Mg ++ free Dulbecco's phosphate buffered saline (CMF-DPBS) was supplied from Invitrogen or equivalent. Sterile deionized water was supplied by Quality Biological or equivalent. DMSO was supplied by CiVenti Chem.

검정 절차 Assay procedure

시험 물품은 일반적으로 순수하게 시험되거나 스폰서에 의해 유도될 것이다(프로토콜 첨부 1 참조). 10 마이크로리터(10 ㎕) 또는 25 ㎕의 각 시험 물품은 상부 표면을 덮기 위해 조직 상에 직접적으로 적용될 것이다. 시험 물품의 특성(액체, 겔, 크림, 포움, 등)에 따라, 투약 디바이스, 메시 또는 조직의 표면 위에 시험 물품을 균일하게 살포하기 위한 다른 보조제의 사용이 필요할 수 있다.Test articles will generally be purely tested or induced by the sponsor (see Protocol Attachment 1). 10 microliters (10 μl) or 25 μl of each test article will be applied directly onto the tissue to cover the upper surface. Depending on the nature of the test article (liquid, gel, cream, foam, etc.), it may be necessary to use a dosing device, mesh, or other adjuvant to evenly spread the test article over the surface of the tissue.

투여일에, 각 시험 물품은 적절한 부피의 EPI-100-LLMM(또는 용해도 시험 동안 결정되는 경우 대안적인 용매)을 사용하여 적어도 200배로 희석될 것이다. EPI-100-LLMM 중 새로운 희석은 각 투여를 위해 제조될 것이다. 용액 제조물을 투여하기 위해 수행되는 최종 희석은 상기 및 연구 워크북에서 문서화된 용해도 평가로부터 결정될 것이다.On the day of dosing, each test article will be diluted at least 200-fold using an appropriate volume of EPI-100-LLMM (or an alternative solvent as determined during solubility testing). A fresh dilution in EPI-100-LLMM will be prepared for each dose. The final dilution performed to administer the solution preparation will be determined from the solubility assessment documented above and in the study workbook.

EPI-100-LLMM 중에 0.5%(v/v)로서 희석된 DMSO는 비히클 대조군으로서 사용되고 시험 물품 및 검정 대조군을 위해 사용되는 동일한 절차를 기초로 하여 조직(10 ㎕ 및 25 ㎕ 용량) 상에 투여될 것이다.DMSO diluted as 0.5% (v/v) in EPI-100-LLMM to be administered on tissues (10 μl and 25 μl doses) was used as vehicle control and based on the same procedure used for test article and assay control. will be.

시험 물품은 7일 시험 동안 48시간 마다(이전 처리로부터 48±2시간의 시간프레임 내에) MelanoDerm™ 조직에 국소적으로 적용될 것이다. 각각 10 마이크로리터 및 25 마이크로리터의 각 시험 물품은 각 조직에 적용될 것이다. 25 마이크로리터의 양성 및 음성 대조군 각각은 각 조직에 적용될 것이다.The test article will be topically applied to the MelanoDerm™ tissue every 48 hours (within a time frame of 48±2 hours from the previous treatment) during the 7 day trial. 10 microliters and 25 microliters, respectively, of each test article will be applied to each tissue. 25 microliters of each of the positive and negative controls will be applied to each tissue.

순 액체 시험 물품(및/또는 적절한 경우 투약 용액)의 pH는 가능한 경우에 결정될 것이다. pH는 pH 페이퍼(예를 들어, 추정하기 위해 0 내지 14의 pH 범위 및/또는 더욱 정밀 한 값을 결정하기 위해 5 내지 10의 pH 범위)를 사용하여 결정될 것이다. 더 좁은 범위 pH 페이퍼 상에서 통상적인 pH 증가는 대략 0.3 내지 0.5 pH 단위이다. pH 페이퍼 상에서 최대 증가는 1.0 pH 단위이다.The pH of the pure liquid test article (and/or dosing solution, where appropriate) will be determined where possible. The pH will be determined using a pH paper (eg, a pH range of 0 to 14 to estimate and/or a pH range of 5 to 10 to determine more precise values). A typical pH increase on narrower range pH paper is approximately 0.3 to 0.5 pH units. The maximum increase on pH paper is 1.0 pH units.

최종 검정은 음성 대조군 및 양성 대조군을 포함할 것이다. 검정 음성 대조군으로 지정된 MelanoDerm™ 조직은 25 ㎕의 멸균, 탈이온수로 처리될 것이다. 25 마이크로리터의 1% 코지산(멸균 탈이온수에서 제조되고 제조 시에 여과됨)은 검정 양성 대조군으로 지정된 조직을 투여하기 위해 사용될 것이다. 1% 코지산은 제조 후 2시간 내에 사용될 때까지 알루미늄 호일이 덮혀진 튜브에 저장될 것이다. 음성 및 양성 대조군 노출 시간은 시험 물품에 대해 사용된 것과 동일할 것이다.The final assay will include negative and positive controls. MelanoDerm™ tissues designated as assay negative controls will be treated with 25 μl of sterile, deionized water. 25 microliters of 1% kojic acid (prepared in sterile deionized water and filtered at the time of preparation) will be used to administer the tissue designated as the assay positive control. 1% kojic acid will be stored in aluminum foil covered tubes until used within 2 hours of manufacture. The negative and positive control exposure times will be the same as those used for the test article.

MTT를 직접적으로 감소시키는 각 시험 물품의 능력을 평가하는 것이 필요하다. 1.0 mg/mL MTT 용액은 하기에 기술되는 바와 같이 MTT 첨가 배지에서 제조될 것이다. 대략 25 ㎕의 시험 물품은 1 mL의 MTT 용액에 첨가될 것이며, 혼합물은 어두운 곳에서 37℃ ± 1℃에서 1 내지 3시간 동안 인큐베이션될 것이다. 음성 대조군, 25 ㎕의 멸균, 탈이온수는 동시에 시험될 것이다. MTT 용액 칼라가 청색/보라색으로 변하는 경우, 시험 물품은 MTT를 감소시키는 것으로 추정된다. 수불용성 시험 물질은 시험 물품과 배지 사이의 계면에서만 직접 감소(어두움)를 나타낼 수 있다.It is necessary to evaluate the ability of each test article to directly reduce MTT. A 1.0 mg/mL MTT solution will be prepared in MTT-added medium as described below. Approximately 25 μl of the test article will be added to 1 mL of MTT solution and the mixture will be incubated in the dark at 37° C.±1° C. for 1-3 hours. A negative control, 25 μl of sterile, deionized water will be tested simultaneously. If the MTT solution color changes to blue/purple, the test article is presumed to have reduced MTT. A water-insoluble test substance may show a direct decrease (darkness) only at the interface between the test article and the medium.

시험 물품(들)에 대한 MTT 직접 감소 시험은 이전에 독립 연구에서 수행될 수 있다. 이러한 경우에, MTT 직접 감소 시험의 결과는 이러한 특정 연구를 위해 이용될 수 있으며, 초기 연구가 참조될 것이다.MTT direct reduction testing for the test article(s) may previously be performed in an independent study. In this case, the results of the MTT direct reduction test can be used for this specific study, and the initial study will be referenced.

조직 노출: 배양을 개시하고 적어도 16시간 후에, 2개의 MelanoDerm™ 조직(0일에 처리되지 않은 것으로 여겨짐)은 검정 0시간에 조직의 침착 정도의 시각적 평가를 돕기 위해 디지털 카메라를 이용하여 촬영될 것이다. 조직의 이미지를 수집하기 위해 이용되는 정확한 절차는 본 연구 워크북 및 리포터에서 명시될 것이다. MelanoDerm™ 조직은 CMF-DPBS로 세정될 것이고, 멸균 흡수성 페이퍼 상에서 블롯팅 건조되고 과량의 액체를 제거할 것이다. MelanoDerm™ 조직은 세정 후 적절한 MTT 함유 웰로 옮겨지고, MTT 검정 섹션에 기술된 바와 같이 MTT 검정에서 가공될 것이다.Tissue Exposure: At least 16 hours after initiation of culture, two MelanoDerm™ tissues (considered untreated at Day 0) will be imaged using a digital camera to aid in visual assessment of the extent of tissue deposition at time 0 of assay. . The exact procedure used to collect images of tissues will be specified in this study workbook and reporter. MelanoDerm™ tissue will be cleaned with CMF-DPBS, blot dried on sterile absorbent paper and excess liquid will be removed. MelanoDerm™ tissue will be transferred to appropriate MTT containing wells after washing and processed in the MTT assay as described in the MTT assay section.

배양을 개시하고 적어도 16시간 후에, 조직은 0.9 mL의 새로운, 사전-가온된 EPI-100-LLMM을 함유한 신규한 6-웰 플레이트로 이동될 것이다. 시험은 7일 시간프레임에 걸쳐 수행될 것이다. 2개의 조직은 첫째날에 국소 처리되고, 48시간 마다(이전 처리로부터 48 +/-2시간의 시간프레임 내에) 각각 10 및 25 마이크로리터의 각 시험 물품으로 처리될 것이다. 배지는 매일 새로 교체될 것이며(이전 재공급으로부터 24+/-2시간의 시간프레임내에); 조직은 0.9 mL의 새로운, 사전-가온된 EPI-100-LLMM을 함유한 신규한 6-웰 플레이트로 이동될 것이다.At least 16 hours after initiating incubation, the tissue will be transferred to a new 6-well plate containing 0.9 mL of fresh, pre-warmed EPI-100-LLMM. The test will be conducted over a 7 day timeframe. Two tissues will be treated topically on day 1 and treated with 10 and 25 microliters of each test article, respectively, every 48 hours (within a time frame of 48 +/- 2 hours from the previous treatment). Medium will be refreshed daily (within a timeframe of 24+/-2 hours from the previous refeed); The tissue will be transferred to a new 6-well plate containing 0.9 mL of fresh, pre-warmed EPI-100-LLMM.

2개의 조직은 첫째날에 국소 처리되고, 48시간 마다(이전 처리로부터 48 +/-2시간의 시간프레임 내에) 25 ㎕의 양성 및 음성 대조군으로 처리될 것이다. 배지는 매일 새로 교체될 것이며(이전 재공급으로부터 24+/-2시간의 시간프레임내에); 조직은 0.9 mL의 새로운, 사전-가온된 EPI-100-LLMM을 함유한 신규한 6-웰 플레이트로 이동될 것이다. 조직은 적절한 노출 시간 동안 공기 중 5±1% CO2의 습윤화된 대기에서 37±1℃에서(표준 배양 조건) 인큐베이션될 것이다.Two tissues will be treated topically on day 1 and will be treated with 25 μl of positive and negative controls every 48 hours (within a timeframe of 48 +/- 2 hours from previous treatment). Medium will be refreshed daily (within a timeframe of 24+/-2 hours from the previous refeed); The tissue will be transferred to a new 6-well plate containing 0.9 mL of fresh, pre-warmed EPI-100-LLMM. Tissues will be incubated at 37±1° C. (standard culture conditions) in a humidified atmosphere of 5±1% CO 2 in air for an appropriate exposure time.

투여일에, MelanoDerm™ 조직은 먼저 임의의 잔류 시험 물품을 제거하기 위해 약 500 ㎕의 CMF-DPBS를 사용하여 3회 부드럽게 세정될 것이다. 이후에, 조직은 0.9 mL의 새로운, 사전-가온된 EPI-100-LLMM을 함유한 신규한 6-웰 플레이트로 이동될 것이고, 적절한 시험 물품, 음성 또는 양성 대조군이 투여될 것이다. 조직은 적절한 노출 시간 동안 공기 중 5±1% CO2의 습윤화된 대기에서 37±1℃(표준 배양 조건)에서 인큐베이션될 것이다. 정확한 세정 절차는 연구 워크북에서 문서화될 것이다.On the day of dosing, MelanoDerm™ tissue will first be gently washed three times using approximately 500 μl of CMF-DPBS to remove any residual test article. Thereafter, the tissue will be transferred to a new 6-well plate containing 0.9 mL of fresh, pre-warmed EPI-100-LLMM, and the appropriate test article, negative or positive control will be administered. Tissues will be incubated at 37±1° C. (standard culture conditions) in a humidified atmosphere of 5±1% CO 2 in air for an appropriate exposure time. The exact cleaning procedure will be documented in the study workbook.

7일 시험의 종료 시에, 음성 또는 양성 대조근 및 각 시험 물품이 투여된 MelanoDerm™ 조직은 검정의 종료(7일) 시에 조직의 침착 정도의 시각적 평가를 돕기 위해 디지털 카메라를 이용하여 촬영될 것이다. 조직의 이미지를 수집하기 위해 사용되는 정확한 절차는 연구 워크북 및 리포트에 명시될 것이다. 이후에, 조직의 생존력은 하기에 명시되는 바와 같이 MTT 감소에 의해 결정될 것이다.At the end of the 7-day trial, the negative or positive control muscle and MelanoDerm™ tissue administered each test article will be imaged using a digital camera to aid in a visual assessment of the degree of tissue deposition at the end of the assay (Day 7). will be. The exact procedure used to collect images of tissues will be specified in the study workbook and report. Thereafter, the viability of the tissue will be determined by MTT reduction as indicated below.

MTT 검정: PBS 중에 제조된 MTT의 10X 스톡(배치 제조 시에 여과됨)은 따뜻한 MTT 첨가 배지에서 해동되고 희석되어 사용하기 2시간 전에 1.0 mg/mL 용액을 생성할 것이다. 300 ㎕의 MTT 용액은 사전-라벨링된 24-웰 플레이트의 각 지정된 웰에 첨가될 것이다.MTT Assay: A 10X stock of MTT prepared in PBS (filtered at batch preparation) will be thawed and diluted in warm MTT-added medium to yield a 1.0 mg/mL solution 2 hours prior to use. 300 μl of MTT solution will be added to each designated well of a pre-labeled 24-well plate.

노출 시간 후에, MTT 검정을 위해 지정된 각 MelanoDerm™ 조직은 CMF-DPBS로 세정되고, 멸균 흡착 페이퍼 상에서 블롯팅 건조되고, 과량의 액체가 제거될 것이다. MelanoDerm™ 조직은 세정 후 적절한 MTT 함유 웰로 옮겨질 것이다. 24-웰 플레이트는 3 ± 0.1시간 동안 표준 조건에서 인큐베이션될 것이다.After the exposure time, each MelanoDerm™ tissue designated for MTT assay will be washed with CMF-DPBS, blot dried on sterile absorbent paper, and excess liquid removed. MelanoDerm™ tissue will be transferred to appropriate MTT containing wells after washing. 24-well plates will be incubated at standard conditions for 3±0.1 hours.

3 ± 0.1시간 후에, MelanoDerm™ 조직은 멸균 흡착 페이퍼 상에서 블롯팅되고, 과량의 액체가 제거되고, 각 지정된 웰에서 2.0 mL의 이소프로판올을 함유한 사전-라벨링된 24-웰 플레이트로 옮겨질 것이다. 플레이트는 파라핀필름을 덮혀지고, 마지막 노출 시간이 종료될 때까지 냉장고(2 내지 8℃)에 저장될 것이다. 필요한 경우에, 플레이트는 MTT를 추출하기 전에 냉장고에서 밤새(또는 마지막 노출 시간이 종료된 후 최대 24시간) 저장될 수 있다. 이후에, 플레이트는 실온에서 적어도 2시간 동안 쉐이킹될 것이다. 추출 기간의 종료 시에, 세포 배양 삽입물 내의 액체는 웰 내에 디켄팅될 것이며, 이로부터 세포 배양 삽입물이 획득되었다. 추출물 용액이 혼합되고, 200 ㎕이 96-웰 플레이트의 적절한 웰로 옮겨질 것이다. 200 ㎕의 이소프로판올이 블랭크로서 지정된 웰에 첨가될 것이다. 각 웰의 550 nm의 흡광도(OD550)는 Molecular Devices Vmax 플레이트 판독기(AUTOMIX 기능 켜짐)로 측정될 것이다.After 3 ± 0.1 hours, MelanoDerm™ tissues will be blotted on sterile absorbent paper, excess liquid removed, and transferred to pre-labeled 24-well plates containing 2.0 mL of isopropanol from each designated well. Plates will be covered with paraffin film and stored in a refrigerator (2-8° C.) until the end of the last exposure time. If desired, the plates can be stored overnight (or up to 24 hours after the end of the last exposure time) in the refrigerator prior to extracting the MTT. Thereafter, the plate will be shaken at room temperature for at least 2 hours. At the end of the extraction period, the liquid in the cell culture insert will be decanted into the wells from which the cell culture insert was obtained. The extract solutions will be mixed and 200 μl will be transferred to the appropriate wells of a 96-well plate. 200 μl of isopropanol will be added to the well designated as blank. The absorbance (OD550) at 550 nm of each well will be measured with a Molecular Devices Vmax plate reader (AUTOMIX function on).

시험 물품이 MTT를 감소시키는 것으로 나타는 경우, 세정 후 조직에 결합된 상태로 존재하여 잘못된 MTT 감소 신호를 초래하는 시험 물품 만이 문제를 나타낸다. 가능한 잔류 시험 물품이 MTT를 직접 감소시키는 작용을 하지 않는다는 것을 입증하기 위해, 최종 검정에서 기능 체크가 수행되어, 시험 물질이 조직에 결합하지 않고 잘못된 MTT 감소 신호를 유발한다는 것을 나타낸다.If the test article is shown to reduce MTT, only the test article that remains bound to the tissue after cleaning, resulting in a false MTT reduction signal, is indicative of a problem. To demonstrate that the possible residual test article does not act to directly reduce MTT, a functional check is performed in the final assay, indicating that the test substance does not bind to tissue and causes a false MTT reduction signal.

잔류 시험 물품이 MTT를 직접적으로 감소시키는 작용을 하는 지의 여부를 결정하기 위해, 냉동-사멸 대조군 조직이 사용된다. -20℃ 냉동고에서 적어도 밤새 처리되지 않은 MelanoDerm™/EpiDerm™(멜라닌세포가 없는 Melanoderm™) 조직을 배치시키고, 실온으로 해동시키고, 이후에 다시 냉동시킴으로써 냉동 사멸 조직이 준비된다. 사멸 직후에, 조직은 냉동고에서 무기한 저장될 수 있다. 냉동 사멸 조직은 MatTek Corporation로부터 이미 제조된 것을 받을 수 있고, 사용할 때까지 -20℃ 냉동고에 저장될 수 있다. 잔류 시험 물품 감소를 시험하기 위해, 사멸 조직은 일반적인 방식으로 시험 물품으로 처리된다. 모든 검정 절차는 생존 조직과 동일한 방식으로 수행될 것이다. 소량의 MTT 감소가 사멸 조직 내의 잔류 NADH 및 관련된 효소로부터 예상되기 때문에, 멸균 탈이온수(음성 사멸 대조군)로 처리된 적어도 하나의 사멸 대조군은 병행하여 시험될 것이다.To determine whether the residual test article acts to directly reduce MTT, a freeze-killed control tissue is used. Frozen dead tissue is prepared by placing untreated MelanoDerm™/EpiDerm™ (Melanocyte-free Melanoderm™) tissue in a -20°C freezer at least overnight, thawing to room temperature, and then re-freezing. Immediately after death, the tissue can be stored indefinitely in a freezer. Frozen dead tissue can be obtained pre-made from MatTek Corporation and stored in a -20°C freezer until use. To test for residual test article reduction, dead tissue is treated with test article in the usual manner. All assay procedures will be performed in the same manner as for live tissue. At least one kill control treated with sterile deionized water (negative kill control) will be tested in parallel, as a small reduction in MTT is expected from residual NADH and related enzymes in dead tissue.

시험 물품-처리 사멸 대조군에서 MTT 감소가 거의 또는 전혀 관찰되지 않는 경우에, 시험 물품-처리된 생존 조직에서 관찰된 MTT 감소는 생존 세포에 기인할 수 있다. (처리된 생존 조직의 양에 비해) 처리된 사멸 대조군에서 상당한 MTT 감소가 존재하는 경우에, 화학적 감소를 고려하기 위해 추가 단계가 수행되어야 하거나, 이러한 시스템에서 시험 물품은 시험할 수 없는 것으로 간주될 수 있다. 사멸 대조군으로부터의 OD550 값은 하기에 기술되는 바와 같이 분석될 것이다.If little or no decrease in MTT is observed in the test article-treated killed control, then the observed decrease in MTT in the test article-treated viable tissue may be due to viable cells. If there is a significant reduction in MTT in the treated dead control group (relative to the amount of live tissue treated), additional steps must be taken to account for the chemical reduction, or the test article in this system would be considered untestable. can OD550 values from the kill control will be analyzed as described below.

미가공 흡광도 데이터가 캡쳐되고 프린트-파일로 저장되고 엑셀 스프레드시트로 불러올 것이다. 블랭크 웰의 평균 OD550 값이 계산될 것이다. 음성 대조군(들)의 보정된 평균 OD550 값은 이의 평균 OD550 값에서 블랭크 웰의 평균 OD550 값을 차감함으로써 결정될 것이다. 개별 시험 물품 노출 및 양성 대조군 노출의 보정된 OD550 값은 블랭크 웰에 대한 평균 OD550 값 각각으로부터 차감함으로써 결정될 것이다. 모든 계산은 엑셀 스프레드시트를 이용하여 수행될 것이다. 논의된 알고리즘이 처리군 수준에서 최종 종점 분석을 계산하기 위해 수행되지만, 동일한 계산은 개별 반복에 적용될 수 있다.Raw absorbance data will be captured and saved as a print-file and imported into an Excel spreadsheet. The average OD550 value of the blank wells will be calculated. The corrected mean OD550 value of the negative control(s) will be determined by subtracting the mean OD550 value of the blank wells from its mean OD550 value. The corrected OD550 values for the individual test article exposures and positive control exposures will be determined by subtracting them from each of the mean OD550 values for the blank wells. All calculations will be performed using an Excel spreadsheet. Although the algorithm discussed is performed to calculate the final endpoint analysis at the treatment group level, the same calculations can be applied to individual iterations.

보정된 시험 물품 노출 OD550 = 시험 물품 노출 OD550 - 블랭크 평균 OD550Calibrated Test Article Exposure OD550 = Test Article Exposure OD550 - Blank Average OD550

사멸 대조군(KC)이 사용되는 경우에, 시험 물품 잔류물에 의해 직접적으로 감소되는 MTT의 양을 보정하기 위해 하기 추가 계산이 수행될 것이다. 음성 대조군 사멸 대조군에 대한 미가공 OD550 값은 시험 물품-처리된 사멸 대조군의 순 OD550 값을 결정하기 위해, 각각의 시험 물품-처리된 사멸 대조군에 대한 미가공 OD550 값으로부터 차감될 것이다.If a kill control (KC) is used, the following additional calculations will be performed to correct for the amount of MTT that is directly reduced by the test article residue. The raw OD550 value for the negative control kill control will be subtracted from the raw OD550 value for each test article-treated kill control to determine the net OD550 value of the test article-treated kill control.

각 시험 물품 KC에 대한 순 OD550 = 미가공 OD550 시험 물품 KC - 미가공 OD550 음성 대조군 KCNet OD550 for each test article KC = raw OD550 test article KC - raw OD550 negative control KC

순 OD550 값은 특정 노출 시간에 시험 물품 잔류물에 의한 직접 감소로 인한 감소된 MTT의 양을 나타낸다. 일반적으로, 순 OD550 값이 0.150을 초과하는 경우에, 순 MTT 감소 양은 최종 보정된 OD550 값을 얻기 위해 생존 가능한 처리된 조직의 보정된 OD550 값으로부터 차감될 것이다. 이러한 최종 보정된 OD550 값은 이후에 대조군 생존력의 %를 결정하기 위해 이용될 것이다.The net OD550 value represents the amount of reduced MTT due to a direct reduction by the test article residue at a particular exposure time. In general, if the net OD550 value is greater than 0.150, the net MTT reduction amount will be subtracted from the corrected OD550 value of viable treated tissue to obtain the final corrected OD550 value. This final corrected OD550 value will then be used to determine the % of control viability.

최종 보정된 OD550 = 보정된 시험 물품 OD550 (생존 가능) - 순 OD550 시험 물품 (KC)final calibrated OD550 = calibrated test article OD550 (viable) - net OD550 test article (KC)

최종적으로, 하기 대조군 계산의 %는 하기와 같다:Finally, the % of the following control calculations are as follows:

% 생존력= [(시험 물품 또는 양성 대조군의 최종 보정된 OD550) / (음성 대조군의 보정된 평균 OD550)] x 100% viability = [(final corrected OD550 of test article or positive control) / (corrected mean OD550 of negative control)] x 100

결과result

MelanoDerm™ 검정 결과는 도 16a 내지 도 16k에 도시되어 있다. 말라세진-, 화합물 I-, 및 화합물 II-처리된 조직은 실험 7일째에 침착 감소를 나타내었다. 도 17a 내지 도 17k는 나열된 처리에 노출된 MelanoDerm™ 샘플의 15X 배율 이미지를 도시한 것이다.MelanoDerm™ assay results are shown in FIGS. 16A-16K . Malassezine-, Compound I-, and Compound II-treated tissues showed reduced deposition on day 7 of the experiment. 17A-17K show 15X magnification images of MelanoDerm™ samples exposed to the listed treatments.

실시예 13Example 13

제브라피시 검정zebrafish black

검정 절차Assay procedure

화합물: 화합물은 연구 후원자에 의해 물/PBS 또는 DMSO에서 가장 높은 가용성 농도로 마스터 스톡(MS) 용액으로서 제공될 것이다.Compounds: Compounds will be provided as master stock (MS) solutions at the highest soluble concentration in water/PBS or DMSO by the study sponsor.

배아 수집을 위한 표준 절차: Phylonix AB 제브라피시는 자연 교배에 의해 또는 대량 배양 생산 시스템(MEPS, Aquatic Habitats)을 이용하여 생성될 것이다. 암컷 제브라피스 마다 대략 50개의 제브라피시가 생성될 것이다. 제브라피시는 피시 워터(fish water)에서 28℃에서 유지될 것이다. 제브라피시는 청소되고(죽은 제브라피시가 제거됨), 발달 단계별로 분류될 것이다. 제브라피시가 부착된 난황낭으로부터 영양을 공급받기 때문에, 수정후 6일(dpf) 동안 먹이가 필요치 않다.Standard Procedure for Embryo Collection: Phylonix AB zebrafish will be produced by natural mating or using a mass culture production system (MEPS, Aquatic Habitats). Approximately 50 zebrafish will be produced for each female zebrafish. Zebrafish will be maintained at 28° C. in fish water. Zebrafish will be cleaned (dead zebrafish removed) and sorted by developmental stage. Since the zebrafish are nourished by the attached yolk sac, no feeding is required for 6 days post-fertilization (dpf).

화합물 용해도: 마스터 스톡(MS)(최고 농도를 사용함)은 순수한 DMSO 내지 서브-스톡(SS), 즉 10, 50, 100, 200, 300 mM, 등에 희석될 것이다. Phylonix에 의해 공급된 어수[탈이온수 1 리터 당 200 mg Instant Ocean Sea Salt(Aquarium Systems); pH 6.6 - 7.0, 2.5 mg/Neutral Regulator 리터(Seachem Laboratories Inc.)로 유지됨; 전도도 850 내지 950 μS]는 4 ml/용기로 시험 용기에 분배될 것이다.Compound Solubility: Master stock (MS) (using highest concentration) will be diluted from pure DMSO to sub-stock (SS), i.e., 10, 50, 100, 200, 300 mM, etc. Fish water supplied by Phylonix [200 mg Instant Ocean Sea Salt (Aquarium Systems) per liter of deionized water; pH 6.6 - 7.0, maintained at 2.5 mg/liter of Neutral Regulator (Seachem Laboratories Inc.); Conductivity 850-950 μS] will be dispensed into the test vessel at 4 ml/container.

시험 화합물 용액(TS)을 생성하기 위해, 4 ㎕의 각 SS는 어수에 직접적으로 첨가될 것이다. 실시예: 어수에 첨가된 4 ㎕의 10 mM SS는 10 μM TS를 생성할 것이며, 최종 DMSO 농도는 0.1%일 것이다. 대안적으로, 동일한 최종 TS 및 DMSO 농도를 얻기 위해, 10 ㎕ SS는 10 ml/어수의 용기에 첨가될 수 있다. DMSO를 1%까지 견딜 수 있는 검정에 대하여, 40 ㎕의 SS는 100 μM TS를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 10 ml 어수가 사용되는 경우에, SS의 부피는 동일한 최종 TS 및 DMSO 농도를 얻기 위해 비례적으로 증가되어야 한다. 용액은 각 검정에 대해 특정된 시간의 길이 동안 28℃에서 인큐베이션될 것이며, 침전의 존재에 대해 매일 시각적으로 시험될 것이다.To generate the test compound solution (TS), 4 μl of each SS will be added directly to the fish water. Example: 4 μl of 10 mM SS added to fish water will produce 10 μM TS, final DMSO concentration will be 0.1%. Alternatively, to obtain the same final TS and DMSO concentrations, 10 μl SS can be added to a vessel of 10 ml/fish water. For assays that can tolerate up to 1% DMSO, 40 μl of SS can be used to produce 100 μM TS. If 10 ml fish water is used, the volume of SS must be increased proportionally to obtain the same final TS and DMSO concentrations. Solutions will be incubated at 28° C. for the length of time specified for each assay and will be visually tested daily for the presence of precipitation.

최대 허용 농도(MTC): MTC(LC10)는 10개의 화합물 농도를 사용하여 결정된, 화합물 치사율에 대한 표준 기준으로서 사용될 것이다. 최고 가용성 화합물 농도를 결정한 후에, 연구 스폰서는 10개의 농도를 선택할 것이다.Maximum Acceptable Concentration (MTC): MTC (LC10) will be used as a standard criterion for compound lethality, determined using concentrations of 10 compounds. After determining the highest soluble compound concentration, the study sponsor will select 10 concentrations.

30개의 약 2 dpf 염소화된 Phylonix 야생형 AB 제브라피시는 화합물 용해도에 따라 0.1 내지 1% 범위의 농도로 4 ml/웰 어수 및 DMSO를 함유한 6-웰 마이크로플레이트의 웰에 분포될 것이다.Thirty approximately 2 dpf chlorinated Phylonix wild-type AB zebrafish will be distributed in the wells of a 6-well microplate containing 4 ml/well fish water and DMSO at concentrations ranging from 0.1 to 1% depending on compound solubility.

10개의 농도(즉, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 50, 100, 및 500 μM(또는 화합물 용해도에 의해 허용되는 농도까지)가 초기에 시험될 것이다. 필요한 경우에, 추가의 더 높은(최대 2000 μM까지) 또는 더 낮은(0.001 μM 이상) 농도가 시험될 것이다.Ten concentrations (i.e., 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 50, 100, and 500 μM (or up to concentrations allowed by compound solubility) will initially be tested. Higher (up to 2000 μM) or lower (0.001 μM or higher) concentrations of

제브라피시는 어두운 곳, 28℃에서 3일 동안 각 농도의 시험 화합물과 함께 인큐베이션될 것이다. 미처리된 및 0.1 내지 1% DMSO 처리된 제브라피시는 검정 및 비히클 대조군으로서 사용될 것이다. 치사율%을 계산하기 위해, 처리 후, 죽은 제브라피시의 수는 매일 카운팅되고, 제거될 것이다. 5 dpf에서, 죽은 동물은 치사율 %(죽은 제브라피시의 총수/30)를 계산하기 위해 카운팅될 것이다. 단, 죽은 제브라피시가 분해되는 경우에, 죽은 제브라피시의 수는 살아있는 제브라피시의 수를 카운팅함으로써 추론될 것이다.Zebrafish will be incubated with each concentration of test compound for 3 days at 28°C in the dark. Untreated and 0.1-1% DMSO treated zebrafish will be used as assays and vehicle controls. To calculate the percent lethality, after treatment, the number of dead zebrafish will be counted and removed daily. At 5 dpf, dead animals will be counted to calculate % lethality (total number of dead zebrafish/30). However, when the dead zebrafish are decomposed, the number of dead zebrafish will be inferred by counting the number of living zebrafish.

MTC를 추정하기 위해, 치사율 곡선은 EXCEL 소프트웨어를 이용하여 치사율% 대 농도를 플롯팅함으로써 생성될 것이다. MTC의 평균 및 SD를 획득하기 위해, 실험은 3회 수행될 것이다.To estimate MTC, lethality curves will be generated by plotting % lethality versus concentration using EXCEL software. To obtain the mean and SD of MTC, the experiment will be performed in triplicate.

제브라피시 피부 침착에 대한 화합물 효과를 시각적으로 평가함: 잔토포어, 이리도포어, 및 멜라노포어(멜라닌세포)를 포함하는 제브라피시 피부 색소 세포는 신경 능선 세포로부터 유래한 것이다. 제브라피시에서, 분화된 피부 색소 전구 세포는 약 24 hpf에서 색소를 발현시킨다. 본 연구의 초점은 피부의 표면 상의 검정색 색소인 멜라닌을 발현시키는 멜라닌세포이다. 멜라닌세포는 초기에 등쪽 머리 부분에 작은 검정색의 반점으로서 나타난다. 제브라피스가 발달함에 따라, 패치의 수가 증가하고, 테일 영역으로 연장하는 밴드를 형성하기 위해 융합한다. 대조적으로, 돌연변이 알비노 제브라피시는 드문 피부 침착을 나타낸다. 화합물은 배아 침착의 연속 과정을 화합물이 저지시키는 지를 평가하기 위해 2 dpf로 투여될 것이고, 5 dpf로 완료된다. 3개의 농도, MTC, 50% MTC, 및 25% MTC는 각 화합물에 대해 시험될 것이다.Visual evaluation of compound effects on zebrafish skin deposition: Zebrafish skin pigment cells, including xanthophores, iridophores, and melanocytes (melanocytes), are derived from neural crest cells. In zebrafish, differentiated skin pigment progenitor cells express pigment at about 24 hpf. The focus of this study is melanocytes that express melanin, a black pigment on the surface of the skin. Melanocytes initially appear as small black spots on the dorsal head. As the zebrafish develops, the number of patches increases and fuses to form bands extending into the tail region. In contrast, mutant albino zebrafish show rare skin deposition. Compounds will be administered at 2 dpf and complete at 5 dpf to assess whether the compound inhibits the continuous process of embryonic deposition. Three concentrations, MTC, 50% MTC, and 25% MTC, will be tested for each compound.

30개 2 dpf 자가-해치드 Phylonix 야생형 AB 제브라피시는 3일 동안 각 화합물로 처리될 것이다. 미처리된 및 0.1% DMSO 처리된 제브라피시는 대조군으로서 사용될 것이다. 양성 대조군: 페닐티오우레아(PTU, 0.03%). 30 2 dpf self-hatched Phylonix wild-type AB zebrafish will be treated with each compound for 3 days. Untreated and 0.1% DMSO treated zebrafish will be used as controls. Positive control: phenylthiourea (PTU, 0.03%).

제브라피시는 제브라피시는 해부 광학 현미경을 이용하여 매일 시각적으로 검사될 것이다. 화합물 및 PTU 처리된 제브라피시는 미처리된 및 비히클 처리된 대조군 제브라피시와 비교될 것이다. 감소된 침착을 나타내는 제브라피스의 수는 카운팅될 것이고, 시험 동물의 %로서 표현될 것이다. 대표적인 이미지가 제공될 것이다. 침착 감소를 위한 최적의 화합물 농도 및 처리 시간을 확인하기 위해, 감소된 피부 침착 대 시간(dpf)을 나타내는 % 제브라피시를 플롯팅함으로써 역학적 곡선이 생성될 것이다. 피셔의 정확한 시험은 화합물 효과가 유의미함(P < 0.05)을 결정하기 위해 사용될 것이다.Zebrafish will be visually inspected daily using a dissecting light microscope. Compound and PTU treated zebrafish will be compared to untreated and vehicle treated control zebrafish. The number of zebrafish exhibiting reduced deposition will be counted and expressed as % of test animals. Representative images will be provided. To identify the optimal compound concentration and treatment time for deposition reduction, a kinetic curve will be generated by plotting % zebrafish representing reduced skin deposition versus time (dpf). Fisher's exact test will be used to determine that the compound effect is significant (P < 0.05).

제브라피시 피부 침착에 대한 화합물의 추가 시각적 평가는 0.1, 1, 및 3 μM으로 처리 후 수행될 것이다. 30개의 2 dpf 자가-해치드 Phylonix 야생형 AB 제브라피시는 3일 동안 각 화합물 농도로 처리될 것이다. 미처리된 및 0.1% DMSO 처리된 제브라피시는 대조군으로서 사용될 것이다. 양성 대조군: 페닐티오우레아(PTU, 0.003%). 제브라피시는 해부 광학 현미경을 이용하여 매일 시각적으로 검사될 것이다. 화합물 및 PTU 처리된 제브라피시는 미처리된 및 비히클 처리된 대조군 제브라피시와 비교될 것이다.Further visual evaluation of compounds for zebrafish skin deposition will be performed after treatment with 0.1, 1, and 3 μM. Thirty 2 dpf self-hatched Phylonix wild-type AB zebrafish will be treated with each compound concentration for 3 days. Untreated and 0.1% DMSO treated zebrafish will be used as controls. Positive control: phenylthiourea (PTU, 0.003%). Zebrafish will be visually inspected daily using a dissecting light microscope. Compound and PTU treated zebrafish will be compared to untreated and vehicle treated control zebrafish.

5 dpf에서, 감소된 침착을 나타내는 제브라피스의 수는 카운팅될 것이고, 시험 동물의 %로서 표현될 것이다. 대표적인 이미지가 제공될 것이다. 침착 감소를 위한 최적의 화합물 농도 및 처리 시간을 확인하기 위해, 감소된 피부 침착 대 농도를 나타내는 % 제브라피시를 플롯팅함으로써 역학적 곡선이 생성될 것이다. 피셔의 정확한 시험은 화합물 효과가 유의미함(P < 0.05)을 결정하기 위해 사용될 것이다.At 5 dpf, the number of zebrafish exhibiting reduced deposition will be counted and expressed as % of test animals. Representative images will be provided. To identify the optimal compound concentration and treatment time for deposition reduction, a kinetic curve will be generated by plotting % zebrafish representing reduced skin deposition versus concentration. Fisher's exact test will be used to determine that the compound effect is significant (P < 0.05).

제브라피시 피부 침착에 대한 화합물 효과를 정량화함: 시각적 평가로부터의 결과를 기초로 하여, 본 발명자는 제브라피시 피부 침착에 대한 화합물 효과를 정량화하기 위해 최적의 조건(농도, 화합물 처리 시간)을 사용할 것이다.Quantifying the compound effect on zebrafish skin deposition: Based on the results from the visual assessment, we will use the optimal conditions (concentration, compound treatment time) to quantify the compound effect on zebrafish skin deposition. .

시각적 평가로부터의 결과에 의해 결정된 최적 단계에서의 20개의 Phylonix 야생형 AB 제브라피시는 최적의 화합물 농도로 처리될 것이다. 미처리된 및 0.1% DMSO 처리된 제브라피시는 대조군으로서 사용될 것이다. 양성 대조군: 페닐티오우레아(PTU, 0.03%).Twenty Phylonix wild-type AB zebrafish at the optimal stage determined by the results from the visual assessment will be treated with the optimal compound concentration. Untreated and 0.1% DMSO treated zebrafish will be used as controls. Positive control: phenylthiourea (PTU, 0.03%).

전체 제브라피시의 등면 이미지는 SPOT 카메라를 이용하여 2X로 촬영될 것이다. 등쪽 머리 영역은 Adobe Photoshop 선택 기능을 이용하여 고려되는 영역(ROI)으로서 규정될 것이다. ROI에서 검정색 피부 침착은 Photoshop 하이라이팅 기능을 이용하여 강조될 것이다. 픽셀 단위의 전체 색소 신호(PS)는 Photoshop 히스토그램 기능을 이용하여 결정될 것이다.Dorsal images of whole zebrafish will be taken at 2X using a SPOT camera. The dorsal head region will be defined as the region to be considered (ROI) using the Adobe Photoshop selection function. The black skin deposition in the ROI will be highlighted using the Photoshop highlighting function. The total dye signal PS in units of pixels will be determined using the Photoshop histogram function.

화합물이 제브라피시 성장에 영향을 미치는 경우에, 신체 길이(L) 및 몸통 폭(W)은 더 작을 것인데, 이는 ROI 및 최종 PS에 영향을 미칠 것이다. 이에 따라, 본 발명자는 FS = PS/ LxW를 이용하여 최종 신호(FS)의 측정을 정규화할 것이다.If the compound affects zebrafish growth, the body length (L) and body width (W) will be smaller, which will affect the ROI and final PS. Accordingly, we will normalize the measurement of the final signal FS using FS = PS/LxW.

미처리된 및 비히클 처리된 제브라피스는 비히클이 영향을 미치지 않음을 입증하기 위해 유사한 FS를 나타낼 것으로 예상된다. PTU 처리된 제브라피스는 검정을 검증하기 위해 낮은 FS를 나타낼 것으로 예상된다. 화합물 처리된 제브라피시는 비히클 처리된 대조군 제브라피시와 비교될 것이다.Untreated and vehicle-treated zebrafish are expected to exhibit similar FS to demonstrate that vehicle has no effect. PTU treated zebrafish is expected to exhibit low FS to validate the assay. Compound treated zebrafish will be compared to vehicle treated control zebrafish.

화합물 효과가 유의미함(P < 0.05)을 결정하기 위해, 화합물 처리된 제브라피시에 대한 평균 FS는 스튜던트 테스트를 이용하여 비히클 처리된 제브라피시와 비교될 것이다.To determine if the compound effect was significant (P < 0.05), the mean FS for compound-treated zebrafish will be compared to vehicle-treated zebrafish using the Student's test.

제브라피시 피부 침착에 대한 화합물 효과의 추가 정량화는 0.5 및 1.5 μM 화합물 농도로 처리 후 수행될 것이다.Further quantification of compound effects on zebrafish skin deposition will be performed after treatment with 0.5 and 1.5 μM compound concentrations.

20개의 2 pdf Phylonix 야생형 AB 제브라피시는 0.5 및 1.5 μM 화합물 농도로 처리될 것이다. 미처리된 및 0.1% DMSO 처리된 제브라피시는 대조군으로서 사용될 것이다. 양성 대조군: 페닐티오우레아(PTU, 0.003%).Twenty 2 pdf Phylonix wild-type AB zebrafish will be treated with 0.5 and 1.5 μM compound concentrations. Untreated and 0.1% DMSO treated zebrafish will be used as controls. Positive control: phenylthiourea (PTU, 0.003%).

전체 제브라피시의 등면 이미지는 SPOT 카메라를 이용하여 2X로 촬영될 것이다. 등쪽 머리 영역은 Adobe Photoshop 선택 기능을 이용하여 고려되는 영역(ROI)으로서 규정될 것이다. ROI에서 검정색 피부 침착은 Photoshop 하이라이팅 기능을 이용하여 강조될 것이다. 픽셀 단위의 전체 색소 신호(PS)는 Photoshop 히스토그램 기능을 이용하여 결정될 것이다.Dorsal images of whole zebrafish will be taken at 2X using a SPOT camera. The dorsal head region will be defined as the region to be considered (ROI) using the Adobe Photoshop selection function. The black skin deposition in the ROI will be highlighted using the Photoshop highlighting function. The total dye signal PS in units of pixels will be determined using the Photoshop histogram function.

화합물이 제브라피시 성장에 영향을 미치는 경우에, 신체 길이(L)는 더 짧아질 것이며, 몸통 폭(W)은 더 작아질 것이며, 이는 ROI 면적 및 최종 PS에 영향을 미칠 것이다. 이에 따라, 본 발명자는 FS = PS/ LxW를 이용하여 최종 신호(FS) 측정을 정규화할 것이다.If the compound affects zebrafish growth, the body length (L) will be shorter and the body width (W) will be smaller, which will affect the ROI area and final PS. Accordingly, we will normalize the final signal (FS) measurement using FS = PS/LxW.

미처리된 및 비히클 처리된 제브라피시는 비히클의 효과 없음을 확인하기 위해 유사한 FS를 나타낼 것으로 예상된다. PTU 처리된 제브라피시는 낮은 FS를 나타내어, 검정을 검정할 것으로 예상된다. 화합물 처리된 제브라피시는 비히클 처리된 대조군 제브라피시와 비교될 것이다.Untreated and vehicle-treated zebrafish are expected to exhibit similar FS to confirm no effect of vehicle. PTU-treated zebrafish show low FS, which is expected to assay the assay. Compound treated zebrafish will be compared to vehicle treated control zebrafish.

화합물 효과가 유의미함(P < 0.05)을 결정하기 위해, 화합물 처리된 제브라피시에 대한 평균 FS는 스튜던트 테스트를 이용하여 비히클 처리된 제브라피시의 평균 FS와 비교될 것이다.To determine if the compound effect was significant (P < 0.05), the mean FS for compound-treated zebrafish will be compared to the mean FS for vehicle-treated zebrafish using the Student's test.

결과result

화합물 II에 노출된 제브라피시에 대한 시각적 평가 결과는 도 18a 내지 18f 및 도 19a 내지 19f에 도시되어 있다. 본 연구의 시각적 평가 부분으로부터의 결과를 요약한 차트는 도 20에 도시되어 있다.Visual evaluation results for zebrafish exposed to compound II are shown in FIGS. 18A to 18F and 19A to 19F. A chart summarizing the results from the visual evaluation portion of this study is shown in FIG. 20 .

고려되는 정량적 평가 영역 및 화합물 II에 노출된 제브라피시에 대한 uf과는 도 21a 내지 21e 및 도 22a 내지 22b에 도시되어 있다.The quantitative evaluation areas considered and uf results for zebrafish exposed to compound II are shown in FIGS. 21A-21E and 22A-22B.

실시예 14Example 14

DMSO 및 세포 배양 배지에서 말라세진 및 말라세진 유도체의 안정성Stability of Malacetin and Malacetin Derivatives in DMSO and Cell Culture Medium

시험된 화합물을 DMSO 및 배양 배지 중에 100 μM로 제조하였다. 용액을 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하고, LC-MS를 이용하여 분석하였다. 피크 면적을 이용하여 용매 중에 잔류하는 화합물을 평가하였다.Tested compounds were prepared at 100 μM in DMSO and culture medium. The solution was incubated at room temperature for 2 h and analyzed using LC-MS. The peak area was used to evaluate the compound remaining in the solvent.

결과result

LC-MS 결과는 도 23a 내지 도 23j에 도시되어 있다. 이러한 결과는, 화합물이 2시간 인큐베이션 후 배양 배지에서 안정하다는 것을 나타낸다.The LC-MS results are shown in FIGS. 23A-23J. These results indicate that the compound is stable in the culture medium after 2 h incubation.

실시예 15Example 15

말라세진 및 말라세진 유도체의 합성Synthesis of Malacetin and Malacetin Derivatives

말라세진(CV-8684), 이의 환형화된 유도체 인돌로[3,2-b] 카바졸(CV-8685), 화합물 I(CV-8686), 화합물 IV(CV-8687), 화합물 II(CV-8688), 및 말라세진 전구체를 미국특허공개 제2017/0260133 A1호로서 공개된, 미국특허출원 제15/455,932호에 기술된 프로토콜에 따라 합성하였으며, 두 문헌 모두는 전체가 본원에 참고로 포함된다.Malassezine (CV-8684), its cyclized derivative indolo[3,2-b]carbazole (CV-8685), compound I (CV-8686), compound IV (CV-8687), compound II (CV) -8688), and a malassezine precursor were synthesized according to the protocol described in U.S. Patent Application No. 15/455,932, published as U.S. Patent Publication No. 2017/0260133 A1, both of which are incorporated herein by reference in their entirety. do.

화합물 C(CV-8802)의 합성Synthesis of compound C (CV-8802)

화합물 10의 합성Synthesis of compound 10

도 24a에 도시된 바와 같이, 0℃에서 테트라하이드로푸란(200 mL) 중 2-아이오도-4-메틸아닐린(10 g, 0.0429 mol)의 용액에 NaHMDS(94.42 mL, THF 중 1 M, 0.0944 mol)를 30분에 걸쳐 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 0℃에서 30분 교반 후에, THF(50 mL) 중 BOC 무수물(10.29 g, 0.0472 mol)의 용액을 30분에 걸쳐 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 포화된 NH4Cl(200 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 유기층을 분리하고, 물(200 mL)로 세척하였다. 합한 수성층을 에틸 아세테이트(2 x 150 mL)로 추출하고, 층을 분리하였다. 에틸 아세테이트 층을 유기층과 합하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 오일을 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(0 내지 5% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 10을 담황색 액체(13.1 g, 91%)로서 수득하였다.As shown in Figure 24a, in a solution of 2-iodo-4-methylaniline (10 g, 0.0429 mol) in tetrahydrofuran (200 mL) at 0 °C NaHMDS (94.42 mL, 1 M in THF, 0.0944 mol) ) was added slowly while maintaining the internal temperature below 5° C. over 30 minutes. After 30 min stirring at 0 °C, a solution of BOC anhydride (10.29 g, 0.0472 mol) in THF (50 mL) was added slowly over 30 min maintaining the internal temperature below 5 °C. The reaction mixture was warmed to room temperature and stirred for 1 h. Saturated NH 4 Cl (200 mL) was added to quench the reaction. The organic layer was separated and washed with water (200 mL). The combined aqueous layers were extracted with ethyl acetate (2 x 150 mL) and the layers were separated. The ethyl acetate layer was combined with the organic layer and concentrated in vacuo to give a brown oil. The crude compound was purified by column chromatography (0-5% ethyl acetate/hexanes). Compound 10 was obtained as a pale yellow liquid (13.1 g, 91%).

화합물 11의 합성Synthesis of compound 11

DMF(100 mL) 중에 용해된 부트-3-인-2-올(25 mL, 0.319 mol)을 0℃에서 DMF(100 mL) 중 NaH(19.2 g, 0.478 mol)에 첨가하였다. DMS(45.2 mL, 0.478 mol)를 30분의 기간에 걸쳐 반응 혼합물에 첨가하고, 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 1시간 동안 교반하고, 이후에 10℃까지 냉각시키고, 아세트산(19.2 mL, 0.319 mol)을 10분의 기간에 걸쳐 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(600 mL)로 희석시키고, 디에틸 에테르(400 mL)로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 요망되는 화합물을 64 내지 68℃에서 증류시켜 7 gm의 순수한 화합물 11(23% 수율)을 수득하였다.But-3-yn-2-ol (25 mL, 0.319 mol) dissolved in DMF (100 mL) was added to NaH (19.2 g, 0.478 mol) in DMF (100 mL) at 0 °C. DMS (45.2 mL, 0.478 mol) was added to the reaction mixture over a period of 30 min and stirred at 0 °C for 30 min. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature, stirred for 1 hour, then cooled to 10° C. and acetic acid (19.2 mL, 0.319 mol) was added over a period of 10 minutes and stirred for 1 hour. The reaction mixture was diluted with water (600 mL) and extracted with diethyl ether (400 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The desired compound was distilled at 64-68° C. to give 7 gm of pure compound 11 (23% yield).

화합물 12의 합성Synthesis of compound 12

구리 아이오다이드(0.34 g, 0.0018 mol) 및 PdCl2(PPh3)4(0.6323 g, 0.0009 mol)를 실온에서 트리에틸아민(100 mL) 중 화합물 10(6.0 g, 0.018 mol), 화합물 11(1.81 g, 0. 0216 mol)의 탈기된 용액에 첨가하고, 6시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되었다(10% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함). 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하고, 반응 혼합물을 물, 포화 NaCl(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 오일을 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(10% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 12를 담황색 액체(4.8 g, 96%)로서 수득하였다.Copper iodide (0.34 g, 0.0018 mol) and PdCl 2 (PPh 3 ) 4 (0.6323 g, 0.0009 mol) were mixed with compound 10 (6.0 g, 0.018 mol), compound 11 (0.6323 g, 0.0009 mol) in triethylamine (100 mL) at room temperature. 1.81 g, 0.216 mol) was added to the degassed solution and stirred for 6 hours. The reaction was complete (monitored by TLC using 10% ethyl acetate/hexanes). The reaction mixture was diluted with ethyl acetate (200 mL) and the reaction mixture was washed with water, saturated NaCl (100 mL) and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered and concentrated in vacuo to give a brown oil. The crude compound was purified by column chromatography (10% ethyl acetate/hexanes). Compound 12 was obtained as a pale yellow liquid (4.8 g, 96%).

화합물 13의 합성Synthesis of compound 13

둥근 바닥 플라스크를 디옥산(200 mL) 중 PtCl2(0.44 g, 0.00166 mol), Na2CO3(2.64g, 0.0249 mol), 인돌(3.89 g, 0.0332 mol) 및 화합물 12(4.8 g, 0.0166 mol)를 채웠다. 플라스크를 질소로 탈기시키고, 시일링하고, 밤새 100℃로 가열하였다. 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(300 mL)로 희석하고, 반응 혼합물을 물(200 mL), 포화 NaCl(200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 오일을 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(10% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 13을 밝은 갈색 고체(2.04 g, 34%)로서 수득하였다. A round bottom flask was mixed with PtCl 2 (0.44 g, 0.00166 mol), Na 2 CO 3 (2.64 g, 0.0249 mol), indole (3.89 g, 0.0332 mol) and compound 12 (4.8 g, 0.0166 mol) in dioxane (200 mL). ) was filled. The flask was degassed with nitrogen, sealed and heated to 100° C. overnight. The solvent was evaporated under reduced pressure. The reaction mixture was diluted with ethyl acetate (300 mL) and the reaction mixture was washed with water (200 mL), saturated NaCl (200 mL) and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered and concentrated in vacuo to give a brown oil. The crude compound was purified by column chromatography (10% ethyl acetate/hexanes). Compound 13 was obtained as a light brown solid (2.04 g, 34%).

화합물 14의 합성Synthesis of compound 14

칼륨 카르보네이트(2.3 g, 0.0166 mol)를 주변 온도에서 메탄올(30 mL) 및 물(10 mL) 혼합물 중 화합물 13(2.0 g, 0.0055 mol)의 용액에 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 밤새 환류 가열하였다. 반응 혼합물을 주변 온도까지 냉각시키고, 용매를 진공 중에서 농축하였다. 잔류물을 에틸아세테이트(100 mL) 중에서 취하고, 물(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, 이후에 (소듐 설페이트 상에서) 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 중에서 농축하여 갈색 고체를 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(20% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다. 화합물 14를 오프-화이트 고체(0.8 g, 54%)로서 수득하였다.Potassium carbonate (2.3 g, 0.0166 mol) was added to a solution of compound 13 (2.0 g, 0.0055 mol) in a mixture of methanol (30 mL) and water (10 mL) at ambient temperature. The resulting suspension was heated to reflux overnight. The reaction mixture was cooled to ambient temperature and the solvent was concentrated in vacuo. The residue is taken up in ethyl acetate (100 mL), washed with water (100 mL) and brine (100 mL), then dried (over sodium sulfate), filtered and the solvent is concentrated in vacuo to give a brown solid. did. The crude compound was purified by column chromatography (20% ethyl acetate/hexanes). Compound 14 was obtained as an off-white solid (0.8 g, 54%).

화합물 C의 합성Synthesis of compound C

0℃에서 아르곤 하에서의 건조된 100 mL 2구 둥근바닥 플라스크에, 디메틸포름아미드(5 mL)를 첨가하였다. POCl3(246 mg, 1.6058 mmol)을 10분에 걸쳐 내부 온도를 5℃미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 0℃에서 30분 교반 후에, 디메틸포름아미드(2 mL) 중 화합물 14(400 mg, 1.459 mmol)의 용액을 10분에 걸쳐 내부 온도를 5℃미만으로 유지시키면서 서서히 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응을 완료한 후에(20% 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 TLC에 의해 모니터링함). 반응 혼합물을 소듐 바이카르보네이트 포화수용액(100 mL)에 붓고, 1시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 물(100 mL), 포화 NaCl(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 고체를 수득하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(0 내지 20% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제하였다.To a dried 100 mL two-necked round bottom flask at 0°C under argon, dimethylformamide (5 mL) was added. POCl 3 (246 mg, 1.6058 mmol) was added slowly over 10 min keeping the internal temperature below 5°C. After stirring at 0 °C for 30 min, a solution of compound 14 (400 mg, 1.459 mmol) in dimethylformamide (2 mL) was added slowly over 10 min keeping the internal temperature below 5 °C. The resulting mixture was stirred at room temperature overnight. After completion of the reaction (monitored by TLC using 20% ethyl acetate/hexanes). The reaction mixture was poured into a saturated aqueous sodium bicarbonate solution (100 mL) and stirred for 1 hour. The resulting mixture was extracted with ethyl acetate (2 x 100 mL). The organic layers were combined, washed with water (100 mL), saturated NaCl (100 mL), and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered and concentrated in vacuo to give a brown solid. The crude compound was purified by column chromatography (0-20% ethyl acetate/hexanes).

일부 실험에서, 이러한 프로토콜의 결과는 화합물 C, 화합물 C1, 및 화합물 C2 중 하나 이상을 포함하는 조성물("미지 조성물")이었다.In some experiments, the result of this protocol was a composition comprising at least one of Compound C, Compound C1, and Compound C2 (“unknown composition”).

화합물 K(CV-8803)의 합성Synthesis of compound K (CV-8803)

도24b에 도시된 바와 같이, MeOH(5 mL) 중 말라세진(40 mg, 0.146 mmol)의 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이러한 용액에 0℃에서 NaBH4(27.6 mg, 0.729 mmol)를 첨가하고, 격렬하게 교반하였다. 3시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 회전증발기에 의해 메탄올을 제거하였다. 반응 혼합물을 DCM(20 mL)으로 희석하고, 수 중 20% 아세트산(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시켰다. 고형물을 여과하고, 여액을 농축하여 34 mg의 화합물 K를 수득하였다.As shown in Figure 24b, a solution of malassezine (40 mg, 0.146 mmol) in MeOH (5 mL) was cooled to 0 °C. To this solution was added NaBH 4 (27.6 mg, 0.729 mmol) at 0° C. and stirred vigorously. After 3 h, the reaction mixture was warmed to room temperature and methanol was removed by rotary evaporator. The reaction mixture was diluted with DCM (20 mL) and washed with 20% acetic acid in water (20 mL) and brine (20 mL). The organic layer was separated and dried over anhydrous sodium sulfate. The solid was filtered and the filtrate was concentrated to give 34 mg of compound K.

화합물 A(CV-8804)의 합성Synthesis of compound A (CV-8804)

도 24c에 도시된 바와 같이, MeOH(5 mL) 중 화합물 II(120 mg, 0.417 mmol)의 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이러한 용액에 0℃에서 NaBH4(78.75 mg, 2.083 mmol)를 첨가하고, 격렬하게 교반하였다. 3시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 회전증발기에 의해 메탄올을 제거하였다. 반응 혼합물을 DCM(20 mL)으로 희석하고, 수 중 20% 아세트산(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시켰다. 고형물을 여과하고, 여액을 농축하여 101 mg의 화합물 A를 수득하였다.As shown in Figure 24c, a solution of compound II (120 mg, 0.417 mmol) in MeOH (5 mL) was cooled to 0 °C. To this solution was added NaBH 4 (78.75 mg, 2.083 mmol) at 0° C. and stirred vigorously. After 3 h, the reaction mixture was warmed to room temperature and methanol was removed by rotary evaporator. The reaction mixture was diluted with DCM (20 mL) and washed with 20% acetic acid in water (20 mL) and brine (20 mL). The organic layer was separated and dried over anhydrous sodium sulfate. The solid was filtered and the filtrate was concentrated to give 101 mg of compound A.

화합물 E(AB12508)의 합성Synthesis of compound E (AB12508)

도 24d에 도시된 바와 같이, MeOH(350 mL) 중 인돌 1(10 g, 85.4 mmol)에 사이클로프로필 알데하이드 2(2.5 g, 35.6 mmol)를 첨가하고, HCl의 1 N 수용액(178 mL)을 첨가하고, 1시간 동안 70℃로 가열하였다. 용매를 제거하고, DCM(2x)으로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. FCC를 통한 물질을 분리하여 2.47 g의 밝은 오렌지색 고체를 이성질체 혼합물 1.0:0.73(2:3':3:3')로서 수득하였다.As shown in Figure 24d, to indole 1 (10 g, 85.4 mmol) in MeOH (350 mL) was added cyclopropyl aldehyde 2 (2.5 g, 35.6 mmol), followed by a 1 N aqueous solution of HCl (178 mL). and heated to 70° C. for 1 hour. The solvent was removed, extracted with DCM (2x), dried over Na 2 SO 4 and concentrated. Separation of the material via FCC gave 2.47 g of a light orange solid as a mixture of isomers 1.0:0.73 (2:3':3:3').

DMF(10 mL) 중 이전 혼합물(1.44 g, 5.0 mmol)을 0℃에서 DMF(15 mL) 중 POCl3(947 mg, 6.0 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 교반하였다. 이후에, 이를 NaHCO3(sat)으로 켄칭시키고, EtOAc(2x)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, FCC를 통해 정제하고, 이후에 prep-HPLC를 통해 정제하였다. 밝은 녹색 고형물(286 mg)을 동결건조 후에 수득하였다.The previous mixture (1.44 g, 5.0 mmol) in DMF (10 mL ) was added to POCl 3 (947 mg, 6.0 mmol) in DMF (15 mL) at 0 °C. The reaction mixture was warmed to room temperature and stirred. Then it was quenched with NaHCO 3 (sat), extracted with EtOAc (2x), dried over Na 2 SO 4 , purified via FCC and then via prep-HPLC. A light green solid (286 mg) was obtained after lyophilization.

[M+H]+ = 315; [M-H]-= 313. 1H NMR (CDCl3): 10.34 (s, 1H), 8.37 (bs, 1H), 8.33 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.23 (bs, 1H), 7.47 (m, 1H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.24-7.29 (m, 2H), 7.16-7.23 (m, 3H), 6.97 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 1.48-1.59 (m, 1H), 0.84-0.93 (m, 1H), 0.62-0.71 (m, 1H), 0.47-0.60 (m, 2H).[M+H]+ = 315; [MH] - = 313. 1 H NMR (CDCl 3): 10.34 (s, 1H), 8.37 (bs, 1H), 8.33 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.23 (bs, 1H), 7.47 ( m, 1H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.24-7.29 (m, 2H), 7.16-7.23 (m, 3H), 6.97 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.45 (d) , J = 8.7 Hz, 1H), 1.48-1.59 (m, 1H), 0.84-0.93 (m, 1H), 0.62-0.71 (m, 1H), 0.47-0.60 (m, 2H).

화합물 A5(CV-8819)의 합성Synthesis of compound A5 (CV-8819)

화합물 3의 합성Synthesis of compound 3

도 24e에 도시된 바와 같이, THF(20 mL) 중 1-(페닐설포닐) 인돌(1, 1 gm, 0.00389 mol)의 용액을 -78℃까지 냉각시켰다. 여기에 t-BuLi(2.52 mL, 0.00428 mol)를 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 서서히 가온시켰다. 0℃에 도달한 후, 반응 혼합물을 -78℃까지 다시 냉각시켰다. 여기에 혼합물을 30분의 기간에 걸쳐 THF(5 mL) 중 N-BOC-3-포르밀 인돌(0.953 gm, 0.00389 mol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 가온시키고, 0℃에서 물(5 mL)로 켄칭시켰다. 반응 혼합물을 물(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, 에틸 아세테이트(250 mL)로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 미정제 반응 혼합물을 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 15% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 풀링하고 농축하여 1.7 gm의 순수한 화합물 3을 오프-화이트 고체(수율 87%)로서 수득하였다.As shown in Figure 24e, a solution of 1-(phenylsulfonyl)indole (1, 1 gm, 0.00389 mol) in THF (20 mL) was cooled to -78 °C. To this was added t-BuLi (2.52 mL, 0.00428 mol) and stirred for 30 minutes. The reaction mixture was slowly warmed to 0 °C. After reaching 0°C, the reaction mixture was cooled again to -78°C. To this mixture was added a solution of N-BOC-3-formyl indole (0.953 gm, 0.00389 mol) in THF (5 mL) over a period of 30 min. The reaction mixture was warmed to 0 °C and quenched with water (5 mL) at 0 °C. The reaction mixture was washed with water (100 mL) and brine (100 mL) and extracted with ethyl acetate (250 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude reaction mixture was purified by column chromatography (0-15% ethyl acetate in hexanes). The desired fractions were pooled and concentrated to give 1.7 gm of pure compound 3 as an off-white solid (87% yield).

화합물 4의 합성 Synthesis of compound 4

DMSO(5 mL) 중 화합물 3(500 mg, 0.996 mmol)의 용액에 실온에서 IBX(334.6 mg, 1.195 mmol)를 첨가하고, 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석하고 물(2 x 25 mL) 및 염수(25 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다(Obtained 444 mg, 수율 89%). 미정제 반응 혼합물은 충분히 순수하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.To a solution of compound 3 (500 mg, 0.996 mmol) in DMSO (5 mL) at room temperature was added IBX (334.6 mg, 1.195 mmol) and stirred for 18 h. The reaction mixture was diluted with ethyl acetate (25 mL) and washed with water (2×25 mL) and brine (25 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated (Obtained 444 mg, yield 89%). The crude reaction mixture was sufficiently pure and was used in the next step without further purification.

화합물 5의 합성Synthesis of compound 5

화합물 4(110 mg, 0.22 mmol), TBAF(THF 중 1M)(220 ㎕, 0.22 mmol) 및 THF(3 mL)의 용액을 1시간 동안 환류하고, 실온까지 냉각시켰다. 휘발성 물질을 회전증발기에 의해 제거하고, 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석하고, 물(25 mL) 및 염수(25 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 미정제 반응 혼합물을 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 풀링하고 농축하여 60 mg의 순수한 화합물 5를 오프-화이트 고체(수율 75%)로서 수득하였다.A solution of compound 4 (110 mg, 0.22 mmol), TBAF (1M in THF) (220 μl, 0.22 mmol) and THF (3 mL) was refluxed for 1 h and cooled to room temperature. The volatiles were removed by rotovap, diluted with ethyl acetate (25 mL) and washed with water (25 mL) and brine (25 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude reaction mixture was purified by column chromatography (0-10% ethyl acetate in hexanes). The desired fractions were pooled and concentrated to give 60 mg of pure compound 5 as an off-white solid (75% yield).

화합물 6의 합성Synthesis of compound 6

디클로로에탄(10 mL) 중 화합물 5(500 mg, 1.388 mmol), CMMC(472.2 mg, 2.79 mmol)의 용액을 30분 동안 50℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음-냉각 물(50 mL)에 붓고, 0.5 M NaOH (15 mL) 및 염수(25 mL)로 세척하고, 디클로로메탄(25 mL)으로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 미정제 반응 혼합물을 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 20% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 풀링하고 농축하여 198 mg의 순수한 화합물 6을 오프-화이트 고체(수율 36.5%)로서 수득하였다.A solution of compound 5 (500 mg, 1.388 mmol), CMMC (472.2 mg, 2.79 mmol) in dichloroethane (10 mL) was heated to 50° C. for 30 min. The reaction mixture was cooled to room temperature, poured into ice-cold water (50 mL), washed with 0.5 M NaOH (15 mL) and brine (25 mL), and extracted with dichloromethane (25 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude reaction mixture was purified by column chromatography (0-20% ethyl acetate in hexanes). The desired fractions were pooled and concentrated to give 198 mg of pure compound 6 as an off-white solid (36.5% yield).

화합물 A5의 합성Synthesis of compound A5

화합물 6(198 mg, 0.5103 mmol)을 메탄올(5 ml) 중에 용해하였다. 이러한 용액에 K3PO4(216.37 mg, 1.021 mmol)를 첨가하고, 30분 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 휘발성 물질을 회전증발기에 의해 제거하였다. 잔류물을 에틸아세테이트(25 mL)에 용해하고, 물(2 x 25 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 얻어진 고형물을 디에틸에테르(10 mL) 중에서 1시간 동안 격렬하게 교반하고, 여과하여 화합물 A5(97 mg, 수율 66%)를 수득하였다.Compound 6 (198 mg, 0.5103 mmol) was dissolved in methanol (5 ml). To this solution was added K 3 PO 4 (216.37 mg, 1.021 mmol) and refluxed for 30 minutes. The reaction mixture was cooled to room temperature and the volatiles were removed by rotary evaporator. The residue was dissolved in ethyl acetate (25 mL) and washed with water (2 x 25 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The obtained solid was vigorously stirred in diethyl ether (10 mL) for 1 hour and filtered to give compound A5 (97 mg, yield 66%).

화합물 H(AB12509)의 합성Synthesis of compound H (AB12509)

도 24f에 도시된 바와 같이, n-부틸리튬(헥산 중 2.5M, 5.5 mL, 13.7 mmol)을 -78℃에서 건조 THF(75 mL) 중 1-페닐설포닐인돌 2(3.05 g, 11.9 mmol)의 용액에 적가하였다. 실온에서 1시간 동안 용액을 교반한 후에, 용액을 다시 -78℃까지 냉각시키고, 건조 THF(45 mL) 중 3-포르밀 인돌 1(3.35 g, 13.7 mmol)을 서서히 첨가하였다. 반응을 밤새 실온까지 가온시켰다. 이후에, MeI(15 eq, 11.1 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 9시간 동안 50℃까지 가온시켰다. H2O로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. FCC(SiO2, 5% EtOAc/헥산)로 4.02 g의 백색의 솜털 같은 고체로서 제공하였다.As shown in Figure 24f, n-butyllithium (2.5M in hexanes, 5.5 mL, 13.7 mmol) was mixed with 1-phenylsulfonylindole 2 (3.05 g, 11.9 mmol) in dry THF (75 mL) at -78 °C. was added dropwise to the solution of After stirring the solution for 1 h at room temperature, the solution was again cooled to -78 °C and 3-formyl indole 1 (3.35 g, 13.7 mmol) in dry THF (45 mL) was added slowly. The reaction was allowed to warm to room temperature overnight. Then MeI (15 eq, 11.1 mL) was added and the reaction mixture was warmed to 50° C. for 9 h. Quench with H 2 O, extracted with EtOAc, dried over Na 2 SO 4 and concentrated. FCC (SiO 2 , 5% EtOAc/Hexanes) provided 4.02 g of a white fluffy solid.

THF(20 mL) 중 비스인돌 3(2 g, 3.9 mmol)의 용액에 TBAF(THF 중 1 M, 5.9 mL, 1.5 eq)를 첨가하고, 14시간 동안 70℃로 가열하였다. 포화 NH4Cl로 켄칭시키고, EtOAc(2x)로 추출하고, H2O 및 염수로 세척하였다. 이러한 지점에서, 22 mL의 DMF를 첨가하고, 대부분의 EtOAc를 감압 하에서 제거하였다. 미정제 혼합물을 다음 단계에서 사용하였다.To a solution of bisindole 3 (2 g, 3.9 mmol) in THF (20 mL) was added TBAF (1 M in THF, 5.9 mL, 1.5 eq) and heated to 70° C. for 14 h. Quench with saturated NH 4 Cl, extracted with EtOAc (2x), washed with H 2 O and brine. At this point, 22 mL of DMF was added and most of the EtOAc was removed under reduced pressure. The crude mixture was used in the next step.

이전 미정제물을 1.5시간에 걸쳐 실온에서 DMF(20 mL) 중 POCl3(3.6 mL, 10 eq)의 용액에 서서히 첨가하였다. 첨가를 완료한 후에, 반응을 추가 30분 동안 교반하고, 이후에 0℃에서 포화 NaHCO3으로 켄칭시키고, EtOAc(3x)로 추출하고, 염수로 세척하고, 농축하였다. FCC(SiO2, 15% EtOAc/hex)로 881 mg의 비스인돌 5를 밝은 황색 고체로서 수득하였다. The previous crude was added slowly to a solution of POCl 3 (3.6 mL, 10 eq) in DMF (20 mL) at room temperature over 1.5 hours. After addition was complete, the reaction was stirred for another 30 min, then quenched with saturated NaHCO 3 at 0° C., extracted with EtOAc (3×), washed with brine and concentrated. FCC (SiO 2 , 15% EtOAc/hex) gave 881 mg of bisindole 5 as a light yellow solid.

MeOH:H2O(9:1, 17.4 mL) 중 비스인돌 5(350 mg)의 용액에 K2CO3(456 mg, 3.5 eq)을 첨가하고, 1시간 동안 75℃로 가열하였다. 용매를 제거하고, 물질을 물로 희석하고, DCM(2x)으로 추출하고, 농축하였다. 미정제 혼합물을 Prep-HPLC(10 내지 100% H2O/CH3CN, 20 mL/분, 30분)를 통해 정제하고, 동결건조시켜 134 mg의 AB12509를 백색 고체로서 수득하였다.To a solution of bisindole 5 (350 mg) in MeOH:H 2 O (9:1, 17.4 mL) was added K 2 CO 3 (456 mg, 3.5 eq) and heated to 75° C. for 1 h. The solvent was removed and the material was diluted with water, extracted with DCM (2x) and concentrated. The crude mixture was purified via Prep-HPLC (10-100% H 2 O/CH 3 CN, 20 mL/min, 30 min) and lyophilized to give 134 mg of AB12509 as a white solid.

화합물 B(CV-8877)의 합성Synthesis of compound B (CV-8877)

화합물 7의 합성Synthesis of compound 7

도 24g에 도시된 바와 같이, THF(10 mL) 중 화합물 II(1 gm, 0.0034 mol)의 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이러한 용액에 BOC 무수물(1.51 gm, 0.0069 mol) 및 DMAP(848 mg, 0.0069 mol)를 첨가하고, 0℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 15시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 회전증발기에 의해 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석하고, 1N HCl(50 mL), 소듐 바이카르보네이트 포화수용액 (50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 미정제 반응 혼합물을 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 풀링하고 농축하여 1.4 gm의 순수한 화합물 7을 오프 화이트 고체(수율 83%)로서 수득하였다.As shown in Figure 24g, a solution of compound II (1 gm, 0.0034 mol) in THF (10 mL) was cooled to 0 °C. To this solution were added BOC anhydride (1.51 gm, 0.0069 mol) and DMAP (848 mg, 0.0069 mol) and stirred at 0°C. The reaction mixture was warmed to room temperature and stirred for 15 h. Volatiles were removed by rotary evaporator. The residue was diluted with ethyl acetate (100 mL) and washed with 1N HCl (50 mL), saturated aqueous sodium bicarbonate solution (50 mL) and brine (50 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The crude reaction mixture was purified by column chromatography (0-10% ethyl acetate in hexanes). The desired fractions were pooled and concentrated to give 1.4 gm of pure compound 7 as an off white solid (83% yield).

화합물 8의 합성Synthesis of compound 8

t-BuOH(10 mL) 중 화합물 7(250 mg, 0.512 mmol)의 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이러한 용액에 2-메틸-2-부텐(10 mL)을 첨가하고, 이후에 NaClO2(1.5 g), NaH2PO4(1.5 g) 및 물(10 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 서서히 가온시키고, 실온에서 15시간 동안 격렬하게 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2(25 mL)로 희석하고, 물(50 mL) 및 염수(25 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 235 mg의 화합물 8(91% 수율)을 수득하였다. 미정제 반응 혼합물은 충분히 순수하였으며, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.A solution of compound 7 (250 mg, 0.512 mmol) in t-BuOH (10 mL) was cooled to 0 °C. To this solution was added 2-methyl-2-butene (10 mL) followed by NaClO 2 (1.5 g), NaH 2 PO 4 (1.5 g) and water (10 mL). The reaction mixture was slowly warmed to room temperature and stirred vigorously at room temperature for 15 h. The reaction mixture was diluted with CH 2 Cl 2 (25 mL) and washed with water (50 mL) and brine (25 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated to give 235 mg of compound 8 (91% yield). The crude reaction mixture was sufficiently pure, which was used in the next step without purification.

화합물 9의 합성Synthesis of compound 9

0℃에서 아세톤(10 mL) 중 화합물 8(100 mg, 0.198 mmol)의 용액에 K2CO3(83 mg, 0.595 mmol) 및 메틸 아이오다이드(30.97 mg, 0.218 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석하고, 물(25 mL) 및 염수(25 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 91 mg의 화합물 9(89% 수율)를 수득하였다. 미정제 반응 혼합물은 충분히 순수하였으며, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.To a solution of compound 8 (100 mg, 0.198 mmol) in acetone (10 mL) at 0° C. was added K 2 CO 3 (83 mg, 0.595 mmol) and methyl iodide (30.97 mg, 0.218 mmol). The reaction mixture was warmed to room temperature and stirred for 5 h. The reaction mixture was diluted with ethyl acetate (25 mL) and washed with water (25 mL) and brine (25 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated to give 91 mg of compound 9 (89% yield). The crude reaction mixture was sufficiently pure, which was used in the next step without purification.

화합물 B의 합성Synthesis of compound B

화합물 9(70 mg, 0.135 mmol)를 메탄올(5 ml)에 용해하였다. 이러한 용액에 K3PO4(57.3 mg, 0.27 mmol)를 첨가하고, 30분 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 휘발성 물질을 회전증발기에 의해 제거하였다. 잔류물을 에틸아세테이트(25 mL)에 용해하고, 물(2 x 25 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 얻어진 고형물을 디에틸에테르(10 mL) 중에서 1시간 동안 격렬하게 교반하고, 여과하여 화합물 B(25 mg, 수율 58%)를 수득하였다.Compound 9 (70 mg, 0.135 mmol) was dissolved in methanol (5 ml). To this solution was added K 3 PO 4 (57.3 mg, 0.27 mmol) and refluxed for 30 minutes. The reaction mixture was cooled to room temperature and the volatiles were removed by rotary evaporator. The residue was dissolved in ethyl acetate (25 mL) and washed with water (2 x 25 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The obtained solid was vigorously stirred in diethyl ether (10 mL) for 1 hour and filtered to give compound B (25 mg, yield 58%).

화합물 B10의 합성Synthesis of compound B10

도 24h에 도시된 바와 같이, 화합물 8(21 mg, 0.041 mmol)을 메탄올(3 ml) 중에 용해하였다. 이러한 용액에 K3PO4(17.6 mg, 0.083 mmol)를 첨가하고, 30분 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 휘발성 물질을 회전증발기에 의해 제거하였다. 잔류물을 에틸아세테이트(25 mL)에 용해하고, 물(2 x 25 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 수득된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 70 내지 100% 에틸아세테이트)에 의해 정제하고, 7 mg의 화합물 B10(수율 55%)을 수득하였다.As shown in Figure 24h, compound 8 (21 mg, 0.041 mmol) was dissolved in methanol (3 ml). To this solution was added K 3 PO 4 (17.6 mg, 0.083 mmol) and refluxed for 30 minutes. The reaction mixture was cooled to room temperature and the volatiles were removed by rotary evaporator. The residue was dissolved in ethyl acetate (25 mL) and washed with water (2 x 25 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The obtained residue was purified by column chromatography (70-100% ethyl acetate in hexane) to obtain 7 mg of compound B10 (yield 55%).

AB11644의 합성Synthesis of AB11644

도 24i에 도시된 바와 같이, CH3CN(11.5 mL) 및 알데하이드 2(294 mg, 4.16 mmol) 중 인돌 1(1.0 g, 8.54 mmol)의 용액에 I2(210 mg, 0.85 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반하였다. 반응을 Na2SO3으로 켄칭시키고, EtOAc(2x)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, FCC(SiO2, 10% EtOAc/헥산)를 통해 정제하고, 이후에 Prep-HPLC를 통해 정제하고, 동결건조시켜 106 mg의 대칭 비스인돌 3을 백색 고체로서 수득하였다.24i, to a solution of indole 1 (1.0 g, 8.54 mmol) in CH 3 CN (11.5 mL) and aldehyde 2 (294 mg, 4.16 mmol) was added I 2 (210 mg, 0.85 mmol) and , the reaction mixture was stirred at room temperature for 17 hours. The reaction was quenched with Na 2 SO 3 , extracted with EtOAc (2x), dried over Na 2 SO 4 , purified via FCC (SiO 2 , 10% EtOAc/hexanes), then via Prep-HPLC and lyophilized to give 106 mg of symmetric bisindole 3 as a white solid.

[M-H]- = 385. 1H NMR (CDCl3): 7.90 (bs, 2H), 7.49 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.15 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 7.00 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 1.52-2.00 (m, 1H), 0.60-0.66 (m, 2H), 0.36-0.41 (m, 2H).[MH]- = 385. 1 H NMR (CDCl 3 ): 7.90 (bs, 2H), 7.49 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.15 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 7.00 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 1.52-2.00 (m, 1H), 0.60-0.66 (m, 2H), 0.36-0.41 (m, 2H).

O52(AB12976)의 합성Synthesis of O52 (AB12976)

도 24j에 도시된 바와 같이, DCM(38 mL) 중 화합물 1(3.8 g)의 용액에 0℃에서 TEA, DMAP, 이후 Boc2O를 첨가하였다. 혼합물을 실온(18 내지 23℃)까지 가온시키고, 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 실리카 겔 크로마토그래피(PE:EA=30:1~20:1~10:1~5:1)에 의해 정제하여 화합물 2(6 g, 96%)를 황색 오일로서 수득하였다.As shown in Figure 24j, to a solution of compound 1 (3.8 g) in DCM (38 mL) at 0 °C was added TEA, DMAP, followed by Boc 2 O. The mixture was warmed to room temperature (18-23° C.) and stirred for 4 h. The mixture was concentrated and purified by silica gel chromatography (PE:EA=30:1~20:1~10:1~5:1) to give compound 2 (6 g, 96%) as a yellow oil.

아세톤/H2O(264 mL/64 mL) 중 화합물 2(6.6 g, 25.7 mmol, 1.0 eq)의 용액에 NMO(4.5 g, 38.6 mmol, 1.5 eq), OsO4(0.197 g, 2.57 mmol, 0.03 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온(18 내지 23℃)에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 Na2S2O3(200 mL)으로 켄칭시키고, 실온에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 EA(300 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축하여 미정제 화합물 3(9 g)을 갈색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.To a solution of compound 2 (6.6 g, 25.7 mmol, 1.0 eq) in acetone/H 2 O (264 mL/64 mL), NMO (4.5 g, 38.6 mmol, 1.5 eq), OsO 4 (0.197 g, 2.57 mmol, 0.03) eq) was added. The mixture was stirred at room temperature (18-23° C.) overnight. The mixture was quenched with Na 2 S 2 O 3 (200 mL) and stirred at room temperature for 10 min. The mixture was extracted with EA (300 mL*3). The organic phases were combined, dried over Na 2 SO 4 , and concentrated to give crude compound 3 (9 g) as a brown oil, which was used in the next step without further purification.

MeCN(80 mL) 중 화합물 3(9.3 g, 31.9 mmol, 1.0 eq)의용액에 0℃에서 TEA(9.68 g, 95.9 mmol, 3.0 eq), 이후 n-C4F9SO2F(14.45 g, 47.9 mmol, 1.5 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온(20 내지 25℃)까지 가온시키고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물에 물(80 mL)을 첨가하고, EA(150 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 유기상을 농축하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE:EA=10:1~5:1~3:1)에 의해 정제하여 화합물 4(5 g, 57%)를 황색 오일로서 수득하였다.To a solution of compound 3 (9.3 g, 31.9 mmol, 1.0 eq) in MeCN (80 mL) at 0 °C TEA (9.68 g, 95.9 mmol, 3.0 eq) followed by nC 4 F 9 SO 2 F (14.45 g, 47.9 mmol) , 1.5 eq) was added. The mixture was warmed to room temperature (20-25° C.) and stirred at room temperature for 2 h. To the mixture was added water (80 mL), and extracted with EA (150 mL*3). The organic phases were combined and dried over Na 2 SO 4 . The organic phase was concentrated and the residue was purified by silica gel chromatography (PE:EA=10:1~5:1~3:1) to give compound 4 (5 g, 57%) as a yellow oil.

DCM(18 mL) 중 화합물 5(1.84 g, 15.7 mmol, 1.0 eq)의 용액에 0℃에서 MeMgBr(3M)(10.47 mL, 31.4 mmol, 2.0 eq)을 적가하고, 용액을 30분 동안 교반하였다. 이후에, 용액을 -20℃까지 냉각시키고, DCM(18 mL) 중 화합물 4(3 g, 10.99 mmol, 0.7 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 -20℃에서 3시간 동안 교반하고, 이후에 실온까지 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 반응을 NH4Cl(aq)(50 mL)로 켄칭시키고, DCM(50mL*2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 유기상을 농축하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE:EA=10:1-5:1-3:1)에 의해 정제하여 화합물 6(3.2 g, 74%)을 약간 황색의 오일로서 수득하였다.To a solution of compound 5 (1.84 g, 15.7 mmol, 1.0 eq) in DCM (18 mL) at 0 °C was added MeMgBr(3M) (10.47 mL, 31.4 mmol, 2.0 eq) dropwise and the solution was stirred for 30 min. The solution was then cooled to -20 °C and compound 4 (3 g, 10.99 mmol, 0.7 eq) in DCM (18 mL) was added. The mixture was stirred at -20°C for 3 h, then warmed to room temperature and stirred for 1 h. The reaction was quenched with NH 4 Cl(aq) (50 mL) and extracted with DCM (50 mL*2). The organic phases were combined and dried over Na 2 SO 4 . The organic phase was concentrated and the residue was purified by silica gel chromatography (PE:EA=10:1-5:1-3:1) to give compound 6 (3.2 g, 74%) as a slightly yellow oil.

DCM(300 mL) 중 화합물 6(3.2 g, 8.21 mmol, 1.0 eq)의 용액에 데스-마틴(9.05 g, 21.33 mmol, 2.6 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 45℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3(60 mL) 및 Na2S2O3(60mL)으로 켄칭시켰다. 유기상 및 수성상을 분리하고, 수성층을 Et2O(100 mL*2)로 추출하였다. 유기상을 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 유기상을 농축하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE:EA=10:1-5:1-3:1)에 의해 정제하여 화합물 7(2.3 g, 71%)을 오렌지색-황색 고체로서 수득하였다.To a solution of compound 6 (3.2 g, 8.21 mmol, 1.0 eq) in DCM (300 mL) was added Dess-Martin (9.05 g, 21.33 mmol, 2.6 eq). The mixture was heated to 45° C. and stirred overnight. The reaction mixture was quenched with saturated NaHCO 3 (60 mL) and Na 2 S 2 O 3 (60 mL). The organic and aqueous phases were separated and the aqueous layer was extracted with Et 2 O (100 mL*2). The organic phases were combined and dried over Na 2 SO 4 . The organic phase was concentrated and the residue was purified by silica gel chromatography (PE:EA=10:1-5:1-3:1) to give compound 7 (2.3 g, 71%) as an orange-yellow solid.

DCM(16 mL) 중 화합물 7(830 mg, 2.14 mmol, 1.0 eq)의 용액에 0℃에서 TFA(4.876 g, 42.8 mmol, 20 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 가온시키고, 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에 의해 제거하고, 잔류물을 DCM(15 mL)으로 용해하였다. 버블이 나타나지 않을 때까지 용액에 소듐 바이카르보네이트의 수용액을 첨가하였다. 용액을 DCM(30 mL*3)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 유기상을 농축하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE:EA=20:1-10:1-5:1-3:1-2:1)에 의해 정제하여 화합물 AB12976(140 mg, 22%)을 갈색 고체로서 수득하였다.To a solution of compound 7 (830 mg, 2.14 mmol, 1.0 eq) in DCM (16 mL) at 0 °C was added TFA (4.876 g, 42.8 mmol, 20 eq). The mixture was warmed to room temperature and stirred at room temperature for 1.5 h. The solvent was removed by vacuum and the residue was dissolved with DCM (15 mL). An aqueous solution of sodium bicarbonate was added to the solution until no bubbles appeared. The solution was extracted with DCM (30 mL*3). The organic phases were combined and dried over Na 2 SO 4 . The organic phase was concentrated, and the residue was purified by silica gel chromatography (PE:EA=20:1-10:1-5:1-3:1-2:1) to give compound AB12976 (140 mg, 22%). Obtained as a brown solid.

TLC: PE:EA=, Rf (7) =0.4, Rf (AB12976) =0.1; 1H NMR (400 MHz, cdcl3) δ 8.08 (s, 2H), 7.47 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.20 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.11 (dd, J = 7.8, 7.1 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 4H). 13C NMR (101 MHz, cdcl3) δ 207.34, 136.12, 127.30, 123.33, 122.17, 119.67, 118.69, , 111.25, 108.57, 38.58.TLC: PE:EA=, Rf ( 7 ) =0.4, Rf ( AB12976 ) =0.1; 1 H NMR (400 MHz, cdcl 3 ) δ 8.08 (s, 2H), 7.47 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.20 (t, J = 7.5 Hz) , 2H), 7.11 (dd, J = 7.8, 7.1 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 4H). 13 C NMR (101 MHz, cdcl 3 ) δ 207.34, 136.12, 127.30, 123.33, 122.17, 119.67, 118.69, , 111.25, 108.57, 38.58.

말라세지아 인돌 A(AB17011)의 합성Synthesis of Malassezia indole A (AB17011)

도 24k에 도시된 바와 같이, DCM(20 mL) 중 화합물 1(20 g, 0.106 mol, 1.0 eq)의 용액에 Boc2O(24.4 g, 0.112 mol, 1.056 eq), DMAP(646 mg, 5.29 mmol, 0.05 eq) 및 TEA(534 mg, 5.29 mmol, 0.05 eq)를 순차적으로 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 2(24 g, 78%)를 수득하였다.As shown in Figure 24K, in a solution of compound 1 (20 g, 0.106 mol, 1.0 eq) in DCM (20 mL), Boc 2 O (24.4 g, 0.112 mol, 1.056 eq), DMAP (646 mg, 5.29 mmol) , 0.05 eq) and TEA (534 mg, 5.29 mmol, 0.05 eq) were added sequentially. The mixture was stirred at room temperature for 16 h. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Then, the mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel chromatography to give compound 2 (24 g, 78%).

MeCN(50 mL) 중 화합물 2(5 g, 17.30 mmol, 1.0 eq) 및 DBU(13.17 g, 86.51 mmol, 5.0 eq)의 용액에 0℃에서 P-ABSA(8.3 g, 34.60 mmol, 2.0 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 가온시키고, 실온에서 100분 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 3(3.5 g, 63%)을 수득하였다.To a solution of compound 2 (5 g, 17.30 mmol, 1.0 eq) and DBU (13.17 g, 86.51 mmol, 5.0 eq) in MeCN (50 mL) at 0 °C was added P-ABSA (8.3 g, 34.60 mmol, 2.0 eq) added. The mixture was warmed to room temperature and stirred at room temperature for 100 min. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Then, the mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel chromatography to give compound 3 (3.5 g, 63%).

MeOH(6 mL) 중 화합물 3(100 mg, 0.316 mmol, 1.0 eq)의 용액에 H2O(0.32 mL) 중 LiOH(7 mg, 0.316 mmol, 1.0 eq)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 감압 하에서 농축하여 미정제 화합물 4를 수득하였고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다.To a solution of compound 3 (100 mg, 0.316 mmol, 1.0 eq) in MeOH (6 mL) was added a solution of LiOH (7 mg, 0.316 mmol, 1.0 eq) in H 2 O (0.32 mL). The mixture was stirred at room temperature for 1 h. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Thereafter, the mixture was concentrated under reduced pressure to obtain crude compound 4, which was used directly in the next step.

DMSO(2 mL) 중 이전 단계로부터의 미정제 화합물 4의 용액에 질소 대기 하에서 HATU(156 mg, 0.410 mmol, 1.3 eq)를 첨가하였다. 이후에, 화합물 4a(81 mg, 0.316 mmol, 1.0 eq) 및 DIEA(123 mg, 0.950 mmol, 3.0 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 AB10758(58 mg, 49%)을 수득하였다..To a solution of crude compound 4 from the previous step in DMSO (2 mL) under nitrogen atmosphere was added HATU (156 mg, 0.410 mmol, 1.3 eq). Then compound 4a (81 mg, 0.316 mmol, 1.0 eq) and DIEA (123 mg, 0.950 mmol, 3.0 eq) were added. The mixture was stirred at room temperature for 15 hours. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Then, the mixture was diluted with water and extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography to give compound AB10758 (58 mg, 49%).

MeOH(5 mL) 중 화합물 AB10758(161.3 mg, 0.432 mmol, 1.0 eq)의 교반된 용액에 H2O(1 mL) 중 LiOH·H2O(90.6 mg, 2.16 mmol, 5.0 eq)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔류물을 동결건조시켜 화합물 AB17011(Li 염 형태, 108 mg, 정량)을 밝은 황색 고체로서 수득하였다.To a stirred solution of compound AB10758 (161.3 mg, 0.432 mmol, 1.0 eq) in MeOH (5 mL) was added a solution of LiOH.H 2 O (90.6 mg, 2.16 mmol, 5.0 eq) in H 2 O (1 mL) did. The mixture was stirred at room temperature for 3 hours. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Thereafter, the mixture was concentrated under reduced pressure and the residue was lyophilized to give compound AB17011 (Li salt form, 108 mg, quant.) as a light yellow solid.

피티리아시트린(AB17014)의 합성Synthesis of Phythyriacitrin (AB17014)

도 24l에 도시된 바와 같이, 무수 Et2O(20 mL) 중 화합물 1(5 g, 42.74 mmol, 1.0 eq)의 용액에 질소 대기 하 0℃에서 COCl2(6.5 g, 0.201 mol, 2.2 eq)를 서서히 첨가하였다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후에, 혼합물을 실온으로 가온시키고, 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 감압 하에서 농축하여 미정제 화합물 2(9 g, 100%)를 수득하였다.The (2.2 eq 6.5 g, 0.201 mol ,), in anhydrous Et 2 O (20 mL) of compound 1 (5 g, 42.74 mmol, 1.0 eq) solution COCl in a nitrogen atmosphere to 0 ℃ to 2 as shown in Figure 24l was added slowly. After stirring at 0° C. for 1 h, the mixture was warmed to room temperature and stirred at room temperature for 0.5 h. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Thereafter, the mixture was concentrated under reduced pressure to obtain crude compound 2 (9 g, 100%).

무수 EA(30 mL) 중 미정제 화합물 2(8 g, 38.28 mmol, 1.0 eq)의 용액에 질소 대기 하, 0℃에서 무수 EA(30 mL) 중 Bu3SnH(11.1 g, 38.28 mmol, 1.0 eq)의 용액을 첨가하였다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후에, 혼합물을 실온으로 가온시키고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 PE(80 mL)로 희석하고, 여과하였다. 필터 케이크를 PE로 세척하여 화합물 3(3 g, 45%)을 수득하였다.To a solution of crude compound 2 (8 g, 38.28 mmol, 1.0 eq) in anhydrous EA (30 mL) under nitrogen atmosphere at 0° C. Bu 3 SnH (11.1 g, 38.28 mmol, 1.0 eq) in anhydrous EA (30 mL) ) was added. After stirring at 0° C. for 0.5 h, the mixture was allowed to warm to room temperature and stirred at room temperature for 1 hour. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. The mixture was then diluted with PE (80 mL) and filtered. The filter cake was washed with PE to give compound 3 (3 g, 45%).

MeOH(10 mL) 중 화합물 3a(1.53 g, 7.51 mmol, 1.3 eq) 및 TsOH(1.29 g, 7.51 mmol, 1.3 eq)의 용액에 화합물 3(1 g, 5.78 mmol, 1.0 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 LCMS 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 prep-TLC(PE:아세톤=4:1)에 의해 정제하여 화합물 AB17014(261 mg, 9%)를 황색 고체로서 수득하였다.To a solution of compound 3a (1.53 g, 7.51 mmol, 1.3 eq) and TsOH (1.29 g, 7.51 mmol, 1.3 eq) in MeOH (10 mL) was added compound 3 (1 g, 5.78 mmol, 1.0 eq). The mixture was stirred at 50° C. for 2 h. LCMS analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Thereafter, the mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography prep-TLC (PE:acetone=4:1) to give compound AB17014 (261 mg, 9%) as a yellow solid.

1H NMR (400 MHz, dmso) δ 12.05 (d, J = 52.6 Hz, 1H), 9.24 (s, 1H), 8.55 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 8.39 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.61 - 7.50 (m, 2H), 7.28 (dd, J = 9.3, 5.1 Hz, 4H). 1 H NMR (400 MHz, dmso) δ 12.05 (d, J = 52.6 Hz, 1H), 9.24 (s, 1H), 8.55 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 8.39 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.61 - 7.50 (m, 2H), 7.28 (dd, J = 9.3, 5.1 Hz, 4H).

AB17151의 합성Synthesis of AB17151

도 24m에 도시된 바와 같이, MeOH(1400 mL) 중 화합물 1(40.0 g, 341 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 화합물 2(9.95 g, 142 mmol, 0.417 eq)를 첨가하고, 이후에 HCl의 1N 수용액(712 mL)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 70℃로 가열하였다. 이후에, MeOH를 진공에 의해 제거하고, 잔류물을 DCM으로 용해하였다. 혼합물을 물로 세척하고, 물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기상을 Na2SO4로 건조시키고, 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상의 컬럼 크로마토그래피(PE/EA, 20:1-5:1)에 의해 정제하여 화합물 3(7 g, 72%)을 밝은 오렌지색의 고체로서 수득하였다.As shown in Figure 24m, to a mixture of compound 1 (40.0 g, 341 mmol, 1.0 eq) in MeOH (1400 mL) was added compound 2 (9.95 g, 142 mmol, 0.417 eq) followed by 1N of HCl Aqueous solution (712 mL) was added and the mixture was heated to 70° C. for 1 h. Then, MeOH was removed by vacuum and the residue was dissolved with DCM. The mixture was washed with water and the water was extracted with DCM. The combined organic phases were dried over Na 2 SO 4 and concentrated. The residue was purified by column chromatography on silica gel (PE/EA, 20:1-5:1) to give compound 3 (7 g, 72%) as a light orange solid.

DMF(48.6 mL) 중 화합물 3(7.0 g, 24.5 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 0℃에서 DMF(59.8 mL) 중 POCl3(3.78 g, 24.5 mmol, 1.0 eq)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온(13 내지 18℃)까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 이후에, 혼합물을 NaHCO3(sat)으로 켄칭시키고, EtOAc(2 x 110 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상의 컬럼 크로마토그래피(PE/EA, 7:1) 및 이후 prep-HPLC에 의해 정제하여 AB12508(4.4 g, 57%)을 연한 녹색 고체로서 수득하였다.To a mixture of compound 3 (7.0 g, 24.5 mmol, 1.0 eq) in DMF (48.6 mL) was added to a solution of POCl 3 (3.78 g, 24.5 mmol, 1.0 eq) in DMF (59.8 mL) at 0 °C. The reaction mixture was warmed to room temperature (13-18° C.) and stirred overnight. The mixture was then quenched with NaHCO 3 (sat), extracted with EtOAc (2×110 mL), dried over Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography on silica gel (PE/EA, 7:1) followed by prep-HPLC to give AB12508 (4.4 g, 57%) as a pale green solid.

DCM(100 mL) 중 AB12508(4.5 g, 14.33 mmol, 1.0 eq), Boc2O(14.06 g, 64.5 mmol, 4.5 eq), DMAP(388.5 mg, 1.433 mmol, 0.1 eq) 및 TEA(7.24 g, 71.65 mmol, 5.0 eq)의 혼합물을 3시간 동안 50℃로 가열하였다. 이후에, 혼합물을 실온(13 내지 18℃)까지 냉각시키고, 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상의 컬럼 크로마토그래피(PE/EA, 100:1~30:1)에 의해 정제하여 화합물 4(5.4 g, 73%)를 수득하였다.AB12508 (4.5 g, 14.33 mmol, 1.0 eq), Boc 2 O (14.06 g, 64.5 mmol, 4.5 eq), DMAP (388.5 mg, 1.433 mmol, 0.1 eq) and TEA (7.24 g, 71.65) in DCM (100 mL) mmol, 5.0 eq) was heated to 50° C. for 3 h. Thereafter, the mixture was cooled to room temperature (13-18° C.) and concentrated. The residue was purified by column chromatography on silica gel (PE/EA, 100:1-30:1) to give compound 4 (5.4 g, 73%).

THF(50 mL) 중 화합물 4(5.4 g, 10.5 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 실온(13 내지 18℃)에서 H2O(20 mL), NaH2PO4(4.586 g, 29.4 mmol, 2.8 eq) 및 NaClO2(2.85 g, 31.5 mmol, 3.0 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 이후에, 혼합물을 EA(3 x 50 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상의 컬럼 크로마토그래피(PE/EA, 50:1-10:1)에 의해 정제하여 화합물 5(2.5 g, 45%)를 수득하였다.To a mixture of compound 4 (5.4 g, 10.5 mmol, 1.0 eq) in THF (50 mL) at room temperature (13-18 °C) H 2 O (20 mL), NaH 2 PO 4 (4.586 g, 29.4 mmol, 2.8 eq) ) and NaClO 2 (2.85 g, 31.5 mmol, 3.0 eq) were added. The mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The reaction was monitored by TLC. Then the mixture was extracted with EA (3×50 mL), dried over Na 2 SO 4 and concentrated. The residue was purified by column chromatography on silica gel (PE/EA, 50:1-10:1) to give compound 5 (2.5 g, 45%).

DMF(20 mL) 중 화합물 5(2.5 g, 4.717 mmol, 1.0 eq) 및 K2CO3(0.976 g, 7.075 mmol, 1.5 eq)의 혼합물에 실온(13 내지 18℃)에서 CH3I(1.0 g, 7.075 mmol, 1.5 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 이후에, 혼합물을 물(20 mL)로 희석하였다. 혼합물을 EA(3 x 50 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상의 컬럼 크로마토그래피(PE/EA, 100:1-10:1)에 의해 정제하여 화합물 6(1.8 g, 70%)을 수득하였다.To a mixture of compound 5 (2.5 g, 4.717 mmol, 1.0 eq) and K 2 CO 3 (0.976 g, 7.075 mmol, 1.5 eq) in DMF (20 mL) at room temperature (13-18° C.) CH 3 I (1.0 g , 7.075 mmol, 1.5 eq) was added. The mixture was stirred at 60° C. for 1 h. The reaction was monitored by TLC. Then the mixture was diluted with water (20 mL). The mixture was extracted with EA (3×50 mL), dried over Na 2 SO 4 and concentrated. The residue was purified by column chromatography on silica gel (PE/EA, 100:1-10:1) to give compound 6 (1.8 g, 70%).

3.0 M HCl/MeOH(20 mL) 중 화합물 6(1.8 g, 3.3 mmol, 1.0 eq)의 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 이후에, MeOH를 진공에 의해 제거하고, 잔류물을 DCM으로 용해하였다. 혼합물을 물로 세척하고, 물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기상을 Na2SO4로 건조시키고, 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상의 컬럼 크로마토그래피(PE/EA, 20:1-5:1)에 의해 정제하여 화합물 AB17151(810 mg, 순수하지 않음)을 수득하고, 이를 PE/EA(5 mL)로 분쇄하여 화합물 AB17151(680 mg, 60%)을 오프-화이트 고체로서 수득하였다.A mixture of compound 6 (1.8 g, 3.3 mmol, 1.0 eq) in 3.0 M HCl/MeOH (20 mL) was stirred at 60° C. for 2 h. The reaction was monitored by TLC. Then, MeOH was removed by vacuum and the residue was dissolved with DCM. The mixture was washed with water and the water was extracted with DCM. The combined organic phases were dried over Na 2 SO 4 and concentrated. The residue was purified by column chromatography on silica gel (PE/EA, 20:1-5:1) to give compound AB17151 (810 mg, not pure), which was triturated with PE/EA (5 mL) Compound AB17151 (680 mg, 60%) was obtained as an off-white solid.

1H NMR (400 MHz, dmso) δ 11.56 (s, 1H), 10.98 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 6.2, 3.1 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.30 (ddd, J = 8.0, 4.7, 3.1 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.11 - 7.05 (m, 2H), 7.00 - 6.95 (m, 1H), 6.80 (ddd, J = 8.0, 7.0, 1.0 Hz, 1H), 4.74 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 1.71 - 1.62 (m, 1H), 0.73 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 0.44 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 0.38 - 0.26 (m, 2H). 1 H NMR (400 MHz, dmso) δ 11.56 (s, 1H), 10.98 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 6.2, 3.1 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.30 (ddd, J = 8.0, 4.7, 3.1 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.11 - 7.05 (m, 2H), 7.00 - 6.95 (m, 1H), 6.80 (ddd, J = 8.0, 7.0, 1.0 Hz, 1H), 4.74 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 1.71 - 1.62 (m, 1H), 0.73 (t, J = 6.9 Hz, 1H) ), 0.44 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 0.38 - 0.26 (m, 2H).

화합물 VI(AB17225)의 합성Synthesis of compound VI (AB17225)

도 24n에 도시된 바와 같이, MeOH(10 mL) 중 화합물 1(600 mg, 2.308 mmol, 1.0 eq)의 교반된 용액에 질소 대기 하에서 MeSO3H(27 mg, 0.281 mmol, 0.12 eq) 및 트리에틸 오르쏘아세테이트(935 mg, 5.772 mmol, 2.5 eq)를 순차적으로 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 LCMS 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH로 2회 세척하여 화합물 AB17225(500 mg, 76%)를 백색 고체로서 수득하였다.As shown in Figure 24n, to a stirred solution of compound 1 (600 mg, 2.308 mmol, 1.0 eq) in MeOH (10 mL) under nitrogen atmosphere MeSO 3 H (27 mg, 0.281 mmol, 0.12 eq) and triethyl Orthoacetate (935 mg, 5.772 mmol, 2.5 eq) was added sequentially. The mixture was stirred at room temperature for 16 h. LCMS analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Then the mixture was filtered and the filter cake was washed twice with MeOH to give compound AB17225 (500 mg, 76%) as a white solid.

1H NMR (400 MHz, dmso) δ 11.03 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.44 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.11 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.35 (d, J = 2.3 Hz, 3H), 3.00 (s, 3H). 1 H NMR (400 MHz, dmso) δ 11.03 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.88 ( s, 1H), 7.44 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.11 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.92 ( d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.35 (d, J = 2.3 Hz, 3H), 3.00 (s, 3H).

말라세지아락트산(AB17227)Malassezialactic acid (AB17227)

도 24o에 도시된 바와 같이, 디옥산(200 mL) 중 화합물 1(15.0 g, 57.5 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 인돌(13.5 g, 115.0 mol, 2.0 eq), 트리스(펜타플루오로페닐)포스핀(6.1 g, 11.4 mmol, 0.2 eq), Na2CO3(9.1 g, 86.2 mmol, 1.5 eq) 및 PtCl2(1.5 g, 5.7 mmol, 0.1 eq)를 첨가하였다. 플라스크를 질소로 탈기시키고, 시일링하고, 밤새 100℃로 가열하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석하고, 물, 포화 NaCl로 세척하였다. 용액을 진공 중에서 농축하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(PE:EA, 200:1~100:1)에 의해 정제하여 화합물 2(8.3 g, 46.7%)를 갈색 고체로서 수득하였다.24o, indole (13.5 g, 115.0 mol, 2.0 eq), tris(pentafluorophenyl)phos to a mixture of compound 1 (15.0 g, 57.5 mmol, 1.0 eq) in dioxane (200 mL) Pin (6.1 g, 11.4 mmol, 0.2 eq), Na 2 CO 3 (9.1 g, 86.2 mmol, 1.5 eq) and PtCl 2 (1.5 g, 5.7 mmol, 0.1 eq) were added. The flask was degassed with nitrogen, sealed and heated to 100° C. overnight. The reaction was monitored by TLC. The solvent was evaporated under reduced pressure. The residue was diluted with ethyl acetate (200 mL) and washed with water, saturated NaCl. The solution was concentrated in vacuo. The crude compound was purified by column chromatography (PE:EA, 200:1-100:1) to give compound 2 (8.3 g, 46.7%) as a brown solid.

MeOH(350 mL) 및 물(125 mL) 중 화합물 2(7.4 g, 21.4 mmol, 1.0 eq)의 용액에 실온에서 K2CO3(11.8 g, 85.6 mmol, 4.0 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 주변 온도까지 냉각시키고, 용매를 진공 중에서 농축하였다. 이후에, 잔류물을 에틸 아세테이트(500 mL) 중에 용해하고, 물, 염수로 세척하였다. 용액을 진공 중에서 농축하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(P:E, 50:1~ 20:1~ PE:EA:DCM, 10:1:1)에 의해 정제하여 화합물 3(4.1 g, 77.9%)을 황색 고체로서 수득하였다.To a solution of compound 2 (7.4 g, 21.4 mmol, 1.0 eq) in MeOH (350 mL) and water (125 mL) at room temperature was added K 2 CO 3 (11.8 g, 85.6 mmol, 4.0 eq). The mixture was stirred at 90° C. overnight. The reaction was monitored by TLC. The reaction mixture was cooled to ambient temperature and the solvent was concentrated in vacuo. The residue was then dissolved in ethyl acetate (500 mL) and washed with water, brine. The solution was concentrated in vacuo. The crude compound was purified by column chromatography (P:E, 50:1 to 20:1 to PE:EA:DCM, 10:1:1) to give compound 3 (4.1 g, 77.9%) as a yellow solid. did.

N2 하에서, DCE(40 mL) 중 화합물 3(2.8 g, 11.4 mmol, 1.0 eq) 및 Yb(CF3SO2)3(2.1 g, 3.4 mmol, 0.3 eq)의 용액. 혼합물에 N2 하에서 화합물 4(1.4 g, 13.7 mmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응을 sat. Na2CO3(40 mL)으로 켄칭시키고, 용액을 2M HCl로 산성화시켰다. 용액을 DCM(3 x 40 mL)으로 추출하고, 합한 유기층을 염수(40 mL)로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 농축하여 미정제 화합물 5(2.45 g, 90.7%)를 핑크색 고체로서 수득하였다.A solution of compound 3 (2.8 g, 11.4 mmol, 1.0 eq) and Yb(CF 3 SO 2 ) 3 (2.1 g, 3.4 mmol, 0.3 eq) in DCE (40 mL) under N 2 . To the mixture was added compound 4 (1.4 g, 13.7 mmol, 1.2 eq) under N 2 . The mixture was stirred at 80° C. for 2 h. The reaction was monitored by TLC. react sat. Quench with Na 2 CO 3 (40 mL) and the solution acidified with 2M HCl. The solution was extracted with DCM (3 x 40 mL) and the combined organic layers were washed with brine (40 mL), dried (Na 2 SO 4 ), and concentrated to give crude compound 5 (2.45 g, 90.7%) as a pink solid. was obtained as

MeOH(40 mL) 및 물(10 mL) 중 화합물 5(690 mg, 1.95 mmol, 1.0 eq)의 용액에 NaOH(0.15 g, 3.9 mmol, 2.0 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응을 건조시키고(Na2SO4), 농축하였다. 잔류물을 2M HCl로 산성화시켰다. 용액을 DCM(3 x 150 mL)으로 추출하고, 합한 유기층을 염수(150 mL)로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 농축하였다. 잔류물을 Pre-HPLC에 의해 정제하여 AB17227(330 mg, 51%)을 보라색 고체로서 수득하였다.To a solution of compound 5 (690 mg, 1.95 mmol, 1.0 eq) in MeOH (40 mL) and water (10 mL) was added NaOH (0.15 g, 3.9 mmol, 2.0 eq). The mixture was stirred at room temperature for 2.5 hours. The reaction was monitored by TLC. The reaction was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was acidified with 2M HCl. The solution was extracted with DCM (3×150 mL) and the combined organic layers were washed with brine (150 mL), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by Pre-HPLC to give AB17227 (330 mg, 51%) as a purple solid.

TLC: DCM:MeOH=10:1, Rf(5)=0.9, Rf(AB17227)=0.2TLC: DCM:MeOH=10:1, Rf (5) =0.9, Rf (AB17227) =0.2

1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.84(s, 1H), 10.57 (s, 1H), 7.49-7.43(dd, J1=8.0Hz, J2=7.2Hz, 2H), 7.32-7.30(d, J = 8.0Hz, 1H), 7.20-7.18(d, J = 7.6Hz, 1H), 7.10-7.09 (m, 1H), 7.05-7.01(m, 1H), 6.95-6.87(m, 3H), 4.19-4.10(m, 3H), 3.17-3.12(m, 1H), 2.98-2.94(m, 1H). 1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.84(s, 1H), 10.57 (s, 1H), 7.49-7.43 (dd, J1=8.0Hz, J2=7.2Hz, 2H), 7.32-7.30(d, J) = 8.0Hz, 1H), 7.20-7.18(d, J = 7.6Hz, 1H), 7.10-7.09 (m, 1H), 7.05-7.01(m, 1H), 6.95-6.87(m, 3H), 4.19- 4.10 (m, 3H), 3.17-3.12 (m, 1H), 2.98-2.94 (m, 1H).

AB12507의 합성Synthesis of AB12507

도 24p에 도시된 바와 같이, THF(250 ml) 중 화합물 1(25 g, 357 mmol, 1.0 eq)의 용액에 질소 대기 하, 0℃에서 DMF(200 mL) 중 NaH(17 g, 428.4 mmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 30분 후에, 혼합물에 0℃에서 디메틸 설페이트(81 g, 642 mmol, 1.8 eq)를 첨가하였다. 첨가 후에, 반응 혼합물을 주변 온도에서 30분 동안 교반하고, 이후에, 아세트산을 서서히 첨가하였다. 생성물을 반응 혼합물로부터 직접 증류하였다. 화합물 2(25 g, 83%)를 수득하였다.As shown in Figure 24p, in a solution of compound 1 (25 g, 357 mmol, 1.0 eq) in THF (250 ml) under nitrogen atmosphere at 0 °C in DMF (200 mL) NaH (17 g, 428.4 mmol, 1.2 eq) was added. After 30 min, to the mixture was added dimethyl sulfate (81 g, 642 mmol, 1.8 eq) at 0°C. After addition, the reaction mixture was stirred at ambient temperature for 30 minutes, after which acetic acid was added slowly. The product was distilled directly from the reaction mixture. Compound 2 (25 g, 83%) was obtained.

THF(200 ml) 중 화합물 3(20 g, 86 mmol, 1.0 eq)의 용액에 0℃에서 2M NaHMDS(94.6 mL, 189.2 mmol, 2.2 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물에 0℃에서에서 40분 동안 THF(200 ml) 중 Boc2O(21 g, 94.6 mmol, 1.1 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이후에, 혼합물에 포화 NH4Cl을 첨가하고, EA(3 x 200 mL)로 추출하고, 반응 혼합물을 물로 세척하였다. 유기층을 염수로 세척하였다. 잔류물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 상의 컬럼 크로마토그래피(PE/EA, 60:1-50:1)에 의해 정제하여 화합물 4(18 g, 83%)를 수득하였다.To a solution of compound 3 (20 g, 86 mmol, 1.0 eq) in THF (200 ml) at 0° C. was added 2M NaHMDS (94.6 mL, 189.2 mmol, 2.2 eq). The mixture was stirred at 0° C. for 30 min. To the mixture was added Boc 2 O (21 g, 94.6 mmol, 1.1 eq) in THF (200 ml) at 0° C. for 40 min. The mixture was stirred at room temperature for 1 h. Then, to the mixture was added saturated NH 4 Cl, extracted with EA (3×200 mL), and the reaction mixture was washed with water. The organic layer was washed with brine. The residue was dried over Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography on silica gel (PE/EA, 60:1-50:1) to give compound 4 (18 g, 83%).

CuI(57 mg, 0.3 mmol, 0.1 eq) 및 PdCl2(PPh3)4(105 g, 0.15 mmol, 0.05 eq)를 TEA(10 mL) 중 화합물 4(1.0 g, 3 mmol, 1.0 eq)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 혼합물을 질소 대기 하, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물 EA(3 x 10 mL)로 희석하고, 반응 혼합물을 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하여 갈색 오일로서 수득하였다. 미정제 화합물 컬럼 크로마토그래피(PE/EA, 60:1-50:1)에 의해 정제하여 화합물 5(900 mg, 100%)를 수득하였다.Degassing of compound 4 (1.0 g, 3 mmol, 1.0 eq) in TEA (10 mL) with CuI (57 mg, 0.3 mmol, 0.1 eq) and PdCl 2 (PPh 3 ) 4 (105 g, 0.15 mmol, 0.05 eq) was added to the solution. The mixture was stirred at room temperature under nitrogen atmosphere for 2 hours. The reaction was monitored by TLC. The reaction mixture was diluted with EA (3×10 mL) and the reaction mixture was washed with water, saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered off and concentrated in vacuo to give as a brown oil. The crude compound was purified by column chromatography (PE/EA, 60:1-50:1) to give compound 5 (900 mg, 100%).

디옥산(50 mL) 중 화합물 5(5 g, 17 mmol, 1.0 eq), PtCl2(900 mg, 1.7 mmol, 0.1 eq), Na2CO3(2.7 g, 25.5 mmol, 1.5 eq) 및 인돌(4.0 g, 34 mmol, 2.0 eq)의 용액을 질소 대기 하, 100℃에서 12시간 동안 환류하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 반응 혼합물 EA(3 x 50mL)로 희석하고, 반응 혼합물을 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 미정제 화합물 컬럼 크로마토그래피(PE/EA, 50:1-40:1)에 의해 정제하여 화합물 6(3 g, 80%)을 수득하였다.Compound 5 (5 g, 17 mmol, 1.0 eq), PtCl 2 (900 mg, 1.7 mmol, 0.1 eq), Na 2 CO 3 (2.7 g, 25.5 mmol, 1.5 eq) and indole ( 4.0 g, 34 mmol, 2.0 eq) was refluxed at 100° C. under nitrogen atmosphere for 12 hours. The reaction was monitored by TLC. The solvent was evaporated under reduced pressure. The reaction mixture was diluted with EA (3×50 mL) and the reaction mixture was washed with water, saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered and concentrated in vacuo. The crude compound was purified by column chromatography (PE/EA, 50:1-40:1) to give compound 6 (3 g, 80%).

메탄올(75 mL) 및 물(25 mL) 중 화합물 6(3 g, 8 mmol, 1.0 eq)의 용액에 실온에서 K2CO3(3.8 g, 0.027 mol)을 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 밤새 환류 가열하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 용매를 진공 중에서 농축하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트(200 mL) 중에 취하고, 물 및 염수로 세척하고, 이후에 건조시키고(소듐 설페이트), 여과하고, 용매를 진공 중에서 농축하였다. 미정제 화합물을 컬럼 크로마토그래피(PE/EA, 50:1-20:1)에 의해 정제하여 화합물 7(1.5 g, 75%)을 수득하였다.To a solution of compound 6 (3 g, 8 mmol, 1.0 eq) in methanol (75 mL) and water (25 mL) at room temperature was added K 2 CO 3 (3.8 g, 0.027 mol). The resulting suspension was heated to reflux overnight. The reaction was monitored by TLC. The reaction mixture was cooled to room temperature and the solvent was concentrated in vacuo. The residue was taken up in ethyl acetate (200 mL), washed with water and brine, then dried (sodium sulfate), filtered and the solvent concentrated in vacuo. The crude compound was purified by column chromatography (PE/EA, 50:1-20:1) to give compound 7 (1.5 g, 75%).

DMF(1 mL) 중 POCl3(73 mg, 0.48 mmol, 1.2 eq)의 용액을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물에 DMF(1 mL) 중 화합물 7(100 mg, 0.4 mmol, 1.0 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 소듐 바이카르보네이트 포화수용액(2 mL)에 붓고, 1시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 EA(2 x 2 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 물, 포화된 NaCl로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔류물을 Prep-TLC에 의해 정제하여 AB12507(60 mg, 50%)을 수득하였다. A solution of POCl 3 (73 mg, 0.48 mmol, 1.2 eq) in DMF (1 mL) was stirred at 0° C. for 30 min. To the mixture was added compound 7 (100 mg, 0.4 mmol, 1.0 eq) in DMF (1 mL). The mixture was stirred at room temperature for 12 h. The reaction was monitored by TLC. The reaction mixture was poured into a saturated aqueous sodium bicarbonate solution (2 mL) and stirred for 1 hour. The resulting mixture was extracted with EA (2 x 2 mL). The organic layers were combined, washed with water, saturated NaCl and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by Prep-TLC to give AB12507 (60 mg, 50%).

화합물 V(AB17219)의 합성Synthesis of compound V (AB17219)

도 24q에 도시된 바와 같이, THF(200 mL) 중 화합물 1(20 g, 91.32 mmol, 1.0 eq)의 용액에 질소 대기 하, 0℃에서 NaHMDS(THF 중 2 M, 94.6 mL, 0.201 mol, 2.2 eq)를 서서히 첨가하였다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후에, THF(40 mL) 중 (Boc)2O(21 g, 0.100 mol, 1.1 eq)의 용액을 0℃에서 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온시키고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에 혼합물을 포화된 NH4Cl(200 mL)로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE: EA=100%-30:1)에 의해 정제하여 화합물 2(18 g, 62%)를 황색 오일로서 수득하였다.As shown in Figure 24q, NaHMDS (2M in THF, 94.6 mL, 0.201 mol, 2.2 in a solution of compound 1 (20 g, 91.32 mmol, 1.0 eq) in THF (200 mL) under nitrogen atmosphere at 0 °C. eq) was added slowly. After stirring at 0 °C for 0.5 h, a solution of (Boc) 2 O (21 g, 0.100 mol, 1.1 eq) in THF (40 mL) was added slowly at 0 °C. The mixture was warmed to room temperature and stirred at room temperature for 1 h. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. The mixture was then quenched with saturated NH 4 Cl (200 mL) and extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (PE: EA=100%-30:1) to give compound 2 (18 g, 62%) as a yellow oil.

TEA(10 mL) 중 화합물 2(1 g, 3.13 mmol, 1.0 eq) 및 화합물 2a(0.24 g, 3.43 mmol, 1.1 eq)의 용액에 질소 대기 하, 실온에서 CuI(60 mg, 0.316 mmol, 0.1 eq) 및 Pd(PPh3)2Cl2(44 mg, 0.0627 mmol, 0.02 eq)를 순차적으로 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE: EA=100%-50:1)에 의해 정제하여 화합물 3(720 mg, 93%)을 황색 오일로서 수득하였다.To a solution of compound 2 (1 g, 3.13 mmol, 1.0 eq) and compound 2a (0.24 g, 3.43 mmol, 1.1 eq) in TEA (10 mL) under nitrogen atmosphere at room temperature with CuI (60 mg, 0.316 mmol, 0.1 eq) ) and Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 (44 mg, 0.0627 mmol, 0.02 eq) were added sequentially. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Then, the mixture was diluted with water and extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (PE: EA=100%-50:1) to give compound 3 (720 mg, 93%) as a yellow oil.

디옥산(25 mL) 중 화합물 3(1 g, 3.83 mmol, 1.0 eq)의 용액에 질소 대기 하에서 10% PtCl2(0.1 g, 0.376 mmol, 0.1 eq), 5-메틸 인돌(1 g, 7.63 mmol, 2.0 eq), 트리스(펜타플루오로페닐)포스핀(407 mg, 0.765 mmol, 0.2 eq) 및 Na2CO3(0.61 g, 5.75 mmol, 1.5 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE: EA=100%-6:1)에 의해 정제하여 화합물 4(500 mg, 93%)를 황색 오일로서 수득하였다.To a solution of compound 3 (1 g, 3.83 mmol, 1.0 eq) in dioxane (25 mL) under nitrogen atmosphere 10% PtCl 2 (0.1 g, 0.376 mmol, 0.1 eq), 5-methyl indole (1 g, 7.63 mmol) , 2.0 eq), tris(pentafluorophenyl)phosphine (407 mg, 0.765 mmol, 0.2 eq) and Na 2 CO 3 (0.61 g, 5.75 mmol, 1.5 eq) were added. The mixture was stirred at 100° C. for 16 h. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Then, the mixture was diluted with water and extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (PE: EA=100%-6:1) to give compound 4 (500 mg, 93%) as a yellow oil.

MeOH/H2O(20 mL/10 mL) 중 화합물 4(785 mg, 2.18 mmol, 1.0 eq)의 용액에 K2CO3(1.2 g, 8.70 mmol, 4.0 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(PE: EA=100%-6:1)에 의해 정제하여 화합물 5(360 mg, 93%)를 수득하였다.To a solution of compound 4 (785 mg, 2.18 mmol, 1.0 eq) in MeOH/H 2 O (20 mL/10 mL) was added K 2 CO 3 (1.2 g, 8.70 mmol, 4.0 eq). The mixture was stirred at 90° C. for 16 h. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Then, the mixture was diluted with water and extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (PE: EA=100%-6:1) to give compound 5 (360 mg, 93%).

MeOH(10 mL) 중 화합물 5(0.85 g, 3.27 mmol, 1.0 eq)의 교반된 용액에 질소 대기 하에서 MeSO3H(38 mg, 0.39 mmol, 0.12 eq) 및 트리에틸 오르쏘아세테이트(1.32 g, 8.18 mmol, 2.5 eq)를 순차적으로 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 이후에, 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH로 세척하여 화합물 AB17219(700 mg, 75%)를 연한 황색 고체로서 수득하였다.To a stirred solution of compound 5 (0.85 g, 3.27 mmol, 1.0 eq) in MeOH (10 mL) under nitrogen atmosphere MeSO 3 H (38 mg, 0.39 mmol, 0.12 eq) and triethyl orthoacetate (1.32 g, 8.18) mmol, 2.5 eq) were added sequentially. The mixture was stirred at room temperature for 4 hours. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. Then the mixture was filtered and the filter cake was washed with MeOH to give compound AB17219 (700 mg, 75%) as a pale yellow solid.

1H NMR (400 MHz, dmso) δ 11.01 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 8.21 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 19.3 Hz, 2H), 7.44 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 3.00 (s, 3H), 2.47 (s, 3H). 1 H NMR (400 MHz, dmso) δ 11.01 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 8.21 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 19.3 Hz, 2H), 7.44 ( d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 3.00 (s, 3H), 2.47 ( s, 3H).

화합물 VIII(AB17220)의 합성Synthesis of compound VIII (AB17220)

도 24r에 도시된 바와 같이, H2O(58 mL) 중 CrO3(39 g, 0.39 mol, 20.0 eq)의 용액에 -5℃에서 AcOH(58 mL) 중 화합물 1(5.0 g, 19.53 mmol, 1.0 eq)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 0 내지 5℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 TLC 분석에서는 요망되는 생성물로의 완전 전환을 나타내었다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 EtOH 및 H2O로 세척하였다. 이후에, 혼합물을 여과하여 순수하지 않은 화합물 2(1.652 g, 29%)를 수득하였다.As shown in Figure 24r, in a solution of CrO 3 (39 g, 0.39 mol, 20.0 eq) in H 2 O (58 mL) at -5 °C in AcOH (58 mL) compound 1 (5.0 g, 19.53 mmol, 1.0 eq) of the solution was added. The mixture was stirred at 0-5° C. for 2 h. TLC analysis of the reaction mixture showed complete conversion to the desired product. The mixture was filtered and the filter cake was washed with EtOH and H 2 O. Then, the mixture was filtered to give impure compound 2 (1.652 g, 29%).

Ac2O(160 mL) 중 순수하지 않은 화합물 2(1.9 g, 6.64 mmol, 1.0 eq)의 용액에 Zn 더스트(dust)(4.34 g, 66.77 mmol, 10.0 eq) 및 AcONa(1.35 g, 9.96 mmol, 1.5 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 160℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 비등 Ac2O 및 아세톤으로 순차적으로 세척하였다. 이후에, 혼합물을 여과하여 화합물 AB17220(417 mg, 16%)을 수득하였다.To a solution of impure compound 2 (1.9 g, 6.64 mmol, 1.0 eq) in Ac 2 O (160 mL) was Zn dust (4.34 g, 66.77 mmol, 10.0 eq) and AcONa (1.35 g, 9.96 mmol, 1.5 eq) was added. The mixture was stirred at 160° C. for 0.5 h. The mixture was filtered and washed sequentially with boiling Ac 2 O and acetone. Then, the mixture was filtered to give compound AB17220 (417 mg, 16%).

1H NMR (400 MHz, dmso) δ 11.35 (s, 2H), 8.00 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.47 (dd, J = 20.4, 7.7 Hz, 4H), 7.17 (s, 2H), 2.64 (s, 6H). 1 H NMR (400 MHz, dmso) δ 11.35 (s, 2H), 8.00 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.47 (dd, J = 20.4, 7.7 Hz, 4H), 7.17 (s, 2H), 2.64 (s, 6H).

화합물 VII(AB17221)의 합성Synthesis of compound VII (AB17221)

도 24s에 도시된 바와 같이, 화합물 1(348 mg, 2.1 mmol, 2.1 eq), 화합물 2(246 mg, 1 mmol, 1 eq), Aliquat(20 mg, 0.05 eq), 칼륨 카르보네이트 aq(773 mg, 5.6 mg, 2 M), Pd(PPh3)4(23 mg, 0.02 mmol, 0.02 eq) 및 디옥산(7 mL)의 혼합물을 3차례 탈기시켰다. 반응 혼합물을 밤새 환류 가열하였다. 냉각 후에, 반응 혼합물을 1N HCl aq(15 mL)에 의해 켄칭시켰다. 얻어진 침전물을 원심분리하고, MeOH/H2O(1:1, 10 mL x 2)로 세척하였다. 얻어진 생성물을 진공 하에서 건조시켰다.24S, compound 1 (348 mg, 2.1 mmol, 2.1 eq), compound 2 (246 mg, 1 mmol, 1 eq), Aliquat (20 mg, 0.05 eq), potassium carbonate aq (773) A mixture of mg, 5.6 mg, 2 M), Pd(PPh 3 ) 4 (23 mg, 0.02 mmol, 0.02 eq) and dioxane (7 mL) was degassed three times. The reaction mixture was heated to reflux overnight. After cooling, the reaction mixture was quenched with 1N HCl aq (15 mL). The resulting precipitate was centrifuged and washed with MeOH/H 2 O (1:1, 10 mL×2). The obtained product was dried under vacuum.

이후에, 화합물 3 (30 mg, 0.073 mmol) 및 트리에틸포스파이트(122 mg, 0.73 mmol, 10 eq)의 혼합물을 3차례 탈기시키고, 48시간 동안 152℃로 가열하였다. 냉각 후에, 반응 혼합물을 0.5 mL EtOH 및 0.2 mL H2O의 용액에 첨가하였다. 얻어진 침전물을 원심분리하고, EtOH/H2O(1:1, 0.3 mL x 2)로 세척하였다. 얻어진 생성물을 진공 하에서 건조시키고, prep-HPLC에 의해 정제하여 AB17221(9.4 mg)을 수득하였다.Then, a mixture of compound 3 (30 mg, 0.073 mmol) and triethylphosphite (122 mg, 0.73 mmol, 10 eq) was degassed three times and heated to 152° C. for 48 h. After cooling, the reaction mixture was added to a solution of 0.5 mL EtOH and 0.2 mL H 2 O. The resulting precipitate was centrifuged and washed with EtOH/H 2 O (1:1, 0.3 mL×2). The obtained product was dried under vacuum and purified by prep-HPLC to give AB17221 (9.4 mg).

실시예 16Example 16

말라세진 및 말라세진 유도체의 아폽토시스-유도 활성Apoptosis-Inducing Activity of Malassezine and Malassezine Derivatives

시약reagent

Alexa Fluor 488 아넥신 V / 죽은 세포 아폽토시스 키트, 우태아 혈청(FBS), 및 0.25% 트립신-EDTA(1x), 페놀 레드를 Invitrogen으로부터 구입하였다. 카스파아제-Glo 3/7 검정을 Promega로부터 구입하였다. RPMI 1640 배지 및 둘베코 변형 이글 배지를 Gibco로부터 구입하였다. 항생제 항진균제 용액(100x)을 Sigma로부터 구입하였다.Alexa Fluor 488 Annexin V/Dead Cell Apoptosis Kit, Fetal Bovine Serum (FBS), and 0.25% Trypsin-EDTA (1x), Phenol Red were purchased from Invitrogen. Caspase-Glo 3/7 assay was purchased from Promega. RPMI 1640 medium and Dulbecco's modified Eagle medium were purchased from Gibco. Antibiotics Antifungal solution (100x) was purchased from Sigma.

세포주 MeWo(ATCC® HTB-65™), WM115(ATCC® CRL-1675) 및 B16F1(ATCC® CRL-6323)를 ATCC로부터 구입하였고, 하기 배양 배지에서 유지하였다: MeWo 및 B16F1에 대한 배양 배지: 10% FBS가 보충된 DMEM; WM115에 대한 배양 배지: 10% FBS가 보충된 RPMI 1640.Cell lines MeWo (ATCC® HTB-65™), WM115 (ATCC® CRL-1675) and B16F1 (ATCC® CRL-6323) were purchased from ATCC and maintained in the following culture media: Culture media for MeWo and B16F1: 10 DMEM supplemented with % FBS; Culture medium for WM115: RPMI 1640 supplemented with 10% FBS.

실험 방법Experimental method

세포를 수확하고, 세포 수를 Countess Cell Counter를 이용하여 결정하였다. 세포를 배양 배지로 y망되는 밀고까지 희석하였다. 최종 세포 밀도는 6시간 및 24시간 처리에 대해 4,000개 세포/웰, 및 48시간 및 72시간 처리에 대해 2,000개 세포/웰이었다. 아넥신 V 검정에 대해, 384-웰 투명-바닥 플레이트(Corning 3712)를 사용하였으며, 384-웰 솔리드 백색-바닥 플레이트(Corning 3570)를 카스파아제-Glo 검정을 위해 사용하였다. 모든 플레이트를 뚜껑으로 덮고, 세포 부착을 위해 37℃ 및 5% CO2에서 밤새 배치시켰다.Cells were harvested and cell number was determined using a Countess Cell Counter. Cells were diluted with culture medium to y-thickness. The final cell densities were 4,000 cells/well for the 6 and 24 hour treatments, and 2,000 cells/well for the 48 and 72 hour treatments. For the Annexin V assay, a 384-well clear-bottom plate (Corning 3712) was used and a 384-well solid white-bottom plate (Corning 3570) was used for the Caspase-Glo assay. All plates were covered with lids and placed overnight at 37° C. and 5% CO 2 for cell attachment.

시험 화합물을 DMSO에서 30 mM 스톡으로 용해하였다. 10배 희석을 수행하여 3 mM 및 0.3 mM 농도를 생성하였다. 0.9 mM 스타우로스포린을 양성 대조군으로서 사용하고, DMSO를 음성 대조군(NC)으로서 사용하였다. 132.5 nL의 화합물을 액체 핸들러 Echo550을 이용하여 화합물 소스 플레이트에서 384-웰 세포 배양 플레이트(들)로 옮겼다. 명시된 인큐베이션 시간 후에, 플레이트를 검출을 위해 인큐베이터로부터 꺼내었다.Test compounds were dissolved in DMSO as a 30 mM stock. 10-fold dilutions were performed to yield 3 mM and 0.3 mM concentrations. 0.9 mM staurosporin was used as a positive control and DMSO was used as a negative control (NC). 132.5 nL of compound was transferred from the compound source plate to the 384-well cell culture plate(s) using a liquid handler Echo550. After the indicated incubation time, the plate was removed from the incubator for detection.

아넥신 V 검정을 위해, 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고, 배양 배지를 제거하였다. 세포를 40 ㎕ PBS로 2회 세척하고, 웰 당 15 ㎕의 사전-혼합된 아넥신 V-FITC 및 Hoechst 33342 염료 작업 용액을 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하고, 시일링하고, 1분 동안 1,000 rpm으로 원심분리하여 버블을 제거하였다. 플레이트를 ImageXpress Nano를 이용하여 판독하였다.For the Annexin V assay, the plate was removed from the incubator and the culture medium was removed. Cells were washed twice with 40 μl PBS and 15 μl per well of pre-mixed Annexin V-FITC and Hoechst 33342 dye working solution was added. Plates were incubated at room temperature for 20 min, sealed, and centrifuged at 1,000 rpm for 1 min to remove bubbles. Plates were read using an ImageXpress Nano.

카스파아제-Glo 검정을 위해, 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고, 실온에서 15분 동안 평형화하였다. 카스파아제-Glo 3/7 시약을 또한 해동시키고, 실험 전에 실온으로 평형화하였다. 카스파아제-Glo 시약을 요망되는 웰에 배양 배지에 대해 1:1 비로 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 15분 동안 인큐베이션하고, EnSpire™ 플레이트 판독기를 이용하여 판독하였다. 배수 유도를 하기 수학식에 따라 계산하였다: 배수 유도 = Lum샘플 / LumNC.For the Caspase-Glo assay, the plates were removed from the incubator and equilibrated for 15 minutes at room temperature. Caspase-Glo 3/7 reagent was also thawed and equilibrated to room temperature prior to experimentation. Caspase-Glo reagent was added to the desired wells in a 1:1 ratio to culture medium. Plates were incubated at room temperature for 15 minutes and read using an EnSpire™ plate reader. The fold derivation was calculated according to the following equation: fold derivation = Lum sample / Lum NC .

아넥신 V 검정 결과Annexin V Assay Results

처리에 대한 노출 후 6, 24, 48, 및 72시간에 아넥신 V-양성 세포의 백분율을 포함한 데이터 표는 도 25a 내지 25d에 도시되어 있다. 별도의 실험 세트로부터의 데이터는 도 90a 내지 108f에 도시되어 있다.Tables of data including the percentage of annexin V-positive cells at 6, 24, 48, and 72 hours post exposure to treatment are shown in FIGS. 25A-25D . Data from a separate set of experiments are shown in Figures 90A-108F.

아넥신 V 염색 데이터는 100 uM 말라세진이 모두 3개의 세포주에서 세포 사망을 유도하였음을 나타내었다. 말라세진은 MeWo에 비해 WM115 및 B16F1 세포에서 더욱 강력한 아폽토시스-유도제이었지만, WM115 세포에서의 반응은 MeWo 및 B16F1 세포에서 더욱 느렸다.Annexin V staining data indicated that 100 uM malassezin induced cell death in all three cell lines. Malassezine was a more potent apoptosis-inducing agent in WM115 and B16F1 cells compared to MeWo, but the response in WM115 cells was slower in MeWo and B16F1 cells.

카스파아제 3/7 검정 결과Caspase 3/7 Assay Results

처리에 대한 노출 후 6, 24, 48, 및 72시간에 카스파아제 3/7의 배수 유도를 포함한 데이터 표는 도 26a 내지 26d에 도시되어 있다. 별도의 실험 세트로부터의 데이터는 도 109a 내지 127c에 도시되어 있다.Tables of data including fold induction of caspase 3/7 at 6, 24, 48, and 72 hours after exposure to treatment are shown in FIGS. 26A-26D . Data from a separate set of experiments are shown in Figures 109A-127C.

말라세진은 WM115 및 MeWo 세포에서 100 uM에서 카스파아제 3/7을 활성화시켰다. 말라세진은 MeWo 세포에 비해 WM115 세포에서 카스파아제 3/7 경로를 더욱 빠르게 촉발시켰는데, 이는 아넥신 V 염색 데이터와 일치한 것이다.Malassezin activated caspase 3/7 at 100 uM in WM115 and MeWo cells. Malassezine triggered the caspase 3/7 pathway more rapidly in WM115 cells compared to MeWo cells, consistent with Annexin V staining data.

실시예 17Example 17

말라세진 및 말라세진 유도체에 노출 후 세포 생존력Cell viability after exposure to malacetin and its derivatives

시약reagent

CellTiter-Glo® 2.0 검정을 Promega로부터 구입하였다.CellTiter-Glo® 2.0 assay was purchased from Promega.

실험 방법Experimental method

CellTiter-Glo 검정을 위해, 시험 화합물을 10 mM DMSO 용액에서 제조하였다. 화합물을 12개의 농도로 일렬로 희석하였다. 100,000개 세포/mL 현탁액으로부터의 40 ㎕의 세포를 384-웰 플레이트(Corning 3570)의 각 웰에 분배하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2, 및 95% 습도에서 밤새 인큐베이션하였다. 시험화합물을 첨가하고, 비히클 대조군으로서 DMSO를 사용하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2, 및 95% 습도에서 6, 24, 또는 48시간 동안 인큐베이션하고, 40 ㎕의 CellTiter-Glo 시약을 웰에 첨가하여 세포 생존력을 평가하였다.For CellTiter-Glo assay, test compounds were prepared in 10 mM DMSO solution. Compounds were serially diluted to 12 concentrations. 40 μl of cells from the 100,000 cells/mL suspension was dispensed into each well of a 384-well plate (Corning 3570). Plates were incubated overnight at 37° C., 5% CO 2 , and 95% humidity. Test compound was added and DMSO was used as vehicle control. Plates were incubated for 6, 24, or 48 hours at 37° C., 5% CO 2 , and 95% humidity, and cell viability was assessed by adding 40 μl of CellTiter-Glo reagent to the wells.

결과result

AB12508(화합물 E), 미지 조성물, CV-8803(화합물 K), CV-8804(화합물 A), CV-8684(말라세진), CV-8685(인돌로[3,2-b]카바졸), CV-8686(화합물 I), CV-8688(화합물 II), 및 스타우로스포린에 대한 노출 후 MeWo 및 WM115 세포에 대한 세포 생존력 백분율은 각각 도 27a-27b, 도 28a-28b, 도 29a-29b, 도 30a-30b, 도 31a-31b, 도 32a-32b, 도 33a-33b, 도 34a-34b, 및 도 35a-35b에 도시되어 있다. 시험 화합물에 노출된 샘플로부터의 모든 데이터를 동일한 인큐베이션 시간을 갖는 상응하는 비히클 대조군으로 정규화하였다.AB12508 (Compound E), unknown composition, CV-8803 (Compound K), CV-8804 (Compound A), CV-8684 (Malasezine), CV-8685 (Indolo[3,2-b]carbazole), Percent cell viability for MeWo and WM115 cells after exposure to CV-8686 (Compound I), CV-8688 (Compound II), and staurosporin were shown in Figures 27A-27B, 28A-28B, 29A-29B, respectively. 30A-30B, 31A-31B, 32A-32B, 33A-33B, 34A-34B, and 35A-35B. All data from samples exposed to the test compound were normalized to the corresponding vehicle control with the same incubation time.

실시예 18Example 18

말라세진 및 말라세진 유도체의 아릴탄화수소 수용체 활성화 가능성Possibility of activating aryl hydrocarbon receptors of malassezine and its derivatives.

검정 절차Assay procedure

HepG2-AhR-Luc 세포를 Pharmaron에서 구입하였으며, One-Glo 루시페라아제 검정 시스템을 Promega에서 구입하였으며, DMEM을 Hyclone에서 구입하였으며, 페니실린/스트렙토마이신을 Solabio에서 구입하였다.HepG2-AhR-Luc cells were purchased from Pharmaron, One-Glo luciferase assay system from Promega, DMEM from Hyclone, and penicillin/streptomycin from Solabio.

높은 함량의 글루코오스 및 L-글루타민뿐만 아니라 10% FBS를 DMEM에 보충함으로써 안정적으로 트랜스펙션된 HepG2 세포에 대한 배양 배지를 제조하였다.A culture medium for stably transfected HepG2 cells was prepared by supplementing DMEM with high content of glucose and L-glutamine as well as 10% FBS.

HepG2-AhR-Luc 세포를 T-75 플라스크에서 37℃, 5% CO2, 및 95% 상대습도로 배양하였다. 세포를 부착 및 분할 전에 80 내지 90% 컨플루언스에 도달하도록 하였다.HepG2-AhR-Luc cells were cultured in T-75 flasks at 37° C., 5% CO 2 , and 95% relative humidity. Cells were allowed to reach 80-90% confluence before attachment and division.

배양된 세포를 5 mL PBS로 세정하였다. PBS를 흡인하고, 1.5 mL 트립신을 플라스크에 첨가하고, 세포를 37℃에서 대략 5분 동안 또는 세포가 분리되고 부유될 때까지 인큐베이션하였다. 과량의 혈청-함유 배지를 첨가함으로써 트립신을 비활성화시켰다.The cultured cells were washed with 5 mL PBS. PBS was aspirated, 1.5 mL trypsin was added to the flask, and cells were incubated at 37° C. for approximately 5 minutes or until cells detached and floated. Trypsin was inactivated by adding an excess of serum-containing medium.

세포 현탁액을 원뿔형 튜브로 옮기고, 세포를 펠렛화하기 위해 10분 동안 120 g으로 원심분리하였다. 세포를 시딩 배지에 적절한 밀도로 재현탁시켰다. 40 ㎕의 세포를 384-웰 배양 플레이트(5 x 103개 세포/웰)로 옮겼다. 플레이트를 인큐베이터에서 37℃에서 24시간 동안 배치시켰다.The cell suspension was transferred to a conical tube and centrifuged at 120 g for 10 min to pellet the cells. Cells were resuspended in seeding medium to the appropriate density. 40 μl of cells were transferred to a 384-well culture plate (5×10 3 cells/well). Plates were placed in an incubator at 37° C. for 24 hours.

이후에, 시험 화합물 및 오메프라졸 양성 대조군의 스톡 용액을 제조하였다. 화합물 용액을 Echo550을 이용하여 검정 플레이트로 옮겼다. 플레이트를 이후에 화합물 처리를 위해 인큐베이터 내에 다시 배치시켰다.Then, stock solutions of test compound and omeprazole positive control were prepared. The compound solution was transferred to the assay plate using an Echo550. The plate was then placed back into the incubator for compound treatment.

이후에, 24시간의 처리 후에, 플레이트를 인큐베이터에서 꺼내고, 주변 온도에서 냉각시켰다. 배양 배지의 양과 동일한 30 ㎕ One-Glo 시약을 각 웰에 첨가하였다. 세포를 적어도 3분 동안 용해하고, 이후에 광도계로 측정하였다.Then, after 24 hours of treatment, the plates were removed from the incubator and cooled at ambient temperature. 30 μl One-Glo reagent equal to the amount of culture medium was added to each well. Cells were lysed for at least 3 minutes and then measured photometrically.

용량 반응을 XLfit에서 비-선형 회귀 분석을 이용하여 그래프로 나타내고, EC50 값을 또한 계산하였다.Dose response was graphed using non-linear regression analysis in XLfit and EC 50 values were also calculated.

결과result

다양한 농도의 오메프라졸, CV-8684(말라세진), CV-8685(인돌로[3,2-b]카바졸), CV-8686(화합물 I), 미지 조성물, CV-8803(화합물 K), CV-8804(화합물 A), AB12508(화합물 E), 및 CV-8688(화합물 II)에 대한 노출 시 HepG2-AhR-루시페라아제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값은 각각 도 36a-36b, 37a-37b, 38a-38b, 39a-39b, 40a-40b, 41a-41b, 42a-42b, 43a-43b, 및 44a-44b에 도시되어 있다.Various concentrations of omeprazole, CV-8684 (malassezine), CV-8685 (indolo[3,2-b]carbazole), CV-8686 (compound I), unknown composition, CV-8803 (compound K), CV AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to -8804 (Compound A), AB12508 (Compound E), and CV-8688 (Compound II) were shown in Figures 36A-36B, 37A-37B, 38A- 38b, 39a-39b, 40a-40b, 41a-41b, 42a-42b, 43a-43b, and 44a-44b.

다양한 농도의 오메프라졸, 미지 조성물, 2,3,7,8-테트라클로로디벤조디옥신(TCDD), CV-8819(화합물 A5), CV-8684(말라세진), AB12508(화합물 E), CV-8686(화합물 I), AB12509(화합물 H), CV-8688(화합물 II), CV-8877(화합물 B), CV-8685(인돌로[3,2-b]카바졸), 화합물 B10, 및 CV-8687(화합물 IV)에 대한 노출 시 HepG2-AhR-루시페라아제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값은 각각 도 45a-45b, 46a-46b, 47a-47b, 48a-48b, 49a-49b, 50a-50b, 51a-51b, 52a-52b, 53a-53b, 54a-54b, 55a-55b, 56a-56b, 및 57a-57b에 도시되어 있다.Various concentrations of omeprazole, unknown composition, 2,3,7,8-tetrachlorodibenzodioxin (TCDD), CV-8819 (Compound A5), CV-8684 (Malacetin), AB12508 (Compound E), CV- 8686 (Compound I), AB12509 (Compound H), CV-8688 (Compound II), CV-8877 (Compound B), CV-8685 (indolo[3,2-b]carbazole), Compound B10, and CV AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay upon exposure to -8687 (Compound IV) were shown in Figures 45a-45b, 46a-46b, 47a-47b, 48a-48b, 49a-49b, 50a-50b, 51a, respectively. -51b, 52a-52b, 53a-53b, 54a-54b, 55a-55b, 56a-56b, and 57a-57b.

다양한 농도의 오메프라졸, TCDD, 말라세진 전구체, AB11644, 3-메틸콜란트렌(3-MC), AB12976(O52), AB17011(말라세지아 인돌 A), 피티리아시트린, AB17151, 및 AB17225에 대한 노출 시 HepG2-AhR-루시페라아제 검정으로부터의 AhR 활성 판독값은 각각 도 58a-58b, 59a-59b, 60a-60b, 61a-61b, 62a-62b, 63a-63b, 64a-64b, 65a-65b, 66a-66b, 및 67a-67b에 도시되어 있다.Upon exposure to varying concentrations of omeprazole, TCDD, malassezine precursor, AB11644, 3-methylcholanthrene (3-MC), AB12976 (O52), AB17011 (Malassezia indole A), phythyriacitrin, AB17151, and AB17225 AhR activity readouts from the HepG2-AhR-luciferase assay are shown in Figures 58a-58b, 59a-59b, 60a-60b, 61a-61b, 62a-62b, 63a-63b, 64a-64b, 65a-65b, 66a-66b, respectively. , and 67a-67b.

2개의 실험 세트로부터의 결과는 하기 표 1 및 표 2에 요약되어 있다.Results from the two experimental sets are summarized in Tables 1 and 2 below.

표 1Table 1

Figure pct00224
Figure pct00224

표 2Table 2

Figure pct00225
Figure pct00225

실시예 19Example 19

MelanoDerm™ 검정MelanoDerm™ Black

연구 요약 1Study Summary 1

이러한 연구의 목적은 반복된 노출 후 MelanoDerm™ 피부 모델에서 피부 멜라닌생성 조절제로서 시험 물품의 잠재적인 작용을 평가하는 것이었다. 처리는 하기와 같다: 격일로 7일 치료(7TD); 격일로 7일 치료 이후 치료 없는 7일(회복)(7TD+7NTD); 및 격일로 14일 치료(14TD). 이러한 연구는 또한, 프로토콜에서 특정된 처리 기간에 걸쳐, 시험 물품에 대한 반복된 노출 후 MelanoDerm™ 조직에 의한 MTT의 전환에 의해 측정한 경우 각 시험 물품에 의해 유발된 잠재적인 진피 자극을 평가하였다.The purpose of this study was to evaluate the potential action of the test article as a modulator of skin melanogenesis in the MelanoDerm™ skin model after repeated exposure. Treatments were as follows: 7 days treatment every other day (7TD); 7 days treatment every other day followed by 7 days without treatment (recovery) (7TD+7NTD); and 14 days of treatment every other day (14TD). This study also evaluated the potential dermal irritation induced by each test article as measured by conversion of MTT by MelanoDerm™ tissue after repeated exposure to the test article, over the treatment period specified in the protocol.

블루 포르마잔 침전물에 대한 MTT의 NAD(P)H-의존 마이크로솜 효소 감소(및 보다 적게, MTT의 숙시네이트 데하이드로게나아제 감소)를 측정하는 MTT (3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드) 전환 검정을 사용하여 시험 물품에 대한 노출 후 세포 대사를 평가하였다[Berridge et al., 1996]. 상대적 생존, 즉, 음성 대조군-처리된 조직에 대한 MTT 전환을 측정함으로써 잠재적인 진피 자극에 대한 증거인 조직에 대한 시험 물품의 독성을 결정하였다.MTT (3-[4,5-dimethylthiazole-) measuring NAD(P)H-dependent microsomal enzyme reduction of MTT (and to a lesser extent, succinate dehydrogenase reduction of MTT) against blue formazan precipitate 2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) conversion assay was used to assess cellular metabolism after exposure to test articles [Berridge et al. , 1996]. Toxicity of the test article to tissue, evidence for potential dermal irritation, was determined by measuring relative survival, ie, MTT conversion to negative control-treated tissue.

물질 및 방법Substances and methods

MelanoDerm™ 피부 모델의 레시피Recipe for MelanoDerm™ skin model

MelanoDerm™ 피부 키트(MatTek Corporation)의 수용 시에, 용액을 제조업체에 의해 명시된 바와 같이 저장하였다. MelanoDerm™ 조직을 사용할 때까지 2 내지 8℃에서 저장하였다. 수용일(투약 전날)에, MelanoDerm™ 유지 배지(EPI-100-LLMM)를 대략 37℃까지 가온시켰다. 9 내지 10 mL의 EPI-100-LLMM을 6-웰 플레이트의 적절한 웰에 분취하였다. 6-웰 플레이트를 라벨링하여 시험 물품 또는 대조군 및 이의 용량 부피 및 노출 조건(MTT 및 멜라닌 종점에 대해 명시됨)을 명시하였다. 각 MelanoDerm™ 조직을 사일링 패키지를 개방하기 전에 아가로오스 겔과 세포 배양 삽입물 사이의 공기 버블에 대해 검사하였다. 세포 배양 삽입 영역의 50% 이상을 덮는 공기 버블을 갖는 조직을 사용하지 않았다. 24-웰 이송 용기를 플라스틱 백에서 꺼내고, 이의 표면을 70% 에탄올로 소독하였다. MelanoDerm™ 조직을 6-웰 플레이트로 무균적으로 옮겼다. 이후에, MelanoDerm™ 조직을 공기 중 5±1% CO2의 습윤화된 대기 중 37±1℃(표준 배양 조건)에서 밤새(적어도 16시간) 도안 인큐베이션하였다.Upon receipt of the MelanoDerm™ Skin Kit (MatTek Corporation), the solution was stored as specified by the manufacturer. MelanoDerm™ tissue was stored at 2-8° C. until use. On the receiving day (the day before dosing), MelanoDerm™ maintenance medium (EPI-100-LLMM) was warmed to approximately 37°C. Aliquots 9-10 mL of EPI-100-LLMM into appropriate wells of a 6-well plate. 6-well plates were labeled to specify the test article or control and its dose volume and exposure conditions (specified for MTT and melanin endpoints). Each MelanoDerm™ tissue was inspected for air bubbles between the agarose gel and the cell culture insert prior to opening the siling package. Tissues with air bubbles covering more than 50% of the cell culture insertion area were not used. The 24-well transfer container was removed from the plastic bag and its surface was disinfected with 70% ethanol. MelanoDerm™ tissues were aseptically transferred to 6-well plates. MelanoDerm™ tissues were then incubated overnight (at least 16 hours) at 37±1° C. (standard culture conditions) in a humidified atmosphere of 5±1% CO2 in air.

레시프 일자로부터 조직의 인큐베이션 적어도 16시간 후에, MTT(2개 조직 - 이러한 보고서의 목적을 위해 "미처리된 일자" 0으로 명명됨) 및 멜라닌 검정(3개의 조직) 각각에 대해 지정된 8개의 MelanoDerm™ 조직을, 검정의 개시 시에 조직의 침착도의 시각적 평가를 돕기 위해 디지털 카메라(CANON 카메라, PowerShot SX130IS, 12x 광학 줌, 수동 설정)를 이용하여 사진촬영하였다. MelanoDerm™ 조직의 바닥으로부터 이러한 사진을 촬영하였으며, 이는 멜라닌을 더 잘 나타내기 위해 역전되었다. 역 Nikon Eclipse TE 2000U 현미경(각각 배율 15x 및 60x)에 연결된 Infinity 2 카메라를 이용하여 또한 사진을 촬영하였다.After at least 16 hours of incubation of the tissues from the date of the recipe, 8 MelanoDerm™ designated for each of the MTT (2 tissues—designated “untreated date” 0 for the purposes of this report) and melanin assay (3 tissues) Tissues were photographed using a digital camera (CANON camera, PowerShot SX130IS, 12x optical zoom, manual settings) to aid in visual assessment of tissue deposition at the initiation of the assay. These pictures were taken from the bottom of the MelanoDerm™ tissue, which was inverted to better reveal melanin. Pictures were also taken using an Infinity 2 camera connected to an inverted Nikon Eclipse TE 2000U microscope (magnification 15x and 60x, respectively).

미처리된 MelanoDerm™ 조직을 이후에 멸균 Ca++ 및 Mg++ 부재 둘베코 포스페이트 완충 염수(CMF-DPBS)로 부드럽게 세정하고, 멸균 흡수 페이퍼 상에서 건식 블롯팅하고, 과량의 액체를 제거하였다. 2개의 조직을 이후에 MTT 생존력 종점(섹션 "MTT 검정" 참조)을 위해 3 ± 0.1시간 동안 적절한 MTT 함유 웰로 옮겼다. 3개의 미처리된 MelanoDerm™ 조직을 멸균 스칼펠을 이용하여 세포 배양 삽입물에서 꺼내고, 라벨링된 1.5 mL 마이크로퍼지 튜브에 배치시키고, 후속 멜라닌 분석(섹션 "멜라닌 검정" 참조)을 위해 -60℃ 미만에서 저장하였다.Untreated MelanoDerm™ tissue was then gently rinsed with sterile Ca++ and Mg++ free Dulbecco's phosphate buffered saline (CMF-DPBS), dry blotted on sterile absorbent paper, and excess liquid removed. Two tissues were then transferred to appropriate MTT containing wells for 3±0.1 hours for the MTT viability endpoint (see section “MTT Assay”). Three untreated MelanoDerm™ tissues are removed from cell culture inserts using a sterile scalpel, placed in labeled 1.5 mL microfuge tubes, and stored below -60°C for subsequent melanin analysis (see section “Melanin Assay”). did.

시험 물품 제조test article manufacturing

시험 물품, CV-8686 및 AB11644를 DMSO 중 스톡 용액(각각 약 100 mM)으로서 제공하였다. 시험 물품을 멸균 EPI-100-LLMM 중 50 μM 및 200 μM 희석액으로서 시험 시스템에 투여하였다. 시험 물품 DMSO(비히클 대조군)를 멸균 EPI-100-LLMM 중 0.2% 희석액으로서 시험 시스템에 투여하였다.The test articles, CV-8686 and AB11644, were provided as stock solutions in DMSO (approximately 100 mM each). Test articles were administered to the test system as 50 μM and 200 μM dilutions in sterile EPI-100-LLMM. Test article DMSO (vehicle control) was administered to the test system as a 0.2% dilution in sterile EPI-100-LLMM.

시험 물품 각각을 하기와 같은 절차를 이용하여 제조하였다: 제공된 스톡 농도로부터 시작하여, 2 ㎕의 각 시험 물품을 먼저 적절한 부피의 EPI-100-LLMM으로 200 μM의 최종 농도로 희석하였다. 250 ㎕의 200 μM 희석액(각 시험 물품에 상응함)을 본 연구에서 사용되는 50 ㎕ 희석액을 제조하기 위해 750 ㎕의 EPI-100-LLMM에 첨가하였다. 시험 물품 희석액을 적어도 1분 동안 와류시키고, 37±1℃(수욕)에서 15분 동안 가열하고, 조직 상에 25 ㎕의 부피로 적용하기 전에 적어도 1분 동안 다시 와류시켰다.Each of the test articles was prepared using the following procedure: Starting from the given stock concentration, 2 μl of each test article was first diluted with an appropriate volume of EPI-100-LLMM to a final concentration of 200 μM. 250 μl of a 200 μM dilution (corresponding to each test article) was added to 750 μl of EPI-100-LLMM to prepare the 50 μl dilution used in this study. The test article dilutions were vortexed for at least 1 minute, heated at 37±1° C. (water bath) for 15 minutes, and vortexed again for at least 1 minute prior to application in a volume of 25 μl onto the tissue.

용매 대조군, DMSO를 EPI-100-LLMM으로 0.2%의 최종 농도까지 희석하였다(v/v). 희석된 용매 대조군을 25 ㎕의 부피로 조직 상에 적용하기 전에 적어도 1분 동안 와류시켰다.The solvent control, DMSO, was diluted with EPI-100-LLMM to a final concentration of 0.2% (v/v). The diluted solvent control was vortexed for at least 1 minute before being applied onto the tissue in a volume of 25 μl.

MTT의 직접 시험 물품 감소의 평가Assessment of MTT's Direct Test Article Reduction

각 시험 물품 희석액을 MTT를 직접적으로 감소시키는 능력을 평가하기 위해 2 mM L-글루타민(MTT 첨가 배지)을 함유한 따뜻한 둘베코 변형 이글 배지(DMEM) 중 1.0 mg/mL MTT(Sigma) 용액에 첨가하였다. 대략 25 ㎕의 각 시험 물품을 1 mL의 MTT 용액에 첨가하고, 혼합물을 대략 1시간 동안 표준 배양 조건에서 인큐베이션하였다. 음성 대조군, 25 ㎕의 멸균, 탈이온수(Quality Biological)를 동시에 시험하였다. MTT 용액 칼라가 청색/자주색으로 변한 경우에, 시험 물품은 MTT를 감소시킨 것으로 추정되었다.Each test article dilution was added to a 1.0 mg/mL MTT (Sigma) solution in warm Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) containing 2 mM L-glutamine (MTT-added medium) to assess its ability to directly reduce MTT. did. Approximately 25 μl of each test article was added to 1 mL of MTT solution and the mixture was incubated at standard culture conditions for approximately 1 hour. A negative control, 25 μl of sterile, deionized water (Quality Biological) was tested simultaneously. If the MTT solution color changed to blue/purple, the test article was assumed to have reduced MTT.

시험 물품, CV-8686, AB11644, 및 DMSO는 생존 세포의 부재 하에서 MTT를 직접적으로 감소시키는 것으로 관찰되지 않았다.The test articles, CV-8686, AB11644, and DMSO were not observed to directly decrease MTT in the absence of viable cells.

pH 결정pH determination

각 시험 물품의 pH를 pH 페이퍼(EMD Millipore Corporation)를 이용하여 측정하였다. 초기에, 각 시험 물품을 좁은 pH 범위에 근접하도록 1.0 pH 단위 증가로 0 내지 14 pH 범위를 갖는 pH 페이퍼에 첨가하였다. 다음으로, 각 시험 물품을 더 정확한 pH 값을 얻기 위해, 0.5 pH 단위 증가로 5 내지 10 pH 단위의 더 좁은 범위를 갖는 pH 페이퍼에 첨가하였다. 각 시험 물품의 pH를 조직 상에 적용되는 모든 용량에 대해 측정하였다(적절한 경우 0, 2, 4, 6, 10, 12, 14일).The pH of each test article was measured using a pH paper (EMD Millipore Corporation). Initially, each test article was added to pH paper having a pH range of 0 to 14 in 1.0 pH unit increments to approximate a narrow pH range. Next, each test article was added to a pH paper having a narrower range of 5 to 10 pH units in 0.5 pH unit increments to obtain a more accurate pH value. The pH of each test article was determined for all doses applied on the tissue (0, 2, 4, 6, 10, 12, 14 days as appropriate).

최종 검정final test

시험 물품 처리: 7TD 그룹 = 7일 검정(격일로 처리)Test article treatment: 7TD group = 7-day assay (treated every other day)

8개의 MelanoDerm™ 조직을 7일 기간에 걸쳐 48 ± 2시간마다 25 ㎕의 투약 용량으로 시험 물품(명시된 농도의 CV-8686 및 AB11644)으로 국소적으로 처리하였다. 2개의 MelanoDerm™ 조직을 7일 시험 동안 48 ± 2시간마다 각각 각각의 음성 대조군, 25 ㎕의 멸균, 탈이온수(Quality Biological) 및 양성 대조군(멸균, 탈이온수 중에 제조된 1% 코지산)으로 국소적으로 처리하였다. 코지산 용액을 제조 시에 여과하고, 사용할 때까지(제조로부터 2시간) 알루미늄 호일로 덮혀진 튜브에서 저장하였다. 조직을 각각 7일 기간에 걸쳐 48 ± 2시간마다 시험 물품 및 검정 대조군으로 처리하였다. 노출된 조직을 이후에 표준 배양 조건에서 인큐베이션하였다.Eight MelanoDerm™ tissues were topically treated with test articles (CV-8686 and AB11644 at the indicated concentrations) at a dose of 25 μl every 48±2 hours over a 7 day period. Two MelanoDerm™ tissues were treated topically with each negative control, 25 μl of sterile, deionized water (Quality Biological) and positive control (sterile, 1% kojic acid prepared in deionized water), respectively, every 48 ± 2 hours for a 7 day trial. treated hostilely. The kojic acid solution was filtered during preparation and stored in aluminum foil covered tubes until use (2 hours from preparation). Tissues were each treated with test article and assay control every 48 ± 2 hours over a 7 day period. The exposed tissue was then incubated in standard culture conditions.

시험 물품 처리: 7TD+7NTD = 격일로 7일 처리 이후 처리 없는 7일(회복)Test article handling: 7TD+7NTD = every other day 7 days treatment followed by 7 days without treatment (recovery)

8개의 MelanoDerm™ 조직을 7일 기간에 걸쳐 48 ± 2시간마다 25 ㎕의 투약 부피로 시험 물품(프로토콜에 명시된 농도의 CV-8686)으로 국소적으로 처리하였다. 조직을 7일 기간에 걸쳐 48 ± 2시간마다 시험 물품으로 처리하였다. 격일로 최초 7일 처리 후에, 조직을 국소적으로 추가되는 처리 없이 추가 7일 기간 동안 배양하였다. 조직을 하기에서 상세히 기술된 바와 같이 매일 '재-공급'하였다. 이후에, 노출된 조직을 표준 배양 조건에서 인큐베이션하였다.Eight MelanoDerm™ tissues were topically treated with test article (CV-8686 at the concentration specified in the protocol) in a dose volume of 25 μl every 48±2 hours over a 7 day period. Tissues were treated with test article every 48 ± 2 hours over a 7 day period. After the first 7 days of treatment every other day, the tissues were cultured for an additional 7 day period without further treatment topically. Tissues were 're-fed' daily as detailed below. Thereafter, the exposed tissues were incubated in standard culture conditions.

시험 물품 처리: 14TD 그룹 = 격일로 14일 처리Test article processing: 14TD group = 14 days processing every other day

8개의 MelanoDerm™ 조직을 7일 기간에 걸쳐 48 ± 2시간 마다 25 ㎕의 투약 용량으로 시험 물품(프로토콜에서 특정된 농도의 CV-8686 및 DMSO)으로 국소적으로 처리하였다. 2개의 MelanoDerm™ 조직을 각각 14일 시험 동안, 48 ± 2시간 마다 각각의 음성 대조군, 25 ㎕의 멸균, 탈이온수(Quality Biological) 및 양성 대조군(멸균, 탈이온수 중에서 제조된 1% 코지산) 각각으로 국소적으로 처리하였다. 코지산 용액을 제조 시에 여과하고, 사용할 때까지(제조하고 2시간) 알루미늄 호일로 덮혀진 튜브에서 저장하였다. 조직을 14일의 기간에 걸쳐 48 ± 2시간 마다 시험 물품 및 검정 대조군 각각으로 처리하였다. 이후에, 노출된 조직을 표준 배양 조건에서 인큐베이션하였다.Eight MelanoDerm™ tissues were topically treated with test article (CV-8686 and DMSO at the concentrations specified in the protocol) at a dose of 25 μl every 48±2 hours over a 7 day period. Two MelanoDerm™ tissues were each tested for 14 days, each 48 ± 2 hours each negative control, 25 μl of sterile, deionized (Quality Biological) and positive control (1% kojic acid prepared in sterile, deionized water) each. was treated topically. The kojic acid solution was filtered during preparation and stored in aluminum foil covered tubes until use (2 hours from preparation). Tissues were treated with each of the test article and assay control every 48±2 hours over a period of 14 days. Thereafter, the exposed tissues were incubated in standard culture conditions.

처리된 MelanoDerm™ 조직을 매일 "재-공급"하였다. 조직을 국소 적용된 대조군을 균일하게 다시 퍼지도록 하기 위해 부드럽게 탭핑하였다. 이후에, 처리된 조직을 0.9 mL의 사전-가온된(약 37℃) EPI-100-LLMM을 함유한 신규한 사전-라벨링된 6-웰 플레이트에 배치시키고, 인큐베이터로 되돌리고, 표준 배양 조건에서 유지시켰다.The treated MelanoDerm™ tissue was “re-feed” daily. The tissue was gently tapped to re-spread the topically applied control evenly. The treated tissue was then placed in a new pre-labeled 6-well plate containing 0.9 mL of pre-warmed (ca. 37° C.) EPI-100-LLMM, returned to the incubator, and maintained in standard culture conditions. did it

각 48 ± 2시간 노출 시간 후에, MelanoDerm™ 조직을 약 500 ㎕의 Ca++Mg++부재-DPBS로 3회 부드럽게 세정하여 임의의 잔류 시험 물품을 제거하였다. 조직을 먼저 0.9 mL의 사전-가온된(약 37℃) EPI-100-LLMM을 함유한 신규한 사전-라벨링된 6-웰 플레이트에 배치시키고, 이후에 상기에서 논의된 적절한 시험 물품, 음성, 또는 양성 대조군을 투여하였다.After each 48±2 h exposure time, MelanoDerm™ tissue was gently rinsed three times with approximately 500 μl of Ca++Mg++Free-DPBS to remove any residual test article. Tissues are first placed in a novel pre-labeled 6-well plate containing 0.9 mL of pre-warmed (ca. 37° C.) EPI-100-LLMM, then the appropriate test article discussed above, negative, or A positive control group was administered.

각 개별 시험의 종료 시에(각각 7TD; 7TD+7NTD; 및 14TD), 각 처리군(시험 물품, 음성 대조군, 및 양성 대조군)의 조직을 Ca++Mg++부재-DPBS로 부드럽게 세정하고, 멸균, 흡수 페이퍼 상에서 건식 블롯팅하고, 과량의 액체를 제거하였다. 이후에, 검정의 개시 시에 조직의 침착도의 시각적 평가를 돕기 위해 디지털 카메라(CANON 카메라, PowerShot SX130IS, 12x 광학 줌, 수동 설정)를 이용하여 조직을 촬영하였다. 이러한 거시적 사진을 MelanoDerm™ 조직의 바닥으로 촬영하고, 이를 멜라닌을 더 잘 나타내기 위해 역전시켰다. 인버트 Nikon Eclipse TE 2000U 현미경(각각 배율 15x 및 60x)에 연결된 Infinity 2 카메라를 이용하여 현미경 사진을 촬영하였다.At the end of each individual test (7TD; 7TD+7NTD; and 14TD, respectively), the tissues of each treatment group (test article, negative control, and positive control) were gently washed with Ca++Mg++-free-DPBS and sterilized; Dry blotting was performed on absorbent paper and excess liquid was removed. Tissues were then photographed using a digital camera (CANON camera, PowerShot SX130IS, 12x optical zoom, manual settings) to aid in visual assessment of tissue deposition at the initiation of the assay. These macroscopic pictures were taken with the bottom of MelanoDerm™ tissue and inverted to better reveal melanin. Photomicrographs were taken using an Infinity 2 camera connected to an Inverted Nikon Eclipse TE 2000U microscope (magnification 15x and 60x, respectively).

각 처리군으로부터의 3개의 조직을 이후에 CMF-DPBS로 세정하고, 멸균, 흡수 페이퍼 상에서 건식 블롯팅하고, 과량의 액체를 제거하였다. 조직을 멸균 스칼펠을 이용하여 삽입물로부터 제거하고, 라벨링된 1.5 mL 마이크로퍼지 튜브에 배치시키고, 멜라닌 검정 섹션에 기술된 바와 같은 후속 멜라닌 분석을 위해 -60℃ 미만에 밤새 저장하였다. 각 처리군(시험 물품, 음성 대조군, 및 양성 대조군)의 2개의 MelanoDerm™ 조직을 이후에 멸균 Ca++ 및 Mg++ 부재 둘베코 포스페이트 완충 염수(CMF-DPBS)로 부드럽게 세정하고, 멸균, 흡수 페이퍼 상에서 건식 블롯팅하고, 과량의 액체를 제거하였다. 이후에, 조직을 MTT 생존력 종점(섹션 MTT 검정 참조)을 위해 대략 3시간 동안 적절한 MTT 함유 웰로 옮겼다.Three tissues from each treatment group were then washed with CMF-DPBS and dry blotted on sterile, absorbent paper to remove excess liquid. Tissue was removed from the insert using a sterile scalpel, placed in a labeled 1.5 mL microfuge tube, and stored overnight at <-60° C. for subsequent melanin analysis as described in the Melanin Assay section. Two MelanoDerm™ tissues of each treatment group (test article, negative control, and positive control) were then gently rinsed with sterile Ca++ and Mg++ free Dulbecco's phosphate buffered saline (CMF-DPBS) and dried on sterile, absorbent paper. lot and remove excess liquid. Tissues were then transferred to appropriate MTT containing wells for approximately 3 hours for the MTT viability endpoint (see section MTT assay).

MTT 검정MTT test

따뜻한 MTT 첨가 배지 중 MTT의 1.0 mg/mL 용액을 사용하기 2시간 이내에 준비하였다. 적절한 노출 시간 후에, MTT 종료점으로 지정된 MelanoDerm™ 조직을 CMF-DPBS로 광범위하게 세정하고, 세척 배지를 디켄팅하였다. 0.3 mL의 MTT 시약을 사전-라벨링된 24-웰 플레이트에서 지정된 웰에 첨가하였다. MelanoDerm™ 조직을 세정 후 적절한 웰로 옮겼다. 플레이트를 표준 배양 조건에서 대략 3시간 동안 인큐베이션하였다.A 1.0 mg/mL solution of MTT in warm MTT-added medium was prepared within 2 hours of use. After an appropriate exposure time, MelanoDerm™ tissues designated as MTT endpoints were extensively washed with CMF-DPBS and the wash media decanted. 0.3 mL of MTT reagent was added to the designated wells in a pre-labeled 24-well plate. MelanoDerm™ tissue was washed and transferred to appropriate wells. Plates were incubated for approximately 3 hours in standard culture conditions.

MTT 용액과 함께 인큐베이션 기간 후에, MelanoDerm™ 조직을 멸균 흡수성 페이퍼 상에 블롯팅하고, 과량의 액체를 제거하고, 각 지정된 웰에 2.0 mL의 이소프로판올을 함유한 사전라벨링된 24-웰 플레이트로 옮겼다. 이후에, 플레이트를 실온에서 적어도 2시간 동안 흔들어 주었다.After a period of incubation with MTT solution, MelanoDerm™ tissues were blotted on sterile absorbent paper, excess liquid was removed, and transferred to prelabeled 24-well plates containing 2.0 mL of isopropanol in each designated well. Afterwards, the plate was shaken at room temperature for at least 2 hours.

추출 기간의 종료 시에, 세포 배양 삽입물 내의 액체를 웰로 디켄팅하였고, 이로부터 세포 배양 삽입물을 취득하였다. 추출물 용액을 혼합하고, 200 ㎕를 각 샘플에 대해 지정된 96-웰 플레이트의 2개의 웰로 옮기고, 200 ㎕의 이소프로판올을 블랭크로서 지정된 2개의 웰에 배치시켰다. 각 웰의 550 nm의 흡광도(OD550)를 Molecular Devices Vmax 플레이트 판독기로 측정하였다.At the end of the extraction period, the liquid in the cell culture insert was decanted into the wells from which the cell culture insert was obtained. The extract solutions were mixed, 200 μl was transferred to two wells of a 96-well plate designated for each sample, and 200 μl isopropanol was placed in the two wells designated as blanks. The absorbance (OD550) at 550 nm of each well was measured with a Molecular Devices Vmax plate reader.

멜라닌 검정melanin black

멜라닌 추출 일자에, 절개된 조직을 실온에서 대략 20분 동안 해동하였다. 250 ㎕의 Solvable을 각 마이크로퍼지 튜브에 첨가하고, 튜브를 건조-배쓰에서 멜라닌 표준물과 함께 60±2℃에서 적어도 16시간 동안 인큐베이션하였다. 샘플과 함께, 동일한 날에 제조된 25 ㎕의 각 시험 물품 희석물을 250 ㎕의 Solvable와 혼합하고, 건조-배쓰(단지 R&D 목적을 위함)에서 60±2℃에서 적어도 16시간 동안 인큐베이션하였다. Solvable에 멜라닌을 용해시킴으로써 1 mg/mL 멜라닌 표준 스톡을 제조하였다. 일련의 멜라닌 표준물을 1 mg/mL로부터 제조하였다. 0.6 mL의 1 mg/mL 멜라닌 표준 스톡 용액을 1.2 mL Solvable에 첨가하고 이후에 일련의 5개 이상의 희석물(3의 희석 인자)을 제조함으로써 표준물 시리즈를 제조하였다. Solvable을 0 표준물로서 사용하였다.On the day of melanin extraction, the dissected tissue was thawed at room temperature for approximately 20 minutes. 250 μl of Solvable was added to each micropurge tube, and the tube was incubated with melanin standards in a dry-bath at 60±2° C. for at least 16 hours. With the samples, 25 μl of each test article dilution prepared on the same day was mixed with 250 μl of Solvable and incubated for at least 16 hours at 60±2° C. in a dry-bath (for R&D purposes only). A 1 mg/mL melanin standard stock was prepared by dissolving melanin in Solvable. A series of melanin standards were prepared from 1 mg/mL. Standard series were prepared by adding 0.6 mL of 1 mg/mL melanin standard stock solution to 1.2 mL Solvable followed by a series of 5 or more dilutions (dilution factor of 3). Solvable was used as the zero standard.

멜라닌 추출을 개시하고 적어도 16시간 후에, 튜브를 샘플을 포함하고(MelanoDerm™ 조직으로부터 추출된 멜라닌을 나타냄), 시험 물품 희석물을 Solvable와 혼합하고, 표준물을 실온까지 냉각시키고, 이후에 실온에서 5분 동안 13,000 rpm으로 원심분리하였다. 200 ㎕의 샘플을 96-웰 플레이트의 적절한 웰에 옮겼다. 200 ㎕의 표준물 및 블랭크를 96-웰 플레이트의 적절한 웰로 이중으로 옮겼다. 200 ㎕의 시험 물품 희석물 및 EPI-100-LLMM 배지를 단지 단일 웰에서 96-웰 플레이트의 적절한 웰에 옮겼다. 각 웰의 490 nm에서의 흡광도(OD490)를 Molecular Devices Vmax 플레이트 판독기로 측정하였다.At least 16 hours after initiating the melanin extraction, the tube contains the sample (representing the melanin extracted from MelanoDerm™ tissue), the test article dilution is mixed with the Solvable, the standard is cooled to room temperature, and then at room temperature. Centrifuge at 13,000 rpm for 5 minutes. 200 μl of the sample was transferred to the appropriate wells of a 96-well plate. 200 μl of standards and blanks were transferred in duplicate to the appropriate wells of a 96-well plate. 200 μl of the test article dilution and EPI-100-LLMM medium were transferred from only single wells to the appropriate wells of a 96-well plate. The absorbance (OD490) at 490 nm of each well was measured with a Molecular Devices Vmax plate reader.

데이터 표시data display

MTT 데이터 - 0일MTT Data - Day 0

미가공 흡광도 데이터가 캡쳐되었다. 블랭크 웰의 평균 OD550값이 계산되었다. 미처리된 조직의 보정된 OD550 값은 미처리된 조직의 OD550 값에서 블랭크 웰의 평균 OD550 값을 차감함으로써 결정되었다. 개별 % 생존력 값은 개별 보정된 OD550 값을 미처리된 조직에 대해 계산된 모든 OD550 값의 평균으로 나눔으로써 각 개별 조직에 대해 표로 나타내었다. 전체 평균 % 생존력이 계산되었다. 마지막으로, 미처리된 조직의 평균 생존력 값은 막대 그래프로 플롯팅되었다(± 1 표준 편차 오차 막대를 가짐).Raw absorbance data were captured. The average OD550 value of the blank wells was calculated. The corrected OD550 value of the untreated tissue was determined by subtracting the average OD550 value of the blank wells from the OD550 value of the untreated tissue. Individual % viability values were tabulated for each individual tissue by dividing the individual corrected OD550 value by the average of all OD550 values calculated for untreated tissues. Overall mean % viability was calculated. Finally, mean viability values of untreated tissues were plotted as bar graphs (with ±1 standard deviation error bars).

MTT 데이터 - 7일, 14일MTT data - 7 days, 14 days

미가공 흡광도 데이터가 캡쳐되었다. 블랭크 웰의 평균 OD550값이 계산되었다. 음성 대조군의 평균 보정된 OD550 값은 평균 OD550 값에서 블랭크 웰의 평균 OD550 값을 차감함으로써 결정되었다. 개별 시험 물품 노출, 양성 대조군 노출, 및 음성 대조군 노출의 보정된 OD550 값은 블랭크 웰에 대한 각 평균 OD550 값으로부터 차감함으로써 결정되었다.Raw absorbance data were captured. The average OD550 value of the blank wells was calculated. The mean corrected OD550 value of the negative control was determined by subtracting the mean OD550 value of the blank wells from the mean OD550 value. Corrected OD550 values for individual test article exposure, positive control exposure, and negative control exposure were determined by subtracting each mean OD550 value for the blank wells.

보정된 시험 물품 노출 시간 OD550 = 시험 물품 노출 시간 OD550 - 블랭크 평균 OD550Calibrated Test Article Exposure Time OD550 = Test Article Exposure Time OD550 - Blank Average OD550

하기 대조군 계산의 퍼센트는 시험 물품-처리된 및 양성 대조군-처리된 조직에 대해 이루어졌다:The following control calculations were made for percentages of test article-treated and positive control-treated tissues:

% 생존력 = [(시험 물품 또는 양성 대조군의 최종 보정된 OD550) / (보정된 평균 OD550 음성/용매 대조군)] x 100% viability = [(final corrected OD550 of test article or positive control) / (corrected mean OD550 negative/solvent control)] x 100

하기 대조군 계산의 퍼센트는 시험 물품-처리된 조직에 대해 이루어졌으며, 여기서, 시험 물품은 DMSO(용매 대조군)이었다:The following control calculations were made for percentages of test article-treated tissue, where the test article was DMSO (solvent control):

% 생존력 = [(시험 물품(용매 대조군)의 최종 보정된 OD550) / (보정된 평균 OD550 음성 대조군)] x 100% viability = [(final corrected OD550 of test article (solvent control)) / (corrected mean OD550 negative control)] x 100

대조군 값의 개별 %는 각 시험 물품 또는 양성 대조군 당 대조군의 평균 %를 계산하기 위해 평균처리되었다. MTT 생존력의 전체 평균이 계산되었다. 마지막으로, 평균 생존력 값은 막대 그래프로 플롯팅되었다(± 1 표준 편차 오차 막대를 가짐).Individual % of control values were averaged to calculate the average % of control per each test article or positive control. The overall mean of MTT viability was calculated. Finally, mean viability values were plotted as bar graphs (with ± 1 standard deviation error bars).

멜라닌 데이터melanin data

미가공 흡광도 데이터가 캡쳐되었다. 각 멜라닌 표준물의 OD490 값이 결정되었다. 각 멜라닌 표준물의 평균 OD490 값은 표준 곡선을 준비하기 위해 이용되었다. 각 멜라닌 표준 농도의 보정된 OD490 값은 멜라닌 표준 농도의 OD490 값에서 블랭크 웰의 OD490 값을 차감함으로써 결정되었다. 표준 곡선은 대응하는 보정된 흡광도(OD490 값)에 대한 mg/mL의 표준물의 농도(y-축)로서 플롯팅되었다. 시험 물품 또는 양성 대조군-처리된 조직에서 멜라닌의 양은 표준 곡선(2차)으로부터 수학적으로 보간되었다.Raw absorbance data were captured. The OD490 value of each melanin standard was determined. The average OD490 value of each melanin standard was used to prepare a standard curve. The corrected OD490 value of each melanin standard concentration was determined by subtracting the OD490 value of the blank wells from the OD490 value of the melanin standard concentration. The standard curve was plotted as the concentration (y-axis) of the standard in mg/mL against the corresponding corrected absorbance (OD490 value). The amount of melanin in the test article or positive control-treated tissue was mathematically interpolated from the standard curve (second order).

결과 및 논의Results and discussion

시험 물품, CV-8686, DMSO 및 AB11644는 반복된 노출 후 멜라닌생성에 대한 진피 자극 가능성 및 영향을 평가하기 위해 아시아 MelanoDerm™ 조직 모델을 이용하여 멜라닌생성 조절제 스크리닝 검정에서 시험되었다. 하기 처리 기간이 시험되었다: 격일로 7일 처리(7TD); 격일로 7일 치료 이후 처리 없이 7일(회복)(7TD+7NTD); 및 격일로 14일 처리(14TD).The test articles, CV-8686, DMSO and AB11644 were tested in a melanogenesis modulator screening assay using the Asian MelanoDerm™ tissue model to evaluate the potential and effect of dermal stimulation on melanogenesis after repeated exposure. The following treatment periods were tested: 7 day treatment every other day (7TD); every other day 7 days treatment followed by 7 days without treatment (recovery) (7TD+7NTD); and 14 days treatment every other day (14TD).

시험 물품은 멸균, EPI-100-LLMM에서 제조된 v/v 희석물로서 시험 시스템에 투여되었다. 시험 물품 CV-8686, 및 AB11644는 200 μM 및 50 μM 희석물로서 시험 시스템에 투여되었다. 시험 물품, DMSO(비히클 대조군)는 0.2%(v/v) 희석물로서 시험 시스템에 투여되었다. 시험 물품의 각 희석물은 5개의 MelanoDerm™ 조직(MTT 종료점에 대해 2개 지정되고, 멜라닌 종료점에 대해 3개가 지정됨)에 국소 적용되었다. 조직은 각 개별 시험 기간에 걸쳐 48 ± 2 시간마다 25 ㎕의 각 시험 물품으로 처리되었다. 음성 대조군(멸균, 탈이온수) 및 양성 대조군(멸균, 탈이온수 중에서 제조된 1% 코지산)은 5개의 MelanoDerm™ 조직 각각(MTT 종료점에 대해 2개가 지정되고 멜라닌 종료점에 대해 3개가 지정됨)에 국소 적용되었고, 각각 7일 및 14일 기간에 걸쳐 48 ± 2시간마다 25 ㎕로 처리되었다.The test article was administered to the test system as a v/v dilution prepared in sterile, EPI-100-LLMM. Test articles CV-8686, and AB11644 were administered to the test system as 200 μM and 50 μM dilutions. The test article, DMSO (vehicle control), was administered to the test system as a 0.2% (v/v) dilution. Each dilution of the test article was topically applied to 5 MelanoDerm™ tissues (two designated for the MTT endpoint and three designated for the melanin endpoint). Tissues were treated with 25 μl of each test article every 48 ± 2 hours over each individual test period. Negative controls (sterile, deionized water) and positive controls (1% kojic acid prepared in sterile, deionized water) were localized to each of the five MelanoDerm™ tissues (two assigned for the MTT endpoint and three assigned for the melanin endpoint). were applied and treated with 25 μl every 48 ± 2 hours over 7 and 14 day periods, respectively.

도 68 및 도 69는 시험 물품, 음성 대조군, 및 양성 대조군에 대한 평균 조직 생존력 및 멜라닌 농도 결과를 요약한 것이다. 도 70 내지 도 74는 0일, 7일 및 14일에 조직의 침착도의 시각적 평가를 돕기 위해 촬영된 조직의 대표적인 거시적 및 미시적 사진(15배 배율만)을 포함한다. 이러한 것은 각 처리군 내에서 복제 조직을 대표하는 것으로 간주되고, 후속 데이터 해석과 관련이 있다. 거시적 사진은 조직에서의 전체 멜라닌 생산 및 조직의 표면 상에서 이의 분포를 나타낸다. 거시적 사진은 멜라닌의 생산, 수상돌기의 존재 또는 시험 물품/대조군 처리와 관련된 임의의 모폴로지 변화에 관한 멜라닌세포의 생리학적 상태의 일반적인 모습을 제공한다.68 and 69 summarize mean tissue viability and melanin concentration results for test article, negative control, and positive control. 70-74 include representative macroscopic and microscopic photographs (15X magnification only) of tissue taken at days 0, 7 and 14 to aid in visual assessment of tissue deposition. These are considered representative of replicate tissue within each treatment group and are relevant for subsequent data interpretation. Macroscopic pictures show total melanin production in the tissue and its distribution on the surface of the tissue. Macroscopic pictures provide a general picture of the physiological state of melanocytes with respect to production of melanin, presence of dendrites or any morphological changes associated with test article/control treatment.

조직 생존력의 평가는 프로토콜에서 특정된 기간에 걸친 반복된 노출 후에 MelanoDerm™ 조직에 대한 시험 물품의 잠재적인 진피 자극을 평가하기 위해 사용되었다. 시험 물품으로 처리된 조직의 생존력은 비교적 높았으며(모든 경우에 7TD 처리 기간 동안 >75%), 이는 조직 모델에 대한 시험 물품에 의해 유도된 세포독성이 최소이거나 전혀 없음을 나타내는 것이다. 시험 물품 CV-8686 및 AB11644에 대한 용량 반응이 주목되었는데, 여기서, 더 높은 농도(200 μM)로 처리된 조직은 50 μM 희석으로서 제조된 화합물로 처리된 조직에 비해 약간 더 낮은 생존력을 갖는다. 조직의 생존력은 긴 노출 시간(7TD+7NTD; 및 14TD 처리 기간)이 길어짐에 따라 점진적으로 감소하였으며, 또한, 검정의 양성 대조군, 1% 코지산으로 처리된 조직의 생존력은 7TD 시험 기간 동안 119.0%이었고, 14TD 시험 기간 동안 48.8%까지 감소하였다. 이러한 결과는, 조직 모델이 생존력에 대한 다양한 농도의 시험 물품의 작용을 구별할 수 있다는 것을 나타낸다.Assessment of tissue viability was used to assess potential dermal irritation of the test article to MelanoDerm™ tissue after repeated exposure over the period specified in the protocol. The viability of the tissues treated with the test article was relatively high (>75% during the 7TD treatment period in all cases), indicating minimal or no cytotoxicity induced by the test article on the tissue model. Dose responses to test articles CV-8686 and AB11644 were noted, where tissues treated with higher concentrations (200 μM) had slightly lower viability compared to tissues treated with compounds prepared as 50 μM dilutions. Tissue viability decreased progressively with increasing long exposure time (7TD+7NTD; and 14TD treatment period), and also, the viability of tissues treated with the positive control of the assay, 1% kojic acid, was 119.0% during the 7TD test period. and decreased by 48.8% during the 14TD test period. These results indicate that the tissue model can discriminate the action of various concentrations of test article on viability.

프로토콜에서 특정된 기간에 걸친 반복된 노출 후에 시험 물품으로 처리된 조직에 의한 멜라닌 생산의 평가는 피부 멜라닌생성 조절제로서 시험 물품의 가능성을 평가하기 위해 사용되었다. 양성 대조군인 1% 코지산은 음성 대조군-처리된 조직(55.8 ㎍/mL)과 비교하여 양성 대조군-처리된 조직(7TD)에서 멜라닌 농도를 23.3 ㎍/mL까지 감소하였다. 양성 대조군, 1% 코지산은 음성 대조군-처리된 조직(174.0 ㎍/mL)과 비교하여 양성 대조군-처리된 조직(14TD)에서 멜라닌 농도를 29.1 ㎍/mL까지 감소시켰다. DMSO로 처리된 조직에 대해 결정된 멜라닌 농도는 135.8 ㎍/mL(14TD)이었고, 이에 따라, 비히클 대조군이 그 자체로 멜라닌 생산에 영향을 미치지 않음을 나타낸다. 시험 물품-처리된 조직에서 멜라닌 농도는 음성 대조군-처리된 조직에 비해 낮았다(14TD 기간 동안 두드러짐). 일반적으로, 멜라닌 검정을 수행함으로써 얻어진 객관적 결과는 연구 동안 촬영된 거시적 및 미시적 사진의 분석을 기반으로 한 주관적 관찰에 의해 지지된다.The evaluation of melanin production by tissues treated with the test article after repeated exposure over the period specified in the protocol was used to evaluate the potential of the test article as a modulator of skin melanogenesis. The positive control, 1% kojic acid, reduced the melanin concentration by 23.3 μg/mL in the positive control-treated tissue (7TD) compared to the negative control-treated tissue (55.8 μg/mL). The positive control, 1% kojic acid, reduced the melanin concentration by 29.1 μg/mL in the positive control-treated tissue (14TD) compared to the negative control-treated tissue (174.0 μg/mL). The determined melanin concentration for the DMSO-treated tissue was 135.8 μg/mL (14TD), thus indicating that the vehicle control did not affect melanin production by itself. Melanin concentrations in the test article-treated tissues were lower (noted during the 14TD period) compared to the negative control-treated tissues. In general, the objective results obtained by performing a melanin assay are supported by subjective observations based on analysis of macroscopic and microscopic photographs taken during the study.

시험 물품, CV-8686, DMSO 및 AB11644는 생존 세포의 부재 하에서 MTT를 직접적으로 감소시키지 않았다. 이에 따라, 사멸 대조군 실험이 수행되지 않았다.Test articles, CV-8686, DMSO and AB11644 did not directly reduce MTT in the absence of viable cells. Accordingly, no killing control experiments were performed.

연구 요약 2Study Summary 2

이 연구의 목적은 7일 간의 처리에 걸쳐 반복 노출 후 MelanoDerm™ 피부 모델에서 피부 멜라닌생성 조정제로서 시험 물품의 잠재적인 작용을 평가하는 것이었다. 이 연구는 또한 7일 처리 기간에 걸쳐 시험 물품에 대한 반복 노출 후 MelanoDerm™ 조직에 의한 MTT의 전환에 의해 측정하는 경우 각 시험 물품에 의해 유발된 잠재적인 진피 자극을 평가하는 것이었다. The purpose of this study was to evaluate the potential action of the test article as a modulator of skin melanogenesis in the MelanoDerm™ skin model after repeated exposure over 7 days of treatment. This study was also to evaluate the potential dermal irritation induced by each test article as measured by conversion of MTT by MelanoDerm™ tissue after repeated exposure to the test article over a 7-day treatment period.

청색 포르마잔 침전물로의 MTT의 NAD(P)H 의존적 마이크로솜 효소 감소(및, 더 적은 정도로, MTT의 숙시네이트 탈수소효소 감소)를 측정하는 MTT (3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드) 전환 검정을 이용하여 시험 물품 1에 대한 노출 후 세포 대사를 평가하였다. 잠재적인 진피 자극에 대한 증거인, 조직에 대한 시험 물품의 독성을 상대 생존, 즉, 음성 대조군-처리 조직에 대비된 MTT 전환을 측정함으로써 결정하였다.MTT (3-[4,5-dimethylthiazole-2) measuring NAD(P)H-dependent microsomal enzyme reduction of MTT (and, to a lesser extent, succinate dehydrogenase reduction of MTT) with blue formazan precipitate -yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) conversion assay was used to assess cellular metabolism following exposure to Test Article 1. Toxicity of the test article to tissue, evidence of potential dermal irritation, was determined by measuring relative survival, ie, MTT conversion compared to negative control-treated tissue.

물질 및 방법Substances and methods

MelanoDerm™ 피부 모델의 입수Acquisition of MelanoDerm™ skin model

MelanoDerm™ 피부 키트 (MatTek Corporation)의 입수 후, 제조업체에 의해 지시된 바와 같이 용액을 저장하였다. MelanoDerm™ 조직을 사용까지 2 내지 8℃에서 저장하였다. 입수 당일 (투여 직전), MelanoDerm™ 유지 배지 (EPI-100-LLMM)를 대략 37℃로 가온시켰다. 0.9 mL의 EPI-100-LLMM을 6-웰 플레이트의 적절한 웰에 분취하였다. 시험 물품 또는 대조군 및 이들의 투여 부피 및 노출 조건(MTT 및 멜라닌 종점에 대해 지정됨)을 표시하도록 6-웰 플레이트를 표지하였다. 각 MelanoDerm™ 조직을 밀봉된 패키지를 열기 전에 아가로스 겔과 세포 배양 인서트 사이의 기포에 대해 검사하였다. 세포 배양 인서트 면적을 50% 넘게 덮는 기포가 있는 조직은 사용하지 않았다. 24-웰 운반 용기를 비닐 봉지에서 꺼내고, 이들의 표면을 70% 에탄올로 소독하였다. MelanoDerm™ 조직을 6-웰 플레이트에 무균으로 옮겼다. MelanoDerm™ 조직을 이후 공기 (표준 배양 조건)에서 5±1% CO2의 습윤 분위기에서 37±1℃에서 밤새 (적어도 16 시간) 인큐베이션하였다.After obtaining the MelanoDerm™ skin kit (MatTek Corporation), the solution was stored as directed by the manufacturer. MelanoDerm™ tissue was stored at 2-8° C. until use. On the day of acquisition (just before dosing), MelanoDerm™ maintenance medium (EPI-100-LLMM) was warmed to approximately 37°C. 0.9 mL of EPI-100-LLMM was aliquoted into the appropriate wells of a 6-well plate. 6-well plates were labeled to indicate test articles or controls and their dose volumes and exposure conditions (designated for MTT and melanin endpoints). Each MelanoDerm™ tissue was inspected for air bubbles between the agarose gel and the cell culture insert prior to opening the sealed package. Tissues with air bubbles covering more than 50% of the cell culture insert area were not used. The 24-well transport containers were removed from the plastic bag and their surfaces were disinfected with 70% ethanol. MelanoDerm™ tissues were aseptically transferred to 6-well plates. MelanoDerm™ tissues were then incubated overnight (at least 16 hours) at 37±1° C. in a humidified atmosphere of 5±1% CO 2 in air (standard culture conditions).

입수일로부터 조직 인큐베이션 적어도 16 시간 후, MTT에 지정된 5 개의 MelanoDerm™ 조직 (각각 이러한 보고의 목적 상 2 개의 조직 - "비처리 일" 0으로 명명됨) 및 멜라닌 (3 개의 조직) 종점) 각각을 무균 Ca++ 및 Mg++ 유리 둘베코 인산염 완충 식염수 (CMF-DPBS)로 조심스럽게 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. 다음으로, 검정의 시작 시에 조직의 색소침착의 정도의 시각 평가를 돕도록 디지털 카메라 (CANON 카메라, PowerShot SX130IS, 12x 광학 줌, 수동 설정 및 Ricoh WG-50, 현미경 모드, 1cm 줌)를 사용하여 조직을 사진촬영하였다. 이러한 사진들은 멜라닌을 더 잘 나타내기 위해 도립형으로 MelanoDerm ™ 조직의 바닥에서부터 촬영된 것이다. 또한, 도립형 Nikon Eclipse TE 2000U 현미경 (각각 15x 및 60x 배율)에 연결된 Infinity 2 카메라를 사용하여 사진을 촬영하였다. After at least 16 hours of tissue incubation from the date of acquisition, each of the 5 MelanoDerm™ tissues assigned to MTT (two tissues each for purposes of this report - designated "untreated day 0") and melanin (3 tissues) endpoints) Wash carefully with sterile Ca++ and Mg++ free Dulbecco's phosphate buffered saline (CMF-DPBS), dry bottling on sterile sorbent paper, and remove excess liquid. Next, use a digital camera (CANON camera, PowerShot SX130IS, 12x optical zoom, manual settings and Ricoh WG-50, microscope mode, 1 cm zoom) to aid in visual assessment of the degree of tissue pigmentation at the start of the assay. The tissue was photographed. These pictures were taken from the bottom of the MelanoDerm ™ tissue in an inverted position to better reveal the melanin. Pictures were also taken using an Infinity 2 camera connected to an inverted Nikon Eclipse TE 2000U microscope (15x and 60x magnifications, respectively).

2 개의 비처리 MelanoDerm™을 이후 MTT 생존력 종점에 대해 3 ± 0.1 시간 동안 적절한 MTT 함유 웰로 옮겼다. 3 개의 비처리 MelanoDerm™ 조직을 멸균 메스를 사용하여 세포 배양 인서트로부터 꺼내고, 표지된 1.5 mL 마이크로퓨지 튜브에 넣고, 후속 멜라닌 분석을 위해 <-60℃에서 저장하였다(멜라닌 분석 섹션 참조).Two untreated MelanoDerm™ were then transferred to the appropriate MTT containing wells for 3±0.1 hours for the MTT viability endpoint. Three untreated MelanoDerm™ tissues were removed from cell culture inserts using a sterile scalpel, placed in labeled 1.5 mL microfuge tubes, and stored at <-60 °C for subsequent melanin analysis (see Melanin Analysis section).

시험 물품 제조test article manufacturing

시험 물품, 말라세진 (CV-8684), 화합물 B (CV-8877), 화합물 E (AB12508), 화합물 H (AB12509), 미지 조성물, 화합물 A5 (CV-8819) 및 O52 (AB12976)를 EPI-100-LLMM에 의해 스톡 농도를 200 μM 및 500 μM의 최종 농도로 희석함으로써 제조하였다. 스톡 농도를 500 μM로 희석함으로써 시험 물품, 화합물 I (CV-8686)을 제조하였다. 모든 희석액을 적어도 1 분 동안 볼텍싱한 후, 37℃±1℃에서 15 분 동안 워터 배쓰에서 가열하였다. 희석액을 이후 적어도 1 분 동안 다시 볼텍싱한 후, 조직에 투여하였다. 시험 물품 및 용매 대조군, DMSO를 EPI-100-LLMM에서 0.5% (v/v) 희석액으로서 제조하였다. 시험 물품 희석액을 적어도 1 분 동안 볼텍싱한 후, 적어도 1 분 동안 다시 볼텍싱하고, 그 다음 조직 상에 적용하였다. 시험 물품, 화합물 I 제형을 희석 없이 (순수) 시험하였다.Test article, Malassezine (CV-8684), Compound B (CV-8877), Compound E (AB12508), Compound H (AB12509), unknown composition, Compound A5 (CV-8819) and O52 (AB12976) in EPI-100 Prepared by diluting stock concentrations with -LLMM to final concentrations of 200 μM and 500 μM. Test article, compound I (CV-8686) was prepared by diluting the stock concentration to 500 μM. All dilutions were vortexed for at least 1 minute and then heated in a water bath at 37° C.±1° C. for 15 minutes. The dilution was then vortexed again for at least 1 minute before administration to the tissue. Test article and solvent control, DMSO, were prepared as 0.5% (v/v) dilutions in EPI-100-LLMM. The test article dilution was vortexed for at least 1 minute, then vortexed again for at least 1 minute, and then applied onto the tissue. The test article, compound I formulation, was tested without dilution (naive).

MTT의 직접 시험 물품 감소의 평가Assessment of MTT's Direct Test Article Reduction

희석된 최고 농도의 각 시험 물품을 MTT를 직접적으로 감소시키는 이의 능력을 평가하기 위해 2mM L-글루타민(MTT 첨가 배지)을 함유하는 따뜻한 둘베코 변형 이글 배지(DMEM) 중 1.0 mg/mL의 MTT (Sigma) 용액에 첨가하였다. 대략 25 μL의 각 시험 물품을 1 mL의 MTT 용액에 첨가하고, 혼합물을 대략 1 시간 동안 표준 배양 조건에서 인큐베이션하였다. 음성 대조군인, 25 μL의 무균 탈이온수 (Quality Biological)를 동시에 시험하였다. MTT 용액 색상이 청색/자주색으로 변하는 경우, 시험 물품은 MTT를 감소시키는 것으로 추정되었다.MTT (1.0 mg/mL) in warm Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) containing 2 mM L-glutamine (MTT-added medium) to assess its ability to directly reduce MTT at the highest concentration of each test article diluted ( Sigma) solution. Approximately 25 μL of each test article was added to 1 mL of MTT solution, and the mixture was incubated at standard culture conditions for approximately 1 hour. A negative control, 25 μL of sterile deionized water (Quality Biological), was tested simultaneously. If the MTT solution color changed to blue/purple, the test article was assumed to decrease MTT.

시험 물품인, DMSO, 화합물 I (CV-8686), 말라세진 (CV-8684), 화합물 B (CV-8877), 화합물 E (AB12508), 화합물 H (AB12509), 미지 조성물, 화합물 A5 (CV-8819), O52 (AB12976), 및 화합물 I 제형은 생존 가능 세포의 부재에서 직접적으로 MTT를 감소시키는 것으로 관찰되지 않았다.DMSO, compound I (CV-8686), malassezine (CV-8684), compound B (CV-8877), compound E (AB12508), compound H (AB12509), unknown composition, compound A5 (CV- 8819), O52 (AB12976), and Compound I formulations were not observed to directly reduce MTT in the absence of viable cells.

pH 결정pH determination

각 시험 물품 및 양성 대조군의 pH를 pH 종이 (EMD Millipore Corporation)를 사용하여 측정하였다. 처음에, 각 시험 물품 또는 양성 대조군을 좁은 pH 범위에 근접하도록 1.0 pH 단위 증분으로 0 내지 14 pH 범위를 갖는 pH 종이에 첨가하였다. 그 다음, 각 시험 물품 또는 양성 대조군을 더 정확한 pH 값을 갖도록 0.5 pH 단위 증분으로 0 내지 6 또는 5 내지 10 pH 단위의 더 좁은 범위를 갖는 pH 종이에 첨가하였다. 각 시험 물품 또는 양성 대조군의 pH를 적절한 경우 조직 상에 적용된 모든 용량에 대하여 측정하였다(0, 2, 4, 6일). The pH of each test article and positive control was measured using pH paper (EMD Millipore Corporation). Initially, each test article or positive control was added to pH paper having a pH range of 0 to 14 in 1.0 pH unit increments to approximate a narrow pH range. Each test article or positive control was then added to a pH paper having a narrower range of 0 to 6 or 5 to 10 pH units in 0.5 pH unit increments to have a more accurate pH value. The pH of each test article or positive control was determined (0, 2, 4, 6 days) for all doses applied on the tissue as appropriate.

한정적 검정limited test

시험 물품 처리Handling of test articles

5 개의 MelanoDerm™ 조직에 7일 기간에 걸쳐 25uL의 투여 부피로 명시된 농도의 시험 물품, 용매 대조군 (DMSO), 화합물 I (CV-8686), 말라세진 (CV-8684), 화합물 B (CV-8877), 화합물 E (AB12508), 화합물 H (AB12509), 미지 조성물, 화합물 A5 (CV-8819), O52 (AB12976), 및 화합물 I 제형을 48 ± 2 시간마다 국소로 처리하였다.Test article, solvent control (DMSO), compound I (CV-8686), malassezine (CV-8684), compound B (CV-8877) at the indicated concentrations in a dose volume of 25 uL over a 7 day period in 5 MelanoDerm™ tissues ), Compound E (AB12508), Compound H (AB12509), unknown composition, Compound A5 (CV-8819), O52 (AB12976), and Compound I formulations were topically treated every 48±2 hours.

하나의 MelanoDerm™ 조직에 음성 대조군, 25μL의 무균 탈이온수 (Quality Biological)를 48 ± 2 시간마다 국소로 처리하였다. 5 개의 MelanoDerm™ 조직을 7일 시험 동안 양성 대조군 (무균 탈이온수에서 제조된 1% 코직산)으로 48 ± 2 시간마다 국소로 처리하였다. 코직산 용액을 제조 시점에 여과하고, 사용될 때까지(제조로부터 2 시간) 알루미늄 호일로 피복된 관에서 저장하였다. 조직을 각각 시험 물품 및 검정 대조군으로 7일 기간에 걸쳐 48 ± 2 시간마다 처리하였다. 노출된 조직을 이후 표준 배양 조건에서 인큐베이션하였다.One MelanoDerm™ tissue was locally treated with a negative control, 25 μL of sterile deionized water (Quality Biological) every 48 ± 2 hours. Five MelanoDerm™ tissues were treated topically every 48±2 hours as a positive control (1% kojic acid prepared in sterile deionized water) for a 7 day trial. The kojic acid solution was filtered at the time of preparation and stored in aluminum foil coated tubes until use (2 hours from preparation). Tissues were treated with test article and assay control, respectively, every 48±2 hours over a 7 day period. The exposed tissues were then incubated in standard culture conditions.

처리된 MelanoDerm™ 조직을 매일 "재공급"하였다. 조직을 조심스럽게 탭핑하여 국소 적용된 대조군이 고르게 재확산되는 것을 보장하였다. 처리된 조직을 이후 0.9 mL의 예비가온된 (~37℃)의 EPI-100-LLMM을 함유하는 새로운 예비표지된 6-웰 플레이트에 넣고, 인큐베이터에 다시 넣고, 표준 배양 조건에서 유지시켰다.The treated MelanoDerm™ tissue was “refeeded” daily. The tissue was carefully tapped to ensure evenly redispersion of the topically applied controls. The treated tissue was then placed in a new pre-labeled 6-well plate containing 0.9 mL of prewarmed (˜37° C.) of EPI-100-LLMM, placed back in the incubator, and maintained in standard culture conditions.

각각 48 ± 2 시간의 노출 시간 후, MelanoDerm™ 조직을 ~ 500 μL의 Ca++Mg++유리-DPBS로 3 회 조심스럽게 세정하여 임의의 잔류 시험 물품을 제거하였다. 조직을 이후 0.9 mL의 예비가온된 (~37℃)의 EPI-100-LLMM을 함유하는 새로운 예비표지된 6-웰 플레이트에 넣은 후, 상기 논의된 바와 같은 적절한 시험 물품, 음성, 또는 양성 대조군을 투여하였다.After an exposure time of 48±2 hours each, the MelanoDerm™ tissue was carefully washed three times with ˜500 μL of Ca++Mg++free-DPBS to remove any residual test article. The tissue is then placed in a new prelabeled 6-well plate containing 0.9 mL of prewarmed (˜37° C.) of EPI-100-LLMM, followed by the appropriate test article, negative, or positive control as discussed above. administered.

7일 간의 노출 기간의 종료 시, 각 처리군(시험 물품, 음성 대조군, 양성 대조군, 및 용매 대조군)의 조직을 Ca++Mg++유리-DPBS로 조심스럽게 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. 이후, 디지털 카메라 (CANON 카메라, PowerShot SX130IS, 12x 광학 줌, 수동 설정 및 Ricoh WG-50, 현미경 모드, 1cm 줌)를 사용하여 조직을 사진촬영하여 검정의 시작 시에 조직의 색소침착 정도의 시각적 평가를 도왔다. 이러한 현미경 사진들은 멜라닌을 더 잘 나타내기 위해 도립형으로 MelanoDerm ™ 조직의 바닥에서부터 촬영된 것이었다. 또한, 도립형 Nikon Eclipse TE 2000U 현미경 (배율 15x)에 연결된 Infinity 2 카메라를 사용하여 현미경 사진을 촬영하였다. At the end of the 7-day exposure period, the tissues of each treatment group (test article, negative control, positive control, and solvent control) were carefully washed with Ca++Mg++free-DPBS, dried bottling on sterile sorbent paper, Excess liquid was removed. Thereafter, the tissue was photographed using a digital camera (CANON camera, PowerShot SX130IS, 12x optical zoom, manual settings and Ricoh WG-50, microscope mode, 1 cm zoom) to visually evaluate the degree of tissue pigmentation at the beginning of the assay. helped These micrographs were taken from the bottom of the MelanoDerm ™ tissue in an inverted position to better reveal melanin. In addition, micrographs were taken using an Infinity 2 camera connected to an inverted Nikon Eclipse TE 2000U microscope (magnification 15x).

각 시험 물품 농도에서, 양성 대조군 및 용매 대조군에 대하여, 두 개의 조직을 이후 CMF-DPBS로 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. 음성 대조군에 대하여, 단일 조직을 CMF-DPBS로 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. 조직을 무균 메스를 사용하여 세균 배양 인서트로부터 꺼내고, 표지된 1.5 mL 마이크로퓨지 튜브에 넣고, 후속 멜라닌 분석을 위해 <-60℃에서 밤새 저장하였다.At each test article concentration, for the positive control and the solvent control, two tissues were then washed with CMF-DPBS, dried bottled on sterile sorbent paper, and excess liquid was removed. For the negative control, single tissue was washed with CMF-DPBS, dried bottled on sterile sorbent paper, and excess liquid was removed. Tissues were removed from bacterial culture inserts using a sterile scalpel, placed in labeled 1.5 mL microfuge tubes, and stored overnight at <-60°C for subsequent melanin analysis.

시험 물품, DMSO, 화합물 I (CV-8686), 말라세진 (CV-8684), 화합물 B (CV-8877), 화합물 E (AB12508), 화합물 H (AB12509), 미지 조성물, 화합물 A5 (CV-8819) (500 μM), O52 (AB12976) (500 μM), 화합물 I 제형, 및 양성 대조군의 두 개의 MelanoDerm™ 조직, 및 시험 물품, 화합물 A5 (CV-8819) (200 μM) 및 O52 (AB12976) (200 μM)에 대하여 세 개의 MelanoDerm™ 조직을 이후 무균 Ca++ 및 Mg++ 유리 둘베코 인산염 완충 식염수 (CMF-DPBS)로 조심스럽게 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. 조직을 이후 MTT 생존력 종점에 대해 대략 3 시간 동안 적절한 MTT 함유 웰로 옮겼다.Test article, DMSO, compound I (CV-8686), malassezine (CV-8684), compound B (CV-8877), compound E (AB12508), compound H (AB12509), unknown composition, compound A5 (CV-8819) ) (500 μM), O52 (AB12976) (500 μM), Compound I formulation, and two MelanoDerm™ tissues of a positive control, and test article, Compound A5 (CV-8819) (200 μM) and O52 (AB12976) ( 200 μM), the three MelanoDerm™ tissues were then carefully rinsed with sterile Ca++ and Mg++ free Dulbecco's phosphate buffered saline (CMF-DPBS), bottled dry on sterile sorbent paper, and excess liquid was removed. Tissues were then transferred to appropriate MTT containing wells for approximately 3 hours for the MTT viability endpoint.

MTT 검정MTT test

따뜻한 MTT 첨가 배지 중의 1.0 mg/mL의 MTT 용액을 사용 전 2 시간 이내에 제조하였다. 적절한 노출 시간 후, MTT 종점에 지정된 MelanoDerm™ 조직을 CMF-DPBS로 폭넓게 세정하고, 세척된 배지를 경사처리하였다. 0.3 mL의 MTT 시약을 예비-표지된 24-웰 플레이트에서 지정된 웰에 첨가하였다. MelanoDerm™ 조직을 세정 후 적절한 웰로 옮겼다. 플레이트는 표준 배양 조건에서 대략 3 시간 동안 인큐베이션하였다.A solution of 1.0 mg/mL MTT in warm MTT supplemented medium was prepared within 2 hours prior to use. After an appropriate exposure time, MelanoDerm™ tissues assigned to the MTT endpoint were extensively washed with CMF-DPBS and the washed media decanted. 0.3 mL of MTT reagent was added to the designated wells in a pre-labeled 24-well plate. MelanoDerm™ tissue was washed and transferred to appropriate wells. Plates were incubated for approximately 3 hours in standard culture conditions.

MTT 용액과의 인큐베이션 기간 후, MelanoDerm™ 조직을 무균 흡착제 종이에서 병입하고, 과량의 액체를 제거하고, 각각의 지정된 웰에 2.0 mL의 이소프로판올을 함유하는 예비-표지된 24-웰 플레이트로 옮겼다. 그 후에, 플레이트를 실온에서 적어도 2 시간 동안 진탕하였다.After a period of incubation with MTT solution, MelanoDerm™ tissues were bottled on sterile sorbent paper, excess liquid was removed, and transferred to pre-labeled 24-well plates containing 2.0 mL of isopropanol in each designated well. The plate was then shaken at room temperature for at least 2 hours.

추출 기간의 종료 시, 세포 배양 인서트 내의 액체를 세포 배양 인서트가 취해진 웰로 경사처리하였다. 추출물 용액을 혼합하고, 200 μL를 각 샘플에 지정된 96-웰 플레이트의 두 개의 웰로 옮기고, 200 μL의 이소프로판올을 블랭크로서 지정된 두 개의 웰에 넣었다. 각각의 웰의 550nm에서의 흡광도(OD550)를 Molecular Devices Vmax 플레이트 판독기로 측정하였다.At the end of the extraction period, the liquid in the cell culture insert was decanted into the well from which the cell culture insert was taken. The extract solutions were mixed, 200 μL was transferred to two wells of a 96-well plate designated for each sample, and 200 μL of isopropanol was placed into the two wells designated as blanks. The absorbance (OD550) at 550 nm of each well was measured with a Molecular Devices Vmax plate reader.

멜라닌 검정melanin black

멜라닌 추출 당일, 적출된 조직을 실온에서 대략 15 분 동안 해동시켰다. 250 μL의 가용성 물질을 각 마이크로퓨지 튜브에 첨가하고, 튜브를 드라이-배쓰에서 멜라닌 표준물과 함께 60±2℃에서 적어도 16 시간 동안 인큐베이션하였다. 멜라닌을 가용성 물질에 용해시킴으로써 1 mg/mL의 멜라닌 표준 스톡 용액을 제조하였다. 일련의 멜라닌 표준물을 1 mg/mL의 스톡 용액으로부터 제조하였다. 1.2 mL의 가용성 물질에 1 mg/mL 멜라닌 표준 스톡 용액을 0.6 mL 첨가한 후, 일련의 5 개 넘는 희석액을 제조함으로써(3의 희석 배수) 표준물 시리즈를 제조하였다. 가용성 물질을 제로 표준물로서 사용하였다.On the day of melanin extraction, the excised tissues were thawed at room temperature for approximately 15 minutes. 250 μL of soluble material was added to each microfuge tube, and the tube was incubated with melanin standards in a dry-bath at 60±2° C. for at least 16 hours. A 1 mg/mL melanin standard stock solution was prepared by dissolving melanin in the soluble material. A series of melanin standards were prepared from a stock solution of 1 mg/mL. A standard series was prepared by adding 0.6 mL of a 1 mg/mL melanin standard stock solution to 1.2 mL of soluble material, followed by making a series of more than 5 dilutions (dilution multiples of 3). Soluble material was used as the zero standard.

멜라닌 추출의 개시 적어도 16 시간 후, 샘플(MelanoDerm™ 조직으로부터 추출된 멜라닌을 나타냄) 및 표준물을 함유하는 튜브를 실온으로 냉각시킨 후, 실온에서 5 분 동안 13,000 rpm으로 원심분리하였다. 200 μL의 샘플을 96-웰 플레이트의 적절한 웰로 옮겼다. 200 μL의 표준물 및 블랭크를 이중으로 96-웰 플레이트의 적절한 웰로 옮겼다. 각각의 웰의 490nm에서의 흡광도(OD490)를 Molecular Devices Vmax 플레이트 판독기로 측정하였다.At least 16 hours after initiation of melanin extraction, the tubes containing the samples (representing melanin extracted from MelanoDerm™ tissue) and standards were cooled to room temperature and then centrifuged at 13,000 rpm for 5 minutes at room temperature. 200 μL of sample was transferred to the appropriate wells of a 96-well plate. 200 μL of standards and blanks were transferred in duplicate to the appropriate wells of a 96-well plate. The absorbance (OD490) at 490 nm of each well was measured with a Molecular Devices Vmax plate reader.

데이터의 프리젠테이션presentation of data

MTT 데이터 - 0일MTT Data - Day 0

흡광도 원 데이터를 캡쳐하였다. 블랭크 웰의 평균 OD550 값을 계산하였다. 비처리 조직의 OD550 값으로부터 블랭크 웰의 평균 OD550 값을 공제함으로써 각각의 비처리 조직의 보정된 OD550 값을 결정하였다. 비처리 조직에 대해 계산된 모든 OD550 값의 평균으로 개별 보정된 OD550 값을 나눔으로써 각 개별 조직에 대해 개별 % 생존력 값을 표로 만들었다. 전체 평균 % 생존력을 계산하였다. 마지막으로, 비처리 조직의 평균 생존력 값을 막대 그래프(± 1 표준 편차 오차 막대)에 플롯팅하였다.Absorbance raw data were captured. The mean OD550 values of blank wells were calculated. The corrected OD550 value of each untreated tissue was determined by subtracting the average OD550 value of the blank wells from the OD550 value of the untreated tissue. Individual % viability values were tabulated for each individual tissue by dividing the individual corrected OD550 values by the average of all OD550 values calculated for untreated tissues. The overall mean % viability was calculated. Finally, the mean viability values of untreated tissues were plotted on a bar graph (± 1 standard deviation error bars).

MTT - 7일MTT - 7 days

흡광도 원 데이터를 캡쳐하였다. Excel® 스프레드시트를 이용하여 모든 계산을 수행하였다. 블랭크 웰의 평균 OD550 값을 계산하였다. 평균 OD550 값으로부터 블랭크 웰의 평균 OD550 값을 공제함으로써 음성 대조군의 평균 보정된 OD550 값을 결정하였다. 개별 시험 물품 노출, 양성 대조군 노출, 및 음성 대조군 노출의 보정된 OD550 값을 블랭크 웰에 대한 각각의 평균 OD550 값으로부터 공제함으로써 결정하였다.Absorbance raw data were captured. All calculations were performed using an Excel® spreadsheet. The mean OD550 values of blank wells were calculated. The mean corrected OD550 value of the negative control was determined by subtracting the mean OD550 value of the blank wells from the mean OD550 value. The corrected OD550 values of individual test article exposures, positive control exposures, and negative control exposures were determined by subtracting the respective mean OD550 values for the blank wells.

보정된 시험 물품 노출 시간 OD550 = 시험 물품 노출 시간 OD550 - 블랭크 평균 OD550Calibrated Test Article Exposure Time OD550 = Test Article Exposure Time OD550 - Blank Average OD550

시험 물품-처리 및 양성 대조군-처리 조직에 대해 대조군 계산의 하기 %가 생성되었다:The following % of control calculations were generated for test article-treated and positive control-treated tissues:

% 생존력 = [(시험 물품 또는 양성 대조군의 최종 보정된 OD550) / % viability = [(final corrected OD550 of test article or positive control) /

(음성/용매 대조군의 보정된 평균 OD550)] × 100(corrected mean OD550 of negative/solvent control)] × 100

대조군 값의 개별 %를 평균내어 각 시험 물품 또는 양성 대조군 당 대조군의 평균 %를 계산하였다. MTT 생존력의 총 평균을 계산하였다. 마지막으로, 평균 생존력 값을 막대 그래프(± 1 표준 편차 오차 막대)에 플롯팅하였다.Individual % of control values were averaged to calculate the average % of control per each test article or positive control. The total mean of MTT viability was calculated. Finally, mean viability values were plotted on a bar graph (±1 standard deviation error bars).

멜라닌 데이터melanin data

흡광도 원 데이터를 캡쳐하였다. 각 멜라닌 표준의 OD490 값을 결정하였다. 각 멜라닌 표준물의 평균 OD490 값을 사용하여 표준 곡선을 생성시켰다. 멜라닌 표준물 농도의 OD490 값으로부터 블랭크 웰의 OD490 값을 공제함으로써 각 멜라닌 표준물 농도의 보정된 OD490 값을 결정하였다. 표준 곡선을 표준물의 농도 (mg/mL) (y-축) 대 상응하는 보정된 흡광도 (OD490 값)로 플롯팅하였다. 시험 물품, 양성 대조군-처리 조직, 또는 음성 대조군-처리 조직에서 멜라닌의 양을 표준 곡선으로부터 수학적으로 삽입하였다(2차). Absorbance raw data were captured. The OD490 value of each melanin standard was determined. A standard curve was generated using the average OD490 value of each melanin standard. The corrected OD490 value of each melanin standard concentration was determined by subtracting the OD490 value of the blank wells from the OD490 value of the melanin standard concentration. The standard curve was plotted as the concentration (mg/mL) of the standard (y-axis) versus the corresponding corrected absorbance (OD490 value). The amount of melanin in the test article, positive control-treated tissue, or negative control-treated tissue was mathematically interpolated from the standard curve (secondary).

결과 및 고찰Results and Discussion

시험 물품, DMSO, 화합물 I (CV-8686), 말라세진 (CV-8684), 화합물 B (CV-8877), 화합물 E (AB12508), 화합물 H (AB12509), 미지 조성물, 화합물 A5 (CV-8819), O52 (AB12976), 및 화합물 I 제형을 아시아인 MelanoDerm™ 조직 모델을 이용하여 멜라닌생성 조정제 스크리닝 검정에서 시험하여 7일 노출 기간에 걸쳐 반복 노출 후 이들의 진피 자극 잠재력 및 멜라닌 생성에 대한 영향을 평가하였다.Test article, DMSO, compound I (CV-8686), malassezine (CV-8684), compound B (CV-8877), compound E (AB12508), compound H (AB12509), unknown composition, compound A5 (CV-8819) ), O52 (AB12976), and Compound I formulations were tested in a melanogenesis modulator screening assay using the Asian MelanoDerm™ tissue model to determine their effect on dermal stimulation potential and melanogenesis after repeated exposure over a 7-day exposure period. evaluated.

시험 물품을 시험 시스템에 순수하게 또는 무균 EPI-100-LLMM에서 제조된 v/v 희석액으로서 투여하였다. 시험 물품 말라세진 (CV-8684), 화합물 B (CV-8877), 화합물 E (AB12508), 화합물 H (AB12509), 미지 조성물, 화합물 A5 (CV-8819), 및 O52 (AB12976)를 500 μM 및 200 μM 희석액으로 시험 시스템에 투여하였다. 시험 물품, 화합물 I (CV-8686)을 500 μM 희석액으로서 시험 시스템에 투여하였다. 시험 물품, DMSO (비히클 대조군)를 0.5% (v/v) 희석액으로 시험 시스템에 투여하였다. 시험 물품, 화합물 I 제형을 그 자체로 시험하였다. 시험 물품의 각 희석액을 5 개의 MelanoDerm™ 조직에 국소로 적용하였다(2 개 또는 3 개가 MTT 종점에 지정된 화합물 A5 (CV-8819) (200 μM) 및 O52 (AB12976) (200 μM)이고, 2 개는 멜라닌 종점이고, 화합물 A5 (CV-8819) (200 μM) 및 O52 (AB12976) (200 μM)는 제외함). 조직을 각 개별 시험 기간에 걸쳐 48 ± 2 시간마다 25 μL의 각 시험 물품으로 처리하였다. 양성 대조군(무균 탈이온수 중에 제조된 1% 코직산)을 5 개의 MelanoDerm™ 조직 각각에 국소로 적용하고(2 개는 MTT 종점에 지정, 및 2 개는 멜라닌 종점에 지정), 7일 기간에 걸쳐 48 ± 2 시간 마다 25 μL로 처리하였다.Test articles were administered to the test system either neat or as v/v dilutions prepared in sterile EPI-100-LLMM. Test articles Malassezine (CV-8684), Compound B (CV-8877), Compound E (AB12508), Compound H (AB12509), unknown composition, Compound A5 (CV-8819), and O52 (AB12976) at 500 μM and 200 μM dilution was administered to the test system. The test article, compound I (CV-8686) was administered to the test system as a 500 μM dilution. The test article, DMSO (vehicle control), was administered to the test system at a 0.5% (v/v) dilution. The test article, Compound I formulation, was tested as such. Each dilution of the test article was topically applied to 5 MelanoDerm™ tissues (2 or 3 were Compound A5 (CV-8819) (200 μM) and O52 (AB12976) (200 μM) assigned to the MTT endpoint, 2 is the melanin endpoint, excluding compounds A5 (CV-8819) (200 μM) and O52 (AB12976) (200 μM)). Tissues were treated with 25 μL of each test article every 48 ± 2 hours over each individual test period. A positive control (1% kojic acid prepared in sterile deionized water) was applied topically to each of the 5 MelanoDerm™ tissues (2 assigned to the MTT endpoint, and 2 to the melanin endpoint), 48 over a 7 day period. Treated with 25 μL every ± 2 hours.

도 75는 시험 물품, 음성 대조군, 및 양성 대조군에 대한 평균 조직 생존력 및 멜라닌 농도 결과를 요약한 것이다. 도 76 내지 87에는 0일 및 7일에 조직의 색소침착 정도에 대한 시각적 평가를 돕기 위해 촬영한 대표적인 거시적 및 미시적 사진(15x 배율만)이 포함되어 있다. 이들은 각 처리군 내의 복제 조직을 대표하는 것으로 간주되며, 후속 데이터 해석과 관련이 있다. 거시적 사진은 조직에서 전체 멜라닌 생성과 조직 표면 상의 이의 분포를 나타낸다. 현미경 사진은 멜라닌의 생성, 수상 돌기의 존재 또는 시험 물품/대조군 처리와 관련된 모든 형태학적 변화에 관한 멜라닌세포의 생리적 상태의 전체도를 제공한다. Figure 75 summarizes mean tissue viability and melanin concentration results for test article, negative control, and positive control. 76-87 include representative macroscopic and microscopic photographs (15x magnification only) taken on days 0 and 7 to aid in visual assessment of the degree of tissue pigmentation. They are considered representative of replicate tissue within each treatment group and are relevant for subsequent data interpretation. Macroscopic pictures show total melanin production in the tissue and its distribution on the tissue surface. Photomicrographs provide an overview of the physiological state of melanocytes with respect to production of melanin, presence of dendrites, or any morphological changes associated with test article/control treatment.

7일 기간에 걸쳐 반복 노출 후 시험 물품으로 처리된 조직에 의한 멜라닌 생성 평가를 이용하여 피부 멜라닌생성 조정제로서의 시험 물품의 잠재력을 평가하였다. 양성 대조군, 1% 코직산은 용매 대조군-처리 조직 (53.82 μg/mL)에 비해 양성 대조군-처리 조직에서 22.01 μg/mL로 멜라닌 농도를 감소시켰다. 일반적으로, 멜라닌 검정을 수행하여 얻은 객관적인 결과는 연구 수행 중에 촬영된 거시적 및 미시적 사진의 분석에 기초한 주관적인 관찰에 의해 뒷받침된다.The potential of the test article as a modulator of skin melanogenesis was evaluated using the assessment of melanogenesis by tissue treated with the test article after repeated exposure over a 7 day period. The positive control, 1% kojic acid, reduced the melanin concentration to 22.01 μg/mL in the positive control-treated tissues compared to the solvent control-treated tissues (53.82 μg/mL). In general, the objective results obtained by performing a melanin assay are supported by subjective observations based on analysis of macroscopic and microscopic photographs taken during the conduct of the study.

시험 물품, DMSO, 화합물 I (CV-8686), 말라세진 (CV-8684), 화합물 B (CV-8877), 화합물 E (AB12508), 화합물 H (AB12509), 미지 조성물, 화합물 A5 (CV-8819), O52 (AB12976), 및 화합물 I 제형은 생존 가능 세포의 부재에서 직접적으로 MTT를 감소시키지 않았다. 따라서, 사멸된 대조군 실험은 수행하지 않았다.Test article, DMSO, compound I (CV-8686), malassezine (CV-8684), compound B (CV-8877), compound E (AB12508), compound H (AB12509), unknown composition, compound A5 (CV-8819) ), O52 (AB12976), and Compound I formulations did not directly reduce MTT in the absence of viable cells. Therefore, killed control experiments were not performed.

시험 물품은 양성 대조군-처리 조직의 경우에 얻어진 것과 비슷한 수준으로 DMSO-처리 조직에 비해 이들의 각각의 조직에서 멜라닌의 농도를 감소시켰다. 예를 들어, 검정 양성 대조군-처리 조직 중 농도 (22.01 μg/mL)에 비해, 시험 물품, 화합물 B (CV-8877) (500μM)로 처리된 조직 중 멜라닌 농도는 25.99 μg/mL이고, 시험 물품, 화합물 E (AB12508) (500μM)로 처리된 조직 중 농도는 25.26 μg/mL였다. The test article reduced the concentration of melanin in their respective tissues compared to DMSO-treated tissues to a level comparable to that obtained for the positive control-treated tissues. For example, the melanin concentration in the tissue treated with the test article, Compound B (CV-8877) (500 μM) is 25.99 μg/mL, compared to the concentration in the assay positive control-treated tissue (22.01 μg/mL), and the test article , the concentration in tissues treated with compound E (AB12508) (500 μM) was 25.26 μg/mL.

추가 연구further study

AB17151, 화합물 B10, 말라세진 전구체, AB17011, AB17014, DMSO, CV-8484, 화합물 E, 및 코직산에 대한 Melanoderm™ 결과는 도 88에 나타나 있다.Melanoderm™ results for AB17151, compound B10, malassezine precursor, AB17011, AB17014, DMSO, CV-8484, compound E, and kojic acid are shown in FIG. 88 .

실시예 20Example 20

말라세진 및 말라세진 유도체의 멜라닌생성 잠재력The melanogenic potential of malacetin and its derivatives.

이 연구의 목적은 말라세진 및 말라세진 유도체에 노출된 B16 멜라닌세포의 멜라닌생성 및 생존력을 관찰하고 보고하는 것이었다.The purpose of this study was to observe and report the melanogenesis and viability of B16 melanocytes exposed to malacetin and its derivatives.

물질 및 시약Substances and reagents

플레이팅 배지에는 L-글루타민, FBS, 페니실린/스트렙토마이신, 및 L-글루타민 없이 DMEM이 포함되었다. 검정 배지에는 페놀 레드 및 L-글루타민, FBS, 페니실린/스트렙토마이신, L-글루타민, 및 MSH 없이 DMEM을 포함하였다. 기타 시약에는 코직산, DMSO, 및 MTT가 포함되었다. 시험된 세포는 B16 세포 (ATCC CRL-6475)였다.The plating medium contained DMEM without L-glutamine, FBS, penicillin/streptomycin, and L-glutamine. Assay medium included DMEM without phenol red and L-glutamine, FBS, penicillin/streptomycin, L-glutamine, and MSH. Other reagents included kojic acid, DMSO, and MTT. The cells tested were B16 cells (ATCC CRL-6475).

프로토콜protocol

B16 멜라닌세포를 70% 포화상태까지 배양하고, 수확하였다. 세포를 4000 개 세포/웰의 밀도로 96-웰 플레이트에 시딩하고, 밤새 부착되게 하였다. 다음 날, 시험 물품 및 대조군을 B16 검정 배지에서 희석하였다. 밤새 배지를 흡기시키고, 200 ul의 시험 물품 및 대조군을 적용하였다. 세포를 37℃ 및 10% CO2에서 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 72 시간 인큐베이션 후, 흡광도를 540 nm에서 판독하였다. 배지를 제거하고, 1 mg/mL의 MTT를 함유하는 100 ul의 플레이팅 배지로 교체하고, 37℃ 및 10% CO2에서 2 시간 동안 인큐베이션하였다. MTT 배지를 제거하고, 200 ul의 95% 에탄올/5% 이소프로판올로 교체하고, 15 분 동안 진탕되게 하였다. 이후, MTT 흡광도를 570 nm에서 판독하였다.B16 melanocytes were cultured to 70% confluency and harvested. Cells were seeded in 96-well plates at a density of 4000 cells/well and allowed to attach overnight. The next day, test articles and controls were diluted in B16 assay medium. The medium was aspirated overnight and 200 ul of test article and control were applied. Cells were incubated at 37° C. and 10% CO 2 for 72 hours. After 72 h incubation, the absorbance was read at 540 nm. The medium was removed and replaced with 100 ul of plating medium containing 1 mg/mL of MTT and incubated at 37° C. and 10% CO 2 for 2 hours. The MTT medium was removed and replaced with 200 ul of 95% ethanol/5% isopropanol and allowed to shake for 15 minutes. The MTT absorbance was then read at 570 nm.

결과result

멜라닌에서의 변화 퍼센트 및 생존력 결과는 도 89a 내지 89x에 나타나 있다.Percent change in melanin and viability results are shown in Figures 89A-89X.

실시예 21Example 21

말라세진 및 말라세진 유도체의 제형Formulations of Malacetin and Malacetin Derivatives

0.1% 말라세진 제형0.1% malacetin formulation

0.1% 말라세진의 조성물을 다음 성분들을 사용하여 제형화하였다: 물, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 글리세린, 부티로스퍼멈 파키 (시어) 버터, 헵틸 운데실레네이트, 세테아릴 올리베이트, 세틸 알코올, 디메틸 이소소르바이드, 디메티콘, 소르비탄 올리베이트, 말라세진, 스쿠알렌, 디포타슘 글리시리제이트, 트리소듐 에틸렌디아민 디숙시네이트, 스클레로튬 검, 잔탄 검, 카프릴릴 글리콜, 클로르페네신, 및 페녹시에탄올.A composition of 0.1% malacetin was formulated using the following ingredients: water, caprylic/capric triglyceride, glycerin, butyrospermum parqui (shea) butter, heptyl undecylenate, cetearyl olivate, cetyl Alcohol, dimethyl isosorbide, dimethicone, sorbitan olivate, malacetin, squalene, dipotassium glycyrrhizate, trisodium ethylenediamine disuccinate, sclerotium gum, xanthan gum, caprylyl glycol, chloro Lefenesin, and phenoxyethanol.

생성된 조성물은 pH 5.72 및 14,000 cps의 점도를 갖는 불투명한 점성의 오프-화이트색 크림이었다.The resulting composition was an opaque, viscous off-white cream with a pH of 5.72 and a viscosity of 14,000 cps.

0.1% 화합물 I 제형0.1% Compound I Formulation

0.1% 화합물 I의 조성물을 말라세진 대신에 화합물 I을 갖는 0.1% 말라세진 제형에 대하여 상술된 동일한 성분들을 사용하여 제형화하였다.A composition of 0.1% compound I was formulated using the same ingredients described above for the 0.1% malacetin formulation with compound I in place of malacetin.

생성된 조성물은 pH 5.66 및 14,000 cps의 점도를 갖는 불투명한 점성의 오프-화이트색 크림이었다.The resulting composition was an opaque, viscous off-white cream with a pH of 5.66 and a viscosity of 14,000 cps.

1% 말라세진 제형1% Malacetin Formulation

1% 말라세진의 조성물을 다음 성분들을 사용하여 제형화하였다: 물, 디메틸 이소소르바이드, 올리브유 글리세레쓰-8 에스테르, 글리세린, 코코넛 알칸, 하이드록시에틸 아크릴레이트/소듐 아크릴로일디메틸 타우레이트 코폴리머, 말라세진, 토코페롤, 펜틸렌 글리콜, 코코-카프릴레이트/카프레이트, 소듐 하이드록사이드, 디소듐 EDTA, 카프릴릴 글리콜, 클로르페네신, 및 페녹시에탄올.A composition of 1% malacetin was formulated using the following ingredients: water, dimethyl isosorbide, olive oil glycereth-8 ester, glycerin, coconut alkane, hydroxyethyl acrylate/sodium acryloyldimethyl taurate copolymer , malacetin, tocopherol, pentylene glycol, coco-caprylate/caprate, sodium hydroxide, disodium EDTA, caprylyl glycol, chlorphenesin, and phenoxyethanol.

생성된 조성물은 pH 6.27 및 2,000 cps의 점도를 갖는 불투명한 점성의 오프-화이트색 크림이었다.The resulting composition was an opaque viscous off-white cream with a pH of 6.27 and a viscosity of 2,000 cps.

1% 화합물 I 제형1% Compound I Formulation

1% 화합물 I의 조성물을 말라세진 대신에 화합물 I을 갖는 1% 말라세진 제형에 대하여 상술된 동일한 성분들을 사용하여 제형화하였다.A composition of 1% compound I was formulated using the same ingredients described above for the 1% malacetin formulation with compound I in place of malacetin.

생성된 조성물은 pH 6.00 및 30,000 cps의 점도를 갖는 불투명한 점성의 오프-화이트색 크림이었다.The resulting composition was an opaque, viscous off-white cream with a pH of 6.00 and a viscosity of 30,000 cps.

화합물 II 제형Compound II Formulation

화합물 II의 조성물은 다음 성분들을 사용하여 제형화하였다: 물, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 글리세린, 부티로스퍼멈 파키 (시어) 버터, 헵틸 운데실레네이트, 펜틸렌 글리콜, 세테아릴 올리베이트, 세틸 알코올, 디메티콘, 소르비탄 올리베이트, 화합물 II, 디포타슘 글리시리제이트, 스쿠알렌, 스클레로튬 검, 잔탄 검, 트리소듐 에틸렌디아민 디숙시네이트, 소듐 하이드록사이드, 카프릴릴 글리콜, 클로르페네신, 및 페녹시에탄올.A composition of compound II was formulated using the following ingredients: water, caprylic/capric triglyceride, glycerin, butyrospermum paki (shea) butter, heptyl undecylenate, pentylene glycol, cetearyl olivate , cetyl alcohol, dimethicone, sorbitan olivate, compound II, dipotassium glycyrrhizate, squalene, sclerotium gum, xanthan gum, trisodium ethylenediamine disuccinate, sodium hydroxide, caprylyl glycol , chlorphenesin, and phenoxyethanol.

생성된 조성물은 오프-화이트색, 5.80의 pH, 및 8,000 cps의 점도를 갖는 불투명한 반-점성 액체였다.The resulting composition was an opaque semi-viscous liquid with an off-white color, a pH of 5.80, and a viscosity of 8,000 cps.

실시예 22Example 22

인디루빈 및 인디루빈 유도체의 아폽토시스-활성 유도Induction of apoptosis-activity of indirubin and indirubin derivatives

시약reagent

Alexa Fluor 488 아넥신 V/사세포 아폽토시스 키트, 소 태아 혈청 (FBS), 0.25% 트립신-EDTA (1x), 카스파제-Glo 3/7 검정, RPMI 1640 배지, 둘베코 변형 이글 배지, 및 항생제 항진균성 용액 (100x). Alexa Fluor 488 Annexin V / Dead Cell Apoptosis Kit, Fetal Bovine Serum (FBS), 0.25% Trypsin-EDTA (1x), Caspase-Glo 3/7 Assay, RPMI 1640 Medium, Dulbecco's Modified Eagle Medium, and Antibiotic Antifungal sex solution (100x).

세포주 MeWo (ATCC® HTB-65™), WM115 (ATCC® CRL-1675) 및 B16F1 (ATCC® CRL-6323)을 다음 배양 배지에서 유지시켰다: MeWo 및 B16F1에 대한 배양 배지: 10% FBS가 보충된 DMEM; WM115에 대한 배양 배지: 10% FBC가 보충된 RPMI 1640.Cell lines MeWo (ATCC® HTB-65™), WM115 (ATCC® CRL-1675) and B16F1 (ATCC® CRL-6323) were maintained in the following culture media: Culture media for MeWo and B16F1: supplemented with 10% FBS DMEM; Culture medium for WM115: RPMI 1640 supplemented with 10% FBC.

실험 방법Experimental method

세포를 수확하고, 세포수를 Countess 세포 계수기를 사용하여 결정하였다. 세포를 배양 배지에 의해 요망되는 밀도로 희석하였다. 최종 세포 밀도는, 예를 들어, 6 시간 및 24 시간 처리 동안 4,000 개 세포/웰, 및 48 시간 및 72 시간 처리 동안 2,000 개 세포/웰일 수 있다. 아넥신 V 검정의 경우에 384-웰 투명-바닥 플레이트 (Corning 3712)를 사용한 반면, 카스파제-Glo 검정의 경우에 384-웰 고형 백색-바닥 플레이트 (Corning 3570)를 사용하였다. 모든 플레이트를 뚜껑으로 덮고, 세포 부착을 위해 밤새 37℃ 및 5% CO2에 두었다.Cells were harvested and cell numbers were determined using a Countess cell counter. Cells were diluted to the desired density with culture medium. The final cell density can be, for example, 4,000 cells/well for 6 and 24 hours treatments, and 2,000 cells/well for 48 hours and 72 hours treatments. For the Annexin V assay a 384-well clear-bottom plate (Corning 3712) was used, whereas for the Caspase-Glo assay a 384-well solid white-bottom plate (Corning 3570) was used. All plates were covered with lids and placed at 37° C. and 5% CO 2 overnight for cell attachment.

시험 화합물을 DMSO에서 30 mM 스톡으로 용해시켰다. 10-배 희석을 수행하여 3 mM 및 0.3 mM 농도를 생성시켰다. 0.9 mM 스타우로스포린을 양성 대조군으로서 사용하고, DMSO를 음성 대조군 (NC)으로서 사용하였다. 액체 핸들러 Echo550을 사용하여 화합물 소스 플레이트로부터 384-웰 세포 배양 플레이트(들)로 132.5 nL의 화합물을 옮겼다. 지시된 인큐베이션 시간 후, 검출을 위해 인큐베이터에서 플레이트를 꺼냈다.Test compounds were dissolved in DMSO as a 30 mM stock. 10-fold dilutions were performed to yield 3 mM and 0.3 mM concentrations. 0.9 mM staurosporin was used as a positive control and DMSO was used as a negative control (NC). 132.5 nL of compound was transferred from the compound source plate to the 384-well cell culture plate(s) using a liquid handler Echo550. After the indicated incubation time, the plate was removed from the incubator for detection.

아넥신 V 검정을 위해, 플레이트를 인큐베이터에서 꺼내고, 배양 배지를 제거하였다. 세포를 40 uL의 PBS 및 15 uL의 예비-혼합 아넥신 V-FITC로 2회 세척하고, Hoechst 33342 염료 워킹 용액을 웰 마다 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 20 분 동안 인큐베이션하고, 밀봉하고, 1,000 rpm에서 1 분 동안 원심분리하여 버블을 제거하였다. 플레이트를 ImageXpress Nano를 사용하여 판독하였다.For the Annexin V assay, the plate was removed from the incubator and the culture medium was removed. Cells were washed twice with 40 uL of PBS and 15 uL of pre-mixed Annexin V-FITC, and Hoechst 33342 dye working solution was added per well. Plates were incubated at room temperature for 20 min, sealed, and centrifuged at 1,000 rpm for 1 min to remove bubbles. Plates were read using an ImageXpress Nano.

카스파제-Glo 검정을 위해, 플레이트를 인큐베이터로부터 꺼내고, 실온에서 15 분 동안 평형시켰다. 카스파제-Glo 3/7 시약을 또한 실험 전에 해동하고 실온에서 평형시켰다. 카스파제-Glo 시약을 배양 배지에 1:1 비율로 필요한 웰에 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 15 분 동안 인큐베이션하고, EnSpire™ 플레이트 리더를 사용하여 판독하였다. 배수 유도를 다음 식에 따라 계산하였다: 배수 유도 = Lum샘플 / LumNC.For the Caspase-Glo assay, the plates were removed from the incubator and allowed to equilibrate for 15 minutes at room temperature. Caspase-Glo 3/7 reagent was also thawed and equilibrated at room temperature prior to experimentation. Caspase-Glo reagent was added to the required wells in a 1:1 ratio to the culture medium. Plates were incubated at room temperature for 15 minutes and read using an EnSpire™ plate reader. The fold induction was calculated according to the following equation: fold induction = Lum sample / Lum NC .

아넥신 V 검정 및 카스파제 3/7 검정 결과Annexin V Assay and Caspase 3/7 Assay Results

인디루빈 및 이의 화학적 유사체를 포함하여 본 발명의 화합물 및 조성물은 세포 사멸을 유도할 것으로 예상된다. 인디루빈의 화학적 유사체는, 예를 들어, 인디루빈에 비해 더 강력한 아폽토시스-유도 활성을 나타낼 것으로 예상된다. 마찬가지로, 인디루빈의 특정 화학적 유사체는, 예를 들어, 인디루빈에 비해 덜 효과적인 아폽토시스-유도 활성을 보일 것으로 예상된다. 그러한 화합물은 더 강력한 화합물에 비해 더 유리한 독성 프로파일을 가질 수 있다. Compounds and compositions of the invention, including indirubin and chemical analogs thereof, are expected to induce cell death. Chemical analogs of indirubin are expected to exhibit a more potent apoptosis-inducing activity compared to, for example, indirubin. Likewise, certain chemical analogs of indirubin are expected to exhibit less effective apoptosis-inducing activity than, for example, indirubin. Such compounds may have a more favorable toxicity profile compared to more potent compounds.

실시예 23Example 23

인디루빈 및 인디루빈 유도체에 대한 노출 후 세포 생존력Cell viability after exposure to indirubin and indirubin derivatives

시약reagent

CellTiter-Glo® 2.0 검정.CellTiter-Glo® 2.0 Assay.

실험 방법Experimental method

CellTiter-Glo 검정을 위해, 시험 화합물을 10 mM DMSO 용액에서 제조하였다. 화합물을 12 개 농도로 연속 희석하였다. 100,000 개 세포/mL 현탁액으로부터의 40 uL의 세포를 384-웰 플레이트 (Corning 3570)의 각 웰에 분배하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2, 및 95% 습도에서 밤새 인큐베이션하였다. 비히클 대조군으로서 DMSO와 함께 시험 화합물을 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2, 및 95% 습도에서 6, 24, 또는 48 시간 동안 인큐베이션하고, 40 uL의 CellTiter-Glo 시약을 웰에 첨가하여 세포 생존력을 평가하였다.For CellTiter-Glo assay, test compounds were prepared in 10 mM DMSO solution. Compounds were serially diluted to 12 concentrations. 40 uL of cells from the 100,000 cells/mL suspension were dispensed into each well of a 384-well plate (Corning 3570). Plates were incubated overnight at 37° C., 5% CO 2 , and 95% humidity. Test compound was added along with DMSO as vehicle control. Plates were incubated for 6, 24, or 48 hours at 37° C., 5% CO 2 , and 95% humidity, and cell viability was assessed by adding 40 uL of CellTiter-Glo reagent to the wells.

결과result

인디루빈 및 이의 화학적 유사체를 포함하여 본 발명의 화합물 및 조성물은 세포 사멸을 유도할 것으로 예상된다. 인디루빈의 화학적 유사체는, 예를 들어, 인디루빈에 비해 더 강력한 아폽토시스-유도 활성을 나타낼 것으로 예상된다. 마찬가지로, 인디루빈의 특정 화학적 유사체는, 예를 들어, 인디루빈에 비해 덜 효과적인 아폽토시스-유도 활성을 보일 것으로 예상된다. 그러한 화합물은 더 강력한 화합물에 비해 더 유리한 독성 프로파일을 가질 수 있다. Compounds and compositions of the invention, including indirubin and chemical analogs thereof, are expected to induce cell death. Chemical analogs of indirubin are expected to exhibit a more potent apoptosis-inducing activity compared to, for example, indirubin. Likewise, certain chemical analogs of indirubin are expected to exhibit less effective apoptosis-inducing activity than, for example, indirubin. Such compounds may have a more favorable toxicity profile compared to more potent compounds.

실시예 24Example 24

인디루빈 및 인디루빈 유도체의 아릴탄화수소 수용체 활성화 잠재력Arylhydrocarbon Receptor Activation Potential of Indirubin and Indirubin Derivatives

검정 절차Assay procedure

고 포도당 및 L-글루타민, 뿐만 아니라 10% FBS와 함께 DMEM을 보충함으로써 안정적으로 형질감염된 HepG2 세포에 대한 배양 배지를 제조하였다.Culture medium for stably transfected HepG2 cells was prepared by supplementing DMEM with high glucose and L-glutamine, as well as 10% FBS.

HepG2-AhR-Luc 세포를 37℃, 5% CO2, 및 95% 상대 습도에서 T-75 플라스크에서 배양하였다. 세포가 탈착 및 분할 전에 80% 내지 90% 포화상태에 도달하게 하였다.HepG2-AhR-Luc cells were cultured in T-75 flasks at 37° C., 5% CO 2 , and 95% relative humidity. Cells were allowed to reach 80% to 90% confluency before detachment and division.

배양된 세포를 5 mL의 PBS에 의해 세정하였다. PBS를 흡기시키고, 1.5 mL의 트립신을 플라스크에 첨가하고, 세포를 대략 5분 동안 또는 세포가 탈착되고 부유할 때까지 37℃에서 인큐베이션하였다. 초과의 혈청-함유 배지를 첨가함으로써 트립신을 불활성화하였다.The cultured cells were washed with 5 mL of PBS. PBS was aspirated, 1.5 mL of trypsin was added to the flask, and cells were incubated at 37° C. for approximately 5 minutes or until cells detached and floated. Trypsin was inactivated by adding excess serum-containing medium.

세포 현탁액을 원뿔 관으로 옮기고, 120 g에서 10 분 동안 원심분리하여 세포를 펠렛화하였다. 세포를 적절한 밀도에서 시딩 배지 중에 재현탁시켰다. 40 μL의 세포를 384-웰 배양 플레이트(5 × 103 개 세포/웰)로 옮겼다. 플레이트를 인큐베이터에서 37℃에서 24 시간 동안 배치하였다.The cell suspension was transferred to a conical tube and centrifuged at 120 g for 10 min to pellet the cells. Cells were resuspended in seeding medium at the appropriate density. 40 μL of cells were transferred to a 384-well culture plate (5 × 10 3 cells/well). Plates were placed in an incubator at 37° C. for 24 hours.

이후, 시험 화합물의 스톡 용액 및 오메프라졸 양성 대조군을 제조하였다. Echo550을 이용하여 화합물 용액을 검정 플레이트로 옮겼다. 이후, 플레이트를 화합물 처리를 위해 인큐베이터에 다시 배치하였다.Then, a stock solution of the test compound and an omeprazole positive control were prepared. Compound solutions were transferred to assay plates using an Echo550. The plate was then placed back into the incubator for compound treatment.

나중에, 24 시간 처리 후, 플레이트를 인큐베이터로부터 꺼내고, 주위 온도로 냉각되게 하였다. 배양 배지의 것과 동등한 30 μL의 One-Glo 시약을 각각의 웰에서 첨가하였다. 세포를 적어도 3분 동안 용해되게 하고, 이후 루미노미터에서 측정하였다.Later, after 24 hours of treatment, the plates were removed from the incubator and allowed to cool to ambient temperature. 30 μL of One-Glo reagent equivalent to that of the culture medium was added to each well. Cells were allowed to lyse for at least 3 minutes and then measured in a luminometer.

XLfit에서 비선형 회귀 분석을 이용하여 용량 반응을 그래프화하고, EC50 값을 또한 계산하였다. The dose response was graphed using nonlinear regression analysis in XLfit and EC 50 values were also calculated.

결과result

인디루빈 및 이의 화학적 유사체를 포함하여 본 발명의 화합물 및 조성물은 AhR 활성을 조절할 것으로 예상된다. 인디루빈의 화학적 유사체는, 예를 들어, 인디루빈에 비해 더 강력한 AhR 효능제 활성을 나타낼 것으로 예상된다. 마찬가지로, 인디루빈의 특정 화학적 유사체는, 예를 들어, 인디루빈에 비해 덜 효과적인 AhR 효능제 활성을 보일 것으로 예상된다.Compounds and compositions of the present invention, including indirubin and chemical analogs thereof, are expected to modulate AhR activity. Chemical analogs of indirubin are expected to exhibit stronger AhR agonist activity compared to, for example, indirubin. Likewise, certain chemical analogs of indirubin are expected to exhibit less effective AhR agonist activity compared to, for example, indirubin.

실시예 25Example 25

MelanoDerm™ 검정MelanoDerm™ Black

이 연구의 목적은 반복 시험 물품 노출 후 MelanoDerm™ 피부 모델에서 피부 멜라닌생성 조정제로서 잠재적인 작용을 평가하는 것이었다. 두 번째로, 이 연구의 목적은 반복 노출 후 MelanoDerm™ 피부 모델에 대한 시험 물품의 잠재적인 진피 자극을 평가하는 것이었다. 음성/용매 대조군-처리 조직과 비교하여 시험 물품-처리 조직에서 MTT (3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드)의 상대 전환율을 측정함으로써 독성을 결정하였다. 음성/용매 대조군-처리 조직과 비교하여 시험 물품-처리 조직에서 생성된 멜라닌의 농도를 측정함으로써 멜라닌 생성에 대한 잠재적인 영향을 결정하였다. The purpose of this study was to evaluate its potential action as a skin melanogenesis modulator in the MelanoDerm™ skin model after repeated test article exposure. Second, the purpose of this study was to evaluate the potential dermal irritation of the test article on the MelanoDerm™ skin model after repeated exposure. By determining the relative conversion of MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) in test article-treated tissues compared to negative/solvent control-treated tissues Toxicity was determined. The potential effect on melanogenesis was determined by measuring the concentration of melanin produced in test article-treated tissues compared to negative/solvent control-treated tissues.

시험 물질 및 검정 대조군의 확인Identification of test substances and assay controls

표 3Table 3

희석된 형태로 시험된 시험 물품Test article tested in diluted form

Figure pct00226
Figure pct00226

Figure pct00227
Figure pct00227

표 4Table 4

조합으로 시험된 시험 물품Test articles tested in combination

Figure pct00228
Figure pct00228

Figure pct00229
Figure pct00229

검정 대조군은 다음을 포함하였다: 양성 대조군 - 1% 코직산; 음성 대조군 - 무균 탈이온수; 및 용매 대조군 - EPI-100-LLMM에서 제조된 DMSO (디메틸 설폭사이드).Assay controls included: positive control - 1% kojic acid; negative control - sterile deionized water; and solvent control - DMSO (dimethyl sulfoxide) prepared in EPI-100-LLMM.

본 연구의 경우, 음성 대조군은 사용하지 않았다. 대신, 용매 대조군 (17AA70)을 사용하여 각각 양성 대조군- 및 시험 물품-처리 조직에 관한 데이터를 보정하였다.For this study, a negative control group was not used. Instead, a solvent control (17AA70) was used to correct data for positive control- and test article-treated tissues, respectively.

추가로, 시험 물품 및 대조군을 4 개 조직의 그룹에 적용하였는데, 조직 중 각각 2 개는 조직 생존력 (MTT) 종점에 사용하고, 2 개는 멜라닌 종점에 사용하였다.Additionally, test articles and controls were applied to groups of 4 tissues, each of which was used for the tissue viability (MTT) endpoint and 2 for the melanin endpoint.

시험 시스템test system

이 연구에서 MatTek Corporation(메사추세츠주 애슐랜드)에 의해 제공된 MelanoDerm™ 피부 모델을 이용하였다. MelanoDerm™ 조직은 정상, 인간-유래 상피 케라틴세포(NHEK) 및 멜라닌세포(NHM)를 포함하였고, 이는 인간 표피의 다층의 고도로 분화된 모델을 형성하도록 배양된 것이었다. 동시배양물 내의 NHM은 자발적인 멜라닌형성을 겪어서 다양한 수준의 색소침착의 조직을 발생시켰다. 배양물을 공기-액체 계면에서 세포 배양 인서트에서 성장시켜, 피부 조정제의 국소 적용을 허용하였다. MelanoDerm™ 모델은 생체내 유사 형태학적 및 초구조학적 특징을 나타낸다. MelanoDerm™ 조직의 기저 세포층에 국재화된 NHM은 수지상이고, 멜라닌 과립을 자발적으로 생산하고, 이는 조직의 층을 점진적으로 증식시켰다. 따라서, 음성 대조군에 대비해 멜라닌의 생산을 저해하거나 자극할 수 있는 재료에 대해 스크리닝하기 위해 시험 시스템이 사용된다.The MelanoDerm™ skin model provided by MatTek Corporation (Asheland, MA) was used in this study. MelanoDerm™ tissue contained normal, human-derived epithelial keratinocytes (NHEK) and melanocytes (NHM), which were cultured to form a multilayered, highly differentiated model of the human epidermis. NHMs in co-culture underwent spontaneous melanogenesis, resulting in tissues with varying levels of pigmentation. Cultures were grown on cell culture inserts at the air-liquid interface to allow topical application of skin conditioning agents. The MelanoDerm™ model exhibits similar morphological and ultrastructural features in vivo. NHMs localized in the basal cell layer of MelanoDerm™ tissue are dendritic and spontaneously produce granules of melanin, which progressively proliferate the layer of tissue. Therefore, the test system is used to screen for materials that can inhibit or stimulate the production of melanin compared to negative controls.

실험 설계 및 방법론Experimental design and methodology

이 연구의 실험 설계는 반복 노출 후 MelanoDerm™ 피부 모델에 대한 피부 멜라닌생성 조정제로서 시험 물품의 상대 조직 생존력 및 잠재적인 작용을 알아보기 위해 순 시험 물품, 가능한 경우 (및/또는 적절한 바대로 투약 용액)의 pH의 결정 및 한정적 검정을 포함하였다. 시험 물품을 총 7일 동안 MelanoDerm™ 피부 모델에 노출시켰다. 시험 물품을 (이전의 치료로부터 48+2시간의 기간 내에) 48시간마다 MelanoDerm™ 피부 모델에 국소로 적용하였다. 시험 물품의 독성을 대조군 및 시험 물품-처리 조직에서 MTT의 NAD(P)H-의존적 마이크로솜 효소 감소에 의해(및, 더 적은 정도로, MTT의 숙시네이트 탈수소효소 감소에 의해) 결정하였다. 데이터를 상대 생존율(음성/용매 대조군에 대비된 MTT 전환율)의 형태로 제시하였다. 음성/용매 대조군-처리 조직과 비교하여 시험 물품-처리 조직에서 생성된 멜라닌의 농도를 측정함으로써 멜라닌 생산에 대한 잠재적인 영향을 평가하였다. 데이터를 멜라닌 표준 곡선을 이용하여 결정된 시험 물품-처리 조직에 의해 생산된 멜라닌의 농도 형태로 제시하였다. 대안적으로, 데이터는 음성/용매 대조군-처리 조직에 대비한 멜라닌 농도의 변화 퍼센트로서 제시될 수 있다.The experimental design of this study was to determine the relative tissue viability and potential action of the test article as a modulator of skin melanogenesis on the MelanoDerm™ skin model after repeated exposure, with a net test article, if possible (and/or dosing solution as appropriate). Determination of the pH and limiting assays were included. The test article was exposed to the MelanoDerm™ skin model for a total of 7 days. The test article was topically applied to the MelanoDerm™ skin model every 48 hours (within a period of 48+2 hours from previous treatment). The toxicity of the test article was determined by the NAD(P)H-dependent microsomal enzyme reduction of MTT (and, to a lesser extent, the succinate dehydrogenase reduction of MTT) in control and test article-treated tissues. Data are presented in the form of relative viability (MTT conversion versus negative/solvent control). The potential effect on melanin production was assessed by measuring the concentration of melanin produced in the test article-treated tissues compared to the negative/solvent control-treated tissues. Data are presented in the form of concentrations of melanin produced by the test article-treated tissue as determined using a melanin standard curve. Alternatively, data can be presented as percent change in melanin concentration relative to negative/solvent control-treated tissue.

이용된 방법은 MatTek Corporation에 의해 제공된 절차의 변형이다.The method used is a modification of the procedure provided by MatTek Corporation.

배지 및 시약Media and reagents

MelanoDerm™ 유지 배지 (EPI-100-LLMM)는 MatTek Corporation으로부터 구매하였다. MelanoDerm™ 피부 모델 (MEL-300-A)은 MatTek Corporation으로부터 구매하였다. 1% 코직산 (무균 탈이온수에서 제조됨)은 Sigma로부터 구매하였다. MTT (3-[4,5 - 디메틸티아졸-2-일] - 2,5 - 디페닐테트라졸륨 브로마이드)는 Sigma로부터 구매하였다. 2 mM L-글루타민 (MTT 첨가 배지)을 함유하는 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM)는 Quality Biological로부터 구매하였다. 추출 용매 (이소프로판올)는 Aldrich로부터 구매하였다. 무균 Ca++ 및 Mg++ 유리 둘베코 인산염 완충 식염수(CMF-DPBS)는 Invitrogen으로부터 구매하였다. 멜라닌은 Sigma로부터 구매하였다. 무균 탈이온수는 Quality Biological로부터 구매하였다. 가용성 물질은 Perkin Elmer로부터 구매하였다.MelanoDerm™ maintenance medium (EPI-100-LLMM) was purchased from MatTek Corporation. MelanoDerm™ skin model (MEL-300-A) was purchased from MatTek Corporation. 1% kojic acid (prepared in sterile deionized water) was purchased from Sigma. MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) was purchased from Sigma. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) containing 2 mM L-glutamine (MTT supplemented medium) was purchased from Quality Biological. The extraction solvent (isopropanol) was purchased from Aldrich. Sterile Ca++ and Mg++ free Dulbecco's phosphate buffered saline (CMF-DPBS) was purchased from Invitrogen. Melanin was purchased from Sigma. Sterile deionized water was purchased from Quality Biological. Soluble material was purchased from Perkin Elmer.

시험 물품의 제조 및 전달Manufacture and Delivery of Test Articles

달리 이러한 프로토콜 내에 명시되어 있지 않는 한, 25 마이크로리터의 각 시험 물품을 조직에 바로 적용하여 상표면을 덮었다. 시험 물품(액체, 겔, 크림, 폼 등)의 성질에 따라, 조직의 표면 위로 시험 물품의 균일한 확산을 허용하는 투약 장치, 메쉬 또는 다른 보조품의 사용이 필요할 수 있다. Unless otherwise specified in these protocols, 25 microliters of each test article was applied directly to the tissue to cover the label. Depending on the nature of the test article (liquid, gel, cream, foam, etc.), it may be necessary to use a dispensing device, mesh, or other aid that allows for uniform diffusion of the test article over the surface of the tissue.

투여 경로route of administration

시험 물품을 7일 시험 동안 48 시간 마다 (이전 처리로부터 48+2 시간의 기간 내에) MelanoDerm™ 조직에 국소로 적용하였다. 25 마이크로리터의 각 시험 물품을 각 조직에 적용하였다. 각각 25 마이크로리터의 양성 및 음성/용매 대조군을 각 조직에 적용하였다.The test article was topically applied to MelanoDerm™ tissue every 48 hours (within a period of 48+2 hours from the previous treatment) for the 7 day trial. 25 microliters of each test article was applied to each tissue. 25 microliters each of positive and negative/solvent controls were applied to each tissue.

pH 결정pH determination

순수한 액체 시험 물품 (및/또는 적절한 경우 투약 용액)의 pH를, 가능한 경우, 결정하였다. pH를 (예를 들어, 더 정확한 값을 예측하기 위한 0 내지 14의 pH 범위 및/또는 이를 결정하기 위한 5 내지 10의 pH 범위로) pH 종이를 이용하여 결정하였다. 더 좁은 범위 pH 종이에서의 통상적인 pH 증분은 대략 0.3 내지 0.5 pH 단위였다. pH 종이에서의 최대 증분은 1.0 pH 단위였다.The pH of the pure liquid test article (and/or dosing solution, where appropriate) was determined, if possible. The pH was determined using pH paper (eg, with a pH range of 0-14 to predict a more accurate value and/or a pH range of 5-10 to determine this). Typical pH increments in narrower range pH papers were approximately 0.3 to 0.5 pH units. The maximum increment on the pH paper was 1.0 pH units.

대조군control

한정적 검정은 음성 대조군, 양성 대조군 및 하나의 용매 대조군 (DMSO)을 포함하였다. 검정 음성 대조군에 지정된 MelanoDerm™ 조직을 25 μL의 무균 탈이온수로 처리하였다. 25마이크로리터의 1% 코직산 (무균 탈이온수에서 제조하고, 제조 시점에 여과함)을 사용하여 검정 양성 대조군에 지정된 조직을 투여하였다. 1% 코직산을 제조의 2시간 내에 사용될 때까지 알루미늄 호일에 의해 피복된 관에서 저장하였다. 음성/용매 및 양성 대조군 노출 시간은 시험 물품에 사용된 것과 동일했다. 비처리 조직을 또한 대조군으로서 사용하였다.The definitive assay included a negative control, a positive control and one solvent control (DMSO). MelanoDerm™ tissues designated as assay negative controls were treated with 25 μL of sterile deionized water. Tissues designated as assay positive controls were dosed using 25 microliters of 1% kojic acid (prepared in sterile deionized water and filtered at the time of preparation). 1% kojic acid was stored in tubes covered with aluminum foil until used within 2 hours of preparation. Negative/solvent and positive control exposure times were the same as those used for the test article. Untreated tissue was also used as a control.

MTT의 직접 시험 물품 감소의 평가Assessment of MTT's Direct Test Article Reduction

MTT를 직접적으로 감소시키는 각 시험 물품의 능력을 평가하는 것이 필요했다. 1.0 mg/mL의 MTT 용액을 MTT 첨가 배지에서 제조하였다. 대략 25 μL의 시험 물품을 1 mL의 MTT 용액에 첨가하고, 혼합물을 암소에서 37±1℃로 1 내지 3 시간 동안 인큐베이션하였다. 25 μL의 무균 탈이온수인 음성 대조군을 동시에 시험하였다. MTT 용액 색상이 청색/자주색으로 변하는 경우, 시험 물품은 MTT를 감소시키는 것으로 추정되었다. 수불용성 시험 물질은 시험 물품과 배지 사이의 계면에서만 직접적인 감소(어두워짐)를 나타냈을 수 있다.It was necessary to evaluate the ability of each test article to directly reduce MTT. A 1.0 mg/mL MTT solution was prepared in MTT-added medium. Approximately 25 μL of test article was added to 1 mL of MTT solution and the mixture was incubated in the dark at 37±1° C. for 1-3 hours. A negative control, 25 μL of sterile deionized water, was tested simultaneously. If the MTT solution color changed to blue/purple, the test article was assumed to decrease MTT. The water-insoluble test substance may have shown a direct decrease (darkening) only at the interface between the test article and the medium.

MelanoDerm™의 입수Get MelanoDerm™

MelanoDerm™ 피부 키트의 입수 후, 제조업체에 의해 지시된 바와 같이 용액을 저장하였다. MelanoDerm™ 조직을 사용될 때까지 2 내지 8℃에서 저장하였다.After obtaining the MelanoDerm™ skin kit, the solution was stored as directed by the manufacturer. MelanoDerm™ tissue was stored at 2-8° C. until used.

입수 당일 (투여 직전), 적절한 부피의 MelanoDerm™ 유지 배지 (EPI-100-LLMM)를 제거하고, 대략 37±1℃로 가온시켰다. 9/10 (0.9) mL의 EPI-100-LLMM/웰을 6-웰 플레이트의 적절한 웰에 분취하였다. 각 MelanoDerm™ 조직을 밀봉된 패키지를 열기 전에 아가로스 겔과 세포 배양 인서트 사이의 기포에 대해 검사하였다. 세포 배양 인서트 면적의 50%를 넘는 기포가 있는 조직은 사용하지 않았다. 24-웰 운반 용기를 비닐 봉지에서 꺼내고, 표면을 70% 에탄올로 소독하였다. 적절한 수의 MelanoDerm™ 조직을 24-웰 운반 용기로부터 6-웰 플레이트에 무균으로 옮겼다. MelanoDerm™ 조직을 공기 (표준 배양 조건)에서 5±1% CO2의 습윤 분위기에서 37±1℃에서 밤새 (적어도 16 시간) 인큐베이션하여 조직을 순응시켰다. 백을 개봉한 후, 조직 이동 시점에 운반 한천에 남아 있는 임의의 미사용 조직을 5% CO2/95% 공기의 대기로 잠시 가스를 채우고, 백을 밀봉하고, 후속 사용을 위해 2 내지 8℃에서 저장하였다.On the day of acquisition (immediately prior to dosing), an appropriate volume of MelanoDerm™ maintenance medium (EPI-100-LLMM) was removed and warmed to approximately 37±1°C. 9/10 (0.9) mL of EPI-100-LLMM/well was aliquoted into the appropriate wells of a 6-well plate. Each MelanoDerm™ tissue was inspected for air bubbles between the agarose gel and the cell culture insert prior to opening the sealed package. Tissues with more than 50% of the cell culture insert area were not used. The 24-well transport container was removed from the plastic bag and the surface was disinfected with 70% ethanol. An appropriate number of MelanoDerm™ tissues were aseptically transferred from a 24-well transfer container to a 6-well plate. MelanoDerm™ tissues were incubated overnight (at least 16 hours) at 37±1° C. in a humidified atmosphere of 5±1% CO 2 in air (standard culture conditions) to allow the tissues to acclimate. After opening the bag, any unused tissue remaining on the transport agar at the time of tissue transfer is briefly gassed with an atmosphere of 5% CO 2 /95% air, the bag is sealed, and at 2-8° C. for subsequent use. Saved.

한정적 검정limited test

조직 노출: 배양을 개시시킨 후 적어도 16시간에, (0일은 비처리로 간주함) 5 개의 MelanoDerm™ 조직을 검정의 0시간에 조직의 색소침착의 정도의 시각 평가를 돕도록 디지털 카메라를 사용하여 사진촬영하였다. 2 개의 MelanoDerm™ 조직을 CMF-DPBS로 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. MelanoDerm™ 조직을 세정 후 적절한 MTT 함유 웰로 옮기고, MTT 검정에서 가공처리하였다. 3 개의 MelanoDerm™ 조직을 CMF-DPBS로 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. MelanoDerm™ 조직을 무균 메스를 사용하여 세포 배양 인서트로부터 꺼내고, 표지된 1.5 mL 마이크로퓨지 튜브에 넣고, 후속 멜라닌 분석을 위해 <-60℃에서 저장하였다.Tissue Exposure: At least 16 h after initiation of culture, (day 0 is considered untreated), 5 MelanoDerm™ tissues were used with a digital camera to aid in visual assessment of the degree of tissue pigmentation at h 0 of assay. photo was taken. Two MelanoDerm™ tissues were washed with CMF-DPBS, bottled dry on sterile sorbent paper, and excess liquid was removed. MelanoDerm™ tissue was transferred to appropriate MTT containing wells after washing and processed in the MTT assay. Three MelanoDerm™ tissues were washed with CMF-DPBS, bottled dry on sterile sorbent paper, and excess liquid was removed. MelanoDerm™ tissues were removed from cell culture inserts using a sterile scalpel, placed in labeled 1.5 mL microfuge tubes, and stored at <-60° C. for subsequent melanin analysis.

배양을 개시시킨 후 적어도 16시간에, 나머지 조직을 0.9 mL/웰의 새로운 예비가온된 EPI-100-LLMM을 함유하는 새로운 6-웰 플레이트로 옮겼다. 시험을 7일 기간에 걸쳐 실시하였다. 5 개의 조직을 25 μL의 각 시험 물품에 의해 첫 날에 및 48시간마다(이전의 치료로부터 48+2시간의 기간 내에) 국소로 처리하였다. 배지를 (이전의 재공급으로부터 24+2시간의 기간 내에) 매일 다시 공급하고; 조직을 0.9 mL/웰의 새로운 예비가온된 EPI-100-LLMM을 함유하는 새로운 6-웰 플레이트로 옮겼다.At least 16 hours after initiation of culture, the remaining tissue was transferred to a new 6-well plate containing 0.9 mL/well of fresh prewarmed EPI-100-LLMM. The test was conducted over a 7 day period. Five tissues were treated topically on the first day and every 48 hours (within a period of 48+2 hours from previous treatment) with 25 μL of each test article. Medium is replenished daily (within a period of 24+2 hours from the previous resupply); Tissues were transferred to new 6-well plates containing 0.9 mL/well of fresh prewarmed EPI-100-LLMM.

5 개의 조직을 각각 25 μL의 양성 및 음성/용매 대조군에 의해 첫 날에 및 48시간마다(이전의 치료로부터 48+2시간의 기간 내에) 국소로 처리하였다. 배지를 (이전의 재공급으로부터 24+2시간의 기간 내에) 매일 다시 공급하고; 조직을 0.9 mL/웰의 새로운 예비가온된 EPI-100-LLMM을 함유하는 새로운 6-웰 플레이트로 옮겼다. 조직을 적절한 노출 시간 동안 공기 중 5±1% CO2의 습윤 분위기에서 37±1℃로 (표준 배양 조건) 인큐베이션하였다.Five tissues were treated topically on the first day and every 48 hours (within a period of 48+2 hours from previous treatment) with 25 μL each of positive and negative/solvent controls. Medium is replenished daily (within a period of 24+2 hours from the previous resupply); Tissues were transferred to new 6-well plates containing 0.9 mL/well of fresh prewarmed EPI-100-LLMM. Tissues were incubated at 37±1° C. (standard culture conditions) in a humidified atmosphere of 5±1% CO 2 in air for appropriate exposure times.

투여 일에, MelanoDerm™ 조직을 먼저 임의의 잔류 시험 물품을 제거하도록 세정당 ~ 500 μL의 CMF-DPBS를 사용하여 3회 조심스럽게 세정하였다. CMF-DPBS를 웰에 조심스럽게 피펫팅한 후, 무균 아스피레이터로 드로잉하였다. 조직을 0.9 mL의 새로운 예비가온된 EPI-100-LLMM을 함유하는 새로운 6-웰 플레이트로 옮기고, 적절한 시험 물품, 음성/용매 또는 양성 대조군을 투여하였다. 조직을 적절한 노출 시간 동안 공기 중 5±1% CO2의 습윤 분위기에서 37±1℃로 (표준 배양 조건) 인큐베이션하였다.On the day of dosing, MelanoDerm™ tissue was first carefully washed three times using ~500 μL of CMF-DPBS per wash to remove any residual test article. CMF-DPBS was carefully pipetted into the wells and then drawn with a sterile aspirator. Tissues were transferred to a new 6-well plate containing 0.9 mL of fresh prewarmed EPI-100-LLMM and the appropriate test article, negative/solvent or positive control was administered. Tissues were incubated at 37±1° C. (standard culture conditions) in a humidified atmosphere of 5±1% CO 2 in air for appropriate exposure times.

7일 시험의 종료 시, 음성/용매 대조군 또는 양성 대조군, 및 각각의 시험 물품으로 처리된 MelanoDerm™ 조직을 검정의 종료(7일) 시 조직의 색소침착의 정도의 시각 평가를 돕도록 디지털 카메라를 사용하여 사진촬영하였다. 이후, 각각 양성 및 음성 대조군, 및 각 시험 물품으로 처리된 두 개의 조직의 생존력을 MTT 감소에 의해 결정하였다. 7일 시험의 종료 시, 각 시험 물품, 양성 및 음성/용매 대조군 각각으로 처리된 세 개의 조직에 의해 생성된 멜라닌을 결정하였다.At the end of the 7-day trial, the negative/solvent control or positive control, and MelanoDerm™ tissues treated with each test article were captured with a digital camera to aid in a visual assessment of the degree of tissue pigmentation at the end of the assay (day 7). was used to take pictures. Then, the viability of two tissues treated with positive and negative controls, respectively, and each test article was determined by MTT reduction. At the end of the 7-day trial, the melanin produced by the three tissues treated with each test article, each of the positive and negative/solvent controls, was determined.

MTT 검정: (배치 제조 시 여과된) PBS 중에 제조된 MTT의 10X 스톡을 해동하고, 따뜻한 MTT 첨가 배지에서 희석하여 사용 전에 2시간 이하에 1.0 mg/mL 용액을 생성시켰다. 300 μL의 MTT 용액을 예비 표지된 24-웰 플레이트의 각각의 지정된 웰에 첨가하였다.MTT Assay: A 10X stock of MTT prepared in PBS (filtered during batch preparation) was thawed and diluted in warm MTT-added medium to yield a 1.0 mg/mL solution up to 2 hours prior to use. 300 μL of MTT solution was added to each designated well of a pre-labeled 24-well plate.

노출 시간 후, MTT 검정에 지정된 각 MelanoDerm™ 조직을 CMF-DPBS (이 단계에 허용 가능한 분무병 사용)로 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. MelanoDerm™ 조직을 세정 후 적절한 MTT 함유 웰로 옮겼다. 24-웰 플레이트를 3 ± 0.1 시간 동안 표준 조건에서 인큐베이션하였다.After the exposure time, each MelanoDerm™ tissue designated for the MTT assay was rinsed with CMF-DPBS (using a spray bottle acceptable for this step), bottled dry on sterile sorbent paper, and excess liquid was removed. MelanoDerm™ tissue was transferred to appropriate MTT containing wells after washing. 24-well plates were incubated at standard conditions for 3±0.1 hours.

3 ± 0.1 시간 후, MelanoDerm™ 조직을 무균 흡착제 종이에서 병입하고, 과량의 액체를 제거하고, 각각의 지정된 웰에 2.0 mL의 이소프로판올을 함유하는 예비-표지된 24-웰 플레이트로 옮겼다. 플레이트를 파라필름에 의해 커버링하고, 마지막 노출 시간이 수확될 때까지 냉장고(2℃ 내지 8℃)에서 저장하였다. 필요한 경우, 플레이트를, MTT를 추출하기 전에 냉장고에서 밤새(또는 마지막 노출 시간이 수확된 후 24 시간까지) 저장하였다. 그 후에, 플레이트를 실온에서 적어도 2 시간 동안 진탕하였다. 추출 기간의 종료 시, 세포 배양 인서트 내의 액체를 세포 배양 인서트가 취해진 웰로 경사처리하였다. 추출 용액을 혼합하고, 200 μL를 96-웰 플레이트의 적절한 웰로 옮겼다. 200 μL의 아이소프로판올을 블랭크로 지정된 웰에 첨가하였다. 각각의 웰의 550nm에서의 흡광도(OD550)를 Molecular Devices Vmax 플레이트 판독기로 측정하였다.After 3±0.1 hours, MelanoDerm™ tissues were bottled on sterile sorbent paper, excess liquid was removed, and transferred to pre-labeled 24-well plates containing 2.0 mL of isopropanol in each designated well. Plates were covered with parafilm and stored in a refrigerator (2°C to 8°C) until the last exposure time was harvested. If necessary, the plates were stored overnight (or up to 24 hours after the last exposure time was harvested) in the refrigerator prior to MTT extraction. The plate was then shaken at room temperature for at least 2 hours. At the end of the extraction period, the liquid in the cell culture insert was decanted into the well from which the cell culture insert was taken. The extraction solutions were mixed and 200 μL was transferred to the appropriate wells of a 96-well plate. 200 μL of isopropanol was added to the wells designated as blanks. The absorbance (OD550) at 550 nm of each well was measured with a Molecular Devices Vmax plate reader.

멜라닌 검정: 적절한 노출 시간의 종료 시, 멜라닌 검정에 지정된 MelanoDerm™ 조직을 배양 배지로부터 임의의 잔류 시험 물품 또는 과량의 페놀 레드를 제거하도록 세정당 ~ 500 μL의 CMF-DPBS를 사용하여 적어도 3회 조심스럽게 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. 검정의 종료 시 디지털 카메라를 사용하여 MelanoDerm™ 조직을 사진촬영하였다. MelanoDerm™ 조직을 무균 메스 또는 무균 펀치(들)를 사용하여 인서트로부터 꺼내고, 표지된 1.5 mL 마이크로퓨지 튜브에 넣고, 후속 멜라닌 분석을 위해 <-60℃에서 저장하였다.Melanin Assay: At the end of the appropriate exposure time, carefully wash the MelanoDerm™ tissue designated for the melanin assay at least 3 times using ~500 µL of CMF-DPBS per wash to remove any residual test article or excess phenol red from the culture medium. Rinse thoroughly, dry bottling on sterile sorbent paper, and remove excess liquid. At the end of the assay, a digital camera was used to photograph the MelanoDerm™ tissue. MelanoDerm™ tissue was removed from the insert using a sterile scalpel or sterile punch(es), placed in a labeled 1.5 mL microfuge tube, and stored at <-60° C. for subsequent melanin analysis.

멜라닌 추출 검정 당일, 적출된 조직을 실온에서 대략 10 분 동안 해동시켰다. 250 μL의 가용성 물질을 각 마이크로퓨지 튜브에 첨가하고, 튜브를 60+2℃에서 적어도 16 시간 동안 인큐베이션하였다. 멜라닌을 가용성 물질에 용해시킴으로써 1 mg/mL의 멜라닌 표준 스톡 용액을 제조하였다. 일련의 멜라닌 표준물을 0 mg/mL 내지 0.33 mg/mL 범위의 1 mg/mL의 스톡으로부터 제조하였다. 1.2 mL의 가용성 물질에 1 mg/mL 멜라닌 표준 스톡 용액을 0.6 mL 첨가한 후, 일련의 5 개 넘는 희석액을 생성시킴으로써(3의 희석 배율) 표준물 시리즈를 제조하였다. 가용성 물질을 제로 표준물로서 사용하였다. 멜라닌 표준물 시리즈 및 가용성 물질을 60+2℃에서 적어도 16 시간 동안 인큐베이션하였다.On the day of the melanin extraction assay, the excised tissues were thawed at room temperature for approximately 10 minutes. 250 μL of soluble material was added to each microfuge tube, and the tube was incubated at 60+2° C. for at least 16 hours. A 1 mg/mL melanin standard stock solution was prepared by dissolving melanin in the soluble material. A series of melanin standards were prepared from stocks of 1 mg/mL ranging from 0 mg/mL to 0.33 mg/mL. A series of standards was prepared by adding 0.6 mL of a 1 mg/mL melanin standard stock solution to 1.2 mL of soluble material, followed by a series of more than 5 dilutions (dilution factor of 3). Soluble material was used as the zero standard. The melanin standard series and soluble material were incubated at 60+2° C. for at least 16 hours.

멜라닌 추출을 개시시킨 후 적어도 16 시간에, 샘플(MelanoDerm™ 조직으로부터 추출된 멜라닌을 나타냄) 및 표준물을 함유하는 튜브를 실온으로 냉각시키고, 실온에서 5 분 동안 13,000 rpm에서 원심분리하였다. 200 μL의 샘플 (단일 웰) 또는 표준물 (이중 웰)을 96-웰 플레이트의 적절한 웰로 옮겼다. 200 μL의 가용성 물질을 이중 웰에서 블랭크로 지정된 웰로 첨가하였다. 각각의 웰의 490nm에서의 흡광도(OD490)를 Molecular Devices Vmax 플레이트 판독기 (선택된 Automix 기능으로)로 측정하였다.At least 16 hours after initiation of melanin extraction, the tubes containing samples (representing melanin extracted from MelanoDerm™ tissue) and standards were cooled to room temperature and centrifuged at 13,000 rpm for 5 minutes at room temperature. 200 μL of samples (single wells) or standards (double wells) were transferred to the appropriate wells of a 96-well plate. 200 μL of soluble material was added from double wells to wells designated as blanks. The absorbance (OD490) at 490 nm of each well was measured with a Molecular Devices Vmax plate reader (with Automix function selected).

MTT의 잔류 시험 물품 감소의 평가를 위한 사멸된 대조군Killed Control for Assessment of Residual Test Article Reduction of MTT

가능한 잔류 시험 물품이 MTT를 직접적으로 감소시키도록 작용하지 않는다는 것을 입증하기 위해, 기능성 확인을 시험 재료가 조직에 결합하고 거짓 MTT 감소 신호를 발생시키지 않는다는 것을 나타내도록 한정적 검정에서 수행하였다.To demonstrate that the possible residual test article does not act to directly reduce MTT, a functional check was performed in a qualifying assay to indicate that the test material binds to tissue and does not generate a false MTT reduction signal.

잔류 시험 물품이 MTT를 감소시키도록 직접적으로 작용하는지를 결정하기 위해, 동결 사멸된 대조군 조직을 사용하였다. 동결 사멸된 조직은 비처리 MelanoDerm™/EpiDerm™(멜라닌세포가 없는 MelanoDerm™) 조직을 적어도 밤새 -20℃ 동결기에 배치하고, 실온으로 해동하고, 이후 재동결시킴으로써 제조하였다. 사멸되면, 조직은 동결기에서 비한정적으로 저장될 수 있다. 동결 사멸된 조직을 MatTek Corporation으로부터 이미 제조된 채 받고, 사용까지 -20℃ 동결기에서 저장할 수 있다. 잔류 시험 물품 감소를 시험하기 위해, 사멸된 조직을 일반 방식으로 시험 물품으로 처리하였다. 모든 검정 절차를 생존 가능 조직에서와 동일한 방식으로 수행하였다. MTT 감소의 작은 양이 사멸된 조직 내에 잔류 NADH 및 연관된 효소로부터 예상되므로, 무균 탈이온수에 의해 치료된 적어도 하나의 사멸된 대조군(음성 사멸된 대조군)을 동시에 시험하였다.To determine whether residual test articles acted directly to reduce MTT, cryo-killed control tissues were used. Freeze-killed tissue was prepared by placing untreated MelanoDerm™/EpiDerm™ (Melanocyte-free MelanoDerm™) tissue in a -20°C freezer at least overnight, thawing to room temperature, and then re-freezing. Once dead, the tissue can be stored in a freezer for indefinitely. Freeze killed tissue can be received pre-prepared from MatTek Corporation and stored in a -20°C freezer until use. To test for residual test article reduction, killed tissue was treated with test article in the usual manner. All assay procedures were performed in the same manner as for viable tissues. At least one killed control (negative killed control) treated with sterile deionized water was tested concurrently, as a small amount of MTT reduction was expected from residual NADH and associated enzymes in the killed tissue.

아주 적은 MTT 감소 또는 비감소가 시험 물품 치료된 사멸된 대조군에서 관찰되는 경우, 시험 물품 치료된 생존 가능 조직에서 관찰된 MTT 감소는 생존 가능 세포 때문일 수 있다. (치료된 생존 가능 조직에서의 양에 대비해) 치료된 사멸된 대조군에서 상당한 MTT 감소가 있는 경우, 추가 단계가 화학물질 감소를 설명하도록 취해져야 하거나, 시험 물품은 이 시스템에서 치료 불가능으로 생각될 수 있다. If a very small decrease or no decrease in MTT is observed in the test article treated killed control group, the observed decrease in MTT in the test article treated viable tissue may be due to viable cells. If there is a significant reduction in MTT in the treated killed control group (relative to the amount in the treated viable tissue), additional steps must be taken to account for the chemical reduction, or the test article may be considered incurable in this system. have.

데이터 분석data analysis

블랭크 웰의 평균 OD550 값을 계산하였다. 음성/용매 대조군(들)의 보정된 평균 OD550 값으로부터 블랭크 웰의 평균 OD550 값을 공제함으로써 음성/용매 대조군(들)의 평균 보정된 OD550 값을 결정하였다. 개별 시험 물품 노출 및 양성 대조군 노출의 보정된 OD550 값을 블랭크 웰에 대한 각각의 평균 OD550 값으로부터 공제함으로써 결정하였다. Excel 스프레드시트를 이용하여 모든 계산을 수행하였다. 논의된 알고리즘이 치료 그룹 수준에서 최종 종점 분석을 계산하도록 수행되더라고, 개별 반복실행에 동일한 계산이 적용될 수 있다.The mean OD550 values of blank wells were calculated. The mean corrected OD550 values of the negative/solvent control(s) were determined by subtracting the mean OD550 values of the blank wells from the corrected mean OD550 values of the negative/solvent control(s). The corrected OD550 values of individual test article exposures and positive control exposures were determined by subtracting the respective mean OD550 values for the blank wells. All calculations were performed using an Excel spreadsheet. Although the algorithm discussed is performed to calculate the final endpoint analysis at the treatment group level, the same calculations can be applied to individual iterations.

보정된 시험 물품 노출 OD550 = 시험 물품 노출 OD550 - 블랭크 평균 OD550 Calibrated Test Article Exposure OD 550 = Test Article Exposure OD 550 - Blank Average OD 550

사멸된 대조군(KC)이 사용되는 경우, 시험 물품 잔류물에 의해 직접적으로 감소한 MTT의 양을 보정하기 위해 하기 추가 계산을 수행하였다. 음성 대조군 사멸된 대조군에 대한 원 OD550 값을 시험 물품 치료된 사멸된 대조군의 순 OD550 값을 결정하도록 각각의 시험 물품 치료된 사멸된 대조군에 대한 원 OD550 값으로부터 공제하였다.When a killed control (KC) was used, the following additional calculations were performed to correct for the amount of MTT directly reduced by the test article residue. The raw OD550 value for the negative control killed control was subtracted from the original OD550 value for each test article treated killed control to determine the net OD550 value of the test article treated killed control.

각각의 시험 물품 KC에 대한 순 OD550 = 원 OD550 시험 물품 KC - 원 OD550 음성/용매 대조군 KC Net OD 550 for each test article KC = original OD 550 test article KC - original OD 550 negative/solvent control KC

순 OD550 값은 특정한 노출 시간에 시험 물품 잔류물에 의한 직접적인 감소로 인해 감소한 MTT의 양을 나타낸다. 일반적으로, 순 OD550 값이 0.150 초과인 경우, MTT 감소의 순 양은 생존 가능 치료된 조직의 보정된 OD550 값으로부터 공제되어 최종 보정된 OD550 값이 얻어질 것이다. 이후, 이 최종 보정된 OD550 값은 대조군 생존력의 %를 결정하도록 이용될 것이다.The net OD550 value represents the reduced amount of MTT due to a direct reduction by the test article residue at a particular exposure time. In general, if the net OD550 value is greater than 0.150, the net amount of MTT reduction will be subtracted from the corrected OD550 value of viable treated tissue to obtain a final corrected OD550 value. This final corrected OD550 value will then be used to determine the % of control viability.

최종 보정된 OD550 = 보정된 시험 물품 OD550(생존 가능) - 순 OD550 시험 물품(KC)final calibrated OD 550 = calibrated test article OD 550 (viable) - net OD 550 test article (KC)

마지막으로, 대조군 계산의 하기 %가 이루어질 것이다:Finally, the following % of control calculations will be made:

% 생존력 = [(시험 물품 또는 양성 대조군의 최종 보정된 OD550) / (음성/용매 대조군(들)의 보정된 평균 OD550)] × 100% viability = [(final corrected OD 550 of test article or positive control) / (corrected average OD 550 of negative/solvent control(s)] × 100

멜라닌 분석: 흡광도 원 데이터를 캡쳐하고, 프린트 파일로 저장하고, Excel 스프레드시트로 불러오기하였다. 각 시험 샘플 (0일에 비처리 MelanoDerm™ 조직, 7일에 각 시험 물품, 음성/용매 또는 양성 대조군으로 처리된 MelanoDerm™ 조직으로부터 추출된 멜라닌을 나타냄) 및 멜라닌 표준물의 OD490 값을 결정하였다. 시험 샘플 및 각 멜라닌 표준물에 대한 보정된 OD490 값을 블랭크 웰의 평균 OD490 값을 공제함으로써 결정하였다. 표준 곡선을 표준물의 농도 (mg/mL) (y-축) 대 상응하는 보정된 흡광도로 플롯팅하였다. 각 개별 조직에서 멜라닌의 양을 표준 곡선 (선형)으로부터 삽입하였다. 마지막으로, 각 시험 물품 또는 대조 처리 군 각각에 대한 평균 멜라닌 농도를 계산하였다.Melanin Analysis: Absorbance raw data was captured, saved as a print file, and imported into an Excel spreadsheet. OD490 values of each test sample (representing untreated MelanoDerm™ tissue on day 0, melanin extracted from MelanoDerm™ tissue treated with each test article on day 7, negative/solvent or positive control) and melanin standards were determined. The corrected OD490 values for the test samples and each melanin standard were determined by subtracting the mean OD490 values of the blank wells. The standard curve was plotted as the concentration (mg/mL) of the standard (y-axis) versus the corresponding corrected absorbance. The amount of melanin in each individual tissue was interpolated from a standard curve (linear). Finally, the average melanin concentration for each test article or control treatment group was calculated.

결과result

도 128은 시험 물품, 양성 대조군, 및 비처리 조직에 대한 평균 조직 생존력 및 멜라닌 농도 결과를 요약한 것이다. 예비 결과는 본 발명의 카르바졸 화합물에 적용된 특정 제형이 독립적으로 카르바졸의 피부 다크닝 활성을 약화시키는 적당한 피부 브라이트닝 효과를 나타낼 수 있다는 것을 시시한다.Figure 128 summarizes mean tissue viability and melanin concentration results for test article, positive control, and untreated tissue. Preliminary results suggest that certain formulations applied to the carbazole compounds of the present invention may independently exhibit a moderate skin brightening effect that attenuates the skin darkening activity of carbazole.

도 129는 개별 실험에서 관찰된 시험 물품 및 비처리 조직에 대한 평균 조직 생존력 및 멜라닌 농도 결과를 요약한 것이다. 예를 들어, 말라세진 및 인디루빈을 포함한 조합 처리는 그 자체로 어느 화합물보다 더욱 효과적인 피부 브라이트닝 효과를 나타냈다.129 summarizes the average tissue viability and melanin concentration results for test article and untreated tissue observed in individual experiments. For example, a combination treatment with malacetin and indirubin showed a more effective skin brightening effect than either compound on its own.

실시예 26Example 26

인디루빈 및 인디루빈 유도체의 멜라닌생성 잠재력Melanogenesis potential of indirubin and indirubin derivatives

이 연구의 목적은 인디루빈 및 인디루빈 유도체에 노출된 B16 멜라닌세포의 멜라닌생성 및 생존력을 관찰하고 보고하는 것이다.The purpose of this study was to observe and report the melanogenesis and viability of B16 melanocytes exposed to indirubin and indirubin derivatives.

물질 및 시약Substances and reagents

플레이팅 배지에는 L-글루타민, FBS, 페니실린/스트렙토마이신, 및 L-글루타민 없이 DMEM이 포함될 것이다. 검정 배지에는 페놀 레드 및 L-글루타민, FBS, 페니실린/스트렙토마이신, L-글루타민, 및 MSH 없이 DMEM이 포함될 것이다. 다른 시약에는 코직산, DMSO, 및 MTT가 포함될 것이다. 시험된 세포는 B16 세포 (ATCC CRL-6475)일 것이다.The plating medium will include DMEM without L-glutamine, FBS, penicillin/streptomycin, and L-glutamine. Assay medium will include DMEM without phenol red and L-glutamine, FBS, penicillin/streptomycin, L-glutamine, and MSH. Other reagents will include kojic acid, DMSO, and MTT. The cells tested will be B16 cells (ATCC CRL-6475).

프로토콜protocol

B16 멜라닌세포를 70% 포화상태까지 배양하고, 수확하였다. 세포를 4000 개 세포/웰의 밀도로 96-웰 플레이트에 시딩하고, 밤새 부착되게 하였다. 다음 날, 시험 물품 및 대조군을 B16 검정 배지에서 희석하였다. 밤새 배지를 흡기시키고, 200 ul의 시험 물품 및 대조군을 적용하였다. 세포를 37℃ 및 10% CO2에서 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 72 시간 인큐베이션 후, 흡광도를 540 nm에서 판독하였다. 배지를 제거하고, 1 mg/mL의 MTT를 함유하는 100 ul의 플레이팅 배지로 교체하고, 37℃ 및 10% CO2에서 2 시간 동안 인큐베이션하였다. MTT 배지를 제거하고, 200 ul의 95% 에탄올/5% 이소프로판올로 교체하고, 15 분 동안 진탕되게 하였다. 이후, MTT 흡광도를 570 nm에서 판독하였다.B16 melanocytes were cultured to 70% confluency and harvested. Cells were seeded in 96-well plates at a density of 4000 cells/well and allowed to attach overnight. The next day, test articles and controls were diluted in B16 assay medium. The medium was aspirated overnight and 200 ul of test article and control were applied. Cells were incubated at 37° C. and 10% CO 2 for 72 hours. After 72 h incubation, the absorbance was read at 540 nm. The medium was removed and replaced with 100 ul of plating medium containing 1 mg/mL of MTT and incubated at 37° C. and 10% CO 2 for 2 hours. The MTT medium was removed and replaced with 200 ul of 95% ethanol/5% isopropanol and allowed to shake for 15 minutes. The MTT absorbance was then read at 570 nm.

결과result

인디루빈 및 이의 화학적 유사체를 포함하여 본 발명의 화합물 및 조성물은 멜라닌생성을 억제할 것으로 예상된다. 인디루빈의 화학적 유사체는, 예를 들어, 인디루빈에 비해 더 강력한 멜라닌생성-억제 활성을 나타낼 것으로 예상된다. 마찬가지로, 인디루빈의 특정 화학적 유사체는, 예를 들어, 인디루빈에 비해 덜 효과적인 멜라닌생성-억제 활성을 보일 것으로 예상된다.The compounds and compositions of the present invention, including indirubin and its chemical analogs, are expected to inhibit melanogenesis. Chemical analogues of indirubin, for example, are expected to exhibit more potent melanogenesis-inhibiting activity compared to indirubin. Likewise, certain chemical analogs of indirubin are expected to exhibit less effective melanogenesis-inhibiting activity than, for example, indirubin.

실시예 27Example 27

시험관내 효능In vitro efficacy

본 발명의 화합물 및 조성물은, 적어도 인디루빈만큼 강력하게, 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하고, 멜라닌세포 활성, 멜라닌 생산, 멜라노솜 생물발생, 및/또는 멜라노솜 이동을 조절할 것으로 예상된다. 또한, 본 발명의 특정 화합물 및 조성물은 인디루빈보다 덜 강력하게 이러한 생물학적 과정에 영향을 줄 것으로 상정된다. 그러한 화합물 및 조성물은 더 강력한 종에 비해 더 유리한 독성 프로파일을 가질 수 있다.The compounds and compositions of the present invention are expected to induce melanocyte apoptosis and modulate melanocyte activity, melanin production, melanosome biogenesis, and/or melanosome migration, at least as potently as indirubin. It is also contemplated that certain compounds and compositions of the present invention will affect these biological processes less potently than indirubin. Such compounds and compositions may have a more favorable toxicity profile compared to more potent species.

실시예 28Example 28

생체내 효능In vivo efficacy

본 발명의 화합물 및 조성물은 피부를 밝게 하고 다양한 장애에 의해 생긴 과색소침착/저색소침착을 개선하는 것을 포함하여, 피부 색소침착을 조절하는 데 적어도 인디루빈만큼 효과적일 것으로 예상된다. 본 발명의 화합물 및 조성물은, 예를 들어, 반감기 및 흡수의 면에서 양호한 약물역학적 프로필을 나타낼 것으로 추가로 예상된다. 소정의 화합물은 더 긴 반감기를 나타내는 한편, 다른 것은 더 짧은 반감기를 나타낼 것이다. 유사하게, 소정의 화합물은 상이한 흡수 프로필을 나타낼 것이고, 몇몇 화합물은 완전히 흡수되는 데 더 길게 걸리고, 다른 것은 완전히 흡수되는 데 더 적은 시간이 걸린다.The compounds and compositions of the present invention are expected to be at least as effective as indirubin in controlling skin pigmentation, including lightening the skin and improving hyperpigmentation/hypopigmentation caused by various disorders. It is further expected that the compounds and compositions of the present invention will exhibit good pharmacodynamic profiles, for example in terms of half-life and absorption. Certain compounds will exhibit longer half-lives, while others will exhibit shorter half-lives. Similarly, certain compounds will exhibit different absorption profiles, some compounds take longer to be fully absorbed and others take less time to be fully absorbed.

실시예 29Example 29

화합물 명명compound naming

하기 표 5는 본 발명의 화합물에 대한 구조 및 명칭을 나타낸 것이다.Table 5 below shows structures and names for the compounds of the present invention.

표 5Table 5

Figure pct00230
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Figure pct00231
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Figure pct00232
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Figure pct00233
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Figure pct00234
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Figure pct00235
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Figure pct00236
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Figure pct00237
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실시예 30Example 30

말라세지아 - 유래 화합물 및/또는 이의 화학적 유사체를 함유하는 조성물의 아폽토시스-유도 활성Apoptosis-inducing activity of compositions containing Malassezia-derived compounds and/or chemical analogs thereof

시약reagent

Alexa Fluor 488 아넥신 V/사세포 아폽토시스 키트, 소 태아 혈청 (FBS), 0.25% 트립신-EDTA (1x), 카스파제-Glo 3/7 검정, RPMI 1640 배지, 둘베코 변형 이글 배지, 및 항생제 항진균성 용액 (100x). Alexa Fluor 488 Annexin V / Dead Cell Apoptosis Kit, Fetal Bovine Serum (FBS), 0.25% Trypsin-EDTA (1x), Caspase-Glo 3/7 Assay, RPMI 1640 Medium, Dulbecco's Modified Eagle Medium, and Antibiotic Antifungal sex solution (100x).

세포주 MeWo (ATCC® HTB-65™), WM115 (ATCC® CRL-1675) 및 B16F1 (ATCC® CRL-6323)을 다음 배양 배지에서 유지시켰다: MeWo 및 B16F1에 대한 배양 배지: 10% FBS가 보충된 DMEM; WM115에 대한 배양 배지: 10% FBC가 보충된 RPMI 1640.Cell lines MeWo (ATCC® HTB-65™), WM115 (ATCC® CRL-1675) and B16F1 (ATCC® CRL-6323) were maintained in the following culture media: Culture media for MeWo and B16F1: supplemented with 10% FBS DMEM; Culture medium for WM115: RPMI 1640 supplemented with 10% FBC.

실험 방법Experimental method

세포를 수확하고, 세포수를 Countess 세포 계수기를 사용하여 결정하였다. 세포를 배양 배지에 의해 요망되는 밀도로 희석하였다. 최종 세포 밀도는, 예를 들어, 6 시간 및 24 시간 처리 동안 4,000 개 세포/웰, 및 48 시간 및 72 시간 처리 동안 2,000 개 세포/웰일 수 있다. 아넥신 V 검정의 경우에 384-웰 투명-바닥 플레이트 (Corning 3712)를 사용한 반면, 카스파제-Glo 검정의 경우에 384-웰 고형 백색-바닥 플레이트 (Corning 3570)를 사용하였다. 모든 플레이트를 뚜껑으로 덮고, 세포 부착을 위해 밤새 37℃ 및 5% CO2에 두었다.Cells were harvested and cell numbers were determined using a Countess cell counter. Cells were diluted to the desired density with culture medium. The final cell density can be, for example, 4,000 cells/well for 6 and 24 hours treatments, and 2,000 cells/well for 48 hours and 72 hours treatments. For the Annexin V assay a 384-well clear-bottom plate (Corning 3712) was used, whereas for the Caspase-Glo assay a 384-well solid white-bottom plate (Corning 3570) was used. All plates were covered with lids and placed at 37° C. and 5% CO 2 overnight for cell attachment.

시험 화합물을 DMSO에서 30 mM 스톡으로 용해시켰다. 10-배 희석을 수행하여 3 mM 및 0.3 mM 농도를 생성시켰다. 0.9 mM 스타우로스포린을 양성 대조군으로서 사용하고, DMSO를 음성 대조군 (NC)으로서 사용하였다. 액체 핸들러 Echo550을 사용하여 화합물 소스 플레이트로부터 384-웰 세포 배양 플레이트(들)로 132.5 nL의 화합물을 옮겼다. 지시된 인큐베이션 시간 후, 검출을 위해 인큐베이터로부터 플레이트를 꺼냈다.Test compounds were dissolved in DMSO as a 30 mM stock. 10-fold dilutions were performed to yield 3 mM and 0.3 mM concentrations. 0.9 mM staurosporin was used as a positive control and DMSO was used as a negative control (NC). 132.5 nL of compound was transferred from the compound source plate to the 384-well cell culture plate(s) using a liquid handler Echo550. After the indicated incubation time, the plate was removed from the incubator for detection.

시험 조성물은 DMSO, EPI-100-LLMM, 또는 임의의 적절한 용매에 용해되고, 하기 표 2 내지 7에서 설명에 따라 제조될 수 있다. 적절한 용매는 당업자에게 잘 알려져 있다.Test compositions can be dissolved in DMSO, EPI-100-LLMM, or any suitable solvent and prepared according to the descriptions in Tables 2-7 below. Suitable solvents are well known to those skilled in the art.

아넥신 V 검정을 위해, 플레이트를 인큐베이터로부터 꺼내고, 배양 배지를 제거하였다. 세포를 40 uL의 PBS 및 15 uL의 예비-혼합 아넥신 V-FITC로 2회 세척하고, Hoechst 33342 염료 워킹 용액을 웰 마다 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 20 분 동안 인큐베이션하고, 밀봉하고, 1,000 rpm에서 1 분 동안 원심분리하여 버블을 제거하였다. 플레이트를 ImageXpress Nano를 사용하여 판독하였다.For the Annexin V assay, the plate was removed from the incubator and the culture medium was removed. Cells were washed twice with 40 uL of PBS and 15 uL of pre-mixed Annexin V-FITC, and Hoechst 33342 dye working solution was added per well. Plates were incubated at room temperature for 20 min, sealed, and centrifuged at 1,000 rpm for 1 min to remove bubbles. Plates were read using an ImageXpress Nano.

카스파제-Glo 검정을 위해, 플레이트를 인큐베이터로부터 꺼내고, 실온에서 15 분 동안 평형시켰다. 카스파제-Glo 3/7 시약을 또한 실험 전에 해동하고 실온에서 평형시켰다. 카스파제-Glo 시약을 배양 배지에 1:1 비율로 필요한 웰에 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 15 분 동안 인큐베이션하고, EnSpire™ 플레이트 리더를 사용하여 판독하였다. 배수 유도를 다음 식에 따라 계산하였다: 배수 유도 = Lum샘플 / LumNC.For the Caspase-Glo assay, the plates were removed from the incubator and allowed to equilibrate for 15 minutes at room temperature. Caspase-Glo 3/7 reagent was also thawed and equilibrated at room temperature prior to experimentation. Caspase-Glo reagent was added to the required wells in a 1:1 ratio to the culture medium. Plates were incubated at room temperature for 15 minutes and read using an EnSpire™ plate reader. The fold induction was calculated according to the following equation: fold induction = Lum sample / Lum NC .

아넥신 V 검정 및 카스파제 3/7 검정 결과Annexin V Assay and Caspase 3/7 Assay Results

조성물 #1 내지 #5를 포함하여 본 발명의 화합물 및 조성물은 세포 사멸을 유도할 것으로 예상된다. 본 발명의 조성물은, 예를 들어, 단독의 적어도 하나의 성분 화합물에 비해 더 강력한 아폽토시스-유도 활성을 나타낼 것으로 예상된다. 마찬가지로, 본 발명의 조성물은, 예를 들어, 단독의 적어도 하나의 성분 화합물에 비해 덜 효과적인 아폽토시스-유도 활성을 보일 것으로 예상된다. 그러한 조성물은 더 강력한 조성물에 비해 더 유리한 독성 프로파일을 가질 수 있다.Compounds and compositions of the present invention, including compositions #1 to #5, are expected to induce cell death. The compositions of the present invention are expected to exhibit a more potent apoptosis-inducing activity compared to, for example, at least one component compound alone. Likewise, compositions of the present invention are expected to exhibit less effective apoptosis-inducing activity than, for example, at least one component compound alone. Such compositions may have a more favorable toxicity profile compared to more potent compositions.

실시예 31Example 31

말라세지아 - 유래 화합물 및/또는 이의 화학적 유사체를 함유하는 조성물에 대한 노출 후 세포 생존력Cell viability after exposure to compositions containing Malassezia-derived compounds and/or chemical analogs thereof

시약reagent

CellTiter-Glo® 2.0 검정.CellTiter-Glo® 2.0 Assay.

실험 방법Experimental method

CellTiter-Glo 검정을 위해, 시험 화합물을 10 mM DMSO 용액에서 제조하였다. 화합물은 12 개 농도로 연속 희석하였다. 100,000 개 세포/mL 현탁액으로부터의 40 uL의 세포를 384-웰 플레이트 (Corning 3570)의 각 웰에 분배하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2, 및 95% 습도에서 밤새 인큐베이션하였다. 비히클 대조군으로서 DMSO와 함께 시험 화합물을 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2, 및 95% 습도에서 6, 24, 또는 48 시간 동안 인큐베이션하고, 40 uL의 CellTiter-Glo 시약을 각 웰에 첨가하여 세포 생존력을 평가하였다.For CellTiter-Glo assay, test compounds were prepared in 10 mM DMSO solution. Compounds were serially diluted to 12 concentrations. 40 uL of cells from the 100,000 cells/mL suspension were dispensed into each well of a 384-well plate (Corning 3570). Plates were incubated overnight at 37° C., 5% CO 2 , and 95% humidity. Test compound was added along with DMSO as vehicle control. Plates were incubated for 6, 24, or 48 hours at 37° C., 5% CO 2 , and 95% humidity, and 40 uL of CellTiter-Glo reagent was added to each well to assess cell viability.

시험 조성물은 DMSO, EPI-100-LLMM, 또는 임의의 적절한 용매에 용해되고, 하기 표 2 내지 7에서 설명에 따라 제조될 수 있다. 적절한 용매는 당업자에게 잘 알려져 있다. Test compositions can be dissolved in DMSO, EPI-100-LLMM, or any suitable solvent and prepared according to the descriptions in Tables 2-7 below. Suitable solvents are well known to those skilled in the art.

결과result

조성물 #1 내지 #5를 포함하여 본 발명의 화합물 및 조성물은 세포 사멸을 유도할 것으로 예상된다. 본 발명의 조성물은, 예를 들어, 단독의 적어도 하나의 성분 화합물에 비해 더 강력한 아폽토시스-유도 활성을 나타낼 것으로 예상된다. 마찬가지로, 본 발명의 조성물은, 예를 들어, 단독의 적어도 하나의 성분 화합물에 비해 덜 효과적인 아폽토시스-유도 활성을 보일 것으로 예상된다. 그러한 조성물은 더 강력한 조성물에 비해 더 유리한 독성 프로파일을 가질 수 있다. Compounds and compositions of the present invention, including compositions #1 to #5, are expected to induce cell death. The compositions of the present invention are expected to exhibit a more potent apoptosis-inducing activity compared to, for example, at least one component compound alone. Likewise, compositions of the present invention are expected to exhibit less effective apoptosis-inducing activity than, for example, at least one component compound alone. Such compositions may have a more favorable toxicity profile compared to more potent compositions.

실시예 32Example 32

말라세지아 - 유래 화합물 및/또는 이의 화학적 유사체를 함유하는 조성물의 아릴탄화수소 수용체 활성화 잠재력Arylhydrocarbon Receptor Activation Potential of Compositions Containing Malassezia-derived Compounds and/or Chemical Analogs thereof

검정 절차Assay procedure

고 포도당 및 L-글루타민, 뿐만 아니라 10% FBS와 함께 DMEM을 보충함으로써 안정적으로 형질감염된 HepG2 세포에 대한 배양 배지를 제조하였다.Culture medium for stably transfected HepG2 cells was prepared by supplementing DMEM with high glucose and L-glutamine, as well as 10% FBS.

HepG2-AhR-Luc 세포를 37℃, 5% CO2, 및 95% 상대 습도에서 T-75 플라스크에서 배양하였다. 세포가 탈착 및 분할 전에 80% 내지 90% 포화상태에 도달하게 하였다.HepG2-AhR-Luc cells were cultured in T-75 flasks at 37° C., 5% CO 2 , and 95% relative humidity. Cells were allowed to reach 80% to 90% confluency before detachment and division.

배양된 세포를 5 mL의 PBS에 의해 세정하였다. PBS를 흡기시키고, 1.5 mL의 트립신을 플라스크에 첨가하고, 세포를 대략 5분 동안 또는 세포가 탈착되고 부유할 때까지 37℃에서 인큐베이션하였다. 초과의 혈청-함유 배지를 첨가함으로써 트립신을 불활성화하였다.The cultured cells were washed with 5 mL of PBS. PBS was aspirated, 1.5 mL of trypsin was added to the flask, and cells were incubated at 37° C. for approximately 5 minutes or until cells detached and floated. Trypsin was inactivated by adding excess serum-containing medium.

세포 현탁액을 원뿔 관으로 옮기고, 120g에서 10 분 동안 원심분리하여 세포를 펠렛화하였다. 세포를 적절한 밀도에서 시딩 배지 중에 재현탁시켰다. 40 μL의 세포를 384-웰 배양 플레이트(5 × 103 개 세포/웰)로 옮겼다. 플레이트를 인큐베이터에서 37℃에서 24 시간 동안 배치하였다.The cell suspension was transferred to a conical tube and centrifuged at 120 g for 10 min to pellet the cells. Cells were resuspended in seeding medium at the appropriate density. 40 μL of cells were transferred to a 384-well culture plate (5 × 10 3 cells/well). Plates were placed in an incubator at 37° C. for 24 hours.

이후, 시험 화합물, 시험 조성물, 및 오메프라졸 양성 대조군의 스톡 용액을 제조하였다. Echo550을 이용하여 화합물 및 조성물 용액을 검정 플레이트로 옮겼다. 이후, 플레이트를 화합물/조성물 처리를 위해 인큐베이터에 다시 배치하였다.Then, stock solutions of the test compound, test composition, and omeprazole positive control were prepared. Compound and composition solutions were transferred to assay plates using an Echo550. The plate was then placed back into the incubator for compound/composition treatment.

나중에, 24 시간 처리 후, 플레이트를 인큐베이터로부터 꺼내고, 주위 온도로 냉각되게 하였다. 배양 배지의 것과 동등한 30 μL의 One-Glo 시약을 각각의 웰에서 첨가하였다. 세포를 적어도 3분 동안 용해되게 하고, 이후 루미노미터에서 측정하였다.Later, after 24 hours of treatment, the plates were removed from the incubator and allowed to cool to ambient temperature. 30 μL of One-Glo reagent equivalent to that of the culture medium was added to each well. Cells were allowed to lyse for at least 3 minutes and then measured in a luminometer.

XLfit에서 비선형 회귀 분석을 이용하여 용량 반응을 그래프화하고, EC50 값을 또한 계산하였다. The dose response was graphed using nonlinear regression analysis in XLfit and EC 50 values were also calculated.

결과result

조성물 #1 내지 #5를 포함하여 본 발명의 화합물 및 조성물은 AhR 활성을 조절할 것으로 예상된다. 본 발명의 조성물은, 예를 들어, 단독의 적어도 하나의 성분 화합물에 비해 더 강력한 AhR 효능제 활성을 나타낼 것으로 예상된다. 마찬가지로, 본 발명의 조성물은, 예를 들어, 단독의 적어도 하나의 성분 화합물에 비해 덜 효과적인 AhR 효능제 활성을 보일 것으로 예상된다. 본 발명의 조성물은 또한, 예를 들어, 단독의 적어도 하나의 성분 화합물에 비해 더 강력한 AhR 길항제 활성을 나타낼 것으로 예상된다. 마찬가지로, 본 발명의 조성물은 또한, 예를 들어, 단독의 적어도 하나의 성분 화합물에 비해 덜 효과적인 AhR 길항제 활성을 보일 것으로 예상된다.Compounds and compositions of the present invention, including compositions #1 to #5, are expected to modulate AhR activity. Compositions of the present invention are expected to exhibit more potent AhR agonist activity compared to, for example, at least one component compound alone. Likewise, compositions of the present invention are expected to exhibit less effective AhR agonist activity compared to, for example, at least one component compound alone. Compositions of the present invention are also expected to exhibit stronger AhR antagonist activity, for example, compared to at least one component compound alone. Likewise, compositions of the present invention are also expected to exhibit less effective AhR antagonist activity, for example, compared to at least one component compound alone.

실시예 33Example 33

MelanoDerm™ 검정MelanoDerm™ Black

이 연구의 목적은 반복 시험 물품 노출 후 MelanoDerm™ 피부 모델에서 피부 멜라닌생성 조정제로서 시험 물품의 잠재적인 작용을 평가하는 것이었다. 두 번째로, 이 연구의 목적은 반복 노출 후 MelanoDerm™ 피부 모델에 대한 시험 물품의 잠재적인 진피 자극을 평가하는 것이었다. 음성/용매 대조군-처리 조직과 비교하여 시험 물품-처리 조직에서 MTT (3-[4,5 - 디메틸티아졸-2-일] - 2,5 - 디페닐테트라졸륨 브로마이드)의 상대 전환율을 측정함으로써 독성을 결정하였다. 음성/용매 대조군-처리 조직과 비교하여 시험 물품-처리 조직에서 생성된 멜라닌의 농도를 측정함으로써 멜라닌 생산에 대한 잠재적인 영향을 결정하였다. The purpose of this study was to evaluate the potential action of test articles as modulators of skin melanogenesis in the MelanoDerm™ skin model after repeated test article exposure. Second, the purpose of this study was to evaluate the potential dermal irritation of the test article on the MelanoDerm™ skin model after repeated exposure. By determining the relative conversion of MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) in test article-treated tissues compared to negative/solvent control-treated tissues Toxicity was determined. The potential effect on melanin production was determined by measuring the concentration of melanin produced in the test article-treated tissues compared to the negative/solvent control-treated tissues.

시험 물질 및 검정 대조군의 확인Identification of test substances and assay controls

표 6Table 6

희석된 형태로 시험된 시험 물품Test article tested in diluted form

Figure pct00238
Figure pct00238

표 7Table 7

조성물 #1Composition #1

Figure pct00239
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Figure pct00240
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표 8Table 8

조성물 #2Composition #2

Figure pct00241
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Figure pct00242
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표 9Table 9

조성물 #3Composition #3

Figure pct00243
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Figure pct00244
Figure pct00244

표 10Table 10

조성물 #4Composition #4

Figure pct00245
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Figure pct00246
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표 11Table 11

조성물 #5Composition #5

Figure pct00247
Figure pct00247

Figure pct00248
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검정 대조군은 다음을 포함하였다: 양성 대조군 - 말라세진 (CV-8684) (500 μM) (17AJ41) 및 용매 대조군 - EPI-100-LLMM에서 제조된 DMSO (디메틸 설폭사이드).Assay controls included: positive control - malassezine (CV-8684) (500 μΜ) (17AJ41) and solvent control - DMSO (dimethyl sulfoxide) prepared in EPI-100-LLMM.

추가로, 시험 물품 및 대조군을 4 개 조직의 그룹에 적용하였는데, 조직 중 각각 2 개는 조직 생존력 (MTT) 종점에 사용하고, 2 개는 멜라닌 종점에 사용하였다.Additionally, test articles and controls were applied to groups of 4 tissues, each of which was used for the tissue viability (MTT) endpoint and 2 for the melanin endpoint.

시험 시스템test system

이 연구에서 MatTek Corporation(메사추세츠주 애슐랜드)에 의해 제공된 MelanoDerm™ 피부 모델을 이용하였다. MelanoDerm™ 조직은 정상, 인간 유래 상피 케라틴세포(NHEK) 및 멜라닌세포(NHM)를 포함하였고, 이는 인간 표피의 다층의 고도로 분화된 모델을 형성하도록 배양된 것이었다. 동시배양물 내의 NHM은 자발적인 멜라닌형성을 겪어서 다양한 수준의 색소침착의 조직을 발생시켰다. 배양물을 공기-액체 계면에서 세포 배양 인서트에서 성장시켜, 피부 조정제의 국소 적용를 허용하였다. MelanoDerm™ 모델은 생체내 유사 형태학적 및 초구조학적 특징을 나타낸다. MelanoDerm™ 조직의 기저 세포층에 국재화된 NHM은 수지상이고, 멜라닌 과립을 자발적으로 생산하고, 이는 조직의 층을 점진적으로 증식시켰다. 따라서, 음성 대조군에 대비해 멜라닌의 생산을 저해하거나 자극할 수 있는 재료에 대해 스크리닝하기 위해 시험 시스템을 사용할 수 있다.The MelanoDerm™ skin model provided by MatTek Corporation (Asheland, MA) was used in this study. MelanoDerm™ tissue contained normal, human-derived epithelial keratinocytes (NHEK) and melanocytes (NHM), which were cultured to form a multilayered, highly differentiated model of the human epidermis. NHMs in co-culture underwent spontaneous melanogenesis, resulting in tissues with varying levels of pigmentation. Cultures were grown on cell culture inserts at the air-liquid interface to allow topical application of skin conditioning agents. The MelanoDerm™ model exhibits similar morphological and ultrastructural features in vivo. NHMs localized in the basal cell layer of MelanoDerm™ tissue are dendritic and spontaneously produce granules of melanin, which progressively proliferate the layer of tissue. Thus, the test system can be used to screen for materials that can inhibit or stimulate the production of melanin versus negative controls.

실험 설계 및 방법론Experimental design and methodology

이 연구의 실험 설계는 반복 노출 후 MelanoDerm™ 피부 모델에 대한 피부 멜라닌생성 조정제로서 시험 물품의 상대 조직 생존력 및 잠재적인 작용을 알아보기 위해 가능한 경우 (및/또는 적절한 바대로 투약 용액)의 pH의 결정 및 한정적 검정을 포함하였다. 시험 물품을 총 7일 동안 MelanoDerm™ 피부 모델에 노출시켰다. 시험 물품을 (이전의 치료로부터 48±2시간의 기간 내에) 48시간마다 MelanoDerm™ 피부 모델에 국소로 적용하였다. 시험 물품의 독성은 대조군 및 시험 물품-처리 조직에서 MTT의 NAD(P)H-의존적 마이크로솜 효소 감소에 의해(및, 더 적은 정도로, MTT의 숙시네이트 탈수소효소 감소에 의해) 결정하였다. 데이터를 상대 생존율(음성/용매 대조군에 대비된 MTT 전환율)의 형태로 제시하였다. 음성/용매 대조군-처리 조직과 비교하여 시험 물품-처리 조직에서 생성된 멜라닌의 농도를 측정함으로써 멜라닌 생산에 대한 잠재적인 영향을 평가하였다. 데이터를 멜라닌 표준 곡선을 이용하여 결정된 시험 물품-처리 조직에 의해 생산된 멜라닌의 농도 형태로 제시하였다. 대안적으로, 데이터는 음성/용매 대조군-처리 조직에 대비한 멜라닌 농도의 변화 퍼센트로서 제시될 수 있다.The experimental design of this study was the determination of pH where possible (and/or dosing solution as appropriate) to investigate the relative tissue viability and potential action of test articles as modulators of skin melanogenesis on the MelanoDerm™ skin model after repeated exposure. and limited assays. The test article was exposed to the MelanoDerm™ skin model for a total of 7 days. The test article was topically applied to the MelanoDerm™ skin model every 48 hours (within a period of 48±2 hours from previous treatment). The toxicity of the test article was determined by NAD(P)H-dependent microsomal enzyme reduction of MTT (and, to a lesser extent, succinate dehydrogenase reduction of MTT) in control and test article-treated tissues. Data are presented in the form of relative viability (MTT conversion versus negative/solvent control). The potential effect on melanin production was assessed by measuring the concentration of melanin produced in the test article-treated tissues compared to the negative/solvent control-treated tissues. Data are presented in the form of concentrations of melanin produced by the test article-treated tissue as determined using a melanin standard curve. Alternatively, data can be presented as percent change in melanin concentration relative to negative/solvent control-treated tissue.

이용된 방법은 MatTek Corporation에 의해 제공된 절차의 변형이다.The method used is a modification of the procedure provided by MatTek Corporation.

배지 및 시약Media and reagents

MelanoDerm™ 유지 배지 (EPI-100-LLMM)는 MatTek Corporation으로부터 구매하였다. MelanoDerm™ 피부 모델 (MEL-300-A)은 MatTek Corporation으로부터 구매하였다. 1% 코직산 (무균 탈이온수에서 제조)은 Sigma로부터 구매하였다. MTT (3-[4,5 - 디메틸티아졸-2-일] - 2,5 - 디페닐테트라졸륨 브로마이드)는 Sigma로부터 구매하였다. 2 mM L-글루타민 (MTT 첨가 배지)을 함유하는 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM)를 Quality Biological로부터 구매하였다. 추출 용매 (이소프로판올)는 Aldrich로부터 구매하였다. 무균 Ca++ 및 Mg++ 유리 둘베코 인산염 완충 식염수(CMF-DPBS)는 Invitrogen으로부터 구매하였다. 멜라닌은 Sigma로부터 구매하였다. 무균 탈이온수는 Quality Biological로부터 구매하였다. 가용성 물질은 Perkin Elmer로부터 구매하였다.MelanoDerm™ maintenance medium (EPI-100-LLMM) was purchased from MatTek Corporation. MelanoDerm™ skin model (MEL-300-A) was purchased from MatTek Corporation. 1% kojic acid (prepared in sterile deionized water) was purchased from Sigma. MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) was purchased from Sigma. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) containing 2 mM L-glutamine (MTT supplemented medium) was purchased from Quality Biological. The extraction solvent (isopropanol) was purchased from Aldrich. Sterile Ca++ and Mg++ free Dulbecco's phosphate buffered saline (CMF-DPBS) was purchased from Invitrogen. Melanin was purchased from Sigma. Sterile deionized water was purchased from Quality Biological. Soluble material was purchased from Perkin Elmer.

시험 물품의 제조 및 전달Manufacture and Delivery of Test Articles

달리 이러한 프로토콜 내에 명시되어 있지 않는 한, 25 마이크로리터의 각 시험 물품을 조직에 바로 적용하여 상표면을 덮었다. 시험 물품(액체, 겔, 크림, 폼 등)의 성질에 따라, 조직의 표면 위로 시험 물품의 균일한 확산을 허용하는 투약 장치, 메쉬 또는 다른 보조품의 사용이 필요할 수 있다. Unless otherwise specified in these protocols, 25 microliters of each test article was applied directly to the tissue to cover the label. Depending on the nature of the test article (liquid, gel, cream, foam, etc.), it may be necessary to use a dispensing device, mesh, or other aid that allows for uniform diffusion of the test article over the surface of the tissue.

투여 경로route of administration

시험 물품을 7일 시험 동안 48 시간 마다 (이전 처리로부터 48+2 시간의 기간 내에) MelanoDerm™ 조직에 국소로 적용하였다. 25 마이크로리터의 각 시험 물품을 각 조직에 적용하였다. 25 마이크로리터의 양성 및 음성/용매 대조군을 각 조직에 적용하였다.The test article was topically applied to MelanoDerm™ tissue every 48 hours (within a period of 48+2 hours from the previous treatment) for the 7 day trial. 25 microliters of each test article was applied to each tissue. 25 microliters of positive and negative/solvent controls were applied to each tissue.

pH 결정pH determination

순수한 액체 시험 물품 (및/또는 적절한 경우 투약 용액)의 pH를, 가능한 경우, 결정하였다. pH를 (예를 들어, 더 정확한 값을 예측하기 위한 0 내지 14의 pH 범위 및/또는 이를 결정하기 위한 5 내지 10의 pH 범위로) pH 종이를 이용하여 결정하였다. 더 좁은 범위 pH 종이에서의 통상적인 pH 증분은 대략 0.3 내지 0.5 pH 단위였다. pH 종이에서의 최대 증분은 1.0 pH 단위였다.The pH of the pure liquid test article (and/or dosing solution, where appropriate) was determined, if possible. The pH was determined using pH paper (eg, with a pH range of 0-14 to predict a more accurate value and/or a pH range of 5-10 to determine this). Typical pH increments in narrower range pH papers were approximately 0.3 to 0.5 pH units. The maximum increment on the pH paper was 1.0 pH units.

대조군control

한정적 검정은 음성 대조군, 양성 대조군 및 하나의 용매 대조군 (DMSO) 또는 양성 대조군 및 용매 대조군 (DMSO)을 포함하였다. 검정 음성/용매 대조군제 지정된 MelanoDerm™ 조직을 25 μL의 무균 탈이온수 또는 DMSO로 처리하였다. 검정 양성 대조군에 지정된 조직을 25 μL의 1% 코직산, 말라세진 (CV-8684) (17AJ41) 500 μM, 또는 조성물 #2로 처리하였다. 1% 코직산을 제조의 2시간 내에 사용될 때까지 알루미늄 호일에 의해 피복된 관에서 저장하였다. 음성/용매 및 양성 대조군 노출 시간은 시험 물품에 사용된 것과 동일했다. 비처리 조직을 또한 대조군으로서 사용하였다.Definitive assays included a negative control, a positive control and one solvent control (DMSO) or a positive control and a solvent control (DMSO). Assay Negative/Solvent Control Agents Designated MelanoDerm™ tissues were treated with 25 μL of sterile deionized water or DMSO. Tissues designated as assay positive controls were treated with 25 μL of 1% kojic acid, malassezine (CV-8684) (17AJ41) 500 μM, or composition #2. 1% kojic acid was stored in tubes covered with aluminum foil until used within 2 hours of preparation. Negative/solvent and positive control exposure times were the same as those used for the test article. Untreated tissue was also used as a control.

MTT의 직접 시험 물품 감소의 평가Assessment of MTT's Direct Test Article Reduction

MTT를 직접적으로 감소시키는 각 시험 물품의 능력을 평가하는 것이 필요했다. 1.0 mg/mL의 MTT 용액을 MTT 첨가 배지에서 제조하였다. 대략 25 μL의 시험 물품을 1 mL의 MTT 용액에 첨가하고, 혼합물을 암소에서 37±1℃에서 1 내지 3 시간 동안 인큐베이션하였다. 25 μL의 무균 탈이온수인 음성 대조군, 또는 25 μL의 DMSO인 용매 대조군을 동시에 시험하였다. MTT 용액 색상이 청색/자주색으로 변하는 경우, 시험 물품은 MTT를 감소시키는 것으로 추정되었다. 수불용성 시험 물질은 시험 물품과 배지 사이의 계면에서만 직접적인 감소(어두워짐)를 나타냈을 수 있다.It was necessary to evaluate the ability of each test article to directly reduce MTT. A 1.0 mg/mL MTT solution was prepared in MTT-added medium. Approximately 25 μL of test article was added to 1 mL of MTT solution and the mixture was incubated in the dark at 37±1° C. for 1-3 hours. A negative control, which was 25 μL of sterile deionized water, or a solvent control, which was 25 μL of DMSO, was tested simultaneously. If the MTT solution color changed to blue/purple, the test article was assumed to decrease MTT. The water-insoluble test substance may have shown a direct decrease (darkening) only at the interface between the test article and the medium.

MelanoDerm™의 입수Get MelanoDerm™

MelanoDerm™ 피부 키트의 입수 후, 제조업체에 의해 지시된 바와 같이 용액을 저장하였다. MelanoDerm™ 조직을 사용될 때까지 2 내지 8℃에서 저장하였다.After obtaining the MelanoDerm™ skin kit, the solution was stored as directed by the manufacturer. MelanoDerm™ tissue was stored at 2-8° C. until used.

입수 당일 (투여 직전), 적절한 부피의 MelanoDerm™ 유지 배지 (EPI-100-LLMM)를 제거하고, 대략 37±1℃로 가온시켰다. 9/10 (0.9) mL의 EPI-100-LLMM/웰을 6-웰 플레이트의 적절한 웰에 분취하였다. 각 MelanoDerm™ 조직을 밀봉된 패키지를 열기 전에 아가로스 겔과 세포 배양 인서트 사이의 기포에 대해 검사하였다. 세포 배양 인서트 면적의 50%를 넘는 기포가 있는 조직은 사용하지 않았다. 24-웰 운반 용기를 비닐 봉지에서 꺼내고, 표면을 70% 에탄올로 소독하였다. 적절한 수의 MelanoDerm™ 조직을 24-웰 운반 용기로부터 6-웰 플레이트에 무균으로 옮겼다. MelanoDerm™ 조직을 공기 (표준 배양 조건)에서 5±1% CO2의 습윤 분위기에서 37±1℃에서 밤새 (적어도 16 시간) 인큐베이션하여 조직을 순응시켰다. 백을 개봉한 후, 조직 이동 시점에 운반 한천에 남아 있는 임의의 미사용 조직을 5% CO2/95% 공기의 대기로 잠시 가스를 채우고, 백을 밀봉하고, 후속 사용을 위해 2 내지 8℃에서 저장하였다.On the day of acquisition (immediately prior to dosing), an appropriate volume of MelanoDerm™ maintenance medium (EPI-100-LLMM) was removed and warmed to approximately 37±1°C. 9/10 (0.9) mL of EPI-100-LLMM/well was aliquoted into the appropriate wells of a 6-well plate. Each MelanoDerm™ tissue was inspected for air bubbles between the agarose gel and the cell culture insert prior to opening the sealed package. Tissues with more than 50% of the cell culture insert area were not used. The 24-well transport container was removed from the plastic bag and the surface was disinfected with 70% ethanol. An appropriate number of MelanoDerm™ tissues were aseptically transferred from a 24-well transfer container to a 6-well plate. MelanoDerm™ tissues were incubated overnight (at least 16 hours) at 37±1° C. in a humidified atmosphere of 5±1% CO 2 in air (standard culture conditions) to allow the tissues to acclimate. After opening the bag, any unused tissue remaining on the transport agar at the time of tissue transfer is briefly gassed with an atmosphere of 5% CO 2 /95% air, the bag is sealed, and at 2-8° C. for subsequent use. Saved.

한정적 검정limited test

조직 노출: 배양을 개시시킨 후 적어도 16시간에, (0일은 비처리로 간주함) 5 개의 MelanoDerm™ 조직을 검정의 0시간에 조직의 색소침착의 정도의 시각 평가를 돕도록 디지털 카메라를 사용하여 사진촬영하였다. 2 개의 MelanoDerm™ 조직을 CMF-DPBS로 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. MelanoDerm™ 조직을 세정 후 적절한 MTT 함유 웰로 옮기로, MTT 검정에서 가공처리하였다. 2개 또는 3 개의 MelanoDerm™ 조직을 CMF-DPBS로 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. MelanoDerm™ 조직을 무균 메스를 사용하여 세포 배양 인서트로부터 꺼내고, 표지된 1.5 mL 마이크로퓨지 튜브에 넣고, 후속 멜라닌 분석을 위해 <-60℃에서 저장하였다.Tissue Exposure: At least 16 h after initiation of culture, (day 0 is considered untreated), 5 MelanoDerm™ tissues were used with a digital camera to aid in visual assessment of the degree of tissue pigmentation at h 0 of assay. photo was taken. Two MelanoDerm™ tissues were washed with CMF-DPBS, bottled dry on sterile sorbent paper, and excess liquid was removed. MelanoDerm™ tissue was processed in the MTT assay by washing and transferring to appropriate MTT containing wells. Two or three MelanoDerm™ tissues were rinsed with CMF-DPBS, bottled dry on sterile sorbent paper, and excess liquid was removed. MelanoDerm™ tissues were removed from cell culture inserts using a sterile scalpel, placed in labeled 1.5 mL microfuge tubes, and stored at <-60° C. for subsequent melanin analysis.

배양을 개시시킨 후 적어도 16시간에, 나머지 조직을 0.9 mL/웰의 새로운 예비가온된 EPI-100-LLMM을 함유하는 새로운 6-웰 플레이트로 옮겼다. 시험을 7일 기간에 걸쳐 실시하였다. 4 개 또는 5 개의 조직을 25 μL의 각 시험 물품에 의해 첫 날에 및 48시간마다(이전의 치료로부터 48+2시간의 기간 내에) 국소로 처리하였다. 배지를 (이전의 재공급으로부터 24+2시간의 기간 내에) 매일 다시 공급하고; 조직을 0.9 mL/웰의 새로운 예비가온된 EPI-100-LLMM을 함유하는 새로운 6-웰 플레이트로 옮겼다.At least 16 hours after initiation of culture, the remaining tissue was transferred to a new 6-well plate containing 0.9 mL/well of fresh prewarmed EPI-100-LLMM. The test was conducted over a 7 day period. 4 or 5 tissues were treated topically on the first day and every 48 hours (within a period of 48+2 hours from previous treatment) with 25 μL of each test article. Medium is replenished daily (within a period of 24+2 hours from the previous resupply); Tissues were transferred to new 6-well plates containing 0.9 mL/well of fresh prewarmed EPI-100-LLMM.

4 개 또는 5 개의 조직을 각각 25 μL의 양성 및 음성/용매 대조군에 의해 첫 날에 및 48시간마다(이전의 치료로부터 48+2시간의 기간 내에) 국소로 처리하였다. 배지를 (이전의 재공급으로부터 24+2시간의 기간 내에) 매일 다시 공급하고; 조직을 0.9 mL/웰의 새로운 예비가온된 EPI-100-LLMM을 함유하는 새로운 6-웰 플레이트로 옮겼다. 조직을 적절한 노출 시간 동안 공기 중 5±1% CO2의 습윤 분위기에서 37±1℃로 (표준 배양 조건) 인큐베이션하였다.4 or 5 tissues were treated topically on the first day and every 48 hours (within a period of 48+2 hours from previous treatment) with 25 μL of positive and negative/solvent controls, respectively. Medium is replenished daily (within a period of 24+2 hours from the previous resupply); Tissues were transferred to new 6-well plates containing 0.9 mL/well of fresh prewarmed EPI-100-LLMM. Tissues were incubated at 37±1° C. (standard culture conditions) in a humidified atmosphere of 5±1% CO 2 in air for appropriate exposure times.

투여일에, MelanoDerm™ 조직을 먼저 임의의 잔류 시험 물품을 제거하도록 세정당 ~ 500 μL의 CMF-DPBS를 사용하여 적어도 3회 조심스럽게 세정하였다. CMF-DPBS를 웰에 조심스럽게 피펫팅한 후, 무균 아스피레이터로 드로잉하였다. 조직을 0.9 mL의 새로운 예비가온된 EPI-100-LLMM을 함유하는 새로운 6-웰 플레이트로 옮기고, 적절한 시험 물품, 음성/용매 또는 양성 대조군을 투여하였다. 조직을 적절한 노출 시간 동안 공기 중 5±1% CO2의 습윤 분위기에서 37±1℃로 (표준 배양 조건) 인큐베이션하였다.On the day of dosing, the MelanoDerm™ tissue was first carefully washed at least 3 times using ~500 μL of CMF-DPBS per wash to remove any residual test article. CMF-DPBS was carefully pipetted into the wells and then drawn with a sterile aspirator. Tissues were transferred to a new 6-well plate containing 0.9 mL of fresh prewarmed EPI-100-LLMM and the appropriate test article, negative/solvent or positive control was administered. Tissues were incubated at 37±1° C. (standard culture conditions) in a humidified atmosphere of 5±1% CO 2 in air for appropriate exposure times.

7일 시험의 종료 시, 음성/용매 대조군 또는 양성 대조군, 및 각각의 시험 물품으로 처리된 MelanoDerm™ 조직을 검정의 종료(7일) 시 조직의 색소침착의 정도의 시각 평가를 돕도록 디지털 카메라를 사용하여 사진촬영하였다. 이후, 각각 양성 및 음성 대조군, 및 각 시험 물품으로 처리된 두 개의 조직의 생존력을 MTT 감소에 의해 결정하였다. 7일 시험의 종료 시, 각 시험 물품, 양성 및 음성/용매 대조군 각각으로 처리된 세 개의 조직에 의해 생성된 멜라닌을 결정하였다.At the end of the 7-day trial, the negative/solvent control or positive control, and MelanoDerm™ tissues treated with each test article were captured with a digital camera to aid in a visual assessment of the degree of tissue pigmentation at the end of the assay (day 7). was used to take pictures. Then, the viability of two tissues treated with positive and negative controls, respectively, and each test article was determined by MTT reduction. At the end of the 7-day trial, the melanin produced by the three tissues treated with each test article, each of the positive and negative/solvent controls, was determined.

MTT 검정: (배치 제조 시 여과된) PBS 중에 제조된 MTT의 10X 스톡을 해동하고, 따뜻한 MTT 첨가 배지에서 희석하여 사용 전에 2시간 이하에 1.0 mg/mL 용액을 생성시켰다. 300 μL의 MTT 용액을 예비 표지된 24-웰 플레이트의 각각의 지정된 웰에 첨가하였다.MTT Assay: A 10X stock of MTT prepared in PBS (filtered during batch preparation) was thawed and diluted in warm MTT-added medium to yield a 1.0 mg/mL solution up to 2 hours prior to use. 300 μL of MTT solution was added to each designated well of a pre-labeled 24-well plate.

노출 시간 후, MTT 검정에 지정된 각 MelanoDerm™ 조직을 CMF-DPBS (이 단계에 허용 가능한 분무병 사용)로 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. MelanoDerm™ 조직을 세정 후 적절한 MTT 함유 웰로 옮겼다. 24-웰 플레이트를 3 ± 0.1 시간 동안 표준 조건에서 인큐베이션하였다.After the exposure time, each MelanoDerm™ tissue designated for the MTT assay was rinsed with CMF-DPBS (using a spray bottle acceptable for this step), bottled dry on sterile sorbent paper, and excess liquid was removed. MelanoDerm™ tissue was transferred to appropriate MTT containing wells after washing. 24-well plates were incubated at standard conditions for 3±0.1 hours.

3 ± 0.1 시간 후, MelanoDerm™ 조직을 무균 흡착제 종이에서 병입하고, 과량의 액체를 제거하고, 각각의 지정된 웰에 2.0 mL의 이소프로판올을 함유하는 예비-표지된 24-웰 플레이트로 옮겼다. 플레이트를 파라필름에 의해 커버링하고, 마지막 노출 시간이 수확될 때까지 냉장고(2℃ 내지 8℃)에서 저장하였다. 필요한 경우, 플레이트를, MTT를 추출하기 전에 냉장고에서 밤새(또는 마지막 노출 시간이 수확된 후 24 시간까지) 저장하였다. 그 후에, 플레이트를 실온에서 적어도 2 시간 동안 진탕하였다. 추출 기간의 종료 시, 세포 배양 인서트 내의 액체를 세포 배양 인서트가 취해진 웰로 경사처리하였다. 추출 용액을 혼합하고, 200 μL를 96-웰 플레이트의 적절한 웰로 옮겼다. 200 μL의 아이소프로판올을 블랭크로 지정된 웰에 첨가하였다. 각각의 웰의 550nm에서의 흡광도(OD550)를 Molecular Devices Vmax 플레이트 판독기로 측정하였다.After 3±0.1 hours, MelanoDerm™ tissues were bottled on sterile sorbent paper, excess liquid was removed, and transferred to pre-labeled 24-well plates containing 2.0 mL of isopropanol in each designated well. Plates were covered with parafilm and stored in a refrigerator (2°C to 8°C) until the last exposure time was harvested. If necessary, the plates were stored overnight (or up to 24 hours after the last exposure time was harvested) in the refrigerator prior to MTT extraction. The plate was then shaken at room temperature for at least 2 hours. At the end of the extraction period, the liquid in the cell culture insert was decanted into the well from which the cell culture insert was taken. The extraction solutions were mixed and 200 μL was transferred to the appropriate wells of a 96-well plate. 200 μL of isopropanol was added to the wells designated as blanks. The absorbance (OD550) at 550 nm of each well was measured with a Molecular Devices Vmax plate reader.

멜라닌 검정: 적절한 노출 시간의 종료 시, 멜라닌 검정에 지정된 MelanoDerm™ 조직을 배양 배지로부터 임의의 잔류 시험 물품 또는 과량의 페놀 레드를 제거하도록 세정당 ~ 500 μL의 CMF-DPBS를 사용하여 적어도 3회 조심스럽게 세정하고, 무균 흡착제 종이에서 건조 병입하고, 과량의 액체를 제거하였다. 검정의 종료 시 디지털 카메라를 사용하여 MelanoDerm™ 조직을 사진촬영하였다. MelanoDerm™ 조직을 무균 메스 또는 무균 펀치(들)를 사용하여 세포 배양 인서트로부터 꺼내고, 표지된 1.5 mL 마이크로퓨지 튜브에 넣고, 후속 멜라닌 분석을 위해 <-60℃에서 저장하였다.Melanin Assay: At the end of the appropriate exposure time, carefully wash the MelanoDerm™ tissue designated for the melanin assay at least 3 times using ~500 µL of CMF-DPBS per wash to remove any residual test article or excess phenol red from the culture medium. Rinse thoroughly, dry bottling on sterile sorbent paper, and remove excess liquid. At the end of the assay, a digital camera was used to photograph the MelanoDerm™ tissue. MelanoDerm™ tissue was removed from cell culture inserts using a sterile scalpel or sterile punch(es), placed in labeled 1.5 mL microfuge tubes, and stored at <-60° C. for subsequent melanin analysis.

멜라닌 추출 검정 당일, 적출된 조직을 실온에서 대략 10 분 동안 해동시켰다. 250 μL의 가용성 물질을 각 마이크로퓨지 튜브에 첨가하고, 튜브를 60+2℃에서 적어도 16 시간 동안 인큐베이션하였다. 멜라닌을 가용성 물질에 용해시킴으로써 1 mg/mL의 멜라닌 표준 스톡 용액을 제조하였다. 일련의 멜라닌 표준물을 0 mg/mL 내지 0.33 mg/mL 범위의 1 mg/mL의 스톡으로부터 제조하였다. 1.2 mL의 가용성 물질에 1 mg/mL 멜라닌 표준 스톡 용액을 0.6 mL 첨가한 후, 일련의 5 개 넘는 희석액을 제조함으로써(3의 희석 배수) 표준물 시리즈를 제조하였다. 가용성 물질을 제로 표준물로서 사용하였다. 멜라닌 표준물 시리즈 및 가용성 물질을 60+2℃에서 적어도 16 시간 동안 인큐베이션하였다.On the day of the melanin extraction assay, the excised tissues were thawed at room temperature for approximately 10 minutes. 250 μL of soluble material was added to each microfuge tube, and the tube was incubated at 60+2° C. for at least 16 hours. A 1 mg/mL melanin standard stock solution was prepared by dissolving melanin in the soluble material. A series of melanin standards were prepared from stocks of 1 mg/mL ranging from 0 mg/mL to 0.33 mg/mL. A standard series was prepared by adding 0.6 mL of a 1 mg/mL melanin standard stock solution to 1.2 mL of soluble material, followed by making a series of more than 5 dilutions (dilution multiples of 3). Soluble material was used as the zero standard. The melanin standard series and soluble material were incubated at 60+2° C. for at least 16 hours.

멜라닌 추출을 개시시킨 후 적어도 16 시간에, 샘플(MelanoDerm™ 조직으로부터 추출된 멜라닌을 나타냄) 및 표준물을 함유하는 튜브를 실온으로 냉각시키고, 실온에서 5 분 동안 13,000 rpm에서 원심분리하였다. 200 μL의 샘플 (단일 웰) 또는 표준물 (이중 웰)을 96-웰 플레이트의 적절한 웰로 옮겼다. 200 μL의 가용성 물질을 이중 웰에서 블랭크로 지정된 웰에 첨가하였다. 각각의 웰의 490nm에서의 흡광도(OD490)를 Molecular Devices Vmax 플레이트 판독기 (선택된 Automix 기능으로)로 측정하였다.At least 16 hours after initiation of melanin extraction, the tubes containing samples (representing melanin extracted from MelanoDerm™ tissue) and standards were cooled to room temperature and centrifuged at 13,000 rpm for 5 minutes at room temperature. 200 μL of samples (single wells) or standards (double wells) were transferred to the appropriate wells of a 96-well plate. 200 μL of soluble material was added to wells designated as blanks in duplicate wells. The absorbance (OD490) at 490 nm of each well was measured with a Molecular Devices Vmax plate reader (with Automix function selected).

MTT의 잔류 시험 물품 감소의 평가를 위한 사멸된 대조군Killed Control for Assessment of Residual Test Article Reduction of MTT

가능한 잔류 시험 물품이 MTT를 직접적으로 감소시키도록 작용하지 않는다는 것을 입증하기 위해, 기능성 확인을 시험 재료가 조직에 결합하고 거짓 MTT 감소 신호를 발생시키지 않는다는 것을 나타내도록 한정적 검정에서 수행하였다.To demonstrate that the possible residual test article does not act to directly reduce MTT, a functional check was performed in a qualifying assay to indicate that the test material binds to tissue and does not generate a false MTT reduction signal.

잔류 시험 물품이 MTT를 감소시키도록 직접적으로 작용하는지를 결정하기 위해, 동결 사멸된 대조군 조직을 사용하였다. 동결 사멸된 조직은 비처리 MelanoDerm™/EpiDerm™(멜라닌세포가 없는 MelanoDerm™) 조직을 적어도 밤새 -20℃ 동결기에 배치하고, 실온으로 해동하고, 이후 재동결시킴으로써 제조하였다. 사멸되면, 조직은 동결기에서 비한정적으로 저장될 수 있다. 동결 사멸된 조직을 MatTek Corporation으로부터 이미 제조된 채 받고, 사용까지 -20℃ 동결기에서 저장할 수 있다. 잔류 시험 물품 감소를 시험하기 위해, 사멸된 조직을 일반 방식으로 시험 물품으로 처리하였다. 모든 검정 절차를 생존 가능 조직에서와 동일한 방식으로 수행하였다. MTT 감소의 작은 양이 사멸된 조직 내에 잔류 NADH 및 연관된 효소로부터 예상되므로, 무균 탈이온수에 의해 치료된 적어도 하나의 사멸된 대조군(음성 사멸된 대조군)은 동시에 시험될 것이다.To determine whether residual test articles acted directly to reduce MTT, cryo-killed control tissues were used. Freeze-killed tissue was prepared by placing untreated MelanoDerm™/EpiDerm™ (Melanocyte-free MelanoDerm™) tissue in a -20°C freezer at least overnight, thawing to room temperature, and then re-freezing. Once dead, the tissue can be stored in a freezer for indefinitely. Freeze killed tissue can be received pre-prepared from MatTek Corporation and stored in a -20°C freezer until use. To test for residual test article reduction, killed tissue was treated with test article in the usual manner. All assay procedures were performed in the same manner as for viable tissues. At least one killed control treated with sterile deionized water (negative killed control) will be tested concurrently, as a small amount of MTT reduction is expected from residual NADH and associated enzymes in the killed tissue.

아주 적은 MTT 감소 또는 비감소가 시험 물품 치료된 사멸된 대조군에서 관찰되는 경우, 시험 물품 치료된 생존 가능 조직에서 관찰된 MTT 감소는 생존 가능 세포 때문일 수 있다. (치료된 생존 가능 조직에서의 양에 대비해) 치료된 사멸된 대조군에서 상당한 MTT 감소가 있는 경우, 추가 단계가 화학물질 감소를 설명하도록 취해져야 하거나, 시험 물품은 이 시스템에서 치료 불가능으로 생각될 수 있다. If a very small decrease or no decrease in MTT is observed in the test article treated killed control group, the observed decrease in MTT in the test article treated viable tissue may be due to viable cells. If there is a significant reduction in MTT in the treated killed control group (relative to the amount in the treated viable tissue), additional steps must be taken to account for the chemical reduction, or the test article may be considered incurable in this system. have.

데이터 분석data analysis

블랭크 웰의 평균 OD550 값을 계산하였다. 음성/용매 대조군(들)의 보정된 평균 OD550 값으로부터 블랭크 웰의 평균 OD550 값을 공제함으로써 음성/용매 대조군(들)의 평균 보정된 OD550 값을 결정하였다. 개별 시험 물품 노출 및 양성 대조군 노출의 보정된 OD550 값을 블랭크 웰에 대한 각각의 평균 OD550 값으로부터 공제함으로써 결정하였다. Excel 스프레드시트를 이용하여 모든 계산을 수행하였다. 논의된 알고리즘이 처리 그룹 수준에서 최종 종점 분석을 계산하도록 수행되더라고, 개별 반복실행에 동일한 계산이 적용될 수 있다.The mean OD550 values of blank wells were calculated. The mean corrected OD550 values of the negative/solvent control(s) were determined by subtracting the mean OD550 values of the blank wells from the corrected mean OD550 values of the negative/solvent control(s). The corrected OD550 values of individual test article exposures and positive control exposures were determined by subtracting the respective mean OD550 values for the blank wells. All calculations were performed using an Excel spreadsheet. Although the algorithm discussed is performed to compute the final endpoint analysis at the treatment group level, the same calculations can be applied to individual iterations.

보정된 시험 물품 노출 OD550 = 시험 물품 노출 OD550 - 블랭크 평균 OD550 Calibrated Test Article Exposure OD 550 = Test Article Exposure OD 550 - Blank Average OD 550

사멸된 대조군(KC)이 사용되는 경우, 시험 물품 잔류물에 의해 직접적으로 감소한 MTT의 양을 보정하기 위해 하기 추가 계산을 수행하였다. 음성 대조군 사멸된 대조군에 대한 원 OD550 값을 시험 물품 치료된 사멸된 대조군의 순 OD550 값을 결정하도록 각각의 시험 물품 치료된 사멸된 대조군에 대한 원 OD550 값으로부터 공제하였다.When a killed control (KC) was used, the following additional calculations were performed to correct for the amount of MTT directly reduced by the test article residue. The raw OD550 value for the negative control killed control was subtracted from the original OD550 value for each test article treated killed control to determine the net OD550 value of the test article treated killed control.

각각의 시험 물품 KC에 대한 순 OD550 = 원 OD550 시험 물품 KC - 원 OD550 음성/용매 대조군 KC Net OD 550 for each test article KC = original OD 550 test article KC - original OD 550 negative/solvent control KC

순 OD550 값은 특정한 노출 시간에 시험 물품 잔류물에 의한 직접적인 감소로 인해 감소한 MTT의 양을 나타낸다. 일반적으로, 순 OD550 값이 0.150 초과인 경우, MTT 감소의 순 양은 생존 가능 치료된 조직의 보정된 OD550 값으로부터 공제되어 최종 보정된 OD550 값이 얻어질 것이다. 이후, 이 최종 보정된 OD550 값은 대조군 생존력의 %를 결정하도록 이용될 것이다.The net OD550 value represents the reduced amount of MTT due to a direct reduction by the test article residue at a particular exposure time. In general, if the net OD550 value is greater than 0.150, the net amount of MTT reduction will be subtracted from the corrected OD550 value of viable treated tissue to obtain a final corrected OD550 value. This final corrected OD550 value will then be used to determine the % of control viability.

최종 보정된 OD550 = 보정된 시험 물품 OD550(생존 가능) - 순 OD550 시험 물품(KC)final calibrated OD 550 = calibrated test article OD 550 (viable) - net OD 550 test article (KC)

마지막으로, 대조군 계산의 하기 %가 이루어질 것이다:Finally, the following % of control calculations will be made:

% 생존력 = [(시험 물품 또는 양성 대조군의 최종 보정된 OD550) / (음성/용매 대조군(들)의 보정된 평균 OD550)] × 100% viability = [(final corrected OD 550 of test article or positive control) / (corrected average OD 550 of negative/solvent control(s)] × 100

멜라닌 분석: 흡광도 원 데이터를 캡쳐하고, 프린트 파일로 저장하고, Excel 스프레드시트로 불러오기하였다. 각 시험 샘플 (0일에 비처리 MelanoDerm™ 조직, 7일에 각 시험 물품, 음성/용매 또는 양성 대조군으로 처리된 MelanoDerm™ 조직으로부터 추출된 멜라닌을 나타냄) 및 멜라닌 표준물의 OD490 값을 결정하였다. 시험 샘플 및 각 멜라닌 표준물에 대한 보정된 OD490 값을 블랭크 웰의 평균 OD490 값을 공제함으로써 결정하였다. 표준 곡선을 표준물의 농도 (mg/mL) (y-축) 대 상응하는 보정된 흡광도로 플롯팅하였다. 각 개별 조직에서 멜라닌의 양을 표준 곡선 (선형)으로부터 삽입하였다. 마지막으로, 각 시험 물품 또는 대조 처리 군 각각에 대한 평균 멜라닌 농도를 계산하였다.Melanin Analysis: Absorbance raw data was captured, saved as a print file, and imported into an Excel spreadsheet. OD490 values of each test sample (representing untreated MelanoDerm™ tissue on day 0, melanin extracted from MelanoDerm™ tissue treated with each test article on day 7, negative/solvent or positive control) and melanin standards were determined. The corrected OD490 values for the test samples and each melanin standard were determined by subtracting the mean OD490 values of the blank wells. The standard curve was plotted as the concentration (mg/mL) of the standard (y-axis) versus the corresponding corrected absorbance. The amount of melanin in each individual tissue was interpolated from a standard curve (linear). Finally, the average melanin concentration for each test article or control treatment group was calculated.

결과result

도 131은 시험 물품, 시험 조성물, 양성 대조군, 및 용매 대조군에 대한 평균 조직 생존력 및 멜라닌 농도 결과를 요약한 것이다. 화합물 포함 조성물 #1 및 #2는 단일 조성물로 조합될 때 상승 작용을 보였다. 131 summarizes mean tissue viability and melanin concentration results for test article, test composition, positive control, and solvent control. Compositions #1 and #2 comprising compounds showed synergy when combined into a single composition.

도 132은 시험 물품, 시험 조성물, 양성 대조군, 및 용매 대조군에 대한 평균 조직 생존력 및 멜라닌 농도 결과를 요약한 것이다. 화합물 포함 조성물 #2, #3, #4, 및 #5는 단일 조성물로 조합될 때 상승 작용을 보였다.132 summarizes mean tissue viability and melanin concentration results for test article, test composition, positive control, and solvent control. Compositions #2, #3, #4, and #5 comprising compounds showed synergy when combined into a single composition.

실시예 34Example 34

말라세지아 - 유래 화합물 및/또는 이의 화학적 유사체를 함유하는 조성물의 멜라닌생성 잠재력Melanogenic Potential of Compositions Containing Malassezia-derived Compounds and/or Chemical Analogs thereof

이 연구의 목적은 말라세지아-유래 화합물 및/또는 이의 화학적 유사체를 함유하는 조성물에 노출된 B16 멜라닌세포의 멜라닌생성 및 생존력을 관찰하고 보고하는 것이다.The purpose of this study was to observe and report the melanogenesis and viability of B16 melanocytes exposed to compositions containing Malassezia-derived compounds and/or chemical analogs thereof.

물질 및 시약Substances and reagents

플레이팅 배지에는 L-글루타민, FBS, 페니실린/스트렙토마이신, 및 L-글루타민 없이 DMEM이 포함될 것이다. 검정 배지에는 페놀 레드 및 L-글루타민, FBS, 페니실린/스트렙토마이신, L-글루타민, 및 MSH 없이 DMEM이 포함될 것이다. 다른 시약에는 코직산, DMSO, 및 MTT가 포함될 것이다. 시험된 세포는 B16 세포 (ATCC CRL-6475)일 것이다.The plating medium will include DMEM without L-glutamine, FBS, penicillin/streptomycin, and L-glutamine. Assay medium will include DMEM without phenol red and L-glutamine, FBS, penicillin/streptomycin, L-glutamine, and MSH. Other reagents will include kojic acid, DMSO, and MTT. The cells tested will be B16 cells (ATCC CRL-6475).

프로토콜protocol

B16 멜라닌세포를 70% 포화상태까지 배양하고, 수확하였다. 세포를 4000 개 세포/웰의 밀도로 96-웰 플레이트에 시딩하고, 밤새 부착되게 하였다. 다음 날, 시험 물품, 시험 조성물, 및 대조군을 B16 검정 배지에서 희석하였다. 밤새 배지를 흡기시키고, 200 ul의 시험 물품 및 대조군을 적용하였다. 세포를 37℃ 및 10% CO2에서 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 72 시간 인큐베이션 후, 흡광도를 540 nm에서 판독하였다. 배지를 제거하고, 1 mg/mL의 MTT를 함유하는 100 ul의 플레이팅 배지로 교체하고, 37℃ 및 10% CO2에서 2 시간 동안 인큐베이션하였다. MTT 배지를 제거하고, 200 ul의 95% 에탄올/5% 이소프로판올로 교체하고, 15 분 동안 진탕되게 하였다. 이후, MTT 흡광도를 570 nm에서 판독하였다.B16 melanocytes were cultured to 70% confluency and harvested. Cells were seeded in 96-well plates at a density of 4000 cells/well and allowed to attach overnight. The next day, test articles, test compositions, and controls were diluted in B16 assay medium. The medium was aspirated overnight and 200 ul of test article and control were applied. Cells were incubated at 37° C. and 10% CO 2 for 72 hours. After 72 h incubation, the absorbance was read at 540 nm. The medium was removed and replaced with 100 ul of plating medium containing 1 mg/mL of MTT and incubated at 37° C. and 10% CO 2 for 2 hours. The MTT medium was removed and replaced with 200 ul of 95% ethanol/5% isopropanol and allowed to shake for 15 minutes. The MTT absorbance was then read at 570 nm.

결과result

조성물 #1 내지 #5를 포함하여 본 발명의 화합물 및 조성물은 멜라닌생성을 억제할 것으로 예상된다. 본 발명의 조성물은, 예를 들어, 적어도 하나의 성분 화합물에 비해 더 강력한 멜라닌생성-억제 활성을 나타낼 것으로 예상된다. 마찬가지로, 본 발명의 소정 조성물은, 예를 들어, 적어도 하나의 성분 화합물에 비해 덜 효과적인 멜라닌생성-억제 활성을 보일 것으로 예상된다.The compounds and compositions of the present invention, including compositions #1 to #5, are expected to inhibit melanogenesis. The compositions of the present invention are expected to exhibit more potent melanogenesis-inhibiting activity, for example, compared to at least one component compound. Likewise, certain compositions of the present invention are expected to exhibit less effective melanogenesis-inhibiting activity compared to, for example, at least one component compound.

실시예 35Example 35

시험관내 효능In vitro efficacy

본 발명의 화합물 및 조성물은 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하고, 멜라닌세포 활성, 멜라닌 생산, 멜라닌 농도, 멜라노솜 생물발생, 및/또는 멜라노솜 이동을 조절할 것으로 예상된다. 또한, 본 발명의 특정 화합물 및 조성물은 덜 강력하게 이러한 생물학적 과정에 영향을 줄 것으로 상정된다. 그러한 화합물 및 조성물은 더 강력한 종에 비해 더 유리한 독성 프로파일을 가질 수 있다.The compounds and compositions of the present invention are expected to induce melanocyte apoptosis and modulate melanocyte activity, melanin production, melanin concentration, melanosome biogenesis, and/or melanosome migration. It is also contemplated that certain compounds and compositions of the present invention will affect these biological processes less potently. Such compounds and compositions may have a more favorable toxicity profile compared to more potent species.

실시예 36Example 36

생체내 효능In vivo efficacy

본 발명의 화합물 및 조성물은 피부를 밝게 하고 다양한 장애에 의해 생긴 과색소침착/저색소침착을 개선하는 것을 포함하여 피부 색소침착을 조절할 것으로 예상된다. 본 발명의 화합물 및 조성물은, 예를 들어, 반감기 및 흡수의 면에서 양호한 약물역학적 프로필을 나타낼 것으로 추가로 예상된다. 소정의 화합물은 더 긴 반감기를 나타내는 한편, 다른 것은 더 짧은 반감기를 나타낼 것이다. 유사하게, 소정의 화합물은 상이한 흡수 프로필을 나타낼 것이고, 몇몇 화합물은 완전히 흡수되는 데 더 길게 걸리고, 다른 것은 완전히 흡수되는 데 더 적은 시간이 걸린다.The compounds and compositions of the present invention are expected to lighten the skin and modulate skin pigmentation, including ameliorating hyperpigmentation/hypopigmentation caused by various disorders. It is further expected that the compounds and compositions of the present invention will exhibit good pharmacodynamic profiles, for example in terms of half-life and absorption. Certain compounds will exhibit longer half-lives, while others will exhibit shorter half-lives. Similarly, certain compounds will exhibit different absorption profiles, some compounds take longer to be fully absorbed and others take less time to be fully absorbed.

실시예 37Example 37

말라세진 및 인디루빈의 화학적 유사체의 합성Synthesis of chemical analogues of malacetin and indirubin

AB17590의 합성Synthesis of AB17590

도 133a에 나타나 있는 바와 같이, 테트라하이드로푸란 (250 mL) 중 화합물 1a (25.0 g, 0.357 mol, 1.0 eq)의 용액에 에티닐마그네슘 브로마이드 (THF 중 0.5 M, 1.07 L, 0.535 mol, 1.5 eq)를 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 2 시간 동안 교반하였다. 그 후에, 혼합물을 포화 수성 암모늄 클로라이드로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(페트롤륨 에테르 중 0 내지 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 화합물 1b (9.5 g, 27%)를 제공하였다. TLC: PE:EA = 20:1, 254 nm; Rf (화합물 1a) = 0.3; Rf (화합물 1b) = 0.7.As shown in Figure 133a, in a solution of compound la (25.0 g, 0.357 mol, 1.0 eq) in tetrahydrofuran (250 mL) ethynylmagnesium bromide (0.5 M in THF, 1.07 L, 0.535 mol, 1.5 eq) was added at 0 °C, and the reaction mixture was warmed to room temperature and stirred for 2 h. After that time, the mixture was quenched with saturated aqueous ammonium chloride and extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (0-10% ethyl acetate in petroleum ether) to give compound 1b (9.5 g, 27%). TLC: PE:EA = 20:1, 254 nm; R f (compound 1a) = 0.3; R f (compound 1b) = 0.7.

테트라하이드로푸란 (100 mL) 중 화합물 1b (9.5 g, 98.96 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 디메틸포름아미드 (50 mL) 중 60% 소듐 하이드라이드 (4.7 g, 0.119 mol, 1.2 eq)의 용액을 질소 분위기 하에 0℃에서 첨가하였다. 30 분 후, 디메틸 설페이트 (22.4 g, 0.178 mol, 1.8 eq)를 0℃에서 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물이 실온으로 가온되게 하고, 실온에서 30 분 동안 교반한 후, 아세트산 (1 ml)을 서서히 첨가하였다. 생성물을 반응 혼합물로부터 바로 증류하였다. 이에 따라 화합물 1c (10.0 g, 91% 수율)를 수득하였다.To a mixture of compound 1b (9.5 g, 98.96 mmol, 1.0 eq) in tetrahydrofuran (100 mL) was added a solution of 60% sodium hydride (4.7 g, 0.119 mol, 1.2 eq) in dimethylformamide (50 mL) with nitrogen It was added at 0° C. under atmosphere. After 30 min, dimethyl sulfate (22.4 g, 0.178 mol, 1.8 eq) was added at 0°C. After addition, the reaction mixture was allowed to warm to room temperature, stirred at room temperature for 30 min, and then acetic acid (1 ml) was added slowly. The product was distilled directly from the reaction mixture. Thus, compound 1c (10.0 g, 91% yield) was obtained.

트리에틸아민 (80 mL) 중 화합물 1 (8.0 g, 24.02 mmol, 1.0 eq) 및 화합물 1c (2.9 g, 26.43 mmol, 1.1 eq)의 용액에 아이오드화제1구리 (456 mg, 2.40 mmol, 0.1 eq) 및 Pd(PPh3)2Cl2 (337 mg, 0.480 mmol, 0.02 eq)를 질소 하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(페트롤륨 에테르 중 0 내지 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 화합물 2 (7.0 g, 92%)를 제공하였다. TLC: PE: EA=10:1, 254 nm; Rf (화합물 1) =0.8; Rf (화합물 2) =0.6.To a solution of compound 1 (8.0 g, 24.02 mmol, 1.0 eq) and compound 1c (2.9 g, 26.43 mmol, 1.1 eq) in triethylamine (80 mL) cuprous iodide (456 mg, 2.40 mmol, 0.1 eq) ) and Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 (337 mg, 0.480 mmol, 0.02 eq) were added under nitrogen at room temperature. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. The reaction mixture was diluted with water and extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (0-10% ethyl acetate in petroleum ether) to give compound 2 (7.0 g, 92%). TLC: PE: EA=10:1, 254 nm; R f (Compound 1) =0.8; R f (Compound 2) =0.6.

오븐-건조 플라스크에 디옥산 (650 mL) 중 플래티넘 디클로라이드 (694 mg, 2.06 mmol, 0.1 eq), 소듐 카르보네이트 (3.3 g, 30.95 mmol, 1.5 eq), 트리스(펜타플루오로페닐) 포스핀 (2.2 g, 4.13 mmol, 0.2 eq), 6-메틸 인돌 (4.8 g, 41.27 mmol, 2.0 eq) 및 화합물 2 (6.5 g, 20.63 mmol, 1.0 eq)의 혼합물을 첨가하였다. 플라스크를 질소로 탈기시키고, 밀봉하고, 100℃로 16 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물, 포화 염수로 추출하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(페트롤륨 에테르 중 0 내지 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 화합물 3 (3.0 g, 36%)를 제공하였다. TLC: PE: EA=10:1, 254 nm; Rf (화합물 2) =0.6; Rf (화합물 3) =0.2.Platinum dichloride (694 mg, 2.06 mmol, 0.1 eq), sodium carbonate (3.3 g, 30.95 mmol, 1.5 eq), tris(pentafluorophenyl) phosphine in an oven-dried flask in dioxane (650 mL) A mixture of (2.2 g, 4.13 mmol, 0.2 eq), 6-methyl indole (4.8 g, 41.27 mmol, 2.0 eq) and compound 2 (6.5 g, 20.63 mmol, 1.0 eq) was added. The flask was degassed with nitrogen, sealed and heated to 100° C. for 16 h. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. The solvent was concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with ethyl acetate and extracted with water, saturated brine. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (0-10% ethyl acetate in petroleum ether) to give compound 3 (3.0 g, 36%). TLC: PE: EA=10:1, 254 nm; R f (Compound 2) =0.6; R f (Compound 3) =0.2.

테트라하이드로푸란 (30 mL) 중 화합물 3 (3.0 g, 7.50 mmol, 1.0 eq)의 용액에 소듐 메탄올레이트 (MeOH 중 5 M, 6.0 mL, 29.98 mmol, 4.0 eq)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물이 실온으로 가온되게 하고, 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(페트롤륨 에테르 중 0 내지 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 화합물 4 (1.5 g, 66%)을 제공하였다. TLC: PE: EA=5:1, 254 nm; Rf (화합물 3) =0.7; Rf (화합물 4) =0.4.To a solution of compound 3 (3.0 g, 7.50 mmol, 1.0 eq) in tetrahydrofuran (30 mL) was added sodium methanolate (5 M in MeOH, 6.0 mL, 29.98 mmol, 4.0 eq) at 0°C. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 2 h. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (0-10% ethyl acetate in petroleum ether) to give compound 4 (1.5 g, 66%). TLC: PE: EA=5:1, 254 nm; R f (Compound 3) =0.7; R f (Compound 4) =0.4.

아르곤 하에 0℃에서 건조된 500 mL 3-목 둥근-바닥 플라스크에 디메틸포름아미드 (10 mL)를 첨가하였다. 그 후에, 5℃ 미만의 내부 온도를 10 분에 걸쳐 유지하면서 포스포러스 옥시클로라이드 (1.2 g, 7.60 mmol, 1.2 eq)를 서서히 첨가하였다. 0℃에서 30 분 동안 교반한 후, 5℃ 미만의 내부 온도를 10 분에 걸쳐 유지하면서 디메틸포름아미드 (20 mL) 중 화합물 4 (1.9 g, 6.33 mmol, 1.0 eq)의 용액을 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후(헥산 중 20% 에틸 아세테이트를 사용하여 TLC에 의해 모니터링), 반응 혼합물을 포화 수성 소듐 바이카르보네이트 (50 mL)에 붓고, 1 시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 × 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물, 포화 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시켰다. 용매를 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(페트롤륨 에테르 중 10 내지 50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 화합물 5 (1.8 g, 89%)를 수득하였다. TLC: PE: EA=1:1, 254 nm; Rf (화합물 4) =0.8; Rf (화합물 5) =0.5.To a dried 500 mL 3-neck round-bottom flask at 0° C. under argon was added dimethylformamide (10 mL). Thereafter, phosphorous oxychloride (1.2 g, 7.60 mmol, 1.2 eq) was added slowly while maintaining the internal temperature below 5° C. over 10 minutes. After stirring at 0° C. for 30 min, a solution of compound 4 (1.9 g, 6.33 mmol, 1.0 eq) in dimethylformamide (20 mL) was added slowly while maintaining the internal temperature below 5° C. over 10 min. The resulting mixture was stirred at room temperature for 16 h. After the reaction was complete (monitored by TLC using 20% ethyl acetate in hexanes), the reaction mixture was poured into saturated aqueous sodium bicarbonate (50 mL) and stirred for 1 h. The resulting mixture was extracted with ethyl acetate (2 x 100 mL). The combined organic layers were washed with water, saturated brine and dried over sodium sulfate. The solvent was filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (10-50% ethyl acetate in petroleum ether) to give compound 5 (1.8 g, 89%). TLC: PE: EA=1:1, 254 nm; R f (Compound 4) =0.8; R f (compound 5) =0.5.

테트라하이드로푸란 (20 mL) 중 화합물 5 (1.8 g, 5.49 mmol, 1.0 eq)의 용액에 디-3차-부틸 디카르보네이트 (3.0 g, 13.72 mmol, 2.5 eq) 및 4-디메틸아미노피리딘 (1.4 g, 11.25 mol, 2.05 eq)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물이 실온으로 가온되게 하고, 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 1N 염산, 포화 수성 소듐 바이카르보네이트 (300 mL) 및 염수 (300 mL)로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(페트롤륨 에테르 중 0 내지 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 화합물 6 (2.4 g, 82%)을 수득하였다. TLC: PE: EA=10:1, 254 nm; Rf (화합물 5) =0.1; Rf (화합물 6) =0.5.To a solution of compound 5 (1.8 g, 5.49 mmol, 1.0 eq) in tetrahydrofuran (20 mL) di-tert-butyl dicarbonate (3.0 g, 13.72 mmol, 2.5 eq) and 4-dimethylaminopyridine (1.4 g, 11.25 mol, 2.05 eq) was added at 0°C. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 3 h. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure and the residue was diluted with ethyl acetate and washed with 1N hydrochloric acid, saturated aqueous sodium bicarbonate (300 mL) and brine (300 mL). The organic layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel chromatography (0-10% ethyl acetate in petroleum ether) to give compound 6 (2.4 g, 82%). TLC: PE: EA=10:1, 254 nm; R f (compound 5) =0.1; R f (compound 6) =0.5.

3차-부탄올 (60 mL) 중 화합물 6 (2.4 g, 4.55 mmol, 1.0 eq)의 용액에 2-메틸-3-부텐 (30 mL), 및 이어서 소듐 클로라이트 (8.2 g, 90.91 mmol, 20.0 eq), 일염기 소듐 포스페이트 (14.2 g, 90.91 mmol, 20.0 eq) 및 물 (60 mL)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물이 실온으로 서서히 가온되게 하고, 실온에서 15 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (100 mL)으로 희석하고, 분리하였다. 유기층을 물 (80 mL), 염수 (80 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 미정제 화합물 7 (2.5 g, 99%)을 수득하였다. TLC: PE: EA=2:1, 254 nm; Rf (화합물 6) =0.7; Rf (화합물 7) =0.3.To a solution of compound 6 (2.4 g, 4.55 mmol, 1.0 eq) in tert-butanol (60 mL) 2-methyl-3-butene (30 mL), followed by sodium chlorite (8.2 g, 90.91 mmol, 20.0 eq) ), monobasic sodium phosphate (14.2 g, 90.91 mmol, 20.0 eq) and water (60 mL) were added at 0°C. The mixture was allowed to warm slowly to room temperature and stirred at room temperature for 15 h. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. The reaction mixture was diluted with dichloromethane (100 mL) and separated. The organic layer was washed with water (80 mL), brine (80 mL), dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to give crude compound 7 (2.5 g, 99%). TLC: PE: EA=2:1, 254 nm; R f (Compound 6) =0.7; R f (Compound 7) =0.3.

디메틸포름아미드 (30 mL) 중 화합물 7 (2.5 g, 4.60 mmol, 1.0 eq)의 용액에 포타슘 카르보네이트 (952 mg, 6.89 mmol, 1.5 eq) 및 메틸 아이오다이드 (978 mg, 6.89 mmol, 1.5 eq)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물이 실온으로 가온되게 하고, 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고, 물 (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(페트롤륨 에테르 중 5 내지 17% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 화합물 8 (2.3 g, 89%)를 수득하였다. TLC: PE: EA=5:1, 254 nm; Rf (화합물 7) =0.1; Rf (화합물 8) =0.6.To a solution of compound 7 (2.5 g, 4.60 mmol, 1.0 eq) in dimethylformamide (30 mL) potassium carbonate (952 mg, 6.89 mmol, 1.5 eq) and methyl iodide (978 mg, 6.89 mmol, 1.5 eq) was added at 0°C. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 2 h. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. The reaction mixture was diluted with ethyl acetate (100 mL) and washed with water (100 mL) and brine (100 mL). The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (5-17% ethyl acetate in petroleum ether) to give compound 8 (2.3 g, 89%). TLC: PE: EA=5:1, 254 nm; R f (Compound 7) =0.1; R f (compound 8) =0.6.

염산 (EA 중 3 M, 30 mL) 중 화합물 8 (1.3 g, 2.33 mmol, 1.0 eq)의 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응을 TLC에 의해 모니터링하였다. 그 후에, 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(페트롤륨 에테르 중 10 내지 25% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 화합물 AB17590 (502 mg, 61%)을 황색 고형물로서 제공하였다. TLC: PE: EA=3:1, 254 nm; Rf (화합물 8) =0.8; Rf (화합물 AB17590) =0.5; LC-MS: 359 (M+1)+;A mixture of compound 8 (1.3 g, 2.33 mmol, 1.0 eq) in hydrochloric acid (3 M in EA, 30 mL) was stirred at room temperature for 16 h. The reaction was monitored by TLC. After that, the mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (10-25% ethyl acetate in petroleum ether) to give compound AB17590 (502 mg, 61%) as a yellow solid. TLC: PE: EA=3:1, 254 nm; R f (compound 8) =0.8; R f (Compound AB17590) =0.5; LC-MS: 359 (M+1) + ;

Figure pct00249
Figure pct00249

AB17653의 합성Synthesis of AB17653

도 133b에 나타나 있는 바와 같이, 메탄올 (10 mL) 중 화합물 1 (721 mg, 3.20 mmol, 1.0 eq), 화합물 1a (560 mg, 3.20 mmol, 1.0 eq) 및 소듐 카르보네이트 (866 mg, 8.17 mmol, 2.55 eq)의 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응의 완료 후, 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 메탄올 및 물로 세척하여 화합물 AB17653 (979 mg, 89%)을 적색 고형물로서 수득하였다. TLC: PE/EA = 3/1, 254 nm; Rf (화합물 1) = 0.6; Rf (화합물 AB17653) = 0.4; LC-MS: 338.95 (M-1)-;As shown in Figure 133b, compound 1 (721 mg, 3.20 mmol, 1.0 eq), compound la (560 mg, 3.20 mmol, 1.0 eq) and sodium carbonate (866 mg, 8.17 mmol) in methanol (10 mL) , 2.55 eq) was stirred for 3 hours at room temperature under a nitrogen atmosphere. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. After completion of the reaction, the mixture was filtered and the filter cake was washed with methanol and water to give compound AB17653 (979 mg, 89%) as a red solid. TLC: PE/EA = 3/1, 254 nm; R f (Compound 1) = 0.6; R f (Compound AB17653) = 0.4; LC-MS: 338.95 (M-1) - ;

Figure pct00250
Figure pct00250

AB17654의 합성Synthesis of AB17654

도 133b에 나타나 있는 바와 같이, 피리딘 (30 mL) 중 화합물 AB17653 (979 mg, 2.88 mmol, 1.0 eq) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (520 mg, 7.49 mmol, 2.6 eq)의 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 LCMS에 의해 모니터링하였다. 반응의 완료 후, 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 고형물이 보일 때까지 1 N HCl을 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 1 N NaOH에 용해시켰다. 그 후에, 3 N HCl을 첨가하여 pH를 5로 조절하고, 여과하였다. 여과 케이크를 1 N HCl로 세척하고, 화합물 AB17654 (500 mg, 48%)를 적색 고형물로서 수득하였다. LC-MS: 357.95 (M+1)+; As shown in Figure 133b, a mixture of compound AB17653 (979 mg, 2.88 mmol, 1.0 eq) and hydroxylamine hydrochloride (520 mg, 7.49 mmol, 2.6 eq) in pyridine (30 mL) at 120 °C under a nitrogen atmosphere. was stirred for 2 hours. The progress of the reaction mixture was monitored by LCMS. After completion of the reaction, the mixture was concentrated under reduced pressure and 1 N HCl was added until a solid was visible. The mixture was filtered and the filter cake was dissolved in 1 N NaOH. After that, the pH was adjusted to 5 by addition of 3 N HCl and filtered. The filter cake was washed with 1 N HCl to give compound AB17654 (500 mg, 48%) as a red solid. LC-MS: 357.95 (M+1) + ;

Figure pct00251
Figure pct00251

AB17655의 합성Synthesis of AB17655

도 133b에 나타나 있는 바와 같이, 메탄올 (10 mL) 중 화합물 2 (637 mg, 3.86 mmol, 1.0 eq), 화합물 1a (676 mg, 3.86 mmol, 1.0 eq) 및 소듐 카르보네이트 (1044 mg, 9.84 mmol, 2.55 eq)의 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응의 완료 후, 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 메탄올 및 물로 세척하여 화합물 AB17655 (1027 mg, 95%)을 적색 고형물로서 수득하였다. LC-MS: 281.05 (M+1)+;As shown in Figure 133b, compound 2 (637 mg, 3.86 mmol, 1.0 eq), compound la (676 mg, 3.86 mmol, 1.0 eq) and sodium carbonate (1044 mg, 9.84 mmol) in methanol (10 mL) , 2.55 eq) was stirred for 3 hours at room temperature under a nitrogen atmosphere. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. After completion of the reaction, the mixture was filtered and the filter cake was washed with methanol and water to give compound AB17655 (1027 mg, 95%) as a red solid. LC-MS: 281.05 (M+1) + ;

Figure pct00252
Figure pct00252

AB17656의 합성Synthesis of AB17656

도 133b에 나타나 있는 바와 같이, 피리딘 (30 mL) 중 화합물 AB17655 (1027 mg, 3.67 mmol, 1.0 eq) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (663 mg, 9.54 mmol, 2.6 eq)의 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 LCMS에 의해 모니터링하였다. 반응의 완료 후, 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 고형물이 보일 때까지 1 N HCl을 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 1 N NaOH에 용해시켰다. 그 후에, 3 N HCl을 첨가하여 pH를 5로 조절하고, 여과하였다. 여과 케이크를 1 N HCl로 세척하고, 화합물 AB17656 (500 mg, 48%)을 적색 고형물로서 수득하였다. LC-MS: 296.00 (M+1)+; As shown in Figure 133b, a mixture of compound AB17655 (1027 mg, 3.67 mmol, 1.0 eq) and hydroxylamine hydrochloride (663 mg, 9.54 mmol, 2.6 eq) in pyridine (30 mL) at 110° C. under a nitrogen atmosphere. was stirred for 2 hours. The progress of the reaction mixture was monitored by LCMS. After completion of the reaction, the mixture was concentrated under reduced pressure and 1 N HCl was added until a solid was visible. The mixture was filtered and the filter cake was dissolved in 1 N NaOH. After that, the pH was adjusted to 5 by addition of 3 N HCl and filtered. The filter cake was washed with 1 N HCl to give compound AB17656 (500 mg, 48%) as a red solid. LC-MS: 296.00 (M+1) + ;

Figure pct00253
Figure pct00253

AB17657의 합성Synthesis of AB17657

도 133b에 나타나 있는 바와 같이, 메탄올 (10 mL) 중 화합물 3 (362 mg, 2.46 mmol, 1.0 eq), 화합물 1a (431 mg, 2.46 mmol, 1.0 eq) 및 소듐 카르보네이트 (666 mg, 6.28 mmol, 2.55 eq)의 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응의 완료 후, 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 메탄올 및 물로 세척하여 화합물 4 (606 mg, 93%)를 적색 고형물로서 수득하였다. TLC: PE/EA = 1/1, 254 nm; Rf (화합물 3) = 0.7; Rf (화합물 4) = 0.5.As shown in Figure 133b, compound 3 (362 mg, 2.46 mmol, 1.0 eq), compound la (431 mg, 2.46 mmol, 1.0 eq) and sodium carbonate (666 mg, 6.28 mmol) in methanol (10 mL) , 2.55 eq) was stirred for 3 hours at room temperature under a nitrogen atmosphere. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. After completion of the reaction, the mixture was filtered and the filter cake was washed with methanol and water to give compound 4 (606 mg, 93%) as a red solid. TLC: PE/EA = 1/1, 254 nm; R f (Compound 3) = 0.7; R f (compound 4) = 0.5.

피리딘 (20 mL) 중 화합물 4 (606 mg, 2.31 mmol, 1.0 eq) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (418 mg, 6.01 mmol, 2.6 eq)의 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응의 완료 후, 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 고형물이 보일 때까지 1 N HCl을 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 1 N NaOH에 용해시켰다. 그 후에, 3 N HCl을 첨가하여 pH를 5로 조절하고, 여과하였다. 여과 케이크를 1 N HCl로 세척하고, 화합물 AB17657 (500 mg, 78%)을 갈색 고형물로서 수득하였다. TLC: PE/EA = 1/1, 254 nm; Rf (화합물 4) = 0.5; Rf (화합물 AB17657) = 0.4; LC-MS: 278.10 (M+1)+; A mixture of compound 4 (606 mg, 2.31 mmol, 1.0 eq) and hydroxylamine hydrochloride (418 mg, 6.01 mmol, 2.6 eq) in pyridine (20 mL) was stirred at 120° C. under a nitrogen atmosphere for 2 h. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. After completion of the reaction, the mixture was concentrated under reduced pressure and 1 N HCl was added until a solid was visible. The mixture was filtered and the filter cake was dissolved in 1 N NaOH. After that, the pH was adjusted to 5 by addition of 3 N HCl and filtered. The filter cake was washed with 1 N HCl to give compound AB17657 (500 mg, 78%) as a brown solid. TLC: PE/EA = 1/1, 254 nm; R f (Compound 4) = 0.5; R f (compound AB17657) = 0.4; LC-MS: 278.10 (M+1) + ;

Figure pct00254
Figure pct00254

AB17658의 합성Synthesis of AB17658

도 133b에 나타나 있는 바와 같이, 아세토니트릴 (10 mL) 중 화합물 5a (337 mg, 1.73 mmol, 1.0 eq), 화합물 5b (554 mg, 1.73 mmol, 1.0 eq) 및 포타슘 카르보네이트 (1114 mg, 3.46 mmol, 2.0 eq)의 혼합물을 질소 분위기 하에 35℃에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응의 완료 후, 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 5c (436 mg, 99%)를 수득하였다. TLC: PE/EA = 1/1, 254 nm; Rf (화합물 5a) = 0.8; Rf (화합물 5c) = 0.5.As shown in Figure 133b, compound 5a (337 mg, 1.73 mmol, 1.0 eq), compound 5b (554 mg, 1.73 mmol, 1.0 eq) and potassium carbonate (1114 mg, 3.46) in acetonitrile (10 mL) mmol, 2.0 eq) was stirred under a nitrogen atmosphere at 35° C. for 1.5 hours. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. After completion of the reaction, the mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel chromatography to give compound 5c (436 mg, 99%). TLC: PE/EA = 1/1, 254 nm; R f (compound 5a) = 0.8; R f (compound 5c) = 0.5.

메탄올 (10 mL) 중 화합물 5 (330 mg, 1.72 mmol, 1.0 eq), 화합물 5c (436 mg, 1.72 mmol, 1.0 eq) 및 소듐 카르보네이트 (465 mg, 4.38 mmol, 2.55 eq)의 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응의 완료 후, 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 메탄올 및 물로 세척하여 화합물 6 (617 mg, 93%)를 적색 고형물로서 수득하였다. TLC: PE/EA = 1/1, 254 nm; Rf (화합물 5) = 0.5; Rf (화합물 6) = 0.4.A mixture of compound 5 (330 mg, 1.72 mmol, 1.0 eq), compound 5c (436 mg, 1.72 mmol, 1.0 eq) and sodium carbonate (465 mg, 4.38 mmol, 2.55 eq) in methanol (10 mL) with nitrogen Stirred under atmosphere at room temperature for 3 hours. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. After completion of the reaction, the mixture was filtered and the filter cake was washed with methanol and water to give compound 6 (617 mg, 93%) as a red solid. TLC: PE/EA = 1/1, 254 nm; R f (compound 5) = 0.5; R f (Compound 6) = 0.4.

피리딘 (20 mL) 중 화합물 6 (617 mg, 1.60 mmol, 1.0 eq) 및 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (290 mg, 4.17 mmol, 2.6 eq)의 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응의 완료 후, 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 고형물이 보일 때까지 1 N HCl을 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 1 N NaOH에 용해시켰다. 그 후에, 3 N HCl을 첨가하여 pH를 5로 조절하고, 여과하였다. 여과 케이크를 1 N HCl로 세척하고, 화합물 AB17658 (500 mg, 78%)을 적색 고형물로서 수득하였다. TLC: PE/EA = 1/1, 254 nm; Rf (화합물 6) = 0.4; Rf (화합물 AB17658) = 0.3; LC-MS: 402.95 (M+1)+; A mixture of compound 6 (617 mg, 1.60 mmol, 1.0 eq) and hydroxylamine hydrochloride (290 mg, 4.17 mmol, 2.6 eq) in pyridine (20 mL) was stirred under a nitrogen atmosphere at 110° C. for 2 h. The progress of the reaction mixture was monitored by TLC. After completion of the reaction, the mixture was concentrated under reduced pressure and 1 N HCl was added until a solid was visible. The mixture was filtered and the filter cake was dissolved in 1 N NaOH. After that, the pH was adjusted to 5 by addition of 3 N HCl and filtered. The filter cake was washed with 1 N HCl to give compound AB17658 (500 mg, 78%) as a red solid. TLC: PE/EA = 1/1, 254 nm; R f (Compound 6) = 0.4; R f (Compound AB17658) = 0.3; LC-MS: 402.95 (M+1) + ;

Figure pct00255
Figure pct00255

실시예 38Example 38

말라세진, 기타 말라세진-유래 화합물, 및 이의 화학적 유사체의 광보호 특성의 생체내 평가In vivo evaluation of the photoprotective properties of malacetin, other malacetin-derived compounds, and chemical analogs thereof

말라세진 1% 제형Malacetin 1% Formulation

이 연구에 사용된 말라세진 1% 제형은 다음 성분들을 함유하였다: 물 (aqua) - 65.939%; 디메틸 이소소르바이드 - 20.000%; 올리브유 글리세레쓰-8 에스테르 - 3.000%; 글리세린 - 2.991%; 코코넛 알칸 - 2.700%; 하이드록시에틸 아크릴레이트/소듐 아크릴로일디메틸 타우레이트 코폴리머 - 1.700%; 말라세진 - 1.000%; 펜틸렌 글리콜 - 1.000%; 페녹시에탄올 - 0.640%; 코코-카프릴레이트/카프레이트 - 0.300%; 카프릴릴 글리콜 - 0.200%; 클로르페네신 - 0.160%; 소르비탄 이소스테아레이트 - 0.140%; 토코페롤 - 0.100%; 폴리소르베이트 60 - 0.080%; 및 디소듐 EDTA - 0.050%.The malacetin 1% formulation used in this study contained the following ingredients: water (aqua) - 65.939%; dimethyl isosorbide - 20.000%; Olive Oil Glycereth-8 Ester - 3.000%; glycerin - 2.991%; Coconut Alkanes - 2.700%; hydroxyethyl acrylate/sodium acryloyldimethyl taurate copolymer - 1.700%; Malacetin - 1.000%; pentylene glycol - 1.000%; Phenoxyethanol - 0.640%; coco-caprylate/caprate - 0.300%; caprylyl glycol - 0.200%; chlorphenesin - 0.160%; sorbitan isostearate - 0.140%; tocopherol - 0.100%; polysorbate 60 - 0.080%; and disodium EDTA - 0.050%.

실험 설계Experimental Design

39세 피부 타입 IV 여성을 개념 연구의 이러한 증명에 포함시켰다.A 39-year-old skin type IV female was included in this demonstration of the concept study.

실험 1 일에, 대상체를 표적화된 광대역 Dualight UVB 장치를 사용하여 최소 홍반 선량 ("Minimal Erythema Dosing: MED")을 결정하기 위해 평가하였다. 6 개의 정사각형 주형을 시험 대상체의 왼쪽 하부 등 (1.5cm × 1.5cm)에 놓았다. 도 134를 참조하라.On day 1 of the experiment, subjects were assessed to determine the minimum erythema dose (“Minimal Erythema Dosing: MED”) using a targeted broadband Dualight UVB device. Six square molds were placed on the left lower back (1.5 cm × 1.5 cm) of the test subject. See FIG. 134 .

대상체의 피부 타입에 대한 MED 사진 시험 선량은 mJ/cm2 단위로 도 135에 열거되어 있다. 방사선 조사 24 시간 후, 대상체는 MED 평가를 위해 복귀하였다. 도 139에 나타나 있는 바와 같이, 대상체의 MED는 120 mJ였다. MED photographic test doses for the subject's skin type are listed in FIG. 135 in mJ/cm 2 . Twenty-four hours after irradiation, subjects returned for MED assessment. 139 , the subject's MED was 120 mJ.

후속적으로, 대상체에게 7일 동안 매일 2 회 오른쪽 등의 상위 시험 정사각형에 말라세진 1%를 적용하였다. 두 번째 오른쪽 하부 정사각형을 4일부터 7일까지 매일 2회 처리하고, 7일에 1회 적용에 대하여 세 번째 중간 정사각형을 처리하였다. 생성물 비히클을 왼쪽 등에 7일 동안 매일 2회 적용하였다. 도 140을 참조하라. 대상체는 7일에 방사선 조사를 위해 연구 센터로 복귀하였다. 도 136을 참조하라. 각 시험 부위에 120 mJ의 UVB 노출로 방사선 조사하였다. 대상체는 광독성/광보호의 평가를 위해 24 시간 이내에 복귀하였다. 도 141을 참조하라.Subsequently, subjects were applied with 1% Malassezine to the upper test square of the right dorsal twice daily for 7 days. The second lower right square was treated twice daily from days 4 to 7, and the third middle square was treated for one application on day 7. Product vehicle was applied twice daily for 7 days to the left back. See FIG. 140 . Subjects returned to the study center for irradiation on day 7. See FIG. 136 . Each test site was irradiated with a UVB exposure of 120 mJ. Subjects returned within 24 hours for assessment of phototoxicity/photoprotection. See FIG. 141 .

대상체는 총 14일 동안 말라세진 1%를 받는 실험을 계속하였다. 도 142 내지 143은 다음 처리에 노출된 대상체의 피부 영역을 나타낸 것이다: 부위 14에, 말라세진 1%를 14일 동안 1일 2회 적용하고; 부위 10에, 말라세진 1%를 11일 동안 1일 2회 적용하고; 부위 8에, 말라세진 1%를 8일 동안 1일 2회 적용하고; 부위 3에, 말라세진 1%를 3일 동안 1일 2회 적용하고; 부위 1에, 말라세진 1%를 1회 적용하고; 비히클 부위에, 비히클을 7일 및 9일 동안 1일 2회 각각 적용하였다.Subjects continued the trial receiving Malassezine 1% for a total of 14 days. 142 to 143 show skin regions of subjects exposed to the following treatments: at site 14, 1% malacetin was applied twice daily for 14 days; At site 10, 1% of malacetin was applied twice daily for 11 days; At site 8, 1% malacetin was applied twice a day for 8 days; at site 3, 1% of malacetin was applied twice a day for 3 days; At site 1, 1% malacetin was applied once; At the vehicle site, vehicle was applied twice daily for 7 and 9 days, respectively.

결과result

도 141에 나타나 있는 바와 같이, UVB 노출 24 시간 후, 대상체는 비히클 시험 부위에 1 + 내지 2 + 홍반을 나타냈다. 홍반 규모에 대해서는 도 138을 참조하라. 대조적으로, 말라세진 1% 7일 처리 부위에서 더 적은 홍반(경증)이 주지되었다. 3일 동안 처리된 부위의 평가는 최소 홍반을 나타냈고, 1일 적용 부위의 경우는 나타내지 않았다. Mexameter MX16을 사용하여 각 부위에서 비색 측정을 수행했으며, 임상 관찰로 뒷받침하였다. 최대 홍반 판독이 비히클 부위, 그리고 이어서 말라세진 7일 처리 부위에서 관찰되었다. 최저 값은 각각 말라세진 3일 및 1일 부위에서 관찰되었다. 도 136을 참조하라.As shown in FIG. 141 , after 24 hours of UVB exposure, subjects exhibited 1 + to 2 + erythema at the vehicle test site. See FIG. 138 for erythema scale. In contrast, less erythema (mild) was noted at the sites treated with Malassezine 1% 7 days. Evaluation of the treated area for 3 days showed minimal erythema, not the 1 day application site. Colorimetric measurements were performed at each site using a Mexameter MX16, supported by clinical observations. Maximum erythema readout was observed at the vehicle site followed by the 7 day malassezin treatment site. The lowest values were observed at the 3 and 1 day sites of Malassezine, respectively. See FIG. 136 .

대상체는 실험을 계속하고, 14일에 반복 UVB 방사선 조사와 15일 판독을 위해 복귀하였다. 도 142를 참조하라. 15일 임상 평가는 7일 비히클 부위에서 중등도 홍반을 나타냈고, 9일에는 유의하게 더 적었다. 도 143을 참조하라. 더 적은 홍반(경증)은 14일, 10일, 및 8일 부위를 포함하여 말라세진 1%-처리 부위에서 주지되었다. 최소 홍반이 1일 및 3일에 말라세진 1% 부위에서 주지되었다. 홍반 및 멜라닌 지수를 측정하기 위해 각 부위로부터 비색 판독을 얻었다. 결과는 말라세진 1%-처리 부위에서 더 적은 홍반의 임상 관찰을 뒷받침하였다. 도 137를 참조하라.Subjects continued the experiment and returned for repeated UVB irradiation on day 14 and readings on day 15. See FIG. 142 . The day 15 clinical evaluation showed moderate erythema at the vehicle site on day 7 and significantly less on day 9. See Figure 143. Less erythema (mild) was noted at the Malassezine 1%-treated sites, including the 14, 10, and 8 day sites. Minimal erythema was noted at the Malassezin 1% site on days 1 and 3. Colorimetric readings were obtained from each site to determine erythema and melanin index. The results supported the clinical observation of less erythema at the Malassezin 1%-treated sites. See Figure 137.

9일에 비히클 부위에서, 및 1일 및 3일에 말라세진-1% 처리 부위에서 생검을 얻었다. 멜라닌세포 및 어피메트릭스(affymetrix) 연구의 정량화를 위해 헤마톡실린 및 에오신, 폰타나 마손 염색 및 MART I에 대해 시편을 분석하였다.Biopsies were obtained at the vehicle site on day 9 and at the malacetin-1% treatment site on days 1 and 3. Specimens were analyzed for hematoxylin and eosin, Fontana Mason staining and MART I for quantification of melanocytes and affymetrix studies.

진단: (A) 피부 - 1일 처리(말라세진 1%): 바스켓직 각질층, 정상 출현 멜라닌세포 (Mart-1로 면역과산화효소 염색에 의해 확인), 및 표피 멜라닌 (폰타나 마손으로 면역과산화효소 염색에 의해 확인).Diagnosis: (A) Skin - 1 day treatment (1% Malassezin): Basketic stratum corneum, normal emerging melanocytes (confirmed by immunoperoxidase staining with Mart-1), and epidermal melanin (immunopperoxidase staining with Fontana Mason confirmed by).

진단: (B) 피부 - 3일 처리 (말라세진 1%): 바스켓직 각질층, C 및 D와 비교할 때 더 적은 수지상 멜라닌세포 (Mart-1/Melan A로 면역과산화효소 염색에 의해 확인), 및 스킵 영역으로서 표피 멜라닌의 약간 감소 (폰타나 마손으로 면역과산화효소 염색에 의해 확인).Diagnosis: (B) Skin - 3 days treatment (1% Malassezin): Basketic stratum corneum, fewer dendritic melanocytes compared to C and D (confirmed by immunoperoxidase staining with Mart-1/Melan A), and A slight decrease in epidermal melanin as a skip region (confirmed by immunoperoxidase staining with Fontana Mason).

진단: (C) 피부 - 비히클: 정상 출현 표피 멜라닌세포 (Mart-1로 면역과산화효소 염색에 의해 확인), 및 표피 멜라닌 (폰타나 마손으로 면역과산화효소 염색에 의해 확인).Diagnosis: (C) Skin—Vehicle: Normal emerge epidermal melanocytes (confirmed by immunoperoxidase staining with Mart-1), and epidermal melanin (confirmed by immunoperoxidase staining with Fontana Mason).

진단: (D) 피부 - 정상: 정상 출현 표피 멜라닌세포 (Mart-1로 면역과산화효소 염색에 의해 확인), 및 표피 멜라닌 (폰타나 마손으로 면역과산화효소 염색에 의해 확인).Diagnosis: (D) Skin - Normal: Normal emergence epidermal melanocytes (confirmed by immunoperoxidase staining with Mart-1), and epidermal melanin (confirmed by immunoperoxidase staining with Fontana Mason).

결론conclusion

개념 연구의 이러한 증명의 결과는 말라세진의 UV-보호 특성을 입증해준다.The results of this proof-of-concept study demonstrate the UV-protective properties of Malassezine.

추가 환자를 포함한 추가 연구가 말라세진과 동등하거나 더 효과적인 UV-보호 특성을 입증할 것으로 예상된다. 또한, 추가 연구는 말라세진-유도 광보호와 관련된 분자 신호전달 경로를 설명할 것으로 예상된다.Additional studies involving additional patients are expected to demonstrate UV-protective properties that are equivalent to or more effective than malacetin. In addition, further studies are expected to elucidate molecular signaling pathways involved in malassezine-induced photoprotection.

문헌literature

Figure pct00256
Figure pct00256

Figure pct00257
Figure pct00257

Figure pct00258
Figure pct00258

본 출원에 인용된 모든 문헌은 본 명세서에 완전히 인용된 것처럼 참고로 본 명세서에 포함된다.All documents cited in this application are incorporated herein by reference as if fully incorporated herein.

본 발명의 예시적인 실시형태가 본 명세서에 기재되어 있지만, 본 발명이 기재된 것에 제한되지 않고 다양한 다른 변경 또는 변형이 본 발명의 범위 또는 사상으로부터 벗어나지 않으면서 당해 분야의 숙련자에 의해 이루어질 수 있는 것으로 이해되어야 한다.While exemplary embodiments of the invention have been described herein, it is to be understood that the invention is not limited thereto and that various other changes or modifications may be made by those skilled in the art without departing from the scope or spirit of the invention. should be

Claims (67)

하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염:
Figure pct00259

상기 식에서,
X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고;
Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고;
R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고;
R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며;
R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고;
Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
여기에서,
Ra가 수소인 경우, Y는 CR5R6이고, R13 및 R14는 둘 모두 수소이고,
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나는 R16이거나;
R5는 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성한다.A compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00259

In the above formula,
X is selected from the group consisting of NR 14 and O;
Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ;
R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ;
R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ;
R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl;
R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ;
each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl;
R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 ;
From here,
when R a is hydrogen, Y is CR 5 R 6 , R 13 and R 14 are both hydrogen;
at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is R 16 ;
R 5 is selected from the group consisting of hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3-6 cycloalkyl. 제1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염:
Figure pct00260
.The compound according to claim 1 having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00260
. 제1항에 있어서,
Y가 CR5R6이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하는 화합물.According to claim 1,
Y is CR 5 R 6 ;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); A compound in which R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group. 제1항에 있어서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나가 C1-4 알킬인 화합물. The compound of claim 1 , wherein at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl. 제1항에 있어서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11이 수소인 화합물.The compound of claim 1 , wherein each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen. 제1항에 있어서, R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 화합물. The method of claim 1 , wherein R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; A compound wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제1항에 있어서,
X가 NH이고;
Y가 CR5R6이고;
각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13이 수소이고;
R2가 수소 또는 C1-4 알킬이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고;
R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고;
Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 화합물.According to claim 1,
X is NH;
Y is CR 5 R 6 ;
each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen;
R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group;
R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl;
A compound wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제1항에 있어서, 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물:
Figure pct00261

Figure pct00262
The compound of claim 1 , wherein the compound is selected from the group consisting of:
Figure pct00261

Figure pct00262
 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염:
Figure pct00263

상기 식에서,
R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며;
R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며;
R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이며;
각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이며;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 적어도 하나는 수소가 아니다.A compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof;
Figure pct00263

In the above formula,
R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO;
R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl;
R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl;
R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ;
each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl;
At least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 is not hydrogen. 제9항에 있어서, 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염:
Figure pct00264
.10. A compound according to claim 9 having the structure of formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00264
. 제9항에 있어서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10이 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물. 10. The method of claim 9, wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. compound that becomes. 제9항에 있어서,
R11 및 R12가 각각 수소이고;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1, 2, 3 또는 4개가 메틸이고, 나머지 기가 수소인 화합물. 10. The method of claim 9,
R 11 and R 12 are each hydrogen;
A compound wherein 1, 2, 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen. 제9항에 있어서, 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물:
Figure pct00265
10. The compound of claim 9, wherein the compound is selected from the group consisting of:
Figure pct00265
 화합물을 포함하는 조성물로서, 상기 화합물이 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인 조성물:
Figure pct00266

상기 식에서,
X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고;
Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고;
R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고;
R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며;
R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고;
Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다. A composition comprising a compound, wherein the compound is a compound having a structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00266

In the above formula,
X is selected from the group consisting of NR 14 and O;
Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ;
R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ;
R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ;
R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl;
R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ;
each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl;
R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 . 제14항에 있어서, 화합물이 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인 조성물:
Figure pct00267
.15. The composition of claim 14, wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00267
. 제14항에 있어서,
Y가 CR5R6이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하는 조성물.15. The method of claim 14,
Y is CR 5 R 6 ;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); wherein R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group. 제14항에 있어서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나가 C1-4 알킬인 조성물. 15. The composition of claim 14, wherein at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl. 제14항에 있어서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11이 수소인 조성물. 15. The composition of claim 14, wherein each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen. 제14항에 있어서, R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 조성물.15. The compound of claim 14, wherein R 12 is -COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제14항에 있어서,
X가 NH이고;
Y가 CR5R6이고;
각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13이 수소이고;
R2가 수소 또는 C1-4 알킬이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고;
R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고;
Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 조성물.15. The method of claim 14,
X is NH;
Y is CR 5 R 6 ;
each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen;
R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group;
R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl;
wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제14항에 있어서, 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물:
Figure pct00268

Figure pct00269

Figure pct00270
15. The composition of claim 14, wherein the compound is selected from the group consisting of:
Figure pct00268

Figure pct00269

Figure pct00270
 화합물을 포함하는 조성물로서, 상기 화합물이 하기 화학식을 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인 조성물:
Figure pct00271

상기 식에서,
R1, R4, R5, R6, R9 및 R10은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R2 및 R3은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며;
R7 및 R8은 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, CN, R13, OR13, OCOR13 및 -CHO로 구성된 군으로부터 선택되거나, R7 및 R8은 조합되어 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성하며;
R11 및 R12는 독립적으로 수소 또는 R13이며;
각각의 R13은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이다.A composition comprising a compound, wherein the compound is a compound having the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00271

In the above formula,
R 1 , R 4 , R 5 , R 6 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO;
R 2 and R 3 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and —CHO, or R 2 and R 3 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl;
R 7 and R 8 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, halogen, CN, R 13 , OR 13 , OCOR 13 and -CHO, or R 7 and R 8 in combination are 5- or 6-membered hetero form cyclyl;
R 11 and R 12 are independently hydrogen or R 13 ;
each R 13 is independently C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl. 제22항에 있어서, 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 조성물:
Figure pct00272
23. A composition according to claim 22 comprising a compound having the structure of formula (II): or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00272
 제22항에 있어서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10이 독립적으로 수소 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물. 23. The method of claim 22, wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen and C 1-4 alkyl. composition to be. 제22항에 있어서,
R11 및 R12가 각각 수소이고;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 중 1, 2, 3 또는 4개가 메틸이고, 나머지 기가 수소인 조성물. 23. The method of claim 22,
R 11 and R 12 are each hydrogen;
wherein 1, 2, 3 or 4 of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are methyl and the remaining groups are hydrogen. 제22항에 있어서, 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물:
Figure pct00273

Figure pct00274
23. The composition of claim 22, wherein the compound is selected from the group consisting of:
Figure pct00273

Figure pct00274
 화합물을 포함하는 조성물로서, 상기 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물:
Figure pct00275
A composition comprising a compound, wherein said compound is selected from the group consisting of:
Figure pct00275
 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 대상체의 피부를 브라이트닝하기 위한 방법으로서, 상기 화합물이 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인, 방법:
Figure pct00276

상기 식에서,
X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고;
Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고;
R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고;
R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며;
R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고;
Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다. A method for brightening the skin of a subject comprising contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00276

In the above formula,
X is selected from the group consisting of NR 14 and O;
Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ;
R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ;
R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ;
R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl;
R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ;
each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl;
R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 . 제28항에 있어서, 화합물이 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인 방법:
Figure pct00277
.The method of claim 28 , wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00277
. 제28항에 있어서,
Y가 CR5R6이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하는 방법.29. The method of claim 28,
Y is CR 5 R 6 ;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); A method in which R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group. 제28항에 있어서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나가 C1-4 알킬인 방법.29. The method of claim 28, wherein at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl. 제28항에 있어서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11이 수소인 방법.29. The method of claim 28, wherein each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen. 제28항에 있어서, R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 방법.29. The compound of claim 28, wherein R 12 is -COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제28항에 있어서,
X가 NH이고;
Y가 CR5R6이고;
각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13이 수소이고;
R2가 수소 또는 C1-4 알킬이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고;
R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고;
Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 방법.29. The method of claim 28,
X is NH;
Y is CR 5 R 6 ;
each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen;
R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group;
R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl;
wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제28항에 있어서, 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 방법:
Figure pct00278

Figure pct00279

Figure pct00280
29. The method of claim 28, wherein the compound is selected from the group consisting of:
Figure pct00278

Figure pct00279

Figure pct00280
 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 대상체에서 멜라닌세포 아폽토시스를 유도하기 위한 방법으로서, 상기 화합물이 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인, 방법:
Figure pct00281

상기 식에서,
X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고;
Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고;
R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고;
R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며;
R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고;
Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다. A method for inducing melanocyte apoptosis in a subject comprising contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof, Way:
Figure pct00281

In the above formula,
X is selected from the group consisting of NR 14 and O;
Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ;
R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ;
R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ;
R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl;
R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ;
each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl;
R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 . 제36항에 있어서, 화합물이 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인 방법:
Figure pct00282
.37. The method of claim 36, wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00282
. 제36항에 있어서,
Y가 CR5R6이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하는 방법.37. The method of claim 36,
Y is CR 5 R 6 ;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); A method in which R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group. 제36항에 있어서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나가 C1-4 알킬인 방법.37. The method of claim 36, wherein at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl. 제36항에 있어서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11이 수소인 방법.37. The method of claim 36, wherein each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen. 제36항에 있어서, R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 방법.37. The method of claim 36, wherein R 12 is -COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제36항에 있어서,
X가 NH이고;
Y가 CR5R6이고;
각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13이 수소이고;
R2가 수소 또는 C1-4 알킬이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고;
R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고;
Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 방법.37. The method of claim 36,
X is NH;
Y is CR 5 R 6 ;
each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen;
R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group;
R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl;
wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제36항에 있어서, 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 방법:
Figure pct00283

Figure pct00284

Figure pct00285
37. The method of claim 36, wherein the compound is selected from the group consisting of:
Figure pct00283

Figure pct00284

Figure pct00285
 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 대상체에서 아릴탄화수소 수용체(AhR) 활성을 조절하기 위한 방법으로서, 상기 화합물이 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인, 방법:
Figure pct00286

상기 식에서,
X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고;
Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고;
R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고;
R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며;
R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고;
Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다. A method for modulating arylhydrocarbon receptor (AhR) activity in a subject comprising contacting the subject with a compound, wherein the compound has the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically thereof Acceptable salt, method:
Figure pct00286

In the above formula,
X is selected from the group consisting of NR 14 and O;
Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ;
R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ;
R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ;
R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl;
R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ;
each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl;
R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 . 제44에 있어서, 화합물이 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인 방법:
Figure pct00287
.45. The method of claim 44, wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00287
. 제44항에 있어서,
Y가 CR5R6이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하는 방법.45. The method of claim 44,
Y is CR 5 R 6 ;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); A method in which R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group. 제44항에 있어서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나가 C1-4 알킬인 방법.45. The method of claim 44, wherein at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl. 제44항에 있어서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11이 수소인 방법.45. The method of claim 44, wherein each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen. 제44항에 있어서, R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 방법.45. The compound of claim 44, wherein R 12 is -COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제44항에 있어서,
X가 NH이고;
Y가 CR5R6이고;
각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13이 수소이고;
R2가 수소 또는 C1-4 알킬이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고;
R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고;
Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 방법.45. The method of claim 44,
X is NH;
Y is CR 5 R 6 ;
each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen;
R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group;
R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl;
wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제44항에 있어서, 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 방법:
Figure pct00288

Figure pct00289

Figure pct00290
45. The method of claim 44, wherein the compound is selected from the group consisting of:
Figure pct00288

Figure pct00289

Figure pct00290
 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 대상체에서 멜라닌생성을 조절하기 위한 방법으로서, 상기 화합물이 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인, 방법:
Figure pct00291

상기 식에서,
X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고;
Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고;
R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고;
R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며;
R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고;
Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다. A method for modulating melanogenesis in a subject comprising contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof :
Figure pct00291

In the above formula,
X is selected from the group consisting of NR 14 and O;
Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ;
R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ;
R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ;
R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl;
R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ;
each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl;
R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 . 제52항에 있어서, 화합물이 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인 방법:
Figure pct00292
.53. The method of claim 52, wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00292
. 제52항에 있어서,
Y가 CR5R6이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하는 방법.53. The method of claim 52,
Y is CR 5 R 6 ;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); A method in which R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group. 제52항에 있어서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나가 C1-4 알킬인 방법.53. The method of claim 52, wherein at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl. 제52항에 있어서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11이 수소인 방법.53. The method of claim 52, wherein each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen. 제52항에 있어서, R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 방법.53. The compound of claim 52, wherein R 12 is -COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제52항에 있어서,
X가 NH이고;
Y가 CR5R6이고;
각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13이 수소이고;
R2가 수소 또는 C1-4 알킬이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고;
R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고;
Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 방법.53. The method of claim 52,
X is NH;
Y is CR 5 R 6 ;
each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen;
R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group;
R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl;
wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제52항에 있어서, 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 방법:
Figure pct00293

Figure pct00294

Figure pct00295
53. The method of claim 52, wherein the compound is selected from the group consisting of:
Figure pct00293

Figure pct00294

Figure pct00295
 대상체를 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 대상체에서 멜라닌 농도를 조절하기 위한 방법으로서, 상기 화합물이 하기 화학식의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인, 방법:
Figure pct00296

상기 식에서,
X는 NR14 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고;
Y는 공유 결합, CR5R6, O 또는 NR15이고;
R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11은 독립적으로 수소, 할로겐, CN, 하이드록실, R16 또는 OR16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R13, R14 및 R15는 독립적으로 수소 또는 R16이고;
R5 및 R6은 독립적으로 수소, 하이드록실, OR16, R16 및 C3-6 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되거나, R5 및 R6은 조합되어 옥소(=O) 기 또는 C3-6 사이클로알킬을 형성하며;
R12는 수소, -CORa 및 R16으로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R16은 독립적으로 포르밀, C1-9 알킬, C2-9 알케닐 또는 C2-9 알키닐이고;
Ra는 수소, 하이드록실 및 OR16으로 구성된 군으로부터 선택된다. A method for modulating melanin concentration in a subject comprising contacting the subject with a compound, wherein the compound is a compound having the structure of the formula: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof :
Figure pct00296

In the above formula,
X is selected from the group consisting of NR 14 and O;
Y is a covalent bond, CR 5 R 6 , O or NR 15 ;
R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, CN, hydroxyl, R 16 or OR 16 ;
R 13 , R 14 and R 15 are independently hydrogen or R 16 ;
R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl, OR 16 , R 16 and C 3-6 cycloalkyl, or R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group or C 3 - 6 cycloalkyl;
R 12 is selected from the group consisting of hydrogen, -COR a and R 16 ;
each R 16 is independently formyl, C 1-9 alkyl, C 2-9 alkenyl or C 2-9 alkynyl;
R a is selected from the group consisting of hydrogen, hydroxyl and OR 16 . 제60항에 있어서, 화합물이 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 결정질 형태, 수화물, 또는 화장용 또는 약학적으로 허용되는 염인 방법:
Figure pct00297
.61. The method of claim 60, wherein the compound is a compound having the structure: or a crystalline form, hydrate, or cosmetically or pharmaceutically acceptable salt thereof:
Figure pct00297
. 제60항에 있어서,
Y가 CR5R6이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하는 방법.61. The method of claim 60,
Y is CR 5 R 6 ;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); A method in which R 5 and R 6 are combined to form an oxo (=O) group. 제60항에 있어서, R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11 중 적어도 하나가 C1-4 알킬인 방법.61. The method of claim 60, wherein at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is C 1-4 alkyl. 제60항에 있어서, 각각의 R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9, R10 및 R11이 수소인 방법.61. The method of claim 60, wherein each of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 is hydrogen. 제60항에 있어서, R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고; Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 방법.61. The compound of claim 60, wherein R 12 is -COR a or C 1-4 hydroxyalkyl; wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제60항에 있어서,
X가 NH이고;
Y가 CR5R6이고;
각각의 R1, R3, R4, R7, R8, R9, R10, R11 및 R13이 수소이고;
R2가 수소 또는 C1-4 알킬이고;
R5가 수소이고, R6가 수소, C1-4 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 O-(C1-4 알킬)이거나; R5 및 R6가 조합되어 옥소(=O) 기를 형성하고;
R12가 -CORa 또는 C1-4 하이드록시알킬이고;
Ra가 수소 또는 C1-4 알킬인 방법.61. The method of claim 60,
X is NH;
Y is CR 5 R 6 ;
each of R 1 , R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 13 is hydrogen;
R 2 is hydrogen or C 1-4 alkyl;
R 5 is hydrogen and R 6 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 3-6 cycloalkyl or O—(C 1-4 alkyl); R 5 and R 6 combine to form an oxo (=O) group;
R 12 is —COR a or C 1-4 hydroxyalkyl;
wherein R a is hydrogen or C 1-4 alkyl. 제60항에 있어서, 화합물이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 방법:
Figure pct00298

Figure pct00299

Figure pct00300
61. The method of claim 60, wherein the compound is selected from the group consisting of:
Figure pct00298

Figure pct00299

Figure pct00300
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