KR20210057315A - 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 분비 분석에 의한 결핵 진단방법 - Google Patents
인터페론 감마 및 티엔에프 알파 분비 분석에 의한 결핵 진단방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20210057315A KR20210057315A KR1020190143951A KR20190143951A KR20210057315A KR 20210057315 A KR20210057315 A KR 20210057315A KR 1020190143951 A KR1020190143951 A KR 1020190143951A KR 20190143951 A KR20190143951 A KR 20190143951A KR 20210057315 A KR20210057315 A KR 20210057315A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- tuberculosis
- spots
- interferon gamma
- negative control
- control group
- Prior art date
Links
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 title claims abstract description 145
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 title claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 238000003556 assay Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 25
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 title description 11
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 title description 10
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 title description 7
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 title 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 47
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims abstract description 46
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 40
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 40
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims abstract description 36
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 101710166488 6 kDa early secretory antigenic target Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 101001057048 Mycobacterium tuberculosis (strain ATCC 25618 / H37Rv) ESAT-6-like protein EsxB Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 101710088334 Diacylglycerol acyltransferase/mycolyltransferase Ag85B Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 230000001064 anti-interferon Effects 0.000 claims abstract description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 45
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 5
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 3
- 208000036981 active tuberculosis Diseases 0.000 abstract description 26
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 16
- 206010065048 Latent tuberculosis Diseases 0.000 abstract description 15
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 31
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 22
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 10
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 8
- 238000011998 interferon-gamma release assay Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 235000017399 Caesalpinia tinctoria Nutrition 0.000 description 5
- 241000388430 Tara Species 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 5
- 208000033353 latent tuberculosis infection Diseases 0.000 description 5
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 208000008128 pulmonary tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 1
- 101710098275 C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- -1 IL-12p70 Proteins 0.000 description 1
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710127797 Macrophage colony-stimulating factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- UFMNTAVTSIJODG-UHFFFAOYSA-N [N+](=O)([O-])C1=CC(=CC=2C(N=C(SC=21)N1CCC(CC1)CN1CCC(CC1)C(F)(F)F)=O)C(F)(F)F Chemical compound [N+](=O)([O-])C1=CC(=CC=2C(N=C(SC=21)N1CCC(CC1)CN1CCC(CC1)C(F)(F)F)=O)C(F)(F)F UFMNTAVTSIJODG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002365 anti-tubercular Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 201000006674 extrapulmonary tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 102000009634 interleukin-1 receptor antagonist activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040001669 interleukin-1 receptor antagonist activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000001223 meningeal tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 208000024356 pleural disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 1
- 201000010098 pleural tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/5695—Mycobacteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/52—Assays involving cytokines
- G01N2333/525—Tumor necrosis factor [TNF]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/52—Assays involving cytokines
- G01N2333/555—Interferons [IFN]
- G01N2333/57—IFN-gamma
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
본 발명은 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 분비 분석에 의한 결핵 진단방법으로, (a) 항-인터페론 감마 및 항-티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 포획 항체가 배양된 지지체를 준비하는 단계; (b) 상기 지지체에 진단대상자의 혈액에서 분리된 말초혈액단핵세포(PBMC)와, ESAT-6, CFP-10, 및 Ag85B를 포함하는 결핵 특이항원을 가하여 항원-항체 복합체를 형성하는 단계; (c) 상기 항원-항체 복합체가 형성된 지지체에 항-인터페론 감마 단일클론 항체 및 항-티엔에프 알파 단일클론 항체 중에서 선택된 1종 이상의 검출 항체를 처리하는 단계; (d) 상기 검출 항체 처리된 결과물에 형광단 결합 시약을 처리하고 형광 증폭제를 가하여 형광 스폿을 발현시키는 단계; 및 (e) 상기 형광 스폿을 계수하여 양성, 음성, 또는 미확정으로 판정하는 단계;를 포함하는 결핵 진단방법에 관한 것이다. 이에 의하여, 음성대조군과 형광 스폿 개수를 비교하는 것만으로도 활동성 결핵을 잠복결핵이나 결핵 비감염과 구별하는 민감도를 현저히 향상시킬 수 있다.
Description
본 발명은 결핵 진단방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 분비 분석에 의한 결핵 진단방법에 관한 것이다.
최근 인터페론 감마 분비 분석(IGRA)은 잠복 결핵(LTBI)을 진단하기 위해 임상 실무에서 널리 사용되어왔다. pauci-bacillary 결핵 또는 접근할 수 없는 부위와 관련된 결핵에서 IGRA는 활동성 결핵 진단을 위해 보조적으로 사용되어 왔다. 그러나 이는 활동성 결핵을 잠복결핵과 구별하지 못하여 활동성 결핵 진단은 제한적이었고, 특히 IGRA 양성율이 잠복 결핵비율 때문에 지나치게 높은 환경 때문에 결핵 감염율이 높은 국가에서는 더욱 그러했다. 결핵 진단을 위한 비침습적 혈액 테스트는 조속히 필요하며, 이는 빠르고 간단한 테스트가 폐외 결핵과 가래가 생성되는 폐결핵을 포함하는 pauci-bacillary TB의 조속한 진단에 매우 유용하기 때문이다. 최근의 연구는 ICAM-1, IL-1ra, IL-2, IL-3, IL-10, IL-12, IL-12p70, IP-10, MCSF, VEGF, TNF-α, IFN-γ와 같은 T 세포에서 분비된 사이토카인의 프로파일에 대한 병렬 평가를 제안하였다.
종래 연구에서는TNF-α 분비 검사(TARA)가 활동성 결핵에 특히 유망함을 알아낸 바 있다. 형광 스폿(Fluorospot)은 새로운 형광-기반의 Enzyme-Linked-Immune-Spot (ELISpot) 기술이고, 이는 동시에 개별적 셀의 여러 사이토카인을 감지하고 ELISpot 분석과 같은 일상의 임상에서 사용할 수 있는 간단한 플랫폼을 제공할 수 있다.
따라서, 비침습적인 간단한 혈액 검사만으로 신속하게 활동성 결핵을 진단하면서도, 종래 결핵 진단법에 비하여 활동성 결핵을 잠복 결핵과 결핵 비감염과 구별해 내는 민감도를 향상시킬 수 있는 결핵 진단법의 개발이 필요한 실정이다.
본 발명의 목적은 종래 문제점을 해결하기 위한 것으로, 결핵 특이항원 ESAT-6, CFP-10, 및 Ag85B를 함께 사용하고, 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 분비 분석 중 1종 이상의 검사를 수행함으로써 활동성 결핵을 잠복 결핵이나 결핵 비감염과 구별할 수 있고, 특히 이와 같은 분석에 형광스폿 분석을 도입함으로써 비침습적인 혈액검사를 통하여 음성대조군과 형광 스폿의 개수 차이를 단순 비교하는 것만으로도 신속하게 활동성 결핵을 잠복 결핵이나 결핵 비감염과 구별하는 민감도 및 특이도를 현저히 향상시킬 수 있는 결핵 진단방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 일 측면에 따르면,
인터페론 감마 및 티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 분비 분석에 의한 결핵 진단방법으로,
(a) 항-인터페론 감마 및 항-티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 포획 항체가 배양된 지지체를 준비하는 단계;
(b) 상기 지지체에 진단대상자의 혈액에서 분리된 말초혈액단핵세포(PBMC)와, ESAT-6, CFP-10, 및 Ag85B를 포함하는 결핵 특이항원을 가하여 항원-항체 복합체를 형성하는 단계;
(c) 상기 항원-항체 복합체가 형성된 지지체에 항-인터페론 감마 단일클론 항체 및 항-티엔에프 알파 단일클론 항체 중에서 선택된 1종 이상의 검출 항체를 처리하는 단계;
(d) 상기 검출 항체 처리된 결과물에 형광단 결합 시약을 처리하고 형광 증폭제를 가하여 형광 스폿을 발현시키는 단계; 및
(e) 상기 형광 스폿을 계수하여 양성, 음성, 또는 미확정으로 판정하는 단계;를 포함하는 결핵 진단방법이 제공된다.
상기 결핵 진단방법은 인터페론 감마 단일 분비 분석 또는 티엔에프 알파 단일 분비 분석일 수 있다.
상기 인터페론 감마 단일 분비 분석 또는 티엔에프 알파 단일 분비 분석은 단계 (e)에서 계수된 상기 스폿의 수가,
결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 이하이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수에 비해 6개 이상 많을 때 결핵 양성으로 판정하고,
결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 초과이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수의 2배 이상일 때 결핵 양성으로 판정할 수 있다.
바람직하게는, 상기 결핵 진단방법은 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 동시 분비 분석일 수 있다.
상기 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 동시 분비 분석은 두 가지 컬러의 형광 스폿을 동시에 발현시킬 수 있다.
상기 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 동시 분비 분석은 단계 (e)에서 계수된 상기 스폿의 수가,
결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 이하이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수에 비해 4개 이상 많을 때 결핵 양성(positive)으로 판정하고,
결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 초과이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수의 2배 이상일 때 결핵 양성으로 판정할 수 있다.
상기 형광단 결합 시약은 anti-BAM-490 및 SA-550 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 하나의 측면에 따르면,
상기 결핵 진단에 사용되는 키트로서, 항-인터페론 감마 및 항-티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 포획 항체가 처리된 지지체; 및 결핵 특이 항원인 ESAT-6, CFP-10, Ag85B;를 포함하는 결핵진단용 키트가 제공된다.
상기 결핵진단용 키트는 항-인터페론 감마 및 항-티엔에프 알파가 동시 처리된 지지체를 포함할 수 있다.
본 발명의 결핵 진단방법은 결핵 특이항원 ESAT-6, CFP-10, 및 Ag85B를 함께 사용하고, 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 분비 분석 중 1종 이상의 검사를 수행함으로써 활동성 결핵을 잠복 결핵이나 결핵 비감염과 구별할 수 있고, 특히 이와 같은 분석에 형광스폿 분석을 도입함으로써 비침습적인 혈액검사를 통하여 음성대조군과 형광 스폿의 개수 차이를 단순 비교하는 것만으로도 신속하게 활동성 결핵을 잠복 결핵이나 결핵 비감염과 구별하는 민감도 및 특이도를 현저히 향상시킬 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 결핵 진단방법을 순차적으로 나타낸 흐름도이다.
도 2는 활동성 결핵 및 비활동성 결핵 판정의 연구 흐름도이다
도 3은 형광스폿 분석의 전형적인 진단 결과이다.
도 2는 활동성 결핵 및 비활동성 결핵 판정의 연구 흐름도이다
도 3은 형광스폿 분석의 전형적인 진단 결과이다.
이하에서, 본 발명의 여러 측면 및 다양한 구현예에 대해 더욱 구체적으로 설명한다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 상세히 설명하도록 한다.
그러나, 이하의 설명은 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
본원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 본 발명의 결핵 진단방법을 순차적으로 나타낸 흐름도이다. 도 1을 참조하여 본 발명의 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 분비 분석에 의한 결핵 진단방법을 설명하도록 한다.
먼저, 항-인터페론 감마 및 항-티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 포획 항체(capture antibodies)가 배양된 지지체를 준비한다(단계 a).
다음으로, 상기 지지체에 진단대상자의 혈액에서 분리된 말초혈액단핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)와, ESAT-6, CFP-10, 및 Ag85B를 포함하는 결핵 특이항원을 가하여 항원-항체 복합체를 형성한다(단계 b).
이후, 상기 항원-항체 복합체가 형성된 지지체에 항-인터페론 감마 단일클론 항체(monoclonal antibody) 및 항-티엔에프 알파 단일클론 항체 중에서 선택된 1종 이상의 검출 항체(detection antibody)를 처리한다(단계 c).
다음으로, 상기 검출 항체 처리된 결과물에 형광단 결합 시약(fluorophore-conjugated reagent)를 처리하고 형광 증폭제(fluorescence enhance)를 가하여 형광 스폿(spot)을 발현시킨다(단계 d).
마지막으로, 상기 형광 스폿을 계수하여 양성(positive), 음성(negative), 또는 미확정(indeterminate)으로 판정한다(단계 e).
상기 결핵 진단방법은 인터페론 감마 단일 분비 분석 또는 티엔에프 알파 단일 분비 분석으로 진행할 수 있다.
상기 인터페론 감마 단일 분비 분석 또는 티엔에프 알파 단일 분비 분석의 경우 단계 (e)에서 계수된 상기 스폿의 수가, 결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 이하이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수에 비해 6개 이상 많을 때 결핵 양성(positive)으로 판정하고, 결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 초과이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수의 2배 이상일 때 결핵 양성(positive)으로 판정할 수 있다.
바람직하게는, 상기 결핵 진단방법은 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 동시 분비 분석으로 진행할 수 있다.
상기 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 동시 분비 분석은 상기 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 분비에 각각 대응하는 두 가지 컬러의 형광 스폿을 동시에 발현시키는 것을 특징으로 한다.
상기 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 동시 분비 분석의 경우 단계 (e)에서 계수된 상기 스폿의 수가, 결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 이하이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수에 비해 4개 이상 많을 때 결핵 양성(positive)으로 판정하고, 결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 초과이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수의 2배 이상일 때 결핵 양성(positive)으로 판정할 수 있다.
상기 형광단 결합 시약은 anti-BAM-490 및 SA-550 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 발명은 상기 결핵 진단에 사용되는 키트로서, 항-인터페론 감마 및 항-티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 포획 항체(capture antibodies)가 처리된 지지체; 및 결핵 특이 항원인 ESAT-6, CFP-10, Ag85B;를 포함하는 결핵진단용 키트를 제공한다.
상기 결핵진단용 키트는 항-인터페론 감마 및 항-티엔에프 알파가 동시 처리된 지지체를 포함하는 것이 바람직하다.
이하에서는 본 발명에 따른 실시예를 들어 구체적으로 설명하도록 한다.
[
실험예
]
실험 방법
(1) 연구 설계 및 결핵의 임상적 진단
2019년 4월부터 8월까지 4차 병원인 서울아산병원(서울, 대한민국)에서 결핵이 의심되는 성인 환자를 모집하였다. 결핵(TB) 의심 환자는 내과 전문의에 의하여 미생물학적, 병리학적 임상상에 따라 표준화된 방법으로 결핵 유무를 진단하였다. 진단 결과에 따라 결핵 확정(confirmed TB) 또는 결핵 의심(probable TB) 환자는 활동성 결핵(active TB)으로 분류하고, 비활동성 결핵(not active TB) 환자는 잠복결핵(not active with LTBI) 또는 결핵 아님(not active TB without LTBI)으로 분류 하였다. 결핵 가능(Possible TB) 환자는 분석에서 제외 하였다. 선입견(bias)를 피하기 위하여 결핵을 진단하는 전문의에게는 형광스폿 분석(fluorospot assay)결과를, 분석을 수행하는 연구자에게는 임상적 진단 결과를 맹검법으로 진행하였다. 본 연구는 서울아산병원의 IRB (임상 연구 심의 위원회)의 승인을 받고 수행하였으며, 모든 참가자로부터 동의서를 수집하였다. 이에 따른 결핵 의심 환자의 임상적 분류 결과를 아래의 표 1에 나타내었다.
| [결핵 확정(confirmed TB)] 배양에서 M. tuberculosis 또는 M. tuberculosis PCR에 양성인 임상 표본 |
| [결핵 의심(probable TB)] 1. 결핵치료에 대한 성공적 반응 및, 2. 다음의 기준 중 어느 하나를 만족함 1)조직 생체검사에서 건락육아종(caseating granuloma)이 나타남 2) 활동성 폐결핵과 상응하는 흉부 CT 소견 3) 결핵 수막염과 일치하는 뇌척수액 변화와 관련된 수막염의 임상 사진 4) 흉막 결핵과 일치하는 흉액 변화와 관련된 흉막 질환의 임상 사진 5) 비뇨 생식기 결핵과 일치하는 설명할 수 없는 비뇨기 증상 또는 지속적인 폐렴 및 방사선 소견의 임상 사진 |
| [결핵 가능(Possible TB)] 상기 기준을 충족시키지 못했지만 활성 결핵을 배제 할 수 없는 환자 |
| [비활동성 결핵(Not active tuberculosis)] 항결핵치료 없이 다른 결핵 증상, 임상적 개선이 없음, 또는 최근 결핵에 노출되었으나 결핵 증상과 흉부 엑스레이 이상증상 없음 1) 잠복결핵: 인터페론 감마 분비 분석에서 양성 판정 2) 결핵비감염: 인터페론 감마 분비 분석에서 음성 판정 |
(2)
말초혈액단핵세포
(
PBMC
) 분리
말초혈액단핵세포(PBMC)는 EDTA 튜브에 수집된 환자의 정맥혈로부터 분리하여 실험시까지 액체 질소 탱크에 보관하였다. 냉동된 PBMC는 빠르게 해동하여 RPMI 1640 배지(Gibco, Grand Island, NY, USA)로 세척하고 1600 rpm, 20 ℃에서 10분간 원심분리하였다. 세포는 다시 AIM-V (Gibco) 배지에 풀고, 10 ㎍/㎖의 DNase를 37 ℃에서 1시간 동안 처리하였으며, Cellometer (Nexcelom Bioscience, Lawrence, MA, USA)를 이용하여 계수하였다.
(3) 형광스폿 분석(
Fluorospot
assay
)
-
실시예
1:
IFN
-γ/
TNF
-α동시 분비 분석
형광스폿 분석은 Human IFN-γ/TNF-α FluoroSpot kit (Mabtech AB, Nacka Strand, Sweden)를 이용하였으며, 제조사의 실험방법을 다음과 같이 변경하여 수행하였다. 키트에 포함된 anti-IFN-γ와 anti-TNF-α 포획 항체(capture antibodies)가 선처리되어 있는 96 웰 플레이트를 멸균된 PBS를 이용하여 세 번 세척하였다. 세척된 플레이트에 200 ㎕의 AIM-V 배지를 넣고 37 ℃에서 1시간 동안 배양하였다. 준비된 플레이트에 웰 당 2 x 105의 PBMC (100 ㎕)를 넣고, 3가지 결핵 특이 항원인 ESAT-6, CFP-10, Ag85B (JPT Peptide Technologies Inc., Berlin, Germany)를 각각 2 ㎍/㎖ 농도로 50 ㎕ 씩 첨가하였다. 세 가지 항원은 각 검체 마다 2반복으로 수행하였다. 양성 대조군은 2 ㎍/㎖의 피토헤마글루티닌(phytohemagglutinin) (PHA, Sigma-Aldrich)을 사용하였으며, 음성 대조군은 AIM-V 배지를 사용하였다. PBMC와 결핵 특이 항원 또는 대조군이 처리된 플레이트는 37 ℃, 5% CO2 인큐베이터에서 18시간 동안 배양한 후, PBST (PBS with 0.01% Tween 20, Sigma)를 이용하여 5회, PBS를 이용하여 1회 세척하였다. 두 가지 검출 항체 (detection antibodies), anti-IFN-γ mAb (7-B6-1-BAM)와 anti-TNF-α mAb (TNF5-biotinylated)를 0.1% BSA가 포함된 PBS (PBS-0.1% BSA)로 희석하여 1 ㎍/㎖ 농도로 플레이트에 처리하고 2시간 동안 실온에서 배양하였다. 배양 후, 위와 같은 방법으로 총 6회 세척하고, PBS-0.1% BSA로 희석한 형광단 결합 항체 (fluorophore-conjugated reagent) anti-BAM-490와 SA-550를 1시간 동안 실온에서 처리하였다. 플레이트를 PBST로 3회, PBS로 3회 세척하고, 형광 증폭제 (fluorescence enhance)를 50 ㎕ 넣고 10분간 스폿(spot)을 발현시켰다. 증류수로 3회 세척하여 형광 발현을 중지시키고, 하룻밤 동안 건조시켰다. 두 가지 색상의 형광 스폿을 FluoroSpot Reader (AID, Strassberg, Germany)를 이용하여 계수하고, 연구자가 각각의 웰을 재 확인하였다.
-
비교예
1:
IFN
-γ/
TNF
-α 동시 분비 분석
3가지 결핵 특이 항원 중 Ag85B을 제외한 ESAT-6 및 CFP-10의 2가지 결핵 특이 항원을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 형광스폿 분석을 수행하였다.
-
비교예
2:
IFN
-γ 단일 분비 분석
3가지 결핵 특이 항원 중 Ag85B을 제외한 ESAT-6 및 CFP-10의 2가지 결핵 특이 항원을 사용한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 형광스폿 분석을 수행하였다.
-
실시예
3:
TNF
-α 단일 분비 분석
3가지 결핵 특이 항원 중 Ag85B을 제외한 ESAT-6 및 CFP-10의 2가지 결핵 특이 항원을 사용한 것을 제외하고는 실시예 3과 동일한 방법으로 형광스폿 분석을 수행하였다.
활동성 결핵 및 비활동성 결핵 진단
(1) 판정 기준
도 2는 활동성 결핵 및 비활동성 결핵 판정의 연구 흐름도이다. 이를 참조하여 결핵의 판정 및 본 발명의 결핵 진단방법의 민감도(%), 특이도(%), 양성 예측값(Positive predictive value, %) 및 음성 예측값(Negative predictive value, %)를 분석하고자 한다.
형광스폿 분석은 다음과 같은 방법으로 양성(positive), 음성(negative), 미확정(indeterminate)으로 분류하였다. 하나의 형광(초록색: IFN-γ, 붉은색: TNF-α)을 발현하는 스폿의 경우, 결핵 특이 항원을 처리한 웰의 스폿 숫자가 음성 대조군에 비하여 6개 이상 많으면 양성으로 판정하였다. 단, 음성 대조군의 스폿 숫자 (spot-forming cells, SFC)가 5개를 초과하는 경우에는 음성 대조군에 비하여 결핵 항원 처리군의 스폿이 2배 이상 많을 때, 양성으로 판정하였다.
한편, 두 가지 형광을 동시에 발현하는 듀얼 스폿(dual spot)의 경우, 결핵 항원 처리군의 듀얼 스폿이 음성 대조군에 비하여 4개 이상 많으면 양성으로 판정하였다. 마찬가지로 음성 대조군의 스폿이 5개를 초과하는 경우에는 음성 대조군에 비하여 결핵 항원 처리군의 듀얼 스폿이 2배 이상 많을 때, positive로 판정하였다. 양성 대조군이 negative 판정을 받는 경우와 음성 대조군의 스폿 숫자가 너무 많은 경우(>100 SFC)에는 미확정으로 판정하였다.
(2) 임상적 진단 결과
서울 아산병원을 내원한 환자 중에서 결핵이 의심되는 환자 정맥혈 검체 48개를 수집하고 형광스폿 분석(Fluorospot assay)을 수행하였다. 48개 중에서 21개는 결핵 확정(confirmed TB) 또는 결핵 의심(probable TB)으로 진단되어 활동성 결핵(active TB) 그룹으로 분류되었고, 21개는 비활동성 결핵(not active TB) 그룹으로 분류되었다. 21개의 비활동성 결핵(not active TB) 검체들은 인터페론 감마 분비 분석(IFN-γ release assay, IGRA) 결과에 의해 6개는 잠복결핵(not active with LTBI)로, 나머지 15개는 결핵 아님(not active TB without LTBI)군으로 분류되었다. 6개 검체는 가능 결핵(Possible TB) 환자는 분석에서 진단되어 분석에서 제외 되었다.
(3) 형광스폿 분석의 민감도와 특이도 분석
인터페론 감마 단일 분비 분석 (IFN-γ single release assay, IGRA, 초록 형광 spot), 티엔에프 알파 단일 분비 분석 (TNF-α single release assay, TARA, 붉은 형광 spot), 및 인터페론 감마와 티엔에프 알파 동시 분비 분석 (IFN-γ/ TNF-α dual release assay, dual assay,)의 전형적인 결과를 임상적인 진단 결과에 따라 분류하여 도 3에 나타내었다.
Possible TB로 제외된 6개의 검체를 제외하고, 42개 검체 중에서 25개는 IGRA 양성, 17개는 IGRA 음성이었으며, 18개는 TARA 양성, 22개는 TARA 음성, 2개는 TARA 미확정(indeterminate) 이었다. 인터페론 감마와 티엔에프 알파 동시 분비 분석은 20개가 양성, 22개가 음성으로 나타났다.
실시예 1 내지 3. 및 비교예 1 내지 3에 대한 형광스폿 분석(Fluorospot assay)의 진단 수행도는 아래의 표 2에 정리하였다.
여기서 민감도는 임상적 진단시 활동성 결핵 진단자 중 형광스폿 분석에서 양성 판정을 받은 비율을 의미하고, 특이도는 임상적 진단시 비활동성 결핵 진단자 중 형광스폿 분석에서 음성 판정을 받은 비율을 의미한다. 또한, 양성 예측값은 형광스폿 분석시 양성 판정자 중 임상적 진단에서 활동성 결핵 진단을 받은 비율을 의미하고, 음성 예측값은 형광스폿 분석시 음성 및 미확정 판정자 중 임상적 진단에서 비활동성 결핵 진단을 받은 비율을 의미한다.
| 구분 | 특이항원 | 분비검사 | 민감도 % (n/21a, 95% CI) |
특이도 % (n/21b, 95% CI) |
양성예측값 % (95% CI) |
음성예측값 % (95% CI) |
| 실시예 1 | ESAT-6, CFP-10, Ag85B | IFN-γ/TNF-α 동시 | 90 (19/21, 68-98) | 95 (20/21, 74-100) | 95 (73-100) | 91 (69-98) |
| 실시예 2 | ESAT-6, CFP-10, Ag85B | IFN-γ-단일 | 90 (19/21, 68-98) | 71 (15/21, 48-88) | 76 (54-90) | 88 (62-98) |
| 실시예 3 | ESAT-6, CFP-10, Ag85B | TNF-α단일 | 81 (17/21, 57-94) | 95 (20/21, 74-100) | 94 (71-100) | 83 (62-95) |
| 비교예 1 | ESAT-6, CFP-10 | IFN-γ/TNF-α 동시 | 86 (18/21, 63-96) | 95 (20/21, 74-100) | 95 (72-100) | 87 (65-97) |
| 비교예 2 | ESAT-6, CFP-10 | IFN-γ-단일 | 86 (18/21, 63-96) | 76 (16/21, 52-91) | 78 (56-92) | 84 (60-96) |
| 비교예 3 | ESAT-6, CFP-10 | TNF-α단일 | 76 (16/21, 52-91) | 95 (20/21, 74-100) | 94 (69-100) | 80 (59-92) |
이에 따르면, 현재 임상에서 사용 중인 2가지 결핵 항원 (ESAT-6, CFP-10)을 이용한 인터페론 감마 분비 분석(비교예 2)는 활동성 결핵 진단을 위한 민감도가 86% (18/21, 95% CI 63-96), 특이도가 76% (16/21, 95% CI 52-91)로 나타났다. 티엔에프 알파 분비 분석(비교예 3)는 민감도 76% (16/21, 95% CI 52-91), 특이도 95% (20/21, 95% CI 74-100), 동시 분비 분석(비교예 1)는 민감도 86% (18/20, 95% CI 63-96), 특이도 95% (20/21, 95% CI 74-100) 였다.
본 발명의 새로 개발한 3가지 결핵 항원 (ESAT-6, CFP-10, Ag85B)을 이용한 인터페론 감마 분비 분석(실시예 2)는 활동성 결핵 진단을 위한 민감도가 90% (19/21, 95% CI 68-98), 특이도가 71% (15/21, 95% CI 48-88)로 나타났다. 티엔에프 알파 분비 분석(실시예 2)는 민감도 81% (17/21, 95% CI 57-94), 특이도 95% (20/21, 95% CI 74-100), 동시 분비 분석(실시예 1)는 민감도 90% (19/21, 95% CI 68-98), 특이도 95% (20/21, 95% CI 74-100) 였다. 본 발명에서 결핵 특이 항원 Ag85B를 추가한 결과 1/21 명의 활동성 결핵을 더 진단할 수 있고, 1/6 명의 잠복 결핵을 추가로 진단할 수 있었다.
이와 같은 결과를 정리하면, 2가지 항원을 이용한 검사인 비교예 1 내지 3의 민감도에 비하여 3가지 항원을 이용한 실시예 1 내지 3의 형광스폿 분석의 민감도가 인터페론 감마 분비 분석, 티엔에프 알파 분비 분석, 동시 분비 분석 각각에 있어서 현저한 증가가 있음을 확인할 수 있다.
이상, 본 발명의 실시예들에 대하여 설명하였으나, 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서, 구성 요소의 부가, 변경, 삭제 또는 추가 등에 의해 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있을 것이며, 이 또한 본 발명의 권리범위 내에 포함된다고 할 것이다.
Claims (9)
- 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 분비 분석에 의한 결핵 진단방법으로,
(a) 항-인터페론 감마 및 항-티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 포획 항체가 배양된 지지체를 준비하는 단계;
(b) 상기 지지체에 진단대상자의 혈액에서 분리된 말초혈액단핵세포(PBMC)와, ESAT-6, CFP-10, 및 Ag85B를 포함하는 결핵 특이항원을 가하여 항원-항체 복합체를 형성하는 단계;
(c) 상기 항원-항체 복합체가 형성된 지지체에 항-인터페론 감마 단일클론 항체 및 항-티엔에프 알파 단일클론 항체 중에서 선택된 1종 이상의 검출 항체를 처리하는 단계;
(d) 상기 검출 항체 처리된 결과물에 형광단 결합 시약을 처리하고 형광 증폭제를 가하여 형광 스폿을 발현시키는 단계; 및
(e) 상기 형광 스폿을 계수하여 양성, 음성, 또는 미확정으로 판정하는 단계;를 포함하는 결핵 진단방법. - 제1항에 있어서,
상기 결핵 진단방법은 인터페론 감마 단일 분비 분석 또는 티엔에프 알파 단일 분비 분석인 것을 특징으로 하는 결핵 진단방법. - 제2항에 있어서,
상기 인터페론 감마 단일 분비 분석 또는 티엔에프 알파 단일 분비 분석은 단계 (e)에서 계수된 상기 스폿의 수가,
결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 이하이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수에 비해 6개 이상 많을 때 결핵 양성으로 판정하고,
결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 초과이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수의 2배 이상일 때 결핵 양성으로 판정하는 것을 특징으로 하는 결핵 진단방법. - 제1항에 있어서,
상기 결핵 진단방법은 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 동시 분비 분석인 것을 특징으로 하는 결핵 진단방법. - 제4항에 있어서,
상기 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 동시 분비 분석은 두 가지 컬러의 형광 스폿을 동시에 발현시키는 것을 특징으로 하는 결핵 진단방법. - 제4항에 있어서,
상기 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 동시 분비 분석은 단계 (e)에서 계수된 상기 스폿의 수가,
결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 이하이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수에 비해 4개 이상 많을 때 결핵 양성(positive)으로 판정하고,
결핵 특이 항원이 처리되지 않은 음성대조군에서 발현된 스폿이 5개 초과이면, 상기 음성대조군에서 발현된 스폿의 수의 2배 이상일 때 결핵 양성으로 판정하는 것을 특징으로 하는 결핵 진단방법. - 제1항에 있어서,
상기 형광단 결합 시약은 anti-BAM-490 및 SA-550 중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 결핵 진단방법. - 제1항 내지 제7항 중에서 선택되는 어느 한 항의 결핵 진단에 사용되는 키트로서, 항-인터페론 감마 및 항-티엔에프 알파 중에서 선택된 1종 이상의 포획 항체가 처리된 지지체; 및 결핵 특이 항원인 ESAT-6, CFP-10, Ag85B;를 포함하는 결핵진단용 키트.
- 제8항에 있어서,
상기 결핵진단용 키트는 항-인터페론 감마 및 항-티엔에프 알파가 동시 처리된 지지체를 포함하는 것을 특징으로 하는 결핵진단용 키트.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020190143951A KR20210057315A (ko) | 2019-11-12 | 2019-11-12 | 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 분비 분석에 의한 결핵 진단방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020190143951A KR20210057315A (ko) | 2019-11-12 | 2019-11-12 | 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 분비 분석에 의한 결핵 진단방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20210057315A true KR20210057315A (ko) | 2021-05-21 |
Family
ID=76157499
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020190143951A KR20210057315A (ko) | 2019-11-12 | 2019-11-12 | 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 분비 분석에 의한 결핵 진단방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20210057315A (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20230100972A (ko) | 2021-12-29 | 2023-07-06 | 재단법인 오송첨단의료산업진흥재단 | 항원성 및 안정성이 개선된 항원을 포함하는 잠복결핵 진단용 조성물 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101733864B1 (ko) | 2015-05-29 | 2017-05-08 | 연세대학교 산학협력단 | 인터페론감마방출분석과 함께 사용되는 활동성 결핵과 잠복성 결핵을 구별하는 바이오마커 및 그 용도 |
-
2019
- 2019-11-12 KR KR1020190143951A patent/KR20210057315A/ko not_active Application Discontinuation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101733864B1 (ko) | 2015-05-29 | 2017-05-08 | 연세대학교 산학협력단 | 인터페론감마방출분석과 함께 사용되는 활동성 결핵과 잠복성 결핵을 구별하는 바이오마커 및 그 용도 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20230100972A (ko) | 2021-12-29 | 2023-07-06 | 재단법인 오송첨단의료산업진흥재단 | 항원성 및 안정성이 개선된 항원을 포함하는 잠복결핵 진단용 조성물 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jacobs et al. | Identification of novel host biomarkers in plasma as candidates for the immunodiagnosis of tuberculosis disease and monitoring of tuberculosis treatment response | |
| Chegou et al. | Beyond the IFN-γ horizon: biomarkers for immunodiagnosis of infection with Mycobacterium tuberculosis | |
| Ruhwald et al. | A multicentre evaluation of the accuracy and performance of IP-10 for the diagnosis of infection with M. tuberculosis | |
| Chen et al. | Diagnosis of active tuberculosis in China using an in-house gamma interferon enzyme-linked immunospot assay | |
| Jafari et al. | Rapid diagnosis of smear-negative tuberculosis by bronchoalveolar lavage enzyme-linked immunospot | |
| US10001481B2 (en) | Method for diagnosing tuberculosis disease by detecting induced markers after stimulation of T-cells with antigens | |
| Chegou et al. | Utility of host markers detected in Quantiferon supernatants for the diagnosis of tuberculosis in children in a high-burden setting | |
| Chiacchio et al. | Higher frequency of T-cell response to M. tuberculosis latency antigen Rv2628 at the site of active tuberculosis disease than in peripheral blood | |
| US11204352B2 (en) | Methods and kits for determining tuberculosis infection status | |
| Porfyridis et al. | Diagnostic value of triggering receptor expressed on myeloid cells-1 and C-reactive protein for patients with lung infiltrates: an observational study | |
| US20140342936A1 (en) | Methods and kits for diagnosing latent tuberculosis infection | |
| EP3111227B1 (en) | Method for diagnosing tuberculosis | |
| Li et al. | Evaluation of a new IFN-γ release assay for rapid diagnosis of active tuberculosis in a high-incidence setting | |
| Ferrian et al. | A combination of baseline plasma immune markers can predict therapeutic response in multidrug resistant tuberculosis | |
| Kim et al. | Combined IFN-γ and TNF-α release assay for differentiating active tuberculosis from latent tuberculosis infection | |
| Comella-del-Barrio et al. | A model based on the combination of IFN-γ, IP-10, ferritin and 25-hydroxyvitamin D for discriminating latent from active tuberculosis in children | |
| Luo et al. | The performance of pleural fluid T-SPOT. TB assay for diagnosing tuberculous pleurisy in China: a two-center prospective cohort study | |
| Chen et al. | Cytokine and antibody based diagnostic algorithms for sputum culture-positive pulmonary tuberculosis | |
| Luo et al. | Combination of mean spot sizes of ESAT-6 spot-forming cells and modified tuberculosis-specific antigen/phytohemagglutinin ratio of T-SPOT. TB assay in distinguishing between active tuberculosis and latent tuberculosis infection | |
| Johnson et al. | Evaluation of QuantiFERON SARS-CoV-2 interferon-γ release assay following SARS-CoV-2 infection and vaccination | |
| Liu et al. | Differential expression of CD64 in patients with Mycobacterium tuberculosis infection: A potential biomarker for clinical diagnosis and prognosis | |
| Zhou et al. | The diagnostic accuracy of high‐mobility group box 1 protein and twelve other markers in discriminating bacterial, viral and co‐infected bronchial pneumonia in Han children | |
| KR20210057315A (ko) | 인터페론 감마 및 티엔에프 알파 분비 분석에 의한 결핵 진단방법 | |
| Gatti et al. | Quantification of neutrophil and monocyte CD64 expression: a predictive biomarker for active tuberculosis | |
| Mosel et al. | Molecular microbiological and immune characterization of a cohort of patients diagnosed with early Lyme disease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal |