KR20210054090A - 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법 - Google Patents

혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법 Download PDF

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Abstract

본원은 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)에 포함된 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 조성물, 혈소판 풍부 혈장 제조방법 및 혈소판 풍부 혈장을 포함하는 건병증 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다.
본원의 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법에 따르면, 혈소판 풍부혈장에 포함된 백혈구, VEGF, IL-8 등의 세포, 성장인자 및 사이토카인의 농도를 측정하여 실제 임상적으로 치료 효과가 있는 혈소판 풍부 혈장을 선별할 수 있는 바, 효율적으로 혈소판 풍부 혈장을 질병 치료에 이용할 수 있다.

Description

혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법 {A method for assessing the clinical efficacy of platelet-rich plasma}
본원은 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)에 포함된 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법, 혈소판 풍부 혈장 제조방법 및 혈소판 풍부 혈장을 포함하는 건병증 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다.
건 조직은 콜라겐 섬유(collagen fibril)가 소수의 건세포(tenocytes) 및 섬유아세포와 밀집된 고도로 정렬된 복합체이다. 콜라겐 섬유는 주로 제 I형 콜라겐이며 다른 유형의 콜라겐과 디코린(decorin), 비글리칸(biglycan), 및 파이브로모듈린(fibromodulin)과 같은 프로테오글리칸이 일부 존재한다. 건 조직의 발달 동안 건세포는 콜라겐 섬유의 합성을 담당하며, 프로테오글리칸은 콜라겐 섬유질의 조립과 건의 생체 역학적 특성 획득을 조절하는 중요한 구성 요소이다.
건병증(Tendinopathy)은 임상에서 나타나는 건 조직의 일반적인 병리학적 상태로, 세포의 형태가 더욱 둥글게되면서 그 수가 많아지며 아폽토시스성 세포사멸(apoptotic cell death)의 특징을 나타낸다. 이러한 상태에서 세포 외 기질에 다양한 변화가 일어나 콜라겐 섬유가 파괴되고 강한 에너지를 전달하는데 사용되는 독특한 생체 역학적 특성을 잃어버리게 된다.
이에 건병증을 치료하기 위한 새로운 치료법에 대한 많은 연구가 진행 중이다. 재생 의학 분야에서는 성장 인자, 유전자 치료법 및 조직 공학 기술을 사용하여 건 조직의 기능을 회복시키기 위한 연구를 진행하고 있으며, 최근, 건유래 줄기세포(tendon-derived stem cell; TDSCs)를 이용하여 건병증을 치료하는 방법이 연구되고 있다.
혈소판 풍부 혈장 (PRP, Patelet Rich Plasma)은 혈액을 특수 처리 후 원심 분리한 것을 말하는데, 일반 혈액보다 혈소판이 풍부하게 응축되게 만든 혈장 성분을 의미한다. 혈소판 풍부 혈장은 전혈과 비교했을 때 높은 농도의 혈소판 수치를 보이며 상처 치유에 도움이 되는 다양한 성장인자 및 사이토카인들을 보유하고 있으며, 상기 물질들은 세포의 증식과 분화, 화학주성(chemotaxis), 혈관신생(angiogenesis) 등에 중요한 역할을 한다.
혈소판 풍부 혈장 주사의 임상적인 효과에 대한 연구는 많이 진행되어 있으나, 치료에 사용하기 위해 혈액 채취 후 자가 혈소판 풍부 혈장을 얻었을 때, 이것이 실제로 효과가 있는 혈소판 풍부 혈장 인지에 대해서는 연구되거나 보고된 것이 없는 상태이다.
이에 본 발명자들은 실제 임상적으로 치료효과가 있는 혈소판 풍부 혈장을 선별할 수 있는 방법을 개발하고자 노력한 결과, 혈소판 풍부 혈장에 포함된 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도를 측정하여, 특정 농도 이상 존재할 경우 상기 혈소판 풍부 혈장이 임상적으로 유효하다는 것을 평가할 수 있는 방법을 개발하여 본 발명을 완성하였다.
대한민국 공개특허 제10-2019-0063211호
본원의 제 1 측면은, 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)에 포함된 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법을 제공하는 것이다.
본원의 제 2 측면은, 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)에 포함된 성장인자, 사이토카인 및 세포를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 조성물을 제공하는 것이다.
본원의 제 3측면은, 상기 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 조성물을 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 키트를 제공하는 것이다.
본원의 제 4 측면은, (A) 개체로부터 혈소판 풍부 혈장을 수득하는 단계; 및 (B) 수득한 혈소판 풍부 혈장의 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장 제조방법을 제공하는 것이다.
본원의 제 5 측면은, 혈소판 풍부 혈장을 포함하는, 건병증 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
본원의 제 1 측면은, 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)에 포함된 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법을 제공한다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)”은 원심 분리 과정을 통해 얻어지며, 전혈(whole blood)에 비해 높은 농도의 혈소판(platelet)을 함유하고 있다. 초기에는 혈소판이 혈액 응고 과정에만 작용하는 것으로 알려져 왔으나, 상처 치유에 대한 이해가 깊어지면서 혈소판이 함유하고 있는 풍부한 성장인자(growth factor)와 싸이토카인(cytokines)의 작용을 통해 조직 재생과 치유 과정에도 작용하는 것이 밝혀지게 되었으며, 현재는 정형외과, 성형외과, 신경외과, 피부과, 치과, 안과, 이비인후과 등 다양한 영역에서 다양한 적응증을 가지고 폭넓게 사용되고 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 성장인자, 사이토카인 및 세포는 PDGF(platelet-derived growth factor), TGF-β(transforming growth factor beta), VEGF(vascular endothelial growth factor), IGF-1(insulin-like growth factor 1), IL-1β(interleukin 1 beta), IL-8(interleukin 8), 및 백혈구(WBC, white blood cell) 중 하나 이상일 수 있으며, 구체적으로 VEGF, IL-8, 및 백혈구로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 혈소판 풍부 혈장에 포함된 백혈구, VEGF 및/또는 IL-8의 농도를 측정하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 혈소판 풍부 혈장에 백혈구가 포함된 경우 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있으며, 구체적으로 혈소판 풍부 혈장에 포함된 백혈구의 농도가 1.78 x103개/μL 이상인 경우, 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 혈소판 풍부 혈장에 포함된 백혈구의 농도가 0.99 x103개/μL 이상, 1.15 x103개/μL 이상, 1.23 x103개/μL 이상, 또는 1.78 x103개/μL 이상인 경우, 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 혈소판 풍부 혈장에 포함된 백혈구의 농도가 0.99 x103개/μL 이상, 1.15 x103개/μL 이상, 10.76 x103개/μL 이상, 또는 14.79 x103개/μL 이상인 경우, 구체적으로 10.76 x103개/μL 이상인 경우, 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 혈소판 풍부 혈장에 포함된 백혈구의 농도는 27.2 x103개/μL 이하 일 수 있으며, 일반적으로 혈소판 풍부 혈장에 포함될 수 있는 백혈구의 농도 이하라면 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 혈소판 풍부 혈장에 VEGF가 포함된 경우 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있으며, 구체적으로 혈소판 풍부 혈장에 포함된 VEGF의 농도가 37.71 pg/mL 이상인 경우, 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 혈소판 풍부 혈장에 포함된 VEGF의 농도가 8.01 pg/mL 이상, 30.06 pg/mL 또는 37.71 pg/mL 이상인 경우, 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 혈소판 풍부 혈장에 포함된 VEGF의 농도는 145.4 pg/mL 이하 일 수 있으며, 일반적으로 혈소판 풍부 혈장에 포함될 수 있는 VEGF의 농도 이하라면 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 혈소판 풍부 혈장에 IL-8가 포함된 경우, 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법에서 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성은 외상과염(medial and lateral epicondylitis), 슬개건염(patellar tendinitis), 아킬레스 건염(Achilles tendinitis), 회전근 개 파열(rotator cuff tear), 족저근막염(plantar fasciitis), 연골 연화증(chondromalacia), 무릎 인대 손상(knee ligament injury), 급성 인대 손상(Acute ligament injury), 건 손상(Tendon injury), 팔꿈치 상과염(Elbow epicondylitis), 족저 근막염(Plantar fasciitis), 아킬레스 건 파열(Achilles tendon rupture), 근육 손상(Muscle injury), 골 손상(Bone injury) 및 연골 손상(Cartilage injury)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 치료에 대한 임상적 유효성일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법에서 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성은 건병증(Tendinopathy) 치료에 대한 임상적 유효성일 수 있으며, 구체적으로 상기 방법에서 임상적 유효성이 있다고 평가받은 혈소판 풍부 혈장은 건병증 치료에 있어서 임상적으로 치료효과가 있는 것을 의미하는 것일 수 있다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "임상적 유효성"은 질병에 대한 치료 효과가 임상적으로 유의한 수준을 의미하는 것으로서, 본원에서는 혈소판 풍부 혈장의 질병에 대한 치료 효과가 임상적으로 유의한 수준인지를 나타내는 것으로서, 구체적으로 건병증에 대한 치료 효과가 임상적으로 유의한 수준인지 나타내는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성은 혈소판 풍부 혈장을 건병증 환자에게 투여하고 3개월 또는 6개월 뒤에 통증 감소, 임상적 기능향상 및/또는 증상 호전 정도 등의 임상적 치료효과가 유의한 것을 의미하는 것일 수 있으며, 구체적으로 혈소판 풍부 혈장의 투여에 의해 NRS 통증 척도 점수로 평가하여 통증이 감소하거나, Constant 점수를 통해 통증 정도 및 일상생활 가능 정도가 향상되는 것을 의미하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "NRS(Numeral Rating Scale) 통증 척도"는 환자 개인의 통증 정도가 어느정도 인지 수치화 하는 것으로서, 구체적으로 환자 개인의 통증 없음을 0, 참을 수 없는 극심한 통증을 10이라고 설정한 후 평가한다. 예를 들어, 건병증으로 인한 통증이 있는 환자의 경우, 언제부터 아팠는지, 통증의 부위가 어디인지, 통증의 양상은 어떠한 지 등의 여러 문진을 실시한 후, 10을 참을 수 없는 극심한 통증이라고 하였을 때 현재 통증이 어느정도 되는 지 환자에게 확인한 후, 치료를 하고 다시 확인함으로서 통증 경감 등의 치료 효과 등을 확인할 수 있다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "Constant 점수"는 통증 정도 및 일상생활 가능 정도에 대한 주관적 평가(35점)과 운동 범위 및 근력에 대한 객관적 평가(65점)로 세분하여 평가하는 것으로서, 치료 전과 후의 constant 점수를 확인함으로서 치료 효과를 확인할 수 있다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "건병증(Tendinopathy)"은 건(힘줄)에 병이 생긴 것을 의미하는 것으로서, 구체적으로 만성적인 과사용(overuse)으로 인해 건 자체의 콜라겐의 퇴행성 변화에 의해 발생하는 것으로, 건 손상이 있을 때 휴식을 취하여 건이 치유되는 시간을 주지 않고 반복적인 염좌(strain)처럼 과사용 손상이 지속되었을 때 발생한다. 이와 유사하게 건염 (Tendinitis)이란 갑작스럽고 과도한 부하(힘)가 근건 단위(musculotendinous unit)에 가해졌을 때 건의 미세 파열(micro tear)에 의해 발생하는 건 자체의 염증을 의미한다. 임상현장에서는 일반적으로 건염과 건병증을 구분 없이 사용한다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 건병증은 부근염, 건초염, 건증, 건염, 햄스트링 근위부 건병증, 아킬레스 건병증, 고위 슬굴곡근 건병증 등을 포함하는 것일 수 있으며, 구체적으로, 회전근개건병증(rotator cuff tendinopathy)을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어 "평가"는, 혈소판 풍부 혈장의 질병에 대한 치료 효과가 임상적으로 유효한지 판별하는 것을 의미한다.
본원의 상기 방법은, 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)에 포함된 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성을 평가하기 위한 정보제공 방법일 수 있다.
본원의 제 2 측면은 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)에 포함된 성장인자, 사이토카인 및 세포를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 조성물을 제공한다. 제1측면과 중복되는 내용은 제2측면의 조성물에도 공히 적용된다.
본원의 일 구현에에 따르면, 상기 성장인자, 사이토카인 및 세포는 PDGF(platelet-derived growth factor), TGF-β(transforming growth factor beta), VEGF(vascular endothelial growth factor), IGF-1(insulin-like growth factor 1), IL-1β(interleukin 1 beta), IL-8(interleukin 8), 및 백혈구(WBC, white blood cell) 중 하나 이상일 수 있으며, 구체적으로 VEGF, IL-8, 및 백혈구로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현에에 따르면, 상기 조성물은 혈소판 풍부 혈장에 포함된 0.99 x103개/μL 이상, 1.15 x103개/μL 이상, 1.23 x103개/μL 이상, 또는 1.78 x103개/μL 이상의 백혈구를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 것일 수 있으며, 구체적으로 1.78 x103개/μL 이상의 백혈구를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 혈소판 풍부 혈장에 포함된 0.99 x103개/μL 이상, 1.15 x103개/μL 이상, 10.76 x103개/μL 이상, 또는 14.79 x103개/μL 이상의 백혈구를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현에에 따르면, 상기 조성물은 혈소판 풍부 혈장에 포함된 8.01 pg/mL 이상, 30.06 pg/mL 또는 37.71 pg/mL 이상의 VEGF를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 것일 수 있으며, 구체적으로 37.71 pg/mL 이상의 VEGF를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성은 건병증(Tendinopathy) 치료에 대한 임상적 유효성인 것일 수 있으며, 구체적으로 회전근개건병증(rotator cuff tendinopathy) 치료에 대한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 제 3 측면은 상기 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 조성물을 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 키트를 제공한다. 제1측면 및 제2측면과 중복되는 내용은 제3측면의 키트에도 공히 적용된다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 키트는 PDGF(platelet-derived growth factor), TGF-β(transforming growth factor beta), VEGF(vascular endothelial growth factor), IGF-1(insulin-like growth factor 1), IL-1β(interleukin 1 beta), IL-8(interleukin 8), 및 백혈구(WBC, white blood cell) 등과 같은 성장인자, 사이토카인 및 세포를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 것일 수 있으며, 구체적으로 VEGF, IL-8, 및 백혈구로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 검출할 수 있는 제제를 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 키트는 다양한 성장인자, 사이토카인 및 세포를 검출할 수 있는 제제를 검출할 수 있는 제제뿐만 아니라, 분석 방법에 적합한 다른 구성 성분 조성물, 용액 또는 장치가 포함될 수 있다.
본원의 제 4 측면은 (A) 개체로부터 혈소판 풍부 혈장을 수득하는 단계; 및 (B) 수득한 혈소판 풍부 혈장의 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장 제조방법을 제공한다. 제1측면 내지 제3측면과 중복되는 내용은 제4측면의 방법에도 공히 적용된다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "개체"는 건병증이 발병되거나 발병될 가능성이 있는 모든 생물체를 의미하며, 구체적인 예로, 마우스, 원숭이, 소, 돼지, 미니돼지, 가축, 인간 등을 포함하는 포유동물, 양식어류 등을 포함할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 임상적 유효성이 있는 혈소판 풍부 혈장 제조방법 일 수 있으며, 구체적으로 건병증 치료 또는 예방에 임상적 유효성이 있는 혈소판 풍부 혈장을 제조하는 방법일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 혈소판 풍부 혈장은 건병증 치료 또는 예방을 위한 것일 수 있고, 상기 건병증은 부근염, 건초염, 건증, 건염, 햄스트링 근위부 건병증, 아킬레스 건병증, 고위 슬굴곡근 건병증 등을 포함하는 것일 수 있으며, 구체적으로, 회전근개건병증(rotator cuff tendinopathy)을 치료 또는 예방하기 위한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 성장인자, 사이토카인 및 세포는 VEGF(vascular endothelial growth factor), IL-8(interleukin 8), 및 백혈구(WBC, white blood cell)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 수득한 혈소판 풍부 혈장에 포함된 백혈구, VEGF 및/또는 IL-8의 농도를 측정하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 백혈구가 포함된 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있으며, 구체적으로 백혈구의 농도가 1.78x103개/μL 이상인 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 백혈구의 농도가 0.99 x103개/μL 이상, 1.15 x103개/μL 이상, 1.23 x103개/μL 이상, 또는 1.78 x103개/μL 이상인 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 백혈구의 농도가 0.99 x103개/μL 이상, 1.15 x103개/μL 이상, 10.76 x103개/μL 이상, 또는 14.79 x103개/μL 이상인 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 VEGF가 포함된 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있으며, 구체적으로 VEGF의 농도가 37.71 pg/mL 이상인 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 VEGF의 농도가 8.01 pg/mL 이상, 30.06 pg/mL 또는 37.71 pg/mL 이상인 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 IL-8이 포함된 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본원의 제 5 측면은, 혈소판 풍부 혈장을 포함하는, 건병증 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다. 제1측면 내지 제4측면과 중복되는 내용은 제4측면의 건병증 치료 또는 예방용 약학 조성물에도 공히 적용된다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 건병증은 부근염, 건초염, 건증, 건염, 햄스트링 근위부 건병증, 아킬레스 건병증, 고위 슬굴곡근 건병증 등을 포함하는 것일 수 있으며, 구체적으로, 회전근개건병증(rotator cuff tendinopathy)을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 혈소판 풍부 혈장은 백혈구가 포함된 것일 수 있으며, 구체적으로 0.99 x103개/μL 이상, 1.15 x103개/μL 이상, 1.23 x103개/μL 이상, 또는 1.78 x103개/μL 이상 포함된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 혈소판 풍부 혈장은 0.99 x103개/μL 이상, 1.15 x103개/μL 이상, 10.76 x103개/μL 이상, 또는 14.79 x103개/μL 이상의 백혈구가 포함된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 혈소판 풍부 혈장은 VEGF가 포함된 것일 수 있으며, 구체적으로 8.01 pg/mL 이상, 30.06 pg/mL 또는 37.71 pg/mL 이상 포함된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 혈소판 풍부 혈장은 IL-8이 포함된 것일 수 있다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "치료"란, 본원의 약학 조성물의 투여에 의해 건병증이 억제되거나 지연되는 모든 행위를 의미한다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "예방"이란, 본원의 약학 조성물의 투여에 의해 건병증의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약학 조성물은 약학적 분야의 통상의 방법에 따라 환자의 신체 내 투여에 적합한 단위투여형의 약학적 제제로 제형화시켜 투여할 수 있으며, 상기 제제는 1회 또는 수회 투여에 의해 효과적인 투여량을 포함할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 제형으로는 비경구투여 제제로서 주사제, 주입제 등이 바람직하다. 또한, 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 통상의 불활성 담체 및 희석제를 포함할 수 있다.
본원의 약학 조성물에 포함될 수 있는 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제는 전분, 당, 및 만니톨과 같은 부형제, 칼슘 포스페이트 등과 같은 충전제 및 증량제, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 등과 같은 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 알긴산염, 및 폴리비닐 피롤리돈 등과 같은 결합제, 활석, 스테아린산 칼슘, 수소화 피마자유 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 윤활제, 포비돈, 크로스포비돈과 같은 붕해제, 폴리소르베이트, 세틸알코올, 및 글리세롤 등과 같은 계면활성제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 약학적으로 허용되는 담체 및 희석제는 편도 유래 줄기세포 및 이를 이식 받을 수혜자에 대해 생물학적 및 생리학적으로 친화적인 것일 수 있다. 희석제로는 이에 한정되지 않으나, 염수, 수용성 완충액, 용매 및/또는 분산제(dispersion media)를 들 수 있다. 이외에도, 예를 들어, 주사제의 경우에는 보존제, 무통화제, 가용화제 또는 안정화제 등을, 국소투여용 제제의 경우에는 기제(base), 부형제, 윤활제 또는 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 본원의 조성물은 동결되지 않은 채 사용되거나 차후 사용을 위해 동결될 수 있다. 동결되어야 할 경우, 표준 냉동보존제 (예를 들어 DMSO, 글리세롤, 에피라이프 (Epilife®) 세포 동결 배지 (Cascade Biologics))가 동결 전 세포 집단에 첨가될 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 건병증 예방 또는 치료용 약학 조성물은 건병증을 치료하기 위하여, 또는 건병증의 발병을 억제하기 위하여 약학적으로 효과적인 양으로 투여될 수 있으며 상기 투여량은 건병증의 진행 상태, 환자의 연령, 체중, 증상의 특성 및 정도, 현재 치료법의 종류, 치료 회수, 투여 형태 및 경로 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 해당 분야의 전문가들에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본원의 조성물은 상기한 약리학적 또는 생리학적 성분을 함께 투여하거나 순차적으로 투여할 수 있으며, 또한 추가의 종래의 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 이러한 투여는 단일 또는 다중 투여일 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 건병증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 건병증의 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 구체적으로, 본원의 건병증의 예방 또는 치료 방법은 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "개체"란, 본원의 약학 조성물을 투여하여 건병증이 경감, 억제 또는 치료될 수 있는 상태 또는 건병증을 앓고 있거나 그러한 위험이 있는 인간을 포함한 마우스, 래트, 햄스터, 돼지, 소, 가축 등의 모든 동물을 의미한다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "투여"란, 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본원의 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
본원의 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법에 따르면, 혈소판 풍부혈장에 포함된 백혈구, VEGF, IL-8 등의 세포, 성장인자 및 사이토카인의 농도를 측정하여 실제 임상적으로 치료 효과가 있는 혈소판 풍부 혈장을 선별할 수 있는 바, 효율적으로 혈소판 풍부 혈장을 질병 치료에 이용할 수 있다.
이하 본원을 실시예 및 실험예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본원의 범위가 이들 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 실험군 및 대조군 설정
실험을 수행하기 위해 회전근개건병증 환자 70명을 모집하였으며, 이 중 수술 및 스테로이드 주사 치료를 수행한 6명을 제외하였고, 나머지 64명의 환자를 각각 운동요법 치료군(대조군) 34명 및 혈소판 풍부 혈장(PRP) 치료군(실험군) 30명으로 분류하였으며, 상기 PRP 치료군은 다시 LP-PRP(Leukocyte-poor platelet-rich plasma) 치료군 15명 및 LR-PRP(Leukocyte-rich platelet-rich plasma) 치료군 15명으로 분류하였다.
또한, 상기 64명의 환자 중 대조군에서 1명, 실험군에서 3명(LP-PRP 2명, LR-PRP 1명)이 중도탈락되어, 최종적으로 대조군 33명, 실험군 27명으로 실험을 수행하였다.
실시예 2: 혈소판 풍부 혈장 제조
혈소판 풍부 혈장 중 LP-PRP은 ACPTM 키트 (Arthrex)를 이용하여 15ml의 혈액으로부터 4ml의 LP-PRP를 제조하였다. 구체적으로, 응고제가 들어있는 1개의 Double syringe와 나비바늘을 연결하여 대상 환자로부터 15ml의 혈액을 채취하고, 1500rpm으로 5분간 원심분리를 시행하였다. 다음으로, Double syringe의 바깥쪽 plunger를 천천히 누르면서 안쪽 plunger를 천천히 당기며 맑은 농도의 4ml의 LP-PRP를 분리하였다. 이 중 1.5ml의 LP-PRP는 초음파 유도 하에서 회전근개에 주입하였다.
혈소판 풍부 혈장 중 LR-PRP은 GPSTM III 키트 (Biomet)를 이용하여 60ml의 혈액으로부터 6ml의 LR-PRP를 제조하였다. 구체적으로, GPS 키트에 동봉된 60ml syringe에 6ml의 항응고제를 투입한 후, 60ml syringe와 나비 바늘을 연결하여 54ml의 혈액을 채취한 후 3200rpm으로 약 15분간 원심분리를 시행하여 6ml의 LR-PRP를 분리하였다. 이 중 1.5ml의 LR-PRP는 초음파 유도 하에서 회전근개에 주입하였다.
실시예 3: 회전근개건병증 초음파 평가 및 혈소판 풍부 혈장 주입
회전근개건병증 초음파 평가를 위해, 실험군 및 대조군을 똑바로 앉힌 후 수정된 크래스 위치(modified crass position) 상태에서 극상근 부위에 초음파 탐지기를 위치시켜 극상근의 두께를 측정하였고, 대결졀(Greater tuberosity)에서부터 수직으로 극상근에 이르기까지의 가장 긴 영역을 측정하였다. 해당 평가는 실험군 및 대조군에서 모두 시행하였으며, 치료 시작 전 및 최종 6개월 추시 시점에 시행한 후 비교하였다.
혈소판 풍부 혈장 주입을 위해, 최초의 초음파 평가가 끝난 후 실험군 피험자를 똑바로 앉힌 후, 퇴행성 회전근개 병변이 있는 상완을 최대한 외회전 시켰다. 다음으로, 초음파를 통해 이두박근 장인대의 횡단면을 찾고, 횡단면을 유지하면서 근위부로 이동하여 극상근 부위에 초음파탐지기를 위치시킨 후, 바늘을 이용하여 초음파 유도 하에 수평 방향으로 퇴행성 극상근 부위에 자가 혈소판 풍부 혈장 1.5ml를 주입하였다. 양측 회전근개 병변부위에 혈소판 풍부 혈장을 주입하는 피험자의 경우 양측 병변부위에 각각 1.5ml를 주입하였고, 한쪽의 병변부위에 혈소판 풍부 혈장을 주입한 직후 동일한 방법으로 다른 병변부위에 주입하였다.
실시예 4: 혈소판 풍부 혈장이 투여된 환자의 임상적 치료효과 확인
상기 실시예 1에서 설정한 실험군의 혈소판 풍부 혈장 투여 전, 투여 후 3개월 및 투여 후 6개월의 임상적 기능향상 및 증상 호전 정도를 Numeral Rating Scale (NRS) 통증척도 또는 Constant 점수로 각각 평가하였다. 구체적으로, NRS 통증척도는 통증의 정도를 환자의 주관에 따라 0~10의 척도로 선택할 수 있게 하고, Constant 점수는 통증 정도 및 일상생활 가능 정도에 대한 주관적 평가(35점)과 운동 범위 및 근력에 대한 객관적 평가(65점)로 세분하여 평가하였다.
실시예 5: 혈소판 풍부 혈장 내의 성장인자, 사이토카인 및 세포 농도 확인
상기 실시예 2에서 제조한 환자의 자가 혈소판 풍부 혈장에 포함된 PDGF(platelet-derived growth factor), TGF-β(transforming growth factor beta), VEGF(vascular endothelial growth factor), IGF-1(insulin-like growth factor 1), IL-1β(interleukin 1 beta), IL-8(interleukin 8), 및 백혈구(WBC, white blood cell)의 농도를 확인하였다.
PDGF, IGF-1, TGF-β, IL-1β(interleukin 1 beta), IL-8(interleukin 8) 및 VEGF 등의 사이토카인 농도 수준을 정량화하기 위해 Multiplex cytokine assay를 수행하였으며, 구체적으로, 혈소판 풍부 혈장 세포를 배지가 포함된 6-웰 플레이트에 웰 당 1 Х 105 개의 세포를 접종한 후, 배양 후 배양 배지(1mL)를 수집하고 제조자의 지시에 따라 Milliplex human cytokine/chemokine magnetic panel kit (Millipore, Billerica, MA, USA)를 사용하여 분석하였다. 또한, 96-웰 플레이트에 25μL의 시료와 25μL의 beads를 넣고 4℃에서 밤새 배양하였다. 다음날, 플레이트의 내용물을 제거하고 검출 항체 25μL를 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 배양하였다. 배양 후, 우리는 검출 항체를 함유하는 플레이트의 각 웰에 25 ㎕의 streptavidin-phycoerythrin을 첨가하고 각 웰에 150 μL의 sheath fluid를 첨가했다. 마지막으로 우리는 cytometer (Luminex 200, Luminex, Austin, TX, USA)를 이용하여 플레이트의 사이토카인 및 케모카인의 농도를 판독했다.
백혈구의 수는 혈액 분석기 (Siemens ADVIA 2120i, Siemens Healthcare Diagnostics, Erlangen, Germany)를 사용하여 정량화 하였다.
실시예 6: 통계적 분석
실시예 1에서 확인한 회전근개건변증 환자로부터 수득한 혈소판 풍부 혈장 내의 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도와 혈소판 풍부 혈장이 투여된 환자의 임상적 치료효과의 상관관계를 확인하기 위해, 상관분석(correlation analysis) 및 일반화선형모형(Generalized Linear Model, GLM)을 수행하였으며, 추가적으로 해당 부분의 초기값을 보정하기 위한 공분산분석(ANalysis Of COVariance, ANCOVA)을 수행하였다. 해당 분석을 통해 유의한 요인을 확인하였으며, 이러한 요인(Constant, NRS)의 최적 기준값을 정하기 위해 로지스틱 회귀분석(logistic regression)을 통해 오즈비(odds ratio)가 유의한 기준값을 선정하였다. 또한 유의한 기준값이 다수일 경우에는 가장 큰 값(max value)을 기준으로 선정하였다.
구체적으로, 실험군 27명, 대조군 33명으로 총 60명의 데이터를 이용하여 분석하였으며, 데이터 분석 시 연속 변수는 평균 ± 표준편차로 표시하였고, 범주형 변수는 횟수로 표시하였다. 범주형 자료에 대하여 chi-square test 혹은 Fisher exact test를 시행하였다. 집단별 혈액정보에 대해 차이가 존재하는지 파악하기 위해 독립 이표본 t-검정(independent two-samples t-test)을 통해 차이 검정을 실시하였다. 집단별 성장인자에 대해 차이가 존재하는지 파악하기 위해 Mann-Whitney 검정을 통해 차이 검정을 실시하였다. 임상 점수에 대한 PRP 군과 대조군의 차이값을 비교하기 위하여 공분산분석(ANCOVA)을 통해 중재에 따른 변화의 유의성을 검증하였다. Cut-off 값을 구하기 위해 스피어만 상관 분석을 시행하여 유의한 변수를 정한 뒤 초기값을 보정한 회귀분석을 통하여 각각의 수치를 다른 값들과 개별적으로 비교하여 유의한 값을 산정하였다. 모든 통계적 분석은 IBM SPSS version 20.0 (IBM corporation) 을 이용하였으며, 통계적 유의성은 P 값이 0.05 미만인 경우로 정하였다.
실시예 7: 혈소판 풍부 혈장 내의 성장인자, 사이토카인 및 세포 농도와 혈소판 풍부 혈장의 임상적 치료 효과의 연관성 확인-NRS 통증 척도
혈소판 풍부 혈장 치료에 따른 임상적 치료 효과와 혈소판 풍부 혈장의 사이토카인 및 세포의 농도를 토대로, 통계적 분석을 통해 혈소판 풍부 혈장에 포함된 다양한 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도와 혈소판 풍부 혈장의 임상적 치료 효과의 연관성을 NRS 통증 척도를 통하여 확인하였다.
구체적으로, 실시예 1에서 설정한 PRP 치료군(실험군)의 초기 혈소판 풍부 혈장 내에 포함된 PDGF, TGF-β, VEGF, IGF-1, IL-1β, IL-8, 및 백혈구의 농도, 대조군과 실험군에서 혈소판 풍부 혈장 주입 후 3개월 째 및 6개월 째의 NRS 통증 척도, 각각의 사이토카인 및 세포의 cut 수치를 기준으로 그 값보다 높은 값과 낮은 값을 통계적으로 비교하여 해당 값이 임상적 결과에 유의미한 영향을 미치는지 통계적으로 분석한 결과 등을 토대로 비교 분석하여 임상적으로 치료 효과가 있는 cut-off value를 확인하였다.
그 결과, 회전근개건변증 환자에 혈소판 풍부 혈장 주사 후 6개월째의 NRS 통증 척도의 임상적 효과를 확인할 수 있는 변수로써 혈소판 풍부 혈장에 백혈구가 0.99 x103개/μL 이상, 1.15 x103개/μL 이상, 1.23 x103개/μL 이상 또는 1.78 x103개/μL 이상 포함된 경우, 환자의 통증을 완화하는 등의 임상적으로 유의미한 치료 효과를 나타낼 수 있는 것으로 판단할 수 있으며, 이 중 가장 높은 수치인 1.78 x103개/μL 이상인 경우 임상적으로 가장 유의미한 치료효과를 보여줄 수 있을 것으로 판단된다(표 1).
Figure pat00001
* total: 검사에서 detection이 된 검사의 개수
* num: 해당 cut value 값과 회귀분석을 시행한 다른 값들의 총 수로서, cut value 이상의 수치를 가지는 값의 수
또한, 회전근개건변증 환자에 혈소판 풍부 혈장 주사 후 6개월째의 NRS 통증 척도의 임상적 효과를 확인할 수 있는 변수로써, 혈소판 풍부 혈장에 VEGF가 8.01 pg/mL 이상, 30.06 pg/mL 또는 37.71 pg/mL 이상 포함된 경우, 환자의 통증을 완화하는 등의 임상적으로 유의미한 치료 효과를 나타낼 수 있는 것으로 판단할 수 있으며, 이 중 가장 높은 수치인 37.71 pg/mL 이상인 경우가 임상적으로 가장 유의미한 치료효과를 보여줄 수 있을 것으로 판단된다(표 2).
Figure pat00002
* total: 검사에서 detection이 된 검사의 개수
* num: 해당 cut value 값과 회귀분석을 시행한 다른 값들의 총 수로서, cut value 이상의 수치를 가지는 값의 수
또한, 회전근개건변증 환자에 혈소판 풍부 혈장 주사 후 6개월째의 NRS 통증 척도의 임상적 효과를 확인할 수 있는 변수로써, 혈소판 풍부 혈장에 IL-8가 0 ng/mL 이상 포함된 경우, 환자의 통증을 완화하는 등의 임상적으로 유의미한 치료 효과를 나타낼 수 있는 것으로 판단할 수 있으며, 따라서, IL-8은 0 이상 포함된 경우, 즉 혈소판 풍부 혈장에 IL-8이 발현되거나 포함된 경우 임상적으로 유의미한 치료 효과를 나타낼 수 있는 것으로 판단할 수 있다(표 3).
Figure pat00003
* total: 검사에서 detection이 된 검사의 개수
* num: 해당 cut value 값과 회귀분석을 시행한 다른 값들의 총 수로서, cut value 이상의 수치를 가지는 값의 수
또한, 혈소판 풍부 혈장에 포함된 PDGF, TGF-β, IGF-1 또는 IL-1β의 농도와 실제 NRS 통증 척도를 통한 임상적 치료효과는 유의미한 상관관계를 보이지 않는 것으로 보인다.
실시예 8: 혈소판 풍부 혈장 내의 성장인자, 사이토카인 및 세포 농도와 혈소판 풍부 혈장의 임상적 치료 효과의 연관성 확인-Constant 점수
혈소판 풍부 혈장 치료에 따른 임상적 치료 효과와 혈소판 풍부 혈장의 사이토카인 및 세포의 농도를 토대로, 통계적 분석을 통해 혈소판 풍부 혈장에 포함된 다양한 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도와 혈소판 풍부 혈장의 임상적 치료 효과의 연관성을 Constant 점수를 통하여 확인하였다.
구체적으로, 실시예 1에서 설정한 PRP 치료군(실험군)의 초기 혈소판 풍부 혈장 내에 포함된 PDGF, TGF-β, VEGF, IGF-1, IL-1β, IL-8, 및 백혈구의 농도, 대조군과 실험군에서 혈소판 풍부 혈장 주입 후 3개월 째 및 6개월 째의 Constant 점수, 각각의 사이토카인 및 세포의 cut 수치를 기준으로 그 값보다 높은 값과 낮은 값을 통계적으로 비교하여 해당 값이 임상적 결과에 유의미한 영향을 미치는지 통계적으로 분석한 결과 등을 토대로 비교 분석하여 임상적으로 치료 효과가 있는 cut-off value를 확인하였다.
그 결과, 회전근개건변증 환자에 혈소판 풍부 혈장 주사 후 6개월째의 Constant 점수의 임상적 효과를 확인할 수 있는 변수로써 혈소판 풍부 혈장에 백혈구가 0.99 x103개/μL 이상, 1.15 x103개/μL 이상, 10.76 x103개/μL 이상 또는 14.79 x103개/μL 이상 포함된 경우, Constant 점수가 향상되는 등의 임상적으로 유의미한 치료 효과를 나타낼 수 있는 것으로 판단할 수 있으며, 이 중 백혈구 농도가 높으면서 OR값이 높은 수치인 10.78 x103개/μL 이상인 경우가 임상적으로 가장 유의미한 치료효과를 보여줄 수 있을 것으로 판단된다(표 4).
Figure pat00004
* total: 검사에서 detection이 된 검사의 개수
* num: 해당 cut value 값과 회귀분석을 시행한 다른 값들의 총 수로서, cut value 이상의 수치를 가지는 값의 수
또한, 회전근개건변증 환자에 혈소판 풍부 혈장 주사 후 6개월째의 Constant 점수의 임상적 효과를 확인할 수 있는 변수로써, 혈소판 풍부 혈장에 IL-8가 0 ng/mL 이상 포함된 경우, Constant 점수가 향상되는 등의 임상적으로 유의미한 치료 효과를 나타낼 수 있는 것으로 판단할 수 있으며, 따라서, IL-8은 0 이상 포함된 경우, 즉 혈소판 풍부 혈장에 IL-8이 발현되거나 포함된 경우 임상적으로 유의미한 치료 효과를 나타낼 수 있는 것으로 판단할 수 있다(표 5).
Figure pat00005
* total: 검사에서 detection이 된 검사의 개수
* num: 해당 cut value 값과 회귀분석을 시행한 다른 값들의 총 수로서, cut value 이상의 수치를 가지는 값의 수
또한, 혈소판 풍부 혈장에 포함된 PDGF, TGF-β, VEGF, IGF-1 또는 IL-1β의 농도와 실제 Constant 점수를 통한 임상적 치료효과는 유의미한 상관관계를 보이지 않는 것으로 보인다.
상기 내용을 종합해보면, 혈소판 풍부 혈장에 포함된 백혈구, VEGF 및 IL-8 농도를 확인하여, 상기 혈소판 풍부 혈장에 임상적으로 치료 효과가 있음을 미리 예측할 수 있는 바, 혈소판 풍부 혈장을 이용한 치료법을 효율적으로 운용할 수 있다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (19)

  1. 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)에 포함된 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 성장인자, 사이토카인 및 세포는 VEGF(vascular endothelial growth factor), IL-8(interleukin 8), 및 백혈구(WBC, white blood cell)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것인, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 방법은
    혈소판 풍부 혈장에 포함된 백혈구의 농도가 1.78 x103개/μL 이상인 경우, 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법.
  4. 제2항에 있어서, 상기 방법은
    혈소판 풍부 혈장에 포함된 VEGF의 농도가 37.71 pg/mL 이상인 경우, 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법.
  5. 제2항에 있어서,
    상기 방법은 혈소판 풍부 혈장에 IL-8가 포함된 경우, 상기 혈소판 풍부 혈장은 임상적으로 치료효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성은 건병증(Tendinopathy) 치료에 대한 임상적 유효성인 것인, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가 방법.
  7. 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)에 포함된 성장인자, 사이토카인 및 세포를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 성장인자, 사이토카인 및 세포는 VEGF(vascular endothelial growth factor), IL-8(interleukin 8), 및 백혈구(WBC, white blood cell)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것인, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 혈소판 풍부 혈장에 포함된 1.78 x103개/μL 이상의 백혈구를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 것인, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 혈소판 풍부 혈장에 포함된 37.71 pg/mL 이상의 VEGF를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 것인, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 조성물.
  11. 제7항에 있어서,
    상기 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성은 건병증(Tendinopathy) 치료에 대한 임상적 유효성인 것인, 혈소판 풍부 혈장의 임상적 유효성 평가용 조성물.
  12. (A) 개체로부터 혈소판 풍부 혈장을 수득하는 단계; 및
    (B) 수득한 혈소판 풍부 혈장의 성장인자, 사이토카인 및 세포의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 혈소판 풍부 혈장 제조방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 방법은
    (C) 백혈구의 농도가 1.78 x103개/μL 이상인 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계
    를 추가로 포함하는 것인, 혈소판 풍부 혈장 제조방법.
  14. 제12항에 있어서, 상기 방법은
    (C) VEGF의 농도가 37.71 pg/mL 이상인 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계
    를 추가로 포함하는 것인, 혈소판 풍부 혈장 제조방법.
  15. 제12항에 있어서, 상기 방법은
    (C) IL-8이 포함된 혈소판 풍부 혈장을 선별하는 단계
    를 추가로 포함하는 것인, 혈소판 풍부 혈장 제조방법.
  16. 혈소판 풍부 혈장을 포함하는, 건병증 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 혈소판 풍부 혈장은 1.78 x103개/μL 이상의 백혈구를 포함하는 것인, 건병증 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  18. 제16항에 있어서,
    상기 혈소판 풍부 혈장은 37.71 pg/mL 이상의 VEGF를 포함하는 것인, 건병증 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  19. 제16항에 있어서,
    상기 혈소판 풍부 혈장은 IL-8을 포함하는 것인, 건병증 치료 또는 예방용 약학 조성물.
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