KR20210024451A

KR20210024451A - 리포솜 약물 제형을 제조하는 방법

Info

Publication number: KR20210024451A
Application number: KR1020207034487A
Authority: KR
Inventors: 로버트 워샴
Original assignee: 인스메드 인코포레이티드; 로버트 워샴
Priority date: 2018-05-02
Filing date: 2019-05-02
Publication date: 2021-03-05
Also published as: WO2019213398A1; EP3787602A1; JP2024075590A; CN112584821A; AU2019262117B2; CA3098573A1; AU2019262117A1; US20210113467A1; JP2021523224A; EP3787602A4; JP7449275B2

Abstract

본원에는 유리한 지질/약물 특징을 갖는 아미카신과 같은 아미노글리코사이드를 함유한 리포솜 약물 제형의 대량 제조 방법이 제공된다. 이러한 방법은 높은 아미노글리코사이드 캡슐화 효율을 갖는 리포솜을 얻기 위해 특정의 지질 대 약물 스트림의 상대 유량비를 사용한다. 얻어진 리포솜 약물 제형은 유리하게는 1 미만:1의 전체 지질-대-약물 중량비를 포함한다.

Description

리포솜 약물 제형을 제조하는 방법

관련된 출원에 대한 상호 참조문헌

본 출원은 2018년 5월 2일에 출원된 미국가출원 제62/665,564호를 우선권으로 주장하며, 이러한 문헌의 개시는 전문이 모든 목적을 위해 본원에 참고로 포함된다.

리포솜 약물 제형은 특정 질환 부위에서 활성제를 타겟화하고 이의 흡수를 향상시킬 수 있게 한다. 이러한 제형은 폐 감염에 의해 유발된 것을 포함하여 다양한 폐 장애를 치료하기 위해 개발되었으며, 여기서, 이의 특징은 항감염제의 흡입 전달을 위해 이상적인 선택으로 만든다.

이러한 하나의 항감염제인 아미카신은 리포솜에 패킹된 것으로서, 여러 임상 시험에서 미코박테륨 아비움 복합체(MAC)에 의해 유발된 난치성 비결핵 미코박테리아성(NTM) 폐 질환의 치료를 위해 성인 환자에서 연구되었다. 최근 아미카신 리포솜 흡입 현탁액(ALIS)의 3상 연구에서, 가이드라인 기반 치료법(GBT)에 ALIS를 첨가한 경우, GBT 단독에 대한 환자의 9%와 비교하여, 29%의 환자에서 6개월까지 객담에서 MAC에 의해 유발된 NTM 폐 질환의 증거가 제거된 것으로 나타났다.

비교적 높은 아미카신 대 지질 비를 함유한 리포솜이 벤치 스케일로 제조되었지만, 이러한 공정을, 상업적 제조 스케일로, 약물 농도, 제형에서 지질의 양, 지질-대-약물 비, 캡쳐된 부피, 약물 누출, 점도, 및 입자 크기와 같은 파라미터가 임상 및/또는 상업적 사용을 위한 사양 내에서 지속적으로 유지되는 리포솜 제형을 생산하기 위해 확장하는 것이 일상적인 문제가 아니라는 것은 널리 알려져 있다.

본 발명은 아미노글리코사이드 항생제, 예를 들어, 아미카신을 함유하고 높은 아미노글리코사이드-대-지질 중량비(및 또한, 낮은 지질-대-아미노글리코사이드 중량비) 및 우수한 캡슐화 효율을 갖는 리포솜을 제조하는 반복 가능한 대량 공정에 대한 필요성을 해결한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 지질 농도에 비해 높은 아미노글리코사이드 로딩(즉, 높은 아미노글리코사이드-대-지질의 상대 중량비)을 갖는, 지질 및 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신)를 포함하는 리포솜 아미노글리코사이드 제형의 대량 제조 방법을 제공한다. 특히, 본 발명의 방법에 따라 제조된 리포솜 현탁액에서 지질-대-아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신) 중량비(또한, "L/D 중량비"로서 지칭됨)는 공정의 완료 시에 1 미만:1, 예를 들어, 약 0.5:1 내지 약 0.9:1이다. 일 구체예에서, 본 발명의 방법에 따라 제조된 리포솜 현탁액의 지질-대-아미노글리코사이드 중량비는 제조 공정의 완료 시에 약 0.7:1(지질:아미노글리코사이드)이다.

다른 양태에서, 본 발명은 지질 및 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신)를 포함하는 리포솜 약물 제형의 대량 제조 방법으로서, 아미노글리코사이드가 높은 캡슐화 효율(예를 들어, 제형으로부터 자유 아미노글리코사이드를 제거하기 위한 세척 전에 적어도 약 40%의 캡슐화 효율)로 리포솜 내에 함유되는 방법에 관한 것이다.

일 구체예에서, 본 방법은 지질을 포함하는 제1 스트림을 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림과 혼합하여 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림을 형성하는 것을 포함한다. 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 리포솜으로 캡슐화된 아미노글리코사이드를 포함하며, 이는 일 구체예에서, 지질 스트림과 아미노글리코사이드 스트림의 교차점에서 형성된다. 추가 구체예에서, 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기에서 수성 식염수와 혼합된다(예를 들어, 도 1 참조). 일 구체예에서, 아미노글리코사이드는 혼합 단계 전에 수용액 중에 존재한다. 다른 구체예에서, 지질은 혼합 단계 전에, 알코올 용액, 예를 들어, 에탄올 용액 중에 존재한다. 추가 구체예에서, 지질은 인지질 및 콜레스테롤을 포함한다. 일 구체예에서, 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림 대 지질을 포함하는 제1 스트림의 상대 유량비는 약 1.5:1(아미노글리코사이드 스트림:지질 스트림) 내지 약 2:1(아미노글리코사이드 스트림:지질 스트림)이다. 추가 구체예에서, 지질은 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC) 및 콜레스테롤을 포함한다.

일 구체예에서, 수성 식염수는 제3 스트림을 통해 반응 용기에 첨가된다. 추가 구체예에서, 제3 스트림은 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림과 동시에 반응 용기에 첨가된다. 다른 구체예에서, 제3 스트림은 반응 용기에 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림의 첨가 전에 반응 용기에 첨가된다. 다른 구체예에서, 수성 식염수는 반응 용기에 진입하기 전에 약 실온에서 존재한다. 일 구체예에서, 수성 식염수는 약 1.5% 수성 소듐 클로라이드이다.

하나의 특정 양태에서, 본 발명은 지질 및 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신)를 포함하는 리포솜 약물 제형의 대량 제조 방법을 제공하며, 여기서, 아미노글리코사이드는 세척 단계 전에, 적어도 40%의 캡슐화 효율로, 리포솜 내에 캡슐화되거나 리포솜과 착물화된다. 일 구체예에서 접선 흐름 여과를 통해 수행되는 세척 단계 후에, 리포솜 아미노글리코사이드 제형에서 지질-대-아미노글리코사이드의 중량비는 1 미만:1, 예를 들어, 약 0.5:1 내지 약 0.9:1(예를 들어, 약 0.7:1)이다. 이러한 방법의 일 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신이다. 추가 구체예에서, 아미카신은 아미카신 설페이트로서 존재한다.

일 구체예에서, 지질을 포함하는 제1 스트림은 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림과 혼합되어 리포솜 아미노글리코사이드를 포함하는 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림(예를 들어, 지질-아미카신 스트림)을 형성한다. 일 구체예에서, 리포솜 아미노글리코사이드 제형은 2개의 스트림의 교차점에서, 즉, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림의 형성 시에 형성된다. 추가 구체예에서, 지질을 포함하는 제1 스트림의 유량은 약 0.5 kg/분 내지 약 1.5 kg/분이며, 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림의 유량은 약 1 kg/분 내지 약 2 kg/분이다. 추가 구체예에서, 지질을 포함하는 제1 스트림의 유량은 약 3 kg/분 내지 약 4 kg/분이며, 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림의 유량은 약 5 kg/분 내지 약 7 kg/분이다. 다른 구체예에서, 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림 대 지질을 포함하는 제1 스트림의 상대 유량비는 약 1.5:1(아미노글리코사이드 스트림 유량:지질 스트림 유량) 내지 약 2:1(아미노글리코사이드 스트림 유량:지질 스트림 유량)이다. 또 다른 구체예에서, 지질은 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC) 및 콜레스테롤을 포함한다.

일 구체예에서, 리포솜 약물 제형의 대량 제조 방법은 지질을 포함하는 제1 스트림을 아미노글리코사이드를 포함한 제2 스트림과 혼합하여 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림을 형성하고, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림을 수성 식염수를 포함하는 용기에 첨가하는 것을 포함한다. 수성 식염수는, 일 구체예에서, 제3 스트림을 통해 반응 용기에 첨가된다(예를 들어, 도 1 참조).

추가 구체예에서, 지질을 포함하는 제1 스트림의 유량이 약 0.5 kg/분 내지 약 1.5 kg/분이며 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림의 유량이 약 1 kg/분 내지 약 2 kg/분일 때, 제3 스트림의 유량은 약 0.5 L/분 내지 약 2.0 L/분, 예를 들어, 약 1.0 L/분 내지 약 2.0 L/분, 예를 들어, 약 1.25 L/분을 포함하는 약 1.0 L/분 내지 약 1.5 L/분이다. 다른 구체예에서, 지질을 포함하는 제1 스트림의 유량이 약 3 kg/분 내지 약 4 kg/분이며 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림의 유량이 약 5 kg/분 내지 약 7 kg/분일 때, 제3 스트림의 유량은 약 3 L/분 내지 약 6 L/분, 예를 들어, 약 4 L/분 내지 약 6 L/분, 예를 들어, 약 5 L/분을 포함하는 약 4.5 L/분 내지 약 5.5 L/분이다.

달리 상세하게 기술하지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "아미노글리코사이드"는 아미노글리코사이드 자유 염기 및 임의의 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하도록 의도된다. 예를 들어, 용어 "아미카신"은 아미카신 자유 염기 및 임의의 이의 약제학적으로 허용되는 염(예를 들어, 아미카신 설페이트)을 포함하도록 의도된다.

일 구체예에서, 리포솜 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신) 제형을 대량 제조하는 방법은 인지질을 포함하는 지질을 포함하는 제1 스트림을 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신)를 포함하는 제2 스트림과 혼합하여 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림을 형성하는 것을 포함한다. 추가 구체예에서, 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기에서 수성 식염수와 혼합된다. 일 구체예에서, 인지질은 포스파티딜콜린이다. 추가 구체예에서, 포스파티딜콜린은 DPPC이다. 다른 구체예에서, 지질은 인지질 및 스테롤을 포함한다. 추가 구체예에서, 스테롤은 콜레스테롤이다. 일 구체예에서, 지질은 DPPC 및 콜레스테롤을 포함한다.

일 구체예에서, 리포솜 아미노글리코사이드 제형을 대량 제조하는 방법은 지질을 포함하는 제1 스트림을 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림과 혼합하는 것을 포함하며, 여기서, 제1 스트림은 제2 스트림과 혼합되어 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림을 형성한다. 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 리포솜 아미노글리코사이드를 포함한다. 일 구체예에서, 리포솜 아미노글리코사이드는 제1 스트림과 제2 스트림의 혼합 시에, 예를 들어, 2개의 스트림의 교차점에서 형성된다. 추가 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기에 첨가되고, 수성 식염수와 혼합된다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드 스트림 및 지질 스트림은 각각 혼합 전에 약 30℃ 내지 약 50℃의 온도에서 유지된다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드 스트림 및 지질 스트림은 각각 혼합 전에 약 35℃ 내지 약 45℃, 예를 들어, 약 38℃ 내지 약 42℃의 온도에서 유지된다. 일 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기에 진입 시에 냉각된다. 다른 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기에서 수성 식염수에 의해 냉각된다. 일 구체예에서, 반응 용기는 약 25℃ 내지 약 40℃, 예를 들어, 약 27℃ 내지 약 35℃의 온도에서 유지된다. 다른 구체예에서, 반응 용기는 약 30℃의 온도에서 유지된다. 다른 구체예에서, 반응 용기는 약 33℃의 온도에서 유지된다.

본 발명의 다른 양태에서, 리포솜 아미노글리코사이드 제형은 본원에 제공된 방법에 따라 대량으로 제조된다. 일 구체예에서, 이에 따라 제조된 리포솜 약물 제형에 존재하는 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신)의 농도는 약 10 g/L 이상, 예를 들어, 약 60 g/L 내지 약 80 g/L 및 약 65 g/L 내지 약 75 g/L(예를 들어, 약 20 g/L, 약 30 g/L, 약 40 g/L, 약 50 g/L, 약 60 g/L, 약 70 g/L 또는 약 80 g/L)를 포함하는 약 50 g/L 내지 약 100 g/L이다. 추가 구체예에서, 이에 따라 제조된 리포솜 약물 제형에 존재하는 지질의 농도는 약 20 g/L 내지 약 80 g/L 및 약 40 g/L 내지 약 60 g/L(예를 들어, 약 50 g/L)를 포함하는 약 10 g/L 내지 약 100 g/L이다. 다른 구체예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 대량으로 제조된 리포솜 약물 제형의 L/D 비는 1 미만:1, 예를 들어, 약 0.5:1 내지 약 0.8:1(예를 들어, 약 0.7:1)이다.

다른 구체예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 대량으로 제조된 리포솜 약물 제형은 약 200 nm 내지 약 500 nm, 예를 들어, 약 200 nm 내지 약 400 nm(예를 들어, 약 250 nm 내지 약 350 nm)의 평균 입자 크기(즉, 평균 직경)를 갖는 리포솜 입자를 포함한다.

도 1은 리포솜 아미노글리코사이드 제형을 제조하기 위한 본 발명의 일 구체예를 도시한 것이다.
도 2는 다양한 리포솜 아미카신 제형의 최종 L/D 비에 대한 상대 지질/아미카신 유량의 효과를 도시한 것이다.

일 양태에서, 본원에 기술된 본 발명은 대량으로 리포솜 아미노글리코사이드 제형을 제조하는 방법에 관한 것이다. 일 구체예에서, 이러한 방법은 지질을 포함하는 제1 스트림(또한, 본원에서 "지질 스트림"으로서 지칭됨)을 아미카신과 같은 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림(또한, 본원에서 "약물 스트림"으로서 지칭됨)과 혼합하여 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림을 형성하는 것을 포함하며, 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기에서 수성 식염수와 혼합된다. 일부 구체예에서, 수성 식염수는 제3 스트림을 통해 반응 용기에 진입한다.

지질과 약물 스트림의 혼합은 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림을 형성할 때 난류가 형성되도록 수행된다. 난류는 지질과 약물 스트림의 "인-라인(in-line)" 혼합을 위해 적절한 T-형상 또는 Y-형상 주입 모듈을 이용하여 편리하게 달성된다.

용어 "대량"은 약물 스트림에서 적어도 약 5 kg 아미노글리코사이드 베이스 출발 물질의 사용을 의미한다(약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 경우 적어도 약 5 kg 아미노글리코사이드 베이스로 계산됨). 일 구체예에서, 약 5 kg 내지 약 50 kg 아미노글리코사이드 베이스 출발 물질, 예를 들어, 약 5 kg 내지 약 35 kg 아미노글리코사이드 베이스 출발 물질이 사용된다. 일 구체예에서, 적어도 약 8 kg 아미노글리코사이드 베이스 출발 물질이 사용된다. 다른 구체예에서, 적어도 약 30 kg 아미노글리코사이드 베이스 출발 물질이 사용된다. 일 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신(예를 들어, 아미카신 설페이트)이다.

본원에 제공되는 방법에서 사용되는 아미노글리코사이드는 약제학적으로 허용되는 염으로서 또는 자유 염기로서 존재할 수 있다. 상기에 제공된 바와 같이, 일 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신, 예를 들어, 아미카신 설페이트이다.

다른 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신, 아프라마이신, 아르베카신, 아스트로마이신, 카프레오마이신, 디베카신, 프라미세틴, 겐타마이신, 히그로마이신 B, 이세파마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 파로모마이신, 로데스트렙토마이신, 리보스타마이신, 시소마이신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다마이신, 또는 이들의 조합물이다.

또 다른 구체예에서, 아미노글리코사이드는 AC4437, 아미카신, 아프라마이신, 아르베카신, 아스트로마이신, 베카나마이신, 보홀마이신, 브룰라마이신, 카프레오마이신, 디베카신, 닥티마이신, 에티마이신, 프라미세틴, 겐타마이신, H107, 히그로마이신, 히그로마이신 B, 이노사마이신, K-4619, 이세파마이신, KA-5685, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 파로모마이신, 플라조마이신, 리보스타마이신, 시소마이신, 로데스트렙토마이신, 소르비스틴, 스펙티노마이신, 스포라리신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다마이신, 베르틸마이신, 또는 이들의 조합물이다.

"약제학적으로 허용되는 염"은 산부가염 및 염기부가염 둘 모두를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 부가염은 자유 염기의 생물학적 효과 및 성질을 보유하고, 생물학적으로 요망되지 않거나 달리 요망되지 않고, 무기산, 예를 들어, 비제한적으로, 염산(HCl), 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 등, 및 유기산, 예를 들어, 비제한적으로, 아세트산, 2,2-디클로로아세트산, 아디프산, 알긴산, 아스코르브산, 아스파르트산, 벤젠설폰산, 벤조산, 4-아세트아미도벤조산, 캄포르산, 캄포르-10-설폰산, 카프르산, 카프로산, 카프릴산, 탄산, 신남산, 시트르산, 시클람산, 도데실황산, 에탄-1,2-디설폰산, 에탄설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 포름산, 푸마르산, 갈락타르산, 겐티스산, 글루코헵톤산, 글루콘산, 글루쿠론산, 글루탐산, 글루타르산, 2-옥소-글루타르산, 글리세로인산, 글리콜산, 히푸르산, 이소부티르산, 락트산(예를 들어, 락테이트로서), 락토비온산, 라우르산, 말레산, 말산, 말론산, 만델산, 메탄설폰산, 무크산, 나프탈렌-1,5-디설폰산, 나프탈렌-2-설폰산, 1-하이드록시-2-나프토산, 니코틴산, 올레산, 오로트산, 옥살산, 팔미트산, 파모산, 프로피온산, 피로글루탐산, 피루브산, 살리실산, 4-아미노살리실산, 세박산, 스테아르산, 숙신산, 아세트산(예를 들어, 아세테이트로서), 타르타르산, 티오시안산, p-톨루엔설폰산, 트리플루오로아세트산(TFA), 운데실렌산, 등으로 형성된, 염을 지칭한다. 일 구체예에서, 약제학적으로 허용되는 염은 HCl, TFA, 락테이트 또는 아세테이트이다. 일 구체예에서, 약제학적으로 허용되는 염은 설페이트 염, 예를 들어, 아미카신 설페이트이다.

"리포솜 아미노글리코사이드 제형"은 지질이 리포솜의 형태를 가지고 아미노글리코사이드가 리포솜 이중층에 의해 캡슐화되거나 리포솜 이중층과 착물화된 지질-아미노글리코사이드 제형에 관한 것이다. 리포솜은 트랩핑된 수성 부피를 함유한 완전히 폐쇄된 지질 이중층 막이다. 리포솜은 단층 소포(단일 막 이중층을 지님) 또는 다중층 소포(각각 수성층에 의해 다음층과 분리되어 있는, 다중막 이중층에 의해 특징되는 양파형 구조) 또는 이들의 조합물일 수 있다. 이중층은 소수성 "테일" 영역 및 친수성 "헤드" 영역을 갖는 2개의 지질 단일층으로 이루어진다. 막 이중층의 구조는 지질 단일층의 소수성(비극성) "테일"이 이중층의 중심 쪽으로 배향되고 친수성 "헤드"가 수성상 쪽으로 배향되게 하는 것이다.

일 구체예에서, 지질-아미노글리코사이드 제형은 2-스트림 주입 공정을 포함하는 방법을 통해 제조된다. 일 구체예에서, 본 방법은 T-형상 주입 모듈 또는 Y-형상 주입 모듈에서 제1 지질 스트림을 제2 아미노글리코사이드 스트림과 혼합하는 것을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "T-형상 주입 모듈," 및 "Y-형상 주입 모듈"은 둘 이상의 스트림이 조합되는, 예를 들어, 단일 지질-아미노글리코사이드 스트림을 형성하기 위해 지질 스트림과 약물 스트림이 조합되는 T-형상 또는 Y-형상 챔버를 지칭한다[예를 들어, 도 1의 다이아그램 참조]. 주입 모듈이 사용되는 지질 및 약물 스트림의 요망되는 비율에 대해 적절한 보어 크기를 가질 것이라는 것이 인식될 것이다. 적합한 보어 크기의 예는 3/16" 및 3/8"를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.

일 구체예에서, 제1 스트림(지질 스트림)은 알코올(예를 들어, 에탄올) 지질 용액을 포함한다. 일 구체예에서, 제2 스트림(아미노글리코사이드 스트림)은 아미노글리코사이드 수용액(예를 들어, 아미카신 수용액)을 포함한다. 일 구체예에서, 제1 스트림 및 제2 스트림은 혼합되어 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림을 형성한다. 일 구체예에서, 제1 스트림 및 제2 스트림 각각은 주입 모듈로 들어가고, 제1 스트림 및 제2 스트림은 주입 모듈에서 혼합된다. 추가 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 주입 모듈에서 배출되고, 후속하여 반응 용기로 들어간다(도 1 참조).

일 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기, 예를 들어, 주입 모듈에서 배출된 후 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림이 들어가는 동일한 반응 용기에서 수성 식염수와 혼합된다. 일 구체예에서, 수성 식염수는 약 0.5 내지 2% 소듐 클로라이드 수용액(예를 들어, 약 1.5%)을 포함한다. 일 구체예에서, 식염수는 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림 전에 반응 용기에 첨가된다. 다른 구체예에서, 식염수는 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림과 동시에 또는 대략 동시에 반응 용기에 첨가된다. 추가 구체예에서, 식염수는 제3 스트림을 통해 반응 용기에 첨가된다. 이에 따라, 일부 구체예에서, 지질-아미노글리코사이드 제형은 3-스트림 주입 공정을 포함하는 방법을 통해 제조된다. 일부 구체예에서, 제3 스트림은 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림으로부터 별도로 반응 용기에 첨가된다.

일 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 리포솜 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신)를 포함하는데, 여기서, 리포솜 내에서(또는 리포솜에 착물화된) 아미노글리코사이드의 캡슐화 효율은 적어도 약 40%이다. 본원에서 사용되는 "캡슐화 효율"은 여과 단계, 예를 들어, 자유 아미노글리코사이드를 제거하기 위한 리포솜 아미노글리코사이드 제형의 접선 흐름 여과 전에 리포솜으로 캡슐화되거나 착물화되는 아미노글리코사이드의 양을 지칭한다. 예를 들어, 약 40% 내지 약 70%(예를 들어, 약 45% 내지 약 55%)의 캡슐화 효율은 본원에 기술된 본 발명의 방법에 따라 지질 스트림과 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신) 스트림을 혼합함으로써 달성될 수 있다.

일 구체예에서, 아미노글리코사이드 스트림 및 지질 스트림은 각각 2개의 스트림을 혼합하기 전에 약 30℃ 내지 약 50℃의 온도에서 유지된다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드 스트림 및 지질 스트림은 각각 혼합 전에 약 35℃ 내지 약 45℃, 예를 들어, 약 38℃ 내지 약 42℃의 온도에서 유지된다. 다른 구체예에서, 지질과 아미노글리코사이드 용액의 조합물은 발열 거동을 나타낸다. 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림의 온도는 일 구체예에서, 약 40℃ 내지 55℃이다. 추가 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림의 온도는 약 45℃ 내지 약 50℃이다. 다른 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기에서 수성 식염수와 혼합되며, 여기서, 수성 식염수는 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림과의 혼합 전에 실온에서 유지된다. 다른 구체예에서, 수성 식염수는 제3 스트림을 통해 반응 용기에 첨가되며, 여기서, 제3 스트림은 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림과의 혼합 전에 실온에서 유지된다. 일 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기에 진입 시에 냉각된다. 다른 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기에서 수성 식염수에 의해 냉각된다. 다른 구체예에서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림은 반응 용기에 진입 시에 냉각된다. 일 구체예에서, 반응 용기는 약 25℃ 내지 약 40℃, 예를 들어, 약 27℃ 내지 약 35℃의 온도에서 유지된다. 다른 구체예에서, 반응 용기는 약 30℃의 온도에서 유지된다. 다른 구체예에서, 반응 용기는 약 33℃의 온도에서 유지된다.

일 구체예에서, 본원에 제공된 방법에 의해 제조된 리포솜 약물 제형의 지질 성분은 전기적 순 중성 지질, 양으로 하전된 지질, 음으로 하전된 지질, 또는 이들의 조합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 지질 성분은 전기적 순 중성 지질을 포함한다. 추가 구체예에서, 지질 성분은 전기적 순 중성 지질을 본질적으로 포함한다. 또 다른 구체예에서, 지질은 DPPC 및 콜레스테롤이다.

본 발명의 리포솜 제형의 제조에서 사용되는 지질은 인지질, 토코페롤, 스테롤, 지방산, 음으로 하전된 지질 및 양이온성 지질 중 하나 이상을 포함하는, 합성, 반-합성 또는 천연 지질일 수 있다. 일 구체예에서, 지질 성분은 전기적 중성 지질, 예를 들어, 스테롤 및 인지질로 이루어진다.

일 구체예에서, 리포솜 약물 제형에 적어도 하나의 인지질이 존재한다. 일 구체예에서, 인지질은 포스파티딜콜린(PC), 포스파티딜글리세롤(PG), 포스파티딜이노시톨 (PI), 포스파티딜세린(PS), 포스파티딜에탄올아민(PE), 포스파티드산(PA), 대두 포스파티딜콜린(SPC), 대두 포스파티딜글리세롤(SPG), 대두 포스파티딜세린(SPS), 대두 포스파티딜이노시톨(SPI), 대두 포스파티딜에탄올아민(SPE), 및 대두 포스파티드산(SPA); 수소화된 에그 및 콩 대응물(예를 들어, 수소화된 에그 포스파티딜콜린 및 수소화된 대두 포스파티딜콜린), 콜린, 글리세롤, 이노시톨, 세린, 에탄올아민을 포함한 글리세롤의 1 위치에 상이한 헤드 기 및 12 내지 26개의 탄소 원자의 사슬을 함유한 글리세롤 위치의 2 및 3에 지방산의 에스테르 결합으로 이루어진 인지질뿐만 아니라, 상응하는 포스파티드산이다. 이러한 지방산에서 탄소 사슬은 포화되거나 불포화될 수 있으며, 인지질은 상이한 사슬 길이 및 상이한 불포화도의 지방산으로 구성될 수 있다.

일 구체예에서, 본원에 제공된 방법에 의해 제조된 리포솜 약물 제형의 지질 성분은 포스파티딜콜린을 포함한다. 예를 들어, 일 구체예에서, 리포솜 약물 제형에서 지질 성분은 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC)을 포함한다. 일 구체예에서, 리포솜 약물 제형의 지질 성분은 DPPC 및 스테롤, 예를 들어, DPPC 및 콜레스테롤을 포함한다. 대안적으로, 지질은 DPPC 및 콜레스테롤을 본질적으로 포함하거나, DPPC 및 콜레스테롤로 이루어진다. 추가 구체예에서, DPPC 및 콜레스테롤은 약 19:1(DPPC:콜레스테롤) 내지 약 1:1(DPPC:콜레스테롤), 또는 약 9:1(DPPC:콜레스테롤) 내지 약 1:1(DPPC:콜레스테롤) , 또는 약 4:1(DPPC:콜레스테롤) 내지 약 1:1(DPPC:콜레스테롤), 또는 약 2:1(DPPC:콜레스테롤) 내지 약 1:1(DPPC:콜레스테롤) 범위의 몰비를 갖는다. 또 다른 구체예에서, DPPC 및 콜레스테롤은 약 2:1(DPPC:콜레스테롤)의 몰비를 갖는다.

본원에 제공된 방법에 의해 제조된 리포솜 약물 제형의 지질 성분의 다른 예는 디미리스토일포스파티딜콜린(DMPC), 디미리스토일포스파티딜글리세롤(DMPG), 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 디팔미토일포스파티딜글리세롤(DPPG), 디스테아로일포스파티딜콜린(DSPC), 디스테아로일포스파티딜글리세롤(DSPG), 디올레일포스파티딜-에탄올아민(DOPE), 혼합된 인지질, 예를 들어, 팔미토일스테아로일포스파티딜-콜린(PSPC), 및 단일 아실화된 인지질, 예를 들어, 모노-올레오일-포스파티딜에탄올아민(MOPE)을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.

본원에 제공된 방법에 의해 제조된 리포솜 약물 제형에서 스테롤 화합물의 예는 콜레스테롤, 콜레스테롤 반-숙시네이트를 포함하는 콜레스테롤의 에스테르, 콜레스테롤 하이드로겐 설페이트 및 콜레스테롤 설페이트를 포함하는 콜레스테롤의 염, 에르고스테롤, 에르고스테롤 반-숙시네이트를 포함하는 에르고스테롤의 에스테르, 에르고스테롤 하이드로겐 설페이트 및 에르고스테롤 설페이트를 포함하는 에르고스테롤의 염, 라노스테롤, 라노스테롤 반-숙시네이트를 포함하는 라노스테롤의 에스테르, 라노스테롤 하이드로겐 설페이트, 라노스테롤 설페이트를 포함하는 라노스테롤의 염, 및 토코페롤을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 토코페롤은 토코페롤, 토코페롤 반-숙시네이트를 포함하는 토코페롤의 에스테르, 토코페롤 하이드로겐 설페이트 및 토코페롤 설페이트를 포함하는 토코페롤의 염을 포함한다. 용어 "스테롤 화합물"은 스테롤, 토코페롤, 등을 포함한다. 토코페롤 및 이의 수용성 유도체는 리포솜을 형성하기 위해 사용된다[예를 들어, PCT 공개문 제87/02219호 참조].

일 구체예에서, 제1 스트림에서 지질의 농도는 약 10 g/L 내지 약 50 g/L, 또는 약 10 g/L 내지 약 30 g/L, 또는 약 15 g/L 내지 약 25 g/L이다. 일 구체예에서, 제1 스트림에서 지질의 농도는 약 17 g/L, 약 18 g/L, 약 19 g/L, 약 20 g/L, 약 21 g/L, 약 22 g/L, 약 23 g/L, 약 24 g/L 또는 약 25 g/L이다. 일 구체예에서, 제1 스트림에서 지질의 농도는 약 20 g/L이다.

일 구체예에서, 제2 스트림(아미노글리코사이드 스트림)에서 아미노글리코사이드의 농도는 약 10 g/L 내지 약 100 g/L; 또는 약 20 g/L 내지 약 70 g/L; 또는 약 30 g/L 내지 약 60 g/L; 또는 약 40 g/L 내지 약 50 g/L이다. 일 구체예에서, 제2 스트림에서 약물의 농도는 약 41 g/L, 약 42 g/L, 약 43 g/L, 약 44 g/L, 약 45 g/L, 약 46 g/L, 약 47 g/L, 약 48 g/L, 약 49 g/L 또는 약 50 g/L이다. 일 구체예에서, 제2 스트림에서 아미노글리코사이드의 농도는 약 45 g/L이다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신이다.

본 발명의 일 구체예에서, 아미노글리코사이드 스트림의 pH는 6 내지 약 7, 또는 약 6.5 내지 약 7.0이다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드 스트림의 pH는 약 6.7이다. 아미노글리코사이드 스트림 pH는 적합한 염기, 예를 들어, 알칼리 또는 알칼리 토금속 하이드록사이드, 예를 들어, 소듐 하이드록사이드를 사용하여 적절한 pH로 조정될 수 있다.

다른 구체예에서, 수성 식염수는 약 0.5% 소듐 클로라이드 내지 약 3% 소듐 클로라이드, 예를 들어, 약 0.75%, 약 1.0%, 약 1.25%, 약 1.5%, 약 1.75%, 약 2.0%, 또는 약 2.5% 소듐 클로라이드를 포함한다. 일 구체예에서, 수성 식염수는 약 1.5% 소듐 클로라이드를 포함한다.

일 구체예에서, 지질 스트림의 유량은 약 0.5 kg/분 내지 약 1.5 kg/분이며, 아미노글리코사이드 스트림의 유량은 약 1 kg/분 내지 약 2 kg/분이다. 추가 구체예에서, 지질 스트림의 유량은 약 3 kg/분 내지 약 4 kg/분이며, 약물 스트림의 유량은 약 5 kg/분 내지 약 7 kg/분이다. 다른 구체예에서, 아미노글리코사이드 스트림 대 지질 스트림의 상대 유량비는 약 1.5:1(아미노글리코사이드 스트림 유량: 지질 스트림 유량) 내지 약 2:1(아미노글리코사이드 스트림 유량:지질 스트림 유량)이다.

일 구체예에서, 지질 스트림의 유량이 약 0.5 kg/분 내지 약 1.5 kg/분이고 아미노글리코사이드 스트림의 유량이 약 1 kg/분 내지 약 2 kg/분일 때, 수성 식염수를 포함하는 제3 스트림의 유량은 약 0.5 L/분 내지 약 2.0 L/분, 예를 들어, 약 1.0 L/분 내지 약 2.0 L/분, 예를 들어, 약 1.0 L/분 내지 약 1.5 L/분이고, 약 1.25 L/분을 포함한다. 다른 구체예에서, 지질 스트림의 유량이 약 3 kg/분 내지 약 4 kg/분이고 아미노글리코사이드 스트림의 유량이 약 5 kg/분 내지 약 7 kg/분일 때, 수성 식염수를 포함하는 제3 스트림의 유량은 약 3 L/분 내지 약 6 L/분, 예를 들어, 약 4 L/분 내지 약 6 L/분, 예를 들어, 약 4.5 L/분 내지 약 5.5 L/분이고, 약 5 L/분을 포함한다.

본 발명의 일 구체예에서, 지질 용액 및 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신) 용액 둘 모두는 조합된 스트림으로 혼합하기 전에, 예를 들어, 하나 이상의(예를 들어, 직렬로 2개의) 약 0.2 ㎛ 필터를 통해 여과된다. 도 1은 직렬의 2개의 필터를 도시한 것이지만, 본 방법의 사용자의 선호에 따라 이러한 수가 변경될 수 있다는 것이 주지되어야 한다. 예를 들어, 지질 스트림 및 아미노글리코사이드 스트림을 초기에 여과하기 위해 1 내지 5개의 필터가 사용될 수 있다.

다른 구체예에서, 수성 식염수(예를 들어, 1.5% 식염수)는 또한, 반응 용기에서 지질-아미노글리코사이드 조합된 스트림과 혼합 전에, 예를 들어, 하나 이상의(예를 들어, 직렬의 2개의) 약 0.2 ㎛ 필터를 통해 여과된다. 추가 구체예에서, 지질 스트림 및 아미노글리코사이드 스트림의 교차점에서 및/또는 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림에서 형성된 리포솜을 포함하는 리포솜 현탁액은 정용여과와 같은 재순환 여과 시스템을 이용하여 반응 용기 내에서 농축된다. 상기에 제공된 바와 같이, 본원에서 사용되는 "캡슐화 효율"은 자유 아미노글리코사이드를 제거하기 위한 여과 단계, 예를 들어, 리포솜 아미노글리코사이드 제형의 접선 흐름 여과 전에 리포솜으로 캡슐화되거나 착물화되는 아미노글리코사이드의 양을 지칭한다. 예를 들어, 약 40% 내지 약 70%(예를 들어, 약 45% 내지 약 55%)의 캡슐화 효율은 본원에 기술된 본 발명의 방법에 따라 지질 스트림과 아미노글리코사이드(예를 들어, 아미카신) 스트림을 혼합함으로써 달성될 수 있다.

다른 구체예에서, 얻어진 농축된 리포솜 현탁액은 추가 수성 식염수(예를 들어, 여과된 1.5% 식염수)로 처리(즉, "세척")되고, 리포솜 현탁액이 적절한 최종 아미노글리코사이드 농도를 함유하고 실질적으로 모든 자유 아미노글리코사이드가 제거될 때까지 정용여과와 같은 재순환 여과 시스템을 이용하여 추가로 여과된다. 추가 구체예에서, 적절한 최종 아미노글리코사이드 농도를 달성하기 위해 3회 이상의 세척(예를 들어, 3, 4, 5 또는 6회 세척)이 수행된다.

일 구체예에서, 세척 후, 본원에 제공된 방법에 따라 대량으로 제조된 리포솜 아미노글리코사이드 제형에 존재하는 아미노글리코사이드의 농도는 약 10 g/L 이상이다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 20 g/L 이상의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 30 g/L 이상의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 40 g/L 이상의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 50 g/L 이상의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 60 g/L 이상의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 70 g/L 이상의 농도로 존재한다. 다른 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 10 g/L 내지 약 100 g/L의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신이다. 일 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 50 g/L 내지 약 100 g/L의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신이다. 일 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 60 g/L 내지 약 80 g/L의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신이다. 또 다른 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 65 g/L 내지 약 80 g/L의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신이다. 또 다른 구체예에서, 아미노글리코사이드는 제형에서 약 65 g/L 내지 약 75 g/L의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신이다. 다른 구체예에서, 아미카신은 제형에서 약 70 g/L의 농도로 존재한다. 추가 구체예에서, 아미노글리코사이드는 아미카신이다.

추가 구체예에서, 세척 후에, 본원에 제공된 방법에 따라 대량으로 제조된 리포솜 약물 제형에 존재하는 지질의 농도는 약 20 g/L 내지 약 80 g/L 및 약 40 g/L 내지 약 60 g/L(예를 들어, 약 50 g/L)를 포함하여, 약 10 g/L 내지 약 100 g/L이다.

다른 구체예에서, 정용여과 후에, 본원에 제공된 방법에 따라 대량으로 제조된 리포솜 약물 제형에서 지질-대-아미노글리코사이드 중량비는 1 미만:1, 예를 들어, 약 0.5:1(지질:아미노글리코사이드) 내지 약 0.8:1(지질:아미노글리코사이드)(예를 들어, 약 0.5:1(지질:아미노글리코사이드) 또는 0.6:1(지질:아미노글리코사이드) 또는 0.7:1(지질:아미노글리코사이드) 또는 0.8:1(지질:아미노글리코사이드))이다. 일 구체예에서, 지질-대-아미노글리코사이드 중량비는 약 0.7:1(지질:아미노글리코사이드)이다.

본원에 제공된 방법에 따라 대량으로 제조된 리포솜 아미노글리코사이드 제형은 약 200 nm 내지 약 500 nm, 예를 들어, 약 200 nm 내지 약 400 nm(예를 들어, 약 250 nm 내지 약 350 nm)의 평균 입자 크기(즉, 평균 직경)를 갖는 리포솜 입자를 포함한다. 리포솜 직경은 상업적으로 입수 가능한 광산란 기술을 이용하여, 예를 들어, Nicomp™ 380 서브마이크론 입자 사이저(Nicomp, Santa Barbara, California USA)를 이용한 준-탄성 광 산란을 이용하여 측정될 수 있다.

본 발명은 하기 실시예를 참조하여 추가로 예시된다. 그러나, 상술된 구체예 및 양태와 같이 이러한 실시예가 예시적인 것으로서, 어떠한 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하는 것으로서 해석되지 않는다는 것이 주지되어야 한다.

실시예

실시예 1: 리포솜 아미카신을 위한 제조 공정 및 공정 제어

3개의 멸균 용액 스트림을 제조하고 지질 스트림 및 아미카신 설페이트 스트림을 적절한 유량으로 T-커넥터 주입 모듈을 통해 혼합하고, 멸균된 정용여과(반응) 용기에서 캡슐화된 아미카신 설페이트를 갖는 리포솜을 함유한 조합된 지질-아미카신 설페이트 스트림을 수집하고, 정용여과 용기에 1.5% 수성 소듐 클로라이드의 스트림을 적절한 유량으로 첨가하고, 이후에 얻어진 리포솜 분산액을 정용여과(세척을 포함함) 및 농축하여 최종 생성물을 형성하는 것을 포함하는 무균 공정을 이용하여 리포솜 아미카신 설페이트의 제조를 수행하였다.

a) 용액 제조: 충분한 양의 하기 3개의 용액을 제조하였다.

● 아미카신 설페이트 용액: 주사용수(WFI) 중 아미카신 설페이트, 소듐 하이드록사이드로 6.6 내지 6.8까지 pH 조정됨.

● 지질 용액: 에탄올 중 DPPC/콜레스테롤(2:1 w/w).

● 1.5% 소듐 클로라이드 용액: WFI 중 1.5% 소듐 클로라이드, 6.6 내지 6.8까지 pH 조정됨.

용액을 제조 24시간 내에 사용하여야 한다.

b) 주입/초기 농축: 아미카신 설페이트 용액 및 지질 용액을 가온시키고, 제어된 첨가 속도로 인-라인 T-커넥터 주입 모듈로 통과시키기 전에 별도의 멸균 필터로 통과시켰다. 혼합된 스트림을 사전-멸균된 반응기 용기에서 수집하였다. 동시에, 1.5% 소듐 클로라이드 수용액을 멸균 필터로 통과시키고, 반응기 용기 내에 적절한 유량으로 스트림으로서 도입하였다. 이러한 스테이지에서, 용액을 아미카신 캡슐화의 수준에 따라 샘플링할 수 있다.

c) 정용여과: 정용여과를 수행하였다. 이러한 단계는 벌크 용액으로부터 에탄올을 제거하고 임의의 "트랩핑되지 않은" 또는 자유 아미카신 설페이트를 세척하는 기능을 한다.

d) 최종 농축: 인-프로세스 시험 결과를 이용하여, 벌크 용액을 아미카신 설페이트의 적절한 농도 수준까지 농축하였다. 농축을 완료한 후에, 아미카신 설페이트의 농도 및 L/D 비율에 대한 확인 시험을 수행할 수 있다.

표 1은 실시예 1의 일반 방법에 따라 수행된, 실험 (A) 및 (B)를 기술한 것이다. (A)에서, 3/8" T-커넥터 주입 모듈이 사용된다. (B)에서, 3/16" T-커넥터 주입 모듈이 사용된다.

추가 실험에서, 일반적으로, 실시예 1의 공정 후에, 지질 및 아미카신 스트림(흐름) 속도를 변경시키고, 리포솜 제형에서 지질 및 아미카신의 최종 농도를 측정하였다. 각 시험에 대한 L/D 비율을 계산하고, 결과는 도 2에 제시하였다. 결과는 바람직한 L/D 비율을 달성하기 위한 최적의 상대적 지질/아미카신 유량에 대한 지침을 제공한다.

* * * * * * *

본 출원 전반에 걸쳐 인용된, 모든 문헌, 특허, 특허출원, 출판물, 제품 설명, 및 프로토콜은 모든 목적을 위해 전문이 본원에 참고로 포함된다.

본 명세서에 예시되고 논의된 구체예는 단지 본 발명을 만들고 사용하기 위해 본 발명자에게 공지된 최상의 방식을 당업자에게 교시하기 위해 의도된 것이다. 본 발명의 상술된 구체예의 수정 및 변경은 상기 교시의 측면에서 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 본 발명을 벗어나지 않고 가능하다. 이에 따라, 청구범위 및 이의 균등물 내에서, 본 발명이 상세하게 기술된 것과 달리 실행될 수 있는 것으로 이해된다.

Claims

지질 및 아미노글리코사이드를 포함하는 리포솜 아미노글리코사이드 제형을 대량으로 제조하는 방법으로서, 전체 지질-대-약물 중량비는 1 미만:1이며,
(a) 상기 지질을 포함하는 제1 스트림을 상기 아미노글리코사이드를 포함하는 제2 스트림과 혼합하여 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림을 형성하는 단계;
(b) 반응 용기에서, 상기 단계 (a)의 지질-아미노글리코사이드 스트림을 수성 식염수와 혼합하는 단계; 및
(c) 상기 리포솜 아미노글리코사이드 제형을 포함하는 상기 단계 (b)의 생성물을 세척하여 캡슐화되지 않은 아미노글리코사이드를 제거하는 단계를 포함하며,
상기 제2 스트림 대 상기 제1 스트림의 상대 유량비는 약 1.5:1 내지 약 2:1인 방법.
제1항에 있어서, 제2 스트림이 아미카신의 수용액을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 제1 스트림이 지질의 알코올 용액을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 수성 식염수가 제3 스트림을 통해 반응 용기에 첨가되는 방법.
제4항에 있어서, 제3 스트림이 지질-아미노글리코사이드 스트림과 동시에 반응 용기에 첨가되는 방법.
제4항에 있어서, 제3 스트림이 지질-아미노글리코사이드 스트림 이전에 반응 용기에 첨가되는 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스트림의 유량이 약 0.5 kg/분 내지 약 1.5 kg/분이며, 제2 스트림의 유량이 약 1 kg/분 내지 약 2 kg/분인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 스트림의 유량이 약 3 kg/분 내지 약 4 kg/분이며, 제2 스트림의 유량이 약 5 kg/분 내지 약 7 kg/분인 방법.
제6항에 있어서, 제1 스트림의 유량이 약 0.5 kg/분 내지 약 1.5 kg/분이며, 제2 스트림의 유량이 약 1 kg/분 내지 약 2 kg/분이며, 제3 스트림의 유량이 약 1 L/분 내지 약 2 L/분인 방법.
제6항에 있어서, 제1 스트림의 유량이 약 3 kg/분 내지 약 4 kg/분이며, 제2 스트림의 유량이 약 5 kg/분 내지 약 7 kg/분이며, 제3 스트림의 유량이 약 3 L/분 내지 약 6 L/분인 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 식염수가 1.5% 소듐 클로라이드인 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노글리코사이드가 아미노글리코사이드의 약제학적으로 허용되는 염인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 지질이 인지질을 포함하는 방법.
제13항에 있어서, 인지질이 포스파티딜콜린인 방법.
제14항에 있어서, 포스파티딜콜린이 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC)인 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 지질이 스테롤을 포함하는 방법.
제16항에 있어서, 스테롤이 콜레스테롤인 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 지질이 DPPC 및 콜레스테롤을 포함하는 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 약물 스트림 및 지질 스트림이 각각 혼합 전에 약 30℃ 내지 약 50℃의 온도에서 유지되는 방법.
제19항에 있어서, 약물 스트림 및 지질 스트림이 각각 혼합 전에 약 35℃ 내지 약 45℃의 온도에서 유지되는 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림의 온도가 반응 용기에서 수성 식염수에 의해 냉각되는 방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (b) 후에, 리포솜이 적어도 40%의 아미노글리코사이드 캡슐화 효율로 제조되는 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜이 조합된 지질-아미노글리코사이드 스트림에서 형성되는 방법.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜 약물 제형의 제조를 위해 전체 지질-대-약물 중량비가 약 0.7:1인 방법.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 세척 단계 (c)가 1.5% 소듐 클로라이드 수용액을 사용하여 수행되는 방법.
제25항에 있어서, 세척 단계 (c)가 반복되며, 생성물이 약 60 g/L 내지 약 80 g/L의 농도로 존재하는 아미노글리코사이드를 갖는 리포솜 약물 제형을 제공하기 위해 농축되는 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노글리코사이드가 아르베카신, 아스트로마이신, 카프레오마이신, 디베카신, 프라미세틴, 겐타마이신, 히그로마이신 B, 이세파마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 파로모마이신, 로데스트렙토마이신, 리보스타마이신, 시소마이신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다마이신, 또는 이들의 조합물인 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노글리코사이드가 AC4437, 아미카신, 아프라마이신, 아르베카신, 아스트로마이신, 베카나마이신, 보홀마이신, 브룰라마이신, 카프레오마이신, 디베카신, 닥티마이신, 에티마이신, 프라미세틴, 겐타마이신, H107, 히그로마이신, 히그로마이신 B, 이노사마이신, K-4619, 이세파마이신, KA-5685, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 파로모마이신, 플라조마이신, 리보스타마이신, 시소마이신, 로데스트렙토마이신, 소르비스틴, 스펙티노마이신, 스포라리신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다마이신, 베르틸마이신, 또는 이들의 조합물인 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노글리코사이드가 아미카신인 방법.
제29항에 있어서, 아미카신이 아미카신 설페이트인 방법.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 리포솜 약물 제형.
제31항에 있어서, 아미노글리코사이드가 약 60 g/L 내지 약 80 g/L의 농도로 존재하는 리포솜 약물 제형.
제31항에 있어서, 아미노글리코사이드가 약 70 g/L의 농도로 존재하는 리포솜 약물 제형.
제31항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 지질이 약 40 g/L 내지 약 60 g/L의 농도로 존재하는 리포솜 약물 제형.
제34항에 있어서, 지질이 약 50 g/L의 농도로 존재하는 리포솜 약물 제형.