KR20210013230A - PDRN encapsulated chitosan nanoparticles included chitosan nanofilm and a method for preparing the same - Google Patents
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Abstract
Description
본 명세서에 의해 개시되는 내용은 PDRN이 캡슐화된 키토산 나노 입자가 포함된 키토산 나노필름, 이의 제조 방법, 및 이의 용도에 관한 것이다.The content disclosed by the present specification relates to a chitosan nanofilm containing chitosan nanoparticles in which PDRN is encapsulated, a method of manufacturing the same, and a use thereof.
구체적으로, 본 명세서에 의해 개시되는 내용은 화장용 및 의료용으로 효율적인 제어 약물 전달 시스템을 개발하는 분야에 관한 것이다.Specifically, the content disclosed by the present specification relates to the field of developing an efficient controlled drug delivery system for cosmetic and medical use.
키토산 (Chitosan)은 키틴의 탈아세틸화를 통해서 제작될 수 있는 천연 생체 고분자 물질로, 폴리-베타-1,4-글루코사민(poly-β-1,4-glucosamine)이라는 명칭을 가지는 D-글루코사민과 N-아세틸글루코사민이 임의적으로 분포하는 양이온 선형 다당류이다.Chitosan is a natural biopolymer material that can be produced through deacetylation of chitin, and it is known as D-glucosamine, which has the name poly-beta-1,4-glucosamine. It is a cationic linear polysaccharide in which N-acetylglucosamine is randomly distributed.
키토산의 일 유도체인 키토산 하이드로클로라이드(Chitosan hydrochloride: 이하, CHC)는 강한 양이온성 키토산의 수용성 유도체이며 생체 적합성, 양전하, 접착 및 생물 분해성과 같은 약물 전달에 유리한 성질을 가지고 있다.Chitosan hydrochloride (hereinafter, CHC), a derivative of chitosan, is a water-soluble derivative of strong cationic chitosan and has advantageous properties for drug delivery such as biocompatibility, positive charge, adhesion and biodegradability.
콜레스테롤 저하, 지방결합능력, 유당소화불량 억제작용, 발암억제효과, 항종양작용, 보습성 및 유화안정성 등 키토산의 다양한 생리적 효과를 의약품 및 화장품 산업에 적용하기 위한 많은 시도가 이루어지고 있다.Many attempts have been made to apply chitosan's various physiological effects such as cholesterol lowering, fat binding ability, lactose indigestion inhibitory effect, carcinogenic effect, antitumor effect, moisturizing and emulsifying stability to the pharmaceutical and cosmetic industries.
또한, 키토산을 이용하여 나노 입자(nanoparticle)가 제작될 수 있으며, 키토산 나노 입자(chitosan nanoparticle; 이하, CNP)에 히알루론산, 커큐민, 펩타이드, 올리고뉴클레오티드 및 천연 항산화제와 같은 다양한 생물학적 활성 화합물이 캡슐화될 수 있다는 것이 이전의 연구에 의해 입증되었다 (Xu et al., 2017, Harris et al., 2011, Liang et al., 2016). In addition, nanoparticles can be produced using chitosan, and various biologically active compounds such as hyaluronic acid, curcumin, peptides, oligonucleotides and natural antioxidants are encapsulated in chitosan nanoparticles (CNP). It has been demonstrated by previous studies (Xu et al., 2017, Harris et al., 2011, Liang et al., 2016).
상기 키토산 나노 입자(CNP)는 생체 내 및 저장 중 효소 및 화학적 분해로부터 민감한 생체 활성 거대 분자를 보호 할 수 있을 뿐만 아니라 흡수성 상피 세포 (Takeuchi 등, 2001)를 통해 대 된 거대 분자의 전달을 촉진 할 수 있다.The chitosan nanoparticles (CNP) can protect sensitive bioactive macromolecules from enzymatic and chemical degradation in vivo and during storage, as well as promote delivery of macromolecules through absorbable epithelial cells (Takeuchi et al., 2001). I can.
한편 폴리데옥시리보뉴클레오티드(polydeoxyribonucleotide; 이하, PDRN)는 짧은 데옥시리보뉴클레오티드(short deoxyribonucleotide) 중합체 (50-2,000 염기의 DNA 절편)의 혼합물이다.On the other hand, polydeoxyribonucleotide (hereinafter, PDRN) is a mixture of short deoxyribonucleotide polymers (50-2,000 base DNA fragments).
PDRN은 세포의 증식과 재생을 촉진하는 세포 성장 자극제로 알려져 있다(Koo and Yun 2016). PDRN은 인간의 태반 (Tonello et al., 1999), 송어 정자 또는 다른 연어 종 (Lee et al., 2018)에서 추출될 수 있다.PDRN is known as a cell growth stimulator that promotes cell proliferation and regeneration (Koo and Yun 2016). PDRN can be extracted from human placenta (Tonello et al., 1999), trout sperm or other salmon species (Lee et al., 2018).
PDRN은 대부분 생체 내로 직접 처리(treatment)되고 있다. 생체 내로 직접 처리되는 PDRN은 짧은 반감기와 생체 내 존재하는 효소에 의해 빠른 시간 내에 제거(degradation)될 수 있으며, 이 경우, 생체 내에서 적절한 농도를 유지하기 위해 상처 부위에 PDRN이 여러 번 처리되어야 하는 번거로움이 있을 수 있다.PDRN is mostly treated directly in vivo. PDRN directly treated in vivo can be rapidly degraded by enzymes present in vivo with a short half-life. In this case, PDRN must be treated several times at the wound site to maintain an appropriate concentration in vivo. It can be a hassle.
따라서, 생체 친화적인 물질을 이용한 생체 활성 물질의 고정화를 통해 생체 내에서 일정 시간 동안 생체 활성 물질을 보호하고, 생체 활성 물질의 방출 속도 제어가 가능할 수 있도록 하는 기술 개발이 요구되고 있는 실정이다.Accordingly, there is a need for technology development to protect a bioactive material for a certain period of time in a living body through immobilization of a bioactive material using a bio-friendly material, and to control the release rate of the bioactive material.
이에 본 출원에서는 생체 친화적 물질인 키토산을 이용하여 생체 활성 물질을 고정화 시켜, 생체 활성 물질의 보호 및 방출 속도 제어가 가능하도록 하는 키토산 나노필름을 제공하고자 한다.Accordingly, the present application intends to provide a chitosan nanofilm capable of protecting a bioactive material and controlling the release rate by immobilizing a bioactive material using chitosan, a bio-friendly material.
본 출원에서는 생체 친화적 물질인 키토산을 이용하여 생체 활성 물질을 고정화 시켜, 생체 활성 물질의 보호 및 방출 속도 제어가 가능하도록 하는 키토산 나노필름의 제작 방법을 제공하고자 한다.In the present application, a method of manufacturing a chitosan nanofilm capable of protecting a bioactive material and controlling the release rate by immobilizing a bioactive material using chitosan, which is a bio-friendly material, is provided.
본 출원에서는 키토산에 고정화된 생체 활성 물질의 방출에 의한 상처 치유 및/또는 조직 재생용 키토산 나노필름을 제공하고자 한다.In the present application, it is intended to provide a chitosan nanofilm for wound healing and/or tissue regeneration by release of a bioactive material immobilized on chitosan.
본 출원에 의해 개시되는 기술의 일 양태에 따르면, PDRN이 캡슐화된 키토산 나노 입자; 및 키토산으로 이루어지는 막(membrane);을 포함하는 키토산 나노필름으로서, 상기 키토산으로 이루어진 막의 표면에 상기 키토산 나노 입자가 하나 이상 포함되어있는 키토산 나노필름이 제공된다.According to one aspect of the technology disclosed by the present application, PDRN is encapsulated chitosan nanoparticles; And a membrane made of chitosan, wherein a chitosan nanofilm including one or more chitosan nanoparticles on a surface of the layer made of chitosan is provided.
본 출원에 의해 개시되는 기술의 다른 양태에 따르면, i) PDRN 용액과 제1 키토산 용액을 1:1 부피비로 교반하는 것을 포함하는 PDRN이 캡슐화 된 키토산 나노 입자를 제조하는 제1 단계 - 이 때, 상기 PDRN 용액은 PDRN이 펜타소듐 트리포스페이트(pentasodium triphosphate)에 용해된 것이며, 상기 제1 키토산 용액은 키토산이 물에 용해된 것임-; ii) 상기 PDRN이 캡슐화 된 키토산 나노 입자가 포함된 키토산 나노 입자 용액(PDRN-CNP solution)을 제조하는 제2 단계 - 이 때, 상기 제2단계는 상기 제1 단계에서 제조된 상기 PDRN이 캡슐화 된 키토산 나노 입자(PDRN-CNP)를 제2 키토산 용액에 첨가하고 교반하는 것을 포함 함- ; 및 iii) 상기 PDRN이 캡슐화 된 키토산 나노 입자가 포함된 키토산 나노 입자 용액(PDRN-CNP solution)을 건조시키는 제3단계; 를 포함하는 키토산 나노필름 제조 방법이 제공된다.According to another aspect of the technology disclosed by the present application, i) a first step of preparing chitosan nanoparticles encapsulated with PDRN comprising stirring the PDRN solution and the first chitosan solution in a volume ratio of 1:1-At this time, The PDRN solution is that PDRN is dissolved in pentasodium triphosphate, and the first chitosan solution is that chitosan is dissolved in water; ii) The second step of preparing a chitosan nanoparticle solution (PDRN-CNP solution) containing the chitosan nanoparticles encapsulated with the PDRN-In this case, the second step is the PDRN prepared in the first step is encapsulated. Including adding chitosan nanoparticles (PDRN-CNP) to the second chitosan solution and stirring -; And iii) a third step of drying a chitosan nanoparticle solution (PDRN-CNP solution) containing chitosan nanoparticles encapsulating the PDRN. There is provided a method for producing a chitosan nanofilm comprising a.
본 출원에 의해 개시되는 기술의 또 다른 양태에 따르면, PDRN이 캡슐화된 키토산 나노 입자; 및 키토산으로 이루어지는 막(membrane);을 포함하는 키토산 나노필름으로서, 상기 키토산으로 이루어진 막(membrane)의 표면에 상기 키토산 나노 입자가 하나 이상 포함되어있고,According to another aspect of the technology disclosed by the present application, PDRN is encapsulated chitosan nanoparticles; And a membrane made of chitosan, wherein at least one chitosan nanoparticle is included on a surface of the membrane made of chitosan,
상기 키토산 나노필름은 세포 증식 효과 및 세포 이동 효과 중 하나 이상을 나타내는, 조직 재생용 키토산 나노필름이 제공된다.The chitosan nanofilm is provided with a chitosan nanofilm for tissue regeneration, which exhibits at least one of a cell proliferation effect and a cell migration effect.
본 명세서에 의해 개시되는 기술에 따르면, 키토산에 고정화된 PDRN이 생체 내에서 안정하게 보호될 수 있는 키토산 나노필름이 제공될 수 있다. 나아가, 상기 고정화된 PDRN이 방출되는 속도가 조절되는 키토산 나노필름이 제공될 수 있다.According to the technology disclosed by the present specification, a chitosan nanofilm capable of stably protecting PDRN immobilized on chitosan in vivo may be provided. Furthermore, a chitosan nanofilm in which the rate at which the immobilized PDRN is released may be controlled may be provided.
PDRN이 고정화된 키토산 나노필름 제조 시 용매 증발법(solvent evaporation method)을 이용하여 키토산 나노필름 생성속도를 단축시킬 수 있고, 공정설비 및 제조에 필요한 에너지가 감소되어 매우 경제적인 제조가 가능하다는 이점을 나타낼 수 있다.When manufacturing the PDRN-immobilized chitosan nanofilm, the production speed of chitosan nanofilm can be shortened by using a solvent evaporation method, and the energy required for manufacturing and processing equipment is reduced, which enables very economical manufacturing. Can be indicated.
본 출원에 의해 제공되는 키토산 나노필름은 생체 친화적인 물질로 생체 내에 적용되는 의약품, 및/또는 화장료 등으로 유용하게 활용될 수 있다. 또한, 본 발명의 제조방법에 따라 제조된 키토산 나노필름은 우수한 세포 증식 및 세포 이동 효과를 나타내는 바, 상처 치유용 의약품, 의료기기, 및/또는 화장료 등으로 유용하게 활용될 수 있다. 나아가, 본 발명의 제조방법에 따라 제조된 키토산 나노필름은 고정화된 생체 활성 물질의 방출 속도 제어가 가능한 효과를 나타내는 바, 의약품, 및/또는 화장료 등으로 유용하게 활용될 수 있다.The chitosan nanofilm provided by the present application is a bio-friendly material and may be usefully used as a pharmaceutical product and/or a cosmetic applied in a living body. In addition, the chitosan nanofilm prepared according to the manufacturing method of the present invention exhibits excellent cell proliferation and cell migration effects, and can be usefully used as a wound healing medicine, medical device, and/or cosmetic. Further, the chitosan nanofilm prepared according to the manufacturing method of the present invention exhibits an effect of controlling the release rate of the immobilized bioactive material, and thus may be usefully used as a pharmaceutical product and/or a cosmetic.
도 1의 (a)는 일 실험예에 따른 키토산(Chitosan) 용액, CNP 용액, 및 PDRN-CNP 용액을 나타낸다.
도 1의 (b)는 일 실험예에 따른 Chitosan-Film, CNP-Film, 및 PDRN-CNP-Film을 나타낸다.
도 2의 (a)는 일 실험예에 따른 CNP의 크기 분포를 나타낸다.
도 2의 (b)는 일 실험예에 따른 PDRN-CNP의 크기 분포를 나타낸다.
도 3의 (a)는 일 실험예에 따른 CNP의 제타 전위를 나타낸다.
도 3의 (b)는 일 실험예에 따른 PDRN-CNP의 제타 전위를 나타낸다.
도 4의 (a)는 일 실험예에 따른 CNP의 TEM 이미지를 나타낸다.
도 4의 (b)는 일 실험예에 따른 PDRN-CNP의 TEM 이미지를 나타낸다.
도 5 는 일 실험예에 따른 PDRN-CNP의 겔 지연 분석(gel-retaring analysis) 결과를 나타낸다. 1은 DNA 마커를, 2는 2μg의 PDRN을, 3은 2μg의 PDRN-CNP에 대한 겔 지연 분석(gel-retaring analysis) 결과를 나타낸다.
도 6은 키토산에 캡슐화된 PDRN의 안정성을 확인하기 위한 전기영동 결과를 나타낸다. 1은 DNA 마커, 2는 캡슐화 되지 않은 PDRN, 3은 캡슐화된 PDRN, 4는 캡슐화 되지 않은 PDRN+ DNAse I, 5는 캡슐화된 PDRN + Chitosanase, 6은 캡슐화된 PDRN+ DNAse I, 7은 캡슐화된 PDRN+ DNAse I+ Chitosanase에 대한 전기영동 결과를 나타낸다.
도 7은 일 실험예에 따른 FE-SEM에 의한 Chitosan-Film 의 표면 형태를 나타낸다.
도 8은 일 실험예에 따른 FE-SEM에 의한 CNP-Film 의 표면 형태를 나타낸다.
도 9는 일 실험예에 따른 FE-SEM에 의한 PDRN-CNP-Film 의 표면 형태를 나타낸다.
도 10 은 일 실험예에 따른 AFM에 의해 분석 된 Chitosan-Film 의 표면 구조를 나타낸다.
도 11 은 일 실험예에 따른 AFM에 의해 분석 된 CNP-Film 의 표면 구조를 나타낸다.
도 12 는 일 실험예에 따른 AFM에 의해 분석 된 PDRN-CNP-Film 의 표면 구조를 나타낸다.
도 13은 일 실험예에 따른 Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film 각각의 TG 및 DTG 곡선을 나타낸다.
도 14는 일 실험예에 따른 PDRN-CNP-Film으로부터 PDRN 방출 퍼센트(%)를 나타낸다.
도 15의 (a)는 일 실험예에 따른 Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film 으로 48시간 동안 처리된 인간 피부 섬유아세포를 나타낸다.
도 15의 (b)는 일 실험예에 따른 Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film 으로 48시간동안 처리된 인간 피부 섬유아세포를 세포 카운터(cell counter)로 측정한 세포 밀도(cell density)와 MTT 분석(MTT assay)에 의해 측정된 세포 생존력(cell viability) 그래프를 나타낸다.
도 16은 일 실험예에 따른 Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film 으로 36시간 동안 처리된 인간 피부 섬유아세포의 세포 이동 효과(cell migration effect)를 나타낸다. (a)는 CNP-Film이 처리된 섬유아세포의 세포 이동 효과를 나타내며, (b)는 Chitosan-Film이 처리된 섬유아세포의 세포 이동 효과를 나타내고, (c)는 PDRN-CNP-Film이 처리된 섬유아세포의 세포 이동 효과를 나타낸다.1A shows a chitosan solution, a CNP solution, and a PDRN-CNP solution according to an experimental example.
Figure 1 (b) shows Chitosan-Film, CNP-Film, and PDRN-CNP-Film according to an experimental example.
Figure 2 (a) shows the size distribution of CNP according to an experimental example.
Figure 2 (b) shows the size distribution of PDRN-CNP according to an experimental example.
3(a) shows the zeta potential of CNP according to an experimental example.
3B shows the zeta potential of PDRN-CNP according to an experimental example.
4A shows a TEM image of CNP according to an experimental example.
4B shows a TEM image of PDRN-CNP according to an experimental example.
5 shows the results of gel-retaring analysis of PDRN-CNP according to an experimental example. 1 represents a DNA marker, 2 represents 2 μg of PDRN, and 3 represents a gel-retaring analysis result for 2 μg of PDRN-CNP.
6 shows electrophoresis results for confirming the stability of PDRN encapsulated in chitosan. 1 is a DNA marker, 2 is an unencapsulated PDRN, 3 is an encapsulated PDRN, 4 is an unencapsulated PDRN+ DNAse I, 5 is an encapsulated PDRN + Chitosanase, 6 is an encapsulated PDRN+ DNAse I, and 7 is an encapsulated PDRN+ DNAse I+ The electrophoresis results for chitosanase are shown.
7 shows the surface shape of Chitosan-Film by FE-SEM according to an experimental example.
8 shows the surface morphology of CNP-Film by FE-SEM according to an experimental example.
9 shows the surface shape of PDRN-CNP-Film by FE-SEM according to an experimental example.
10 shows the surface structure of Chitosan-Film analyzed by AFM according to an experimental example.
11 shows the surface structure of CNP-Film analyzed by AFM according to an experimental example.
12 shows the surface structure of PDRN-CNP-Film analyzed by AFM according to an experimental example.
13 shows TG and DTG curves of Chitosan-Film, CNP-Film, and PDRN-CNP-Film, respectively, according to an experimental example.
14 shows the percent (%) of PDRN release from PDRN-CNP-Film according to an experimental example.
FIG. 15A shows human skin fibroblasts treated with Chitosan-Film, CNP-Film and PDRN-CNP-Film for 48 hours according to an experimental example.
Figure 15 (b) is a cell density measured by a cell counter (cell counter) of human skin fibroblasts treated with Chitosan-Film, CNP-Film and PDRN-CNP-Film for 48 hours according to an experimental example. ) And the cell viability (cell viability) measured by MTT assay.
FIG. 16 shows the cell migration effect of human skin fibroblasts treated with Chitosan-Film, CNP-Film and PDRN-CNP-Film for 36 hours according to an experimental example. (a) shows the cell migration effect of fibroblasts treated with CNP-Film, (b) shows the cell migration effect of fibroblasts treated with Chitosan-Film, and (c) shows PDRN-CNP-Film treated It shows the cell migration effect of fibroblasts.
용어의 정의Definition of Terms
본 명세서에서 사용되는 대표적인 용어에 대한 정의는 이하와 같다.Definitions of representative terms used in the present specification are as follows.
용어 "키토산"은 다당류로, 갑각류 껍질로부터 얻어지는 키틴의 -CH3CONH의 탈세틸화에 의하여 유도된 천연 고분자 물질이다. 즉, 키토산은 키틴의 단량체에 존재하는 아세틸기(acetyl group; -COCH3)가 아미노기(-NH3)로 치환된 형태이다. 한편, 게, 가재, 새우 등 갑각류의 껍질로부터 얻는 키틴은 셀룰로우스 다음으로 풍부한 천연고분자로 셀롤로오스 C-2위치의 OH가 CH3CONH로 치환된 구조이며 셀룰로오스와 매우 비슷한 구조를 가진 불용성 물질이다.The term "chitosan" is a polysaccharide, a natural high molecular substance derived from decetylation of -CH 3 CONH of chitin obtained from crustacean shells. That is, chitosan is a form in which an acetyl group (-COCH 3 ) present in a chitin monomer is substituted with an amino group (-NH 3 ). On the other hand, chitin obtained from the shells of crustaceans such as crab, crayfish, and shrimp is the second most abundant natural polymer after cellulose, and it has a structure in which OH at the C-2 position of cellulose is substituted with CH 3 CONH. It is a substance.
이러한 키토산은 천연고분자 중 유일한 양이온성을 갖는 물질로 알려져 있다. 키토산은 또한 풍부한 활성 아미노기와 히드록시기를 가지고 있으며 활성 아미노기의 수는 키틴의 탈아세틸화 정도에 따라 달라진다.Chitosan is known as the only cationic material among natural polymers. Chitosan also has abundant active amino and hydroxy groups, and the number of active amino groups depends on the degree of deacetylation of chitin.
키토산은 생체 적합성이고, 비독성이며, 면역 유발성이 낮으며 효소에 의하여 쉽게 분해되는 것으로 알려져 있다. 또한, 키토산은 세포를 활성화에 따른 노화 억제, 면역력 강화, 질병 예방, 생체의 자연적인 치유 능력 활성화 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다.Chitosan is known to be biocompatible, non-toxic, low immunogenic, and easily degraded by enzymes. In addition, chitosan is known to exhibit the effect of inhibiting aging by activating cells, strengthening immunity, preventing diseases, and activating the natural healing ability of the living body.
용어 "PDRN"은 폴리디옥시리보뉴클레오티드(polydeoxyribonucleotide)를 지칭하는 것으로, 짧은 디옥시리보뉴클레오타이드(short deoxyribonucleotide)의 혼합물(mixture)이다. 즉, DNA사슬을 일정 크기로 분획화하여 만든 저분자량 DNA 복합체(Low molecular weight DNA complex)이다.The term "PDRN" refers to polydeoxyribonucleotide, which is a mixture of short deoxyribonucleotides. In other words, it is a low molecular weight DNA complex made by fractionating a DNA chain into a certain size.
PDRN은 인간의 태반, 송어 정자 또는 다른 연어 종에서 추출될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. PDRN의 체내 투여 시 항염증 효과, 세포 증식 효과, 조직 재생 효과가 나타날 수 있다.PDRN can be extracted from human placenta, trout sperm or other salmon species, but is not limited thereto. When PDRN is administered in vivo, it may have anti-inflammatory effects, cell proliferation effects, and tissue regeneration effects.
용어 "단일 층(mono layer)"은 화합물을 소재로 하며 두 개의 상을 나누는 경계가 되는 단일 층으로 물질의 분리에 이용될 수 있다.The term "mono layer" may be used for the separation of materials as a single layer that is made of a compound and serves as a boundary between two phases.
상기 단일 층(mono layer)에는 필름(film), 또는 섬유 복합체(fiber complex)가 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The mono layer may include a film or a fiber complex, but is not limited thereto.
상기 섬유 복합체(fiber complex)에는 나노섬유 복합체(nanofiber complex)가 포함될 수 있으나. 이에 제한되지 않는다.The fiber complex may include a nanofiber complex. It is not limited thereto.
용어 "필름(film)"은 화합물을 소재로 하는 얇은 막(membrane)을 의미 하는 것으로, 단일 층(mono layer) 의 한 종류일 수 있다. 본 명세서에서 용어 "필름(film)"은 "막(membrane)"과 혼용될 수 있다.The term "film" refers to a thin film made of a compound, and may be a kind of a mono layer. In this specification, the term "film" may be used interchangeably with "membrane."
용어 "고분자 필름(polymer film)"고분자 화합물을 소재로 하는 얇은 막을 의미 하는 것으로, 단일 층(mono layer) 의 한 종류일 수 있다.The term "polymer film" refers to a thin film made of a polymer compound, and may be a type of a mono layer.
필름(film) 은 균일한 다공성 필름(homogenous porous film) 또는 비공극성 필름(non-porous film)일 수 있다.The film may be a homogenous porous film or a non-porous film.
용어 "비공극성 필름(non-porous film)"은 일반적으로 0.001㎛ 이하의 공경을 갖는 필름을 의미할 수 있다. 0.001㎛ 이하의 공경은 막을 구성하고 있는 분자의 열 진동에 의해 생긴 입자의 틈일 수 있다.The term “non-porous film” can generally mean a film having a pore diameter of 0.001 μm or less. The pore diameter of 0.001 μm or less may be a gap between particles caused by thermal vibration of molecules constituting the membrane.
용어 "균일한 다공성 필름(homogenous porous film)"은 공경의 크기가 균일한 필름을 의미할 수 있다.The term "homogenous porous film" may mean a film having a uniform pore size.
용어 "섬유(fiber)"는 길이가 직경보다 월등히 큰 형태의 고체 물질로, 길고 가늘며 연하게 굽힐 수 있는 천연 또는 인조의 선상 물체를 의미한다. 용어 "섬유 복합체(fiber complex)" 는 다수의 섬유(fiber)가 모여서 만들어진 천을 의미할 수 있으며, 이는 단일 층(mono layer) 의 한 종류일 수 있다.The term "fiber" is a solid material whose length is much larger than its diameter and refers to a natural or artificial linear object that can be bent long, thin, and soft. The term "fiber complex" may refer to a fabric made by gathering a plurality of fibers, which may be a type of mono layer.
용어 "나노섬유(nanofiber)"는 직경이 수십에서 수백 나노미터에 불과한 섬유를 의미할 수 있다.The term "nanofiber" may mean a fiber having a diameter of only tens to hundreds of nanometers.
용어 "나노섬유 복합체(nanofiber complex)" 는 나노섬유(nanofiber)가 모여서 만들어진 천을 의미할 수 있으며, 이는 단일 층(mono layer) 의 한 종류일 수 있다. 나노섬유 복합체(nanofiber compolex)는 별도의 직조과정 없이 나노섬유(nanofiber)를 함께 모으기만 하면 서로 얽혀 천이 된다.The term "nanofiber complex" may refer to a fabric made of a group of nanofibers, which may be a type of a single layer. The nanofiber compolex is entangled with each other and becomes a fabric by simply collecting the nanofibers together without a separate weaving process.
용어 "캡슐화(encapsulation)"는 특정 물질을 다른 물질로 둘러싸거나 코팅하는 기술을 의미한다.The term "encapsulation" refers to the technique of enclosing or coating a specific material with another material.
특정 물질을 둘러싸는데 사용되는 물질 또는 코팅의 재료는 설탕, 단백질, 다당류, 합성고분자, 또는 지방 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 리포좀은 대표적인 나노캡슐(nano capsule)의 한 종류일 수 있다.The material used to surround the specific material or the material of the coating may be sugar, protein, polysaccharide, synthetic polymer, or fat, but is not limited thereto. Liposomes may be one type of representative nanocapsule.
용어 "나노캡슐"은 나노 크기의 캡슐을 의미하며, 나노캡슐의 내부에 특정 물질이 포함되어 있을 수 있다. 본 명세서에서, 용어 "나노 입자(nanoparticle)"는 "나노캡슐(nano capsule)"와 혼용될 수 있다.The term "nanocapsule" refers to a nano-sized capsule, and a specific material may be included in the nanocapsule. In this specification, the term "nanoparticle" may be used interchangeably with "nano capsule".
캡슐화된 특정 물질은 외부 환경으로부터 안정하게 보호될 수 있으며, 특정 조건에서 방출될 수 있다.Certain encapsulated materials can be reliably protected from the external environment and can be released under specific conditions.
본 명세서에서 사용되는 용어 "나노필름(nanofilm)"은 나노 입자(nanoparticle)가 포함된 필름을 의미 할 수 있다.The term "nanofilm" as used herein may refer to a film including nanoparticles.
용어 '약'이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 25, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.The term'about' refers to 30, 25, 20, 25, 10, 9, 8, 7, 6, 5, or 30 for a reference amount, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, amount, weight or length. It means an amount, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, amount, weight or length varying by 4, 3, 2 or 1%.
이러한 용어들에 더하여, 필요한 경우 기타 용어들이 명세서 내의 다른 곳에서 정의된다. 본원에서 달리 명확하게 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 업계 용어들은 업계에서 인식하는 의미를 가질 것이다.In addition to these terms, other terms are defined elsewhere in the specification as necessary. Unless clearly defined otherwise herein, industry terms used herein will have industry-recognized meanings.
이하, 본 명세서에 의해 개시되는 내용을 상세히 설명한다.Hereinafter, the content disclosed by the present specification will be described in detail.
1. 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자를 포함하는 키토산 필름(Nucleotides-CP-Film)의 구성1. Composition of chitosan film (Nucleotides-CP-Film) comprising chitosan particles encapsulated by one or more nucleotides
본 명세서에 의해 제공되는 일 실시예에 따르면, "하나 이상의 뉴클레오타이드가 포함된 키토산 입자를 하나 이상 포함하는 키토산 필름" (이하, Nucleotides-CP-Film)이 제공될 수 있다.According to an embodiment provided by the present specification, "a chitosan film including one or more chitosan particles including one or more nucleotides" (hereinafter, Nucleotides-CP-Film) may be provided.
상기 Nucleotides-CP-Film은 i) 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자 (Nucleotides encapsulated chitosan particle; 이하, Nucleotides-CP) 및 ii) 층(layer) (예를 들어, 막(membrane))을 구성 요소로 포함 할 수 있다.The Nucleotides-CP-Film i) one or more nucleotides encapsulated chitosan particles (Nucleotides encapsulated chitosan particles; hereinafter, Nucleotides-CP) and ii) a layer (e.g., a membrane) as a component Can contain
상기 Nucleotides-CP-Film은 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자 (nucleotides-CP)가 상기 층(layer)의 표면에 균일하게 분포(homogenously distributed)되어 있는 형태일 수 있다.The Nucleotides-CP-Film may have a form in which nucleotides-encapsulated chitosan particles (nucleotides-CP) are homogenously distributed on the surface of the layer.
즉, 본 명세서에서 개시하는 Nucleotides-CP-Film은 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP)를 포함하는 층상 구조물(layer structure)이다.That is, Nucleotides-CP-Film disclosed in the present specification is a layer structure including chitosan particles (Nucleotides-CP) in which the one or more nucleotides are encapsulated.
상기 층 (layer)은 단일 층(mono layer) 또는 복수 층(multilayer)로 형성될 수 있으나, 설명의 편의를 위해, 단일 층(mono layer) 형태로 이루어진 Nucleotides-CP-Film 을 중심으로 설명한다.The layer (layer) may be formed as a single layer (mono layer) or a plurality of layers (multilayer), but for convenience of description, description will be made mainly on Nucleotides-CP-Film formed in a monolayer form.
이하에서는, Nucleotides-CP-Film의 각 구성 요소(Nucleotides-CP 및 층)에 대하여 구체적인 설명을 개시한다.Hereinafter, a detailed description of each component (Nucleotides-CP and layer) of Nucleotides-CP-Film will be described.
1-1. 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자 (Nucleotides-CP)1-1. Chitosan particles in which one or more nucleotides are encapsulated (Nucleotides-CP)
본 명세서에 의해 제공되는 일 실시예에 따르면, 하나 이상의 뉴클레오타이드(nucleotides)와 키토산 입자(chitosan particle; 이하, CP)의 복합체가 제공될 수 있다.According to an embodiment provided by the present specification, a complex of one or more nucleotides and chitosan particles (hereinafter, CP) may be provided.
상기 키토산 입자(CP)는 키토산(chitosan)을 일 구성 요소로 포함할 수 있다.The chitosan particles CP may include chitosan as a component.
상기 복합체의 형태는 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드(nucleotides)가 상기 키토산 입자(CP)에 캡슐화 된 형태일 수 있다. The form of the complex may be a form in which the one or more nucleotides are encapsulated in the chitosan particles (CP).
설명의 편의를 위해, 이하에서는 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides encapsulated chitosan particle)를 nucleotides-CP로 칭한다. 또한, 설명의 편의를 위해 이하에서는 상기 '하나 이상의 뉴클레오타이드'를 '뉴클레오타이드'로 혼용하여 사용한다.For convenience of explanation, hereinafter, nucleotides encapsulated chitosan particles in which the one or more nucleotides are encapsulated are referred to as nucleotides-CP. In addition, for convenience of description, hereinafter, the'one or more nucleotides' are used interchangeably as'nucleotides'.
1-1-1. 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP) 의 형태1-1-1. The form of chitosan particles (Nucleotides-CP) in which one or more nucleotides are encapsulated
본 명세서에서 제공되는 몇몇 실시예에 따른 상기 키토산 입자(CP) 및/또는 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)는 입체 형태일 수 있다. 예를 들어, 상기 키토산 입자(CP) 및/또는 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)는 대칭 또는 비대칭의 구형 일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The chitosan particles (CP) and/or chitosan particles (nucleotides-CP) in which nucleotides are encapsulated according to some embodiments provided herein may have a three-dimensional form. For example, the chitosan particles (CP) and/or the chitosan particles (nucleotides-CP) in which the nucleotides are encapsulated may have a symmetrical or asymmetrical spherical shape, but are not limited thereto.
이하에서는, 상기 뉴클레오타이드가 키토산 입자(CP)에 캡슐화 되어있는 구체적인 형태에 대해 설명한다.Hereinafter, a specific form in which the nucleotide is encapsulated in chitosan particles (CP) will be described.
예를 들어, 상기 뉴클레오타이드(nucleotides)는 키토산 입자(CP)의 내부에 존재하는 것일 수 있다. For example, the nucleotides may be present in chitosan particles (CP).
다른 예를 들어, 상기 뉴클레오타이드(nucleotides)는 키토산 입자(CP)의 표면에 존재하는 것일 수 있다.For another example, the nucleotides may be present on the surface of chitosan particles (CP).
또 다른 예를 들어, 상기 뉴클레오타이드(nucleotides)는 키토산 입자(CP)의 내부 및 표면에 존재하는 것일 수 있다.For another example, the nucleotides may be present inside and on the surface of the chitosan particle (CP).
이하에서는, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 하나 이상의 뉴클레오타이드(nucleotides)와 키토산 입자(CP) 사이에서 일어날 수 있는 상호작용(interaction)에 대하여 설명한다.Hereinafter, an interaction that may occur between one or more nucleotides of the chitosan particles (nucleotides-CP) in which the nucleotides are encapsulated and the chitosan particles (CP) will be described.
예를 들어, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)는 상기 뉴클레오타이드(nucleotides)와 키토산 입자(CP)의 정전기적 상호작용(electrostatic interaction)에 의해 형성된 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 정전기적 상호작용은 양이온성(cationic)인 뉴클레오타이드(nucleotides)와 음이온성(anionic)인 키토산 입자(CP) 사이의 상호작용일 수 있다.For example, the nucleotide-encapsulated chitosan particles (nucleotides-CP) may be formed by an electrostatic interaction between the nucleotides and chitosan particles (CP). Specifically, the electrostatic interaction may be an interaction between cationic nucleotides and anionic chitosan particles (CP).
다른 예를 들어, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)는 상기 뉴클레오타이드(nucleotides)와 키토산 입자(CP) 사이의 수소 결합(hydrogen bond)에 의해 형성된 것일 수 있다.For another example, the nucleotide-encapsulated chitosan particles (nucleotides-CP) may be formed by a hydrogen bond between the nucleotides and chitosan particles (CP).
또 다른 예를 들어, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)는 상기 뉴클레오타이드(nucleotides)와 상기 키토산 입자(CP) 사이의 공유 결합(covalent bond)에 의해 형성된 것일 수 있다.For another example, the nucleotide-encapsulated chitosan particles (nucleotides-CP) may be formed by a covalent bond between the nucleotides and the chitosan particles (CP).
또 다른 예를 들어, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)는 상기 뉴클레오타이드(nucleotides)와 상기 키토산 입자(CP) 사이의 소수성 상호작용(hydrophobic interaction)에 의해 형성된 것일 수 있다.For another example, the nucleotide-encapsulated chitosan particles (nucleotides-CP) may be formed by a hydrophobic interaction between the nucleotides and the chitosan particles (CP).
1-1-2. 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP)의 성분1-1-2. Components of chitosan particles (Nucleotides-CP) in which one or more nucleotides are encapsulated
1-1-2-1. 키토산1-1-2-1. Chitosan
이하에서는, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 구성요소로 포함될 수 있는 키토산(chitosan)에 대하여 구체적으로 설명한다.Hereinafter, chitosan, which may be included as a component of the encapsulated chitosan particles (nucleotides-CP), will be described in detail.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP) 및/또는 키토산 입자(CP)의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 염의 형태일 수 있다.According to an embodiment provided herein, chitosan, which is a component of chitosan particles (Nucleotides-CP) and/or chitosan particles (CP) in which nucleotides are encapsulated, may be in the form of a salt.
예를 들어, 상기 키토산은 키토산 하이드로클로라이드(chitosan hydrochloride; 이하, CHC)일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.For example, the chitosan may be chitosan hydrochloride (hereinafter, CHC), but is not limited thereto.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP) 및/또는 키토산 입자(CP)의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 키토산 유도체를 포함할 수 있다.According to an embodiment provided herein, chitosan, which is a component of chitosan particles (Nucleotides-CP) and/or chitosan particles (CP) in which nucleotides are encapsulated, may include a chitosan derivative.
예를 들어, 상기 키토산 유도체는 키토산의 알킬화물, 아실화물, 아릴화물, 황산화물 또는 인산화물일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.For example, the chitosan derivative may be an alkylated product, an acylated product, an arylated product, a sulfur oxide or a phosphoric oxide of chitosan, but is not limited thereto.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP) 및/또는 키토산 입자(CP)의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 물에 용해될 수 있다. 즉, 상기 키토산은 수용성(water soluble)일 수 있다.According to an embodiment provided herein, chitosan, which is a component of chitosan particles (Nucleotides-CP) and/or chitosan particles (CP) in which nucleotides are encapsulated, may be dissolved in water. That is, the chitosan may be water soluble.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP) 및/또는 키토산 입자(CP)의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 유기산 수용액에 용해될 수 있다. 예를 들어, 상기 키토산은 포름산(formic acid), 젖산(lactic acid), 아스코르브산(ascorbic acid) 또는 초산(acetic acid)에 용해될 수 있다.According to an embodiment provided herein, chitosan, which is a component of chitosan particles (Nucleotides-CP) and/or chitosan particles (CP) in which nucleotides are encapsulated, may be dissolved in an aqueous organic acid solution. For example, the chitosan may be dissolved in formic acid, lactic acid, ascorbic acid, or acetic acid.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP) 및/또는 키토산 입자(CP)의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 무기산 수용액에 용해될 수 있다. 예를 들어, 상기 키토산은 묽은 염산(diluted hydrochloric acid)에 용해될 수 있다.According to an embodiment provided herein, chitosan, which is a component of chitosan particles (Nucleotides-CP) and/or chitosan particles (CP) in which nucleotides are encapsulated, may be dissolved in an aqueous inorganic acid solution. For example, the chitosan may be dissolved in diluted hydrochloric acid.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP) 및/또는 키토산 입자(CP)의 일 구성요소인 키토산(chitosan)의 분자량은 제한되지 않을 수 있다.According to an embodiment provided herein, the molecular weight of chitosan, which is a component of chitosan particles (Nucleotides-CP) and/or chitosan particles (CP) in which nucleotides are encapsulated, may not be limited.
예를 들어, 상기 키토산의 분자량[단위 g/mol]은 10000 내지 20000일 수 있다. 다른 예를 들어, 상기 키토산의 분자량[단위 g/mol]은 2000 내지 10000일 수 있다. 또 다른 예를 들어, 상기 키토산의 분자량은 2000이하일 수 있다.For example, the molecular weight [unit g/mol] of chitosan may be 10000 to 20000. For another example, the molecular weight [unit g/mol] of chitosan may be 2000 to 10000. For another example, the molecular weight of chitosan may be 2000 or less.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP) 및/또는 키토산 입자(CP)의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 키틴(chitin)이 탈아세틸화(deacetylation) 된 것 일 수 있다.According to an exemplary embodiment provided herein, chitosan, which is a component of chitosan particles (Nucleotides-CP) and/or chitosan particles (CP) in which nucleotides are encapsulated, is deacetylated by chitin. ) Can be.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 100% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 100%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 95% 내지 100% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 95% to 100%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 85% 내지 95% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 85% to 95%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 75% 내지 85% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 75% to 85%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 65% 내지 75% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 65% to 75%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 55% 내지 65% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 55% to 65%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 55% 이하 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 55% or less.
1-1-2-2. 하나 이상의 뉴클레오타이드(nucleotides)1-1-2-2. One or more nucleotides
이하에서는, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 구성요소로 포함될 수 있는 뉴클레오타이드(nucleotides)에 대하여 구체적으로 설명한다.Hereinafter, nucleotides that can be included as components of the encapsulated chitosan particles (nucleotides-CP) will be described in detail.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 상기 뉴클레오타이드(nucleotides)는 DNA 또는 RNA 일 수 있다. 예를 들어, 상기 RNA는 mRNA(messenger RNA), tRNA(transfer RNA), rRNA(ribosomal RNA), miRNA(micro RNA), snRNA(small nuclear RNA), snoRNA(small nucleolar RNA), aRNA(antisense RNA), 또는 siRNA(small intrfering RNA) 일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.According to an embodiment provided herein, the nucleotides may be DNA or RNA. For example, the RNA is mRNA (messenger RNA), tRNA (transfer RNA), rRNA (ribosomal RNA), miRNA (micro RNA), snRNA (small nuclear RNA), snoRNA (small nucleolar RNA), aRNA (antisense RNA) , Or siRNA (small intrfering RNA), but is not limited thereto.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 상기 뉴클레오타이드(nucleotides)는 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide)일 수 있다.According to an embodiment provided herein, the nucleotides may be oligonucleotides.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 상기 뉴클레오타이드(nucleotides)는 폴리디옥시리보뉴클레오타이드(polydeoxyribonucleotide; 이하, PDRN) 일 수 있다.According to an embodiment provided herein, the nucleotides may be polydeoxyribonucleotides (hereinafter, PDRN).
상기 PDRN은 10 내지 3000개; 10 내지 2000개; 10 내지 1000개; 10 내지 500개; 10 내지 250개; 또는 10 내지 100개;의 염기 또는 염기쌍을 가지는 DNA 단편(DNA fragment) 일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 상기 PDRN은 10 내지 3000개; 10 내지 2000개; 10 내지 1000개; 10 내지 500개; 10 내지 250개; 또는 10 내지 100개;의 염기 또는 염기쌍을 가지는 DNA 단편(DNA fragment)의 혼합물(mixture)일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The PDRN is 10 to 3000; 10 to 2000; 10 to 1000; 10 to 500; 10 to 250; Alternatively, it may be a DNA fragment having 10 to 100 bases or base pairs, but is not limited thereto. In addition, the PDRN is 10 to 3000; 10 to 2000; 10 to 1000; 10 to 500; 10 to 250; Or it may be a mixture of DNA fragments having 10 to 100 bases or base pairs, but is not limited thereto.
예를 들어, 상기 PDRN은 50 내지 2000개의 염기 또는 염기쌍(bases or basepair)을 가지는 DNA 단편(DNA fragment)의 혼합물(mixture)일 수 있다.For example, the PDRN may be a mixture of DNA fragments having 50 to 2000 bases or basepairs.
상기 PDRN은 인위적으로 합성된 것일 수 있고, 생물로부터 유래된 것일 수 있다. 즉, 상기 PDRN은 그 유래가 무관할 수 있다.The PDRN may be artificially synthesized or may be derived from an organism. That is, the origin of the PDRN may be irrelevant.
일 예에서, 상기 PDRN은 인간의 태반으로부터 유래한 것일 수 있다.In one example, the PDRN may be derived from a human placenta.
다른 예에서, 상기 PDRN은 어류의 정자, 정액 및/또는 정소로부터 유래한 것 일 수 있다. 이 경우, 상기 어류는 연어목 (Salmoniformes) 및/또는 연어과(Salmonidae) 일 수 있다. 예를 들어, 상기 어류는 연어속(Oncorhynchus) 또는 송어속(Salmo)일 수 있다.In another example, the PDRN may be derived from sperm, semen, and/or testis of fish. In this case, the fish may be Salmoniformes and/or Salmonidae. For example, the fish may be salmon genus (Oncorhynchus) or trout genus (Salmo).
1-1-3. 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP)의 물리적 특징 및 화학적 특징1-1-3. Physical and chemical properties of chitosan particles (Nucleotides-CP) in which one or more nucleotides are encapsulated
이하에서는, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 물리적 특징 및 화학적 특징에 대해 설명한다.Hereinafter, physical and chemical characteristics of chitosan particles (nucleotides-CP) in which the nucleotides are encapsulated will be described.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따른 키토산 입자(CP) 및/또는 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 직경은 나노 크기(nano size) 또는 마이크로 크기(micro size)일 수 있다.The diameter of chitosan particles (CP) and/or chitosan particles (nucleotides-CP) in which nucleotides are encapsulated according to an exemplary embodiment provided herein may be a nano size or a micro size.
일 예로, 상기 키토산 입자(CP)의 직경은 나노 크기(nano size) 일 수 있다.For example, the diameter of the chitosan particles CP may be a nano size.
예를 들어, 상기 키토산 입자(CP)의 직경은 100 nm 내지 500 nm 일 수 있다. 구체적으로, 상기 키토산 입자(CP)의 직경은 100 nm 내지 300 nm 일 수 있다. 구체적으로, 상기 키토산 입자(CP)의 직경은 300 nm 내지 500 nm 일 수 있다.For example, the chitosan particles CP may have a diameter of 100 nm to 500 nm. Specifically, the diameter of the chitosan particles CP may be 100 nm to 300 nm. Specifically, the chitosan particles CP may have a diameter of 300 nm to 500 nm.
다른 예로, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 직경은 나노 크기(nano size) 일 수 있다.As another example, the diameter of the chitosan particles (nucleotides-CP) in which the nucleotides are encapsulated may be a nano size.
예를 들어, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 직경은 100 내지 500nm 일 수 있다. 구체적으로, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 직경은 100nm 내지 250nm 일 수 있다. 구체적으로, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 직경은 250nm 내지 500nm 일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 직경은 250nm 내지 350nm일 수 있다.For example, the diameter of chitosan particles (nucleotides-CP) in which the nucleotides are encapsulated may be 100 to 500 nm. Specifically, the diameter of the chitosan particles (nucleotides-CP) in which the nucleotides are encapsulated may be 100 nm to 250 nm. Specifically, the diameter of the chitosan particles (nucleotides-CP) in which the nucleotides are encapsulated may be 250 nm to 500 nm. More specifically, the diameter of the chitosan particles (nucleotides-CP) in which the nucleotides are encapsulated may be 250 nm to 350 nm.
본 명세서의 구체적인 예에서, 상기 키토산 입자(CP)는 직경이 나노 크기(nano size)이다. 상기 나노 크기의 직경을 가지는 키토산 입자(CP)는 "키토산 나노 입자(CNP)"로 표현될 수 있다.In a specific example of the present specification, the chitosan particles CP have a nano size. The chitosan particles (CP) having the nano-sized diameter may be expressed as "chitosan nanoparticles (CNP)".
이러한 “키토산 나노 입자(CNP)”가 내부에 하나 이상의 뉴클레오타이드를 포함하는 경우, "하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 나노 입자(nucleotides-CNP)" 또는 "뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 나노 입자(nucleotides-CNP)"로 표현될 수 있다.When these “chitosan nanoparticles (CNP)” contain one or more nucleotides therein, “chitosan nanoparticles in which one or more nucleotides are encapsulated (nucleotides-CNP)” or “chitosan nanoparticles in which nucleotides are encapsulated (nucleotides-CNP)” It can be expressed as ".
한편, 뉴클레오타이드가 상기 키토산 입자(CP), 예를 들어, 키토산 나노 입자(CNP)에 포함되는 경우, 상기 뉴클레오타이드는 효소 또는 외부 환경으로부터 보호될 수 있다.Meanwhile, when nucleotides are included in the chitosan particles (CP), for example, chitosan nanoparticles (CNP), the nucleotides may be protected from enzymes or external environments.
예를 들어, 상기 효소는 DNA 분해효소(DNase) 또는 RNA 분해효소(RNase) 일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.For example, the enzyme may be DNA degrading enzyme (DNase) or RNA degrading enzyme (RNase), but is not limited thereto.
즉, 본 명세서에서 개시하고 있는 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 나노 입자(nucleotides-CNP)는 DNA 분해효소(DNase) 또는 RNA 분해효소(RNase)로부터 상기 뉴클레오타이드가 분해되는 것을 방지할 수 있는 형태의 물질이다.That is, chitosan nanoparticles (nucleotides-CNP) in which nucleotides disclosed herein are encapsulated are substances in a form capable of preventing the nucleotide from being degraded from DNA degrading enzyme (DNase) or RNA degrading enzyme (RNase).
또한, 본 명세서에 의해 제공되는 뉴클레오타이드는 상기 키토산 입자(CP)에 대하여 0.1 내지 10 % 질량 퍼센트(w/w)를 가질 수 있다.In addition, the nucleotide provided by the present specification may have 0.1 to 10% mass percent (w/w) based on the chitosan particles (CP).
예를 들어, 상기 뉴클레오타이드는 상기 키토산 입자(CP)에 대하여, 0.5 내지 5 % 질량 퍼센트(w/w)를 가질 수 있다.For example, the nucleotide may have 0.5 to 5% mass percent (w/w) based on the chitosan particles (CP).
예를 들어, 상기 뉴클레오타이드는 상기 키토산 입자(CP)에 대하여, 0.5 내지 2 % 질량 퍼센트(w/w)를 가질 수 있다.For example, the nucleotide may have 0.5 to 2% mass percent (w/w) based on the chitosan particles (CP).
1-1-4. 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(Nucleotides-CP)의 제작 방법1-1-4. Method for producing chitosan particles (Nucleotides-CP) in which one or more nucleotides are encapsulated
이하에서는, 상기 키토산 입자 및/또는 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)의 제작 방법에 대해 설명한다.Hereinafter, a method of manufacturing the chitosan particles and/or chitosan particles in which the nucleotides are encapsulated (nucleotides-CP) will be described.
본 명세서에서 제공되는 몇몇 실시예에 따르면, 상기 키토산 입자 및/또는 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)는 이온성 겔화 방법(ionic gelation method), 또는 코아세르베이션 방법(coacervation method) 에 의해 생산될 수 있다.According to some embodiments provided herein, the chitosan particles and/or chitosan particles in which the nucleotides are encapsulated (nucleotides-CP) are subjected to an ionic gelation method or a coacervation method. Can be produced by
본 명세서에서 제공되는 몇몇 실시예에 따르면, 상기 키토산 입자 및/또는 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)는 용매 증발 방법, 순간 에멀션 및 용매 분산 방법에 의해 생산될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.According to some embodiments provided herein, the chitosan particles and/or chitosan particles in which the nucleotides are encapsulated (nucleotides-CP) may be produced by a solvent evaporation method, an instant emulsion, and a solvent dispersion method, but is not limited thereto. Does not.
본 명세서에서 제공되는 몇몇 실시예에 따르면, 상기 키토산 입자 및/또는 상기 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자(nucleotides-CP)는 초임계 액체기술, 비-습성 템플레이트에서 입자복제, 자가조합 및 전기방사 방법에 의해 생산될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.According to some embodiments provided herein, the chitosan particles and/or chitosan particles encapsulated with the nucleotides (nucleotides-CP) are used in supercritical liquid technology, particle replication in a non-moist template, self-assembly, and electrospinning methods. It may be produced by, but is not limited thereto.
1-2. 층상 구조(layer structure)1-2. Layer structure
본 명세서에서 개시되는 층상 구조 (layer structure)는 단일 층(mono layer) 또는 복수 층(multilayer)로 형성될 수 있다. 상기 복수 층(multilayer)은 상기 단일 층(mono layer)이 적층 된 형태일 수 있다. The layer structure disclosed herein may be formed as a single layer or a multilayer. The multilayer may be in a form in which the mono layer is stacked.
이하에서는 설명의 편의를 위해, 단일 층(mono layer) 형태를 중심으로 설명한다.Hereinafter, for convenience of description, a description will be given focusing on a single layer type.
1-2-1. 단일 층(mono layer)의 형태1-2-1. The form of a mono layer
일 실시예로, 상기 단일 층(mono layer)은 막(membrane) 구조물이다. 구체적으로, 상기 단일 층(mono layer)은 키토산을 구성요소로 하는 막(membrane)일 수 있다.In one embodiment, the mono layer is a membrane structure. Specifically, the mono layer may be a membrane containing chitosan as a component.
상기 막(membrane)은 비공극성 막(non-porous membrane)일 수 있다.The membrane (membrane) may be a non-porous membrane (non-porous membrane).
상기 막(membrane)은 균일한 다공성 막(homogenous porous membrane)일 수 있다.The membrane may be a homogenous porous membrane.
상기 막 구조물은 나노 섬유 복합체(nanofiber complex)와 비교하여, 상이한 성질 및 장점을 가질 수 있다.Compared with the nanofiber complex, the membrane structure may have different properties and advantages.
상기 나노섬유 복합체(nanofiber complex)는 나노섬유(nanofiber)가 모여 만들어진 물질로, 공극(pore)이 존재하고, 그 공극(pore)의 크기는 균일하지 않다. 즉, 상기 나노섬유 복합체(nanofiber complex)는 무작위적으로(randomly) 생성된 공극(pore)을 포함하기 때문에 균일한 특성을 가지지 못하여 상기 나노섬유 복합체를 생성할 때 선택성(selectivity)이 낮아지는 문제가 있다. The nanofiber complex is a material made of a group of nanofibers, and has pores, and the size of the pores is not uniform. That is, since the nanofiber complex contains randomly generated pores, it does not have a uniform characteristic, and thus, the problem of lowering selectivity when generating the nanofiber complex. have.
그러나, 본 명세서에서 개시하고 있는 막(membrane) 구조물은 i) 공극(pore)이 존재하지 않거나, ii) 공극(pore)이 존재하더라도 크기가 작거나, iii) 공극(pore)이 존재하더라도 크기가 균일 할 수 있기 때문에, 균일한 특성을 가질 수 있어 선택성(selectivity)이 높다.However, the membrane structure disclosed in the present specification i) does not have pores, ii) has a small size even if there is a pore, or iii) has a size even if there is a pore. Since it can be uniform, it can have uniform characteristics, and thus selectivity is high.
또한, 두께에 대하여, 상기 막(membrane) 구조물은 나노섬유 복합체(nanofiber complex) 보다 얇다.In addition, with respect to thickness, the membrane structure is thinner than that of a nanofiber complex.
나아가, 강도(strength)에 대하여, 상기 막(membrane) 구조물은 나노섬유 복합체(nanofiber complex) 보다 높다. 예를 들어, 상기 막(membrane) 구조물의 인장 강도(tensile strength)는 상기 나노섬유 복합체(nanofiber complex)의 인장 강도 보다 높을 수 있다.Furthermore, with respect to strength, the membrane structure is higher than that of a nanofiber complex. For example, the tensile strength of the membrane structure may be higher than the tensile strength of the nanofiber complex.
1-2-2. 단일 층(mono layer)의 성분1-2-2. Components of a mono layer
이하에서는, 상기 단일 층(mono layer), 특히 막(membrane)의 일 구성요소인 키토산(chitosan)에 대하여 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the monolayer, particularly chitosan, which is a component of the membrane, will be described in detail.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 상기 막(membrane) 의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 염의 형태일 수 있다.According to an exemplary embodiment provided herein, chitosan, which is a component of the membrane, may be in the form of a salt.
예를 들어, 상기 키토산은 키토산 하이드로클로라이드(chitosan hydrochloride; 이하, CHC)일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.For example, the chitosan may be chitosan hydrochloride (hereinafter, CHC), but is not limited thereto.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면 상기 막(membrane) 의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 키토산 유도체를 포함할 수 있다.According to the exemplary embodiment provided herein, chitosan, which is a component of the membrane, may include a chitosan derivative.
예를 들어, 상기 키토산 유도체는 키토산의 알킬화물, 아실화물, 아릴화물, 황산화물 또는 인산화물일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.For example, the chitosan derivative may be an alkylated product, an acylated product, an arylated product, a sulfur oxide or a phosphoric oxide of chitosan, but is not limited thereto.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 상기 막(membrane) 의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 물에 용해될 수 있다. 즉, 상기 키토산은 수용성(water soluble)일 수 있다.According to an exemplary embodiment provided herein, chitosan, which is a component of the membrane, may be dissolved in water. That is, the chitosan may be water soluble.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 상기 막(membrane) 의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 유기산 수용액에 용해될 수 있다. 예를 들어, 상기 키토산은 포름산(formic acid), 젖산(lactic acid), 아스코르브산(ascorbic acid) 또는 초산(acetic acid)에 용해될 수 있다.According to an exemplary embodiment provided herein, chitosan, which is a component of the membrane, may be dissolved in an aqueous organic acid solution. For example, the chitosan may be dissolved in formic acid, lactic acid, ascorbic acid, or acetic acid.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 상기 막(membrane) 의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 무기산 수용액에 용해될 수 있다. 예를 들어, 상기 키토산은 묽은 염산(diluted hydrochloric acid)에 용해될 수 있다.According to an exemplary embodiment provided herein, chitosan, which is a component of the membrane, may be dissolved in an aqueous inorganic acid solution. For example, the chitosan may be dissolved in diluted hydrochloric acid.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 상기 막(membrane) 의 일 구성요소인 키토산(chitosan)의 분자량은 제한되지 않을 수 있다.According to the exemplary embodiment provided herein, the molecular weight of chitosan, which is a component of the membrane, may not be limited.
예를 들어, 상기 키토산의 분자량[단위 g/mol]은 10000 내지 20000일 수 있다. 다른 예를 들어, 상기 키토산의 분자량[단위 g/mol]은 2000 내지 10000일 수 있다. 또 다른 예를 들어, 상기 키토산의 분자량은 2000 이하일 수 있다.For example, the molecular weight [unit g/mol] of chitosan may be 10000 to 20000. For another example, the molecular weight [unit g/mol] of chitosan may be 2000 to 10000. For another example, the molecular weight of the chitosan may be 2000 or less.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따르면, 상기 막(membrane) 의 일 구성요소인 키토산(chitosan)은 키틴(chitin)이 탈아세틸화(deacetylation) 된 것 일 수 있다.According to an exemplary embodiment provided herein, chitosan, which is a component of the membrane, may be deacetylated of chitin.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 100% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 100%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 95% 내지 100% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 95% to 100%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 85% 내지 95% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 85% to 95%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 75% 내지 85% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 75% to 85%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 65% 내지 75% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 65% to 75%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 55% 내지 65% 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 55% to 65%.
구체적으로, 상기 키토산(chitosan)의 키틴으로부터의 탈아세탈화 정도(deacetylation degree; DD)는 55% 이하 일 수 있다.Specifically, the degree of deacetylation (DD) of chitosan from chitin may be 55% or less.
본 명세서에서 개시하고 있는 Nucleotides-CP-Film의 일 구성요소인 막(membrane)은, 전술한 성질들 중 어느 하나 이상을 가지는 막(membrane) 구조의 단일 층(mono layer)이 2개 이상 적층된 복수 층(multilayer)의 층상 구조일 수 있다.A membrane, which is a component of Nucleotides-CP-Film disclosed in the present specification, has two or more monolayers of a membrane structure having one or more of the above-described properties. It may be a multilayered layered structure.
2. 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자를 포함하는 키토산 필름 (Nucleotides-CP-Film) 의 물리적 특성 및 화학적 특성2. Physical and chemical properties of chitosan film (Nucleotides-CP-Film) containing chitosan particles encapsulated by one or more nucleotides
이하에서는, 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 입자(nucleotides-CP)를 포함하는 키토산 필름의 물리적 특징 및 화학적 특징에 대해 설명한다. Hereinafter, physical and chemical characteristics of a chitosan film including chitosan particles (nucleotides-CP) in which one or more nucleotides are encapsulated will be described.
이하에서는 직경이 나노 사이즈인 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화 된 키토산 입자를 포함하는 키토산 필름은 Nucleotide-CNP-Film이라 표현한다.Hereinafter, a chitosan film including chitosan particles encapsulated with one or more nucleotides having a nano-sized diameter is referred to as Nucleotide-CNP-Film.
본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따른 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)의 두께는 마이크로 크기(micro size)일 수 있다.The thickness of Nucelotide-CP-Film (eg, Nucleotide-CNP-Film) according to an embodiment provided herein may be a micro size.
예를 들어, 상기 두께는 30 μm 내지 60 μm일 수 있다. 구체적으로, 상기 두께는 50 μm 내지 60 μm일 수 있다. For example, the thickness may be 30 μm to 60 μm. Specifically, the thickness may be 50 μm to 60 μm.
본 명세서에서 개시하는 나노필름은 섬유 복합체(fiber complex)로 이루어진 층상 구조물의 두께 (통상 100 μm내지 120 μm) 보다 얇다.The nanofilm disclosed in the present specification is thinner than the thickness of a layered structure made of a fiber complex (usually 100 μm to 120 μm).
상기 두께는 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)의 구성요소인 막(membrane)이 단일 층(monolayer)인지 복수 층(multilayer)인지 상관없이, 전체 나노필름의 두께를 의미한다.The thickness refers to the thickness of the entire nanofilm, regardless of whether the membrane, which is a component of Nucelotide-CP-Film (e.g., Nucleotide-CNP-Film), is a monolayer or multilayer. do.
또한, 본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 따른 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)의 인장 강도(tensile strength)는 Nucleotide-CP 및/또는 Nucleotide-CNP가 포함된 섬유 복합체(fiber complex)의 인장 강도 보다 높다.In addition, the tensile strength of Nucelotide-CP-Film (eg, Nucleotide-CNP-Film) according to an embodiment provided herein is a fiber composite containing Nucleotide-CP and/or Nucleotide-CNP (fiber complex) higher than the tensile strength.
예를 들어, 상기 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)의 인장 강도(tensile strength)는 70kgf/cm2 내지 90 gf/cm2 일 수 있다.For example, the tensile strength of the Nucelotide-CP-Film (eg, Nucleotide-CNP-Film) may be 70kgf/cm2 to 90 gf/cm2.
구체적으로, 상기 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)의 인장 강도(tensile strength)는 약 80kgf/cm2 내지 약 90 gf/cm2 일 수 있다.Specifically, the tensile strength of the Nucelotide-CP-Film (eg, Nucleotide-CNP-Film) may be about 80 kgf/cm2 to about 90 gf/cm2.
나아가, 본 명세서에서 제공되는 일 실시예에 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)의 신장률(elongation at break)은 Nucleotide-CP 및/또는 Nucleotide-CNP가 포함된 섬유 복합체(fiber complex)의 신장률 보다 높다.Furthermore, the elongation at break of Nucelotide-CP-Film (eg, Nucleotide-CNP-Film) in an embodiment provided herein is a fiber composite containing Nucleotide-CP and/or Nucleotide-CNP ( fiber complex).
예를 들어, Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)m의 신장률(elongation at break)은 7 % 내지 8 % 일 수 있다.For example, the elongation at break of Nucelotide-CP-Film (eg, Nucleotide-CNP-Film) m may be 7% to 8%.
한편, 본 명세서에 의해 제공되는 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)에는 뉴클레오타이드가 0.1 내지 10 % 질량 퍼센트(w/w)로 상기 Nucelotide-CP-Film에 포함될 수 있다.On the other hand, in Nucelotide-CP-Film (for example, Nucleotide-CNP-Film) provided by the present specification, a nucleotide may be contained in the Nucelotide-CP-Film in 0.1 to 10% mass percent (w/w).
예를 들어, 상기 뉴클레오타이드는 상기 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)에 대하여, 0.5 내지 5 % 질량 퍼센트(w/w)로 포함될 수 있다.For example, the nucleotide may be included in an amount of 0.5 to 5% by mass (w/w) relative to the Nucelotide-CP-Film (eg, Nucleotide-CNP-Film).
구체적으로, 상기 뉴클레오타이드는 상기 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)에 대하여, 0.5 내지 2 % 질량 퍼센트(w/w)로 포함될 수 있다.Specifically, the nucleotide may be included in an amount of 0.5 to 2% by mass (w/w) relative to the Nucelotide-CP-Film (eg, Nucleotide-CNP-Film).
3. 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자를 포함하는 키토산 필름 (Nucleotides-CP-Film) 의 제작 방법3. Method for producing chitosan film (Nucleotides-CP-Film) containing chitosan particles in which one or more nucleotides are encapsulated
이하에서는, 상기 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)의 제작 방법에 대해 설명한다.Hereinafter, a method of manufacturing the Nucelotide-CP-Film (eg, Nucleotide-CNP-Film) will be described.
본 명세서에서 제공되는 몇몇 실시예에 따르면, 상기 Nucelotide-CP-Film (예를 들어, Nucleotide-CNP-Film)은 용매 증발법(solvent evaporation) 또는 용액 캐스팅 방법(solution casting method)에 의해 생산될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.According to some embodiments provided herein, the Nucelotide-CP-Film (eg, Nucleotide-CNP-Film) may be produced by a solvent evaporation method or a solution casting method. However, it is not limited thereto.
상기 Nucelotide-CP-Film을 제작하기 위한 방법은The method for manufacturing the Nucelotide-CP-Film
i) 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 나노 입자(Nucleotide-CP)를 제조하는 제 1 단계; i) a first step of preparing chitosan nanoparticles (Nucleotide-CP) in which one or more nucleotides are encapsulated;
ii) 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 나노 입자(Nucleotide-CP)가 포함된 키토산 나노 입자 용액(Nucleotide-CP solution)을 제조하는 제 2 단계; 및 ii) a second step of preparing a chitosan nanoparticle solution (Nucleotide-CP solution) containing chitosan nanoparticles (Nucleotide-CP) in which the one or more nucleotides are encapsulated; And
iii) 상기 키토산 나노 입자 용액(Nucleotide-CP solution)을 건조시키는 제 3 단계;를 포함할 수 있다.iii) a third step of drying the chitosan nanoparticle solution (Nucleotide-CP solution); may include.
본 명세서에서는 i) Nucelotide-CP-Film 을 형성할 수 있는 용액을 Nucleotide-CNP solution 이라 표현한다.In this specification, i) a solution capable of forming Nucelotide-CP-Film is referred to as Nucleotide-CNP solution.
상기 제 1 단계는 전술 한 바와 같이 온성겔 화 방법(ionic gelation method), 코아세르베이션 방법(coacervation method), 용매 증발법, 순간 에멀션 및 용매 분산 방법, 초임계 액체기술, 비-습성 템플레이트에서 입자복제, 자가조합 및/또는 전기방사 방법에 의해 생산될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.As described above, the first step is an ionic gelation method, a coacervation method, a solvent evaporation method, an instant emulsion and a solvent dispersion method, a supercritical liquid technology, and a particle in a non-wet template. It may be produced by cloning, self-assembly and/or electrospinning methods, but is not limited thereto.
구체적으로, 상기 제 1 단계는 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드(nuccleotides)가 포함된 용액과 제1 키토산 용액을 n:m의 부피비로 교반하는 과정을 포함할 수 있다 (n 및 m은 1이상의 자연수). 예를 들어, 상기 뉴클레오타이드(nuccleotides)가 포함된 용액과 제1 키토산 용액은 1:1의 부피비로 교반될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.Specifically, the first step may include stirring the solution containing the one or more nucleotides and the first chitosan solution at a volume ratio of n:m (n and m are natural numbers of 1 or more). For example, the solution containing the nucleotides and the first chitosan solution may be stirred at a volume ratio of 1:1, but is not limited thereto.
상기 제 1 단계는 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드(nuccleotides)가 포함된 용액과 상기 제1 키토산 용액을 가열하는 과정을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 제 1 단계는 40 내지 50 ℃에서 가열하는 과정을 더 포함할 수 있다.The first step may further include heating the solution containing the one or more nucleotides and the first chitosan solution. For example, the first step may further include heating at 40 to 50°C.
상기 하나 이상의 뉴클레오타이드(nuccleotides)가 포함된 용액은 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드(nuccleotides)가 펜타소듐 트리포스페이트(pentasodium triphosphate; TPP)에 용해된 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The solution containing one or more nucleotides (nuccleotides) may be one in which the one or more nucleotides (nuccleotides) are dissolved in pentasodium triphosphate (TPP), but is not limited thereto.
상기 하나 이상의 뉴클레오타이드는 PDRN일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The one or more nucleotides may be PDRN, but are not limited thereto.
상기 하나 이상의 뉴클레오타이드(nuccleotides)가 포함된 용액은 염의 형태일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드(nuccleotides)가 포함된 용액은 나트륨 염(sodium salt) 형태일 수 있다.The solution containing at least one nucleotide (nuccleotides) may be in the form of a salt, but is not limited thereto. For example, the solution containing one or more nucleotides may be in the form of a sodium salt.
상기 하나 이상의 뉴클레오타이드(nuccleotides)가 포함된 용액은 800μg/mL일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The solution containing the one or more nucleotides (nuccleotides) may be 800 μg/mL, but is not limited thereto.
상기 제1 키토산 용액은 키토산이 물에 용해된 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. The first chitosan solution may be obtained by dissolving chitosan in water, but is not limited thereto.
상기 키토산은 키토산 하이드로 클로라이드(chitosan hydrochloride)일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. The chitosan may be chitosan hydrochloride, but is not limited thereto.
상기 키토산은 90%의 탈아세틸화도(deacetylation degree)를 가지는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The chitosan may have a deacetylation degree of 90%, but is not limited thereto.
구체적으로, 상기 제 2 단계는 상기 제 1 단계에서 생산된 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드가 포함된 키토산 입자(Nucleotide-CP)를 제2 키토산 용액에 첨가하는 단계를 포함할 수 있다.Specifically, the second step may include adding chitosan particles (Nucleotide-CP) containing the one or more nucleotides produced in the first step to the second chitosan solution.
상기 제 2 단계는 상기 제 1 단계에서 생산된 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드가 포함된 키토산 입자(Nucleotide-CP)와 제2 키토산 용액을 교반하는 단계를 포함할 수 있다.The second step may include stirring the chitosan particles (Nucleotide-CP) containing the one or more nucleotides produced in the first step and a second chitosan solution.
상기 제 2 키토산 용액은 키토산 하이드로클로라이드(chitosan hydrochloride)용액일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The second chitosan solution may be a chitosan hydrochloride solution, but is not limited thereto.
상기 제 2 키토산 용액에는 글리세롤(glycerol)이 더 포함될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 상기 글리세롤은 1%(w/w)일 수 있다.The second chitosan solution may further contain glycerol, but is not limited thereto. For example, the glycerol may be 1% (w/w).
상기 제 2 단계에서 제조된 상기 키토산 나노 입자 용액(Nucleotide-CP solution)에 포함된 하나 이상의 뉴클레오타이드의 질량 퍼센트는 1%(w/w)일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The mass percent of one or more nucleotides contained in the chitosan nanoparticle solution (Nucleotide-CP solution) prepared in the second step may be 1% (w/w), but is not limited thereto.
구체적으로, 상기 제 3 단계는 상기 제 2 단계에서 제조된 상기 키토산 나노 입자 용액(Nucleotide-CP solution)을 페트리 접시(petri dish)에 붓는 과정을 포함할 수 있다.Specifically, the third step may include pouring the chitosan nanoparticle solution (Nucleotide-CP solution) prepared in the second step into a petri dish.
상기 제 3 단계는 상기 제 2 단계에서 제조된 상기 키토산 나노 입자 용액을 건조시키는 과정을 포함할 수 있다. The third step may include drying the chitosan nanoparticle solution prepared in the second step.
구체적으로, 상기 키토산 나노 입자 용액은 30℃ 내지 70℃ 에서 건조될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 보다 구체적으로, 상기 키토산 나노 입자 용액은 40℃ 에서 건조될 수 있다.Specifically, the chitosan nanoparticle solution may be dried at 30°C to 70°C, but is not limited thereto. More specifically, the chitosan nanoparticle solution may be dried at 40°C.
구체적으로, 상기 키토산 나노 입자 용액은 8시간 내지 12시간 동안 건조될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 보다 구체적으로, 상기 키토산 나노 입자 용액은 10 시간 동안 건조될 수 있다.Specifically, the chitosan nanoparticle solution may be dried for 8 to 12 hours, but is not limited thereto. More specifically, the chitosan nanoparticle solution may be dried for 10 hours.
상기 제 3 단계는 상기 제 2 단계에서 제조된 상기 키토산 나노 입자 용액을 건조시키는 과정 후 낮은 온도에서 보관하는 과정을 더 포함할 수 있다.The third step may further include drying the chitosan nanoparticle solution prepared in the second step and then storing the chitosan nanoparticle solution at a low temperature.
상기 낮은 온도는 20℃ 이하일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The low temperature may be 20° C. or less, but is not limited thereto.
4. 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 입자를 포함하는 키토산 필름(Nucleotides-CP-Film)의 효과 및 기능4. Effect and function of chitosan film (Nucleotides-CP-Film) containing chitosan particles in which one or more nucleotides are encapsulated
이하에서는, 본 명세서에 의해 제공되는 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화된 키토산 나노 입자(Nucleotide-CP)가 포함된 키토산 나노필름(Nucelotide-CP-Film)에 의한 몇몇 효과에 대해 설명한다.Hereinafter, some effects of the chitosan nanofilm (Nucelotide-CP-Film) containing chitosan nanoparticles (Nucleotide-CP) in which one or more nucleotides provided by the present specification are encapsulated will be described.
하기 개시된 효과들은 키토산 나노 입자, 키토산 필름 및/또는 키토산 나노 입자에 캡슐화된 하나 이상의 뉴클레오타이드에 의한 효과 일 수 있다.The effects disclosed below may be effects of chitosan nanoparticles, chitosan film, and/or one or more nucleotides encapsulated in chitosan nanoparticles.
4-1. 뉴클레오타이드의 보호 효과4-1. The protective effect of nucleotides
본 명세서에 의해 제공되는 Nucleotide-CP-Film에 포함되어 있는 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드는 외부 환경으로부터 보호될 수 있다.The one or more nucleotides included in Nucleotide-CP-Film provided by the present specification may be protected from an external environment.
상기 외부 환경은 상기 Nucleotides-CP-Film이 활용될 수 있는 환경을 포함할 수 있다.The external environment may include an environment in which the Nucleotides-CP-Film can be utilized.
상기 Nucleotides-CP-Film 이 세포 배양에 활용되는 경우, 상기 외부 환경은 배양될 세포, 상기 배양될 세포에서 방출되는 물질, 및 배양 배지가 될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.When the Nucleotides-CP-Film is used for cell culture, the external environment may be a cell to be cultured, a material released from the cell to be cultured, and a culture medium, but is not limited thereto.
상기 Nucleotides-CP-Film 이 생체 내서 이용되는 경우, 상기 외부 환경은 생체 내에 존재하는 단백질, DNA, RNA, 호르몬이 될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. When the Nucleotides-CP-Film is used in vivo, the external environment may be proteins, DNA, RNA, and hormones present in the living body, but is not limited thereto.
예를 들어, 상기 Nucleotides-CP-Film 에 포함되어 있는 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드는 효소로부터 보호될 수 있다. 상기 효소는 DNA 분해 효소, 또는 RNA 분해 효소일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 상기 DNA 분해 효소는 DNase1 일 수 있다.For example, the one or more nucleotides contained in the Nucleotides-CP-Film may be protected from enzymes. The enzyme may be a DNA degrading enzyme or an RNA degrading enzyme, but is not limited thereto. For example, the DNA degrading enzyme may be DNase1.
4-2. 뉴클레오타이드의 방출 조절 효과4-2. The effect of modulating the release of nucleotides
본 명세서에 의해 제공되는 Nucleotides-CP-Film 으로부터 상기 뉴클레오타이드가 방출될 수 있다.The nucleotide may be released from Nucleotides-CP-Film provided by the present specification.
상기 뉴클레오타이드는 중성 조건에서 방출될 수 있다. 예를 들어, 상기 뉴클레오타이드는 약 pH 7 조건에서 방출될 수 있다.The nucleotide can be released under neutral conditions. For example, the nucleotide can be released under conditions of about
이하에서는, 방출 퍼센트(방출 %)를 이용해 상기 뉴클레오타이드의 방출 속도를 설명한다.In the following, the rate of release of the nucleotide is described using the percent release (% of release).
본 명세서에서 사용되는 용어 "방출 퍼센트(방출 %)"는 Nucleotides-CP-Film 에 포함되어있는 뉴클레오타이드의 양을 기준으로 방출된 뉴클레오타이드의 양을 나타낸다.The term "percent release (% release)" as used herein refers to the amount of nucleotides released based on the amount of nucleotides contained in Nucleotides-CP-Film.
본 명세서에 의해 제공되는 Nucleotides-CP-Film 으로부터 하나 이상의 뉴클레오타이드의 방출 퍼센트는 15시간 동안 꾸준하게 증가할 수 있다.The percent release of one or more nucleotides from Nucleotides-CP-Film provided by this specification can increase steadily over 15 hours.
본 명세서에 의해 제공되는 Nucleotides-CP-Film 으로부터 하나 이상의 뉴클레오타이드의 방출 퍼센트는 15시간 내지 24시간 동안 꾸준하게 유지될 수 있다.The percent release of one or more nucleotides from Nucleotides-CP-Film provided by this specification can be kept steady for 15 to 24 hours.
본 명세서에 의해 제공되는 Nucleotides-CP-Film 으로부터 하나 이상의 뉴클레오타이드의 방출 퍼센트는 90% 까지 꾸준하게 증가될 수 있다.The percent release of one or more nucleotides from Nucleotides-CP-Film provided by this specification can be steadily increased up to 90%.
본 명세서에 의해 제공되는 Nucleotides-CP-Film 으로부터 하나 이상의 뉴클레오타이드의 방출 퍼센트는 15시간 내지 24시간 동안 90%로 내지 100%로 유지될 수 있다.The percent release of one or more nucleotides from Nucleotides-CP-Film provided by this specification can be maintained between 90% and 100% for 15 to 24 hours.
4-3. 세포 증식 효과4-3. Cell proliferation effect
본 명세서에 의해 제공되는 Nucleotides-CP-Film 에 의해 세포 활성화 효과가 나타날 수 있다.The cell activation effect may be exhibited by Nucleotides-CP-Film provided by the present specification.
상기 세포는 유기체의 기능적, 구조적 기본 단위로 동물 세포 또는 식물 세포일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 상기 세포는 줄기세포, 전구 세포 또는 완전히 분화된 세포일 수 있다. 다른 예를 들어, 상기 세포는 피부 세포일 수 있다. 구체적으로, 상기 세포는 진피 세포 또는 표피 세포일 수 있다.The cell may be an animal cell or a plant cell as a functional and structural basic unit of an organism, but is not limited thereto. For example, the cells may be stem cells, progenitor cells, or fully differentiated cells. For another example, the cells may be skin cells. Specifically, the cells may be dermal cells or epidermal cells.
상기 세포 활성화 효과는 세포 증식, 세포 분화, 및 세포 재생 효과 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 이 외에도 당 업계에서 사용되는 일반적인 세포 활성의 의미가 포함될 수 있다.The cell activation effect may include any one or more of cell proliferation, cell differentiation, and cell regeneration effects, but is not limited thereto. In addition, the meaning of general cellular activity used in the art may be included.
용어 “세포 증식(cell proliferation)”이란, 세포가 분열되어 세포 수가 증가하는 것을 의미할 수 있으며, 상기 세포의 증식은 단층으로의 증식 또는 다층으로의 증식을 모두 포함한다.The term "cell proliferation" may mean that the number of cells increases due to division of cells, and the proliferation of the cells includes both proliferation into a single layer or multilayer.
본 명세서에 의해 제공되는 몇몇 실시예에 따르면, Nucleotides-CP-Film 에 의해 세포 증식 효과가 나타날 수 있다.According to some embodiments provided by the present specification, the cell proliferation effect may be exhibited by Nucleotides-CP-Film.
일 실시예로, Nucleotides-CP-Film 에 의해 세포 밀도(cell density) 증가 효과가 나타날 수 있다.In one embodiment, the effect of increasing cell density may be exhibited by Nucleotides-CP-Film.
예를 들어, Nucleotides-CP-Film 이 존재하는 경우의 세포의 밀도는 Nucleotides-CP-Film 이 존재하지 않을 때의 세포 밀도보다 약 4배 내지 약 5배 높을 수 있다. For example, the density of cells when Nucleotides-CP-Film is present may be about 4 to about 5 times higher than the cell density when Nucleotides-CP-Film is not present.
다른 예를 들어, Nucleotides-CP-Film 이 존재하는 경우의 세포의 밀도는 키토산 필름(chitosan-Film)이 존재하는 경우의 세포 밀도보다 약 3배 내지 약 4배 높을 수 있다.For another example, the density of cells in the presence of Nucleotides-CP-Film may be about 3 to about 4 times higher than the cell density in the presence of chitosan-Film.
또 다른 예를 들어, Nucleotides-CP-Film 이 존재하는 경우의 세포의 밀도는 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화되지 않은 키토산 나노 입자를 포함하는 키토산 나노필름(CNP-Film)이 존재하는 경우의 세포 밀도보다 약 1.2배 내지 약 1.5배 높을 수 있다.As another example, the density of cells in the presence of Nucleotides-CP-Film is greater than the cell density in the presence of chitosan nanofilms (CNP-Film) including chitosan nanoparticles in which the one or more nucleotides are not encapsulated. It can be about 1.2 times to about 1.5 times higher.
다른 실시예로, Nucleotides-CP-Film 에 의해 세포 생존률(cell viability) 증가 효과가 나타날 수 있다.In another embodiment, the effect of increasing cell viability may be exhibited by Nucleotides-CP-Film.
예를 들어, Nucleotides-CP-Film 이 존재하는 경우의 세포 생존률(%)은 상기 Nucleotides-CP-Film 이 존재하지 않을 때의 세포 생존률(%) 보다 약 1.5배 내지 약 2배 높을 수 있다.For example, the cell viability (%) when Nucleotides-CP-Film is present may be about 1.5 to about 2 times higher than the cell viability (%) when Nucleotides-CP-Film is not present.
다른 예를 들어, Nucleotides-CP-Film이 존재하는 경우의 세포의 밀도는 키토산 필름(chitosan-Film)이 존재하는 경우의 세포 밀도보다 약 1.3배 내지 약 1.5배 높을 수 있다.For another example, the density of cells in the presence of Nucleotides-CP-Film may be about 1.3 to about 1.5 times higher than the cell density in the presence of chitosan-Film.
또 다른 예를 들어, Nucleotides-CP-Film 이 존재하는 경우의 세포의 밀도는 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화되지 않은 키토산 나노 입자를 포함하는 키토산 나노필름(CNP-Film)이 존재하는 경우의 세포 밀도보다 약 1.2배 내지 약 1.3배 높을 수 있다.As another example, the density of cells in the presence of Nucleotides-CP-Film is greater than the cell density in the presence of chitosan nanofilms (CNP-Film) including chitosan nanoparticles in which the one or more nucleotides are not encapsulated. It can be about 1.2 times to about 1.3 times higher.
4-4. 세포 이동 효과4-4. Cell migration effect
본 명세서에 의해 제공되는 몇몇 실시예에 따르면, Nucleotides-CP-Film 에 의해 세포 이동(cell migration) 효과가 나타날 수 있다.According to some embodiments provided by the present specification, a cell migration effect may be exhibited by Nucleotides-CP-Film.
예를 들어, Nucleotides-CP-Film 이 존재하는 경우의 세포 이동 효과는 키토산 필름(chitosan-Film)이 존재하는 경우의 세포 이동 효과 보다 높을 수 있다.For example, the cell migration effect in the presence of Nucleotides-CP-Film may be higher than the cell migration effect in the presence of chitosan-Film.
다른 예를 들어, Nucleotides-CP-Film 이 존재하는 경우의 세포 이동 효과는 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드가 캡슐화되지 않은 키토산 나노 입자를 포함하는 키토산 나노필름(CNP-Film)이 존재하는 경우의 세포 이동 효과보다 높을 수 있다.For another example, the cell migration effect in the presence of Nucleotides-CP-Film is more than the cell migration effect in the presence of a chitosan nanofilm (CNP-Film) comprising chitosan nanoparticles in which the one or more nucleotides are not encapsulated. It can be high.
4-5. 재생 효과4-5. Regeneration effect
본 명세서에 의해 제공되는 몇몇 실시예에 따르면, Nucleotides-CP-Film에 의해 조직 재생(tissue regeneration) 효과가 나타날 수 있다. 상기 조직은 식물 또는 동물 조직일 수 있다. 예를 들어, 상기 동물 조직은 뼈 조직, 결합 조직, 근육 조직, 신경 조직, 또는 상피 조직일 수 있다.According to some embodiments provided by the present specification, a tissue regeneration effect may be exhibited by Nucleotides-CP-Film. The tissue may be plant or animal tissue. For example, the animal tissue may be bone tissue, connective tissue, muscle tissue, nerve tissue, or epithelial tissue.
본 명세서에 의해 제공되는 몇몇 실시예에 따르면, Nucleotides-CP-Film 에 의해 상처 치유(wound healing) 효과가 나타날 수 있다.According to some embodiments provided by the present specification, a wound healing effect may be exhibited by Nucleotides-CP-Film.
상기 조직 재생(tissue regeneration) 효과 또는 상처 치유(wound healing) 효과는 전술한 세포 활성화 효과 또는 세포 이동 효과에 의해 나타날 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The tissue regeneration effect or wound healing effect may be exhibited by the aforementioned cell activation effect or cell migration effect, but is not limited thereto.
본 명세서에 의해 제공되는 몇몇 실시예에 따르면, Nucleotides-CP-Film에 의해 궤양 또는 염증 치료 효과가 나타날 수 있다.According to some embodiments provided by the present specification, an ulcer or inflammation treatment effect may be exhibited by Nucleotides-CP-Film.
상기 궤양은 소화성 궤양, 각막 궤양, 당뇨병성 궤양, 동맥경화성 궤양, 또는 구강점막 궤양일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The ulcer may be a peptic ulcer, a corneal ulcer, a diabetic ulcer, an arteriosclerotic ulcer, or an oral mucosa ulcer, but is not limited thereto.
2-4. 피부 상태 개선 효과2-4. Skin condition improvement effect
본 명세서에 의해 제공되는 몇몇 실시예에 따르면, Nucleotides-CP-Film에 의해 피부 상태 개선 효과가 나타날 수 있다.According to some embodiments provided by the present specification, an effect of improving skin conditions may be exhibited by Nucleotides-CP-Film.
상기 피부 상태 개선 효과는 전술한 세포 활성화 효과 또는 세포 이동 효과에 의해 나타날 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The skin condition improvement effect may be exhibited by the aforementioned cell activation effect or cell migration effect, but is not limited thereto.
예를 들어, Nucleotides-CP-Film 에 의해 상처 치유(wound healing) 효과가 나타날 수 있다.For example, the wound healing effect can be achieved by Nucleotides-CP-Film.
다른 예를 들어, Nucleotides-CP-Film 에 의해 조직 재생 효과가 나타날 수 있다.As another example, the tissue regeneration effect can be shown by Nucleotides-CP-Film.
또 다른 예를 들어, Nucleotides-CP-Film 에 의해 피부 미백 효과가 나타날 수 있다.As another example, the skin whitening effect may be exhibited by Nucleotides-CP-Film.
또 다른 예를 들어, Nucleotides-CP-Film 에 의해 피부 노화 억제 효과가 나타날 수 있다.As another example, the skin aging inhibitory effect may be exhibited by Nucleotides-CP-Film.
이하, 실험예를 통하여 본 명세서을 더욱 상세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present specification will be described in more detail through experimental examples.
이하에는, 하나 이상의 뉴클레오타이드인 PDRN이 캡슐화된 키토산 나노 입자 및 상기 PDRN이 캡슐화된 키토산 나노 입자가 포함된 키토산 나노필름을 제작하는 방법이 개시되었다.Hereinafter, a method of manufacturing a chitosan nanofilm including chitosan nanoparticles encapsulated with PDRN, which is one or more nucleotides, and chitosan nanoparticles encapsulated with PDRN, is disclosed.
또한, 상기 PDRN이 캡슐화된 키토산 나노 입자 및 상기 PDRN이 캡슐화된 키토산 나노 입자가 포함된 키토산 나노필름의 물리적 및 화학적 특징을 확인하는 방법 및 결과가 개시되었다.In addition, a method and a result for confirming the physical and chemical characteristics of the chitosan nanoparticles in which the PDRN is encapsulated and the chitosan nanoparticles in which the PDRN is encapsulated are disclosed are disclosed.
설명의 편의를 위해, i) PDRN이 캡슐화 된 키토산 나노 입자(이하, PDRN-CNP)를 포함하는 키토산 나노필름을 PDRN-CNP-Film(도 1의 (b-3) 참고)이라 하며, ii) 키토산 나노 입자가 포함되지 않은 키토산 필름을 Chitosan-Film (도 1의 (b-1) 참고) 이라 하고, iii) PDRN이 캡슐화 되지 않은 키토산 나노 입자가 포함된 키토산 나노필름을 CNP-Film(도 1의 (b-2) 참고)이라 한다. 상기 Chitosan-Film 및 CNP-Film은 PDRN-CNP-Film 과 비교할 대조군으로 사용되었다. 상기 Chitosan-Film은 용매로서 물을 가지는 키토산으로부터 제작되었다.For convenience of explanation, i) a chitosan nanofilm containing PDRN-encapsulated chitosan nanoparticles (hereinafter, PDRN-CNP) is referred to as PDRN-CNP-Film (see (b-3) in FIG. 1), ii) The chitosan film containing no chitosan nanoparticles is referred to as Chitosan-Film (see (b-1) in FIG. 1), and iii) the chitosan nanofilm containing chitosan nanoparticles not encapsulated with PDRN is referred to as CNP-Film (Fig. 1). Refer to (b-2) of). The Chitosan-Film and CNP-Film were used as controls to compare with PDRN-CNP-Film. The Chitosan-Film was prepared from chitosan having water as a solvent.
또한, 이하에서는 i) 건조 후 PDRN-CNP-Film이 형성될 수 있는 용액을 PDRN-CNP solution (도 1의 (a-3) 참고)이라 부르며, ii) 건조 후 CNP-Film이 형성될 수 있는 용액을 CNP-solution(도 1의 (a-2) 참고)이라 부른다. 건조 후, Chitosan-Film이 형성될 수 있는 용액은 Chitosan-solution(도 1의 (a-1) 참고)이라 부른다.In addition, in the following, i) a solution in which PDRN-CNP-Film can be formed after drying is referred to as PDRN-CNP solution (refer to (a-3) in Fig. 1), and ii) CNP-Film can be formed after drying. The solution is called CNP-solution (refer to (a-2) in FIG. 1). After drying, a solution in which Chitosan-Film can be formed is called Chitosan-solution (see (a-1) in FIG. 1).
[실험예 1] PDRN-CNP-Film 제작[Experimental Example 1] Production of PDRN-CNP-Film
1-1. PDRN이 캡슐화된 CNP 제작1-1. PDRN-encapsulated CNP production
이온성 겔화(ionic gelation)의 방법으로 1% 질량 퍼센트의 PDRN이 키토산 나노 입자(이하, CNP)에 캡슐화되었다.PDRN of 1% mass percent was encapsulated in chitosan nanoparticles (hereinafter, CNP) by the method of ionic gelation.
캡슐화에 사용된 PDRN은 Zerone Bio(Chonan, Korea)에 의해 생산된 것으로, 송어의 정자로부터 분리된 genomic DNA를 사용해 제조되었다.PDRN used for encapsulation was produced by Zerone Bio (Chonan, Korea), and was prepared using genomic DNA isolated from sperm of trout.
CNP를 만들기 위해 사용된 키토산의 원료로 수용성 키토산 하이드로 클로라이드 (KRAEBER & CO GMBH, Germany) 가 사용되었다.Water-soluble chitosan hydrochloride (KRAEBER & CO GMBH, Germany) was used as a raw material for chitosan used to make CNP.
수용성 키토산 하이드로 클로라이드는 이중 증류수(double distilled water)에 용해되었고, 90 % 탈아세틸화도(deacetyllation degree; DD) 및 100 mPas 점도를 갖는 4 mg / mL 의 수용성 키토산 하이드로 클로라이드 용액이 제조되었다. 1M NaOH의 첨가를 통해, 제조된 키토산 용액의 최종 pH가 4.6으로 조절되었다.Aqueous chitosan hydrochloride was dissolved in double distilled water, and a 4 mg/mL aqueous chitosan hydrochloride solution having a 90% deacetylation degree (DD) and a viscosity of 100 mPas was prepared. Through the addition of 1M NaOH, the final pH of the prepared chitosan solution was adjusted to 4.6.
PDRN (length between 50-2000 bp)이 0.3 mg/mL의 펜타소듐 트리포스페이트 (TPP)에 용해되어 PDRN 용액이 제조되었다.PDRN (length between 50-2000 bp) was dissolved in 0.3 mg/mL of pentasodium triphosphate (TPP) to prepare a PDRN solution.
수용성 키토산 하이드로 클로라이드 용액과 PDRN 용액은 각각 0.45μm 필터를 통해 여과되었다.The aqueous chitosan hydrochloride solution and PDRN solution were filtered through a 0.45 μm filter, respectively.
PDRN의 캡슐화 과정은 Fan et al., 2012에 기술 된 변형된 이온성 겔화(modified ionic gelation)의 방법으로 수행 되었다. The PDRN encapsulation process was performed by the method of modified ionic gelation described in Fan et al., 2012.
최종 농도 800μg/mL (0.3 mg / mL TPP 내에서)인 나트륨 염(PDRN-Na) 형태의 PDRN 용액이 수용성 키토산 하이드로 클로라이드 용액에 30 ℃ 에서 1:1의 부피 비로 첨가되었고, 계속적인 기계를 이용한 교반 하에서 40 ℃에서 5 분 동안 가열되었다.A PDRN solution in the form of sodium salt (PDRN-Na) with a final concentration of 800 μg/mL (in 0.3 mg/mL TPP) was added to the aqueous chitosan hydrochloride solution in a volume ratio of 1:1 at 30°C, using a continuous machine. It was heated at 40° C. for 5 minutes under stirring.
하기 표 1은 PDRN이 캡슐화된 키토산 나노 입자(PDRN-CNP)를 제작하기 위한 키토산, TPP, PDRN의 양을 개시한다. Table 1 below discloses the amounts of chitosan, TPP, and PDRN for producing PDRN-encapsulated chitosan nanoparticles (PDRN-CNP).
또한, 하기 표 1은 대조군으로서 PDRN이 캡슐화 되지 않은 키토산 나노 입자(이하, CNP) 를 제작하기 위한 키토산, TPP, PDRN의 양을 개시한다. 즉, 대조군인 CNP는 상기 PDRN이 캡슐화된 CNP의 제작 방법에서 PDRN을 넣는 과정을 제외하고 동일한 방법을 사용하여 제조되었다.In addition, Table 1 below discloses the amounts of chitosan, TPP, and PDRN for producing chitosan nanoparticles (hereinafter, CNP) in which PDRN is not encapsulated as a control. That is, the control CNP was prepared using the same method except for the process of putting PDRN in the method for producing the PDRN-encapsulated CNP.
(mL)(mL)
PDRN-CNP
PDRN-
1-2. PDRN-CNP-Film 제작1-2. PDRN-CNP-Film production
PDRN-CNP-Film은 용매 증발법(solvent evaporation method)으로 제조되었다.PDRN-CNP-Film was prepared by a solvent evaporation method.
이 단계에서는 i) 전 단계에서 제작된 PDRN이 캡슐화 된 키토산 나노 입자 및 ii) 키토산 하이드로클로라이드(chitosan hydrochloride)가 사용되었다.In this step, i) chitosan nanoparticles encapsulated with PDRN produced in the previous step and ii) chitosan hydrochloride were used.
우선, 20 mg/mL의 키토산 하이드로클로라이드 용액이 제조되었고, 1M의 NaOH를 사용하여 pH가 4.2로 조절되었다. 최종 생성물의 바람직한 가용성 수준(desired soluble level)을 수득 하기 위해, 상기 키토산 하이드로클로라이드 용액에 글리세롤 (1 % w/w)이 첨가되었다.First, a 20 mg/mL chitosan hydrochloride solution was prepared, and the pH was adjusted to 4.2 using 1M NaOH. To obtain the desired soluble level of the final product, glycerol (1% w/w) was added to the chitosan hydrochloride solution.
그 후, 전 단계에서 생성된 캡슐화된 PDRN(22mL)이 상기 키토산 하이드로클로라이드 용액에 첨가되었고, 20분 동안 교반되었다. 이를 통해 1% PDRN (w/w)이 포함된 PDRN-CNP solution(도 1의 (a-3) 참고) 이 생산되었다.Thereafter, the encapsulated PDRN (22 mL) produced in the previous step was added to the chitosan hydrochloride solution and stirred for 20 minutes. Through this, a PDRN-CNP solution containing 1% PDRN (w/w) (see (a-3) in FIG. 1) was produced.
상기 방법에 의해 생성된 PDRN-CNP solution 은 직경 9cm의 페트리 접시(petri dish)에 부어졌고, 40 ℃의 건조 오븐에서 10 시간 동안 건조되었고, PDRN-CNP-Film (도 1의 (b-3) 참고)이 얻어졌다. 일정한 수분 함량과 안정성 유지를 위해, 전술한 방법에 의해 생산된 PDRN-CNP-Film은 10℃의 진공 데시케이터(desiccator)에서 보관되었다.The PDRN-CNP solution produced by the above method was poured into a petri dish with a diameter of 9 cm, dried in a drying oven at 40° C. for 10 hours, and PDRN-CNP-Film ((b-3) in FIG. 1 Reference) was obtained. In order to maintain constant moisture content and stability, PDRN-CNP-Film produced by the above-described method was stored in a vacuum desiccator at 10°C.
대조군인 CNP-Film은 PDRN-CNP-Film 제작 방법과 동일한 방법을 이용하되, PDRN이 캡슐화 된 CNP 대신, PDRN이 캡슐화 되지 않은 CNP가 키토산 하이드로클로라이드 용액에 첨가되는 방법으로 제작되었다.The control CNP-Film was prepared in the same manner as the PDRN-CNP-Film production method, but instead of the PDRN-encapsulated CNP, the PDRN-encapsulated CNP was added to the chitosan hydrochloride solution.
또한, 대조군인 Chitosan-Film은 상기 PDRN-CNP-Film 의 제작 방법에서 캡슐화된 PDRN이 키토산 하이드로클로라이드 용액에 첨가되는 과정을 제외하고 동일한 방법을 사용하여 제조되었다.In addition, the control Chitosan-Film was prepared using the same method except for the process in which the encapsulated PDRN was added to the chitosan hydrochloride solution in the method for producing the PDRN-CNP-Film.
[실험예 2] PDRN-CNP 물리화학적 특성 분석[Experimental Example 2] PDRN-CNP physicochemical properties analysis
본 발명자들은 필름 제조에 사용 된 PDRN이 캡슐화된 키토산 나노 입자(이하, PDRN-CNP)의 물리 화학적 성질을 확인하였고, PDRN이 캡슐화 되지 않은 키토산 나노 입자 (이하, CNP)의 물리화학적 성질과 비교하였다.The present inventors confirmed the physicochemical properties of PDRN-encapsulated chitosan nanoparticles (hereinafter, PDRN-CNP) used for film production, and compared with the physicochemical properties of chitosan nanoparticles (hereinafter, CNP) in which PDRN was not encapsulated. .
2-1. CNP 입자 크기 측정2-1. CNP particle size measurement
나노 입자의 크기는 동적 광 산란 (DLS) 기술을 기반으로 하는 Zetasizer Nano-ZS (Malvern Instruments, UK)를 사용하여 측정되었다.The size of the nanoparticles was measured using a Zetasizer Nano-ZS (Malvern Instruments, UK) based on dynamic light scattering (DLS) technology.
그 결과, PDRN이 나노 입자에 캡슐화된 경우의 나노 입자는 PDRN이 캡슐화 되지 않은 나노 입자 보다 더 작은 크기 분포를 나타내는 것이 확인되었다(도 2 참고, (a): PDRN이 캡슐화 되지 않은 나노 입자의 크기 분포, (b): PDRN이 캡슐화 되지 않은 나노 입자 크기 분포).As a result, it was confirmed that the nanoparticles when the PDRN was encapsulated in the nanoparticles showed a smaller size distribution than the nanoparticles in which the PDRN was not encapsulated (see FIG. 2, (a): the size of the nanoparticles in which the PDRN was not encapsulated Distribution, (b): PDRN-encapsulated nanoparticle size distribution).
하기 표 2는 CNP 및 PDRN-CNP의 입자 크기를 수치로 나타낸다.Table 2 below shows the particle sizes of CNP and PDRN-CNP numerically.
2-2. Zeta potential 측정2-2. Zeta potential measurement
제타 전위 (Zeta potential)는 표면 전하이며, 부유액에서 입자들 사이에 전기적 반발을 통해 입자 안정성에 상당한 영향을 줄 수 있는 것으로 알려져 있다. 제타 전위 값이 30 mV보다 높은 경우, 안정된 솔루션임을 나타낸다.Zeta potential is a surface charge and is known to significantly affect particle stability through electrical repulsion between particles in a suspension. If the zeta potential value is higher than 30 mV, it indicates a stable solution.
CNP 및 PDRN-CNP 용액의 제타 전위를 측정하기 위해 동적 광 산란 (DLS) 기술을 기반으로 하는 Zetasizer Nano-ZS (Malvern Instruments, UK)가 사용되었다.Zetasizer Nano-ZS (Malvern Instruments, UK) based on dynamic light scattering (DLS) technology was used to measure the zeta potential of CNP and PDRN-CNP solutions.
그 결과, CNP 및 PDRN-CNP 용액 모두 +30 mV 이상의 제타 전위 값을 가지고 있고, CNP가 포함된 용액 및 PDRN-CNP가 포함된 용액 모두 매우 안정한 용액이라는 것이 확인되었다 (도 3 참고, (a): PDRN이 캡슐화 되지 않은 나노 입자의 제타 전위, (b): PDRN이 캡슐화 되지 않은 나노 입자의 제타 전위).As a result, it was confirmed that both the CNP and PDRN-CNP solutions had a zeta potential value of +30 mV or higher, and that both the CNP-containing solution and the PDRN-CNP-containing solution were very stable solutions (see FIG. 3, (a)). : Zeta potential of nanoparticles without PDRN encapsulation, (b): Zeta potential of nanoparticles without PDRN encapsulation).
하기 표 3은 CNP 및 PDRN-CNP의 제타 전위를 수치로 나타낸다.Table 3 below shows the zeta potential of CNP and PDRN-CNP numerically.
하기 표 3에 기재된 바와 같이, CNP의 현탁액 표면은 +42.07 mV 양전하를 가지고 있었고, PDRN-CNP의 현탁액 표면은 +36.07 mV 양전하를 가지고 있었다. 상기 양전하는 입자 주위의 키토산 분자에 존재하는 수소화된 아미노 그룹 (-NH3+)에 의해서 형성된 것으로 보인다.As shown in Table 3 below, the surface of the suspension of CNP had a positive charge of +42.07 mV, and the surface of the suspension of PDRN-CNP had a positive charge of +36.07 mV. The positive charge appears to be formed by hydrogenated amino groups (-NH3+) present in chitosan molecules around the particles.
구체적으로, PDRN-CNP의 제타 전위(+36.07 mV)는 CNP의 제타 전위(+ 42.07 mV) 보다 감소된 값을 보였으며, 이는 PDRN의 인산염에 의해 키토산 NH3+ 가 중화된 결과로 보인다. 즉, 상기 결과를 통해 PDRN이 성공적으로 키토산 나노 입자에 캡슐화 되었음이 확인되었다. Specifically, the zeta potential (+36.07 mV) of PDRN-CNP showed a lower value than that of CNP (+ 42.07 mV), which appears to be a result of neutralization of chitosan NH3+ by the phosphate of PDRN. That is, through the above results, it was confirmed that PDRN was successfully encapsulated in chitosan nanoparticles.
2-3. PDI 측정2-3. PDI measurement
크기 분포가 얼마나 퍼져있는지를 나타내는 PDI 값은 동적 광 산란 (DLS) 기술을 기반으로 하는 Zetasizer Nano-ZS (Malvern Instruments, UK)를 사용하여 측정되었다.The PDI value, indicating how wide the size distribution is, was measured using a Zetasizer Nano-ZS (Malvern Instruments, UK) based on dynamic light scattering (DLS) technology.
하기 표 4에 나타난 바와 같이, CNP의 PdI 값과 PDRN-CNP의 PdI 값은 큰 차이가 없었다.As shown in Table 4 below, there was no significant difference between the PdI value of CNP and the PdI value of PDRN-CNP.
2-4. 형태(morphology) 분석 2-4. Morphology analysis
CNP와 PDRN-CNP의 형태는 고성능 디지털 이미징 투과 전자 현미경 (Transmission Electron Microscopy, TEM) (JEOL 2100, Hitachi High-Technologies Corp., 일본)에 의해 확인되었다.The morphology of CNP and PDRN-CNP was confirmed by a high-performance digital imaging transmission electron microscopy (TEM) (JEOL 2100, Hitachi High-Technologies Corp., Japan).
CNP의 현탁액 또는 캡슐화 된 PDRN의 현탁액은 400 메쉬(400 mesh) 크기의 탄소 피복 구리 격자(carbon-coated copper grid)상에 펼쳐졌고, 우라닐 아세테이트(uranyl acetate)로 염색되었다.A suspension of CNP or a suspension of encapsulated PDRN was spread on a carbon-coated copper grid having a size of 400 mesh and stained with uranyl acetate.
각각의 염색된 샘플들은 실온에서 건조된 후, 100 kV의 가속 전압을 사용하여 TEM 분석되었다. Each stained sample was dried at room temperature and then subjected to TEM analysis using an acceleration voltage of 100 kV.
TEM 이미지 분석 결과, CNP와 PDRN-CNP는 모두 구형이고 부드럽고 거의 균질인(homogenous) 다분산(polydispersed)의 특성을 보였다 (도 4 참고, (a): CNP, (b): PDRN-CNP).As a result of TEM image analysis, both CNP and PDRN-CNP were spherical, soft and almost homogenous, polydispersed (see FIG. 4, (a): CNP, (b): PDRN-CNP).
2-5. 캡슐화된 PDRN의 양 분석2-5. Analysis of the amount of encapsulated PDRN
키토산 -DNA 복합체 캡슐화 용량은 키토산의 분자량, 및 키토산의 탈카복실화 정도(degree of decarboxylation) 의해 영향을 받을 수 있다.The chitosan-DNA complex encapsulation capacity can be influenced by the molecular weight of chitosan and the degree of decarboxylation of chitosan.
키토산의 탈카복실화 정도(degree of decarboxylation)에 의해 키토산의 전하 밀도 및 키토산의 양전하를 띠는 아미노기(NH3+)와 DNA의 인산염기(phosphate group)의 몰 비(N/P ratio)가 영향을 받을 수 있다.The charge density of chitosan and the molar ratio of the positively charged amino group (NH3+) and the phosphate group of DNA (N/P ratio) of chitosan will be affected by the degree of decarboxylation of chitosan. I can.
CNP에 캡슐화 된 PDRN의 양은 CNP 준비 혼합물(CNP preparation mixture)에 첨가 된 PDRN의 총량(표 1 참고)과 이온 성 젤라틴 화 (ionic gelation) 후에 현탁액에 잔류하는 PDRN의 양의 차이를 측정함으로써 계산되었다.The amount of PDRN encapsulated in CNP was calculated by measuring the difference between the total amount of PDRN added to the CNP preparation mixture (see Table 1) and the amount of PDRN remaining in the suspension after ionic gelation. .
CNP의 PDRN 캡슐화 효율은 94.75 ± 2.56 %였다.The PDRN encapsulation efficiency of CNP was 94.75±2.56%.
PDRN이 캡슐화 된 CNP는 비 캡슐화 된 PDRN을 대조군으로하여 아가로오스 겔 (2 %) 전기 영동으로 분석 되었다.PDRN-encapsulated CNPs were analyzed by agarose gel (2%) electrophoresis with non-encapsulated PDRN as a control.
CNP에 캡슐화 된 PDRN은 움직이지 않고 로딩 웰(loading well)에 남아있는 반면, 캡슐화 되지 않은 PDRN은 로딩 웰(loading well)로부터 이동된 것이 확인되었다 (도 5 참고, 1: DNA 마커, 2: PDRN 2 μg, 3: 캡슐화된 PDRN 2 μg). It was confirmed that the PDRN encapsulated in CNP does not move and remains in the loading well, while the non-encapsulated PDRN has moved from the loading well (see Fig. 5, 1: DNA marker, 2: PDRN). 2 μg, 3: 2 μg of encapsulated PDRN).
[실험예 3] PDRN-CNP-Film 에서 PDRN의 보호 효과 확인[Experimental Example 3] Confirmation of the protective effect of PDRN in PDRN-CNP-Film
엔도뉴클레아제(endonuclease)로부터 키토산에 캡슐화된 PDRN의 안정성이 아가로스 (2%) 겔 전기 영동에 의해 확인되었다.The stability of PDRN encapsulated in chitosan from endonuclease was confirmed by agarose (2%) gel electrophoresis.
캡슐화 되지 않은 PDRN의 현탁액 또는 캡슐화 된 PDRN의 현탁액은 최종 농도 8 μg / mL의 7.5 유닛의 DNAse I (TaKaRa, Japan)로 37 ℃에서 15 분 동안 처리되었다. A suspension of unencapsulated PDRN or a suspension of encapsulated PDRN was treated with 7.5 units of DNAse I (TaKaRa, Japan) at a final concentration of 8 μg/mL at 37° C. for 15 minutes.
90 ℃에서 1 분간 반응이 열로 불 활성화 된 후, 캡슐화된 PDRN에 65 ℃에서 30 분 동안 키토산 분해 효소(80μg/mL)가 처리되었다. PDRN의 무결성은 아가로스(2 %) 겔 전기 영동에 의해 분석되었다.After the reaction was inactivated by heat at 90° C. for 1 minute, the encapsulated PDRN was treated with chitosan degrading enzyme (80 μg/mL) at 65° C. for 30 minutes. The integrity of PDRN was analyzed by agarose (2%) gel electrophoresis.
DNAse I의 처리에 의해 캡슐화되지 않은 PDRN은 사라진 것이 확인되었으며, 대조적으로 캡슐화된 PDRN은 DNAse I가 처리되더라도 사라지지 않은 것이 확인 되었다. 또한, 키토산 분해 효소(Chitosanase)에 의한 분해에 의해 캡슐화된 PDRN으로부터 PDRN이 방출되는 것이 확인되었다(도 6 참고, 1: DNA 마커, 2: 캡슐화 되지 않은 PDRN, 3: 캡슐화된 PDRN, 4: 캡슐화 되지 않은 PDRN+ DNAse I, 5: 캡슐화된 PDRN + Chitosanase, 6: 캡슐화된 PDRN+ DNAse I, 7: 캡슐화된 PDRN+ DNAse I+ Chitosanase).It was confirmed that unencapsulated PDRN disappeared by the treatment of DNAse I, and in contrast, it was confirmed that the encapsulated PDRN did not disappear even when DNAse I was treated. In addition, it was confirmed that PDRN was released from the encapsulated PDRN by degradation by chitosanase (see FIG. 6, 1: DNA marker, 2: non-encapsulated PDRN, 3: encapsulated PDRN, 4: encapsulated) Unencapsulated PDRN + DNAse I, 5: encapsulated PDRN + Chitosanase, 6: encapsulated PDRN + DNAse I, 7: encapsulated PDRN + DNAse I + Chitosanase).
상기 결과를 통해, 상기 PDRN이 키토산에 의해 캡슐화 되어 효소 또는 외부 환경으로부터 보호될 수 있다는 것이 확인되었다. 생리 조건에서는 상기 실험에서 사용된 분해 효소의 농도보다 현저하게 낮은 농도의 분해 효소가 존재하기 때문에, 생리 조건에서는 PDRN이 효소로부터 보다 더 잘 보호될 것으로 예상될 수 있다.Through the above results, it was confirmed that the PDRN can be encapsulated by chitosan and protected from enzymes or the external environment. In physiological conditions, since there is a significantly lower concentration of degrading enzyme than the concentration of the degrading enzyme used in the experiment, it can be expected that PDRN will be better protected from the enzyme under physiological conditions.
[실험예 4] PDRN-CNP-Film 물리-화학적 성질 분석[Experimental Example 4] PDRN-CNP-Film Physico-chemical property analysis
4-1. Thickness 측정4-1. Thickness measurement
PDRN-CNP-Film의 두께는 필름 당 5 개의 다른 위치에서 디지털 마이크로 미터(Mitutoyo Corp., Japan)를 사용하여 측정되었다. PDRN-CNP-Film 두께의 평균값은 하기 표 5와 같다.The thickness of PDRN-CNP-Film was measured using a digital micrometer (Mitutoyo Corp., Japan) at 5 different locations per film. The average value of the PDRN-CNP-Film thickness is shown in Table 5 below.
대조군인 Chitosan-Film과 비교할 때, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film 의 두께는 보다 두꺼운 것이 확인되었다. 이러한 결과는, CNP- solution 및 PDRN-CNP solution 의 고형분의 함량이 높다는 것으로부터 기인한다.Compared with the control Chitosan-Film, the thickness of CNP-Film and PDRN-CNP-Film was confirmed to be thicker. This result is due to the high solid content of the CNP-solution and PDRN-CNP solution.
4-2. Tensile strength 및 Elongation strength 측정4-2. Tensile strength and elongation strength measurement
필름의 인장 강도 (tensile strength; TS) 및 파단 신도(elongation at break; EB)가 ASTM (1997)에 의해 측정 되었다.The tensile strength (TS) and elongation at break (EB) of the film were measured by ASTM (1997).
필름의 인장 강도 (tensile strength; TS) 및 파단 신도(elongation at break; EB) 의 측정을 위해, 각 필름이 100 mm x 15mm의 직사각형 크기로 절단되었으며, 50 %의 상대 습도(RH)조건의 0.01 kN 로드 셀이 장착 된 인장 시험기(a tensile testing machine)(Instron Corp, MA)에서 시험 되었다.For the measurement of the tensile strength (TS) and elongation at break (EB) of the film, each film was cut into a rectangular size of 100 mm x 15 mm, and 0.01 at 50% relative humidity (RH) condition. It was tested on a tensile testing machine (Instron Corp, MA) equipped with a kN load cell.
PDRN-CN-Film의 견본(specimens)은 파단(breakage) 될 때까지 50mm의 초기 간격에서 10mm/분-1 의 속도로 늘려졌다.Specimens of PDRN-CN-Film were stretched at a rate of 10 mm/min-1 at an initial interval of 50 mm until breakage.
기계적 분석을 진행하는 동안 상대습도는 60 %를 넘지 않았고, 온도는 27 ℃를 넘지 않았다.During the mechanical analysis, the relative humidity did not exceed 60% and the temperature did not exceed 27°C.
TS는 최대 인장 응력(maximum tensile stress)을 Film 견본의 단면적으로 나누어 계산되었다. EB는 파단(breakage) 시 견본(specimens)의 길이를 초기 길이 (50mm)로 나누고 100을 곱하여 계산되었다.TS was calculated by dividing the maximum tensile stress by the cross-sectional area of the film specimen. EB was calculated by dividing the length of the specimens at breakage by the initial length (50 mm) and multiplying by 100.
Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film의 TS 및 EB는 표6에 나타난 바와 같다.TS and EB of Chitosan-Film, CNP-Film and PDRN-CNP-Film are as shown in Table 6.
결과는 평균 ± 표준 편차 (n=3)로 표현되었으며, 기계적 분석을 통한 측정은 3번 수행되었다.Results were expressed as mean ± standard deviation (n=3), and measurements through mechanical analysis were performed 3 times.
상기 결과에 의해, 필름 상에 CNP또는 PDRN-CNP의 융합에 의해, 필름의 저항성이 변형될 수 있다는 것이 예상된다. 높은 EB 값은 중합체 사슬 간의 응집력으로 인해 우수한 유연성, 신장성 및 인성을 나타내는 것으로 알려져 있다.From the above results, it is expected that the resistance of the film may be modified by fusion of CNP or PDRN-CNP on the film. High EB values are known to exhibit good flexibility, extensibility and toughness due to cohesion between polymer chains.
4-3. 표면 형태 (Surface morphology) 분석4-3. Surface morphology analysis
Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film의 표면 형태(surface morphology)가 FE-SEM(Field Emission Scanning Electron Microscopy)(SEISS, Germany)에 의해 관찰되었다.The surface morphology of Chitosan-Film, CNP-Film and PDRN-CNP-Film was observed by Field Emission Scanning Electron Microscopy (FE-SEM) (SEISS, Germany).
각각의 Film(0.5 cm x 0.5 cm)은 양면 카본 테이프에 올려 졌고, 스퍼터 코터 (sputter coater)를 사용하여 2분 동안 백금으로 코팅되었다. 그 다음, 각각의 Film은 1 ~ 5 kV의 가속 전압에서 FE-SEM으로 관찰되었다.Each film (0.5 cm x 0.5 cm) was put on double-sided carbon tape and coated with platinum for 2 minutes using a sputter coater. Then, each film was observed with FE-SEM at an acceleration voltage of 1 to 5 kV.
FE-SEM에 의한 필름 표면 형태 관찰 결과는 도7 내지 도 9와 같다(도 7: Chitosan-Film , 도 8: CNP-Film , 도 9: PDRN-CNP-Film )The results of observation of the film surface morphology by FE-SEM are shown in Figs. 7 to 9 (Fig. 7: Chitosan-Film, Fig. 8: CNP-Film, Fig. 9: PDRN-CNP-Film)
Chitosan-Film은 불규칙한 매끄러운 표면(irregular smooth surface)을 나타낸다 (도 7 참고).Chitosan-Film shows an irregular smooth surface (see Fig. 7).
한편, CNP-Film은 불규칙한 형상의 CNP (irregular shape CNPs)가 필름 표면에 균등하게 분포(evenly distributed )한다 (도 8 참고).On the other hand, in CNP-Film, irregular shape CNPs (irregular shape CNPs) are evenly distributed on the film surface (see FIG. 8).
반면에, PDRN-CN-Film은 평균 15 nm 크기의 캡슐화 된 PDRN이 원형으로(circular shape) 필름 표면에 균일하게 분포(homogeneously distributed)되어있다 (도 9 참고).On the other hand, in PDRN-CN-Film, encapsulated PDRN having an average size of 15 nm is homogeneously distributed on the film surface in a circular shape (see FIG. 9).
또한, AFM (Atomic Force Microscopy)(Bruker Dimension Icon, Bruker Co., Germany)을 사용하여 PDRN-CNP-Film의 거칠기 값(roughness values)과 횡단면 프로필(cross-section profiles)을 통해 표면 형태가 더 분석되었다.In addition, the surface shape is further analyzed through the roughness values and cross-section profiles of PDRN-CNP-Film using AFM (Atomic Force Microscopy) (Bruker Dimension Icon, Bruker Co., Germany). Became.
53±1 의 상대습도(RH)에서 72시간 동안 평형을 이룬 샘플은 AFM 이미징(AMF imaging)에 맞는 얇은 조각으로 잘렸고, 얇은 조각으로 잘린 각각의 샘플에 양면 테이프가 붙여졌다.Samples equilibrated for 72 hours at 53±1 relative humidity (RH) were cut into thin slices suitable for AFM imaging, and double-sided tape was applied to each sample cut into thin slices.
상기 샘플들은 25 N/m의 스프링 상수를 가진 예리한 캔틸레버(cantilever)를 사용하여 비접촉 모드(noncontact mode)에서 스캔되었고, 50μm x 50μm의 이미지가 얻어졌다. 각 샘플에 대한 결과 데이터는 3D 이미지로 변환되었다 (Fabra, Talens, & Chiralt, 2009). 모든 샘플은 3 배로 만들어졌고, Bruker Nanoscope 분석 소프트웨어(버전 1.40)를 사용하여 거칠기 값(roughness values)과 횡단면 프로파일(cross-section profiles)이 계산되었다.The samples were scanned in non-contact mode using a sharp cantilever with a spring constant of 25 N/m, and images of 50 μm x 50 μm were obtained. The resulting data for each sample was converted into 3D images (Fabra, Talens, & Chiralt, 2009). All samples were made in triplicate, and roughness values and cross-section profiles were calculated using Bruker Nanoscope analysis software (version 1.40).
도 10 은 AFM에 의해 분석 된 Chitosan-Film 의 표면 구조를 나타낸다.10 shows the surface structure of Chitosan-Film analyzed by AFM.
도 11 은 AFM에 의해 분석 된 CNP-Film 의 표면 구조를 나타낸다.11 shows the surface structure of CNP-Film analyzed by AFM.
도 12 는 AFM에 의해 분석 된 PDRN-CNP-Film 의 표면 구조를 나타낸다.12 shows the surface structure of PDRN-CNP-Film analyzed by AFM.
CNP와 PDRN-CNP가 융합된 필름의 Ra값 및 Rq 값은 하기 표 7에 개시된 바와 같다.The Ra and Rq values of the film in which CNP and PDRN-CNP are fused are as disclosed in Table 7 below.
Ra는 평균 평면으로부터 측정 된 표면 높이 편차(Z)의 절대 값의 산술 평균 값이며, Rq는 평균 이미지 데이터로부터 취해진 높이 편차의 평균 제곱근 평균 값이다.Ra is the arithmetic mean value of the absolute value of the surface height deviation (Z) measured from the average plane, and Rq is the mean square mean value of the height deviation taken from the average image data.
CNP 및 PDRN-CNP의 첨가에 의한 필름의 거칠기의 증가는 표면 CA(°)에 영향을 미칠 수 있다.The increase in the roughness of the film by the addition of CNP and PDRN-CNP can affect the surface CA (°).
4-4. Thermal property analysis4-4. Thermal property analysis
열량 분석(Calorimetric analysis)은 동시 열 중량 분석기(a simultaneous thermal gravimetric analyzer) (Seiko Exstar 6200, Japan)를 사용하여 수행되었다. Calorimetric analysis was performed using a simultaneous thermal gravimetric analyzer (Seiko Exstar 6200, Japan).
Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film은 각각 5.10, 5.00 및 6.32mg의 샘플 중량이 측정되었다. For Chitosan-Film, CNP-Film and PDRN-CNP-Film, sample weights of 5.10, 5.00 and 6.32 mg were measured, respectively.
각 필름은 30 ℃에서 800 ℃까지 10 ℃/분의 가열 속도로 가열되었다. 150 mL/분의 질소 흐름 하에서, Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film의 열 중량(thermo gravimetric) 측정 (TG) 및 유도 열 중량(derivate thermo gravimetric) 측정 (DTG) 분석이 수행되었다.Each film was heated from 30° C. to 800° C. at a heating rate of 10° C./min. Under a nitrogen flow of 150 mL/min, thermo gravimetric (TG) and derivate thermo gravimetric (DTG) analysis of Chitosan-Film, CNP-Film and PDRN-CNP-Film were performed. .
도 13은 Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film 각각의 TG 및 DTG 곡선을 나타낸다. 13 shows TG and DTG curves of Chitosan-Film, CNP-Film and PDRN-CNP-Film, respectively.
TG 곡선(도 13의 (a) 참고) 에 따르면, Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film 모두 30 내지 100 ℃ 구간에서 첫 번째 작은 중량 손실(weight loss)이 나타났으며, 이는 수분 증발에 의한 것 일 수 있다. 또한, 150 내지 250℃ 구간에서 두 번째 중량 손실(weight loss)이 나타났으며, 이는 키토산의 열분해에 의한 것 일 수 있다. 나아가, 500 내지 700℃ 구간에서 세 번째 중량 손실(weight loss)이 나타났으며, 이는 부분적으로 분해 된 키토산과 탄화의 산화로 인해 발생하는 것일 수 있다. 각각의 중량 손실(weight loss) 단계에서 각 필름의 중량 손실률은 거의 동일했다.According to the TG curve (see (a) of FIG. 13), the first small weight loss appeared in the range of 30 to 100 °C for both Chitosan-Film, CNP-Film, and PDRN-CNP-Film, which It may be due to evaporation. In addition, a second weight loss appeared in the 150 to 250°C section, which may be due to pyrolysis of chitosan. Furthermore, a third weight loss appeared in the 500 to 700°C section, which may be caused by oxidation of partially decomposed chitosan and carbonization. At each weight loss step, the weight loss rate of each film was almost the same.
DTG 곡선(도 13의 (b) 참고) 에 따르면, Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film의 첫 번째 분해 온도(decomposition temperatures)는 약 218 ℃로 서로 비슷하다. Chitosan-Film 과 CNP-Film의 두 번째 분해 온도(decomposition temperatures)는 각각 571℃ 및 587.6℃로 유사하나, PDRN-CNP-Film의 두 번째 분해 온도(decomposition temperatures)는 633.6 ℃ 로 차이가 존재한다.According to the DTG curve (see Fig. 13(b)), the first decomposition temperatures of Chitosan-Film, CNP-Film and PDRN-CNP-Film are about 218°C, which are similar to each other. The second decomposition temperatures of Chitosan-Film and CNP-Film are similar at 571°C and 587.6°C, respectively, but the second decomposition temperatures of PDRN-CNP-Film differ by 633.6°C.
[실험예 5] PDRN-CNP-Film 으로부터 PDRN의 컨트롤된 방출 동역학 (Controlled release kinetics of PDRN in PDRN-CN-Film)[Experimental Example 5] Controlled release kinetics of PDRN in PDRN-CN-Film from PDRN-CNP-Film
PDRN-CNP-Film으로부터의 PDRN의 컨트롤된 방출을 확인하기 위해, 약물 방출 분석(drug release assay)이 수행되었다.To confirm the controlled release of PDRN from PDRN-CNP-Film, a drug release assay was performed.
PDRN-CNP 필름 (160 mg)은 15 mL의 pH 7.2인 인산 완충액 (phosphate buffer) 에 담가졌다. 그 후, 25 ℃에서 진탕기(shaker) (New Brunswick Scientific Co. Inc., USA) 를 사용하여 60 rpm으로 PDRN-CNP 필름은 인산 완충액과 섞여졌다. The PDRN-CNP film (160 mg) was immersed in 15 mL of phosphate buffer, pH 7.2. Then, the PDRN-CNP film was mixed with a phosphate buffer at 60 rpm using a shaker (New Brunswick Scientific Co. Inc., USA) at 25°C.
PBS 용액을 포함하는 PDRN-CNP-Film의 시료 100μL가 시간 간격(time intervals) (0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 및 24 시간) 마다 얻어졌다. 100 μL of samples of PDRN-CNP-Film containing PBS solution were obtained at every time intervals (0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 and 24 hours).
얻어진 각각의 시료가 16,000rpm에서 10 분간 원심 분리되었다. 원심분리 후, 상등액이 수집되었고, 상기 상등액으로부터 PDRN 농도가 측정되었다.Each of the obtained samples was centrifuged for 10 minutes at 16,000 rpm. After centrifugation, the supernatant was collected, and the PDRN concentration was measured from the supernatant.
PDRN의 농도는 나노 미세 부피 분광 광도계(Nano micro-volume spectrophotometer)(Genway, UK)를 이용해 측정되었다.The concentration of PDRN was measured using a nano micro-volume spectrophotometer (Genway, UK).
PDRN 방출 동역학 프로파일(profile)은 상이한 시간 간격에서 PDRN-CNP-Film으로부터 방출 된 PDRN에 기초하여 결정되었다. 모든 측정 값은 3 배로 수집되었고, 동일한 양의 CNP -Film이 blank 시료로 사용되었다.PDRN release kinetics profiles were determined based on PDRN released from PDRN-CNP-Film at different time intervals. All measured values were collected in triplicate, and the same amount of CNP-Film was used as a blank sample.
PDRN-CNP-Film으로부터의 PDRN의 방출은 배양 초기 9 시간 동안 많은 양이 방출되었고, 빠르게 방출되었다. 배양 후, 15 시간이 경과할 때까지 PDRN-CNP-Film에 포함된 PDRN의 90% 이상이 지속적으로 방출되었다 (도 14 참고).The release of PDRN from PDRN-CNP-Film was released in large amounts during the initial 9 hours of incubation, and released rapidly. After incubation, more than 90% of PDRN contained in PDRN-CNP-Film was continuously released until 15 hours elapsed (see FIG. 14).
[실험예 6] PDRN-CNP-Film 에 의한 세포 증식 및 세포 이동 효과[Experimental Example 6] Effect of cell proliferation and cell migration by PDRN-CNP-Film
세포 증식(cell proliferation) 및 세포 이동(cell migration) 효과를 확인하기 위해, 인간 유래의 피부 섬유아세포 (Dermal fibroblast, HDF) 가 American Type Culture Collection (Normal, Human, Adult (ATCC® PCS-201-012??)로부터 구매되었다. 상기 인간 유래의 피부 섬유아세포 (Dermal fibroblast, HDF)는 antibiotic-antimycotic (Gibco, USA), 및 2 % fetal bovine serum (FBS, Hyclone, Fisher Scientific, USA)가 보충된 Dulbecco's modified Eagles medium (DMEM) (Hyclone, GE Healthcare Life Sciences, USA)에서 배양되었다.In order to confirm the effect of cell proliferation and cell migration, human-derived skin fibroblasts (HDF) were introduced into the American Type Culture Collection (Normal, Human, Adult (ATCC® PCS-201-012). The human-derived skin fibroblasts (Dermal fibroblast, HDF) were Dulbecco's supplemented with antibiotic-antimycotic (Gibco, USA) and 2% fetal bovine serum (FBS, Hyclone, Fisher Scientific, USA). It was cultured in modified Eagles medium (DMEM) (Hyclone, GE Healthcare Life Sciences, USA).
상기 인간 유래의 피부 섬유아세포는 5% CO2의 존재 하에 37 ℃에서 배양되었다.The human-derived skin fibroblasts were cultured at 37°C in the presence of 5% CO2.
6-1. PDRN-CNP-Film 에 의한 세포 증식 효과6-1. Cell proliferation effect by PDRN-CNP-Film
HDF(1X105 세포)는 24 시간 동안 2 mL 배지가 있는 6개의 웰 플레이트(well plates)에서 성장되었다. 그 후, 상기 배지는 각각의 웰 플레이트로부터 제거되었다.HDFs (1X105 cells) were grown in 6 well plates with 2 mL medium for 24 hours. Thereafter, the medium was removed from each well plate.
상기 HDF 세포는 10 mg의 Chitosan-Film, 10 mg의 CNP-Film 및10 mg의 PDRN-CNP-Film (키토산, CNP 및 PDRN-CNP)으로 처리 되었다. 음성 대조군으로 2% FBS 배지가 사용되었다.The HDF cells were treated with 10 mg of Chitosan-Film, 10 mg of CNP-Film and 10 mg of PDRN-CNP-Film (chitosan, CNP and PDRN-CNP). 2% FBS medium was used as a negative control.
24 시간 후, MTT(3-(4,5-디메틸-2-티아졸릴)-2,5-디페닐-2H-테트라졸륨 브로마이드((3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide), Sigma Aldrich, USA) 분석법을 사용하여 HDF 세포의 세포 성장 정도가 평가되었다.After 24 hours, MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide ((3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2 ,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide), Sigma Aldrich, USA) assay was used to evaluate the degree of cell growth of HDF cells.
각 웰 플레이트에 존재하는 세포는 30분 동안 20μL의 MTT 용액과 반응하였고 보라색 포르마잔(formazan) 생성물이 형성되었다. 이어서, 미토콘드리아 탈수소 효소(mitochondrial dehydrogenase)의 활성에 의해 생성된 포르마잔(formazan)은 디메틸 설폭사이드(DMSO, Sigma Aldrich, USA)로 재현탁(re-suspended)되었다.The cells present in each well plate reacted with 20 μL of MTT solution for 30 minutes, and a purple formazan product was formed. Subsequently, formazan produced by the activity of mitochondrial dehydrogenase was re-suspended with dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma Aldrich, USA).
세포에 각 필름이 처리되고 48 시간이 지난 후, 세포 카운터(cell counter)를 이용해 세포 밀도(cell proliferation)가 측정되었다. 또한, 마이크로 플레이트 리더(microplate reader) (Bio-Rad, USA)를 이용해 570 nm에서 측정된 광학 밀도(optical density; OD)에 의해 세포 생존력(cell viability)이 평가되었다 (도 15의 (b) 참고).After 48 hours of treatment with each film on the cells, cell proliferation was measured using a cell counter. In addition, cell viability was evaluated by optical density (OD) measured at 570 nm using a microplate reader (Bio-Rad, USA) (see FIG. 15(b)). ).
상기 결과를 통해 PDRN-CN-Film이 48 시간 동안 처리되었을 때, 인간 유래의 피부 섬유아세포의 세포 증식 활성(cell proliferation activity)이 더 커지는 것이 확인되었다 (도 15 참고).Through the above results, it was confirmed that when PDRN-CN-Film was treated for 48 hours, the cell proliferation activity of human-derived skin fibroblasts increased (see FIG. 15).
6-2. PDRN-CNP-Film 에 의한 세포 이동 효과6-2. Cell migration effect by PDRN-CNP-Film
시험관 내(in vitro)에서 세포 이동 분석(cell migration assay)을 위해, Chitosan-Film, CNP-Film 및 PDRN-CNP-Film이 인간 유래의 피부 섬유아세포에 처리되었다. For cell migration assay in vitro, Chitosan-Film, CNP-Film and PDRN-CNP-Film were treated on human-derived skin fibroblasts.
36 시간이 경과된 후, 세포 이동 분석법(in vitro cell migration assay)로 세포 이동(cell migration) 효과가 확인되었다.After 36 hours had elapsed, the effect of cell migration was confirmed by an in vitro cell migration assay.
그 결과, PDRN-CNP-Film이 처리된 세포의 경우, CNP-Film이 처리된 세포의 경우 보다 빠르게 세포 이동이 활성화 된다는 것이 확인되었다 (도 16 참고, (a): CNP-Film, (b): Chitosan-Film, (c): PDRN-CNP-Film).As a result, it was confirmed that in the case of PDRN-CNP-Film-treated cells, cell migration was activated faster than in the case of CNP-Film-treated cells (see FIG. 16, (a): CNP-Film, (b)) : Chitosan-Film, (c): PDRN-CNP-Film).
이들 실험예는 오로지 본 명세서에 의해 개시되는 내용을 예시하기 위한 것으로서, 본 명세서에 의해 개시되는 내용의 범위가 이들 실험예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.These experimental examples are for illustrative purposes only, and those of ordinary skill in the art are not construed that the scope of the content disclosed by the present specification is limited by these experimental examples. It will be obvious to you.
Claims (19)
키토산으로 이루어진 막; 을 포함하는 키토산 나노필름으로서,
상기 막의 표면에 상기 PDRN이 캡슐화된 키토산 나노입자가 균등하게 분포되어 있고,
상기 키토산 나노필름의 두께는 50μm 내지 60μm 인,
키토산 나노필름.
Chitosan nanoparticles encapsulated with PDRN (polydeoxyribonucleotide); And
A membrane made of chitosan; As a chitosan nanofilm comprising a,
Chitosan nanoparticles encapsulated with PDRN are evenly distributed on the surface of the membrane,
The thickness of the chitosan nanofilm is 50 μm to 60 μm,
Chitosan Nanofilm.
상기 키토산 나노 입자의 키토산 및 상기 막의 키토산 중 하나 이상은 탈아세틸화도가 85% 내지 95%인 것을 특징으로 하는 키토산 나노필름.
The method of claim 1,
Chitosan nanofilm, characterized in that at least one of the chitosan of the chitosan nanoparticles and the chitosan of the membrane has a degree of deacetylation of 85% to 95%.
상기 키토산 나노 입자의 키토산 및 상기 막의 키토산 중 하나 이상은 키토산 하이드로클로라이드인 키토산 나노필름.
The method of claim 1,
At least one of chitosan of the chitosan nanoparticles and chitosan of the membrane is chitosan hydrochloride.
상기 PDRN은 어류 정액 또는 정소 유래인 것인 키토산 나노필름.
The method of claim 1,
The PDRN is a chitosan nanofilm that is derived from fish semen or testis.
상기 어류는 연어과의 어류인 것을 특징으로 하는 키토산 나노필름.
The method of claim 4,
The fish is a chitosan nanofilm, characterized in that the fish of the salmon family.
상기 PDRN의 크기는 50bp 내지 2000bp 인 것을 특징으로 하는 키토산 나노필름.
The method of claim 1,
Chitosan nanofilm, characterized in that the size of the PDRN is 50bp to 2000bp.
상기 키토산 나노 입자의 직경은 250nm 내지 350nm 인 것을 특징으로 하는 키토산 나노필름.
The method of claim 1,
Chitosan nanofilm, characterized in that the diameter of the chitosan nanoparticles is 250nm to 350nm.
상기 PDRN은 상기 키토산 나노 입자에 대하여 0.5 내지 5 % 질량 퍼센트(w/w)인 키토산 나노필름.
The method of claim 1,
The PDRN is a chitosan nanofilm of 0.5 to 5% mass percent (w/w) with respect to the chitosan nanoparticles.
상기 PDRN은 상기 키토산 나노 입자에 대하여 0.5 내지 2 % 질량 퍼센트(w/w)인 키토산 나노필름.
The method of claim 8,
The PDRN is a chitosan nanofilm of 0.5 to 2% mass percent (w/w) with respect to the chitosan nanoparticles.
상기 막은 비공극성 또는 균일한 다공성인 것을 특징으로 하는 키토산 나노필름.
The method of claim 1,
Chitosan nanofilm, characterized in that the membrane is non-porous or uniformly porous.
상기 키토산 나노필름은 수용성인 것을 특징으로 하는 키토산 나노필름.
The method of claim 1,
The chitosan nanofilm is a chitosan nanofilm, characterized in that the water-soluble.
상기 키토산 나노필름은 PDRN 방출능을 가지며,
이 때, 상기 키토산 나노필름에 포함된 상기 PDRN 전체 질량의 90% 이상을 24시간 이내에 방출하는 것을 특징으로 하는 키토산 나노필름.
The method of claim 1,
The chitosan nanofilm has PDRN release ability,
At this time, chitosan nanofilm, characterized in that to release more than 90% of the total mass of the PDRN contained in the chitosan nanofilm within 24 hours.
상기 키토산 나노필름에 세포 배양 뒤 약 48시간 이후에 세포의 증식이 약 20배 증가되는 것을 특징으로 하는 키토산 나노필름.
The method of claim 1,
Chitosan nanofilm, characterized in that the proliferation of cells is increased by about 20 times after about 48 hours after cell culture on the chitosan nanofilm.
ii) 상기 PDRN이 캡슐화 된 키토산 나노 입자가 포함된 키토산 나노 입자 용액을 제조하는 제2 단계 - 이 때, 상기 제2 단계는 상기 제1 단계에서 제조된 상기 PDRN이 캡슐화 된 키토산 나노 입자를 제2 키토산 용액에 첨가하고 교반하는 것을 포함 함- ; 및
iii) 상기 PDRN이 캡슐화 된 키토산 나노 입자가 포함된 키토산 나노 입자 용액을 디쉬 유사틀에 부어서 건조시키는 제3단계;
를 포함하는 키토산 나노필름 제조 방법.
i) The first step of preparing chitosan nanoparticles encapsulated with PDRN comprising stirring the PDRN solution and the first chitosan solution in a volume ratio of 1:1-At this time, the PDRN solution contains PDRN dissolved in pentasodium triphosphate. And the first chitosan solution is that chitosan is dissolved in water;
ii) The second step of preparing a chitosan nanoparticle solution containing chitosan nanoparticles encapsulated with the PDRN-In this case, the second step is a second step of preparing chitosan nanoparticles encapsulated with the PDRN prepared in the first step. Including adding to the chitosan solution and stirring -; And
iii) a third step of pouring the chitosan nanoparticle solution containing the chitosan nanoparticles encapsulated with the PDRN into a dish-like mold and drying it;
Chitosan nanofilm manufacturing method comprising a.
상기 PDRN 용액은 PDRN-Na 염의 형태인 키토산 나노필름 제조 방법.
The method of claim 14,
The PDRN solution is a method of producing a chitosan nanofilm in the form of a PDRN-Na salt.
상기 제1 키토산 용액 또는 상기 제2 키토산 용액은 키토산 하이드로 클로라이드 용액인 키토산 나노필름 제조 방법.
The method of claim 14,
The first chitosan solution or the second chitosan solution is chitosan hydrochloride solution chitosan nanofilm manufacturing method.
상기 제2 키토산 용액은 글리세롤을 더 포함하는 키토산 나노필름 제조방법.
The method of claim 14,
The second chitosan solution is a chitosan nanofilm manufacturing method further comprising glycerol.
상기 제3 단계는 30℃ 내지 70℃ 에서 이루어지는 것을 특징으로 하는 키토산 나노필름 제조방법.
The method of claim 14,
The third step is a chitosan nanofilm manufacturing method, characterized in that made at 30 ℃ to 70 ℃.
상기 제3 단계는 8시간 내지 12 시간 동안 이루어지는 것을 특징으로 하는 키토산 나노필름 제조방법.The method of claim 14,
The third step is a chitosan nanofilm manufacturing method, characterized in that made for 8 to 12 hours.
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