KR20210002039A - Wrinkle forming apparatus for artificial skin, producing method of wrinkled artificial skin using the same, the wrinkled artificial skin and screening method of compound for improving skin wrinkle using the wrinkled artificial skin - Google Patents

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Abstract

The present invention provides a wrinkle forming device for an artificial skin, including a mold fixing frame and a mold mounted on the mold fixing frame, wherein the mold includes a mounting part mounted on the mold fixing frame and a stamp connected to the mounting part, wherein the stamp includes an upper surface directly coupled to the mounting part and a lower surface facing the upper surface, wherein the lower surface includes one or more uneven parts. The present invention also provides a method for manufacturing a wrinkled artificial skin using the wrinkle forming device, a wrinkled artificial skin manufactured by the method, and a method for screening a skin wrinkle alleviation compound using the wrinkled artificial skin.

Description

인공피부 주름형성 장치, 이를 이용한 주름진 인공피부 제조방법, 상기 제조방법으로 제조된 주름진 인공피부 및 상기 주름진 인공피부를 이용한 피부 주름 개선 화합물 스크리닝 방법 {WRINKLE FORMING APPARATUS FOR ARTIFICIAL SKIN, PRODUCING METHOD OF WRINKLED ARTIFICIAL SKIN USING THE SAME, THE WRINKLED ARTIFICIAL SKIN AND SCREENING METHOD OF COMPOUND FOR IMPROVING SKIN WRINKLE USING THE WRINKLED ARTIFICIAL SKIN}Artificial skin wrinkle forming device, wrinkled artificial skin manufacturing method using the same, wrinkled artificial skin manufactured by the above manufacturing method and skin wrinkle improvement compound screening method using the wrinkled artificial skin USING THE SAME, THE WRINKLED ARTIFICIAL SKIN AND SCREENING METHOD OF COMPOUND FOR IMPROVING SKIN WRINKLE USING THE WRINKLED ARTIFICIAL SKIN}

본 기재는 인공피부 주름형성 장치, 이를 이용한 주름진 인공피부 제조방법, 상기 제조방법으로 제조된 주름진 인공피부 및 상기 주름진 인공피부를 이용한 피부 주름 개선 화합물 스크리닝 방법에 관한 것이다. The present disclosure relates to an artificial skin wrinkle forming apparatus, a method for manufacturing wrinkled artificial skin using the same, a wrinkled artificial skin manufactured by the above manufacturing method, and a skin wrinkle improvement compound screening method using the wrinkled artificial skin.

피부는 신체의 외부를 덮고 있는 기관으로 바깥쪽에서부터 표피, 진피 및 피하지방층의 세 개의 층으로 구성되어 있다. 표피는 중층 편평상피의 각질형성세포가 대부분을 차지하고 있다. 콜라겐 섬유와 탄력 섬유와 같은 기질 단백질로 이루어진 진피는 표피 아래에 위치하며, 진피에는 혈관, 신경, 땀샘 등이 있다. 피하지방층은 지방세포로 구성되어 있다. 피부는 상기와 같은 다양한 세포들과 구성물질들이 상호작용하여 그 형태를 유지하며 체온 조절과 외부 환경에 대한 장벽으로의 기능 등 다양한 기능을 나타낸다.The skin is an organ that covers the outside of the body and consists of three layers: the epidermis, the dermis, and the subcutaneous fat layer from the outside. The epidermis occupies most of the keratinocytes of the middle layer of squamous epithelium. The dermis, made of matrix proteins such as collagen fibers and elastic fibers, is located under the epidermis, and the dermis contains blood vessels, nerves, and sweat glands. The subcutaneous fat layer is composed of fat cells. Skin maintains its shape by interacting with various cells and constituents as described above, and exhibits various functions such as controlling body temperature and acting as a barrier to the external environment.

인공피부(artificial skin)는 피부세포와 피부 구성물질인 콜라겐, 엘라스틴 등을 이용하여 3차원적으로 상기와 같은 피부를 재구성한 것으로서, 살아있는 섬유아세포와 각질형성세포로 구성되어 실제 피부와 유사한 구조적, 기능적 특성을 나타내기 때문에 피부 모사체(skin equivalent 또는 reconstructed skin)라고도 불린다. 인공피부는 화상, 외상 등 손상을 입은 피부의 대체(영구생착형) 또는 재생(일시 피복형)을 위해 이용될 뿐만 아니라, 피부 생리연구, 피부 자극 평가, 피부 효능평가 등 다양한 영역에서 이용되고 있다.Artificial skin is a three-dimensional reconstruction of the above-described skin using skin cells and skin components such as collagen and elastin. It is composed of living fibroblasts and keratinocytes, and has a structure similar to that of real skin. It is also called skin equivalent or reconstructed skin because of its functional properties. Artificial skin is not only used for replacement (permanent engraftment type) or regeneration (temporary covering type) of damaged skin such as burns and trauma, but is also used in various areas such as skin physiology research, skin irritation evaluation, and skin efficacy evaluation. .

그러나, 인공피부는 실제피부와 달리 진피층과 표피층 간 경계면(dermal-epidermal junction; DEJ)이 평평한 구조를 가지기에, 인공피부만을 가지고 항노화 실험 등을 진행하는 데 한계가 있었다. 실제피부는 진피층과 표피층 간 경계면이 평평하지 않고 굴곡져있기 때문이다.However, unlike actual skin, artificial skin has a flat structure in which the dermal-epidermal junction (DEJ) between the dermal layer and the epidermal layer is flat, so there is a limitation in conducting anti-aging experiments with artificial skin only. This is because the interface between the dermal layer and the epidermis layer is not flat but curved.

안타깝게도 아직까지 피부의 굴곡이나 주름을 모사한 인공피부를 제조하는 방법에 대해서는 많은 연구가 활발하게 이루어지지 않고 있으며, 이는 현재 시중에서 판매되고 있는 다양한 주름개선 화장품들이 실제 광고되는 내용에 비해 주름개선 효과가 크게 떨어지는 하나의 원인이 된다.Unfortunately, many studies have not been actively conducted on the method of manufacturing artificial skin that simulates the curves or wrinkles of the skin, which is a wrinkle improvement effect compared to the contents of various wrinkle improvement cosmetics currently sold on the market. Is one of the causes of the fall.

이에 본 발명자들은 오랜 연구 끝에, 현재까지 보고된 적 없는 새로운 주름진 인공피부를 제조할 수 있는 장치를 개발하여, 이를 이용하여 주름진 인공피부를 제조하기에 이르렀으며, 이를 통해 피부주름 개선 물질을 용이하게 스크리닝할 수 있다.Accordingly, the inventors of the present invention developed a device capable of manufacturing a new wrinkled artificial skin, which has not been reported until now, after a long study, and came to manufacture wrinkled artificial skin using this, and through this, a substance for improving skin wrinkles was easily obtained. Can be screened.

현재까지의 인공피부 모델의 변형은 주로 세포를 바꾸거나 특정한 물질을 첨가 또는 제거하는 세포생물학적인 방법들에 의존하고 있으며, 이러한 방법들은 인공피부를 구성하는 진피층과 표피층 간 경계면의 구조를 주름지게 변화시키는 것은 아니기에, 현재까지의 인공피부 모델 실험결과를 그대로 실제피부에 적용하기에는 여러 측면에서 한계를 지니고 있다. 일 구현예는 인공피부가 실제피부와 같이 주름을 가지도록 하기 위한 인공피부 주름형성 장치를 제공하기 위한 것이다. Modifications of the artificial skin model to date mainly rely on cellular biological methods that change cells or add or remove specific substances, and these methods change the structure of the interface between the dermal and epidermal layers that make up the artificial skin wrinkled. Since it is not required, there are limitations in several aspects to apply the experimental results of the artificial skin model to date to actual skin. One embodiment is to provide an artificial skin wrinkle forming apparatus for making the artificial skin have wrinkles like actual skin.

다른 일 구현예는 상기 인공피부 주름형성 장치를 이용한 주름진 인공피부 제조방법을 제공하기 위한 것이다.Another embodiment is to provide a method for manufacturing wrinkled artificial skin using the artificial skin wrinkle forming apparatus.

또 다른 일 구현예는 상기 제조방법으로 제조된 주름진 인공피부를 제공하기 위한 것이다.Another embodiment is to provide a wrinkled artificial skin manufactured by the above manufacturing method.

또 다른 일 구현예는 상기 주름진 인공피부를 이용하여 피부주름 개선 화합물을 스크리닝하는 방법을 제공하기 위한 것이다. Another embodiment is to provide a method for screening a compound for improving skin wrinkles using the wrinkled artificial skin.

일 구현예에 따르면, 몰드 고정틀 및 상기 몰드 고정틀에 장착되는 몰드를 포함하고, 상기 몰드는 상기 몰드 고정틀에 장착되는 장착부 및 상기 장착부와 연결된 스탬프를 포함하고, 상기 스탬프는 상기 장착부와 직접 결합된 상면 및 상기 상면과 마주하는 하면을 포함하고, 상기 하면은 하나 이상의 요철부를 포함하는 인공피부 주름형성 장치를 제공한다.According to an embodiment, a mold holding frame and a mold mounted on the mold holding frame are included, wherein the mold includes a mounting portion mounted on the mold holding frame and a stamp connected to the mounting portion, and the stamp is an upper surface directly coupled to the mounting portion And a lower surface facing the upper surface, wherein the lower surface provides an artificial skin wrinkle forming apparatus including one or more irregularities.

상기 스탬프는 3mm 내지 12mm의 폭을 가질 수 있다.The stamp may have a width of 3mm to 12mm.

상기 요철부는 삼각형 형상을 가질 수 있다. The uneven portion may have a triangular shape.

상기 스탬프의 하면은 1개 이상의 삼각형 형상의 요철부를 포함하고, 상기 삼각형 형상의 요철부의 폭 및 길이는 서로 동일하거나 상이할 수 있다.The lower surface of the stamp includes at least one triangular-shaped uneven portion, and the width and length of the triangular-shaped uneven portion may be the same or different from each other.

상기 삼각형 형상의 요철부를 포함하는 스탬프는 하기 수학식 1을 만족시킬 수 있다.The stamp including the triangular-shaped irregularities may satisfy Equation 1 below.

[수학식 1][Equation 1]

(w + h) x 2 ≤ S ≤ (w + h) x 5(w + h) x 2 ≤ S ≤ (w + h) x 5

상기 수학식 1에서, In Equation 1,

S는 스탬프의 폭이고,S is the width of the stamp,

w는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균폭이고,w is the average width of the irregularities included in the lower surface of the stamp,

h는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균길이이다.h is the average length of the irregularities included in the lower surface of the stamp.

상기 스탬프의 하면은 1개 이상의 삼각형 형상의 요철부를 포함하면서, 상기 스탬프는 하기 수학식 2를 만족시킬 수 있다.While the lower surface of the stamp includes one or more triangular-shaped irregularities, the stamp may satisfy Equation 2 below.

[수학식 2][Equation 2]

G x 2 < S G x 2 <S

상기 수학식 2에서, In Equation 2,

S는 스탬프의 폭이고,S is the width of the stamp,

G는 상기 스탬프의 하면에 포함된 1개 이상의 요철부 간 평균거리이다.G is the average distance between one or more irregularities included in the lower surface of the stamp.

상기 요철부는 반원 형상을 가질 수 있다.The uneven portion may have a semicircular shape.

상기 스탬프의 하면은 1개 이상의 반원 형상의 요철부를 포함하고, 상기 반원 형상의 요철부의 폭 및 길이는 서로 동일하거나 상이할 수 있다.The lower surface of the stamp includes one or more semicircular irregularities, and the width and length of the semicircular irregularities may be the same or different from each other.

상기 스탬프의 하면은 1개 이상의 반원 형상의 요철부를 포함하면서, 상기 스탬프는 하기 수학식 3을 만족시킬 수 있다.While the lower surface of the stamp includes one or more semicircular irregularities, the stamp may satisfy Equation 3 below.

[수학식 3][Equation 3]

w x 24 < S < w x 45w x 24 <S <w x 45

상기 수학식 3에서, In Equation 3,

S는 스탬프의 폭이고,S is the width of the stamp,

w는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균폭이다.w is the average width of the irregularities included in the lower surface of the stamp.

상기 스탬프를 구성하는 하면은 3개 이상의 요철부를 포함하고, 상기 요철부는 제1 요철부, 제2 요철부 및 제3 요철부로 구성되며, 상기 제1 요철부 및 제3 요철부는 그 폭 및 길이가 서로 동일하고, 상기 제2 요철부의 폭은 상기 제1 요철부의 폭보다 두?恣?, 상기 제2 요철부의 길이는 상기 제1 요철부의 길이보다 길고, 상기 제2 요철부는 상기 제1 요철부 및 제3 요철부 사이에 위치할 수 있다.The lower surface constituting the stamp includes three or more uneven portions, the uneven portions are composed of a first uneven portion, a second uneven portion, and a third uneven portion, and the first uneven portion and the third uneven portion have a width and a length thereof. They are the same as each other, the width of the second uneven portion is two?恣? than the width of the first uneven portion, the length of the second uneven portion is longer than the length of the first uneven portion, and the second uneven portion is the first uneven portion and It can be located between the 3rd uneven part.

상기 인공피부 주름형성 장치는 상기 몰드 고정틀이 견착되는 견착장치를 더 포함할 수 있다.The artificial skin wrinkle forming apparatus may further include a shoulder attachment device to which the mold fixing frame is attached.

상기 몰드 고정틀 및 몰드는 각각 독립적으로 아크릴로니트릴-부타디엔-스티렌(ABS) 수지 또는 폴리락트산(PLA) 수지로 제조될 수 있다.The mold holding frame and the mold may each independently be made of acrylonitrile-butadiene-styrene (ABS) resin or polylactic acid (PLA) resin.

다른 일 구현예에 따르면, 견착장치에 콜라겐 및 섬유아세포를 포함하는 인공 진피 혼합물을 투입하는 단계; 상기 혼합물이 굳기 전에 상기 인공피부 주름형성 장치의 요철부가 상기 굳지 않은 혼합물에 닿도록 스탬핑하는 단계; 상기 혼합물을 굳혀 주름진 인공 진피층을 형성하는 단계; 및 상기 주름진 인공 진피층 상에 표피층을 형성하는 단계를 포함하는 주름진 인공피부 제조방법을 제공한다.According to another embodiment, the step of injecting an artificial dermal mixture containing collagen and fibroblasts into the shoulder attachment device; Stamping so that the uneven portion of the artificial skin wrinkle-forming device contacts the unsolidified mixture before the mixture is hardened; Solidifying the mixture to form a wrinkled artificial dermal layer; And it provides a wrinkled artificial skin manufacturing method comprising the step of forming an epidermal layer on the wrinkled artificial dermis layer.

상기 견착장치에 상기 인공 진피 혼합물을 투입하는 단계에서, 상기 인공 진피 혼합물은 400㎕ 내지 800㎕의 부피로 투입될 수 있다.In the step of injecting the artificial dermal mixture into the shoulder attachment device, the artificial dermal mixture may be added in a volume of 400 μl to 800 μl.

상기 혼합물을 굳혀 주름진 인공 진피층을 형성하는 단계는 상기 스탬핑 후 세포배양용 인큐베이터에서 1시간 내지 5시간 동안 상기 혼합물을 방치하는 단계일 수 있다.The step of solidifying the mixture to form a wrinkled artificial dermal layer may be a step of leaving the mixture for 1 to 5 hours in an incubator for cell culture after the stamping.

상기 인공 진피층을 형성하는 단계 이후, 상기 표피층을 형성하기 전에, 상기 인공 진피층 상에 섬유아세포 배양 배지를 넣고 배양하는 단계를 더 포함할 수 있다.After the step of forming the artificial dermal layer, before forming the epidermal layer, the step of culturing a fibroblast culture medium on the artificial dermal layer may be further included.

상기 표피층을 형성하는 단계는 상기 주름진 인공 진피층 상에 각질형성세포를 시딩(seeding)하고, 이를 각질형성세포 배양 배지에서 배양하는 단계; 및 상기 배양 후, 이를 표피층 생성 배지에서 배양하는 단계를 포함할 수 있다.The step of forming the epidermal layer may include seeding keratinocytes on the wrinkled artificial dermal layer, and culturing them in a keratinocyte culture medium; And after the cultivation, it may include the step of culturing it in an epidermal layer generation medium.

상기 주름진 인공 진피층 상에 각질형성세포를 시딩(seeding)한 후에는 이를 각질형성세포 배양 배지에서 배양하는 단계는 1일 내지 3일 동안 실시할 수 있다.After seeding the keratinocytes on the wrinkled artificial dermal layer, the step of culturing them in a keratinocyte culture medium may be performed for 1 to 3 days.

상기 표피층 생성 배지에서 배양하는 단계는 상기 표피층 생성 배지에서 공기에 노출시키지 않고 배양한 후, 이를 다시 공기에 노출시켜 배양하는 단계일 수 있다.The step of culturing in the epidermal layer generating medium may be a step of culturing the epidermal layer generating medium without exposure to air and then culturing it by exposing it to air again.

또 다른 일 구현예에 따르면, 상기 주름진 인공피부 제조방법으로 제조된 주름진 인공피부를 제공한다.According to another embodiment, a wrinkled artificial skin manufactured by the method for manufacturing wrinkled artificial skin is provided.

또 다른 일 구현예에 따르면, 상기 주름진 인공피부에 화합물을 처리하는 단계 및 상기 화합물 처리 후 시간이 지남에 따라 상기 인공피부 내 주름이 없어지는지 여부를 확인하는 단계를 포함하는 피부 주름 개선 화합물 스크리닝 방법을 제공한다.According to another embodiment, a skin wrinkle improvement compound screening method comprising treating the wrinkled artificial skin with a compound and determining whether wrinkles in the artificial skin disappear over time after treatment with the compound Provides.

일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치를 이용하면 진피층과 표피층 간 경계면에 주름을 가진 실제피부와 가장 유사한 형태의 주름진 인공피부를 제조할 수 있다. 그리고, 상기 주름진 인공피부는 실제피부와 매우 유사한 형태를 가지기에, 이를 이용하여 피부주름 개선 화합물을 용이하게 스크리닝할 수 있다.Using the artificial skin wrinkle forming apparatus according to an embodiment, it is possible to manufacture wrinkled artificial skin in the shape most similar to actual skin having wrinkles at the interface between the dermal layer and the epidermal layer. In addition, since the wrinkled artificial skin has a shape very similar to the actual skin, it is possible to easily screen for a skin wrinkle improvement compound by using it.

도 1 및 도 2는 각각 독립적으로 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치(견착장치에 견착된 인공피부 주름형성 장치)의 사진이다.
도 3은 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치를 구성하는 몰드 고정틀의 사진이다.
도 4는 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치(몰드 고정틀 및 이에 장착된 몰드)의 사진이다.
도 5는 견착장치에 주름지지 않은 인공 진피층을 담지한 후, 인공피부 주름형성 장치로 스탬핑하여 인공 진피층에 주름을 형성시키는 모습을 나타낸 사진이다.
도 6, 도 10, 도 16, 도 24 및 도 35는 각각 독립적으로 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치를 구성하는 몰드의 스탬프 단면도이다.
도 7은 도 6의 단면을 가지는 스탬프를 포함하는 몰드를 이용하여 제조된 주름진 인공피부(실시예 1) 사진이다.
도 8은 도 7의 붉은색 박스를 확대(x10)한 공초점레이저주사현미경(CLS microscope; confocal laser scanning microscope) 사진이다.
도 9는 도 6의 단면을 가지는 스탬프를 포함하는 몰드를 이용하여 제조된 주름진 인공피부 단면의 광간섭단층촬영(OCT; Optical Coherence Tomography) 사진이다.
도 11은 도 10의 단면을 가지는 스탬프를 포함하는 몰드를 이용하여 제조된 주름진 인공피부(실시예 2) 사진이다.
도 12는 도 11의 붉은색 박스를 확대(x10)한 공초점레이저주사현미경(CLS microscope; confocal laser scanning microscope) 사진이다.
도 13은 도 10의 단면을 가지는 스탬프를 포함하는 몰드를 이용하여 제조된 주름진 인공피부 단면의 광간섭단층촬영(OCT; Optical Coherence Tomography) 사진이다.
도 14는 진피층과 표피층 간 경계면이 평평한 종래인공피부(비교예 1) 사진이다.
도 15는 도 14의 붉은색 박스를 확대(x10)한 공초점레이저주사현미경(CLS microscope; confocal laser scanning microscope) 사진이다.
도 17은 도 16의 단면을 가지는 스탬프를 포함하는 몰드를 이용하여 제조된 주름진 인공피부(실시예 3) 사진이다.
도 18은 도 16의 단면을 가지는 스탬프를 포함하는 몰드를 이용하여 제조된 주름진 인공피부 단면의 광간섭단층촬영(OCT; Optical Coherence Tomography) 사진이다.
도 19는 도 17의 주름진 인공피부에 주름개선 물질로 잘 알려진 레티노산을 처리한 후의 사진이다.
도 20은 조 19의 단면을 가지는 스탬프를 포함하는 몰드를 이용하여 제조된 주름진 인공피부 단면의 광간섭단층촬영(OCT; Optical Coherence Tomography) 사진이다.
도 21은 실제피부를 H&E 조직 염색한 후의 그 단면을 나타낸 현미경 사진이다.
도 22는 종래 인공피부를 H&E 조직 염색한 후의 그 단면을 나타낸 현미경 사진이다.
도 23은 주름진 인공 진피층을 형성하는 단계를 나타낸 모식도이다.
도 25 내지 도 33은 각각 실시예 4 내지 실시예 12에 따른 주름진 인공피부 사진이다.
도 35는 도 34의 단면을 가지는 스탬프를 포함하는 몰드를 이용하여 제조된 주름진 인공피부에 특정 화합물을 처리하여, 상기 화합물이 피부 주름 개선 효능이 있는지 여부를 스크리닝하는 방법을 나타낸 모식도이다.1 and 2 are each independently photographs of an artificial skin wrinkle forming apparatus (artificial skin wrinkle forming apparatus attached to the shoulder attachment device) according to an embodiment.
3 is a photograph of a mold fixing frame constituting an artificial skin wrinkle forming apparatus according to an embodiment.
4 is a photograph of an artificial skin wrinkle forming apparatus (a mold fixing frame and a mold mounted thereto) according to an embodiment.
5 is a photograph showing a state in which an artificial dermal layer that is not wrinkled is supported on the shoulder attachment device and then stamped with an artificial skin wrinkle forming device to form wrinkles on the artificial dermal layer.
6, 10, 16, 24, and 35 are respectively independently stamped cross-sectional views of a mold constituting an artificial skin wrinkle forming apparatus according to an embodiment.
7 is a photograph of a wrinkled artificial skin (Example 1) manufactured using a mold including a stamp having a cross section of FIG. 6.
FIG. 8 is a picture of a confocal laser scanning microscope (CLS microscope) in which the red box of FIG. 7 is enlarged (x10).
9 is an optical coherence tomography (OCT) photograph of a cross-section of a wrinkled artificial skin manufactured using a mold including a stamp having a cross-section of FIG. 6.
11 is a photograph of a wrinkled artificial skin (Example 2) manufactured using a mold including a stamp having a cross section of FIG. 10.
FIG. 12 is a picture of a confocal laser scanning microscope (CLS microscope) in which the red box of FIG. 11 is enlarged (x10).
FIG. 13 is an optical coherence tomography (OCT) photograph of a cross section of a wrinkled artificial skin manufactured using a mold including a stamp having a cross section of FIG. 10.
14 is a photograph of a conventional artificial skin (Comparative Example 1) in which the interface between the dermal layer and the epidermal layer is flat.
FIG. 15 is a picture of a confocal laser scanning microscope (CLS microscope) in which the red box of FIG. 14 is enlarged (x10).
17 is a photograph of a wrinkled artificial skin (Example 3) manufactured using a mold including a stamp having a cross section of FIG. 16.
18 is an optical coherence tomography (OCT) photograph of a cross section of a wrinkled artificial skin manufactured using a mold including a stamp having a cross section of FIG. 16.
FIG. 19 is a photograph of the wrinkled artificial skin of FIG. 17 after treatment with retinoic acid, which is well known as a wrinkle improving material.
FIG. 20 is an optical coherence tomography (OCT) photograph of a cross section of a wrinkled artificial skin manufactured using a mold including a stamp having a cross section of the jaw 19.
Fig. 21 is a photomicrograph showing a cross section of real skin after H&E tissue staining.
22 is a microscopic photograph showing a cross section of a conventional artificial skin after H&E tissue staining.
23 is a schematic diagram showing a step of forming a wrinkled artificial dermal layer.
25 to 33 are photographs of wrinkled artificial skin according to Examples 4 to 12, respectively.
FIG. 35 is a schematic diagram showing a method of screening whether the compound has an effect on improving skin wrinkles by treating a specific compound on wrinkled artificial skin manufactured using a mold including a stamp having a cross section of FIG. 34.

이하, 본 발명의 구현예에 대하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 구현예에 한정되지 않는다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail so that those of ordinary skill in the art may easily implement the present invention. However, the present invention may be implemented in various different forms, and is not limited to the embodiments described herein.

본 명세서에서 "인공피부(artificial skin)"라 함은 피부세포와 피부 구성물질인 콜라겐 등을 이용하여 3차원적으로 피부를 재구성한 것을 의미하며, 실제 피부와 유사한 구조적, 기능적 특성을 나타내는 고분자 복합체라면 모두 포함하는 최광의의 의미이다.In the present specification, the term "artificial skin" refers to a three-dimensional skin reconstruction using skin cells and collagen, which is a skin material, and a polymer composite that exhibits structural and functional properties similar to those of actual skin. This is the broadest meaning that includes all ramen noodles.

본 명세서에서 "스탬핑"이라 함은 인공피부 주름형성 장치의 요철부가 인공 진피층 등의 모사층에 닿도록 힘을 가하는 작업을 의미할 수 있으며, 상기 힘을 가한 후 다시 상기 인공피부 주름형성 장치를 제거하는 작업은 포함하지 않을 수 있다.In the present specification, "stamping" may refer to an operation of applying a force so that the uneven portion of the artificial skin wrinkle-forming device touches a simulated layer such as an artificial dermal layer, and the artificial skin wrinkle-forming device is removed again after applying the force. It may not include tasks that do.

본 명세서에서 층, 막, 영역, 판 등의 부분이 다른 부분 "위에" 있다고 할 때, 이는 다른 부분 "바로 위에" 있는 경우뿐만 아니라 그 중간에 또 다른 부분이 있는 경우도 포함한다. 반대로 어떤 부분이 다른 부분 "바로 위에" 있다고 할 때에는 중간에 다른 부분이 없는 것을 뜻한다.In the present specification, when a portion such as a layer, a film, a region, or a plate is said to be “on” another portion, this includes not only the case where the other portion is “directly above” but also the case where there is another portion in the middle. Conversely, when one part is "directly above" another part, it means that there is no other part in the middle.

이하 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치에 관하여 설명한다.Hereinafter, an artificial skin wrinkle forming apparatus according to an embodiment will be described.

실제피부는 표피층과 진피층 간 경계면이 평평하지 않고 굴곡진 주름을 가지는데(도 21의 붉은색 점선으로 표시된 원 참조), 종래 인공피부는 표피층과 진피층 간 경계면이 평평하여(도 22의 붉은색 화살표 참조), 실제피부와 종래 인공피부는 그 형태가 상이한 바, 인공피부로 실험한 결과를 그대로 실제피부에 적용시키는 데 무리가 있었다. 실제로 인공피부 실험결과를 통해 피부주름 개선에 효과가 있다고 판단된 대부분의 물질들은 실제로는 피부주름 개선 효과가 크지 않으며, 이는 표피층과 진피층 간 경계면이 평평한 인공피부는 주름을 거의 가지지 않기에, 피부주름 개선 효과를 판단하기에 적절한 모델이 되지 못하기 때문이다.The real skin has a curved wrinkle rather than a flat interface between the epidermal layer and the dermal layer (refer to the circle indicated by the red dotted line in FIG. Reference), since the shape of the actual skin and the conventional artificial skin are different, it was difficult to apply the results of the experiment with artificial skin as it is to the actual skin. In fact, most of the substances judged to be effective in improving skin wrinkles through artificial skin experiment results are not actually effective in improving skin wrinkles. This is because artificial skin with a flat interface between the epidermal layer and the dermis layer has few wrinkles. This is because it is not an appropriate model to judge the effect of improvement.

종래 인공피부 모델로는 실제 피부의 주름개선 효과를 용이하게 확인할 수 없다고 하여도 화장품 동물실험 금지법에 따라 동물실험을 실시할 수 있는 것도 아니기에, 현재까지 주름개선 물질에 대한 연구를 하는 연구원들 입장에서는 실제 피부에 대한 주름개선 효과를 용이하게 예측하기 어려운 문제가 있었다.Even if the conventional artificial skin model cannot easily confirm the effect of improving the actual skin wrinkles, it is not possible to conduct animal experiments under the Cosmetic Animal Testing Act, so researchers who have been researching wrinkle-improving substances until now There was a problem that it was difficult to easily predict the effect of improving wrinkles on the actual skin.

또한, 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 종래 인공피부를 스트레칭함으로써, 종래 인공피부에 주름을 형성시키는 기술이 소개되기도 하였으나, 이는 스트레칭 조건에 따라 주름이 형성되는 모양이 그때마다 달라서, 원하는 형상의 주름진 인공피부를 제조하는 것이 불가했으며, 무엇보다도 스트레칭에 의해서는 종래 인공피부에 주름을 용이하게 형성하는 것이 쉽지 않다는 문제점이 있다.In addition, in order to solve the above problems, conventional techniques for forming wrinkles on artificial skin by stretching artificial skin have been introduced, but this is because the shape in which wrinkles are formed varies depending on the stretching conditions. It has been impossible to manufacture artificial skin, and above all, there is a problem in that it is not easy to easily form wrinkles on conventional artificial skin by stretching.

그러나, 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치는 스트레칭 방식이 아닌 스탬핑 방식으로 주름을 형성하기에, 이미 제조된 인공피부에 후속작업으로 주름형성을 하는 것이 아니라, 인공피부 제조 초기 단계에서부터 주름을 형성시키는 단계를 실시할 수 있고, 스탬핑되는 모양이나 형태를 얼마든지 용이하게 변경할 수 있기에, 원하는 형태의 주름을 가지는 인공피부를 대량으로 용이하게 생산할 수 있다. However, since the artificial skin wrinkle forming apparatus according to one embodiment forms wrinkles by stamping rather than stretching, wrinkles are not formed by subsequent work on artificial skin that has already been manufactured, but wrinkles are removed from the initial stage of artificial skin manufacturing. Since the step of forming can be carried out and the shape or shape to be stamped can be easily changed, it is possible to easily produce artificial skin having wrinkles of a desired shape in large quantities.

일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치는 몰드 고정틀 및 상기 몰드 고정틀에 장착되는 몰드를 포함하고, 상기 몰드는 상기 몰드 고정틀에 장착되는 장착부 및 상기 장착부와 연결된 스탬프를 포함하고, 상기 스탬프는 상기 장착부와 직접 결합된 상면 및 상기 상면과 마주하는 하면을 포함하고, 상기 하면은 하나 이상의 요철부를 포함한다.An artificial skin wrinkle forming apparatus according to an embodiment includes a mold fixing frame and a mold mounted on the mold fixing frame, the mold including a mounting part mounted on the mold fixing frame and a stamp connected to the mounting part, and the stamp is the mounting part And an upper surface directly coupled to and a lower surface facing the upper surface, and the lower surface includes one or more irregularities.

도 3은 상기 몰드 고정틀의 사진을 나타낸 것이며, 상기 몰드 고정틀의 가운데 구멍에 몰드의 장착부를 삽입하여(도 4 참조), 몰드와 몰드 고정틀로 구성된 인공피부 주름형성 장치를 제조할 수 있다. 이와 같은 형태를 가진 인공피부 주름형성 장치는 상기 몰드의 장착부을 잡아당기거나 밀어서 높이조절을 할 수 있으며, 상기 장착부를 스탬프 방향으로 밀어줌으로써 인공피부에 주름을 형성시킬 수 있다. FIG. 3 shows a photograph of the mold fixing frame, and by inserting the mounting part of the mold into the center hole of the mold fixing frame (see FIG. 4 ), an artificial skin wrinkle forming apparatus comprising a mold and a mold fixing frame can be manufactured. The artificial skin wrinkle forming apparatus having such a shape can adjust the height by pulling or pushing the mounting portion of the mold, and by pushing the mounting portion in the stamp direction, wrinkles can be formed on the artificial skin.

보다 구체적으로, 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치는 상기 몰드 고정틀이 견착되는 견착장치를 더 포함할 수 있는데(도 1 및 도 2 참조), 이 때 상기 견착장치 내에는 인공피부, 구체적으로 인공 진피층이 담지되어 있을 수 있다. 즉, 상기 견착장치 내에 인공 진피층을 담지시킨 후, 상기 견착장치에 상기 몰드와 몰드 고정틀로 구성된 인공피부 주름형성 장치의 몰드 고정틀을 견착시켜 상기 인공피부 주름형성 장치를 고정시킨 후, 상기 몰드의 장착부를 잡아당기거나 밀어서 높이를 조절한 후, 상기 몰드의 장착부를 인공 진피층이 담지된 방향으로 밀어줌으로써, 인공 진피층 내에 원하는 형태의 주름을 용이하게 형성시킬 수 있다. (도 5 참조) 예컨대, 상기 견착장치로는 corning사에서 판매하는 Transwell® 등을 사용할 수 있으나, 상기 견착장치의 종류가 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.More specifically, the artificial skin wrinkle forming apparatus according to an embodiment may further include an shoulder attachment device to which the mold fixing frame is attached (see FIGS. 1 and 2), and in this case, the artificial skin, specifically An artificial dermal layer may be supported. That is, after supporting the artificial dermal layer in the shoulder attachment device, the mold fixing frame of the artificial skin wrinkle forming apparatus consisting of the mold and the mold fixing frame is attached to the shoulder attachment device to fix the artificial skin wrinkle forming device, and then the mounting portion of the mold After adjusting the height by pulling or pushing the mold, by pushing the mounting portion of the mold in the direction in which the artificial dermal layer is supported, wrinkles of a desired shape can be easily formed in the artificial dermal layer. (See FIG. 5) For example, Transwell ® sold by Corning Corporation may be used as the shoulder attachment device, but the type of the shoulder attachment device is not necessarily limited thereto.

예컨대, 상기 스탬프는 3mm 내지 12mm의 폭을 가질 수 있다. 상기 스탬프의 폭이 3mm 미만인 경우 상기 스탬프 내에 요철부를 형성시키기가 어려우며, 스탬핑 시 스탬프 주변으로 인공 진피 혼합물을 구성하는 콜라겐이 삐져나오는 현상이 발생할 수 있어 바람직하지 않으며, 상기 스탬프의 폭이 12mm 초과인 경우 견착장치 내부로 스탬프가 수월하게 삽입되지 않아 원하는 높이에서 스탬핑이 안되고, 이는 인공 진피층 내에 미세한 주름을 형성시키기 어렵게 하여 바람직하지 않을 수 있다.For example, the stamp may have a width of 3mm to 12mm. If the width of the stamp is less than 3 mm, it is difficult to form the uneven parts in the stamp, and during stamping, a phenomenon in which collagen constituting the artificial dermal mixture may protrude around the stamp, which is not preferable, and the width of the stamp is more than 12 mm In this case, since the stamp is not easily inserted into the shoulder attachment device, stamping is not possible at a desired height, which may make it difficult to form fine wrinkles in the artificial dermal layer, which may be undesirable.

예컨대, 상기 요철부는 다양한 형상, 예컨대 삼각형, 사각형, 오각형, 육각형 등의 다각형 또는 반원 형상을 가질 수 있으며, 상기 다양한 형상을 가지는 요철부가 2개 이상 상기 스탬프의 하면에 포함될 경우, 상기 요철부는 서로 동일한 폭과 길이를 가질 수도 있고, 서로 상이한 폭과 길이를 가질 수도 있다.For example, the uneven portions may have various shapes, for example, polygonal or semicircular shapes such as triangles, squares, pentagons, hexagons, and when two or more uneven portions having various shapes are included on the lower surface of the stamp, the uneven portions are identical to each other. They may have a width and length, or may have different widths and lengths.

한편, 상기 요철부의 모양에 따라 상기 스탬프의 하면에 포함되는 요철부가 특정 파라미터를 만족시켜야 인공 진피층 상에 주름을 용이하게 형성시킬 수 있다.On the other hand, according to the shape of the uneven portion, the uneven portion included in the lower surface of the stamp must satisfy a specific parameter in order to easily form a wrinkle on the artificial dermal layer.

구체적으로, 상기 요철부가 삼각형 형상을 가질 경우, 상기 스탬프는 하기 수학식 1을 만족시킬 수 있다.Specifically, when the uneven portion has a triangular shape, the stamp may satisfy Equation 1 below.

[수학식 1][Equation 1]

(w + h) x 2 ≤ S ≤ (w + h) x 5(w + h) x 2 ≤ S ≤ (w + h) x 5

상기 수학식 1에서, In Equation 1,

S는 스탬프의 폭이고,S is the width of the stamp,

w는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균폭이고,w is the average width of the irregularities included in the lower surface of the stamp,

h는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균길이이다.h is the average length of the irregularities included in the lower surface of the stamp.

보다 구체적으로, 상기 요철부가 삼각형 형상을 가지면서, 상기 스탬프의 폭(S)이 10㎛ 이상, 예컨대 10㎛ 내지 12㎛일 경우, 상기 스탬프는 하기 수학식 1-1을 만족시킬 수 있다.More specifically, when the uneven portion has a triangular shape and the width S of the stamp is 10 μm or more, for example, 10 μm to 12 μm, the stamp may satisfy Equation 1-1 below.

[수학식 1-1][Equation 1-1]

(w + h) x 2.2 ≤ S ≤ (w + h) x 4(w + h) x 2.2 ≤ S ≤ (w + h) x 4

상기 수학식 1-1에서,In Equation 1-1,

S는 스탬프의 폭이고,S is the width of the stamp,

w는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균폭이고,w is the average width of the irregularities included in the lower surface of the stamp,

h는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균길이이다.h is the average length of the irregularities included in the lower surface of the stamp.

삼각형 형상의 요철부를 포함하는 스탬프가 상기 수학식 1을 만족시킬 경우 또는 삼각형 형상의 요철부를 포함하고 10㎛ 이상의 폭을 가지는 스탬프가 상기 수학식 1-1을 만족시킬 경우, 상기 스탬프는 용이하게 인공 진피층 상에 주름을 형성시킬 수 있을 뿐만 아니라, 미세한 주름 형상까지 재현할 수 있다.When a stamp including a triangular uneven portion satisfies Equation 1, or when a stamp including a triangular uneven portion and a width of 10 μm or more satisfies Equation 1-1, the stamp is easily artificial. Not only can wrinkles be formed on the dermal layer, but even fine wrinkles can be reproduced.

또한, 상기 요철부가 삼각형 형상을 가질 경우, 상기 스탬프는 하면에 1개 이상, 예컨대 2개 이상의 요철부를 포함하면서, 동시에 하기 수학식 2를 만족시킬 수 있다.In addition, when the uneven portion has a triangular shape, the stamp may include one or more, for example, two or more uneven portions on a lower surface, and simultaneously satisfy Equation 2 below.

[수학식 2][Equation 2]

G x 2 < S G x 2 <S

상기 수학식 2에서, In Equation 2,

S는 스탬프의 폭이고,S is the width of the stamp,

G는 상기 스탬프의 하면에 포함된 1개 이상, 예컨대 2개 이상의 요철부 간 평균거리이다.G is an average distance between one or more, for example, two or more irregularities included on the lower surface of the stamp.

삼각형 형상의 요철부를 포함하는 스탬프가 상기 수학식 2를 만족키실 경우, 상기 스탬프는 여러 개의 요철부를 포함할 수 있어, 보다 다양한 형태의 주름 형상을 인공 진피층 상에 형성시킬 수 있다.When the stamp including the triangular-shaped uneven portion satisfies Equation 2, the stamp may include several uneven portions, so that more various types of wrinkles can be formed on the artificial dermal layer.

한편, 상기 요철부가 삼각형 형상이 아닌 반원 형상을 가질 경우, 상기 스탬프는 하면에 1개 이상, 예컨대 2개 이상의 반원 형상의 요철부를 포함하면서, 동시에 하기 수학식 3을 만족시킬 수 있다.On the other hand, when the uneven portion has a semicircular shape other than a triangular shape, the stamp may include one or more, for example, two or more semicircular irregularities on the lower surface, and at the same time satisfy Equation 3 below.

[수학식 3][Equation 3]

w x 24 < S < w x 45w x 24 <S <w x 45

상기 수학식 3에서, In Equation 3,

S는 스탬프의 폭이고,S is the width of the stamp,

w는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균폭이다.w is the average width of the irregularities included in the lower surface of the stamp.

요철부가 삼각형과 같은 다각형 형상이 아닌 둥근 반원 형상일 경우 상기 스탬프는 여러 개의 요철부를 하면에 포함하는 것이 인공 진피층에 주름을 형성하기가 용이할 수 있다. 예컨대, 상기 스탬프의 폭과 반원 형상의 요철부의 평균폭 간 관계가 상기 수학식 3을 만족시키는 경우, 요철부가 다각형 형상인 경우와 동등한 수준으로 미세하면서도 다양한 주름을 인공 진피층에 재현시킬 수 있다.When the uneven portion has a round semicircular shape rather than a polygonal shape such as a triangle, it may be easy to form wrinkles in the artificial dermal layer by including a plurality of uneven portions on the lower surface of the stamp. For example, when the relationship between the width of the stamp and the average width of the semicircular irregularities satisfies Equation 3, it is possible to reproduce fine and various wrinkles in the artificial dermis layer at the same level as when the irregularities are polygonal.

예컨대, 상기 스탬프를 구성하는 하면은 3개 이상의 요철부를 포함하고, 상기 요철부는 제1 요철부, 제2 요철부 및 제3 요철부로 구성되며, 상기 제1 요철부 및 제3 요철부는 그 폭 및 길이가 서로 동일하고, 상기 제2 요철부의 폭은 상기 제1 요철부의 폭보다 두?恣?, 상기 제2 요철부의 길이는 상기 제1 요철부의 길이보다 길고, 상기 제2 요철부는 상기 제1 요철부 및 제3 요철부 사이에 위치할 수 있다(도 35 참조). 이 경우, 실제 인간피부와 매우 유사한 형태의 주름을 인공피부에 형성시킬 수 있으며, 상기 제1 요철부, 제2 요철부 및 제3 요철부를 포함하는 하면을 가지는 스탬프를 가지는 인공피부 주름형성 장치를 이용하여 제조된 주름진 인공피부에 피부 주름 개선 화합물을 처리하였을 때, 제1 요철부 및 제3 요철부에 의해 형성된 주름을 없어지고, 제2 요철부에 의해 형성된 주름만이 남아있게 되는 바, 피부 주름 개선 화합물을 스크리닝하는데 매우 유용할 수 있다(도 36 참조). 구체적으로, 피부 주름 개선 효능이 있는 화합물로 '상기 제1 요철부, 제2 요철부 및 제3 요철부를 포함하는 하면을 가지는 스탬프를 가지는 인공피부 주름형성 장치를 이용하여 제조된 주름진 인공피부'를 처리할 경우, 상기 제1 요철부 및 제3 요철부에 의해 형성된 주름은 그 패임이 깊이 않아 쉽게 복원(주름 펴짐)되나, 제2 요철부에 의해 형성된 주름은 그 패임이 깊어 쉽게 복원되지 않을 것인 바, 제1 요철부 및 제3 요철부에 의해 형성된 주름의 복원 정도와 제2 요철부에 의해 형성된 주름의 복원 정도를 비교함으로써, 처리된 특정 화합물이 피부 주름 개선 효능을 가지는지 여부를 쉽게 스크리닝할 수 있다.For example, the lower surface constituting the stamp includes three or more uneven portions, the uneven portion is composed of a first uneven portion, a second uneven portion and a third uneven portion, and the first uneven portion and the third uneven portion have a width and The lengths are the same, the width of the second uneven portion is greater than the width of the first uneven portion?恣?, the length of the second uneven portion is longer than the length of the first uneven portion, and the second uneven portion It may be located between the portion and the third uneven portion (see Fig. 35). In this case, an artificial skin wrinkle forming apparatus having a stamp having a lower surface including the first uneven portion, the second uneven portion and the third uneven portion can be formed on the artificial skin with a wrinkle in a shape very similar to that of the actual human skin. When the skin wrinkle-improving compound is treated on the wrinkled artificial skin manufactured by using, the wrinkles formed by the first and third uneven portions are eliminated, and only the wrinkles formed by the second uneven portion remain. It can be very useful for screening for wrinkle-improving compounds (see Figure 36). Specifically, as a compound having the effect of improving skin wrinkles,'wrinkled artificial skin manufactured using an artificial skin wrinkle forming apparatus having a stamp having a lower surface including the first uneven portion, the second uneven portion and the third uneven portion' In the case of treatment, the wrinkles formed by the first and third uneven portions are not easily restored (wrinkled) because the depressions are not deep, but the wrinkles formed by the second uneven portions are not easily restored because the depressions are deep. In bar, by comparing the degree of restoration of the wrinkles formed by the first and third uneven portions and the degree of restoration of the wrinkles formed by the second uneven portion, it is easy to determine whether the treated specific compound has the effect of improving skin wrinkles. Can be screened.

예컨대, 상기 몰드 고정틀 및 몰드는 각각 독립적으로 아크릴로니트릴-부타디엔-스티렌(ABS) 수지 또는 폴리락트산(PLA) 수지로 제조될 수 있다. 상기 몰드 고정틀 및 몰드가 상기 종류의 수지로 제조되는 경우 인공 진피층에 직접 닿는 경우에도 인공 진피층을 오염시키지 않으면서 미세한 주름까지 재현하는 것이 용이할 수 있다. 나아가, 상기 종류의 수지는 3D 프린터로도 제조가 가능한 소재로서, 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치를 저렴한 가격으로 대량 생산하는 것이 가능할 수 있다.For example, the mold holding frame and the mold may each independently be made of acrylonitrile-butadiene-styrene (ABS) resin or polylactic acid (PLA) resin. When the mold holding frame and the mold are made of the above type of resin, it may be easy to reproduce even fine wrinkles without contaminating the artificial dermal layer even when directly touching the artificial dermal layer. Furthermore, the kind of resin is a material that can be manufactured by a 3D printer, and it may be possible to mass-produce the artificial skin wrinkle forming apparatus according to an embodiment at a low price.

다른 일 구현예에 따른 주름진 인공피부 제조방법은 견착장치에 콜라겐 및 섬유아세포를 포함하는 인공 진피 혼합물을 투입하는 단계; 상기 혼합물이 굳기 전에 상기 인공피부 주름형성 장치의 요철부가 상기 굳지 않은 혼합물에 닿도록 스탬핑하는 단계; 상기 혼합물을 굳혀 주름진 인공 진피층을 형성하는 단계; 및 상기 주름진 인공 진피층 상에 표피층을 형성하는 단계를 포함한다.A method for manufacturing wrinkled artificial skin according to another embodiment comprises the steps of: injecting an artificial dermal mixture containing collagen and fibroblasts into an shoulder attachment device; Stamping so that the uneven portion of the artificial skin wrinkle-forming device contacts the unsolidified mixture before the mixture is hardened; Solidifying the mixture to form a wrinkled artificial dermal layer; And forming an epidermal layer on the wrinkled artificial dermal layer.

진피층(dermis)은 연결 조직으로 이루어진 표피 밑의 피부 층으로, 완충작용을 하여 신체를 압력과 장력(stress and strain)으로부터 보호한다. 진피층은 기저막(basement membrane)을 통해 표피와 단단히 연결되어 있다. 진피층은 그 구조에 내재해 있는 혈관, 신경 등의 다양한 부속물들을 지지해주는 기질을 공급한다. The dermis is a layer of skin underneath the epidermis made of connective tissue, and acts as a buffer to protect the body from pressure and strain. The dermal layer is tightly connected to the epidermis through a basement membrane. The dermal layer supplies a substrate that supports various appendages such as blood vessels and nerves that are inherent in the structure.

상기 인공 진피층은 실제 피부와의 인체 상관성의 관점에서 섬유아세포 및 콜라겐을 혼합한 재료를 사용하여 형성할 수 있다. 상기 인공 진피층은 1층 또는 2층 이상으로 구성할 수 있으며, 예컨대 포함할 수 있으며, 콜라겐을 함유하는 제1 진피층 및 섬유아세포를 함유하는 제2 진피층으로 나누어 구성될 수도 있고, 콜라겐 및 섬유아세포를 함유하는 단일의 진피 모사층으로 구성될 수도 있다. 이 경우 인공피부의 진피 수축 현상을 더 완화할 수 있다.The artificial dermal layer may be formed by using a material in which fibroblasts and collagen are mixed from the viewpoint of human body correlation with actual skin. The artificial dermal layer may consist of one layer or two or more layers, for example, and may be divided into a first dermal layer containing collagen and a second dermal layer containing fibroblasts, and may contain collagen and fibroblasts. It may consist of a single dermal mimicking layer containing. In this case, the dermal contraction of artificial skin can be further alleviated.

상기 제1 진피층은 콜라겐을 함유할 수 있으며, 엘라스틴(Elastin), 키토산(Chitosan), 글리코사미노글루칸(GAGs; glycosaminoglycans), 히알루론산(HA; hyaluronic acid)과 같은 진피를 구성하는 세포외기질(extracellular matrix)을 더 함유할 수 있다.The first dermal layer may contain collagen, and extracellular matrix constituting the dermis such as elastin, chitosan, glycosaminoglycans (GAGs), and hyaluronic acid (HA). extracellular matrix) may further contain.

상기 제2 진피층은 상기 제1 진피층의 상부에 위치할 수 있으며, 섬유아세포를 함유하고, 엘라스틴(Elastin), 키토산(Chitosan), 글리코사미노글루칸(GAGs; glycosaminoglycans), 히알루론산(HA; hyaluronic acid)과 같은 진피를 구성하는 세포외기질(extracellular matrix)을 더 함유할 수 있다.The second dermal layer may be located above the first dermal layer, contains fibroblasts, and contains elastin, chitosan, glycosaminoglycans (GAGs), hyaluronic acid (HA). ), and may further contain an extracellular matrix constituting the dermis.

상기 단일의 인공 진피층은 콜라겐 및 섬유아세포를 함유할 수 있으며, 상기 콜라겐 및 섬유아세포는 전술한 바와 같다.The single artificial dermal layer may contain collagen and fibroblasts, and the collagen and fibroblasts are as described above.

사용되는 콜라겐은 소 기원, 레트 꼬리로부터 또는 어류로부터, 또는 천연 콜라겐 또는 유전 공학에 의해 생성된 콜라겐 중 임의의 다른 기원의 콜라겐일 수 있는데, 이는 섬유아세포의 존재 하에서 수축할 수 있다. The collagen used may be of bovine origin, from rat tail or from fish, or of any other origin: natural collagen or collagen produced by genetic engineering, which can contract in the presence of fibroblasts.

인공 진피층의 두께는 일반적으로 0.05 cm 이상, 특히 대략 0.05 cm 내지 2 cm 이지만, 본 발명에 따른 인공피부의 유리한 특성에 손상을 주지 않는 한 증가 또는 감소될 수 있다. The thickness of the artificial dermal layer is generally 0.05 cm or more, in particular about 0.05 cm to 2 cm, but can be increased or decreased as long as the advantageous properties of the artificial skin according to the invention are not impaired.

상기 견착장치에 상기 인공 진피 혼합물을 투입하는 단계에서, 상기 인공 진피 혼합물은 400㎕ 내지 800㎕의 부피로 투입될 수 있다. 상기 인공 진피 혼합물을 상기 부피 범위로 투입하여야 인공 진피층 내에 스탬핑된 주름이 견고하게 생성될 수 있다.In the step of injecting the artificial dermal mixture into the shoulder attachment device, the artificial dermal mixture may be added in a volume of 400 μl to 800 μl. When the artificial dermal mixture is added in the above volume range, wrinkles stamped in the artificial dermal layer can be firmly generated.

상기 콜라겐 및 섬유아세포를 포함하는 인공 진피 혼합물을 견착장치에 투입하면 시간이 지남에 따라 상기 인공 진피 혼합물이 굳게 되는데(gelation), 상기 혼합물이 굳기 전에 바로 스탬핑하여 주름을 형성시켜야 한다. 이 후, 상기 혼합물을 굳혀 주름진 인공 진피층을 형성하게 된다. 예컨대, 상기 스탬핑 후 세포배양용 인큐베이터(37℃, 5% CO2)에서 1시간 내지 5시간 동안 상기 스탬핑된 혼합물을 방치함으로써, 상기 혼합물을 굳혀 주름진 인공 진피층을 형성할 수 있다. 구체적으로, 상기 스탬핑된 혼합물이라 함은, 스탬프가 상기 혼합물 내에 스탬핑되어 있는 상태의 혼합물(주름형성 장치의 요철부가 상기 혼합물에 닿아 있는 상태의 혼합물)을 의미할 수 있다. 상기 스탬핑된 혼합물이 굳어 겔화가 완료되면, 상기 주름형성 장치를 제거함으로써 주름진 인공 진피층을 얻을 수 있다.When the artificial dermal mixture containing collagen and fibroblasts is added to the shoulder attachment device, the artificial dermal mixture is hardened over time (gelation), and wrinkles must be formed by stamping immediately before the mixture is hardened. After that, the mixture is solidified to form a wrinkled artificial dermal layer. For example, by leaving the stamped mixture for 1 to 5 hours in a cell culture incubator (37° C., 5% CO 2 ) after stamping, the mixture may be solidified to form a wrinkled artificial dermal layer. Specifically, the stamped mixture may refer to a mixture in which a stamp is stamped in the mixture (a mixture in which the uneven portions of the wrinkle forming apparatus are in contact with the mixture). When the stamped mixture is hardened and gelation is completed, the wrinkled artificial dermal layer can be obtained by removing the wrinkle forming device.

상기 인공 진피층을 형성하는 단계 이후, 상기 표피층을 형성하기 전에, 상기 인공 진피층 상에 섬유아세포 배양 배지(M106, Gibco)를 넣고 배양, 예컨대 약 5일 내지 9일, 약 6일 내지 약 8일, 또는 약 7일 정도 배양하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 표피층을 형성하기 전에, 상기 인공 진피층 상에 섬유아세포 배양 배지를 넣고 배양함으로써, 인공 진피층을 더욱 안정화시킬 수 있다.After the step of forming the artificial dermal layer, before forming the epidermal layer, fibroblast culture medium (M106, Gibco) is put on the artificial dermal layer and cultured, such as about 5 to 9 days, about 6 to about 8 days, Or it may further include the step of culturing about 7 days. Before forming the epidermal layer, the artificial dermal layer can be further stabilized by adding and culturing the fibroblast culture medium on the artificial dermal layer.

상기와 같이 인공 진피층이 형성되면 그 위에 각질형성세포를 적용한 후 배양하는 단계를 거친다. 즉, 상기 인공 진피층 위에 각질형성세포를 얹고 배양함으로써 상기 인공 진피층 위에 인공 표피층을 형성하게 된다. 상기 각질형성세포(keratinocyte)는 표피층 세포의 약 80% 내지 90%를 구성하며 표피층의 가장 깊은 층인 기저층에서의 유사분열을 통해 형성된 후 피부 표면을 향해 상층으로 올라온다.When the artificial dermal layer is formed as described above, keratinocytes are applied thereon and then cultured. That is, by placing and culturing keratinocytes on the artificial dermal layer, an artificial epidermal layer is formed on the artificial dermal layer. The keratinocytes constitute about 80% to 90% of the cells in the epidermal layer and are formed through mitosis in the basal layer, the deepest layer of the epidermal layer, and then rise to the upper layer toward the skin surface.

여기서 사용되는 각질형성세포는 예컨대 인간으로부터 유래한 각질형성세포일 수 있다. 상기 각질형성세포는 상용되는 어떠한 각질세포라도 사용될 수 있으며, 인간으로부터 직접 분리 또는 분리된 후 배양된 각질형성세포뿐만 아니라 다른 세포로부터 유도된 각질형성세포도 사용 가능하다. 상업적으로 입수 가능한 인간 각질형성세포로는 Lonza 에서 제공하는 NHEK-Neo, Pooled(Neonatal Normal Human Epidermal Keratinocytes, Pooled: 제품번호 00192906, 조직 취득 번호 P867, 백인들), NHEK-Neo(제품번호 00192907, 조직 취득 번호: 20647, 백인), NHEK-Adult(제품번호 00192627, 조직 취득 번호: 21155, 백인), NHEK-Neo(제품번호 00192907, 조직 취득 번호: 18080, 흑인)를 들 수 있다. 그리고 Thermo Fisher에서 제공하는 HEKn (Human Epidermal keratinocytes, neonatal: 제품번호 C0015C, 조직 취득 번호 1781129, 백인), HEKn(제품번호 C0015C, 조직 취득 번호 1803827, 흑인)을 들 수 있다. 각질형성세포가 기저막(base membrane)에 붙어서 증식하는 성질을 유지하기 위해서, 디쉬는 0.1% 내지 0.2% 젤라틴 혹은 0.1 mg/ml 내지 0.2 mg/ml 콜라겐 타입 IV으로 코팅해서 사용하는 것이 바람직하다. 상기 세포는 35℃ 내지 37℃, 5% 내지 10% CO2 인큐베이터에서 배양될 수 있으며 약 70% 내지 80% 의 밀도가 되었을 때 계대 배양을 할 수 있다. The keratinocytes used herein may be, for example, keratinocytes derived from humans. The keratinocytes may be any commercially available keratinocytes, and keratinocytes derived from other cells as well as keratinocytes cultured after being isolated or isolated directly from humans may be used. Commercially available human keratinocytes include NHEK-Neo, Pooled (Neonatal Normal Human Epidermal Keratinocytes, Pooled: Product No. 00192906, Tissue Acquisition No. P867, Whites), NHEK-Neo (Product No. 00192907, Tissue) provided by Lonza. Acquisition number: 20647, white), NHEK-Adult (product number 00192627, tissue acquisition number: 21155, white), NHEK-Neo (product number 00192907, tissue acquisition number: 18080, black). In addition, HEKn (Human Epidermal keratinocytes, neonatal: product number C0015C, tissue acquisition number 1781129, white) and HEKn (model number C0015C, tissue acquisition number 1803827, black) provided by Thermo Fisher can be mentioned. In order for keratinocytes to adhere to the base membrane and maintain the property of proliferation, the dish is preferably coated with 0.1% to 0.2% gelatin or 0.1 mg/ml to 0.2 mg/ml collagen type IV. The cells may be cultured in an incubator of 35° C. to 37° C., 5% to 10% CO 2 , and passage culture may be performed at a density of about 70% to 80%.

상기 각질형성세포는 예컨대 시딩(seeding)에 의해 상기 인공 진피층 위에 적용될 수 있으며, 배양 기간은 예컨대 1일 내지 4일, 1일 내지 3일, 또는 1일 내지 2일일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. The keratinocytes may be applied on the artificial dermal layer by, for example, seeding, and the culture period may be, for example, 1 to 4 days, 1 to 3 days, or 1 to 2 days, but is not limited thereto.

상기 각질형성세포의 적용 및 배양 단계를 거친 후 인공 표피층 생성 배지에서 배양하는 단계를 거친다.After applying the keratinocytes and culturing them, they are cultured in an artificial epidermal layer production medium.

여기서, "인공 표피층 생성 배지"는 인공피부에서 인공 표피층을 생성하기 위한 배지를 의미하며, 이는 당업계에 공지된 어떤 배지라도 사용될 수 있다. 예컨대, 상기 인공 표피층 생성 배지는 소 뇌하수체 추출물(Bovine Pitutary Extract, BPE), 인간의 상피성장인자(human epidermal growth factor, hEGF), 소의 인슐린(bovine Insulin), 하이드로코티손(Hydrocortisone), 및 젠타마이신 및 암포테리신-B(GA-1000 (Gentamicin, Amphotericin-B))을 포함하는 배지일 수 있다. 또한, 상기 성분에 에피네프린(Epinephrine) 및 트랜스페린(Transferrin)이 더 포함된 배지일 수도 있다. 상기 배지의 상업적 입수 가능한 예로서 CnT-3D-PR (CellnTEC사)를 들 수 있다.Here, the "artificial epidermal layer generation medium" refers to a medium for generating an artificial epidermal layer in artificial skin, and any medium known in the art may be used. For example, the artificial epidermal layer production medium is bovine pitutary extract (BPE), human epidermal growth factor (hEGF), bovine insulin, hydrocortisone, and gentamicin and It may be a medium containing amphotericin-B (GA-1000 (Gentamicin, Amphotericin-B)). In addition, it may be a medium further containing epinephrine and transferrin in the component. A commercially available example of the medium is CnT-3D-PR (CellnTEC).

예컨대, 상기 표피층을 형성하는 단계는 상기 주름진 인공 진피층 상에 각질형성세포를 시딩(seeding)하고, 이를 각질형성세포 배양 배지에서 배양하는 단계; 및 상기 배양 후, 이를 표피층 생성 배지에서 배양하는 단계를 포함할 수 있다.For example, the step of forming the epidermal layer may include seeding keratinocytes on the wrinkled artificial dermal layer and culturing them in a keratinocyte culture medium; And after the cultivation, it may include the step of culturing it in an epidermal layer generation medium.

상기 주름진 인공 진피층 상에 각질형성세포를 시딩(seeding)한 후에는 이를 각질형성세포 배양 배지(EpiLife, Gibco)에서 배양하는 단계는 1일 내지 3일 동안 실시할 수 있다.After seeding the keratinocytes on the wrinkled artificial dermal layer, the step of culturing them in a keratinocyte culture medium (EpiLife, Gibco) may be performed for 1 to 3 days.

상기 표피층 생성 배지에서 배양하는 단계는 상기 표피층 생성 배지(CnT-3D-PR, CellnTEC)에서 1일 내지 2일 동안 공기에 노출시키지 않고 배양한 후, 이를 다시 공기에 노출시켜 13일 내지 15일 동안 배양하는 단계일 수 있다. 상기와 같이 인공 진피층 형성 단계를 공기에 노출된 상태에서 진행할 경우, 이미 주름이 형성된 인공 진피층 상에 어떠한 형태 변화를 일으키지 않으면서 인공 표피층이 잘 형성될 수 있다. 또한, 상기 표피층 배양 과정에서 자연스러운 조직 수축이 발생되어, 실제 피부와 매우 유사한 주름을 가지는 인공피부의 제조가 가능할 수 있다.In the step of culturing in the epidermal layer generation medium, after culturing in the epidermal layer generation medium (CnT-3D-PR, CellnTEC) without exposure to air for 1 to 2 days, it is exposed to air again for 13 to 15 days. It may be a step of culturing. When the step of forming the artificial dermal layer as described above is performed while being exposed to air, the artificial epidermal layer can be well formed without causing any shape change on the artificial dermal layer in which wrinkles have been formed. In addition, natural tissue contraction occurs in the process of culturing the epidermal layer, so that it is possible to manufacture artificial skin having wrinkles very similar to actual skin.

즉, 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치를 사용하여 주름진 인공피부를 제조하기 위해서는, 전술한 인공피부 주름형성 장치를 구성하는 스탬프 하면에 포함된 요철부의 모양 및 상기 모양에 따른 특정 파라미터 충족 여부, 인공 진피층의 담지 부피량(또는 콜라겐 담지 부피량) 및 인공 표피층 형성 시 공기 중에 노출시켜 배양하는지 여부에 따라 주름진 인공피부가 원하는 형태로 잘 제조가 될 수 있다. 즉, 단순히 인공피부 주름형성 장치를 구성하는 스탬프의 모양만이 중요한 게 아니라, 상기 스탬프의 모양과 함께 인공 진피층 담지 부피량과 인공 표피층 형성 조건 등도 최종적으로 제조되는 주름진 인공피부의 형태에 중요한 영향을 끼칠 수 있다.That is, in order to manufacture wrinkled artificial skin using the artificial skin wrinkle forming apparatus according to one embodiment, the shape of the irregularities included in the lower surface of the stamp constituting the above-described artificial skin wrinkle forming apparatus and whether certain parameters according to the shape are satisfied. , Depending on the amount of the artificial dermal layer supported (or the amount of collagen supported) and whether the artificial epidermal layer is exposed to air and cultured, wrinkled artificial skin can be well prepared in a desired shape. In other words, not only the shape of the stamp constituting the artificial skin wrinkle forming apparatus is important, but the shape of the stamp, along with the amount of artificial dermal layer supported and the conditions for forming the artificial epidermal layer, have an important influence on the shape of the finally produced wrinkled artificial skin. It can hurt.

또 다른 구현예에 따르면, 전술한 주름진 인공피부 제조방법으로 제조된 주름진 인공피부를 제공한다.According to another embodiment, a wrinkled artificial skin manufactured by the above-described wrinkled artificial skin manufacturing method is provided.

또 다른 일 구현예에 따르면, 전술한 주름진 인공피부를 이용한 피부 주름 개선용 화합물의 스크리닝 방법을 제공한다. 예컨대, 상기 피부 주름 개선 화합물 스크리닝 방법은 주름진 인공피부에 화합물을 처리하는 단계 및 상기 화합물 처리 후 시간이 지남에 따라 상기 인공피부 내 주름이 없어지는지 여부를 확인하는 단계를 포함한다. According to another embodiment, there is provided a method for screening a compound for improving skin wrinkles using the aforementioned wrinkled artificial skin. For example, the method of screening for a compound for improving skin wrinkles includes treating a compound on wrinkled artificial skin and determining whether wrinkles in the artificial skin disappear over time after the compound treatment.

이하 실시예를 통하여 상술한 본 발명의 구현예를 보다 상세하게 설명한다. 다만 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.The embodiments of the present invention described above will be described in more detail through the following examples. However, the following examples are for illustrative purposes only and do not limit the scope of the present invention.

인공피부 주름형성 장치 제조Manufacturing of artificial skin wrinkle forming device

제조예 1Manufacturing Example 1

ABS 수지를 3D 프린터로 성형(Printed by Fortus 250mc, Stratasys)하여, 도 6에 기재된 그림과 동일한 구조를 가지는 스탬프를 포함하는 인공피부 주름형성 장치를 제조하였다. ABS resin was molded with a 3D printer (Printed by Fortus 250mc, Stratasys), and an artificial skin wrinkle forming apparatus including a stamp having the same structure as the picture shown in FIG. 6 was manufactured.

제조예 2Manufacturing Example 2

ABS 수지를 3D 프린터로 성형(Printed by Fortus 250mc, Stratasys)하여, 도 10에 기재된 그림과 동일한 구조를 가지는 스탬프를 포함하는 인공피부 주름형성 장치를 제조하였다.ABS resin was molded with a 3D printer (Printed by Fortus 250mc, Stratasys), and an artificial skin wrinkle forming apparatus including a stamp having the same structure as the picture shown in FIG. 10 was manufactured.

제조예 3Manufacturing Example 3

ABS 수지를 3D 프린터로 성형(Printed by Fortus 250mc, Stratasys)하여, 도 16에 기재된 그림과 동일한 구조를 가지는 스탬프를 포함하는 인공피부 주름형성 장치를 제조하였다.ABS resin was molded with a 3D printer (Printed by Fortus 250mc, Stratasys), and an artificial skin wrinkle forming apparatus including a stamp having the same structure as the picture shown in FIG. 16 was manufactured.

제조예 1 내지 제조예 3에 따른 인공피부 주름형성 장치를 구성하는 스탬프의 형상은 하기 표 1과 같다.The shapes of the stamps constituting the artificial skin wrinkle forming apparatus according to Preparation Examples 1 to 3 are shown in Table 1 below.

(단위: mm)(Unit: mm) 제조예 1Manufacturing Example 1 제조예 2Manufacturing Example 2 제조예 3Manufacturing Example 3 스탬프의 폭(S)Stamp width (S) 1010 1010 1212 요철부의 평균폭(w)Average width of the uneven part (w) 1One 22 1One 요철부의 평균길이(h)Average length of uneven part (h) 2.3252.325 2.52.5 33 요철부 간 평균거리(G)Average distance between irregularities (G) 00 00 22

제조예 4Manufacturing Example 4

ABS 수지를 3D 프린터로 성형(Printed by Fortus 250mc, Stratasys)하여, 하기 표 2 및 도 24에 기재된 그림과 동일한 구조를 가지는 스탬프를 포함하는 인공피부 주름형성 장치를 제조하였다.ABS resin was molded with a 3D printer (Printed by Fortus 250mc, Stratasys) to prepare an artificial skin wrinkle forming apparatus including a stamp having the same structure as the figures shown in Table 2 and FIG. 24 below.

제조예 5 내지 제조예 12Preparation Examples 5 to 12

인공피부 주름형성 장치를 구성하는 스탬프 형상을 하기 표 2 내지 표 4에 기재된 수치대로 한 것을 제외하고는 제조예 4와 동일하게 하여 인공피부 주름형성 장치를 제조하였다.An artificial skin wrinkle forming apparatus was manufactured in the same manner as in Preparation Example 4, except that the stamp shape constituting the artificial skin wrinkle forming apparatus was set to the numerical values shown in Tables 2 to 4 below.

(단위: mm)(Unit: mm) 제조예 4Manufacturing Example 4 제조예 5Manufacturing Example 5 제조예 6Manufacturing Example 6 스탬프의 폭(S)Stamp width (S) 66 88 77 요철부의 평균폭(w)Average width of the uneven part (w) 0.250.25 0.250.25 0.250.25 요철부의 평균길이(h)Average length of uneven part (h) 1One 22 33 요철부 간 평균거리(G)Average distance between irregularities (G) 00 00 00

(단위: mm)(Unit: mm) 제조예 7Manufacturing Example 7 제조예 8Manufacturing Example 8 제조예 9Manufacturing Example 9 스탬프의 폭(S)Stamp width (S) 33 88 77 요철부의 평균폭(w)Average width of the uneven part (w) 0.50.5 0.50.5 0.50.5 요철부의 평균길이(h)Average length of uneven part (h) 1One 22 33 요철부 간 평균거리(G)Average distance between irregularities (G) 00 00 00

(단위: mm)(Unit: mm) 제조예 10Manufacturing Example 10 제조예 11Manufacturing Example 11 제조예 12Manufacturing Example 12 스탬프의 폭(S)Stamp width (S) 88 88 88 요철부의 평균폭(w)Average width of the uneven part (w) 1One 1One 1One 요철부의 평균길이(h)Average length of uneven part (h) 1One 22 33 요철부 간 평균거리(G)Average distance between irregularities (G) 00 00 00

주름진 인공피부 제조Manufacturing wrinkled artificial skin

실시예 1Example 1

Transwell® (Corning사)에 콜라겐(Nutragen, Advanced Biomatrix사) 및 섬유아세포(NDFn, ThermoFisher사)의 혼합물을 600㎕ 부피량으로 담지한 후, 제조예 1의 인공피부 주름형성 장치를 상기 Transwell® (Corning)에 견착시킨 후, 상기 인공피부 주름형성 장치를 구성하는 스탬프가 상기 인공 진피층에 닿도록 스탬핑하였다. 세포배양용 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 상기 스탬프가 혼합물에 닿아 있는 상태 그대로 2시간 동안 방치하여 상기 혼합물을 굳힌 후(겔화), 상기 인공피부 주름형성 장치를 제거하여 주름진 인공 진피층을 제조하였다. 이 후, 상기 인공 진피층 상에 섬유아세포 배양 배지(M106, Gibco)를 넣고 7일 간 배양하여 인공 진피층을 안정화시켰다. 다음으로, 상기 인공 진피층 상에 각질형성세포(HEKn, ThermoFisher사)를 시딩(seeding)하고, 각질형성세포 배양 배지(EpiLife, Gibco)에서 1일 간 배양한 후, 표피층 생성 배지(CnT-3D-PR, (CellnTEC)에서 1일 간 배양하고, 이어서 동일한 표피층 생성 배지에서 14일 간 공기 중에서 노출시킨 상태로 배양하여 인공 표피층을 형성함으로써, 주름진 인공피부를 제조하였고, 이를 도 7에 나타내었다.Transwell ® (Corning) is loaded with a mixture of collagen (Nutragen, Advanced Biomatrix) and fibroblasts (NDFn, ThermoFisher) in a volume of 600 µl, and then the artificial skin wrinkle forming apparatus of Preparation Example 1 is used as the Transwell ® ( Corning), and then stamped so that the stamp constituting the artificial skin wrinkle forming apparatus contacts the artificial dermal layer. In a cell culture incubator at 37°C, 5% CO 2 , the stamp was left in contact with the mixture for 2 hours to harden the mixture (gelling), and then the artificial skin wrinkle-forming device was removed to prepare a wrinkled artificial dermal layer. . Thereafter, fibroblast culture medium (M106, Gibco) was put on the artificial dermal layer and cultured for 7 days to stabilize the artificial dermal layer. Next, keratinocytes (HEKn, ThermoFisher) are seeded on the artificial dermal layer, cultured in keratinocyte culture medium (EpiLife, Gibco) for 1 day, and then epidermal layer generation medium (CnT-3D- Incubated in PR, (CellnTEC) for 1 day, and then cultured in the same epidermal layer formation medium for 14 days in a state exposed to air to form an artificial epidermal layer, thereby preparing wrinkled artificial skin, which is shown in FIG. 7.

실시예 2Example 2

제조예 1의 인공피부 주름형성 장치 대신 제조예 2의 인공피부 주름형성 장치를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일하게 하여, 주름진 인공피부를 제조하였고, 이를 도 11에 나타내었다.A wrinkled artificial skin was manufactured in the same manner as in Example 1, except that the artificial skin wrinkle forming apparatus of Preparation Example 2 was used instead of the artificial skin wrinkle forming apparatus of Preparation Example 1, which is shown in FIG. 11.

실시예 3Example 3

제조예 1의 인공피부 주름형성 장치 대신 제조예 3의 인공피부 주름형성 장치를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일하게 하여, 주름진 인공피부를 제조하였고, 이를 도 17에 나타내었다.A wrinkled artificial skin was manufactured in the same manner as in Example 1, except that the artificial skin wrinkle forming apparatus of Preparation Example 3 was used instead of the artificial skin wrinkle forming apparatus of Preparation Example 1, which is shown in FIG. 17.

실시예 4Example 4

Transwell® (Corning사)에 콜라겐(Nutragen, Advanced Biomatrix사) 및 섬유아세포(NDFn, ThermoFisher사)의 혼합물을 600㎕ 부피량으로 담지한 후, 제조예 4의 인공피부 주름형성 장치를 상기 Transwell® (Corning)에 견착시킨 후, 상기 인공피부 주름형성 장치를 구성하는 스탬프가 상기 인공 진피층에 닿도록 스탬핑하였다. 세포배양용 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 상기 스탬프가 혼합물에 닿아 있는 상태 그대로 2시간 동안 방치하여 상기 혼합물을 굳힌 후(겔화), 상기 인공피부 주름형성 장치를 제거하여 주름진 인공 진피층을 제조하였다. 이 후, 상기 인공 진피층 상에 섬유아세포 배양 배지(M106,Gibco)를 넣고 7일 간 배양하여 인공 진피층을 안정화시켜, 주름진 인공피부 진피층을 제조하였고, 이를 도 25에 나타내었다.Transwell ® (Corning) was loaded with a mixture of collagen (Nutragen, Advanced Biomatrix) and fibroblasts (NDFn, ThermoFisher) in a volume of 600 µl, and then the artificial skin wrinkle forming apparatus of Preparation Example 4 was added to the Transwell ® ( Corning), and then stamped so that the stamp constituting the artificial skin wrinkle forming apparatus contacts the artificial dermal layer. In a cell culture incubator at 37°C, 5% CO 2 , the stamp was left in contact with the mixture for 2 hours to harden the mixture (gelling), and then the artificial skin wrinkle-forming device was removed to prepare a wrinkled artificial dermal layer. . Thereafter, fibroblast culture medium (M106, Gibco) was added to the artificial dermal layer and cultured for 7 days to stabilize the artificial dermal layer, thereby preparing a wrinkled artificial dermal dermal layer, which is shown in FIG. 25.

실시예 5Example 5

제조예 4의 인공피부 주름형성 장치 대신 제조예 5의 인공피부 주름형성 장치를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 동일하게 하여, 주름진 인공피부 진피층을 제조하였고, 이를 도 26에 나타내었다.A wrinkled artificial skin dermal layer was prepared in the same manner as in Example 4, except that the artificial skin wrinkle forming apparatus of Preparation Example 5 was used instead of the artificial skin wrinkle forming apparatus of Preparation Example 4, and this is shown in FIG. 26.

실시예 6Example 6

제조예 4의 인공피부 주름형성 장치 대신 제조예 6의 인공피부 주름형성 장치를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 동일하게 하여, 주름진 인공피부 진피층을 제조하였고, 이를 도 27에 나타내었다.A wrinkled artificial skin dermal layer was prepared in the same manner as in Example 4, except that the artificial skin wrinkle forming apparatus of Preparation Example 6 was used instead of the artificial skin wrinkle forming apparatus of Preparation Example 4, and this is shown in FIG.

실시예 7Example 7

제조예 4의 인공피부 주름형성 장치 대신 제조예 7의 인공피부 주름형성 장치를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 동일하게 하여, 주름진 인공피부 진피층을 제조하였고, 이를 도 28에 나타내었다.A wrinkled artificial skin dermal layer was prepared in the same manner as in Example 4, except that the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 7 was used instead of the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 4, which is shown in FIG.

실시예 8Example 8

제조예 4의 인공피부 주름형성 장치 대신 제조예 8의 인공피부 주름형성 장치를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 동일하게 하여, 주름진 인공피부 진피층을 제조하였고, 이를 도 29에 나타내었다.In the same manner as in Example 4, except that the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 8 was used instead of the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 4, a wrinkled artificial skin dermal layer was prepared, and is shown in FIG. 29.

실시예 9Example 9

제조예 4의 인공피부 주름형성 장치 대신 제조예 9의 인공피부 주름형성 장치를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 동일하게 하여, 주름진 인공피부 진피층을 제조하였고, 이를 도 30에 나타내었다.In the same manner as in Example 4, except that the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 9 was used instead of the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 4, a wrinkled artificial skin dermal layer was prepared, which is shown in FIG. 30.

실시예 10Example 10

제조예 4의 인공피부 주름형성 장치 대신 제조예 10의 인공피부 주름형성 장치를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 동일하게 하여, 주름진 인공피부 진피층을 제조하였고, 이를 도 31에 나타내었다.In the same manner as in Example 4, except that the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 10 was used instead of the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 4, a wrinkled artificial skin dermal layer was prepared, which is shown in FIG. 31.

실시예 11Example 11

제조예 4의 인공피부 주름형성 장치 대신 제조예 11의 인공피부 주름형성 장치를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 동일하게 하여, 주름진 인공피부 진피층을 제조하였고, 이를 도 32에 나타내었다.A wrinkled artificial skin dermal layer was prepared in the same manner as in Example 4, except that the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 11 was used instead of the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 4, which is shown in FIG. 32.

실시예 12Example 12

제조예 4의 인공피부 주름형성 장치 대신 제조예 12의 인공피부 주름형성 장치를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 동일하게 하여, 주름진 인공피부 진피층을 제조하였고, 이를 도 33에 나타내었다.In the same manner as in Example 4, except that the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 12 was used instead of the artificial skin wrinkle-forming device of Preparation Example 4, a wrinkled artificial skin dermal layer was prepared, which is shown in FIG. 33.

비교예 1Comparative Example 1

인공피부 주름형성 장치를 사용하지 않은 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일하게 하여, 주름지지 않은 인공피부를 제조하였고, 이를 도 14에 나타내었다.In the same manner as in Example 1, except that the artificial skin wrinkle-forming device was not used, artificial skin without wrinkles was prepared, which is shown in FIG. 14.

평가 1-1: 육안을 통한 주름여부 확인Evaluation 1-1: Checking the presence of wrinkles through the naked eye

실시예 1 내지 실시예 12 및 비교예 1의 인공피부(또는 인공피부 진피층)에 주름이 형성되었는지 여부를 육안으로 확인하였다(도 7, 도 11, 도 14, 도 17 및 도 25 내지 도 33 참조). 이로부터, 실시예 1 내지 실시예 12의 인공피부(또는 인공피부 진피층)는 비교예 1의 인공피부에 비해 패임이 발생된 것을 알 수 있으며, 따라서 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치를 이용하여 주름진 인공피부(또는 인공피부 진피층)를 얻을 수 있음을 확인할 수 있다. 구체적으로, 일 구현예에 따른 인공피부 주름형성 장치를 구성하는 스탬프의 폭, 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 폭 및 길이에 따라 실제 인간피부와 유사한 주름진 인공피부를 구현할 수 있는지 여부가 결정됨을 유추할 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 수학식 1을 만족시키는 스탬프를 하면에 포함하는 인공피부 주름형성 장치는 상기 수학식 1을 불만족시키는 스탬프를 하면에 포함하는 인공피부 주름형성 장치에 비해 실제 인간피부와 유사한 주름진 인공피부의 구현이 보다 용이함을 알 수 있다. 실시예 4 및 실시예 7의 경우 인공피부에 패임이 발생하기는 하나 그 정도가 미미하여 실제 인간피부에 존재하는 주름처럼 보이지 않고, 실시예 6, 실시예 9 및 실시예 12는 패임이 너무 깊어 실제 인간피부에 존재하는 주름처럼 보이지 않음을 알 수 있다.Whether wrinkles were formed in the artificial skin (or artificial skin dermal layer) of Examples 1 to 12 and Comparative Example 1 was visually checked (see FIGS. 7, 11, 14, 17, and 25 to 33). ). From this, it can be seen that the artificial skin (or artificial skin dermal layer) of Examples 1 to 12 has a dent compared to the artificial skin of Comparative Example 1, and thus the artificial skin wrinkle forming apparatus according to one embodiment is used. Thus, it can be confirmed that wrinkled artificial skin (or artificial skin dermal layer) can be obtained. Specifically, it is determined whether a wrinkled artificial skin similar to the actual human skin can be implemented according to the width of the stamp constituting the artificial skin wrinkle forming apparatus according to an embodiment, and the width and length of the irregularities included in the lower surface of the stamp. It can be inferred. More specifically, the artificial skin wrinkle forming apparatus including a stamp satisfying Equation 1 on the lower surface is similar to the artificial skin wrinkle forming apparatus including the stamp not satisfying Equation 1 on the lower surface. It can be seen that it is easier to implement the skin. In the case of Examples 4 and 7, the artificial skin is indented, but the degree is insignificant, so it does not look like wrinkles existing in the human skin. In Examples 6, 9 and 12, the indentation is too deep. It can be seen that it does not look like wrinkles present in human skin.

평가 1-2: OCT 단면 이미지를 통한 주름여부 확인Evaluation 1-2: Confirmation of wrinkles through OCT cross-section image

실시예 1, 실시예 2 및 비교예 1의 인공피부를 공초점레이저주사현미경(CLS microscope; confocal laser scanning microscope; LSM 710, Zeiss)를 사용하여 이미지를 촬영하여 그 결과를 하기 도 8, 도 12 및 도 15에 나타내었다. 또한, 실시예 1 내지 실시예 3의 인공피부를 광간섭단층촬영(OCT; Optical Coherence Tomography)하여 OCT 단면 이미지를 얻었고, 그 결과를 하기 도 9, 도 13 및 도 18에 나타내었다.The artificial skin of Example 1, Example 2, and Comparative Example 1 was photographed using a confocal laser scanning microscope (LSM 710, Zeiss), and the results are shown in FIGS. 8 and 12. And shown in FIG. 15. In addition, the artificial skin of Examples 1 to 3 was subjected to Optical Coherence Tomography (OCT) to obtain OCT cross-sectional images, and the results are shown in FIGS. 9, 13 and 18 below.

상기 도 8, 도 9, 도 12, 도 13, 도 15 및 도 18로부터, 실시예 1 내지 실시예 3의 인공피부는 주름이 형성되어 있음을 확인할 수 있으나, 비교예 1의 인공피부는 주름이 형성되어 있지 않음을 확인할 수 있다.8, 9, 12, 13, 15, and 18, it can be seen that the artificial skin of Examples 1 to 3 has wrinkles, but the artificial skin of Comparative Example 1 has wrinkles. It can be seen that it is not formed.

평가 2: 주름 개선 물질 스크리닝 가부 확인Evaluation 2: Confirmation of screening for anti-wrinkle substances

실시예 3의 주름진 인공피부에 주름개선 물질로 잘 알려져 있는 레티노산을 처리한 후, 실제로 상기 인공피부의 주름이 개선되는지 여부를 확인하였다. 도 19는 실시예 3의 주름진 인공피부에 레티노산 처리한 후의 사진이며, 도 20은 주름진 인공피부에 레티노산 처리한 후의 OCT 단면 이미지인데, 도 18 및 도 19로부터 레티노산이 주름진 인공피부의 주름을 확실하게 개선시켰음을 확인할 수 있었다. 따라서, 상기 레티노산 대신 다른 피부 주름 개선 효과를 가진다고 판단되는 후보물질을 사용함으로써, 주름 개선에 효과가 있는지 여부를 용이하게 스크리닝할 수 있다.After the wrinkled artificial skin of Example 3 was treated with retinoic acid, which is well known as a wrinkle-improving material, it was confirmed whether or not the wrinkles of the artificial skin were actually improved. 19 is a photograph after retinoic acid treatment on the wrinkled artificial skin of Example 3, and FIG. 20 is a cross-sectional view of the OCT after retinoic acid treatment on the wrinkled artificial skin. It was confirmed that the improvement was reliably. Therefore, by using a candidate substance judged to have other skin wrinkle improvement effects instead of the retinoic acid, it is possible to easily screen whether or not there is an effect on wrinkle improvement.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시예들에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리 범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구 범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리 범위에 속하는 것이다.Although the preferred embodiments of the present invention have been described in detail above, the scope of the present invention is not limited thereto, and various modifications and improvements by those skilled in the art using the basic concept of the present invention defined in the following claims are also present. It belongs to the scope of the invention.

Claims (23)

몰드 고정틀 및 상기 몰드 고정틀에 장착되는 몰드를 포함하고,
상기 몰드는 상기 몰드 고정틀에 장착되는 장착부 및 상기 장착부와 연결된 스탬프를 포함하고,
상기 스탬프는 상기 장착부와 직접 결합된 상면 및 상기 상면과 마주하는 하면을 포함하고,
상기 하면은 하나 이상의 요철부를 포함하는
인공피부 주름형성 장치.Including a mold fixing frame and a mold mounted on the mold fixing frame,
The mold includes a mounting portion mounted on the mold fixing frame and a stamp connected to the mounting portion,
The stamp includes an upper surface directly coupled to the mounting portion and a lower surface facing the upper surface,
The lower surface includes one or more irregularities
Artificial skin wrinkle forming device. 제1항에서,
상기 스탬프는 3mm 내지 12mm의 폭을 가지는 인공피부 주름형성 장치.In claim 1,
The stamp is an artificial skin wrinkle forming apparatus having a width of 3mm to 12mm. 제1항에서,
상기 요철부는 삼각형 형상을 가지는 인공피부 주름형성 장치.In claim 1,
The artificial skin wrinkle forming apparatus having a triangular shape. 제3항에서,
상기 스탬프의 하면은 1개 이상의 삼각형 형상의 요철부를 포함하고, 상기 삼각형 형상의 요철부의 폭 및 길이는 서로 동일한 인공피부 주름형성 장치.In paragraph 3,
The lower surface of the stamp includes one or more triangular-shaped irregularities, and the width and length of the triangle-shaped irregularities are the same as each other. 제3항에서,
상기 스탬프의 하면은 1개 이상의 삼각형 형상의 요철부를 포함하고, 상기 삼각형 형상의 요철부의 폭 및 길이는 서로 상이한 인공피부 주름형성 장치.In paragraph 3,
The lower surface of the stamp includes one or more triangular-shaped irregularities, and the width and length of the triangle-shaped irregularities are different from each other. 제3항에서,
상기 스탬프는 하기 수학식 1을 만족시키는 인공피부 주름형성 장치:
[수학식 1]
(w + h) x 2 ≤ S ≤ (w + h) x 5
상기 수학식 1에서,
S는 스탬프의 폭이고,
w는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균폭이고,
h는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균길이이다.In paragraph 3,
The stamp is an artificial skin wrinkle forming apparatus that satisfies the following Equation 1:
[Equation 1]
(w + h) x 2 ≤ S ≤ (w + h) x 5
In Equation 1,
S is the width of the stamp,
w is the average width of the irregularities included in the lower surface of the stamp,
h is the average length of the irregularities included in the lower surface of the stamp. 제3항에서,
상기 스탬프의 하면은 1개 이상의 요철부를 포함하면서, 상기 스탬프는 하기 수학식 2를 만족시키는 인공피부 주름형성 장치:
[수학식 2]
G x 2 < S
상기 수학식 2에서,
S는 스탬프의 폭이고,
G는 상기 스탬프의 하면에 포함된 1개 이상의 요철부 간 평균거리이다.In paragraph 3,
An artificial skin wrinkle forming apparatus that satisfies the following equation (2) while the lower surface of the stamp includes one or more irregularities:
[Equation 2]
G x 2 <S
In Equation 2,
S is the width of the stamp,
G is the average distance between one or more irregularities included in the lower surface of the stamp. 제1항에서,
상기 요철부는 반원 형상을 가지는 인공피부 주름형성 장치.In claim 1,
The artificial skin wrinkle forming apparatus having a semicircular shape of the uneven portion. 제8항에서,
상기 스탬프의 하면은 1개 이상의 반원 형상의 요철부를 포함하고, 상기 반원 형상의 요철부의 폭 및 길이는 서로 동일한 인공피부 주름형성 장치.In clause 8,
The lower surface of the stamp includes one or more semicircular irregularities, and the width and length of the semicircular irregularities are the same as each other. 제8항에서,
상기 스탬프의 하면은 1개 이상의 반원 형상의 요철부를 포함하고, 상기 반원 형상의 요철부의 폭 및 길이는 서로 상이한 인공피부 주름형성 장치.In clause 8,
The lower surface of the stamp includes one or more semicircular irregularities, and the width and length of the semicircular irregularities are different from each other. 제8항에서,
상기 스탬프의 하면은 1개 이상의 요철부를 포함하면서, 상기 스탬프는 하기 수학식 3을 만족시키는 인공피부 주름형성 장치:
[수학식 3]
w x 24 < S < w x 45
상기 수학식 3에서,
S는 스탬프의 폭이고,
w는 상기 스탬프의 하면에 포함된 요철부의 평균폭이다.In clause 8,
An artificial skin wrinkle forming apparatus that satisfies the following Equation 3 while the lower surface of the stamp includes one or more irregularities:
[Equation 3]
wx 24 <S <wx 45
In Equation 3,
S is the width of the stamp,
w is the average width of the irregularities included in the lower surface of the stamp. 제1항에서,
상기 하면은 3개 이상의 요철부를 포함하고,
상기 요철부는 제1 요철부, 제2 요철부 및 제3 요철부로 구성되며,
상기 제1 요철부 및 제3 요철부는 그 폭 및 길이가 서로 동일하고,
상기 제2 요철부의 폭은 상기 제1 요철부의 폭보다 두?恣?,
상기 제2 요철부의 길이는 상기 제1 요철부의 길이보다 길고,
상기 제2 요철부는 상기 제1 요철부 및 제3 요철부 사이에 위치하는 인공피부 주름형성 장치.In claim 1,
The lower surface includes three or more irregularities,
The uneven portion is composed of a first uneven portion, a second uneven portion, and a third uneven portion,
The first and third uneven portions have the same width and length,
The width of the second uneven portion is greater than the width of the first uneven portion? 恣?,
The length of the second uneven portion is longer than the length of the first uneven portion,
An artificial skin wrinkle forming apparatus disposed between the second uneven portion and the third uneven portion. 제1항에서,
상기 인공피부 주름형성 장치는 상기 몰드 고정틀이 견착되는 견착장치를 더 포함하는 인공피부 주름형성 장치.In claim 1,
The artificial skin wrinkle forming apparatus further comprises a shoulder attachment device to which the mold fixing frame is attached. 제1항에서,
상기 몰드 고정틀 및 몰드는 각각 독립적으로 아크릴로니트릴-부타디엔-스티렌(ABS) 수지 또는 폴리락트산(PLA) 수지로 제조되는 인공피부 주름형성 장치.In claim 1,
The mold holding frame and the mold are each independently made of acrylonitrile-butadiene-styrene (ABS) resin or polylactic acid (PLA) resin. 견착장치에 콜라겐 및 섬유아세포를 포함하는 인공 진피 혼합물을 투입하는 단계;
상기 혼합물이 굳기 전에 상기 인공피부 주름형성 장치의 요철부가 상기 굳지 않은 혼합물에 닿도록 스탬핑하는 단계;
상기 혼합물을 굳혀 주름진 인공 진피층을 형성하는 단계; 및
상기 주름진 인공 진피층 상에 표피층을 형성하는 단계
를 포함하는 주름진 인공피부 제조방법.Injecting an artificial dermal mixture containing collagen and fibroblasts into the shoulder attachment device;
Stamping so that the uneven portion of the artificial skin wrinkle-forming device contacts the unsolidified mixture before the mixture is hardened;
Solidifying the mixture to form a wrinkled artificial dermal layer; And
Forming an epidermal layer on the wrinkled artificial dermal layer
Wrinkled artificial skin manufacturing method comprising a. 제15항에서,
상기 견착장치에 상기 인공 진피 혼합물을 투입하는 단계에서, 상기 인공 진피 혼합물은 400㎕ 내지 800㎕의 부피로 투입되는 주름진 인공피부 제조방법.In paragraph 15,
In the step of injecting the artificial dermal mixture into the shoulder attachment device, the artificial dermal mixture is injected in a volume of 400 μl to 800 μl. 제15항에서,
상기 혼합물을 굳혀 주름진 인공 진피층을 형성하는 단계는 상기 스탬핑 후 세포배양용 인큐베이터에서 1시간 내지 5시간 동안 상기 혼합물을 방치하는 단계인 주름진 인공피부 제조방법.In paragraph 15,
The step of solidifying the mixture to form a wrinkled artificial dermal layer is the step of leaving the mixture in an incubator for cell culture for 1 to 5 hours after the stamping. 제15항에서,
상기 주름진 인공피부 제조방법은 상기 인공 진피층을 형성하는 단계 이후, 상기 표피층을 형성하기 전에, 상기 인공 진피층 상에 섬유아세포 배양 배지를 넣고 배양하는 단계를 더 포함하는 주름진 인공피부 제조방법.In paragraph 15,
The method for producing wrinkled artificial skin further comprises the step of adding and culturing a fibroblast culture medium on the artificial dermal layer after the step of forming the artificial dermal layer and before forming the epidermal layer. 제15항에서,
상기 표피층을 형성하는 단계는 상기 주름진 인공 진피층 상에 각질형성세포를 시딩(seeding)하고, 이를 각질형성세포 배양 배지에서 배양하는 단계; 및 상기 배양 후, 이를 표피층 생성 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 주름진 인공피부 제조방법.In paragraph 15,
The step of forming the epidermal layer may include seeding keratinocytes on the wrinkled artificial dermal layer, and culturing them in a keratinocyte culture medium; And culturing it in an epidermal layer production medium after the culture. 제19항에서,
상기 각질형성세포 배양 배지에서 배양하는 단계는 1일 내지 3일 동안 실시하는 주름진 인공피부 제조방법.In paragraph 19,
The step of culturing in the keratinocyte culture medium is a method for producing wrinkled artificial skin performed for 1 to 3 days. 제19항에서,
상기 표피층 생성 배지에서 배양하는 단계는 상기 표피층 생성 배지에서 공기에 노출시키지 않고 배양한 후, 이를 다시 공기에 노출시켜 배양하는 단계인 주름진 인공피부 제조방법.In paragraph 19,
The step of culturing in the epidermal layer generation medium is a step of culturing in the epidermal layer generation medium without exposure to air, and then culturing it by exposing it to air again. 제15항의 제조방법으로 제조된 주름진 인공피부.Wrinkled artificial skin manufactured by the manufacturing method of claim 15. 제22항의 주름진 인공피부에 화합물을 처리하는 단계 및
상기 화합물 처리 후 시간이 지남에 따라 상기 인공피부 내 주름이 없어지는지 여부를 확인하는 단계
를 포함하는 피부 주름 개선 화합물 스크리닝 방법.
Treating the compound on the wrinkled artificial skin of claim 22, and
Checking whether wrinkles in the artificial skin disappear over time after treatment with the compound
Skin wrinkle improvement compound screening method comprising a.
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JPH119339A (en) * 1997-06-20 1999-01-19 Kose Corp Artificial skin model and manufacture therefor
KR20190003061A (en) * 2017-06-30 2019-01-09 (주)아모레퍼시픽 Producing method of artificial skin and artificial skin
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