KR20210000088A - Method, composition and kit for screening fatty acid synthase inhibitor - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a method, a composition, and a kit for screening a fatty acid synthase inhibitor. In one aspect, simultaneous quantitative and qualitative analysis is possible, screening of a large amount of candidates can be performed faster as compared with existing molecular biological experimental methods, and it is possible to check whether a fatty acid synthase inhibitor candidate shows a significant expression change in a cell line using at least one selected from the group consisting of N1-acetyl spermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC (20:2), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18: 1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and vaccenic acid. Accordingly, the present invention provides a high level of screening efficiency with respect to a fatty acid synthase inhibitor. Accordingly, the present invention can be variously utilized for new drug development for fatty acid synthase inhibition.

Description

지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝을 위한 방법, 조성물 및 키트 {Method, composition and kit for screening fatty acid synthase inhibitor}[Method, composition and kit for screening fatty acid synthase inhibitor}

본 명세서에는 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝을 위한 방법, 조성물 및 키트가 개시된다.Disclosed herein are methods, compositions and kits for screening fatty acid synthase inhibitors.

지방산 합성 효소(Fatty acid synthase, FAS)를 비롯한 몇몇 지방대사효소가 암의 발생과 악성화를 촉진하는 것이 이미 알려져 있으며, 이들이 암 치료의 새로운 표적 분자가 될 가능성이 기대되고 있다. FAS는 아세틸-CoA(Acetyl-CoA), 말로닐-CoA(Malonyl-CoA)의 전구물질로부터 NADPH의 축합 반응에 의해 포화지방산인 팔미트산을 합성하는 효소이다. 정상세포에서는 간, 지방 조직, 분비유선에서 높은 발현을 볼 수 있지만, 그 이외의 조직에서는 거의 발현하지 않는다. FAS는 섭취하는 지방 및 호르몬 등에 의해 엄격하게 하향 조절되기 때문에 정상 조직에서는 낮은 수준으로 발현되는데 반해, 과증식 병변이나 진행성 암에서는 과발현 된다고 알려져 있다. 특히 유방암, 대장암, 위암, 갑상선암, 전립선암, 난소암 그리고 자궁내막암 등에서 높은 수준으로 발현된다고 보고되었다. It is already known that some fat metabolism enzymes, including fatty acid synthase (FAS), promote cancer incidence and malignancy, and they are expected to become new target molecules for cancer treatment. FAS is an enzyme that synthesizes palmitic acid, a saturated fatty acid, by condensation reaction of NADPH from precursors of acetyl-CoA and malonyl-CoA. In normal cells, high expression can be seen in liver, adipose tissue, and secretory mammary glands, but rarely in other tissues. Since FAS is strictly down-regulated by ingested fat and hormones, it is known to be overexpressed in hyperproliferative lesions or advanced cancers, whereas it is expressed at a low level in normal tissues. In particular, it has been reported to be expressed at high levels in breast cancer, colon cancer, gastric cancer, thyroid cancer, prostate cancer, ovarian cancer and endometrial cancer.

진행성 암 중에서 전립선암은 서구의 흔한 암종으로, 남성 암 발생률 및 암 사망률에 있어 2위를 차지한다. 최근 대한민국에서도 노인 인구의 증가와 식생활의 서구화로 인해 전립선암이 빠른 속도로 증가하고 있는 추세이다. 전립선암의 주된 조기 검진 도구는 혈중 전립선 특이 항원(PSA) 측정과 직장 수지 검사(digital rectal examination, DRE)이다. 임상적으로 유의한 전립선암 환자에서 혈중 PSA 수치가 높게 나오지만, PSA 수치가 높다고 모두 전립선암이라고 할 수는 없다. PSA 수치는 전립선암이 아니더라도 양성전립선비대증, 전립선염, 전립선 외상(자전거), 성관계 후 등에 의해서도 상승 될 수 있는 수치이기 때문이다. 그러나, PSA 수치가 낮다고 전립선암이 없다라고 단정지을 수도 없다는 문제점을 가지고 있다. 이렇듯, PSA 수치는 전립선암의 조기 검진에 가장 많이 사용됨에도 불구하고 전립선암 진단 및 이의 치료제의 스크리닝에 있어 PSA의 정확성(accuracy)을 논하기는 무척 어려운 상황이다. Among advanced cancers, prostate cancer is a common carcinoma in the West, and ranks second in male cancer incidence and cancer mortality. In recent years, prostate cancer is increasing rapidly in Korea due to the increase of the elderly population and the westernization of diet. The main early screening tools for prostate cancer are blood prostate specific antigen (PSA) measurement and digital rectal examination (DRE). Although clinically significant prostate cancer patients have high levels of PSA in blood, high levels of PSA do not all indicate prostate cancer. This is because PSA levels can be elevated even after benign prostatic hyperplasia, prostatitis, prostate trauma (bicycle), and after sex, even without prostate cancer. However, it has a problem that it cannot be concluded that there is no prostate cancer because the PSA level is low. As such, although PSA levels are most often used for early screening of prostate cancer, it is very difficult to discuss the accuracy of PSA in prostate cancer diagnosis and screening for its treatment.

FASNALL은 피리미딘계 FAS 억제제 혹은 다중 보조인자 결합(multiple cofactor binding) FAS 억제제, 보다 바람직하게는 싸이오펜 피리미딘(thiophene pyrimidine) 기반의 FAS 억제제로, 이전의 억제제들과는 다르게 퓨린 상호작용 부위(purine interaction site)를 대상으로 새로운 스캐폴드를 정의한 약물이다. 3가지의 FAS 활성부위인 KR(ketoacyl reductase), ER(enoyl reductase), MAT(Malonyl acetyl transferase)을 퓨린 함유 보조인자(purine-containing co-factor)로 사용하며 FASNALL은 FAS를 강력하게 선택적으로 억제하고 HER2+ 유방암 세포주에서 지질 프로파일의 변화를 유도하는 사실이 알려져 있다.FASNALL is a pyrimidine-based FAS inhibitor or a multiple cofactor binding FAS inhibitor, more preferably a thiophene pyrimidine-based FAS inhibitor. Unlike previous inhibitors, FASNALL is a purine interaction site (purine interaction). site), a drug that has defined a new scaffold. The three active sites of FAS, KR (ketoacyl reductase), ER (enoyl reductase), and MAT (malonyl acetyl transferase) are used as purine-containing co-factors, and FASNALL strongly and selectively inhibits FAS. It is known to induce a change in lipid profile in HER2+ breast cancer cell lines.

GSK2194069는 기질 중간체와 경쟁하며 KR 도메인을 대상으로 하는 강력한 FAS 억제제이다. TVB-3166은 가역적이고 선택적인 이미다조피리딘(imidazopyridine) 기반의 FAS 억제제이다. 지질 뗏목 구조를 파괴하고 세포 사멸을 유도하는 세포 신호 전달 경로의 변화를 일으킨다고 보고되었다.한편, 신약개발 시 약효를 평가하기 위한 표적항암제 및 약물에 대한 전 임상 연구는 주로 생체 외의 세포 실험과 동물실험을 통하여 진행되고 있다. 이 중 본 발명에서 적용한 대사체학(metabolomics) 기법은 세포 과정(Cellular process) 중 발생하는 소분자 대사산물 전체(대사체; metabolome)에 대하여 종합적인 연구를 하는 학문으로, 약효와 관련된 바이오마커 도출과 더불어 전체적인 세포 상태, 체계와 관련된 대사 상태 및 거시적 생화학적 사건 관측을 가능하게 한다. 따라서 대사체학 기법을 신약 개발 스크리닝에 도입하여 약물이 세포 내에 투입되어 변하는 대사체들을 스크리닝 함으로써 후보 물질에 대한 평가를 대량 신속처리(High-throughput) 방식으로 평가할 수 있다. 또한 기존 분자생물학적 실험법과 달리 정량 및 정성이 동시 분석이 가능하다는 점과 대량 분석이 가능하다는 점에서 장점을 가지고 있다. 비록 현재의 바이오마커 시장은 유전체 분야에 집중되어 있기는 하나, 최근 유전체 보다 유전자의 기능을 볼 수 있는 단백질체, 대사체를 이용한 오믹스(omics) 기반의 신약 개발 스크리닝의 가능성 및 개발이 대두 되고 있는 상황이다. GSK2194069 competes with the substrate intermediate and is a potent FAS inhibitor targeting the KR domain. TVB-3166 is a reversible and selective imidazopyridine based FAS inhibitor. It has been reported that it causes changes in the cellular signaling pathway that destroys the structure of the lipid raft and induces apoptosis. Meanwhile, preclinical studies on target anticancer agents and drugs to evaluate the efficacy of new drugs are mainly conducted in vitro cell experiments and animal studies. It is progressing through an experiment. Among them, the metabolomics technique applied in the present invention is a study that comprehensively studies the entire small molecule metabolites (metabolome) generated during the cellular process, along with deriving biomarkers related to drug efficacy. It enables observation of overall cellular status, system-related metabolic status and macroscopic biochemical events. Therefore, by introducing metabolomics technique to new drug development screening, by screening metabolites that change as drugs are injected into cells, the evaluation of candidate substances can be evaluated in a high-throughput method. In addition, unlike existing molecular biology experiments, it has advantages in that it enables simultaneous quantitative and qualitative analysis and that it enables mass analysis. Although the current biomarker market is concentrated in the genomic field, the possibility and development of new drug development screening based on omics using proteomics and metabolites that can see the function of genes rather than genomes are emerging. It is a situation.

이를 바탕으로 본 발명자들은 지방산 합성 효소 억제제를 스크리닝 할 수 있는 바이오마커를 대사체학 연구를 통해 도출하고, 이의 기능을 검증하고자 다양한 연구를 수행한 끝에, N1-아세틸스퍼미딘(N1-acetylspermidine), 스퍼미딘(spermidine), 스퍼민(spermine), L-트립토판(L-tryptophan), 8,11,14-에이코사트리엔산(8,11,14-eicosatrienoic acid), 도코사펜타엔산(docosapentaenoic acid), 리소PC(16:1)(LysoPC(16:1)), 리소PC(20:2)(LysoPC(20:2)), 리소PC(18:0)(LysoPC(18:0)), 리소PC(20:1)(LysoPC(20:1)), 리소PC(p-16:0)(LysoPC(p-16:0)), 팔미토일-L-카르니틴(palmitoyl-L-carnitine), PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2(prostaglandin A2), 스테아르산(stearic acid) 및 박센산(vaccenic acid)이 지방산 합성 효소 억제제의 처리에 따라 암세포 내에서 유의적인 변화를 나타내는 바이오마커임을 확인하고 본 발명을 완성하였다. Based on this, the present inventors derived biomarkers capable of screening fatty acid synthase inhibitors through metabolomics studies, and after conducting various studies to verify their functions, N1-acetylspermidine, spur Spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid (8,11,14-eicosatrienoic acid), docosapentaenoic acid , LysoPC(16:1)(LysoPC(16:1)), LysoPC(20:2)(LysoPC(20:2)), LysoPC(18:0)(LysoPC(18:0)), Liso PC(20:1)(LysoPC(20:1)), LysoPC(p-16:0)(LysoPC(p-16:0)), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid and baksenic acid The present invention was completed by confirming that (vaccenic acid) is a biomarker showing a significant change in cancer cells by treatment with a fatty acid synthase inhibitor.

KR 등록특허공보 10-2016-0096931호KR Registered Patent Publication No. 10-2016-0096931 KR 등록특허공보 10-2018-0010135호KR Registered Patent Publication No. 10-2018-0010135

일 측면에서, 본 발명의 목적은 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 특성을 활용하여 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝을 위한 방법, 조성물 및 키트를 제공하는 것이다.In one aspect, the object of the present invention is N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), Lyso PC (20:2), Lyso PC (18:0), Lyso PC (20:1), Lyso PC (p-16:0), Palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC ( 35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid and baksenic acid by utilizing one or more properties selected from the group consisting of fatty acid synthase inhibitors It is to provide methods, compositions and kits for screening.

상기 과제를 달성하기 위하여, 일 측면에서 본 발명은 암 세포주에 후보 물질을 처리하는 단계; 후보 물질을 처리한 암 세포주 내 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨(level)을 측정하는 단계; 및 측정한 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨을 후보 물질 처리 전의 레벨과 비교하는 단계;를 포함하는 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝 방법을 제공한다.In order to achieve the above object, in one aspect, the present invention comprises the steps of treating a candidate substance in a cancer cell line; N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lyso in cancer cell lines treated with candidate substances PC(20:2), LysoPC(18:0), LysoPC(20:1), LysoPC(p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC(19:1), PC(35 :4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, measuring one or more levels selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid; And the measured N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC (20:2) ), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE Comprising: (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, comparing at least one level selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid with the level prior to treatment with the candidate substance; A method for screening a fatty acid synthase inhibitor is provided.

또한, 일 측면에서 본 발명은 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 검출하는 물질을 유효성분으로 포함하는 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝용 조성물을 제공한다.In addition, in one aspect, the present invention is N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lyso PC(20:2), LysoPC(18:0), LysoPC(20:1), LysoPC(p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC(19:1), PC(35 :4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid and baksenic acid containing a substance that detects at least one selected from the group consisting of as an active ingredient It provides a composition for screening a fatty acid synthase inhibitor.

또한, 일 측면에서 본 발명은 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨(level) 측정부를 포함하는 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝 키트를 제공한다.In addition, in one aspect, the present invention is N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lyso PC(20:2), LysoPC(18:0), LysoPC(20:1), LysoPC(p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC(19:1), PC(35 :4), PE (18: 1), PE (34: 1), PE (37: 6), prostaglandin A2, stearic acid, and fatty acid synthesis comprising one or more level measuring units selected from the group consisting of baksenic acid Enzyme inhibitor screening kits are provided.

또한, 일 측면에서 본 발명은 지방산 합성 효소 억제제로 치료 받은 또는 지방산 합성 효소 억제제로 치료 중인 암 환자로부터 분리된 시료 내에서 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨을 측정하는 단계; 및 측정한 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨로 암 환자의 상태를 결정하는 단계;를 포함하는 암 환자의 상태 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공한다.In addition, in one aspect, the present invention provides N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11, in a sample isolated from a cancer patient treated with a fatty acid synthase inhibitor or treated with a fatty acid synthase inhibitor. 14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), lyso PC (18:0), lyso PC (20:1), lyso PC (p -16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2 , Measuring at least one level selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid; And the measured N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC (20:2) ), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, determining the condition of the cancer patient at one or more levels selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid; cancer comprising Provides a method of providing information for diagnosing the patient's condition.

일 측면에서, 정량 및 정성이 동시에 분석이 가능하며, 기존의 분자생물학적 실험법과 비교하여 보다 신속하게 대량의 후보 물질에 대한 스크리닝이 가능하고, N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 이용하여 지방산 합성 효소 억제제 후보 물질이 세포주 내에서의 유의적인 발현 변화를 나타내는 지 여부를 파악할 수 있게 하는 바 지방산 합성 효소 억제제에 대한 스크리닝 효율이 뛰어나다. 이에 따라, 본 발명은 지방산 합성 효소 억제 효과를 나타내는 신약 개발에서 다양하게 활용될 수 있다는 이점이 있다.In one aspect, quantitative and qualitative analysis can be performed at the same time, screening for a large amount of candidate substances is possible more quickly compared to conventional molecular biology experiments, and N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan , 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), lyso PC (18:0), lyso PC (20:1) , LysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37: 6), by using at least one selected from the group consisting of prostaglandin A2, stearic acid, and baksenic acid, it is possible to determine whether a candidate fatty acid synthase inhibitor exhibits a significant change in expression in the cell line. Excellent screening efficiency. Accordingly, the present invention has the advantage of being able to be used in various ways in the development of new drugs exhibiting a fatty acid synthase inhibitory effect.

도 1은 WST-1 분석 또는 CCK-8 분석을 통하여 LNCaP-ln3 세포주 및 MCF-7 세포주 각각에 대한 세포 성장 저해 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 전립선암 세포주(LNCaP-ln3)에 FAS 억제제를 처리한 후의 대사체 변화를 초고성능 액체크로마토그래피 질량분석기를 이용하여 분석한 결과를 크로마토그램으로 나타낸 도이다.
도 3은 유방암 세포주(MCF-7)에 FAS 억제제를 처리한 후의 대사체 변화를 초고성능 액체크로마토그래피 질량분석기를 이용하여 분석한 결과를 크로마토그램으로 나타낸 도이다.
도 4는 도 2에 나타낸 결과값에 대하여 PCA(principal component analysis) 통계 처리한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 도 3에 나타낸 결과값에 대하여 PCA 통계 처리한 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 도 4에 나타낸 결과값을 보정한 데이터 중 N1-아세틸스퍼미딘에 대하여 t-검증을 수행한 결과를 상자 수염 그림으로 나타낸 도이다.
도 7은 도 5에 나타낸 결과값을 보정한 데이터 중 N1-아세틸스퍼미딘에 대하여 t-검증을 수행한 결과를 상자 수염 그림으로 나타낸 도이다.
도 8은 도 4에 나타낸 결과값을 보정한 데이터 중 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판에 대하여 t-검증을 수행한 결과를 상자 수염 그림으로 나타낸 도이다.
도 9은 도 2에 나타낸 결과값을 보정한 데이터 중 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산에 대하여 t-검증을 수행한 결과를 heat map으로 나타낸 도이다.
도 10은 도 3에 나타낸 결과값을 보정한 데이터 중 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산에 대하여 t-검증을 수행한 결과를 heat map으로 나타낸 도이다.
도 11은 도 4 및 5에 나타낸 결과값을 보정한 데이터 중 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산에 대하여 t-검증을 수행한 결과를 표로 나타낸 도이다.
도 12는 MCF-7 세포에서 N1-아세틸스퍼미딘을 활용하여 FAS 억제제 스크리닝의 정확도를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 13은 MCF-7 세포에서 스퍼민을 활용하여 FAS 억제제 스크리닝의 정확도를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 14는 MCF-7 세포에서 스퍼미딘을 활용하여 FAS 억제제 스크리닝의 정확도를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 15는 MCF-7 세포에서 N-트립토판을 활용하여 FAS 억제제 스크리닝의 정확도를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 16은 LNCaP-ln3 세포에서 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민 또는 N-트립토판을 활용하여 FAS 억제제 스크리닝의 정확도를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 17은 MCF-7 세포 또는 LNCaP-ln3 세포에서 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민 및 L-트립토판의 조합을 활용하여 FAS 억제제 스크리닝의 정확도를 확인한 결과를 나타내는 도이다.1 is a diagram showing the results of confirming the cell growth inhibitory effect for each of the LNCaP-ln3 cell line and the MCF-7 cell line through WST-1 analysis or CCK-8 analysis.
FIG. 2 is a diagram showing the results of analyzing metabolite changes after treatment with an FAS inhibitor in a prostate cancer cell line (LNCaP-ln3) using an ultra-high performance liquid chromatography mass spectrometer.
3 is a diagram showing the results of analyzing metabolite changes after treatment with an FAS inhibitor in a breast cancer cell line (MCF-7) using an ultra-high performance liquid chromatography mass spectrometer as a chromatogram.
FIG. 4 is a diagram showing a result of statistical processing of principal component analysis (PCA) on the result value shown in FIG. 2.
5 is a diagram showing the results of PCA statistical processing on the result values shown in FIG. 3.
6 is a diagram showing the result of performing t-test on N1-acetylspermidine among data corrected for the result value shown in FIG. 4 in a box and whisker plot.
FIG. 7 is a diagram showing the results of performing t-test on N1-acetylspermidine among data corrected for the result values shown in FIG. 5 in a box and whisker plot.
FIG. 8 is a diagram showing the results of performing t-test on spermidine, spermine, and L-tryptophan among the corrected data for the result values shown in FIG. 4 in a box and whisker plot.
9 is 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), and lyso PC among data obtained by correcting the result values shown in FIG. (18:0), LysoPC (20:1), LysoPC (p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1 ), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and baksenic acid are t-tested as a heat map.
FIG. 10 shows 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), and lyso PC among data obtained by correcting the result values shown in FIG. (18:0), LysoPC (20:1), LysoPC (p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1 ), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and baksenic acid are t-tested as a heat map.
11 shows 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), and lyso PC (20:2) among the data obtained by correcting the result values shown in Figs. LysoPC(18:0), LysoPC(20:1), LysoPC(p-16:0), Palmitoyl-L-carnitine, PC(19:1), PC(35:4), PE(18 :1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and baksenic acid were t-tested as a table.
12 is a diagram showing the results of confirming the accuracy of FAS inhibitor screening using N1-acetylspermidine in MCF-7 cells.
13 is a diagram showing the results of confirming the accuracy of FAS inhibitor screening using spermin in MCF-7 cells.
14 is a diagram showing the results of confirming the accuracy of screening for an FAS inhibitor using spermidine in MCF-7 cells.
15 is a diagram showing the results of confirming the accuracy of FAS inhibitor screening using N-tryptophan in MCF-7 cells.
16 is a diagram showing the results of confirming the accuracy of FAS inhibitor screening using N1-acetylspermidine, spermidine, spermine or N-tryptophan in LNCaP-ln3 cells.
FIG. 17 is a diagram showing the results of confirming the accuracy of FAS inhibitor screening in MCF-7 cells or LNCaP-ln3 cells using a combination of N1-acetylspermidine, spermidine, spermine and L-tryptophan.

이하, 상세히 설명한다.Hereinafter, it will be described in detail.

일 측면에서 본 발명은 암 세포주에 후보 물질을 처리하는 단계; 후보 물질을 처리한 암 세포주 내 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨(level)을 측정하는 단계; 및 측정한 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨을 후보 물질 처리 전의 레벨과 비교하는 단계;를 포함하는 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝 방법을 제공한다.In one aspect, the present invention comprises the steps of treating a candidate substance to a cancer cell line; N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lyso in cancer cell lines treated with candidate substances PC(20:2), LysoPC(18:0), LysoPC(20:1), LysoPC(p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC(19:1), PC(35 :4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, measuring one or more levels selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid; And the measured N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC (20:2) ), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE Comprising: (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, comparing at least one level selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid with the level prior to treatment with the candidate substance; A method for screening a fatty acid synthase inhibitor is provided.

일 구현예에서, '스크리닝'은 특정한 대사체를 선별 및/또는 검출하는 조작에 관한 것이다. In one embodiment,'screening' relates to the manipulation of selecting and/or detecting a particular metabolite.

일 구현예에서 상기 스크리닝은 대사체의 레벨 변화를 측정하는 기기, 일례로 UHPLC-MS, LC-MS 등을 이용하여 수행하는 것을 포함할 수 있다.In one embodiment, the screening may include performing a metabolite level change using a device, for example, UHPLC-MS, LC-MS, or the like.

일 구현예에서, '지방산 합성 효소 억제제'는 FAS 억제제로도 지칭되는 것으로 지방산 합성 효소의 발현 또는 활성을 억제하는 물질이라면 제한 없이 포함하는 개념이다. 지방산 합성 효소는 각종 암에서 과발현되어 있는 것으로 알려진 물질로, 이에 일례로 상기 지방산 합성 효소 억제제는 암 치료제를 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 유방암 치료제, 대장암 치료제, 위암 치료제, 갑상선암 치료제, 전립선암 치료제, 난소암 치료제 및 자궁내막암 치료제 중 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. In one embodiment, the'fatty acid synthase inhibitor' is also referred to as an FAS inhibitor, and includes without limitation any substance that inhibits the expression or activity of fatty acid synthase. Fatty acid synthase is a substance known to be overexpressed in various cancers. For example, the fatty acid synthase inhibitor may include a cancer treatment, preferably breast cancer treatment, colon cancer treatment, stomach cancer treatment, thyroid cancer treatment, prostate It may be one or more of cancer treatment, ovarian cancer treatment, and endometrial cancer treatment, but is not limited thereto.

일 구현예에서, 상기 조성물은 유방암 세포주, 대장암 세포주, 위암 세포주, 갑상선암 세포주, 전립선암 세포주, 난소암 세포주 및 자궁내막암 세포주 중 하나 이상의 세포주를 유효성분으로 더 포함할 수 있고, 상기 각 세포들은 FAS 과발현 세포주일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 일 구현예에서, 상기 '과발현'은 FAS의 발현 수준이 각 조직의 정상 세포와 비교하여 1.1 배 이상, 1.2배 이상, 1.3배 이상, 1.4배 이상, 1.5배 이상, 1.6배 이상, 1.7배 이상, 1.8배 이상, 1.9배 이상, 2.0배 이상, 2.5배 이상, 3배 이상, 3.5배 이상, 4배 이상, 4.5배 이상, 5배 이상, 10배 이상, 15배 이상, 20배 이상, 25배 이상, 30배 이상, 35배 이상, 40배 이상, 45배 이상, 50배 이상 더 높은 것을 의미할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In one embodiment, the composition may further include one or more of a breast cancer cell line, a colon cancer cell line, a gastric cancer cell line, a thyroid cancer cell line, a prostate cancer cell line, an ovarian cancer cell line, and an endometrial cancer cell line as an active ingredient, and each of the cells They may be FAS overexpressing cell lines, but are not limited thereto. In one embodiment, the'overexpression' means that the expression level of FAS is 1.1 times or more, 1.2 times or more, 1.3 times or more, 1.4 times or more, 1.5 times or more, 1.6 times or more, 1.7 times or more compared to normal cells of each tissue. , 1.8 times or more, 1.9 times or more, 2.0 times or more, 2.5 times or more, 3 times or more, 3.5 times or more, 4 times or more, 4.5 times or more, 5 times or more, 10 times or more, 15 times or more, 20 times or more, 25 It may mean more than times, more than 30 times, more than 35 times, more than 40 times, more than 45 times, more than 50 times higher, but is not limited thereto.

일 구현예에서, 전립선암 세포주는 LNCaP-ln3 세포주일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서 사용한 LNCaP-ln3 세포주는 기탁번호 KCTC 13846BP로 기탁된 세포주이다.In one embodiment, the prostate cancer cell line may be an LNCaP-ln3 cell line, but is not limited thereto. The LNCaP-ln3 cell line used in the present invention is a cell line deposited with the accession number KCTC 13846BP.

일 구현예에서, 유방암 세포주는 유방상피내암 세포주일 수 있고, 보다 바람직하게는 MCF-7 세포주일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 유방상피내암 세포주는 유방암상피세포주로 지칭될 수도 있으며, 본 발명에서 사용한 MCF-7 세포주는 기탁번호 KCTC 13643BP로 기탁된 세포주이다.In one embodiment, the breast cancer cell line may be a breast cancer cell line, more preferably an MCF-7 cell line, but is not limited thereto. The breast cancer cell line may be referred to as a breast cancer epithelial cell line, and the MCF-7 cell line used in the present invention is a cell line deposited under the accession number KCTC 13643BP.

일 구현예에서, 상기 방법은 상기 세포주에서 상기 N1-아세틸스퍼미딘, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 후보물질 처리 전과 비교하여 높아지면, 바람직하게는 바람직하게는 5% 이상, 6% 이상, 7% 이상, 8% 이상, 9% 이상, 10% 이상, 11% 이상, 12% 이상, 13% 이상, 14% 이상, 15% 이상, 16% 이상, 17% 이상, 18% 이상, 19% 이상, 20% 이상, 21% 이상, 22% 이상, 23% 이상, 24% 이상, 25% 이상, 26% 이상, 27% 이상, 28% 이상, 29% 이상, 30% 이상, 31% 이상, 32% 이상, 50% 이상, 100% 이상, 200% 이상, 300% 이상, 500% 이상, 600% 이하로 높아지면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 적합하다고 판단하고, 후보물질 처리 전과 비교하여 낮아지거나 동일하면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 부적합하다고 판단하는 단계;를 더 포함할 수 있다.In one embodiment, the method comprises the N1-acetylspermidine, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), and lysoPC (20:2) in the cell line. ), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE If at least one level selected from the group consisting of (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid and baksenic acid is higher than before treatment with the candidate, it is preferably preferred. More than 5%, more than 6%, more than 7%, more than 8%, more than 9%, more than 10%, more than 11%, more than 12%, more than 13%, more than 14%, more than 15%, more than 16%, 17% or more, 18% or more, 19% or more, 20% or more, 21% or more, 22% or more, 23% or more, 24% or more, 25% or more, 26% or more, 27% or more, 28% or more, 29% If the concentration is higher than, 30% or more, 31% or more, 32% or more, 50% or more, 100% or more, 200% or more, 300% or more, 500% or more, 600% or less, the candidate substance is considered suitable as a fatty acid synthase inhibitor. It may further include a step of determining that the candidate material is unsuitable as a fatty acid synthase inhibitor if it is lower than or equal to the candidate material before treatment.

일 구현예에서, 상기 방법은 상기 세포주에서 상기 스퍼미딘, 스퍼민 및 L-트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 후보물질 처리 전과 비교하여 낮아지면, 바람직하게는 바람직하게는 5% 이상, 6% 이상, 7% 이상, 8% 이상, 9% 이상, 10% 이상, 11% 이상, 12% 이상, 13% 이상, 14% 이상, 15% 이상, 16% 이상, 17% 이상, 18% 이상, 19% 이상, 20% 이상, 21% 이상, 22% 이상, 23% 이상, 24% 이상, 25% 이상, 26% 이상, 27% 이상, 28% 이상, 29% 이상, 30% 이상, 31% 이상, 32% 이상, 50% 이상, 100% 이상, 200% 이상, 300% 이상, 500% 이상, 600% 이하로 낮아지면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 적합하다고 판단하고, 후보물질 처리 전과 비교하여 높아지거나 동일하면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 부적합하다고 판단하는 단계;를 더 포함할 수 있다.In one embodiment, the method is, when the level of at least one selected from the group consisting of spermidine, spermine and L-tryptophan in the cell line is lowered compared to before treatment with the candidate substance, preferably 5% or more, 6%. More than, 7% or more, 8% or more, 9% or more, 10% or more, 11% or more, 12% or more, 13% or more, 14% or more, 15% or more, 16% or more, 17% or more, 18% or more, 19% or more, 20% or more, 21% or more, 22% or more, 23% or more, 24% or more, 25% or more, 26% or more, 27% or more, 28% or more, 29% or more, 30% or more, 31% If it is lowered to above, 32% or more, 50% or more, 100% or more, 200% or more, 300% or more, 500% or more, 600% or less, the candidate substance is judged to be suitable as a fatty acid synthase inhibitor, and compared with before treatment with the candidate substance. It may further include a step of determining that the candidate substance is unsuitable as a fatty acid synthase inhibitor if it is higher or equal.

일 구현예에서, 상기 후보 물질 처리 전 후의 대사체의 레벨 변화값에 대하여 t-검증을 수행한 후 p값이 0.15 이하, 0.14 이하, 0.13 이하, 0.12 이하, 0.11 이하, 0.1 이하, 0.09 이하, 0.08 이하, 0.07 이하, 0.06 이하, 0.05 이하, 0.04 이하, 0.03 이하, 0.02, 0.01 이하의 값을 나타낼 때 그 물질을 유의적인 변화를 나타내는 대사체로 분류할 수 있고, 바람직하게는 0.05 이하의 값을 나타낼 때 그 물질을 유의적인 변화를 나타내는 대사체로 분류할 수 있다. In one embodiment, a p value of 0.15 or less, 0.14 or less, 0.13 or less, 0.12 or less, 0.11 or less, 0.1 or less, 0.09 or less, after performing t-test on the level change value of the metabolite before and after treatment with the candidate substance, When a value of 0.08 or less, 0.07 or less, 0.06 or less, 0.05 or less, 0.04 or less, 0.03 or less, 0.02 or 0.01 or less is displayed, the substance can be classified as a metabolite showing a significant change, preferably a value of 0.05 or less. When presented, the substance can be classified as a metabolite that exhibits significant changes.

일 측면에서 본 발명은 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 검출하는 물질을 유효성분으로 포함하는 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝용 조성물을 제공한다.In one aspect, the present invention provides N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC ( 20:2), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4 ), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and fatty acid synthesis comprising a substance that detects at least one selected from the group consisting of baksenic acid as an active ingredient It provides a composition for screening an enzyme inhibitor.

일 구현예에서, 'N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산 중 하나 이상을 검출하는 물질'은 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 검출할 수 있는 물질이라면 어느 것이든 제한 없이 포함된다. 일례로 상기 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상 을 검출하는 물질은 항체, ELISA 키트 내 효소 등일 수 있다.In one embodiment,'N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC ( 20:2), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4 ), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, a substance that detects at least one of stearic acid and baksenic acid'N1-acetylspermidine, spermidine, spermine , L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), lyso PC (18:0), lyso PC ( 20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), Any substance capable of detecting one or more selected from the group consisting of PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid and baksenic acid is included without limitation. For example, the N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC (20:2) ), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, a substance that detects one or more selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid may be an antibody, an enzyme in an ELISA kit, or the like.

일 구현예에서, 상기 조성물은 유방암 세포주, 대장암 세포주, 위암 세포주, 갑상선암 세포주, 전립선암 세포주, 난소암 세포주 및 자궁내막암 세포주 중 하나 이상의 세포주를 더 포함할 수 있다. In one embodiment, the composition may further include at least one of a breast cancer cell line, a colon cancer cell line, a gastric cancer cell line, a thyroid cancer cell line, a prostate cancer cell line, an ovarian cancer cell line, and an endometrial cancer cell line.

일 측면에서 본 발명은 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨(level) 측정부를 포함하는 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝 키트를 제공한다.In one aspect, the present invention provides N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC ( 20:2), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4 ), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and fatty acid synthase inhibitor comprising at least one level measurement unit selected from the group consisting of baksenic acid Provides a screening kit of.

일 구현예에서, 'N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨'은 시료 내에 포함되는 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 농도, 질량 등 객관적인 수치 및 해당 물질의 타 물질에 대한 상대량을 모두 포함하는 최광의의 의미이다.In one embodiment,'N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC ( 20:2), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4 ), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, at least one level selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid, N1-acetylspermidine contained in the sample , Spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), lyso PC (18:0) ), lyso PC (20:1), lyso PC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE ( 34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid and baksenic acid, one or more objective values such as concentration, mass, etc., and the relative amount of the substance to other substances. Meaning.

일 구현예에서, 상기 키트는 유방암 세포주, 대장암 세포주, 위암 세포주, 갑상선암 세포주, 전립선암 세포주, 난소암 세포주 및 자궁내막암 세포주 중 하나 이상의 세포주를 더 포함할 수 있다. In one embodiment, the kit may further include at least one of a breast cancer cell line, a colon cancer cell line, a gastric cancer cell line, a thyroid cancer cell line, a prostate cancer cell line, an ovarian cancer cell line, and an endometrial cancer cell line.

일 구현예에서, 상기 키트의 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨 측정부는 상기 기술한 스크리닝용 조성물을 포함하는 것일 수 있다. In one embodiment, the kit of N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lyso PC(20:2), LysoPC(18:0), LysoPC(20:1), LysoPC(p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC(19:1), PC(35 :4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid and at least one level measuring unit selected from the group consisting of baksenic acid, the above-described composition for screening It may be included.

일 구현예에서, 상기 키트는 FAS 억제제를 스크리닝할 수 있는 방법, 또는 스크리닝 대상이 되는 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상에 대한 설명을 포함하는 지시서를 더 포함할 수 있다. 일례로 상기 지시서는 팜플렛 또는 전단지 형태의 안내 책자, 키트에 부착된 라벨, 및 키트를 포함하는 패키지의 표면상에 설명을 포함할 수 있으며, 인터넷과 같이 전기 매체를 통해 공개되거나 제공되는 정보를 포함하는 안내서 등을 더 포함할 수 있다.In one embodiment, the kit is a method capable of screening an FAS inhibitor, or N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, doco Sapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), lyso PC (18:0), lyso PC (20:1), lyso PC (p-16:0), palmitoyl- Group consisting of L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid and baksenic acid It may further include an instruction including a description of one or more selected from. For example, the instruction may include a brochure in the form of a pamphlet or flyer, a label attached to the kit, and a description on the surface of the package including the kit, and include information disclosed or provided through an electronic medium such as the Internet. It may further include a guide or the like.

일 측면에서 본 발명은 지방산 합성 효소 억제제로 치료 받은 또는 지방산 합성 효소 억제제로 치료 중인 암 환자로부터 분리된 시료의 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨을 측정하는 단계; 및 측정한 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨로 암 환자의 상태를 결정하는 단계;를 포함하는 암 환자의 상태 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공한다.In one aspect, the present invention provides N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eco of a sample isolated from a cancer patient treated with a fatty acid synthase inhibitor or treated with a fatty acid synthase inhibitor. Satrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), lyso PC (18:0), lyso PC (20:1), lyso PC (p-16: 0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid And measuring one or more levels selected from the group consisting of baksenic acid. And the measured N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC (20:2) ), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, determining the condition of the cancer patient at one or more levels selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid; cancer comprising Provides a method of providing information for diagnosing the patient's condition.

일 구현예에서, 상기 암 환자는 유방암, 대장암, 위암, 갑상선암, 전립선암, 난소암 및 자궁내막암 중 하나 이상의 암에 대한 환자일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In one embodiment, the cancer patient may be a patient for one or more of breast cancer, colon cancer, gastric cancer, thyroid cancer, prostate cancer, ovarian cancer, and endometrial cancer, but is not limited thereto.

일 구현예에서, 상기 시료는 암 환자로부터 채취한 시료일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 생체 시료는 암 환자로부터 채취한 혈액, 혈청, 혈장, 뇨 등을 포함할 수 있다.In one embodiment, the sample may be a sample taken from a cancer patient. More specifically, the biological sample may include blood, serum, plasma, urine, and the like collected from a cancer patient.

일 구현예에서, 상기 방법은 상기 암 환자에서 분리된 시료 내에 상기 N1-아세틸스퍼미딘, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 암 치료 전과 비교하여 높아지면, 바람직하게는 5% 이상, 6% 이상, 7% 이상, 8% 이상, 9% 이상, 10% 이상, 11% 이상, 12% 이상, 13% 이상, 14% 이상, 15% 이상, 16% 이상, 17% 이상, 18% 이상, 19% 이상, 20% 이상, 21% 이상, 22% 이상, 23% 이상, 24% 이상, 25% 이상, 26% 이상, 27% 이상, 28% 이상, 29% 이상, 30% 이상, 31% 이상, 32% 이상, 50% 이상, 100% 이상, 200% 이상, 300% 이상, 500% 이상, 600% 이하로 높아지면 암 환자의 상태가 개선되었다 판단하고, 암 치료 후와 비교하여 낮아지거나 동일하면 암 치료 상태가 나빠졌다고 판단하는 단계;를 더 포함할 수 있다.In one embodiment, the method comprises the N1-acetylspermidine, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), and lyso in a sample isolated from the cancer patient. PC(20:2), LysoPC(18:0), LysoPC(20:1), LysoPC(p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC(19:1), PC(35 :4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, if one or more levels selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid are elevated compared to before cancer treatment, Preferably, 5% or more, 6% or more, 7% or more, 8% or more, 9% or more, 10% or more, 11% or more, 12% or more, 13% or more, 14% or more, 15% or more, 16% or more , 17% or more, 18% or more, 19% or more, 20% or more, 21% or more, 22% or more, 23% or more, 24% or more, 25% or more, 26% or more, 27% or more, 28% or more, 29 % Or more, 30% or more, 31% or more, 32% or more, 50% or more, 100% or more, 200% or more, 300% or more, 500% or more, 600% or less, the condition of the cancer patient has improved. It may further include a step of determining that the cancer treatment state has deteriorated if it is lower than or equal to that after the cancer treatment.

일 구현예에서, 상기 방법은 상기 암 환자에서 분리된 시료 내에 상기 스퍼미딘, 스퍼민 및 L-트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 후보물질 처리 전과 비교하여 낮아지면, 바람직하게는 바람직하게는 5% 이상, 6% 이상, 7% 이상, 8% 이상, 9% 이상, 10% 이상, 11% 이상, 12% 이상, 13% 이상, 14% 이상, 15% 이상, 16% 이상, 17% 이상, 18% 이상, 19% 이상, 20% 이상, 21% 이상, 22% 이상, 23% 이상, 24% 이상, 25% 이상, 26% 이상, 27% 이상, 28% 이상, 29% 이상, 30% 이상, 31% 이상, 32% 이상, 50% 이상, 100% 이상, 200% 이상, 300% 이상, 500% 이상, 600% 이하로 낮아지면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 적합하다고 판단하고, 암 치료 후와 비교하여 낮아지거나 동일하면 암 치료 상태가 나빠졌다고 판단하는 단계;를 더 포함할 수 있다.In one embodiment, the method is, if at least one level selected from the group consisting of spermidine, spermine and L-tryptophan in a sample isolated from the cancer patient is lowered compared to before treatment with the candidate substance, preferably 5 % Or more, 6% or more, 7% or more, 8% or more, 9% or more, 10% or more, 11% or more, 12% or more, 13% or more, 14% or more, 15% or more, 16% or more, 17% or more , 18% or more, 19% or more, 20% or more, 21% or more, 22% or more, 23% or more, 24% or more, 25% or more, 26% or more, 27% or more, 28% or more, 29% or more, 30 % Or more, 31% or more, 32% or more, 50% or more, 100% or more, 200% or more, 300% or more, 500% or more, 600% or less, the candidate is considered to be suitable as a fatty acid synthase inhibitor, It may further include a step of determining that the cancer treatment state has deteriorated if it is lower than or equal to that after the cancer treatment.

중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생락하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다. 또한, 본 명세서에 기재된 '또는' 이라는 표현은, 별도의 언급이 없다면, '및'을 포함하는 개념으로 이해하여야 할 것이다.Redundant content is omitted in consideration of the complexity of the present specification, and terms not otherwise defined herein have meanings commonly used in the technical field to which the present invention belongs. In addition, the expression'or' described in the present specification should be understood as a concept including'and' unless otherwise stated.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples will be described in detail to aid understanding of the present invention. However, the following examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to the following examples. The embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those of ordinary skill in the art.

실시예 1. 인간 유래 암 세포주의 지방산 합성 효소 억제제(FAS 억제제, Fatty acid synthase inhibitor) 처리에 따른 세포 생존률 변화 확인Example 1. Confirmation of changes in cell viability according to treatment with a fatty acid synthase inhibitor (FAS inhibitor, Fatty acid synthase inhibitor) in a human-derived cancer cell line

인간 유래 세포주인 LNCaP-ln3 및 MCF-7가 FAS 억제제의 스크리닝에 적합한 세포주로 활용될 수 있을지 여부를 확인하기 위하여, 상기 각 세포주에 공지된 FAS 억제제를 처리한 후 각각 WST-1 분석 및 CCK-8 분석을 수행하여 세포 생존률 변화를 확인하였다.In order to confirm whether human-derived cell lines, LNCaP-ln3 and MCF-7, can be used as cell lines suitable for screening FAS inhibitors, each cell line was treated with a known FAS inhibitor, and then WST-1 assay and CCK- 8 Analysis was performed to confirm the change in cell viability.

1-1. WST-1 assay을 통한 FAS 억제제 처리에 따른 인간 유래 세포주(LNCaP-ln3)의 세포 생존률 확인1-1. Confirmation of cell viability of human-derived cell line (LNCaP-ln3) according to FAS inhibitor treatment through WST-1 assay

LNCaP-ln3 세포주가 FAS 효소 억제제 평가 실험에 유용한 세포주인지 판단하기 위해 이 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 세포 성장률 검사인 WST-1 검사를 시행하여 FASNALL, GSK2194069 및 TVB-3166의 농도별 LNCaP-ln3 세포주의 성장 저해율을 확인하였다.To determine whether the LNCaP-ln3 cell line is a useful cell line for the FAS enzyme inhibitor evaluation experiment, the WST-1 test, a cell growth rate test commonly used in this technology field, was performed and LNCaP-ln3 cell lines by concentration of FASNALL, GSK2194069 and TVB-3166 The growth inhibition rate was confirmed.

우선, 한국생명공학연구원에 기탁번호 KCTC 13846BP로 기탁된 LNCaP-ln3 암 세포를 37℃ 온도의 5% 이산화탄소 세포배양기에 10 %의 소태아혈청과 1 %의 항생제가 포함된 RPMI 배지를 사용하여 96 웰 플레이트의 각 웰에 세포수가 7.4 x 103개가 되도록 배양한다. 그리고 나서 세포의 성장이 안정화된 이후에, 대조군에는 실험군 대신에 총 배지의 0.01%가 되는 량의 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 첨가하여 24시간 배양한다. 그리고 실험군으로는 총 배지의 0.01 %이자 농도는 0, 1, 5, 10, 50 μM이 되도록 FASNALL, GSK2194069 및 TVB-3166 각각을 처리하고, 양성 대조군으로는 10 μM의 paclitaxel을 첨가한 뒤 24시간 동안 배양한다. 약물 처리 시간이 지난 후 WST-1 시약을 배지의 10%가 되도록 넣어준다. WST-1 시약을 처리한 배지에 2시간 배양 후, ELISA 기기를 이용하여 470 nm에서 측정한다. 그 결과로서 세포 성장 그래프를 도 1에 나타내었다. First, LNCaP-ln3 cancer cells deposited with the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology with the deposit number KCTC 13846BP were used in a 5% carbon dioxide cell incubator at 37°C using RPMI medium containing 10% fetal bovine serum and 1% antibiotic. Incubate so that the number of cells is 7.4 x 10 3 in each well of the well plate. Then, after the cell growth is stabilized, DMSO (dimethyl sulfoxide) in an amount equal to 0.01% of the total medium is added to the control group instead of the experimental group and cultured for 24 hours. In the experimental group, FASNALL, GSK2194069, and TVB-3166 were each treated so that the concentration of 0.01% of the total medium was 0, 1, 5, 10, and 50 μM, and as a positive control group, 10 μM of paclitaxel was added for 24 hours. While incubating. After the drug treatment time has elapsed, the WST-1 reagent is added to 10% of the medium. After incubation for 2 hours in a medium treated with the WST-1 reagent, measurement is performed at 470 nm using an ELISA instrument. As a result, a cell growth graph is shown in FIG. 1.

도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, FAS 억제제인 FASNALL, GSK2194069 및 TVB-3166 각각을 5 내지 50 μM 농도로 처리하였을 때 세포 성장을 유의하게 저해하는 것을 확인하였다(student’s t-test, p value <0.05).As can be seen in Figure 1, it was confirmed that the FAS inhibitors FASNALL, GSK2194069, and TVB-3166 significantly inhibited cell growth when treated at a concentration of 5 to 50 μM (student's t-test, p value <0.05 ).

또한, FASNALL 처리 후 24시간 배양시 0, 1, 5, 10, 50 μM 농도를 처리한 각각의 경우에 대조군과 비교하여 각각 74.53, 47.20, 36.88, 32.32 %의 세포 성장률을 나타내었다. 양성 대조군인 paclitaxel 처리시 세포 성장률은 1.83 % 였다. In addition, when cultured for 24 hours after FASNALL treatment, in each case treated with 0, 1, 5, 10, and 50 μM concentrations, cell growth rates of 74.53, 47.20, 36.88, and 32.32% were respectively shown compared to the control group. The cell growth rate was 1.83% when treated with paclitaxel, a positive control.

GSK2194069 처리 후 24시간 배양시 0, 1, 5, 10, 50 μM 농도를 처리한 각각의 경우에 대조군과 비교하여 각각 100, 103.3, 104.83, 89.80, 64.24 %의 세포 성장률을 나타내었다. 양성 대조군인 paclitaxel 처리시 세포 성장률은 46.08 % 였다. When incubated for 24 hours after GSK2194069 treatment, cell growth rates of 100, 103.3, 104.83, 89.80, and 64.24% were shown, respectively, compared to the control group in each case treated with 0, 1, 5, 10, and 50 μM concentrations. When treated with paclitaxel, a positive control, the cell growth rate was 46.08%.

TVB-3166 처리 후 24시간 배양시 0, 1, 5, 10, 50 μM 농도를 처리한 각각의 경우에 대조군과 비교하여 각각 100, 91.03, 71.95, 64.67, 32.48 %의 세포 성장률을 나타내었다. 양성 대조군인 paclitaxel 처리시 세포 성장률은 55.84 % 였다.When cultured for 24 hours after TVB-3166 treatment, cell growth rates of 100, 91.03, 71.95, 64.67, and 32.48% were respectively obtained as compared to the control in each case treated with 0, 1, 5, 10, and 50 μM concentrations. When treated with paclitaxel, a positive control, the cell growth rate was 55.84%.

FASNALL 이외의 총 3가지의 FAS 억제제 모두 양성 대조군인 paclitaxel과 함께 유의적인 (student’s t-test, p value <0.001) 시간 의존적 세포 성장 저해능을 보였다. 따라서 FAS 과발현 세포주인 LNCaP-ln3 세포를 FAS 저해 약물 스크리닝 대상 세포주로 적합하다고 평가하였다. All three FAS inhibitors other than FASNALL showed significant (student's t-test, p value <0.001) time-dependent cell growth inhibitory activity with paclitaxel, a positive control. Therefore, the FAS overexpressing cell line, LNCaP-ln3 cells, was evaluated as suitable as a target cell line for FAS inhibitory drug screening.

1-2. CCK-8 assay을 통한 FAS 억제제 처리에 따른 인간 유래 세포주(MCF-7)의 세포 생존률 확인1-2. Confirmation of cell viability of human-derived cell line (MCF-7) according to FAS inhibitor treatment through CCK-8 assay

MCF-7 세포주가 FAS 억제제 평가 실험에 유용한 세포주인지 판단하기 위해 이 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 세포 성장률 검사인 CCK-8 검사를 시행하여 FASNALL, GSK2194069 및 TVB-3166의 MCF-7 유방암세포의 성장 저해율을 확인하였다.The growth of MCF-7 breast cancer cells of FASNALL, GSK2194069, and TVB-3166 by conducting the CCK-8 test, a cell growth rate test commonly used in this technology, to determine whether the MCF-7 cell line is a useful cell line for FAS inhibitor evaluation experiments. The inhibition rate was confirmed.

우선, KCTC 13643BP로 기탁된 MCF-7 유방암 세포를 37℃ 온도의 5% 이산화 탄소 세포배양기에 10 %의 소태아혈청과 1 %의 항생제가 포함된 DMEM 배지를 사용하여 96 웰 플레이트의 각 웰에 세포수가 1.3 x 103 이 되도록 배양한다. 그리고 나서 세포의 성장이 안정화된 이후에, 대조군에는 실험군 대신에 총 배지의 0.01%가 되는 량의 DMSO를 첨가하여 24시간 배양한다. 그리고 실험군으로는 총 배지의 0.01 %이자 농도는 0, 1, 5, 10, 50 μM이 되도록 FASNALL, GSK2194069 및 TVB-3166 각각을 처리하고, 양성 대조군을 위해 10 μM의 Paclitaxel 도 첨가한 뒤 24시간 동안 배양한다. 약물 처리 시간이 지난 후 CCK-8 시약을 배지의 10%가 되도록 넣어준다. CCK-8 시약을 처리한 배지에 2시간 배양 후, ELISA 기기를 이용하여 450 nm에서 측정한다. 그 결과로서 세포 성장 그래프를 도 1에 나타내었다. First, MCF-7 breast cancer cells deposited with KCTC 13643BP were placed in each well of a 96-well plate using DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and 1% antibiotic in a 5% carbon dioxide cell incubator at 37°C. Incubate so that the number of cells is 1.3 x 10 3 . Then, after the growth of the cells is stabilized, instead of the experimental group, the control group is cultured for 24 hours by adding the amount of DMSO to 0.01% of the total medium. And as the experimental group, FASNALL, GSK2194069 and TVB-3166 were each treated so that the concentration of 0.01% of the total medium was 0, 1, 5, 10, 50 μM, and 10 μM of Paclitaxel was also added for the positive control, followed by 24 hours. While incubating. After the drug treatment time has elapsed, the CCK-8 reagent is added to 10% of the medium. After incubation for 2 hours in a medium treated with CCK-8 reagent, measurement at 450 nm using an ELISA instrument. As a result, a cell growth graph is shown in FIG. 1.

그 결과로 FASNALL을 포함한 3종의 FAS　억제제가 MCF-7 세포주의 세포 성장을 유의하게 저해하는 것을 확인하였다 (student’s t-test, p value <0.05). As a result, it was confirmed that three kinds of FAS　 inhibitors, including FASNALL, significantly inhibited the cell growth of the MCF-7 cell line (student's t-test, p value <0.05).

또한 FASNALL 처리 시에 대조군 대비 0, 1, 5, 10, 50 μM 농도 별 100, 91.86, 79.43, 79.04, 78.03 %의 세포 성장을 나타냄을 관측하였다. GSK2194069 처리 시에 대조군 대비 0, 1, 5, 10, 50 μM 농도 별 100, 102.2, 93.43, 93.61, 85.27 %의 세포 성장을 나타냄을 관측하였다. TVB-3166 처리 시에 대조군 대비 0, 1, 5, 10, 50 μM 농도 별 100, 102.2, 93.43, 93.61, 85.27 %의 세포 성장을 나타냄을 관측하였다. 양성 대조군으로 쓰인 paclitaxel 처리 시 세포 성장률이 86.06%로, 본 실험군들이 양성 대조군과 비슷하게 유의적인 (student’s t-test, p value <0.001) 세포 성장 저해능을 가짐을 확인할 수 있었다. 따라서 MCF-7 유방암 세포를 약물 스크리닝 대상 세포주로 적합하다고 평가하였다.In addition, it was observed that cell growth of 100, 91.86, 79.43, 79.04, 78.03% by concentration of 0, 1, 5, 10, 50 μM compared to the control group was observed during FASNALL treatment. It was observed that cell growth of 100, 102.2, 93.43, 93.61, 85.27% by concentration of 0, 1, 5, 10, 50 μM compared to the control group was observed when GSK2194069 was treated. It was observed that cell growth of 100, 102.2, 93.43, 93.61, 85.27% at 0, 1, 5, 10, 50 μM concentration compared to the control group during treatment with TVB-3166 was observed. When treated with paclitaxel, which was used as a positive control, the cell growth rate was 86.06%, and it was confirmed that these experimental groups had a significant (student's t-test, p value <0.001) cell growth inhibitory ability similar to the positive control. Therefore, it was evaluated that MCF-7 breast cancer cells were suitable as a target cell line for drug screening.

실시예 2. 인간 유래 암 세포주에서 FAS 억제제 처리에 따른 대사체 분리 및 분석Example 2. Isolation and analysis of metabolites according to FAS inhibitor treatment in human-derived cancer cell lines

FAS 억제제 처리에 따라 변화하는 대사체, 즉 FAS 억제제의 스크리닝에 활용될 수 있는 대사체들을 도출하기 위하여 FAS 억제제의 스크리닝에 적합한 세포주인 인간 유래 암 세포주들에 공지의 FAS 억제제를 처리한 후 각 세포주 내 변화하는 대사체에 대한 분석을 수행하였다. In order to derive metabolites that change according to FAS inhibitor treatment, that is, metabolites that can be used for screening of FAS inhibitors, human-derived cancer cell lines, which are suitable cell lines for screening of FAS inhibitors, are treated with known FAS inhibitors and each cell line Analysis of the metabolites in change was performed.

2-1. 인간유래 세포주(LNCaP-ln3, MCF-7) 배양 및 FAS 억제제 처리 후 세포 획득2-1. Acquired cells after culturing human-derived cell lines (LNCaP-ln3, MCF-7) and treatment with FAS inhibitors

2-1-1. LNCaP-ln3 배양 및 FAS 억제제 처리2-1-1. LNCaP-ln3 culture and FAS inhibitor treatment

LNCaP-ln3 전립선암 세포를 37℃온도의 5% 이산화탄소 세포배양기에서 10 %의 소태아혈청과 1 %의 항생제가 포함된 RPMI 배지를 사용하여 배양한다. 세포의 성장이 안정화된 이후에, 대조군에는 실험군 대신에 총 배지의 0.01%가 되는 량의 DMSO를 첨가하여 24시간 배양한다. 그리고 실험군으로는 총 배지의 0.01 %가 되는 양의 50 μM FASNALL, GSK2194069 및 TVB-3166 각각을 처리하여 24시간 동안 배양한다. 세포는 각 그룹별 5개의 세포 디쉬에서 배양하여 각 군의 총 실험 수가 5(n=5)이 되도록 하였다. 24시간 배양한 뒤에는 배지를 제거하고 인산완충생리식염수(PBS, phosphate buffered saline)를 이용하여 세포를 2차례 세척한 뒤에 셀 스크래퍼를 이용하여 세포를 배양 접시에서 획득하여 튜브에 담아 -80 ℃에서 보관한다. LNCaP-ln3 prostate cancer cells are cultured in an RPMI medium containing 10% fetal bovine serum and 1% antibiotic in a 5% carbon dioxide cell incubator at 37°C. After the growth of the cells is stabilized, instead of the experimental group, DMSO in an amount equal to 0.01% of the total medium is added to the control group and cultured for 24 hours. In addition, as an experimental group, 50 μM FASNALL, GSK2194069, and TVB-3166 in an amount equal to 0.01% of the total medium were treated and cultured for 24 hours. Cells were cultured in 5 cell dishes for each group so that the total number of experiments in each group was 5 (n=5). After 24 hours of incubation, remove the medium, wash the cells twice with phosphate buffered saline (PBS), and then use a cell scraper to obtain the cells from a culture dish and place them in a tube and store at -80 °C. do.

2-1-2. MCF-7 배양 및 FAS 억제제 처리2-1-2. MCF-7 culture and FAS inhibitor treatment

MCF-7 유방암 세포를 37 ℃온도의 5% 이산화탄소 세포배양기에서 10 %의 소태아혈청과 1 %의 항생제가 포함된 DMEM 배지를 사용하여 배양한다. 세포의 성장이 안정화된 이후에, 대조군에는 FASNALL 대신에 총 배지의 0.01%가 되는 량의 DMSO를 첨가하여 24시간 배양한다. 그리고 실험군으로는 총 배지의 0.01 %가 되는 양의 50 μM FASNALL, GSK2194069 및 TVB-3166 각각을 처리하여 24시간 동안 배양한다. 세포는 그룹 별 5개의 세포 디쉬에서 배양하여 각 군의 총 실험 수가 5(n=5)가 되도록 하였다. 24시간 배양한 뒤에는 배지를 PBS를 이용하여 세포를 2차례 세척해준 뒤에 셀 스크래퍼를 이용하여 세포를 배양 접시에서 획득하여 튜브에 담아 -80 ℃에서 보관한다. MCF-7 breast cancer cells were cultured in a 5% carbon dioxide cell incubator at 37°C using DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and 1% antibiotic. After the growth of the cells is stabilized, instead of FASNALL, DMSO in an amount equal to 0.01% of the total medium is added to the control and cultured for 24 hours. In addition, as an experimental group, 50 μM FASNALL, GSK2194069, and TVB-3166 in an amount equal to 0.01% of the total medium were treated and cultured for 24 hours. Cells were cultured in 5 cell dishes for each group so that the total number of experiments in each group was 5 (n=5). After culturing for 24 hours, the medium is washed twice with PBS, and then the cells are obtained from a culture dish using a cell scraper, placed in a tube, and stored at -80°C.

2-2. 세포 내액 추출 및 DNA 정량2-2. Intracellular fluid extraction and DNA quantification

획득한 세포 시료에 대한 질량분석기 분석을 위하여 내부 표준물질로 레저핀 2 μg/mL 이 들어있는 70 % 메탄올 용액을 100 μL씩 넣어준 뒤, 볼텍싱을 하여 추출액에 시료가 잘 섞이게 한다. 그 후 시료와 용액의 혼합액을 액체 질소를 사용하여 얼렸다가 상온의 물에 녹여준 뒤 30초간 음파처리 해 주는 과정을 총 3번 반복 시행함으로써 세포를 파괴하여 세포 내의 대사체를 추출하였다. 그리고 나서 원심분리기를 이용하여 14000 rpm으로 10분 동안 원심 분리를 진행한 뒤에 상층액만 획득하여 분석을 진행했다.For mass spectrometry analysis of the obtained cell sample, add 100 μL of 70% methanol solution containing 2 μg/mL of respin as an internal standard, and then vortex to mix the sample well in the extract. After that, the mixture of the sample and the solution was frozen using liquid nitrogen, dissolved in water at room temperature, and then subjected to sonication for 30 seconds for a total of 3 times to destroy cells and extract metabolites in the cells. Then, after centrifugation was performed at 14000 rpm for 10 minutes using a centrifuge, only the supernatant was obtained and analyzed.

획득한 추출액은 추후 세포량의 보정을 위하여 DNA 정량을 실시하였다. DNA정량은 신코 사의 분광광도계 Nano-MD를 사용하여, 추출액 5 μL를 큐벳에 넣어준 후 340 nm에서 정량하여 수행하였다.The obtained extract was subjected to DNA quantification in order to correct the amount of cells later. DNA quantification was performed by using a Shinko spectrophotometer Nano-MD, 5 μL of the extract was added to a cuvette, and quantified at 340 nm.

2-3. 초고성능 액체크로마토그래피 질량분석기(ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry, UHPLC-MS)를 이용한 분석2-3. Analysis using ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry (UHPLC-MS)

초고성능 액체크로마토그래피질량분석기인 UPLC-Orbitrap-MS(Thermo Scientific™ Dionex™ UltiMate™ 3000과 Orbitrap Velos Pro™)를 이용하여 상기 실시예 2-2에 따라 전처리된 각 시료 내 대사체들의 분석을 수행하였다. Analysis of metabolites in each sample pretreated according to Example 2-2 was performed using UPLC-Orbitrap-MS (Thermo Scientific™ Dionex™ UltiMate™ 3000 and Orbitrap Velos Pro™ ) , an ultra-high performance liquid chromatography mass spectrometer I did.

구체적으로, 획득한 시료 추출액을 바이알에 담은 뒤 10 μL를 초고성능 액체크로마토그래피 질량분석기에 주입한다. 주입기의 온도는 7℃로 유지하였다. 초고성능 액체크로마토그래피의 조건은 용액은 이동상 A로 0.1 % 포름산을 넣은 물을 사용하고 이동상 B로 0.1 % 포름산을 넣은 메탄올을 사용했다. 컬럼은 waters사의 ACQUITYⓡ HSS T3(2.1×100 mm, 1.7 μm)를 사용하고 컬럼의 온도는 40 ℃를 유지했다. 두 이동상을 UPLC 시스템 내에서 분석 시간에 따라 다른 비율로 혼합하여 흘려주는 기울기 용리(gradient elution)방법으로 진행하였고, 이때 액체크로마토그래피 이동상의 구배는 0분 A용액 99%로 2분, 14분에 B의 조성이 100%가 되도록 하고 이 후 15분까지 유지한 뒤 3분 동안 처음 조건으로 맞춰준다. 용액의 흐름은 0.4 mL로 유지했다. 질량분석기는 포지티브 모드(positive mode)와 네거티브 모드(negative mode) 분석 모두 진행되었다. 질량분석기의 소스(source)의 온도는 300 ℃, 용매 지연시간은 3분으로 하였다. 분석 도중에는 분석의 품질 관리를 위해 시퀀스에 quality control(QC)샘플을 넣어 전체 분석법의 진행에 기기의 문제가 없음을 확인하였다. QC샘플은 대조군 및 실험군 시료 추출액을 모두 풀링한 것으로 사용했다. Specifically, after the obtained sample extract is put into a vial, 10 μL is injected into an ultra-high performance liquid chromatography mass spectrometer. The temperature of the injector was maintained at 7°C. The conditions for ultra-high performance liquid chromatography were water with 0.1% formic acid as mobile phase A and methanol with 0.1% formic acid as mobile phase B. As the column, ACQUITY ® HSS T3 (2.1×100 mm, 1.7 μm) from Waters was used, and the temperature of the column was maintained at 40°C. The two mobile phases were mixed and flowed at different ratios according to the analysis time in the UPLC system. At this time, the gradient of the liquid chromatography mobile phase was 0 min.A solution was 99% in 2 min. and 14 min. Make sure that the composition of B is 100%, and after that, hold for 15 minutes, and then adjust to the initial conditions for 3 minutes. The flow of the solution was maintained at 0.4 mL. The mass spectrometer was analyzed in both positive mode and negative mode. The temperature of the source of the mass spectrometer was 300°C, and the solvent delay time was 3 minutes. During the analysis, quality control (QC) samples were added to the sequence for quality control of the analysis, and it was confirmed that there was no problem with the instrument in the progress of the entire analysis method. The QC sample was used by pooling both the control and experimental group sample extracts.

2-4. 크로마토그램 데이터 분석 및 통계 처리2-4. Chromatogram data analysis and statistical processing

분석 후 얻은 크로마토그램은 도 2 및 3에 나타내었다. LNCaP-ln3 세포주에 대하여 실험한 결과는 도 2에 나타내었고, MCF-7 세포주에 대하여 실험한 결과는 도 3에 나타내었다. 크로마토그램으로부터 써모피셔사이언티티픽 사의 compound discovery 소프트웨어를 사용하여 보정과 피크 정렬을 한 액셀 원본 데이터(raw data)를 추출하였다. 추출된 원본 데이터 의 개수는 총 1265개였다. 추출된 파일을 먼저 내부 표준물질로 나눠주고 세포의 DNA 정량을 이용하여 보정해준 뒤 SIMCA 소프트웨어를 이용하여 통계처리를 진행하였다. 그 결과는 도 4 및 5에 나타내었다. LNCaP-ln3 세포주에 대하여 실험한 결과는 도 4에 나타내었고, MCF-7 세포주에 대하여 실험한 결과는 도 5에 나타내었다.The chromatograms obtained after analysis are shown in FIGS. 2 and 3. The results of the experiments on the LNCaP-ln3 cell line are shown in FIG. 2, and the results of the experiments on the MCF-7 cell line are shown in FIG. From the chromatogram, raw data of the accelerator, corrected and aligned with the peaks, were extracted using the compound discovery software of Thermo Fisher Scientific. The total number of extracted original data was 1265. The extracted file was first divided into an internal standard, corrected using DNA quantification of cells, and then statistically processed using SIMCA software. The results are shown in FIGS. 4 and 5. The results of the experiments on the LNCaP-ln3 cell line are shown in FIG. 4, and the results of the experiments on the MCF-7 cell line are shown in FIG.

도 4 및 5에 나타낸 바와 같이, PCA 분석 결과 대조군과 실험군의 클러스터링(clustering)이 확연하게 나누어지는 것을 관찰 할 수 있었으며 이로써 약물 처리 후 세포 내 대사체의 변화가 있었음을 확인할 수 있었다. As shown in Figs. 4 and 5, as a result of PCA analysis, it was observed that clustering of the control group and the experimental group was clearly divided, thereby confirming that there was a change in intracellular metabolites after drug treatment.

이 후, 통계적 처리를 위하여, 상기 결과를 보정한 데이터에 대하여 t-검증을 수행하여 유의적으로 변한 데이터를 구분하였다. 통계처리 결과에 따라 p값이 0.05 이하인 물질들을 유의적인 변화를 나타내는 대사체로 분류하였다. 유의적인 변화를 나타내는 것으로 분류된 물질들은 크로마토그램의 m/z 값을 토대로 HMDB (Human Metabolome Database), 매스뱅크(massbank), 메틀린(metlin)과 같은 데이터베이스를 토대로 정성이 진행됐다. Thereafter, for statistical processing, a t-test was performed on the data corrected for the above results, and significantly changed data was classified. According to the statistical treatment results, substances with a p value of 0.05 or less were classified as metabolites showing significant changes. Substances classified as showing significant changes were qualitative based on databases such as HMDB (Human Metabolome Database), massbank, and metlin based on the m/z value of the chromatogram.

그 결과, LNCaP-ln3 세포주에서 FASNALL, GSK2194069, TVB-3166 각각의 처리에 따라 유의적으로 변화한 검출 물질은 총 약 96개 정도였고, MCF-7 세포주에서 FASNALL 처리에 따라 유의적으로 변화한 검출 물질은 총 102개였다. As a result, in LNCaP-ln3 cell line, a total of about 96 detection substances significantly changed according to each treatment of FASNALL, GSK2194069, and TVB-3166, and detection significantly changed according to FASNALL treatment in MCF-7 cell line. There were a total of 102 substances.

그 중 LNCaP-ln3 전립선암 세포주와 MCF-7 유방암 세포주 모두에서 FAS 억제제 처리에 따라 변화한 대사체 중 하나인 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판에 대한 변화값을 각각 도 6 내지 8 에 상자 수염 그림으로 나타내었다.Among them, the change values for N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, and L-tryptophan, which are one of the metabolites that changed according to the FAS inhibitor treatment in both the LNCaP-ln3 prostate cancer cell line and the MCF-7 breast cancer cell line, are shown in FIG. It is shown as a box whisker picture in to 8.

도 6 및 7에서 확인할 수 있는 바와 같이, 구체적으로, LNCaP-ln3 세포주의 경우 대조군과 비교하여 FASNALL, GSK2194069, TVB-3166 각각을 처리한 경우 N1-아세틸스퍼미딘이 각각 111.93배, 2.20배, 17.89배 증가되는 경향을 보였고, MCF-7 세포주의 경우 대조군과 비교하여 FASNALL, GSK2194069, TVB-3166 각각을 처리한 경우 N1-아세틸스퍼미딘이 각각 8.27배, 1.034배, 4.938배 증가됨을 확인하였다. 특히, FAS 과발현 세포인 LNCaP-ln3 세포주에서 약물 처리 시 대사체의 배수 변화(fold change)가 더 확연하게 나타나는 것을 볼 수 있었다. As can be seen in FIGS. 6 and 7, specifically, in the case of the LNCaP-ln3 cell line, N1-acetylspermidine was 111.93 times, 2.20 times, and 17.89 times, respectively, when FASNALL, GSK2194069, and TVB-3166 were treated as compared to the control group. It was confirmed that the MCF-7 cell line increased by 8.27 times, 1.034 times, and 4.938 times, respectively, when FASNALL, GSK2194069, and TVB-3166 were treated, respectively, compared to the control group. In particular, it was found that the fold change of metabolites was more pronounced in the LNCaP-ln3 cell line, which is an FAS overexpressing cell, when treated with drugs.

도 8에서 확인할 수 있는 바와 같이, LNCaP-ln3 전립선암 세포주에서 FAS 억제제 처리에 따라 변화한 대사체 중 일부인 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판과 관련해서는, LNCaP-ln3 세포주의 경우 대조군과 비교하여 FASNALL, GSK2194069, TVB-3166 처리시 스퍼미딘이 0.062배 0.022배, 0.009배 감소되는 경향을 보였고, 스퍼민이 0.321배, 0.167배, 0.223배 감소되는 경향을 보였으며, L-트립토판은 0.771배, 0.417배, 0.430배 감소함을 확인하였다.As can be seen in Figure 8, with respect to spermidine, spermine, and L-tryptophan, which are some of the metabolites that have changed according to the FAS inhibitor treatment in the LNCaP-ln3 prostate cancer cell line, in the case of the LNCaP-ln3 cell line FASNALL compared to the control group. , GSK2194069, TVB-3166 treatment showed a tendency to decrease spermidine by 0.062 times, 0.022 times and 0.009 times, and spermine decreased by 0.321 times, 0.167 times and 0.223 times, and L-tryptophan decreased by 0.771 times and 0.417 times. , It was confirmed that it decreased by 0.430 times.

또한, LNCaP-ln3 전립선암 세포주와 MCF-7 유방암 세포주 모두에서 FAS 억제제 처리에 따라 변화한 대사체들 중 일부인 8,11,14-에이코사트리엔산(8,11,14-eicosatrienoic acid), 도코사펜타엔산(docosapentaenoic acid), 리소PC(16:1)(LysoPC(16:1)), 리소PC(20:2)(LysoPC(20:2)), 리소PC(18:0)(LysoPC(18:0)), 리소PC(20:1)(LysoPC(20:1)), 리소PC(p-16:0)(LysoPC(p-16:0)), 팔미토일-L-카르니틴(palmitoyl-L-carnitine), PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2(prostaglandin A2), 스테아르산(stearic acid), 박센산(vaccenic acid)과 관련해서는, 도 9 내지 11에 나타내었다.In addition, 8,11,14-eicosatrienoic acid (8,11,14-eicosatrienoic acid), which is some of the metabolites that have changed according to FAS inhibitor treatment in both the LNCaP-ln3 prostate cancer cell line and the MCF-7 breast cancer cell line, Docosapentaenoic acid, LysoPC (16:1) (LysoPC (16:1)), LysoPC (20:2) (LysoPC (20:2)), LysoPC (18:0) ( LysoPC(18:0)), LysoPC(20:1)(LysoPC(20:1)), LysoPC(p-16:0)(LysoPC(p-16:0)), palmitoyl-L-carnitine (palmitoyl-L-carnitine), PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, Regarding stearic acid and vaccenic acid, it is shown in FIGS. 9 to 11.

도 9 내지 11에서 확인할 수 있는 바와 같이, LNCaP-ln3 세포주의 경우 대조군과 비교하여 FASNALL, GSK2194069, TVB-3166 처리 시 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산, 박센산에 대하여 3가지 약물을 각각 처리한 샘플들이 모두 같은 경향을 가지고 유의적으로 증감하였다. 아울러, MCF-7 세포주의 경우 또한 상기 실험군 각각은 대조군과 비교하여 FASNALL, GSK2194069, TVB-3166 처리 시 LNCaP-ln3 세포주에서 확인한 결과와 동일한 경향을 갖는 것을 확인하였다.As can be seen in Figures 9 to 11, in the case of the LNCaP-ln3 cell line compared to the control FASNALL, GSK2194069, TVB-3166 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), lyso PC (18:0) , Lyso PC (20:1), Lyso PC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34 :1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and baksenic acid, all of the samples treated with the three drugs had the same tendency and significantly increased or decreased. In addition, in the case of the MCF-7 cell line, each of the experimental groups was confirmed to have the same tendency as the results found in the LNCaP-ln3 cell line when FASNALL, GSK2194069, and TVB-3166 were treated as compared with the control group.

따라서 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산 중 하나 이상을 이용하여 FASNALL, GSK2194069, TVB-3166을 포함하는 다양한 FAS 억제제의 약효를 스크리닝하는 데 활용할 수 있다.Therefore, N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC (20:2), LysoPC(18:0), LysoPC(20:1), LysoPC(p-16:0), Palmitoyl-L-carnitine, PC(19:1), PC(35:4), PE(18 :1), PE (34: 1), PE (37: 6), using at least one of prostaglandin A2, stearic acid and baksen acid to screen the efficacy of various FAS inhibitors including FASNALL, GSK2194069, TVB-3166 Can be utilized.

실시예 3. 대사체들을 활용한 FAS 억제제 스크리닝의 정확도 확인Example 3. Confirmation of accuracy of FAS inhibitor screening using metabolites

상기 실시예 2-1 내지 2-4에 기술한 방법을 통하여, LNCaP-ln3 전립선암 세포 및 MCF-7 유방암 세포를 각각 배양한 후 각 FAS 억제제들(FASNALL, GSK2194069 및 TVB-3166)을 처리하고, 각 세포 내액 추출물의 DNA 정량으로 보정을 진행하였으며, 그 결과에 대해서는 초고성능 액체크로마토그래피 질량분석기를 이용하여 분석을 진행하였다.Through the method described in Examples 2-1 to 2-4, after culturing LNCaP-ln3 prostate cancer cells and MCF-7 breast cancer cells, respectively, FAS inhibitors (FASNALL, GSK2194069 and TVB-3166) were treated, and , Correction was performed by quantifying the DNA of each intracellular liquid extract, and the results were analyzed using an ultra-high performance liquid chromatography mass spectrometer.

그리고 나서, 크로마토그램 데이터 분석 및 통계 처리를 진행하여 각 대사체들 처리에 따른 ROC (receiver operating characteristic) curve를 확보하였다.Then, chromatogram data analysis and statistical processing were performed to obtain a ROC (receiver operating characteristic) curve according to the processing of each metabolite.

구체적으로, Thermo Xcalibur Qual Browser의 크로마토그램으로부터 양성자로 이온화된 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판의 MS1값으로 범위를 설정하고 'Toggle peak detection'을 통해 각 물질의 peak 영역(area) 값을 구해 원본 데이터(raw data)를 추출하였다. 그 뒤 써모피셔사이언티픽 사의 compound discovery 소프트웨어를 사용하여 보정과 피크 정렬을 한 내부 표준물질로 나눠주었다. 세포의 DNA 정량을 이용하여 보정해 준 뒤 IBM SPSS Statistics 소프트웨어를 이용하여 통계처리를 진행하였다. 3 종류의 FAS 억제제를 처리한 3개의 군과 1개의 대조군을 포함한 4개 그룹의 n수는, LNCaP-ln3, MCF-7 세포 별로 각 5개씩 나누어 각 대사체마다 10개의 variable data를 얻었다. ROC curve analysis에서 Test variable로 4개의 대사체(N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판)를 지정해주고 각 샘플의 FAS 억제제 처리 상태를 State variable으로 설정해 개별 ROC curve분석을 진행하였다. 그 결과 두 개의 세포주에서 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판 각각에 대한 ROC curve를 총 8개를 확보하였다. MCF-7 세포에서 확인한 결과는 도 12 내지 15에 나타내었고, LNCaP-ln3 세포에서 확인한 결과는 도 16에 나타내었다. AUC(Area under curve)가 1에 가까울수록 정확도가 높음을 의미한다.Specifically, the range was set with the MS1 values of N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, and L-tryptophan ionized with protons from the chromatogram of Thermo Xcalibur Qual Browser, and the peak area of each substance ( area) value was obtained and the raw data was extracted. It was then divided into internal standards that were calibrated and peak aligned using Thermo Fisher Scientific's compound discovery software. After correction using the DNA quantification of the cells, statistical processing was performed using IBM SPSS Statistics software. The number of n of 4 groups, including 3 groups treated with 3 types of FAS inhibitors and 1 control group, was divided by 5 for each LNCaP-ln3 and MCF-7 cells to obtain 10 variable data for each metabolite. In the ROC curve analysis, four metabolites (N1-acetylspermidine, spermidine, spermin, L-tryptophan) were designated as test variables, and the FAS inhibitor treatment state of each sample was set as a state variable, and individual ROC curve analysis was performed. As a result, a total of 8 ROC curves were obtained for each of N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, and L-tryptophan in two cell lines. Results confirmed in MCF-7 cells are shown in Figs. 12 to 15, and results confirmed in LNCaP-ln3 cells are shown in Fig. 16. The closer the AUC (Area under curve) is to 1, the higher the accuracy.

그리고 나서 Multi-biomarker로서의 ROC curve를 얻기 위해서 이진 로지스틱 분석(Binary logistic analysis)을 먼저 진행하여 상기 4개의 대사체를 변수로 지정하였고 'probabilities'로 결합시켜 새로운 test variable을 SPSS 데이터베이스에서 구해낸 뒤, 상기에서 기술한 방법과 동일한 방법으로 ROC curve를 얻었다. 해당 ROC curve는 도 17에 나타내었다. 도면 내 붉은색 선은 참조선이며, AUC가 1에 가까울수록 정확도가 높음을 의미한다.Then, in order to obtain the ROC curve as a multi-biomarker, binary logistic analysis was first performed, the four metabolites were designated as variables, and a new test variable was obtained from the SPSS database by combining them with'probabilities'. ROC curve was obtained in the same way as described in. The corresponding ROC curve is shown in FIG. 17. The red line in the drawing is a reference line, and the closer the AUC is to 1, the higher the accuracy.

도 11 내지 17에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판를 활용하면 FAS 억제제 스크리닝 정확도가 우수하며, 이들 대사체들을 조합하는 경우 그 정확도가 보다 높아진다.As can be seen in FIGS. 11 to 17, the use of the N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, and L-tryptophan of the present invention provides excellent FAS inhibitor screening accuracy, and when these metabolites are combined, the accuracy is higher. .

한국생명공학연구원Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KCTC13643BPKCTC13643BP 2018091720180917 한국생명공학연구원Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KCTC13846BPKCTC13846BP 2019043020190430

Claims (23)

암 세포주에 후보 물질을 처리하는 단계;
후보 물질을 처리한 암 세포주 내 N1-아세틸스퍼미딘(N1-acetylspermidine), 스퍼미딘(spermidine), 스퍼민(spermine), L-트립토판(L-tryptophan), 8,11,14-에이코사트리엔산(8,11,14-eicosatrienoic acid), 도코사펜타엔산(docosapentaenoic acid), 리소PC(16:1)(LysoPC(16:1)), 리소PC(20:2)(LysoPC(20:2)), 리소PC(18:0)(LysoPC(18:0)), 리소PC(20:1)(LysoPC(20:1)), 리소PC(p-16:0)(LysoPC(p-16:0)), 팔미토일-L-카르니틴(palmitoyl-L-carnitine), PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2(prostaglandin A2), 스테아르산(stearic acid) 및 박센산(vaccenic acid)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨(level)을 측정하는 단계; 및
측정한 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨을 후보 물질 처리 전의 레벨과 비교하는 단계;를 포함하는 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝 방법.Treating the candidate substance to the cancer cell line;
N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid in cancer cell lines treated with candidate substances (8,11,14-eicosatrienoic acid), docosapentaenoic acid, LysoPC (16:1) (LysoPC (16:1)), LysoPC (20:2) (LysoPC (20:2 )), LysoPC(18:0)(LysoPC(18:0)), LysoPC(20:1)(LysoPC(20:1)), LysoPC(p-16:0)(LysoPC(p-16 :0)), palmitoyl-L-carnitine, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37 :6), measuring at least one level selected from the group consisting of prostaglandin A2, stearic acid, and vaccenic acid; And
Measured N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), lysoPC (20:2) , LysoPC (18:0), LysoPC (20:1), LysoPC (p-16:0), Palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE ( 18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, comparing at least one level selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid with the level prior to treatment with the candidate substance; fatty acid comprising Methods of screening for synthetase inhibitors. 제1항에 있어서,
상기 지방산 합성 효소 억제제는 암 치료제인, 스크리닝 방법.The method of claim 1,
The fatty acid synthase inhibitor is a cancer treatment, a screening method. 제1항에 있어서,
상기 지방산 합성 효소 억제제는 유방암 치료제, 대장암 치료제, 위암 치료제, 갑상선암 치료제, 전립선암 치료제, 난소암 치료제 및 자궁내막암 치료제 중 하나 이상인, 스크리닝 방법.The method of claim 1,
The fatty acid synthase inhibitor is at least one of a breast cancer treatment, a colon cancer treatment, a stomach cancer treatment, a thyroid cancer treatment, a prostate cancer treatment, an ovarian cancer treatment, and an endometrial cancer treatment, a screening method. 제1항에 있어서,
상기 암 세포주는 유방암 세포주, 대장암 세포주, 위암 세포주, 갑상선암 세포주, 전립선암 세포주, 난소암 세포주 및 자궁내막암 세포주 중 하나 이상인, 스크리닝 방법.The method of claim 1,
The cancer cell line is at least one of a breast cancer cell line, a colon cancer cell line, a gastric cancer cell line, a thyroid cancer cell line, a prostate cancer cell line, an ovarian cancer cell line, and an endometrial cancer cell line. 제1항에 있어서,
상기 방법은 상기 암 세포주에서 상기 N1-아세틸스퍼미딘, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 후보물질 처리 전과 비교하여 높아지면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 적합하다고 판단하고, 후보물질 처리 전과 비교하여 낮아지거나 동일하면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 부적합하다고 판단하는 단계;를 더 포함하는, 스크리닝 방법.The method of claim 1,
The method comprises the N1-acetylspermidine, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), and lyso PC in the cancer cell line. (18:0), LysoPC (20:1), LysoPC (p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1 ), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and baksenic acid. And determining that the candidate substance is unsuitable as a fatty acid synthase inhibitor if it is determined to be lower than or equal to the candidate substance before treatment. 제1항에 있어서,
상기 방법은 상기 암 세포주에서 상기 스퍼미딘, 스퍼민 및 L-트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 후보물질 처리 전과 비교하여 낮아지면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 적합하다고 판단하고, 후보물질 처리 전과 비교하여 높아지거나 동일하면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 부적합하다고 판단하는 단계;를 더 포함하는, 스크리닝 방법.The method of claim 1,
In the above method, if at least one level selected from the group consisting of spermidine, spermine and L-tryptophan in the cancer cell line is lowered compared to before treatment with the candidate substance, it is determined that the candidate substance is suitable as a fatty acid synthase inhibitor, and before treatment with the candidate substance Comparing higher or equal to the step of determining that the candidate substance is unsuitable as a fatty acid synthase inhibitor; further comprising, screening method. 제1항에 있어서,
상기 방법은 상기 암 세포주에서 상기 N1-아세틸스퍼미딘, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 후보물질 처리 전과 비교하여 5% 이상 높아지면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 적합하다고 판단하는 것인, 스크리닝 방법.The method of claim 1,
The method comprises the N1-acetylspermidine, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), and lyso PC in the cancer cell line. (18:0), LysoPC (20:1), LysoPC (p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1 ), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and baksenic acid. It is determined that it is suitable as an inhibitor, the screening method. 제1항에 있어서,
상기 방법은 상기 암 세포주에서 상기 스퍼미딘, 스퍼민 및 L-트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 후보물질 처리 전과 비교하여 5% 이상 낮아지면 후보 물질이 지방산 합성 효소 억제제로 적합하다고 판단하는 것인, 스크리닝 방법.The method of claim 1,
The method is to determine that the candidate substance is suitable as a fatty acid synthase inhibitor when at least one level selected from the group consisting of spermidine, spermine and L-tryptophan in the cancer cell line is lowered by 5% or more compared to before treatment with the candidate substance. , Screening method. N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 검출하는 물질을 유효성분으로 포함하는 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝용 조성물.N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), lyso PC (18:0), LysoPC (20:1), LysoPC (p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1 ), PE (34: 1), PE (37: 6), prostaglandin A2, stearic acid, and a composition for screening a fatty acid synthase inhibitor comprising a substance that detects one or more selected from the group consisting of baksenic acid as an active ingredient. 제9항에 있어서,
상기 지방산 합성 효소 억제제는 암 치료제인, 스크리닝용 조성물.The method of claim 9,
The fatty acid synthase inhibitor is a cancer therapeutic agent, a composition for screening. 제9항에 있어서,
상기 지방산 합성 효소 억제제는 유방암 치료제, 대장암 치료제, 위암 치료제, 갑상선암 치료제, 전립선암 치료제, 난소암 치료제 및 자궁내막암 치료제 중 하나 이상인, 스크리닝용 조성물.The method of claim 9,
The fatty acid synthase inhibitor is one or more of breast cancer treatment, colon cancer treatment, stomach cancer treatment, thyroid cancer treatment, prostate cancer treatment, ovarian cancer treatment, and endometrial cancer treatment, a screening composition. 제9항에 있어서,
상기 조성물은 유방암 세포주, 대장암 세포주, 위암 세포주, 갑상선암 세포주, 전립선암 세포주, 난소암 세포주 및 자궁내막암 세포주 중 하나 이상의 세포주를 더 포함하는, 스크리닝용 조성물.The method of claim 9,
The composition further comprises one or more of a breast cancer cell line, a colon cancer cell line, a gastric cancer cell line, a thyroid cancer cell line, a prostate cancer cell line, an ovarian cancer cell line, and an endometrial cancer cell line, a composition for screening. N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨 측정부를 포함하는 지방산 합성 효소 억제제의 스크리닝 키트.N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), lyso PC (18:0), LysoPC (20:1), LysoPC (p-16:0), Palmitoyl-L-Carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1 ), PE (34: 1), PE (37: 6), prostaglandin A2, stearic acid, and a screening kit for a fatty acid synthase inhibitor comprising at least one level measuring unit selected from the group consisting of baksenic acid. 제13항에 있어서,
상기 지방산 합성 효소 억제제는 암 치료제인, 스크리닝 키트.The method of claim 13,
The fatty acid synthase inhibitor is a cancer treatment, screening kit. 제13항에 있어서,
상기 지방산 합성 효소 억제제는 유방암 치료제, 대장암 치료제, 위암 치료제, 갑상선암 치료제, 전립선암 치료제, 난소암 치료제 및 자궁내막암 치료제 중 하나 이상인, 스크리닝 키트.The method of claim 13,
The fatty acid synthase inhibitor is one or more of a breast cancer treatment, a colon cancer treatment, a stomach cancer treatment, a thyroid cancer treatment, a prostate cancer treatment, an ovarian cancer treatment, and an endometrial cancer treatment, a screening kit. 제13항에 있어서,
상기 키트는 유방암 세포주, 대장암 세포주, 위암 세포주, 갑상선암 세포주, 전립선암 세포주, 난소암 세포주 및 자궁내막암 세포주 중 하나 이상의 암 세포주를 더 포함하는, 스크리닝 키트.The method of claim 13,
The kit further comprises at least one cancer cell line of a breast cancer cell line, a colon cancer cell line, a gastric cancer cell line, a thyroid cancer cell line, a prostate cancer cell line, an ovarian cancer cell line and an endometrial cancer cell line. 제13항에 있어서,
상기 레벨 측정부는 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항의 스크리닝용 조성물을 포함하는 것인, 스크리닝 키트.The method of claim 13,
The screening kit comprising the screening composition according to any one of claims 9 to 12. 지방산 합성 효소 억제제로 치료 받은 또는 지방산 합성 효소 억제제로 치료 중인 암 환자로부터 분리된 시료 내에서 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨을 측정하는 단계; 및
측정한 N1-아세틸스퍼미딘, 스퍼미딘, 스퍼민, L-트립토판 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨로 암 환자의 상태를 결정하는 단계;를 포함하는 암 환자의 상태 진단을 위한 정보 제공 방법.N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan 8,11,14-eicosatrienoic acid, doco in samples isolated from cancer patients treated with fatty acid synthase inhibitors or treated with fatty acid synthase inhibitors Sapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), lyso PC (18:0), lyso PC (20:1), lyso PC (p-16:0), palmitoyl- Group consisting of L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid and baksenic acid Measuring one or more levels selected from; And
Measured N1-acetylspermidine, spermidine, spermine, L-tryptophan 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lyso PC (16:1), lyso PC (20:2), LysoPC(18:0), LysoPC(20:1), LysoPC(p-16:0), Palmitoyl-L-carnitine, PC(19:1), PC(35:4), PE(18 : 1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, determining the condition of the cancer patient at one or more levels selected from the group consisting of stearic acid and baksenic acid; How to provide information to diagnose the condition. 제18항에 있어서,
상기 암 환자는 유방암, 대장암, 위암, 갑상선암, 전립선암, 난소암 및 자궁내막암 중 하나 이상의 암에 대한 환자인, 정보 제공 방법.The method of claim 18,
The cancer patient is a patient for one or more of breast cancer, colon cancer, gastric cancer, thyroid cancer, prostate cancer, ovarian cancer, and endometrial cancer. 제18항에 있어서,
상기 방법은 상기 암 환자로부터 분리된 시료 내 상기 N1-아세틸스퍼미딘, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 암 치료 전과 비교하여 높아지면 암 환자의 상태가 개선되었다 판단하고, 암 치료 후와 비교하여 낮아지거나 동일하면 암 치료 상태가 나빠졌다고 판단하는 단계;를 더 포함하는, 정보 제공 방법.The method of claim 18,
The method includes the N1-acetylspermidine, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), and lysoPC (20:2) in a sample isolated from the cancer patient. ), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and baksenic acid. It is determined, and the step of determining that the cancer treatment state has deteriorated if it is lower than or equal to that after the cancer treatment. 제18항에 있어서,
상기 방법은 상기 암 환자로부터 분리된 시료 내 상기 스퍼미딘, 스퍼민 및 L-트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 암 치료 전과 비교하여 낮아지면 암 환자의 상태가 개선되었다 판단하고, 암 치료 후와 비교하여 높아지거나 동일하면 암 치료 상태가 나빠졌다고 판단하는 단계;를 더 포함하는, 정보 제공 방법.The method of claim 18,
The method determines that the condition of the cancer patient is improved when one or more levels selected from the group consisting of spermidine, spermine and L-tryptophan in the sample isolated from the cancer patient are lowered compared to before cancer treatment, and after cancer treatment Comparing higher or equal to the step of determining that the cancer treatment state has deteriorated; further comprising, information providing method. 제18항에 있어서,
상기 방법은 상기 암 환자에서 분리된 시료 내 상기 N1-아세틸스퍼미딘, 8,11,14-에이코사트리엔산, 도코사펜타엔산, 리소PC(16:1), 리소PC(20:2), 리소PC(18:0), 리소PC(20:1), 리소PC(p-16:0), 팔미토일-L-카르니틴, PC(19:1), PC(35:4), PE(18:1), PE(34:1), PE(37:6), 프로스타글란딘 A2, 스테아르산 및 박센산으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 암 치료 전과 비교하여 5% 이상 높아지면 암 환자의 상태가 개선되었다 판단하는 것인, 정보 제공 방법.The method of claim 18,
The method includes the N1-acetylspermidine, 8,11,14-eicosatrienoic acid, docosapentaenoic acid, lysoPC (16:1), and lysoPC (20:2) in a sample isolated from the cancer patient. ), lysoPC (18:0), lysoPC (20:1), lysoPC (p-16:0), palmitoyl-L-carnitine, PC (19:1), PC (35:4), PE (18:1), PE (34:1), PE (37:6), prostaglandin A2, stearic acid, and baksenic acid. To determine that the condition has improved, the method of providing information. 제18항에 있어서,
상기 방법은 상기 암 환자에서 분리된 시료 내 상기 스퍼미딘, 스퍼민 및 L-트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레벨이 암 치료 전과 비교하여 5% 이상 낮아지면 암 환자의 상태가 개선되었다 판단하는 것인, 정보 제공 방법.The method of claim 18,
The method is to determine that the condition of the cancer patient is improved if at least one level selected from the group consisting of spermidine, spermine and L-tryptophan in the sample isolated from the cancer patient is lowered by 5% or more compared to before cancer treatment. , How to provide information.
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