KR20200046768A - New microorganism Enterobacter asburiae ObRS-5 or microbial agent comprising the same - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to an Enterobacter asburiae obRS-5 (microbial accession number: KACC 81075BP) strain or a microbial agent containing the same. The microbial agent using the strain has no environmental pollution and human toxicity so it is possible to control environment-friendly plague or promote plant growth for plants such as Ligularia fischeri etc., thereby being able to increase the number of crops.

Description

신규 미생물 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 또는 이를 함유하는 미생물 제제 {New microorganism Enterobacter asburiae ObRS-5 or microbial agent comprising the same}New microorganism Enterobacter asburiae ObRS-5 or microbial agent comprising the same}

본 발명은 신규 미생물 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5(Enterobacter asburiae ObRS-5, 미생물 수탁번호 : KACC 81075BP) 균주 또는 이를 함유하는 미생물 제제에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 식물 역병균인 파이토프토라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)에 대하여 방제효과를 갖는 신규 미생물 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 또는 이를 유효성분으로 함유하는 미생물 제제에 관한 것이다.The present invention relates to a microorganism microorganism Enterobacter asburiae ObRS-5 ( Enterobacter asburiae ObRS-5, microorganism accession number: KACC 81075BP) strain or a microbial agent containing the same, more specifically, the plant reverse pathogen Phytoptopra dre A novel microbial enterobacter asburier ObRS-5 strain having a control effect against Phytophthora drechsleri or a microbial agent containing the same as an active ingredient.

곰취(Ligularia fischeri)는 그늘지고 습기가 많은 높은 지대의 숲에서 자생하는 숙근성 산채로서 1990년대부터 강원도, 경상남도, 경상북도 및 전라남도 일부 지역의 시설 또는 임야에서 재배되고 있다. 곰취는 생으로 먹을 수 있고, 맛과 향이 좋아 소비자 기호가 높은 산채 중 하나이다. 곰취는 고지대 산에서 자생하는 동안 병해충 발생이 거의 없는 식물로 알려져 있지만 기존의 자생지와 습도, 온도, 조도 등이 다른 환경인 시설하우스에서 밀식 연작 재배할 때 역병, 흰가루병, 흰비단병 등 병해가 다양하게 발생하여 문제가 된다고 보고된바 있다.Gomchi ( Ligularia fischeri ) is a ripe wild vegetable that grows in a forest with high humidity and shade and has been cultivated in facilities or forests in some areas of Gangwon-do, Gyeongsangnam-do, Gyeongsangbuk-do, and Jeollanam-do since the 1990s. Gomchi is one of the wild vegetables that can be eaten raw and has a high taste and aroma, and has a high consumer preference. Gomchi is known as a plant that rarely causes pests while growing in the highlands, but various pests such as late blight, powdery mildew, and white silk disease are cultivated when wheat is cultivated in a facility house, which has a different environment from the existing habitat, such as humidity, temperature, and illuminance. It has been reported to cause problems.

곰취에 발생하는 병해 중에서도 Phytophrhoa drechsleri 병원균에 의한 역병(Phytopthora root rot)은 한 번 발병하면 급속도로 확산되어 고사하기 때문에 방제가 매우 어려운 병이며 예방이 중요하다(Kwon et al., 1999). 합성농약을 이용한 화학적 방제는 환경오염과 인축에 대한 독성 등의 문제를 가지고 있어, 생으로 섭취하는 산채인 곰취의 특성상 생산농가나 소비자 모두 친환경 재배를 선호한다. 그러나 곰취 역병의 친환경 방제를 위한 미생물제와 같은 생물적 방제 수단이 부재하여 농가에서는 곰취 친환경재배의 어려움을 호소하고 있다. 곰취 종자는 발아율이 낮아 자가 육묘가 어렵고 곰취 묘의 가격이 다른 작물과 비교하여 비싼 편이기 때문에, 매년 식재하는 농가는 드문 편이라서 연작피해로 인한 역병 발생이 심하다. 최근에 2~3년 곰취 재배 농가들 중 일부에서 곰취 역병 발생이 24.1∼43.1%에 달하여 곰취 생산량이 큰 폭으로 감소하여 머위, 두릅 또는 고추 등 다른 작물로 대체하였다.Among the diseases that occur in bear odor , the disease caused by the Phytophrhoa drechsleri pathogen (Phytopthora root rot) is very difficult to control because it spreads rapidly and dies after one onset, and prevention is important (Kwon et al ., 1999). Since chemical control using synthetic pesticides has problems such as environmental pollution and toxicity to livestock, both production farmers and consumers prefer eco-friendly cultivation due to the nature of Gomchi, a wild vegetable that is ingested raw. However, because there is no biological control means such as microbial agents for eco-friendly control of Gomchi plague, farmers are complaining of the difficulty of eco-cultivation of Gomchi. Because germ seed seeds have a low germination rate, it is difficult to grow them by themselves, and the price of gomch seedlings is higher than other crops. In recent 2 ~ 3 years, some of the farmers who cultivated Gomchi had 24.1 ~ 43.1% of Gomchi blight, which significantly reduced the amount of Gomchi production and replaced it with other crops such as coltsfoot, elm or pepper.

친환경 농업에서 유용미생물 또는 길항미생물은 화학 농약의 대체가 가능한 대안으로서 큰 역할을 하고 있다. 오늘날 농업은 품종 개량, 토양 비옥도 증진, 병해충 방제 및 잡초 제거 등의 방법으로 식량 증산에 몰두해 왔지만 지속적인 농약의 사용과 남용은 토양과 하천의 심각한 오염을 유발하고 있다. 또한, 농작물에 이들 농약이 잔류함으로써 독성, 환경오염 및 사람과 가축에 대한 독성 등의 문제를 일으키기 때문에 농약 사용은 현재 세계적으로 그에 대한 제제 조치가 강화되고 있다. 이와 같은 농약에 대한 우려와 삶의 질에 대한 관심이 커지면서 최근에는 새로운 대안으로서 농작물 병해충 방제에 미생물이나 식물추출물을 이용하는 생물학적 방제가 관심의 대상이 되고 있다.In eco-friendly agriculture, useful microorganisms or antagonistic microorganisms play a large role as an alternative to chemical pesticides. Today, agriculture has been devoted to food production by improving varieties, improving soil fertility, controlling pests and removing weeds, but continued use and abuse of pesticides has caused serious contamination of soils and rivers. In addition, since these pesticides remain in crops, causing problems such as toxicity, environmental pollution, and toxicity to humans and livestock, the use of pesticides is currently being strengthened in the world. As concerns about pesticides and interest in quality of life have grown, biological control using microorganisms or plant extracts as a new alternative has recently become a concern.

미생물 제제는 식물병 또는 해충 방제에 효과를 나타내는 세균, 진균, 바이러스 등으로 만든 제품을 일컬으며, 병해충 방제 외에도 농업에 이용할 수 있는 영역은 토양개량, 유기물 분해촉진, 양/수분 흡수 촉진, 생육촉진 및 제초작용 등이 있다(Johansson et al., 2004; Khan et al., 2007; Chandler et al., 2008). 유용 미생물이 식물의 생장을 돕는 방법으로 인산가용화, 질소고정, 식물생장촉진 호르몬 생산 등 생물비료기작이 알려져 있으며, 그 외에도 용균작용, 기생작용, 공간이나 양분 경쟁을 통한 길항작용, 항생물질 생산, 병저항성 유도 등 생물적 방제기작으로 알려진 방법으로 식물 생장을 간접적으로 돕는다. 건전한 토양과 작물 근권에 상대적으로 높은 개체군을 나타낸다고 보고한 형광성 Pseudomonas sp., Bacillus sp., Streptomyces sp. 등은 식물과의 상호작용을 촉진하는 매체로서의 역할을 하고, 작물 근권에 서식하는 미생물은 숙주 식물과 관계를 형성하는 과정에서 식물병해충의 효율적인 생물적 방제 등 작물 수확량 증가에 이용될 가능성이 높아 미생물의 농업적 활용도를 높일 수 있을 것으로 보고 있다.Microbial agents refer to products made of bacteria, fungi, viruses, etc. that are effective in controlling plant diseases or pests. In addition to pest control, areas that can be used for agriculture include soil improvement, organic matter decomposition promotion, nutrient / moisture absorption promotion, and growth promotion And weeding (Johansson et al., 2004; Khan et al., 2007; Chandler et al., 2008). Biological fertilizer mechanisms such as phosphate solubilization, nitrogen fixation, and plant growth-promoting hormone production are known as useful microorganisms to help plants grow. In addition, lysis, parasitic action, antagonism through space or nutrient competition, production of antibiotics, Indirectly assists plant growth by methods known as biological control mechanisms, such as induction of disease resistance. Fluorescent Pseudomonas sp. Reported to exhibit relatively high populations in healthy soil and crop roots. , Bacillus sp., Streptomyces sp. The back serves as a medium to promote interaction with plants, and microorganisms inhabiting the crop roots are highly likely to be used to increase crop yield, such as efficient biological control of plant pests in the process of forming a relationship with the host plant. It is expected to increase the agricultural utilization of.

본 발명자들은 이러한 유용미생물 또는 길항미생물이 갖는 다양한 생리활성을 연구하던 중, 신규 미생물 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5(Enterobacter asburiae ObRS-5)가 곰취 등의 식물에 역병을 일으키는 파이토프토라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)에 대한 방제효과가 우수함을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다. While studying the various physiological activities of these useful or antagonistic microorganisms, the present inventors, the new microorganism Enterobacter asburiae ObRS-5 ( Enterobacter asburiae ObRS-5), causes the plague of plants such as bear odors. The present invention was completed by confirming that the control effect against sally ( Phytophthora drechsleri ) is excellent.

대한민국 등록특허 제10-1512653호 (발명의 명칭 : 신규한 미생물 균주 및 친환경 비료용 미생물제제, 출원인 : 강원대학교 산학협력단, 등록일 : 2015년04월10일)Republic of Korea Registered Patent No. 10-1512653 (Invention name: New microorganism strain and microbial agent for eco-friendly fertilizer, Applicant: Kangwon National University Industry-Academy Cooperation Foundation, Registration Date: April 10, 2015) 대한민국 등록특허 제10-1820010호 (발명의 명칭 : 살선충 효능을 갖는 신규 엔테로박터 속 HK169균주 및 그의 배양물을 유효성분으로 함유하는 선충 방제제, 출원인 : 한국화학연구원, 등록일 : 2018년01월12일)Republic of Korea Registered Patent No. 10-1820010 (Invention name: Nematode control agent containing HK169 strain and its culture as an active ingredient in a new enterobacter having the nematode effect, Applicant: Korea Research Institute of Chemical Technology, Registration Date: January 2018 12 days)

Chandler, D., G. Davidson, W. Grant, J. Greaves and G. Tatchell. 2008. Microbial biopesticides for integrated crop management: an assessment of environmental and regulatory sustainability. Trends Food Sci. Technol. 19(5): 275-283.Chandler, D., G. Davidson, W. Grant, J. Greaves and G. Tatchell. 2008. Microbial biopesticides for integrated crop management: an assessment of environmental and regulatory sustainability. Trends Food Sci. Technol. 19 (5): 275-283. Khan, M. S., A. Zaidi and P. A. Wani. 2007. Role of phosphate-solubilizing microorganisms in sustainable agriculture - a review. Agron. Sustain. Dev. 27(1): 29-43.Khan, M. S., A. Zaidi and P. A. Wani. 2007. Role of phosphate-solubilizing microorganisms in sustainable agriculture-a review. Agron. Sustain. Dev. 27 (1): 29-43. Kwon, S. B., H. J. Jee, S. B. Bang, K. K. Lee and C. K. Hong. 1999. Phytophthora root rot of Ligularia fischeri caused by P. drechsleri. Korean Soc. Plant Pathol. 5(1): 58-60.Kwon, S. B., H. J. Jee, S. B. Bang, K. K. Lee and C. K. Hong. 1999. Phytophthora root rot of Ligularia fischeri caused by P. drechsleri. Korean Soc. Plant Pathol. 5 (1): 58-60. Johansson, J. F., L. R. Paul and R. D. Finlay. 2004. Microbial interactions in the mycorrhizosphere and their significance for sustainable agriculture. FEMS Microbiol. Ecol. 48(1): 1-13.Johansson, J. F., L. R. Paul and R. D. Finlay. 2004. Microbial interactions in the mycorrhizosphere and their significance for sustainable agriculture. FEMS Microbiol. Ecol. 48 (1): 1-13.

본 발명의 목적은 신규 미생물 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5(Enterobacter asburiae ObRS-5, 미생물 수탁번호 : KACC 81075BP) 균주 또는 이를 함유하는 미생물 제제를 제공하는 데에 있다. 보다 상세하게는 본 발명의 목적은 식물 역병균인 파이토프토라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)에 대하여 방제효과를 갖는 신규 미생물 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 또는 이를 유효성분으로 함유하는 미생물 제제를 제공하는 데에 있다. An object of the present invention is to provide a novel microorganism Enterobacter asburiae ObRS-5 ( Enterobacter asburiae ObRS-5, microorganism accession number: KACC 81075BP) strain or a microbial agent containing the same. In more detail, an object of the present invention is a novel microorganism Enterobacter asburier having a control effect against Phytophthora drechsleri , a plant pest, or a microorganism preparation containing the same as an active ingredient To provide.

본 발명은 식물병 방제효능을 갖는 신규 미생물 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5(Enterobacter asburiae ObRS-5, 미생물 수탁번호 : KACC 81075BP)에 관한 것이다. The present invention relates to a novel microorganism Enterobacter asburiae ObRS-5 having a plant disease control efficacy ( Enterobacter asburiae ObRS-5, microorganism accession number: KACC 81075BP).

상기 식물병은 역병균인 파이토프토라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)로부터 유도되는 것을 특징으로 한다. The plant disease is characterized by being derived from the late blight Phytophthora drechsleri .

상기 식물은 곰취, 고추, 토마토, 오이, 상추, 수박, 겨자, 당귀, 양파, 배추, 파, 무, 인삼, 딸기, 상추 및 마늘로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.The plant may be selected from the group consisting of gomchi, pepper, tomato, cucumber, lettuce, watermelon, mustard, Angelica, onion, cabbage, green onion, radish, ginseng, strawberry, lettuce and garlic.

상기 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주는 서열번호 1의 염기서열로 표현되는 16s rRNA의 유전자를 포함한다. The Enterobacter asburier ObRS-5 strain includes a gene of 16s rRNA expressed by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.

본 발명은 상기 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 식물병 방제용 미생물 제제를 제공한다. The present invention provides a microbial agent for controlling plant diseases comprising the Enterobacter asburier ObRS-5 strain or a culture medium thereof.

이에 본 발명은 상기 미생물 제제를 포함하는 미생물 농약에 관한 것이다. Accordingly, the present invention relates to a microbial pesticide comprising the microbial agent.

상기 미생물 농약은 종자코팅제, 종자침지제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제 및 관주살포제로 이루어진 군 중에서 선택되는 제형으로 제공될 수 있다. The microbial pesticide may be provided in a formulation selected from the group consisting of seed coating agent, seed soaking agent, soil conditioner, composting agent, foliar spraying agent and irrigation spraying agent.

또한 본 발명은 상기 미생물 제제를 10~1000배로 희석하여 희석액을 얻는 단계; 및, 상기 희석액을 방제대상 식물에 종자침지, 종자코팅, 엽면살포 또는 관주살포하는 단계;를 포함하는 식물 병원균 방제 방법을 제공한다. In addition, the present invention is a step of obtaining a diluted solution by diluting the microbial agent 10 to 1000 times; And, providing a method for controlling plant pathogens comprising; dipping the seed to the control target plant, seed coating, seed coating, foliar spray or irrigation spray.

이하 본 발명을 자세하게 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명에서 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주의 배양에 적용가능한 배지는 특별히 제한되지 않으며, 바람직하게는, TSB(Tryptic Soy Broth), TSA(Tryptic Soy Agar), NA(Nutrient Broth) 및 NA(Nutrient Agar)에서 선택되는 통상의 미생물 배지를 사용할 수 있다. The medium applicable to the culture of Enterobacter asburier ObRS-5 strain in the present invention is not particularly limited, preferably, Tryptic Soy Broth (TSB), Tryptic Soy Agar (TSA), Nutrient Broth (NA) and NA ( Nutrient Agar) can be used.

본 발명의 균주 배양액은 호기 조건에서 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5를 pH 5.0~9.0 및 15~35℃에서 배양한 것일 수 있다. 보다 바람직하게는 호기 조건에서 pH 6.5~7.5 및 25~30℃에서 배양하는 것이 더 좋다. 이 때 적절한 배양시간은 24-48 시간인 것이 바람직하며, 배양방법은 액체 진탕 배양이나 고체 배양 어느 방법이든지 선택될 수 있다. The strain culture solution of the present invention may be cultured at pH 5.0-9.0 and 15-35 ° C. of Enterobacter asburier ObRS-5 under aerobic conditions. More preferably, it is better to culture at pH 6.5 to 7.5 and 25 to 30 ° C under aerobic conditions. At this time, it is preferable that the proper incubation time is 24-48 hours, and the culture method may be selected from either liquid shaking culture or solid culture.

본 발명은 상기 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 식물병 방제제를 제공하는데, 상기 균주 또는 이의 배양액은 사용용도에 따라 적절하게 물 또는 균주 배양전의 배지로 희석하여 사용할 수 있다. The present invention provides a plant disease control agent comprising the Enterobacter asburier ObRS-5 strain or a culture medium thereof, wherein the strain or culture medium thereof can be appropriately diluted with water or a medium prior to strain culture depending on the intended use. have.

본 발명은 또한 상기 미생물 제제의 형태는 크게 제한되지 않으나, 미생물 농약으로 제공되며, 더 바람직하게는 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제 또는 관주살포제의 제형으로 제공될 수 있다. The present invention is also not particularly limited in the form of the microbial agent, but is provided as a microbial pesticide, and more preferably, may be provided in the form of a seed coating agent, a soil conditioner, a compost premature agent, a foliar sprayer, or an irrigation sprayer.

상기 미생물 농약으로서, 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제 또는 관주살포제는 통상의 식물 농약에 사용하는 담체 또는 부형제를 사용할 수 있다. 상기 담체 또는 부형제로서 바람직하게는 벤토나이트, 계면활성제, 탈크, 제오라이트 등을 사용할 수 있다. As the microbial pesticide, a seed coating agent, soil conditioner, composting agent, foliar spraying agent or irrigation spraying agent may be used as a carrier or excipient used in conventional plant pesticides. As the carrier or excipient, bentonite, surfactant, talc, zeolite and the like can be preferably used.

또한 본 발명은 상기 미생물 제제를 10~1000배로 희석(1x106~8 CFU/㎖)하여 희석액을 얻는 단계; 및, 상기 희석액을 방제대상 식물에 종자침지, 종자코팅, 엽면살포 또는 관주살포하는 단계;를 포함하는 식물 병원균 방제 방법을 제공한다. 상기 종자침지, 종자코팅 시의 희석액 대 종자의 혼합비는 종자가 침지되거나 코팅되기만 한다면 사용량은 적절하게 조절할 수 있다. 또한 상기 엽면살포 또는 관주살포 시 각 희석액의 살포량도 토양 분포나 식물 상태에 따라 적절하게 조절할 수 있다. In addition, the present invention is a step of obtaining a diluent by diluting the microbial agent 10 to 1000 times (1x10 6 to 8 CFU / ㎖); And, providing a method for controlling plant pathogens comprising; dipping the seed to the control target plant, seed coating, seed coating, foliar spray or irrigation spray. The mixing ratio of the seed immersion and the diluent at the time of seed coating to the seed can be appropriately adjusted as long as the seed is immersed or coated. In addition, the application amount of each diluent can be appropriately adjusted according to soil distribution or plant conditions when spraying the foliar or spraying irrigation.

본 발명의 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 미생물 제제의 방제대상 식물 또는 생육촉진 대상 식물은 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게는 곰취, 고추, 토마토, 오이, 상추, 수박, 겨자, 당귀, 양파, 배추, 파, 무, 인삼, 딸기, 상추 및 마늘로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 또한 상기 방제대상 식물로서 역병에 취약한 각종 화훼류의 적용도 가능하다. The plant to be controlled or the plant to promote growth of the microbial agent comprising the strain of the present invention or a culture medium thereof is not particularly limited, but is preferably bear, red pepper, tomato, cucumber, lettuce, watermelon, mustard, Angelica, onion, Chinese cabbage, It can be selected from the group consisting of green onion, radish, ginseng, strawberry, lettuce, and garlic. In addition, various plants vulnerable to late blight can be applied as the plant to be controlled.

본 발명은 식물 역병균에 대하여 방제효과를 갖는 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5(Enterobacter asburiae ObRS-5, 미생물 수탁번호 : KACC 81075BP) 균주 또는 이를 함유하는 미생물 제제에 관한 것으로서, 상기 균주를 이용한 환경공해와 인체독성이 없어 곰취 등의 식물에 대해 환경 친화적인 역병 방제 또는 식물의 생육 촉진이 가능하여 작물의 수량을 증대시킬 수 있다. 엔테로박터 아스뷰리에와 관련된 식물병 방제제 관련 기술로서 대한민국 등록특허 제10-1512653호와 대한민국 등록특허 제10-1820010호에 각각 수분 결핍과 염분 스트레스를 받는 사구식물의 근권에서 분리된 신규한 엔테로박터 아스뷰리에 m-4 및 이를 함유하는 식물생장촉진 효과가 있는 친환경 비료용 미생물제제, 토마토뿌리혹선충에 대해 높은 살선충력을 갖는 엔테로박터 속 HK169 균주에 관한 기술이 개시되어 있으나, 각 균주의 기능 및 이로 인해 발생하는 효과가 달라 본 발명과는 다른 기술이라고 할 수 있다. The present invention relates to an enterobacter asburiae ObRS-5 (microbial accession number: KACC 81075BP) strain or a microbial agent containing the same, which has a control effect against plant pests, and the environment using the strain Since it has no pollution and no human toxicity, it is possible to control the environment-friendly plague or promote plant growth for plants such as bear odor, thereby increasing the number of crops. As a technology related to plant disease control related to Enterobacter asburier, a new entero isolated from the root zone of a dune plant under water deficiency and salinity stress in Korean Patent Registration No. 10-1512653 and Korean Patent Registration No. 10-1820010, respectively. Bacterium Asburier m-4 and a microbial agent for eco-friendly fertilizers having a plant growth promoting effect containing the same, and a technique for HK169 strain of Enterobacter genus having high killing power against tomato root knot nematodes, is disclosed, It can be said to be a different technology from the present invention due to different functions and effects generated therefrom.

도 1은 본 발명의 길항미생물 분리과정에서 확인된 항균력을 나타내는 균주의 비율을 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주의 종자 생물 검정법을 나타내는 모식도이다.
도 3은 본 발명의 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주의 종자 생물 검정 결과를 나타내는 그래프 및 사진이다.
도 4는 본 발명의 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주의 16S rRNA의 DNA 염기서열을 나타내는 도면이다.
도 5는 본 발명의 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주의 유전학적 위치를 나타내는 계통수 그림이다.
도 6은 본 발명의 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주의 종자 코팅처리에 의한 곰취 역병 방제 효과를 나타내는 사진이다.
도 7은 본 발명의 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주의 관주처리에 의한 곰취 역병 방제 효과를 나타내는 사진이다.
1 is a graph showing the proportion of strains showing the antibacterial activity identified in the antagonistic microbial separation process of the present invention.
Figure 2 is a schematic diagram showing the seed bioassay of Enterobacter asburier ObRS-5 strain of the present invention.
Figure 3 is a graph and photographs showing the results of seed bioassay of the Enterobacter asburier ObRS-5 strain of the present invention.
4 is a diagram showing the DNA sequence of the 16S rRNA of the Enterobacter asburier ObRS-5 strain of the present invention.
Figure 5 is a phylogenetic tree showing the genetic location of the Enterobacter asburier ObRS-5 strain of the present invention.
Figure 6 is a photograph showing the control effect of Gomcheok blight by seed coating treatment of Enterobacter asburier ObRS-5 strain of the present invention.
Figure 7 is a photograph showing the effect of controlling the antibacterial deodorant by irrigation treatment of Enterobacter asburier ObRS-5 strain of the present invention.

이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다. Hereinafter, a preferred embodiment of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the embodiments described herein and may be embodied in other forms. Rather, it is provided to sufficiently convey the spirit of the present invention to those skilled in the art so that the contents introduced herein are thorough and complete.

<실시예 1. 신규 균주의 분리><Example 1. Isolation of new strains>

곰취 역병을 방제하기 위한 미생물을 분리하기 위해 공주, 익산, 밀양, 순창 등 국내 14개 지역의 작물 재배 토양, 근권 토양 및 뿌리로부터 세균을 분리하였다. 채취한 토양 및 근권토양은 3 g을 멸균수 27 ml에 넣고 28℃에서 180 rpm으로 30분 간 진탕 처리한 후 1 ml을 취하여 멸균수 9 ml에 단계 희석하여 Tryptic Soybean Agar (TSA; Difco), 1/10 TSA, Nutrient Agar (NA; Difco) 배지에 도말하였다. 채취한 뿌리는 수세 후 물기를 제거하고 멸균한 막자사발에 멸균수 3 ml과 시료를 넣고 완전히 갈은 후, 멸균수 24 ml을 더 첨가한 현탁액을 위와 같은 방법으로 각각의 배지에 도말하였다. 28℃에서 48시간 동안 배양한 후 색과 형태가 다른 단일 콜로니를 순수 분리하였고, 20%(v/v) glycerol 수용액에 넣어 -70℃에 보관하며 실험에 이용하였다.Bacteria were isolated from soils and roots of crop cultivation, roots and roots in 14 regions of Korea, including Gongju, Iksan, Miryang, and Sunchang, to isolate microorganisms for controlling Gomchi plague. For the collected soil and mycobacterium soil, put 3 g into 27 ml of sterile water, shake for 30 minutes at 28 ° C at 180 rpm, take 1 ml and dilute it stepwise in 9 ml of sterile water to tryptic soybean agar (TSA; Difco), 1/10 TSA, Nutrient Agar (NA; Difco) medium. The collected roots were drained after washing with water, and 3 ml of sterile water and a sample were put into a sterilized mortar and thoroughly ground, and a suspension in which 24 ml of sterile water was further added was applied to each medium in the same manner as above. After incubation at 28 ° C. for 48 hours, a single colony having a different color and shape was purely separated, put in a 20% (v / v) glycerol aqueous solution, stored at -70 ° C., and used in the experiment.

<실시예 2. 곰취 역병균에 대한 항균력 검정><Example 2. Antibacterial activity test against Gomchi blight>

실시예 1에서 분리한 균주들의 역병균 Phytophthora drechsleri에 대한 항균력을 검정하였다. Potato Dextrose Agar (PDA; Difco) 배지의 중앙으로부터 35 ㎜ 거리에 분리균주를 획선 도말하여 25℃에서 24시간 동안 배양하였고, 대조구에는 멸균수를 이용하였다. Phytophthora drechsleri 균총을 PDA 배지의 정 가운데에 치상하여 25℃에서 5일 간 분리균주와 배양한 후 저지대(Inhibition zone)의 크기를 측정하여 항균력이 우수한 미생물을 선별하였다. Against the plague Phytophthora drechsleri of the strains isolated in Example 1 Antibacterial activity was tested. Separated strains were streaked at a distance of 35 mm from the center of the Potato Dextrose Agar (PDA; Difco) medium and cultured at 25 ° C. for 24 hours, and sterile water was used as a control. After culturing Phytophthora drechsleri in the middle of PDA medium for 5 days at 25 ° C and incubating with the isolates, the size of the inhibition zone was measured to select microorganisms with excellent antibacterial activity.

그 결과, 도 1과 같이 분리 세균 385점의 Phytophthora drechsleri에 대한 길항력을 검정한 결과, 역병균의 균사생장억제율이 25% 이상인 균주는 11점으로 확인되며 전체 분리균주의 3%로 나타난다. 또한 균사생장억제율이 10% 이상 25% 미만인 균주는 52점으로, 전체 분리균주의 14%로 나타났으며, 10% 미만이거나 억제 효과가 나타나지 않은 균주는 322점으로, 전체 분리균주의 84%로 나타나 분리 세균 중 대부분이 Phytophthora drechsleri에 대한 항균 활성이 없는 것으로 확인된다. As a result, as a result of assaying the antagonistic power of Phytophthora drechsleri of 385 isolates as shown in FIG. 1, strains having a mycelial growth inhibition rate of more than 25% of late blight are identified as 11 points, and appear as 3% of all isolates. In addition, the strains with mycelial growth inhibition rate of 10% or more and less than 25% were 52 points, and 14% of all isolates were strained. Strains with less than 10% or no inhibitory effect were 322 points, with 84% of all isolates. It appears that most of the isolated bacteria have no antibacterial activity against Phytophthora drechsleri .

이 결과를 통해, 전체 분리균주의 17% 즉, 균사생장억제율이 10% 이상 나타난 분리세균 63점을 길항미생물로서 선별하였다.Through these results, 63 isolates with a total mycelial growth rate of 17%, that is, mycelial growth inhibition rate of 10% or more, were selected as antagonistic microorganisms.

<실시예 3. 종자 생물 검정을 통한 미생물 선발><Example 3. Microbial selection through seed bioassay>

실시예 2에서 선별한 Phytophthora drechsleri에 대한 항균력이 우수한 63점의 분리균주를 대상으로 종자를 이용한 생물 검정을 수행하였다. 고추 종자는 발아 소요일수가 짧고 발아율이 높고 고르며 곰취 종자와 표면적이 비슷하면서 유묘기에 Phytophthora drechsleri에 대한 감수성이 높아, 종자 생물 검정을 수행하기에 효율 향상 및 시간과 비용 절감에 적합하였다. 종자를 이용한 생물 검정 방법은 Chang 등(2001)의 방법을 수정하여 실시하였다(도 2 참조). A bioassay using seeds was performed on 63 isolates having excellent antibacterial activity against Phytophthora drechsleri selected in Example 2. Pepper seeds have a short germination time, high germination rate, evenness , and similar surface area to bear-bearing seeds, and are highly susceptible to Phytophthora drechsleri in seedlings, making them suitable for improving efficiency and reducing time and cost in performing seed bioassays. The bioassay method using seeds was carried out by modifying the method of Chang et al. (2001) (see FIG. 2).

먼저, 선별된 분리균주를 TSA 배지에 획선 도말하여 28℃에서 24시간 동안 배양한 뒤 0.1%(w/v) peptone water (Becton Dickinson Biosciences, USA)에 현탁하여 농도를 1.0x108 cfu/ml로 조절하였다(OD600=0.5). Phytophthora drechsleri 균주는 0.02% glucose(w/v)가 첨가된 1.5%(w/v) water agar 배지 중앙에 직경 5 ㎜ 균총을 치상하여 28℃에서 24시간 배양하였다. 고추 종자(Manitta, Nongwoo-bio, Korea)는 표면의 미생물을 제거하기 위해 1% NaClO 및 70% Ethanol 용액으로 표면 살균하여 멸균수로 적신 필터페이퍼에 치상하였고 25℃에서 3일 동안 발아시킨 후 유근이 2 ㎜ 발아한 종자를 선별하였다. 선별한 종자는 준비한 분리균주현탁액에 3시간 침지처리한 후 Phytophthora drechselri를 배양한 water agar 배지의 가장자리에 치상하였다(n=12). 대조구에는 멸균수에 침지한 고추 종자를 치상하였고, 모든 처리구는 25℃에서 광을 14시간/일으로 조사하면서 배양하였다. 이 후 처리 7일과 14일 후에 발병률(%)을 조사하였다.First, the selected isolates were streaked on TSA medium, incubated at 28 ° C. for 24 hours, and then suspended in 0.1% (w / v) peptone water (Becton Dickinson Biosciences, USA) to give a concentration of 1.0x10 8 cfu / ml. It was adjusted (OD 600 = 0.5). The Phytophthora drechsleri strain was incubated at 28 ° C. for 24 hours with a 5 mm diameter microflora in the center of 1.5% (w / v) water agar medium to which 0.02% glucose (w / v) was added. Pepper seeds (Manitta, Nongwoo-bio, Korea) were surface sterilized with 1% NaClO and 70% Ethanol solution to remove the microorganisms on the surface, dentified on filter paper moistened with sterile water, germinated at 25 ° C for 3 days, and then rooted The 2 mm germinated seeds were selected. The selected seeds were immersed in the prepared isolate suspension for 3 hours, and then placed on the edge of the water agar medium in which Phytophthora drechselri was cultured (n = 12). In the control group, pepper seeds immersed in sterile water were incubated, and all treatments were incubated with irradiation at 25 ° C. for 14 hours / day. The incidence (%) was examined 7 and 14 days after treatment.

이상과 같이 1차 선발한 분리균주 63점을 대상으로 역병 억제 효과가 있는 균주를 선발하기 위해 종자 생물 검정을 수행한 결과, ObRS-5 균주의 결과가 가장 좋은 것으로 확인되어 이 결과를 도 3에 나타내었다. As described above, as a result of performing a seed bioassay to select a strain having a plague suppression effect on 63 primary isolates, the result of the ObRS-5 strain was confirmed to be the best, and this result is shown in FIG. 3. Shown.

도 3에서 상단 '가' 그래프는 하단 '나'의 1.5%(w/v) water agar 배지에서 확인된 고추 종자의 성장 상태를 수치화하여 나타낸 것으로서, 도 3에서 '가'와 '나'의 A와 D는 ObRS-5 균주와 Phytophthora drechselri가 같이 처리된 것이고, B와 E는 Phytophthora drechselri만 처리된 것이며, C와 F는 무처리군이다. The upper 'A' graph in FIG. 3 is a numerical representation of the growth status of pepper seeds identified in 1.5% (w / v) water agar medium of the lower 'I', and in FIG. 3, A of 'A' and 'I' And D were treated with ObRS-5 strain and Phytophthora drechselri , B and E were treated only with Phytophthora drechselri , and C and F were untreated.

도 3의 결과에서, Phytophthora drechselri만 처리된 것의 발병률은 7일에 80.6%, 14일 94.4%로 나타나지만, ObRS-5 균주와 Phytophthora drechselri가 같이 처리된 처리구(A와 D)에서 역병 발병률이 7일에 11.1%와 14일에 30.6%로 나타나, 현저한 역병 억제 효과가 있음을 확인할 수 있다. In the results of FIG. 3, the incidence of treatment with only Phytophthora drechselri is 80.6% on day 7 and 94.4% on day 14, but the incidence of late blight on treatments (A and D) treated with ObRS-5 strain and Phytophthora drechselri is 7 days To 11.1% and 30.6% on the 14th, it can be confirmed that there is a remarkable plague suppression effect.

<실시예 4. 선발균주의 생리학적 특성, 16S rDNA 염기서열 분석 및 계통수 작성><Example 4. Physiological characteristics of selected strains, 16S rDNA sequence analysis and phylogenetic tree preparation>

선발한 균주 ObRS-5를 동정하기 위해, 배양조건을 확인하였다. 상기 균주는 혐기 조건보다 호기 조건에서 잘 자라며, pH 5.0~9.0 및 15~35℃에서 배양가능한 것으로 확인된다. 보다 바람직하게는 호기 조건의 pH 6.5~7.5 및 25~30℃에서 배양이 잘 되며, pH 7.0 및 28℃에서 가장 잘 자랐다. 적합한 배양용 배지는 TSB(Tryptic Soy Broth), TSA(Tryptic Soy Agar), NA(Nutrient Broth), 및 NA(Nutrient Agar)인 것으로 확인되었고, 액체 진탕 배양이나 고체 배양 모두 균주의 성장이 잘 되었다. 또한 균주의 상태가 가장 최적으로 배양되기 위해서는 전배양된 균주를 새 배지에 24~48 시간 동안 배양하는 것이 바람직하였다. 이 때 배지 내 균주의 초기 접종 농도는 1x104~5 CFU/㎖인 것이 바람직하였다. In order to identify the selected strain ObRS-5, the culture conditions were checked. The strain grows better in aerobic conditions than in anaerobic conditions, and is confirmed to be cultivable at pH 5.0-9.0 and 15-35 ° C. More preferably, the culture is good at pH 6.5 to 7.5 and 25 to 30 ° C under aerobic conditions, and grows best at pH 7.0 and 28 ° C. Suitable culture media were TSB (Tryptic Soy Broth), TSA (Tryptic Soy Agar), NA (Nutrient Broth), and NA (Nutrient Agar), and both liquid shake culture and solid culture showed good growth of the strain. In addition, in order for the state of the strain to be optimally cultured, it was preferable to culture the pre-cultured strain in a new medium for 24 to 48 hours. At this time, the initial inoculation concentration of the strain in the medium was preferably 1x10 4 to 5 CFU / mL.

다음으로는 유전학적 특성을 확인하기 위해, ObRS-5 균주를 TSA 배지에 획선 도말하여 28℃에서 24시간 동안 배양한 뒤 단일 콜로니를 Tryptic Soybean Broth (TSB; Difco) 배지에 접종하여 28℃에서 48시간 동안 배양하였다. 균주 배양액은 8,000 rpm에서 15분 동안 원심 분리하여 균체를 수확한 뒤 Genomic DNA Prep kit (Nanohelix, Korea)로 제조사의 매뉴얼에 따라 genomic DNA를 추출하였다. 추출한 DNA의 16S rDNA 염기서열을 증폭하기 위해 27F (5'-GAGTTTGMTCCTGGCTCAG-3'), 1492R (5'-ACGGYTACCTTGTTACGACTT-3') (M은 A 또는 C, Y는 C 또는 T을 나타냄) 프라이머를 이용하여(Weisburg et al., 1991) 95℃에서 5분 동안 열을 가한 후, 95℃에서 1분, 55℃에서 1분, 72℃에서 1분 30초 동안 30회 반응 및 72℃에서 10분 동안 반응시켰다. 증폭된 PCR 산물은 전기영동 분석으로 길이를 확인한 후 Genotech Co. (Daejeon, Korea)에 염기서열 분석을 의뢰하였다. 16S ribosomal RNA에 대한 DNA 염기서열을 이용한 분자계통수를 작성하기 위해 균주의 염기서열을 MEGA 6.06 프로그램을 이용하여 정렬한 뒤 Neighbor-joining 알고리즘을 사용하여 계통수를 작성하였다(Bootstrapping 1000회 반복; Felsenstein, 1985). 비교한 표준 균주의 염기 서열은 EzTaxon-e 서버(http://www.eztaxon.org)를 통해 다운로드 받아 이용하였다. Next, in order to confirm the genetic characteristics, the ObRS-5 strain was streaked on TSA medium and incubated at 28 ° C. for 24 hours, and then a single colony was inoculated in Tryptic Soybean Broth (TSB; Difco) medium at 28 ° C., 48 Incubated for hours. The strain culture was centrifuged at 8,000 rpm for 15 minutes to harvest the cells, and genomic DNA was extracted according to the manufacturer's manual using the Genomic DNA Prep kit (Nanohelix, Korea). To amplify the 16S rDNA base sequence of the extracted DNA, 27F (5'-GAGTTTGMTCCTGGCTCAG-3 '), 1492R (5'-ACGGYTACCTTGTTACGACTT-3') (M is A or C, Y is C or T) primer is used. (Weisburg et al., 1991) After heating at 95 ° C for 5 minutes, 30 reactions at 95 ° C for 1 minute, 55 ° C for 1 minute, 72 ° C for 1 minute and 30 seconds, and 72 ° C for 10 minutes To react. After confirming the length of the amplified PCR product by electrophoresis analysis, Genotech Co. (Daejeon, Korea) was commissioned to sequence analysis. To create a molecular sequence using the DNA sequence for 16S ribosomal RNA, the strain sequence was sorted using the MEGA 6.06 program, and then a phylogenetic tree was created using a neighbor-joining algorithm (Bootstrapping 1000 repetitions; Felsenstein, 1985) ). The base sequence of the compared standard strain was downloaded and used through the EzTaxon-e server (http://www.eztaxon.org).

이에 대한 ObRS-5 균주의 16S rRNA 유전자의 DNA 염기서열(서열번호 1)은 도 4와 같이 확인되었으며, 이를 이용하여 도 5와 같이 분자계통수를 작성한 결과, Enterobacter 속의 여러 균주들과 근연관계에 속하는 것으로 나타났다. 또한 ObRS-5 균주는 Enterobacter asburiae JCM 6052 균주와 99.9%의 높은 상동성을 보였으며 Bootstrap 값은 86%로 비교적 높은 것으로 나타나, Enterobacter asburiae의 subcluster에 속하는 것으로 확인되어, 최종적으로 Enterobacter asburiae ObRS-5로 동정하였다. The DNA nucleotide sequence (SEQ ID NO: 1) of the 16S rRNA gene of the ObRS-5 strain was identified as shown in FIG. 4, and as a result of creating a molecular system as shown in FIG. 5, belonging to a relationship with several strains of Enterobacter Appeared. Also ObRS-5 strain Enterobacter asburiae JCM 6052 strain and showed a high homology of 99.9% Bootstrap values are shown to be relatively high as 86%, are found to belong to the subcluster of Enterobacter asburiae, finally Enterobacter asburiae to ObRS-5 Pity.

<실시예 5. ObRS-5균주의 종자 코팅처리에 의한 곰취 역병 방제 효과 검정><Example 5. Effect of control of seed coating of ObRS-5 strains to control the effect of controlling the disease of bear deodorant>

곰취 역병의 토양처리(접종)는 다음과 같이 진행하였다. 역병균인 Phytophthora drechselri의 유주자는 기주 식물에 침입하는 1차 전염원으로 알려져 있기 때문에 역병균을 다루는 연구에서 다량의 유주자(zoospores)를 확보하는 것은 실험을 수행하기 위한 중요한 요소 중 하나이다(Mansoori and Banihashemi, 1982). 먼저 유주자낭 유도에 필요한 토양추출물을 제조하기 위해, 2 ㎜ 체에 거른 토양을 증류수와 1 : 3(v/v) 비율로 혼합하고 CaCO3 3 g을 첨가하여 실온에서 20시간 동안 정치하였고, 3겹의 거즈로 토양을 걸러낸 여액을 취하여 필터페이퍼로 여과한 후 멸균하여 사용하였다. 직경 5 ㎜의 Phytophthora drechselri 균총을 V8 juice 배지(V8 juice (Campbell's Soup Co., Camden, USA) 330 ml, CaCO3 1.5 g, DW 670 ml)에서 3일간 배양 한 후 멸균수로 배지를 씻어내고 토양추출물을 첨가한 후 20℃에서 광을 24시간/일로 조사하면서 6일간 정치배양하였다. 유주자낭 생성 여부를 실체현미경(M205A, LEICA, Germany)으로 확인한 후 유주자를 나출시키기 위해 25분간 -20℃에서 처리한 후 3시간 동안 실온에 정치하였다. 균사는 멸균한 거즈로 걸러낸 후 유주자 현탁액 농도를 조절하여 주 당 5 ml씩 토양 g당 5.0x105 zoospores가 되도록 토양 관주처리하였다.Soil treatment (inoculation) of Gomchi plague was conducted as follows. Since the host of the late blight Phytophthora drechselri is known to be the primary source of invasion of host plants, securing large amounts of zoospores in studies dealing with late blight is one of the important factors for conducting experiments (Mansoori and Banihashemi, 1982). First, in order to prepare the soil extract necessary for inducing the sacrum, the soil filtered through a 2 mm sieve was mixed with distilled water in a ratio of 1: 3 (v / v) and 3 g of CaCO 3 was added to stand for 20 hours at room temperature, and 3 layers The filtrate from which the soil was filtered with gauze was collected, filtered through filter paper, and sterilized. After incubating the Phytophthora drechselri flora with a diameter of 5 mm in V8 juice medium (330 ml of V8 juice (Campbell's Soup Co., Camden, USA), CaCO 3 1.5 g, DW 670 ml) for 3 days, wash the medium with sterile water and wash the soil. After the extract was added, the mixture was allowed to stand still for 6 days while irradiating light at 20 ° C. for 24 hours / day. After confirming the presence or absence of a juvenile follicle, the microscope was checked with a stereomicroscope (M205A, LEICA, Germany), and treated at -20 ° C for 25 minutes to exit the jujuder, and then left at room temperature for 3 hours. After the mycelium was filtered with sterile gauze, the soil was irrigated with 5.0 ml per week of soil to adjust the concentration of the owner's suspension to be 5.0x10 5 zoospores per g of soil.

다음으로, 선발한 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주의 곰취 종자 코팅처리에 의한 역병 방제 효과를 검정하였다. 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주는 TSA 배지에 획선 도말하여 28℃에서 24시간 동안 배양한 뒤 0.1% peptone water에 현탁하여 농도를 1.0x108 cfu/ml로 조절하였다. 멸균한 상토(Baroker, Seoul Bio, Korea)에 멸균거즈를 깔고 그 위에 표면살균한 곰취 종자를 파종한 후 다시 멸균토양으로 얇게 덮었다. 파종 5일 후 유근이 1.5∼2 ㎜ 발아한 곰취 종자를 선별하여 준비한 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 현탁액에 3시간 동안 침지처리한 후 32공 트레이에 재 파종하였다(n=12). 대조구는 0.1% peptone water에 침지처리한 후 파종하였다. 파종 4주 후 역병균인 Phytophthora drechselri를 앞서 제시한 토양관주처리를 통해 접종하고 대조구에서 지상부 시들음 병징이 50% 이상 나타났을 때 발병률(%)을 조사하였다. Next, the selected Enterobacter Asburier The anti-blight control effect of the ObRS-5 strain by coating the odorous seed was tested. Enterobacter asburier ObRS-5 strain was streaked on TSA medium, incubated at 28 ° C. for 24 hours, and then suspended in 0.1% peptone water to adjust the concentration to 1.0 × 10 8 cfu / ml. Sterile gauze was placed on sterilized topsoil (Baroker, Seoul Bio, Korea), and the surface sterilized bear seeds were sown, and then covered again with sterile soil. After 5 days of sowing, after 5 hours of sowing, the germ-bearing seeds with germination of 1.5-2 mm germinated were immersed in the Enterobacter asburier ObRS-5 strain suspension prepared for 3 hours, and then re-sown into a 32-hole tray (n = 12). Controls were sown after immersion in 0.1% peptone water. After 4 weeks of sowing, the incidence rate (%) was investigated when the phagocytosis Phytophthora drechselri was inoculated through the soil irrigation treatment presented above, and over 50% of the withered lesions appeared in the control.

이렇게 상기 발병률에 대한 결과를 표 1과 도 6에 나타내었는데, 도 6은 표 1의 Experiment 1 결과로서, A는 병원균인 Phytophthora drechselri의 처리 전에 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5로 종자코팅 처리된 군, B는 병원균인 Phytophthora drechselri 만의 처리군, C는 무처리군을 나타낸다. 또한 표 1의 결과를 이용하여 방제가도 계산하였다. The results of the incidence are shown in Table 1 and FIG. 6, and FIG. 6 shows Experiment 1 results of Table 1, wherein A is a seed-coated group of Enterobacter asburier ObRS-5 before treatment with the pathogen Phytophthora drechselri . , B represents the treatment group of Phytophthora drechselri , the pathogen, and C represents the untreated group. In addition, the control was also calculated using the results in Table 1.

방제가 = ((무처리-처리)/무처리) x 100 (%)Control = ((no treatment-treatment) / no treatment) x 100 (%)

표 1 및 도 6과 같이, 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주로 종자코팅 처리된 군의 역병 발병률은 25.0%로 나타나, 60%(방제가)의 곰취 역병 방제 효과가 있는 것으로 확인된다. 반복 수행한 결과에서도 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주로 종자처리된 군은 60%의 곰취 역병 방제 효과를 나타낸다. As shown in Table 1 and FIG. 6, the incidence of late blight in the seed-coated group with Enterobacter asburier ObRS-5 strain is 25.0%, which is confirmed to have an effect of controlling deodorant plague of 60% (control). Even in the result of repeated executions, the group treated with Enterobacter asburier ObRS-5 strain exhibits a control effect of 60% of anemone plague.

TreatmentTreatment Disease incidence (%)Disease incidence (%) Experiment 1Experiment 1 Experiment 2Experiment 2 5 days after5 days after 15 days after15 days after 5 days after5 days after 15 days after15 days after ObRS-5ObRS-5 25.025.0 25.0 25.0 18.8 18.8 25.025.0 pathogen-treated controlpathogen-treated control 56.3 56.3 62.5 62.5 62.5 62.5 62.5 62.5 nontreated healthy controlnontreated healthy control 0 0 0 0 0 0 0 0

<실시예 6. ObRS-5균주의 관주처리에 의한 곰취 역병 방제효과 검정><Example 6. Control of the effect of controlling the disease of bear odor by irrigation treatment of ObRS-5 strain>

엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주의 관주처리에 의한 곰취 역병 방제 효과를 검정하기 위해, ObRS-5 균주를 TSB 배지에 접종하여 180 rpm, 48시간 동안 진탕배양한 후 농도를 1x108 cfu/ml로 조절하였다. 준비한 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 배양액을 파종 4주된 곰취 12주에 주당 50 ml씩 1회(표 2의 Experiment 1 및 2) 또는 7일 간격으로 2회(표 2의 Experiment 3) 관주 처리하였고 대조구에는 TSB 배지를 동일하게 관주 처리하였다. 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 배양액 처리 7일 후 역병균 Phytophthora drechselri를 실시예 5에서 수행한 바와 같이 접종하였고 대조구에서 지상부 시들음 병징이 50% 이상 나타났을 때 발병률(%)을 조사하여 표 2와 도 7에 나타내었다.Enterobacter Asburier ObRS-5 In order to test the effect of controlling the deodorant plague by irrigation treatment, the ObRS-5 strain was inoculated in TSB medium and shaken and cultured for 180 rpm, 48 hours, and then the concentration was 1x10 8 cfu / ml. Was adjusted to. The prepared Enterobacter Asburier ObRS-5 culture was irrigated once every 50 ml per week (Experiment 1 and 2 in Table 2) or twice at 7 day intervals (Experiment 3 in Table 2) at 12 weeks of sowing at 4 weeks after sowing. In the control group, TSB medium was irrigated in the same manner. Enterobacter Asburier ObRS-5 was inoculated with Phytophthora drechselri , as shown in Example 5, after 7 days of culture, and the incidence (%) was investigated when the withered withdrawal symptom was greater than 50% in the control. It is shown in FIG. 7.

도 7은 표 2의 Experiment 1 결과로서, A와 C는 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주의 관주처리 후 역병균 Phytophthora drechselri를 접종한 군이며, B와 D는 역병균 Phytophthora drechselri만을 접종한 군이다. 7 is a result of Experiment 1 in Table 2, A and C are groups inoculated with the bacterium Phytophthora drechselri after the irrigation treatment of Enterobacter asburier ObRS-5 strain, and groups B and D were inoculated only with the bacterium Phytophthora drechselri to be.

TreatmentTreatment Disease incidence (%)Disease incidence (%) Experiment 1Experiment 1 Experiment 2Experiment 2 Experiment 3 Experiment 3 7 days after7 days after 14 days after14 days after 7 days after7 days after 14 days after14 days after 7 days after7 days after 14 days after14 days after ObRS-5ObRS-5 0 0 7.1 7.1 0 0 6.3 6.3 11.1 11.1 11.111.1 ControlControl 68.8 68.8 75.0 75.0 50.0 50.0 50.0 50.0 86.7 86.7 93.3 93.3

표 2와 도 7을 참고하면, 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 배양액의 토양 관주처리 1회에 의한 곰취 역병 방제효과를 검정한 결과, 처리 14일째에 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 처리구에서 발병률이 6.3~7.1%로서, 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주가 처리되지 않고 Phytophthora drechselri만 처리된 군과 비교하여 87.4~90.5%(방제가)의 곰취 역병 방제 효과가 있는 것으로 확인된다. Referring to Table 2 and FIG. 7, as a result of assaying the effect of controlling the deodorant blight by soil irrigation treatment of Enterobacter Asburier ObRS-5 strain culture, Enterobacter Asburier ObRS-5 strain treatment group on the 14th day of treatment In the incidence rate is 6.3 ~ 7.1%, compared to the group treated with Enterobacter asburier ObRS-5 and not Phytophthora drechselri alone, it was confirmed that it has an antibacterial effect of 87.4 to 90.5% (control).

또한 토양 관주처리 2회 실시한 결과, 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 처리구의 발병률은 7일에 11.1%로 나타나 87.2%(방제가)의 곰취 역병 방제 효과가 나타났고, 역병균 접종 14일 후에 88.1%(방제가)의 곰취 역병 방제 효과를 나타내는 것을 알 수 있다. In addition, as a result of two soil irrigation treatments, the incidence rate of Enterobacter asburier ObRS-5 strain treatment was 11.1% on the 7th, which showed 87.2% (control) of the antibacterial effect of bear odor, 14 days after the inoculation It can be seen that 88.1% (control) showed the effect of controlling the plague plague.

이상과 같은 결과로, 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 배양액 처리에 의한 곰취 역병 방제 효과가 우수한 지속성을 나타내는 것으로 확인된다. As a result of the above, it was confirmed that Enterobacter asburier ObRS-5 strain control effect of controlling the antibacterial effect of bear odor was excellent.

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<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> New microorganism Enterobacter asburiae ObRS-5 or microbial agent comprising the same <130> P-2018-0225 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1356 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Enterobacter asburiae <400> 1 ggttaagcta cctacttctt ttgcaaccca ctcccatggt gtgacgggcg gtgtgtacaa 60 ggcccgggaa cgtattcacc gtagcattct gatctacgat tactagcgat tccgacttca 120 tggagtcgag ttgcagactc caatccggac tacgacgcac tttatgaggt ccgcttgctc 180 tcgcgaggtc gcttctcttt gtatgcgcca ttgtagcacg tgtgtagccc tactcgtaag 240 ggccatgatg acttgacgtc atccccacct tcctccagtt tatcactggc agtctccttt 300 gagttcccgg ccggaccgct ggcaacaaag gataagggtt gcgctcgttg cgggacttaa 360 cccaacattt cacaacacga gctgacgaca gccatgcagc acctgtctca gagttcccga 420 aggcaccaat ccatctctgg aaagttctct ggatgtcaag agtaggtaag gttcttcgcg 480 ttgcatcgaa ttaaaccaca tgctccaccg cttgtgcggg cccccgtcaa ttcatttgag 540 ttttaacctt gcggccgtac tccccaggcg gtcgacttaa cgcgttagct ccggaagcca 600 cgcctcaagg gcacaacctc caagtcgaca tcgtttacgg cgtggactac cagggtatct 660 aatcctgttt gctccccacg ctttcgcacc tgagcgtcag tctttgtcca gggggccgcc 720 ttcgccaccg gtattcctcc agatctctac gcatttcacc gctacacctg gaattctacc 780 cccctctaca agactctagc ctgccagttt cgaatgcagt tcccaggttg agcccgggga 840 tttcacatcc gacttgacag accgcctgcg tgcgctttac gcccagtaat tccgattaac 900 gcttgcaccc tccgtattac cgcggctgct ggcacggagt tagccggtgc ttcttctgcg 960 ggtaacgtca atcgacaagg ttattaacct tatcgccttc ctccccgctg aaagtacttt 1020 acaacccgaa ggccttcttc atacacgcgg catggctgca tcaggcttgc gcccattgtg 1080 caatattccc cactgctgcc tcccgtagga gtctggaccg tgtctcagtt ccagtgtggc 1140 tggtcatcct ctcagaccag ctagggatcg tcgcctaggt gagccgttac cccacctact 1200 agctaatccc atctgggcac atctgatggc aagaggcccg aaggtccccc tctttggtct 1260 tgcgacgtta tgcggtatta gctaccgttt ccagtagtta tccccctcca tcaggcagtt 1320 tcccagacat tactcacccg tccgccgctc gtcacc 1356 <110> REPUBLIC OF KOREA (MANAGEMENT: RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> New microorganism Enterobacter asburiae ObRS-5 or microbial agent          comprising the same <130> P-2018-0225 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1356 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Enterobacter asburiae <400> 1 ggttaagcta cctacttctt ttgcaaccca ctcccatggt gtgacgggcg gtgtgtacaa 60 ggcccgggaa cgtattcacc gtagcattct gatctacgat tactagcgat tccgacttca 120 tggagtcgag ttgcagactc caatccggac tacgacgcac tttatgaggt ccgcttgctc 180 tcgcgaggtc gcttctcttt gtatgcgcca ttgtagcacg tgtgtagccc tactcgtaag 240 ggccatgatg acttgacgtc atccccacct tcctccagtt tatcactggc agtctccttt 300 gagttcccgg ccggaccgct ggcaacaaag gataagggtt gcgctcgttg cgggacttaa 360 cccaacattt cacaacacga gctgacgaca gccatgcagc acctgtctca gagttcccga 420 aggcaccaat ccatctctgg aaagttctct ggatgtcaag agtaggtaag gttcttcgcg 480 ttgcatcgaa ttaaaccaca tgctccaccg cttgtgcggg cccccgtcaa ttcatttgag 540 ttttaacctt gcggccgtac tccccaggcg gtcgacttaa cgcgttagct ccggaagcca 600 cgcctcaagg gcacaacctc caagtcgaca tcgtttacgg cgtggactac cagggtatct 660 aatcctgttt gctccccacg ctttcgcacc tgagcgtcag tctttgtcca gggggccgcc 720 ttcgccaccg gtattcctcc agatctctac gcatttcacc gctacacctg gaattctacc 780 cccctctaca agactctagc ctgccagttt cgaatgcagt tcccaggttg agcccgggga 840 tttcacatcc gacttgacag accgcctgcg tgcgctttac gcccagtaat tccgattaac 900 gcttgcaccc tccgtattac cgcggctgct ggcacggagt tagccggtgc ttcttctgcg 960 ggtaacgtca atcgacaagg ttattaacct tatcgccttc ctccccgctg aaagtacttt 1020 acaacccgaa ggccttcttc atacacgcgg catggctgca tcaggcttgc gcccattgtg 1080 caatattccc cactgctgcc tcccgtagga gtctggaccg tgtctcagtt ccagtgtggc 1140 tggtcatcct ctcagaccag ctagggatcg tcgcctaggt gagccgttac cccacctact 1200 agctaatccc atctgggcac atctgatggc aagaggcccg aaggtccccc tctttggtct 1260 tgcgacgtta tgcggtatta gctaccgttt ccagtagtta tccccctcca tcaggcagtt 1320 tcccagacat tactcacccg tccgccgctc gtcacc 1356

Claims (8)

식물병 방제효능을 갖는 신규 미생물 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5(Enterobacter asburiae ObRS-5, 미생물 수탁번호 : KACC 81075BP). Enterobacter asburiae ObRS-5, a new microorganism having a plant disease control efficacy, Enterobacter asburiae ObRS-5, microorganism accession number: KACC 81075BP. 제1항에 있어서,
상기 식물병은 역병균인 파이토프토라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)로부터 유도되는 것을 특징으로 하는 균주.
According to claim 1,
The plant disease is a strain characterized by being derived from Phytophthora drechsleri ( Pytopthora drechsleri ).
제1항에 있어서,
상기 식물은 곰취, 고추, 토마토, 오이, 상추, 수박, 겨자, 당귀, 양파, 배추, 파, 무, 인삼, 딸기, 상추 및 마늘로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 균주.
According to claim 1,
The plant is a strain characterized in that it is selected from the group consisting of gomchi, pepper, tomato, cucumber, lettuce, watermelon, mustard, Angelica, onion, cabbage, green onion, radish, ginseng, strawberry, lettuce and garlic.
제1항에 있어서,
상기 균주는 서열번호 1의 염기서열로 표현되는 16s rRNA의 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는 균주.
According to claim 1,
The strain is characterized in that it comprises a gene of 16s rRNA represented by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.
제1항의 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 것을 특징으로 하는 식물병 방제용 미생물 제제. Claim 1 Enterobacter asburier ObRS-5 strain or a microbial agent for controlling plant diseases characterized in that it comprises a culture medium. 제4항의 미생물 제제를 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물 농약.A microbial pesticide comprising the microbial agent of claim 4. 제6항에 있어서,
상기 미생물 농약은 종자코팅제, 종자침지제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제 및 관주살포제로 이루어진 군 중에서 선택되는 제형인 것을 특징으로 하는 미생물 농약.
The method of claim 6,
The microbial pesticide is a microbial pesticide, characterized in that the formulation selected from the group consisting of seed coating agent, seed soaking agent, soil improver, composting agent, foliar sprayer and irrigation sprayer.
제4항의 미생물 제제를 10~1000배로 희석하여 희석액을 얻는 단계; 및, 상기 희석액을 방제대상 식물에 종자침지, 종자코팅, 엽면살포 또는 관주살포하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 식물 병원균 방제 방법.Diluting the microbial agent of claim 4 by 10 to 1000 times to obtain a diluent; And, dipping the diluent into a plant to be controlled, seed immersion, seed coating, foliar spraying or irrigation spraying.
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