KR20190140034A - 면역검정에서 후크 효과 간섭을 최소화하기 위한 장치 및 방법 - Google Patents
면역검정에서 후크 효과 간섭을 최소화하기 위한 장치 및 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20190140034A KR20190140034A KR1020197034829A KR20197034829A KR20190140034A KR 20190140034 A KR20190140034 A KR 20190140034A KR 1020197034829 A KR1020197034829 A KR 1020197034829A KR 20197034829 A KR20197034829 A KR 20197034829A KR 20190140034 A KR20190140034 A KR 20190140034A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- dye
- target peptide
- reagent
- immunoassay
- protein
- Prior art date
Links
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims abstract description 144
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 64
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 128
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 106
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 101
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 101
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 90
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 49
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 36
- KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N phenolphthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2C(=O)O1 KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 claims description 26
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 25
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 25
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 claims description 24
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 21
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 claims description 18
- 238000004891 communication Methods 0.000 claims description 18
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N urobilinogen Chemical compound CCC1=C(C)C(=O)NC1CC1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(CC3C(=C(CC)C(=O)N3)C)N2)CCC(O)=O)N1 OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 claims description 17
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 claims description 17
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims description 17
- PRZSXZWFJHEZBJ-UHFFFAOYSA-N thymol blue Chemical group C1=C(O)C(C(C)C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C(=CC(O)=C(C(C)C)C=2)C)=C1C PRZSXZWFJHEZBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 14
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 claims description 10
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 claims description 9
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 claims description 9
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 claims description 9
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 9
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 claims description 9
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 claims description 9
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 claims description 9
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 claims description 9
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 9
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 9
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 claims description 9
- RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M sodium;3-[[4-[(e)-[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfonatophenyl)methyl]azaniumylidene]-2-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]-n-ethyl-3-methylanilino]methyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C(=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=2C(=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=C1 RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 8
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 8
- 108091005995 glycated hemoglobin Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 claims description 6
- 108010014663 Glycated Hemoglobin A Proteins 0.000 claims description 2
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 claims description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 83
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 32
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 4
- 238000008156 Microalbumin Assay Methods 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000008155 medical solution Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000004911 serous fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002943 spectrophotometric absorbance Methods 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- -1 washes Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
- G01N21/80—Indicating pH value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/583—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with non-fluorescent dye label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6827—Total protein determination, e.g. albumin in urine
- G01N33/6839—Total protein determination, e.g. albumin in urine involving dyes, e.g. Coomassie blue, bromcresol green
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/16—Reagents, handling or storing thereof
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
면역검정에서 후크 효과 간섭을 최소화하는 방법이 개시된다. 상기 방법에 따라 이용될 수 있는 시약, 키트 및 면역검정 장치가 또한 개시된다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조/참조 진술에 의한 통합
본 출원은 35 USC § 119(e) 하에서 2017년 5월 4일에 출원된 미국 가출원 번호 62/501,284호의 이익을 주장한다. 상기 언급된 특허 출원의 전체 내용은 참조로서 명백히 본원에 포함된다.
배경
면역검정 기술은 의료 진단 분야, 특히 흡광도 기반 측정에 의존하는 현장 진료(point of care) 분석기에서 널리 이용된다. 특히, 이들 검정은 생물학적 샘플(sample)에서 다양한 단백질 분석물의 검출에 유용하다. 상기 분야에서 널리 받아들여지는 이용에도 불구하고, 이들 검정에서 다양한 유형의 간섭이 여전히 관찰된다. 예를 들어, 면역검정 분석기의 검출 범위의 한계는 "후크 효과(hook effect)"로 공지된 간섭 현상에 기인한다. 시험 샘플에서 높은 분석물 농도가 실제로 분석물에 대한 검정 반응 신호에서의 감소를 유발하여 거짓 음성 또는 거짓의 낮은 농도 결과의 보고를 발생시키는 경우에 후크 효과가 관찰된다.
후크 효과는 항원을 갖는 항체의 포화 곡선을 기초로 하며(예를 들어, 도 1 참조), 시험 샘플 내의 분석물의 농도가 검정 시약에서 사용된 항체의 결합능을 초과하여 신호의 생성에 필요한 면역 복합체의 불완전한 형성을 발생시키는 경우에 발생한다. 예를 들어, 과도하게 높은 농도의 분석물은 면역검정에서 사용되는 포획 및 검출 항체 둘 모두를 동시에 포화시킬 수 있으며, 이에 의해 도 1에 제시된 "후크" 또는 거짓으로 감소된 농도 측정을 발생시킨다. 이들 예에서, 거짓 음성 또는 거짓의 낮은 결과가 보고되며, 이는 분석기의 정확도에 부정적인 영향을 미치고, 환자 관리에 치명적인 영향을 미칠 수 있다.
대부분의 분석기는 교정 곡선, 알고리즘(algorithm) 등과 같은 메커니즘(mechanism)의 사용을 통해 후크 효과를 벌충하려고 시도한다. 매우 큰 분석물 농도 범위를 갖는 면역검정에서, 신중한 검정 설계 및 사용되는 항체 시약 및 검사되는 샘플의 양에 대한 조정이 전형적으로 요구되고; 따라서, 결과의 유효성을 보장하기 위해 단일 샘플에 대해 다수의 검정이 수행될 필요가 있을 수 있다. 후크 효과를 제거하기 위해 현재 이용되는 다른 방법은 샘플과 포획 항체의 인큐베이션(incubation)과 검출 항체의 이후의 첨가 사이에 세척 단계의 추가를 포함하나; 세척 단계의 추가는 검정을 수행하는데 필요한 시간 및 기계의 양 둘 모두를 증가시킨다. 오히려, 생물학적 샘플의 고 처리량 분석을 위해서는 1-단계 검정(둘 모두의 항체가 동시에 첨가됨)이 필요하다.
도면의 간단한 설명
도 1은 고농도의 분석물이 존재하는 경우 면역검정에서 관찰된 간섭의 고-용량 후크 효과 유형을 입증한다.
도 2는 티몰 블루(thymol blue)의 구조 및 2개의 상이한 파장(595 nm 및 455 nm)에서 다양한 농도의 알부민(albumin)과 티몰 블루의 상호작용시 획득된 분광광도 측정을 예시한다.
도 3은 페놀프탈레인(phenolphthalein)의 구조 및 552 nm에서 다양한 농도의 알부민과 페놀프탈레인의 상호작용시 획득된 분광광도 측정을 예시한다.
도 4는 2개의 상이한 pH 및 파장(617 nm에서 pH 8 및 572 nm에서 pH 9)에서 다양한 농도의 알부민과 유니버셜(Universal) pH 지시제의 상호작용시 획득된 분광광도 측정을 예시한다.
도 5는 마이크로알부민(microalbumin) 면역검정(◇) 및 단백질 검정 시약(□)으로 획득될 수 있는 알부민 농도의 예시적인 분광광도 측정을 예시한다.
상세한 설명
예시적인 언어 및 결과를 통해 본 발명의 개념(들)의 적어도 하나의 구현예를 상세히 설명하기 전에, 본 발명의 개념(들)은 이의 적용에 있어서 하기 설명에 기재된 구성의 세부사항 및 성분의 배열에 제한되지 않음이 이해되어야 한다. 본 발명의 개념(들)은 다른 구현예가 가능하거나, 다양한 방식으로 실시되거나 수행될 수 있다. 이와 같이, 본원에서 사용되는 언어는 가능한 가장 넓은 범위 및 의미로 제공되도록 의도되며; 구현예는 예시적인 것을 의미하며 총망라된 것이 아니다. 또한, 본원에서 이용되는 어구 및 용어는 설명의 목적을 위한 것이며, 제한되는 것으로 간주되어선 안되는 것이 이해되어야 한다.
본원에서 달리 정의되지 않는 한, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)과 관련하여 사용되는 과학 및 기술 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 또한, 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함할 것이며, 복수 용어는 단수를 포함할 것이다. 전술한 기술 및 절차는 일반적으로 당 분야에 널리 공지된 통상적인 방법에 따라 그리고 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되고 논의되는 다양한 일반적 및 보다 구체적인 참고문헌에 기재된 바와 같이 수행된다. 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의약 및 약학 화학과 관련하여 사용된 명명법, 및 이들의 실험실 절차 및 기술은 당 분야에 널리 공지되고 일반적으로 사용되는 것이다. 화학 합성 및 화학 분석에는 표준 기술이 이용된다.
명세서 내에 언급된 모든 특허, 공개된 특허 출원, 및 비-특허 공개는 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)이 속하는 분야의 당업자의 기술 수준을 나타낸다. 본 출원의 임의의 부분에서 언급된 모든 특허, 공개된 특허 출원, 및 비-특허 공개는 각각의 개별적 특허 또는 공개가 참조로서 포함되는 것으로 구체적 및 개별적으로 표시되는 것과 동일한 정도로 전체내용이 참조로서 명백히 본원에 포함된다.
본원에 개시되고/되거나 청구된 모든 물품, 조성물 및/또는 방법은 본 발명의 개시에 비추어 과도한 실험 없이 제조되고 실행될 수 있다. 본 발명의 개념(들)의 물품, 조성물 및 방법은 특정 구현예에 의해 기재되었으나, 본 발명의 개념(들)의 개념, 사상 및 범위로부터 벗어남이 없이 본원에 기재된 물품, 조성물 및/또는 방법 및 방법의 단계 또는 단계의 순서에 변형이 적용될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 당업자에게 명백한 상기 모든 유사한 대체 및 변형은 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 개념(들)의 사상, 범위 및 개념 내에 있는 것으로 간주된다.
본 발명의 개시에 따라 이용되는 바와 같이, 하기 용어는 달리 지시되지 않는 한 하기 의미를 갖는 것으로 이해될 것이다:
청구범위 및/또는 명세서에서 용어 "포함하는"과 함께 사용되는 경우 단수 용어의 사용은 "하나"를 의미할 수 있으나, "하나 이상", "적어도 하나" 및 "하나 또는 하나 초과"의 의미와도 일치한다. 청구범위에서 용어 "또는"의 사용은 대안만을 나타내도록 명백히 지시되거나 대안이 상호 배타적이지 않은 경우 "및/또는"을 의미하기 위해 사용되나, 본 발명의 개시는 대안만을 나타내는 정의 및 "및/또는"을 지지한다. 본 출원 전체에 걸쳐, 용어 "약"은 값이 장치에 대한 고유한 오차 변동, 값을 결정하기 위해 이용되는 방법, 또는 연구 대상 사이에 존재하는 변동을 포함하는 것을 나타내는 데 사용된다. 용어 "적어도 하나"의 사용은 하나뿐만 아니라 2개, 3개, 4개, 5개, 10개, 15개, 20개, 30개, 40개, 50개, 100개 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 초과의 임의의 양을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 용어 "적어도 하나"는 첨부되는 용어에 따라 100개 또는 1000개 이상으로 확장될 수 있으며; 또한, 100개/1000개의 양은 제한으로 간주되지 않고, 더 높은 한계가 또한 만족스러운 결과를 발생시킬 수 있다. 또한, 용어 "X, Y 및 Z 중 적어도 하나"의 사용은 X 단독, Y 단독 및 Z 단독뿐만 아니라 X, Y 및 Z의 임의의 조합을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 서수 용어(즉, "제1", "제2", "제3", "제4" 등)의 사용은 단지 2개 이상의 항목을 구별하기 위한 것이며, 예를 들어, 또 다른 항목에 비한 하나의 항목에 대한 임의의 차례 또는 순서 또는 중요성 또는 임의의 첨가 순서를 의미하지는 않는다.
용어 "약"은 값이 장치에 대한 고유한 오차 변동, 값을 결정하기 위해 이용되는 방법 및/또는 연구 대상 사이에 존재하는 변동을 포함하는 것을 나타내는 데 사용된다. 예를 들어, 비제한적인 예로, 용어 "약"이 이용되는 경우, 지정된 값은 플러스(plus) 또는 마이너스(minus) 12 퍼센트(percent), 또는 11 퍼센트, 또는 10 퍼센트, 또는 9 퍼센트, 또는 8 퍼센트, 또는 7 퍼센트, 또는 6 퍼센트, 또는 5 퍼센트, 또는 4 퍼센트, 또는 3 퍼센트, 또는 2 퍼센트, 또는 1 퍼센트만큼 가변적일 수 있다.
본 명세서 및 청구범위(들)에서 사용되는 바와 같이, 단어 "포함하는"(및 "-들을 포함하다" 및 "-을 포함하다"와 같은 포함하는의 임의의 형태), "갖는"(및 "-들을 갖다" 및 "-을 갖다"와 같은 갖는의 임의의 형태), "포함하는"(및 "-을 포함하다" 및 "-들을 포함하는"과 같은 포함하는의 임의의 형태), 또는 "함유하는"("-을 함유하다" 및 "-들을 함유하다"와 같은 함유하는의 임의의 형태)은 포괄적이거나 개방형이며, 추가의 언급되지 않는 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "또는 이들의 조합"은 상기 용어 앞에 열거된 항목의 모든 순열 및 조합을 나타낸다. 예를 들어, "A, B, C, 또는 이들의 조합"은 A, B, C, AB, AC, BC, 또는 ABC, 및 특정 상황에서 순서가 중요한 경우, 또한 BA, CA, CB, CBA, BCA, ACB, BAC, 또는 CAB 중 적어도 하나를 포함하는 것으로 의도된다. 상기 예를 계속하여, BB, AAA, AAB, BBC, AAABCCCC, CBBAAA, CABABB 등과 같은 하나 이상의 항목 또는 용어의 반복을 포함하는 조합이 명백히 포함된다. 당업자는 문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한 전형적으로 임의의 조합의 항목 또는 용어의 수에 대한 제한이 없음을 이해할 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "실질적으로"는 이후에 기재되는 사건 또는 상황이 완전히 발생하거나 이후에 기재되는 사건 또는 상황이 더 큰 범위 또는 정도로 발생함을 의미한다. 예를 들어, 특정 사건 또는 상황과 관련되는 경우, 용어 "실질적으로"는 이후에 기재되는 사건 또는 상황이 시간의 적어도 80%, 또는 시간의 적어도 85%, 또는 시간의 적어도 90%, 또는 시간의 적어도 95%에서 발생하는 것을 의미한다. 용어 "실질적으로 인접한"은 2개의 항목이 서로 100% 인접하거나, 2개의 항목이 서로 근접하나, 서로 100% 인접하지 않거나, 2개의 항목 중 하나의 일부가 다른 항목에 100% 인접하지 않지만, 다른 항목에 근접한 것을 의미할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "회합하다"는 2개 이상의 항목의 직접 또는 간접 연결을 나타내는 것으로 이해될 것이다. 본원에서 사용되는 어구 "-화 회합된"은 2개의 모이어티(moiety)의 서로에 대한 직접 회합뿐만 아니라 2개의 모이어티의 서로에 대한 간접 회합 둘 모두를 포함한다. 회합의 비제한적인 예는 직접 결합에 의하거나 스페이서(spacer) 기를 통해 하나의 모이어티를 또 다른 모이어티에 공유 결합시키는 것, 직접적으로 또는 모이어티에 결합된 특정 결합쌍 구성원에 의해 하나의 모이어티를 또 다른 모어이티에 비-공유 결합시키는 것, 하나의 모이어티를 또 다른 모이어티에 용해시키거나 합성에 의한 것과 같은 하나의 모이어티의 또 다른 모이어티로의 통합, 및 하나의 모이어티를 또 다른 모이어티 상에 코팅(coating)시키는 것을 포함한다.
이제 특정 구현예를 참조하여, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)은 일반적으로 면역검정의 성능 및 신뢰성을 개선시키기 위한 키트(kit), 장치 및 방법에 관한 것이다. 특히, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 특정 구현예는 면역검정에서 후크 효과 간섭을 최소화하기 위한 키트, 장치 및 방법에 관한 것이다.
현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 특정한 비제한적인 구현예는 샘플 내의 표적 펩티드(peptide) 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도를 검출하기 위한 방법에 관한 것이다. 특정한 특정 구현예에서, 상기 방법은 면역검정에서 후크 효과 간섭을 최소화하는 방법으로 추가로 정의될 수 있다.
상기 방법은 (1) 표적 펩티드 또는 단백질 분석물을 함유하는 것으로 의심되는 샘플; (2) 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 적어도 하나의 염료로서, 적어도 하나의 염료의 흡수 대역이 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 대한 결합시 이동하는, 적어도 하나의 염료; 및 (3) 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있고, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 대한 결합시 직접적 또는 간접적으로 신호를 발생시킬 수 있는 적어도 하나의 면역검정 시약을 동시에 또는 전체적 또는 부분적으로 순차적으로 조합하는 것을 포함한다. 이후, 적어도 하나의 염료 및 적어도 하나의 면역검정 시약은 샘플에 존재하는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합하는 것이 허용된다. 이후, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도는 (i) 면역검정 시약에 의해 발생되는 신호 및 (ii) 적어도 하나의 염료의 흡수 대역의 검출을 통해 결정된다.
현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 기능할 수 있고, 따라서 면역 검정에서 후크 효과 간섭이 최소화될 수 있는 메커니즘을 제공할 수 있는 당 분야에 공지되거나 본원에서 달리 고려되는 임의의 염료가 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 범위 내에 속한다. 예를 들어(비제한적인 예로), 적어도 하나의 염료는 pH 지시제일 수 있다. 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 이용될 수 있는 pH 지시제의 예는 티몰 블루, 페놀프탈레인, 유니버셜 pH 지시제, 쿠마시(Coomassie) 단백질 검정 시약, 660 nm 단백질 검정 시약, 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
적어도 하나의 염료는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있다. 대안적으로, 적어도 하나의 염료는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 비특이적으로 결합할 수 있다.
현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 후크 간섭을 최소화하기 위해 이용되는 염료는 당 분야에 공지되거나 본원에서 달리 고려되는 임의의 면역검정에 포함될 수 있다. 예를 들어(비제한적인 예로), 적어도 하나의 면역검정 시약은 표적 분석물에 결합하는 포획 항체 및 포획 항체에 결합하는 검출기 항체를 포함할 수 있으나; 당 분야에 공지되거나 본원에서 달리 고려되는 임의의 다른 면역검정 구성이 또한 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 범위 내에 속한다.
특정한 비제한적인 구현예에서, 면역검정 시약에 의해 발생된 신호는 응집 검정을 통해 검출될 수 있다.
면역검정을 통해 검출할 수 있는 임의의 표적 펩티드 또는 단백질 분석물은 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 방법을 통해 검출될 수 있다. 표적 분석물의 예는 알부민(albumin), 크레아티닌(creatinine), 케톤(ketone), 빌리루빈(bilirubin), 우로빌리노겐(urobilinogen), 당화 헤모글로빈(glycosylated hemoglobin)(HbA1C), 인간 융모생식선 자극호르몬(human chorionic gonadotropin)(hCG), 페리틴(ferritin), 성장 호르몬(growth hormone), 프로락틴(prolactin), 및 티로글로불린(thyroglobulin)(Tg)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 기재된 바와 같은 면역검정과 함께 사용하기 위한 당 분야에 공지된 임의의 생물학적 샘플은 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 이용될 수 있다. 이용될 수 있는 생물학적 샘플의 예는 소변, 전혈 또는 이의 임의의 일부(즉, 혈장 또는 혈청), 타액, 가래, 뇌척수액(CSF), 장액, 복강액, 낭포액, 땀, 간질액, 눈물, 점액, 방광 세척액, 정액, 이들의 조합 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 기재된 임의의 방법 단계는, 비제한적인 예로, 사용자에 의해 수행될 수 있다. 그러나, 본원에서 사용되는 용어 "사용자"는 인간에 의한 사용으로 제한되지 않으며; 오히려, 용어 "사용자"는 (비제한적인 예로) 컴퓨터(computer), 서버(server), 웹사이트(website), 프로세서(processor), 네트워크 인터페이스(network interface), 인간, 사용자 단말기, 가상 컴퓨터, 이들의 조합 등을 포함할 수 있다.
현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 다양한 구현예는 본원에 기재된 방법에 따라 기능할 수 있는(또는 기능할 수 있도록 변형된) 임의의 반사 분광 진단 기기와 함께 이용될 수 있다. 특정한 비제한적인 구현예에서, 기기는 현장 진료 기기일 수 있다. 반사 분광 진단 기기는 본원에 기재된 방법/공정의 논리를 구현하고/하거나 실행할 수 있는 시스템(system) 또는 시스템들일 수 있다. 소프트웨어(software) 명령어 및/또는 펌웨어(firmware) 형태로 구현된 논리는 임의의 적절한 하드웨어(hardware)에서 실행될 수 있다. 예를 들어, 소프트웨어 명령어 및/또는 펌웨어의 형태로 구현된 논리는 전용 시스템 또는 시스템들, 개인 컴퓨터 시스템, 분산 처리 컴퓨터 시스템 등에서 하나 이상의 구성요소에 의해 실행될 수 있다. 일부 구현예에서, 전체 논리는 기기(비제한적인 예로, 현장 진료 기기)에서 작동하는 독립형 환경으로 구현될 수 있다. 다른 구현예에서, 논리는 다수의 기기가 데이터(data)를 분석하고 분석 결과를 기기에 제공하기 위해 중앙 컴퓨터 시스템으로 전송되는 데이터를 수집하는 분산 시스템과 같은 네트워크화(networked) 환경에서 구현될 수 있다. 기기의 각각의 요소는 부분적으로 또는 완전히 네트워크 기반이거나 클라우드(cloud) 기반일 수 있으며, 단일한 물리 위치에 위치하거나 위치하지 않을 수 있다.
본원에서 사용되는 회로는 아날로그(analog) 및/또는 디지털(digital) 구성요소, 또는 하나 이상의 적합하겐 프로그램화된(programmed) 프로세서(예를 들어, 마이크로프로세서(microprocessor)) 및 관련 하드웨어 및 소프트웨어, 또는 하드와이어드 로직(hardwired logic)을 포함(이에 제한되지는 않음)한다. 또한, "구성요소"는 하나 이상의 기능을 수행할 수 있다. 용어 "구성요소"는 하드웨어, 비제한적인 예로, 프로세서(예를 들어, 마이크로프로세서), 주문형 집적 회로(ASIC), 필드 프로그램 가능 게이트 어레이(field programmable gate array)(FPGA), 하드웨어 및 소프트웨어의 조합 등을 포함할 수 있다.
본원에서 이용되는 소프트웨어는 하나 이상의 구성요소에 의해 실행되는 경우 구성요소가 특정 기능을 수행하도록 하는 하나 이상의 컴퓨터 판독 가능 매체(즉, 컴퓨터 판독 가능 명령어)를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 알고리즘은 하나 이상의 비-일시적 메모리(memory)에 저장될 수 있음이 이해되어야 한다. 비제한적인 예시적인 비-일시적 메모리는 랜덤 액세스 메모리(random access memory), 판독 전용 메모리, 플래시 메모리(flash memory) 등을 포함할 수 있다. 상기 비-일시적 메모리는 전기 기반, 광학 기반 등일 수 있다.
현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 특정한 비제한적 구현예는 상기 본원에 기재된 면역검정 방법을 편리하게 수행하는 데 유용한 시약 키트에 관한 것이다. 시약 키트는 상기 본원에 상세히 기재된 바와 같은 적어도 하나의 염료와 함께 상기 본원에 상세하게 기재된 바와 같은 적어도 하나의 면역검정 시약을 포함한다.
현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 특정한 다른 비제한적인 구현예는 상기 본원에 기재된 시약 키트를 함유하고, 상기 본원에 기재된 면역검정 방법에서 사용하기 위한 면역검정 장치(비제한적인 예로, 면역검정 카트리지(cartridge))에 관한 것이다. 예를 들어, 면역검정 장치는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물을 함유하는 것으로 의심되는 샘플을 수용할 수 있는 적어도 하나의 구획을 포함할 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 구획은 상기 본원에 상세히 기재된 바와 같은 적어도 하나의 면역검정 시약 및 상기 본원에 상세히 기재된 바와 같은 적어도 하나의 염료를 포함한다.
또한, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 시약 키트 및/또는 면역검정 장치는 본원에 기재되거나 본원에서 달리 고려되는 임의의 특정 면역검정을 수행하기 위한 다른 성분(들) 및/또는 시약(들)을 추가로 함유할 수 있다. 이들 추가 성분(들)/시약(들)의 특성은 특정 면역검정 형식에 좌우될 것이며, 이의 확인은 당업자의 기술 범위 내에 있다. 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 시약 키트 및/또는 면역검정 장치에 존재할 수 있는 추가 시약/성분의 예는 희석제, 세척 용액(비제한적인 예로, 등장액), 용해제(적혈구 용해용), 부형제(동결건조된 시약의 재구성에 이용됨), 표지화제, 간섭 용액, 양성 대조군, 음성 대조군, 품질 관리, 및/또는 작동자뿐만 아니라 이들의 임의의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 이용되는 시약은 이들이 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 기능하도록 하는 임의의 형태 및/또는 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들어, 비제한적인 예로, 시약을 일회용 시약의 형태로 배치하는 것이 바람직할 수 있다. 또한, 하나 이상의 시약을 동결건조시키는 것이 바람직할 수 있으며; 면역검정 장치에서의 건조된 시약의 사용은 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2013/078130호(2013년 5월 30일에 공개됨, Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Tarrytown, NY; 이의 전체 내용은 참조로서 본원에 명백히 포함됨)에 상세히 기재되어 있다. 또한, 다수의 성분은 단일 제형으로 함께 배치될 수 있고/있거나 요망시 단일 입자로 동결건조될 수 있다.
특정한(그러나, 비제한적인) 구현예에서, 시약 키트 및/또는 면역검정 장치는 적어도 하나의 염료가 배치되는 검정 완충액을 추가로 포함할 수 있다.
다른 특정한(그러나, 비제한적인) 구현예에서, 적어도 하나의 염료는 건조된 시약의 형태로 시약 키트 및/또는 면역검정 장치에 존재할 수 있다. 또한, 적어도 하나의 면역검정 시약은 또한 건조된 시약의 형태로 시약 키트 및/또는 면역검정 장치에 존재할 수 있다.
성분/시약은 시약 키트 및/또는 면역검정 장치의 별도의 용기/구획에 각각 배치될 수 있거나, 다양한 성분/시약이 항체 결합 상수/효율의 경쟁적 특성 및/또는 시약의 안정성과 같은(이에 제한되지는 않음) 요인에 따라 하나 이상의 용기/구획에서 조합될 수 있다. 시약 키트 및/또는 면역검정 장치는 검정을 수행하기 위해 다른 별도로 포장된 시약을 추가로 포함할 수 있다.
키트 및/또는 면역검정 장치에서의 다양한 성분/시약의 상대량은 검정 방법 동안 발생하는 것을 필요로 하는 반응을 실질적으로 최적화하는 성분/시약의 농도를 제공하고, 검정의 민감도를 추가로 실질적으로 최적화시키기 위해 매우 가변적일 수 있다. 적절한 환경하에서, 키트/장치 내의 하나 이상의 성분/시약은 건조 형태, 예를 들어, 동결건조된 입자(구체, 미세정제, 분말, 마이크로스팟(microspot) 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않음)로 제공될 수 있고, 시약 키트/장치는 건조된 시약의 용해를 위해 부형제(들)을 추가로 포함할 수 있고; 이러한 방식으로, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 방법 또는 검정을 수행하기 위한 적절한 농도를 갖는 시약 용액이 이들 성분으로부터 획득될 수 있다.
현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 시약 키트는 키트를 사용하는 방법을 설명하는 일련의 서면 설명서를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 특성의 키트는 임의의 면역검정 장치와 함께 및/또는 본원에 기재되거나 본원에서 달리 고려되는 임의의 방법에서 사용될 수 있다.
면역검정 장치는 이와 관련된 하나 이상의 수동 기능을 가질 수 있으며(즉, 하나 이상의 시약의 첨가 및/또는 2개의 구획 사이의 혼합물의 이동을 위해 피펫팅(pipetting)이 요구됨); 대안적으로, 면역검정 장치는 필요한 시약/성분이 면역검정 장치의 구성 동안 다양한 구획(여기서, 다양한 구획은 연속적인 유체 소통함(또는 연속적인 유체 소통할 수 있음))에 배치되는 완전 자동 폐쇄 시스템일 수 있고, 이에 따라 샘플이 면역검정 장치에 첨가된 후에 검정의 수행을 위해 샘플 및/또는 시약(들)의 수동 조작이 필요하지 않다.
면역검정 장치는 상기 본원에 기재된 성분을 함유하는 하나 이상의 구획을 포함하고; 면역검정 장치에는 장치가 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 기능할 수 있는 한 임의의 수의 구획, 임의의 배열의 구획, 및 이들 사이의 성분의 임의의 분포가 제공될 수 있다. 다수의 구획이 제공되는 경우, 구획은 서로 완전히 분리되어 있을 수 있거나, 하나 이상의 구획이 서로 유체 소통할 수 있다. 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 사용될 수 있는 면역검정 장치의 다양한 구조는 당 분야에 널리 공지되어 있고, 이에 따라 이의 추가 설명이 필요하지 않은 것으로 간주된다.
특정한 비제한적인 구현예에서, 면역검정 장치는 서로 유체 소통할 수 있는 적어도 2개의 구획을 포함할 수 있고, 적어도 하나의 면역검정 시약 및 적어도 하나의 염료가 동일한 구획에 배치될 수 있다. 대안적으로, 면역검정 장치는 서로 유체 소통할 수 있는 적어도 2개의 구획을 포함할 수 있고, 적어도 하나의 면역검정 시약 및 적어도 하나의 염료가 상이한 구획에 배치될 수 있다.
면역검정 장치는 샘플이 적용/배치될 수 있는 샘플 적용 챔버(chamber) 및/또는 입구 채널(channel)을 추가로 포함할 수 있다. 샘플 적용 챔버/입구 채널은 면역검정 장치의 하나 이상의 구획과 유체 소통할 수 있다. 또한, 면역검정 장치에 샘플 적용 챔버 및 입구 채널 둘 모두가 제공되는 경우, 샘플 적용 챔버는 입구 채널과 유체 소통할 수 있는 한편, 입구 채널은 시약이 배치되는 하나 이상의 구획과 유체 소통할 수 있다.
특정 구현예에서, 면역검정 장치는 적어도 제1 및 제2 구획을 포함한다. 제1 구획은 생물학적 샘플을 수용할 수 있으며, 요망시(그러나, 비제한적으로) 대량의 샘플로부터 단백질/펩티드를 분리하기 위한 메커니즘을 포함할 수 있다. 상기 분리 메커니즘은 면역검정 장치의 분야에 널리 공지되어 있으며, 따라서 이의 추가 설명은 필요하지 않은 것으로 간주된다. 제2 구획은 제1 구획과 유체 소통할 수 있으며, 상기 본원에 상세히 기재된 면역검정 방법을 수행하기 위한 적어도 하나의 면역검정 시약 및/또는 적어도 하나의 염료를 포함한다. 대안적으로, 면역검정 장치는 제3 구획을 포함할 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 면역검정 시약 및 적어도 하나의 염료가 제2 구획과 제3 구획 사이에서 분리된다.
면역검정 장치는 또한 분광계에 의해 광학적으로 조사될 수 있는 광학 판독 챔버를 포함할 수 있다. 광학 판독 챔버는 상기 본원에 기재된 임의의 구획과 연관될 수 있거나, 광학 판독 챔버는 상기 본원에 기재된 것과는 별도의 구획과 연관될 수 있다.
특정 구현예에서, 면역검정 장치는 필요에 따라 장치의 특정 부분을 방출 가능하게 이동(비제한적인 예로, 샘플 적용 챔버로부터 면역검정 챔버 및/또는 광학 판독 챔버로 분리 막을 이동시키는 것)시키는 것을 담당하는 하나 이상의 작동자를 추가로 포함할 수 있다. 존재시, 작동자(들)은 수동 및/또는 자동으로 작동될 수 있다.
면역검정 장치의 임의의 구획은 그 안에 배치된 시약(들)을 이의 사용 때까지 실질적으로 기밀한 환경에서 유지시키기 위해 밀봉될 수 있고; 예를 들어, 동결건조된 시약(들)을 함유하는 구획은 시약(들)의 임의의 의도하지 않은 재구성을 방지하기 위해 밀봉될 수 있다. 입구 채널 및 구획뿐만 아니라 2개의 구획은 서로 "유체 소통할 수 있는" 것으로 기재될 수 있으며; 이러한 문구는 구획(들)이 여전히 밀봉될 수 있으나, 2개의 구획이 그 내부에 또는 그 사이에 형성된 밀봉의 천공시에 그 사이에 유체 유동을 가질 수 있음을 나타낸다.
현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 키트/면역검정 장치에는 당 분야에 공지되거나 본원에서 달리 고려되는 임의의 다른 원하는 특징이 제공될 수 있다. 예를 들어, 비제한적인 예로, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 키트/면역검정 장치는, 비제한적인 예로, 희석제, 세척액, 용해제(적혈구 용해용), 부형제(동결건조된 시약의 재구성에 이용됨), 표지화제, 간섭 용액, 양성 대조군, 음성 대조군, 품질 관리, 및/또는 작동자뿐만 아니라 이들의 임의의 조합과 같은 다른 용액을 함유하는 하나 이상의 추가 구획을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트/면역검정 장치는 희석제를 함유하는 하나 이상의 추가 구획을 포함할 수 있고, 이들 추가 구획(들)은 장치의 임의의 다른 구획(들)과 유체 소통할 수 있다. 또 다른 예에서, 키트/면역검정 장치는 하나 이상의 동결건조된 시약의 재구성을 위한 적어도 하나의 부형제를 함유하는 하나 이상의 추가 구획을 추가로 포함할 수 있고, 추가 구획(들)은 장치의 임의의 다른 구획(들)/채널(들)(예를 들어, 동결건조된 시약을 함유하는 구획)과 유체 소통할 수 있다. 또한, 키트/면역검정 장치는 세척 용액을 함유하는 하나 이상의 추가 구획을 포함할 수 있고, 구획(들)은 키트/장치의 임의의 다른 구획(들)/채널(들)과 유체 소통할 수 있다.
또한, 본원에 기재되거나 본원에서 달리 고려되는 임의의 키트/면역검정 장치는 단일 키트/장치에 다중화된 다수의 검정을 포함할 수 있다. 다수의 검정이 존재하는 경우, 둘 모두의 검정은 본원에 기재된 바와 같이 구성되고 기능할 수 있다. 대안적으로, 본원에 기재된 바와 같은 검정은 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 키트/면역검정 장치 내에 함유될 수 있는 당 분야에 공지된 임의의 다른 유형의 검정과 함께 다중화될 수 있다. 다수의 검정이 단일 키트/면역검정 장치에 존재하는 경우, 2개 이상의 검정은 동시에 및/또는 순차적으로(전체적 또는 부분적으로 순차적을 포함함) 수행될 수 있다. 2개 이상의 검정이 동시에 수행되는 경우, 상이한 질량 및/또는 파장에서 검출되는 2개 이상의 검출 시약을 이용하는 것이 바람직할 수 있다.
다수의 검정이 단일 면역검정 장치에 존재하는 경우, 다수의 입구 채널이 샘플 적용 챔버에 연결될 수 있다. 특정 구현예에서, 샘플의 일부는 이의 내용물에 관계 없이 샘플 적용 챔버로부터 다수의 입구 채널로 통과될 수 있다. 대안적으로, 샘플 적용 챔버, 입구 채널, 및/또는 전체 샘플로부터의 특정 성분의 분리 및 상이한 검정으로의 상기 성분의 전달을 가능하게 하는 이들 사이의 연결에 구조(들)가 존재할 수 있다. 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 이용될 수 있는 샘플 분배 장치의 비제한적인 예는 미국 특허 출원 공개 번호 2016/0008813호 및 2016/0318019호(각각 2016년 1월 14일, 및 2016년 11월 3일에 공개됨, Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Tarrytown, NY; 이들 각각의 전체 내용은 참조로서 본원에 명백히 포함됨)에 상세히 기재되어 있다.
실시예
하기에 실시예가 제공된다. 그러나, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)은 이의 적용에서 특정 실험, 결과 및 실험실 절차에 제한되지 않는 것이 이해되어야 한다. 오히려, 실시예는 단순히 다양한 구현예 중 하나로 제공되며, 예시적인 것을 의미하며, 총망라된 것은 아니다.
실시예 1: 마이크로알부민(MicroAlbumin) 후크 효과에 대한 벌충에 대한 조사
pH 지시제는 이의 국소 환경의 pH에 비색적으로 반응하는 염료이다. 알부민과 같은 단백질에 결합시, 국소 환경 pH가 변하고, 이 반응은 단백질의 존재와 관련될 수 있다. 현재의 IgM 항체 포획(MAC) 면역검정은 "후크" 효과, 즉, 응집이 실제로 감소되고, 거짓 음성 결과를 유발할 수 있는 고 농도의 영역을 갖는다(도 1 참조). 대조적으로, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 검출 시스템을 이용하여 용량 반응 기울기가 증가될 수 있다(후크는 감소되거나 제거될 수 있다). 본원에 개시되고/되거나 청구된 검출 시스템에서, 염료-결합 검정이 응집 검정과 동시에 첨가되어, 후크 효과가 완화될 수 있고, 용량 반응이 연장될 수 있다. 이러한 방식의 염료 pH 지시제의 사용은 현재 마이크로알부민 검정에서 관찰되는 후크 효과를 일반적으로 발생시키는 높은 단백질 수준의 첨가를 검출할 수 있다.
다양한 유형의 염료-결합 검정이 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 이용될 수 있다. 예를 들어(비제한적인 예로), 2개의 상이한 범주의 염료-결합 검정에 대한 데이터가 본원의 하기에 제공된다. 제1 유형의 검정은 단백질 검출에 전형적으로 사용되지 않지만, 현재의 마이크로알부민 검정과 상용되도록 설계된 염료를 이용한다. 제2 유형의 검정 접근법은 면역검정 시스템에서 후크 효과를 제거하는 데 또한 사용될 수 있는 표준 단백질 검출 염료 검정을 이용한다.
재료:
염료
지시제
3개의 염료 지시제가 본원에서 이용되었고, 이는 티몰 블루, 페놀프탈레인 및 유니버셜 pH 지시제를 포함한다.
티몰 블루(이의 구조는 도 2에 제시됨, 좌측 패널(panel))는 Sigma-Aldrich Corp.(St. Louis, MO; Lot No. MKBR0446V)로부터 입수하였고, 자주색 분말 형태 및 8.9의 pKa를 가졌다. 본 실시예에서 이용된 염료 제조물은 0.1 g 티몰 블루를 21.5 mL의 0.01 M NaOH에 용해시켜 제조한 후, 이를 정제수로 250 mL로 희석시켰다.
페놀프탈레인(이의 구조는 도 3에 제시됨, 좌측 패널)은 Sigma-Aldrich Corp.(St. Louis, MO; Lot No. MKBP2993V)로부터 입수하였고, 무색 액체 형태 및 9.4의 pKa를 가졌다. 염료는 제조업체에 의해 제공된 제조 형식으로 이용되었다.
유니버셜 pH 지시제 용액은 Fluka Analytical(Honeywell Research Chemicals, Mexico City, Mexico; Lot NO. SZBG0080V)로부터 입수하였고, 적색 액체 형태 및 공지되지 않은 pKa를 가졌다. 염료는 제조업체에 의해 제공된 제조 형식으로 이용되었다.
단백질 검정
쿠마시 단백질 검정 시약은 ThermoFisher Scientific(Waltham, MA; Reference No. RE234426)으로부터 입수하였고, 액체 형태를 가졌다. 검정은 제조업체에 의해 제공된 제조 형식으로 이용되었다.
피어스(Pierce) 660 nm 단백질 검정은 ThermoFisher Scientific(Waltham, MA; Lot No. R623191)으로부터 입수하였고, 액체 형태를 가졌다. 검정은 제조업체에 의해 제공된 제조 형식으로 이용되었다.
결과:
염료
지시제
절차는 DCA VANTAGE® 분석기(Siemens Medical Solutions USA, Inc., Malvern, PA)에서 이용되는 마이크로알부민 검정 카트리지와 같은(이에 제한되지는 않음) 마이크로알부민 검정에서 사용되는 것을 모방하도록 설계되었다. 이 기기는 본질적으로 분광광도계이므로, 하기 조건은 이러한 유형의 시스템에 통합될 수 있다. 이들 염료는 검정 완충액에 혼입되거나 카트리지 내부의 건조된 시약으로 첨가될 수 있다.
각각의 지시제에 대해, 충분한 재료가 완충액에 첨가되어 분광광도계에서 용이하게 판독될 수 있는 색 강도를 제공한다. 이들 농도는 상기 재료 섹션(section)에 제공된다. 이 용액을 분광광도계로 측정하고, 피크(peak) 파장 및 흡광도를 기록하였다. 단백질을 첨가하고, 용액을 다시 측정하고, 결과를 기록하였다. 티몰 블루 및 페놀프탈레인은 9 근처의 pKa 값을 가지므로, 이들은 pH 9 완충액으로 시험하였다. 유니버셜 pH 지시제 용액은 다양한 pH 수준을 포함하며; 따라서, 이러한 지시제는 7, 8 및 9의 pH로 시험하였다. 다양한 농도의 알부민 첨가물과 각각의 염료의 상호작용시에 획득된 데이터가 티몰 블루, 페놀프탈레인 및 유니버셜 pH 지시제 용액 각각에 대해 도 2-4에 제시된다. 스톡(stock) 알부민 농축물의 첨가 후 각각의 용액의 pH를 확인하였고, 각각의 검정 용액의 pH 변화는 무시할만 했다. 따라서, 도 2-4에 제시된 관찰된 차이는 확실히 알부민에 대한 각각의 염료의 결합에 기인될 수 있다.
지시제 각각은 단백질의 첨가에 따른 변화를 나타내었다. 예를 들어, 도 4에 제시된 바와 같이, 유니버셜 pH 지시제 용액을 8의 pH에서 시험한 경우, 0.131의 흡광도와 함께 617 nm에서 피크가 존재하였다. 단백질을 첨가한 후, 피크는 418 nm로 변화하였고, 617 nm 흡광도는 0.045로 떨어졌다.
상기 염료는 pH 8 내지 9 범위에서 발생하는 현재의 마이크로알부민 검정과의 상용성으로 인해 선택되었다. 그러나, 당 분야에 공지되거나 당 분야에서 달리 고려되고, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라 면역검정과 함께 또한 이용될 수 있는 더욱 산성인 특성을 갖는 많은 다른 단백질 검출 시스템(표준의 상업적으로 이용 가능한 단백질 시스템을 포함함)이 존재한다. 이들 단백질 검출 시스템 중 임의의 것이 또한 알부민 후크 효과가 존재하는 자동화 시스템에서 사용될 수 있다.
단백질 검정
단백질 검정을 제조업체의 권장 절차에 따라 수행하였다. 피어스 660 nm 단백질 검정을 위해, 0.1 ml 단백질을 1.5 mL의 시약에 첨가하였다. 5분 동안 실온에서 인큐베이션 후, 용액을 660 nm에서 분광광도계에서 판독하였다. 쿠마시 단백질 검정 시약의 사용은 유사한 과정을 따랐다; 0.03 ml 단백질을 1.5 mL의 시약에 첨가하고, 5분 동안 실온에서 인큐베이션 후, 용액을 595 nm에서 분광광도계에서 판독하였다. ThermoFisher Scientific(Waltham, MA)으로부터의 200 mg/dL의 알부민 표준과 함께 30, 300 및 5000 mg/dL의 알부민 샘플을 각각 2개의 복제물을 이용하여 시험하였다.
5000 mg/dL 샘플을 3개의 DCA VANTAGE® 분석기(Siemens Medical Solutions USA, Inc., Malvern, PA)에서 시험하였고, 여기서 각각의 검정은 15 mg/dL 초과의 알부민 값으로 복귀하였다.
시험된 단백질 검정 둘 모두에서 단백질의 증가시 분광광도 흡광도의 증가가 관찰되었다. 피어스 검정은 2개의 가장 높은 수준에서 규모를 벗어났다. 대조적으로, DCA VANTAGE® 분석기로 전형적으로 관찰되는 후크 효과는 5000 mg/dL 샘플이 15 mg/dL 미만의 알부민 수준을 발생시키는 경우에 관찰되었다.
도 5는 마이크로알부민 면역검정(◇) 및 단백질 검정 시약(□)으로 획득될 수 있는 알부민 농도의 예시적인 분광광도 측정을 비교하는 그래프(graph)이다. 관찰될 수 있는 바와 같이, 높은 농도의 분석물이 포획 및 검출 항체 둘 모두를 동시에 포화시키고, 이에 따라 가장 높은 농도에서 거짓으로 감소된 농도 측정을 발생시키므로, 마이크로알부민 면역검정으로 후크 효과가 관찰된다. 그러나, 단백질 검정에서는 후크 효과가 관찰되지 않으며; 단백질 검정에서 증가하는 분석물 농도에 대한 분광 측정은 상부 정점지속에 도달할 때까지 다소 선형 방식으로 계속 증가한다. 단백질 검정은 단일 시약(둘 다 오염될 수 있는 2개의 항체가 아님)에 의존하므로, 단백질 검정을 간섭할 수 있는 경쟁이 없으며, 따라서 높은 분석물 농도에서 분광 측정의 감소가 없다. 분석물의 포화 수준은 면역검정을 이용한 측정을 감소시키는 반면, 단백질 검정에서 분석물의 포화 수준은 상부 정점지속 수준에서 실질적으로 동일한 측정을 발생시킬 것이다.
따라서, 이들 실시예는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 시약의 면역검정으로의 첨가(여기서, 염료의 흡수 대역은 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 이동함)가 면역검정에서 후크 효과 간섭을 최소화할 것을 입증한다.
본 발명의 개념(들)의 비제한적인 예시적 구현예
특정 구현예는 샘플에서 표적 펩티드 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도를 검출하기 위한 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 (a) (1) 표적 펩티드 또는 단백질 분석물을 함유하는 것으로 의심되는 샘플; (2) 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 적어도 하나의 염료로서, 적어도 하나의 염료의 흡수 대역이 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 대한 결합시 이동하는, 적어도 하나의 염료; 및 (3) 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있고, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 대한 결합시 직접적 또는 간접적으로 신호를 발생시킬 수 있는 적어도 하나의 면역검정 시약을 동시에 또는 전체적 또는 부분적으로 순차적으로 조합하는 단계를 포함한다.
상기 방법은 또한 (b) (1)에 존재하는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 (2) 및 (3)을 결합시키는 단계; (c) (i) 면역검정 시약에 의해 발생된 신호; 및 (ii) 적어도 하나의 염료의 흡수 대역을 검출함으로써 표적 펩티드 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도를 결정하는 단계를 포함한다.
상기 방법에서, 적어도 하나의 염료는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 또는 비특이적으로 결합할 수 있다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 염료는 pH 지시제, 예를 들어(비제한적인 예로), 티몰 블루, 페놀프탈레인, 유니버셜 pH 지시제, 쿠마시 단백질 검정 시약, 660 nm 단백질 검정 시약, 및 이들의 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 면역검정 시약은 표적 분석물에 결합하는 포획 항체 및 포획 항체에 결합하는 검출기 항체를 포함한다. 특정 구현예에서, 면역검정 시약에 의해 발생된 신호는 응집 검정을 통해 검출될 수 있다.
상기 방법에 의해 검출되는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물은 알부민, 크레아티닌, 케톤, 빌리루빈, 우로빌리노겐, 당화 헤모글로빈(HbA1C), 인간 융모생식선 자극호르몬(hCG), 페리틴, 성장 호르몬, 프로락틴, 및 티로글로불린(Tg)을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
상기 방법은 면역검정에서 후크 효과 간섭을 최소화하는 방법으로 추가로 정의될 수 있다.
특정 구현예는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있고, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 신호를 직접적 또는 간접적으로 발생시킬 수 있는 적어도 하나의 면역검정 시약; 및 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 적어도 하나의 염료를 포함하는 면역검정에서 사용하기 위한 시약 키트에 관한 것으로, 여기서 적어도 하나의 염료의 흡수 대역은 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 이동한다.
키트의 적어도 하나의 염료는 검정 완충액에 존재할 수 있다. 대안적으로, 적어도 하나의 염료는 건조된 시약의 형태일 수 있다.
키트에 존재하는 적어도 하나의 염료는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 또는 비특이적으로 결합할 수 있다.
키트의 특정 구현예에서, 적어도 하나의 염료는 pH 지시제, 예를 들어(비제한적인 예로), 티몰 블루, 페놀프탈레인, 유니버셜 pH 지시제, 쿠마시 단백질 검정 시약, 660 nm 단백질 검정 시약, 및 이들의 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
키트의 특정 구현예에서, 적어도 하나의 면역검정 시약은 표적 분석물에 결합하는 포획 항체 및 포획 항체에 결합하는 검출기 항체를 포함한다. 특정 구현예에서, 면역검정 시약에 의해 발생된 신호는 응집 검정을 통해 검출될 수 있다.
키트의 특정 구현예에서, 검출되는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물은 알부민, 크레아티닌, 케톤, 빌리루빈, 우로빌리노겐, 당화 헤모글로빈(HbA1C), 인간 융모생식선 자극호르몬(hCG), 페리틴, 성장 호르몬, 프로락틴, 및 티로글로불린(Tg)을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 구현예는 샘플 내의 표적 펩티드 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도를 결정하기 위한 면역검정 장치에 관한 것으로, 면역검정 장치는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물을 함유하는 것으로 의심되는 샘플을 수용할 수 있는 적어도 하나의 구획을 포함하고, 적어도 하나의 구획은 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있고, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 신호를 직접적 또는 간접적으로 발생시킬 수 있는 적어도 하나의 면역검정 시약; 및 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 적어도 하나의 염료를 포함하며, 적어도 하나의 염료의 흡수 대역은 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 이동한다.
면역검정 장치는 서로 유체 소통할 수 있는 적어도 2개의 구획을 포함하는 것으로 추가로 정의될 수 있고, 적어도 하나의 면역검정 시약 및 적어도 하나의 염료는 동일한 구획에 배치된다. 대안적으로, 면역검정 장치는 서로 유체 소통할 수 있는 적어도 2개의 구획을 포함하는 것으로 추가로 정의될 수 있고, 적어도 하나의 면역검정 시약 및 적어도 하나의 염료는 상이한 구획에 배치된다.
면역검정 장치의 적어도 하나의 염료는 검정 완충액에 존재할 수 있다. 대안적으로, 적어도 하나의 염료는 건조된 시약의 형태일 수 있다.
면역검정 장치에 존재하는 적어도 하나의 염료는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 또는 비특이적으로 결합할 수 있다.
면역검정 장치의 특정 구현예에서, 적어도 하나의 염료는 pH 지시제, 예를 들어(비제한적인 예로), 티몰 블루, 페놀프탈레인, 유니버셜 pH 지시제, 쿠마시 단백질 검정 시약, 660 nm 단백질 검정 시약, 및 이들의 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
면역검정 장치의 특정 구현예에서, 적어도 하나의 면역검정 시약은 표적 분석물에 결합하는 포획 항체 및 포획 항체에 결합하는 검출기 항체를 포함한다. 특정 구현예에서, 면역검정 시약에 의해 발생된 신호는 응집 검정을 통해 검출될 수 있다.
면역검정 장치의 특정 구현예에서, 검출되는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물은 알부민, 크레아티닌, 케톤, 빌리루빈, 우로빌리노겐, 당화 헤모글로빈(HbA1C), 인간 융모생식선 자극호르몬(hCG), 페리틴, 성장 호르몬, 프로락틴, 및 티로글로불린(Tg)을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
따라서, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)에 따라, 상기 기재된 목적 및 장점을 완전히 충족시키는 키트, 면역검정 장치 및 방법이 제공되었다. 본 발명의 개념(들)은 상기 기재된 특정 언어와 관련하여 기재되었으나, 많은 대안, 변형 및 변화가 당업자에게 명백할 것이 분명하다. 따라서, 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)은 현재 개시되고/되거나 청구된 본 발명의 개념(들)의 사상 및 넓은 범위 내에 속하는 모든 상기 대안, 변형 및 변화를 포함하도록 의도된다.
하기는 예시적 구현예의 비제한적인 목록이다:
1. 샘플 내의 표적 펩티드 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도를 결정하기 위한 방법으로서,
(a) (1) 표적 펩티드 또는 단백질 분석물을 함유하는 것으로 의심되는 샘플; (2) 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 적어도 하나의 염료로서, 적어도 하나의 염료의 흡수 대역이 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 대한 결합시 이동하는, 적어도 하나의 염료; 및 (3) 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있고, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 대한 결합시 직접적 또는 간접적으로 신호를 발생시킬 수 있는 적어도 하나의 면역검정 시약을 동시에 또는 전체적 또는 부분적으로 순차적으로 조합하는 단계;
(b) (1)에 존재하는 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 (2) 및 (3)을 결합시키는 단계;
(c) (i) 면역검정 시약에 의해 발생된 신호; 및 (ii) 적어도 하나의 염료의 흡수 대역을 검출함으로써 표적 펩티드 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도를 결정하는 단계를 포함하는,
방법.
2. 예시적 구현예 1에서, 적어도 하나의 염료가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합하는 방법.
3. 예시적 구현예 1에서, 적어도 하나의 염료가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 비특이적으로 결합하는 방법.
4. 예시적 구현예 1 내지 3 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 염료가 pH 지시제인 방법.
5. 예시적 구현예 4에서, 적어도 하나의 염료가 티몰 블루, 페놀프탈레인, 유니버셜 pH 지시제, 쿠마시 단백질 검정 시약, 660 nm 단백질 검정 시약, 및 이들의 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 방법.
6. 예시적 구현예 1 내지 5 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 면역검정 시약이 표적 분석물에 결합하는 포획 항체 및 포획 항체에 결합하는 검출기 항체를 포함하는 방법.
7. 예시적 구현예 1 내지 6 중 어느 하나에서, 면역검정 시약에 의해 발생된 신호가 응집 검정을 통해 검출되는 방법.
8. 예시적 구현예 1 내지 7 중 어느 하나에서, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물이 알부민, 크레아티닌, 케톤, 빌리루빈, 우로빌리노겐, 당화 헤모글로빈(HbA1C), 인간 융모생식선 자극호르몬(hCG), 페리틴, 성장 호르몬, 프로락틴, 및 티로글로불린(Tg)을 포함하는 군으로부터 선택되는 방법.
9. 예시적 구현예 1 내지 8 중 어느 하나에서, 면역검정에서 후크 효과 간섭을 최소화하는 방법으로 추가로 정의되는 방법.
10. 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있고, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 신호를 직접적 또는 간접적으로 발생시킬 수 있는 적어도 하나의 면역검정 시약; 및
표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 적어도 하나의 염료로서, 적어도 하나의 염료의 흡수 대역이 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 이동하는, 적어도 하나의 염료를 포함하는,
면역검정에서 사용하기 위한 시약 키트.
11. 예시적 구현예 10에서, 적어도 하나의 염료가 검정 완충액에 존재하는 시약 키트.
12. 예시적 구현예 10에서, 적어도 하나의 염료가 건조된 시약의 형태로 존재하는 시약 키트.
13. 예시적 구현예 10 내지 12 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 염료가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합하는 시약 키트.
14. 예시적 구현예 10 내지 12 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 염료가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 비특이적으로 결합하는 시약 키트.
15. 예시적 구현예 10 내지 14 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 염료가 pH 지시제인 시약 키트.
16. 예시적 구현예 15에서, 적어도 하나의 염료가 티몰 블루, 페놀프탈레인, 유니버셜 pH 지시제, 쿠마시 단백질 검정 시약, 660 nm 단백질 검정 시약, 및 이들의 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 시약 키트.
17. 예시적 구현예 10 내지 16 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 면역검정 시약이 표적 분석물에 결합하는 포획 항체 및 포획 항체에 결합하는 검출기 항체를 포함하는 시약 키트.
18. 예시적 구현예 10 내지 17 중 어느 하나에서, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물이 알부민, 크레아티닌, 케톤, 빌리루빈, 우로빌리노겐, 당화 헤모글로빈(HbA1C), 인간 융모생식선 자극호르몬(hCG), 페리틴, 성장 호르몬, 프로락틴, 및 티로글로불린(Tg)을 포함하는 군으로부터 선택되는 시약 키트.
19. 샘플 내의 표적 펩티드 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도를 결정하기 위한 면역검정 장치로서,
면역검정 장치가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물을 함유하는 것으로 의심되는 샘플을 수용할 수 있는 적어도 하나의 구획을 포함하고,
적어도 하나의 구획이 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있고, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 신호를 직접적 또는 간접적으로 발생시킬 수 있는 적어도 하나의 면역검정 시약; 및
표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 적어도 하나의 염료로서, 적어도 하나의 염료의 흡수 대역이 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 이동하는, 적어도 하나의 염료를 포함하는,
면역검정 장치.
20. 예시적 구현예 19에서, 서로 유체 소통할 수 있는 적어도 2개의 구획을 포함하는 것으로 추가로 정의되고, 적어도 하나의 면역검정 시약 및 적어도 하나의 염료가 동일한 구획에 배치되는 면역검정 장치.
21. 예시적 구현예 19에서, 서로 유체 소통할 수 있는 적어도 2개의 구획을 포함하는 것으로 추가로 정의되고, 적어도 하나의 면역검정 시약 및 적어도 하나의 염료가 상이한 구획에 배치되는 면역검정 장치.
22. 예시적 구현예 19 내지 21 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 염료가 건조된 시약의 형태로 적어도 하나의 구획 내에 존재하는 면역검정 장치.
23. 예시적 구현예 19 내지 22 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 염료가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합하는 면역검정 장치.
24. 예시적 구현예 19 내지 23 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 염료가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 비특이적으로 결합하는 면역검정 장치.
25. 예시적 구현예 19 내지 24 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 염료가 pH 지시제인 면역검정 장치.
26. 예시적 구현예 25에서, 적어도 하나의 염료가 티몰 블루, 페놀프탈레인, 유니버셜 pH 지시제, 쿠마시 단백질 검정 시약, 660 nm 단백질 검정 시약, 및 이들의 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 면역검정 장치.
27. 예시적 구현예 19 내지 26 중 어느 하나에서, 적어도 하나의 면역검정 시약이 표적 분석물에 결합하는 포획 항체 및 포획 항체에 결합하는 검출기 항체를 포함하는 면역검정 장치.
28. 예시적 구현예 19 내지 27 중 어느 하나에서, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물이 알부민, 크레아티닌, 케톤, 빌리루빈, 우로빌리노겐, 당화 헤모글로빈(HbA1C), 인간 융모생식선 자극호르몬(hCG), 페리틴, 성장 호르몬, 프로락틴, 및 티로글로불린(Tg)을 포함하는 군으로부터 선택되는 면역검정 장치.
Claims (20)
- 샘플(sample) 내의 표적 펩티드(peptide) 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도를 결정하기 위한 방법으로서,
(a) (1) 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물을 함유하는 것으로 의심되는 샘플;
(2) 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 적어도 하나의 염료로서, 상기 적어도 하나의 염료의 흡수 대역이 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 이동하는, 적어도 하나의 염료; 및
(3) 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있고, 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 신호를 직접적 또는 간접적으로 발생시킬 수 있는 적어도 하나의 면역검정 시약을 동시에 또는 전체적 또는 부분적으로 순차적으로 조합하는 단계:
(b) (1)에 존재하는 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 (2) 및 (3)을 결합시키는 단계;
(c) (i) 상기 면역검정 시약에 의해 발생된 신호; 및 (ii) 상기 적어도 하나의 염료의 흡수 대역을 검출함으로써 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도를 결정하는 단계를 포함하는,
방법. - 제1항에 있어서, 적어도 하나의 염료가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합하는 방법.
- 제1항에 있어서, 적어도 하나의 염료가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 비특이적으로 결합하는 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 염료가 pH 지시제인 방법.
- 제4항에 있어서, 적어도 하나의 염료가 티몰 블루(thymol blue), 페놀프탈레인(phenolphthalein), 유니버셜(Universal) pH 지시제, 쿠마시(Coomassie) 단백질 검정 시약, 660 nm 단백질 검정 시약, 및 이들의 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 면역검정 시약이 표적 분석물에 결합하는 포획 항체 및 상기 포획 항체에 결합하는 검출기 항체를 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 면역검정 시약에 의해 발생된 신호가 응집 검정을 통해 검출되는 방법.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물이 알부민(albumin), 크레아티닌(creatinine), 케톤(ketone), 빌리루빈(bilirubin), 우로빌리노겐(urobilinogen), 당화 헤모글로빈(glycosylated hemoglobin)(HbA1C), 인간 융모생식선 자극호르몬(human chorionic gonadotropin)(hCG), 페리틴(ferritin), 성장 호르몬(growth hormone), 프로락틴(prolactin), 및 티로글로불린(thyroglobulin)(Tg)을 포함하는 군으로부터 선택되는 방법.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 면역검정에서 후크(hook) 효과 간섭을 최소화하는 방법으로 추가로 정의되는 방법.
- 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있고, 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 신호를 직접적 또는 간접적으로 발생시킬 수 있는 적어도 하나의 면역검정 시약; 및
상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 적어도 하나의 염료로서, 상기 적어도 하나의 염료의 흡수 대역이 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 이동하는, 적어도 하나의 염료를 포함하는,
면역검정에서 사용하기 위한 시약 키트. - 제10항에 있에서, 적어도 하나의 염료가 검정 완충액에 존재하는 시약 키트.
- 제10항에 있어서, 적어도 하나의 염료가 건조된 시약의 형태로 존재하는 시약 키트.
- 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 염료가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합하는 시약 키트.
- 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 염료가 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 비특이적으로 결합하는 시약 키트.
- 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 염료가 pH 지시제인 시약 키트.
- 제15항에 있에서, 적어도 하나의 염료가 티몰 블루, 페놀프탈레인, 유니버셜 pH 지시제, 쿠마시 단백질 검정 시약, 660 nm 단백질 검정 시약, 및 이들의 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 시약 키트.
- 제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 면역검정 시약이 표적 분석물에 결합하는 포획 항체 및 상기 포획 항체에 결합하는 검출기 항체를 포함하는 시약 키트.
- 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 표적 펩티드 또는 단백질 분석물이 알부민, 크레아티닌, 케톤, 빌리루빈, 우로빌리노겐, 당화 헤모글로빈(HbA1C), 인간 융모생식선 자극호르몬(hCG), 페리틴, 성장 호르몬, 프로락틴, 및 티로글로불린(Tg)을 포함하는 군으로부터 선택되는 시약 키트.
- 샘플 내의 표적 펩티드 또는 단백질 분석물의 존재 및/또는 농도를 결정하기 위한 면역검정 장치로서,
상기 면역검정 장치가 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물을 함유하는 것으로 의심되는 상기 샘플을 수용할 수 있는 적어도 하나의 구획을 포함하고,
상기 적어도 하나의 구획이 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 특이적으로 결합할 수 있고, 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 신호를 직접적 또는 간접적으로 발생시킬 수 있는 적어도 하나의 면역검정 시약; 및
상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합할 수 있는 적어도 하나의 염료로서, 상기 적어도 하나의 염료의 흡수 대역이 상기 표적 펩티드 또는 단백질 분석물에 결합시 이동하는, 적어도 하나의 염료를 포함하는,
면역검정 장치. - 제19항에 있어서, 서로 유체 소통할 수 있는 적어도 2개의 구획을 포함하는 것으로 추가로 정의되고, 적어도 하나의 면역검정 시약 및 적어도 하나의 염료가 동일한 구획에 배치되는 면역검정 장치.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762501284P | 2017-05-04 | 2017-05-04 | |
| US62/501,284 | 2017-05-04 | ||
| PCT/US2018/031085 WO2018204784A1 (en) | 2017-05-04 | 2018-05-04 | Devices and methods for minimizing hook effect interference in immunoassays |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20190140034A true KR20190140034A (ko) | 2019-12-18 |
Family
ID=64016287
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020197034829A KR20190140034A (ko) | 2017-05-04 | 2018-05-04 | 면역검정에서 후크 효과 간섭을 최소화하기 위한 장치 및 방법 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20200064339A1 (ko) |
| EP (1) | EP3619221A4 (ko) |
| JP (1) | JP7005656B2 (ko) |
| KR (1) | KR20190140034A (ko) |
| AU (1) | AU2018261788B2 (ko) |
| CA (1) | CA3062319A1 (ko) |
| WO (1) | WO2018204784A1 (ko) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114364983A (zh) * | 2019-09-04 | 2022-04-15 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 识别免疫比浊法中钩状效应的方法、装置及计算机可读介质 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9211980D0 (en) * | 1992-06-05 | 1992-07-15 | Int Murex Tech Corp | Immunoassay method |
| US5908787A (en) * | 1997-09-23 | 1999-06-01 | Bayer Corporation | Total protein detection method |
| DE69940067D1 (de) * | 1998-08-14 | 2009-01-22 | Biocontrol Systems Inc | Ger einheiten die zielmaterialbindende farbstoffe gebrauchen |
| US6747135B1 (en) * | 1998-10-16 | 2004-06-08 | The Board Of Trustees For The Leland Stanford Junior University | Fluorescent dye binding peptides |
| DE10064827A1 (de) * | 2000-12-22 | 2002-06-27 | Dade Behring Marburg Gmbh | Nachweisverfahren |
| US20030215358A1 (en) * | 2002-01-15 | 2003-11-20 | Schulman Lloyd S. | Liquid permeable composition in dry reagent devices |
| US20040219620A1 (en) * | 2003-04-29 | 2004-11-04 | Mayer Brent A. | Chromogenic substrate with a pH indicator dye |
| GB0401288D0 (en) * | 2004-01-21 | 2004-02-25 | Orion Diagnostica Oy | Sampling and assay device |
| US7439014B2 (en) * | 2006-04-18 | 2008-10-21 | Advanced Liquid Logic, Inc. | Droplet-based surface modification and washing |
| US7935538B2 (en) * | 2006-12-15 | 2011-05-03 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Indicator immobilization on assay devices |
| EP2939023B1 (en) * | 2012-12-28 | 2019-04-17 | Abbott Point of Care Inc. | System and method for identifying a hook effect and expanding the dynamic range in point of care immunoassays |
| WO2014126995A1 (en) * | 2013-02-14 | 2014-08-21 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Reduction of false positive on reagent test devices |
| CN105026932B (zh) * | 2013-03-15 | 2017-06-13 | 西门子医疗保健诊断公司 | 微流控分配设备 |
| US9157910B2 (en) * | 2013-03-15 | 2015-10-13 | Abbott Laboratories | Assay with increased dynamic range |
| EP2972346A4 (en) * | 2013-03-15 | 2016-12-07 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc | HETEROGENEOUS LUMINESCENT OXYGEN CHANNELIZATION IMMUNOASSAYS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF |
| GB201418897D0 (en) * | 2014-10-23 | 2014-12-10 | Univ Hull | Methods and apparatus for the analysis of compounds |
-
2018
- 2018-05-04 EP EP18794814.6A patent/EP3619221A4/en active Pending
- 2018-05-04 US US16/609,309 patent/US20200064339A1/en not_active Abandoned
- 2018-05-04 KR KR1020197034829A patent/KR20190140034A/ko not_active IP Right Cessation
- 2018-05-04 AU AU2018261788A patent/AU2018261788B2/en active Active
- 2018-05-04 WO PCT/US2018/031085 patent/WO2018204784A1/en unknown
- 2018-05-04 JP JP2019560207A patent/JP7005656B2/ja active Active
- 2018-05-04 CA CA3062319A patent/CA3062319A1/en not_active Abandoned
-
2022
- 2022-07-18 US US17/813,204 patent/US20220349877A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2018204784A1 (en) | 2018-11-08 |
| EP3619221A1 (en) | 2020-03-11 |
| US20200064339A1 (en) | 2020-02-27 |
| JP2020520449A (ja) | 2020-07-09 |
| US20220349877A1 (en) | 2022-11-03 |
| EP3619221A4 (en) | 2020-04-22 |
| AU2018261788B2 (en) | 2022-06-02 |
| CA3062319A1 (en) | 2018-11-08 |
| AU2018261788A1 (en) | 2019-10-31 |
| JP7005656B2 (ja) | 2022-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4302536A (en) | Colorimetric immunoassay process | |
| AU2019349405B2 (en) | Methods for detecting hook effect(s) associated with anaylte(s) of interest during or resulting from the conductance of diagnostic assay(s) | |
| US20220349877A1 (en) | Devices and methods for minimizing hook effect inteference in immunoassays | |
| EP3129789B1 (en) | Spectroscopic methods for the detection of glycated hemoglobin | |
| JP2024026282A (ja) | イムノアッセイにおけるポリハプテン試薬の不十分な送達に起因する異常な結果を検出する方法 | |
| EP3923806B1 (en) | Calibrators and controls for the determination of the percentage of glycated hemoglobin in a patient's liquid test sample | |
| CA3147512C (en) | Tangent flow hemolysis detection blood testing device | |
| US20210270849A1 (en) | Methods for detection of aberrant results caused by incomplete dispersion of immunoassay reagent |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| X091 | Application refused [patent] | ||
| AMND | Amendment | ||
| X601 | Decision of rejection after re-examination |