KR20190071469A - Antiviral composition for influenza virus comprising leuconostoc mesenteroides dsr 218 as an active material - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 류코노스톡 메센테로이드를 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스용 약학 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 류코노스톡 메센테로이드를 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물, 사료 조성물 또는 세정용 조성물 등에 관한 것이다.The present invention relates to a pharmaceutical composition for an antiviral against influenza virus containing as an active ingredient luonostomercenteroid. The present invention also relates to a food composition, a feed composition or a cleaning composition for preventing or ameliorating an influenza virus infectious disease containing as an active ingredient, luchnostomercenteroid.
인플루엔자 바이러스는 급성 호흡기감염질환인 독감의 원인체로, 공중보건학적으로 매우 중요하게 여겨지는 병원체 중의 하나이다.Influenza virus is the causative agent of the flu, an acute respiratory infectious disease, and one of the pathogens considered to be very important in public health.
H1N1과 H3N2 아형의 A형 인플루엔자 바이러스와 Victoria와 Yamagata lineage의 B형 인플루엔자 바이러스로 구성되는 계절성 인플루엔자 바이러스(seasonal influenza virus)는 매년 겨울철 유행하며 사람들에게 큰 피해를 입히고 있다. 세계보건기구(WHO)에 따르면, 매년 전세계적으로 약 3백만~5백만 명의 사람들이 계절성 인플루엔자 바이러스에 감염되어 심각한 병증을 겪고, 그 중 약 25만~50만 명의 사람들이 사망하는 것으로 알려져 있다.The seasonal influenza virus, which consists of the H1N1 and H3N2 subtypes of influenza A virus and the influenza B virus of Victoria and Yamagata lineage, is in winter every year and is causing great damage to people. According to the World Health Organization (WHO), about 3 million to 5 million people worldwide are infected with the seasonal influenza virus each year and suffer from serious illness, of which about 250,000 to 500,000 people are known to die.
인플루엔자 바이러스의 대유행(pandemic)은 더욱 큰 피해를 초래한다. 1918년 발생한 인플루엔자 바이러스 대유행 시 약 5천만 명의 사람이 사망하였으며 1957년과 1968년에 발생한 인플루엔자 바이러스 대유행 시에는 의해 약 백만 명의 사람이 사망한 것으로 알려져 있다. 인류는 지난 2009년 신종 인플루엔자 바이러스에 의해 발생한 대유행 시에도 심각한 인적 피해와 경제적 피해 그리고 사회적 혼란을 경험한 바 있었다. The pandemic of influenza viruses causes more damage. The influenza virus pandemic, which occurred in 1918, killed some 50 million people, and the influenza virus pandemic, which occurred in 1957 and 1968, is known to have killed about 1 million people. Humans experienced severe personal injury, economic damage and social disruption in the pandemic caused by the 2009 influenza virus.
조류인플루엔자 바이러스(avian influenza virus) 역시 심각한 위협으로 여겨지고 있다. 현재까지도 조류인플루엔자 바이러스의 지속적인 사람감염 사례가 보고되고 있다. 특히 고병원성 H5N1 조류인플루엔자 바이러스의 경우 약 59%, H7N9 조류인플루엔자 바이러스의 경우 약 32%의 높은 치사율을 나타내는 것으로 분석되고 있어 WHO에서 예의주시하고 있는 상황이다.Avian influenza virus is also considered a serious threat. Until now, there have been reports of persistent human infections of avian influenza virus. Especially, 59% of the highly pathogenic H5N1 avian influenza virus and 32% of the H7N9 avian influenza virus have been analyzed, which is closely monitored by WHO.
이러한 인플루엔자 바이러스를 예방하기 위한 가장 효과적인 방법은 백신접종으로 알려져 있지만 백신만으로 인플루엔자 바이러스에 의한 피해를 조절하기에는 한계가 있다. 현재 계절성 인플루엔자 바이러스에 대한 백신을 접종하고 있음에도 불구하고 전세계적으로 매년 25만~50만 명의 사망자가 발행하고 있다.Although the most effective way to prevent such influenza viruses is known as vaccination, only the vaccine has a limitation in controlling the damage caused by the influenza virus. Despite vaccination against seasonal influenza virus, there are 250,000 to 500,000 deaths worldwide each year.
인플루엔자 백신의 경우, 인플루엔자 바이러스가 갖는 항원성 변이 특성 때문에 그 해 겨울에 유행할 바이러스를 연초에 예측한 뒤 이에 대한 백신을 생산하는 생산체계에 따라 제작된다. 따라서 제작 된 백신이 그 해 겨울 유행하는 인플루엔자 바이러스의 항원과 일치하지 않는 상황이 발생 할 수 있으며, 이러한 경우 사람을 인플루엔자 바이러스 감염으로부터 효과적으로 보호하지 못할 수도 있다. 또한 예측하지 못한 시기에 신종인플루엔자 바이러스가 갑작스럽게 유행 할 경우 백신으로는 신속한 초기대응이 어렵다. Influenza vaccines are produced according to a production system that anticipates viruses that will be outbred in winter due to the nature of the antigenic variation of influenza viruses, and then produces vaccines against them. Therefore, there may be cases where the vaccine produced does not coincide with the influenza virus antigens of the winter season, and it may not protect people effectively against influenza virus infection. Also, if the swine flu virus is suddenly outbreak at an unpredictable time, it is difficult to respond quickly to the vaccine.
항바이러스제의 사용은 이러한 백신의 한계점을 극복할 수 있었다. 실제로 지난 2009년 발생한 신종인플루엔자 바이러스 대유행 시, 충분한 도즈(dose)의 백신이 준비되기 전, 인플루엔자 바이러스 표면 당단백질 중 하나인 neuraminidase(NA)를 억제하는 항바이러스제(NA inhibitor, NAI)인 oseltamivir(상품명 Tamifluㄾ)가 효과적인 신종 인플루엔자 바이러스 조절 수단으로 널리 처방되었다. 최근 연구에 따르면, 2009년 당시 oseltamivir의 처방은 신종인플루엔자 바이러스로부터 효과적으로 사람들을 보호한 것으로 분석되었다. The use of antiviral agents could overcome the limitations of these vaccines. In fact, oseltamivir (NA inhibitor, NAI), which inhibits neuraminidase (NA), one of the surface glycoproteins of influenza virus, before the preparation of a sufficient dose vaccine in the pandemic of the new influenza virus in 2009, Tamiflu ㄾ) have been widely prescribed as effective influenza virus control measures. According to a recent study, oseltamivir's prescription at the time of 2009 was found to effectively protect people from the swine influenza virus.
위와 같은 항바이러스제의 장점에도 불구하고, 지속적인 항바이러스제의 사용은 항바이러스제 내성 인플루엔자 바이러스의 출현을 유도할 수 있다. 실제로 지난 2007~2009년 사이 NAI인 oseltamivir에 대한 내성을 획득한 H1N1 아형의 계절성 인플루엔자 바이러스(A/Birsbane/59/2007)가 전세계적으로 출현하여 유행하였다. 이와 같은 상황이 현재 유행하고 있는 인플루엔자 바이러스에서도 나타날 수 있는 가능성이 높은 것으로 여겨지고 있으며, 실제로 국내(질병관리본부)에서 oseltamivir에 내성을 갖는 신종인플루엔자 바이러스 분리 사례를 보고한 바 있다. 또한 B형 인플루엔자 바이러스의 경우 A형 인플루엔자 바이러스에 비해 상대적으로 NAI에 대한 감수성이 낮은 것으로 알려져 있다. Despite the advantages of such antiviral agents, the continued use of antiviral agents can lead to the emergence of antiviral resistant influenza viruses. In fact, the seasonal influenza A (H1N1) influenza virus (A / Birsbane / 59/2007), which acquired resistance to the NAI, oseltamivir, between 2007 and 2009, became popular worldwide. This situation is considered to be highly likely to occur in the current influenza virus, and in fact, the domestic (Disease Control Headquarters) has reported a case of isolating a new influenza virus resistant to oseltamivir. It is also known that influenza B virus is less susceptible to NAI than influenza A virus.
따라서 항바이러스제에 내성을 갖는 바이러스의 발생 시 효과적으로 사용할 수 있는 새로운 항바이러스제 또는 항바이러스제와 함께 사용하였을 때 상승효과를 보일 수 있는 보조제의 개발이 매우 시급한 상황이다. 새로운 항바이러스제 또는 항바이러스 보조제의 개발은 큰 경제적 이익을 창출할 수 있으므로, 현재 전세계의 많은 연구진과 제약회사에서 새로운 항바이러스제 개발에 박차를 가하고 있다. Therefore, it is very urgent to develop an adjuvant which can exhibit a synergistic effect when it is used together with a new antiviral agent or antiviral agent which can be effectively used when a virus having resistance to an antiviral agent is generated. The development of new antiviral or antiviral adjuvants can create great economic benefits, and many researchers and pharmaceutical companies around the world are now spurring the development of new antiviral drugs.
우리나라 역시 국내 기술로 새로운 항바이러스제를 개발해야 할 필요성이 매우 높게 요구되고 있으며, 항바이러스제 개발에 대한 국내 고유의 기술을 축적하고 해외 의존도를 낮추기 위해서 우리나라만의 전통 약제나 식품에서 새로운 항바이러스제 후보물질을 탐색??발굴하는 연구가 시급히 요구되고 있다. In Korea, too, there is a great need to develop new antiviral drugs with domestic technology. In order to accumulate technologies unique to domestic antiviral drug development and to reduce dependence on foreign countries, There is an urgent need for research to search for and discover.
최근에 발표된 다수의 연구논문에 따르면, 유산균이 인플루엔자 바이러스 감염을 억제하고 인플루엔자 백신의 면역원성을 높이는 기능을 하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 관점에서 볼 때, 풍부한 유산균을 갖고 있는 우리나라의 대표적인 발효식품인 김치 및 김치 유래 유산균은 항바이러스 효능을 갖는 의약품 보조제로 개발될 수 있는 높은 가능성을 갖고 있다. According to a number of recently published research papers, lactic acid bacteria have been shown to inhibit influenza virus infection and to enhance the immunogenicity of influenza vaccines. From this point of view, kimchi and kimchi-derived lactic acid bacteria, which are representative fermented foods of Korea, which have abundant lactic acid bacteria, have a high possibility of being developed as a pharmaceutical adjuvant having antiviral efficacy.
따라서 항바이러스 효능을 나타내는 의약품 보조제로서의 가능성이 매우 높은 김치 및 김치 유래 유산균을 이용하여 새로운 항바이러스 물질을 개발한다면, 원료 및 기술에 대한 해외 의존도를 크게 낮출 수 있고 농식품 분야에 있어 경제적으로도 큰 이익을 창출 할 수 있을 것으로 사료된다. 일례로, 2009년 대유행 시 로슈(Roche)사는 Tamifluㄾ의 판매로 약 9억달러의 수익을 얻은 것으로 알려져 있다. Therefore, if new antiviral substances are developed by using lactic acid bacteria derived from kimchi and kimchi, which are highly likely to be antibiotic-effective drugs, foreign dependence on raw materials and technology can be greatly reduced and economic benefits Of the total population. For example, in 2009, Roche was reported to have earned about $ 900 million in sales of Tamiflu..
궁극적으로, 인플루엔자 바이러스를 효과적으로 억제할 수 있는 김치 유산균을 개발한다면, 인플루엔자 바이러스 대유행과 같은 상황 발생 시 기본 치료제의 신속한 확보가 불가능한 상황하에서 신속하게 우리국민을 인플루엔자 바이러스의 위험으로부터 보호할 수 있으리라 사료된다.Ultimately, if Kimchi lactic acid bacteria, which can effectively inhibit influenza viruses, are developed, it will be possible to protect the Korean people from the risk of influenza virus rapidly in situations where it is not possible to quickly obtain basic treatment agents in the event of a pandemic influenza virus .
이에 본 출원의 발명자들은 인플루엔자 바이러스를 효과적으로 억제 할 수 있는 유산균에 대해 연구하던 중, 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 유산균을 투여한 개체의 경우 인플루엔자 바이러스의 감염시 감염으로 인한 질환을 예방 또는 치료하는 효과가 우수함을 확인하였다. Accordingly, the inventors of the present application have been studying lactic acid bacteria that can effectively inhibit influenza virus, and in the case of administering the lucconostomercenteroid DSR 218 lactic acid bacterium, the effect of preventing or treating a disease caused by infection upon influenza virus infection Respectively.
본 발명은 식물성 유산균을 유효성분으로 하는 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스용 약학 조성물을 제공하기 위한 것이다.The present invention is to provide an antiviral pharmaceutical composition for influenza virus comprising as an active ingredient a plant-derived lactic acid bacterium.
또한, 본 발명의 다른 목적은 식물성 유산균을 유효성분으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물 또는 식품 첨가제 조성물을 제공하기 위한 것이다.Another object of the present invention is to provide a food composition or food additive composition for preventing or ameliorating an influenza virus infectious disease comprising an active ingredient of a plant-derived lactic acid bacterium.
또한, 본 발명의 다른 목적은 식물성 유산균을 유효성분으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물 또는 사료 첨가제 조성물을 제공하기 위한 것이다.Another object of the present invention is to provide a feed composition or feed additive composition for preventing or ameliorating an influenza virus infectious disease comprising as an active ingredient a plant-derived lactic acid bacterium.
이에 본 발명은 바람직한 제1구현예로서, 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218[기탁번호: KFCC-11436P] 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스용 약학 조성물을 제공하고자 한다.Accordingly, the present invention provides, as a first preferred embodiment, an antiviral pharmaceutical composition for influenza virus containing Leuconostomycetenseoid DSR 218 [Accession No .: KFCC-11436P] or a culture thereof as an active ingredient.
이때, 상기 바이러스는 A/Korea/01/2009(H1N1)의 A형 인플루엔자 바이러스일 수 있다.At this time, the virus may be an influenza A virus of A / Korea / 01/2009 (H1N1).
상기 구현예에 의한 항바이러스용 약학 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염으로 인한 질환을 예방 또는 치료하기 위한 것일 수 있다. The pharmaceutical composition for antiviral according to the above embodiment may be one for preventing or treating a disease caused by an influenza virus infection.
또한, 상기 바이러스 감염으로 인한 질환은 독감, 감기, 인후염, 기관지염, 폐렴, 조류독감, 돼지독감 및 염소독감 중의 하나일 수 있다.In addition, the disease caused by the viral infection may be one of influenza, cold, sore throat, bronchitis, pneumonia, avian influenza, swine flu and chlorine influenza.
본 발명은 바람직한 제2구현예로서, 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.As a second preferred embodiment of the present invention, there is provided a food composition for preventing or ameliorating an influenza virus infectious disease, which comprises leucono stokescensenteroid DSR 218 or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명은 바람직한 제3구현예로서, 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 식품 첨가제 조성물을 제공한다.The present invention provides, as a third preferred embodiment, a food additive composition for preventing or ameliorating an influenza virus infectious disease, comprising leucono stokescensenteroid DSR 218 or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명은 바람직한 제4구현예로서, 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 생균제 조성물을 제공한다.The present invention provides, as a fourth preferred embodiment, a prophylactic composition for preventing or ameliorating an influenza virus infectious disease containing leucono stokescensenteroid DSR 218 or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명은 바람직한 제5구현예로서, 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다. The present invention provides, as a fifth preferred embodiment, a feed composition for preventing or ameliorating an influenza virus infection disease containing leucono stokescensenteroid DSR 218 or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명은 바람직한 제6구현예로서, 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.As a sixth preferred embodiment of the present invention, there is provided a feed additive composition for preventing or ameliorating an influenza virus infection disease containing leucono stokescensenteroid DSR 218 or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명은 바람직한 제7구현예로서, 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 발효식품을 제공한다.The present invention provides, as a seventh preferred embodiment, a fermented food for preventing or improving an influenza virus infectious disease containing Leuconostoc mesenteroid DSR 218 or a culture thereof as an active ingredient.
본 발명은 바람직한 제8구현예로서, 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 소독용 또는 세정용 조성물을 제공한다.The present invention provides, as a preferred eighth embodiment, a composition for disinfection or cleaning of influenza virus containing leucono stokescensenteroid DSR 218 or a culture thereof as an active ingredient.
상기 구현예에 의한 소독용 또는 세정용 조성물은 소독제, 주방세제, 세탁세제, 야채 및 채소의 세척제, 또는 손 세정제에 사용될 수 있다.The composition for disinfection or cleaning according to the above embodiments may be used as a disinfectant, a kitchen detergent, a laundry detergent, a vegetable and vegetable detergent, or a hand cleaner.
본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218은 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 활성이 우수하므로, 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염에 의해 발병되는 독감, 감기, 인후염, 기관지염, 폐렴, 조류독감, 돼지독감, 염소독감 등의 예방 또는 치료용으로 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 상기의 항바이러스 활성을 나타내는 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218은 음료, 발효식품, 건강기능식품 등과 식품 조성물, 식품첨가제 조성물, 사료 조성물 또는 사료첨가제 조성물 등에 유용하게 활용될 수 있다.The present invention relates to a pharmaceutical composition containing as an active ingredient an influenza virus DSR 218 having excellent antiviral activity against an influenza virus. Therefore, the pharmaceutical composition of the present invention can be used as an effective ingredient for preventing influenza, flu, sore throat, bronchitis, Flu, swine flu, chlorine flu, and the like. In addition, Leuconostocceptenoid DSR 218 exhibiting the above antiviral activity can be usefully used for beverage, fermented food, health functional food and the like, food composition, food additive composition, feed composition or feed additive composition.
도 1의 (a)는 실시예의 균주 시료를 투여한 마우스에 있어서, 바이러스 감염 후 14 일간의 체중 변화를 나타내는 그래프이고, 도 1의 (b)는 바이러스 감염 후 14 일간의 생존율 변화를 나타내는 그래프이다.
도 2는 실시예의 균주 시료를 투여한 마우스에 있어서, 바이러스 감염 후 6 일째의 폐 바이러스 역가를 나타내는 그래프이다.
도 3은 실시예의 균주 시료를 투여한 마우스에 있어서, 바이러스 감염 후 6 일째의 폐의 병리조직학적 병변을 분석하여 염증반응을 확인한 사진이다.FIG. 1 (a) is a graph showing changes in body weight for 14 days after virus infection in a mouse to which a strain sample of the Example was administered, and FIG. 1 (b) is a graph showing changes in survival rate for 14 days after virus infection .
Fig. 2 is a graph showing the titer of lung virus at 6 days after virus infection in a mouse to which a strain sample of the Example was administered.
Fig. 3 is a photograph showing the inflammatory response of the mouse administered with the strain sample of the Example by analyzing the histopathological lesion of the lung on the 6th day after the virus infection.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 류코노스톡 메센테로이드는 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218(Leuconostoc mesenteroides DSR 218; 기탁번호 KFCC-11436P)로 명명되어 한국미생물보존센터에 2008년 12월 23일자로 기탁되었다.The leuconostomercenteroids of the present invention were named as Leuconostoc mesenteroides DSR 218 (Accession No. KFCC-11436P) and deposited at the Korean Microorganism Conservation Center on December 23, 2008.
상기 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218은 -1℃에서 숙성되고, 산도가 1.0%인 김치로부터 분리된 균주이다. 그 균학적 성질로서는 일반적인 류코노스톡 메센테로이드 균주가 산성 조건, 특히 pH 3.5 이하에서 증식이 급격히 저하됨에 비하여 본 균주는 pH 2.0-4.0의 산성 조건에서 내산성을 갖고 있어 pH 2.0에서도 생존한다.The Leuconostoc mesenteroid DSR 218 is a strain isolated from kimchi which is aged at -1 DEG C and has an acidity of 1.0%. As a mycological property, the growth of the generic licorostomercenteroid strain is abruptly lowered under acidic conditions, particularly at a pH of less than 3.5, whereas the strain has acid resistance at an acidic condition of pH 2.0-4.0, and survives even at pH 2.0.
또한, 상기 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218은 다른 류코노스톡 메센테로이드 균주에 비해 그 산 생성량이 낮은 특징이 있다. 상기 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218은 다른 류코노스톡 메센테로이드 균주에 비하여 발효시 생산되는 산의 양이 현저하게 적다. 김치즙 배지를 이용하여 본 발명 균주와 대조균주의 산 생산량을 비교하여본 결과 배양 32일에는 상기 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218은 0.45%이었으며, 대조균주는 0.96%로 나타났다. 상기 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218은 대조균주에 비하여 50%이하의 산 생산능을 보이고 있다.
In addition, the Ryukono Stokeshensteode DSR 218 has a lower acid production amount than other Ryukono Stokes mefenoteroid strains. The Leuconostoc mesenteroide DSR 218 is significantly less acid produced during fermentation than the other Leuconostoc mesenteroide strains. The acid production of the strain of the present invention was compared with that of the control strain using Kimchi broth. As a result, the Leuconostoc mesenteroides
본 발명의 유효성분은 상기 식물성 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218의 생균, 건조균, 사균 또는 균체를 포함하거나 포함하지 않는 배양액이다.The active ingredient of the present invention is a culture medium containing or not containing the above-mentioned
본 발명에서 사균은 본 발명의 식물성 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218을 배양한 후 가열, 초음파, 효소, 압력, 산 및 염기 등의 처리를 통해 생균을 사멸시킨 사균으로서, 유산균의 발효에 의한 대사산물을 포함하는 배양액을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 발효에 의한 배양액을 포함시키지 않을 경우 발효시킨 배양액을 여과 또는 원심분리하여 균체를 회수한 후 생균을 사멸시키거나, 먼저 사멸시킨 후 배양액으로부터 사멸된 균체를 회수할 수도 있다.In the present invention, the dead cells of the present invention are killed dead plants by cultivating the
본 발명에서 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218을 배양하는 경우, 배지의 조성이나 배양 조건은 당업계에 알려진 적당한 배지와 배양조건에 따라 이루어질 수 있다. 이러한 배양과정은 당업자라면 선택되는 균주에 따라 용이하게 조정하여 사용할 수 있다. 이러한 다양한 배양 방법은 다양한 문헌(예를 들면, James et al., Biochemical Engineering, Prentice-Hall International Editions)에 개시되어 있다.In the present invention, when cultivating
예를 들어, 김치에서 유래된 본 발명의 식물성 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218은 식물성 배지 100 중량부에 각각의 균주 0.01 내지 3 중량부를 첨가하여 제조할 수 있다. 상기 식물성 배지는 식물성 배지 100 중량부에 10 내지 40 중량부의 배추 및 10 내지 40 중량부의 무를 포함할 수 있고, 바람직하게는 0.1 내지 5 중량부의 포도당 및/또는 0.1 내지 5 중량부의 효모 추출물을 더 포함할 수 있다. 상기 식물성 배지에 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218을 접종한 후 25 내지 40℃에서 2 내지 5일간 발효하여 균체를 포함하는 발효액을 얻을 수 있고, 균체가 제거된 발효액은 균체를 포함하는 발효액을 원심분리하여 상등액만 농축하여 얻을 수 있다.For example, the vegetable Leuconostoc mesenteroides
또한, 본 발명에 따른 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 균주의 배양액은 예를 들어 다음과 같이 제조될 수 있다. 절임배추를 분쇄하고 착즙한 후, 효과적인 균주의 생육을 위하여 포도당을 1.0-2.0%(w/v) 첨가하여 제조한 멸균된 배추즙에 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218균주를 접종한 후 25-30℃에서 18-24 시간 동안 배양하여 제조할 수 있다.
Further, a culture solution of the strain of
본 발명에서 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 가지는 유효성분은 상기 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 유산균으로서, 안전성이 입증된 유산균으로부터 유래되어 부작용의 우려 없이 인플루엔자 바이러스 감염으로 인한 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물, 식품 첨가제 조성물, 생균제 조성물, 사료 조성물, 사료 첨가제 조성물, 발효식품 및 소독용 또는 세정용 조성물 등의 유효성분으로 이용될 수 있다. 상기 인플루엔자 바이러스는 H1N1 아형 및 H3N2 아형의 A형 인플루엔자 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종의 A형 인플루엔자 바이러스 또는 Victoria lineage 및 Yamagata lineage로 이루어진 B형 인플루엔자 바이러스 군으로부터 선택되는 1종의 B형 인플루엔자 바이러스인 것이 바람직하다. 더욱 바람직한 것은 A/California/7/2009(H1N1)pdm09-like virus, A/Hong Kong/4801/2014(H3N2)-like virus, B/Brisbane/60/2008-like virus 및 B/Phuket/3073/2013-like virus 중에서 선택된 1종의 인플루엔자 바이러스이다.In the present invention, the active ingredient having antiviral activity against influenza virus is the above-mentioned
본 명세서에서, '치료'는 증상의 경감 또는 개선, 질환 범위의 감소, 질환 진행의 지연 또는 완화, 질환 상태의 개선, 경감 또는 안정화, 부분적 또는 완전한 회복, 생존의 연장 기타 다른 이로운 치료 결과 등을 모두 포함하는 의미로 사용된다.As used herein, " treatment " refers to the treatment or amelioration of symptoms, reduction of disease extent, delay or alleviation of disease progression, improvement, alleviation or stabilization of disease state, partial or complete recovery, It is used to mean both inclusive.
본 발명에 따른 상기 바이러스 감염으로 인한 질환으로는 예를 들면, 독감, 감기, 인후염, 기관지염, 폐렴, 조류독감, 돼지독감, 염소독감 등의 인플루엔자 바이러스 감염으로 인한 질환을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
Examples of the diseases caused by the viral infection according to the present invention include diseases caused by influenza virus infection such as influenza, cold, sore throat, bronchitis, pneumonia, avian influenza, swine flu and chlorine influenza, It is not.
더욱 구체적으로, 본 발명은 바람직한 구현예로서 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스용 약학 조성물을 제공한다. More specifically, the present invention provides, as a preferred embodiment, an antiviral pharmaceutical composition for influenza virus containing, as an active ingredient,
상기 약학 조성물은 바람직하게는 경구 제형으로 제제화될 수 있으며, 예를 들어 액제, 현탁제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제 또는 엑스제와 같은 경구 투여용 제형으로 제제화될 수 있다. 그리고, 각각의 제형으로 제제화할 때에는, 각각의 제형의 제조에 필요한 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 첨가제를 부가하여 제조할 수 있다. 대표적으로 경구 투여용 제형으로 제제화시 담체로서 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제 및 방부제 중에서 1종 이상을 선택하여 사용할 수 있으며, 첨가제로는 향료, 비타민류 및 항산화제 중에서 1종 이상을 선택하여 사용할 수 있다.The pharmaceutical composition may be formulated into oral formulations, and may be formulated into oral dosage forms such as, for example, solutions, suspensions, powders, granules, tablets, capsules, pills or extensions. When formulating each formulation, a pharmaceutically acceptable carrier or additive necessary for the preparation of each formulation can be added. Typically, it is a form for oral administration. At the time of formulation, one or more of carriers such as a diluent, a lubricant, a binder, a disintegrant, a sweetener, a stabilizer and an antiseptic can be selected and used as an additive. Or more can be selected and used.
상기 담체 및 첨가제는 약제학적으로 허용 가능한 것은 모두 가능하며, 구체적으로 희석제로는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘 또는 탈크, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈 또는 히드록시프로필셀룰로오스가 바람직하다. 또한, 붕해제로는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산나트륨, 폴라크릴린칼륨, 또는 크로스포비돈, 감미제로는 백당, 과당, 솔비톨, 또는 아스파탐, 안정제로는 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 베타-사이클로덱스트린, 백납, 또는 잔탄검, 방부제로는 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필, 또는 솔빈산칼륨이 바람직하다.Examples of the diluent include lactose, corn starch, soybean oil, microcrystalline cellulose, or mannitol as the diluent, magnesium stearate or talc as the lubricant, polyvinyl pyrrolidone Or hydroxypropylcellulose are preferable. Examples of the disintegrant include carboxymethylcellulose calcium, sodium starch glycolate, polacrilin potassium, or crospovidone; examples of sweeteners include white sugar, fructose, sorbitol, or aspartame; stabilizers include sodium carboxymethylcellulose, Preferred examples of the antiseptic agent include methyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, and potassium sorbate.
또한, 상기 성분 이외에도 공지의 첨가제로서 미각을 돋구기 위하여, 매실향, 레몬향, 파인애플향, 허브향 등의 천연향료, 천연과즙, 클로로필린, 플라보노이드 등의 천연색소, 과당, 벌꿀, 당알코올, 설탕과 같은 감미성분, 또는 구연산, 구연산 나트륨과 같은 산미제를 혼합하여 사용할 수도 있다. 이러한 제제화 방법 및 제제화시 필요한 담체 및 첨가제에 대해서는 Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)에 상세하게 기재되어 있다.In addition to the above components, natural additives such as natural flavors such as plum flavor, lemon flavor, pineapple flavor and herb flavor, natural fruit juice, natural coloring matters such as chlorophyllin and flavonoid, fructose, honey, sugar alcohol, sugar Or acidic agents such as citric acid and sodium citrate may be mixed and used. Such formulation methods and carriers and additives required for formulation are described in detail in Remington ' s Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995).
본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218을 1일 0.01mg/kg 내지 10g/kg으로, 바람직하게는 1mg/kg 내지 1g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the condition and the weight of the patient, the degree of disease, the drug form, the administration route and the period, but can be appropriately selected by those skilled in the art. However, in order to obtain the desired effect, it is preferable to administer the present invention
본 발명의 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유 동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, humans, and the like in various routes. All modes of administration may be expected, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intra-uterine or intracerebroventricular injections.
또한 본 발명의 바람직한 또 다른 구현예들로서 상기의 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물 또는 식품 첨가제 조성물을 제공한다.Also, as another preferred embodiment of the present invention, there is provided a food composition or food additive composition for preventing or ameliorating an influenza virus infectious disease containing the above-described
상기 식품 조성물은 산제, 과립제, 캅셀제, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 액제, 엑스제와 같은 건강기능식품으로 제조될 수 있고, 치즈, 김치, 발효소시지, 발효생식제품과 같은 발효 식품으로 제조될 수 있으며, 음료, 이유식, 유제품, 차, 젤리 등의 일반 식품으로 제조될 수 있다. 또한 상기 식품 조성물의 제조에 필요한 식품 첨가제 조성물로도 이용될 수 있다.The food composition may be manufactured as a health functional food such as a powder, a granule, a capsule, a suspension, an emulsion, a syrup, a liquid, an extract, and may be manufactured as a fermented food such as cheese, kimchi, fermented sausage, , Beverages, baby foods, dairy products, tea, jellies, and the like. It may also be used as a food additive composition necessary for the production of the food composition.
본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218이 식품 조성물 또는 식품 첨가제 조성물에 포함될 때 그 양은 건조물 또는 고형인 경우 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 음료인 경우 100㎖를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.When the
식품 조성물 또는 식품 첨가제 조성물로서 이용될 경우 식품학적으로 허용 가능한 담체 또는 첨가제와 함께 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 식품학적으로 허용 가능한 담체 또는 첨가제는 제조하고자 하는 제형의 제조에 당해 기술분야에서 사용 가능한 것으로 공지되어 있는 임의의 담체 또는 첨가제가 이용될 수 있다. When used as a food composition or food additive composition, may be formulated into conventional formulations known in the art, together with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. The pharmaceutically acceptable carrier or additive may be any carrier or additive known to be usable in the art for the preparation of the formulation to be prepared.
본 발명의 식품 조성물이 음료 형태로 제조되는 경우 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드, 예를 들어, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제(사카린, 아스파탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 음료 100㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.When the food composition of the present invention is prepared in the form of a beverage, there is no particular restriction on the liquid ingredient other than the above-mentioned leuconovac methtersteroid
또한, 본 발명의 식품 조성물 또는 식품 첨가제 조성물은 유효성분으로 사용되는 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물 또는 식품 첨가제 조성물은 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 이외에 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
In addition, the food composition or food additive composition of the present invention may contain flavonoids such as various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors, and natural flavors in addition to the present lucanosol stevensoride
또한 본 발명의 바람직한 또 다른 구현예들로서 상기의 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물 또는 사료 첨가제 조성물을 제공한다.Also, as another preferred embodiment of the present invention, there is provided a feed composition or feed additive composition for preventing or ameliorating an influenza virus infectious disease containing the above-mentioned
류코노스톡 메센테로이드 DSR 218이 사료 조성물 또는 사료 첨가제 조성물에 함유되어 이용될 경우, 상기 조성물은 20 내지 90% 고농축액이거나 분말 또는 과립형태로 제조될 수 있다. 상기 사료 첨가제는 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산 등의 유기산이나 인산나트륨, 인산칼륨, 산성 피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나, 폴리페놀, 카테킨, 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물, 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제 중 어느 하나 또는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 사료로 이용될 경우, 상기 조성물은 통상의 사료 형태로 제제화될 수 있으며, 통상의 사료 성분을 함께 포함할 수 있다. 상기 사료 첨가제 및 사료는 곡물, 예를 들면 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀; 식물성 단백질 사료, 예를 들면 평지, 콩 및 해바라기를 주성분으로 하는 사료; 동물성 단백질 사료, 예를 들면 혈분, 육분, 골분 및 생선분; 당분 및 유제품, 예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조 성분 등을 더 포함할 수 있으며, 이외에도 영양 보충제, 소화 및 흡수 향상제, 성장 촉진제 등을 더 포함할 수 있다. 상기 사료 첨가제는 동물에게 단독으로 투여하거나 식용 담체 중에서 다른 사료 첨가제와 조합하여 투여할 수도 있다. 또한, 상기 사료 첨가제는 탑 드레싱으로서 또는 이들을 동물 사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도의 경구 제형으로 용이하게 동물에게 투여할 수 있다. 상기 사료 첨가제를 동물 사료와 별도로 투여할 경우, 당해 기술분야에 잘 알려진 바와 같이 약제학적으로 허용 가능한 식용 담체와 조합하여, 즉시 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 고체 또는 액체, 예를 들어 옥수수 전분, 락토오스, 수크로오스, 콩 플레이크, 땅콩유, 올리브유, 참깨유 및 프로필렌글리콜일 수 있다. 고체 담체가 사용될 경우, 사료 첨가제는 정제, 캡슐제, 산제, 트로키제 또는 함당정제 또는 미분산성 형태의 탑 드레싱일 수 있다. 액체 담체가 사용될 경우, 사료 첨가제는 젤라틴 연질 캡슐제, 또는 시럽제나 현탁액, 에멀젼제, 또는 용액제의 제형일 수 있다. 상기 사료는 동물의 식이 욕구를 충족시키는데 통상적으로 사용되는 임의의 단백질-함유 유기 곡분을 포함할 수 있다. 이러한 단백질-함유 곡분은 통상적으로 옥수수, 콩 곡분, 또는 옥수수/콩 곡분 믹스로 구성되어 있다. 또한 사료 조성물 또는 사료 첨가제 조성물은 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용액 촉진제 등을 함유할 수 있다. 또한 사료 첨가제 조성물은 침주, 분무 또는 혼합하여 동물의 사료에 첨가하여 이용될 수 있다.
When leuconostomercenteroid
또한 본 발명의 바람직한 또 다른 구현예들로서, 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 또는 이의 배양물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 소독용 또는 세정용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 소독제, 주방세제, 세탁세제, 야채ㅇ채소 세척제 또는 손 세정제에 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In still another preferred embodiment of the present invention, there is provided a composition for disinfection or cleaning of influenza virus containing leucono stokescensenteroid
본 발명의 소독용 또는 세정용 조성물은 하나 이상의 계면활성제를 포함할 수 있다. 상기 계면활성제는 음이온성, 비-이온성, 양이온성, 양쪽성 또는 양이온성 형태(zwitter ionic type), 또는 이것들의 혼합물일 수 있다. 음이온성 계면활성제의 대표적인 예로는 선형 알킬벤젠술폰산염(LAS), 알킬황산염(AS), 알파올레핀술폰산염(AOS), 알코올에톡시황산염(AES) 또는 천연지방산의 알칼리금속염을 들 수 있다. 비-이온성 계면활성제의 예로는 알킬폴리에틸렌글리콜에테르, 노닐페놀 폴리에틸렌글리콜 에테르, 수크로스와 글루코스의 지방산에스테르 또는 폴리에톡실화 알킬글루코시드의 에스테르를 들 수 있다. The disinfecting or cleaning compositions of the present invention may comprise one or more surfactants. The surfactant may be anionic, non-ionic, cationic, amphoteric or zwitterionic type, or a mixture thereof. Representative examples of anionic surfactants include linear alkylbenzenesulfonic acid salts (LAS), alkylsulfuric acid salts (AS), alpha olefin sulfonic acid salts (AOS), alcohol ethoxy sulfate (AES) or alkali metal salts of natural fatty acids. Examples of non-ionic surfactants include alkylpolyethylene glycol ethers, nonylphenol polyethylene glycol ethers, fatty acid esters of sucrose with glucose or esters of polyethoxylated alkyl glucosides.
또한, 본 발명의 소독용 또는 세정용 조성물은 용도에 맞추어 연마제, 표백제, 표면활성제, 부식방지제, 금속봉쇄제, 얼룩-재침착 방지제, 향수, 효소 및 표백제의 안정화제, 제형 보조제, 광증백제, 거품 부스터, 킬레이트화제, 충전제, 직물연화제 등과 같은 당업계에서 공지된 다른 세제 성분들을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 소독용 또는 세정용 조성물은 분제, 액제 등의 임의의 편리한 형태로 제형화될 수 있다.
The composition for disinfecting or cleaning according to the present invention can be suitably used for various purposes such as an abrasive, a bleaching agent, a surface active agent, a corrosion inhibitor, a metal blocker, a stain-repellent agent, a perfume, a stabilizer for enzymes and bleaching agents, Foam boosters, chelating agents, fillers, fabric softeners, and the like, as well as other detergent ingredients known in the art. In addition, the disinfecting or cleaning composition of the present invention may be formulated into any convenient form such as powder or liquid.
이하, 본 발명에 따른 항바이러스용 조성물에 대해 상세히 설명하기로 한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니고, 본 발명의 기술 사상 범위 내에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하며, 이 또한 첨부된 특허 청구 범위에 속하는 것은 당연하다.
Hereinafter, the antiviral composition according to the present invention will be described in detail. It is to be understood, however, that the invention is not limited to the disclosed embodiments, but, on the contrary, is intended to cover various modifications and equivalent arrangements included within the spirit and scope of the appended claims. It is obvious that the present invention belongs to the claims.
<실시예><Examples>
실시예: 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218의 배양Example: Culture of
절임배추를 브랜더로 분쇄, 착즙 후 포도당을 1.0%(w/v) 첨가한 후, 멸균하여 배추즙 배지를 제조하였다. 상기 실시예 1에서 분리된 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 균주[기탁번호: KFCC-11436P]를 MRS 브로스(MRS 브로스, Difco.; 박토 펩톤 10g, 소고기추출물 10g, 효모추출물 5g, 글루코스 20g, 트윈80 1g, 구연산 2g, 제2인산칼륨 2g, 초산나트륨 5g, 황산망간 0.1g, 황산마그네슘 0.05g/증류수 1ℓ) 5ml에 접종하여 25℃에서 24시간 1차 전배양을 하였다. 이후, 상기 1차 전배양액을 멸균된 배추즙 배지에 1.0% 접종하여 25℃에서 24시간 동안 2차 전배양을 하였다. 상기 2차 전배양액을 다시 멸균된 배추즙 배지에 1.0% 접종하여 25℃에서 20시간 동안 본배양하였다.The pickled Chinese cabbage was crushed with a broth, and 1.0% (w / v) glucose was added after the juice, and the cabbage juice medium was prepared by sterilization. (MRS broth, Difco .; 10 g of bactopeptone, 10 g of beef extract, 5 g of yeast extract, 20 g of glucose, 20 g of
이후, 3차 계대 배양된 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 균을 원심분리하고 균체를 10% 탈지유에 현탁하여 -70℃에서 보관하였다.Subsequently, the third-line cultured Ryukono-Stokes methenseolide
그리고, 상기 유산균을 MRS 액체 배지에 접종하여 37℃에서 24시간 배양하였다. 상기 균체를 포함하는 배양액을 4,000rpm, 4℃에서 10분간 원심분리하여 균체를 얻은 후 멸균된 PBS 완충용액을 이용하여 3회 세척하였다. 상기 세척한 균체를 다시 멸균된 PBS 완충용액에 현탁한 후 95℃에서 10분간 열처리하였다. 상기 열처리된 균을 4,000rpm, 4℃에서 10분간 원심분리하여 균체를 얻은 후 멸균된 PBS 완충용액 1㎖에 현탁하였다. 이 균 현탁액을 -20℃에 보관하면서 실험에 사용하였다.
Then, the lactic acid bacteria were inoculated into the MRS liquid medium and cultured at 37 占 폚 for 24 hours. The culture broth containing the cells was centrifuged at 4,000 rpm for 10 minutes at 4 ° C to obtain cells, which were then washed three times with sterilized PBS buffer solution. The washed cells were suspended in sterilized PBS buffer solution and heat-treated at 95 ° C for 10 minutes. The heat-treated bacterium was centrifuged at 4,000 rpm at 4 DEG C for 10 minutes to obtain cells, which were then suspended in 1 mL of sterilized PBS buffer solution. The suspension of this bacterium was used for the experiment while being stored at -20 ° C.
<실험예><Experimental Example>
실험예 1. 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 효능Experimental Example 1. Antiviral efficacy against influenza virus
상기 실시예에서 준비한 균주 시료를 이용하여 독감의 원인체인 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 분석하고자 하였다.The antimicrobial activity of influenza virus, which is the cause of influenza, was analyzed using the strains prepared in the above examples.
실험동물인 BALB/c 마우스(5~6주령, 암컷) 30 마리를 (주)오리엔트 바이오에서 구입하였으며, 인플루엔자 바이러스는 국립보건원 질병관리본부에서 분양 받은 A/Korea/01/2009 (H1N1)를 사용하였다. Thirty male BALB / c mice (5 to 6 weeks old, female) were purchased from Orient Biotech Co., Ltd. The influenza virus was used in the A / Korea / 01/2009 (H1N1) Respectively.
그리고, 상기 마우스 당 상기 균주 시료를 109 CFU 가량씩 총 28일 동안 경구(per oral)로 투여하였다. 상기 마우스에게 균주 투여를 시작한 후 14 일째에, 마우스를 반수 치사량의 2배 중량(2 LD50, lethal dose for 50 percent kill)의 H1N1 아형의 A형 인플루엔자 바이러스(A/Korea/01/2009)로 감염시켰으며, 이후 14일간 균주 시료를 더 투여하였다.Then, the above strain sample per mouse was administered orally in a total amount of 10 9 CFU for 28 days. On day 14 after the start of the strain administration to the mice, the mice were injected with the H1N1 subtype of influenza A virus (A / Korea / 01/2009) in a dose of twice the lethal dose (2 LD 50 , lethal dose for 50 percent kill) And then the strain was further administered for 14 days.
항바이러스 효능은 바이러스 감염 이후 14 일간의 체중변화와 생존율 변화, 그리고 바이러스 감염 6 일째의 폐 바이러스 역가와 병리조직학적 병변을 분석하여 확인하였다.The antiviral efficacy was confirmed by analyzing 14 days of body weight change and survival rate after viral infection, and histopathologic lesion of lung virus at 6th day of virus infection.
그 결과를 도 1, 도 2, 그리고 도 3에 나타내었다. 도 1, 도 2, 그리고 도 3에서 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 유산균은 균주명의 마지막 숫자를 이용하여 218로 명명하였다.
The results are shown in FIG. 1, FIG. 2, and FIG. In Fig. 1, Fig. 2 and Fig. 3,
도 1a는 실시예의 균주 시료를 투여한 마우스에 있어서, 바이러스 감염 후 14 일간의 체중 변화를 나타내는 그래프이고, 도 1b는 바이러스 감염 후 14 일간의 생존율 변화를 나타내는 그래프이다.FIG. 1A is a graph showing changes in body weight for 14 days after virus infection in a mouse to which a strain sample of the example is administered, and FIG. 1B is a graph showing changes in survival rate for 14 days after virus infection.
상기 도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 균주 시료를 투여하지 않고 바이러스만 감염시킨 실험군(Infection) 마우스는 바이러스 감염 이후 8일째에 모두 사망하였으나, 실시예의 균주 시료를 투여 받은 실험군(DSR 218) 마우스는 50% 이상의 생존율을 나타냄으로써 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 효능을 갖는 것으로 나타났다. As can be seen from FIG. 1, mice infected with only the virus but not the strain samples died on the eighth day after the virus infection. However, the mouse (DSR 218) Showed an antiviral efficacy against influenza virus by showing a survival rate of 50% or more.
또한, 도 2는 실시예의 균주 시료를 투여한 마우스에 있어서, 바이러스 감염 후 6 일째의 폐 바이러스 역가를 나타내는 그래프이다.2 is a graph showing the titer of lung virus at 6 days after virus infection in a mouse to which a strain sample of the Example was administered.
상기 도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 바이러스 감염 6일째에 폐(lung)에 존재하는 바이러스 역가를 분석한 결과, 실시예의 균주 시료를 투여 받은 실험군(DSR 218) 마우스는 균주 시료를 투여하지 않고 바이러스를 감염시킨 실험군(Infection) 마우스에 비해 폐 바이러스 역가가 43.5% 감소되었다. 이 결과는 마우스 내에 실시예의 시료를 투여함으로 인해 폐에서의 인플루엔자 바이러스 증식이 효과적으로 억제(Inhibition)됨을 의미한다.As can be seen from FIG. 2, virus titers in the lungs on the 6th day after virus infection were analyzed. As a result, mice (DSR 218), which received the strain samples of the examples, (43.5%) compared to the Infection mice infected with the virus. This result implies that influenza virus proliferation in the lung is effectively inhibited by administering the sample of the example in the mouse.
그리고, 도 3은 실시예의 균주 시료를 투여한 마우스에 있어서, 바이러스 감염 후 6 일째의 폐의 병리조직학적 병변을 분석하여 염증반응을 확인한 사진이다.Fig. 3 is a photograph showing the inflammatory reaction in the lungs of the lungs on the 6th day after the viral infection in the mice to which the strain sample of the Example was administered.
상기 도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 실시예의 균주 시료를 투여한 실험군(DSR 218) 마우스는 균주 시료를 투여하지 않고 바이러스를 감염시킨 실험군(Infection) 마우스에 비해 폐의 염증반응이 적게 나타났다. As can be seen from FIG. 3, mice in the experimental group (DSR 218) administered with the strain samples of the Examples showed less lung inflammation reaction than those infected with the virus without the strain samples.
그러므로 도 1, 도 2, 그리고 도 3 결과를 종합하여 볼 때, 본 류코노스톡 메센테로이드 DSR 218 균주는 H1N1 인플루엔자 바이러스의 증식을 더욱 효과적으로 억제하는 항바이러스 효능을 갖고 있다고 판단된다.
Therefore, from the results of FIGS. 1, 2 and 3, it can be concluded that the present
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 특허청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.Although the present invention has been described in terms of the preferred embodiments mentioned above, it is possible to make various modifications and variations without departing from the spirit and scope of the invention. It is also to be understood that the appended claims are intended to cover such modifications and changes as fall within the true spirit of the invention.
Claims (12)
상기 바이러스는 A/Korea/01/2009(H1N1)의 A형 인플루엔자 바이러스인 것을 특징으로 하는 항바이러스용 약학 조성물.The method according to claim 1,
Wherein said virus is an influenza A virus of A / Korea / 01/2009 (H1N1).
상기 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염으로 인한 질환을 예방 또는 치료하기 위한 것인 항바이러스용 약학 조성물.The method according to claim 1,
Wherein said composition is for preventing or treating a disease caused by an influenza virus infection.
상기 바이러스 감염으로 인한 질환은 독감, 감기, 인후염, 기관지염, 폐렴, 조류독감, 돼지독감 및 염소독감 중의 하나인 것을 특징으로 하는 항바이러스용 약학 조성물.The method of claim 3,
Wherein the disease caused by the viral infection is one of influenza, cold, sore throat, bronchitis, pneumonia, avian influenza, swine flu and chlorine influenza.
상기 조성물은 소독제, 주방세제, 세탁세제, 야채 및 채소의 세척제, 또는 손 세정제에 사용되는 것인 소독용 또는 세정용 조성물.12. The method of claim 11,
Wherein the composition is used in a disinfectant, a kitchen detergent, a laundry detergent, a vegetable and vegetable detergent, or a hand cleaner.
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|---|---|---|---|---|
| WO2023033626A1 (en) * | 2021-09-06 | 2023-03-09 | 한국식품연구원 | Composition comprising leuconostoc pseudomesenteroides wikim0138 strain as active ingredient for prevention or treatment of cancer |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080170996A1 (en) * | 2006-07-28 | 2008-07-17 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Compositions and Methods for Stimulation of Lung Innate Immunity |
| US20100159039A1 (en) * | 2008-12-09 | 2010-06-24 | Liisna Inc. | Antiviral agents containing a fermentation product of garlic by lactic acid bacteria |
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Patent Citations (3)
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