KR20190057011A - Pest control composition comprising Armeniacae Semen extract as active ingredient - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 행인 추출물을 유효성분으로 포함하는 해충 방제용 조성물, 해충 방제제 및 이를 이용한 해충 방제 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a pest control composition, an insect pest control composition, and a pest control method using the composition as an active ingredient.
유기인제를 포함하는 기존의 해충 방제제는 환경 유해성 및 인체 유해성 등의 문제가 있어 살충제를 포함한 농약의 사용이 제한되고 있으며, 친환경 농산물에 대한 관심이 증가됨에 따라, 고품질 유기농 농산물의 생산을 지향하는 농가가 증가하고 있다. 농산물의 생산량과 품질에 큰 영향을 미치는 해충 방제 기술은 대부분이 친환경 기술이 아니거나 그렇지 않을 경우에는 그 효과가 미비하다.Conventional pest control agents including organic phosphorus have problems such as environmental harm and human harmfulness, and thus use of pesticides including insecticides is limited. As interest in environmentally friendly agricultural products is increased, production of high quality organic agricultural products Farms are increasing. Most pest control technologies that have a significant impact on the production and quality of agricultural products are not eco-friendly or ineffective.
해충 방제 기술 중, 생물학적 방제법으로 곤충 호르몬을 이용하는 방법이 있다. 곤충호르몬은 곤충의 생체 내에서 만들어지는 유기화합물로 미량으로 유효하게 작용하다. 곤충호르몬은 생체내외의 정보를 특정한 표적세포에 전달하고 그 표적세포의 활동을 조절하여 곤충이 정상적으로 생명현상을 유지할 수 있도록 하는 화학전달물질로 작용한다. 곤충호르몬에는 중추신경계의 신경분비세포에서 합성 및 분비되는 신경펩타이드 호르몬과 내분비선에서 합성 및 분비되는 호르몬 등이 있다. Among the pest control techniques, there is a method of using an insect hormone as a biological control method. Insect hormones are organic compounds that are produced in the body of insects and act effectively in trace amounts. Insect hormones act as chemical messengers that transmit information in and out of the body to specific target cells and regulate the activity of the target cells, allowing insects to maintain their normal life cycle. Insect hormones include neuropeptide hormones synthesized and secreted by neurons in the central nervous system and hormones synthesized and secreted by the endocrine glands.
곤충에서 신경펩타이드 호르몬의 일반적인 작용기작은 다음과 같다. 신경펩타이드 호르몬은 특정 표적세포에 있는 수용체와 높은 특이성 및 친화성을 가지고 결합하여 세포의 작용을 조절한다. 특히, 곤충의 다양한 생리활동을 조절하는 소형신경펩타이드(Short neuropeptide F)는 세포막상의 수용체(GPCR: G protein coupled receptor)에 결합하여 세포막 내측에 있는 adenylate cyclase를 활성화시켜 ATP로부터 cAMP(cyclic AMP)의 생성을 촉진하고, 이 cAMP는 2차 메신저로서 세포내의 효소 또는 분자계에 정보를 전달한다. The common functional groups of neuropeptide hormones in insects are as follows. Neuropeptide hormones bind to receptors in specific target cells with high specificity and affinity to regulate cellular function. In particular, short neuropeptide F, which regulates the various physiological activities of insects, binds to the G protein coupled receptor (GPCR) and activates the adenylate cyclase inside the cell membrane to release cAMP (cyclic AMP) from ATP This cAMP, as a secondary messenger, transmits information to the intracellular enzymes or molecular systems.
소형 신경펩타이드의 수용체는 다양한 하위신호전달 체계를 활성화 시켜 섭식, 생식 및 개체의 성장을 조절한다고 알려있으며, 여러 감각기에 고루 분포하고 있다. 본 발명자들은 쌍시목 초파리과에 속하는 노랑초파리 (Drosophila melanogaster) 모델을 이용하여 신경펩타이드인 소형 신경펩타이드가 인슐린 유전자의 발현을 조절하여 대사 기능, 개체 성장 및 초파리의 수명 조절에 관여함을 최초로 보고하였고(Lee et al., Nature Cell Biol., 2008), 특히 소형 신경펩타이드의 하위신호전달체계 중 최근에 PKA-CREB-DYRK 경로는 섭식행동을 유도함을 보고하였다 (Hong et al. PLoS Genetics, 2012).Small neuropeptide receptors are known to regulate feeding, reproduction and individual growth by activating various sub-signaling pathways, and are distributed throughout several senses. The present inventors for the first time reported using a Drosophila melanogaster model belonging to the family of Dicloviridae (Drosophila melanogaster ) for the first time that a small neuropeptide, a neuropeptide, modulates the expression of an insulin gene and is involved in metabolic function, individual growth, and lifespan control of Drosophila lee et al., Nature Cell Biol ., 2008), especially PKA-CREB-DYRK path to the latest in sub-signaling pathways in a small neuropeptide reported to induce feeding behavior (Hong et al. PLoS Genetics, 2012).
특히, 곤충의 신경펩타이드는 곤충 종간 진화적으로 매우 잘 보전되어 있으나, 유사한 기능을 담당하는 포유류의 신경펩타이드와 아미노산 서열 및 구조에서 많은 차이를 보인다. 따라서, 곤충의 신경펩타이드 신호를 저해하는 화합물이나 제재가 포유류의 신경펩타이드 신호에는 작용하지 못하거나, 활성이 매우 낮은 것으로 알려져 있으며, 이를 기반으로 곤충 특이적인 신경펩타이드 수용체 억제 물질을 발굴할 경우, 인간을 포함한 포유류에는 작용하지 않아 인간 유해성을 감소시킬 수 있다.In particular, insect neuropeptides are very well conserved among insect species, but they differ in amino acid sequence and structure from mammalian neuropeptides with similar functions. Therefore, it is known that compounds or agents that inhibit insect neuropeptide signals do not act on mammalian neuropeptide signals or have very low activity. When insect-specific neuropeptide receptor inhibitors are discovered, But it does not work on mammals, including humans, and can reduce human toxicity.
행인(Armeniacae Semen, 杏仁) 은 살구의 씨로서 주로 한약재로 많이 이용된다. 살구나무는 장미과에 속하는 낙엽소교목으로 높이 5m 정도이다. 살구는 7월에 황색 또는 황적색으로 익으며 맛이 시고 달다. 원산지는 동부 아시아이다. 우리 나라에서 살구가 재배되기 시작한 때는 확실하지 않으나 오래 전부터 중부 이북지방의 산야에서 자생되어왔던 것으로 추측된다. 살구의 품종에는 평화·산형3호·광오대실(廣烏大實)·소화 등 일본으로부터의 도입종 외에 미국에서 도입된 품종, 국내의 지방종으로부터 선발한 몇 품종이 있다. 재배의 적지는 대개 사과의 적지와 일치한다.Armeniacae Semen (杏仁) is an apricot seed which is mainly used as a herb medicine. The apricot tree is a deciduous arboreous tree belonging to the Rosaceae, 5m high. Apricots ripen in yellow or yellowish red in July and taste and sweet. Origin is East Asia. It is not certain when the apricots were cultivated in our country, but it is presumed that they have been naturally grown in mountain areas in the north of the central part of Korea for a long time. There are several varieties of apricot selected from the varieties imported from the US and the domestic lipids in addition to those imported from Japan, such as Peace, Mountain
행인의 효능으로는 진해·거담·소종(消腫)·평천(平喘)·윤장(潤腸) 등이 알려져 있으며 각종 해소·천식·기관지염·급성간염·인후염·장조변비(腸燥便煉)·창종(瘡腫)·암종(癌腫) 등에 치료제로 사용된다. 또한 행인은 여성의 피부미용에도 좋은 것으로 알려져 있다.The efficacy of passengers is known as Jinhae, Gadam, Yeomyeom, Pyeongcheon, and Yunjang. Various relief, asthma, bronchitis, acute hepatitis, sore throat, intestinal constipation, · It is used as a remedy for swine fever (carcinoma) and carcinoma (carcinoma). Also, passers-by is known to be good for women's skin beauty.
행인과 관련하여, 대한민국 등록특허공보 제10-1480700호는 행인을 포함하는 생약 추출물의 화장품용 조성물을 개시하고 있다. Regarding passers-by, Korean Patent Registration No. 10-1480700 discloses a cosmetic composition containing a herbal extract comprising a passenger.
이렇듯, 행인 추출물을 포함하는 해충 방제제에 대한 발명은 전무한 실정이며, 특히 곤충 신경펩타이드 및 내분비계에 대한 행인 추출물의 작용에 대해서는 전혀 알려진 바가 없다.As described above, there is no invention of a pest control agent containing an extract of Phellinus linteus, and in particular, there is no known effect of an insect neuron peptide and an extract of Phellinus linteus on the endocrine system.
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 친환경 해충 방제제를 개발하고자 예의 노력한 결과, 행인 추출물이 효과적으로 신경펩타이드 수용체의 활성을 조절하여 해충의 섭식을 감소시키고 먹이 회피도를 증가시켜 천연물 해충방제제로 사용할 수 있고, 인간에 대해서는 독성이 거의 없다는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Under these circumstances, the present inventors have made intensive efforts to develop an environmentally-friendly pest control agent, and as a result, it has been found that the extract of Pseudomonas sp. Effectively modulates the activity of the neuropeptide receptor to reduce insect feeding and increase food avoidance, And confirming that there is almost no toxicity to humans, thereby completing the present invention.
본 발명의 목적은 행인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 해충 방제용 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a composition for controlling insects, which comprises an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
본 발명의 다른 목적은 상기 해충 방제용 조성물을 포함하는 해충 방제제를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pest controlling agent comprising the composition for pest control.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 해충 방제용 조성물을 해충에 처리하는 단계를 포함하는, 해충 방제 방법을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a pest control method comprising the step of treating the insect pest controlling composition.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 해충 방제용 조성물을 포함하는 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a quasi-drug composition comprising the composition for controlling insects.
본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.Each description and embodiment disclosed in the present application can be applied to each other description and embodiment. That is, all combinations of the various elements disclosed in this application fall within the scope of the present application. Further, the scope of the present application is not limited by the specific description described below.
본 발명의 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 행인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 해충 방제용 조성물을 제공한다.As one embodiment for achieving the object of the present invention, the present invention provides a composition for pest control comprising an extract or extract thereof as an active ingredient.
본 발명에서는 행인 추출물 또는 이의 분획물이 곤충의 섭식, 생식 및 개체의 성장을 조절한다고 알려져 있는 소형신경펩타이드 수용체의 활성을 억제하는 효과가 있어, 해충 방제 용도로 사용될 수 있음을 확인하였다.In the present invention, it has been confirmed that the extract or its fractions inhibit the activity of small neuropeptide receptors known to regulate feeding, reproduction and individual growth of insects and can be used for pest control.
본 발명에서 용어, "행인(Armeniacae Semen, 杏仁)"은 장미과에 속하는 살구나무(Prunus armeniaca Linne var. ansu Maximowicz), 개살구나무(Prunus mandshurica Koehne var. glabra Nakai), 시베리아살구(Prunus sibirica Linne) 또는 아르메니아살구(Prunus armeniaca Linne) 등을 포함하는 살구의 씨로서, 행자, 행핵인 또는 고행인으로도 불린다.In the present invention, the term "Armeniacae Semen" refers to apricot trees belonging to the rose family ( Prunus armeniaca Linne var. Ansu Maximowicz ), Prunus mandshurica Koehne var. Glabra Nakai , Prunus sibirica Linne The apricot seed, including the Armenian apricot ( Prunus armeniaca Linne ), is also known as an ancestor, a nucleus or an ascetic.
본 발명의 목적상 행인은 그 종류에 제한되지 않으며, 재배한것을 사용하거나 시중에서 구입한 것을 그 출처에 제한 없이 사용할 수 있다.For the purpose of the present invention, the person is not limited to the kind, and cultivated or commercially available products can be used without limitation in their origin.
또한, 행인은 해충 방제제로서의 구체적인 효능에 대해 알려진 바 없다. 이에, 본 발명자들은 행인 추출물이 곤충에 특이적인 소형신경펩타이드의 수용체의 활성을 억제하고 해충의 섭식을 감소시키며 행인 추출물이 포함된 먹이에 대한 해충의 기피도가 증가하는 것을 확인하여, 행인 추출물을 포함하는 친환경 해충 방제 조성물을 최초로 개발하였다는 점에서 그 의의가 매우 크다.In addition, no specific effect on the insect pest control agent is known. Thus, the inventors of the present invention confirmed that the extracts of passerines inhibit the activity of receptors of insect-specific small neuropeptides, reduce insect feeding, and increase the repellency of insects against food containing the insect extract. This is significant in that it is the first time that an environmentally-friendly pest control composition was developed.
본 발명에서 용어 "추출물"은 행인의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.The term " extract " in the present invention means an extract obtained by extracting a passenger, a diluted or concentrated liquid of the extracted liquid, a dried material obtained by drying the extracted liquid, a controlled preparation or a purified product of the extracted liquid, And extracts of all formulations that can be formed using an extract.
본 발명에서, 행인 추출물은 행인을 세척하고 건조시킨 후 분쇄하는 단계; 및 상기 분쇄된 행인을 물, C1 내지 C6의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 구성되는 군으로부터 선택된 용매로 추출하는 단계에 의해 수득할 수 있다. 상기 행인 추출물은 구체적으로는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 펜탄올 또는 헥산올로 추출한 것일 수 있고, 더욱 구체적으로는 에탄올로 추출한 것일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the passive extract comprises washing, drying and pulverizing passages; And extracting the pulverized starting materials with a solvent selected from the group consisting of water, C 1 to C 6 alcohols and mixed solvents thereof. Specifically, the extract can be extracted with methanol, ethanol, propanol, butanol, pentanol or hexanol, and more specifically, extracted with ethanol, but the present invention is not limited thereto.
추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 보다 구체적으로 본 발명에서 행인 추출물을 얻기 위한 방법은 다음과 같다. 건조 행인을 중량의 약 2 내지 20 배, 구체적으로는 약 3 내지 5 배에 달하는 부피의 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 펜탄올 및 헥산올 등과 같은 C1 ~ C6의 알코올의 극성 용매 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매를 용출 용매로 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 추출 온도는 1 내지 100 ℃, 구체적으로는 25 ℃일 수 있으며, 추출 기간은 약 1시간 내지 10 일, 구체적으로는 2 내지 50 시간일 수 있고, 추출 방법은 진탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출, 또는 이들을 병합한 방법일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 구체적인 실시예에서는 증류수를 이용하여 행인 분쇄물을 침지시키고, 100 ℃에서 150분 동안 추출한 뒤 무형광 솜을 이용하여 추출물을 여과 후 동결 건조함으로써 행인 추출물을 확보하였다.The extraction method is not particularly limited, and extraction can be carried out at room temperature or with heating under conditions where the active ingredient is not destroyed or minimized. More specifically, the method for obtaining the extract of the present invention is as follows. The dry runner can be used in a polar solvent of a C 1 to C 6 alcohol such as water, methanol, ethanol, propanol, butanol, pentanol, hexanol and the like in a volume of about 2 to 20 times, Or a mixed solvent thereof having a mixing ratio of about 1: 0.1 to 1:10 may be used as an elution solvent, but the present invention is not limited thereto. The extraction temperature may be 1 to 100 ° C, specifically 25 ° C, and the extraction period may be about 1 hour to 10 days, specifically, 2 to 50 hours. The extraction method may include shaking extraction, hot water extraction, Reflux cooling extraction, ultrasonic extraction, or a combination thereof. However, the present invention is not limited thereto. In a specific example of the present invention, the pulverized product was immersed in distilled water and extracted at 100 ° C for 150 minutes. The extract was filtered and then lyophilized to obtain an extract from the extract.
상기 행인 추출물은 천연, 잡종, 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물조직 배양물로부터 추출 가능하다.The extract can be extracted from natural, hybrid, and variant plants and extracted from plant tissue cultures.
본 발명에서 용어 "분획물"은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.The term " fraction " in the present invention means a product obtained by performing fractionation to separate a specific component or a specific component group from a mixture containing various components.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 행인을 추출하여 얻은 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 수득할 수 있다.The fractionation method for obtaining the fraction in the present invention is not particularly limited and may be carried out according to a method commonly used in the art. As a non-limiting example of the above-mentioned fractionation method, fractions can be obtained from the extract by treating a predetermined solvent with the extract obtained by extracting passerine.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데에 사용되는 분획 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올 등의 극성 용매; 헥산(hexane), 에틸아세테이트(ethylacetate), 아세톤(acetone), 클로로포름(chloroform) 등의 비극성 용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합하여 사용될 수 있다. 또한, 행인을 추출하여 이온 교환수지를 통과시켜 추출물을 분획하는 방법을 이용할 수도 있으며, 본 발명에서 행인을 분획하기 위하여 사용한 이온 교환 수지는 더욱 상세하게는 합성흡착제로 방향족계 무치환 수지(디아이온 HP-20류, SP825류, AXT204류, XAD1600T류, MN200류) 중의 하나일 수 있다.The kind of the fraction solvent used for obtaining the fraction in the present invention is not particularly limited, and any solvent known in the art can be used. Non-limiting examples of the fraction solvent include polar solvents such as water and alcohol; And non-polar solvents such as hexane, ethylacetate, acetone, and chloroform. These may be used alone or in combination of two or more. The ion exchange resin used to fractionate the passenger in the present invention may be a synthetic adsorbent such as aromatic non-substituted resin (diaion HP-20 series, SP825 series, AXT204 series, XAD1600T series, MN200 series).
본 발명에서 용어 "해충"이란, 인간의 생활에 직접 또는 간접으로 해를 주는 모든 곤충을 말한다. 본 발명에서 상기 해충은 동물 또는 식물에 해를 가하는 곤충일 수 있고, 또한 인간 질병 매개 해충, 농가 해충, 원예작물 해충 및 목조 해충일 수 있지만, 이에 제한되지 않고 본 발명의 해충 방제용 조성물에 의해 신경펩타이드 수용체의 활성이 억제되는 것을 모두 포함할 수 있다.The term " insect pests " in the present invention refers to all insects which directly or indirectly harm human life. In the present invention, the insect pests may be insects harmful to animals or plants, and may also be human disease-mediated insects, farm insects, horticultural insects and horticultural insects and wooden insects. And inhibiting the activity of the neuropeptide receptor.
또한, 구체적으로 상기 해충은 이집트숲모기, 흰줄숲모기, 학질모기, 중국얼룩날개모기, 열대집모기, 진드기, 총채벌레, 벼멸구, 과실파리, 집파리, 초파리, 메뚜기, 풀무치, 붉은 불개미, 러시아밀진딧물, 완두수염진딧물, 담배가루이 또는 감자잎벌레일 수 있지만 이에 제한되는 것은 아니다.Specifically, the pests are selected from the group consisting of Egyptian forest mosquito, white mosquito mosquito, school mosquito, Chinese spotted mosquito, tropical house mosquito, mite, thripworm, Aphids, pea aphids, tobacco may be Louis or potato beetles, but are not limited thereto.
본 발명에서 용어 "해충 방제"란 해충에 의한 해를 감소시키기 위한 일련의 행위로서, 해충방제법은 구체적으로 물리적(기계적) 방제법, 경종적 방제법, 화학적 방제법, 생물학적 방제법, 법적 방제법, 포살, 등화유살, 태양열법, 온탕침법, 증기열법, 화열법, 적외선법, 냉각법, 고추파법, 초음파법, 감입법, 침수법 및 친환경 방제법 등을 포함할 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.The term " pest control " in the present invention is a series of actions for reducing harm caused by a pest. The pest control method specifically includes physical (mechanical) control, poison control, chemical control, biological control, legal control, But are not limited to, solar heating, hot water impregnation, steam heating, pyrogen heating, infrared cooling, cooling, chopping, ultrasound, embedding, immersion and eco-control.
"방제"는 해충에 의한 해를 감소시키기 위한 일련의 행위로서, 해충을 죽여 없애는 것을 반드시 수반하는 "살충"과 구별될 수 있다. 따라서, 본 발명의 해충 방제용 조성물을 이용하면 생태계를 교란시키는 효과가 적거나 없을 수 있다. 또한, 상기 "방제"는 "기피"를 포함할 수 있으므로 본 발명의 해충 방제용 조성물은 해충 기피용 조성물로도 사용될 수 있다. "Control" is a series of actions to reduce the harm caused by a pest, which can be distinguished from an "insect" that necessarily involves killing the pest. Therefore, using the composition for pest control of the present invention may have little or no effect of disturbing the ecosystem. In addition, since the above-mentioned " control " may include " avoidance ", the composition for controlling insects of the present invention may also be used as a composition for avoiding insects.
본 발명에서는 해충 방제를 위해 행인 추출물 또는 이의 분획물이 조성물 총 중량 중 0.5 내지 5 중량%(w/w), 구체적으로 0.5 내지 4 중량%, 0.5 내지 3 중량%, 0.5 내지 2 중량%, 0.5 내지 1 중량%, 1 내지 5 중량%, 2 내지 5 중량%, 3 내지 5 중량% 또는 4 내지 5 중량% 로 포함될 수 있으나 이제 제한되지 않는다. In the present invention, for the control of insects, the extract or fraction thereof is present in an amount of 0.5 to 5% by weight, specifically 0.5 to 4% by weight, 0.5 to 3% by weight, 0.5 to 2% by weight, 0.5 to 5% 1 to 5 wt.%, 2 to 5 wt.%, 3 to 5 wt.% Or 4 to 5 wt.%.
행인 추출물 또는 이의 분획물이 조성물 총 중량의 0.5 중량%(w/w) 미만으로 포함될 경우 해충의 소형신경펩타이드 수용체를 충분히 억제하지 못하여 해충 방제효과가 저하되며, 5 중량%(w/w)를 초과하여 포함될 경우 균질 용액제조 및 방제제의 제조 단가가 올라가는 문제가 있다.(W / w) of the total weight of the composition does not sufficiently inhibit the small neuropeptide receptors of the insect pest, thereby reducing the pest control effect and reducing the pest control effect by more than 5% by weight (w / w) There is a problem in that the production cost of the homogeneous solution preparation and the controlling agent is increased.
상기 해충 방제용 조성물은 행인 추출물 이외의 다른 추출물을 더 포함할 수 있다. 일 예로 만삼 추출물을 더 포함할 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.The composition for controlling pests may further comprise an extract other than the extract from the passerium. Examples include, but are not limited to, ginseng extract.
본 발명의 해충 방제용 조성물은 곤충 특이적인 신경펩타이드의 수용체의 활성을 억제할 수 있고, 상기 신경펩타이드는 소형신경펩타이드(short neuropeptide F: sNPF)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The composition for insect control of the present invention can inhibit the activity of an insect-specific neuropeptide receptor, and the neuropeptide may be but is not limited to a short neuropeptide F (sNPF).
본 발명에서 용어 "소형신경펩타이드(short neuropeptide F: sNPF)"는 곤충의 펩타이드 호르몬으로서, 소형신경펩타이드의 수용체는 다양한 하위신호전달 체계를 활성화 시켜, 곤충의 섭식, 생식 및 개체의 성장을 조절한다고 알려져 있으며, 여러 감각기에 고루 분포하고 있다. 상기 해충 방제용 조성물은 소형신경펩타이드에 대해 활성을 갖는 해충에 특이적으로 방제 효과를 나타낼 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The term " short neuropeptide F (sNPF) " in the present invention is a peptide hormone of insects. The receptors of small neuropeptides activate various sub-signaling pathways, regulating insect feeding, reproduction and individual growth It is known and distributed evenly in several senses. The composition for controlling pests may exhibit a controlling effect specifically for insects having activity against small neuropeptides, but the present invention is not limited thereto.
본 발명의 일 실시예에서는 행인 추출물이 곤충에 특이적인 소형신경펩타이드의 수용체의 활성을 억제하여, 그 결과 초파리의 섭식이 감소하고 행인 추출물이 포함된 먹이에 대한 초파리의 기피도가 증가하는 것을 확인하였다.In one embodiment of the present invention, it was confirmed that the extracts of the present invention suppressed the activity of receptors of insect-specific small neuropeptides, resulting in a reduction in the feeding of the fruit flies and an increase in the avoidance of the fruit flies Respectively.
상기와 같은 결과는 행인 추출물이 해충 방제제로 사용될 수 있음을 확인한 것이다.The above results confirm that the extract of Phellinus linteus can be used as a pest control agent.
본 발명의 목적을 달성하기 위한 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 해충 방제용 조성물을 포함하는 해충 방제제를 제공한다. 해충 및 해충 방제는 상기에서 설명한 바와 같다.In another aspect of the present invention, the present invention provides an insect control agent comprising the composition for controlling insects. Pest and pest control are as described above.
본 발명의 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 해충 방제용 조성물을 해충에 처리하는 단계를 포함하는 해충 방제 방법을 제공한다. 해충 및 해충 방제는 상기에서 설명한 바와 같다.In another aspect of the present invention, the present invention provides a pest control method comprising the step of treating the insect pest control composition. Pest and pest control are as described above.
상기 방법은 해충에 직접 또는 간접적으로 본 발명의 해충 방제용 조성물을 처리하는 방법일 수 있으나, 일 예로 인간, 동물 등의 주변 또는 해충이 서식할 것으로 예측되는 장소에 상기 해충 방제용 조성물을 위치시키는 것일 수 있다.The method may be a method of directly or indirectly treating the insect pest controlling composition of the present invention. However, the insect pest controlling composition may be placed, for example, in the vicinity of humans, animals, Lt; / RTI >
본 발명의 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 해충 방제용 조성물을 포함하는 의약외품 조성물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, there is provided a quasi-drug composition comprising the above composition for controlling insects.
상기 의약외품은 약사법 제2조 제7호 다목에 기재된 감염병 예방을 위하여 살균·살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제로서, 사람 또는 동물의 보건을 위해 사용되는 파리, 모기 등의 기피제, 구제제, 방지제, 방제제 또는 유인살충제를 의미할 수 있다.The quasi-drug is a preparation used for sterilization, insecticide and similar uses for the prevention of the infectious diseases described in the Article 2 (7) of the Pharmaceutical Affairs Act. It is used as an insect repellent for the human or animal health such as flies, mosquitoes, May mean an antiseptic or an attractant insecticide.
또한 상기 의약외품은 피부외용제 및 개인위생용품을 포함할 수 있다. 바람직하게는 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 또는 연고제일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.The quasi-drug may also include external preparations for skin and personal hygiene products. But is not limited to, a disinfectant cleaner, a shower foam, a guarine, a wet tissue, a detergent soap, a hand wash, or an ointment.
본 발명에 따른 상기 해충 방제용 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용 할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.When the composition for controlling insect pests according to the present invention is used as a quasi-drug additive, the composition may be added as it is, or may be used together with other quasi-drugs or quasi-drugs, and may be suitably used according to a conventional method. The amount of the active ingredient to be mixed can be appropriately determined depending on the purpose of use.
본 발명의 의약외품 조성물은 일 예로, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조된 것일 수 있다. 예를 들어, 로션 등과 같은 유액, 크림, 연고, 스프레이, 오일젤, 젤, 오일, 에어로졸, 연막제와 같은 제형을 가질 수 있으나, 본 발명의 해충 방제 유도 효과를 나타내는 것이라면 제한되지 않고 사용할 수 있다. The quasi-drug composition of the present invention may be, for example, one prepared in the form of a general emulsified formulation and a solubilized formulation. For example, they may have formulations such as emulsions such as lotions, creams, ointments, sprays, oil gels, gels, oils, aerosols, and softeners, but they can be used without limitation as long as they exhibit the pest control effect of the present invention .
또한 상기 의약외품 조성물은 각각의 제형에 일반적으로 의약외품 조성물에 배합되는 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제 또는 향료 등을 필요에 따라 적절히 배합하여 사용할 수 있다.In addition, the quasi-drug composition may be formulated into each formulation as appropriate, if necessary, in an oil, water, surfactant, humectant, lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, a thickener, a chelating agent, a pigment, Can be used.
본 발명의 행인 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 해충 방제용 조성물은 곤충 특이적인 소형신경펩타이드의 수용체의 활성 억제를 통해 인간 유해성 및 환경 유해성이 최소화된 해충 방제 효과를 보임으로서, 상기 해충 방제용 조성물을 포함하는 해충 방제제 및 이를 이용한 해충 방제 방법은 친환경 해충 방제 용도로 활용될 수 있다.The composition for insect control comprising the extract of the present invention as an active ingredient or the fraction thereof as an active ingredient exhibits an insect pest control effect with minimized human harmfulness and environmental harmfulness through inhibition of receptor activity of insect-specific small neuropeptides, A pest control agent containing a composition for a pest control agent and a pest control method using the same can be used for environmental pest control.
도 1은 소형신경펩타이드 수용체 발현 벡터(pAc5.1-sNPFR) 및 CRE를 포함하는 루시퍼레이즈(luciferase) 발현벡터(pGL3-CRE)가 주입된 세포주를 이용한 소형신경펩타이드 및 이의 수용체의 활성 측정 방법을 나타내는 도면이다.
도 2는 행인 추출물의 소형신경펩타이드 수용체 활성억제 효과를 나타내는 도면이다.
도 3은 행인 추출물의 섭식 억제능을 나타내는 도면이다.
도 4는 행인 추출물에 의한 곤충 회피효과를 나타내는 도면이다.
도 5는 행인 추출물의 곤충 치사효능을 나타내는 도면이다.
도 6은 행인 추출물의 인간 신경세포에 대한 무독성 효과를 나타내는 도면이다.1 shows a method for measuring the activity of a small neuropeptide and its receptor using a cell line injected with a small neuropeptide receptor expression vector (pAc5.1-sNPFR) and a luciferase expression vector (pGL3-CRE) Fig.
Fig. 2 is a graph showing the inhibitory effect on the small neuropeptide receptor activity of the extract of Panax ginseng.
Fig. 3 is a graph showing the ingestion-inhibiting ability of the goat extract. Fig.
Fig. 4 is a view showing an insect avoidance effect caused by a passerine extract. Fig.
Fig. 5 is a diagram showing the insecticidal efficacy of the goat extract. Fig.
FIG. 6 is a graph showing the non-toxic effect of the extract from the passerine on human neurons. FIG.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples and Experimental Examples. However, these examples and experimental examples are intended to illustrate the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples and experimental examples.
실시예 1: 행인추출물의 제조 Example 1: Preparation of Candida extract
증류수를 이용하여 행인 분쇄물을 침지시키고, 100 ℃에서 150분 동안 추출한 뒤 무형광 솜을 이용하여 추출물을 여과 후 동결 건조하였다. 이 건조물을 DMSO에 20mg/ml로 용해시킨 후, 1 중량%(w/w)로 세포 배양액 또는 곤충배지에 첨가하여 하기의 실시예에서 사용하였다. The pulverized product was immersed in distilled water and extracted at 100 ° C for 150 minutes. The extract was filtered using an incontinent cotton pad and lyophilized. This construct was dissolved in DMSO at 20 mg / ml and then added to the cell culture medium or insect medium at 1 wt% (w / w) and used in the following examples.
실시예 2: 행인 추출물의 소형신경펩타이드 수용체 활성 억제능 측정Example 2: Determination of inhibitory activity of small-scale neuropeptide receptor activity of goat extract
실시예 2-1: 소형신경펩타이드의 수용체를 과발현하는 곤충 세포주 제작Example 2-1: Production of Insect Cell Lines Overexpressing Small Neuropeptide Receptors
섭식행동을 조절하는 소형신경펩타이드 및 이의 수용체의 활성을 분석하기 위해 소형신경펩타이드의 표적유전자의 프로모터 분석을 기반으로 한 Luminescent Assay 기법을 활용하여 소형신경펩타이드 수용체 특이적인 활성을 억제하는 행인 추출물의 효능을 평가하였다. In order to analyze the activity of small neuropeptides and their receptors that regulate eating behavior, the efficacy of the goat extract inhibiting small neuropeptide receptor-specific activities using a luminescent assay technique based on the target gene promoter analysis of small neuropeptides .
먼저, 초파리의 소형신경펩타이드 수용체(sNPFR)가 클로닝된 곤충발현 벡터(pAc5.1-sNPFR) 및, CREB response element (CRE)를 포함하고 있는 luciferase 발현벡터(pGL3-CRE)를 초파리 세포주인 S2 세포에 주입하여 소형신경펩타이드 수용체의 활성을 측정할 수 있는 세포주를 제작하였다. First, a luciferase expression vector (pGL3-CRE) containing an insect expression vector (pAc5.1-sNPFR) and a CREB response element (CRE) cloned in the fruitfly's small neuropeptide receptor (sNPFR) To produce a cell line capable of measuring the activity of a small neuropeptide receptor.
상기의 pAc5.1-sNPFR 및 pGL3-CRE 벡터가 주입된 세포에 소형신경펩타이드를 처리하면 과발현된 수용체(sNPFR)에 의해 PKA-CREB 신호전달체계가 활성화되고 CREB 전사인자가 pGL3-CRE에 결합하면서 루시퍼레이즈(luciferase)가 발현된다. 상기 세포에 루시페린(Luciferin)을 처리하면 루시퍼레이즈에 의해 루시페린이 발광하게 되어, 발광 정도를 루미노미터(luminometer)를 이용하여 측정하는 방식을 통해 소형신경펩타이드 및 이의 수용체의 활성을 측정하였다(도 1).Treatment of small neuropeptides with the pAc5.1-sNPFR and pGL3-CRE vectors induced PKA-CREB signaling by the over-expressed receptor (sNPFR) and CREB transcription factor binding to pGL3-CRE Luciferase is expressed. When luciferin was treated with luciferin in the cells, luciferin was emitted by luciferase, and the activity of the small neuropeptide and its receptor was measured by measuring the degree of luminescence using a luminometer One).
실시예 2-2: 소형신경펩타이드 수용체의 활성 측정Example 2-2: Measurement of activity of small neuropeptide receptor
상기에서 제조된 행인 추출물 및 상기 세포주를 이용하여 행인 추출물의 소형신경펩타이드 수용체에 대한 활성 억제능을 확인하였다.The inhibitory activity against the small neuropeptide receptors of the extracts prepared from the above-mentioned extracts and the extracts of the extracts using the cell lines was confirmed.
구체적으로, 소형신경펩타이드만 처리한 pAc5.1-sNPFR 및 pGL3-CRE 벡터가 주입된 세포주(대조군) 및 소형신경펩타이드와 행인 추출물을 함께 처리한 세포주(실험군)의 발광정도를 비교하였다.Specifically, the degree of luminescence of pAc5.1-sNPFR and pGL3-CRE vector-treated cell lines (control group) treated with small neuropeptide alone and the cell line (experimental group) treated with small neuropeptide and goat extract were compared.
또한, 행인 추출물의 효과를 복합살충제(담배벌레 및 노린재에 대한 살충효과가 있다고 알려져 있고, 행인 추출물, 마전자 추출물, 파두 추출물, 조각인 추출물, 백후추 추출물 및 맥아 추출물 등을 포함)의 효과와 비교하기 위해, 소형신경펩타이드와 함께 복합살충제 또는 이의 구성성분 각각을 처리한 세포주의 발광정도도 비교하였다.In addition, the effects of passive extracts were evaluated by the combination of the effects of compound insecticides (including insecticides against tobacco and insecticides, including passerine extract, horse extract, peat extract, carrot extract, white pepper extract and malt extract) For comparison, the degree of luminescence of the cell line treated with the compound insecticide or each of its components together with the small neuropeptide was also compared.
그 결과, 소형신경펩타이드만 처리한 대조군에 비해 소형신경펩타이드와 행인 추출물을 함께 처리한 실험군은 대조군과 비교하여 루시페린의 발광도가 38% 감소하여, 행인 추출물에 소형신경펩타이드 수용체의 활성을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다 (도 2).As a result, compared with the control group treated with small neuropeptide alone, the experimental group treated with the small neuropeptide and the goat extract decreased the luminescence of luciferin by 38% as compared with the control group, and inhibited the activity of the small neuropeptide receptor in the goat extract (Fig. 2).
또한, 행인 추출물의 소형신경펩타이드 수용체 활성 억제효과는 복합살충제 및 그 구성성분들의 효과와 비교하여 더 뛰어난 것을 확인하였다(도 2).In addition, it was confirmed that the inhibitory effect on the small-scale neuropeptide receptor activity of the goat extract was superior to that of the compound insecticide and its constituents (Fig. 2).
실시예 3: 행인 추출물의 섭식 억제능 측정Example 3: Measurement of feeding inhibitory ability of goat extract
실시예 3-1: 초파리 준비 및 사육Example 3-1: Drosophila preparation and breeding
초파리는 25℃를 유지한 상태에서 사육하였고, 부화 후 3-5 일 동안 정상 배지에서 사육 후 실험에 사용하였다. Drosophila was kept at 25 ℃ and used for experiment after rearing in normal medium for 3-5 days after hatching.
실시예 3-2: 초파리의 섭식량 측정Example 3-2: Measurement of feeding amount of fruit fly
상기 초파리를 일반 곤충 사육배지 또는 실시예 1을 통해 제조된 행인 추출물이 1 중량%로 포함된 사육배지에서 각각 4일 동안 키우고 2시간 동안 굶긴 후 식용색소를 포함한 먹이를 섭취한 개체수를 측정하고 흡광분석을 통해 섭취량을 정량화하였다.The fruit flies were grown for 4 days in a general insect rearing medium or in a rearing medium containing 1% by weight of the extract prepared from Example 1, and after starving for 2 hours, the number of food consumed including food coloring was measured, The intake was quantified by analysis.
또한, 실시예 2-2의 복합살충제 또는 이의 구성성분 각각이 포함된 사육배지에서 키운 초파리를 이용하여 상기와 동일한 실험을 진행하였다. In addition, the same experiment as above was carried out using the flies cultured in the growth medium containing the compound insecticide of Example 2-2 or each of the components thereof.
그 결과, 일반 곤충 사육배지에서 자란 대조군에 비해 행인 추출물이 포함된 사육배지에서 자란 초파리의 섭식개체수가 77% 감소하였고 전체 섭식량은 71% 감소하여, 행인 추출물에 초파리의 섭식을 억제할 수 있는 효과가 있음을 확인하였다(도 3).As a result, compared to the control group grown in the general insect rearing medium, the feeding number of the fruit fly grown in the culture medium containing the extract of the passerine was reduced by 77% and the total ingestion amount was decreased by 71% (Fig. 3).
또한, 행인 추출물의 섭식 억제효과는 복합살충제 및 그 구성성분들의 효과와 비교하여 더 뛰어난 것을 확인하였다(도 3). In addition, it was confirmed that the feeding inhibitory effect of the passive extract was superior to that of the compound insecticide and its constituents (Fig. 3).
실시예 4: 행인 추출물에 대한 곤충의 회피도 측정Example 4: Determination of insect avoidance level for passerine extract
행인 추출물이 포함된 먹이에 대한 회피도를 측정하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.The following experiment was conducted to measure the avoidance degree of the food containing the goat extract.
구체적으로, 실시예 3과 같은 방법으로 초파리를 사육한 후, 사육배지에 붉은색 또는 파란색 식용색소를 첨가하고, 실험군의 파란색 식용색소 배지에만 실시예 1과 같이 제조된 행인 추출물을 첨가하여 배지의 선택경향을 초파리 복부의 색변화로 정량 후 회피도를 다음 계산식을 사용하여 측정하였다.Specifically, the fruit flies were raised in the same manner as in Example 3, red or blue food coloring matter was added to the rearing medium, and the extract of the passerelle prepared in Example 1 was added only to the blue food coloring medium of the experimental group. The selection tendency was measured by the color change of the fruit fly abdomen, and the degree of avoidance was measured using the following equation.
Avoidance = (Blue-Red) / (Blue+Red+Purple)Avoidance = (Blue-Red) / (Blue + Red + Purple)
그 결과, 대조군에 비해 행인 추출물이 첨가된 먹이의 회피도가 4배 이상 증가하였음을 확인할 수 있었다(도 4).As a result, it was confirmed that the avoidance degree of the food supplemented with the goat extract was more than four times higher than that of the control (Fig. 4).
실시예 5: 행인 추출물의 곤충 치사효능 측정Example 5: Determination of insect lethal effects of goat extract
행인 추출물의 곤충에 대한 치사효능을 확인하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.The following experiment was carried out to confirm the lethal effects of insect extracts on insects.
구체적으로, 실시예 1과 같이 제조된 행인 추출물 첨가한 사육배지에 실시예 3과 같은 방법으로 사육한 초파리 성충 100마리를 넣어 1일 단위로 죽은 개체수를 확인하여 행인 추출물의 치사 효능을 측정하였다.Specifically, 100 dead fruit flies raised in the same manner as in Example 3 were added to the growth medium supplemented with the extract prepared as in Example 1, and the mortality of the dead extract was determined by confirming the dead number per day.
그 결과, 행인 추출물이 첨가된 배지에서 사육한 초파리의 경우, 사육 5일 후 전체 초파리 중 18%의 초파리가 죽은 것을 확인하였는 바, 이를 통해 행인 추출물이 곤충에 대해 치사효능이 있음을 확인하였다(도 5).As a result, it was confirmed that, in the case of Drosophila that was raised in the medium containing the Drosophila extract, 18% of the Drosophila in the whole Drosophila was dead after 5 days of rearing, 5).
실시예 6: 행인 추출물의 포유류에 대한 독성여부 측정Example 6: Determination of toxicity of mammalian extracts
행인 추출물의 포유류에 대한 세포독성 여부를 확인하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.The following experiment was carried out to confirm cytotoxicity of goat extract to mammals.
구체적으로, 인간의 신경세포주인 SK-N-SH 세포주에 실시예 1과 같이 제조된 행인 추출물을 1일 동안 처리하고, WST-1 분석법을 이용하여 세포 생존률을 측정하여, 행인 추출물을 처리하지 않은 대조군과 비교하였다.Specifically, the cell line extract of SK-N-SH, which is a human nerve cell line, was treated for 1 day and the cell survival rate was measured by WST-1 assay, And compared with the control group.
그 결과, 행인 추출물을 인간의 신경세포주에 처리한 실험군의 생존률과 행인 추출물을 처리하지 않은 대조군의 생존률에 있어서 유의미한 차이를 보이지 않았는 바, 행인 추출물은 포유류에 대한 독성이 없어, 친환경 해충 방제제로 유용함을 확인하였다(도 6).As a result, there was no significant difference in the survival rate of the experimental group treated with the human guinea pig extract and the survival rate of the control group treated with the human guinea pig extract. Therefore, the human guinea pig extract had no toxicity to mammals and was useful as an environmentally friendly pest control agent (Fig. 6).
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.From the above description, it will be understood by those skilled in the art that the present invention may be embodied in other specific forms without departing from the spirit or essential characteristics thereof. In this regard, it should be understood that the embodiments described above are illustrative in all aspects and not restrictive. The scope of the present invention should be construed as being included in the scope of the present invention without departing from the scope of the present invention as defined by the appended claims.
Claims (11)
A composition for controlling insects, comprising an extract of Armeniacae Semen or a fraction thereof as an active ingredient.
The composition according to claim 1, wherein the composition inhibits the receptor activity of an insect-specific neuropeptide.
The insect controlling composition according to claim 1, wherein the extract is extracted with a solvent selected from the group consisting of water, an alcohol having 1 to 6 carbon atoms, and a mixed solvent thereof.
4. The composition for controlling insects according to claim 3, wherein the alcohol is ethanol or methanol.
2. The pest controlling composition according to claim 1, wherein the extract or the fraction thereof is contained in an amount of 0.5 to 5 wt% (w / w) based on the total weight of the composition.
The insect controlling composition according to claim 1, wherein the pest is an insect harmful to an animal or a plant.
7. The pest control composition according to claim 6, wherein the pest is any one selected from the group consisting of human disease-mediated insect pests, homestead insect pests, horticultural insect pests and wood insect pests.
The method of claim 7, wherein the pest is selected from the group consisting of Egyptian forest mosquito, white mosquito mosquito, mosquito mite, mite, thrips, brownflies, fruit flies, house flies, fruit flies, grasshoppers, red fire ants and potato beetles By weight of the composition.
9. A pest control agent comprising the composition of any one of claims 1 to 8.
9. A method for controlling insects, comprising the step of treating the composition of any one of claims 1 to 8 to pests.
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E902 | Notification of reason for refusal | ||
E90F | Notification of reason for final refusal | ||
E601 | Decision to refuse application |