KR20190043230A - A method for screening drug for treating cervical cancer, and a pharmaceutical composition for treating cervical cancer - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법, 및 자궁경부암 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 자궁경부암에 특이적으로 나타나는 HP1γ의 세포질로의 이동 기전을 이용하여 자궁경부암 치료를 위한 약물을 스크리닝하는 방법과 이를 이용하여 스크리닝된 약물을 포함하는 자궁경부암 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a drug screening method for treating cervical cancer and a pharmaceutical composition for treating cervical cancer. More particularly, the present invention relates to a method for treating cervical cancer using HP1? The present invention relates to a method for screening a drug and a pharmaceutical composition for treating cervical cancer comprising the drug screened using the same.
자궁경부암은 인유두종 바이러스(HPV) 중에서도 고위험군 HPV의 감염에 의해 발생한다. 자궁경부암의 발생 원인은 다른 고형암들에 비해 비교적 명확히 밝혀져 있다. 약 12개의 고위험군 HPV 아형 (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59) 중 하나 또는 그 이상의 고위험군 HPV 감염은 자궁경부암의 필수 조건이라고 알려져 있다.Cervical cancer is caused by the infection of high risk HPV among HPV (HPV). The causes of cervical cancer are relatively clear compared to other solid tumors. It is known that HPV infection of one or more of the 12 high risk HPV subtypes (
한편, 기존 연구에서는 세포 내에서 Ube2l3 gene expression의 조절에 따라 Ube2l3 mRNA 및 단백질 레벨의 증가에 의해 p53 ubiquitination 및 p53 degradation이 증가되고, Ube2l3 발현과 p53의 발현 관계를 제시(Biochemical Pharmacology Volume 80, Issue 6, 15 September 2010, Pages 932-940)하고 있는데, 이와 같이 고위험군 HPV 감염이 된 숙주세포에서는 UBE2L3 효소에 의해 암억제 단백질인 p53의 유비퀴틴화가 진행되어 프로테아좀에 의한 p53의 파괴가 일어나 암의 발생이 촉진된다.In the present study, Ube2l3 expression and p53 degradation were increased by Ube2l3 mRNA and protein levels, and Ube2l3 expression and p53 expression were correlated with the expression of Ube2l3 gene (Biochemical Pharmacology Volume 80,
한편, 자궁경부암을 예방하는 HPV 백신은 기존에 개발되어 있다. Merck사가 판매하는 Gardasil과 GlaxoSmithKline사가 판매하는 Cervarix의 경우 HPV 16형과 18형의 초기 감염을 막는다. 이러한 HPV 백신은 6개월에 걸쳐 3번의 주사를 맞으며 성관계 중 HPV에 노출된 경험이 없는 여성들에게 우선적으로 추천되고 있다.Meanwhile, HPV vaccines to prevent cervical cancer have been developed. Gardasil, sold by Merck, and Cervarix, sold by GlaxoSmithKline, block early infections of
그러나, HPV 감염을 치료하는 약물에 대하여는 연구가 거의 진행되지 아니하고 있는 실정이었다. 따라서, 현재까지 자궁경부암 치료에는 수술을 통한 자궁적출, 방사선요법, 항암화학요법이 이용되고 있었다. 그러나, 현재 항암화학요법에 이용되는 약물인 cisplatin, paclitaxel 등은 자궁경부암 세포뿐 아니라 환자의 정상 세포에까지 영향을 미치는 부작용을 일으키며, 내성이 발생하는 문제점이 있었다.However, studies on the drugs that treat HPV infection have been rarely conducted. So far, hysterectomy through surgery, radiotherapy, and chemotherapy have been used for the treatment of cervical cancer. However, cisplatin and paclitaxel, which are currently used in chemotherapy, cause adverse effects that affect not only cervical cancer cells but also normal cells of patients, resulting in resistance.
이에 따라, 보다 선택성이 높고 부작용이 적은 자궁경부암 치료를 위한 약물의 개발을 위한 약물 스크리닝 방법, 및 자궁경부암 치료제에 대한 연구가 필요한 실정이었다.Accordingly, there is a need for a drug screening method and a cervical cancer therapeutic agent for the development of a drug for treatment of cervical cancer which has higher selectivity and less side effects.
본 발명은 자궁경부암에 특이적으로 나타나는 HP1γ의 세포질로의 이동 기전을 이용하여 자궁경부암 치료를 위한 약물을 스크리닝하는 방법과 이를 이용하여 스크리닝된 약물을 포함하는 자궁경부암 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.The present invention provides a method for screening a drug for cervical cancer treatment using the migration mechanism of HP1? Specific to cervical cancer, and a pharmaceutical composition for treating cervical cancer comprising the screened drug using the same will be.
본 발명의 일 측면에 따른 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법은,A drug screening method for treating cervical cancer according to one aspect of the present invention includes:
a) 자궁경부암 세포에 약물을 처리하는 단계;a) treating the cervical cancer cell with a drug;
b) 상기 약물 처리된 자궁경부암 세포의 세포질과 핵을 분리하여 세포질과 핵의 HP1γ단백질량을 측정하는 단계;b) measuring cytoplasmic and nuclear HP1? protein levels by separating the cytoplasm and nucleus of the drug-treated cervical cancer cells;
c) 상기 약물 처리된 자궁경부암 세포에서 UBE2L3의 발현의 증감을 확인하는 단계; 및c) confirming the increase or decrease in expression of UBE2L3 in the drug-treated cervical cancer cells; And
d) 상기 세포질의 HP1γ단백질량이 감소 및 상기 핵의 HP1γ단백질량이 증가하고, UBE2L3의 발현이 감소되는 약물을 스크리닝하는 단계를 포함한다.d) screening a drug for which the amount of HP1? protein in the cytoplasm is decreased, the amount of HP1? protein in the nucleus is increased, and the expression of UBE2L3 is reduced.
그리고, 상기 c) 단계 후 p53 단백질과 세포사멸 유도 단백질의 발현량을 확인하는 단계, 및 p53 표적유전자의 mRNA 발현량을 확인하는 단계를 더 포함할 수 있다.The method may further include confirming the expression level of the p53 protein and the apoptosis inducing protein after the step c), and confirming the mRNA expression level of the p53 target gene.
또한, 상기 자궁경부암 세포는 SiHa 또는 HeLa 자궁경부암 세포주일 수 있다.The cervical cancer cells may be SiHa or HeLa cervical cancer cells.
아울러, 상기 HP1γ단백질량 측정은 웨스턴 블럿 방법을 이용할 수 있고, 상기 UBE2L3의 발현은 웨스턴 블럿 방법으로 측정할 수 있다.In addition, the amount of HP1 [gamma] protein can be measured by the Western blot method, and the expression of UBE2L3 can be measured by the Western blot method.
한편, 상기 세포사멸 유도 단백질은 Bax, Noxa, Puma, 및 active-caspase 3로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.Meanwhile, the apoptosis inducing protein may be one or more selected from the group consisting of Bax, Noxa, Puma, and active-
본 발명의 또 다른 측면에 따른 자궁경부암 치료용 약학적 조성물은, 셀리넥서(selinexor, C17H11F6N7O)를 유효성분으로 포함할 수 있다.Cervical cancer therapeutic pharmaceutical composition, according to another aspect of the invention, the Salle nekseo (selinexor, C 17 H 11 F 6 N 7 O) may comprise as the active ingredient.
그리고, 상기 셀리넥서(selinexor, C17H11F6N7O)는 exportin-1의 억제제일 수 있다.And, the selinexor (C 17 H 11 F 6 N 7 O) may be an inhibitor of exportin-1.
본 발명에 따른 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법은, 새롭게 규명한 HPV에 의한 자궁경부암의 특이적 발생 기전을 이용하여 보다 선택성이 높고 부작용이 적은 자궁경부암 치료를 위한 약물의 개발에 널리 활용될 수 있는 스크리닝 방법을 제공할 수 있다.The drug screening method for treatment of cervical cancer according to the present invention can be widely used for the development of drugs for treatment of cervical cancer having a higher selectivity and less side effect by using the newly developed mechanism of specific development of cervical cancer by HPV A screening method can be provided.
아울러, 본 발명에 따른 자궁경부암 치료용 약학적 조성물은 자궁경부암의 발생 기전 중 상위 발생 기전에 속하는 자궁경부암 세포의 핵에서 세포질로의 HP1γ이동을 억제함으로써, 자궁경부암을 치료할 수 있는 약학적 조성물을 제공할 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition for treating cervical cancer according to the present invention is a pharmaceutical composition capable of treating cervical cancer by inhibiting migration of HP1? From the nucleus of the cervical cancer cell belonging to the upper stage of development of cervical cancer to cytoplasm .
도 1a는, 본 발명의 실시예 1에 따른 실험에서 HP1γ를 발현시킨 자궁경부암 세포에서 UBE2L3의 발현이 억제되고, 암억제 단백질인 p53의 발현과 세포사멸 유도 단백질들의 발현이 증가함을 나타낸 결과이다.
도 1b는, 본 발명의 실시예 1에 따른 실험에서 HP1γ를 발현시킨 자궁경부암 세포에서 p53의 표적유전자들의 발현이 증가함을 나타낸 결과이다.
도 1c는, 본 발명의 실시예 1에 따른 실험에서 HP1γ를 발현시킨 자궁경부암 세포의 증식 정도가 대조군에 비해 크게 감소함을 나타낸 결과이다.
도 2a는, 본 발명의 실시예 2에 따른 실험에서 대조군에 비해 인유두종 바이러스의 E6 단백질을 발현시키는 자궁경부암 세포에서 HP1γ가 세포질에 더 많이 존재하는 것을 확인한 결과이다.
도 2b는, 본 발명의 실시예 2에 따른 실험에서 대조군에 비해 인유두종 바이러스의 E6 단백질을 발현시키는 자궁경부암 세포에서 세포질 수송단백질인 exportin-1과 HP1γ의 결합이 증가하는 것을 확인한 결과이다.
도 3a는, Exportin-1과 결합하는 서열(150, 152번째 류신)을 알라닌으로 치환하여 exportin-1과 결합하지 못하는 돌연변이 HP1γ 벡터(HP1γ AA)의 모습을 나타낸 것이다.
도 3b는, 본 발명의 실시예 3에 따른 실험에서 자궁경부암 세포에서 발현시킨 HP1γ AA 단백질은 exportin-1과의 결합이 손상된 것을 보여주는 그림이다.
도 3c는, 본 발명의 실시예 3에 따른 실험에서 자궁경부암 세포에서 발현시킨 HP1γ AA 단백질은 핵 내부만 존재함을 보여주는 결과이다.
도 3d는, 본 발명의 실시예 3에 따른 실험에서 HP1γ AA를 발현하는 자궁경부암 세포에서 UBE2L3의 발현이 억제되고 암억제 단백질인 p53의 발현과 세포사멸 유도 단백질들의 발현이 증가함을 보여주는 결과이다.
도 3e는, 본 발명의 실시예 3에 따른 실험에서 HP1γ AA를 발현하는 자궁경부암 세포에서 p53의 표적유전자들의 발현이 증가함을 보여주는 결과이다.
도 4a는, 본 발명의 실시예 4에 따른 실험에서 Exportin-1 억제약물인 KPT-330을 처리한 자궁경부암 세포에서 HP1γ의 세포질 내 양이 감소하고 핵 내 양이 증가하였음을 보여주는 결과이다.
도 4b는, 본 발명의 실시예 4에 따른 실험에서 Exportin-1 억제약물인 KPT-330을 처리한 자궁경부암 세포에서 UBE2L3의 발현이 억제되고 암억제 단백질인 p53의 발현과 세포사멸 유도 단백질들의 발현이 증가하였음을 보여주는 결과이다.
도 4c는, 본 발명의 실시예 4에 따른 실험에서 Exportin-1 억제약물인 KPT-330을 처리한 자궁경부암 세포에서 p53의 표적유전자들의 발현이 증가하였음을 보여주는 결과이다.FIG. 1A is a graph showing the results of inhibition of the expression of UBE2L3 in cervical cancer cells expressing HP1γ and the expression of p53 and apoptosis-inducing proteins in the experiment according to Example 1 of the present invention .
FIG. 1B shows the expression of p53 target genes in HP1γ-expressing cervical cancer cells in the experiment according to Example 1 of the present invention.
FIG. 1C shows that the degree of proliferation of HP1γ-expressing cervical cancer cells was greatly reduced in the experiment according to Example 1 of the present invention compared with the control group.
FIG. 2A shows the results of confirming the presence of more HP1γ in the cytoplasm in cervical cancer cells expressing HPV E6 protein in the experiment according to Example 2 of the present invention.
FIG. 2B shows that the binding of exportin-1 and HP1γ, which are cytoplasmic transport proteins, in the cervical cancer cells expressing HPV E6 protein is increased in the experiment according to Example 2 of the present invention.
FIG. 3A shows the appearance of a mutant HP1 gamma vector (HP1? AA) that does not bind exportin-1 by replacing the sequence (150, 152th leucine) binding to Exportin-1 with alanine.
FIG. 3B is a graph showing that HP1γ AA protein expressed in cervical cancer cells in the experiment according to Example 3 of the present invention is impaired in binding to exportin-1.
FIG. 3C shows that HP1γ AA protein expressed in cervical cancer cells is present only in the nucleus in the experiment according to Example 3 of the present invention.
FIG. 3D shows that the expression of UBE2L3 is suppressed in the cervical cancer cells expressing HP1? AA and the expression of p53, which is a cancer suppressor protein, and the expression of apoptosis inducing proteins are increased in the experiment according to Example 3 of the present invention .
FIG. 3E shows the results of an experiment according to Example 3 of the present invention showing an increase in the expression of p53 target genes in HP1γ AA-expressing cervical cancer cells.
FIG. 4A is a graph showing that the amount of HP1γ in the cervical cancer cells treated with Exportin-1 inhibitor KPT-330 was decreased and the amount of nuclear was increased in Example 4 of the present invention.
FIG. 4B is a graph showing the expression of UBE2L3 in the cervical cancer cells treated with Exportin-1 inhibitor, KPT-330, and the expression of p53, a cancer-suppressing protein, and the expression of apoptosis-inducing proteins in Example 4 of the present invention This is a result of showing the increase.
FIG. 4C shows that the expression of p53 target genes was increased in the cervical cancer cells treated with Exportin-1 inhibitor KPT-330 in the experiment according to Example 4 of the present invention.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The present invention is capable of various modifications and various embodiments, and specific embodiments are illustrated in the drawings and described in detail in the detailed description. It is to be understood, however, that the invention is not to be limited to the specific embodiments, but includes all modifications, equivalents, and alternatives falling within the spirit and scope of the invention. DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.
본 발명은, a) 자궁경부암 세포에 약물을 처리하는 단계; b) 상기 약물 처리된 자궁경부암 세포의 세포질과 핵을 분리하여 세포질과 핵의 HP1γ단백질량을 측정하는 단계; c) 상기 약물 처리된 자궁경부암 세포에서 UBE2L3의 발현의 증감을 확인하는 단계; 및 d) 상기 세포질의 HP1γ단백질량이 감소 및 상기 핵의 HP1γ단백질량이 증가하고, UBE2L3의 발현이 감소되는 약물을 스크리닝하는 단계를 포함하는 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법을 제공한다.The present invention provides a method for treating cervical cancer, comprising: a) treating a cervical cancer cell with a drug; b) measuring cytoplasmic and nuclear HP1? protein levels by separating the cytoplasm and nucleus of the drug-treated cervical cancer cells; c) confirming the increase or decrease in expression of UBE2L3 in the drug-treated cervical cancer cells; And d) screening a drug for which the amount of HP1? Protein in the cytoplasm is decreased, the amount of HP1? Protein in the nucleus is increased, and the expression of UBE2L3 is reduced.
또한, 본 발명의 다른 측면에 따르면 셀리넥서(selinexor, C17H11F6N7O)를 유효성분으로 포함하는 자궁경부암 치료용 약학적 조성물이 제공된다.It is also, according to another aspect of the invention provides a Salle nekseo (selinexor, C 17 H 11 F 6 N 7 O) a pharmaceutical composition for treating cervical cancer comprising as an active ingredient.
이하 본 발명의 구체적인 구현예에 따른 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법 및 자궁경부암 치료용 약학적 조성물에 관하여 보다 상세하게 설명하기로 한다.Hereinafter, a drug screening method for treating cervical cancer and a pharmaceutical composition for treating cervical cancer according to a specific embodiment of the present invention will be described in detail.
종래 자궁경부암 치료에 적용되는 항암화학요법에 이용되는 약물인 cisplatin, paclitaxel 등은 자궁경부암 세포뿐 아니라 환자의 정상 세포에까지 영향을 미치는 부작용을 일으키며, 내성이 발생하는 문제점이 있었다.Cisplatin and paclitaxel, which are drugs used in chemotherapy for cervical cancer treatment, have adverse effects on cancer cells as well as normal cells of patients, resulting in resistance.
이에 본 발명자들은 보다 선택성이 높고 부작용이 적은 자궁경부암 치료를 위한 약물의 개발을 위한 약물 스크리닝 방법을 연구한 결과, 자궁경부암 세포에서 핵으로부터 세포질로의 HP1γ이동을 억제하는 경우 UBE2L3의 발현이 감소하여 종국적으로 자궁경부암을 치료할 수 있다는 점을 실험을 통하여 확인하고 발명을 완성하였다.Therefore, the present inventors have studied a drug screening method for the development of a drug for the treatment of cervical cancer which has a higher selectivity and less side effect, and as a result, the expression of UBE2L3 is decreased in the case of inhibiting HP1γ migration from the nucleus to the cytoplasm in cervical cancer cells It was confirmed through experiments that the cervical cancer could eventually be treated, and the invention was completed.
본 발명의 일 측면에 따른 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법은,A drug screening method for treating cervical cancer according to one aspect of the present invention includes:
a) 자궁경부암 세포에 약물을 처리하는 단계;a) treating the cervical cancer cell with a drug;
b) 상기 약물 처리된 자궁경부암 세포의 세포질과 핵을 분리하여 세포질과 핵의 HP1γ단백질량을 측정하는 단계;b) measuring cytoplasmic and nuclear HP1? protein levels by separating the cytoplasm and nucleus of the drug-treated cervical cancer cells;
c) 상기 약물 처리된 자궁경부암 세포에서 UBE2L3의 발현의 증감을 확인하는 단계; 및c) confirming the increase or decrease in expression of UBE2L3 in the drug-treated cervical cancer cells; And
d) 상기 세포질의 HP1γ단백질량이 감소 및 상기 핵의 HP1γ단백질량이 증가하고, UBE2L3의 발현이 감소되는 약물을 스크리닝하는 단계를 포함할 수 있다.d) screening for a drug in which the amount of HP1? protein in the cytoplasm is decreased, the amount of HP1? protein in the nucleus is increased, and the expression of UBE2L3 is decreased.
본 발명에서는, HP1은 히스톤 코드를 인식하여 염색체에 결합하는 것으로 알려져 있는데 이러한 HP1이 자궁경부암 세포에서 UBE2L3 유전자의 발현을 억제함으로써 p53의 파괴를 막고 세포 사멸을 유도하는 것을 발견하였다. 또한, 자궁경부암을 일으키는 HPV16의 E6 단백질에 의해 핵 내부에 존재하는 HP1이 세포질로 이동하여 UBE2L3 발현을 억제하지 못함을 확인하였다.In the present invention, it is known that HP1 binds to a chromosome by recognizing a histone code. It has been found that HP1 inhibits the expression of UBE2L3 gene in cervical cancer cells, thereby preventing the destruction of p53 and inducing apoptosis. In addition, it was confirmed that HP1, which is present in the nucleus, migrates to the cytoplasm and does not inhibit the expression of UBE2L3 by E6 protein of HPV16 that causes cervical cancer.
즉, 본 발명은 후성 유전 단백질인 heterochromatin protein 1(HP1)에 의한 UBE2L3의 발현 조절과 이를 통한 p53 작용 증진을 확인하고, 자궁경부암에서 특이적으로 나타나는 HP1의 세포질 이동을 관찰함으로써, HP1 세포질 이동 억제를 통한 자궁경부암 세포의 사멸을 유도하는 기전을 밝혀 이를 이용한 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법을 제공할 수 있다.That is, the present invention confirms the expression control of UBE2L3 by heterochromatin protein 1 (HP1), which is a progeny hereditary protein, and promotes p53 action through it, and observes cytoplasmic movement of HP1 specifically in cervical cancer, And thus can provide a method for screening a drug for the treatment of cervical cancer using the same.
본 발명의 일 측면에 따른 스크리닝 방법은 구체적으로 다음과 같다.The screening method according to one aspect of the present invention is as follows.
스크리닝 대상 약물이 처리되지 아니한 자궁경부암 세포에서 세포질과 핵을 분리하여 세포질과 핵의 HP1γ단백질량, 및 UBE2L3의 발현을 측정한다.The cytoplasm and nucleus are separated from cervical cancer cells that are not treated with the screening drug, and the amount of cytoplasmic and nuclear HP1γ protein and the expression of UBE2L3 are measured.
다음으로, 상기 자궁경부암 세포와 같은 종류의 자궁경부암 세포에 스크리닝 대상 약물을 처리하고, 상기 약물 처리된 자궁경부암 세포의 세포질과 핵을 분리하여 세포질과 핵의 HP1γ단백질량을 측정하며, 상기 약물 처리된 자궁경부암 세포에서 UBE2L3의 발현을 측정한다.Next, the drug to be screened is treated with cervical cancer cells of the same kind as the cervical cancer cells, and the cytoplasm and nucleus of the drug-treated cervical cancer cells are separated to measure the amount of HP1? Protein in the cytoplasm and nucleus, The expression of UBE2L3 is measured in cervical cancer cells.
상기에서 약물 처리되지 아니한 자궁경부암 세포의 세포질과 핵의 HP1γ단백질량과, 약물 처리된 자궁경부암 세포의 세포질과 핵의 HP1γ단백질량을 비교하여 세포질의 HP1γ단백질량이 감소 및 상기 핵의 HP1γ단백질량이 증가되는지를 확인한다.The amount of HP1 [gamma] protein in the cytoplasm and nucleus of the cervix cancer cells not treated with the drug was compared with the amount of HP1 [gamma] protein in the cytoplasm and nucleus of the drug-treated cervical cancer cell, .
또한, 약물 처리 되지 아니한 자궁경부암 세포의 UBE2L3의 발현과, 약물 처리된 자궁경부암 세포의 UBE2L3의 발현을 비교하여 UBE2L3의 발현이 감소되는지를 확인한다.In addition, UBE2L3 expression in untreated cervical cancer cells and UBE2L3 expression in drug treated cervical cancer cells are compared to confirm that expression of UBE2L3 is reduced.
상기 과정을 거쳐, 세포질의 HP1γ단백질량이 감소 및 핵의 HP1γ단백질량이 증가하고, UBE2L3의 발현이 감소되는 약물을 최종적으로 스크리닝 할 수 있다.Through the above process, a drug whose amount of cytoplasmic HP1 γ decreases, nuclear HP1 γ increases and UBE2L3 expression decreases can be finally screened.
즉, 본 발명의 일 측면에 따른 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법은, 자궁경부암에서 특이적으로 나타나는 'HP1γ의 세포질 이동'을 억제하는 약물을 스크리닝 하는 것으로, 이러한 약물이 결국 HP1γ의 세포질로의 이동을 억제하여 UBE2L3의 발현을 감소시켜, 종국적으로 자궁경부암 세포사멸을 일으킨다는 점을 이용한 것이다.That is, the drug screening method for treating cervical cancer according to one aspect of the present invention is to screen for a drug that inhibits 'cytoplasmic migration of HP1γ' specifically present in cervical cancer, And suppression of UBE2L3 expression, thereby ultimately leading to cervical cancer cell death.
한편, 본 발명은 자궁경부암에서 HPV16의 E6 단백질에 의한 HP1γ의 특이적인 위치 변화를 확인하였는데, 일반적으로 자궁경부암 세포에서 HPV의 E6 단백질 발현에 의해 핵 내에 존재하는 HP1γ의 양이 감소하고, 세포질에 존재하는 HP1γ의 양이 증가한다. 이는 E6 단백질 발현에 의해 세포질 수송 단백질인 exportin-1과 HP1γ의 결합이 증가하기 때문으로 이에 대한 실험결과는 본 발명의 실시예에서 상세히 기술하고 있다.Meanwhile, the present invention specifically detects the change of HP1 gamma by
한편, 본 발명에 따른 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법은, c)상기 약물 처리된 자궁경부암 세포에서 UBE2L3의 발현의 증감을 확인하는 단계 이후에, p53 단백질과 세포사멸 유도 단백질의 발현량을 확인하는 단계, 및 p53 표적유전자의 mRNA 발현량을 확인하는 단계를 더 포함할 수 있다.Meanwhile, the method for screening for cervical cancer according to the present invention comprises: (c) determining the expression level of p53 protein and apoptosis-inducing protein after confirming the increase or decrease of expression of UBE2L3 in the cervical cancer cells treated with the drug; , And confirming the mRNA expression level of the p53 target gene.
이 경우, 상기 d)단계의 약물 스크리닝은, p53 단백질과 세포사멸 유도 단백질의 발현량이 증가하고, p53 표적유전자의 mRNA 발현량이 증가하는 약물을 스크리닝하는 단계를 더 포함할 수 있다.In this case, the drug screening in the step d) may further include screening a drug for which the expression level of the p53 protein and the apoptosis inducing protein is increased and the mRNA expression level of the p53 target gene is increased.
이는 UBE2L3의 발현이 감소되는 경우, p53 단백질과 세포사멸 유도 단백질의 발현량이 증가하고, p53 표적유전자의 mRNA 발현량이 증가하기 때문이다. 결국, UBE2L3의 발현 감소에 의해 암 억제 단백질인 p53 단백질과 세포사멸 유도 단백질의 증가로 인해 자궁경부암 세포가 사멸되게 된다.This is because, when the expression of UBE2L3 is decreased, the expression amount of p53 protein and apoptosis inducing protein is increased and mRNA expression amount of p53 target gene is increased. As a result, the decrease of UBE2L3 expression leads to the death of cervical cancer cells due to the increase of p53 protein and apoptosis inducing protein.
한편, 본 발명에 있어서 상기 자궁경부암 세포는 SiHa 또는 HeLa 자궁경부암 세포주일 수 있다.In the present invention, the cervical cancer cells may be SiHa or HeLa cervical cancer cells.
또한, 상기에서 HP1γ단백질량 측정 및 UBE2L3의 발현 측정은 웨스턴 블럿 방법을 이용하는 것이 바람직할 수 있다. In addition, it may be preferable to use the Western blot method to measure the amount of HP1? Protein and the expression of UBE2L3.
아울러, 상기에서 언급한 세포사멸 유도 단백질은 Bax, Noxa, Puma, 및 active-caspase 3로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.In addition, the above-mentioned apoptosis inducing protein may be one or more selected from the group consisting of Bax, Noxa, Puma, and active-
상술한 자궁경부암에 특이적으로 나타나는 HP1γ의 세포질로의 이동 기전을 이용하여 자궁경부암 치료를 위한 약물을 스크리닝 하는 방법을 통하여 스크리닝된 약물은 자궁경부암 치료에 이용될 수 있다.Screening drugs using cervical cancer screening method using the migration mechanism of HP1γ specifically to cervical cancer described above can be used for the treatment of cervical cancer.
상기 스크리닝된 약물은 exportin-1의 억제제일 수 있다. 세포질 수송단백질인 exportin-1을 억제함으로써 HP1γ가 핵에서 세포질로 이동하는 것을 억제할 수 있기 때문이다.The screened drug may be an inhibitor of exportin-1. This is because inhibition of exportin-1, a cytoplasmic transport protein, can inhibit migration of HP1γ from the nucleus to the cytoplasm.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 셀리넥서(selinexor, C17H11F6N7O)를 유효성분으로 포함하는 자궁경부암 치료용 약학적 조성물이 제공될 수 있다.According to another aspect of the invention, it can be provided with a Salle nekseo (selinexor, C 17 H 11 F 6 N 7 O) a pharmaceutical composition for treating cervical cancer comprising as an active ingredient.
즉, 셀리넥서를 처리한 자궁암 세포에서는 exportin-1이 억제되고, 이로 인해 세포질의 HP1γ단백질량이 감소 및 상기 핵의 HP1γ단백질량이 증가하게 된다. 그리고, HP1γ의 이동이 억제됨으로써 UBE2L3의 발현이 감소하여 결국 p53 단백질과 세포사멸 유도 단백질의 발현량이 증가하게 되는 원리로 셀리넥서는 자궁경부암 치료 효과를 나타낼 수 있게 된다.In other words, exportin-1 is inhibited in celecox-treated uterine cancer cells, resulting in a decrease in cytoplasmic HP1γ protein content and an increase in HP1γ protein content in the nucleus. In addition, the expression of UBE2L3 is decreased by inhibiting the migration of HP1γ, and thus the expression level of p53 protein and apoptosis inducing protein is increased. Thus, Celignac can treat cervical cancer.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부도면을 참조하여 상세히 설명하기로 한다. 다만, 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings. It should be understood, however, that these examples are for illustrative purposes only and are not to be construed as limiting the scope of the present invention.
실시예Example 1: 자궁경부암 세포에 1: in cervical cancer cells HP1γHP1? 단백질 발현 후 p53의 효과 확인 Identification of the effect of p53 after protein expression
자궁경부암 세포인 HeLa 세포를 10% FBS와 1% 페니실린/스트렙토마이신 (P/S)을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였다. 상기 배양된 HeLa 세포에 Lipofectamine 2000 reagent를 사용하여 GFP-HP1γ 벡터를 도입하였다. 24시간 후 Pro-prep reagent를 이용하여 세포의 단백질을 추출하고 웨스턴 블럿 분석을 수행하였다. 웨스턴 블럿은 단백질을 SDS-PAGE를 통해 크기별로 분리한 후 각 단백질을 검출하는 1차 항체에 12시간 노출시키고 형광표지된 2차 항체에 1시간 노출시킨 후 AGFA 필름에 형광을 노출시킴으로써 각 단백질의 양을 분석하였다.HeLa cells as cervical cancer cells were cultured in DMEM medium containing 10% FBS and 1% penicillin / streptomycin (P / S). GFP-HP1? Vector was introduced into the cultured HeLa cells using Lipofectamine 2000 reagent. After 24 hours, proteins were extracted from the cells using Pro-prep reagent and Western blot analysis was performed. Western blotting was performed by SDS-PAGE to separate the proteins, followed by exposure to the primary antibody for 12 hours for each protein, 1 hour exposure to the fluorescence-labeled secondary antibody, and exposure of the fluorescence to the AGFA film. Respectively.
분석 결과, HP1γ을 발현하는 자궁경부암 세포에서 UBE2L3의 발현이 억제되었으며 p53과 세포사멸 유도 단백질 (Bax, Noxa, Puma, active-caspase 3)의 발현이 증가하였음을 알 수 있었다(도 1a).As a result, UBE2L3 expression was suppressed in HP1γ-expressing cervical cancer cells, and expression of p53 and apoptosis inducing proteins (Bax, Noxa, Puma, active-caspase 3) was increased (FIG.
또한, RT-qPCR 분석을 수행하여 p53 표적유전자의 mRNA 발현 수준을 측정하였다. 상기의 GFP-HP1γ 벡터를 도입한 HeLa 세포로부터 Easy-blue reagent를 이용하여 RNA를 수득하고, 이 RNA로부터 Reverse Transcription kit를 사용하여 역전사시켜 cDNA를 수득하였다. 이어, 상기 cDNA를 주형으로 사용한 정량적 실시간 PCR (qPCR)을 CFX96TM 및 Chromo4TM real-time PCR detector를 포함하는 KAPATM SYBR FAST qPCR을 사용하여 수행함으로써 유전자들의mRNA 수준을 측정하고 비교하였다. 그 결과, HP1γ을 발현하는 자궁경부암 세포에서 p53 표적유전자의 발현이 증가하였음을 알 수 있었다(도 1b).In addition, RT-qPCR analysis was performed to measure the mRNA expression level of the p53 target gene. RNA was obtained from HeLa cells transfected with the above GFP-HP1γ vector using Easy-blue reagent, and reverse transcribed from this RNA by reverse transcription kit to obtain cDNA. Next, mRNA levels of genes were measured and compared by performing quantitative real-time PCR (qPCR) using the cDNA as a template using KAPATM SYBR FAST qPCR containing CFX96TM and Chromo4TM real-time PCR detector. As a result, the expression of p53 target gene was increased in cervical cancer cells expressing HP1? (Fig. 1B).
또한, HeLa 세포에 GFP-HP1γ 벡터를 도입하고 16시간, 24시간, 40시간, 60시간 이후에 세포의 숫자를 셈으로써 세포 증식 속도를 측정 및 비교하였다. 그 결과, HP1γ을 발현하는 자궁경부암 세포에서 세포 증식 속도가 현저히 감소하였음을 알 수 있었다(도 1c). In addition, cell proliferation rates were measured and compared by counting the number of cells after 16 hours, 24 hours, 40 hours, and 60 hours after introduction of GFP-HP1γ vector into HeLa cells. As a result, the rate of cell proliferation was significantly reduced in cervical cancer cells expressing HP1? (FIG. 1C).
실시예Example 2: 자궁경부암에서 2: in cervical cancer HPV의HPV E6 단백질에 의한 E6 protein HP1γ의HP1γ 위치 변화 Position change
자궁경부암 세포인 SiHa 세포를 10% FBS와 1% 페니실린/스트렙토마이신 (P/S)을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였다. 상기 배양된 SiHa 세포에 Lipofectamine 2000 reagent를 사용하여 Flag-HPV16E6 벡터를 도입하였다. 24시간 후, 세포에 Buffer A (10mM HEPES (pH 7.9), 50mM NaCl, 0.5M sucrose, 0.1mM EDTA, 0.5% Triton x100)를 처리한 후 1000rpm으로 5분 원심분리하여 세포질 단백질을 분리해내고, 남은 펠렛에 Buffer B (10mM HEPES (pH 7.9), 10mM KCl, 0.1mM EDTA, 0.1mM EGTA)를 처리한 후 13000 rpm으로 20분 원심분리하여 핵 단백질을 추출했다. 상기에서 분리한 세포질과 핵 단백질로 웨스턴 블럿 분석을 수행하였다. 그 결과, HPV16의 E6 단백질 발현에 의해 핵 내에 존재하는 HP1γ의 양이 감소하고, 세포질에 존재하는 HP1γ의 양이 증가하였음을 알 수 있었다(도 2a). The cervical cancer cells, SiHa cells, were cultured in DMEM medium containing 10% FBS and 1% penicillin / streptomycin (P / S). A Flag-HPV16E6 vector was introduced into the cultured SiHa cells using a Lipofectamine 2000 reagent. After 24 hours, the cells were treated with Buffer A (10 mM HEPES (pH 7.9), 50 mM NaCl, 0.5 M sucrose, 0.1 mM EDTA, 0.5% Triton x 100) and centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes. The remaining pellet was treated with Buffer B (10 mM HEPES (pH 7.9), 10 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 0.1 mM EGTA) and centrifuged at 13000 rpm for 20 minutes to extract the nucleoprotein. Western blot analysis was performed on the separated cytoplasm and nuclear protein. As a result, it was found that the amount of HP1? Existing in the nucleus was decreased by the expression of E6 protein of HPV16 and the amount of HP1? Existing in the cytoplasm was increased (Fig. 2a).
또한, E6 단백질 발현에 의해 HP1γ가 핵 밖으로 수송되는 기전을 규명하기 위해 면역침강법을 통해 세포질 수송 단백질인 exportin-1과 HP1γ의 결합을 측정하였다. Flag-HPV16E6 벡터를 도입한 HeLa 세포에 Pro-prep을 이용하여 단백질을 추출한 후, HP1γ 1차 항체 및 A+G bead를 세포에서 추출한 단백질과 12시간 반응시켰다. 이후, 웨스턴 블럿 분석을 통해 HP1γ와 결합하는 단백질 중 exportin-1의 양을 검출하였다. 그 결과, E6 단백질 발현에 의해 exportin-1과 HP1γ의 결합이 증가하는 것을 알 수 있었다(도 2b).In addition, the binding of exportin-1 and HP1γ, the cytoplasmic transport proteins, was measured by immunoprecipitation to identify the mechanism by which HP1γ is transported out of the nucleus by E6 protein expression. Proteins were extracted from HeLa cells transfected with the Flag-HPV16E6 vector using Pro-prep, and the HP1γ primary antibody and A + G bead were reacted with the proteins extracted from the cells for 12 hours. Western blot analysis was performed to detect the amount of exportin-1 in the protein binding to HP1 ?. As a result, it was found that the expression of E6 protein increased binding of exportin-1 and HP1γ (FIG. 2B).
실시예Example 3: 3: HP1γ의HP1γ 핵 내 잔류의 자궁경부암 치료 효과 Remnant cervical cancer treatment in nuclear
exportin-1과 결합하는 아미노산 (150번째, 152번째 류신)을 알라닌으로 치환한 돌연변이 벡터 (HP1γ AA)를 제작하였다(도 3a).A mutant vector (HP1? AA) in which amino acids (150th and 152th leucine) binding to exportin-1 were replaced with alanine was prepared (FIG.
자궁경부암 세포인 SiHa 세포에 Lipofectamine 2000 reagent를 사용하여 HP1γ WT, HP1γ AA 벡터를 각각 도입하였고, 면역침강법을 통해 각 벡터와 exportin-1의 결합 정도를 측정하였다. 그 결과, 자궁경부암 세포에서 발현된 HP1γ AA 단백질은 HP1γ WT 단백질에 비해 exportin-1과 결합이 크게 감소하였음을 알 수 있었다(도 3b). HP1γ WT and HP1γ AA vectors were introduced into cervical cancer cells, SiHa cells, using Lipofectamine 2000 reagent, respectively. Immunoprecipitation method was used to measure the binding of each vector to exportin-1. As a result, HP1γ AA protein expressed in cervical cancer cells was significantly reduced in exportin-1 and binding to HP1γ WT protein (FIG. 3b).
상기와 같이 HP1γ WT, HP1γ AA 벡터를 도입한 SiHa 세포를 형광현미경으로 관찰한 결과, HP1γ WT 벡터는 세포질과 핵 모두에 발현하는 데에 반해 HP1γ AA 벡터는 핵 내부에만 잔류함을 확인할 수 있었다(도 3c).As a result of observation of SiHa cells transfected with HP1γ WT and HP1γ AA vectors by fluorescence microscopy as described above, it was confirmed that the HP1γ WT vector was expressed in both cytoplasm and nucleus, whereas HP1γ AA vector remained only in the nucleus ( 3c).
또한, 웨스턴 블럿 분석을 수행한 결과, HP1γ WT을 발현하는 SiHa 세포에 비해 HP1γ AA을 발현하는 SiHa 세포에서 UBE2L3의 발현이 억제되었으며, p53 단백질과 세포사멸 유도 단백질 (Bax, Noxa, Puma, active-caspase 3)의 발현이 증가하였음을 알 수 있었다(도 3d).In addition, Western blot analysis showed that the expression of UBE2L3 was suppressed in SiHa cells expressing HP1γ AA compared with that of HP1γ WT-expressing cells, and the expression of p53 protein and apoptosis inducing protein (Bax, Noxa, Puma, active- caspase 3) expression was increased (Fig. 3d).
또한, RT-qPCR 분석을 수행한 결과, HP1γ WT을 발현하는 SiHa 세포에 비해 HP1γ AA을 발현하는 SiHa 세포에서 p53 표적유전자의 mRNA 발현 수준 또한 증가하였음을 알 수 있었다(도 3e). In addition, RT-qPCR analysis showed that mRNA expression level of p53 target gene was also increased in SiHa cells expressing HP1? AA compared to SiHa cells expressing HP1? WT (Fig. 3e).
실시예Example 4: 4: selinexorselinexor ( ( KPT330KPT330 ) 약물의 p53 효과의 증대 여부) Increase of p53 effect of drug
SiHa 세포에 KPT330을 100 nM의 농도로 24시간 처리한 후, 세포질과 핵 단백질을 분리하여 웨스턴 블럿 분석을 수행하였다. 그 결과, KPT330에 의해 세포질의 HP1γ 단백질량이 감소하고 핵 내 HP1γ 단백질량이 증가하였다. 이를 통해 KPT330 처리에 의해 HP1γ의 세포질 수송이 억제되었음을 확인하였다. SiHa cells were treated with KPT330 at a concentration of 100 nM for 24 hours, Western blot analysis was performed by separating cytoplasmic and nuclear proteins. As a result, KPT330 decreased cytoplasmic HP1 [gamma] protein and increased nuclear HP1 [gamma] protein. It was confirmed that HP1γ cytosolic transport was inhibited by KPT330 treatment.
또한, SiHa 세포에 KPT330을 100 nM의 농도로 24시간 처리한 후 단백질을 추출하여 웨스턴 블럿 분석을 수행한 결과, KPT330 처리에 의해 UBE2L3의 발현이 감소하였으며, p53 단백질과 세포사멸 유도 단백질 (Bax, Noxa, Puma, active-caspase 3)의 발현이 증가하였음을 알 수 있었다(도 4b).The expression of UBE2L3 was decreased by treatment with KPT330, and the expression of p53 protein and apoptosis inducing protein (Bax, Noxa, Puma, active-caspase 3) expression was increased (FIG. 4B).
SiHa 세포에 KPT330을 100nM의 농도로 24시간 처리한 후 RT-qPCR 분석을 수행한 결과, KPT330 처리에 의해 p53 표적유전자의 mRNA 발현수준이 증가하였음을 알 수 있었다(도 4d).As a result of RT-qPCR analysis after treatment of KPT330 with SiHa cells at a concentration of 100 nM for 24 hours, the mRNA expression level of the p53 target gene was increased by KPT330 treatment (Fig. 4d).
상기와 같이 본 발명에 따른 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법은, 새롭게 규명한 HPV에 의한 자궁경부암의 특이적 발생 기전을 이용하여 보다 선택성이 높고 부작용이 적은 자궁경부암 치료를 위한 약물의 개발에 널리 활용될 수 있는 스크리닝 방법을 제공할 수 있고, 자궁경부암의 발생 기전 중 상위 발생 기전에 속하는 자궁경부암 세포의 핵에서 세포질로의 HP1γ이동을 억제함으로써, 자궁경부암을 치료할 수 있는 약학적 조성물을 제공할 수 있다.As described above, the drug screening method for the treatment of cervical cancer according to the present invention is widely used for the development of drugs for treatment of cervical cancer which has high selectivity and low side effect by using the newly discovered HPV-specific developmental mechanism of cervical cancer The present invention also provides a pharmaceutical composition capable of treating cervical cancer by inhibiting migration of HP1? From the nucleus of cervical cancer cells belonging to the upper developmental mechanism of cervical cancer to the cytoplasm .
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to specific embodiments thereof, those skilled in the art will appreciate that such specific embodiments are merely preferred embodiments and that the scope of the present invention is not limited thereby. something to do. It is therefore intended that the scope of the invention be defined by the claims appended hereto and their equivalents.
Claims (9)
b) 상기 약물 처리된 자궁경부암 세포의 세포질과 핵을 분리하여 세포질과 핵의 HP1γ단백질량을 측정하는 단계;
c) 상기 약물 처리된 자궁경부암 세포에서 UBE2L3의 발현의 증감을 확인하는 단계; 및
d) 상기 세포질의 HP1γ단백질량이 감소 및 상기 핵의 HP1γ단백질량이 증가하고, UBE2L3의 발현이 감소되는 약물을 스크리닝하는 단계;
를 포함하는 자궁경부암 치료를 위한 약물 스크리닝 방법.
a) treating the cervical cancer cell with a drug;
b) measuring cytoplasmic and nuclear HP1? protein levels by separating the cytoplasm and nucleus of the drug-treated cervical cancer cells;
c) confirming the increase or decrease in expression of UBE2L3 in the drug-treated cervical cancer cells; And
d) screening for a drug in which the amount of HP1? protein in the cytoplasm is decreased, the amount of HP1? protein in the nucleus is increased, and the expression of UBE2L3 is reduced;
A method for screening a drug for the treatment of cervical cancer.
The method according to claim 1, further comprising the steps of: confirming the expression level of p53 protein and apoptosis inducing protein after step c), and confirming mRNA expression level of p53 target gene; .
The method of claim 2, wherein the drug screening in step d) further comprises screening for a drug whose expression level of p53 protein and apoptosis inducing protein is increased and mRNA expression level of p53 target gene is increased, Lt; / RTI >
The method of claim 1, wherein the cervical cancer cell is a SiHa or HeLa cervical cancer cell line.
The method according to claim 1, wherein the amount of HP1 [gamma] protein is measured by a Western blot method for screening for cervical cancer.
The method according to claim 1, wherein the expression of UBE2L3 is measured by a Western blot method.
The method of claim 2, wherein the apoptosis-inducing protein is at least one selected from the group consisting of Bax, Noxa, Puma, and active-caspase 3.
Salle nekseo (selinexor, C 17 H 11 F 6 N 7 O) a cervical cancer treatment a pharmaceutical composition comprising as an active ingredient.
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| Klymenko et al. | RNA-Seq analysis of differentiated keratinocytes reveals a massive response to late events during human papillomavirus 16 infection, including loss of epithelial barrier function | |
| He et al. | Human papillomavirus E6/E7 and long noncoding RNA TMPOP2 mutually upregulated gene expression in cervical cancer cells | |
| Göttgens et al. | Inhibition of CDK4/CDK6 enhances radiosensitivity of HPV negative head and neck squamous cell carcinomas | |
| Mondal et al. | Artemisinin represses telomerase subunits and induces apoptosis in hpv‐39 infected human cervical cancer cells | |
| Donaldson et al. | An interaction between human papillomavirus 16 E2 and TopBP1 is required for optimum viral DNA replication and episomal genome establishment | |
| Yan et al. | Abrogation of the Brd4-positive transcription elongation factor B complex by papillomavirus E2 protein contributes to viral oncogene repression | |
| Diab et al. | FOXM1 drives HPV+ HNSCC sensitivity to WEE1 inhibition | |
| Lehoux et al. | E1-mediated recruitment of a UAF1-USP deubiquitinase complex facilitates human papillomavirus DNA replication | |
| Li et al. | TRIM22 knockdown suppresses chronic myeloid leukemia via inhibiting PI3K/Akt/mTOR signaling pathway | |
| Bai et al. | MiR-217 promotes cutaneous squamous cell carcinoma progression by targeting PTRF | |
| Dalgıç et al. | Investigating the role of JAK/STAT pathway on dasatinib-induced apoptosis for CML cell model K562 | |
| Accardi et al. | Epstein-Barr virus transforming protein LMP-1 alters B cells gene expression by promoting accumulation of the oncoprotein ΔNp73α | |
| Liu et al. | MiR-592 inhibited cell proliferation of human colorectal cancer cells by suppressing of CCND3 expression | |
| Paudel et al. | Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus latency-associated nuclear antigen and angiogenin interact with common host proteins, including annexin A2, which is essential for survival of latently infected cells | |
| Wu et al. | Long noncoding RNA hypoxia-inducible factor 1 alpha-antisense RNA 1 promotes tumor necrosis factor-α-induced apoptosis through caspase 3 in Kupffer cells | |
| Li et al. | RETRACTED ARTICLE: CCNB1 Expedites the Progression of Cervical Squamous Cell Carcinoma via the Regulation by FOXM1 | |
| Zhao et al. | MicroRNA-222 controls human pancreatic cancer cell line capan-2 proliferation by P57 targeting | |
| Li et al. | Clusterin induced by N, N′-Dinitrosopiperazine is involved in nasopharyngeal carcinoma metastasis | |
| Yu et al. | RETRACTED ARTICLE: Circ_0005576 Promotes Malignant Progression Through miR-874/CDK8 Axis in Colorectal Cancer | |
| Fontan et al. | Human papillomavirus 16 (HPV16) E2 repression of TWIST1 transcription is a potential mediator of HPV16 cancer outcomes | |
| Wang et al. | Epigenetic silencing of ASPP1 confers 5‐FU resistance in clear cell renal cell carcinoma by preventing p53 activation | |
| Wang et al. | RETRACTED ARTICLE: MicroRNA-365 targets multiple oncogenes to inhibit proliferation, invasion, and self-renewal of aggressive endometrial cancer cells |
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