KR20180096079A - 20-he를 유효성분으로 하는 항결핵 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항결핵 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 종래 곤충의 탈피 호르몬으로 알려진 20-HE(20-hydroxyecdysone)가 노랑초파리에서 결핵균 감염동안 생존에 필수적인 역할을 하며, 선천적인 면역 및 항균 작용을 나타내는 dCAMP의 발현을 촉진한다는 사실에 기초한 것으로서, 20-HE를 유효성분으로 하는 항결핵 조성물에 대한 것이다.

Description

20-HE를 유효성분으로 하는 항결핵 조성물{Anti-Tuberculosis Composition Comprising 20-HE}

본 발명은 항결핵 조성물에 관한 것으로, 종래 곤충의 탈피 호르몬으로 알려진 20-HE(20-hydroxyecdysone)가 노랑초파리에서 결핵균 감염동안 생존에 필수적인 역할을 하며, 선천적인 면역 및 항균 작용을 나타내는 dCAMP의 발현을 촉진한다는 사실에 기초한 것으로서, 20-HE를 유효성분으로 하는 항결핵 조성물에 대한 것이다.

결핵균(Mycobacterium tuberculosis)은 결핵(TB, tuberculosis)의 원인균이다. 전세계 인구의 3 분의 1이 잠재적으로 결핵균에 감염되어 있고, 결핵으로 인해 매년 약 2백만명이 사망하는 것으로 알려져 있다. 여러 약물에 내성이 있는 약물 내성 균주의 출현이 결핵을 제어하기 어려운 원인이 되고 있다.

노랑초파리(Drosophila melanogaster)는 파리목 초파리과에 속하는 곤충으로, 인간 질병 유발 유전자의 약 75 %에 이르는 동족체를 가지고 있으며, 단백질의 50 %는 포유류 동족체를 가지고 있다(Chien 등, Reiter 등). 따라서 발생 및 병의 원인 규명에 매우 유용한 모델로 사용된다. 비교적 단순한 조직과 기관은 복잡한 유전자와 세포 신호전달 체계에 대한 실험 재료로 사용하는데 여러 가지 장점을 가지기 때문에 초파리를 이용한 질병의 치료에 대한 많은 연구가 이루어지고 있다.

포유류에서 cathelicidin은 항결핵 활성을 나타내며 인간 대식세포에서 항결핵 자가포식과 리소좀 성숙(lysosomal maturation)의 유도에 결정적인 역할을 한다. 그러나 현재까지 노랑초파리에서 인간 cathelicidin과 동일 또는 유사한 기능을 하는 단백질에 대해서는 알려진 바 없다.

한편, 초파리의 후기 유충 발생 기간동안 활성화되며, 세포사멸(apoptosis)과 자가포식(autophagy)에 필수적인 탈피 호르몬 20-HE가 drosomycin, attacin-A, metchnikowin 및 cecropin A1 등을 암호화하는, 펩티도글리칸에 의해 유도되는 AMP 유전자들의 발현을 향상시키는 것으로 알려져 있다(Zhang 등). 또한, 20-HE는 선천면역과 유사한 작용을 하는 자가포식을 유도하는 atg 유전자들을 상향조절한다는 것도 확인되었다(Liu 등).

그러나 현재까지 20-HE의 항균성이나 항결핵 특성에 관해서는 알려진 바가 없다.

Chien S, Reiter LT, Bier E, Gribskov M. Homophila: human disease gene cognates in Drosophila. Nucleic Acids Res 2002;30:149-51. Reiter LT, Potocki L, Chien S, Gribskov M, Bier E. A systematic analysis of human disease-associated gene sequences in Drosophila melanogaster. Genome Res 2001;11:1114-25. Zhang Z, Palli SR. Identification of a cis-regulatory element required for 20-hydroxyecdysone enhancement of antimicrobial peptide gene expression in Drosophila melanogaster. Insect Mol Biol 2009;18:595-605. Liu H, Jia Q, Tettamanti G, Li S. Balancing crosstalk between 20-hydroxyecdysone-induced autophagy and caspase activity in the fat body during Drosophila larval-prepupal transition. Insect Biochem Mol Biol 2013;43:1068-78.

본 발명은 약물 내성 결핵균을 제어하기 위한 새로운 유형의 항결핵 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

전술한 목적을 달성하기 위한 본 발명은 20-HE를 유효성분으로 하는 항균제 조성물 및 항결핵 조성물을 제공한다.

이상과 같이 본 발명에 의하면 종래 알려져 있지 않았던 20-HE의 항균 특성 및 항결핵 특성을 처음으로 발견하였다. 따라서 20-HE를 활용하면 새로운 종류의 결핵 예방 및 치료제가 가능하게 된다.

도 1은 야생형 초파리에 결핵균 감염후 시간경과에 따른 cg6568 발현 변화를 보여주는 도표.
도 2 및 도 3은 dCAMP가 초파리의 선천면역에 관여하여 결핵균에 대한 생존율 및 항균활성을 증가시키는 것을 보여주는 PCR 결과 사진 및 도표.
도 4는 20-HE가 S2 세포의 cg6568 발현을 유도하는 것을 보여주는 PCR 결과 사진 및 도표.
도 5는 20-HE가 초파리의 생존율을 개선시키는 것을 보여주는 도표.

이하 첨부된 도면과 실시예를 들어 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나 이러한 도면과 실시예는 본 발명의 기술적 사상의 내용과 범위를 쉽게 설명하기 위한 예시일 뿐, 이에 의해 본 발명의 기술적 범위가 한정되거나 변경되는 것은 아니다. 이러한 예시에 기초하여 본 발명의 기술적 사상의 범위 안에서 다양한 변형과 변경이 가능함은 당업자에게는 당연할 것이다.

전술하였듯이, 본 발명은 20-HE를 유효성분으로 하는 항균제 조성물 및 항결핵 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 상기 조성물은 상기 단백질 또는 유전자를 단독으로 함유하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명은 제형 자체에 관한 것이 아니므로 담체 등에 대한 상세한 설명을 생략하지만, 당업자는 상황에 맞추어 적절하게 담체의 종류, 함량 등을 선택할 수 있을 것이다.

본 발명자들에 의하면, 20-HE가 초파리에서 그 기능은 밝혀지지 않은 유전자 cg6568(서열번호 2)의 발현을 촉진하며, cg6568 발현물인 dCAMP(cathelicidin-like antimicrobial protein of D. melanogaster)가 초파리의 선천면역에 관여하여 결핵균에 대한 생존율 및 항균활성이 증가함을 밝혔다.

본 발명은 이러한 사실에 기초한 것이다.

단백질 dCAMP(서열번호 1)의 기능은, 본 발명자들에 의해 처음 발견된 것으로서, 하기 실시예에서 증명되었듯이, 노랑초파리에서 결핵균 감염동안 생존에 필수적인 역할을 하며, 선천적인 면역 및 항균 작용을 나타내면서 결핵균 생존을 억제하는 기능을 한다. dCAMP는 518개의 아미노산으로 이루진 56.7 kDa의 단백질로서 pI 9.67이다.

서열번호 2의 유전자는, 종래 존재는 알려져 있었지만 그 구체적 기능과 작용에 대해서는 밝혀지지 않았던 유전자 cg6568이다. 하기 실시예에서 확인되는 바와 같이, cg6568은 모든 발달 단계에서 다양한 수준으로 발현되었으며, 발현 수준은 결핵균 감염 시간경과에 따라 변화하였다. 또한 cg6568 RNAi를 발현하는 초파리로 확인한 바, 결핵균 감염동안 초파리의 생존과 항균 효과의 발휘를 위해 cg6568의 발현이 필수적이었다.

서열번호 1

maltitkfrtsrgmvvavqptvvlspkipdsqdnekkpfsksepgnatvrvnaggivlnkipaiirpsmkraattkmtgataagattttsstgavgypvlktpkyvvqtspsgssghqlqmlarkdtqslgvainslppntiikattrpsqtapltpnsaavtpstpsssrnstqstptvvpdarvssavrqavfikrelpqpqrsmrnmtlglveqapllhlgvapqhlsllkrhicrnanvthldccltlrklkqnehfallaehfelsesdvedtfkrtliklarylrplirwpdarhhnerfkhtplnyranllhvrsliecvetdvpidlglgsgsykfilcintngiisyvssafpgscddlqlfeasrfrdvipnyltlcaepgkavrrarrsgfgdphdsadedeaaaepkrsltkfeaqrlsgqlasqqslsvvdgaltskrapaiqlptfnaqepacraqmrdmidylrefrmldnsaikqksllgyldemivvaaglcnlkrqeles

서열번호 2

atggcgttga caattacaaa atttcgaact tcgaggggga tggtggtggc cgtacagccc

acagtggtgt tgagccccaa aataccagat tcccaggata acgaaaagaa accgttttca

aaatcggagc cgggaaatgc aactgtgaga gttaatgcag gtggtatagt tcttaacaaa

ataccagcga ttataaggcc aagtatgaag agagcagcaa caacaaagat gactggagcc

acggctgcgg gagcaacaac aacaacatcg tcaacaggtg cagtgggata tcccgttctc

aaaacaccca agtatgtggt tcagactagt ccgagtggat cctctggcca tcagctccag

atgctggcga ggaaggacac tcaaagtctg ggagtggcca tcaattcact gccgcccaac

acaatcatca aagcaaccac aagaccttca caaacagcgc ctttgacacc aaactcagcg

gctgtcacgc caagcacgcc gagcagtagc aggaattcca ctcagtccac accaactgtg

gtacctgatg cgagagtttc ctccgccgtg cgccaagctg tgttcatcaa gagggagcta

ccccagccgc agaggagcat gcgaaatatg acacttggtt tggtggaaca ggcgccactg

cttcatttgg gtgttgcgcc acagcacctg tcactgctga aacgccatat ctgccgcaat

gctaatgtca cccacttgga ctgttgcttg actctaagga aactcaaaca aaacgagcac

ttcgccctgt tggccgagca ctttgagctg agcgaatcag atgtcgagga cacatttaag

cgcaccctta tcaagctggc ccgttacctc cgtccactga ttcgttggcc agatgcacgg

catcacaacg agcgcttcaa acatacccca ctgaactacc gagccaacct gttgcatgta

cgctcgttga tcgagtgtgt ggaaacggac gtgccgatag atctgggatt gggcagcggc

agctataagt tcatattgtg catcaataca aatggcatca tcagctatgt gtctagcgcc

tttcctggta gttgcgatga tcttcaattg tttgaggcca gcagatttcg ggatgtcatt

cccaattacc taacactatg cgcggaacca ggcaaagcag tacgccgtgc tcgcaggtcg

ggcttcggag atcctcacga ctcagcggat gaggatgagg cggcggcgga accaaagcga

tcacttacca aattcgaggc acagcgtttg agtggccagc tagcaagcca gcaatcccta

tccgttgtag acggagcact gacttccaag cgggctccag cgattcaact acccacattc

aacgcacaag aacccgcctg tagagcccaa atgagagata tgatagatta tttaagggaa

ttccgcatgc tggataattc ggctattaag caaaagtcat tgctgggtta tcttgatgaa

atgatcgtgg tggctgcggg tctatgcaac cttaagcgcc aagagttgga atcttaa

[실시예]

1. 재료 및 방법

(1) 결핵균 배양

Middlebrook OADC (BD Bioscience, NJ, USA)와 0.2 %(v/v) Tween-80 (Sigma, MO, USA)이 보충된 Middlebrook 7H9 broth (Difco, NJ, USA) 배지에 M. marinum strain Aronson (ATCC # 927, 어류에서 분리됨)을 접종하고 29℃ 암실에서 교반없이 OD600가 0.6이 되도록 배양하였다. aliquot를 10 % (v/v) 글리세롤에서 -80℃로 동결시켰다. 결핵균 단일 세포 현탁액은 종래 방법에 따라 준비하였다.(Song CH, Lee JS, Lee SH, Lim K, Kim HJ, Park JK, et al. Role of mitogen-activated protein kinase pathways in the production of tumor necrosis factor-alpha, interleukin-10, and monocyte chemotactic protein-1 by Mycobacterium tuberculosis H37Rv-infected human monocytes. J Clin Immunol 2003;23:194-201)

(2) 초파리 유지 및 결핵균 감염

초파리는 표준 이스트 옥수수 한천 배지의 12h/12h의 명암주기, 65 % 습도, 25 ℃에서 배양/유지되었다. 모든 실험은 3-5 일된 수컷 성체를 대상으로 하였다.

유전자형 w¹¹¹⁸, act-gal4/CyO (Act5C promoter의 조절하에 GAL4를 편재적 발현), cg-gal4 [hemocytes (또한 지방과 림프선)에서 GAL4를 발현함], 및 da-gal4 GAL4의 편재적 발현)는 Bloomington Stock Center에서 입수했다. UAS-102 cg6568 RNAi (v13348) 초파리는 오스트리아 비엔나 초파리 RNAi 센터 (VDRC)에서 얻었다.

결핵균 감염은 이전에 기술된 대로 수행되었다.(Dionne MS, Ghori N, Schneider DS. Drosophila melanogaster is a genetically tractable model host for Mycobacterium marinum. Infect Immun 2003;71:3540-50 : Kim JJ, Lee HM, Shin DM, Kim W, Yuk JM, Jin HS, et al. Host cell autophagy activated by antibiotics is required for their effective antimycobacterial drug action. Cell Host Microbe 2012;11:457-68.)

(3) 슈나이더 세포 (S2 cell) 배양 및 관련 시약

Invitrogen (MA, USA)에서 구입한 S2 세포를 10 % (v/v) 열 불활화 FBS (Gibco)와 1 % (w/v) 페니실린-스트렙토마이신-암포테리신 B (Lonza, Basel, Switzerland)를 포함하는 Schneider 's 배지 (Gibco, MA, USA)에 접종하고 25℃, 5 % (v/v) CO2 하에서 배양하였다. 인산염-완충 식염수 (PBS)와 20-HE는 Sigma (MO, USA)에서 구입하였다.

(4) 세균부하의 측정

콜로니 형성수(Colony-forming units; CFU)는 이전에 기술된 바와 같이 추정되었다.(Oh CT, Moon C, Choi TH, Kim BS, Jang J. Mycobacterium marinum infection in Drosophila melanogaster for antimycobacterial activity assessment. J Antimicrob Chemother 2013;68:601-9.)

개별 감염된 초파리를 CO2로 마취시키고 얼음에 두었다. 표면 박테리아를 제거하기 위해 초파리를 70 % (v/v) 에탄올로 살균한 후, 100 μL의 멸균된 물에서 유봉으로 균질화시켰다. 균질화된 초파리를 연속 희석하고 10 % (w/v) OADC (BD Bioscience)가 첨가된 7H11 아가 플레이트 (Difco)에 도말하여 세균수를 세었다. 플레이트를 10-14일동안 배양하고 콜로니를 계수하였다.

(5) RNA 추출과 준정량 RT-PCR

종래기술에 따라 TRIzol (Invitrogen)을 사용하여 초파리 또는 S2 세포에서 총 RNA를 추출하였다.(Yang CS, Lee JS, Jung SB, Oh JH, Song CH, Kim HJ, et al. Differential regulation of interleukin-12 and tumour necrosis factor-alpha by phosphatidylinositol 3-kinase and ERK 1/2 pathways during Mycobacterium tuberculosis infection. Clin Exp Immunol 2006;143:150-60.) 준정량(semi-quantitative) PCR은 Veriti Thermal Cycler (Applied Biosystems, MA, USA)를 사용하여 58℃에서 30 초간 어닐링 단계를 30 사이클 이상 수행되었다.

cg6568 및 액틴에 대한 표적 특이성 프라이머 쌍은 각각 (서열번호 3, 서열번호 4) 및 (서열번호 5, 서열번호 6)을 사용하였다.

서열번호 3 : 5'-AGGATAACGAAAGAAACCGT-3'

서열번호 4 : 5'-AGAACGGGATATCCCACTGCA-3'

서열번호 5 : 5'-GATCACCATTGGCAACGA-3'

서열번호 6 : 5'-TCTTGATCTTGATGGTCG-3'

RT-PCR 생성물을 1.5 w% 아가로오스 겔에서 분리하고, 에티듐브로마이드 (Sigma)를 사용하여 가시화하였다. 모든 젤을 사진(Bio-Rad, CA, USA)으로 찍었다.

(6) 통계분석

독립적인 실험의 모든 데이터는 양측 스튜던트 t-검정을 사용하여 비교되었다. p 값 <0.05는 유의성을 반영하는 것으로 간주되었다. 초파리 생존 분석을 위해 GraphPad Prism 소프트웨어 (GraphPad Software, Inc., CA, USA)를 이용하였다. 95 % 신뢰구간은 양방향에서 표준 오차에 1.96을 곱하여 계산하였다. 통계적 유의성을 평가하기 위해 log-rank (Mantel-Cox) 테스트를 진행하였다.

2. 결과 및 고찰

(1) 결핵 감염 1일 후부터 내인성 cg6568의 발현이 증가된다.

종래 게놈 분석 결과 cg6568 발현은 그람 양성균이나 음성균에 의한 감염에 영향을 받지 않는 것으로 알려져 있다.(De Gregorio E, Spellman PT, Rubin GM, Lemaitre B. Genome-wide analysis of the Drosophila immune response by using oligonucleotide microarrays. Proc Natl Acad Sci USA. 2001;98:12590-5.) 그러나 본 발명자들은 이러한 종래 논문의 견해에 의문을 가지고, cg6568의 발현이 결핵균에 의해 촉진 또는 억제되는지에 대해 분석하였다.

결핵 감염이 cg6568 발현을 유도하는지를 탐색하기 위해, 준정량적 PCR (도 1의 (a)) 및 정량적 농도 측정 분석 (도 1의 (b))을 통해 cg6568 전사 수준을 측정 하였다.

초파리 w¹¹¹⁸에 치사량으로 알려진 결핵균 500 CFU씩 주사하고 25℃에서 1, 3, 5, 7일간 유지하였다. 대조군[UI]으로는 PBS만 주사하였다. 감염 직후에는 cg6568 전사가 급감했다가 1 일 후에 전사가 상승되어 5일동안 유지되었다(도 1). 감염 7일 후, cg6568 유전자의 전사는 감염 직후의 수준으로 감소하였다.

따라서, cg6568은 결핵균 감염에 대한 면역방어에 관여함을 알 수 있다.

(2) 결핵 감염시 dCAMP는 항생제 역할을 한다.

dCAMP가 결핵균 감염동안 성체 초파리의 생존율을 향상시키는지 여부를 조사하였다.

dCAMP 기능을 평가하기 위해 UDR-cg6568 RNAi (VDRC에서 얻음)를 발현하는 형질전환 초파리를 사용했다. GAL4/UAS 바이너리 조절 시스템을 사용하여 cg6568 RNAi를 발현시켰다; UAS-cg6568 RNAi 계통을 몇 개의 GAL4 계통과 교배시켰다. 준정량적 PCR은 act-gal4/+ 대조군에 비해 act-gal4/UAS-cg6568 RNAi 초파리에서 내인성 cg6568의 발현이 유의하게 감소함을 보였다(도 2의 (a)). 이것은 UAS-cg6568 RNAi 구조가 cg6568을 효과적으로 녹다운시킨다는 것을 의미한다.

결핵균 감염동안 초파리 생존을 측정했다. 3~5 일 된 act-gal4/UAS-cg6568 RNAi 및 act-gal4/+ 발현 수컷 초파리에 500 CFU의 결핵균을 주사하였다. PBS를 음성 대조군으로 사용하였다. 실험구마다 개체는 120마리로 하였고, 24시간 간격으로 사망 개체수를 세었다. 그 결과, UAS-cg6568 RNAi를 발현하는 형질전환 초파리의 생존율은 대조군 초파리보다 현저히 낮았다(도 2의 (b)).

또한, 다른 드라이버 (cg-gal4 및 da-gal4)를 사용하여 도입 유전자가 유도된 UAS-cg6568 발현 RNAi 초파리 균주의 생존율과 이 균주에서의 결핵균 수를 측정하였다.

초파리에 결핵균 500 CFU를 주사하고 감염 후 3 일까지 생존 및 박테리아 부담 측면에서 모니터링하였다. 실험구 개체수는 30마리로 하였고, 24시간 간격으로 사망 개체수를 세었다. 도 3의 (a) 및 (b)에 나타낸 바와 같이, 결과는 act-gal4/UAS-cg6568 RNAi를 사용했을 때 얻은 결과와 유사하였다. cg-gal4/UAS-cg6568 RNAi 또는 da-gal4/UAS-cg6568 RNAi를 발현하는 감염된 초파리는 감염 7 일 이내에 높은 사망률을 나타냈다(도 3의 (a) 및 (b)).

결핵균은 대조군 cg-gal4- 및 da-gal4- 감염 초파리에서는 중간정도의 치사율을 보여, 감염 후 7 일까지 약 20 %가 사망하였다. cg6568 RNAi (cg-gal4/UAS-cg6568 RNAi, da-gal4/UAS-cg6568 RNAi)를 발현하는 초파리는 대조군 (cg-gal4/+ 및 da-gal4/+ 초파리)보다 훨씬 높은 세균 부하를 보였다(도 3의 (c) 및 (d)). 도 3의 (c) 및 (d)에서 각 실험구의 개체수는 10마리로 하였다.

이상을 종합하면, dCAMP가 초파리의 선천면역에 관여하여 결핵균에 대한 생존율 및 항균활성이 증가함을 알 수 있다.

(3) 20-HE는 S2 세포에서 cg6568 발현을 유도한다.

서로 다른 시간대 (1, 2, 3, 6 시간)에 1 μM 20-HE로 초파리 S2 세포(1 × 106/mL)를 처리하였다. 이에 의해 cg6568 mRNA 발현의 강한 시간-의존성 상향조절이 촉발되었다(도 4에서 (a) 및 (b)). 도면에서 Un은 미처리구이다.

1 μM 20-HE 처리 1시간 후부터 3시간 후까지 cg6568 mRNA 발현이 급격하게 증가하다가 처리 6시간 후에 약간 감소하였다. 10 μM 20-HE는 w¹¹¹⁸ 성체 초파리에서 적어도 2일동안 cg6568 발현을 증가시켰다(데이터는 나타내지 않음). 이러한 결과는, 초파리 cg6568 발현은 20-HE에 의존적임을 의미한다.

(4) 20-HE는 초파리의 결핵균에 대한 생존율을 증가시킨다.

20-HE가 결핵균에 감염된 초파리의 생존을 개선시키는지를 분석하였다(도 4). 초파리 w1118를 결핵균 500 CFU로 감염시킨 다음 20-HE를 10 nM (▲), 100 nM (▼), 1 μM (◆), and 0 μM (□) 함유한 옥수수 가루 한천 배지에서 배양하였다. 대조군(○)은 미감염/미처리 초파리이다. 개체는 각각 97~100마리로 하였다. 도면에서 에러바는 95% 신뢰구간을 나타낸다(이하 동일).

도 5에 도시된 바와 같이, 옥수수 가루 한천 배지에 20-HE (10 nM 내지 1 μM)를 공급하였을 때, 결핵균 감염 후 초파리 생존율은 용량 의존적으로 개선되었다.

따라서, 20-HE는 dCAMP 합성을 유도하고, 증가된 dCAMP가 결핵균 감염에 대한 반응에 기여한다는 사실을 확인할 수 있다.

결론적으로 본 발명자들은, 기능이 불명했던 유전자 cg6568의 발현물인 단백질 dCAMP는 결핵균에 의해 유도된 초파리의 숙주 병원체 방어기전에서 결정적인 항균 역할을 함을 밝혔다. 나아가 20-HE가 cg6568의 발현을 촉진함으로써 간접적으로 결핵균 감염에 대한 방어기작을 발휘하는 용도, 즉 항결핵 용도로 활용될 수 있음을 확인한 것이다.

<110> The Industry & Academic Cooperation in Chungnam National University (IAC) <120> Anti-Tuberculosis Composition Comprising 20-HE <130> P0217-119 <160> 6 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 518 <212> PRT <213> Drosophila melanogaster <400> 1 Met Ala Leu Thr Ile Thr Lys Phe Arg Thr Ser Arg Gly Met Val Val 1 5 10 15 Ala Val Gln Pro Thr Val Val Leu Ser Pro Lys Ile Pro Asp Ser Gln 20 25 30 Asp Asn Glu Lys Lys Pro Phe Ser Lys Ser Glu Pro Gly Asn Ala Thr 35 40 45 Val Arg Val Asn Ala Gly Gly Ile Val Leu Asn Lys Ile Pro Ala Ile 50 55 60 Ile Arg Pro Ser Met Lys Arg Ala Ala Thr Thr Lys Met Thr Gly Ala 65 70 75 80 Thr Ala Ala Gly Ala Thr Thr Thr Thr Ser Ser Thr Gly Ala Val Gly 85 90 95 Tyr Pro Val Leu Lys Thr Pro Lys Tyr Val Val Gln Thr Ser Pro Ser 100 105 110 Gly Ser Ser Gly His Gln Leu Gln Met Leu Ala Arg Lys Asp Thr Gln 115 120 125 Ser Leu Gly Val Ala Ile Asn Ser Leu Pro Pro Asn Thr Ile Ile Lys 130 135 140 Ala Thr Thr Arg Pro Ser Gln Thr Ala Pro Leu Thr Pro Asn Ser Ala 145 150 155 160 Ala Val Thr Pro Ser Thr Pro Ser Ser Ser Arg Asn Ser Thr Gln Ser 165 170 175 Thr Pro Thr Val Val Pro Asp Ala Arg Val Ser Ser Ala Val Arg Gln 180 185 190 Ala Val Phe Ile Lys Arg Glu Leu Pro Gln Pro Gln Arg Ser Met Arg 195 200 205 Asn Met Thr Leu Gly Leu Val Glu Gln Ala Pro Leu Leu His Leu Gly 210 215 220 Val Ala Pro Gln His Leu Ser Leu Leu Lys Arg His Ile Cys Arg Asn 225 230 235 240 Ala Asn Val Thr His Leu Asp Cys Cys Leu Thr Leu Arg Lys Leu Lys 245 250 255 Gln Asn Glu His Phe Ala Leu Leu Ala Glu His Phe Glu Leu Ser Glu 260 265 270 Ser Asp Val Glu Asp Thr Phe Lys Arg Thr Leu Ile Lys Leu Ala Arg 275 280 285 Tyr Leu Arg Pro Leu Ile Arg Trp Pro Asp Ala Arg His His Asn Glu 290 295 300 Arg Phe Lys His Thr Pro Leu Asn Tyr Arg Ala Asn Leu Leu His Val 305 310 315 320 Arg Ser Leu Ile Glu Cys Val Glu Thr Asp Val Pro Ile Asp Leu Gly 325 330 335 Leu Gly Ser Gly Ser Tyr Lys Phe Ile Leu Cys Ile Asn Thr Asn Gly 340 345 350 Ile Ile Ser Tyr Val Ser Ser Ala Phe Pro Gly Ser Cys Asp Asp Leu 355 360 365 Gln Leu Phe Glu Ala Ser Arg Phe Arg Asp Val Ile Pro Asn Tyr Leu 370 375 380 Thr Leu Cys Ala Glu Pro Gly Lys Ala Val Arg Arg Ala Arg Arg Ser 385 390 395 400 Gly Phe Gly Asp Pro His Asp Ser Ala Asp Glu Asp Glu Ala Ala Ala 405 410 415 Glu Pro Lys Arg Ser Leu Thr Lys Phe Glu Ala Gln Arg Leu Ser Gly 420 425 430 Gln Leu Ala Ser Gln Gln Ser Leu Ser Val Val Asp Gly Ala Leu Thr 435 440 445 Ser Lys Arg Ala Pro Ala Ile Gln Leu Pro Thr Phe Asn Ala Gln Glu 450 455 460 Pro Ala Cys Arg Ala Gln Met Arg Asp Met Ile Asp Tyr Leu Arg Glu 465 470 475 480 Phe Arg Met Leu Asp Asn Ser Ala Ile Lys Gln Lys Ser Leu Leu Gly 485 490 495 Tyr Leu Asp Glu Met Ile Val Val Ala Ala Gly Leu Cys Asn Leu Lys 500 505 510 Arg Gln Glu Leu Glu Ser 515 <210> 2 <211> 1557 <212> DNA <213> Drosophila melanogaster <400> 2 atggcgttga caattacaaa atttcgaact tcgaggggga tggtggtggc cgtacagccc 60 acagtggtgt tgagccccaa aataccagat tcccaggata acgaaaagaa accgttttca 120 aaatcggagc cgggaaatgc aactgtgaga gttaatgcag gtggtatagt tcttaacaaa 180 ataccagcga ttataaggcc aagtatgaag agagcagcaa caacaaagat gactggagcc 240 acggctgcgg gagcaacaac aacaacatcg tcaacaggtg cagtgggata tcccgttctc 300 aaaacaccca agtatgtggt tcagactagt ccgagtggat cctctggcca tcagctccag 360 atgctggcga ggaaggacac tcaaagtctg ggagtggcca tcaattcact gccgcccaac 420 acaatcatca aagcaaccac aagaccttca caaacagcgc ctttgacacc aaactcagcg 480 gctgtcacgc caagcacgcc gagcagtagc aggaattcca ctcagtccac accaactgtg 540 gtacctgatg cgagagtttc ctccgccgtg cgccaagctg tgttcatcaa gagggagcta 600 ccccagccgc agaggagcat gcgaaatatg acacttggtt tggtggaaca ggcgccactg 660 cttcatttgg gtgttgcgcc acagcacctg tcactgctga aacgccatat ctgccgcaat 720 gctaatgtca cccacttgga ctgttgcttg actctaagga aactcaaaca aaacgagcac 780 ttcgccctgt tggccgagca ctttgagctg agcgaatcag atgtcgagga cacatttaag 840 cgcaccctta tcaagctggc ccgttacctc cgtccactga ttcgttggcc agatgcacgg 900 catcacaacg agcgcttcaa acatacccca ctgaactacc gagccaacct gttgcatgta 960 cgctcgttga tcgagtgtgt ggaaacggac gtgccgatag atctgggatt gggcagcggc 1020 agctataagt tcatattgtg catcaataca aatggcatca tcagctatgt gtctagcgcc 1080 tttcctggta gttgcgatga tcttcaattg tttgaggcca gcagatttcg ggatgtcatt 1140 cccaattacc taacactatg cgcggaacca ggcaaagcag tacgccgtgc tcgcaggtcg 1200 ggcttcggag atcctcacga ctcagcggat gaggatgagg cggcggcgga accaaagcga 1260 tcacttacca aattcgaggc acagcgtttg agtggccagc tagcaagcca gcaatcccta 1320 tccgttgtag acggagcact gacttccaag cgggctccag cgattcaact acccacattc 1380 aacgcacaag aacccgcctg tagagcccaa atgagagata tgatagatta tttaagggaa 1440 ttccgcatgc tggataattc ggctattaag caaaagtcat tgctgggtta tcttgatgaa 1500 atgatcgtgg tggctgcggg tctatgcaac cttaagcgcc aagagttgga atcttaa 1557 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 aggataacga aagaaaccgt 20 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 agaacgggat atcccactgc a 21 <210> 5 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 gatcaccatt ggcaacga 18 <210> 6 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 tcttgatctt gatggtcg 18

Claims (2)

1. 20-HE를 유효성분으로 하는 항균제 조성물.
   
2. 20-HE를 유효성분으로 하는 항결핵 조성물.

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