KR20180064715A - Highly densified microparticles composed of low cross-linked hyaluronic acid and process for preparing thereof - Google Patents
Highly densified microparticles composed of low cross-linked hyaluronic acid and process for preparing thereof Download PDFInfo
- Publication number
- KR20180064715A KR20180064715A KR1020160164910A KR20160164910A KR20180064715A KR 20180064715 A KR20180064715 A KR 20180064715A KR 1020160164910 A KR1020160164910 A KR 1020160164910A KR 20160164910 A KR20160164910 A KR 20160164910A KR 20180064715 A KR20180064715 A KR 20180064715A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- cross
- microparticles
- less
- low
- Prior art date
Links
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims abstract description 151
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 151
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 149
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 title claims abstract description 39
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 19
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 238000007670 refining Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 37
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 29
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical group [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 27
- SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(oxiran-2-ylmethoxy)butoxymethyl]oxirane Chemical group C1OC1COCCCCOCC1CO1 SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 14
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 6
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 abstract description 28
- 239000000376 reactant Substances 0.000 abstract description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 12
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 12
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 12
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 12
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 12
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 229960004393 lidocaine hydrochloride Drugs 0.000 description 7
- YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N lidocaine hydrochloride monohydrate Chemical compound O.[Cl-].CC[NH+](CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002585 base Substances 0.000 description 6
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 4
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 4
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 229910052602 gypsum Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010440 gypsum Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000011243 crosslinked material Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 229940023490 ophthalmic product Drugs 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
- C08J3/12—Powdering or granulating
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/20—Polysaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
- C08J3/24—Crosslinking, e.g. vulcanising, of macromolecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Description
본 발명은 고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자 및 이의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a microparticle composed of a high-density hyaluronic acid cross-linked body and a method for producing the same.
히알루론산 가교체는 보건의료 및 미용성형 목적에서 최근 산업적 응용성이 확장되어 왔다. 히알루론산 가교체로 구성된 보건의료 및 미용성형 분야의 제품으로는 필러, 관절강 주사제, 유착방지제, 안과용 의약품 또는 내시경 점막하 주입제 등으로 사용되어 왔으며, 그 사용 목적에 따라 점성 및 탄성계수와 같은 물리화학적 특성이 각각 다르게 형성되도록 제조되어 왔다. Hyaluronic acid bridges have recently expanded in industrial applicability for healthcare and cosmetic purposes. Hyaluronic acid crosslinked products have been used for fillers, joint injections, anti-adhesion agents, ophthalmic drugs or endoscopic submucosal injection agents, and the use of physico-chemical agents such as viscosity and elastic modulus Have been fabricated to have different characteristics.
가교된 히알루론산 겔이 체내에서 장기적으로 본연의 물성을 유지하기 위해서는 가교된 히알루론산 겔의 탄성계수/점성계수의 값이 높아야 한다. 이는 Tanδ 값으로 표기할 수 있으며, Tanδ가 높을수록 고체에 가까운 특성을 보인다.In order for the crosslinked hyaluronic acid gel to maintain its inherent physical properties in the body in the long term, the elastic modulus / viscosity coefficient of the crosslinked hyaluronic acid gel should be high. It can be expressed by Tanδ value, and the higher the tan δ, the more the property is close to solid.
현재까지 알려진 가교된 히알루론산을 포함하는 겔의 상기와 같은 물리화학적 특성을 결정짓는 요인으로는 대표적으로 1) 히알루론산의 가교율, 2) 가교된 히알루론산 입자의 크기 및 3) 가교된 히알루론산 입자의 수용액 내 농도가 있다.The factors that determine the above physicochemical properties of the gel containing the crosslinked hyaluronic acid known so far include 1) the crosslinking ratio of hyaluronic acid, 2) the size of the crosslinked hyaluronic acid particles, and 3) the amount of crosslinked hyaluronic acid There is a concentration of the particles in the aqueous solution.
가교된 히알루론산 겔의 물성을 변형하기 위하여 사용하는 기존에 알려진 방법 중, 히알루론산의 가교율을 변형하는 방법은, 가교 반응 중 첨가하는 가교제의 양을 변경함으로써 쉽게 도출될 수 있다. 그러나 이 방법으로 히알루론산 가교체의 Tanδ 값을 높이고자 가교제의 첨가량을 높이게 되면, 히알루론산 겔이 주입된 조직 부위에 미반응 가교제로 인한 국소적 발진 반응이 나타날 가능성이 높다. 또한 가교제의 말단 잔기가 용액 중으로 노출되었을 때 체내 조직과 직접적인 반응이 나타날 가능성도 있다. 따라서 물성을 높이기 위하여 가교 반응 중 가교제의 투입량을 높이는 방법은 낮은 안전성으로부터 최종 히알루론산 가교체의 보건의료 및 미용성형 분야로의 응용을 제한할 수 있다. Of the known methods used for modifying the physical properties of the crosslinked hyaluronic acid gel, the method of modifying the crosslinking rate of hyaluronic acid can be easily derived by changing the amount of the crosslinking agent added during the crosslinking reaction. However, if the amount of cross-linking agent added to increase the tan δ value of the cross-linked hyaluronic acid by this method is increased, there is a high possibility that a localized rash reaction due to an unreacted cross-linking agent appears in the tissue portion injected with the hyaluronic acid gel. There is also the possibility that the terminal residue of the cross-linking agent may react directly with the body tissue when exposed to the solution. Therefore, the method of increasing the amount of the cross-linking agent during the crosslinking reaction to improve the physical properties may restrict the application of the final hyaluronic acid crosslinked body to the healthcare and cosmetic molding fields due to low safety.
히알루론산 입자의 크기는 히알루론산 겔의 전체적인 탄성계수를 높임과 동시에 히알루론산의 효소에 의한 분해를 저해하는데 있어서 결정적인 역할을 할 수 있으나, 최종 입자의 크기가 체내 주입 시 사용되는 주사 바늘의 내부 직경보다 작아야 하는 한계를 가져, 27G의 주사를 사용했을 경우 210㎛, 30G의 경우 159㎛ 이상의 입자 크기를 가질 경우 실질적 효용가치가 없다. 또한 입자의 크기를 너무 크게 제조하면 가교된 히알루론산 겔이 주사기 바늘을 통과할 때 주입력이 상승하여 임상에 사용하기가 어렵게 된다.The size of the hyaluronic acid particles may play a crucial role in enhancing the overall elastic modulus of the hyaluronic acid gel and inhibiting the degradation of the hyaluronic acid by the enzyme. However, the size of the final particle may be influenced by the inner diameter of the injection needle And there is no practical utility value when the particle size is 210 [mu] m when 27G scanning is used and 159 [mu] m or more when 30G is used. In addition, when the size of the particles is too large, the cross-linked hyaluronic acid gel increases its main input when it passes through the needle of a syringe, making it difficult to use it in clinical practice.
또한 가교된 히알루론산 입자의 용액 내 농도를 높여 전체적인 주입제의 물성을 바꾸는 방법은 체내에 주입되었을 때 히알루론산 입자의 농도와 관계없이 히알루론산 입자의 양에 의해 물리화학적 성질이 결정되므로 주입량을 달리한다면 효과를 볼 수 없다. In addition, when the concentration of the crosslinked hyaluronic acid particles in the solution is increased to change the physical properties of the whole injecting agent, the physicochemical properties are determined by the amount of the hyaluronic acid particles irrespective of the concentration of the hyaluronic acid particles when injected into the body. If you do not see the effect.
상기와 같은 이유에서 현재까지 알려진 가교된 히알루론산을 포함하는 겔의 물리화학적 특성 범위는 극히 제한되어 왔다.For the above reasons, the range of physico-chemical properties of gels containing cross-linked hyaluronic acid, which has hitherto been known, has been extremely limited.
본 발명에 앞서 발명자들은 하나의 입자 내에 히알루론산 가교체의 밀도를 높이면 전체적인 겔이 가지는 Tanδ 를 높일 수 있을 것이라고 가정하였다. 입자의 내부 히알루론산 고분자의 밀도를 높이는 방법을 사용하면, 가교제의 농도를 높이거나 입자의 크기를 변형시키거나 용액 내 가교된 히알루론산의 농도를 높이지 않아도 히알루론산 가교체 마이크로 입자의 물성을 변경할 수 있다.Prior to the present invention, the inventors assumed that increasing the density of the hyaluronic acid cross-linking agent in one particle would increase Tanδ of the whole gel. Using the method of increasing the density of the hyaluronic acid polymer inside the particles, the properties of the hyaluronic acid crosslinked microparticles can be changed without increasing the concentration of the crosslinking agent, changing the particle size, or increasing the concentration of the crosslinked hyaluronic acid in the solution. .
본 발명자와 마찬가지로 하나의 입자 내부의 고분자 농도를 높이는 방법으로는 가교된 히알루론산 겔을 알코올 계 유기용매에 침전하는 방법을 활용할 수 있다. 그러나 이와 같은 방법으로는 1) 입자 크기를 균일하게 형성하기가 어려우며, 2) 침전된 히알루론산 가교체를 수용액 상에 완벽히 재분산하기가 어렵다는 단점을 가진다.As in the present inventors, as a method of increasing the concentration of the polymer in one particle, a method of precipitating a crosslinked hyaluronic acid gel in an alcoholic organic solvent can be utilized. However, this method has the disadvantage that (1) it is difficult to uniformly form the particle size, and (2) it is difficult to completely redisperse the precipitated hyaluronic acid crosslinked body in the aqueous solution.
따라서 본 발명에서는 상기와 같은 침전법이 아닌 새로운 방법으로 제조되는 고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자 및 이의 제조 방법을 구현하고자 하였다.Therefore, in the present invention, microparticles composed of a high density hyaluronic acid crosslinked product prepared by a novel method other than the precipitation method as described above, and a method for producing the microparticles are implemented.
대한민국 등록특허공보 제 10-1250846호에는 가교제와 히알루론산의 혼합물을 유기용매 중에서 고체상으로 가교 반응시키는 히알루론산 가교물의 제조방법이 개시되어 있다. 위 특허문헌은 액체상에서 가교 반응시키는 종래 기술의 단점을 지적하고, 가교반응의 효율을 향상시키기 위해 고체상에서 가교 반응시키는 제조방법을 제안한다. 그러나 종래 기술은 고체상 가교 및 액체상 가교 모두 히알루론산 가교체 마이크로 입자의 필러 등으로서 요망되는 최적의 물성을 달성할 수 있는 제조공정을 제시하지 못하고 있다.Korean Patent Registration No. 10-1250846 discloses a method for producing a crosslinked hyaluronic acid in which a mixture of a crosslinking agent and hyaluronic acid is subjected to a crosslinking reaction in a solid phase in an organic solvent. The above patent documents point out disadvantages of the prior art in which a cross-linking reaction is carried out in a liquid phase, and propose a production method in which a cross-linking reaction is carried out in a solid phase in order to improve the efficiency of the cross-linking reaction. However, the prior art fails to provide a manufacturing process capable of achieving the optimum physical properties required as a filler of hyaluronic acid cross-linked microparticles in both solid phase crosslinking and liquid phase crosslinking.
본 발명자는 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자를 제공할 수 있는 제조방법의 상도에 고심하였다. 구체적으로 본 발명의 과제는 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자의 제조방법의 개발이다.The present inventors have focused on the topology of the production method capable of providing microparticles composed of a low-modulus, ultra-high density hyaluronic acid cross-linked product. Specifically, the object of the present invention is the development of a method for producing microparticles composed of a low-glycosylated hyper-dense hyaluronic acid cross-linked product.
본 발명은 아래의 수단을 통해 전술한 과제를 해결하였다.The present invention has solved the above-described problems through the following means.
1. 1) 히알루론산을 염이 포함되지 않은 일반 증류수에 25% 이상의 농도로 넣고 이를 120℃ 이상, 1 내지 4bar 의 고온 가압 조건에서 빠르게 용해하는 단계;1. 1) Hyaluronic acid is added to common distilled water not containing a salt at a concentration of 25% or more and rapidly dissolved at a temperature of 120 ° C or higher and a high temperature of 1 to 4 bar;
2) 완전히 용해된 고농도 히알루론산 수용액에 강염기와 가교제를 넣고 교반하여 히알루론산 가교체의 반응물을 제공하는 단계; 2) adding a strong base and a cross-linking agent to the completely dissolved high concentration hyaluronic acid aqueous solution and stirring to provide a reaction product of hyaluronic acid cross-linked product;
3) 히알루론산 가교체 반응물을 40℃ 이하에서 반응하여 히알루론산 가교체를 합성하는 단계; 및3) reacting the reaction product of hyaluronic acid cross-linking agent at 40 ° C or less to synthesize a hyaluronic acid cross-linked product; And
4) 히알루론산 가교체를 정제하고, 입자화하는 단계를 포함하는 저가교율 초고밀도 히알루론산 마이크로 입자의 제조방법.4) A method for producing low-modulus, low-density, high-density hyaluronic acid microparticles, comprising refining and granulating a hyaluronic acid cross-linked product.
2. 상기 1 에 있어서, 단계 1) 에서 히알루론산의 농도가 25-35% 인 것을 특징으로 하는 제조방법.2. The method according to the above 1, wherein the concentration of hyaluronic acid in step 1) is 25-35%.
3. 상기 1 또는 2 에 있어서, 단계 4) 에서 투석법으로 정제하고, 이를 마이크로 채를 이용하여 입자화하는 것을 특징으로 하는 제조방법.3. The production method according to the above 1 or 2, wherein the microorganism is purified by dialysis in step 4) and granulated using microchips.
4. 상기 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 강염기가 수산화나트륨이고, 가교제가 1,4-부타네디올디글리시딜에테르(1,4-Butanediol diglycidyl ether, BDDE)인 것을 특징으로 하는 제조방법.4. The production method according to any one of 1 to 3 above, wherein the strong base is sodium hydroxide and the cross-linking agent is 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) .
5. 상기 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 제조된 마이크로 입자의 입자표면직경이 100㎛ 이상 250㎛ 이하인 것을 특징으로 하는 제조방법.5. The production method according to any one of 1 to 4 above, wherein the produced microparticles have a particle surface diameter of 100 mu m or more and 250 mu m or less.
6. 상기 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 제조된 마이크로 입자가 1,500Pa 이상 2,000Pa 이하의 탄성계수와, 500Pa·s 이상 1,000Pa·s 이하의 점성계수를 갖는 것을 특징으로 하는 제조방법.6. The production method according to any one of 1 to 5 above, wherein the prepared microparticles have an elastic modulus of 1,500 Pa or more and 2,000 Pa or less and a viscosity coefficient of 500 Pa · s or more and 1,000 Pa · s or less.
7. 상기 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 단계 2) 에서 가교제를 히알루론산 모노머 대비 5mol% 이하로 첨가하는 것을 특징으로 하는 제조방법.7. The production method according to any one of 1 to 6 above, wherein the crosslinking agent is added to the hyaluronic acid monomer in a proportion of not more than 5 mol% in step 2).
8. 상기 1 내지 7 중 어느 하나에 따른 제조방법으로 제조된 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자.8. Microparticles composed of a low-modulus, ultra-high density hyaluronic acid cross-linked product prepared by the production method according to any one of the above 1 to 7.
9. 제조 과정 중 가교제가 히알루론산 모노머 대비 5mol% 이하로 첨가되며, 가교반응 조성물 중 히알루론산의 농도가 30% 이고, 히알루론산을 증류수에 용해하기 위하여 고온 가압이 수반되는 방법으로 제조되는 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자.9. A process for producing a crosslinked product, which comprises adding a crosslinking agent to a hyaluronic acid monomer in an amount of not more than 5 mol% based on the amount of the hyaluronic acid monomer in the preparation process, and a hyaluronic acid concentration of 30% Microparticles composed of an ultra-high density hyaluronic acid crosslinked product.
10. 상기 9 에 있어서, 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체가 가교 후 정제 하였을 때 1,500Pa 이상 2,000Pa 이하의 탄성계수와, 500Pa·s 이상 1,000Pa·s 이하의 점성계수를 갖는 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자.10. The low hysteresis hyaluronic acid hyaluronic acid according to the above 9, wherein when the low-glycemic ultra-high density hyaluronic acid cross-linked product is purified after cross-linking, an elastic modulus of 1,500 Pa or more and 2,000 Pa or less and a low- Microparticles composed of a crosslinked lonic acid.
11. 상기 9 또는 10 에 있어서, 가교제가 1,4-부타네디올디글리시딜에테르(1,4-Butanediol diglycidyl ether, BDDE)인 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자.11. Microparticles as described in 9 or 10 above, wherein the cross-linking agent is a 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE), and the cross-linking agent is a low-modulus, ultra-high density hyaluronic acid bridge.
12. 상기 9 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 마이크로 입자의 평균입자크기가 100㎛ 이상 250㎛ 이하인 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자.12. The microparticle according to any one of 9 to 11, wherein the microparticle is composed of a low-curvature, ultra-high density hyaluronic acid cross-linked substance having an average particle size of microparticles of 100 mu m or more and 250 mu m or less.
13. 상기 8 내지 12 중 어느 하나에 따른 마이크로 입자를 포함하는 필러, 관절강 주사제, 유착방지제, 안과용 의약품 또는 내시경 점막하 주입제용 조성물.13. A composition for fillers, joint injections, adhesion inhibitors, ophthalmic pharmaceuticals or endoscopic submucosal injectors according to any one of 8 to 12 above.
14. 상기 13 에 있어서, 상기 조성물이 0.3% 농도의 리도카인염산염을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.14. The composition of claim 13, wherein said composition comprises a 0.3% concentration of lidocaine hydrochloride.
본 발명은 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자를 제공하며, 이의 제조 방법을 제공한다.The present invention provides a microparticle composed of a low-modulus, ultra-high density hyaluronic acid cross-linked substance, and a method for producing the same.
도 1 은 제조방법에 따른 히알루론산 가교체의 점탄성 계수를 나타낸 그래프이다.
도 2 는 히알루론산 가교체를 이용한 주사제의 주입력을 비교한 그래프이다.
도 3 은 히알루론산 가교체의 정제과정에서 수화도 차이를 나타낸 그래프이다.FIG. 1 is a graph showing the viscoelastic coefficient of the crosslinked hyaluronic acid according to the production method.
FIG. 2 is a graph comparing the main inputs of injections using a hyaluronic acid crosslinked form.
FIG. 3 is a graph showing the difference in hydration degree during the purification process of the hyaluronic acid cross-linked product.
본 명세서에서 % 농도라 함은 특별한 언급이 없는 한 전체 조성물 대비 중량% 를 의미한다.In the present specification, the% concentration refers to the weight percentage relative to the total composition, unless otherwise specified.
본 발명자들은 마이크로 입자 내부 히알루론산 가교체의 밀도를 높이기 위하여 가교 반응 중의 히알루론산 농도를 높이고자 하였다. The present inventors intend to increase the concentration of hyaluronic acid in the cross-linking reaction in order to increase the density of cross-linked hyaluronic acid in microparticles.
기존에 산업적으로 히알루론산 가교체를 제조하기 위하여 사용되는 방법으로는 염기성 수용액에 일정량의 가교제와 히알루론산 고분자를 15 내지 25 중량% 로 포함하여 가교반응을 진행하는 것이 대표적이다. 채택 가능한 염기성 수용액과 가교제는 공지의 성분이 다양하게 존재하며, 통상의 기술자가 적절히 선택할 수 있었다. 이때 히알루론산 고분자의 농도가 15% 이하이면 가교 반응이 완벽히 진행되지 않아 가교제의 미반응 잔기가 남을 수 있고, 25% 이상의 범위에서는 히알루론산이 염기성 수용액에 완벽히 용해되지 않아 반응이 불균일하게 진행될 우려가 있는 것으로 인지되고 있었다.Conventionally, as a method for industrially producing a crosslinked hyaluronic acid, a crosslinking reaction is carried out by adding a certain amount of a crosslinking agent and a hyaluronic acid polymer in an amount of 15 to 25% by weight to a basic aqueous solution. As the basic aqueous solution and the cross-linking agent that can be adopted, there are various known components, and a person skilled in the art can appropriately select them. At this time, if the concentration of the hyaluronic acid polymer is less than 15%, the crosslinking reaction does not proceed perfectly and unreacted residues of the crosslinking agent may remain. In the range of 25% or more, hyaluronic acid is not completely dissolved in the basic aqueous solution, It was recognized that there was.
그러나 본 발명자들은 상기 목표를 달성하기 위하여 위 종래 인식에서 획기적으로 탈피하여 25% 이상의 히알루론산을 균질하게 포함하는 염기성 수용액을 제조하고 이를 히알루론산 가교체의 반응물로 사용하고자 하였다. 바람직하게는 히알루론산의 농도를 25-35 % 로 하였다. 보다 바람직하게는 히알루론산의 농도를 30% 로 하였다. 이 때 염기성 수용액과 가교제는 공지의 성분을 제한 없이 채택하였다. 다만 바람직하게는 수산화나트륨의 강염기와 BDDE의 가교제를 선택할 수 있다. However, in order to achieve the above object, the inventors of the present invention have attempted to break away from the above conventional recognition and prepare a basic aqueous solution homogeneously containing 25% or more of hyaluronic acid and use it as a reaction product of hyaluronic acid crosslinked product. Preferably, the concentration of hyaluronic acid is 25-35%. More preferably, the concentration of hyaluronic acid is set to 30%. At this time, the basic aqueous solution and the cross-linking agent adopted the known components without limitation. Preferably, a strong base of sodium hydroxide and a crosslinking agent of BDDE can be selected.
현재까지 당 분야에서 물질의 용해도를 높이는 방법으로는 고온/가압을 활용하는 방법, Co-solvent를 사용하는 방법, 계면활성제를 사용하는 방법 등이 있다. Up to now, methods of increasing the solubility of materials in the field include high temperature / pressure application methods, Co-solvent application methods, and surfactant application methods.
상기 방법 중 본 발명을 구현하기에 가장 이상적인 방법으로는 고온/가압을 이용하는 방법이 될 수 있다. Co-solvent를 활용하는 방법은 잔류용매가 최종 히알루론산 겔에 존재할 가능성이 높으며, 계면활성제를 활용하는 방법은 히알루론산 겔의 전체적인 물성을 변형시킬 우려가 있고 제조 후 계면활성제를 완벽히 제거하기 어렵다는 단점을 가지기 때문이다.Of these methods, the most ideal method for implementing the present invention may be a method using high temperature / pressure. In the method using a Co-solvent, there is a high possibility that the residual solvent is present in the final hyaluronic acid gel, and the method of utilizing a surfactant may change the overall physical properties of the hyaluronic acid gel and the disadvantage that it is difficult to completely remove the surfactant after preparation .
따라서 본 발명자들은 히알루론산이 분해되지 않는 범위 내에서 높은 농도로 용해될 수 있는 고온/가압 방법을 이용한 제조방법을 새로이 발명하고, 이로부터 용해된 25% 이상의 히알루론산 수용액(바람직하게는 25-35%, 보다 바람직하게는 30%)을 가교반응의 반응물로써 사용하여 저가교율 초고밀도 히알루론산 마이크로 입자를 제조하고자 하였다. Therefore, the present inventors newly invented a production method using a high temperature / pressure method which can be dissolved at a high concentration within a range in which hyaluronic acid can not be decomposed and newly developed a 25% or more aqueous solution of hyaluronic acid (preferably 25-35 %, More preferably 30%) as a reactant in the crosslinking reaction to prepare low-cost gypsum ultra-high density hyaluronic acid microparticles.
본 발명의 일 실험예에서 히알루론산을 25% 이상 포함할 경우, 온도 및 염의 존재 유무에 의해 비가교 히알루론산의 갈변현상이 나타날 수 있음을 확인하였다. 이로부터 기지의 알려진 히알루론산 가교체 제조에 사용되는 가교반응물의 조성, 즉 히알루론산을 가교제가 포함된 염기성 수용액에 용해한 것으로는 고온 가압 조건에서 히알루론산의 화학 구조적 변화 없이 고농도의 히알루론산을 용해할 수 없음을 확인하였다. 이와 관련하여 기지의 히알루론산 가교체가 40℃ 이하의 조건에서 가교반응을 진행하는 것 또한 가교단계에서 히알루론산의 분해 및 갈변현상을 최대한 억제하기 위한 방법으로, 이는 비가교 히알루론산이 염이 포함된 용액에서 열 안정성이 매우 낮다는 것을 의미한다. It was confirmed that when the hyaluronic acid was contained in an amount of 25% or more in the example of the present invention, browning of non-crosslinked hyaluronic acid may occur due to the presence of temperature and salt. From the result, it can be considered that the composition of the crosslinking reagent used in the production of the known hyaluronic acid crosslinked product of the base, that is, the hyaluronic acid dissolved in the basic aqueous solution containing the crosslinking agent, dissolves the hyaluronic acid at a high concentration without changing the chemical structure of the hyaluronic acid under high- . In this regard, the crosslinking reaction of the known hyaluronic acid crosslinked product proceeds at a temperature of 40 ° C or lower. This is also a method for suppressing the decomposition and browning phenomenon of hyaluronic acid to the maximum in the crosslinking step. This is a method in which irreversible hyaluronic acid- Which means that the thermal stability in the solution is very low.
이에 본 발명은 용해단계에서 히알루론산 갈변현상이 나타나지 않는 고농도 히알루론산 가교반응방법, 즉 1) 히알루론산을 염기성 수용액이 아닌 염이 포함되지 않은 일반 증류수에 넣고 이를 고온 가압 조건에서 빠르게 용해하는 방법, 2) 완전히 용해된 고농도 히알루론산 수용액에 강염기와 가교제를 넣고 교반하여 히알루론산 가교체를 제조하는 방법 및 3) 히알루론산 가교체를 정제하고 이를 입자화 하는 방법을 포함하는 저가교율 초고밀도 히알루론산 입자의 제조방법을 제공한다.Accordingly, the present invention provides a high-concentration hyaluronic acid crosslinking reaction method in which hyaluronic acid is not browned in the dissolution step, that is, 1) a method of rapidly dissolving hyaluronic acid in common distilled water not containing a basic aqueous solution and dissolving it in a high- 2) a method of preparing a hyaluronic acid crosslinked body by adding a strong base and a crosslinking agent to a completely dissolved aqueous solution of highly concentrated hyaluronic acid, and 3) a method of purifying a hyaluronic acid crosslinked body and granulating the same, Of the present invention.
본 발명의 상기 제조 방법상 수반되는 고온 가압 조건은 25% 이상의 히알루론산을 염이 포함되어있지 않은 일반 증류수에 고르게 용해할 수 있는 조건이면 최종적으로 발명의 구현에 영향을 미치지 않으나, 용해과정에서 외부의 균이 침투할 수 없는 조건인 120℃ 이상, 1 내지 4bar 의 조건이 가장 바람직하다. The high temperature pressurizing conditions involved in the above production method of the present invention do not affect the implementation of the present invention at least in the condition that 25% or more of hyaluronic acid can be dissolved evenly in the common distilled water containing no salt. However, Most preferably 120 deg. C or more and 1 to 4 bar, which is a condition in which bacteria of the present invention can not permeate.
또한 본 발명자들은 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자가 가지는 제조방법상 특성, 즉 최종 가교 반응물 내부 가교제의 농도가 히알루론산 모노머 대비 5 mol% 이하의 농도를 가지며, 가교 반응물상 히알루론산 농도가 25% 이상(바람직하게는 25-35%, 보다 바람직하게는 30%)인 가교 반응물로부터 제조되는 히알루론산 마이크로 입자를 제공한다.Also, the present inventors have found that the microparticles constituted by the low-glycemic ultra-high density hyaluronic acid cross-linked product have a production process characteristic, that is, the concentration of the cross-linking agent in the final cross-linking reaction product is 5 mol% or less of the hyaluronic acid monomer, Is 25% or more (preferably 25-35%, more preferably 30%) of the hyaluronic acid microparticles.
본 발명에 따른 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자는 제조방법 상 가교제의 사용이 극히 적어 생체 내 주입하였을 때 미반응 가교제로부터 우려되는 안전성의 문제가 적다. 본 발명의 발명자들은 히알루론산 가교체 제조에 사용되는 가교제로서 기존에 산업적으로 사용되는 가교제 중 독성이 가장 낮은 BDDE를 사용하되 히알루론산 모노머 대비 5mol% 이하의 초미세량을 사용함으로서 최종 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자의 임상적 안전성을 높일 수 있다고 판단하였다. 따라서 본 발명에 따른 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체는 제조 방법상 가교제를 히알루론산 모노머 대비 5 mol% 이하의 양으로 사용한다.The microparticles constituted by the low-glycemic ultra-high density hyaluronic acid cross-linked product according to the present invention have extremely low use of the cross-linking agent due to the manufacturing process, and thus have little safety concern about unreacted cross-linking agent when injected in vivo. The inventors of the present invention have found that the use of BDDE having the lowest toxicity among the conventional cross-linking agents used in the prior art as a cross-linking agent for use in the production of cross-linked hyaluronic acid, but using an ultrapure amount of less than 5 mol% based on the hyaluronic acid monomer, And that the microparticles could enhance the clinical safety. Therefore, the crosslinking agent of the low-cost gypsum ultra-high density hyaluronic acid according to the present invention is used in an amount of 5 mol% or less based on the hyaluronic acid monomer in the preparation process.
또한 종래 방법으로 제조되는 히알루론산 가교체보다 점성이 낮고 탄성계수가 높아 입자의 형태 유지가 장기간 가능하다. 또한 본 발명에 따른 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체는 가교 후 정제 하였을 때 1,500Pa 이상 2,000 Pa 이하의 탄성계수와, 500Pa·s 이상 1,000Pa·s 이하의 점성계수를 갖는다.In addition, since the viscosity of the hyaluronic acid crosslinked body manufactured by the conventional method is lower than that of the hyaluronic acid crosslinked body, the shape stability of the particles can be maintained for a long time. In addition, the low-glycemic ultra-high density hyaluronic acid crosslinked product according to the present invention has an elastic modulus of 1,500 Pa or more and 2,000 Pa or less and a viscosity coefficient of 500 Pa · s or more and 1,000 Pa · s or less when crosslinked and purified.
또한 본 발명에 따른 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자는 열에 대한 안정성이 우수하여 멸균 후에 감소되는 물리화학적 물성변화율이 적다. In addition, the microparticles composed of the low-glycemic ultra-high density hyaluronic acid cross-linked product according to the present invention are excellent in heat stability and have a small rate of change in physical and chemical properties after sterilization.
또한 본 발명의 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자 및 이를 조성물로 하는 주사제는 국소 마취제를 포함할 수 있다. 국소 마취제의 종류로는 리도카인 및 이의 염이 사용될 수 있으며, 최종 함량은 독성을 나타내지 않는 범위 내에서 사용하되 리도카인염산염의 경우 총 중량 대비 0.3% 인 것이 가장 적합하다. In addition, the microparticles composed of the low-glycoside hyper-dense hyaluronic acid cross-linked product of the present invention and the injectable composition comprising the microparticles may include a local anesthetic agent. As a local anesthetic agent, lidocaine and its salts may be used. The final amount of lidocaine hydrochloride is preferably within the range of not showing toxicity, but 0.3% of the total weight of lidocaine hydrochloride is most suitable.
본 발명의 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자를 제조하는 방법은 일반적인 방법인 25% 이하 농도의 히알루론산을 가교제가 포함된 염기성 용액에서 가교하는 방법과 달리 히알루론산을 증류수상에 고온/가압의 조건 하에 선용해한 후 강염기와 가교제를 첨가하는 두 단계로 구성된다. 본 발명에 따라 히알루론산이 25% 이상 고농도(바람직하게는 25-35%, 보다 바람직하게는 30%)로 용해되는 가교 반응 조성물을 제공할 수 있다. The method of producing the microparticles composed of the low-glycemic ultra-high density hyaluronic acid cross-linked product of the present invention is characterized in that hyaluronic acid is added to the distilled water phase at a high temperature / And then adding a strong base and a cross-linking agent. According to the present invention, it is possible to provide a crosslinking reaction composition wherein hyaluronic acid is dissolved at 25% or more (preferably 25-35%, more preferably 30%) at a high concentration.
본 발명의 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자는 미용 및 보건의료 분야에 걸쳐 전반적으로 사용가능하며, 특히 피하조직 또는 피내조직에 사용되는 필러로써 사용될 수 있다. 본 발명자들은 주사 바늘의 내부 직경으로부터 임상적으로 이용 가능한 히알루론산 가교체의 입자표면직경(Surface mean diameter)은 100 내지 250㎛ 이 가장 바람직하다고 판단하였으며, 상기 입자표면직경 범위는 공지의 수단을 통해 달성할 수 있다. 추가적으로 본 발명의 저가교율 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자는 주사제의 조성물로 사용되었을 때, 일반 히알루론산 가교체에 비하여 낮은 주입력을 갖는다. 주입력이 낮은 이유는 동일 입자 크기의 히알루론산 가교체가 포함된 용액을 비교할 때 마이크로 입자 내부의 히알루론산의 밀도가 높으면 히알루론산 입자의 개수가 적어지기 때문이다.The microparticles composed of the low-cost gypsum ultra-high density hyaluronic acid cross-linked product of the present invention can be used generally as a filler used in subcutaneous tissue or intradermal tissue throughout the cosmetic and healthcare fields. The present inventors have determined that the particle diameter of the particle surface is most preferably from 100 to 250 mu m in terms of the surface mean diameter of the crosslinked hyaluronic acid clinically usable from the inner diameter of the injection needle. Can be achieved. In addition, the microparticles comprised of the low-modulus, ultra-high density hyaluronic acid cross-linkers of the present invention have a lower main input when used as a composition for injections compared to conventional hyaluronic acid cross-linked forms. The reason for the lower main input is that when the solution containing the hyaluronic acid crosslinked substance of the same particle size is compared, the density of the hyaluronic acid inside the microparticles becomes higher, and the number of the hyaluronic acid particles becomes smaller.
이하 초고밀도 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자 및 이의 제조방법에 대한 본 발명의 구성을 실시예 및 실험예를 들어 설명하나, 이는 본 발명을 예시하는 것으로, 본 발명의 권리범위가 이에 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the constitution of the present invention for microparticles composed of an ultra-high density hyaluronic acid cross-linked product and a method for producing the same will be described with reference to Examples and Experimental Examples. However, the scope of the present invention is not limited thereto .
[실시예 1][Example 1]
15g의 히알루론산나트륨을 50mL 증류수에 5분간 1,000rpm의 속도로 교반하여 고르게 분산시킨 후 122°C, 1.2bar 조건하에서 10분 동안 방치하였다. 상기 히알루론산 나트륨 수용액에 수산화나트륨과 히알루론산 모노머 대비 4mol%의 양에 해당하는 1,4-부타네디올디글리시딜에테르(1,4-Butanediol diglycidyl ether, BDDE)를 넣고 고르게 교반하였다. 이후 가교반응을 35℃ 조건하에서 24시간동안 진행하였다. 형성된 히알루론산 가교체를 증류수에 투석하여 미반응된 가교제를 제거하였으며, 투석 종료 후 물을 첨가하여 최종 무게를 562.5g으로 맞춰 농도 조절하였다.15 g of sodium hyaluronate was stirred in 50 mL of distilled water for 5 minutes at a rate of 1,000 rpm, dispersed evenly, and then left to stand at 122 ° C and 1.2 bar for 10 minutes. 1,4-Butanediol diglycidyl ether (BDDE) corresponding to 4 mol% of sodium hydroxide and hyaluronic acid monomer was added to the sodium hyaluronate aqueous solution and stirred evenly. The crosslinking reaction was then carried out at 35 DEG C for 24 hours. The formed hyaluronic acid crosslinked product was dialyzed against distilled water to remove unreacted crosslinking agent. After the dialysis, water was added to adjust the final weight to 562.5g.
[실시예 2][Example 2]
15g의 히알루론산나트륨을 50mL 증류수에 5분간 1,000rpm의 속도로 교반하여 고르게 분산시킨 후 122°C, 1.2bar 조건하에서 10분 동안 방치하였다. 상기 히알루론산 나트륨 수용액에 수산화나트륨과 히알루론산 모노머 대비 4mol%의 양에 해당하는 1,4-부타네디올디글리시딜에테르(1,4-Butanediol diglycidyl ether, BDDE)를 넣고 고르게 교반하였다. 이후 가교반응을 35℃ 조건하에서 24시간동안 진행하였다. 형성된 히알루론산 가교체를 증류수에 투석하여 미반응된 가교제를 제거하였으며, 투석 종료 후 물을 첨가하여 최종 무게를 562.5g으로 농도 조절하고 이를 습윤 멸균하였다. 상기 히알루론산 가교체에 3% 리도카인염산염이 포함되어있는 멸균된 62.5g의 버퍼액을 첨가하여 pH를 7.2 내지 7.4로 조절하고 180㎛ 채를 이용하여 입자화 하였다.15 g of sodium hyaluronate was stirred in 50 mL of distilled water for 5 minutes at a rate of 1,000 rpm, dispersed evenly, and then left to stand at 122 ° C and 1.2 bar for 10 minutes. 1,4-Butanediol diglycidyl ether (BDDE) corresponding to 4 mol% of sodium hydroxide and hyaluronic acid monomer was added to the sodium hyaluronate aqueous solution and stirred evenly. The crosslinking reaction was then carried out at 35 DEG C for 24 hours. The formed hyaluronic acid crosslinked product was dialyzed against distilled water to remove unreacted crosslinking agent. After completion of the dialysis, water was added to adjust the final weight to 562.5 g and wet sterilized. 62.5 g of sterile buffer solution containing 3% lidocaine hydrochloride was added to the hyaluronic acid crosslinked product to adjust the pH to 7.2 to 7.4, and the mixture was granulated using 180 쨉 m.
[실시예 3][Example 3]
15g의 히알루론산나트륨을 50mL 증류수에 5분간 1,000rpm의 속도로 교반하여 고르게 분산시킨 후 122°C, 1.2bar 조건하에서 10분 동안 방치하였다. 상기 히알루론산 나트륨 수용액에 수산화나트륨과 히알루론산 모노머 대비 4mol%의 양에 해당하는 1,4-부타네디올디글리시딜에테르(1,4-Butanediol diglycidyl ether, BDDE)를 넣고 고르게 교반하였다. 이후 가교반응을 35℃ 조건하에서 24시간동안 진행하였다. 형성된 히알루론산 가교체를 증류수에 투석하여 미반응된 가교제를 제거하였으며, 투석 종료 후 물을 첨가하여 최종 무게를 675.0g으로 농도 조절하고 이를 습윤 멸균하였다. 상기 히알루론산 가교체에 3% 리도카인염산염이 포함되어있는 멸균된 75.0g의 버퍼액을 첨가하여 pH를 7.2 내지 7.4로 조절하고 180㎛ 채를 이용하여 입자화 하였다.15 g of sodium hyaluronate was stirred in 50 mL of distilled water for 5 minutes at a rate of 1,000 rpm, dispersed evenly, and then left to stand at 122 ° C and 1.2 bar for 10 minutes. 1,4-Butanediol diglycidyl ether (BDDE) corresponding to 4 mol% of sodium hydroxide and hyaluronic acid monomer was added to the sodium hyaluronate aqueous solution and stirred evenly. The crosslinking reaction was then carried out at 35 DEG C for 24 hours. The formed hyaluronic acid crosslinked product was dialyzed against distilled water to remove unreacted crosslinking agent. After completion of the dialysis, water was added to adjust the final weight to 675.0 g and wet sterilized. 75.0 g of sterilized buffer solution containing 3% lidocaine hydrochloride was added to the hyaluronic acid crosslinked product to adjust the pH to 7.2 to 7.4, and the mixture was granulated using 180 쨉 m.
[실시예 4][Example 4]
15g의 히알루론산나트륨을 50mL 증류수에 5분간 1,000rpm의 속도로 교반하여 고르게 분산시킨 후 122°C, 1.2bar조건하에서 10분 동안 방치하였다. 상기 히알루론산 나트륨 수용액에 수산화나트륨과 히알루론산 모노머 대비 4mol%의 양에 해당하는 1,4-부타네디올디글리시딜에테르(1,4-Butanediol diglycidyl ether, BDDE)를 넣고 고르게 교반하였다. 이후 가교반응을 35℃ 조건하에서 24시간동안 진행하였다. 형성된 히알루론산 가교체를 증류수에 투석하여 미반응된 가교제를 제거하였으며, 투석 종료 후 물을 첨가하여 최종 무게를 750g으로 농도 조절하고 이를 습윤 멸균하였다. 상기 히알루론산 가교체에 3% 리도카인염산염이 포함되어있는 멸균된 83.3g의 버퍼액을 첨가하여 pH를 7.2 내지 7.4로 조절하고 180㎛ 채를 이용하여 입자화 하였다.15 g of sodium hyaluronate was stirred in 50 mL of distilled water for 5 minutes at a rate of 1,000 rpm, dispersed evenly, and then left to stand at 122 ° C and 1.2 bar for 10 minutes. 1,4-Butanediol diglycidyl ether (BDDE) corresponding to 4 mol% of sodium hydroxide and hyaluronic acid monomer was added to the sodium hyaluronate aqueous solution and stirred evenly. The crosslinking reaction was then carried out at 35 DEG C for 24 hours. The formed hyaluronic acid crosslinked product was dialyzed against distilled water to remove unreacted crosslinking agent. After the completion of the dialysis, water was added to adjust the final weight to 750 g and wet sterilized. 83.3 g of sterilized buffer solution containing 3% lidocaine hydrochloride was added to the hyaluronic acid crosslinked product to adjust the pH to 7.2 to 7.4, and the mixture was granulated using 180 쨉 m.
[실시예 5][Example 5]
15g의 히알루론산나트륨을 50mL 증류수에 5분간 1,000rpm의 속도로 교반하여 고르게 분산시킨 후 122°C, 1.2bar조건하에서 10분 동안 방치하였다. 상기 히알루론산 나트륨 수용액에 수산화나트륨과 히알루론산 모노머 대비 4mol%의 양에 해당하는 1,4-부타네디올디글리시딜에테르(1,4-Butanediol diglycidyl ether, BDDE)를 넣고 고르게 교반하였다. 이후 가교반응을 35℃ 조건하에서 24시간동안 진행하였다. 형성된 히알루론산 가교체를 증류수에 투석하여 미반응된 가교제를 제거하였으며, 투석 종료 후 물을 첨가하여 최종 무게를 675.0 g 로 농도 조절하고 이를 습윤 멸균하였다. 상기 히알루론산 가교체에 멸균된 75.0g의버퍼액을 첨가하여 pH를 7.2 내지 7.4로 조절하고 180㎛ 채를 이용하여 입자화 하였다.15 g of sodium hyaluronate was stirred in 50 mL of distilled water for 5 minutes at a rate of 1,000 rpm, dispersed evenly, and then left to stand at 122 ° C and 1.2 bar for 10 minutes. 1,4-Butanediol diglycidyl ether (BDDE) corresponding to 4 mol% of sodium hydroxide and hyaluronic acid monomer was added to the sodium hyaluronate aqueous solution and stirred evenly. The crosslinking reaction was then carried out at 35 DEG C for 24 hours. The formed hyaluronic acid crosslinked product was dialyzed against distilled water to remove unreacted crosslinking agent. After completion of the dialysis, water was added to adjust the final weight to 675.0 g and wet sterilized. 75.0 g sterilized buffer solution was added to the hyaluronic acid crosslinked product to adjust the pH to 7.2 to 7.4 and to be granulated using 180 mu m.
[비교예 1][Comparative Example 1]
15g의 히알루론산나트륨을 히알루론산 모노머 대비 4mol%의 양에 해당하는 1,4-부타네디올디글리시딜에테르(1,4-Butanediol diglycidyl ether, BDDE)이 포함된 염기성 용액 75mL에 고르게 5분간 1,000rpm의 속도로 교반하여 용해한 후 35°C 조건하에서 24시간동안 가교하였다. 이를 증류수에 투석하여 미반응된 가교제를 제거하였으며, 투석 종료 후 물을 첨가하여 최종 무게를 562.5g으로 농도 조절하였다.15 g of sodium hyaluronate was uniformly added to 75 mL of a basic solution containing 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) corresponding to 4 mol% of the hyaluronic acid monomer for 5 minutes The mixture was stirred at a speed of 1,000 rpm for dissolution and crosslinked at 35 ° C for 24 hours. The solution was dialyzed against distilled water to remove unreacted crosslinking agent. After completion of the dialysis, water was added to adjust the final weight to 562.5 g.
[비교예 2][Comparative Example 2]
15g의 히알루론산 나트륨을 75ml의 증류수에 5분간 1,000rpm의 속도로 교반하여 고르게 분산시킨 후 122°C, 1.2bar조건하에서 10 분 동안 방치하였다. 상기 히알루론산 수용액에 수산화나트륨과 히알루론산 모노머 대비 4mol%의 양에 해당하는 1,4-부타네디올디글리시딜에테르(1,4-Butanediol diglycidyl ether, BDDE)를 넣고 고르게 교반하였다. 이후 가교반응을 35℃ 조건하에서 24시간동안 진행하였다. 형성된 히알루론산 가교체를 증류수에 투석하여 미반응된 가교제를 제거하였으며, 투석 종료 후 물을 첨가하여 최종 무게를 562.5g으로 맞춰 농도 조절하였다.15 g of sodium hyaluronate was stirred in 75 ml of distilled water at a rate of 1,000 rpm for 5 minutes, dispersed evenly, and then left to stand at 122 ° C and 1.2 bar for 10 minutes. 1,4-Butanediol diglycidyl ether (BDDE) corresponding to 4 mol% of sodium hydroxide and hyaluronic acid monomer was added to the hyaluronic acid aqueous solution and stirred evenly. The crosslinking reaction was then carried out at 35 DEG C for 24 hours. The formed hyaluronic acid crosslinked product was dialyzed against distilled water to remove unreacted crosslinking agent. After the dialysis, water was added to adjust the final weight to 562.5g.
[비교예 3][Comparative Example 3]
비교예 1 에 해당하는 히알루론산 가교체를 습윤멸균하고 3% 리도카인염산염이 포함되어있는 멸균된 62.5g의 버퍼액을 첨가하여 pH를 7.2 내지 7.4로 조절하고 180㎛ 채를 이용하여 입자화 하였다.The hyaluronic acid crosslinked material of Comparative Example 1 was wet-sterilized, and 62.5 g of sterilized buffer solution containing 3% lidocaine hydrochloride was added to adjust the pH to 7.2 to 7.4, and the mixture was granulated using 180 mu m.
[실험예 1][Experimental Example 1]
실시예 1 과 비교예 1 내지 2 의 점도 및 탄성계수를 Rheometer (malvern)장비를 이용하여 측정하였으며, 이를 도 1 에 나타내었다. 실시예 1 은 비교예 1 내지 2 와 비교하여 약 3배 정도 증가된 탄성계수를 가지며, 낮은 점도 값을 갖는다.The viscosity and elastic modulus of Example 1 and Comparative Examples 1 and 2 were measured using a Rheometer (Malvern) apparatus and are shown in FIG. Example 1 has an elastic modulus increased by about 3 times as compared with Comparative Examples 1 and 2, and has a low viscosity value.
[실험예 2][Experimental Example 2]
실시예 2 내지 5 와 비교예 3 을 100ml/min의 속도로 주입하며 주입력을 측정하였으며, 그 결과를 도 2 에 나타내었다. 도 2 에서 실시예 2 내지 5 는 비교예 3 과 비교하여 주입력이 현저히 낮아졌음을 확인할 수 있다. 그 이유는 히알루론산 가교체로 구성된 마이크로 입자 내부 히알루론산의 밀도가 증가하였기 때문이다.Examples 2 to 5 and Comparative Example 3 were injected at a rate of 100 ml / min and the main input was measured. The results are shown in FIG. In FIG. 2, it can be confirmed that the main input is significantly lower in Examples 2 to 5 than in Comparative Example 3. This is because the density of the hyaluronic acid inside the microparticles composed of the cross-linked hyaluronic acid is increased.
[실험예 3][Experimental Example 3]
실시예 2 내지 5, 비교예 3 의 입자 크기를 동적광산란법으로 측정하였으며, 이를 표 1 에 나타내었다. 모든 시험 샘플은 입자표면직경 100㎛ 이상 250㎛ 이내의 입자크기를 가졌으며, 입자 제조방법 변경에 의하여 변하지 않았음을 확인함으로써 본 발명의 제조방법이 입자 크기를 결정하는 데에는 영향을 미치지 않았음을 확인하였다.The particle sizes of Examples 2 to 5 and Comparative Example 3 were measured by a dynamic light scattering method and are shown in Table 1. All the test samples had a particle size of 100 μm or more and 250 μm or less in diameter on the particle surface and confirmed that the particle size was determined by confirming that the particle size was not changed by changing the particle production method Respectively.
[실험예 4][Experimental Example 4]
실시예 1 과 비교예 2 의 정제 과정 중 수화도를 수화 과정 중 투석막 무게의 변화로 측정하였으며, 이를 도 3에 나타내었다. 실시예 1 이 비교예 2 와 비교하여 동일양의 히알루론산을 포함하고 있음에도 불구하고 수화가 덜 되었음을 확인하였을 때, 가교체가 보다 치밀하게 형성되었음을 알 수 있다.The hydration degree during the purification process of Example 1 and Comparative Example 2 was measured by changing the weight of the dialysis membrane during hydration and is shown in FIG. It can be seen that the crosslinked body was formed more densely when it was confirmed that Example 1 contained less harsh hydration even though it contained the same amount of hyaluronic acid as Comparative Example 2.
Claims (6)
2) 완전히 용해된 고농도 히알루론산 수용액에 강염기와 가교제를 넣고 교반하여 히알루론산 가교체의 반응물을 제공하는 단계;
3) 히알루론산 가교체 반응물을 40℃ 이하에서 반응하여 히알루론산 가교체를 합성하는 단계; 및
4) 히알루론산 가교체를 정제하고, 입자화하는 단계를 포함하는 저가교율 초고밀도 히알루론산 마이크로 입자의 제조방법.1) adding hyaluronic acid to common distilled water containing no salt at a concentration of 25-35%, and rapidly dissolving the hyaluronic acid at a temperature of 120 ° C or higher and a high temperature of 1 to 4 bar;
2) adding a strong base and a cross-linking agent to the completely dissolved high concentration hyaluronic acid aqueous solution and stirring to provide a reaction product of hyaluronic acid cross-linked product;
3) reacting the reaction product of hyaluronic acid cross-linking agent at 40 ° C or less to synthesize a hyaluronic acid cross-linked product; And
4) A method for producing low-modulus, low-density, high-density hyaluronic acid microparticles, comprising refining and granulating a hyaluronic acid cross-linked product.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020160164910A KR20180064715A (en) | 2016-12-06 | 2016-12-06 | Highly densified microparticles composed of low cross-linked hyaluronic acid and process for preparing thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020160164910A KR20180064715A (en) | 2016-12-06 | 2016-12-06 | Highly densified microparticles composed of low cross-linked hyaluronic acid and process for preparing thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20180064715A true KR20180064715A (en) | 2018-06-15 |
Family
ID=62628549
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020160164910A KR20180064715A (en) | 2016-12-06 | 2016-12-06 | Highly densified microparticles composed of low cross-linked hyaluronic acid and process for preparing thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20180064715A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111840638A (en) * | 2020-07-21 | 2020-10-30 | 华熙生物科技股份有限公司 | Preparation method of crosslinked hyaluronic acid filler for injection |
| KR20220088004A (en) | 2020-12-18 | 2022-06-27 | 충남대학교산학협력단 | Method for measuring the crosslink rate in the compositon including crosslinked hyaluronic acid |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101250846B1 (en) | 2005-07-04 | 2013-04-05 | 주식회사 엘지생명과학 | Process for Preparing Crosslinked Hyaluronic Acid |
-
2016
- 2016-12-06 KR KR1020160164910A patent/KR20180064715A/en not_active Application Discontinuation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101250846B1 (en) | 2005-07-04 | 2013-04-05 | 주식회사 엘지생명과학 | Process for Preparing Crosslinked Hyaluronic Acid |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111840638A (en) * | 2020-07-21 | 2020-10-30 | 华熙生物科技股份有限公司 | Preparation method of crosslinked hyaluronic acid filler for injection |
| CN111840638B (en) * | 2020-07-21 | 2022-04-12 | 华熙生物科技股份有限公司 | Preparation method of crosslinked hyaluronic acid filler for injection |
| KR20220088004A (en) | 2020-12-18 | 2022-06-27 | 충남대학교산학협력단 | Method for measuring the crosslink rate in the compositon including crosslinked hyaluronic acid |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhao et al. | Processing, mechanical properties and bio-applications of silk fibroin-based high-strength hydrogels | |
| Fan et al. | Tough, swelling-resistant, self-healing, and adhesive dual-cross-linked hydrogels based on polymer–tannic acid multiple hydrogen bonds | |
| Kaewprasit et al. | Thai silk fibroin gelation process enhancing by monohydric and polyhydric alcohols | |
| Kang et al. | Cellulose derivatives and graft copolymers as blocks for functional materials | |
| You et al. | Regulating the degradation rate of silk fibroin films through changing the genipin crosslinking degree | |
| US11292827B2 (en) | Method for producing high-concentration collagen for using as medical material | |
| KR101091575B1 (en) | Manufacturing method of biocompatible polyvinyl alcohol-based hydrogel | |
| CN103965491A (en) | Preparation method for silk fibroin composite gel | |
| KR101501217B1 (en) | Process for preparing polydioxanone particles for filler | |
| CN107118361B (en) | Silk fibroin/carboxymethyl chitosan composite gel and preparation method thereof | |
| CN110407982B (en) | Antibacterial hydrogel material and preparation method thereof | |
| CN106188584B (en) | A kind of derivatives of hyaluronic acids hydrogel and preparation method thereof | |
| CN106883430A (en) | A kind of preparation method of vegetable protein composite aquogel | |
| CN103007342B (en) | Biodegradable and medical tricalcium phosphate/gamma-polyglutamic acid composite and preparation method thereof | |
| Oh et al. | Preparation of silk sericin beads using LiCl/DMSO solvent and their potential as a drug carrier for oral administration | |
| KR20180064715A (en) | Highly densified microparticles composed of low cross-linked hyaluronic acid and process for preparing thereof | |
| CN104894856A (en) | Processing method for improving mechanical properties of silk fibroin nanofiber | |
| CN101928355B (en) | Aminated alginic acid and preparation method thereof | |
| Wang et al. | Imidazolidinyl urea reinforced polyacrylamide hydrogels through the formation of multiple hydrogen bonds | |
| CN110384831B (en) | Preparation method of zwitterionic hydrogel for postoperative adhesion prevention, cross-linking agent and polymer | |
| CN109762184B (en) | Preparation method of collagen hydrogel | |
| Liu et al. | Homogeneous sulfation of silk fibroin in an ionic liquid | |
| CN106750379A (en) | A kind of preparation method of PVA-GO Nanometer composite hydrogels | |
| KR101853260B1 (en) | Process for preparation of sevelamer carbonate | |
| CN101314058A (en) | Modification method for animal skin collagen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E601 | Decision to refuse application |