KR20180050634A

KR20180050634A - Composition for immune enhancement comprising ethanol extract of Ulmus cortex

Info

Publication number: KR20180050634A
Application number: KR1020180051991A
Authority: KR
Inventors: 정경태; 이종환; 황혜진; 강경화; 현숙경; 김병우
Original assignee: 동의대학교 산학협력단
Priority date: 2018-05-04
Filing date: 2018-05-04
Publication date: 2018-05-15

Abstract

The present invention relates to a health functional food composition or a pharmaceutical composition for enhancing immunity, containing an alcohol extract of Ulmus davidiana tree bark which has an activity of enhancing immunity or a fraction thereof. The alcohol extract of the Ulmus davidiana tree bark provided in the present invention has a remarkably improved proliferation-stimulating activity of immunocyte, compared to a conventional hot water extract, thereby being capable of being widely used for developing agents having an improved effect of enhancing immunity.

Description

[0001] The present invention relates to a composition for enhancing immunity comprising an alcohol extract of elm bark as an active ingredient.

본 발명은 느릅나무 수피의 알코올 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 면역증강 활성을 나타내는 느릅나무 수피의 알코올 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 면역증강용 건강 기능 식품 조성물 또는 약학조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for enhancing immunity comprising an alcohol extract of elm bark as an active ingredient. More particularly, the present invention relates to a composition for enhancing immune health comprising an alcohol extract of elm bark or its fraction exhibiting immunoenhancing activity Functional food composition or pharmaceutical composition.

면역반응은 활성화된 면역세포가 외래성 및 내인성 물질(항원)에 대하여 일으키는 일련의 반응이다. 세균, 바이러스 등을 포함한 미생물 및 생체의 이물질 등이 생체로 유입되면, 숙주세포는 감염을 극복하기 위해 염증반응의 원인이 되는 사이토카인 등의 인자를 분비하여 염증반응을 유발시킨다. 그리고 이러한 미생물 및 생체의 이물질 등이 면역세포에 의해 인식이 되면 면역세포가 활성화되고, 활성화된 면역세포에서도 염증반응의 원인이 되는 많은 인자를 분비하여 염증반응을 유발한다고 알려져 있다.An immune response is a series of reactions caused by activated immune cells against adventitious and endogenous substances (antigens). When a microorganism including a bacterium, a virus, and a foreign body of a living body enters the living body, the host cell secretes a factor such as cytokine which causes the inflammation reaction to overcome the infection and induces an inflammatory reaction. When these microorganisms and living organisms are recognized by the immune cells, the immune cells are activated, and in the activated immune cells, many factors that cause the inflammation reaction are secreted to induce the inflammation reaction.

이러한 면역반응은 태어날 때부터 가지고 있는 선천면역 (innate immunity)과 후천적으로 생활 등에 적응되어 얻어지는 후천면역(acquired immunity)로 구분된다. 여기서, 선천면역은 일명 '자연면역'이라고도 하는 것으로, 항원에 대하여 비특이적으로 반응하며 특별한 기억작용은 보이지 않는다. 선천면역 체계로는 항원의 침입을 차단하는 피부, 점액조직, 상산성의 위산, 체내로 들어온 침입자들을 제거하는 식균작용을 담당하는 대식세포 (macrophage), 다형핵 백혈구 등과 같은 식세포 등이 있다. 이러한 선천면역은 실제 대부분의 감염을 방어한다. 한편, 후천면역은 처음 침입한 항원에 대한 기억작용이 있어, 다시 침입이 발생하였을 때, 특이적으로 반응하여 효과적으로 항원을 제거하는 특징이 있다.These immune responses are divided into innate immunity, which is acquired from birth, and acquired immunity, which is obtained by adaptation to life and the like. Here, congenital immunity is also called "natural immunity" and responds nonspecifically to the antigen and does not show any special memory function. The congenital immune system includes skin, mucus tissue, acid stomach acid that blocks the entry of the antigen, macrophage which is responsible for the phagocytosis of the body, phagocytes such as polymorphonuclear leukocytes and the like. This congenital immune defenses most infections in practice. On the other hand, acquired immunity has a memory effect on the first invaded antigen, and when the invaded again occurs, it specifically reacts to effectively remove the antigen.

이러한 면역기능이 저하되면, 천식, 계절성 또는 통년성 비염, 알러지성 비염, 결막염, 아토피성 피부염, 두드러기, 적혈구의 용혈, 급성 사구체 신염, 감기, 만성 피로 및 암 등 다양한 면역질환이 발생할 수 있다. 이러한 면역질환은 치료보다 예방이 중요한데, 현재 시판되고 있는 치료제는 예방을 위하여 복용하기에는 어려운 것이 현실이다. 이에 부작용의 가능성이 있는 면역증강제의 복용 없이, 면역기능 장애를 예방 및 치료할 수 있는 방법이 요구되었다.When such immune function deteriorates, various immune diseases such as asthma, seasonal or perennial rhinitis, allergic rhinitis, conjunctivitis, atopic dermatitis, urticaria, hemolysis of red blood cells, acute glomerulonephritis, cold, chronic fatigue and cancer may occur. Such immune diseases are more important to prevent than treatment, and currently commercial drugs are difficult to take for prevention. Therefore, there is a need for a method for preventing and treating immune dysfunction without taking an immunostimulant that has the potential for side effects.

이를 위하여, 부작용이 적은 천연물로부터 면역활성을 조절할 수 있는 성분을 발굴하고, 이를 이용하여 면역활성을 조절할 수 있는 제제를 개발하기 위한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 예를 들어, 한국등록특허 제1141314호에는 오적산 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2009-0108208호에는 홍삼 추출물, 표고버섯균사체 추출물, 알로에 추출물 및 유산균을 포함하는 스트레스성 면역질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 개시되어 있다. 그러나, 이러한 천연물 유래 성분은 천연물이 나타내는 효과보다도 면역조절 활성이 크게 감소되거나, 동일한 천연물로부터 얻어진 추출물이 서로다른 면역조절 활성을 나타내거나, 천연물로부터 면역조절 활성을 나타내는 유효성분의 분리동정이 용이하지 않다는 등의 다양한 어려움이 있어, 상기 천연물 유래 성분을 유효성분으로 포함하는 면역조절 제제의 개발이 지체되고 있는 실정이다. For this purpose, studies have been actively carried out to develop a preparation capable of modulating immunological activity by using a natural substance having a low side effect and extracting a component capable of controlling the immune activity. For example, Korean Patent No. 1141314 discloses a composition for enhancing immunity comprising an extract of Ohtansan as an active ingredient. In Korean Patent Laid-Open No. 2009-0108208, red ginseng extract, shiitake mushroom mycelium extract, aloe extract, A pharmaceutical composition for preventing or treating a stress-related immune < RTI ID = 0.0 > disorder. &Lt; / RTI > However, such a natural-origin-derived component has a problem that the immunomodulating activity is greatly reduced, the extract obtained from the same natural product exhibits different immunomodulating activity than the effect exhibited by the natural product, or the active ingredient exhibiting the immunomodulating activity from the natural product is easy to identify The development of an immunomodulating agent containing the natural-substance-derived component as an active ingredient has been delayed. SUMMARY OF THE INVENTION

특히, 천연물로부터 면역조절 활성을 나타내는 유효성분의 분리동정이 용이하지 않다는 제한요인으로 인하여, 대부분의 천연물 유래 성분을 포함하는 제제는 핵심적인 활성성분을 순수분리하지 않고, 상기 활성성분을 포함하는 조 추출물 또는 분획물을 사용하여 제품화하려는 연구가 진행되고 있다. 그러나, 동일한 천연물로부터 얻어진 추출물이 서로다른 면역조절 활성을 나타낼 수 있다는 또 다른 제한요인으로 인하여, 실질적으로는 천연물을 이용한 면역조절 제제의 개발이 지체되고 있는 실정이다. Particularly, due to the limitation that it is not easy to isolate and identify the active ingredient showing immunomodulatory activity from natural products, most of the preparations containing the natural material-derived ingredients are not purified pure active ingredients, Studies are underway to commercialize extracts or fractions. However, due to other limitations that extracts obtained from the same natural products can exhibit different immunomodulatory activities, the development of immunomodulatory agents using natural products has been substantially delayed.

한편, 유피라고도 호칭되는 느릅나무의 수피는 참느릅나무, 둥근 참느릅나무, 좀참느릅나무, 당느릅나무, 혹느릅나무, 떡느릅나무 등의 다양한 느릅나무의 줄기부분의 껍질을 의미하는데, 한방에서는 고름을 제거하고 새살을 돋아나게 하는 효능이 있다고 하여 종기, 종창, 염증 등의 질환의 치료에 사용되어 왔다. 뿐만 아니라, 천연 항생제로서의 효과도 나타내어, 민간요법으로서 위웨양, 십이지장궤양, 소장궤양, 대장궤양 등의 다양한 소화기 궤양의 치료에 사용되어 왔다. 그러나, 상기 느릅나무의 수피를 달여서 음용할 경우, 급성 간염이나 신부전을 일으킬 수 있다고 알려져 있기 때문에, 상기 느릅나무의 수피로부터 안전한 제제를 개발하려는 연구가 활발히 진행되고 있는데, 느릅나무의 수피 역시 종래의 천연물의 제한요인을 그대로 나타내고 있다. 예를 들어, 한국공개특허 제1998-086059호에는 참느릅나무 수피 추출물을 유효성분으로 함유한 면역억제제 및 이의 이용방법이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2001-0068625호에는 느릅나무의 수피 또는 뿌리의 열수 추출물로부터 유래된 단백다당체를 포함하는 면역증강용 제제가 개시되어 있다. 특히, 종래의 민간요법 또는 한방에서 사용된 느릅나무 수피의 열수 추출물에는 다양한 약리활성을 나타내는 유효성분이 존재할 것으로 기대되었으나, 지금까지 개발된 것은 상기 열수 추출물로부터 분리된 단백다당체에 불과하였고, 상기 단백다당체가 면역증강 활성을 나타내기는 하지만, 상기 면역수준을 획기적으로 증가시키는 것이 아닌 약 20 내지 30% 증가시키는 수준에 불과하였으므로, 상기 느릅나무 수피에는 상기 규명된 단백다당체 보다도 더욱 향상된 면역증강 효과를 나타내는 또 다른 성분이 포함되어 있을 것으로 기대되고 있으나, 아직까지는 이에 대한 연구결과가 보고되지 않고 있는 실정이다.On the other hand, the bark of an elm, also called a duck, means a shell of a stem of a variety of elm trees such as a tree limb, a round limb, a limb elk, a limb elm, a elm elk, It has been used for the treatment of diseases such as swelling, swelling and inflammation because it has the efficacy to remove and raise new life. It has also been shown to be effective as a natural antibiotic and has been used in the treatment of various digestive ulcers such as gastric ulcer, duodenal ulcer, small intestine ulcer and colonic ulcer as folk remedies. However, studies have been actively conducted to develop a safe preparation from the bark of the elm, because it is known that drinking the bark of the elm bark can cause acute hepatitis or kidney failure. The limitation factors of natural products are shown intact. For example, Korean Unexamined Patent Publication (Kokai) No. 1998-086059 discloses an immunosuppressant containing an extract of Trichomonas sphaeroa as an active ingredient and a method of using the same. In Korean Patent Laid-Open No. 2001-0068625, There is disclosed an agent for enhancing immunity comprising a protein polysaccharide derived from a hot-water extract. Particularly, it has been expected that an effective ingredient exhibiting various pharmacological activities is expected to exist in the hot water extract of the elm bark used in the conventional folk medicine or herbal medicine. However, what was developed so far is merely a protein polysaccharide isolated from the hot-water extract, But the level of immunity is not increased dramatically but by about 20% to 30%. Therefore, the elm bark has a better immune-enhancing effect than the above-described protein polysaccharide It is anticipated that other ingredients will be included, but the results have not been reported yet.

이러한 배경하에서, 본 발명자들은 부작용을 최소화하면서 면역기능 장애를 예방 및 치료할 수 있는 면역증강활성을 나타내는 제제를 천연물로부터 개발하고자 예의 연구노력한 결과, 느릅나무의 수피를 대상으로 알코올로 추출하여 얻어진 추출물이 종래의 느릅나무 추출물 보다도 우수한 면역증강 활성을 나타냄을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.Under these circumstances, the inventors of the present invention have made extensive efforts to develop an agent showing immunity enhancing activity capable of preventing and treating immune dysfunction while minimizing adverse effects. As a result, it has been found that an extract obtained by extracting alcohol from bark of elm And exhibited immunity enhancing activity superior to that of the conventional elm extract. Thus, the present invention has been completed.

본 발명의 하나의 목적은 면역증강 활성을 나타내는 느릅나무 수피의 알코올 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 면역증강용 건강 기능 식품 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a health functional food composition for immunity enhancement comprising an alcohol extract of elm bark or its fraction showing immunity enhancing activity.

본 발명의 다른 목적은 상기 추출물 또는 분획물을 포함하는 면역증강용 약학 조성물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for enhancing immunity comprising the extract or fraction.

본 발명자들은 부작용을 최소화하면서 면역기능 장애를 예방 및 치료할 수 있는 면역증강활성을 나타내는 제제를 천연물로부터 개발하고자 다양한 연구를 수행하던 중, 느릅나무의 수피에 주목하게 되었다. 상기 느릅나무의 수피는 면역증강 또는 면역억제 활성을 나타내는 다양한 유효성분이 포함되어 있다고 알려져 있으나, 이러한 효과를 나타내는 유효성분 중에서 극히 일부만이 규명되었을 뿐이므로, 종래의 느릅나무 수피유래의 면역증강 제제 보다도 더욱 우수한 활성을 나타내는 면역증강 제제를 느릅나무의 수피로부터 발굴할 수 있을 것으로 예상하였다. 이에, 느릅나무의 수피를 포함하는 다양한 천연물로부터 각각의 알코올 추출물을 수득하고, 상기 각 추출물의 면역증강 활성을 비교한 결과, 느릅나무의 수피의 알코올 추출물이 가장 우수한 면역증강 활성을 나타냄을 확인하였다. 이에, 상기 느릅나무의 수피의 알코올 추출물의 면역증강 활성을 다양하게 시험한 결과, 세포증식을 촉진시키고, 면역세포에서 면역관련 사이토카인(인터루킨-2, 인터루킨-4 등)의 분비량을 증가시키는 효과를 나타냄을 확인하였다. 뿐만, 아니라 종래의 면역증강제로서 개발된 느릅나무의 수피유래 단백다당체의 원천이 되는 느릅나무 수피의 열수 추출물에 대한, 본 발명에서 제공하는 느릅나무의 수피의 알코올 추출물의 면역증강 활성을 비교한 결과, 면역세포의 증식율을 종래의 열수 추출물 보다도 본 발명의 알코올 추출물이 더욱 향상시킬 수 있음을 확인하였다. 이러한 향상된 면역증강 활성을 나타내는 느릅나무의 수피의 알코올 추출물은 지금까지 전혀 보고되지 않았고, 본 발명자에 의하여 최초로 개발되었다.The present inventors paid attention to the bark of elm while carrying out various studies to develop an agent exhibiting immunity enhancing activity capable of preventing and treating immune dysfunction while minimizing side effects from natural products. The bark of the elm bark is known to contain various active ingredients showing immunity enhancement or immunosuppressive activity. However, since only a small part of the active ingredients showing such an effect has been identified, it has been found that the bark of the elm bark is more effective than the immunostimulant derived from the conventional elm bark It was anticipated that immune enhancers showing excellent activity could be extracted from bark of elm. Thus, the respective alcohol extracts were obtained from various natural products including the bark of elm, and the immunoenhancing activity of each of the extracts was compared. As a result, it was confirmed that the alcohol extract of bark of elm bark showed the best immune enhancing activity . As a result of various tests on the immunoenhancing activity of the alcohol extract of bark of the elm bark, it was found that the effect of promoting cell proliferation and increasing the secretion amount of immune-related cytokines (interleukin-2, interleukin-4, etc.) Respectively. As a result of comparing the immunoenhancing activity of the alcohol extract of bark of elm bark provided in the present invention for the hot-water extract of elm bark, which is a source of the protein polysaccharide derived from bark of elm, which was developed as a conventional immunity enhancer , It was confirmed that the alcohol extract of the present invention can further improve the growth rate of immune cells as compared with the conventional hot water extract. The alcohol extract of bark of elm bark, which exhibits such enhanced immunostimulating activity, has not been reported at all and has been developed for the first time by the present inventor.

따라서, 느릅나무의 수피의 알코올 추출물은 종래의 면역증강제 보다도 더욱 우수한 면역증강 활성을 나타내므로, 새로운 면역증강용 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.Therefore, it was found that the alcohol extract of bark of elm bark exhibited a better immunostimulating activity than the conventional immunostimulant, and thus can be used as an effective ingredient of a new composition for enhancing immunity.

상기 목적을 달성하기 위한 일 실시양태로서, 본 발명은 느릅나무 수피의 알코올 추출물 또는 그의 분획물을 유효 성분으로 포함하는 면역증강용 건강 기능 식품 조성물을 제공한다.In order to accomplish the above object, the present invention provides a health functional food composition for immunomodulation comprising an alcohol extract of elm bark or a fraction thereof as an active ingredient.

본 발명의 용어 "느릅나무 수피"란, "유피(楡皮)" 또는 “유백피” 또는 “유근피”라고도 호칭되는데, 느릅나무의 줄기부분의 껍질과 뿌리부분의 껍질을 모두 포함하는 의미이다. The term "elm bark" of the present invention is also referred to as "bark skin ", " milky bark ", or " yukee bark ", which includes both the bark and the bark of the root part of the elm.

본 발명에 있어서, 상기 느릅나무의 수피는 다양한 느릅나무로부터 유래된 수피라면 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 참느릅나무(Ulmus parvifolia), 왕느릅나무(Ulmus macrocarpa), 난티나무(Ulmus laciniata), 당느릅 나무(Ulmus davidiana) 등의 다양한 느릅나무의 줄기와 뿌리부분의 껍질이 될 수 있다.In the present invention, the bark of the elm is not particularly limited as long as it is derived from a variety of elm. Preferably, the bark of Ulmus parvifolia, Ulmus macrocarpa, Ulmus laciniata, (Ulmus davidiana), and the roots of roots of various elm trees.

본 발명의 용어 "느릅나무 수피의 알코올 추출물"이란, 상기 느릅나무의 수피를 알코올로 추출하여 수득한 용매 추출물을 의미하는데, 본 발명의 목적상, 느릅나무 수피의 추출물은 느릅나무의 수피 또는 그의 분쇄물을 바람직하게는 탄소수 1 내지 6의 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등) 또는 이들의 혼합 용매, 보다 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올을 용매로 사용하여 추출하여 수득한 결과물이 될 수 있으며, 가장 바람직하게는 에탄올을 용매로 사용하여 추출하여 수득한 결과물이 될 수 있으나, 이에 제한되지는 않고, 상기 결과물은 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물 등을 모두 포함한다.The term "alcohol extract of elm bark " of the present invention means a solvent extract obtained by extracting the bark of the elm bark with alcohol. For the purpose of the present invention, the extract of elm bark is the bark of elm or its The pulverized product may be a product obtained by extracting the pulverized product preferably with an alcohol having 1 to 6 carbon atoms (methanol, ethanol, butanol, etc.) or a mixed solvent thereof, more preferably methanol or ethanol as a solvent, But the present invention is not limited thereto, and the resultant product may be a dried product obtained by drying an extract, a diluted solution or an extract of an extract, an extract, or a product such as a modified product or a purified product .

본 발명의 용어 "분획물"이란 다양한 구성성분을 포함하는 혼합물로부터 특정성분 또는 특정 그룹을 분리하는 분획방법에 의하여 얻어진 결과물을 의미한다. 본 발명에서는 바람직하게는 상기 느릅나무 수피의 알코올 추출물을 용매 분획법, 한외여과 분획법, 크로마토그래피 분획법 등의 다양한 방법으로 분획한 결과물이 될 수 있다.The term "fraction " of the present invention means a product obtained by a fractionation method for separating a specific component or a specific group from a mixture containing various constituents. In the present invention, preferably, the alcohol extract of the elm bark may be fractionated by various methods such as a solvent fractionation method, an ultrafiltration fractionation method, and a chromatography fractionation method.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 느릅나무 수피의 메탄올 추출물은 비장세포에서 유래된 면역세포(림프구)(도 1), 지라세포(splenocyte)(도 2) 또는 면역세포(도 3)의 세포 증식율을 향상시킬 수 있고, 면역관련 사이토카인인 인터루킨-2(IL-2)(도 4a)와 인터루킨-4 (IL-4)(도 4b)의 분비수준을 증가시킬 수 있음을 확인하였다. 아울러, 느릅나무 수피의 열수 추출물과 에탄올 추출물의 비장세포 증식촉진 활성을 비교한 결과, 느릅나무 수피의 알코올 추출물이 열수 추출물 보다도 더욱 향상된 비장세포 증식촉진 활성을 나타냄을 확인하였다(도 5a 및 5b).According to one embodiment of the present invention, the methanol extract of elm bark extracts the cell proliferation rate of immunodeficient cells (lymphocytes) (Fig. 1), splenocytes (Fig. 2) (IL-2) (Fig. 4A) and interleukin-4 (IL-4) (Fig. 4B) secretion levels of the immune-related cytokines. In addition, it was confirmed that the alcohol extract of the elm bark extract exhibited more enhanced spleen cell proliferation than the hot-water extract (FIGS. 5A and 5B) when compared with the promoting activity of the splenocyte proliferation of the hot-water extract and the ethanol extract of the elm bark, .

따라서, 본 발명에서 제공하는 느릅나무의 수피의 알코올 추출물은 종래의 면역증강제 보다도 더욱 우수한 면역증강 활성을 나타내므로, 새로운 면역증강용 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.Therefore, it has been found that the alcohol extract of bark of elm provided by the present invention exhibits a better immune enhancing activity than that of the conventional immunity enhancer, and thus can be used as an effective ingredient of a new immunity enhancing composition.

이처럼, 본 발명의 느릅나무 수피의 알코올 추출물은 면역세포의 증식을 촉진시키고, 면역관련 사이토카인의 분비량을 증가시키는 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 상기 느릅나무 수피는 오랫동안 한방 또는 민간요법에서 식용 또는 약용으로 사용되어 그의 안전성이 입증되었으므로, 상기 느릅나무 수피의 알코올 추출물 또는 그의 분획물은 상식할 수 있으면서도 면역활성의 증강을 도모할 수 있는 식품의 형태로 제조되어 섭취할 수 있다. 이때, 상기 식품에 포함되는 상기 느릅나무 수피의 알코올 추출물 또는 그의 분획물의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 1 중량%로 포함될 수 있다. 식품이 음료인 경우에는 100㎖를 기준으로 1 내지 10g, 바람직하게는 2 내지 7g의 비율로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 첨가할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용된다.As described above, the alcohol extract of the present invention exhibits an effect of promoting the proliferation of the immune cells and increasing the secretion amount of the immuno-related cytokine, and the elm bark has been used for a long time in a herbal or folk remedy for edible or medicinal purposes And its safety has been proved. Therefore, the alcohol extract or fraction thereof of the elm bark can be prepared in the form of food which is common but can increase the immunological activity, and can be ingested. At this time, the content of the alcohol extract of the elm bark or the fraction thereof contained in the food is not particularly limited, but is preferably 0.001 to 10% by weight, more preferably 0.1 to 1% by weight based on the total weight of the food composition . When the food is a beverage, it may be contained in a proportion of 1 to 10 g, preferably 2 to 7 g based on 100 ml. In addition, the composition may contain additional ingredients which are commonly used in food compositions and which can improve odor, taste, vision and the like. For example, vitamins A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, niacin, biotin, folate, panthotenic acid and the like. In addition, it may include minerals such as zinc (Zn), iron (Fe), calcium (Ca), chromium (Cr), magnesium (Mg), manganese (Mn) and copper (Cu) It may also include amino acids such as lysine, tryptophan, cysteine, valine, and the like. In addition, it is also possible to use antiseptics (such as potassium sorbate, sodium benzoate, salicylic acid, and sodium dehydroacetate), disinfectants (such as bleaching powder and highly bleached white powder, sodium hypochlorite), antioxidants (butylhydroxyanilide (BHA), butylhydroxytoluene BHT), etc.), coloring agents (such as tar pigments), coloring agents (such as sodium nitrite and sodium acetic acid), bleaching agents (sodium sulfite), seasoning (such as MSG sodium glutamate), sweeteners (such as hypoglycemia, , Food additives such as flavorings (vanillin, lactones, etc.), swelling agents (alum, potassium hydrogen D-tartrate), emulsifiers, emulsifiers, thickeners, encapsulating agents, gum bases, foam inhibitors, ) Can be added. The additives are selected according to the type of food and used in an appropriate amount.

한편, 상기 느릅나무 수피의 알코올 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 식품 조성물을 이용하여 면역증강용 기능성 식품을 제조할 수 있다.On the other hand, the food composition containing the alcohol extract of the elm bark or a fraction thereof may be used to produce a functional food for immunity enhancement.

구체적인 예로, 상기 식품 조성물을 이용하여 면역활성을 증강시킬 수 있는 가공식품을 제조할 수 있다. 이런 가공식품에는 예들 들어, 과자, 음료, 주류, 발효식품, 통조림, 우유가공식품, 육륙가공식품, 국수 등을 포함한다. 과자는 비스킷, 파이, 케익, 빵, 캔디, 젤리, 껌, 시리얼(곡물푸레이크 등의 식사대용품류 포함) 등을 포함한다. 음료는 음용수, 탄산음료, 기능성이온음료, 쥬스(예들 들어, 사과, 배, 포도, 알로에, 감귤, 복숭아, 당근, 토마토 쥬스 등), 식혜 등을 포함한다. 주류는 청주, 위스키, 소주, 맥주, 양주, 과실주 등을 포함한다. 발효식품은 간장, 된장, 고추장 등을 포함한다. 통조림은 수산물 통조림(예들 들어, 참치, 고등어, 꽁치, 소라 통조림 등), 축산물 통조림(쇠고기, 돼지고기, 닭고기, 칠면조 통조림 등), 농산물 통조림(옥수수, 복숭아, 파일애플 통조림 등)을 포함한다. 우유가공식품은 치즈, 버터, 요구르트 등을 포함한다. 육류가공식품은 돈까스, 비프까스, 치킨까스, 소세지. 탕수육, 너겟류, 너비아니 등을 포함한다. 밀봉포장생면 등의 국수를 포함한다. 이 외에도 상기 조성물은 레토르트식품, 스프류 등에 사용될 수 있다.As a specific example, the food composition can be used to produce a processed food which can enhance the immunological activity. Such processed foods include, for example, confectionery, drinks, liquor, fermented foods, canned foods, processed milk products, processed marine foods, noodles and the like. The sweets include biscuits, pies, cakes, breads, candies, jellies, gums, cereals (including dinner utensils such as cereal flakes). Drinks include drinking water, carbonated beverages, functional ionic beverages, juices (such as apples, pears, grapes, aloes, citrus fruits, peaches, carrots, tomato juices, etc.) and sikhye. The mainstream includes sake, whiskey, shochu, beer, liquor, and fruit wine. Fermented foods include soy sauce, miso, and kochujang. Canned products include canned products (eg, tuna, mackerel, saury, canned fish, etc.), canned products (canned beef, pork, chicken, turkey canned food) and canned products (corn, peach and canned pineapple). Milk processed foods include cheese, butter, yogurt and the like. Meat-processed foods include pork cutlet, beef cutlet, chicken cutlet, sausage. Sweet and sour pork, nuggets, and nubani. And noodles such as sealed packaging raw noodles. In addition, the composition may be used in retort food, soup and the like.

본 발명의 용어 "기능성 식품(functional food)"이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)와 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하는데, 상기 식품은 면역활성의 증강에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.The term "functional food " of the present invention is the same term as " food for special health use (FoSHU) ", and includes medical and medical effects The food may be prepared in various forms such as tablets, capsules, powders, granules, liquids, rings and the like in order to obtain a useful effect for enhancing the immunological activity.

상기 목적을 달성하기 위한 다른 실시양태로서, 본 발명은 느릅나무 수피의 알코올 추출물 또는 그의 분획물을 유효 성분으로 포함하는 면역증강용 약학 조성물을 제공한다.In another aspect of the present invention, the present invention provides a pharmaceutical composition for enhancing immunity comprising an alcohol extract of elm bark or a fraction thereof as an active ingredient.

상술한 바와 같이, 본 발명에서 제공하는 느릅나무 수피의 알코올 추출물 또는 그의 분획물은 면역세포의 증식을 촉진하고, 면역관련 사이토카인의 분비를 촉진시킬 수 있으므로, 면역활성을 증강시키는 효과를 나타낸다. 또한, 본 발명에 따른 느릅나무 수피의 알코올 추출물은 상술한 바와 같이 면역활성을 증강시켜서, 면역기능 저하로 인하여 유발되는 다양한 면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 이용될 수 있다. 상기 면역기능 저하로 인한 질환은 종류를 제한하지 않으며, 예를 들면, 천식, 계절성 또는 통년성 비염, 알러지성 비염, 결막염, 아토피성 피부염, 두드러기, 적혈구의 용혈, 급성 사구체 신염, 감기, 만성 피로 또는 암 등일 수 있다.As described above, the alcohol extract or fraction thereof of the elm bark provided by the present invention promotes the proliferation of the immune cells and promotes the secretion of the immuno-related cytokine, thus exhibiting the effect of enhancing the immune activity. In addition, the alcohol extract of the elm bark according to the present invention can be used as a pharmaceutical composition for preventing or treating various immune diseases caused by lowered immune function by enhancing the immune activity as described above. The disease caused by the immune function depression is not limited in kind, and includes, for example, asthma, seasonal or perennial rhinitis, allergic rhinitis, conjunctivitis, atopic dermatitis, urticaria, hemolysis of red blood cells, acute glomerulonephritis, Cancer, and the like.

본 발명의 약학 조성물은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명에서, 상기 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. The pharmaceutical compositions of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients or diluents conventionally used in the manufacture of pharmaceutical compositions. Specifically, the pharmaceutical composition may be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral preparations, suppositories and sterilized injection solutions according to a conventional method . In the present invention, the carrier, excipient and diluent which may be contained in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate , Calcium silicate, cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. In the case of formulation, a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant is usually used. Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, Sucrose, lactose, gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral use may include various excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, preservatives, etc. in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used in suspension, liquid solutions, emulsions and syrups have. Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerogelatin and the like can be used.

본 발명의 약학 조성물에 포함된 상기 느릅나무 수피의 알코올 추출물 또는 그의 분획물의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 최종 조성물 총 중량을 기준으로 0.0001 내지 50 중량%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 20 중량%의 함량으로 포함될 수 있다. The content of the alcohol extract of the elm bark or the fraction thereof contained in the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, but is preferably 0.0001 to 50% by weight, more preferably 0.01 to 20% by weight, .

상기 본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명의 용어 "약제학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 단독으로로 투여하거나 공지된 면역치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered in a pharmaceutically effective amount. The term "pharmaceutically effective amount " of the present invention means a therapeutic or prophylactic treatment of a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment or prevention And the effective dose level refers to the level of the disease to be treated, the severity of the disease, the activity of the drug, the age, body weight, health, sex, sensitivity of the patient to the drug, Duration, duration of administration, factors involved in combination with or contemporaneously with the composition of the present invention, and other factors well known in the medical arts. The pharmaceutical composition of the present invention may be administered alone or in combination with a known immunotherapeutic agent. It is important to take into account all of the above factors and administer an amount that will achieve the maximum effect in the least amount without side effects.

본 발명의 약학 조성물의 투여량은 사용목적, 질환의 중독도, 환자의 연령, 체중, 성별, 기왕력, 또는 유효성분으로서 사용되는 물질의 종류 등을 고려하여 당업자가 결정할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약학 조성물은 성인 1인당 약 1㎍ 내지 약 100 mg/kg, 바람직하게는 10㎍ 내지 약 10 mg/kg로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention can be determined by those skilled in the art in consideration of the purpose of use, the degree of addiction to the disease, the age, body weight, sex, history, or kind of the substance used as the active ingredient. For example, the pharmaceutical composition of the present invention may be administered at about 1 μg to about 100 mg / kg, preferably 10 μg to about 10 mg / kg per adult, and the frequency of administration of the composition of the present invention is particularly It is not limited, but it can be administered once a day or divided into several doses. The dose is not intended to limit the scope of the invention in any way.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 실시양태로서, 본 발명은 상기 약학 조성물을 약제학적으로 유효한 양으로 면역력 약화된 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 면역활성을 증강시키는 방법을 제공한다.In another aspect of the present invention, the present invention provides a method for enhancing an immune activity, comprising administering the pharmaceutical composition to a subject other than a human having a weakened immune response in a pharmaceutically effective amount.

본 발명의 용어 "개체"란 유전적인 요인 또는 면역관련 질환의 발병으로 인하여 면역활성이 약화되거나 또는 약화된 쥐, 가축 등을 포함하는 포유동물, 양식어류 등을 제한 없이 포함할 수 있다. 이때, 면역활성의 약화를 유발시킬 수 있는 면역관련 질환은 특별히 이에 제한되지 않으나 바람직하게는 천식, 계절성 또는 통년성 비염, 알러지성 비염, 결막염, 아토피성 피부염, 두드러기, 적혈구의 용혈, 급성 사구체신염, 감기, 만성 피로, 암 등이 될 수 있다.The term "individual" of the present invention can include, without limitation, a genetic factor or a mammal including a rat, a livestock, etc. which has weakened or weakened immune activity due to the onset of an immune related disease or the like. The immune-related diseases that can cause the weakening of the immune activity are not particularly limited, but are preferably asthma, seasonal or perennial rhinitis, allergic rhinitis, conjunctivitis, atopic dermatitis, urticaria, red blood cell hemolysis, acute glomerulonephritis, Cold, chronic fatigue, cancer, and the like.

본 발명의 면역증강용 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여 등의 경로를 통해 투여 될 수 있다. 다만, 경구 투여 시에는 위산에 의하여 상기 아출의 추출물, 그의 분획물 또는 이로부터 유래된 9종의 화합물이 변성될 수 있기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다. The administration route of the pharmaceutical composition for immunostaining of the present invention can be administered through any ordinary route as long as it can reach the target tissue. The pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, but may be administered by intraperitoneal administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, oral administration, intranasal administration, intrapulmonary administration, rectal administration and the like &Lt; / RTI > However, since oral extracts may denature the extract, its fractions or the nine compounds derived therefrom by gastric acid, the oral composition should be formulated so as to coat the active agent or protect it from degradation at the top . In addition, the composition may be administered by any device capable of transferring the active agent to the target cell.

본 발명에서 제공하는 느릅나무 수피의 알코올 추출물은 종래의 열수 추출물에 비하여 현저하게 향상된 면역세포 증식 촉진활성을 나타내므로, 보다 향상된 면역증강 효과를 나타내는 제제의 개발에 널리 활용될 수 있을 것이다. The alcohol extract of the elm bark provided in the present invention exhibits remarkably improved immune cell proliferation promoting activity as compared with the conventional hot-water extract, so that it can be widely used for the development of an agent exhibiting an improved immune enhancing effect.

도 1은 본 발명의 느릅나무 수피의 메탄올 추출물을 단독으로 또는 다른 면역세포 증식촉진 물질과 혼합하여 처리함에 따른, 면역세포의 증식수준의 변화를 시간의 경과에 따라 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7)의 처리농도에 따른, 마우스의 비장세포의 증식수준의 변화를 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 느릅나무 수피의 메탄올 추출물의 처리농도에 따른, 면역세포의 증식수준의 변화를 시간의 경과에 따라 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4a는 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7), Con A 또는 LPS이 다양한 농도의 조합에 따른, 비장세포에서 분비되는 IL-2 수준의 변화를 나타내는 그래프이다.
도 4b는 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7), Con A 또는 LPS이 다양한 농도의 조합에 따른, 비장세포에서 분비되는 IL-4 수준의 변화를 나타내는 그래프이다.
도 5a는 느릅나무 수피의 열수 추출물(UCWE)의 처리수준 및 처리시간의 변화에 따른 비장세포의 증식수준의 변화를 나타내는 그래프이다.
도 5b는 느릅나무 수피의 에탄올 추출물(UCEE)의 처리수준 및 처리시간의 변화에 따른 비장세포의 증식수준의 변화를 나타내는 그래프이다.FIG. 1 is a graph showing the results of measurement of the change in the level of proliferation of immune cells with time, as a result of treatment with the methanol extract of elm bark of the present invention alone or in combination with other immune cell proliferation promoting substances.
2 is a graph showing changes in the level of proliferation of splenocytes in mice according to the treatment concentration of alcohol extract (DEU-7) of elm bark.
FIG. 3 is a graph showing the results of measurement of changes in the level of proliferation of immune cells with time, according to the treatment concentration of the methanol extract of elm bark of the present invention.
FIG. 4A is a graph showing changes in IL-2 levels secreted by splenocytes in various concentrations of alcohol extract (DEU-7), Con A, or LPS in elm bark.
FIG. 4B is a graph showing changes in IL-4 levels secreted from splenocytes by various concentrations of alcohol extract (DEU-7), Con A, or LPS in elm bark.
FIG. 5A is a graph showing changes in the level of proliferation of spleen cells according to the treatment level and the treatment time of the hot-water extract (UCWE) of elm bark.
FIG. 5B is a graph showing changes in the level of proliferation of splenocytes according to the treatment level and the treatment time of the ethanol extract (UCEE) of elm bark.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예 1: 천연물 유래 메탄올 추출물의 제조 및 면역증강 활성을 나타내는 추출물의 선별Example 1: Preparation of methanol extract from natural products and screening of extracts showing immunity enhancing activity

본 발명자가 보유하고 있는 천연물 메탄올 추출물 라이브러리 (266종)를 토대로 하여, 기존의 면역 세포 증식능이 보고 되어 있거나 식품으로서의 사용이 불가능한 소재들은 배제하고, 종래 문헌을 통하여 보고가 되지 않은 소재 11종을 선정하였다. 선정된 11종의 소재 각각을 고압살수 세척하고, 분쇄하여 분말화 하였으며, 상기 분말을 실온에서 메탄올에 함침하여 각각의 메탄올 추출물을 제조하였다.On the basis of the natural product methanol extract library (266 kinds) possessed by the present inventors, 11 kinds of materials which have not been reported through conventional literature are selected Respectively. Each of the selected 11 kinds of materials was washed with high pressure spraying, pulverized and powdered, and each of the methanol extracts was prepared by impregnating the powder with methanol at room temperature.

상기 수득한 각각의 메탄올 추출물을 Balb/c 특정 병원체 부재 마우스(samtako. Korea)의 비장세포에서 유래된 면역세포(림프구)에 처리한 후, 상기 면역세포의 세포증식 촉진 수준을 비교한 결과, 느릅나무 수피의 메탄올 추출물이 가장 우수한 면역세포의 세포증식 촉진활성을 나타냄을 확인하였다.Each of the obtained methanol extracts was treated with immune cells (lymphocytes) derived from spleen cells of a Balb / c-specific pathogen member mouse (samtako. Korea), and the level of promoting cell proliferation of the immune cells was compared. The methanol extract of the bark extract showed the best cell proliferation promoting activity of immune cells.

실시예 2: 느릅나무 수피의 메탄올 추출물의 면역세포 증식 촉진활성 검증Example 2: Promoting activity of promoting immune cell proliferation of methanol extract of elm bark

상기 실시예 1에서 확인된 느릅나무 수피의 메탄올 추출물(DEU7)의 면역세포 증식촉진 활성을 평가하기 위하여, 느릅나무 수피의 메탄올 추출물(DEU7)을 단독, PHA와 동시처리 또는 LPS와 동시에 Balb/c 특정 병원체 부재 마우스(samtako. Korea)의 비장세포에서 유래된 면역세포(림프구)에 처리한 후, 72시간 동안 배양하면서, IncuCyte(Essen Bio-Science사)를 이용하여 배양시간의 경과에 따른 면역세포의 증식수준의 변화를 측정하였다(도 1). 이때, 상기 IncuCyte는 세포배양기에 설치하고, 장비내부에 세포 배양 마이크로플레이트를 장착하여, 장비내부의 현미경 렌즈와 카메라를 통해 실시간으로 세포 증식능을 모니터링하였다. 또한, 대조군으로는 추출용매인 메탄올을 처리한 것을 사용하고, 양성 대조군으로서, 상기 느릅나무 수피의 메탄올 추출물을 PHA 또는 LPS와 혼합하여 처리한 것을 사용하였다. PHA(Phytohemagglutinin)는 뮤코다당류 성분의 식물성혈구응집소(植物性血球凝集素)로서 T 림프구의 증식과 활성 증가를 초래하는 물질로 알려져 있고, LPS(Lipopolysaccaride)는 지질과 다당체가 공유결합해서 연결되는 복합체로, 그람 음성 세균의 세포벽 성분으로서 존재하며 T림프구 비의존적 B 림프구 증식을 초래하는 물질로 알려져 있다.To evaluate the immune cell proliferation promoting activity of the elm bark extract (DEU7) identified in Example 1, methanol extract (DEU7) of the elm bark was treated with PHA alone or simultaneously with Balb / c The cells were treated with immune cells (lymphocytes) derived from spleen cells of a specific pathogen-free mouse (samtako. Korea), and cultured for 72 hours. Immunocytes were cultured with IncuCyte (Essen Bio-Science) (Fig. 1). At this time, the IncuCyte was installed in a cell incubator, and a cell culture microplate was installed inside the device, and cell proliferation was monitored in real time through a microscope lens and a camera inside the device. As a control group, methanol treated as an extraction solvent was used, and as a positive control, the methanol extract of the elm bark was treated with PHA or LPS. PHA (phytohemagglutinin) is a phytohemagglutinin (phytohemagglutinin) component of mucopolysaccharide and is known to cause the proliferation and activity increase of T lymphocytes. LPS (Lipopolysaccaride) is a complex in which lipids and polysaccharides are covalently linked , Which is present as a cell wall component of gram negative bacteria and is known to cause T lymphocyte-independent B lymphocyte proliferation.

도 1은 본 발명의 느릅나무 수피의 메탄올 추출물을 단독으로 또는 다른 면역세포 증식촉진 물질과 혼합하여 처리함에 따른, 면역세포의 증식수준의 변화를 시간의 경과에 따라 측정한 결과를 나타내는 그래프이다. 도 1에서 보듯이, 느릅나무 수피의 메탄올 추출물을 단독으로 또는 다른 면역세포 증식촉진 물질과 혼합하여 처리할 경우에는, 면역세포의 증식이 촉진됨을 확인하였다.FIG. 1 is a graph showing the results of measurement of the change in the level of proliferation of immune cells with time, as a result of treatment with the methanol extract of elm bark of the present invention alone or in combination with other immune cell proliferation promoting substances. As shown in FIG. 1, when the methanol extract of elm bark was treated alone or mixed with other immune cell proliferation promoting substances, it was confirmed that the proliferation of immune cells was promoted.

따라서, 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7)은 면역세포의 증식을 촉진시킬 수 있음을 알 수 있었다.Therefore, the alcohol extract of elm bark (DEU-7) could promote the proliferation of immune cells.

실시예 3: 느릅나무 수피의 메탄올 추출물의 비장세포 증식 촉진활성 검증Example 3: Promotion of splenocyte proliferation promoting activity of methanol extract of elm bark

Balb/c 특정 병원체 부재 마우스(samtako. Korea)로 부터 비장을 적출하고, 적출된 비장에 RPMI 1640 배지를 가한 다음, stainless mesh (0.038 aperture, Sigma-aldrich korea)를 사용하여 비장을 분쇄하여, 비장세포 분쇄물을 원심분리하여, 침전물을 수득하였다. 상기 수득한 침전물에 RBC 용혈완충액(Biolegend)을 가하여 침전물에 포함된 적혈구를 용혈시킨 다음, 이를 원심분리하여 적혈구 용혈층이 제거된 비장세포를 수득하였다. 상기 수득한 비장세포를 세척하고, 10% FBS를 포함하는 RPMI 1640 배지에 현탁시킨 후, 배양하였다.The spleen was removed from a Balb / c-specific pathogen-free mouse (samtako. Korea), and spleen was pulverized using a stainless mesh (0.038 aperture, Sigma-aldrich korea) The cell lysate was centrifuged to obtain a precipitate. RBC hemolysis buffer (Biolegend) was added to the obtained precipitate to hemolyze red blood cells contained in the precipitate, and then centrifuged to obtain spleen cells from which erythro hemolyzed layer was removed. The spleen cells obtained were washed, suspended in RPMI 1640 medium containing 10% FBS, and then cultured.

상기 배양된 비장세포에 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7)을 서로 다른 농도(0, 25, 50 또는 100㎍/㎖)로 처리하고, 72시간 동안 배양한 다음, 세포계수기(hemocytometer) 및 트립신 추출법(trypan blue exclusion method)을 이용하여 배양된 비장세포의 수를 계수하고 비교하였다(도 2).The cultured spleen cells were treated with different concentrations (0, 25, 50 or 100 μg / ml) of alcohol extract (DEU-7) of elm bark and incubated for 72 hours. Cell counts The number of spleen cells cultured using the trypan blue exclusion method was counted and compared (FIG. 2).

도 2는 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7)의 처리농도에 따른, 마우스의 비장세포의 증식수준의 변화를 나타내는 그래프이다. 도 2에서 보듯이, 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7)의 처리농도가 증가할 수록 비장세포의 수가 증가함을 확인하였다.2 is a graph showing changes in the level of proliferation of splenocytes in mice according to the treatment concentration of alcohol extract (DEU-7) of elm bark. As shown in FIG. 2, it was confirmed that the number of spleen cells was increased as the concentration of alcohol extract of elm bark (DEU-7) was increased.

실시예 4: MTT 분석법을 이용한 느릅나무 수피의 메탄올 추출물의 세포증식 촉진활성 검증Example 4: Assay of cell proliferation promoting activity of methanol extract of elm bark using MTT assay

상기 실시예 3에서 배양된 비장세포를 RPMI 1640 배지에 현탁시키고, 상기 현탁액을 96웰 플레이트에 웰당 1x10⁶ 세포수가 되도록 접종한 다음, 상기 느릅나무 수피의 메탄올 추출물(DEU-7), Con A 또는 LPS를 다양한 농도(0, 15, 25, 50 또는 100㎍/㎖)로 처리하고, 5% CO₂ 및 37℃의 조건에서 72시간 동안 배양하여 각각의 배양물을 수득하였다. 상기 수득한 각 배양물에 MTT 용액(5mg/㎖) 20㎕를 가하고 4시간 동안 반응시킨 다음, 반응물을 원심분리하여 침전물을 수득하고, 상기 수득한 침전물에 용출액 100 ㎕를 가하여 침전물에 포함된 세포에서 생성된 포르마잔 결정을 용해시킨 다음, 570 nm에서 흡광도를 측정하였다(도 3). 이때, 양성대조군으로서 Con A 또는 LPS를 처리한 것을 사용하였다. 상기 Con A(Concanavalin A)는 림프구 중에서도 T 림프구의 증식과 활성 증가를 초래하는 물질로 알려져 있다.The spleen cells cultured in Example 3 were suspended in RPMI 1640 medium, and the suspension was inoculated to a 96-well plate at a rate of 1 × 10 ⁶ cells / well. Then, the methanol extract (DEU-7), Con A LPS was treated with various concentrations (0, 15, 25, 50 or 100 占 퐂 / ml) and cultured at 5% CO ₂ and 37 ° C for 72 hours to obtain respective cultures. To each of the cultures obtained, 20 μl of MTT solution (5 mg / ml) was added and reacted for 4 hours. The reaction product was centrifuged to obtain a precipitate. 100 μl of the eluate was added to the precipitate, And the absorbance was measured at 570 nm (FIG. 3). At this time, a positive control group treated with Con A or LPS was used. Con A (Concanavalin A) is known to be a substance that causes proliferation and activity increase of T lymphocytes among lymphocytes.

도 3은 본 발명의 느릅나무 수피의 메탄올 추출물의 처리농도에 따른, 면역세포의 증식수준의 변화를 시간의 경과에 따라 측정한 결과를 나타내는 그래프이다. 도 3에서 보듯이, 본 발명의 본 발명의 느릅나무 수피의 메탄올 추출물은 농도의존적으로 면역세포의 증식수준을 향상시킬 수 있음을 알 수 있었다.FIG. 3 is a graph showing the results of measurement of changes in the level of proliferation of immune cells with time, according to the treatment concentration of the methanol extract of elm bark of the present invention. As shown in FIG. 3, the methanol extract of elm bark of the present invention of the present invention can improve the level of proliferation of immune cells in a concentration-dependent manner.

실시예 5: 느릅나무 수피의 메탄올 추출물의 면역관련 사이토카인의 분비량 촉진활성 검증Example 5 Verification of Secretion-promoting Activity of Immune-Related Cytokine of Methanol Extract of Elm Bark

상기 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7), Con A 또는 LPS를 다양한 농도(0, 15, 25, 50 또는 100㎍/㎖)의 조합으로 처리하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 4와 동일한 방법을 수행하여 각각의 배양물을 수득하였다. 상기 배양물의 배양상등액을 면역관련 사이토카인(IL-2 또는 IL-4)의 분비량을 측정하기 위한 ELISA 키트에 적용하여, 배양된 각 비장세포에서 분비된 면역관련 사이토카인(IL-2 또는 IL-4)의 분비량 변화를 측정하였다(도 4a 및 4b).The same procedure as in Example 4 was carried out except that the alcohol extract (DEU-7), Con A or LPS of the elm bark was treated with a combination of various concentrations (0, 15, 25, 50 or 100 μg / Each culture was obtained. The culture supernatant of the culture was applied to an ELISA kit for measuring the secretion amount of the immuno-related cytokine (IL-2 or IL-4), and the immuno-related cytokine secreted from each cultured splenocyte (IL- 4) were measured (Figs. 4A and 4B).

도 4a는 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7), Con A 또는 LPS이 다양한 농도의 조합에 따른, 비장세포에서 분비되는 IL-2 수준의 변화를 나타내는 그래프이고, 도 4b는 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7), Con A 또는 LPS이 다양한 농도의 조합에 따른, 비장세포에서 분비되는 IL-4 수준의 변화를 나타내는 그래프이다. 도 4a 및 4b에서 보듯이, Con A 또는 LPS의 처리에 의하여 영향을 받는 경향을 나타내었으나, 대체로 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7)의 처리양이 증가할 수록 비장세포에서 분비되는 면역관련 사이토카인(IL-2 또는 IL-4)의 수준이 증가함을 알 수 있었다.FIG. 4A is a graph showing changes in levels of IL-2 secreted from splenocytes by various concentrations of alcohol extract (DEU-7), Con A or LPS in elm bark, FIG. 4 is a graph showing changes in the level of IL-4 secreted by spleen cells, according to the combination of various concentrations of alcohol extract (DEU-7), Con A or LPS. As shown in FIGS. 4a and 4b, the tendency to be affected by the treatment of Con A or LPS, however, in general, as the amount of treatment of alcohol extract (DEU-7) of elm bark increases, (IL-2 or IL-4) levels were increased.

실시예 6: 느릅나무 수피 추출물의 종류에 따른 면역증강 활성 비교Example 6: Comparison of immune enhancing activity according to kinds of elm bark extract

먼저, 느릅나무 수피를 물에 침지하고, 95℃에서 6 시간동안 추출한 다음, 추출물을 200mesh의 체로 여과하여 액상성분을 수득하였다. 상기 수득한 액상성분을 48시간 동안 동결건조시켜서, 느릅나무 수피의 열수 추출물(Ulmus cortex water extract, UCWE)을 제조하였다.First, the elm bark was immersed in water and extracted at 95 DEG C for 6 hours. Then, the extract was filtered with a 200 mesh sieve to obtain a liquid component. The obtained liquid components were lyophilized for 48 hours to prepare Ulmus cortex water extract (UCWE) of elm bark.

또한, 느릅나무 수피를 95% 에탄올에 침지하고, 45℃에서 2 시간씩 3회 환류 추출한 다음, 추출물을 200mesh의 체로 여과하여 액상성분을 수득하였다. 상기 수득한 액상성분을 45℃에서 감압농축(N-1000SW, EYELA, Japan)한 후 동결 건조(FDU21000, EYELA, Japan)하여 느릅나무 수피의 에탄올 추출물(Ulmus cortex ethanol extract, UCEE)을 제조하였다.The elm bark was immersed in 95% ethanol and refluxed three times at 45 ° C for 2 hours. The extract was then filtered through a 200 mesh sieve to obtain a liquid component. The obtained liquid component was concentrated under reduced pressure (N-1000SW, EYELA, Japan) at 45 ° C and then lyophilized (FDU21000, EYELA, Japan) to prepare Ulmus cortex ethanol extract (UCEE).

한편, 상기 느릅나무 수피의 알코올 추출물(DEU-7), Con A 또는 LPS 대신에, 상기 제조된 UCWE 또는 UCEE를 다양한 농도(0, 25, 50 또는 100㎍/㎖)로 처리하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 4와 동일한 방법을 사용하여 세포 증식수준을 측정하였다(도 5a 및 5b). 이때, 대조군으로는 UCWE 또는 UCEE를 처리하지 않고 배양한 비장세포를 사용하였다.On the other hand, except that the above-prepared UCWE or UCEE was treated at various concentrations (0, 25, 50 or 100 占 퐂 / ml) instead of the alcohol extract (DEU-7), Con A or LPS of the elm bark , And the level of cell proliferation was measured using the same method as in Example 4 (FIGS. 5A and 5B). At this time, splenocytes cultured without treatment with UCWE or UCEE were used as a control group.

도 5a는 느릅나무 수피의 열수 추출물(UCWE)의 처리수준 및 처리시간의 변화에 따른 비장세포의 증식수준의 변화를 나타내는 그래프이고, 도 5b는 느릅나무 수피의 에탄올 추출물(UCEE)의 처리수준 및 처리시간의 변화에 따른 비장세포의 증식수준의 변화를 나타내는 그래프이다. 도 5a에서 보듯이, 100 ㎍/㎖의 느릅나무 수피의 열수 추출물(UCWE)을 처리하고 72 시간 동안 배양된 비장세포의 수준은 대조군에 비하여 약 1.2배 증가되어, 거의 증가되지 않는 양상을 나타낸 반면, 도 5b에서 보듯이, 25 ㎍/㎖의 느릅나무 수피의 에탄올 추출물(UCEE)을 처리하여 24 내지 72 시간 동안 배양된 비장세포의 수준은 대조군에 비하여 약 1.2배 증가되었고, 50 ㎍/㎖의 느릅나무 수피의 에탄올 추출물(UCEE)을 처리하여 24 내지 72 시간 동안 배양된 비장세포의 수준은 대조군에 비하여 약 1.5배 증가되었으며, 100 ㎍/㎖의 느릅나무 수피의 에탄올 추출물(UCEE)을 처리하여 24 내지 72 시간 동안 배양된 비장세포의 수준은 대조군에 비하여 약 2 내지 3배 증가됨을 확인하였다.FIG. 5A is a graph showing changes in the level of proliferation of splenocytes according to the treatment level and the treatment time of the hot water extract (UCWE) of the elm bark, FIG. 5B is a graph showing the treatment level of the ethanol extract (UCEE) FIG. 5 is a graph showing changes in the level of proliferation of spleen cells with changes in treatment time. FIG. As shown in FIG. 5A, the level of splenocytes cultured for 72 hours was about 1.2-fold higher than that of the control group, while the level of 100-μg / ml of hydrothermal extract (UCWE) As shown in FIG. 5B, the level of spleen cells cultured for 24 to 72 hours after treatment with 25 μg / ml of the ethanol extract of elm bark (UCEE) was increased about 1.2 times as compared with the control, and 50 μg / The level of spleen cells cultured for 24 to 72 hours was increased about 1.5 times as compared with that of the control, and the ethanol extract (UCEE) of 100 ㎍ / ㎖ of elm bark was treated with ethanol extract of elm bark (UCEE) The level of spleen cells cultured for 24 to 72 hours was increased by about 2 to 3 times as compared with the control.

따라서, 동일한 느릅나무 수피로부터 수득한 추출물이라 하더라도, 에탄올 추출물이 열수 추출물 보다 향상된 면역세포 증식촉진 활성을 나타냄을 알 수 있었다.Therefore, even if the extract was obtained from the same elm bark, the ethanol extract showed an enhanced immune cell proliferation promoting activity over the hot water extract.

Claims

A health functional food composition for immune enhancement comprising an alcohol extract of elm bark or a fraction thereof as an active ingredient.

The method according to claim 1,
Wherein the alcohol extract of the elm bark is obtained by extracting the elm bark or its pulverized product with an alcohol having 1 to 6 carbon atoms or a mixed solvent thereof.

The method according to claim 1,
Wherein the alcohol extract of the elm bark is obtained by extraction with ethanol.

The method according to claim 1,
Wherein the fraction is a fraction obtained by applying the alcohol extract of the elm bark to a method selected from the group consisting of a solvent fractionation method, an ultrafiltration fractionation method, a chromatographic fractionation method and a combination thereof.

A pharmaceutical composition for immunostaining comprising an alcohol extract of elm bark or a fraction thereof as an active ingredient.

6. The method of claim 5,
A pharmaceutical composition, which further comprises a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent.