KR20170142682A - A method for manufacturing fermented ginseng powder with antiinflammatory activity, and ginseng powder manufactured by the method - Google Patents

A method for manufacturing fermented ginseng powder with antiinflammatory activity, and ginseng powder manufactured by the method Download PDF

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KR20170142682A
KR20170142682A KR1020160076557A KR20160076557A KR20170142682A KR 20170142682 A KR20170142682 A KR 20170142682A KR 1020160076557 A KR1020160076557 A KR 1020160076557A KR 20160076557 A KR20160076557 A KR 20160076557A KR 20170142682 A KR20170142682 A KR 20170142682A
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최경민
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황승미
고선미
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Abstract

The present invention relates to a method of manufacturing fermented red ginseng powder. The method includes: a step of making a red ginseng powder medium by using sterilized red ginseng powder; and a step of making fermented red ginseng powder by engrafting a mixed strain into the red ginseng powder medium and then fermenting the mixture. The mixed strain is mixed with at least one among a bifidobacterium longum strain, a blifidobacterium lactis strain, a lactobacillus rhamnosus strain, a Lactobacillus acidophillus strain, and a streptococcus thermophiles strain, and the red ginseng powder and the mixed strain are fermented at a ratio of 10:2. The fermented red ginseng powder is capable of including ginsenoside Rg3 content and improving anti-inflammatory activity in human bodies.

Description

항염증 기능을 촉진하기 위한 홍삼 분말 발효물 제조 방법 및 상기 방법으로 제조된 홍삼 분말 발효물{A METHOD FOR MANUFACTURING FERMENTED GINSENG POWDER WITH ANTIINFLAMMATORY ACTIVITY, AND GINSENG POWDER MANUFACTURED BY THE METHOD}FIELD OF THE INVENTION [0001] The present invention relates to a method for producing a red ginseng powder fermented product for promoting an anti-inflammatory function and a red ginseng powder fermented product prepared by the above method,

본 발명은 항염증 기능을 촉진하기 위한 홍삼 분말 발효물 제조 방법 및 상기 방법으로 제조된 홍삼 분말 발효물에 관한 것이다.The present invention relates to a method for preparing fermented red ginseng powder for promoting anti-inflammatory function and fermented red ginseng powder produced by the method.

구체적으로, 멸균된 홍삼 분말을 이용하여 홍삼 분말 배지를 제조하는 단계; 및 상기 홍삼 분말 배지에 혼합 균주를 접종하고 발효해서 홍삼 분말 발효물을 제조하는 단계;를 포함하되, 상기 혼합 균주는 비피도박테리움(Bifidobacterium longum)균주, 비피도박테리움 락티스(Blifidobacterium lactis)균주, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)균주, 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophillus)균주 및 스트렙토코코스 써모필러스(Streptococcus thermophiles)균주 중에서 한개 이상의 균주를 혼합한 것이고, 상기 홍삼 분말과 혼합 균주를 10:2의 비율이 되도록 하여 발효하는 것을 기술적 특징으로 하고 있다.Specifically, the method comprises: preparing red ginseng powder using sterilized red ginseng powder; And the step of preparing the red ginseng powder medium red ginseng powder fermented by inoculation and fermentation of mixed strain; including, but, the mixed culture is Bifidobacterium (Bifidobacterium longum) strain, Bifidobacterium lactis (Blifidobacterium lactis) A strain of Lactobacillus rhamnosus , a strain of Lactobacillus acidophilus , and a strain of Streptococcus thermophiles , wherein the red ginseng powder and the mixed strain 10: 2 ratio.

또한, 항염증 기능을 촉진하기 위한 홍삼 분말 발효물은 40μg/mL의 농도가 되도록 농축하여 제조되는 것을 기술적 특징으로 하고 있다.In addition, the red ginseng powder fermented product for promoting anti-inflammatory function is produced by concentrating to a concentration of 40 μg / mL.

또한, 항염증 기능을 촉진하기 위한 홍삼 분말 발효물은 4~5일 발효하여 제조되는 것을 기술적 특징으로 하고 있다. In addition, red ginseng powder fermented to promote anti-inflammatory function is produced by fermentation for 4 to 5 days.

홍삼(Panax ginseng C.A. Meyer)은 오갈피나무과에 속하는 다년생 풀인 4~6년근 수삼을 선별하여 껍질을 벗기지 않고 증기로 쪄서 건조한 담황갈색 또는 담적갈색의 인삼을 말한다.Red ginseng ( Panax ginseng CA Meyer) is a perennial grass belonging to the Acanthopagaceae family and is selected from 4-6 year old root ginseng and dried by steaming without peeling. It is a pale yellowish brown or light reddish brown ginseng.

이러한 홍삼은 한의학적으로는, 성질은 약간 따뜻하고 맛은 달고 약간 쓰며, 비, 폐, 심장으로 들어가 원기를 보충하고 진액을 만드는 등, 건강 증진과 질병 예방의 효과가 있는 대표적 한약재로 사용되어 왔다.Such red ginseng has been used as a typical medicinal herb which has the effect of health promotion and prevention of disease, such as being slightly warm in the nature, slightly sweet in taste, and entering the rain, the lungs, and the heart,

한편 홍삼은 증숙 후 건조하는 과정에서 인삼의 유효 성분들이 열분해 과정을 거쳐 화학적 변화를 일으켜 수삼이나 백삼 등 다른 인삼에는 들어 있지 않은 홍삼만의 특수성분인 Rg3를 비롯한 8종의 특수 성분을 생성한다.On the other hand, red ginseng produces 8 special ingredients including Rg3, which is a special ingredient only in red ginseng, which is not contained in other ginseng such as ginseng and white ginseng.

이러한 홍삼의 특수성분 중 하나인 Rg3는 암세포 전이 억제작용, 혈소판 응집억제작용, 항혈전 작용, 혈관이완 작용 및 항암제의 내성 억제작용에 강한 효능이 있다.One of the special components of red ginseng, Rg3, has a strong effect on cancer cell metastasis inhibiting action, platelet aggregation inhibiting action, antithrombotic action, vasodilating action and anticancer drug resistance inhibiting action.

그러나 이러한 진세노사이드 Rg3는 진세노사이드 Rg3 자체로 효능을 나타내는 것이 아니라, 사람의 장내에 서식하고 있는 장내 미생물에 의해 분해되어야만 체내로 흡수되어 효과가 나타난다. However, these ginsenosides Rg3 do not show efficacy as ginsenoside Rg3 itself, but are effectively absorbed into the body only when they are degraded by intestinal microorganisms living in human intestines.

하지만, 사람의 장내에 서식하고 있는 장내 미생물은 개인마다 차이가 있어 인삼이나 홍삼을 동일한 조건으로 복용한다고 하더라도 개인에 따라 서로 다른 효과를 나타내거나 효과가 없는 것으로 나타났다.However, intestinal microorganisms living in the intestines of a human are different from each other, and even if they take ginseng or red ginseng under the same conditions, they show different effects or have different effects according to individuals.

위와 같은 문제점을 해결하고자 최근에는 이러한 홍삼의 특수 성분이 인체 내로 용이하게 흡수될 수 있도록 홍삼을 장내 미생물 또는 유산균을 이용하여 발효하거나 효소를 처리하는 방법 등이 사용되고 있다.In order to solve the above problems, recently, a method of fermenting red ginseng using intestinal microorganisms or lactic acid bacteria or treating an enzyme so that the special ingredient of red ginseng can be easily absorbed into the human body is used.

이에 본 출원인은 홍삼 및 유산균을 이용한 홍삼 분말 발효물을 만들어 홍삼의 특수 성분인 진세노사이드 Rg3를 포함시키는 것은 물론 항염증 기능을 증진시킬 수 있는 방법을 안출하였다.Accordingly, Applicant has made a method of enhancing anti-inflammatory function as well as including ginsenoside Rg3 as a special ingredient of red ginseng by making fermented red ginseng powder using red ginseng and lactic acid bacteria.

본 발명과 관련된 선행기술로는, 대한민국 공개특허공보 제10-2012-0117116호는 발효홍삼 추출물을 함유하는 피부세포 사멸방지용 화장료 조성물에 관한 것이 기재되어 있다.As a prior art related to the present invention, Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2012-0117116 discloses a cosmetic composition for preventing skin cell death containing fermented red ginseng extract.

청구항 8을 살펴보면, 홍삼으로부터 추출용매를 이용하여 홍삼 추출물을 얻는 단계; 상기 홍삼 추출물에 락토바실러스 퍼멘텀을 접종하여 30 내지 37℃에서 3 내지 4일간 배양하는 단계; 상기 발효액에 아스페르길루스 니가 및 트리코더마 리세이를 각각 접종하여 25~30℃에서 3 내지 4일간 배양하는 단계; 및 상기 배양액을 숙성, 열처리 및 여과하여 발효홍삼 추출물을 얻는 방법이 기재되어 있다.According to the eighth aspect of the present invention, there is provided a method for producing red ginseng, comprising: obtaining red ginseng extract from red ginseng using an extraction solvent; Culturing the red ginseng extract at 30 to 37 DEG C for 3 to 4 days by inoculating Lactobacillus fermentum; Incubating the fermentation broth with Aspergillus niger and Trichoderma mariniferae respectively at 25 to 30 DEG C for 3 to 4 days; And a method of obtaining the fermented red ginseng extract by aging, heat treatment and filtration of the culture solution.

상기 선행기술은 발효홍삼을 가공하는 시간이 7~13일로써 다소 장기간이 소요되어 대량으로 신속하게 생산하기 어려울 수도 있다.In the prior art, the processing time of the fermented red ginseng is 7 to 13 days, which takes a long period of time, so that it may be difficult to rapidly produce the fermented red ginseng in large quantities.

또한, 대한민국 등록특허공보 제10-1037412호는 발효 흑홍삼 제조방법이 기재되어 있다.Korean Patent Registration No. 10-1037412 discloses a fermented black ginseng production method.

청구항 1을 살펴보면, 수삼근 또는 홍삼을 절단한 후 정제수를 가하여 혼합하는 단계; 상기 혼합물에 아밀라이제 또는 셀룰라아제를 가하여 40 내지 60℃의 온도에서 4 내지 48시간 동안 효소 분해시키는 단계; 상기 분해액을 여과 제거하고, 수삼근 또는 홍삼을 60 내지 80℃의 온도에서 24 내지 120시간 동안 숙성시키는 단계; 상기 숙성된 수삼근 또는 홍삼을 100 내지 150℃의 온도 및 1기압의 압력에서 4 내지 120시간 동안 흑홍삼을 제조하는 단계; 및 상기 흑홍삼에 상기 여과된 분해액을 가하고, 유산균을 가하여 발효시키는 단계로 이루어진 발효 흑홍삼의 제조방법이 기재되어 있다.According to claim 1, there is provided a method for preparing a red ginseng product, Adding amylase or a cellulase to the mixture and enzymatically digesting the mixture at a temperature of 40 to 60 DEG C for 4 to 48 hours; Filtering the decomposed liquid and aging thrice or ginseng at a temperature of 60 to 80 캜 for 24 to 120 hours; Preparing the aged triclinic or red ginseng for 4 to 120 hours at a temperature of 100 to 150 ° C and a pressure of 1 atm; And adding the filtered digestion solution to the black ginseng and adding lactic acid bacteria to the ginseng to ferment the fermented black ginseng.

상기 선행기술은 발효흑홍삼을 가공하는데 처리하는 단계가 많고 또한 장기간 가공시간을 필요로 하는 등 제조의 번거로움이 있다.The prior art has many steps for processing fermented black and red ginseng and requires a long time for processing such as manufacturing.

따라서 본 출원인은 홍삼 및 유산균을 이용한 홍삼 분말 발효물을 만들어 홍삼의 특수 성분인 진세노사이드 Rg3를 포함시키는 방법을 제공하되, 홍삼 분말 발효물의 가공시간을 줄이면서 항염증 기능을 촉진시키는 홍삼 분말 발효물을 개발하여 상업화 하고자 한다.Accordingly, the applicant of the present invention provides a method of making red ginseng powdery fermented product using red ginseng and lactic acid bacteria to include ginsenoside Rg3, which is a special ingredient of red ginseng, and to provide a method of reducing the processing time of red ginseng powder, We want to develop and commercialize water.

대한민국 공개특허공보 제10-2012-0117116호 (2012.10.24. 공개)Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2012-0117116 (published on October 24, 2012) 대한민국 등록특허공보 제10-1037412호 (2011.05.27. 공고)Korean Registered Patent No. 10-1037412 (issued on May 27, 2011)

본 발명의 해결과제는, 유용 미생물을 이용하여 진세노사이드 Rg3 함량을 포함시키고 체내 항염증 활성을 촉진시키기 위한 홍삼 분말 발효물을 제조하는 방법을 제공하고자 한다.The object of the present invention is to provide a method for preparing a red ginseng powder fermented product containing the ginsenoside Rg3 content using the useful microorganism and promoting the anti-inflammatory activity in vivo.

또한, 항염증 활성 촉진을 위해 최적의 발효시간으로 발효된 홍삼 분말 발효물을 제조하는 방법을 제공하고자 한다.Also, it is intended to provide a method for preparing fermented red ginseng powder fermented at an optimal fermentation time for promoting anti-inflammatory activity.

본 발명은, 멸균된 홍삼 분말을 이용하여 홍삼 분말 배지를 제조하는 단계; 및 상기 홍삼 분말 배지에 혼합 균주를 접종하고 발효해서 홍삼 분말 발효물을 제조하는 단계;를 포함하되, 상기 혼합 균주는 비피도박테리움(Bifidobacterium longum)균주, 비피도박테리움 락티스(Blifidobacterium lactis)균주, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)균주, 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophillus)균주 및 스트렙토코코스 써모필러스(Streptococcus thermophiles)균주 중에서 한개 이상의 균주를 혼합한 것이고, 상기 홍삼 분말과 혼합 균주를 10:2의 비율이 되도록 하여 발효하는 것을 특징으로 하는 홍삼 분말 발효물 제조 방법을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.The present invention relates to a method for preparing red ginseng powder, comprising the steps of: preparing a red ginseng powder medium using sterilized red ginseng powder; And a step of inoculating a mixed strain into the red ginseng powder medium and fermenting the fermented red ginseng powder to prepare a fermented product of red ginseng powder, wherein the mixed strain is selected from the group consisting of Bifidobacterium longum strain , Blifidobacterium lactis lactis) strain, Lactobacillus ramno suspension (Lactobacillus rhamnosus) strain, Lactobacillus know also the filler's (Lactobacillus acidophillus) strain and Streptomyces Cocos Thermo filler's would a mixture of one or more strains from (Streptococcus thermophiles) strain, the red ginseng powder and mixed And the strain is fermented at a ratio of 10: 2. The present invention provides a method for producing fermented red ginseng powder.

본 발명은, 홍삼 분말 발효물을 40μg/mL의 농도가 되도록 농축하여 제조되는 것을 특징으로 하는 홍삼 분말 발효물의 제조 방법을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.The present invention provides a process for producing fermented red ginseng powder characterized by being prepared by concentrating fermented red ginseng powder to a concentration of 40 μg / mL.

본 발명은, 홍삼 분말 발효물은 4~5일 발효하여 제조되는 것을 특징으로 하는 홍삼 분말 발효물의 제조 방법을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.The present invention provides a process for producing fermented red ginseng powder characterized in that fermented red ginseng powder is fermented for 4 to 5 days, thereby solving the technical problem.

본 발명인 홍삼 분말 발효물 제조방법에 따른 홍삼 분말 발효물은 진세노사이드 Rg3를 포함시키고, 체내 항염증 활성을 촉진시키는 효과를 보유하고 있다.The fermented product of red ginseng powder according to the method for producing fermented red ginseng powder according to the present invention contains ginsenoside Rg3 and promotes the antiinflammatory activity of the body.

본 발명인 홍삼 분말 발효물 제조방법에 따른 홍삼 분말 발효물은 항염증 활성 촉진을 위해 최적의 발효시간으로 발효되어, 체내 항염증 활성을 촉진시키는 효과를 보유하고 있다.The fermented red ginseng powder according to the present invention is effective for promoting antiinflammatory activity by fermenting at an optimum fermentation time for promoting antiinflammatory activity.

도 1은 홍삼 분말 발효물의 농도별 세포독성을 확인한 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 2는 홍삼 분말 발효물의 Nitrite 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 홍삼 분말 발효물의 PGE2 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 4는 홍삼 분말 발효물의 TNF-α 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 5는 홍삼 분말 발효물의 IL-1β 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 6은 홍삼 분말 발효물의 IL-6 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 7은 진세노사이드 Rg3 물질의 농도별 세포독성을 확인한 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 8는 진세노사이드 Rg3 물질의 농도별 Nitrite 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 9은 진세노사이드 Rg3 농도별 PGE2 생성억제 효과를 나타낸 것이다.
도 10은 진세노사이드 Rg3 농도별 TNF-α 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 11는 진세노사이드 Rg3 농도별 IL-6 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 12은 진세노사이드 Rg3 농도별 IL-1β 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 13는 진세노사이드 Rg3 농도별 염증 관련 단백질 iNOS와 COX-2의 발현 효과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 14는 진세노사이드 Rg3 농도별 염증 관련 MAPKs 단백질 발현 효과를 나타낸 것이다.
도 15은 진세노사이드 Rg3 농도별 염증 관련 NF-kB 핵과 세포질내에서의 발현변화를 나타낸 것이다.
FIG. 1 is a graph showing the results of confirming the cytotoxicity of red ginseng powder fermented by concentration.
FIG. 2 is a graph showing the inhibitory effect of red ginseng powder fermentation on nitrite generation.
FIG. 3 is a graph showing the effect of inhibiting PGE 2 production of red ginseng powder fermented product.
FIG. 4 is a graph showing the inhibitory effect of the fermented red ginseng powder on TNF-α production.
FIG. 5 is a graph showing the inhibitory effect of fermented red ginseng powder on IL-1? Production.
6 is a graph showing the inhibitory effect of fermented red ginseng powder on IL-6 production.
FIG. 7 is a graph showing the results of confirming cytotoxicity of the concentration of ginsenoside Rg3 material.
FIG. 8 is a graph showing the inhibitory effect of the concentration of ginsenoside Rg3 on nitrite formation by concentration.
9 shows the effect of inhibiting PGE 2 production by the concentration of ginsenoside Rg3.
Fig. 10 is a graph showing the inhibitory effect of TNF-α production on the concentration of ginsenoside Rg3.
Fig. 11 is a graph showing the inhibitory effect of IL-6 production on the concentration of ginsenoside Rg3.
FIG. 12 is a graph showing the inhibitory effect of IL-1β production on the concentration of ginsenoside Rg3.
Fig. 13 is a graph showing the expression effects of inflammation-related proteins iNOS and COX-2 on the concentration of ginsenoside Rg3.
Fig. 14 shows the effect of inflammation-related MAPKs protein expression on the concentration of ginsenoside Rg3.
Fig. 15 shows the expression of inflammation-related NF-kB nuclei and cytoplasmic changes in the concentration of ginsenoside Rg3.

본 명세서 및 청구 범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.The terms and words used in the present specification and claims should not be construed as limited to ordinary or dictionary terms and the inventor may properly define the concept of the term in order to best describe its invention It should be construed as meaning and concept consistent with the technical idea of the present invention.

따라서 본 명세서에 기재된 실시예, 참조예 및 도면에 기술된 사항은 본 발명의 가장 바람직한 일 예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다. Therefore, the embodiments described in the present specification, the reference examples, and the drawings are merely the most preferred examples of the present invention, and not all of the technical ideas of the present invention are described. Therefore, It should be understood that various equivalents and modifications may be present.

실시예Example 1. 홍삼 분말  1. Red ginseng powder 발효물Fermentation product 제조  Produce

① 멸균된 홍삼 분말 10 중량%를 포함하여 홍삼 분말 배지를 만든다.① Red ginseng powder medium containing 10% by weight of sterilized red ginseng powder is prepared.

② 상기 홍삼 분말 배지에 혼합 균주 2 중량%를 접종하고 30~35℃로 설정된 Shaking incubator에서 140~150rpm으로 4~5일 동안 배양하여 홍삼 분말 발효물을 제조하였다.② Red ginseng powder fermented product was prepared by inoculating 2% by weight of the mixed strain into the red ginseng powder medium and culturing at 140 to 150 rpm for 4 to 5 days in a shaking incubator set at 30 to 35 ° C.

또한, 상기 혼합 균주는 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)균주, 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis)균주, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)균주, 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophillus)균주 및 스트렙토코코스 써모필러스(Streptococcus thermophiles)균주 중에서 한개 이상의 균주를 혼합하고 접종하여 배양한다.Further, the mixed culture is Bifidobacterium ronggeom (Bifidobacterium longum) strain, Bifidobacterium lactis (Bifidobacterium lactis strain, Lactobacillus rhamnosus strain, Lactobacillus acidophilus strain and Streptococcus thermophiles strain And then cultured inoculated with one or more strains.

③ 상기 홍삼 분말 발효물은 40μg/mL가 되도록 농축하여 제조한다.(3) The red ginseng powder fermented product is prepared by concentrating to 40 μg / mL.

④ 상기 홍삼 분말 발효물을 농축하여 진세노사이드 Rg3가 5~20μg/mL가 되도록 한다.(4) The red ginseng powder fermentation product is concentrated to have a ginsenoside Rg3 of 5-20 μg / mL.

실험예Experimental Example 1. 홍삼 분말  1. Red ginseng powder 발효물의Fermented 항염증 분석실험 Anti-inflammatory assay

1-1. 홍삼 분말 1-1. Red ginseng powder 발효물의Fermented 항염증 분석실험 Anti-inflammatory assay

① 세포배양① Cell culture

Raw 264.7 대식세포는 10% FBS(fetal bovine serum) (Hyclone, Logan, UT, USA), 95~100units/mL penicillin 및 95~100μg/mL streptomycin을 첨가한 DMEM배지 (Hyclone, Logan, UT, USA)에서 세포수가 5x105 cell/mL가 되도록 하여 35~37℃로 설정된 5% CO2 incubator에서 배양한다. 세포의 배양액은 2~3일마다 교환하였고 70~80% 정도의 cell density를 보일 때 trypsin-EDTA로 처리하여 계대배양 하였다.Raw 264.7 macrophages were cultured in DMEM medium (Hyclone, Logan, UT, USA) supplemented with 10% fetal bovine serum (Hyclone, Logan, UT, USA), 95-100 units / mL penicillin and 95-100 μg / mL streptomycin. In a 5% CO 2 incubator set at 35 to 37 ° C such that the cell number is 5 × 10 5 cells / mL. The cell culture medium was changed every 2-3 days and when cell density of 70 ~ 80% was observed, it was treated with trypsin-EDTA and subcultured.

② MTT 시험법을 이용한 세포독성 측정(2) Cytotoxicity measurement using MTT assay

Raw 264.7 대식세포를 10% FBS를 포함하는 DMEM 배양액에 녹인 후 24well plate에 2×105cells/mL 농도로 접종하여 35~37℃로 설정된 5% CO2 incubator에서 하루 동안 안정화 시킨 후, 3% FBS를 포함하는 DMEM 배양액으로 교환하고 발효물을 농도별로 처리한 후 22~24시간 동안 배양하였다. Raw 264.7 macrophages were dissolved in DMEM culture medium containing 10% FBS, and then inoculated at a concentration of 2 × 10 5 cells / mL on a 24-well plate. The cells were stabilized in a 5% CO 2 incubator set at 35-37 ° C., FBS, and the fermented product was treated at different concentrations and cultured for 22 to 24 hours.

그 후 각 well의 배양액들을 제거하고 MTT solution(0.5~0.7mg/mL in PBS)을 10% FBS를 포함하는 DMEM 배양액에 녹여 95~100μL 첨가하고, 35~37℃에서 2~3시간 동안 반응시킨 후 각 well에 1~2mL의 dimethylsulfoxide (DMSO)를 첨가하여 결정체를 녹인 후 micro plate reader을 사용 측정 파장을 570nm로 하여 흡광도를 측정 하였다.After incubation, the MTT solution (0.5-0.7 mg / mL in PBS) was dissolved in DMEM medium containing 10% FBS, added with 95-100 μL, and incubated at 35-37 ° C for 2-3 hours. After adding 1 ~ 2 mL of dimethylsulfoxide (DMSO) to each well, the crystals were dissolved and the absorbance was measured using a microplate reader at a measurement wavelength of 570 nm.

③ Nitric oxide(NO)와 prostaglandin E2 (PGE2) 생성억제③ Inhibit the production of nitric oxide (NO) and prostaglandin E 2 (PGE 2 )

Raw 264.7 대식세포에 LPS를 1~2μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 각 시료를 농도별로 처리한 후 시간별로 배양하였다. 그 후 Griss reaction 방법을 통해 NO를 측정하고, ELISA 방법을 통해 PGE2를 측정하였다.Raw 264.7 macrophages were treated with LPS at a concentration of 1-2 μg / mL to induce inflammation. Each sample was treated at different concentrations and then cultured for a period of time. After that, NO was measured by Griss reaction method and PGE 2 was measured by ELISA method.

④ 염증 사이토카인 발현억제④ Suppression of inflammatory cytokine expression

Raw 264.7 대식세포에 LPS를 1~2μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 다음 각 시료를 농도별로 처리한 후 상층액을 이용하여 ELISA 방법을 통해 각종 염증관련 사이토카인 (TNF-α, IL-1β, IL-6) 생성을 확인한다.Raw 264.7 macrophages were treated with LPS at a concentration of 1 to 2 μg / mL to induce inflammation. Each sample was treated at different concentrations, and then various inflammation-related cytokines (TNF-α, IL- 1 [beta], IL-6).

1-2. 홍삼 분말 1-2. Red ginseng powder 발효물의Fermented 항염증 효과 분석 실험결과 Anti-inflammatory effect analysis result

① 홍삼 분말 발효물의 농도별 세포독성 확인① Identification of cytotoxicity by concentration of red ginseng powder fermented water

도 1은 홍삼 분말 발효물의 농도별 세포독성을 확인한 결과를 그래프로 나타낸 것이다. FIG. 1 is a graph showing the results of confirming the cytotoxicity of red ginseng powder fermented by concentration.

Raw 264.7 대식세포의 세포 독성을 확인하기 위해 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물을 농도별로 처리하고 22~24시간 동안 배양하여 세포독성을 측정한 결과 홍삼 분말 발효물은 160μg/mL 농도까지 독성이 없는 것을 확인하였다.To confirm the cytotoxicity of Raw 264.7 macrophages, the red ginseng powder fermented product prepared in Example 1 was treated for each concentration and cultured for 22 to 24 hours to measure cytotoxicity. As a result, the red ginseng powder fermented product had a concentration of 160 μg / mL It was confirmed that there is no toxicity.

② 홍삼 분말 발효물의 Nitrite 생성억제 효과② Inhibitory Effect of Red Ginseng Powder Fermentation on Nitrite Formation

도 2는 홍삼 분말 발효물의 Nitrite 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.FIG. 2 is a graph showing the inhibitory effect of red ginseng powder fermentation on nitrite generation.

Raw 264.7 대식세포에 LPS를 1~2μg/mL농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물을 농도별로 처리하여 NO 생성을 확인한 결과, 홍삼 분말 발효물은 농도 의존적으로 NO 생성이 억제되는 것을 확인하였다.Raw 264.7 macrophages were treated with LPS at a concentration of 1 to 2 μg / mL to induce inflammation. Then, the fermented red ginseng powder prepared in Example 1 was treated at different concentrations to determine NO production. As a result, , It was confirmed that NO production was suppressed.

③ 홍삼 분말 발효물의 prostaglandin E2 (PGE2) 생성억제 효과③ Inhibitory effect of red ginseng powder on fermentation of prostaglandin E 2 (PGE 2 )

도 3은 홍삼 분말 발효물의 PGE2 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.FIG. 3 is a graph showing the effect of inhibiting PGE 2 production of red ginseng powder fermented product.

Raw 264.7 대식세포에 LPS를 1~2μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물을 농도별로 처리하여 PGE2 생성을 확인한 결과, 홍삼 분말 발효물은 농도 의존적으로 PGE2 생성이 억제되었지만, 특히 9~10day의 홍삼 분말 발효물은 10μg/mL 농도에서부터 50% 이상 감소하였으며, 40μg/mL이상의 농도에서는 4~5day의 홍삼 분말 발효물이 강한 억제 효과를 보였다.Raw 264.7 macrophages were treated with LPS at a concentration of 1-2 μg / mL to induce inflammation. The red ginseng powder fermented in Example 1 was treated at different concentrations to produce PGE 2. As a result, Dependent PGE 2 In particular, red ginseng powder fermented at 9 ~ 10days decreased more than 50% from 10μg / mL concentration, and 4 ~ 5day fermented red ginseng powder showed strong inhibitory effect at 40μg / mL concentration.

이상에서, 홍삼 분말 발효물은 농도가 높고 배양시간이 길수록 NO와 PGE2 생성이 농도 의존적으로 감소하지만, 홍삼 분말 발효물의 농도를 무한정 높일 수 없고, 배양시간이 길어지면 많은 시간이 소요되는 문제가 발생한다.From the above, it can be seen that the concentration of NO and PGE 2 decreases in a concentration dependent manner when the concentration of red ginseng powder is high and the incubation time is long, but the concentration of the fermented red ginseng powder can not be increased indefinitely, Occurs.

따라서 위와 같은 문제를 해결하기 위해 홍삼 분말 발효물의 농도와 배양시간을 최소화하는 상업적인 발전이 필요하다.Therefore, in order to solve the above problems, commercial development is required to minimize the concentration of fermented red ginseng and the incubation time.

따라서 본 출원인은 상기 ③의 4~Therefore, the applicant of the present invention, 5day의5day 홍삼 분말  Red ginseng powder 발효물이Fermented water 40μg40 μg /mL이상의 농도에서 / mL < / RTI > PGEPGE 22 생성에 강한 억제 효과를 보인 실험을 토대로 홍삼 분말 Based on the experiments showing strong inhibitory effect on the production, red ginseng powder 발효물의Fermented 농도를 0~ Concentration is 0 ~ 40μg40 μg /mL까지 설정하여 / mL < / RTI > TNFTNF -α 및 IL-6의 생성억제 효과를 알아보기로 하였다.-α and IL-6, respectively.

④ 홍삼 분말 발효물의 TNF-α 생성억제 효과④ Inhibitory effect of red ginseng powder on fermentation of TNF-α

도 4는 홍삼 분말 발효물의 TNF-α 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.FIG. 4 is a graph showing the inhibitory effect of the fermented red ginseng powder on TNF-α production.

Raw 264.7 대식세포에 LPS를 1~2μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물을 농도별로 처리 하였다. Raw 264.7 macrophages were treated with LPS at a concentration of 1-2 μg / mL to induce inflammation. Then, the red ginseng powder fermented product prepared in Example 1 was treated by concentration.

그 후 ELISA 방법을 통해 TNF-α 생성을 확인한 결과, 역시 농도 의존적으로 TNF-α 생성이 감소하는 것을 확인하였고, 특히 40μg /mL 농도에서 4~ 5day의 홍삼 분말 발효물은 TNF-α 생성을 70%이상 억제하는 효과를 보였다. Then the result confirming the TNF-α produced by the ELISA method, also concentration-dependent manner with TNF-α was confirmed that the generation is reduced, in particular 70 to red ginseng powder fermented product is produced TNF-α in the 4 ~ 5day at 40μg / mL concentration %.

⑤ 홍삼 분말 발효물의 IL-1β 생성억제 효과⑤ Inhibitory effect of fermented red ginseng powder on IL-1β production

도 5는 홍삼 분말 발효물의 IL-1β 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.FIG. 5 is a graph showing the inhibitory effect of fermented red ginseng powder on IL-1? Production.

Raw 264.7 대식세포에 LPS를 1~2μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물을 농도별로 처리 하였다. Raw 264.7 macrophages were treated with LPS at a concentration of 1-2 μg / mL to induce inflammation. Then, the red ginseng powder fermented product prepared in Example 1 was treated by concentration.

그 후 ELISA 방법을 통해 IL-1β 생성을 확인한 결과, 홍삼 분말 발효물 모두 농도 의존적으로 IL-1β 생성이 감소하는 것을 확인하였고, 특히 20 및 40μg /mL 농도에서 4~ 5day의 홍삼 분말 발효물이 IL- 생성을 강하게 억제하는 효과를 보였다. After confirming the IL-1β generated by the ELISA method results, it was confirmed that a decrease in red ginseng powder fermented both concentration-dependent manner IL-1β generated, in particular 20, and the red ginseng powder fermented product of 4 ~ 5day at 40μg / mL concentration IL- production was strongly inhibited.

⑥ 홍삼 분말 발효물의 IL-6 생성억제 효과⑥ Inhibitory effect of fermented red ginseng powder on IL-6 production

도 6은 홍삼 분말 발효물의 IL-6 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.6 is a graph showing the inhibitory effect of fermented red ginseng powder on IL-6 production.

Raw 264.7 대식세포에 LPS 1μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물을 농도별로 처리 하였다. Raw 264.7 macrophages were treated with LPS at a concentration of 1 μg / mL to induce inflammation, and then the fermented red ginseng powder prepared in Example 1 was treated by concentration.

그 후 ELISA 방법을 통해 IL-6 생성을 확인한 결과, 홍삼 분말 발효물 모두 농도 의존적으로 IL-6 발현이 억제되는 것을 확인하였고, 특히 발효 전과 비교했을 때 4~5day의 홍삼 분말 발효물은 IL-6 생성을 강하게 억제하는 효과를 보였다.IL-6 production was confirmed by ELISA method. As a result, it was confirmed that IL-6 expression was inhibited in a concentration-dependent manner in all of the red ginseng powder fermented products. In particular, when 4 to 5 days of fermented red ginseng powder was compared with that before fermentation, 6 production was strongly inhibited.

이상에서, Thus, 실험예Experimental Example 1의 결과를 토대로 홍삼 분말  Based on the results of 1, red ginseng powder 발효물은The fermented product 40μL40 μL /mL에서 4~5day 동안 발효한 홍삼 분말 / mL for 4 ~ 5days fermented red ginseng powder 발효물이Fermented water 항염증 활성을 향상시키는 효과가 뛰어난 것을 확인할 수 있었다. It was confirmed that the effect of improving the anti-inflammatory activity was excellent.

실험예Experimental Example 2. 진세노사이드  2. Gin Senocide Rg3Rg3 물질의 항염증 효과 분석실험 Analysis of anti-inflammatory effects of substances

실험에 앞서 본 출원인은 상기 실시예 1에서 제조된 홍삼 분말 발효물에서 진세노사이드 Rg3 물질을 추출하였다.Prior to the experiment, Applicant extracted ginsenoside Rg3 material from the red ginseng powder fermented product prepared in Example 1 above.

① 진세노사이드 Rg3 물질의 농도별 대식세포독성 확인① Identification of macrophage toxicity by concentration of ginsenoside Rg3 substance

도 7은 진세노사이드 Rg3 물질의 농도별 대식세포독성을 확인한 결과를 그래프로 나타낸 것이다.FIG. 7 is a graph showing the results of confirming macrophage toxicity by concentration of ginsenoside Rg3 substance.

Raw 264.7 대식세포(5x105 cell/mL 기준)에 염증유발 물질인 구강 미생물인 streptococcus mutans에서 분리한 AgⅠ/Ⅱ 재조합 단백질을 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물에서 추출한 Rg3 물질을 농도별로 처리한 다음 MTT 방법으로 실험한 결과, Rg3는 40μg/mL 농도까지 세포 독성이 없는 것으로 확인하였다.Raw 264.7 macrophages (5x10 5 cells / mL) were treated with Ag I / II recombinant protein isolated from streptococcus mutans , an oral inflammatory substance, to induce inflammation. Then, the red ginseng powder fermented product prepared in Example 1 The extracted Rg3 material was treated by concentration and then MTT method. As a result, it was confirmed that Rg3 was not cytotoxic up to 40 μg / mL concentration.

② 진세노사이드 Rg3 물질의 농도별 Nitrite 생성억제 효과② Inhibitory effect of ginsenoside Rg3 on Nitrite formation

도 8은 진세노사이드 Rg3 물질의 농도별 Nitrite 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.FIG. 8 is a graph showing the inhibitory effect of nasally nitrite formation on the concentration of ginsenoside Rg3 material.

Raw 264.7 대식세포(5x105 cell/mL 기준)에 AgⅠ/Ⅱ 재조합 단백질 0.5~0.7μg/mL을 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물에서 추출한 Rg3 물질을 농도별로 처리한 다음 NO 생성을 확인한 결과, Rg3는 40μg/mL 농도까지 의존적으로 NO 생성이 억제되는 것을 확인하였다.Raw 264.7 macrophages (5x10 5 cells / mL) were treated with 0.5 ~ 0.7 μg / mL of Ag I / Ⅱ recombinant protein to induce inflammation. The Rg3 substance extracted from the fermented red ginseng powder prepared in Example 1 After the treatment, NO production was confirmed. As a result, it was confirmed that Rg3 inhibited NO production dependently up to a concentration of 40 μg / mL.

③ 진세노사이드 Rg3 농도별 prostaglandin E2 (PGE2) 생성억제 효과③ Inhibitory effect of prostaglandin E 2 (PGE 2 ) on the concentration of ginsenoside Rg3

도 9는 진세노사이드 Rg3 농도별 PGE2 생성억제 효과를 나타낸 것이다.9 shows the effect of inhibiting PGE 2 production by the concentration of ginsenoside Rg3.

Raw 264.7 대식세포(5x105 cell/mL 기준)에 AgⅠ/Ⅱ 재조합 단백질을 0.5~0.7μg/mL 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물에서 추출한 Rg3 물질을 농도별로 처리한 다음 PGE2 생성을 확인한 결과, Rg3는 농도 의존적으로 PGE2 생성이 억제되었지만, 특히 10μg/mL에서 60% 억제 효과를 나타내었다.Raw 264.7 macrophages (5x10 5 cells / mL) were treated with 0.5 ~ 0.7 μg / mL of Ag I / Ⅱ recombinant protein to induce inflammation. The Rg3 material extracted from the fermented red ginseng powder prepared in Example 1 confirming process, and then PGE 2 produced results, Rg3 exhibited a concentration-dependent manner, but PGE 2 generation is suppressed, in particular 60% inhibition at 10μg / mL effect.

④ 진세노사이드 Rg3 농도별 TNF-α 생성억제 효과④ TNF-α production inhibitory effect of ginsenoside Rg3 concentration

도 10은 진세노사이드 Rg3 농도별 TNF-α 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.Fig. 10 is a graph showing the inhibitory effect of TNF-α production on the concentration of ginsenoside Rg3.

Raw 264.7 대식세포(5x105 cell/mL 기준)에 AgⅠ/Ⅱ 재조합 단백질을 0.5~0.7μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물에서 추출한 Rg3 물질을 농도별로 3시간 및 12시간 처리하였다. Raw 264.7 macrophages (based on 5x10 5 cells / mL) were treated with Ag I / II recombinant protein at a concentration of 0.5-0.7 μg / mL to induce inflammation. Then, the Rg3 substance extracted from the fermented red ginseng powder prepared in Example 1 For 3 hours and 12 hours.

그 후 ELISA 방법을 통해 Then, by ELISA method TNFTNF -α 생성을 확인한 결과, -α production, Rg3는Rg3 is 12시간 처리한 군에서 억제효과가 더 뛰어났으며  The inhibition effect was better in the 12 hour treatment group 20μg20 μg /mL 농도에서 강한 억제효과를 나타내었다./ mL, respectively.

⑤ 진세노사이드 Rg3 농도별 IL-6 생성억제 효과⑤ Inhibitory effect of ginsenoside Rg3 on IL-6 production

도 11은 진세노사이드 Rg3 농도별 IL-6 생성억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.Fig. 11 is a graph showing the inhibitory effect of IL-6 production on the concentration of ginsenoside Rg3.

Raw 264.7 대식세포(5x105 cell/mL 기준)에 AgⅠ/Ⅱ 재조합 단백질을 0.5~0.7μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물에서 추출한 Rg3 물질을 농도별로 처리하였다. Raw 264.7 macrophages (5x10 5 cells / mL) were treated with Ag I / II recombinant protein at a concentration of 0.5-0.7 μg / mL to induce inflammation. The Rg3 substance extracted from the fermented red ginseng powder prepared in Example 1 Respectively.

그 후 ELISA 방법을 통해 IL-6 생성을 확인한 결과, IL-6 production was then confirmed by ELISA. As a result, Rg3는Rg3 is 모두 농도 의존적으로 IL-6 생성이 억제되었지만, 특히 12시간 처리한 군에서 억제효과가 더 뛰어났으며  In all, IL-6 production was inhibited in a concentration-dependent manner, 20μg20 μg /mL에서 80%까지 감소 되는 것을 확인하였다./ mL to 80%.

⑥ 진세노사이드 Rg3 농도별 IL-1β 발현억제 효과⑥ Inhibitory effect of ginsenoside Rg3 on IL-1β expression

도 12는 진세노사이드 Rg3 농도별 IL-1β 발현억제 효과를 그래프로 나타낸 것이다.Fig. 12 is a graph showing the inhibitory effect of IL-1? On the concentration of ginsenoside Rg3.

Raw 264.7 대식세포(5x105 cell/mL 기준)에 AgⅠ/Ⅱ 재조합 단백질을 0.5~0.7μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물에서 추출한 Rg3 물질을 농도별로 12시간 처리하였다. Raw 264.7 macrophages (based on 5x10 5 cells / mL) were treated with Ag I / II recombinant protein at a concentration of 0.5-0.7 μg / mL to induce inflammation. Then, the Rg3 substance extracted from the fermented red ginseng powder prepared in Example 1 For 12 hours.

그 후 ELISA 방법을 통해 IL-The IL- 생성을 확인한 결과,  As a result, Rg3Rg3 물질은 농도 의존적으로 감소 되었지만, 특히  Although the material has been reduced in a concentration dependent manner, 20μg20 μg /mL 농도에서 60%까지 / mL to 60% 감소되는Reduced 것을 확인하였다. Respectively.

⑦ 진세노사이드 Rg3 농도별 염증 관련 단백질 iNOS와 COX-2 생성억제⑦ Inhibition of inflammation-related protein iNOS and COX-2 production by ginsenoside Rg3 concentration

도 13은 진세노사이드 Rg3 농도별 염증 관련 단백질 iNOS와 COX-2의 발현 효과를 그래프로 나타낸 것이다.Fig. 13 is a graph showing the expression effects of inflammation-related proteins iNOS and COX-2 on the concentration of ginsenoside Rg3.

Raw 264.7 대식세포(5x105 cell/mL 기준)에 AgⅠ/Ⅱ 재조합 단백질을 0.5~0.7μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물에서 추출한 Rg3 물질을 농도별로 처리하여 iNOS와 COX-2의 발현 정도를 웨스턴 블롯 실험으로 측정하였다.Raw 264.7 macrophages (based on 5x10 5 cells / mL) were treated with Ag I / II recombinant protein at a concentration of 0.5-0.7 μg / mL to induce inflammation. Then, the Rg3 substance extracted from the fermented red ginseng powder prepared in Example 1 The expression levels of iNOS and COX-2 were measured by western blotting.

측정결과, iNOS에 의해 생성되는 NO의 생성이 농도 의존적으로 억제되어 iNOS 생성 역시 억제되는 것을 확인할 수 있었고, 특히 Rg3는 20μg /mL 농도에서부터 iNOS가 거의 발현되지 않음을 확인할 수 있었다. As a result of the measurement, it was confirmed that the production of NO produced by iNOS was inhibited in a concentration-dependent manner, and the production of iNOS was also inhibited. In particular, Rg3 From the concentration of 20 μg / mL, it was confirmed that iNOS was hardly expressed.

또한, 염증과정에서 인지질을 대사시켜 생성된 아라키돈산에서 PGE2를 생성시키는 효소인, COX-2의 발현을 확인하기 위해 염증이 유발된 RAW 264.7 대식세포에 Rg3를 농도별로 처리한 결과, iNOS와 마찬가지로 COX-2의 발현도 농도 의존적으로 발현이 감소되는 것을 확인하였다.In order to confirm the expression of COX-2, an enzyme that produces PGE 2 in arachidonic acid produced by phospholipid metabolism in the inflammatory process, Rg3 was treated with RAW 264.7 macrophages in the presence of iNOS Similarly, expression of COX-2 was also found to be decreased in a concentration-dependent manner.

⑧ 진세노사이드 Rg3 농도별 염증 관련 MAPKs 단백질 발현효과⑧ Effect of ginsenoside Rg3 on inflammation-related MAPKs protein expression

도 14는 진세노사이드 Rg3 농도별 염증 관련 MAPKs 단백질 발현 효과를 나타낸 것이다.Fig. 14 shows the effect of inflammation-related MAPKs protein expression on the concentration of ginsenoside Rg3.

Raw 264.7 대식세포(5x105 cell/mL 기준)에 AgⅠ/Ⅱ 재조합 단백질을 0.5~0.7μg/mL 농도로 처리하여 염증을 유발시킨 후 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물에서 추출한 Rg3 물질을 농도별로 처리하여 MAPKs(mitogen-activated protein kinases)의 발현 정도를 웨스턴 블롯 실험으로 측정하였고, MAPKs의 발현 정도를 알아보기 위해 항-인산화 ERK 항체, 항-인산화JNK 항체 및 항-인산화 p38 항체를 사용하였다.Raw 264.7 macrophages (based on 5x10 5 cells / mL) were treated with Ag I / II recombinant protein at a concentration of 0.5-0.7 μg / mL to induce inflammation. Then, the Rg3 substance extracted from the fermented red ginseng powder prepared in Example 1 The level of expression of MAPKs (mitogen-activated protein kinases) was measured by western blotting. To examine the expression level of MAPKs, anti-phosphorylated ERK antibody, anti-phosphorylated JNK antibody and anti-phosphorylated p38 antibody were used Respectively.

MAPKs 신호전달 관련성을 확인한 결과, ERK, JNK 및 p38의 인산화가 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인할 수 있었다.As a result of confirming the signal transduction of MAPKs, it was confirmed that the phosphorylation of ERK, JNK and p38 was decreased in a concentration-dependent manner.

이상에서 MAPKs, ERK, JNK 및 p38에 대해서 서술한다.Herein, MAPKs, ERK, JNK and p38 are described.

MAPKs(mitogen activated protein kinase)는 진핵세포의 신호전달에서 중심적인 역할을 하는 단백질 인산화효소가 연속되는 경로로서, 세포질 내부의 신호를 세포내의 핵으로 전달하는데 관여하여 포유동물의 세포에서 다양한 생화학적 반응, 즉 세포의 선당, 분화, 사멸 등을 매개한다.MAPKs (mitogen-activated protein kinase) are a continuous pathway of protein kinases that play a central role in the signaling of eukaryotic cells. They involve the transfer of signals inside the cytoplasm to the nuclei in the cells, resulting in a variety of biochemical reactions , That is, mediates cell differentiation, differentiation, and death.

즉, MAPKs는 세포가 성장인자, 사이토카인(cytokine) 및 호르몬 등에 의한 자극을 받았을 때 작동되며 세포내 중간 전달물질을 통하여 신호를 핵내부로 전달한다.In other words, MAPKs are activated when cells are stimulated by growth factors, cytokines and hormones, and they transmit signals through the intracellular intermediates.

또한, ERK는 주로 표피성장인자에 의해 활성화되고, 세포내의 다른 신호전달 체계에 관여하며, NF-κB를 활성화시킨다.In addition, ERK is mainly activated by epidermal growth factor, is involved in other signal transduction systems within the cell, and activates NF-κB.

또한, JNK는 환경적 스트레스에 대한 반응 및 세포 표면 수용체의 몇몇 종류에 의해 활성화 되며, 면역 세포의 성숙 및 분화를 포함하는 면역 반응을 조절할 뿐만 아니라, 면역계에 의해 파괴되어 식별된 세포 내 예정된(programmed) 세포 사멸에 영향을 미친다.In addition, JNK is activated by several responses to environmental stress and some cell surface receptors, as well as controlling the immune response, including the maturation and differentiation of immune cells, as well as programmed ) Cell death.

또한, p38은 지질다당질 분자나 삼투압과 관련된 세포 스트레스에 의해 활성화되며, TNF-α의 stability와 translation을 통제한다고 보고하고 있다.In addition, p38 is activated by cellular stress associated with lipopolysaccharide molecules or osmotic pressure, and it is reported that the stability and translation of TNF-α are controlled.

⑨ 진세노사이드 Rg3 농도별 염증 관련 NF-kB 핵과 세포질내에서의 발현변화⑨ Expression of inflammation-related NF-kB nucleus and cytoplasmic changes by concentration of ginsenoside Rg3

도 15는 진세노사이드 Rg3 농도별 염증 관련 NF-kB 핵과 세포질내에서의 발현변화를 나타낸 것이다.Fig. 15 shows the expression of inflammation-related NF-kB nuclei and cytoplasmic changes in the concentration of ginsenoside Rg3.

LPS 및 TNF-α에 의한 신호전달이 활성화되면 IκB-α가 분해되고 NF-κB p65가 핵으로 이동하여 염증유발인자 유전자의 프로모터에 존재하는 NF-κB element에 결합하여 전사를 활성화 시킨다. 위와 같은 변화를 증명하기 위해 염증 유발된 대식세포에서 세포질과 핵에서 관련 전사인자 NF-κB p65의 활성화를 확인한 결과, Rg3를 처리하였을 때 농도 의존적으로 세포질내에서 IκB-α는 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였고 핵에서는 p65는 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인하였다.Activation of signaling by LPS and TNF-α degrades IκB-α and translocates NF-κB p65 into the nucleus, which binds to the NF-κB element present in the promoter of the inflammatory factor gene to activate transcription. In order to prove these changes, activation of NF-κB p65, a related transcription factor in cytoplasm and nucleus, was observed in inflammation-induced macrophages, and the concentration of IκB-α in the cytoplasm was increased in a concentration-dependent manner when Rg3 was treated And p65 in the nucleus was decreased in a concentration dependent manner.

이상에서 상술된 바와 같이, 홍삼 분말 발효물은 발효하지 않은 시료보다 발효된 시료에서 항염증 효과가 높게 나타났으며, 특히 4~5day 홍삼 분말 발효물은 40μg/mL일 때 PGE2 생성 억제, TNF-α 생성 억제, IL-1β 생성 억제 및 IL-6 생성 을 억제함으로써 항염증 효과가 높게 나타났다.As described above, the red ginseng powder fermented product showed higher antiinflammatory effect than fermented samples. In particular, the fermented product of 4 ~ 5day red ginseng powder inhibited PGE 2 production at 40 μg / mL, -α production inhibition, inhibition of IL-1β production and inhibition of IL-6 production.

또한, 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물로부터 추출된 진세노사이드 Rg3 물질도 PGE2 생성 억제, TNF-α 생성 억제, IL-1β 생성 억제 및 IL-6 생성 을 억제함으로써 항염증 효과가 높게 나타났다.In addition, the ginsenoside Rg3 substance extracted from the fermented red ginseng powder obtained in Example 1 suppressed PGE 2 production, inhibited TNF-α production, inhibited IL-1β generation and IL-6 production, Respectively.

또한, 상기 실시예 1에서 제조한 홍삼 분말 발효물로부터 추출된 진세노사이드 Rg3 물질은 실험예 2를 통해 NF-kB에 관련하여 사이토카인 발현, iNOS 단백질 발현 및 COX-2 단백질 발현을 조절할 수 있는 것으로 나타났다.In addition, the ginsenoside Rg3 substance extracted from the fermented red ginseng powder prepared in Example 1 was able to regulate cytokine expression, iNOS protein expression and COX-2 protein expression in relation to NF-kB in Experimental Example 2 Respectively.

Claims (5)

멸균된 홍삼 분말을 이용하여 홍삼 분말 배지를 제조하는 단계; 및
상기 홍삼 분말 배지에 혼합 균주를 접종하고 발효해서 홍삼 분말 발효물을 제조하는 단계;를 포함하되, 상기 혼합 균주는 비피도박테리움(Bifidobacterium longum)균주, 비피도박테리움 락티스(Blifidobacterium lactis)균주, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)균주, 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophillus)균주 및 스트렙토코코스 써모필러스(Streptococcus thermophiles)균주 중에서 한개 이상의 균주를 혼합한 것이고, 상기 홍삼 분말과 혼합 균주를 10:2의 비율이 되도록 하여 발효하는 것을 특징으로 하는, 홍삼 분말 발효물 제조 방법.
Preparing red ginseng powder using sterilized red ginseng powder; And
Preparing a fermented product of red ginseng powder by inoculating a mixed strain into the red ginseng powder medium and fermenting the fermented product, wherein the mixed strain is Bifidobacterium longum strain , Bifidobacterium < RTI ID = 0.0 > lactis) strain, Lactobacillus ramno suspension (Lactobacillus rhamnosus) strain, Lactobacillus know also the filler's (Lactobacillus acidophillus) strain and Streptomyces Cocos Thermo filler's would a mixture of one or more strains from (Streptococcus thermophiles) strain, the red ginseng powder and mixed Wherein the strain is fermented at a ratio of 10: 2.
청구항 1에 있어서,
상기 홍삼 분말 발효물을 제조하는 단계에서 홍삼 분말 발효물은 40μg/mL의 농도가 되도록 농축하여 제조되는 것을 특징으로 하는, 홍삼 분말 발효물 제조방법.
The method according to claim 1,
Wherein the fermented red ginseng powder is prepared by concentrating the red ginseng powder to a concentration of 40 μg / mL in the step of preparing the red ginseng powder fermented product.
청구항 2에 있어서,
상기 홍삼 분말 발효물은 4~5일 발효하여 제조되는 것을 특징으로 하는, 홍삼 분말 발효물의 제조 방법.
The method of claim 2,
Wherein the red ginseng powder fermented product is fermented for 4 to 5 days.
청구항 1에 있어서,
상기 홍삼 분말 발효물에 포함되는 진세노사이드 Rg3는 5~20μg/mL인 것을 특징으로 하는, 홍삼 분발 발효물의 제조방법.
The method according to claim 1,
Wherein the ginsenoside Rg3 contained in the fermented red ginseng powder is 5 to 20 占 퐂 / mL.
청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 기재된 제조방법으로 제조한 홍삼 분말 발효물.








A red ginseng powder fermented product produced by the production method according to any one of claims 1 to 4.








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