KR20170106772A - Pseudomonas sp. DJ15 with Insecticidal Activity against Aphid - Google Patents

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Abstract

Provided are a novel Pseudomonas sp. DJ15 strain (KACC 92116P) having controlling effects on aphid, and a composition for controlling aphid using the same. According to the present invention, the novel Pseudomonas sp. DJ15 strain and xantholysin A and B isolated from a culture solution thereof exhibit excellent controlling effects on aphid, and the composition for controlling aphid is an eco-friendly biological composition with little adverse effects on environmental pollution and the ecosystem.

Description

진딧물에 대한 방제활성을 갖는 신규한 슈도모나스속 DJ15 균주{ Pseudomonas sp. DJ15 with Insecticidal Activity against Aphid}A novel Pseudomonas sp. DJ15 strain {Pseudomonas sp. DJ15 with Insecticidal Activity against Aphid}

본 발명은 진딧물에 대한 방제 활성을 갖는 신규한 슈도모나스속 DJ15 균주에 관한 것이다.The present invention relates to a novel Pseudomonas sp. DJ15 strain having an aphid control activity.

진딧물은 연중 지속적으로 발생하는 농업의 주요한 해충 중 하나로서 세대의 반복이 짧아 약제에 대한 저항성이 높다. 진딧물이 매개하는 식물성 바이러스와 이 해충이 분비한 감로로 인하여 발생되는 식물병은 작물의 생산량을 현저하게 감소시킨다. 이에 농가에서는 진딧물을 방제하기 위하여 대표적으로 합성농약을 사용하고 있다. 하지만 합성농약의 사용은 환경과 인축에 부작용을 가져올 수 있기 때문에 다른 방제법에 대한 연구를 추진하고 있다. 합성농약의 대체 방안으로는 천연물이나 미생물을 이용한 해충방제를 들 수 있는데, 천연식물제제의 개발에 대한 연구는 활발하게 진행되고 있으나 미생물제제에 대한 연구는 매우 미비한 실정이다. 따라서 진딧물 방제용 미생물 자원의 확보와 더불어 이를 농가현장에 직접 적용할 수 있는 진딧물 방제법 개발에 대한 연구가 필요하다.Aphids are one of the main pests of agriculture that occur continuously throughout the year, and their resistance to drugs is high due to the short repetition of generations. Plant diseases caused by aphid-mediated vegetal viruses and the nectar secreted by these insects significantly reduce crop production. Therefore, farmers use synthetic pesticides as a representative to control aphids. However, since the use of synthetic pesticides may cause adverse effects on environment and manpower, research is being conducted on other control methods. As an alternative to synthetic pesticides, natural pesticides and microbial pest control can be mentioned. Studies on the development of natural plant preparations have been actively carried out, but there have been very few studies on microbial preparations. Therefore, it is necessary to study the development of aphid control method that can be applied directly to the farm site in addition to the securing of microbial resources for the control of aphid.

이에 본 발명자들은 시설재배지에서 복숭아혹진딧물의 효과적인 방제를 위하여, 농가현장에 살포시 환경오염의 폐해 및 생태계 악영향의 가능성이 낮고, 이 진딧물에 대한 저항성 발현이 적으며, 농가현장에서도 복숭아혹진딧물 방제효율이 우수한 미생물의 확보와 더불어, 이를 이용한 복숭아혹진딧물 방제제 및 방제방법을 개발하고자 지속적인 연구를 수행하였다.Therefore, the present inventors have found that the possibility of harmful environmental pollution and ecosystem adversely affecting the aphid of aphids is low and the resistance to the aphids is low, In addition to securing these excellent microorganisms, we have continued to develop a method for controlling and controlling the peach aphid by using the same.

종래에는 복숭아혹진딧물의 방제를 위하여 동계에 기계유유제를 살포하거나 발생초기에 진딧물 전용약제를 살포하는 방법을 이용한다. 상업적으로 이용하는 방제약제에는 아타라 입제, 체스 입상수화제, 아타라 입상수화제, 테라피 입제, 볼리암후레쉬 액상수화제 및 주렁수화제/유제 등이 있다.Conventionally, a method of spraying a machine oil emulsion to the winter or spraying aphid drug for the early stage of development is used for controlling the peach aphid. Commercially available antiseptic agents include Atala granules, chess granular granules, Atara granular granules, therapeutic granules, balloam fresh liquid waxes, and aerosols / emulsions.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.Numerous papers and patent documents are referenced and cited throughout this specification. The disclosures of the cited papers and patent documents are incorporated herein by reference in their entirety to better understand the state of the art to which the present invention pertains and the content of the present invention.

KR 등록특허 10-1444214KR Patent No. 10-1444214 KR 등록특허 10-0404767KR Patent No. 10-0404767 KR 등록특허 10-0940231KR Patent No. 10-0940231

본 발명자들은 진딧물 방제 활성을 갖는 신규 토착 미생물 및 이의 활성 물질을 분리하고자 노력하였다. 그 결과, 진딧물에 대한 방제 활성을 갖는 신규한 슈도모나스 속 DJ15 균주를 분리하고 이의 방제 활성 물질인 잔토라이신(xantholysin) A 및 B의 진딧물 방제 활성을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.The present inventors have sought to isolate a new indigenous microorganism having an aphid control activity and its active substance. As a result, the present invention was completed by isolating a novel Pseudomonas sp. DJ15 strain having a controlling activity against aphids and confirming the aphid control activity of xantholysin A and B, which are active substances for controlling the aphid.

따라서, 본 발명의 목적은 신규한 슈도모나스속 DJ15 균주(KACC 92116P)를 제공하는 데 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a novel Pseudomonas sp. DJ15 strain (KACC 92116P).

본 발명의 다른 목적은 진딧물 방제용 조성물을 제공하는 데 있다.It is another object of the present invention to provide a composition for controlling aphids.

본 발명의 또 다른 목적은 진딧물 방제 방법을 제공하는 데 있다.It is another object of the present invention to provide a method for controlling aphids.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.Other objects and advantages of the present invention will become more apparent from the following detailed description of the invention, claims and drawings.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 진딧물에 대한 방제 활성을 갖는 신규한 슈도모나스속 DJ15 균주(KACC 92116P)을 제공한다.According to one aspect of the present invention, there is provided a novel Pseudomonas sp. DJ15 strain (KACC 92116P) having an aphid control activity.

본 발명자들은 진딧물 방제 활성을 갖는 신규 토착 미생물 및 이의 활성 물질을 분리하고자 노력하였다. 그 결과, 진딧물에 대한 방제 활성을 갖는 신규한 슈도모나스 속 DJ15 균주를 분리하고 이의 방제 활성 물질인 잔토라이신(xantholysin) A 및 B의 진딧물 방제 활성을 확인하였다.The present inventors have sought to isolate a new indigenous microorganism having an aphid control activity and its active substance. As a result, a novel Pseudomonas sp. DJ15 strain having a controlling activity against aphids was isolated, and the aphid control activity of xantholysin A and B, which are active ingredients of the Pseudomonas sp.

본 발명에 따른 슈도모나스 속 DJ15 균주는 해변 토양으로부터 분리된 국내토착 미생물로서, 진딧물에 대한 살충물질을 생산하는 특징을 갖는다.The Pseudomonas sp. DJ15 strain according to the present invention is a domestic indigenous microorganism isolated from seaside soils and has a characteristic of producing insecticidal substances against aphids.

본 발명의 신규한 슈도모나스속 DJ15 균주(KACC 92116P)는 진딧물에 대한 방제 활성을 갖는다.The novel Pseudomonas sp. DJ15 strain (KACC 92116P) of the present invention has a controlling activity against aphids.

본 발명의 일 구현 예에 따르면, 상기 진딧물은 복숭아혹진딧물(Myzus persicae)이다.According to one embodiment of the present invention, the aphid is a peach aphid ( Myzus persicae ).

상기 복숭아혹진딧물은 성충, 약충이 어린 잎이나 잎의 뒷면에 떼를 지어 즙액을 빨아먹어 식물체가 위축되어 생육이 정지되는 직접적인 피해를 발생시키는 해충이다. 또한, 백여종의 식물바이러스병을 옮기는 간접적 피해를 유발한다. 잎이나 줄기는 물론 꽃이나 열매 등에도 기생하여 즙액을 빨아 먹음으로써 식물체의 양분이 소실되고 잎이 오그라지거나 말리는등 변형이 되기도 한다. 또 배설물을 통해 감로를 분비하여 그을음병을 유발하기도 하는데 그을음병이 발생되면 잎이 검어지며, 광합성이 저해되어 식물체가 연약해진다. 2차적인 피해로 농작물에 PLRV(감자잎말림바이러스), TuMV(순무모자이크바이러스), CAMV(꽃양배추모자이크바이러스), CMV(오이모자이크바이러스) 등의 바이러스병을 옮긴다.The peach lycopodium aphid is a pest which causes a direct damage by stopping the growth of a plant by the sucking of the juice by attaching adults or nymphs to the back of young leaves or leaves. It also causes indirect damage by transferring hundreds of plant virus diseases. Leaves and stems, as well as flowers and fruits, such as parasitic by sucking the juice by eating the plant nutrients are lost, and the leaves are distorted, such as shriveling or drying. It also secretes nectar from faeces and causes soot disease. When soot disease occurs, the leaves become dark, photosynthesis is inhibited, and the plant becomes fragile. Secondary damage causes viruses such as PLRV (potato leaf blight virus), TuMV (turnip mosaic virus), CAMV (flowering cabbage mosaic virus) and CMV (cucumber mosaic virus) to be transferred to crops.

하기 실시예에서 검증된 바와 같이, 상기 슈도모나스속 DJ15(KACC 92116P) 균주는 진딧물 방제 활성 물질을 분비한다.As verified in the following examples, the Pseudomonas sp. DJ15 (KACC 92116P) strain secretes an aphid control active substance.

본 발명의 일 구현 예에 따르면, 상기 슈도모나스속 DJ15(KACC 92116P) 균주는 잔토라이신 A 및 잔토라이신 B로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔토라이신을 생성한다.According to one embodiment of the present invention, the Pseudomonas sp. DJ15 (KACC 92116P) strain produces at least one xanthoraicin selected from the group consisting of xanthorrhizin A and xanthorhindin B.

본 발명의 슈도모나스속 DJ15(KACC 92116P) 균주는 하기 화학식 1의 잔토라이신 A를 생성한다.The Pseudomonas sp. DJ15 (KACC 92116P) strain of the present invention produces Zanthorrhizin A of the following formula (1).

[화학식 1][Chemical Formula 1]

Figure pat00001
Figure pat00001

본 발명의 슈도모나스속 DJ15(KACC 92116P) 균주는 하기 화학식 2의 잔토라이신 B를 생성한다.The Pseudomonas sp. DJ15 (KACC 92116P) strain of the present invention produces Zantraisin B of the following formula (2).

[화학식 2](2)

Figure pat00002
Figure pat00002

상기 슈도모나스속 DJ15(KACC 92116P) 균주는 진딧물 방제 활성을 갖는 잔토라이신 A 및/또는 잔토라이신 B를 생성하므로, 상기 균주, 이의 배양액 모두 진딧물에 대한 방제 활성을 갖는다.Since the strain Pseudomonas sp. DJ15 (KACC 92116P) produces zotorhionin A and / or zantholysin B having an aphid control activity, all of the above strains and their cultures have a controlling activity against aphids.

본 발명의 일 구현 예에 따르면, 상기 잔토라이신 A는 22-26 ㎎/L 농도에서 반수치사량(Lethal Dose 50. LD50)을 나타낸다.According to one embodiment of the present invention, the xanthoraicin A exhibits a half-life lethal dose (Lethal Dose 50. LD 50 ) at a concentration of 22-26 mg / L.

본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 상기 잔토라이신 A는 23-26 ㎎/L, 24-26 ㎎/L 또는 24-25 ㎎/L 농도에서 반수치사량을 나타낸다.According to another embodiment of the present invention, the xanthorhythin A exhibits a half-life mortality at a concentration of 23-26 mg / L, 24-26 mg / L or 24-25 mg / L.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 잔토라이신 B는 10-15 ㎎/L 농도에서 반수치사량을 나타낸다.According to one embodiment of the present invention, the xanthorrhizin B exhibits a half-life lethal dose at a concentration of 10-15 mg / L.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 잔토라이신 B는 11-15 ㎎/L, 12-15 ㎎/L, 13-15 ㎎/L 또는 13-14 ㎎/L 농도에서 반수치사량을 나타낸다.According to another embodiment of the present invention, the xanthorhythin B exhibits a half lethal dose at a concentration of 11-15 mg / L, 12-15 mg / L, 13-15 mg / L or 13-14 mg / L.

상기 잔토라이신이 진딧물 방제 활성을 갖는다는 것은 본 발명에서 최초로 규명한 결과이다.The fact that the xanthorrhizin has an aphid control activity is the result of the first identification in the present invention.

본 발명의 신규한 슈도모나스속 DJ15 균주(KACC 92116P)는 키틴 분해 활성을 갖는다.The novel Pseudomonas sp. DJ15 strain (KACC 92116P) of the present invention has a chitinolytic activity.

하기 실시 예에서 입증된 바와 같이, 본 발명의 슈도모나스속 DJ15 균주는 키틴을 분해할 수 있는 키티나아제(chitinase)를 분비한다.As demonstrated in the following examples, the Pseudomonas sp. DJ15 strain of the present invention secretes chitinase capable of degrading chitin.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 슈도모나스속 DJ15(KACC 92116P), 상기 슈도모나스속 DJ15(KACC 92116P)의 배양액, 상기 배양액의 추출물, 잔토라이신 A(xantholysin A) 및 잔토라이신 B로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 유효성분으로 포함하는 진딧물 방제용 조성물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a method for producing a Pseudomonas sp. DJ15 (KACC 92116P), a culture of the Pseudomonas sp. DJ15 (KACC 92116P), an extract of the culture solution, xantholysin A and xantholysin B The present invention provides a composition for controlling aphids, comprising at least one component selected from the group consisting of

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 진딧물 방제용 조성물을 살포 또는 도포하는 단계를 포함하는 진딧물 방제 방법을 제공한다.According to still another aspect of the present invention, there is provided a method of controlling aphids, comprising spraying or applying the composition for controlling aphids.

본 발명의 조성물이 적용될 수 있는 작물은 벼, 밀, 보리, 옥수수, 콩, 감자, 밀, 팥, 귀리 및 수수를 포함하는 식량 작물류; 아라비돕시스, 배추, 무, 고추, 딸기, 토마토, 수박, 오이, 양배추, 참외, 호박, 파, 양파 및 당근을 포함하는 채소 작물류; 인삼, 담배, 목화, 참깨, 사탕수수, 사탕무우, 들깨, 땅콩 및 유채를 포함하는 특용작물류; 사과나무, 배나무, 대추나무, 복숭아, 양다래, 포도, 감귤, 감, 자두, 살구 및 바나나를 포함하는 과수류; 장미, 글라디올러스, 거베라, 카네이션, 국화, 백합 및 튤립을 포함하는 화훼류; 및 라이그라스, 레드클로버, 오차드그라스, 알파알파, 톨페스큐 및 페레니얼라이그라스를 포함하는 사료작물류로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.Crops to which the composition of the present invention can be applied include food crops including rice, wheat, barley, corn, soybeans, potatoes, wheat, red beans, oats and millet; Vegetable crops including Arabidopsis, cabbage, radish, pepper, strawberry, tomato, watermelon, cucumber, cabbage, melon, squash, onions, onions and carrots; Special crops including ginseng, tobacco, cotton, sesame, sugar cane, beet, perilla, peanut and rapeseed; Apple trees, pears, jujubes, peaches, sheep, grapes, citrus, persimmon, plums, apricots and banana; Roses, gladiolus, gerberas, carnations, chrysanthemums, lilies and tulips; And feed crops including ragras, red clover, orchardgrass, alpha-alpha, tall fescue and perennialla grass.

본 발명의 진딧물 방제용 조성물 및 진딧물 방제 방법은 상기 신규한 슈도모나스속 DJ15 균주(KACC 92116P)를 이용하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.Since the composition for controlling aphids and aphid control method of the present invention uses the novel Pseudomonas sp. DJ15 strain (KACC 92116P), the description common to both of them is omitted in order to avoid the excessive complexity of the present specification.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다: The features and advantages of the present invention are summarized as follows:

(a) 본 발명은 진딧물에 대한 방제 활성 및 키틴 분해 활성을 갖는 신규한 슈도모나스속 DJ15 균주 및 이를 이용한 진딧물 방제용 조성물을 제공한다.(a) The present invention provides a novel Pseudomonas sp. DJ15 strain having a controlling activity against aphids and a chitin-degrading activity, and a composition for controlling aphids using the same.

(b) 본 발명의 신규한 슈도모나스속 DJ15 균주 및 이의 배양액으로부터 분리한 잔토라이신 A 및 B는 우수한 진딧물 방제 활성을 나타낸다.(b) The novel Pseudomonas sp. DJ15 strain of the present invention and the zotorhizins A and B isolated from the culture thereof exhibit excellent aphid control activity.

(c) 본 발명의 진딧물 방제용 조성물은 친환경적인 생물학적 조성물로, 환경 오염 및 생태계에 대한 악영향의 가능성이 낮다.(c) The aphid control composition of the present invention is an environmentally friendly biological composition, and is less likely to adversely affect environmental pollution and ecosystem.

도 1은 신규한 슈도모나스 속 DJ15 균주(KACC 92116P)의 크기를 보여주는 투과전자현미경 사진을 나타낸다.
도 2는 신규한 슈도모나스 속 DJ15 균주의 키틴 분해 활성을 나타낸다.
도 3은 신규한 슈도모나스 속 DJ15 균주의 16S 유전자 염기서열 분석에 기초한 분자계통분류학적 위치를 나타낸다.
도 4는 배양 배지에 따른 신규한 슈도모나스 속 DJ-15 배양액에 의한 복숭아혹진딧물 살충력을 나타낸다.
도 5는 글루코오스, 만노오스, 수크로오스, 프럭토오스 또는 갈락토오스를 탄소원을 포함하는 무기염류배지에서 신규한 슈도모나스 속 DJ15 균주를 배양하여 살충율을 확인한 결과를 나타낸다.
도 6a 및 6b는 신규한 슈도모나스 속 DJ15의 복숭아혹진딧물에 대한 살충물질인 잔토라이신 A 및 B를 MALDI-TOF/MS로 분석한 결과를 나타낸다.
도 7a 및 7b는 신규한 슈도모나스 속 DJ15의 복숭아혹진딧물에 대한 살충물질인 잔토라이신 A 및 B를 proton 2D TOCSY NMR로 분석한 결과를 나타낸다.
도 8은 신규한 슈도모나스 속 DJ15 유래 잔토라이신 A 및 B의 화학식을 나타낸다. 화학식 1은 잔토라이신 A이고, 화학식 2는 잔토라이신 B의 화학식이다.
도 9a 및 9b는 본 발명의 슈도모나스 속 DJ15 균주가 생산하는 살충물질인 잔토라이신 A 및 B의 농도에 따른 복숭아혹진딧물의 살충율을 나타낸다.
Figure 1 shows a transmission electron micrograph showing the size of the novel Pseudomonas sp. DJ15 strain (KACC 92116P).
Fig. 2 shows the chitin degrading activity of the novel Pseudomonas sp. DJ15 strain.
Figure 3 shows the molecular phylogenetic location based on 16S gene sequencing analysis of the novel Pseudomonas sp. DJ15 strain.
Fig. 4 shows the peptic aphid insecticidal activity by the novel Pseudomonas sp. DJ-15 culture medium according to the culture medium.
FIG. 5 shows the result of confirming the insecticidal rate by culturing a novel Pseudomonas sp. DJ15 strain in an inorganic salt medium containing glucose, mannose, sucrose, fructose or galactose as a carbon source.
6A and 6B show results of MALDI-TOF / MS analysis of Zanthorrhizin A and B, insecticidal substances against aphids of peach aphid in the novel Pseudomonas sp. DJ15.
FIGS. 7A and 7B show the results of proton 2D TOCSY NMR analysis of Zanthorrhizin A and B, insecticidal substances against peach aphid in New Pseudomonas sp. DJ15.
Fig. 8 shows the formulas of the novel Pseudomonas sp. DJ15-derived zotolacins A and B; (1) is the xanthoraicin A, and the formula (2) is the formula of the xanthoraicin B.
9A and 9B show the mortality of peach aphid according to the concentrations of Zanthorrhizin A and B, insecticidal substances produced by the Pseudomonas sp. DJ15 strain of the present invention.

이하, 실시 예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these embodiments are only for describing the present invention in more detail and that the scope of the present invention is not limited by these embodiments in accordance with the gist of the present invention .

이 때, 사용되는 기술용어 및 과학용어에 있어 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 일반적으로 이해하는 의미를 지닌다. 또한, 종래와 동일한 기술적 구성 및 작용에 대한 반복되는 설명은 생략하기로 한다.Here, unless otherwise defined in the technical terms and scientific terms used, those having ordinary skill in the art to which the present invention belongs have a generally understood meaning. Repeated descriptions of the same technical constitution and operation as those of the conventional art will be omitted.

실시예 1: 진딧물 살충활성 미생물의 분리 및 배양Example 1: Isolation and culture of insecticidal active microorganisms

고창 해수욕장에서 채취한 토양 1 g을 CY 배지에 넣고 5일 동안 배양하였다. 이때, CY 배지의 조성은 2% 스웰 키틴(Swellen chitin) 및 0.2% 효모 추출물로 구성되었다. 배양액에 1%(v/v) 수준으로 접종하고 배양액 일부를 CY 한천배지(스웰 키틴 2%, 0.2% 효모추출물, 아가 2%)에 도말하여 30℃에서 배양하였다.1 g of soil collected from Gochang Beach was placed in CY medium and cultured for 5 days. At this time, the composition of the CY medium was composed of 2% Swellen chitin and 0.2% yeast extract. The culture was inoculated at a level of 1% (v / v), and a portion of the culture was plated on CY agar medium (2% swell chitin, 0.2% yeast extract, 2% agar) and cultured at 30 ° C.

상기 3일 후 CY 한천배지에 생성된 콜로니들을 각각 LB 액체 배지(트립톤 10.0 g, 효모 추출물 5.0 g, 염화나트륨 10.0 g)에 96 시간 배양 후 진딧물에 대한 살충율을 조사한 다음 가장 활성이 높은 균주를 선발하였다. 상기 선발된 진딧물 활성이 가장 높은 균주를 LB 한천배지(트립톤 10.0 g, 효모추출물 5.0 g, 염화나트륨 10.0 g, 아가 15.0 g)에서 반복적인 계대배양을 통해 순수 분리하여 얻은 다음 그의 구조를 투과전자현미경으로 관찰하였다(도 1). 도 1에서도 확인할 수 있듯이, 균주의 크기는 1 내지 2(길이)×0.5 내지 1(폭) ㎛이었으며, 균주의 형태는 짧은 막대모양이였다. 순수 분리된 미생물은 16S 리보솜 유전자 분석상 비병원성 슈도모나스 속(pseudomonas sp.) 그람음성세균으로 동정되었다. 또한, 신규 동정된 슈도모나스 속 그람음성세균은 키틴이 함유된 CY 한천배지에서 30℃ 정치 배양하였을 때, 3일 후 클리어존(clear zone)을 형성하는 것을 확인하여, 키틴에 대한 분해능을 갖는 것을 확인하였다(도 2).After 3 days, the colonies on the CY agar medium were cultured for 96 hours in LB liquid medium (Tryptone 10.0 g, yeast extract 5.0 g, and sodium chloride 10.0 g), respectively, and the insecticidal activity against aphids was examined. Were selected. The strain with the highest activity of the selected aphid was obtained by repeated separation of subculture in an LB agar medium (10.0 g of tryptone, 5.0 g of yeast extract, 10.0 g of sodium chloride, 15.0 g of agar) and then its structure was examined by transmission electron microscope (Fig. 1). As can be seen in FIG. 1, the size of the strain was 1 to 2 (length) × 0.5 to 1 (width) μm, and the shape of the strain was a short rod shape. The purely isolated microorganism was identified as a non-pathogenic pseudomonas sp. Gram-negative bacterium in 16S ribosomal gene analysis. Further, it was confirmed that a newly identified Pseudomonas sp. Gram-negative bacterium formed a clear zone after 3 days when cultured in a CY agar medium containing chitin at 30 DEG C to confirm that it has a cleavage ability against chitin (Fig. 2).

실시예 2: 염기서열 분석에 의한 진딧물 살충활성 미생물의 동정Example 2: Identification of aphid insecticidally active microorganisms by base sequence analysis

상기 실시예 1에서 순수 분리된 진딧물 살충활성 미생물의 동정을 위해 염색체 DNA(chromosome DNA)를 추출한 후 16S 리보솜의 유전자 서열을 분석한 결과, 서열목록 제1서열의 염기서열을 확인할 수 있었다.The chromosomal DNA (chromosome DNA) was extracted for the identification of the aphid insecticidally active microorganism purely isolated in Example 1, and the gene sequence of 16S ribosomes was analyzed to confirm the nucleotide sequence of the 1st sequence of the sequence listing.

또한, 상기 순수 분리된 진딧물 살충활성 미생물은 네이버-조이닝(Neighbor-joining)법에 의한 계통학적 분석을 통해 확인한 결과 도 3에서도 확인할 수 있듯이, Pseudomonas mosselii CIP 105259(AF072688) 균주와 분류학적으로 99.7% 수준으로 유사하였다.As shown in FIG. 3, the Pseudomonas mosselii CIP 105259 (AF072688) strain was taxonomically classified into a 99.7% strain as shown in FIG. 3 as a result of phylogenetic analysis by the neighbor-joining method. %.

상기 실시 예 1에서 순수 분리된 진딧물 살충활성 미생물은 Pseudomonas mosselii CIP 105259(AF072688) 균주와 유전자 분석을 기초로한 계통학적 분류상에서는 유사하였으나, 아직 Pseudomonas mosselii CIP 105259(AF072688) 균주에서는 보고된 바가 없는 진딧물 살충활성 및 키틴 분해활성을 갖는 신규한 미생물임을 확인하고, 이를 슈도모나스속 DJ15라고 명명하고, 국립농업과학원 농업유전자원센터에 기탁하여 2016년 1월 13일 기탁번호 KACC 92116P를 부여받았다.Example 1 The purified aphids from insecticidally active microorganism Pseudomonas mosselii CIP 105259 (AF072688) strains and were similar On the phylogenetic classification based on the genetic analysis, yet Pseudomonas mosselii CIP 105259 (AF072688) strains in the aphid not the reported bar It was identified as a new microorganism having insecticidal activity and chitinolytic activity and named as DJ15 in Pseudomonas and deposited with the National Institute of Agricultural Science and Technology, National Institute of Agricultural Science and Technology and received the deposit number KACC 92116P on Jan. 13,

실시예 3: 슈도모나스속 DJ-15의 살충활성 및 살충물질 분리Example 3: Isolation and isolation of insecticidal activity of DJ-15 from Pseudomonas sp.

상기 실시예 1의 신규 미생물 슈도모나스 속(pseudomonas sp.) DJ15를 LB 배지에 하룻밤 배양한 다음 배양액 일부(1%, v/v)를 0.2% 글루코오스를 탄소원으로 함유한 무기염류 배지에 접종하고 30℃, 150 rpm에서 4일 동안 진탕 배양하였다. 이때 무기염류 배지의 조성은 리터당 1.0 g KH2PO4, 2.0 g Na2HPO4, 0.4 g (NH4)2SO4, 0.4 g MgSO4ㆍ7H2O 및 리터당 미량원소 용액 0.2%(v/v)로 구성하였다. 미량원소 용액은 리터당 0.1 g Al(OH)3, 0.05 g SnCl2ㆍ2H2O, 0.05 g KI, 0.05 g LiCl, 0.08 g MnSO4ㆍ4H2O, 0.05 g H3BO3, 0.1 g ZnSO4ㆍ7H2O, 0.1 g CoCl2ㆍ6H2O, 0.1 g NiSO4ㆍ6H2O, 0.05 g BaCl2, 0.05 g (NH4)6Mo7Oㆍ4H2O 및 0.08 g FeSO4로 구성되었다.The new microorganism pseudomonas sp. DJ15 of Example 1 was cultured overnight in LB medium, and then a part of the culture (1%, v / v) was inoculated into an inorganic salt medium containing 0.2% glucose as a carbon source, , And shake cultured at 150 rpm for 4 days. The composition of the inorganic salt medium was 1.0 g KH 2 PO 4 , 2.0 g Na 2 HPO 4 , 0.4 g (NH 4 ) 2 SO 4 , 0.4 g MgSO 4揃 7H 2 O and 0.2% (v / v). 0.05 g KI, 0.05 g LiCl, 0.08 g MnSO 4 .4H 2 O, 0.05 g H 3 BO 3 , 0.1 g ZnSO 4 , 0.1 g Al 2 O 3 , 0.05 g SnCl 2 .2H 2 O, and 7H consisted 2 O, 0.1 g CoCl 2 and 6H 2 O, 0.1 g NiSO 4 and 6H 2 O, 0.05 g BaCl 2 , 0.05 g (NH 4) 6 Mo 7 O and 4H 2 O and 0.08 g FeSO 4 .

상기 진탕 배양된 배양원액을 진딧물에 살포하여 24 시간 후 살충율을 조사하였다. 살충율은 무처리구 복숭아혹진딧물 생충수에 대한 처리구 복숭아혹진딧물 생충수 비율를 기준으로 하는 Abbott's 식, 살충율={[(무처리구 진딧물 생충수 - 처리구 진딧물 생충수)] / 무처리구 진딧물 생충수}×100에 의해 계산하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.The shake cultured stock solution was sprayed on aphids to investigate the mortality rate after 24 hours. The insecticidal rate was determined by Abbott's formula, insecticidal rate = {[(untreated aphid aphid aphid aphid aphid aphid aphid)] / aphid aphid aphid aphid} × 100 based on the ratio of green peach aphid Respectively. The results are shown in Fig.

도 3에서 보여준 바와 같이, LB 배지, 무기염류 배지 및 CY 배지에서 배양한 DJ-15 균주 배양액의 진딧물 살충율이 각각 70% 이상의 수준으로 조사되어 본 발명의 균주 배양액 역시 살충효과가 있는 것을 확인하였으며, 이는 배양액에 살충물질이 함유되어 있음을 알 수 있었다. DJ15 균주는 CY 배지에서 처음 분리된 균주로, 상기 CY 배지는 키틴을 탄소원으로 이용하는 균주를 선발하는데 적합한 배지이다. 키틴은 게의 껍질에서 분리할 수 있으며 이는 상용화에 경제적으로 우수한 재료로 사용되고 있다. 따라서 CY 배지에서 분리한 균은 키틴을 이용하여 생장할 수 있는 균, 즉 키틴 분해 활성을 가지는 균주이며 상용화시 경제적으로 우수한 균이 될 수 있다. CY 배지에서 분리한 DJ15는 CY 배지에서 배양하였을 때 70% 정도의 진딧물에 대한 살충활성을 나타내었다. CY 배지는 최소한의 영양분만을 제공하는 것으로, 보다 나은 살충율을 알아보기 위해 고급배지인 LB 배지를 사용한 결과, 영양분이 풍부하여 비교적 많은 2차 대사산물을 많이 생성함으로써, 진딧물 살충율이 100%를 나타내었다(도 4). 최적배지를 알아보기 위해 실행한 실험에서 다양한 탄소원을 소량(20 g/L)으로 사용하여 무기염류배지에 DJ15를 배양하였을 때 탄소원 중 글루코오스와 만노오스에서 높은 살충율을 나타내었다(도 5). 살충물질을 분리하기 위해 CY 배지, 무기염류배지(탄소원: 글루코오스 20 g/L) 및 LB 배지에서 DJ15를 배양하였다. CY 배지는 배양(5-6일 배양, 30℃, 150 rpm 배양) 시간이 길어 제외하였으며, 무기염류배지 및 LB 배지에 배양(4일 배양, 30℃, 150 rpm 배양)한 DJ15의 배양액을 추출과 정제하였을 때 같은 물질을 생산하는 것을 TLC 및 HPLC 상에서 확인할 수 있었다. 무기염류배지가 LB배지에 비해 낮은 살충율을 보였지만 추출과 정제 시 LB배지에서 배양한 DJ15의 배양액의 경우 진딧물 살충물질 이외의 다양한 물질들이 많이 나와 정제에 어려움이 있었다. 따라서 살충물질의 정제 및 추출이 보다 용이한 것으로 판단된 무기염류배지로 DJ15를 배양한 배양액에서 진딧물 살충활성물질을 분리하였다.As shown in FIG. 3, the aphid kill rates of the DJ-15 culture medium cultured in the LB medium, the inorganic salt medium and the CY medium were each 70% or more, indicating that the culture medium of the present invention also had an insecticidal effect , Indicating that the culture medium contained insecticidal substances. The DJ15 strain is a strain first isolated from CY medium, and the CY medium is a medium suitable for selecting a strain using chitin as a carbon source. Chitin can be isolated from the crab shell and is used as an economically superior material for commercialization. Therefore, the bacteria isolated from the CY medium can be grown by using chitin, that is, a strain having chitinolytic activity, which can be economically advantageous in commercialization. DJ15 isolated from CY medium showed about 70% insecticidal activity against aphids when cultured in CY medium. CY medium provides only minimal nutrients. In order to investigate better insecticidal rate, LB medium, which is a high-quality medium, was used. As a result, a large amount of secondary metabolites were produced due to abundant nutrients. (Fig. 4). Experiments were carried out in order to determine the optimum medium. DJ15 was cultivated in a mineral salt medium using a small amount of various carbon sources (20 g / L), showing a high insecticidal rate in glucose and mannose in carbon sources (FIG. 5). To isolate the insecticidal material, DJ15 was cultured in CY medium, inorganic salt medium (carbon source: 20 g / L of glucose) and LB medium. CY medium was excluded because it was cultured for 5-6 days at 30 ° C and 150 rpm. The culture medium of DJ15 (culture for 4 days, 30 ° C, 150 rpm) was cultured on inorganic salt medium and LB medium And purified by TLC and HPLC. Inorganic salt medium showed lower insecticidal rate than LB medium. However, in the case of DJ15 cultured in LB medium during extraction and purification, a variety of substances other than aphid insecticide substances were found, which made purification difficult. Therefore, the aphid insecticide was isolated from the culture medium in which DJ15 was cultured with an inorganic salt medium which was considered to be easier to purify and extract the insecticidal substance.

이에 상기 살충물질을 조사하기 위해 글루코오스 무기염류 배지에서 배양한 DJ15 균주 배양액을 원심분리 한 후 상층액을 에틸아세테이트, 클로로포름으로 추출하였으며, 상기 추출액들의 진딧물 살충율을 조사한 결과 에틸아세테이트 추출물에서 가장 높은 활성이 조사되었다.In order to investigate the insecticidal substances, the DJ15 strain cultured in a glucose mineral medium was centrifuged, and then the supernatant was extracted with ethyl acetate and chloroform. As a result of examining the aphid kill rate of the extracts, the highest activity Was investigated.

상기 가장 높은 활성을 가지는 에틸아세테이트 추출물을 실리카겔 크로마토그래피 정제를 실시하였다. 실리카겔 정제는 실리카겔 50 g을 유리컬럼(지름 3.5 cm×길이 21 cm)에 100% 클로르포름으로 습식 충진한 다음 상기에서 얻은 에틸아세테이트 추출물을 칼럼에 넣고 클로르포름(CHCl3), 메탄올(MeOH) 용매계를 용출하여 실시하였다. 정제에 사용된 용매계는 CHCl3-EtOAc=55:45(v:v)로 용출하였다. 각각의 용출액을 수득하여 TLC로 확인하였다. 그 결과 TLC 상에서 발색되는 부분이 복숭아혹진딧물에 대한 살충활성이 있는 것을 확인하였다.The ethyl acetate extract having the highest activity was subjected to silica gel chromatography purification. 50 g of the silica gel was wet-packed in a glass column (3.5 cm in diameter × 21 cm in length) with 100% chloroform, and the ethyl acetate extract obtained above was placed in a column. The column was washed with chloroform (CHCl 3 ) System was eluted. The solvent system used for purification was eluted with CHCl 3 -EtOAc = 55: 45 (v: v). Each eluate was obtained and confirmed by TLC. As a result, it was confirmed that the part which develops on TLC has insecticidal activity against peach aphid.

이에 실리카겔 정제에서 얻은 활성분획을 Supelclean LC18 컬럼을 이용하여 다시 정제하였다. 상기의 활성 분획물을 컬럼에 넣고 메탄올로 용출하면서 6 ㎖씩 분취하였다. 분취된 용출액을 각각 농축 후 진딧물 살충활성을 조사하여 살충활성 분획을 얻은 다음, 액체크로마토그래피로 분석하여 단일피크 화합물을 모았다. 이때 사용된 칼럼은 ODS(지름 4.6 ㎜×길이 20 ㎝)로서 용매는 84%(v/v) 메탄올이 함유된 수용액을 이용하였다.The active fraction obtained from the silica gel purification was further purified using a Supelclean LC18 column. The above-mentioned active fractions were put into a column and eluted with methanol, and 6 ml aliquots were collected. After collecting the eluate, the insecticidal activity was examined by examining the insecticidal activity of aphids, followed by analysis by liquid chromatography to collect a single peak compound. The column used was ODS (diameter 4.6 mm x length 20 cm), and an aqueous solution containing 84% (v / v) methanol was used as the solvent.

상기 액체크로마토그래피에서 정제한 활성분획은 농축한 다음 매트릭스 지원 레이저 이탈 이온화 비행시간형 질량분석장치((Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry, MALDI-TOF/MS, 도 6), 핵자기공명(nuclear magnetic resonance, NMR, 도 7), 로 분석하여 살충물질의 화학구조(화학식 1 및 2)를 예측하였다(도 8).The active fractions purified in the liquid chromatography were concentrated and then loaded onto a matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF / MS, FIG. 6) The chemical structures of the insecticidal materials (Formulas 1 and 2) were predicted by analyzing with nuclear magnetic resonance (NMR, FIG. 7) (FIG. 8).

[화학식 1][Chemical Formula 1]

Figure pat00003
Figure pat00003

[화학식 2](2)

Figure pat00004
Figure pat00004

MALDI-TOF MS 분석결과 도 7a 및 7b에서도 확인할 수 있듯이, 잔토라이신 A(Xantholysin A)는 분자량이 [M+Na]+ 값이 1798.0403, 잔토라이신 B는 분자량이 [M+Na]+ 값이 1784.0956인 화합물이 각각 검출되었으며, 이는 기존에 보고(Li 등, 2013, PLoS one, 8(5): e62946)된 것과 유사한 분자량을 가진 잔토라이신 화합물이었다.As a result of MALDI-TOF MS analysis, as shown in FIGS. 7A and 7B, the molecular weight of [M + Na] + was 1798.0403, the molecular weight of Zantorysin A was [M + Na] + (1784.0956) were detected, respectively. This was a xanthorrhicin compound having a molecular weight similar to that previously reported (Li et al., 2013, PLoS one, 8 (5): e62946).

또한 이 화합물을 NMR 분석한 결과 하기 표 1에서 제시한 바와 같이 잔토라이신 화합물의 전형적인 경향을 가지는 것을 확인하였다.As a result of NMR analysis of this compound, it was confirmed that the compound has a typical tendency of the xanthorrhizine compound as shown in Table 1 below.

펩타이드Peptides 서열order HNHN H? 기타Other 잔토라이신 AZantoraicin A LEU1LEU1 8.448.44 4.224.22 1.65, 1.611.65, 1.61 Hg: 1.61; Hd: 0.85Hg: 1.61; Hd: 0.85 GLU2GLU2 8.728.72 4.204.20 1.94, 2.061.94, 2.06 Hg: 2.40Hg: 2.40 GLN3GLN3 8.318.31 4.214.21 2.042.04 Hg: 2.28, 2.33; Hd: 7.48, 6.85Hg: 2.28, 2.33; Hd: 7.48, 6.85 VAL4VAL4 7.677.67 3.993.99 2.182.18 Hg: 0.87. 0.91Hg: 0.87. 0.91 LEU5LEU5 7.927.92 4.124.12 1.631.63 Hg: 1.63; Hd: 0.84Hg: 1.63; Hd: 0.84 GLN6GLN6 8.218.21 4.074.07 1.951.95 Hg: 2.21; Hd: 7.28, 6.72Hg: 2.21; Hd: 7.28, 6.72 SER7SER7 7.897.89 4.644.64 4.264.26 VAL8VAL8 8.278.27 4.154.15 2.382.38 Hg: 0.88, 1.00Hg: 0.88, 1.00 LEU9LEU9 8.178.17 4.134.13 1.741.74 Hg: 1.46; Hd: 0.84, 0.77Hg: 1.46; Hd: 0.84, 0.77 GLN10GLN10 7.917.91 4.234.23 1.991.99 Hg: 2.31; Hd: 7.37, 6.74Hg: 2.31; Hd: 7.37, 6.74 LEU11LEU11 7.947.94 4.204.20 1.54, 1.731.54, 1.73 Hg: 1.54; Hd:0.88, 0.81Hg: 1.54; Hd: 0.88, 0.81 LEU12LEU12 7.887.88 4.144.14 1.611.61 Hd: 0.84Hd: 0.84 GLN13GLN13 7.247.24 4.104.10 1.871.87 Hg: 2.14, 2.26; Hd:7.37, 6.96Hg: 2.14, 2.26; Hd: 7.37, 6.96 ILE14ILE14 7.567.56 4.304.30 1.811.81 Hg: 1.10, 1.29; Hd: 0.78Hg: 1.10, 1.29; Hd: 0.78 잔토라이신 BZantoraicin B LEU1LEU1 8.428.42 4.234.23 1.65, 1.611.65, 1.61 Hg: 1.61; Hd: 0.85Hg: 1.61; Hd: 0.85 GLU2GLU2 8.698.69 4.204.20 1.94, 2.061.94, 2.06 Hg: 2.4Hg: 2.4 GLN3GLN3 8.308.30 4.224.22 2.042.04 Hg: 2.30; Hd: 7.47, 6.86Hg: 2.30; Hd: 7.47, 6.86 VAL4VAL4 7.6687.668 4.004.00 2.182.18 Hg: 0.89Hg: 0.89 LEU5LEU5 7.917.91 4.134.13 1.621.62 Hg: 1.62; Hd: 0.84Hg: 1.62; Hd: 0.84 GLN6GLN6 8.228.22 4.084.08 1.95, 2.131.95, 2.13 Hg: 2.21; Hd: 7.27, 6.72Hg: 2.21; Hd: 7.27, 6.72 SER7SER7 7.907.90 4.664.66 4.274.27 VAL8VAL8 8.278.27 4.144.14 2.362.36 Hg: 0.88, 0.99Hg: 0.88, 0.99 LEU9LEU9 8.128.12 4.164.16 1.73, 1.451.73, 1.45 Hg: 1.45; Hd: 0.83Hg: 1.45; Hd: 0.83 GLN10GLN10 7.917.91 4.234.23 2.002.00 Hg: 2.30; Hd: 7.36, 6.73Hg: 2.30; Hd: 7.36, 6.73 LEU11LEU11 7.997.99 4.184.18 1.54, 1.721.54, 1.72 Hg: 1.54; Hd: 0.88, 0.80Hg: 1.54; Hd: 0.88, 0.80 LEU12LEU12 7.877.87 4.154.15 1.611.61 Hd: 0.84Hd: 0.84 GLN13GLN13 7.357.35 4.124.12 1.871.87 Hg: 2.15, 2.27; Hd: 7.38, 6.85Hg: 2.15, 2.27; Hd: 7.38, 6.85 VAL14VAL14 7.637.63 4.244.24 2.042.04 Hg: 0.79Hg: 0.79

실시예 4: 슈도모나스속 DJ-15에서 분리된 잔토라이신 A 및 B의 진딧물 살충시험Example 4: Aphid insect test of Zanthorrhizin A and B isolated from Pseudomonas spp DJ-15

상기 화학식 1 및 2의 슈도모나스속 DJ-15 배양액에서 분리한 잔토라이신 A 및 B를 복숭아혹진딧물 2령 약충이 이식된 배추 잎면에 농도별로 살포한 다음 24시간 후 진딧물 살충율을 조사하였다. 진딧물 살충율을 검정한 결과 도 9a 및 9b에서 보여준 바와 같이, 잔토라이신 A는 50 ㎎/L 이상 처리 시 100%에 가까운 진딧물 살충율을 보였으며, 반수치사량은 24.6 ㎎/L 수준이었다. 잔토라이신 B는 20 ㎎/L 이상 처리 시 100%에 가까운 진딧물 살충율을 보였으며, 반수치사량은 13.4 mg/L 수준이었다.Zymoliticins A and B isolated from the Pseudomonas sp. DJ-15 cultures of Formulas 1 and 2 were sprayed on the leaf surface of Chinese cabbage leaflets transplanted with second-day peach aphids, and then examined for aphid kill rate after 24 hours. As shown in FIGS. 9a and 9b, when the aphid insecticidal rate was examined, the zotolite A was found to have a rate close to 100% and the half-life lethal dose was 24.6 mg / L when treated with 50 mg / L or more. Zanthorrhizin B showed a close to 100% aphid kill rate at 20 ㎎ / L or more, and the half-life lethal dose was 13.4 mg / L.

이러한 결과는 본 발명 슈도모나스속 DJ15가 생산하는 잔토라이신은 진딧물 방제제로서 사용될 수 있음을 확인한 결과이며, 이에 잔토라이신이 진딧물 살충력을 가지고 있다는 것은 본 발명에서 최초로 확인한 결과이다.These results are the result of confirming that Zanthorrhizin produced by Pseudomonas sp. DJ15 of the present invention can be used as aphid control agent. Thus, it is the first result of the present invention that Zanthorrhizin has aphid insecticidal power.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the same is by way of illustration and example only and is not to be construed as limiting the scope of the present invention. It is therefore intended that the scope of the invention be defined by the claims appended hereto and their equivalents.

농업생명공학연구원Agricultural Biotechnology Research Institute KACC92116PKACC92116P 2016011320160113

<110> INDUSTRY FOUNDATION OF CHONNAM NATIONAL UNIVERSITY <120> Novel Pseudomonas sp. DJ15 Strain having Control Activity against Aphid <130> PN160069 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1419 <212> RNA <213> Pseudomonas sp. DJ15 16s rRNA <400> 1 ctacacatgc agtcgagcgg atgacgggag cttgctcctt gattcagcgg cggacgggtg 60 agtaatgcct aggaatctgc ctggtagtgg gggacaacgt ttcgaaagga acgctaatac 120 cgcatacgtc ctacgggaga aagcagggga ccttcgggcc ttgcgctatc agatgagcct 180 aggtcggatt agctagtagg tgaggtaatg gctcacctag gcgacgatcc gtaactggtc 240 tgagaggatg atcagtcaca ctggaactga gacacggtcc agactcctac gggaggcagc 300 agtggggaat attggacaat gggcgaaagc ctgatccagc catgccgcgt gtgtgaagaa 360 ggtcttcgga ttgtaaagca ctttaagttg ggaggaaggg cagtaagtta ataccttgct 420 gttttgacgt taccgacaga ataagcaccg gctaactctg tgccagcagc cgcggtaata 480 cagagggtgc aagcgttaat cggaattact gggcgtaaag cgcgcgtagg tggttcgtta 540 agttggatgt gaaagccccg ggctcaacct gggaactgca tccaaaactg gcgagctaga 600 gtatggtaga gggtggtgga atttcctgtg tagcggtgaa atgcgtagat ataggaagga 660 acaccagtgg cgaaggcgac cacctggact gatactgaca ctgaggtgcg aaagcgtggg 720 gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgtcaa ctagccgttg 780 gaatccttga gattttagtg gcgcagctaa cgcattaagt tgaccgcctg gggagtacgg 840 ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt 900 ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aggccttgac atgcagagaa ctttccagag 960 atggattggt gccttcggga actctgacac aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt 1020 cgtgagatgt tgggttaagt cccgtaacga gcgcaaccct tgtccttagt taccagcacg 1080 tcatggtggg cactctaagg agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt 1140 caagtcatca tggcccttac ggcctgggct acacacgtgc tacaatggtc ggtacagagg 1200 gttgccaagc cgcgaggtgg agctaatctc acaaaaccga tcgtagtccg gatcgcagtc 1260 tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc tagtaatcgc aaatcagaat gttgcggtga 1320 atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtgggt tgcaccagaa 1380 gtagctagtc taaccttcgg gaggacggta tacatcggt 1419 <110> INDUSTRY FOUNDATION OF CHONNAM NATIONAL UNIVERSITY <120> Novel Pseudomonas sp. DJ15 Strain having Control Activity against          Aphid <130> PN160069 <160> 1 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 1419 <212> RNA <213> Pseudomonas sp. DJ15 16s rRNA <400> 1 ctacacatgc agtcgagcgg atgacgggag cttgctcctt gattcagcgg cggacgggtg 60 agtaatgcct aggaatctgc ctggtagtgg gggacaacgt ttcgaaagga acgctaatac 120 cgcatacgtc ctacgggaga aagcagggga ccttcgggcc ttgcgctatc agatgagcct 180 aggtcggatt agctagtagg tgaggtaatg gctcacctag gcgacgatcc gtaactggtc 240 tgagaggatg atcagtcaca ctggaactga gacacggtcc agactcctac gggaggcagc 300 agtggggaat attggacaat gggcgaaagc ctgatccagc catgccgcgt gtgtgaagaa 360 ggtcttcgga ttgtaaagca ctttaagttg ggaggaaggg cagtaagtta ataccttgct 420 gtttggggt taccgacaga ataagcaccg gctaactctg tgccagcagc cgcggtaata 480 cagagggtgc aagcgttaat cggaattact gggcgtaaag cgcgcgtagg tggttcgtta 540 agttggatgt gaaagccccg ggctcaacct gggaactgca tccaaaactg gcgagctaga 600 gtatggtaga gggtggtgga atttcctgtg tagcggtgaa atgcgtagat ataggaagga 660 acaccagtgg cgaaggcgac cacctggact gatactgaca ctgaggtgcg aaagcgtggg 720 gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgtcaa ctagccgttg 780 gaatccttga gattttagtg gcgcagctaa cgcattaagt tgaccgcctg gggagtacgg 840 ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt 900 ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aggccttgac atgcagagaa ctttccagag 960 atggattggt gccttcggga actctgacac aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt 1020 cgtgagatgt tgggttaagt cccgtaacga gcgcaaccct tgtccttagt taccagcacg 1080 tcatggtggg cactctaagg agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt 1140 caagtcatca tggcccttac ggcctgggct acacacgtgc tacaatggtc ggtacagagg 1200 gttgccaagc cgcgaggtgg agctaatctc acaaaaccga tcgtagtccg gatcgcagtc 1260 tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc tagtaatcgc aaatcagaat gttgcggtga 1320 atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtgggt tgcaccagaa 1380 gtagctagtc taaccttcgg gaggacggta tacatcggt 1419

Claims (7)

진딧물에 대한 방제 활성 및 키틴 분해 활성을 갖는 신규한 슈도모나스속 DJ15 균주(KACC 92116P).
A novel Pseudomonas sp. DJ15 strain (KACC 92116P) having an antifungal activity and chitinolytic activity.
제 1 항에 있어서, 상기 진딧물은 복숭아혹진딧물(Myzus persicae)인 것을 특징으로 하는 균주.
The strain of claim 1, wherein the aphid is Myzus persicae .
제 1 항에 있어서, 상기 슈도모나스속 DJ15(KACC 92116P) 균주는 잔토라이신 A 및 잔토라이신 B로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 잔토라이신을 생성하는 것을 특징으로 하는 균주.
The strain of claim 1, wherein the Pseudomonas sp. DJ15 (KACC 92116P) strain produces at least one xanthoraicin selected from the group consisting of xanthorrhizin A and xanthorhindin B.
제 3 항에 있어서, 상기 잔토라이신 A는 22-26 ㎎/L 농도에서 반수치사량(Lethal Dose 50)을 나타내는 것을 특징으로 하는 균주.
4. The strain according to claim 3, wherein the Zanthoraicin A exhibits a half-life lethal dose (Lethal Dose 50) at a concentration of 22-26 mg / L.
제 3 항에 있어서, 상기 잔토라이신 B는 10-15 ㎎/L 농도에서 반수치사량(Lethal Dose 50)을 나타내는 것을 특징으로 하는 균주.
4. The strain according to claim 3, wherein the Zanthoraicin B exhibits a half-life (Lethal Dose 50) at a concentration of 10-15 mg / L.
슈도모나스속 DJ15(KACC 92116P), 상기 슈도모나스속 DJ15(KACC 92116P)의 배양액, 상기 배양액의 추출물, 잔토라이신 A(xantholysin A) 및 잔토라이신 B로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 유효성분으로 포함하는 진딧물 방제용 조성물.
At least one component selected from the group consisting of Pseudomonas sp. DJ15 (KACC 92116P), the Pseudomonas sp. DJ15 (KACC 92116P), the culture solution extract, xantholysin A and xantholysin B Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
제 6 항의 진딧물 방제용 조성물을 살포 또는 도포하는 단계를 포함하는 진딧물 방제 방법.A method for controlling aphids, comprising spraying or applying the composition for controlling aphids of claim 6.
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