KR20170077997A - Mixed strain having nematicidal effect against root knot nematode and uses thereof - Google Patents

Mixed strain having nematicidal effect against root knot nematode and uses thereof Download PDF

Info

Publication number
KR20170077997A
KR20170077997A KR1020150188065A KR20150188065A KR20170077997A KR 20170077997 A KR20170077997 A KR 20170077997A KR 1020150188065 A KR1020150188065 A KR 1020150188065A KR 20150188065 A KR20150188065 A KR 20150188065A KR 20170077997 A KR20170077997 A KR 20170077997A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
strain
root
knot
nematode
meloidogyne
Prior art date
Application number
KR1020150188065A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR101795781B1 (en
Inventor
김민수
Original Assignee
한국생명공학연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국생명공학연구원 filed Critical 한국생명공학연구원
Priority to KR1020150188065A priority Critical patent/KR101795781B1/en
Publication of KR20170077997A publication Critical patent/KR20170077997A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101795781B1 publication Critical patent/KR101795781B1/en

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14Fungi; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12R1/465
    • C12R1/645
    • C12R1/79

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

본 발명에서는 토양 작물에 기생하는 뿌리혹선충(Meloidogyne sp.)에 대해 살선충 효과가 우수한 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주를 분리하였다. 따라서 상기 3종의 균주를 혼합하여 제조한 혼합 균주는 상호 생육 억제능이 없으며, 상기 균주를 단독으로 사용하였을 때보다 뿌리혹선충의 알 부화 및 생육을 억제하는 시너지 효과를 나타냄으로써 작물의 생육을 원활히 할 수 있는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 3종의 혼합 균주는 미생물 자체, 액상, 입상 또는 분상으로 제조되어 종자, 식물체, 모판, 토양 등에 여러 가지 방법으로 처리될 수 있으며, 화학합성농약을 대체할 수 있는 미생물 제제로 매우 유용하게 이용될 수 있을 것이다. In the present invention, oligo-less nematocides effect excellent AAS robot for the root-knot nematode (Meloidogyne sp.) Which are parasitic on crops, soil spokes La (Arthrobotrys oligospora) NT-21 strain, Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis KKY-0217 strain and Paecilomyces lysineus lilacinus ) strain NE-86. Therefore, the mixed strains prepared by mixing the three strains do not inhibit mutual growth, and they exhibit a synergistic effect of inhibiting egg hatching and growth of root-knot nematodes, as compared with the case of using the strains alone, . Therefore, the three kinds of mixed strains of the present invention can be prepared by microorganisms themselves, liquid, granular or powder form, and can be treated in various ways such as seeds, plants, bases and soils, and microorganism preparations It can be very useful.

Description

뿌리혹선충에 대해 살선충 효과를 가지는 혼합 균주 및 이의 용도{Mixed strain having nematicidal effect against root knot nematode and uses thereof}Mixed strains having nematode effect against root-knot nematodes and uses thereof.

본 발명은 뿌리혹선충에 대해 살선충 효과를 가지는 혼합 균주 및 이의 용도에 관한 것이다. The present invention relates to a mixed strain having a nematode effect against root-knot nematodes and uses thereof.

뿌리혹선충(Meloidogyne sp.)은 1850년대 영국의 온실에서 재배중인 오이 뿌리혹에서 처음 발견되었으며, 세계적으로는 78종이 분포하고 있다. 국내에는 모두 6종의 뿌리혹선충이 서식하고 있으며, 작물 재배에 문제가 되는 뿌리혹선충은 땅콩뿌리혹선충(Meloidogyne arenaria), 당근뿌리혹선충(Meloidogyne hapla) 및 고구마뿌리혹선충(Meloidogyne incognita) 3종으로 알려져 있다. 이들 선충은 가지, 감자, 수박, 딸기 등 다양한 작물을 기주로 가지고 있으며, 특히 시설재배단지에 큰 피해가 되고 있다. 뿌리혹선충(Meloidogyne sp.)은 길이 0.1~1mm 정도의 작은 동물로 지구상 모든 곳에 서식하며 토양 1m2 당 약 40만 마리로 토양생태계에 중요한 역할을 한다. 그 중 식물에 기생하는 선충류는 10%이고 나머지 90%는 자유생활선충이다. 또한, 선충 감염으로 인한 작물의 피해규모의 절반을 야기하는 것으로 알려져 있으며 전 세계 약 700여 종의 작물의 뿌리, 줄기, 잎 등에 기생하여 양분의 이동통로를 막고 양분을 탈취해 피해를 준다. 특히 시설원예지에 연작으로 인한 선충 피해가 많은데 20~30%의 수확량 감소를 가져오기도 하며 진균, 세균, 바이러스 등의 2차 감염으로 인하여 많은 피해를 주기도 한다. Meloidogyne spp . Was first found in cucumber rootstocks grown in the UK's greenhouses in the 1850s, with 78 species distributed worldwide. There are all local to the root-knot nematodes of six kinds of forms, root-knot nematode is a problem in crops are peanut root-knot nematode (Meloidogyne arenaria ), carrot root nematode ( Meloidogyne hapla ) and sweet potato root nematodes ( Meloidogyne incognita ). These nematodes have various kinds of crops such as eggplant, potato, watermelon and strawberry as a host, and they are particularly harmful to the facility cultivation complex. Root-knot nematodes (Meloidogyne sp.) In length from 0.1 to habitat anywhere on Earth as a small animal about 1mm and plays an important role in the soil ecosystem of about 400,000 per soil 1m 2. Among them, 10% are nematodes parasitic to plants and 90% are free-living nematodes. It is also known to cause half of crop damage caused by nematode infection. It is parasitic on roots, stems and leaves of about 700 kinds of crops around the world, blocking nutrient migration pathways and damaging nutrients. Especially, there is a lot of nematode damage caused by the sequence in the facilities. It causes 20 ~ 30% decrease in yield and causes a lot of damage due to secondary infections such as fungi, bacteria and viruses.

뿌리혹선충의 생활사는 여섯 단계로 나뉘며 알에서 부화된 제 2기 유충이 식물의 뿌리의 골무를 뚫고 침입하여, 뿌리 조직의 중심주에 정착하고 식물의 영양분을 흡수함으로써 피해를 준다. 기생 부위의 식물 세포는 세포수가 증가되고, 비대 증상이 일어나 혹모양을 형성한다. 거대세포는 정상세포보다 더 크며, 감수분열 없이 염색체가 증대되는 내재복제(endoreduplication)로 대략 100개의 핵을 갖고 있다. 선충의 생활사는 2령 유충의 뿌리혹선충이 뿌리로 침입하여 세포 사이를 이동하여 유관속주에 이르게 되면 식도와 연결되어 있는 구침을 이용하여 식물의 세포벽을 뚫고 식도분비물을 방출하여 5-7개의 유조직(parenchymatous) 세포들을 이용하여 영양분을 섭취한다. 완전히 분화된 거대세포(giant cells)는 정상세포보다 더 크며, 감수분열없이 염색체가 증대되는 내재복제로 대략 100개의 핵(multinucleate)을 갖고 있다. 선충은 정주하여 3번의 탈피를 한다. 가끔 수컷으로 발달된 후 뿌리 밖으로 나가기도 하지만 이것은 번식에 영향을 미치지 않는다. 배모양의 암컷은 알을 낳으며 뿌리 표면으로 방출된다. 선충 감염에 의한 작물 피해를 줄이거나 방제하기 위해서 윤작, 토양훈증, 토양 과습화, 유기물 사용, 유묘기관리, 조기 파종 및 정식 등이 있으나 이런 방법들은 식물체에 영향을 미치며 완전한 방제는 불가능하여 좋은 방법이라 볼 수 없으며 저항성 품종 또한 드물다. 또한, 알디카브(aldicarb), 페나미포스(fenamiphos) 및 메틸 브로마이드(methyl bromide)를 이용한 화학적 방제를 하는 경우가 있으나, 이는 인체 및 환경오염의 문제점이 있다. 따라서, 선충 구제를 위한 새로운 방법의 일환으로 미생물을 이용한 연구가 활발히 진행 중이다. The life span of the root-knot nematode is divided into six stages, and the second larva hatched from the egg breaks through the thimble of the root of the plant and infects the plant by absorbing the nutrients of the plant. Plant cells in the parasitic area increase in the number of cells, hypertrophy occurs and lumps form. Giant cells are larger than normal cells and have about 100 nuclei with endoreduplication, which increases chromosomes without meiosis. When the nematode of the nematode enters the roots of the second instar larva, it moves between the cells and reaches the anastomosis. Then, the nematode secretion is released through the cell wall of the plant using the needle connected with the esophagus, Parenchymatous cells are used to ingest nutrients. Fully differentiated giant cells are larger than normal cells and have approximately 100 nucleotides (multinucleates) with an intrinsic replication that increases chromosomes without meiosis. The nematode is administered three times by molt. Sometimes they develop into males and then go out of their roots, but this does not affect reproduction. Pear-shaped females lay eggs and are released to the root surface. In order to reduce or control crop damage caused by nematode infection, there are crop rotation, soil fumigation, soil humidification, use of organic matter, management of mullet management, early sowing and formality. However, these methods affect plant and can not be completely controlled. And resistant varieties are also rare. In addition, chemical control using aldicarb, fenamiphos, and methyl bromide may be performed, but this causes human and environmental pollution problems. Therefore, research using microorganisms is actively under way as a new method for nematode remedy.

한편, 한국공개특허 제2003-0094540호에는 '살선충 활성을 갖는 신규한 균주를 포함하는 미생물살선충제, 그 제조방법 및 처리방법'에 대해 개시하고 있으며, 한국등록특허 제0791983호에는 아쓰로보트리스속 미생물 및 이를 포함하는 식물 기생성선충 방제용 미생물 제제에 대해 개시하고 있다. 하지만, 본 발명의 뿌리혹선충에 대해 살선충 효과를 가지는 혼합 균주 및 이의 용도에 대해서는 아직 개시된 바가 없다. Korean Patent Laid-Open Publication No. 2003-0094540 discloses a microbial nematode containing a novel strain having a nematode activity, a method for producing and treating the microbial nematode, and Korean Patent No. 0791983 discloses an anti- Leuces microorganisms and microorganism preparations for controlling plant-derived nematodes containing the same. However, the mixed strains having the nematode effect against the root-knot nematodes of the present invention and their uses have not yet been disclosed.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 토양 작물에 기생하는 뿌리혹선충(Meloidogyne sp.)에 대해 살선충 효과가 우수한 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주를 분리하였다. 따라서 본 발명의 상기 3종의 균주를 혼합하여 제조한 혼합 균주는 상호 생육 억제능이 없었으며, 상기 균주를 단독으로 사용하였을 때보다 뿌리혹선충의 알 부화 및 생육을 억제하는 시너지 효과를 나타내는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.The present invention is derived by the request as described above, the inventors have raised less root-knot nematode (Meloidogyne sp.) Nematocides effect is excellent AAS robot for parasitic on crops, soil spokes La (Arthrobotrys oligospora) NT-21 strain, Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis KKY-0217 strain and Paecilomyces lysineus lilacinus ) strain NE-86. Therefore, it was confirmed that the mixed strains prepared by mixing the above three strains of the present invention had no mutual growth inhibitory ability and showed synergy effect of inhibiting egg hatching and growth of root-knot nematodes than when the strains were used alone , Thereby completing the present invention.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) 균주로 이루어진 뿌리혹선충 방제용 혼합 균주를 제공한다.In order to accomplish the above object, the present invention relates to a method for producing an anti- oligospora) strain, Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis , and Paecilomyces lilacinus . The present invention also provides a mixed strain for controlling root-knot nematitis .

또한, 본 발명은 상기 혼합 균주, 상기 균주의 배양물 또는 상기 균주의 배양액의 농축액과 농약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 뿌리혹선충 방제용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for controlling root blight nematitis, which comprises the above-mentioned mixed strain, a culture of the strain, or a concentrate of a culture solution of the strain, and a pesticide acceptable carrier.

또한, 본 발명은 상기 뿌리혹선충 방제용 조성물의 유효량을 식물부위, 토양 또는 종자에 처리하는 단계를 포함하는 뿌리혹선충을 방제하는 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for controlling root-knot nematia comprising the step of treating an effective amount of the composition for controlling root-knot nematosis to a plant part, soil or seed.

또한, 본 발명은 상기 혼합 균주를 배양하는 단계를 포함하는 뿌리혹선충 방제용 조성물의 제조 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for preparing a composition for controlling root nodule nematism comprising culturing the mixed strain.

또한, 본 발명은 상기 혼합 균주, 상기 균주의 배양물 또는 상기 균주의 배양액의 농축액과 농약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 뿌리혹선충의 감염 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for preventing or treating infection with root-knot nematia, which comprises the mixed strain, the culture of the strain or a concentrate of the culture medium of the strain and an agrochemically acceptable carrier.

본 발명에서는 토양 작물에 기생하는 뿌리혹선충(Meloidogyne sp.)에 대해 살선충 효과가 우수한 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주를 분리하였다. 따라서 상기 3종의 균주를 혼합하여 제조한 혼합 균주는 상호 생육 억제능이 없으며, 상기 균주를 단독으로 사용하였을 때보다 뿌리혹선충의 알 부화 및 생육을 억제하는 시너지 효과를 나타냄으로써 작물의 생육을 원활히 할 수 있는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 3종의 혼합 균주는 미생물 자체, 액상, 입상 또는 분상으로 제조되어 종자, 식물체, 모판, 토양 등에 여러 가지 방법으로 처리될 수 있으며, 화학합성농약을 대체할 수 있는 미생물 제제로 매우 유용하게 이용될 수 있을 것이다. In the present invention, oligo-less nematocides effect excellent AAS robot for the root-knot nematode (Meloidogyne sp.) Which are parasitic on crops, soil spokes La (Arthrobotrys oligospora strain NT-21, Streptomyces avermitilis KKY-0217 strain and Paecilomyces lysineus lilacinus ) strain NE-86. Therefore, the mixed strains prepared by mixing the three strains do not inhibit mutual growth, and they exhibit a synergistic effect of inhibiting egg hatching and growth of root-knot nematodes, as compared with the case of using the strains alone, . Therefore, the three kinds of mixed strains of the present invention can be prepared by microorganisms themselves, liquid, granular or powder form, and can be treated in various ways such as seeds, plants, bases and soils, and microorganism preparations It can be very useful.

도 1은 본 발명의 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주의 계통학적 위치를 나타낸 결과이다.
도 2는 본 발명의 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주의 계통학적 위치를 나타낸 결과이다.
도 3은 본 발명의 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주의 계통학적 위치를 나타낸 결과이다.
도 4는 본 발명의 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주(a), 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주(b) 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주(c)의 상호 생육 억제능이 없음을 나타낸 결과이다.
도 5는 본 발명의 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주, 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주 및 이를 혼합하여 제조한 3종의 혼합 균주에 의한 뿌리혹선충의 알 부화 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 6은 본 발명의 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주, 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주 및 이를 혼합하여 제조한 3종의 혼합 균주에 의한 뿌리혹선충의 생육 억제효과를 나타낸 결과이다. control value는 방제가(%)를 나타낸 것이다.
1 is oligonucleotide-less Ars robot of the present invention sports La (Arthrobotrys oligospora ) NT-21 strains.
Fig. 2 shows the phylogenetic positions of the strain Streptomyces avermitilis KKY-0217 of the present invention.
Figure 3 is a graphical representation of the results obtained with Paecilomyces < RTI ID = 0.0 > lilacinus ) strain NE-86.
FIG. 4 is a graph showing the activity of the inventive Arthrobotrys oligospora) NT-21 strain (a), Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis KKY-0217 strain (b) and Paecilomyces lira sinensis lilacinus ) NE-86 strain (c).
Figure 5 is a graphical representation of the results obtained from the Arthrobotrys < RTI ID = 0.0 > oligospora) NT-21 strain, Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis ) KKY-0217 strain, Paecilomyces lysineus lilacinus ) NE-86 strain, and three mixed strains prepared by mixing them.
FIG. 6 is a graph showing the activity of the inventive Arthrobotrys oligospora) NT-21 strain, Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis ) KKY-0217 strain, Paecilomyces lysineus lilacinus NE-86 strains, and three mixed strains prepared by mixing them. The control value is the control (%).

본 발명을 달성하기 위하여, 본 발명은 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) 균주로 이루어진 뿌리혹선충 방제용 혼합 균주를 제공한다. In order to accomplish the present invention, the present invention relates to a method for the treatment of arthrobotrys The present invention relates to a mixed strain for controlling root-knot nematitis , which comprises an oligospora strain, a Streptomyces avermitilis strain and a Paecilomyces lilacinus strain.

본 발명의 뿌리혹선충 방제용 혼합 균주에서, 상기 아스로보트리스 올리고스포라 균주는 기탁번호가 KCTC12879BP인 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주이고, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스 균주는 기탁번호가 KCTC12846BP인 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermilitis) KKY-0217 균주이고, 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) 균주는 기탁번호가 KCTC12880BP인 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주인 것이 바람직하다.In the mixed strains for controlling root-knot nematodes according to the present invention, the asbestosolysis oligospora strain is an arthrobotrys with accession number KCTC12879BP oligospora) NT-21 strain, and Streptomyces Abbe reumi subtilis strain of Streptomyces Abbe reumi subtilis (Accession No. KCTC12846BP the Streptomyces avermilitis KKY-0217 strain, Paecilomyces lysineus lilacinus ) strain is a strain of Paecilomyces < RTI ID = 0.0 > lilacinus strain NE-86.

상기 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주는 뿌리혹선충이 발병된 토양으로부터 분리하였으며, 뿌리혹선충의 알 부화 및 생육 억제능이 우수한 균주로 선발되었다. 상기 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주는 한국생명공학연구원에 2015년 8월 11일자(KCTC12879BP), 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주는 한국생명공학연구원에 2015년 6월 16일자(KCTC12846BP) 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주는 한국생명공학연구원에 2015년 8월 11일자(KCTC12880BP)로 기탁하였다. The above-mentioned Arthrobotrys oligospora) NT-21 strain, Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis KKY-0217 strain and Paecilomyces lysineus lilacinus NE-86 isolates were isolated from the root-knot nematode soil and were selected as strains with excellent egg hatching and growth inhibition ability of root-knot nematodes. Asda said the robot called Spokane up leased (Arthrobotrys oligospora) NT-21 strain is dated 11 August 2015 (KCTC12879BP) on the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, Streptomyces Abe reumi Antilles (Streptomyces avermitilis ) KKY-0217 was deposited at the Korea Biotechnology Research Institute on June 16, 2015 (KCTC12846BP) and Paecilomyces lysineus lilacinus strain NE-86 was deposited with KCTC12880BP on Aug. 11, 2015 at the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology.

본 발명에 따른 상기 혼합 균주에서, 살선충 활성은 일반적으로 식물 병원성을 나타내는 뿌리혹선충(Meloidogyne sp.); 헤테로데라(Heterodera sp.), 글로보데라(Globodera sp.) 등과 같은 시스트선충; 뿌리썩이선충(Pratylenchus.); 감귤선충(Tylenchulus semipenetrans); 감귤뿌리 선충(Radopholus); 줄기구근선(Ditylenchus); 밀알선충(Anguina); 잎선충(Aphelenchoides)에 대한 살선충 활성이며, 바람직하게는 뿌리혹선충(Meloidogyne sp.)에 대한 살선충 활성이나, 이에 제한되지 않는다.In the above-mentioned mixed strains according to the present invention, the nematode activity is generally caused by a root-knot nematode ( Meloidogyne sp.); Sister nematodes such as Heterodera sp., Globodera sp. And the like; Primateen (Pratylenchus.); Tylenchulus semipenetrans; Radopholus; Ditylenchus; Anguina; It is a live nematode activity against Aphelenchoides, preferably a live nematode activity against the root nematode ( Meloidogyne sp.), But is not limited thereto.

본 발명에 따른 상기 혼합 균주에서, 상기 뿌리혹선충 원인균은 멜로이도기네 하플라(Meloidogyne hapla), 멜로이도기네 인코그니타(Meloidogyne incognita), 멜로이도기네 아레나리아(Meloidogyne arenaria), 멜로이도기네 자바니카(Meloidogyne javanica) 또는 멜로이도기네 팔락스(Meloidogyne fallax)일 수 있으나, 이제 제한되지 않는다.In the mixed strain according to the present invention, the root-knot nematode bacteria are meloidogyne flasks hapla , Meloidogyne < RTI ID = 0.0 > incognita , Meloidogyne < / RTI > arenaria , Meloidogyne javanica , or Meloidogyne fallax , but are not now limited.

또한, 본 발명은 상기 혼합 균주, 상기 균주의 배양물 또는 상기 균주의 배양액의 농축액과 농약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 뿌리혹선충 방제용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for controlling root blight nematitis, which comprises the above-mentioned mixed strain, a culture of the strain, or a concentrate of a culture solution of the strain, and a pesticide acceptable carrier.

본 발명에 따른 뿌리혹선충 방제용 조성물은 예를 들어, 직접 분사가능한 용액, 분말 및 현탁액의 형태 또는 고농축 수성, 유성 또는 다른 현탁액, 분산액, 에멀젼, 유성 분산액, 페이스트, 분진, 흩뿌림 물질 또는 과립제로 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The composition for controlling root-knot nematitis according to the present invention may be in the form of, for example, directly sprayable solutions, powders and suspensions, or in the form of highly concentrated aqueous, oily or other suspensions, dispersions, emulsions, oily dispersions, pastes, dusts, But are not limited thereto.

본 발명의 뿌리혹선충 방제용 조성물은 다양한 형태로 제제화할 수 있다. 상기 제제는 예를 들어 용매 및/또는 담체를 첨가함으로써 제조될 수 있다. 종종, 비활성 첨가제 및 표면-활성 물질, 예를 들어 유화제 또는 분산제를 제제에 혼합한다. 적합한 표면-활성 물질은 방향족 술폰산(예를 들어 리그노술폰산, 페놀-술폰산, 나프탈렌- 및 디부틸나프탈렌술폰산), 지방산, 알킬- 및 알킬아릴술포네이트, 알킬 라우릴 에테르, 지방 알코올 술페이트의 알칼리 금속, 알카라인 토금속, 암모늄염, 술페이트화 헥사-, 헵타- 및 옥타데칸올, 지방 알코올 글리콜 에테르의 염, 술포네이트 나프탈렌 및 이의 유도체, 포름알데히드의 축합물, 나프탈렌 또는 나프탈렌술폰산, 페놀 및 포름알데히드의 축합물, 폴리옥시에틸렌옥틸 페놀 에테르, 에톡실화 이소옥틸-, 옥틸- 또는 노닐페놀, 알킬페닐 또는 트리부틸페닐 폴리글리콜 에테르, 알킬아릴폴리에테르 알코올, 이소트리데실 알코올, 지방 알코올/에틸렌 옥사이드 축합물, 에톡실화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 알킬에테르 또는 폴리옥시프로필렌, 라우릴 알코올 폴리글리콜 에테르 아세테이트, 소르비톨 에스테르, 리그닌-술파이트 폐액 또는 메틸셀룰로오스일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.The root-knot nematode controlling composition of the present invention can be formulated into various forms. The preparation can be prepared, for example, by adding a solvent and / or a carrier. Often, inert additives and surface-active materials, such as emulsifiers or dispersants, are mixed into the formulation. Suitable surface-active materials include, but are not limited to, aromatic sulfonic acids (e.g., lignosulfonic acid, phenol-sulfonic acid, naphthalene- and dibutylnaphthalenesulfonic acid), fatty acids, alkyl- and alkylarylsulfonates, alkyl lauryl ethers, A salt of a fatty alcohol glycol ether, a sulfonate naphthalene and derivatives thereof, a condensate of formaldehyde, a condensate of naphthalene or naphthalene sulfonic acid, a phenol and a formaldehyde Condensates, polyoxyethylene octylphenol ethers, ethoxylated isooctyl-, octyl- or nonylphenol, alkylphenyl or tributylphenyl polyglycol ethers, alkylaryl polyether alcohols, isotridecyl alcohol, fatty alcohol / ethylene oxide condensates , Ethoxylated castor oil, polyoxyethylene alkyl ether or polyoxypropylene, lauryl alcohol Polyglycol ether acetate, sorbitol esters, lignin-sulfite waste liquid, or may be a cellulose, are not limited.

적합한 고형 담체 물질은 원칙적으로, 모두 다공성이고, 농업적으로 허용가능한 담체, 예를 들어 광물토류(예컨대 실리카, 실리카 겔, 실리케이트, 활석, 고령토, 석회암, 석회, 초크, 보울, 황토, 점토류, 백운석, 규조 토류, 황산칼슘, 황산 마그네슘, 산화마그네슘, 분쇄 합성물질), 비료(예컨대 황산암모늄, 인산암모늄, 질산암모늄, 우레아), 식물성 제품(예컨대 곡물 가루, 나무 껍질 가루, 목분(wood meal) 및 견과 껍질 가루) 또는 셀룰로오스 분말일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 상기 고형 담체는 1종류 또는 2종류 이상을 혼합하여 사용할 수도 있다.Suitable solid carrier materials are in principle all porous and comprise an agriculturally acceptable carrier such as mineral earths such as silica, silica gel, silicate, talc, kaolin, limestone, limestone, chalk, Fertilizers such as ammonium sulfate, ammonium phosphate, ammonium nitrate, urea, vegetable products such as cereal flour, bark powder, wood meal, And nut shell powder), or cellulose powder. The solid carrier may be used alone or in combination of two or more.

본 발명의 뿌리혹선충 방제용 조성물은 관수용, 엽면 살포용, 종자 소독용 또는 농기구 소독용으로 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The root-knot nematode controlling composition of the present invention can be used for, but is not limited to, a tube-receiving, a leaf-surface spraying, a seed sterilizing, or an agricultural equipment disinfection.

본 발명의 뿌리혹선충 방제용 조성물은 식물체 흡수 및 효과를 증진시키기 위하여 확산제 및 침투제, 또는 계면활성제와도 혼용이 가능하다.The root-knot nematode controlling composition of the present invention can be mixed with a diffusing agent, a penetrating agent, or a surfactant to enhance plant absorption and effect.

또한, 본 발명은 상기 뿌리혹선충 방제용 조성물의 유효량을 식물부위, 토양 또는 종자에 처리하는 단계를 포함하는 뿌리혹선충을 방제하는 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for controlling root-knot nematia comprising the step of treating an effective amount of the composition for controlling root-knot nematosis to a plant part, soil or seed.

상기 뿌리혹선충을 방제하는 방법으로는 상기 뿌리혹선충 방제용 조성물의 유효량을 식물부위, 토양 또는 종자에 분무 또는 살포하여 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.As a method for controlling the root-knot nematode, an effective amount of the composition for controlling nematode root can be sprayed or sprayed on a plant part, soil or seed, but is not limited thereto.

본 발명의 '유효량'은 유익한 또는 원하는 결과를 일으키기에 충분한 양으로, 뿌리혹선충을 방제하기 위해 방제용 조성물을 물로 균일하게 희석한 후 동력살포기와 같은 적절한 살포장치를 이용하여 식물체 및 경작지에 살포할 수 있다. 본 발명의 수화제 또는 액상 수화제를 물에 희석하는 경우 수화제 또는 액상 수화제의 농도는 유효성분이 생물학적으로 유효한 범위가 될 수 있도록 105 내지 1010cfu/㎖으로 조절할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The " effective amount " of the present invention can be determined by uniformly diluting the control composition with water to control the root-knot nematode in an amount sufficient to produce beneficial or desired results, and then sprayed onto the plant and arable land using a suitable spraying device such as a power sprayer . When the wettable powder or liquid wettable powder of the present invention is diluted in water, the concentration of the wettable powder or the liquid wettable powder may be adjusted to 10 5 to 10 10 cfu / ml so that the effective ingredient may be in a biologically effective range, but is not limited thereto.

또한, 본 발명은 상기 혼합 균주를 배양하는 단계를 포함하는 뿌리혹선충 방제용 조성물의 제조 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for preparing a composition for controlling root nodule nematism comprising culturing the mixed strain.

상기 균주의 배양 방법은 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용할 수 있으며, 특정 방법에 특별히 제한되는 것은 아니다. Any method known in the art can be used for culturing the strain, and the method is not particularly limited.

또한, 본 발명은 상기 혼합 균주, 상기 균주의 배양물 또는 상기 균주의 배양액의 농축액과 농약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 뿌리혹선충의 감염 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for preventing or treating infection with root-knot nematia, which comprises the mixed strain, the culture of the strain or a concentrate of the culture medium of the strain and an agrochemically acceptable carrier.

본 발명의 뿌리혹선충의 감염 예방 또는 치료용 조성물은 특히 연작을 수행하는 시설재배지 등의 토양에 고밀도로 서식하며, 작물의 뿌리에 침입하여 작물의 성장을 둔화시키고 수확을 감소시켜 결국에는 작물을 고사하게 만드는 식물 병원성 토양선충 방제에 이용될 수 있기 때문에, 특히 무엇보다도 무공해, 안전 농산물에 대한 관심이 높아지고 수요가 늘어나고 있으며 농약사용에 의한 잔류독성, 환경오염에 대한 경각심이 높아지고 있는 시점에서 무공해 안전농산물의 생산에 매우 크게 기여할 수 있다.The composition for preventing or treating infections of root-knot nematodes according to the present invention is particularly useful for the prevention of diseases caused by root-knot nematodes, In particular, since interest in pollution-free and safe agricultural products is increasing and demand is increasing, and the awareness of residual toxicity and environmental pollution due to the use of pesticides is rising, pollution-free safety products Which can greatly contribute to the production of

본 발명의 뿌리혹선충의 감염 예방 또는 치료용 조성물은, 식물이나 재배 토양에 선충이 나타나기 시작하거나 나타나기 전 예방보호 조치로, 선충의 피해를 받는 곡물(예컨대, 밀, 보리, 호밀, 귀리, 쌀, 사탕수수 및 관련 작물), 사탕무(예컨대, 사탕무 및 사료 사탕무), 오이 식물(예컨대, 오일, 서양호박, 멜론), 야채(예컨대, 시금치, 상추, 아스파라거스, 양배추 및 브라시카, 당근, 양파, 토마토, 감자), 감귤류 과일(예컨대, 오렌지, 레몬, 자몽, 중국종 귤), 과일(예컨대, 사과, 배, 자두, 복숭아, 알몬드, 체리, 딸기, 라즈베리 및 블랙베리), 콩과 식물(예컨대, 알팔파, 강낭콩, 렌즈콩, 완두콩, 대두), 유성식물(예컨대, 평지씨, 겨자씨, 양귀비, 올리브, 해바라기씨, 코코넛, 카스터 오일식물, 코코아씨, 땅콩), 섬유 식물(예컨대, 면화, 아마, 대마, 황마), 라우라세(예컨대, 아보카도, 계피, 캄퍼), 낙엽성 나무와 침엽수(예컨대, 주목나무, 밤나무, 오리나무, 포플라, 자작나무, 전나무, 낙엽송, 소나무) 또는 식물(예컨대, 옥수수, 잔디식물, 담배, 견과, 커피, 사탕 수수, 차나무, 포도나무, 홉, 바나나 및 천연 고무나무) 등(그러나, 이에 제한되지 않는다)에 또는 이들 식물의 재배토양이나 종자에 전달 또는 살포하여 선충에 의한 피해를 억제하거나 줄일 수 있다. 한편, 식물부위, 토양, 종자 등에 선충감염에 대한 예방 또는 치료가 필요한 경우나 경작전 선충 제거를 통한 토양 정화가 필요한 곳에 본 발명의 살선충 활성을 갖는 미생물 및/또는 기타 항선충 활성을 갖는 혼합 미생물과 화학 살충제를 동시에 투여하여 선충에 의한 피해를 억제시킬 수도 있을 것이다.The composition for preventing or treating infection with root-knot nematodes according to the present invention is a composition for preventing or treating nematode infestation, wherein the nematode-damaged cereals such as wheat, barley, rye, oats, rice, (Such as sugar cane and related crops), sugar beets (such as sugar beets and feed beets), cucumber plants (such as oil, squash, melons), vegetables (such as spinach, lettuce, asparagus, cabbage and brassica, Citrus fruit (such as orange, lemon, grapefruit, Chinese mandarin), fruit (such as apple, pear, plum, peach, almond, cherry, strawberry, raspberry and blackberry) (Eg, cotton, flaxseed, poppy, olive, sunflower seed, coconut, castor oil plant, cocoa seed, peanut), alfalfa, , Hemp, jute), Laura (For example, avocado, cinnamon, camphor), deciduous trees and conifers (for example, timber, chestnut, duck, poplar, birch, fir, larch, pine) (For example, but not limited to, coffee, sugarcane, tea, vine, hops, bananas and natural rubber trees) or to the cultivated soil or seeds of these plants. . On the other hand, in the case where it is necessary to prevent or treat nematode infestation in plant parts, soil, seeds, or where soil purification by removal of nematode is necessary, microorganisms having nematicidal activity of the present invention and / It may be possible to suppress the damage caused by nematodes by administering both microorganisms and chemical insecticides simultaneously.

이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these embodiments are merely illustrative of the present invention and that the scope of the present invention is not limited thereto.

재료 및 방법Materials and methods

1. One. 뿌리혹선충(Root-knot nematodes MeloidogyneMeloidogyne sp.)의 sp.) of 확보 및 동정 Securing and Identifying

뿌리혹선충(Meloidogyne sp.)의 알 분리는 해당 선충을 60일 동안 증식시킨 토마토 뿌리를 조심스럽게 씻은 후 500㎖의 0.5% 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite) 용액과 1cm로 자른 뿌리 100g을 호모게나이저(Nihonseiki Kaisha LTD.)를 이용하여 2000rpm으로 3분간 균질화시켰다. 그 후 200 메쉬(mesh) 체를 이용하여 뿌리를 제거하고 500 메쉬 체에 모인 알을 광학현미경하에서 알 밀도(㎖당 알 갯수)를 조사하여 하기 실시예에 사용하였다. Meloidogyne sp. Isolates were washed with 500 ml of 0.5% sodium hypochlorite solution and 100 g of roots cut to 1 cm from the homogenizer ( Nihonseiki Kaisha LTD.) For 3 minutes at 2000 rpm. Then roots were removed using a 200 mesh sieve, and the eggs collected in a 500 mesh sieve were used in the following examples by irradiating an alumina (number of eggs per ml) under an optical microscope.

식물로부터 뿌리혹선충 암컷 5마리를 마이크로핀셋을 이용하여 분리한 후에 증류수로 3회 세척하였다. 이를 현미경하에서 실험용 바늘을 이용하여 마쇄한 후, DNeasy Blood and tissue kit(QIAGEN-Inc)를 이용하여 뿌리혹선충의 유전자만을 분리하고, 하기 표 1의 프라이머를 이용하여 유전자를 증폭하고, 증폭된 유전자 분석을 통해 뿌리혹선충을 동정하였다.Five females of root-knot nematodes were separated from the plants using micro-forceps and washed three times with distilled water. Then, the DNA of the root-knot nematode was isolated using a DNeasy blood and tissue kit (QIAGEN-Inc), amplified using primers shown in Table 1 below, amplified Were identified.

뿌리혹선충 종류별 분석용 프라이머Primers for analysis of root-knot nematode species 프라이머
이름
primer
name
서열번호SEQ ID NO: 프라이머 염기서열(5'-3')The primer sequence (5'-3 ') 특이성 및 소스Specificity and source
MI-FMI-F 1One GTGAGGATTCAGCTCCCCAGGTGAGGATTCAGCTCCCCAG M. incognita-specific SCAR M. incognita -specific SCAR MI-RMI-R 22 ACGAGGAACATACTTCTCCGTCCACGAGGAACATACTTCTCCGTCC FarFar 33 TCGGCGATAGAGGTAAATGACTCGGCGATAGAGGTAAATGAC M. arenaria-specific SCAR M. arenaria -specific SCAR RarRar 44 TCGGCGATAGACACTACAAACTTCGGCGATAGACACTACAAACT FjavFjav 55 GGTGCGCGATTGAACTGAGCGGTGCGCGATTGAACTGAGC M. javanica-specific M. javanica -specific RjavRjav 66 CAGGCCCTTCAGTGGAACTATACCAGGCCCTTCAGTGGAACTATAC JMV1JMV1 77 GGATGGCGTGCTTTCAACGGATGGCGTGCTTTCAAC M. hapla , M. chitwoodi and
M. fallax specific IGS-SCAR
M. pills , M. chitwoodi and
M. fallax specific IGS-SCAR
JMV2JMV2 88 TTTCCCCTTATGATGTTTACCCTTTCCCCTTATGATGTTTACCC JMV halpaJMV halpa 99 AAAAATCCCCTCGAAAAATCCACCAAAAATCCCCTCGAAAAATCCACC

2. 2. 선충eelworm 포식성 미생물의 확보 및 동정 Identification and identification of predatory microorganisms

선충 포식성 미생물은 뿌리혹선충이 발병된 시설재배 단지 지역 중 뿌리혹선충의 기생이 확인된 밭의 작물 뿌리 주변의 흙을 2kg 정도 채집한 후, 100g의 토양을 2mm 채로 거른 후 걸러진 토양 중 1g을 1.5% 아가 배지 중앙부위에 놓고 얇게 펴고 선충 50마리를 아가 배지 위에 첨가한 후 25℃에서 배양하며 실체 현미경하에서 포식성 미생물의 출현을 관찰하였다. 포식 구조를 형성하는 균사체 및 미생물을 선충 포식성 미생물로 간주하고 배지 위에 생성된 포자와 미생물을 따로 분리하여 100ppm의 스트렙토마이신(streptomycin)이 첨가된 CMA(Corn Meal Agar) 배지에 계대배양하였다.2kg of soil around the root of the root of the rootstock nematode was observed in the cultivation area where the root necrosis nematode was developed. The microorganism was treated with 2g of 100g soil, The agar medium was placed on the center of the medium, and 50 nematodes were added to the agar medium. The medium was incubated at 25 ° C. and the appearance of predatory microorganisms was observed under a stereomicroscope. Mycelia and microorganisms forming the predator structure were regarded as nematode predatory microorganisms, and spores and microorganisms produced on the medium were separately separated and subcultured in CMA (Corn Meal Agar) medium supplemented with 100 ppm of streptomycin.

3. 분리된 3. Isolated 선충eelworm 포식성 미생물의 상호간의 생육에 대한 조사 Investigation of mutual growth of predatory microorganisms

상기 분리된 뿌리혹선충에 대한 방제효과를 가지는 3종의 미생물들이 상호간의 생육에 영향을 미치는지 확인하기 위해, 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주(a), 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주(b) 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주(c)를 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지에 각각 30℃에서 5일간 배양한 후, 이를 1cm2의 크기로 잘라내어 새로운 PDA 배지에 상기 3종의 균주 조합으로 접종하여 30℃에서 3일간 배양하여 각 균주의 상호간의생육 억제력을 확인하였다. In order to confirm whether the three kinds of microorganisms having the control effect against the separated root-knot nematodes affects mutual growth, Arthrobotrys oligospora) NT-21 strain (a), Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis KKY-0217 strain (b) and Paecilomyces lira sinensis lilacinus NE-86 strain (c) was cultivated in a PDA (Potato Dextrose Agar) medium for 5 days at 30 ° C, and the cells were cut into 1 cm 2 and inoculated with the above three strains in a new PDA medium. For 3 days to confirm mutual growth inhibition of each strain.

실시예Example 1.  One. 뿌리혹선충에To root-knot nematodes 대한 방제효과를 가지는 3종의 미생물의 동정  Identification of three microorganisms with anti-microbial effect

뿌리혹선충에 방제 효과를 가지는 3종의 미생물을 PDB(Potato Dextrose Broth) 배지에서 3~5일간 배양한 후, 멸균한 거즈로 PDB 배지에서 자란 균사를 거른 후 균사의 배지 성분을 제거하기 위해 멸균수로 2~3회 세척한 후 균사를 1.5㎖ 튜브에 옮겨 동결 건조하였다. 동결건조된 3종의 미생물의 균사를 마쇄한 후 각각의 유전자만을 뽑아낸 후, 하기 표 2에 개시된 프라이머를 이용하여 특정 유전자를 증폭하여 동정하였다. 각각의 미생물 균주에 해당되는 유전자 염기서열은 NCBI 블라스트를 통해 유사도를 분석하여, 계통학적 위치를 확인하였으며, 3종의 미생물은 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주로 동정되었다(도 1 내지 3). Three kinds of microorganisms having a controlling effect on root-knot nematodes were cultured in a PDB (Potato Dextrose Broth) medium for 3 to 5 days. Then, the mycelia grown in the PDB medium were sterilized by sterilized gauze and then sterilized And the mycelium was transferred to a 1.5-ml tube and lyophilized. After the mycelia of the three lyophilized microorganisms were pollinated, only individual genes were extracted, and specific genes were amplified using the primers shown in Table 2 below. The nucleotide sequence of each microbial strain was analyzed by NCBI blast to determine the phylogenetic position. Three microorganisms were identified as Arthrobotrys oligospora) NT-21 strain, Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis KKY-0217 strain and Paecilomyces lysineus lilacinus strain NE-86 (Figs. 1 to 3).

본 발명에 사용된 프라이머The primers used in the present invention 프라이머 이름Name of the primer 서열정보(5'-3')Sequence information (5'-3 ') 정방향Forward 역방향Reverse ITS4ITS4 CTT GGT CAT TTA GAG GAA GTA A (서열번호 10)CTT GGT CAT TTA GAG GAA GTA A (SEQ ID NO: 10) TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC
(서열번호 11)
TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC
(SEQ ID NO: 11)

실시예Example 2. 본 발명의 3종 균주의  2. The strain of the three strains of the present invention 상호간의Mutual 생육 확인 Growth confirmation

도 4에 개시된 바와 같이 본 발명의 3종의 균주인 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주(a), 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주(b) 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주(c)는 같은 배지 내에서 성장하면서 상호 억제력을 나타내지 않았으며, 이는 상기 3종의 균주 조합이 배양 및 제제화 공정과정과 토양에 살포 후에도 서로 생육을 억제하지 않음으로써 3종의 균주를 제품화하는데 있어서 문제가 없는 것으로 사료된다.As shown in FIG. 4, three strains of the present invention, Arthrobotrys oligospora NT-21 (a), Streptomyces avermitilis KKY-0217 strain (b) And Paecilomyces lilacinus NE-86 strain (c) did not exhibit mutual inhibitory power while growing in the same medium, indicating that the combination of the three strains was effective in the culture and formulation process and even after application to the soil It is considered that there is no problem in commercialization of the three strains by inhibiting growth of each other.

실시예Example 3. 본 발명의 혼합 균주의  3. Mixed strains of the present invention 뿌리혹선충의Root-knot nematode 알 부화 억제효과 확인  Confirming egg hatching inhibition effect

포식성 미생물의 뿌리혹선충의 알에 대한 포식력을 확인하기 위해, 1.5% 워터 아가 배지 가운데에 코르크 보러(cork borer)를 이용하여 토양에서 분리한 뿌리혹선충(Meloidogyne incognita) 500개의 알(Egg)을 올려놓고 25℃에서 배양 후 10일 후 선충의 알을 해부현미경으로 관찰하였다. 이 때 사용된 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주는 각각 PDB(Potato Dextrose Broth) 배지에서 3일간 배양하였다. 본 실시예에서는 배양된 각각의 미생물 세포 수가 1×108CFU/㎖이 되도록 제조하여 3㎖을 사용하였고, 혼합 균주는 1×108CFU/㎖의 미생물을 각각 1㎖씩 혼합하여 3㎖을 사용하였다. 대조군(control)은 뿌리혹선충 방제용 균주처리 없이 선충의 알만 비교 분석하였다. 그 결과, 도 5에 개시된 바와 같이 배양 10일 후 선충의 알 수는 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주를 혼합하여 처리하였을 때 가장 적게 나타남으로써, 상기 균주를 단독으로 처리하였을 때보다 3종의 균주를 혼합하여 사용하는 것이 뿌리혹선충의 알 부화 억제능이 우수함을 확인하였다.In order to determine the predation ability of the nematode of the predatory microorganism on the eggs, a 1.5% water-agar medium was used as a cow borer in the soil, incognita ) 500 eggs were placed and incubated at 25 ℃ for 10 days. Nematode eggs were observed under a dissecting microscope. The strains Arthrobotrys oligospora NT-21, Streptomyces avermitilis KKY-0217 and Paecilomyces lysineus, lilacinus ) NE-86 were cultured in PDB (Potato Dextrose Broth) medium for 3 days, respectively. In this embodiment, the manufacturing number of the cultured microbial cells such that each of the 1 × 10 8 CFU / ㎖ was used 3㎖, the mixed culture is a mix 3㎖ by microorganisms of 1 × 10 8 CFU / ㎖ each 1㎖ Respectively. The control (control) was compared with the nematode of the nematode without the treatment of root - knot nematode. As a result, as shown in Fig. 5, after 10 days of incubation, the number of nematodes was increased by Arthrobotrys oligospora) NT-21 strain, Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis KKY-0217 strain and Paecilomyces lysineus lilacinus NE-86), it was confirmed that the mixture of three strains was superior to that of the strains treated with the strain alone, to inhibit egg hatching of root-knot nematodes.

실시예Example 4. 본 발명의 혼합 균주의  4. Mixed strains of the present invention 뿌리혹선충의Root-knot nematode 생육 억제효과 확인 Identification of growth inhibition effect

뿌리혹선충 방제효과를 가지는 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주는 각각 PDB(Potato Dextrose Broth) 배지에서 3일간 배양하였다. 배양된 각각의 미생물 세포 수가 1×108CFU/㎖이 되도록 제조하였다. 각각의 시험 포트에 배양된 미생물 300㎖을 사용하였고, 혼합 균주는 1×108CFU/㎖의 미생물을 각각 100㎖씩 혼합하여 300㎖을 시험에 사용하였다. 30일 후 뿌리혹 형성을 확인해 본 결과, 도 6에 개시된 바와 같이 3종의 균주 중에는 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) KKY-0217 균주가 가장 좋은 방제율(69.32%)을 나타내었으며, 그 다음으로는 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주(39.06%) 및 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주(25.36%) 순으로 나타내었다. 접종 균주에 따른 방제율에 큰 차이가 있었으며, 3종의 균주를 혼합하여 제조한 혼합균주를 접종한 실험구에서 가장 높은 뿌리혹선충 방제율(82.16%)을 나타내는 것을 확인하였다. Arthrobotrys oligospora strain NT-21, Streptomyces avermitilis strain KKY-0217 and Paecilomyces lilacinus strain NE-86, which have root-knot nematitis control effect, The strains were cultured in PDB (Potato Dextrose Broth) medium for 3 days, respectively. And the number of cultured microbial cells was adjusted to 1 x 10 8 CFU / ml. 300 ml of the cultured microorganisms were used in each test port, and 100 ml of each 1 × 10 8 CFU / ml of the microorganism was mixed, and 300 ml was used for the test. As a result of confirming the root formation after 30 days, as shown in FIG. 6, among the three strains, Streptomyces avermitilis avermitilis KKY-0217 showed the best control rate (69.32%), followed by Paecilomyces lycinus lilacinus strain NE-86 (39.06%) and Arthrobotrys oligospora NT-21 strain (25.36%). There was a significant difference in the control ratio according to the inoculation strain and it was confirmed that the highest control rate (82.16%) was observed in the control strain inoculated with the mixed strains prepared by mixing the three strains.

한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC12879BPKCTC12879BP 2015081120150811 한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC12846BPKCTC12846BP 2015061620150616 한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC12880BPKCTC12880BP 2015081120150811

<110> Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology <120> Mixed strain having nematicidal effect against root knot nematode and uses thereof <130> PN15248 <160> 11 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 gtgaggattc agctccccag 20 <210> 2 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 acgaggaaca tacttctccg tcc 23 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 tcggcgatag aggtaaatga c 21 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 tcggcgatag acactacaaa ct 22 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 ggtgcgcgat tgaactgagc 20 <210> 6 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 caggcccttc agtggaacta tac 23 <210> 7 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 7 ggatggcgtg ctttcaac 18 <210> 8 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 8 tttcccctta tgatgtttac cc 22 <210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 9 aaaaatcccc tcgaaaaatc cacc 24 <210> 10 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 10 cttggtcatt tagaggaagt aa 22 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 11 tcctccgctt attgatatgc 20 <110> Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology <120> Mixed strain having nematicidal effect against root knot nematode          and uses <130> PN15248 <160> 11 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 gtgaggattc agctccccag 20 <210> 2 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 acgaggaaca tacttctccg tcc 23 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 tcggcgatag aggtaaatga c 21 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 tcggcgatag acactacaaa ct 22 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 ggtgcgcgat tgaactgagc 20 <210> 6 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 caggcccttc agtggaacta tac 23 <210> 7 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 7 ggatggcgtg ctttcaac 18 <210> 8 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 8 tttcccctta tgatgtttac cc 22 <210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 9 aaaaatcccc tcgaaaaatc cacc 24 <210> 10 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 10 cttggtcatt tagaggaagt aa 22 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 11 tcctccgctt attgatatgc 20

Claims (7)

아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) 균주, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermitilis) 균주 및 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) 균주로 이루어진 뿌리혹선충 방제용 혼합 균주. Arthrobotrys oligospora) strain, Streptomyces Abbe reumi subtilis (Streptomyces avermitilis ) and Paecilomyces lysineus lilacinus ) for the control of root nematode. 제1항에 있어서, 상기 아스로보트리스 올리고스포라 균주는 기탁번호가 KCTC12879BP인 아스로보트리스 올리고스포라(Arthrobotrys oligospora) NT-21 균주이고, 스트렙토마이세스 아베르미틸리스 균주는 기탁번호가 KCTC12846BP인 스트렙토마이세스 아베르미틸리스(Streptomyces avermilitis) KKY-0217 균주이고, 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) 균주는 기탁번호가 KCTC12880BP인 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) NE-86 균주인 것을 특징으로 하는 뿌리혹선충 방제용 혼합 균주.The method according to claim 1, wherein the asbestosolysis oligospora strain is selected from the group consisting of Arthrobotrys &lt; RTI ID = 0.0 &gt; oligospora) NT-21 strain, and Streptomyces Abbe reumi subtilis strain of Streptomyces Abbe reumi subtilis (Accession No. KCTC12846BP the Streptomyces avermilitis KKY-0217 strain, Paecilomyces lysineus lilacinus ) strain is a strain of Paecilomyces &lt; RTI ID = 0.0 &gt; lilacinus strain NE-86. 제1항에 있어서, 상기 뿌리혹선충은 멜로이도기네 하플라(Meloidogyne hapla), 멜로이도기네 인코그니타(Meloidogyne incognita), 멜로이도기네 아레나리아(Meloidogyne arenaria), 멜로이도기네 자바니카(Meloidogyne javanica) 또는 멜로이도기네 팔락스(Meloidogyne fallax)인 것을 특징으로 하는 뿌리혹선충 방제용 혼합 균주.The method of claim 1, wherein the root-knot nematode was mellow and Ido Guinea Plastic (Meloidogyne hapla), Melo Ido Guinea encoding other cognitive (Meloidogyne incognita , Meloidogyne &lt; / RTI &gt; arenaria , Meloidogyne javanica ) or Meloidogyne fallax ( Meloidogyne fallax ). 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 혼합 균주, 상기 균주의 배양물 또는 상기 균주의 배양액의 농축액과 농약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 뿌리혹선충 방제용 조성물.A composition for controlling root blight nematitis, which comprises a mixed strain according to any one of claims 1 to 3, a culture of the strain or a concentrate of the culture medium of the strain and an agrochemically acceptable carrier. 제4항에 따른 뿌리혹선충 방제용 조성물의 유효량을 식물부위, 토양 또는 종자에 처리하는 단계를 포함하는 뿌리혹선충을 방제하는 방법.A method for controlling a root-knot nematode comprising the step of treating an effective amount of a composition for controlling root-knot nematism according to claim 4 to a plant part, soil or seed. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 혼합 균주를 배양하는 단계를 포함하는 뿌리혹선충 방제용 조성물의 제조 방법.A method for preparing a composition for controlling root-knot nematitis, which comprises culturing a mixed strain of any one of claims 1 to 3. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 혼합 균주, 상기 균주의 배양물 또는 상기 균주의 배양액의 농축액과 농약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 뿌리혹선충의 감염 예방 또는 치료용 조성물.A composition for preventing or treating infection of a root-knot nematode, comprising a mixed strain of any one of claims 1 to 3, a culture of the strain or a concentrate of the culture medium of the strain and an agrochemically acceptable carrier.
KR1020150188065A 2015-12-29 2015-12-29 Mixed strain having nematicidal effect against root knot nematode and uses thereof KR101795781B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150188065A KR101795781B1 (en) 2015-12-29 2015-12-29 Mixed strain having nematicidal effect against root knot nematode and uses thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150188065A KR101795781B1 (en) 2015-12-29 2015-12-29 Mixed strain having nematicidal effect against root knot nematode and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20170077997A true KR20170077997A (en) 2017-07-07
KR101795781B1 KR101795781B1 (en) 2017-11-09

Family

ID=59353581

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020150188065A KR101795781B1 (en) 2015-12-29 2015-12-29 Mixed strain having nematicidal effect against root knot nematode and uses thereof

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101795781B1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108220207A (en) * 2018-03-14 2018-06-29 陆平丰 Compound microbial preparation and application thereof in preventing and treating root-knot nematodes
KR20190040713A (en) * 2017-10-11 2019-04-19 전북대학교산학협력단 New Paecilomyces lilacinus JEF076 and Purpureocillium lilacinum JEF141 strains controlling Orthoptera order, formulated compositions for controlling the Orthoptera order and application methods to control the Orthoptera order
CN114176096A (en) * 2021-11-10 2022-03-15 河北兴柏农业科技有限公司 Streptomyces avermitilis active spore pesticide and preparation method thereof

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR086097A1 (en) 2011-04-15 2013-11-20 Syngenta Participations Ag METHOD FOR CONTROLLING PESTS OF NEMATODES

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190040713A (en) * 2017-10-11 2019-04-19 전북대학교산학협력단 New Paecilomyces lilacinus JEF076 and Purpureocillium lilacinum JEF141 strains controlling Orthoptera order, formulated compositions for controlling the Orthoptera order and application methods to control the Orthoptera order
CN108220207A (en) * 2018-03-14 2018-06-29 陆平丰 Compound microbial preparation and application thereof in preventing and treating root-knot nematodes
CN114176096A (en) * 2021-11-10 2022-03-15 河北兴柏农业科技有限公司 Streptomyces avermitilis active spore pesticide and preparation method thereof
CN114176096B (en) * 2021-11-10 2024-01-19 河北兴柏农业科技股份有限公司 Streptomyces avermitilis active spore pesticide and preparation method thereof

Also Published As

Publication number Publication date
KR101795781B1 (en) 2017-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2713977T3 (en) Flavobacterium pesticide strain and bioactive compositions, metabolites and uses
KR101695918B1 (en) Streptomyces badius SP6C4 strain having antimicirobial activity against insect pathogen or strawberry fungal disease pathogen isolated from strawberry pollen and uses thereof
KR101287141B1 (en) Streptomyces griseus BIG105 for controlling plant diseases and uses thereof
Yeon et al. Control of root-knot nematodes by a mixture of maleic acid and copper sulfate
KR101708325B1 (en) Aspergillus niger F22 strain having nematocidal activity against plant parasitic nematode and uses thereof
BR112019020151A2 (en) methods to control plant disease and to improve a plant&#39;s resistance to disease, agricultural composition, and plant seed.
KR101795781B1 (en) Mixed strain having nematicidal effect against root knot nematode and uses thereof
KR101695916B1 (en) Streptomyces badius SF7B6 strain having antimicrobial activity against pathogen for plant fungal disease isolated from flower of strawberry and uses thereof
KR101802911B1 (en) Composition for controlling root knot nematode comprising kojic acid as effective component and uses thereof
Patil et al. Bio-management of cucumber wilt complex caused by root-knot nematode, Meloidogyne incognita and Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum in polyhouse under protected cultivation
KR102559587B1 (en) Root-knot nematode egg hatching rate inhibition microorganism neobacillus drentensis jc05 strain and use thereof
Li et al. Biological control of blossom blight of alfalfa caused by Botrytis cinerea under environmentally controlled and field conditions
KR101859926B1 (en) Composition for controlling bacterial canker containing Actinidia arguta extract or its fraction as effective component and uses thereof
WO2014136967A1 (en) Method of producing seeds for plants having resistance to seedling diseases, and method of preventing the onset of and eliminating seedling diseases
KR20190050048A (en) Nematocide Composition Comprising Plant Extracts of Indian Shell Flower, Cinnamon, and Neem Seed as Effective Ingredients
US20220053769A1 (en) Microbacterium esteraromaticum strain, composition comprising the same, and uses thereof
KR20120075936A (en) Bacillus sp. pb25 strain isolated from soil and uses thereof
CN112219854A (en) Synergistic and decrement biological-chemical sterilization composition and preparation and application thereof
KR101501033B1 (en) Streptomyces koyangensis BIG11003 having nematicidal effect and uses thereof
Mosahaneh et al. Biological control agents in the management of different initial population densities of Meloidogyne javanica in tomato
Abo-Korah et al. Effect of different bioagents on the population density of Meloidogyne incognita infected tomato plants
KR101622123B1 (en) Composition for controlling nematodes comprising an extract of Waltheria species, and method for controlling nematodes using the same
KR101633003B1 (en) Composition for controlling nematodes comprising an extract of Melochia species, and method for controlling nematodes using the same
KR101211681B1 (en) Biological agent for plant diseases using streptomyces nigrogriseolus cmc0647
KR101320428B1 (en) Composition for controlling plant diseases comprising 3-pentanol as effective ingredient

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant