KR20170075293A - 피부 개선용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 이소프락시딘을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 조성물은 피부의 노화, 주름, 탄력 저하, 수분함유량 저하를 개선 또는 예방하는 효과가 있고, 구체적으로 피부 내 콜라겐(타입 I) 및 황산화 글리코사미노글리칸의 합성을 촉진하고, HAS-2와 HAS-3의 발현을 증가시켜 피부의 주름, 노화, 탄력 등의 저하를 근본적으로 개선 및 예방하고, 멜라닌 생성을 저해하는 효과가 있어 화장료, 피부 주름 개선, 보습촉진 및 미백용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 피부의 주름, 탄력 및 보습의 개선과 미백에 효과적인 조성물에 관한 것이다.
피부는 외부 환경으로부터 인체를 보호하는 기능, 내부의 수분 및 유용 성분이 밖으로 유출되는 것을 막아주는 장벽기능과 체온조절기능, 배설기능 등 다양한 생리적 기능을 담당하고 있는 중요한 기관이다. 개체의 노화가 진행됨에 따라 피부 또한 이러한 중요기능을 상실하는 노화를 맞게 되는데 일반적으로 피부 노화의 주요 원인은 자연적인 나이의 증가로 설명되는 내인성 요인과 태양광에 의한 손상 같은 외인성 요인으로 크게 나눌 수 있다. 이러한 내, 외 요인에 의한 피부 노화의 결과로 주름 생성 및 탄력 저하 현상이 나타나는데 주로 진피층의 손상 및 변화로 인해 발생한다.
피부의 구조는 표피층, 진피층, 피하지방층으로 크게 분류된다. 진피층은 피부의 90%를 차지하는 실질적인 피부이며 콜라겐 섬유와 탄력섬유의 결합조직과 세포와 결합조직 사이를 채우는 기질로 구성되어 있다. 콜라겐 섬유는 섬유아세포에서 생성되며, 중요한 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력 및 세포 접착의 지탱 등이 알려져 있다. 이러한 콜라겐은 나이가 들어감에 따라 그 양이 줄어들고 구조가 손상되며, 이는 내인성 피부노화, 주름발생의 주요 원인으로 지목되어 오고 있다. 또한, 자외선에 의한 콜라겐 섬유 손상은 외인성 피부노화, 주름 발생의 원인으로 볼 수 있다. 탄력섬유는 피부의 탄력을 유지하는 중요 물질로, 여러 원인에 의해 변성이 오면 피부 탄력의 감소로 이어지게 된다. 기질은 진피의 결합섬유와 세포 사이를 채우고 있는 물질로 형태가 없는 젤 상태로 존재한다. 기질을 이루는 친수성 다당체인 글리코사미노글리칸은 물에 녹아 점액 상태로 존재하므로 뮤코 다당체라고 부르기도 한다.
글리코사미노글리칸(Glycosaminoglycan; GAG)은 이당류 형태의 당이 반복적으로 연결된 구조로 히아루론산(Hyaluronic acid), 콘드로이틴 황산(chondroitin sulfate), 헤파린 황산(heparan sulfate), 헤파린(heparin), 케라틴 황산(keratan sulfate) 및 더마탄 황산(dermatan sulfate)의 6종이 있다. GAG 는 크게 두 가지로 나눌 수 있는데, 황산기를 포함하지 않는 GAG 인 히알루론산(Hyaluronic acid) 과 황산기를 포함하는 나머지 5종이 그 것이다.
GAG는 피부에서 세포외 기질(Extracellular marix; ECM) 에 주로 존재하며 ECM의 많은 부분을 차지하는 콜라겐 섬유, 탄력섬유 사이의 빈 공간을 채우는 역할을 하고 주위의 단백질들의 변화나 세포들의 변화를 인지하여 세포에 신호를 전달한다. 이를 통해 세포들의 성장이나 분화 및 정상적인 기능에 영향을 준다. 또한, GAG 는 물 분자와의 결합력이 우수해 피부의 수분 유지에도 중요한 역할을 한다. 내, 외적 원인에 의해 피부노화가 진행됨에 따라 진피에 존재하는 GAG의 양이 감소하고 새로이 GAG를 합성하는 능력이 저하되는데 이는 진피층의 빈 공간을 증가시켜 주름발생과 피부탄력의 감소, 수분량 감소의 결과를 가져온다.
이러한 피부노화 및 주름을 개선하기 위해 사용되고 있는 주름 예방 및 개선 화장료는 비타민 A(레티놀)이나 레티닐 팔미테이트를 함유하는 제품이 대표적이라 할 수 있다. 그러나 이들 원료를 함유한 제품은 경시변화에 민감할 뿐만 아니라 유효 농도 이상으로 피부에 침투되거나 분해될 경우, 상당한 피부 자극과 발적 등의 안정성의 문제로 사용량이 제한되어 왔고, 실질적인 주름예방 및 개선효과 및 보습 효과가 미미하다.
또한, 희고 고운 피부를 갖고자 하는 것은 현대에서 많은 사람들의 일반적인 소망이다. 피부의 색깔 또는 밝기는 사람의 피부 내 멜라닌(melanin)의 농도와 분포에 따라 유전적으로 결정되나, 태양 자외선, 피로 또는 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나제(tyrosinase)라는 효소가 촉매로 작용하여 도파(DOPA) 및 도파퀴논(Dopaquinone)으로 순차적으로 바뀐 후, 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 이와 같이 멜라닌이 만들어지는 경로는 알려져 있으나, 멜라닌 합성을 유도하는 메커니즘에서 티로시나제가 촉발되는 원인이 무엇인지에 대해서는 아직도 자세히 밝혀지지 않고 있다.
한편, 일반적으로 알려진 미백 성분으로서, 코지산(Kojic acid) 또는 알부틴(Albutin) 등과 같은 티로시나제 효소활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민 C(L-Ascorbic acid) 또는 이들의 유도체와 각종 식물 추출물이 있다. 이들은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써, 피부톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착증의 개선이 가능하다. 그러나 피부 적용 시, 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나, 효과가 미미하여 실질적인 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있다.
따라서, 생체에 안전하고, 유효성분이 안정하며, 무엇보다도 기존의 주름 및 탄력 개선, 미백 효과가 있는 물질보다 효과가 우수한 주름 및 탄력 개선, 미백 활성을 지닌 성분의 개발이 절실히 요망되고 있다.
상기와 같은 피부 노화와 주름, 보습 능력 등을 근본적으로 개선할 수 있으면서, 독성이 없는 노화방지제의 개발이 지속적으로 요구되고 있었는바, 이러한 문제를 해결하기 위해, 본 발명자들은 피부의 노화를 막고, 주름의 발생을 억제할 수 있는 피부 개선용 성부에 대하여 지속적인 연구를 하여, 이소프락시딘이 피부세포의 황산화 글리코사미노글리칸 합성 및 콜라겐 타입 I의 합성을 촉진시키는 효과가 뛰어나고, HAS-2, HAS-3의 발현 증진 및 멜라닌 합성을 저해하는 효능이 우수하여, 인체에 적용 시 탁월한 주름, 탄력 개선 및 보습 증진, 미백 증진 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명은 이소프락시딘을 이용하여 피부세포의 황산화 글리코사미노글리칸의 합성 촉진, 콜라겐 타입 I의 합성 촉진, HAS-2, HAS-3의 발현 증진, 멜라닌의 총량을 감소시키는 용도 및 이소프락시딘을 포함하여 다양한 제형으로 응용 가능한 피부 주름, 피부 탄력, 또는 피부 노화의 개선 또는 예방, 보습 증진, 미백 등의 피부 개선효과를 갖는 화장료 조성물, 약학 조성물 및 식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 황산화 글리코사미노글리칸(sulfated Glycosaminoglycan), 콜라겐 및 이들의 조합 중 어느 하나의 합성 촉진용 일 수 있다.
상기 조성물은 멜라닌 색소 억제용 일 수 있다.
상기 조성물은 피부 노화, 피부 주름, 피부 탄력 저하, 피부 수분함유 저하 또는 노화의 개선 또는 예방용 일 수 있다.
상기 조성물은 피부 미백용 일 수 있다.
상기 조성물에 포함되는 이소프락시딘의 함량은 전체 조성물 중 1×10-5 내지 10 중량% 일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 파운데이션, 화장수류, 화장연고, 스프레이, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파우더, 메이크업 제거제 및 세정제로 구성되는 군으로부터 선택되는 제형을 가질 수 있다.
또한, 본 발명은 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 화장품을 제공한다.
또한, 본 발명은 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 피부손상 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 피부손상 질환은 피부발적(erythema), 피부 노화, 피부 주름, 피부 탄력 저하 및 피부 수분함유 저하로 이루어진 군에서 선택된 것 일 수 있다.
또한, 본 발명은 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 색소 침착 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 색소 침착 질환은 주근깨, 노인성 반점, 간반, 기미, 갈색 또는 흑점, 일광 색소반, 푸른 흑피증(cynic melisma), 약물 사용 후의 과다 색소 침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma) 및 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소침착으로 이루어진 군에서 선택된 것 일 수 있다.
상기 약학 조성물은 연고, 크림, 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 수용액, 비수성용제, 현탁제 및 유제로 구성되는 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것 일 수 있다.
또한, 본 발명은 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 건강 기능 식품 조성물을 제공한다.
상기 건강 기능 식품 조성물은 피부 노화, 피부 주름, 피부 탄력 저하, 피부 수분함유 저하 또는 노화의 개선 또는 예방용 일 수 있다.
상기 건강 기능 식품 조성물은 피부 미백용 일 수 있다.
본 발명은 이소프락시딘을 유효성분으로 포함하는 조성물의 경우, 피부의 노화, 주름, 탄력 저하, 수분함유량 저하의 개선 또는 예방 및 미백 효과가 있다. 구체적으로 피부 내 콜라겐(타입 I) 및 황산화 글리코사미노글리칸의 생합성을 촉진함으로써 피부의 기계적 견고성을 좋게 해 피부의 주름, 노화, 탄력 등의 저하를 근본적으로 개선 및 예방하는 효과가 있고, 멜라닌 합성을 저해하는 효능이 있어 미백 효과가 뛰어나므로, 화장료, 약학 그리고 식품 조성물에도 매우 유용하게 사용할 수 있다. 또한, 천연물 유래 물질로서, 장기적으로 사용해도 부작용이 없이 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명은 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 이소프락시딘은 하기 화학식1로 표시되는 것일 수 있다.
[화학식 1]
상기 화학식 1의 화합물은 이소프락시딘(Isofraxidin)이라 하며 쿠마린 (coumarin)에 포함되는 것으로, 식물 추출물의 유효성분 중 하나로 알려져 있다.
상기 이소프락시딘은 당 분야에서 공지된 각종의 유기 화학적 방법 등을 통하여 화학적으로 합성할 수 있으며, 또한 식물 등으로부터 용이하게 수득할 수 있다. 본 발명에서 사용된 이소프락시딘은 시그마 알드리치(Sigma aldrich, 미국)로부터 구입하여 사용하였다.
상기 이소프락시딘의 유도체는 이소프락시딘의 일부 구조가 치환 또는 변화된 화합물 중 본 발명의 이소프락시딘의 효과와 유사한 효과를 나타내는 것을 모두 의미하는 것이다.
상기 이소프락시딘은 콜라겐 감소 및 탄력 저하와 관련된 주름 발생이나 진피 세포외 기질의 다른 구성성분인 황산화 글리코사미노글리칸의 합성 저하 및 분해 촉진에 의한 주름 발생의 억제, 치료 및 개선을 위한 유효성분으로서 이용될 수 있으며 피부 등에 발생한 상처의 치유 효능도 우수하여 상처 치료를 위한 유효성분으로서 이용될 수 있고, 멜라닌 생성억제를 통한 미백 치료 및 개선을 위한 유효성분으로 이용될 수 있다. 또한, 이소프락시딘은 소량으로 포함되어도 우수한 효능이 유지되기 때문에, 의약품 또는 화장품에서 피부 주름, 피부 탄력 저하 또는 피부 노화를 개선 또는 예방하거나, 미백 치료 또는 개선을 위한 유효성분으로서 다양한 제형으로 이용될 수 있어 응용 범위가 넓은 장점이 있다.
상기 이소프락시딘은 황산화 글리코사미노글리칸의 및 콜라겐 타입 I 의 생합성을 촉진 시켜 콜라겐 타입 I과 피부의 진피 세포외 기질 구성을 치밀하게 유지되도록 하는 효과를 나타내는 것을 확인하였다.
구체적인 일 실시예에서 인체 유래의 섬유 아세포 및 각질 형성 세포에서 이소프락시딘의 효과를 알아보기 위하여, 인체 유래의 섬유아세포에 이소프락시딘을 처리했을 때 황산화 글리코사미노글리칸의 및 콜라겐 타입 I의 생성을 증가시켜, 진피 세포 외 기질의 구성을 치밀하게 유지되도록 하는 효과가 있음을 확인하였다(표 1 및 표 2).
구체적인 일 실시예에서, 이소프락시딘의 HAS-2, HAS-3 발현 증진 효과를 알아보기 위하여 인체 유래의 각질 형성 세포에 이소프락시딘을 처리했을 때 보습관련 유전자인 HAS-2, HAS-3 의 발현이 증가됨을 확인하였다(표 3).
또한, 구체적인 일 실시예에서, 이소프락시딘의 멜라닌 생성 저해능을 확인하기 위하여 쥐의 멜라노마 세포에 이소프락시딘을 처리했을 때 대조군 대비 25% 이상의 멜라닌 생성 저해율을 나타냄을 확인하였다(표 4).
또한, 구체적인 일 실시예서, 이소프락시딘을 외용연고 또는 에센스 제형으로 제조하고, 이를 인간의 피부에 도포하였을 때 우수한 피부주름 개선 효과를 나타냄을 확인하였다. 특히, 본 발명에서 이소프락시딘은 낮은 농도 수준으로 즉, 소량으로 적용할 경우에도 우수한 주름 개선 효과를 나타냄을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 화장료 조성물은 황산화 글리코사미노글리칸(sulfated Glycosaminoglycan) 합성 촉진용 또는 콜라겐 합성 촉진용 화장료 조성물 일 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 멜라닌 색소 억제용 일 수 있고, 바람직하게는 멜라닌 색소 합성 억제용 일 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 피부 보습용 일 수 있다.
상기 이소프락시딘을 포함하는 화장료 조성물은 피부 내에서 황산화 글리코사미노글리칸의 생성 증가시키고, 또한 타입 1 콜라겐의 생성 촉진, HAS의 발현을 증진시킴으로써 피부를 개선 시킬 수 있어, 바람직하게는 피부 노화, 피부 주름, 피부 탄력 저하 또는 피부 수분함유 저하의 개선 또는 예방용 일 수 있다.
또한, 상기 이소프락시딘을 포함하는 화장료 조성물은 피부 내에서 멜라닌 색소의 총량을 감소시켜 미백 효과를 나타내는 효과가 있어, 미백용 화장료 조성물 일 수 있다.
본 발명의 조성물을 이용한 경우 피부 수분량의 증가 및 수분 보유능이 증가하는 것을 실험적으로 확인하였고(표 4), 피부탄력의 개선, 노화예방 피부주름 예방 또는 개선 효과가 우수한 것 또한 실험적으로 확인하였다(표 5).
상기 용어 '피부 노화'는 피부에 탄력 감소, 윤기 감소, 주름 생성, 재생력 약화 또는 심한 건조 등의 증상이 나타나는 것으로, 시간의 흐름 또는 외부 환경 등에 의해 유발될 수 있으며, 콜라겐, 엘라스틴과 함께 황산화 글리코사미노글리칸과 같은 세포외 기질 구성성분이 감소되면 피부탄력이 저하되거나 피부 주름이 생성되므로 이들의 감소에 의해 유발될 수 있다.
본 발명의 용어 '피부 주름'은 피부에 생긴 잔줄을 의미하는데, 유전자에 의한 원인, 피부 진피에 존재하는 콜라겐의 감소, 외부 환경 등에 의해 유발될 수 있으며, 엘라스틴과 콜라겐을 등의 세포 내 구조적 지탱을 도와주는 황산화 글리코사미노글리칸이 감소되면 피부 주름이 생성된다.
상기 용어 '피부 탄력'은 진피층에 존재하는 엘라스틴(elastin)으로 구성된 탄력섬유에 의하여 나타나는데, 이러한 탄력섬유는 고무와 같이 매우 낮은 탄성계수를 가지고 있어서, 작은 힘에 의해서도 쉽게 변형되고, 또 그 힘이 제거되었을 때는 쉽게 원형으로 되돌아 온다. 상기 황산화 글리코사미노글리칸의 감소에 의하여 콜라겐 및 엘라스틴의 감소뿐 아니라 구조를 유지하기 어렵게 하여 피부탄력의 저하가 나타난다.
상기 용어 '보습'은 수분손실(수분 증발) 등을 적절히 조절하여 생체의 항상성을 유지하는 것을 의미하고, 피부 내 히알루론산과 더불어 황산화 글리코사미노글리칸이 감소되면 수분손실이 일어날 수 있다.
상기 용어 '미백'은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써 피부 톤을 밝게 할 뿐만 아니라, 자외선 호르몬 또는 유전자에 기인한 주근깨 등의 피부 과색소 침착을 개선하는 것을 의미한다.
상기 용어 '예방'은 본 발명의 조성물을 이용하여 노화를 야기하는 원인을 불문하고 피부의 노화 또는 주름의 생성, 탄력 또는 수분 함유의 저하를 억제 또는 지연시키는 것을 의미하고, 바람직하게는 섬유 아세포 및 각질 형성 세포에서 황산화 글리코사미노글리칸의 및 콜라겐 타입 I의 생합성을 촉진하는 작용을 통해서 억제 또는 지연시키는 것을 의미한다.
상기 용어 '개선'은 피부의 주름, 노화 및 탄력과 관련된 능력을 유지 또는 강화시켜 피부 상태를 호전 또는 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미하는 것으로, 구체적으로 황산화 글리코사미노글리칸의 합성을 촉진하여 엘라스틴과 콜라겐의 감소뿐 아니라 이들의 구조를 유지하도록 하여 피부 주름, 노화, 탄력 또는 수분 함유량을 호전시키는 것을 의미한다.
상기 조성물에 포함되는 이소프락시딘의 함량은 유효량으로 포함될 수 있다.
상기 용어 '유효량'은 피부의 노화 또는 주름의 생성 현상을 억제 또는 지연시키거나, 이미 생성된 주름을 완화시킬 수 있는, 또는 멜라닌 세포를 억제하여 미백효과를 나타낼 수 있는 이소프락시딘의 양을 의미한다
본 발명의 조성물에 포함되는 상기 이소프락시딘의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태, 상기 이소프락시딘이 피부에 적용되는 방법 및 피부에 머무르는 시간 등에 따라 달라질 수 있다. 일 예로, 상기 조성물이 피부과적 치료를 위한 의약품으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 이소프락시딘을 포함할 수 있다. 화장품으로 제품화되는 경우에 있어서도 유효성분이 단기간 내에 피부에 머무르게 되는 메이크업 제거제, 세정제 등과 같은 워시-오프(wash-off) 타입의 화장품의 경우에는 비교적 높은 농도의 이소프락시딘을 포함할 수 있다. 반면 유효성분이 장기간 동안 피부에 머무르게 되는 화장수, 유액, 크림, 에센스 등의 리브-온(leave-on) 타입의 화장품의 경우에는 워시-오프 타입의 화장품에 비해 낮은 농도의 이소프락시딘을 포함해도 무방할 것이다.
상기 조성물에 포함되는 이소프락시딘의 함량은 구체적으로 전체 조성물 중 1×10-5 내지 10 중량% 일 수 있고, 바람직하게는 0.0001 중량% 내지 1중량% 일 수 있다. 상기 성분이 0.00001 중량% 미만의 농도에서는 피부 세포에서 콜라겐 타입 I의 생성, 황산화 글리코사미노글리칸의 합성을 촉진하는 효과를 얻기 어렵고, 10 중량% 초과의 농도에서는 용제로의 용해성 등 조성물의 전체적인 가공성이 떨어져, 후술하는 화장품 제형 등 각종 용도로의 사용이 제한될 우려가 있다.
또한, 상기 조성물에 포함되는 이소프락시딘의 바람직한 농도는 0.1 ㎍/ml 내지 100 ㎍/ml, 더욱 바람직하게는 1 ㎍/ml 내지 50 ㎍/ml, 더더욱 바람직하게는 5 ㎍/ml 내지 25 ㎍/ml 일 수 있다.
상기 조성물은 외피에 적용될 수 있는 어떠한 제형으로도 이용할 수 있다. 구체적인 예로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 파운데이션, 화장수류, 화장연고, 스프레이, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파우더, 메이크업 제거제 및 세정제로 구성되는 군으로부터 선택되는 제형을 가질 수 있으며, 상기 예에 제한되지 않는다.
또한, 상기 조성물은 피부 탄력 증진, 피부 노화의 방지, 피부 주름, 미백의 개선 등을 위한 피부 외용제로 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서, 이소프락시딘을 외용연고 또는 에센스 제형으로 제조하고, 이를 인간의 피부에 도포하였을 때 우수한 피부주름 개선 효과를 나타냄을 확인하였다. 특히, 본 발명에서 이소프락시딘은 낮은 농도 수준으로 즉, 소량으로 적용할 경우에도 우수한 주름 개선 효과를 나타냄을 확인하였다.
본 발명에 따른 이소프락시딘을 함유하는 화장료 조성물은 사용 및 취급이 용이하도록 화장학적으로 허용되는 담체, 희석제, 보조제, 착색제, 안정화제, 착향제, 계면활성제, 유분, 보습제, 알코올, 점증제, 산화방지제, pH 조절제, 자외선 차단제 등을 추가로 함유할 수 있고, 피부외용 조성물로서 사용될 때에는 액상, 유상, 크림상, 연고, 스틱상, 팩, 파스타제, 산제 등 외피에 적용할 수 있는 어떠한 제형으로도 이용 가능하다.
상기 화장료 조성물은 사용 및 취급이 용이하도록 화장학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 화장학적으로 허용가능한 부형제로는 계면활성제, 유화제, 비누산, 용매, 결합제, 희석제, 활택제, 안정제, 향료, 물, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 착색제, 보존제, 항생제, 항산화제, 소포제, 항균제, 항재침착제, 효소, 식물 또는 미네랄 오일, 지방, 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 보존제, 단백질, 실리콘, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 또는 왁스 등을 예로 들 수 있으며, 이들을 단독 또는 2종 이상 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물을 화장품으로 제형화 할 경우 활성 성분에 대한 담체로서 작용하는 피부적으로 허용가능한 공지의 부형제를 포함할 수 있고, 구체적으로 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed., The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있다. 상기 문헌들은 본 명세서의 일부로서 포함된다.
또한 본 발명은 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 화장품에 관한 것이다.
상기 화장품은 화장수류, 에센스류, 스킨류, 로션류, 크림류, 팩류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 갖는 것 일 수 있다.
상기 화장품은 일 예로 스킨, 스킨소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 피부손상 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 색소 침착 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
또한 본 발명은 상기 약학 조성물을 포함하는 의약품 또는 의약외품에 관한 것이다.
상기 약학 조성물은 인간을 포함한 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방을 목적으로 사용하는 약재를 의미한다.
상기 피부손상 질환은 피부의 손상에 의하여 나타나는 질환을 의미하는 것으로, 구체적으로 피부발적(erythema), 피부 노화, 피부 주름, 피부 탄력 저하, 피부 수분함유 저하 및 노화로 이루어진 군에서 선택된 것 일 수 있다.
상기 색소 침착 질환은 색소가 과도하게 증식하거나, 침착되는 증상과 관련된 모든 질환을 의미하고, 바람직하게는 주근깨, 노인성 반점, 간반, 기미, 갈색 또는 흑점, 일광 색소반, 푸른 흑피증(cynic melisma), 약물 사용 후의 과다 색소 침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma) 및 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소침착으로 이루어진 군에서 선택된 것 일 수 있다.
상기 약학 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.001 중량% 내지 99.9 중량% 또는 0.1 중량% 내지 99 중량% 또는 1 중량% 내지 20 중량% 포함될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 조성물의 사용태양 및 사용방법에 따라 상기 추출물의 함량은 약학적으로 유효한 양 또는 바람직한 양으로 적절히 조절하여 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 대상자의 연령, 성별, 체중, 증상, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 약학 조성물은 0.01 내지 1000 mg/일로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한 번 할 수도 있고, 수회 나누어 할 수도 있다. 또한, 투여량은 연령, 성별, 체중, 질병의 정도, 투여경로 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하지 않는다.
상기 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 유효성분으로 하는 상기 이소프락시딘을 단독으로 포함할 수 있고, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 희석제 및/또는 부성분을 더 포함할 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 유효성분 외에 추가로 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다.
상기 '약학적으로 허용되는'이란 생리학적으로 허용되고 동물, 바람직하게는 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 의미한다. 상기 약학적으로 유효한 양은 질환 및 이의 중증 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.
상기 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1 이상을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용 가능하다.
상기 성분들은 상기 유효성분인 이소프락시딘에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.
상기 약학 조성물의 제형은 사용방법에 따라 달라질 수 있으며, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 본 발명이 속하는 기술 분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화 될 수 있다. 상기 제형의 예로 연고, 크림, 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 수용액, 비수성용제, 현탁제 및 유제로 구성되는 군으로부터 선택되는 제형을 일 수 있다.
상기 제형을 위하여 부형제, 일 예로 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등을 더욱 포함할 수 있다.
일반적으로는, 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제(TABLETS), 알약, 연질 또는 경질 캅셀제(CAPSULES), 환제(PILLS), 산제(POWDERS) 및 과립제(GRANULES) 등이 포함되고, 이러한 제제는 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.
또한, 경구 투여를 위한 액상제제에는 현탁제(SUSTESIONS), 내용액제, 유제(EMULSIONS) 및 시럽제(SYRUPS) 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 또는 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
피부 투여를 위해 언급할 수 있는 예로는 더스팅 파우더, 에멀젼, 현탁액, 오일, 스프레이, 연고, 그리지 연고, 크림 페이스트, 겔, 폼, 또는 용액을 생성시키는데 적합하고, 경피 약물 전달체(TTS: Transdermal therapeuticsystem)에 적합한 담체 및/또는 부형제가 있다. 본 발명의 국소용 약학제제는 반고체상 제형일 수 있으며 특히 연고(용액 연고, 현탁액 연고), 크림, 겔 또는 페이스트가 있다. 유상에 주로 사용되는 것은 지방 알콜, 예를 들면 라우릴 알코올, 세틸 알코올, 스테아릴 알코올, 지방산, 예를 들면 팔미트산 또는 스테아르산, 액상 또는 고체상 파라핀 또는 오조케라이트, 액상 내지 고체상 왁스, 예를 들면 이소프로필 미리스테이트, 천연 지방 또는 일부 합성 지방, 예를 들면 코코넛 지방산 트리글리세라이드, 경화유, 예를 들면 수소화된 피넛 또는 캐스터 오일, 또는 글리세롤의 지방산 부분 에스테르, 예를 들면 글리세롤 모노스테아레이트 또는 글리세롤 디스테아레이트가 있다. 적합한 유화제로는 계면활성제, 예를 들어 비이온성 계면활성제, 예를 들면 폴리알코올 또는 이것의 산화에틸렌 부가물의 지방산 에스테르, 예컨대 폴리글리세롤 지방산 에스테르 또는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 예컨대 소르비탄 올레에이트 및/또는 소르비탄 이소스테아레이트 등, 이소스테아레이트, 스테롤, 또는 폴리옥시에틸렌 지방 알콜 에테르 또는 지방산 에스테르, 예를 들어 음이온성 계면활성제, 예를 들면 지방 알코올 설포네이트의 알칼리 금속염, 예컨대 나트륨 라우릴 설페이트, 나트륨 세틸 설페이트 또는 나트륨 스테아릴 설페이트가 있으며 이들은 상기 지방 알코올, 예를 들면 세틸 알코올 또는 스테아릴 알코올의 존재 하에서 일반적으로 사용된다. 이 중에서도 특히 크림 건조를 방지하는 제제, 예를 들면 폴리알코올, 예컨대 글리세롤, 소르비톨, 프로필렌 글리콜 및/또는 폴리에틸렌 글리콜을 수상에 첨가하거나 또는 보존제, 향료 등을 수상에 첨가하는 것이 가능하다.
본 발명의 약학제제는 무수상태의 연고일 수 있고, 국소용도에 적합하고 체온상태에서 액체인 파라핀, 특히 저점도 파라핀을 함유하거나, 또는 상기 천연지방 또는 부분합성 지방, 예를 들면, 코코넛 지방산 트리글리세라이드, 경화유, 예를 들면 수소화된 피넛 도는 캐스터 오일, 글리세롤의 지방산 부분 에스테르, 예를 들면 글리세롤 모노스테아레이트 및 디스테아레이트, 실리콘, 예를 들면 폴리메틸실록산, 예컨대 헥사메틸디실록산 도는 옥타메틸트리실록산을 함유할 수 있으며, 예를 들어 수성크림과 관련되어 있고 수분 흡수 용량을 증가시키는 지방알코올, 그리고 스테롤, 울 왁스, 다른 유화제 및/또는 기타 첨가제를 함유할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물을 의약품으로 제형화할 경우 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있고, 상기 문헌들은 본 명세서의 일부로서 포함된다.
또한 본 발명의 약학 조성물은 피부의 개선, 완화, 치료 또는 예방을 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
이상 본 명세서에 기재된 수치 값은 달리 명시되어 있지 않은 한 균등범위까지 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
또한, 본 발명은 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 건강 기능 식품 조성물에 관한 것이다.
상기 식품 조성물은 피부 노화, 피부 주름, 피부 탄력 저하 또는 피부 수분함유의 개선 또는 예방용 건강 기능 식품 조성물 일 수 있다.
또한, 상기 조성물은 피부 미백용 건강 기능 식품 조성물 일 수 있다.
상기 식품이라 함은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서 건강기능식품, 기능성식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제를 모두 포함하는 의도이다.
상기 식품은 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능식품 등일 수 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영, 유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실 및 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등)를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
상기 식품, 기능성식품, 건강기능식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
본 발명에서 건강기능식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절 기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다.
상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명에서 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며, 건강기능음료를 포함하는 의도이다.
상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상기의 천연 탄수화물의 예는 포도당이나 과당 등과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스 등과 같은 디사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 폴리사카라이드 또는 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올 등일 수 있다. 상기 향미제는 타우마틴이나 레바우디오시드 A 또는 글리시르히진과 같은 스테비아 추출물과 같은 천연 향미제 또는 사카린, 아스파르탐 등과 같은 합성 향미제일 수 있다.
상기 천연 탄수화물의 첨가량은 본 발명의 식품 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 g 내지 20 g, 바람직하게는 5 g 내지 12 g일 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 중요하지 않지만, 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0 내지 2,000 중량부 범위에서 선택될 수 있다.
상기 건강기능음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.
상기 건강기능음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명의 이소프락시딘을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상기의 천연 탄수화물의 예는 포도당이나 과당 등과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스 등과 같은 디사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 폴리사카라이드 또는 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올 등일 수 있다. 상기 향미제는 타우마틴이나 레바우디오시드 A 또는 글리시르히진과 같은 스테비아 추출물과 같은 천연 향미제 또는 사카린, 아스파르탐 등과 같은 합성 향미제일 수 있다.
상기 천연 탄수화물의 첨가량은 본 발명의 식품 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 g 내지 20 g, 바람직하게는 5 g 내지 12 g일 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지 않지만, 본 발명의 이소프락시딘 100 중량부 당 0 내지 20 중량부 범위에서 선택될 수 있다.
상기 건강기능식품은 식품첨가물을 추가로 포함할 수 있고, 식품첨가물로서의 적합여부는 다른 규정이 없는한 식품의약품안전처에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
본 발명의 건강기능식품을 제조하는 과정에서 음료를 포함한 식품에 첨가되는 본 발명의 추출물은 필요에 따른 그 함량을 적절히 가감할 수 있고, 바람직하게는 전체 식품 100 중량%에 대하여 0.00001 내지 10 중량%로 포함되도록 첨가할 수 있다.
또한 본 발명은 상기 화장료, 약학적 또는 식품 조성물의 제조를 위한 이소프락시딘의 용도 및 유효량의 이소프락시딘을 피부에 적용 또는 복용하는 것을 포함하는 피부를 개선시키는 방법에 관한 것이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[
실시예
1] 인체 유래의 섬유아세포에서의 콜라겐 타입 I의 합성 촉진 효과 확인
이소프락시딘을 인간 유래 섬유아세포(Human fibroblast)의 배양액에 첨가하여 세포수준에서 콜라겐 합성 촉진 효과를 확인하였다. 사용된 이소프락시딘은 시그마 알드리치(Sigma Aldrich, 미국) 로부터 구입하여 사용하였다. 합성된 콜라겐의 측정은 PICP EIA kit(Procollagen Type I C-Peptide Enzyme Immuno Assay KIT)를 이용하여 정량 하였다.
실험에서 이소프락시딘의 최종 농도는 10 ㎍/ml, 20 ㎍/ml가 되도록 하였다. 이소프락시딘을 인간 유래의 섬유아세포의 배양배지(DMEM 배지)에 첨가하여 48 시간 배양한 후 배양액을 취하여 PICP EIA 키트로 각 농도에서 콜라겐 합성 정도를 분광광도계를 이용하여 450 nm에서 측정하였다.
효과의 비교를 위하여 아무것도 첨가하지 않은 섬유아세포의 배양배지(대조군)와 TGF-beta 를 최종농도 10 ng/ml가 되도록 첨가한 시료에 대하여 동일한 방법으로 콜라겐 합성 정도를 측정하였다.
콜라겐 생성 증가율은 대조군에 대한 상대적인 콜라겐 생성량의 비율로 계산하고 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
시료 | 콜라겐 생성량(ng/ml) | 증가율(%) |
대조군 | 178 | - |
TGF-beta 10 ng/ml | 470 | 164 |
이소프락시딘 10 ㎍/ml | 304 | 71 |
이소프락시딘 20 ㎍/ml | 370 | 108 |
(반복수 = 4) |
상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 이소프락시딘은 일반적으로 콜라겐 합성 능력이 있는 것으로 알려진 TGF-beta를 적용한 실험군보다는 낮지만, 모든 농도에서 대조군보다 높은 콜라겐 생성 증가를 나타냈으며, 농도 의존적으로 증가하는 우수한 콜라겐 합성효과가 있음을 확인 하였다.
[
실시예
2] 인체 유래의 섬유아세포에서의
황산화
글리코사미노글리칸의
합성 촉진 효과 확인
이소프락시딘을 인간 유래 섬유아세포(Human fibroblast)의 배양액에 첨가하여 세포수준에서 황산화 글리코사미노글리칸의 합성 촉진 효과를 확인하였다. 황산화 글리코사미노글리칸의 측정은 Blyscan glycosaminoglycan assay kit(Biocolor)를 이용하여 정량하였다.
실험에서 이소프락시딘의 최종 농도는 1 ㎍/ml, 10 ㎍/ml, 20 ㎍/ml가 되도록 하였다. 이소프락시딘은 인간 유래의 섬유아세포(Human fibroblast)의 배양배지(DMEM 배지)에 첨가하여 24시간 배양한 후 배양액을 취하여 Blyscan glycosaminoglycan assay 키트로 각 농도에서 전체 황산화 글리코사미노글리칸의 양을 분광광도계를 이용하여 656 nm에서 측정하였다.
황산화 글리코사미노글리칸의 생성 증가율은 아무것도 첨가하지 않은 섬유아세포의 배양배지(대조군)에 대한 상대적인 황산화 글리코사미노글리칸 생성량의 비율로 계산하고 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
시료(㎍/ml) | 황산화 글리코사미노글리칸 생성량(ng/ml) | 증가율(%) |
대조군 | 0.46 | - |
이소프락시딘 1 ㎍/ml | 0.50 | 8.7 |
이소프락시딘 10 ㎍/ml | 1.64 | 257 |
이소프락시딘 20 ㎍/ml | 2.98 | 548 |
(반복수 = 4) |
상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 이소프락시딘을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 각각 10 ㎍/ml와 20 ㎍/ml의 이소프락시딘을 처리한 처리군 모두에서 우수한 황산화 글리코사미노글리칸 합성의 증가효과가 있음을 확인 하였다.
[
실시예
3] 인체 유래의 각질 형성 세포에서
이소프락시딘에
의한 히알루론산 합성효소(HAS) 유전자의 발현 증가
이소프락시딘을 1 ppm, 10 ppm으로 첨가한 배양액을 인체 유래 각질 형성 세포에 24시간동안 처리하였다. 세포를 회수하여, RNeasy mini kit(Qiagen)로 전체 RNA를 추출한 뒤, 정량하여 1㎍의 RNA를 GeneAmp? RNA PCR kit(Applied Biosystems)를 이용하여 역전사(reverse transcription)하였다. 역전사 반응은 Mycycler? PCR 기기(Biorad)를 이용하여 수행하였다.
이후 역전사 반응용액 2㎕와 HAS-2, HAS-3, GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)의 Taqman? probe(Invitrogen, 미국, HS02511055_S1, HS03929097_g1)를 이용하여 quantitative real time PCR을 수행하였다. Real time PCR은 CFX96 TouchTM Real-Time PCR Detection System 기기(Biorad)를 이용하여 수행하였다. Real time PCR을 통해 얻은 실험 결과는 하우스키핑(housekeeping) 유전자인 GAPDH를 기준으로 Livak K.J. 외(Methods, 2001, 25, 402-408)에 기재된 방법으로 계산하여 나타내었다.
또한, 글루코사민 100ppm(대조군)에 대해서도 동일한 방법으로 실험을 진행하였고, 음성 대조군의 mRNA 발현량을 기준(100%)으로 하여 글루코사민, 이소프락시딘 처리 실험군의 mRNA 발현량을 수치화하여 표 3에 나타내었다.
시료 | 무처리 (음성 대조군) |
글루코사민 100 ppm |
이소프락시딘 1 ppm |
이소프락시딘 10 ppm |
HAS-2 발현량(%) |
100 | 114 | 122 | 135 |
HAS-3 발현량(%) |
100 | 125 | 126 | 151 |
(반복수 = 4) |
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 이소프락시딘 처리에 의해 인체 유래 각질형성 세포에서 히알루론산 합성효소, 특히 HAS-2와 HAS-3의 발현이 증가되었다. 또한, 이소프락시딘은 양성 대조군인 글루코사민 보다 100배 더 적은 양으로도 양성 대조군보다 우수한 HAS-2와 HAS-3의 발현의 증가를 나타내는 것을 확인하였는바, 이를 통해서 이소프락시딘이 적은 양으로도 우수한 보습 효과를 가지고 있고, 적은 양으로도 피부 수분 보유 저하에 대한 보습 효과가 있음을 확인하였다.
[
실시예
4] 쥐의
멜라노마
세포(B-16 mouse melanoma cell) 에서
이소프락시딘에
의한 멜라닌 생성 저해 효과
이소프락시딘을 쥐의 멜라노마 세포(B-16 mouse melanoma cell)의 배양액에 첨가하여 세포 수준에서의 미백 효과를 실험하였다(Lotan R., Lotan D. Cancer Res. 40:3345-3350, 1980). 실험 전 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 독성을 평가하여 독성이 없는 농도를 선정하여 미백평가를 수행하였다.
화학식 1의 화합물을 배양액에 최종 농도가 1 ㎍/ml, 10 ㎍/ml이 되도록 하여 실험하였으며, 대조군인 알부틴은 200 ㎍/ml가 되도록 배지에 첨가하여 각각 B-16 멜라노마 세포에 처리하여 3일간 배양하였다.
이 후, 세포들을 트립신(trypsin) 처리하여 배양용기로부터 떼어내 원심분리 한 후 멜라닌을 추출하였다. 떼어 낸 세포는 수산화 나트륨 용액(1N) 1ml를 가하여 10분간 끓여 멜라닌을 녹이고 분광 광도계를 이용하여, 400 nm에서 흡광도를 측정하여 생성된 멜라닌의 양을 측정하였다. 상기 멜라닌 양은 단위 세포 수 당(106 cells)의 흡광도로 나타내는 방법으로 측정하였으며, 대조군에 대한 상대적인 멜라닌 생성량을 저해율(%)로 계산하고 결과를 하기 표 4에 정리하였다.
시료군 | 음성 대조군 | 양성 대조군 알부틴 200 ㎍/ml |
이소프락시딘 10㎍/ml |
이소프락시딘 1㎍/ml |
저해율 | - | 31.3 % | 34.9 % | 29.1 % |
(반복수 = 3) |
표 4에 나타낸 바와 같이, 농도에 따른 세포수준에서 멜라닌 생성 저해 효과를 확인한 결과, 이소프락시딘은 양성 대조군의 1/20 수준에서도 멜라노마 세포에서 멜라닌 생성 억제능이 기존에 알려진 미백 물질인 알부틴(Arbutin) 보다 우수함을 확인 하였고, 1/200 수준에서는 거의 유사한 멜라닌 생성 억제능을 나타냄을 확인할 수 있었다. 따라서, 이소프락시딘은 종래 물질보다 더 적은 농도로도 현저히 우수한 미백 활성 효과를 가짐을 알 수 있다.
[제조예 1 및 비교예 1] 피부 외용연고의 제조
하기 표 5의 조성과 같이 이소프락시딘을 유효성분으로 포함하는 피부 외용연고를 통상의 방법에 따라 제조하였다. 또한, 유효성분을 제외한 나머지 성분으로 제조한 피부 외용연고를 비교예 1로 제조하였다.
조성(중량%) | 제조예 1 (중량%) | 비교예 1 (중량%) |
이소프락시딘 | 0.2 | 0 |
디에틸 세바케이트 | 8 | 8 |
경납 | 5 | 5 |
폴리옥시에틸렌올레일에테르 포스페이트 | 6 | 6 |
벤조산 나트륨 | 1 | 1 |
바셀린 | to 100 | to 100 |
[제조예 2 및 비교예 2] 에센스의 제조
이소프락시딘을 유효성분으로 포함하는 화장료 에센스의 제형을 제조예 2로, 유효성분을 포함하지 않는 것을 제외하고는 제조예 2와 동일하게 화장료 에센스를 제조한 것을 비교예 2로 하였다. 상세한 조성은 하기 표 6에 나타내었다.
조성(중량%) | 제조예 2 (중량%) | 비교예 2 (중량%) |
이소프락시딘 | 0.5 | 0 |
글리세린 | 10.0 | 10.0 |
히아루론산나트륨수용액(1%) | 5.0 | 5.0 |
폴리옥시에틸렌경화피마자유 | 1.0 | 1.0 |
파라옥시안식향산메틸 | 0.1 | 0.1 |
향료 | 0.05 | 0.05 |
정제수 | to 100 | to 100 |
[실험예 1] 패널 테스트를 통한 피부 주름 개선 효과 확인
상기 제조예 2와 비교예 2의 에센스에 대해서 건강한 35세에서 50세의 여성을 대상으로 피부 주름 개선 효과를 다음과 같이 시험하였다.
35세에서 50세까지의 여성 30명을 15명씩 2개의 군으로 구분하고 1군은 이소프락시딘을 0.5% 포함하는 제조예 2의 에센스를, 2군은 비교예 2의 에센스를 안면부에 1일 1회 3개월간 도포하였다. 3개월 후 피부 주름의 개선 정도를 피험자의 설문을 통해 평가하였다. 피험자의 설문은 피부 주름 개선 및 탄력 증진에 관하여 사용전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 상당한 개선의 3단계로 판정하였으며, 그 결과는 하기 표 7에 나타내었다.
구분(명) | 개선없음 | 약간의 개선 | 상당한 개선 |
제조예 2 | 2 | 5 | 8 |
비교예 2 | 8 | 5 | 2 |
상기 표 7에 나타낸 바와 같이, 이소프락시딘 0.5%를 포함한 제조예 2의 에센스를 사용한 경우, 사용하지 않은 비교예 2의 에센스를 사용한 경우보다 피부 주름 개선 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.
[실험예 2] 영상분석을 통한 화장료 에센스의 주름개선효과 시험
영상분석을 통하여 상기 제조예 2 및 비교예 2의 에센스에 대해서 주름 개선 효과를 평가하였다.
구체적으로, 실험이 시작되기 전, 눈 밑의 레플리카(replica)를 채취하고(Xantopren, Bayer), 실험이 종료된 직후 레플리카를 눈 밑의 동일 부위에서 채취하여 영상분석을 통해 피부 주름의 2차원적 분석으로 피부 주름의 밀도를 측정하였다. 영상 분석에 의한 피부 주름 밀도의 감소율은 에센스의 사용 전 피부 주름 밀도에 대한 사용 후 피부 주름 밀도의 비를 평균한 값이며, 상기 측정 결과를 하기 표 8에 나타내었다.
피부 주름 밀도 감소율(%) | |
비교예 2 | 35 |
제조예 2 | 72 |
상기 표 8에 나타낸 바와 같이, 이소프락시딘을 포함한 제조예 2의 에센스를 사용한 경우, 이소프락시딘을 포함하지 않은 비교예 2의 에센스를 사용한 경우보다 피부 주름 개선 효과가 우수함을 알 수 있다. 또한, 상기 시험 과정에서 제조예 2의 에센스에 의한 피부 자극이나 부작용은 발견되지 않았다.
Claims (16)
- 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 황산화 글리코사미노글리칸(sulfated Glycosaminoglycan), 콜라겐 및 이들의 조합 중 어느 하나의 합성 촉진용인 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 멜라닌 색소 억제용인 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 피부 노화, 피부 주름, 피부 탄력 저하 또는 피부 수분함유의 개선 또는 예방용인 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 피부 미백용인 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물에 포함되는 이소프락시딘의 함량은 전체 조성물 중 1×10-5 내지 10 중량 %인 화장료 조성물. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 파운데이션, 화장수류, 화장연고, 스프레이, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파우더, 메이크업 제거제 및 세정제로 구성되는 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 화장료 조성물. - 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 화장품.
- 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 피부손상 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제9항에 있어서,
상기 피부손상 질환은 피부발적(erythema), 피부 노화, 피부 주름, 피부 탄력 저하 및 피부 수분함유 저하로 이루어진 군에서 선택된 것인 약학 조성물. - 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 색소 침착 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제11항에 있어서,
상기 색소 침착 질환은 주근깨, 노인성 반점, 간반, 기미, 갈색 또는 흑점, 일광 색소반, 푸른 흑피증(cynic melisma), 약물 사용 후의 과다 색소 침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma) 및 상처 또는 피부염으로 인한 염증 후 과다 색소침착으로 이루어진 군에서 선택된 것인 약학 조성물. - 제9항 내지 제 12항에 있어서,
상기 약학 조성물은 연고, 크림, 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 수용액, 비수성용제, 현탁제 및 유제로 구성되는 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 약학 조성물. - 이소프락시딘(Isofraxidin) 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 건강 기능 식품 조성물.
- 제14항에 있어서,
상기 건강 기능 식품 조성물은 피부 노화, 피부 주름, 피부 탄력 저하, 피부 수분함유 저하 또는 노화의 개선 또는 예방용인, 건강 기능 식품 조성물. - 제14항에 있어서,
상기 건강 기능 식품 조성물은 피부 미백용인, 건강 기능 식품 조성물.
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