KR20170021278A - Functional food composition comprising complex ferment consisting of soybean and barley - Google Patents
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Abstract
Description
본 명세서에 기재된 내용은 콩 및 보리의 발효복합물을 포함하는 기능성 식품 조성물에 관한 것이다.Described herein is a functional food composition comprising a fermented complex of soybeans and barley.
본 연구는 대한민국 농림축산식품부(Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs)의 고부가가치식품기술개발사업(High Value-added Food Technology Development Program)의 지원과 농림수산식품기술기획평가원(Korea Institute of Planning and Evaluation for Technology in Food, Agriculture, Forestry and Fisheries, iPET)의 관리 하에 이루어진 것이다.This study was supported by the Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs of the Republic of Korea and the Korea Institute of Planning and Evaluation for Technology in Food, Agriculture, Forestry and Fisheries, and iPET.
피부는 환경독소, UV 등에 직접 노출되어 이로 인해 발생하는 활성산소와 염증반응의 수준이 다른 조직에 비해 매우 높은 편이며, 수질오염과 오존층 파괴 등의 환경 요인의 증가에 의해 노화가 촉진되고 있다. 이러한 피부 노화가 장기간 지속될수록 다른 피부 질환 및 암 발생의 원인으로 작용할 수 있기 때문에 피부 노화의 예방은 중요한 보건상의 문제로 자리 잡고 있다. The skin is directly exposed to environmental toxins, UV, etc., and the level of reactive oxygen and inflammation reaction resulting therefrom is very high compared with other tissues, and aging is promoted by environmental factors such as water pollution and ozone layer destruction. Prevention of skin aging is becoming an important health problem because the longer this aging of the skin lasts, it can act as a cause of other skin diseases and cancer development.
피부 기능과 피부 상태는 영양에 크게 의존하며, 영양결핍에 반응하여 피부에 병소가 발생한다는 사실을 근거로 하여 비타민, 미네랄, 필수 지방산 등의 공급을 통한 피부 상태의 개선에 초점을 맞추어 연구가 진행되어 왔다. 그 대표적인 수단인 피부에 바르는 화장품은 화장품의 낮은 피부 투과율과 흡수율의 문제가 있는데 반해 식품은 체내로 직접 섭취하여 흡수할 수 있다는 장점이 있어, 최근 들어 식품이 단순 식사, 특정식품성분, 영양보충으로서의 역할에서 나아가 피부 건강을 개선하고 피부 손상이나 노화의 위험을 감소시킬 수 있는 수단으로 인식이 변화되고 있다. 이에 따라 화장품뿐만 아니라 미용 식품에 대한 관심도 함께 증대되면서, 피부 노화 및 질병을 예방할 수 있는 기능성을 포함하는 기능성 미용 식품 개발이 요구되고 있다.Based on the fact that skin function and skin condition are highly dependent on nutrition and that skin lesions occur in response to nutritional deficiency, research is focused on improving skin condition through supply of vitamins, minerals and essential fatty acids Has come. As a representative means of skin cosmetics, there is a problem of low skin permeability and absorption rate of cosmetics, while food has an advantage that it can be directly absorbed and absorbed in the body. Recently, it has been known that foods are used as simple meals, The role is shifting from being recognized as a means to improve skin health and reduce the risk of skin damage or aging. Accordingly, there has been a growing interest in cosmetics as well as cosmetics, and development of functional cosmetics including functionalities to prevent skin aging and diseases has been demanded.
본 발명은 대표적인 식품의 원재료인 콩 및 보리를 기능화하여 피부 주름 개선 또는 피부 보습 효능을 갖는 식품 조성물을 제공하고자 한다. The present invention is intended to provide a food composition having function of soybean and barley, which are representative raw materials of foods, to improve skin wrinkles or skin moisturizing effect.
본 발명의 구현예들은 콩 및 보리로부터 유래된 콩-보리 발효복합물을 포함하는 식품 조성물로, 상기 발효복합물은 다이드제인(daidzein) 및 제니스테인(genistein)의 함량이 증가된 콩 효모발효물 및 베타-글루칸(β-glucan) 의 함량이 증가된 보리 효모발효물을 포함하는 식품 조성물을 제공한다. Embodiments of the present invention are food compositions comprising a soybean-barley fermentation complex derived from soybean and barley, said fermentation complex comprising a fermented soybean yeast strain with increasing amounts of daidzein and genistein, - a fermented barley yeast with an increased content of glucan (? -Glucan).
본 발명에 따른 콩 효모발효물은 피부 미용개선의 지표가 되는 유효성분으로 다이드제인 및 제니스테인을 종래 콩 효모발효물보다 증가된 양으로 포함하며, 보리 효모발효물도 유효성분으로 β-글루칸 을 종래 보리 발효물보다 증가된 양으로 포함한다. 따라서, 본 발명에 따른 식품 조성물은 상기 콩 및 보리로부터 유래된 콩-보리 발효복합물을 포함함으로써 피부 주름의 바이오마커인 MMP-1 활성 및 발현 억제, 피부 보습 히아루론산 생성효소의 활성화에 우수한 효능을 제공할 수 있다.The fermented soybean yeast according to the present invention is an effective ingredient which is an index of improvement of skin beauty. It contains daidzein and genistein in an increased amount compared to conventional soybean fermented yeast, Glucan as an active ingredient in an increased amount than conventional barley fermentation products. Therefore, the food composition according to the present invention provides an excellent effect on inhibition of MMP-1 activity and expression, which is a biomarker of skin wrinkle, and activation of skin moisturizing hyaluronic acid-producing enzyme, by including soybean-barley fermentation complex derived from soybean and barley can do.
도 1는 본 발명의 일 구현예에 따른 자수정 찰보리 발효물(실시예 1) 및 자수정 찰보리 원물(비교예 1)의 추출용매 종류에 따른 HAS2(hyaluronan synthase 2)발현을 비교하여 나타낸 도이다.
도 2은 본 발명의 일 구현예에 따른 자수정 찰보리 발효물(실시예 1, Fer-) 및 자수정 찰보리 원물(비교예 1, Ori-)의 MMP-1 발현을 비교하여 나타낸 도이다.
도 3은 세포독성 실험결과로서 각 샘플 처리군에 따른 세포 생존률을 나타낸 도이다.
도 4은 광노화가 유도된 동물모델에 본 발명의 일 구현예에 따른 콩-보리 발효복합물을 포함하는 식이를 처리한 군의 사료 식이섭취량을 비교하여 나타내 것이다.
도 5는 광노화가 유도된 동물모델에 본 발명의 일 구현예에 따른 콩-보리 발효복합물을 포함하는 식이에 따른 무모생쥐의 무게를 측정하여 나타낸 도이다.
도 6은 광노화가 유도된 동물모델에 본 발명의 일 구현예에 따른 콩-보리 발효복합물을 포함하는 식이에 따른 피부의 수분 보습량을 측정하여 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 일 구현예에 따른 콩-보리 발효복합물을 포함하는 식이에 따른 피부 수분손실량(TEWL)을 측정하여 나타낸 도이다.
도 8는 본 발명의 일 구현예에 따른 상기 콩-보리 발효복합물의 프로콜라겐 타입-1(procollagen type-1, PIP-1)과 MMP-1(Matrix metalloproteinase-1)의 발현정도를 측정하여 나타낸 도이다.
도 9은 본 발명의 일 구현예에 따른 상기 콩-보리 발효복합물에 따른 피부조직의 주름생성정도를 측정하여 나타낸 도이다.
도 10는 본 발명의 일 구현예에 따른 콩-보리 발효복합물에 의한 UVB조사로 낮아진 pH의 변화정도 및 피부 보습정도를 측정하여 나타낸 도이다.
도 11는 본 발명의 일 구현예에 따른 콩-보리 발효복합물에 의한 UVB 조사로 두꺼워진 표피의 변화정도를 촬영 및 측정하여 나타낸 도이다.
도 12은 본 발명의 일 구현예에 따른 콩-보리 발효복합물에 의한 UVB 조사 후 유리아미노산의 생성량, 억제된 filaggrin의 발현정도를 비교하여 나타낸 도이다.
도 13은 본 발명의 일 구현예에 따른 콩-보리 발효복합물에 의한 UVB 조사로 줄어든 글리세롤의 증가정도 및 늘어난 수분 손실량의 감소정도를 비교하여 나타낸 도이다.
도 14은 본 발명의 일 구현예에 따른 콩-보리 발효복합물의 UVB 조사로 인산화된 p38(p-p38)과 ERK(p-ERK) 억제정도를 촬영한 도이다.
도 15는 본 발명의 일 구현예에 따른 콩-보리 발효복합물의 UVB 조사로 인산화된 p38(p-p38)과 ERK(p-ERK) 억제정도를 측정하여 나타낸 도이다.
도 16은 본 발명의 일 구현예에 따른 상기 콩-보리 발효복합물은 UVB 조사로 낮아진 SOD(superoxide dismutase)의 활성과 Nrf-2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2)의 발현정도를 나타낸 도이다.
도 17는 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P) 효모 단독 배양 시의 시간에 대한 세포 농도, 기질 소모량, β-glucan 농도의 변화를 나타낸 도이다(검정 ●: DCW (g/L), 분홍 ●: Residual reducing sugar (g/L), 파랑 ●: β-glucan (g/L))
도 18은 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P) 효모 단독 배양 시의 시간에 대한 시간에 대한 발효변수들의 변화를 나타낸 도이다(빨간 ●: 비 증식 속도, 카키 ●: 증식 수율. 청록 ●: β-glucan 생산 수율, 갈색 ●: 기질 소모 속도)
도 19는 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) 효모 단독 배양 시의 시간에 대한 세포 농도, 기질 소모량, β-glucan 농도의 변화를 나타낸 도이다(검정 ■: DCW (g/L), 분홍 ■: Residual reducing sugar (g/L), 파랑 ■: β-glucan (g/L))
도 20는 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) 효모 단독 배양 시의 시간에 대한 발효변수들의 변화를 나타낸 도이다(빨간 ■: 비 증식 속도, 카키 ■: 증식 수율, 청록 ■: β-glucan 생산 수율, 갈색 ■: 기질 소모 속도).
도 21은 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P) 및 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) 효모 동시 배양 시 시간에 대한 세포 농도, 기질 소모량, β-glucan 농도의 변화를 나타낸 도이다(검정 ◆: DCW (g/L), 분홍 ◆: Residual reducing sugar (g/L), 파랑 ◆: β-glucan (g/L)).
도 22은 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P) 및 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) 효모 동시 배양 시 시간에 대한 발효변수들의 변화를 나타낸 도이다(빨간 ◆: 비 증식 속도, 카키 ◆: 증식 수율, 청록 ◆: β-glucan 생산 수율, 갈색 ◆: 기질 소모 속도).
도 23은 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P) 효모 단독 배양(●), 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) 효모 단독 배양(■), 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P) 및 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) 효모 동시 배양시(◆)의 생육 특성 및 발효변수의 변화 측정하여 나타낸 도이다(DCW: 검정, residual reducing sugar: 분홍, β-glucan: 파랑).
도 24은 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 복용시점별 눈가주름 육안 평가 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 25는 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 복용시점별 눈가주름 정도의 변화를 나타낸 도이다.
도 26은 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 복용시점별 피부 수분량 변화 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 27은 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 복용시점별 경피수분손실량 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 28는 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 복용시점별 피부 각질량 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 29은 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 복용시점별 피험자의 얼굴, 전박 부위 각질량 변화를 측정한 결과를 나타낸 도이다.
도 30는 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 복용시점별 피험자의 눈가 피부주름정도 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 31는 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 복용시점별 눈가주름변화 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 32은 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 복용시점별 눈가주름변화 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 33은 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 복용시점별 효능을 설문조사로 평가한 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 34은 본 발명의 임상평가 결과로 본 발명의 일 구현예에 따른 시험제품(B제품)과 대조제품(A제품)의 제품사용성에 대한 설문평가 결과를 나타낸 도이다.FIG. 1 is a graph comparing HAS2 (hyaluronan synthase 2) expression according to the extraction solvent types of an amorphous fermented fermented product according to an embodiment of the present invention (Example 1) and a charcoal raw material (Comparative Example 1).
FIG. 2 is a graph comparing MMP-1 expression of an amorphous ferrite ferrite (Example 1, Fer-) and an amethyst ferrite raw material (Comparative Example 1, Ori-) according to an embodiment of the present invention.
3 is a graph showing cell viability according to each sample treatment group as a result of cytotoxicity test.
FIG. 4 shows the comparison of the dietary intakes of the group treated with the diet containing the fermented soybean-barley complex according to an embodiment of the present invention in an animal model in which photoaging was induced.
FIG. 5 is a graph showing the weight of a hairless mouse according to a diet containing a fermented soybean-barley complex according to an embodiment of the present invention in an animal model in which photoaging is induced.
FIG. 6 is a graph showing the moisture content of the skin according to the diet containing the fermented soybean-barley complex according to an embodiment of the present invention in an animal model in which photoaging is induced.
FIG. 7 is a graph illustrating measured skin water loss (TEWL) according to a diet containing a fermented soybean-barley complex according to an embodiment of the present invention.
8 is a graph showing the expression level of procollagen type-1 (PIP-1) and MMP-1 (Matrix metalloproteinase-1 ) of the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention .
9 is a graph illustrating the degree of wrinkle formation of skin tissue according to the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention.
FIG. 10 is a graph showing the degree of change of pH and skin moisturizing degree lowered by UVB irradiation by a soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention.
FIG. 11 is a photograph showing the degree of change of the thickened skin by UVB irradiation by the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention.
FIG. 12 is a graph comparing the amount of free amino acid and the degree of suppressed filaggrin expression after UVB irradiation by the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention.
FIG. 13 is a graph comparing the degree of increase of glycerol and the decrease of increased water loss by UVB irradiation by the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention.
FIG. 14 is a photograph showing the degree of inhibition of phosphorylated p38 (p-p38) and ERK (p-ERK) by UVB irradiation of a soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention.
15 is a graph showing the degree of inhibition of phosphorylated p38 (p-p38) and ERK (p-ERK) by UVB irradiation of a soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention.
16 is a graph showing the activity of SOD (superoxide dismutase) lowered by UVB irradiation and the expression level of Nrf-2 (nuclear factor-erythroid 2-related factor 2) in the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention to be.
Figure 17 is a Pichia Jockey dini (Pichia jadinii, KFCC 11487P) cell density, substrate consumption with respect to time at the time of yeast alone cultured, a view showing the change in the β-glucan concentration (black ●: DCW (g / L) , pink ●: Residual reducing sugar (g / L ), Blue ●: β-glucan (g / L))
18 is a Pichia Jockey dini (Pichia a diagram showing a change of the fermentation parameters for the time of the jadinii, KFCC 11487P) yeast time when single cultures (red ●: specific growth rate, khaki ●: growth yield cyan ●:. β-glucan yield, brown ●: Substrate consumption rate)
Figure 19 is a graph Pullulan (Aureobasidium The results are shown in Table 1. The values of cell concentration, substrate consumption, and β-glucan concentration were plotted against time in single culture of yeast cells ( pullulan , KCCM 12017) ), Blue: beta-glucan (g / L))
FIG. 20 is a cross- Pullulan (Aureobasidium pullulans , KCCM 12017). Figure 4 shows the changes in fermentation parameters over time during yeast single culture (red: nonproliferation rate, kaki: proliferation yield, cyanobacteria: yield of β-glucan production, ).
21 is a Pichia Jockey dini (Pichia jadinii, KFCC 11487P) and Aureobasidium Stadium Pullulan (Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) cell concentration of the yeast cocultured during time, substrate consumption, and also showing the change of the β-glucan concentration (black ◆: DCW (g / L) , pink ◆: Residual reducing sugar ( g / L), and blue: β-glucan (g / L).
Figure 22 is a Pichia Jockey dini (Pichia jadinii, KFCC 11487P) and Aureobasidium Stadium Pullulan (Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) is a diagram showing a variation of the fermentation parameters for the yeast cocultured during time (red ◆: specific growth rate, khaki ◆: growth yield, green, ◆: β-glucan yield, brown ◆: Substrate consumption rate).
23 is a Pichia Jockey dini (Pichia jadinii, KFCC 11487P) yeast cultured alone (●), Aureobasidium pullulan Stadium (Aureobasidium pullulans , KCCM 12017) Yeast alone culture (■), Pichia Jockey dini (Pichia jadinii, KFCC 11487P) and Aureobasidium Stadium Pullulan (Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) growth characteristics of yeast when cocultured (◆), and a diagram showing the change in measurement of the fermentation parameters (DCW: black, residual reducing sugar: pink, β-glucan: blue).
24 is a graph showing the results of visual evaluation of eye wrinkles according to the time of taking test product (product B) and reference product (product A) according to one embodiment of the present invention as a result of clinical evaluation of the present invention.
FIG. 25 is a graph showing changes in the degree of eye wrinkles according to the time of taking the test product (product B) and the reference product (product A) according to one embodiment of the present invention as a result of clinical evaluation of the present invention.
FIG. 26 is a graph showing the results of analysis of changes in skin moisture content at the time of taking a test product (product B) and a reference product (product A) according to an embodiment of the present invention as a result of clinical evaluation of the present invention.
FIG. 27 is a graph showing the results of analysis of transdermal water loss according to the time of administration of the test product (product B) and the reference product (product A) according to one embodiment of the present invention as a clinical evaluation result of the present invention.
FIG. 28 is a graph showing the results of skin angle mass spectrometry at the time of taking a test product (product B) and a reference product (product A) according to an embodiment of the present invention as a clinical evaluation result of the present invention.
FIG. 29 shows the result of measuring the changes in the masses of the face and the elbow of a subject according to the time of taking the test product (product B) and the reference product (product A) according to an embodiment of the present invention as a result of the clinical evaluation of the present invention .
FIG. 30 is a graph showing the results of analysis of the degree of eye wrinkles of a subject by the time of taking a test product (product B) and a reference product (product A) according to an embodiment of the present invention as a clinical evaluation result of the present invention.
FIG. 31 is a graph showing the results of analysis of changes in the eye wrinkles at the time of taking the test product (product B) and the reference product (product A) according to one embodiment of the present invention as a clinical evaluation result of the present invention.
FIG. 32 is a graph showing the results of analysis of change in eye wrinkles according to the time of taking test product (product B) and reference product (product A) according to one embodiment of the present invention as a result of clinical evaluation of the present invention.
FIG. 33 is a graph showing the results of a clinical evaluation of the efficacy of a test product (product B) and a reference product (product A) according to one embodiment of the present invention, by questionnaire survey.
FIG. 34 is a diagram showing a result of a questionnaire evaluation on product usability of a test product (product B) and a reference product (product A) according to an embodiment of the present invention as a clinical evaluation result of the present invention.
본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 몸 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.As used herein, the term "skin" refers to a tissue covering the body surface of an animal, and is a concept of the broadest notion including a scalp and hair as well as a tissue covering the body surface of the face or body.
본 명세서에서 "콩 효모발효물" 및 "보리 효모발효물"이라 함은, 피키아 쟈디니(Pichia jadinii) 및 오레오바시디움 플루란 ( Aureobasidium pullulans )의 복합 균주를 콩 또는 보리에 접종하여 발효배양한 생성물을 의미한다.Called "yeast fermented beans" and "yeast fermentation of barley water" herein also are Pichia Jockey dini (Pichia jadinii), and Aureobasidium Pullulan (Aureobasidium pullulans ) is inoculated into soybean or barley and fermented and cultured.
본 명세서에서 "발효복합물"이라 함은, 복수의 발효물을 혼합한 혼합물 및 복수의 원료를 혼합하여 발효한 발효물을 모두 포함하는 최광의의 개념이다.The term "fermented complex" in this specification is the broadest concept including both a mixture of a plurality of fermented products and a fermented product obtained by mixing a plurality of raw materials.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 구현예들은 콩 및 보리로부터 유래된 콩-보리 발효복합물을 포함하는 식품 조성물을 제공한다. Embodiments of the present invention provide a food composition comprising a soy-barley fermented composite derived from soy and barley.
보다 상세하게는, 본 발명의 구현예들은 콩 및 보리로부터 유래된 콩-보리 발효복합물을 포함하는 식품 조성물로, 상기 발효복합물은 다이드제인(daidzein) 및 제니스테인(genistein)의 함량이 증가된 콩 효모발효물; 및 베타-글루칸(β-glucan) 의 함량이 증가된 보리 효모발효물을 포함하는 식품 조성물을 제공한다.More particularly, embodiments of the present invention are food compositions comprising soybean-barley fermented complexes derived from soybeans and barley, wherein the fermentation complexes comprise soybean- and barley-derived soybean- Fermented yeast; And a fermented barley yeast having an increased content of beta-glucan.
본 발명의 구현예들에 따른 보리의 세포벽에 포함된 상기 베타-글루칸(β-glucan)은 다당류의 일종으로, 효모의 세포벽, 버섯류, 곡류 등에 존재하는 물질이다. 베타-글루칸은 포도당 중합체로서 포도당 단위체가 1, 3위치에 β-글리코시드 결합을 기본 구조로 가지고 있고, 포도당이 결합되는 위치에 따라 구조 및 물리 화학적 성질이 다르다. 예를 들면 베타-글루칸에는 베타-(1,3)/(1,4)-글루칸(β-(1,3)/(1,4)-glucan), 베타-(1,3)/(1,6)-글루칸(β-(1,3)/(1,6)-glucan) 등이 있으며, 하기 화학식 1은 이 중 베타-(1,3)/(1,6)-글루칸의 구조식을 나타낸 것이다.The β-glucan contained in the cell wall of the barley according to embodiments of the present invention is a kind of polysaccharide, and is a substance existing in cell walls, mushrooms, cereals, etc. of yeast. Beta-glucan is a glucose polymer having a basic structure of β-glycosidic bonds at 1 and 3 positions of glucose units, and its structure and physicochemical properties are different depending on the position where glucose is bonded. For example, beta-glucan includes beta (1,3) / (1,4) -glucan (beta - (1,3) (1,3) / (1,6) -glucan), and the following formula (1) can be used to form the structure of the β- (1,3) / .
[화학식 1][Chemical Formula 1]
베타-글루칸은 암세포를 직접 공격하지 않고 비특이적 면역반응으로 인간의 정상 세포의 면역기능을 활성화시켜 암세포의 증식과 재발을 억제하고 (macrophage)를 활성화 시켜 암세포가 있는 체내로 들어가 여러 가지 (Cytokine)의 분비를 촉진시킴으로써 면역세포인 와 B세포의 면역기능을 활성화 시켜준다. 이 외에도 베타-글루칸은 혈당강하 및 혈중 콜레스테롤 감소 효과가 우수하며, 지질대사를 개선하여 체지방 형성과 축적을 억제함으로써 항 비만효과를 가지고 있다. 베타-글루칸은 종래 항암효과 및 면역증강효과만이 알려져 있어 항암 또는 면역증강을 위한 의약품 또는 건강기능식품으로 이용되어 왔다. 상기 베타-글루칸은 당구조를 갖는 단위가 세포막을 이루는 당단백질과 결합하므로 피부조직과의 친화력이 우수하고, 수분과의 친화력이 높아 피부 내에서의 수분을 보유할 수 있다. 이에 본 발명의 구현예들에 따른 식품 조성물은 상기와 같은 작용을 하는 베타-글루칸의 함량이 보리원물 또는 종래 보리 발효물보다 매우 증가된 보리 효모 발효물을 포함함으로써 우수한 보습효능, 주름개선 및 미백 효능 등을 제공할 수 있다.Beta-glucan does not directly attack cancer cells but activates immune function of normal human cells by nonspecific immune response, inhibits the proliferation and recurrence of cancer cells (macrophage), enters the body of cancer cells and enters into the body of various cytokines Stimulates the immune function of immune cells and B cells. In addition, beta-glucan has excellent blood glucose lowering effect and blood cholesterol reduction effect, and it has an anti-obesity effect by suppressing the formation and accumulation of body fat by improving lipid metabolism. Beta-glucan has been known for its anticancer effect and immunostimulating effect only and has been used as a medicinal product or health functional food for anti-cancer or immunity enhancement. Since the unit having a sugar structure binds to a glycoprotein constituting a cell membrane, the beta-glucan has an affinity with a skin tissue and has high affinity with water, so that it can retain moisture in the skin. Therefore, the food composition according to the embodiments of the present invention is characterized in that the content of beta-glucan having the above-mentioned action includes the fermented barley yeast or fermented barley yeast which is much higher than that of the conventional barley fermented product, Efficacy and the like.
본 발명의 구현예들에 따른 콩에 포함된 상기 다이드제인(daidzein, 7-Hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl) chromen-4-one)은 플라보노이드 중 아이소플라본의 일종으로, 혈중 콜레스테롤 수치를 낮춰 주어 각종 만성 질환의 예방과 치료에 효과적인 것으로 알려져 있으며, 화학식은 아래와 같다. The daidzein (7-Hydroxy-3- (4-hydroxyphenyl) chromen-4-one) contained in beans according to embodiments of the present invention is a type of isoflavone in flavonoids, It is known to be effective in the prevention and treatment of various chronic diseases, and its chemical formula is as follows.
[화학식 3](3)
본 발명의 구현예들에 따른 콩에 포함된 상기 제니스테인(genistein, 5,7-Dihydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)chromen-4-one)은 상기 다이드제인과 같이 아이소플라본 화합물 중의 하나로서 다음의 화학식을 가진다.Genistein (5,7-dihydroxy-3- (4-hydroxyphenyl) chromen-4-one) contained in soybean according to embodiments of the present invention is one of the isoflavone compounds Lt; / RTI >
[화학식 4][Chemical Formula 4]
상기 다이드제인 및 제니스테인은 대두 및 이집트콩과 같은 콩과 식물, 두부 및 템페(tempeh)와 같은 콩가공품, 식물단백질 조직을 가진 식품에 포함되어 있다. 식물성 호르몬으로서 세포 내 신호전달에 관여하는 단백질인산화효소를 저해하고 나이가 들어감에 따라서 탄력이 없어진 피부가 탄력을 되찾는데 필수인 단백질인 콜라겐의 생성을 촉진하여 주며, 천연물이기 때문에 안전성이 뛰어나고 피부 산화와 노화를 방지할 수 있다. 이외, 유방암과 전립선암, 난소암, 대장암뿐만 아니라 혈중 콜레스테롤을 낮춰 주어 각종 만성 질환의 예방과 치료에 효과적이다. 이는 다이드제인 및 제니스테인이 혈중 지방 농도 감소, LDL산화억제, 항염증 효과, 피응고와 혈전감소, 건전한 혈관유지 등 항동맥경화 효과를 갖고 있기 때문이다. 또한, α-글루코시다제를 저해하여 N-결합형 당단백질(N-linked glycoprotein)인 티로시나제(tyrosinase)의 글리코실화(glycosylation)를 저해하므로, 티로시나제의 세포내 이동이나 활성을 억제할 수 있고, 자외선에 의해 유도되는 피부흑화를 농도 의존적으로 개선할 수 있다. 이에 본 발명의 구현예들에 따른 식품 조성물은 상기 다이드제인 및 제니스테인의 함량이 콩 원물 또는 종래 콩 발효물보다 매우 증가된 콩 효모 발효물을 포함함으로써 우수한 피부 미백효능, 피부 주름 개선 및 보습 효능 등을 제공할 수 있다. The daidzein and genistein are contained in soybean and soybean products such as soybean, soybean products such as tofu and tempeh, and foods having plant protein tissue. It is a botanical hormone that inhibits protein kinases involved in intracellular signal transduction and promotes the production of collagen, a protein essential for elasticity recovery, as it gets older. It is safe because it is a natural product, And aging can be prevented. In addition, it lowers blood cholesterol as well as breast cancer, prostate cancer, ovarian cancer, colon cancer, and is effective for prevention and treatment of various chronic diseases. This is because daidzein and genistein have anti-arteriosclerotic effects such as reduced blood lipid levels, inhibition of LDL oxidation, anti-inflammatory effects, blood clotting and thrombosis, and healthy vascular retention. In addition, it inhibits glycosylation of tyrosinase, which is an N-linked glycoprotein, by inhibiting? -Glucosidase, thereby inhibiting intracellular movement or activity of tyrosinase, Skin darkening induced by ultraviolet rays can be improved in a concentration-dependent manner. Accordingly, the food composition according to the embodiments of the present invention is excellent in skin whitening efficacy, skin wrinkle improvement, and moisturizing effect by containing the daidzein and the genistein in a soybean fermented soybean fermented product, And so on.
본 발명의 일 구현예에 따른 상기 콩 효모발효물 및 보리 효모발효물은 피키아 쟈디니(Pichia jadinii) 및 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans)의 복합 균주로 발효된 효모발효물이다. 발효물은 균의 종류에 따라 그 발효 메커니즘이 상이하므로, 본 발명은 상기와 같은 복합균주로 콩 및 보리를 발효함으로써 균주간의 상호 보완을 통해 콩 또는 보리의 발효를 촉진시켜, 피부에 유익한 대사산물을 다량생성하고 배출시킬 수 있어 풍부한 발효산물을 제조할 수 있다. 일 구현예에 따른 상기 복합 균주는 오레오바시디움 플루란이 피키아 쟈디니보다 더 많이 포함된 것이며, 예를 들면 피키아 쟈디니 및 오레오바시디움 플루란이 1:2 내지 1:4의 중량비율(균수비율)로 혼합된 것일 수 있다. 이는 피키아 쟈디니의 생육속도가 오레오바시디움 플루란의 생육속도 보다 2배 이상 빠르므로 오레오바시디움 플루란을 보다 많이 접종해야 하기 때문이다. 또한, 상기 피키아 쟈디니 및 오레오바시디움 플루란은 각각 피키아 쟈디니(KFCC 11487P) 및 오레오바시디움 플루란(KCCM 12017)를 예로 들 수 있다.The yeast fermented beans and barley, yeast fermented product according to one embodiment of the present invention are picky ah jar dini (Pichia jadinii) and Aureobasidium Stadium Pullulan (Aureobasidium pullulans ) is a yeast fermented product. Since the fermentation product differs in fermentation mechanism depending on the kind of bacteria, the present invention promotes the fermentation of soybean or barley through mutual complementation of the strains by fermenting soybean and barley with the above-mentioned complex strain, Can be produced and discharged in large quantities, so that a rich fermented product can be produced. The composite strain in accordance with an embodiment is Aureobasidium Stadium Pullulan Pikia It is included more than Judy , for example , Jadini and Aureobasidium Plurakan may be mixed in a weight ratio (ratio of bacteria) of 1: 2 to 1: 4. It Pichia The growth rate of the Jockey dini Aureobasidium Stadium Since the growth rate of Pullulan is two times faster than that of Aureobasidium This is because more flu shots are needed. In addition, the Pichia Jadini and Aureobasidium Pullulan, respectively , Jockey dini (KFCC 11487P) and Aureobasidium Stadium Fluorenyl may be mentioned is (KCCM 12017) as an example.
일 구현예로서 상기 콩 효모발효물 및 보리 효모발효물은 알파화된 콩 및 보리를 발효한 효모발효물이며, 이때 상기 알파화된 콩 및 보리는 열을 가하며 볶은 콩 및 보리를 분말화한 것이다. 콩 및 보리는 외피로 둘러싸여 효소분해 작용을 받기 어려우므로 외피를 파괴하는 과정을 거쳐야 콩 및 보리 안의 단백질과 탄수화물을 미생물의 효소작용으로 분해할 수 있으며, 이러한 전처리 과정은 습식과 건식 방법으로 나누어진다. 증기를 사용하는 습식방법은 추후 제조공정상 외부미생물에 불안정한 원료로 제조되기 때문에 건식방법에 의한 전처리 방법이 보다 용이할 수 있다. 이러한 물리적 방법에 의한 외피의 파괴 및 열을 이용한 단백질 및 탄수화물의 변성은 효소분해 수율을 높이고, 더욱이 복잡한 구조로 이루어진 단백질의 구조를 파괴하여 효소분해가 보다 용이하게 이루어지게 할 수 있다. In one embodiment, the fermented soybean yeast and fermented barley yeast are fermented yeast fermented with soybeans and barley, wherein the fermented soybeans and barley are pulverized by adding heat to roasted soybeans and barley . Since soybeans and barley are surrounded by a shell, they are difficult to undergo enzymatic degradation. Therefore, it is necessary to destroy the envelope before degrading proteins and carbohydrates in soybeans and barley into enzymes of microorganisms. Such pretreatment processes are divided into wet and dry processes . Since the wet method using steam is manufactured as an unstable raw material to the external microorganisms, the pretreatment method by the dry method may be easier. The destruction of the envelope and the denaturation of proteins and carbohydrates by heat can increase the degradation yield of the enzymes and further break down the structure of the complex protein structure, thereby facilitating the degradation of the enzymes.
구체적으로, 상기 콩 효모발효물 및 보리 효모발효물은 콩 및 보리를 각각 알파화 단계; 액/당화 단계; 및 효모발효 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조할 수 있으며, 또는 콩과 보리의 혼합물을 함께 알파화 단계; 액/당화 단계; 및 효모발효 단계를 포함하는 제조방법을 통해 하나의 공정으로 발효복합물을 제조할 수 있다. 상기 알파화 단계는 콩/보리를 90℃ 이상의 온도에서 볶은 다음 100 메쉬(mesh) 이상으로 분말화하는 단계를 포함할 수 있고, 상기 액/당화 단계는 상기 분말화된 콩/보리를 아밀라제(Amylase) 및 글루코아밀라제(glucoamylase) 중 하나 이상을 첨가하여 프로테아제(protease)로 효소분해하는 단계를 포함할 수 있다. 또한, 상기 효모발효 단계는 상기 액/당화된 콩 또는 보리를 발효조에 넣고 20 내지 40℃의 온도조건 하에서 10 내지 30 시간동안 배양하여 발효하는 단계를 포함할 수 있다. 또한, 상기 제조방법은 효모 발효 후 세포 파쇄 단계(disruption) 및 여과 단계(seiveing)을 더 포함할 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 콩 효모발효물 및 보리 효모발효물은 상기 효모발효 단계에서 각각 복합 균주 종배양액을 발효액량 대비 1 중량% 내지 10 중량% 또는 1 중량% 내지 5 중량%의 양으로 콩 또는 보리에 접종하여 발효한 것이다. 일 구현예에 따르면 상기 효모 발효 단계에서 발효조에 넣는 콩 또는 보리의 함량은 각각 전체 함량 대비 1 중량% 내지 20 중량%, 보다 구체적으로는 전체 함량 대비 1 중량% 내지 10 중량%의 범위내일 수 있다. 또한, 일 구현예로서 상기 콩은 대두, 강낭콩, 완두콩 등을 예로 들 수 있으며, 구체적으로는 대두를 사용할 수 있다. 상기 보리는 흰찰쌀보리, 새찰쌀보리, 자수정찰보리, 보석찰보리, 강호청보리 등을 예로 들 수 있으며, 구체적으로는 자수정 찰보리를 사용할 수 있다.Specifically, the bean yeast fermented product and the barley yeast fermented product are produced by: Liquid / saccharification step; And a yeast fermentation step, or may be prepared by a process comprising the steps of: alpha-blending together a mixture of soybeans and barley; Liquid / saccharification step; And a yeast fermentation step, a fermentation complex can be produced in one process. The step of alpha-oxidation may include roasting the soybeans / barley at a temperature of 90 ° C or higher and then pulverizing the soybean / barley to 100 mesh or more, wherein the liquid / saccharification step is a step of adding the pulverized soybean / barley to amylase ) And glucoamylase, and then enzymatically degrading the protease with a protease. Also, the yeast fermentation step may include fermenting the liquid / saccharified soybeans or barley into a fermentation tank and incubating the mixture at a temperature of 20 to 40 DEG C for 10 to 30 hours. In addition, the production method may further include cell disruption and seepage after yeast fermentation. More specifically, the soybean yeast fermented product and the barley yeast fermented product are cultivated in the yeast fermentation stage in an amount of 1% by weight to 10% by weight or 1% by weight to 5% by weight, respectively, And then fermented. According to one embodiment, the content of soybeans or barley in the fermentation tank in the yeast fermentation step may be in the range of 1 wt% to 20 wt%, more specifically 1 wt% to 10 wt%, based on the total content, respectively . In one embodiment, the soybean may be soybeans, kidney beans, peas, and the like. Specifically, soybeans may be used. Examples of the barley include white rice barley, pickle barley, amethyst charcoal, jewel charcoal, and charcoal charcoal, and specifically, amethyst charcoal can be used.
본 발명의 구현예들에 따라 상기와 같이 제조된 콩-보리 복합화합물은 피부 미용 개선기능을 갖는 유효성분인 다이드제인, 제니스테인, 베타-글루칸 등을 일반 콩 및 보리 원물 또는 일반 콩 및 보리 발효물과 비교하여 매우 증가된 함량으로 포함할 수 있다. 구체적으로, 일 구현예로서 상기 복합발효물은 상기 베타-글루칸을 복합발효물 총 중량에 대하여 10 중량% 이상으로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 복합발효물은 상기 베타-글루칸을 복합발효물 총 중량에 대하여 10 중량% 이상, 12중량% 이상, 14중량% 이상, 16중량% 이상, 18중량% 이상, 20중량% 이상, 22중량% 이상, 24중량% 이상, 26중량% 이상, 28중량% 이상, 30중량% 이상, 32중량% 이상, 34중량% 이상, 36중량% 이상, 38중량% 이상 또는 40중량% 이상 일 수 있다. According to the embodiments of the present invention, the soybean-barley complex compound prepared as described above can be used as an effective ingredient for improving skin care, such as daidzein, genistein, and beta-glucan, It can be included in a greatly increased content compared to water. Specifically, in one embodiment, the complex fermented product may contain the beta-glucan in an amount of 10% by weight or more based on the total weight of the complex fermentation product. Specifically, the complex fermented product may contain at least 10% by weight, at least 12% by weight, at least 14% by weight, at least 16% by weight, at least 18% by weight, at least 20% by weight, At least 22 wt%, at least 24 wt%, at least 26 wt%, at least 28 wt%, at least 30 wt%, at least 32 wt%, at least 34 wt%, at least 36 wt%, at least 38 wt% .
또한,일 구현예로서 상기 발효복합물은 상기 다이드제인 및 제니스테인을 발효복합물 총 중량에 대하여 각각 0.005중량% 이상으로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 다이드제인 및 제니스테인을 발효복합물 총 중량에 대하여 0.005중량% 이상, 0.01중량% 이상, 0.05중량% 이상, 0.1중량% 이상, 0.2중량% 이상, 0.3중량% 이상, 0.4 중량% 이상, 0.5중량% 이상 또는 1중량% 이상일 수 있다. Also, in one embodiment, the fermentation complex may comprise the daidzein and the genistein, respectively, in an amount of at least 0.005% by weight based on the total weight of the fermentation complex. Specifically, the daidzein and the genistein may be added in an amount of 0.005 wt% or more, 0.01 wt% or more, 0.05 wt% or more, 0.1 wt% or more, 0.2 wt% or more, 0.3 wt% or more, 0.4 wt% or more , 0.5% by weight or more, or 1% by weight or more.
보다 구체적으로는, 일 구현예로서 상기 발효복합물은 베타-글루칸을 발효복합물 총 중량에 대하여 10-50 중량%, 다이드제인 0.005-5 중량%, 및 제니스테인 0.005-5중량%로 포함할 수 있다.More specifically, in one embodiment, the fermentation complex can include beta-glucan in an amount of 10-50 wt%, daidzein 0.005-5 wt%, and zenithaine 0.005-5 wt%, based on the total weight of the fermentation complex .
또한, 본 발명의 일 구현예에 따른 조성물은 상기 콩 효모발효물 및 보리 효모발효물을 10:1 내지 1:10의 중량비로 혼합한 발효복합물, 콩 및 보리를 10:1 내지 1:10의 중량비로 혼합하여 발효한 발효물을 포함할 수 있다. 구체적으로 상기 콩 효모발효물 및 보리 효모발효물을 9:1 내지 1:9, 8:1 내지 1:8, 7:1 내지 1:7, 6:1 내지 1:6, 5:1 내지 1:5, 4:1 내지 1:4, 3:1 내지 1:3, 2:1 내지 1:2일 수 있다. 보다 구체적으로는 1:1의 중량비로 혼합한 발효복합물을 포함할 수 있다. 상기 범위 내일 때, 콩발효물에서의 지표물질인 다이드제인과 제니스테인의 함량과 보리발효물의 베타글루칸의 함량이 서로 적절히 포함됨으로써 탁월한 기능성을 나타낼 수 있다. The composition according to one embodiment of the present invention may be prepared by mixing the fermented soybean yeast fermented product and the barley yeast fermented product at a weight ratio of 10: 1 to 1:10, 10: 1 to 1:10 And may include a fermented product fermented by mixing in a weight ratio. Specifically, the bean yeast fermented product and the barley yeast fermented product are mixed at a ratio of 9: 1 to 1: 9, 8: 1 to 1: 8, 7: 1 to 1: 7, 6: 1 to 1: 6, : 5, 4: 1 to 1: 4, 3: 1 to 1: 3, 2: 1 to 1: 2. More specifically, a fermentation complex mixed at a weight ratio of 1: 1. When the content is within the above range, the content of daidzein and genistein, which are indicator substances in the soybean fermented product, and the content of beta-glucan in the fermented product of barley are properly contained, thereby exhibiting excellent functionality.
본 발명의 구현예들에 따른 조성물은 상기 발효복합물을 조성물의 제형 또는 용도에 따라 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 100 중량%로 포함할 수 있으며, 구체적으로는 0.01 내지 50중량%로 포함할 수 있다. The composition according to embodiments of the present invention may comprise 0.0001 to 100% by weight, and more specifically 0.01 to 50% by weight, of the fermentation complex, based on the total weight of the composition, depending on the formulation or use of the composition .
본 발명의 구현예들에 따른 상기 발효복합물은 다이드제인, 제니스테인, 베타-글루칸 과 같은 피부 유용성 성분들을 증가된 함량으로 포함함으로써, UV-B 자극에 의해 증가된 콜라겐 분해 효소인 MMP-1 발현의 억제 활성을 가져, 피부 각질화 과다생성 및 콜라겐 분해를 억제하고, 콜라겐의 합성의 전구체인 타입-1 프로콜라겐(Procollagen type-1) 생성을 증가시켜 주름 개선에 효과적이다. 또한, 피부의 방수성 외부층이 적절히 발달되도록 할 수 있는 필라그린(Filaggrin)의 발현을 증가시켜 피부보습에 우수한 효과가 있다. 이에 본 발명은 상기 발효복합물을 포함하는 피부 보습, 피부 주름 개선, 피부 미백를 포함하는 전반적인 피부 미용 개선 용도의 식품 조성물을 제공할 수 있다.The fermentation complex according to embodiments of the present invention comprises increased amounts of skin oil components such as daidzein, genistein, and beta-glucan, thereby increasing the amount of MMP-1 expression, an increased collagenase enzyme by UV-B stimulation , Inhibits excessive keratinization of skin and collagen degradation, and increases production of type-1 procollagen (Procollagen type-1), a precursor of collagen synthesis, and is effective in improving wrinkles. In addition, it has an excellent effect on skin moisturization by increasing the expression of filaggrin, which can appropriately develop the waterproof outer layer of the skin. Accordingly, the present invention can provide a food composition for general skin beauty improvement including skin moisturizing, skin wrinkle improvement, and skin whitening including the fermentation complex.
본 발명의 구현예들에 따른 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함한다. 본 발명의 식품 조성물은 상기 발효복합물외 포함할 수 있는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 용도 및 제형에 따라 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품 보조 첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. Food compositions according to embodiments of the present invention include forms such as pills, powders, granules, infusions, tablets, capsules or solutions. The food composition of the present invention may contain other components other than the fermentation complex, and may contain various herbal medicine extracts, food-aid additives, natural carbohydrates, and the like as additional ingredients, have.
일 구현예로서 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜을 예로 들 수 있으며, 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 Ａ, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 포함할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.In one embodiment, the natural carbohydrate is a monosaccharide such as glucose, fructose, etc .; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol, and natural flavors other than those mentioned above (e.g., tautatin, stevia, The food composition of the present invention may contain various nutrients, vitamins, minerals (for example, fructose, glutaraldehyde, etc.) and synthetic flavors (saccharine, aspartame, etc.) Electrolytes, flavorings such as synthetic flavors and natural flavors, colorants and thickeners (cheese, chocolate etc.), pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, Preservatives, glycerin, alcohols, carbonating agents used in carbonated beverages, etc. Besides, it may contain flesh for the production of natural fruit juice and fruit juice drinks and vegetable drinks. C. These components can be used independently or in combination.
본 발명의 구현예들에 따른 식품 조성물은 예를 들면 상기 발효복합물을 3g 포함(베타-글루칸 300mg 이상, 제니스테인 및 다이드제인 총 200 μg이상 포함)하는 불투명한 형태의 음료 타입(100ml)일 수 있으며, 1일 1회 100ml로 음용할 수 있다. 9주 내지 15주간 꾸준히 음용할 것이 권장된다. The food composition according to embodiments of the present invention may be in the form of an opaque form of beverage (100 ml) containing, for example, 3 g of the fermentation complex (including more than 300 mg of beta-glucan, 200 μg of total of genistein and daidzein) You can drink 100ml once a day. It is recommended to drink continuously for 9 to 15 weeks.
이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예를 통하여 설명한다. 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 상세히 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 하기의 실시예의 범위로 제한되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be described with reference to the following examples and experimental examples. The Examples and Experimental Examples are intended to further illustrate the present invention and are not intended to limit the scope of the present invention.
또한, 이 기술분야의 통상의 지식을 가진 자이면 누구나 이 발명의 기술 사상의 범주를 이탈하지 않고 첨부한 특허청구범위 내에서 다양한 변형 및 모방이 가능함은 명백한 사실이다.It will be apparent to those skilled in the art that various modifications and variations can be made in the present invention without departing from the scope of the invention.
[실시예 1] 보리 효모발효물의 제조[Example 1] Production of fermented barley yeast
전남 영광 100% 국내산 자수정찰보리를 150℃-180℃에서 10분-20분 동안 볶음솥에서 알파화 시킨 후 분쇄기를 사용하여 100 mesh이상으로 분말화하였다. 상기 분말화된 자수정찰보리를 발효배지로 하였다. 발효에 사용한 미생물로서 본 출원인의 균주인 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P)와 KCCM으로부터 분양 받은 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017)를 1:1의 균수로 혼합하여 복합균주를 제조한 다음, 이를 YM 배지(전 배양 배지; 기본 배지조성 - 1.71 % 글루코오스, 0.15 % 질산암모늄, 0.1 % K2H2PO4, 0.1 % NaCl, 0.02 % MgSO4)를 사용하여 30℃에서 24시간동안 발효조에서 배양하였다. 글루코스 17.1g/L, 질산 암모늄 1.5g/L 및 알파화한 상기 자수정찰보리 1%-10%를 상기 발효조 배지에 첨가하였다. 이를 수용액 상태에서 121℃에서 30분 동안 멸균시킨 후 상기 복합균주의 종배양액을 발효액량의 1%-5% 정도 발효조에 접종하여 30℃에서 24시간동안 배양하였다. 배양완료 후 90℃-100℃에서 30분 이상 살균 후 분무건조기를 사용하여 분말화하여, 보리 효모발효물을 제조하였다.
그 결과 얻어진 보리 효모발효물 내의 최종 베타글루칸 함량은 282.6mg/g 으로, 자수정찰보리 원물에 비하여 3.5배 증가되었음을 알 수 있었다.As a result, the final content of beta - glucan in the fermented barley yeast was 282.6 mg / g, which was 3.5 times higher than that of the amorphous charcoal raw material.
[실시예 2] 콩 효모발효물의 제조[Example 2] Production of fermented soybean yeast
대두(구입처: ㈜샘표식품)를 150℃-180℃에서 10분-20분 동안 볶음솥에서 알파화 시킨 후 분쇄기를 사용하여 100 mesh이상으로 분말화하였다. 상기 분말화된 대두를 발효배지로 하였다. 발효에 사용한 미생물로서 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P)와 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017)를 1:1의 균수로 혼합하여 복합균주를 제조한 다음, 이를 YM 배지(broth)를 사용하여 30℃에서 24시간동안 발효조에서 배양하였다. 글루코스 17.1g/L, 질산 암모늄 1.5g/L 및 알파화한 상기 대두 1%-10%를 상기 발효조 배지에 첨가하였다. 이를 수용액 상태에서 121℃에서 30분 동안 멸균시킨 후 상기 복합균주의 종배양액을 발효액량의 1%-5% 정도 발효조에 접종하여 30℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양완료 후 90℃-100℃에서 30분 이상 살균 후 분무건조기를 사용하여 분말화하여, 콩 효모발효물을 제조하였다.Soybean (Sankyo Food Co., Ltd.) was ground at 150 ° C to 180 ° C for 10 minutes to 20 minutes in a frying pan and then pulverized to a size of 100 mesh or more using a pulverizer. The pulverized soybean was used as a fermentation medium. As the microorganism used in the fermentation Pichia Jockey dini (Pichia jadinii, KFCC 11487P) and Aureobasidium Stadium Pullulan (Aureobasidium pullulans , KCCM 12017) were mixed at a ratio of 1: 1 to prepare a composite strain, which was then cultured in a fermenter at 30 ° C for 24 hours using a YM broth. 17.1 g / L of glucose, 1.5 g / L of ammonium nitrate and 1% -10% of the above-mentioned soybeans were added to the fermenter medium. This was sterilized in an aqueous solution at 121 ° C for 30 minutes, and the seed culture of the complex strain was inoculated into a fermenter at 1% -5% of the fermentation broth and cultured at 30 ° C for 24 hours. After completion of the incubation, the mixture was sterilized at 90 ° C to 100 ° C for at least 30 minutes and then pulverized using a spray drier to prepare a fermented soybean yeast.
그 다음, 상기 제조된 콩 효모발효물내 다이드제인 및 제니스테인 함량의 증가여부를 하기와 같이 확인하였다.Then, the increase of the daidzein and the genistein content in the soybean fermented yeast thus prepared was confirmed as follows.
먼저, 상기 제조된 콩 효모발효물 1.73 g을 80% MeOH에 담궈 상온에서 하루 동안 추출한 추출물을 여과 및 농축하여 80% MeOH 추출물 287 mg 얻었다. 이때 상기 콩 효모발효물에는 지표성분 외에 상당량의 당과 그 외 물질들이 존재하므로 분석에 용이하게 분획을 통해서 이들을 최대한 제거하였다. 그 다음 상기 콩 효모발효물의 추출물을 에틸아세테이트(EtOAc), 부탄올(BuOH), 그리고 물(H2O)을 각각 이용하여 계통분획을 진행하여 각각 5.1mg, 68.5 mg, 210 mg을 얻었다. 물층을 제외한 EtOAc와 BuOH 분획물을 합쳐 500ppm농도로 시료를 제조하였다.First, 1.73 g of the fermented soybean yeast thus prepared was dipped in 80% MeOH, and the extract was extracted at room temperature for one day. The extract was filtered and concentrated to obtain 287 mg of 80% MeOH extract. At this time, the fermented soybean yeast has a large amount of sugars and other substances in addition to the indicator components, and thus they are easily removed through the fractions. Then, the extract of the fermented soybean yeast was treated with ethyl acetate (EtOAc), butanol (BuOH) and water (H2O) to obtain fraction of 5.1 mg, 68.5 mg and 210 mg, respectively. EtOAc and BuOH fractions except for the water layer were combined to prepare a sample at a concentration of 500 ppm.
STD(Standard)는 100ppb, 250ppb, 500ppb, 1000ppb, 5000ppb 농도로 하여, 상기 콩 효모발효물의 추출물의 질량을 분석하였다. 분석조건은 다음과 같다.The mass of the extract of the fermented soybean yeast was analyzed by STD (Standard) at concentrations of 100 ppb, 250 ppb, 500 ppb, 1000 ppb and 5000 ppb. The analysis conditions are as follows.
- Column; C18 (2.1 mm X 150 mm, 2.7 ㎛)- Column; C18 (2.1
- Solvent; gradient with 0.1% Formic acid in Water and Acetonitrile, 0.2ml/min- Solvent; gradient with 0.1% Formic acid in Water and Acetonitrile, 0.2 ml / min
- Instrument; Agilent Technologies 6410 Triple Quad LC/MSMS - Instrument; Agilent Technologies 6410 Triple Quad LC / MSMS
[표 1][Table 1]
분석결과, 물분획물은 제외한 분획물의 양은 73.6 mg이였으므로, 다이드제인의 함량은 73.6 X 2080.69 =153,138.78 ng, 제니스테인의 함량은 73.6 X 2453.13 = 180,550.37 ng 였다(하기 표 2 내지 4 참조). As a result of the analysis, the amount of the fraction excluding the water fraction was 73.6 mg, and the content of daidzein was 73.6 x 2080.69 = 153,138.78 ng and the content of genistein was 73.6 x 2453.13 = 180,550.37 ng (see Tables 2 to 4 below).
[표 2][Table 2]
[표 3][Table 3]
[표 4][Table 4]
발효복합물Fermentation complex
[실험예 2] 자수정 찰보리 원물 및 효모발효물 간의 피부건강개선 효능 비교[Experimental Example 2] Comparing the skin health improvement effect between the amorphous silicon carbide raw material and the yeast fermented product
피부보습Skin moisturizing
자수정 찰보리 원물(비교예1) 및 본 발명의 일 구현예에 따른 자수정 찰보리 효모발효물(실시예 1)간의 피부보습 효능평가 및 적절한 추출용매 선택을 위하여, 자수정 찰보리 원물(비교예1) 및 본 발명의 일 구현예에 따른 자수정 찰보리 효모발효물(실시예 1)의 각 열수추출물, 에틸아세테이트추출물, 부탄올추출물의 보습 인자인 HAS2(hyaluronan synthase 2)의 발현 및 활성을 웨스턴블랏을 통해 단백질 수준에서 그 효능을 확인하였다.In order to evaluate the skin moisturizing effect between the amorphous charcoal raw material (Comparative Example 1) and the amorphous charred yeast fermented product (Example 1) according to one embodiment of the present invention and to select an appropriate extraction solvent, an amethyst charcoal raw material (Comparative Example 1) The expression and activity of HAS2 (hyaluronan synthase 2), a moisturizing factor of each hot-water extract, ethyl acetate extract and butanol extract, of the fermented yeast fermented yeast fermented by amphibia according to an embodiment of the present invention (Example 1) And its efficacy was confirmed.
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 자수정 찰보리 원물 및 자수정 찰보리 발효물 모두 추출용매 중 에틸아세테이트 발효추출물에서 HAS2 발현이 가장 높았으며, 추출용매 중 에틸아세테이트 발효추출물의 경우 자수정 찰보리 발효물이 자수정 찰보리 원물보다 HAS2 발현이 현저히 높게 나타났다.As a result, as shown in FIG. 1, HAS2 expression was the highest in the ethyl acetate fermentation extract in the extraction solvent, and in the case of the ethyl acetate fermentation extract in the extraction solvent, the fermentation product of the amethyst and the ferulic acid HAS2 expression was significantly higher than that of HAS2.
피부 주름개선Skin wrinkle improvement
자외선 조사에 의한 피부노화는 MMP-1(collagenase) 단백질의 과발현 및 활성증가를 유도하며, 이러한 과정은 자외선에 의한 활성산소 생성과 매우 밀접한 관련이 있다. 또한, 이로 인한 세포손상은 주름형성을 촉진한다. 따라서 자수정 찰보리 원물(비교예1) 및 본 발명의 일 구현예에 따른 자수정 찰보리 효모발효물(실시예 1)의 에틸아세테이트 추출물의 주름개선효능을 비교하는 실험을 실시하였다. E1-E5는 에틸아세테이트 용매(농도별) 추출 샘플을 의미한다. Skin aging by ultraviolet irradiation induces overexpression and activity of MMP-1 (collagenase) protein, and this process is closely related to the production of reactive oxygen species by ultraviolet light. In addition, cellular damage resulting from this promotes wrinkling. Therefore, an experiment was conducted to compare the wrinkle-reducing effect of the ethyl acetate extract of the amethyst fly ash (Comparative Example 1) and the amorphous fly ash yeast fermented product (Example 1) according to one embodiment of the present invention. E1-E5 means an ethyl acetate solvent (concentration by weight) extraction sample.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 자수정 찰보리 원물은 UVB조사시 MMP-1 발현정도가 급격히 증가한데 반해, 자수정 찰보리 발효물은 MMP-1의 발현이 약 50% 이상 억제됨을 확인할 수 있다. As a result, as shown in FIG. 2, it can be confirmed that the MMP-1 expression level of the amethyst-based fermented product is inhibited by about 50% or more while the MMP-1 expression level is rapidly increased upon UVB irradiation.
[실험예 3] 동물모델에서 콩-보리 발효복합물의 자외선에 의한 피부 주름완화 및 보습개선 효능[Experimental Example 3] Effect of soybean-barley fermentation complex on skin wrinkle and moisturizing effect by ultraviolet rays in animal model
본 발명의 구현예들에 따른 콩-보리 발효복합물의 광노화 동물모델에서 식이에 의한 피부개선 효능평가 비교를 위하여 효능평가를 수행하였다. 동물모델에서의 평가는 UVB를 조사하지 않은 N(Normal)군, UVB를 조사한 C(Control)군, UVB를 조사하고 자수정 찰보리 효모발효물(실시예 1)과 콩 효모발효물(실시예 2)의 혼합물(콩-보리 발효복합물)을 식이섭취한 BS군, 양성대조군(pyconogenol)인 PC군 간의 비교를 통하여 이루어졌다. 이때 상기 BS군은 다시 자수정 찰보리 효모발효물과 콩 효모발효물을 5:5 배합비율로 처리한 군=BS1, 자수정 찰보리 효모발효물과 콩 효모발효물을 8:2 배합비율로 처리한 군=BS2. 자수정 찰보리 효모발효물과 콩 효모발효물을 2:8 배합비율로 처리한 군=BS3로 나누었다.The efficacy of the soybean-barley fermented complex according to embodiments of the present invention was evaluated in order to compare the efficacy of dietary skin for the photoaging animal model. In the animal model, the N (normal) group not irradiated with UVB, the C (control) group irradiated with UVB, the UVB irradiated and the fermented yeast fermented yeast (Example 1) and the yeast fermented yeast (Example 2) (Soybean - barley fermented complex) and PC group (pyconogenol). The BS group was further treated with a 5: 5 blend ratio of ammonium ferricyzoids and soybean fermented yeast fermented product. BS1, fermented ammonium ferricyzate and fermented soybean yeast were mixed at a ratio of 8: 2. BS2. The amethyst fermented yeast fermented yeast and the fermented yeast yeast were divided into 2 groups of: BS3.
자외선이 조사된 세포모델에서의 발효 자수정 Fermentation Amethyst in Ultraviolet-irradiated Cell Model 찰보리와And 콩 혼합물의 보습 효능 검증 Verification of moisturizing effect of soybean mixture
먼저, 인간 피부각질형성세포(Human keratinocyte) 세포주인 HaCaT세포를 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin) 1%, FBS 10%가 함유된 DMEM배지를 이용하여 유지하여 세포주 모델을 준비하였다. 그 다음 상기 HaCaT세포를 40mm 세포배양접시에 40 x 104개의 개수로 분주하고 24시간 후 UVB를 125 mJ/cm2 양으로 조사한 후 자수정 찰보리 효모발효물(실시예 1) 및 콩 효모발효물(실시예2)을 혼합한 콩-보리 발효복합물(실시예 3) 및 피크노제놀(pyconogenol, 양성대조군)을 각각 10, 50, 100 μg/ml과 1, 20, 50 μM의 농도로 처리하였다. 24시간 후 세포독성실험(MTT assay)을 진행하였다. First, HaCaT cells, a human keratinocyte cell line, were maintained in a DMEM medium containing penicillin /
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이 BS2과 BS3 처리군은 UVB 가 조사되지 않은 보통의 상태인 즉 정상 수준의 상태로 세포증식을 회복시켰으나, BS1 처리군은 효능의 변화가 거의 없었으며 PC 처리군은 오히려 농도 의존적으로 세포독성을 나타내었다.As a result, as shown in FIG. 3, the BS2 and BS3 treated groups recovered cell proliferation in a normal state, i.e., a normal state in which no UVB was irradiated. However, BS1 treatment group showed almost no change in efficacy, Was rather cytotoxic in a concentration dependent manner.
동물모델에서 In animal models 광노화Photoaging 유도 및 콩-보리 발효복합물이 첨가된 Induction and soybean-barley fermentation complex added 식이공급에In dietary supply 따른 피부보습 측정 Skin moisturization measurement
먼저, 총 50마리의 6주령 무모생쥐(구입처: ㈜중앙실험동물)에 약 12주간 UV(ultra violet) B를 하기 표 5에 해당하는 양만큼 조사하여 광노화를 유도하였다.Ultraviolet B was irradiated for about 12 weeks in a total of 50 6-week-old hairless mice (purchased from Central Laboratory Co., Ltd.) for the amount corresponding to Table 5 to induce photoaging.
[표 5][Table 5]
그리고, 자수정 찰보리 효모발효물(실시예 1) 및 대두 효모발효물(실시예 2)을 이용한 식이를 제작하였다. 이때 상기 실시예 1 및 2를 혼합한 발효복합물은 식이 총 중량에 대하여 2.5중량%, 양성 대조군은 0.5중량%로 포함되도록 하였다. AIN-93G 조제 사료를 이용하였으며, 그 조성은 아래와 같다. Then, a diet was prepared using fermented yeast fermented yeast (Example 1) and yeast fermented yeast (Example 2). At this time, the fermentation complex mixture of Examples 1 and 2 was included in an amount of 2.5% by weight based on the total weight of the diet and 0.5% by weight in the positive control. AIN-93G was used as feed, and the composition was as follows.
상기 광노화가 유도된 동물모델에 약 4주간 일반식이 후, 주3회씩 8주간 제작된 식이 공급하였다. 사료의 섭취량은 매주 모든 처리군에 200g씩 사료를 공급해 주었으며, 총 3회 식이섭취량을 측정하였다. 그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 정상군 및 광노화 유도군과 비교하여 콩-보리 발효복합물이 첨가된 식이 처리군 및 PC군에서는 모두 별다른 변화를 보이지 않았다. In the photo-induced animal model, the diet prepared for about 4 weeks after the general diet and three times a week for 8 weeks was supplied. Dietary intake was 200g per week for all treatment groups, and total dietary intake was measured three times. As a result, as shown in FIG. 4, no significant change was observed in the dietary treatment group and the PC group to which the soybean-barley fermented complex was added compared with the normal group and the photoaging group.
그 다음, 상기 광노화가 유도된 동물모델에서의 식이 효율 및 체중 증가를 측정하였다. 식이 효율은 광노화 유도 동물모델에서 식이 섭취량을 알아보기 위하여 매주 마다 섭취한 사료의 양을 측정하였고, 체중 증가는 광노화 유도 동물모델에서 식이에 의한 체중 변화를 알아보기 위하여 매 2주 마다 체중을 측정하였다. 광노화가 유도된 무모생쥐를 각 처리군당 무작위로 5마리씩 선택하여 저울을 이용해 무게를 측정하였으며, 12주간 총 3회 실시하고 각 처리군당 측정된 모든 값을 평균 처리하여 그래프로 나타내었다. 그 결과, 도 5에서 알 수 있듯이 각 처리군에서 별다른 변화를 보이지 않았다.Then we measured the dietary efficiency and weight gain in the photoaging induced animal model. Dietary efficiency was determined by measuring the amount of feed consumed every week in order to determine the dietary intake in the model of photoaging induced animal, and weight gain was measured every 2 weeks to determine the dietary weight change in the photoaging induced animal model . Weighed mice were randomly selected and weighed using a scale. Twenty three weeks were performed for all 12 weeks, and all the values measured for each treatment group were averaged and plotted. As a result, as shown in FIG. 5, no significant change was observed in each treatment group.
마지막으로, 피부 수분은 광노화 유도 동물모델에서 발효 자수정 찰보리와 콩 혼합물이 첨가된 식이에 의한 피부 보습양을 측정하였다. 광노화 유도 무모생쥐를 각 처리군 모두 총 12주 동안 매주마다 1회씩 피부의 수분양을 측정하였다. 피부 수분량 측정은 피부측정 센서통합장치(Courage-Khanzaka electronic GMDH, Germany) 프로토콜을 이용하여 수행하였고, 그 측정값은 도 6에 나타내었다. 그 결과, 상기 식이섭취량 및 무게측정 결과와 달리, UVB를 조사한 모든 군은 N군에 비해서 피부의 수분양이 통계적으로 유의한 수준으로 감소하였음을 알 수 있다. 그리고 콩-보리 발효복합물을 식이섭취한 모든 처리군은 UVB만을 처리한 대조군 C군에 비해서 피부의 수분양이 증가하였다. 특히 자외선에 노출됨으로써 피부 수분량이 줄어든 대조군에 비하여 콩-보리 발효복합물 처리군은 초기에 피 부의 수분량을 유지함으로써 보습기능을 가짐을 확인할 수 있었다. Lastly, skin moisture was measured by the photoaging method in the animal model. Photoreceptor - induced hairless mice were treated with skin rinsing once a week for a total of 12 weeks in each treatment group. The skin moisture content was measured using a skin sensor integration device (Courage-Khanzaka electronic GMDH, Germany) protocol and the measured values are shown in FIG. As a result, unlike the above-mentioned dietary intake and weight measurement results, it was found that the number of skin lotions decreased to a statistically significant level in all groups irradiated with UVB as compared with the group N. And all treatments of dietary soybean - barley fermented complexes showed increased water uptake compared to control group C treated with UVB alone. In particular, the soybean - barley fermented complex treated group showed moisturizing function in the early stage by maintaining the moisture content of the skin, compared with the control group in which skin moisture was reduced by exposure to ultraviolet rays.
광노화Photoaging 유도 동물모델의 피부 수분 손실량 관찰 및 분석 Observation and analysis of skin moisture loss in guided animal models
광노화유도 무모생쥐 피부의 수분 손실량(TEWL)을 측정하기 위하여 무모생쥐를 주당 3회(총 12주) UVB를 조사하였으며, 컬러미터(Colormeter; DermaLab Skin Lab combo, Cortex Technology, Denmark) 프로토콜을 이용하여 TEWL을 측정하여 도 7와 같은 결과를 얻었다. To measure the water loss (TEWL) of the skin of the photoinduced guinea-pig mouse, the mice were irradiated with UVB three times a week (total 12 weeks) and analyzed using a colormeter (DermaLab Skin Lab combo, Cortex Technology, Denmark) protocol TEWL was measured to obtain the results shown in FIG.
그 결과 N군과 C군간의 통계적 유의성이 있었고, 발효 자수정 찰보리와 콩 혼합물을 첨가한 식이를 섭취 한 처리군들 중 BS2군과 PC군이 통계적으로 유의한 수준으로 UVB 처리에 따른 피부의 수분손실량을 효과적으로 방어하는 효과를 나타냄을 알 수 있었다. As a result, there was a statistical significance between N and C groups. Among the treatments group in which the fermented amber tea and soybean mixture were added, BS2 and PC groups showed statistically significant levels of water loss In the case of the present invention.
광노화Photoaging 유도 동물모델에서의 주름개선 효능평가 Evaluation of wrinkle-reducing efficacy in guided animal models
본 발명의 일 구현예에 따른 상기 콩-보리 발효복합물의 피부 주름개선 효능이 우수한지 확인하기 위하여 주름 관련 인자인 프로콜라겐 타입-1(procollagen type-1, PIP-1)과 MMP-1(Matrix metalloproteinase-1)의 발현 및 활성을 웨스턴 블랏을 통해 단백질 수준에서 그 효능을 확인하고, 메이슨스 트리크롬(masson's trichrome) 염색법을 이용하여 콜라겐의 합성정도를 알아보았다. 그리고 피부조직의 주름을 측정하였다.In order to confirm whether the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention has an excellent skin wrinkle reducing effect, procollagen type-1 (PIP-1) and MMP-1 metalloproteinase-1 ) and its activity were confirmed by Western blotting at the protein level and the degree of synthesis of collagen was examined by masson's trichrome staining method. And wrinkles of skin tissue were measured.
그 결과, 도 8 및 도 9과 같이 혼합물은 콜라겐 합성을 원활하게 해주고, PIP-1의 발현을 증가시키고 MMP-1의 발현을 저해하여 결과적으로 주름의 생성을 억제시키는 효능을 나타냄을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in FIGS. 8 and 9, it was confirmed that the mixture smoothes collagen synthesis, increases the expression of PIP-1, inhibits the expression of MMP-1, and consequently inhibits the generation of wrinkles .
광노화Photoaging 유도 동물모델에서의 In an induced animal model 피부보습Skin moisturizing 효능평가 Efficacy evaluation
본 발명의 일 구현예에 따른 상기 콩-보리 발효복합물의 피부 보습 효능이 우수한지 확인하기 위하여 피부조직에서의 pH, 보습량과 수분손실량을 측정하고, H&E염색법을 이용하여 피부두께를 측정하였다. 보습 관련 인자인 필라그린의 발현 및 활성을 웨스턴 블랏을 통해 단백질 수준에서 그 효능을 확인하고, 유리아미노산과 글리세롤의 생성정도를 측정하였다.In order to confirm whether the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention is excellent in skin moisturizing effect, the pH, moisturizing amount and water loss amount in the skin tissue were measured and skin thickness was measured using H & E staining method. Expression and activity of paprika green, a moisturizing factor, were confirmed by Western blotting at the protein level and the degree of free amino acid and glycerol production was measured.
그 결과, 도 10내지 도 13에 나타난 바와 같이, 콩-보리 발효복합물은 UVB에 의하여 낮아진 pH(도 10), 두꺼워진 표피(도 11), 유리아미노산의 생성량(도 12), 억제된 filaggrin의 발현(도 12), 늘어난 수분 손실량(도 13), 줄어든 글리세롤(도 13)에 영향을 주어 표피 두께를 정상수준으로 회복시키고 pH를 높였으며, 수분손실량을 줄이고, 글리세롤과 유리아미노산의 생성량을 늘렸으며, 필라그린의 발현을 N군 수준으로 복구 시킴으로써 피부 보습의 효능이 있는 것으로 나타났다.As a result, as shown in Figs. 10 to 13, the soybean-fermented fermented composite showed a pH lowered by UVB (Fig. 10), a thickened skin (Fig. 11), an amount of free amino acid (Fig. 12) (Fig. 12), increased water loss (Fig. 13), and reduced glycerol (Fig. 13), restoring the epidermal thickness to the normal level and increasing the pH, reducing water loss and increasing the production of glycerol and free amino acid And restoring the expression of pillar green to the N-group level showed the effect of skin moisturizing.
광노화Photoaging 유도 동물모델에서의 주름 및 보습 관련 기전연구 평가 Evaluation of wrinkle and moisturizing mechanism in induction animal model
본 발명의 일 구현예에 따른 상기 콩-보리 발효복합물의 피부 주름 및 보습에 관여하는 기전에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위하여, MAPK 경로(mitogen-activated protein kinase pathway)에서의 단백질 발현 정도를 웨스턴 블랏을 이용하여 평가를 실시하였다.In order to investigate the effect of the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention on the mechanism of skin wrinkling and moisturization, the degree of protein expression in the mitogen-activated protein kinase pathway was measured by Western blotting Were used for evaluation.
그 결과, 도 14 및 도 15에 나타난 바와 같이, 본 발명의 일 구현예에 따른 상기 콩-보리 발효복합물은 UVB에 의하여 인산화된 p38과 ERK1/2를 억제시키는 결과를 나타냄을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in FIG. 14 and FIG. 15, it was confirmed that the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention inhibits p38 phosphorylated by UVB and ERK1 / 2.
광노화Photoaging 유도 동물모델에서의 항산화 효능평가 Evaluation of Antioxidant Efficacy in Induced Animal Model
본 발명의 일 구현예에 따른 상기 콩-보리 발효복합물의 항산화 효능을 평가하기 위하여 항산화 관련 인자와 효소의 발현 및 유도 정도를 ELISA와 웨스턴 블랏을 이용하여 측정하였다.In order to evaluate the antioxidant activity of the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention, the expression and induction of antioxidant-related factors and enzymes were measured by ELISA and Western blotting.
그 결과, 도 16에 나타난 바와 같이, 본 발명의 일 구현예에 따른 상기 콩-보리 발효복합물은 UVB에 의하여 낮아진 SOD(superoxide dismutase)의 활성과 Nrf-2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2)의 발현을 높여 항산화 효능이 있는 것으로 나타났다. As a result, as shown in FIG. 16, the soybean-barley fermentation complex according to an embodiment of the present invention has an activity of superoxide dismutase (SOD) lowered by UVB and nuclear factor-erythroid 2-related factor 2 ), And showed antioxidant effect.
[실험예 4] 보리 품종 별 발효에 따른 품질 지표 분석[Experimental Example 4] Analysis of quality index according to fermentation by barley variety
먼저, 보리를 스팀 살균 한 후 냉각수로 냉각하고 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P)와 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) 균주를 YM Broth(전 배양 배지; 기본 배지조성 - 1.71 % 글루코오스, 0.15 % 질산암모늄, 0.1 % K2H2PO4, 0.1 % NaCl, 0.02 % MgSO4) 배양액에 5 %가 되도록 접종하였다. First, the barley is sterilized by steam, cooled with cooling water , Jockey dini (Pichia jadinii, KFCC 11487P) and Aureobasidium Pullulan (Aureobasidium pullulans , KCCM 12017) was inoculated to a culture medium of YM Broth (basic culture medium: 1.71% glucose, 0.15% ammonium nitrate, 0.1% K2H2PO4, 0.1% NaCl, 0.02% MgSO4) at a concentration of 5%.
그 다음, 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P)와 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017)를 각각 100 mL YM broth에서 130 rpm, 30℃에서 24시간 전보온(pre incubation)한 후 3 L 발효 조에 각각 또는 동시에 5 %가 되도록 접종하여 30℃, 24시간 배양하였다. 칭량된 코니칼 튜브(conical tube)에 배양액을 30 mL 회수하여 10 분간 3000 rpm으로 원심분리 후 균체를 증류수로 3회 세척하고, 상등 액을 제거한 후 남은 균체를 105℃에서 등량이 될 때까지 건조하였다. 건조 후 튜브의 무게에서 코니칼 튜브 무게를 뺀 값을 측정하여 건조 균체량(고형분 함량, DCW)을 측정하였다. Then , Jockey dini (Pichia jadinii , KFCC 11487P) and Aureobasidium Flags ruran (Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) for each 100 mL YM broth 130 rpm in, was inoculated so that at 30
그리고 상기 배양액을 적당한 농도로 희석한 후 DNS 발색시약을 사용해 580 nm에서 흡광도를 측정하여 잔류 환원당(Residual reducing sugar)의 농도를 측정하였다.Then, the culture was diluted to an appropriate concentration, and the absorbance at 580 nm was measured using a DNS coloring reagent to determine the concentration of the residual reducing sugar.
마지막으로, 건강기능식품 공전의 Ⅲ.3.4.3 β-glucan 시험법을 이용하여, 배양액의 베타-글루칸을 글루코오스형태로 분해하고 발색시켜 470 nm에서 흡광도를 측정하여 베타-글루칸의 함량을 정량하였다. 글루코오스를 표준물질로 사용하여 최대 흡수 파장인 470 nm에서 정량하였다. 글루타치온(Glutatitione)은 알록산 시약법(Alloxan reagent method)을 이용하여 글루타치온을 발색 법으로 정량하였다.Finally, β-glucan of the culture broth was decomposed into glucose form by using Ⅲ.3.4.3 β-glucan test method of Health Functional Food Cycle, and the content of β-glucan was quantified by measuring the absorbance at 470 nm . Glucose was quantitated at 470 nm, which is the maximum absorption wavelength, as a reference material. Glutathione was quantified by the color development method using glutathione using the Alloxan reagent method.
[표 6] [Table 6]
4 종류의 보리에 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P)와 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) 효모를 동시 배양한 결과, 발효물의 베타-글루칸 함량이 원료에 비해 자수정보리 중 알파화한 것이 가장 함량이 뛰어났다. 글루타치온 함량은 156.6(mg/L)으로 쌀보리나 발아보리와 평균값에 대한 유의적 차이가 크게 없었으나 베타-글루칸 함량은 105.3(mg/g)으로 가장 높은 수치를 나타내었다. Four kinds of barley Pichia Jockey dini (Pichia jadinii, KFCC 11487P) and Stadium Aureobasidium pullulan (Aureobasidium pullulans , KCCM 12017) yeast, the content of beta - glucan in the fermented product was the highest in the amylose barley as compared with the raw material. The content of glutathione was 156.6 (mg / L), but the content of beta - glucan was the highest at 105.3 (mg / g).
[실험예 5] 효모 단일/복합 발효에 따른 품질 지표 분석[Experimental Example 5] Analysis of quality index according to yeast single / multiple fermentation
먼저, 각 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P) 및 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) 단일 균주 및 상기 두 균주를 1:1의 균수 비율로 혼합한 복합균주를 YM Broth(전 배양 배지; 기본 배지조성 - 1.71 % 글루코오스, 0.15 % 질산암모늄, 0.1 % K2H2PO4, 0.1 % NaCl, 0.02 % MgSO4) 배양액에 5 %가 되도록 접종하였다. First, each Pichia Jockey dini (Pichia jadinii, KFCC 11487P) and Aureobasidium Stadium A combination of a single strain of Aureobasidium pullulans (KCCM 12017) and the two strains in a 1: 1 bacteriostatic ratio was mixed with YM broth (pre-culture medium: basic medium composition - 1.71% glucose, 0.15% ammonium nitrate, 0.1% K2H2PO4, 0.1% NaCl, 0.02% MgSO4).
그 다음, 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P)와 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017)를 각각 100 mL YM broth에서 130 rpm, 30℃에서 24시간 전보온(pre incubation)한 후 3 L 발효 조에 각각 또는 동시에 5 %가 되도록 접종하여 30℃, 24시간 배양하였다. 칭량된 코니칼 튜브(conical tube)에 배양액을 30 mL 회수하여 10 분간 3000 rpm으로 원심분리 후 균체를 증류수로 3회 세척하고, 상등 액을 제거한 후 남은 균체를 105℃에서 등량이 될 때까지 건조하였다. 건조 후 튜브의 무게에서 코니칼 튜브 무게를 뺀 값을 측정하여 건조 균체량(고형분 함량, DCW)을 측정하였다. Then , Jockey dini (Pichia jadinii , KFCC 11487P) and Aureobasidium Flags ruran (Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) for each 100 mL YM broth 130 rpm in, was inoculated so that at 30
그리고 상기 배양액을 적당한 농도로 희석한 후 DNS 발색시약을 사용해 580 nm에서 흡광도를 측정하여 잔류 환원당(Residual reducing sugar)의 농도를 측정하였다.Then, the culture was diluted to an appropriate concentration, and the absorbance at 580 nm was measured using a DNS coloring reagent to determine the concentration of the residual reducing sugar.
마지막으로, 건강기능식품 공전의 Ⅲ.3.4.3 β-glucan 시험법을 이용하여, 배양액의 베타-글루칸을 글루코오스 형태로 분해하고 발색시켜 470 nm에서 흡광도를 측정하여 베타-글루칸의 함량을 정량하였다. 글루코오스를 표준물질로 사용하여 최대 흡수 파장인 470 nm에서 정량하였다. 글루타치온(Glutatitione)은 알록산 시약법(Alloxan reagent method)을 이용하여 글루타치온을 발색 법으로 정량하였다.Finally, β-glucan of the culture broth was decomposed into glucose form by using Ⅲ.3.4.3 β-glucan test method of Health Functional Food Cycle, and the content of β-glucan was quantified by measuring the absorbance at 470 nm . Glucose was quantitated at 470 nm, which is the maximum absorption wavelength, as a reference material. Glutathione was quantified by the color development method using glutathione using the Alloxan reagent method.
동일한 배양시간, 배양조건에서 균체량, β-glucan 함량 등을 비교한 결과를 도 17 내지 도 23에 나타내었다. 분석 결과, 최대 비 증식속도인 0.887 h- 1를 나타내고, 균체 증식 수율의 평균값은 0.388 g-DCW/g-sugar, β-glucan 증식 수율의 평균값은 0.331 g-β-glucan/g-sugar로 효모를 단독 배양하는 것 보다 복합균주로서 동시 배양하는 것이 β-glucan 생산 수율을 높이는데 효과적임을 알 수 있었다.The results obtained by comparing the cell culture amount, the amount of β-glucan, and the like at the same incubation time, culture conditions, and the like are shown in FIG. 17 to FIG. As a result of the analysis, the maximum non-proliferation rate was 0.887 h - 1 . The mean cell growth yield was 0.388 g-DCW / g-sugar and the average value of β-glucan proliferation was 0.331 g-β-glucan / Was found to be effective in increasing the yield of β-glucan production.
[실험예 6] 실험계획법(DOE)을 적용한 발효 공정 최적화 수립[Experimental Example 6] Optimization of fermentation process using experimental design method (DOE)
RSM (Response Surface Design)을 이용하여 보리, 콩 발효의 최적조건검색: 중심합성계획법에 의한 실험 설계 Search for optimum condition of barley and soybean fermentation using RSM (Response Surface Design): Experimental design by central synthesis planning method
-2요인 설계, 입방체 점, 중심점으로 구성하여 설계-2 Design by factor design, cube point, and center point
-보리 당화물: low- 10, high- 30- Barley cargo: low- 10, high- 30
-효모 추출물: low- 5, high- 10- yeast extract: low- 5, high- 10
-반복 수: 2- Number of iterations: 2
실험 방법 및 결과Experimental methods and results
보리 용액은 아밀라제, 글루코시다제 등의 효소를 0.5 %씩 첨가하여 20시간 동안 60℃에서 당화하여 준비하였다. 보리 당화물과 효모 추출물를 하기 표 7에 표시된 만큼씩 섞어 50 mL 배양액 기준으로 혼합하고, 121℃에서 15분간 멸균하였다. 피키아 쟈디니(Pichia jadinii, KFCC 11487P) 및 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) 효모를 각각 5%씩 접종하고 24시간 배양하였다.The barley solution was prepared by adding 0.5% of enzymes such as amylase and glucosidase and saccharifying at 60 ° C for 20 hours. The barley carbohydrate and yeast extract were mixed as indicated in Table 7 below, mixed according to the culture volume of 50 mL, and sterilized at 121 占 폚 for 15 minutes. Pichia Jockey dini (Pichia jadinii, KFCC 11487P) and Aureobasidium Stadium Pullulan (Aureobasidium pullulans, KCCM 12017) respectively by 5% of the yeast inoculated and incubated for 24 hours.
[표 7][Table 7]
요인분석적 설계(Factorial design)에 따른 설계 결과 및 베타-글루칸의 농도를 하기 표 8에 나타내었다.The design results according to factorial design (Factorial design) and the concentration of beta-glucan are shown in Table 8 below.
[표 8][Table 8]
부분요인적합(Factorial fit): 베타-글루칸 대 보리 당화물, 효모 추출물의 계수 값을 하기 표 9에 나타내었다.Factorial fit: The coefficient values of beta-glucan versus barley saccharide and yeast extract are shown in Table 9 below.
[표 9][Table 9]
소결Sintering
1차 RSM, 2차 2수준 요인분석적 설계를 통하여 최적 보리 당화물, 효모추출물. 첨가량 결정 실험을 실시한 결과, 보리 당화물 40g/L, 효모추출물 10g/L 이상의 모든 첨가 구에서 최소 8.231 g/L에서 최대 14.491 g/L의 베타-글루칸 생산량을 보였다. 보리 당화물 40-50g/L 첨가 구에서 가장 높은 베타-글루칸 증가량을 보였으며, 50-60g/L 첨가구간에서는 증가율이 감소하는 경향을 나타났다. 또한 보리 당화물 50g/L 이상 실험구에서 점성이 매우 증가하여 발효조에서의 배양 시 용존 산소(DO)조절이 매우 힘들 것으로 예상되었다. 보리 당화물 첨가량 50-60g/L, 효모추출물 첨가량이 15-20g/L인 실험 구에서 배지에 의한 베타-글루칸 생산량과 미생물에 의한 베타-글루칸 생산량의 비가 6:4 정도로 파악되었으며, 미생물에 의한 베타-글루칸 생산능이 가장 우수하였다.Optimal barley sugar content, yeast extracts through analytical design of primary RSM, secondary 2 level factor. The amount of beta - glucan was found to be at least 8.331 g / L and 14.491 g / L in all the additions of 40 g / L of barley carbohydrate and 10 g / L of yeast extract. The highest increase of beta-glucan was observed in 40-50 g / L of barley carcass, while the increase rate of 50-60 g / L of addition was observed. In addition, the viscosity of barley saccharide was higher than 50g / L, and it was expected that DO (DO) could be very difficult to control during fermentation. The ratio of beta - glucan production by microorganism and beta - glucan production by microorganism was found to be about 6: 4 in the experimental group with addition of 50 - 60 g / L of barley sugar and 15-20 g / L of yeast extract. Beta-glucan production was the most excellent.
[실험예 7] 콩-보리 발효복합물의 피부 보습 및 피부 주름개선 효능 임상평가[Experimental Example 7] Clinical evaluation of skin moisturizing effect and skin wrinkle improving effect of soybean-barley fermented complex
본 발명의 구현예들에 따른 콩-보리 발효복합물의 피부 보습 및 피부 주름개선 효능을 평가하기 위하여, 임상평가를 실시하였다.Clinical evaluations were conducted to assess the skin moisturizing and skin wrinkle reducing effects of the soybean-barley fermentation complex according to embodiments of the present invention.
시험제품 및 대조제품의 제조Manufacture of Test and Control Products
먼저, 대조제품으로서 상기의 콩보리 발효복합물을 포함하지 않는 음료를 제조하였다(이하, A제품). 본 발명의 일 구현예인 시험제품으로는 상기 실시예 1의 보리 효모발효물 및 실시예 2의 콩 효모발효물을 1:1의 중량비로 혼합한 콩보리 발효복합물을 포함하여 베타글루칸을 300mg 이상, 제니스테인 및 다이드제인을 총 200μg 이상 포함하는 100ml의 음료(이하, B제품)를 제조하였다. A 제품과 B제품의 구체적인 성분은 하기 표와 같다. 상기 음료는 레트로트 멸균 파우치 형태로 포장되며, 1일 1회 1포 음용하기 위한 것이며, 12주의 복용 기간을 권장하고 있다. First, a beverage containing no fermented soybean barley complex was prepared as a control product (hereinafter, product A). Examples of the test product as an embodiment of the present invention include a fermented soybean barley complex obtained by mixing the fermented barley yeast of Example 1 and the fermented soybean yeast of Example 2 at a weight ratio of 1: 100 ml of a drink (hereinafter, referred to as product B) containing 200 μg or more total of genistein and daidzein was prepared. Specific components of the products A and B are shown in the following table. The beverage is packaged in the form of a retort sterilized pouch and is intended to be drunk one time a day, recommending a 12 week dosing period.
A 제품 (대조제품)A product (control product)
B 제품 (시험제품)B products (test products)
피험자 선정 및 공통된 실험방법Selection of subjects and common experimental methods
피험자로 건성피부(수분량 지수 49이하-Corneometer ® CM825 측정 시, C+K, Germany의 reference 반영)이면서 눈가주름(육안평가 grade 3이상-ref. 경희대피부생명공학센터 SOP) 이 생성되기 시작하거나 이미 생성된 25~60세의 한국 성인여성 65명을 대상으로 선정하였다. 선정된 피험자들에게 상기 제조한 시험제품(B) 또는 대조제품(A)을 이중맹검 무작위로 할당하여 12주간 복용하도록 한 다음, 복용 전(0주), 복용 4주 후, 복용 8주 후, 복용 12주 후 각 시점에 육안평가, 피부수분량, 각질량, 경피수분손실량 (TEWL), 눈가주름 개선 정도, 식이조사 및 체중조사, 혈액분석(외부업체 위탁- 더웰의원 건강검진 센터), 설문 평가 및 안전성 평가를 실시하여 시험제품에 대한 인체 피부 보습 및 주름 개선에 대한 유효성을 평가하였다. As a subject, dry skin (moisture index of 49 or less - Corneometer ® CM825 when measuring, reference to C + K, Germany) and eye wrinkles (
구체적으로, 피험자들을 시험제품 복용 전, 복용 4주 후, 8주 후, 12주 후 시점에 센터를 방문하도록 하였다. 센터 방문 직후 피험자들을 무작위로 할당하여 A제품 (대조제품)과 B제품(시험군)으로 나누고, 각 그룹 안에서 다시 A그룹과 B그룹으로 나누어 피험자의 얼굴, 전박의 좌 또는 우측을 측정부위로 정하였다. 피험자들은 세안을 한 다음 공기의 이동과 직사 광선이 없으며 항온항습조건 (22±2℃, 50±5%)이 유지되는 공간에서 30분간 피부 안정을 취한 후 육안평가, 기기측정(피부 수분량, 각질량, 경피 수분손실량, 눈가주름-레플리카), 설문 평가, 체중(BMI)측정, 식이조사 및 안전성 평가에 참여하도록 하였다(표 10 참조). 이때 피험자들은 기능성을 표시하는 화장품 사용을 중단하도록 하고, 복용하고 있던 건강보조제품 등의 섭취도 중단하도록 하여 시험제품을 사용에 영향을 줄 수 있는 요인 등을 소거 하였다Specifically, subjects were allowed to visit the center before taking the test product, 4 weeks, 8 weeks, and 12 weeks after taking the test product. Immediately after the center visit, the subjects were randomly assigned and divided into A products (control product) and B products (test group), divided into A group and B group in each group, and the left or right side of the subject's face, Respectively. After skin cleansing, the subjects were allowed to sit for 30 minutes in a room without air movement and direct sunlight and under constant temperature and humidity conditions (22 ± 2 ℃, 50 ± 5%). Mass, transdermal water loss, eye wrinkle-replica), questionnaire evaluation, body weight (BMI) measurement, dietary investigation and safety evaluation (see Table 10). At this time, subjects were asked to stop using cosmetics to display their functionalities and to stop taking the health-supplement products they were taking, which eliminated factors that might affect the use of the test product
[표 10][Table 10]
측정부위는 열굴 및 전박내측으로, 얼굴은 피험자 얼굴의 눈꼬리와 코끝이 만나는 뺨 부위(수분량, 각질, TEWL 측정), 눈가 Crow's feet 부위(주름 측정)를 측정하였으며, 전박내측은 전박 내측의 굴측 부위에서 5cm 떨어진 부위(수분량, 각질, TEWL 측정) 하였다. The cheek area (water content, keratin, TEWL measurement) and the crow's feet area (wrinkle measurement) were measured. The inner part of the anterior part of the anterior part of the anterior part of the dorsal surface (Water content, keratin, TEWL measurement).
데이터 분석은 시험제품 복용 전, 복용 4주 후, 복용 8주 후, 12주 후 시점에 기기 측정값의 평균 및 표준편차 값(S.D)을 각각 구하고, 측정값의 시점별, 군간별 차이유무를 통계분석 하였다. Data analysis was performed by taking the mean and standard deviation (SD) of the measured values of the instrument before, after 4 weeks, 8 and 12 weeks, respectively, Statistical analysis was performed.
-제품복용 시점별 비교: Paired t-test (p<0.05) - Comparisons by time of product use: Paired t-test ( p <0.05 )
-제품의 군간 비교: Independent t-test (p<0.05) - Product-to-product comparison: Independent t-test ( p <0.05 )
-순응도: Chi-square test (p<0.05)- Compliance: Chi-square test ( p <0.05 )
통계 분석 프로그램은 SPSS® 20.0을 사용했으며, 설문조사 결과는 빈도분석 하였다.The statistical analysis program used SPSS ® 20.0, and the frequency of the survey was analyzed.
육안평가Visual evaluation
육안평가는 피험자의 눈가주름 정도를 2명의 시험자가 육안 평가기준(표 11)에 의거하여 0~9 단계로 평가하였다. 시점별 눈꼬리 부위의 주름 상태는 안면 촬영장치 ( VISIA , Canfield Sientific , Inc. USA)를 이용하여 촬영하였다.In the visual evaluation, the degree of wrinkling of the subject's eyes was evaluated by two testers in the range of 0 to 9 according to the visual evaluation criteria (Table 11). The wrinkles at the time of eye contact were measured with a facial photographing device ( VISIA, Canfield Sientific , Inc. USA) .
[표 11][Table 11]
그리고 평가 결과는 하기 표 12 및 13, 도 24 및25에 나타내었다.The evaluation results are shown in Tables 12 and 13 and 24 and 25 below.
[표 12][Table 12]
[표 13][Table 13]
표 12, 도 24 및 25에서 확인할 수 있는 바와 같이, 제품 복용 전과 비교시 제품복용 12주 시점의 시험제품인 B제품을 섭취한 시험군에서 통계적으로 유의하게 눈가주름 육안평가 점수가 감소, 즉 개선되었다(p<0.05). 표 13 및 도 24 및 25에 나타난 바와 같이 시험제품을 섭취한 시험군간의 제품복용 4, 8, 12주 후 시점에서의 그룹간 눈가주름 육안평가 점수는 통계적 유의차가 없었다(p<0.05).As can be seen in Table 12, Figs. 24 and 25, the test group in which the product B, which is the test product at the 12-week time point of the product intake, had a statistically significant decrease in the eye wrinkle visual evaluation score ( p < 0.05 ). As shown in Table 13 and Figures 24 and 25, there was no statistically significant difference ( p < 0.05 ) between the groups in which the test product was consumed at 4, 8, and 12 weeks after the product administration.
CorneometerCorneometer ®® CM825 CM825 를 이용한 피부 수분량 측정Measurement of skin moisture using
Corneometer ® CM825(Courage+ Khazaka GmbH , Germany)는 전기용량(capacitance)을 측정하는 원리로 피부 각질층 아래 30~40㎛의 수분량을 측정하는 기기이다. Probe에서 전류를 보내면 피부의 수분 함유량에 따른 피부의 전기 전도도에 따라 probe head에 남아 있는 절연이온 값이 수치화(AU: arbitrary unit)되어 나타난다. 따라서 피부에 수분함량이 많을수록 측정값은 높아진다. 본 시험에서는 정확한 측정치를 얻기 위해 제품복용 전, 복용 4주 후, 8주 후, 12주 시점에서 시험부위(뺨, 전박내측)를 각각 3회 반복 측정 하여 그 평균값을 분석하였다. 그리고 그 분석결과를 표 14 및 15, 도 26에 나타내었다. Corneometer ® CM825 (Courage + Khazaka GmbH , Germany) is a device for measuring the water content of 30 ~ 40 ㎛ under the stratum corneum. When an electric current is sent from the probe, the insulation ion value remaining in the probe head is expressed as an arbitrary unit according to the skin's electric conductivity according to the moisture content of the skin. Therefore, the higher the moisture content of the skin, the higher the measured value. In this study, we measured the mean value of the test site (cheeks, inner part of the ankle) three times, before and after 4 weeks, 8 weeks, and 12 weeks, respectively. The analysis results are shown in Tables 14 and 15 and FIG.
[표 14][Table 14]
[표 15][Table 15]
분석결과, 표 14 및 도 26에 나타난 바와 같이 제품 복용전과 비교시 제품복용 4주 후, 8주 후, 12주 후 시점에서 얼굴, 전박부위의 A제품(대조군)과 B제품(시험군) 모두 통계적으로 유의하게 피부 수분량이 증가하였다(p<0.05). 피부 수분 최대 증가율은 얼굴부위에서 A제품이 24.02%, B제품이 42.07%로 나타났으며, 전박부위에서는 A제품이 18.07%, B제품이 27.81%로 나타났다. 또한, 표 15 및 도 26에 나타난 바와 같이 제품 복용전과 비교시 제품복용 4주 후, 8주 후, 12주 후 시점에서 모두 A제품(대조군)에 비해 B제품(시험군)에서 통계적으로 유의하게 피부 수분량이 증가하였다(p<0.05).As a result of the analysis, as shown in Table 14 and FIG. 26, in comparison with before the product administration, the product A (control group) and the product B (test group) on the face and forehead region at 4 weeks, 8 weeks, There was statistically significant increase in skin moisture ( p <0.05 ). The maximum rate of increase in skin moisture was 24.02% for the A product and 42.07% for the B product in the face region, and the A product and the B product were 18.07% and 27.81%, respectively. In addition, as shown in Table 15 and Fig. 26, the B-product (test group) showed statistically significant difference from the A-product (control group) at 4 weeks, 8-week, Skin moisture increased ( p <0.05 ).
VapometerVapometer ®® 를 이용한 Using 경피수분손실량Percutaneous water loss (( TEWLTEWL ) 측정) Measure
경피수분손실은 피부로부터 발산되는 수분을 말하며 보습기능과 밀접한 관계를 가지고 있다. 건조함이 악화될 경우 TEWL값이 증가하기 때문에 보습력의 유무는 TEWL측정 정도로 판단할 수 있다. 측정기기인 Vapometer ® ( Delfin , Finland)는 온도와 습도 센서가 측정 부위의 단위 면적 당 시간 경과에 따른 수분 증발량(g/m2h)을 측정한다. 본 시험에서는 각 평가시점 마다 시험부위(뺨, 전박내측)를 측정하여 수분 증발량을 분석하였다. 분석결과는 표 16 및 17, 도 27에 나타내었다.Transdermal water loss refers to the water released from the skin and has a close relationship with the moisturizing function. Since the TEWL value increases when the dryness deteriorates, the presence or absence of moisture can be judged by the degree of TEWL measurement. The measuring instrument Vapometer ® ( Delfin , Finland) measures the moisture evaporation (g / m 2 h) over time per unit area of the measurement site of the temperature and humidity sensor. In this test, the amount of water evaporation was analyzed by measuring the test site (cheek, inside of the anterior chamber) at each evaluation time point. The analysis results are shown in Tables 16 and 17 and FIG.
[표 16][Table 16]
[표 17][Table 17]
분석결과, 표 16 및 도 27에 나타난 바와 같이 제품 복용전과 비교시 제품복용 8주 후 시점에서는 얼굴 부위에서, 제품복용 12주 후 시점에서는 얼굴, 전박부위 모두에서 B제품(시험군)에서 통계적으로 유의하게 경피수분손실량(TEWL)이 감소하였다(p<0.05). 경피수분손실량 최대 감소율은 얼굴부위에서 A제품이 4.40%, B제품이 6.52%로 나타났으며, 전박부위에서는 B제품이 7.37%로 나타났다. 또한, 표 17 및 도 27에 나타난 바와 같이 제품복용 12주 후 시점에서 전박부위에서 A제품(대조군)에 비해 B제품(시험군)에서 통계적으로 유의하게 경피수분손실량이 감소하였다(p<0.05).As a result of the analysis, as shown in Table 16 and FIG. 27, in the case of the product (test group) in the facial region and the face and the full-bodied region at 12 weeks after the product taking, Significant decrease in transdermal water loss (TEWL) ( p <0.05 ). The maximum rate of decrease in transdermal water loss was 4.40% for A and 6.52% for B and 7.37% for B, respectively. In addition, as shown in Table 17 and FIG. 27, the transdermal water loss was statistically significantly decreased in the B-product (test group) compared to the A-product (control group) at 12 weeks after the product administration ( p <0.05 ) .
D-D- squamesquame ®® 을 이용한 피부 각질량 측정Measurement of skin angle mass using
피부수분 정도를 평가하는 또 다른 지표인 각질량 측정은 D- squame ® Black Tape을 이용하여 시험부위(뺨, 전박내측)의 각질을 채취한다. 본 시험에서는 D500 D-squame ® Disc Applicator로 약 5초간 225g/cm2 의 압력으로 피부에 부착한 후 떼어냈다. 채취한 각질표본은 Charm view( Moritex , Japan)로 700배 확대하여 촬영한 후 이미지 프로그램(Image-Pro ® plus)을 이용하여 각질의 면적을 분석하였다. 분석결과는 표 18 및 19, 도 28 및 29에 나타내었다.Another indicator of each mass measured to evaluate the degree of skin moisture are to be taken to keratin of the test sites (cheek, an inner forearm) using a D- squame ® Black Tape. The test pulled off the D500 D-squame Disc ® for 5 seconds to Applicator with a pressure of 225g / cm 2 was attached to the skin. The horny specimens were taken at 700x magnification with a Charm view ( Moritex , Japan) and analyzed using an image program ( Image-Pro ® plus ). The analysis results are shown in Tables 18 and 19, and Figs. 28 and 29.
[표 18][Table 18]
[표 19][Table 19]
분석결과, 표 18 및 도 28, 29에 나타난 바와 같이 제품 복용전과 비교시 제품복용 4주 후 시점에서는 얼굴 부위에서, 제품복용 8주 후, 12주 후 시점에서는 얼굴, 전박부위 모두에서 B제품(시험군)에서 통계적으로 유의하게 피부 각질량이 감소하였다(p<0.05). 각질 최대 감소율은 제품복용 12주 후 시점에서 얼굴부위에서는 A제품이 3.09%, B제품이 13.15%로 나타났으며, 전박부위에서는 A제품이 1.97%, B제품이 9.64%로 나타났다. 또한, 표 19 및 도 28, 29에 나타난 바와 같이 제품복용 4, 8, 12주 후 시점에서 얼굴, 전박 부위 모두에서 A제품(대조군)에 비해 B제품(시험군)에서 통계적으로 유의하게 피부 각질량이 감소하였다(p<0.05).As a result of the analysis, as shown in Table 18 and FIGS. 28 and 29, compared to before the product was taken, in the face area after 4 weeks of product taking, 8 weeks after the product taking and 12 weeks after taking the product, Test group) ( p <0.05 ). The maximum reduction rate of keratin was 3.09% for the A and 13.15% for the face at 12 weeks after taking the product, and the A and B products were 1.97% and 9.64%, respectively. In addition, as shown in Table 19 and Figures 28 and 29, at the 4th, 8th, and 12th weeks after the product administration, all of the facial and dermal areas were statistically significantly higher in the B product (test group) than the A product ( P < 0.05 ).
VisiolineVisioline ®® VLVL -650을-650 이용한 눈가주름(Replica) 측정 Use of the eyelid wrinkle (Replica)
Visioline ® , VL650 (Courage+ KhazakaGmbH , Germany)은 제작된 Replica의 주름의 깊이, 길이 등을 측정하는 장비이다. 특별한 광원이 통과되도록 제작된 표준 카트리지에 Replica를 끼우고 광원을 통과시켜 그림자 명암 영상을 CCD Camera를 이용하여 파일화 한 후 각 파라미터들(Total wrinkle area; 총 주름면적, No. of wrinkles; 주름의 수, Total length; 총 주름의 길이, Mean length; 평균 주름의 길이, Wrinkle depth; 총 주름의 깊이, Mean depth; 평균 주름의 깊이, Max wrinkle depth; 가장 굵은 주름의 깊이)을 분석한다. 그리고 분석결과를 표 20 내지 24, 도 30 내지 32에 나타내었다. Visioline ® , VL650 (Courage + Khazaka GmbH , Germany ) is a device for measuring the depth and length of wrinkles in replica fabrics . Replica is inserted into standard cartridge made to pass special light source, light source is passed through, and shaded and contrasted images are filed using CCD camera, and then total parameters (total wrinkle area, number of wrinkles Analyze the total wrinkle length, mean length, average wrinkle length, wrinkle depth, mean depth, average wrinkle depth, and maximum wrinkle depth. The analysis results are shown in Tables 20 to 24 and FIGS. 30 to 32.
[표 21][Table 21]
[표 22][Table 22]
[표 23][Table 23]
[표 24][Table 24]
분석결과, 표 21, 22 및 도 30, 31에 나타난 바와 같이 제품 복용전과 비교시 제품복용 12주 후 시점에 A제품(대조군)에서 파라미터들 중 주름깊이(Wrinkle Depth)가 유의하게 감소하였다(p<0.05). 나머지 파라미터들에서는 A제품(대조군), B제품(시험군) 모두 감소하는 경향은 다소 보이나 통계적으로 유의한 차이는 보이지 않았다. 또한, 표 23, 24 및 도 30, 31에 나타난 바와 같이 군간비교시 제품복용 4, 8, 12주 후 시점에서 두 그룹간의 피부 눈가주름(Replica)은 통계적으로 유의한 차이가 없었다(p<0.05).As a result of the analysis, as shown in Tables 21 and 22 and FIGS. 30 and 31, the wrinkle depth of the parameters in the A product (control group) was significantly decreased at 12 weeks after the product was taken ( p ≪ 0.05 ). In the remaining parameters, there was a slight tendency to decrease in both A product (control group) and B product (test group), but there was no statistically significant difference. In addition, as shown in Tables 23, 24 and 30 and 31, there was no statistically significant difference in the replica between the two groups at 4, 8, and 12 weeks after the product administration ( p <0.05 ).
혈액분석Blood analysis
시험제품 복용 전(-2주)과 복용 12주 후 피험자들의 혈액을 검사하여 시험제품이 인체 대사에 영향을 미치지 않았음을 확인한다. 혈액검사는 외부의뢰기관(더웰의원 건강검진 센터)에 위탁하여 시험이 종료된 후 결과를 제공받아 분석하였고, 그 분석결과는 표 25 내지 27에 나타내었다.After 12 weeks of taking the test product (-2 weeks) and after 12 weeks, examine the blood of the subjects to confirm that the test product did not affect human metabolism. Blood tests were commissioned to an external referral organization (Dwell Clinic) and the results were analyzed after the test was completed. The analysis results are shown in Tables 25-27.
[표 25][Table 25]
[표 26][Table 26]
[표 27][Table 27]
분석결과, 상기 표 25 및 26에 나타난 바와 같이, 제품복용 전과 비교시 제품복용 12주 후 알부민(Albumin), 크레아티닌(Creatinine), 헤모글로빈(Hemoglobin) 항목은 A제품(대조군)에서, T.프로틴(T.Protein), 알부민(Albumin), T.빌(T.Bil), 혈당, 크레아티닌(Creatinine), 헤모글로빈(Hemoglobin) 항목은 B제품(시험군)에서 유의한 차이가 있었으나, 파라미터들의 평균값은 모두 참고치 범위 내에 있었다(p<0.05). 또한, 표 27에 나타난 바와 같이, 군간비교시 크레아티닌(Creatinine) 파라미터에서는 제품복용 12주 후 시점에서 통계적으로 유의한 차이를 보였으며, 나머지 모든 파라미터에서는 유의한 차이를 보이지 않았다(p<0.05).As a result of the analysis, as shown in Tables 25 and 26, albumin, creatinine, and hemoglobin items were observed in the A product (control group), T. protein T. protein, albumin, T. Bil, blood glucose, creatinine and hemoglobin were significantly different in B product (test group) ( P < 0.05 ). In addition, as shown in Table 27, creatinine parameters of the groups were statistically significant at 12 weeks after the product administration, and all the other parameters showed no significant difference ( p <0.05 ).
식이조사Dietary investigation 및 체중측정 And weight measurement
피험자들의 식습관 변화가 실험결과에 영향을 미치지 않았음을 확인하고자 시험제품 복용 전, 복용 4주 후, 8주 후, 12주 후 시점에서 체중을 측정하고, 식이조사를 실시하여 시험기간 동안에 식습관이 평소처럼 유지되었는지를 확인하였다. 피험자들은 제공받은 식이조사 평가지에 본인이 식사량 정도를 자가평가 하도록 하고 방문 시에 가져오도록 하여 시험자는 확인 및 기록하였다. 이때 식이량 정도는 안먹음:0, 적음:1, 보통:2, 많음:3으로 평가하였고, 평가결과는 표 28 및 29에 나타내었다.In order to confirm that the changes in the dietary habits of the subjects did not affect the test results, the body weight was measured before the test product, 4 weeks, 8 weeks, and 12 weeks after the test product, I confirmed that it was maintained as usual. The subjects were asked to self-assess the amount of food they had provided in the dietary survey and were brought in at the time of visit. At this time, the degree of dietary intake was evaluated as 0, 0 as low, 1 as low, 2 as high, and 3 as high, and the evaluation results are shown in Tables 28 and 29.
[표 28][Table 28]
[표 29][Table 29]
분석결과, 상기 표 28에 나타난 바와 같이, 제품복용 전과 비교시 제품복용 12주 후 시점 A제품(대조군)에서 체중이 유의하게 감소한 것을 제외한 식이조사, 체중, BMI 지수 모두 제품복용 4, 8주 후 시점에서 유의한 차이가 없었다(p<0.05). 또한, 표 29에 나타난 바와 같이, 제품복용 12주 후 시점에서 BMI지수에서 군간 유의한 차이를 보였으며, 나머지 식이조사, 체중에는 군간 유의한 차이를 보이지 않았다(p<0.05).As a result of the analysis, as shown in Table 28, all of the dietary investigations, body weight, and BMI indices except for a significant decrease in body weight in the A-product (control group) There was no significant difference at the time ( p <0.05 ). In addition, as shown in Table 29, there was a significant difference between the groups in the BMI index at 12 weeks after the product intake, and there was no significant difference between the groups in the other diets and body weight ( p <0.05 ).
설문 평가Question evaluation
설문 내용은 의뢰인과 협의하여 작성되었으며, 시험제품 복용 4주 후, 복용 8주 후, 복용 12주 후에 피험자가 작성한 답변을 토대로 시험제품의 효능과 복용성에 대한 만족도를 평가하였다. 평가결과는 표 30, 31 및 도 33, 34에 나타내었다.The questionnaires were prepared in consultation with the client. We evaluated the efficacy and acceptability of the test product on the basis of the responses given by the subjects after 4 weeks of taking the test product, 8 weeks after taking the product, and 12 weeks after taking the product. The evaluation results are shown in Tables 30 and 31 and FIGS. 33 and 34.
[표 30][Table 30]
[표 31][Table 31]
효능에 관한 설문 분석결과, 상기 표 30 및 도 33에 나타난 바와 같이 대부분의 항목에서 A제품(대조군), B제품(시험군) 모두 제품복용 경과시 피부개선에 관한 만족도가 다소 증가하는 경향을 보였다. 특히, 부드러워짐 항목은 복용 12주 후 시점에서 B제품에서 피험자들의 85% 이상이 피부 개선에 대한 만족도를 보였으며, A제품에 비해 10%정도 높은 만족도를 보였다. 제품 복용성에 관한 설문분석 결과, 표 31 및 도 34에 나타난 바와 같이 대부분의 항목에서 피험자들이 30% 이하로 A제품(대조군) 및 B제품(시험군) 모두에 다소 낮은 만족도를 보였다.As a result of the questionnaire analysis on the efficacy, as shown in Table 30 and FIG. 33, satisfaction of skin improvement tendency was slightly increased in all items A (control group) and B product (test group) . Especially, more than 85% of the subjects in the B product showed satisfactory satisfaction with the skin improvement after 12 weeks of taking the softening item, and the satisfaction level was about 10% higher than that of the A product. As shown in Table 31 and FIG. 34, in most of the items, the subjects were somewhat less satisfied with both products A (control) and B (test) than 30% of the subjects.
안전성 평가Safety evaluation
시험제품 복용 4주 후, 복용 8주 후, 복용 12주 후 시험자가 피험자의 피부 상태를 관찰하고 피험자와의 질의 응답을 통해 피부상태와 전신적 상태, 제품의 자극 유무를 확인하여 기록, 평가하였다. 이상반응이 있을 시 피부 이상반응 보고를 작성하도록 하며 이에 대한 시험 제품과의 관련성은 시험책임자가 판단하도록 하였다. 그 결과, 하기 표 32에 나타난 바와 같이 본 시험기간 동안 모든 피험자에게서 피부, 전신적 증상에 아무런 이상반응이 관찰되지 않았다.After 4 weeks of taking the test product, 8 weeks after taking, and 12 weeks after taking the test, the examinee's skin condition was observed and the skin condition, system condition, and irritation of the product were confirmed through question and answer with the subject. If there is an adverse reaction, report the adverse reaction of the skin. As a result, no adverse reactions to skin or systemic symptoms were observed in all subjects during the test period as shown in Table 32 below.
[표 32][Table 32]
본 발명의 일 실시예에 따른 조성물의 제조예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Examples of the preparation of the composition according to an embodiment of the present invention will be described below, but the present invention can be applied to various other formulations.
[제조예 1]겔 파우치 타입의 기능성 음료 제조[Manufacturing Example 1] Production of gel pouch type functional beverage
하기 표 33의 조성을 갖는 겔 파우치 타입의 기능성 음료를 당업자의 통상적인 방법에 따라 제조하였다.A gel pouch type functional beverage having the composition shown in the following Table 33 was prepared according to a conventional method of a person skilled in the art.
[표 33][Table 33]
[제조예 2] 껌의 제조[Production Example 2] Production of gum
하기 표 34의 조성을 갖는 기능성 껌을 당업자의 통상적인 방법에 따라 제조하였다.Functional gums having the composition shown in the following Table 34 were prepared according to the conventional methods of those skilled in the art.
[표 34][Table 34]
[제조예 3] 환의 제조[Manufacturing Example 3] Production of rings
하기 표 35의 조성을 갖는 기능성 환을 당업자의 통상적인 방법에 따라 제조하였다.Functional rings having the composition in Table 35 below were prepared according to conventional methods of those skilled in the art.
[표 35][Table 35]
Claims (7)
상기 발효복합물은 콩 효모발효물 및 보리 효모발효물을 2:1 내지 1:2의 중량비로 혼합한 혼합물이고,
상기 콩 효모발효물 및 보리 효모발효물은 피키아 쟈디니(Pichia jadinii) 및 오레오바시디움 플루란(Aureobasidium pullulans)의 복합 균주로 발효된 효모발효물이며,
상기 발효복합물은 다이드제인(daidzein) 및 제니스테인(genistein)의 함량이 증가된 콩 효모발효물; 및 베타-글루칸(β-glucan)의 함량이 증가된 보리 효모발효물을 포함하는 피부 보습용 식품 조성물.A food composition for skin moisturization comprising a soybean-barley fermentation complex derived from soybean and barley,
The fermentation complex is a mixture of a fermented soybean yeast and a fermented barley yeast at a weight ratio of 2: 1 to 1: 2,
The soybean yeast fermented product and the barley yeast fermented product were obtained from Pichia jadinii ) and Aureobasidium pullulans ), which is a fermented yeast fermented product,
Wherein said fermentation complex is a fermented soybean yeast with an increased content of daidzein and genistein; And a fermented barley yeast having an increased content of beta-glucan.
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| CN109825518A (en) * | 2019-02-25 | 2019-05-31 | 佐登妮丝（广州）美容化妆品有限公司 | The preparation method and its usage of 3 '-hydroxy dye geniteins |
| KR20230101181A (en) | 2021-12-29 | 2023-07-06 | 농업회사법인 청맥 주식회사 | Color barley fermented product, and the body fat reduction composition containing active ongredients the fermented product |
Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| KR101068815B1 (en) | 2008-08-12 | 2011-10-04 | 두두원발효(주) | Cosmetic composition for improving skin wrinkle and skin whitening comprising a soybean compound fermented by kimchi lactic acid bacteria complex |
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