KR20160150391A - Pseudomonas sp. sdy3 being abled to resolve oil and oil degradation method using the same - Google Patents
Pseudomonas sp. sdy3 being abled to resolve oil and oil degradation method using the same Download PDFInfo
- Publication number
- KR20160150391A KR20160150391A KR1020150088311A KR20150088311A KR20160150391A KR 20160150391 A KR20160150391 A KR 20160150391A KR 1020150088311 A KR1020150088311 A KR 1020150088311A KR 20150088311 A KR20150088311 A KR 20150088311A KR 20160150391 A KR20160150391 A KR 20160150391A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- oil
- strain
- pseudomonas
- sdy3
- diesel
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
- B09C1/10—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
-
- C12R1/38—
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Soil Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
Abstract
Description
본 발명은 유류 분해능을 가지는 신규한 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주 및 이를 이용한 유류 분해 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 유류로 오염된 토양으로부터 분리한 미생물 중 유류 분해능과 유류의 분해속도를 측정하여 가장 우수한 것을 선별한 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .)SDY3 균주(수탁번호 KCTC18365P) 및 상기 유류 분해 균주를 이용하여 유류를 분해하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to novel Pseudomonas sp. sp . ) SDY3 strain and a method for degrading oil using the same. More particularly, the present invention relates to a strain of Pseudomonas sp. Which selects the best one by measuring the degradation rate of oil and the degradation rate of microorganisms isolated from oil- sp . ) SDY3 strain (Accession No. KCTC18365P) and a method for decomposing the oil using the oil degrading strain.
급격한 산업성장과 더불어 유류의 사용이 폭발적으로 증가해 왔으며, 이로 인한 유류 유출 사고의 발생 빈도 또한 급증하고 있다. 특히 토양의 유류오염과 관련하여, 과거의 미군부대 주둔지 또는 국내 군부대 등의 유류저장고에서의 유류 누출과 주유소 등지의 지하저장탱크 및 송유관 등의 시설의 관리 미흡 또는 이상으로 인한 석유화학물질의 누출이 계속 증가하여 토양오염이 심화되고 있다. 또한 미군부대와 국내 군부대 주둔지의 철수나 이동으로 인하여 개발되는 토지의 경우, 수십년간 유류오염이 진행되어 오염지역의 면적과 농도가 높아서 이를 효과적으로 정화하는 것이 관건이다.Along with rapid industrial growth, the use of oil has exploded and the frequency of oil spill accidents has also increased rapidly. Especially, in relation to oil pollution in soil, it is necessary to prevent oil leaks in past US military units or domestic military bases, leakage of petrochemicals due to inadequate management of facilities such as underground storage tanks and oil pipelines, Soil contamination is intensifying. In addition, in the case of land developed due to the withdrawal and movement of US military units and domestic military bases, oil pollution has progressed for several decades and the area and concentration of polluted areas are high.
유류에 의한 토양오염은 대기나 수질 오염에 비하여 오염의 확산 속도가 낮은 반면에 피해 양상이 다양하며 지속적으로 나타나고, 지하수 오염 및 타 용도로의 토지개발에 따른 부가적 문제를 수반하는 특징이 있다. 또한 가스나 액체와는 달리 고체 상태인 토양은 공정 내로의 이송과 화학적 또는 생물학적 반응 등을 고려했을 때 공학적으로 다루기가 어려운 문제가 있어, 일단 오염된 토양을 완벽하게 정화하기 위해서는 많은 시간과 비용이 소모되고 정화기술 면에서도 대기 및 수질 오염과는 다른 방법으로 접근을 해야만 한다.Soil contamination by oil is characterized by a low rate of contamination diffusion compared to air or water pollution, but with varying patterns of damage and persistent appearance, accompanied by additional problems associated with groundwater contamination and land development for other uses. In addition, unlike gas or liquid, solid soil is difficult to be engineered when considering the transfer into the process and the chemical or biological reaction, and it takes a lot of time and money to completely clean the contaminated soil In terms of cleanup technology, it must be approached in a different way from air and water pollution.
유류에 의해 오염된 토양의 정화방법은 크게 생물학적 처리방법, 물리 또는 화학적 처리방법, 열적 처리방법으로 나눌 수 있다. 이 중 물리 또는 화학적 처리방법은 세정법, 세척법, 용제추출법, 고형화법 등이 있고 열적 처리방법은 열탈착법, 소각법 등이 있는데, 세정법은 계면활성제와 같은 세정용액에 의해 2차오염이 발생 될 가능성이 있을 뿐 아니라 휘발성 유기화합물질의 처리 시 높은 세정제 비용으로 경제성이 떨어지며 오염물질의 확산을 초래할 수 있는 단점이 있고, 세척법은 오염토양의 굴착 및 이송 비용, 토양세척장치의 제작비용, 세척제 비용 및 폐수/폐기물 처리 비용 등이 높게 소요될 수 있어 비교적 경제성이 낮은 단점이 있으며, 용제추출법은 추출용매에 의한 2차 오염의 염려가 있고, 고형화법은 휘발성 유기물질의 경우 고정화가 어려우며 고형화된 물질에 대한 처분작업이 별도 필요한 단점이 있다. 또한, 열탈착법은 가스상의 2차 생성물의 처리장치가 요구되고 높은 에너지 처리 비용이 드는 단점이 있고, 소각법은 소각재의 재처분 작업이 필요하고 토양 미생물 및 유기물질까지 모두 분해시키기 때문에 친환경적이지 못한 단점이 있다. The method of purification of soil polluted by oil can be roughly divided into biological treatment method, physical or chemical treatment method, and thermal treatment method. Among these methods, there are cleaning methods, cleaning methods, solvent extraction methods, solidification methods and the like. Thermal processing methods include thermal desorption, incineration, etc. The cleaning method is a method in which secondary contamination is caused by a cleaning solution such as a surfactant In addition, there is a disadvantage in that the cost of the detergent is low due to the high cleaning agent cost and the diffusion of contaminants may be caused. In addition, the cleaning method is costly for excavation and transportation of contaminated soil, And waste water / waste disposal costs. Therefore, there is a disadvantage in relatively low economic efficiency. In the solvent extraction method, there is a fear of secondary contamination by the extraction solvent. In the solidification method, it is difficult to immobilize the volatile organic substance in the solidified material There is a disadvantage that separate disposal work is necessary. In addition, the thermal desorption method requires a device for treating a gaseous secondary product and has a disadvantage in that it requires a high energy processing cost. The incineration method requires disposal of the ash material and decomposes soil microorganisms and organic substances, There are disadvantages.
이러한 2차 생성물의 처리 문제, 2차 오염의 염려 및 정화 비용의 문제에 따라 생물학적 처리방법의 유용성이 주목받고 있으며, 생물학적 분해법, 생물학적 통풍법 등 지중에 산소 및 영양물질 등을 공급하여 토양내 미생물의 생분해능을 촉진하는 방법이 이용되고 있다. 생분해란 자연 생태계의 특정 미생물 등이 적절한 조건하에서 유해오염물질을 분해하여 무해화 시키거나 영양원으로 사용하는 현상이며, 이러한 생물학적 처리방법은 경제적이면서도 자연의 정화능력을 이용함으로써 2차 오염원이 없는 장점이 있다. The use of biological treatment methods has attracted attention due to the problems of treatment of such secondary products, the concern of secondary pollution, and the cost of purification. In addition, by supplying oxygen and nutrients to soil such as biological decomposition method and biological ventilation method, A method of promoting the biodegradation of the biosensor is used. Biodegradation is a phenomenon in which specific microorganisms of natural ecosystem decompose harmful pollutants under appropriate conditions and use them as a nutrient source. These biological treatment methods are advantageous because they are economic and have no secondary pollution source have.
다만 이러한 생분해를 이용한 생물학적 처리방법은 처리기간이 긴 단점을 가지고 있어, 오염물질의 생분해를 강화할 수 있는 요인들에 대한 조사와 실험들을 통해 최종적으로 생분해능의 극대화를 이끌어내는 것이 중요하다. 특히, 선진 외국의 경우 오염 토양에 대한 많은 연구로 미생물학적 정화 기술의 실용화가 이루어지고 있으며, 이를 기반으로 특정 오염물질에 대한 분해능이 우수한 외래미생물을 첨가하는 미생물 투입법이 적용되기도 한다. However, biological treatment methods using biodegradation have a disadvantage of a long treatment period, so it is important to ultimately maximize biodegradation through investigation and experiments on factors that can enhance biodegradation of pollutants. In particular, in advanced countries, microbial purification technology has been put into practical use by many studies on contaminated soil, and microorganism input method in which foreign microorganisms having excellent resolution for specific pollutants are applied is also applied.
이러한 연구에 있어서 유류 분해능이 우수한 균주의 분리 및 선별이 우선되며, 한국 특허 공개번호 제2002-0060009호는 슈도모나스 속 CU1을 이용하여 원유 1%(v/w)로 오염된 토양을 7일간 처리한 결과 토양 내 57.17%의 원유를 분해했다고 기재하고 있고, 한국 특허 공개번호 제2004-0098213호는 TPH가 10,000ppm인 토양에서 67%의 디젤 분해율을 나타내는 슈도모나스 제네코-1을 기재하고 있는 등, 균주의 선별에 관한 연구가 활발히 이루어지고 있는 실정이다. In this study, the isolation and screening of strains having excellent oil resolving power have priority, and Korean Patent Publication No. 2002-0060009 discloses a method for treating soil contaminated with crude oil 1% (v / w) using Pseudomonas spp. CU1 for 7 days It has been reported that 57.17% of the crude oil was decomposed in the soil, and Korean Patent Publication No. 2004-0098213 describes Pseudomonas geneco-1 showing 67% diesel degradation rate in a soil having 10,000 ppm TPH. And the like.
그러나 생물학적 처리방법에 있어서, 보다 짧은 기간에 높은 유류분해효율을 취득하는 것이 중요한 과제임에도 불구하고, 균주의 선별에 있어 유류분해속도에 관한 고려는 다소 부족하여 오염된 토양의 정화에 있어서 경제성의 문제가 대두되고 있다.However, in biological treatment methods, it is an important task to acquire a high oil fractionation efficiency in a shorter period of time. However, consideration of the oil fractionation speed is somewhat lacking in the selection of the strain, Is emerging.
이에 따라, 본 발명자들은 실질적인 유류오염토양의 정화에 있어서 그 처리기간을 단축시키기 위해서는 유류 분해능과 유류 분해속도의 두 가지 성능을 감안해야 하는 사실에 착안하여, 유류에 오염된 토양으로부터 미생물을 분리하여 그로부터 유류 분해능과 유류 분해속도가 우수한 미생물을 찾고자 노력한 결과, 슈도모나스 속의 신규한 균주가 오염된 토양의 유류를 효과적으로 분해하는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the inventors of the present invention focused on the fact that, in order to shorten the treatment period in the purification of a substantially oil contaminated soil, it is necessary to take into account the two functions of the oil resolution and the oil degradation rate, and the microorganisms are separated from the oil- As a result of efforts to find a microorganism having excellent oil resolution and oil degradation rate, it has been confirmed that a novel strain of Pseudomonas sp. Efficiently decomposes the oil of the contaminated soil and completed the present invention.
본 발명의 목적은 유류 분해능과 유류의 분해 속도가 우수한 신규 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주를 제공하는 것이다.An object of the present invention is to provide a novel Pseudomonas sp. sp . ) SDY3 strain.
본 발명의 다른 목적은 상기 균주를 이용하여 토양의 유류오염물질을 분해하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for decomposing oil pollutants in soil using the strain.
또한, 유류에 오염된 토양으로부터 우수한 유류분해능을 가지는 미생물을 분리하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.It is another object of the present invention to provide a method for separating a microorganism having excellent oil resolution from a soil contaminated with oil.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 유류 분해능이 우수한 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주를 제공한다. In order to achieve the object of the present invention, there is provided a Pseudomonas sp. sp . ) SDY3 strain.
상기에 있어서, 유류는 항공유, 휘발유, 등유, 경우, 중유 및 디젤로 이루어진 군으로부터 선택되는 석유계 유류인 것이며, 더욱 바람직하게는 상기 석유계 유류로서 디젤의 분해능이 우수한 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주를 제공한다. In the above description, the oil is a petroleum-based oil selected from the group consisting of jet fuel, gasoline, kerosene, case, heavy oil and diesel, and more preferably Pseudomonas sp . ) SDY3 strain.
상기 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 탄화수소의 분해능을 보이며, 바람직하게는 상기 탄화수소는 방향족 탄화수소이고, 상기 방향족 탄화수소는 플루오렌, 페난트렌 및 피렌으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.The Pseudomonas sp. sp . ) The strain SDY3 shows the ability to decompose hydrocarbons, preferably the hydrocarbons are aromatic hydrocarbons and the aromatic hydrocarbons are selected from the group consisting of fluorene, phenanthrene and pyrene.
또한, 본 발명은 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주를 유류 오염 토양에 분주하여 유류 오염 토양의 유류를 분해하는 방법을 제공한다.The present invention also relates to the use of the Pseudomonas sp. sp . ) SDY3 strain into oil-contaminated soil to provide a method for decomposing the oil of the oil-contaminated soil.
본 발명에 따른 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 우수한 유류분해능을 가지는 것으로, 특히 디젤과 탄화수소에 대한 분해능이 우수하고 분해속도가 빠른 유류 분해 균주이다. 상기 균주를 이용한 유류 오염 토양의 유류를 분해하는 방법은 물리적, 화학적, 열적 처리방법보다 환경 친화적이며, 우수한 유류 분해 속도를 나타내 종래의 생물학적 처리방법보다 효율적이며 경제적이다.The Pseudomonas sp. sp . ) The SDY3 strain has excellent oil resolving power, and is a particularly good oil-degrading strain with high resolving power for diesel and hydrocarbons and high decomposition rate. The method of decomposing the oil-contaminated soil using the strain is more environmentally friendly than the physical, chemical and thermal treatment methods, and exhibits excellent oil degradation rate and is more efficient and economical than conventional biological treatment methods.
본 발명에 따른 또 다른 장점 중 하나는 상기 균주는 국내의 유류 오염된 토양에서 선별된 것으로서, 국내의 토양에 분주할 경우 자생능력이 뛰어나며 생태계의 혼란을 야기하지 않는다는 점이다.Another advantage of the present invention is that the strain is selected from domestic oil-contaminated soils, and has excellent self-sufficiency and does not cause confusion in the ecosystem when it is distributed in domestic soil.
또한, 본 발명의 유류 분해 균주 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 방향족 탄화수소의 분해능이 있어, 이러한 방향족 탄화수소에 오염된 토양의 정화에 이용되거나, 디젤 등의 유류와 방향족 탄화수소의 복합적인 오염 토양의 정화에도 이용될 수 있다.Furthermore, Pseudomonas species (Pseudomonas oil decomposition strains of the invention sp . ) The SDY3 strain has an ability to decompose aromatic hydrocarbons, and can be used for purification of soil contaminated with such aromatic hydrocarbons, or for purification of contaminated soil complexed with oil such as diesel and aromatic hydrocarbons.
본 발명의 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 미생물 기탁에 관한 부다페스트조약에 의한 국제기탁기관인 생명공학연구소(KTC:Korean Collection for Type Cultures)에 2015년 3월 31일에 기탁한 새로운 미생물 균주로서, 그 선별 방법 및 특징을 상세하게 설명한다.Pseudomonas species of this invention (Pseudomonas sp . ) The SDY3 strain is a new microbial strain deposited on March 31, 2015 in the KTC (International Collection Service for Type Cultures), an international depository organization under the Budapest Treaty on the Deposit of Microorganisms. Explain.
1. 슈도모나스 속(1. Pseudomonas sp. PseudomonasPseudomonas spsp .. ) ) SDY3SDY3 균주 Strain
본 발명의 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 하기의 표 1의 형태 및 생화학적 특성을 특징으로 한다. Pseudomonas species of this invention (Pseudomonas sp . ) The SDY3 strain is characterized by the shape and biochemical characteristics shown in Table 1 below.
Cell size 0.5x1.75um
Cell shape Coccobacilli
Oxidase -
Rhamnose -
N-acetylglucosamine -
D-ribose -
Inositol -
Sucrose -
Maltose -
Itaconate -
Suberate +
Malonate -
Acetate +
D, L-lactate +
L-alanine +
5-ketogluconate -
Glycogen -
3-hydroxy-benzoate +
L-serine -
Mannitol -
D-glucose -
Salicine -
D-melibiose -
L-fucose -
D-sorbitol -
L-arabinose -
propionate +
Caprate -
Valerate +
Citrate -
Histidine +
2-ketogluconate +
3-hycroxy-butylrate +
p-4-hydroxy-benzoate +
L-proline +
Gram stain (-)
Cell size 0.5x1.75um
Cell shape Coccobacilli
Oxidase -
Rhamnose -
N-acetylglucosamine -
D-ribose-
Inositol -
Sucrose -
Maltose -
Itaconate -
Suberate +
Malonate -
Acetate +
D, L-lactate +
L-alanine +
5-ketogluconate -
Glycogen -
3-hydroxy-benzoate +
L-serine-
Mannitol -
D-glucose -
Salicine -
D-melibiose -
L-fucose-
D-sorbitol-
L-arabinose -
propionate +
Caprate -
Valerate +
Citrate -
Histidine +
2-ketogluconate +
3-hydroxy-butylrate +
p-4-hydroxy-benzoate +
L-proline +
상기 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 우수한 유류 분해능을 나타내는 것으로, 상기 유류는 항공유, 휘발유, 등유, 경유, 중유 및 디젤로 이루어진 군으로부터 선택되는 석유계 유류일 수 있다. 더욱 바람직하게는 상기 균주는 우수한 디젤 분해능 및 빠른 디젤의 분해속도를 나타내는 것이다. 구체적으로, 상기 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주를 2%(v/v)디젤이 함유된 최소영양배지(MSM)에 3%(v/v)의 농도로 접종하여, 25℃, pH7, 150rpm에서 5일간 배양한 후의 디젤 분해능은 93%이고, 2%(w/w)디젤로 오염시킨 토양에서의 유류 분해능은 28일 경과 후 91%로, 그 분해속도가 빠르고 분해능이 우수하다.The Pseudomonas sp. sp . ) The SDY3 strain exhibits excellent oil resolution, and the oil may be a petroleum oil selected from the group consisting of jet fuel, gasoline, kerosene, light oil, heavy oil and diesel. More preferably, the strain exhibits excellent diesel resolution and fast degradation rate of diesel. Specifically, the Pseudomonas sp. sp . ) SDY3 strain was inoculated at 3% (v / v) concentration in a minimal nutrient medium (MSM) containing 2% (v / v) diesel and the diesel resolution after incubation at 25 ° C, 93%, and the oil degradation rate in the soil contaminated with 2% (w / w) diesel is 91% after 28 days, and the decomposition rate is fast and the resolution is excellent.
상기 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 세포 소수성이 높고, 유화능이 낮은 것을 또 다른 특징으로 한다. 세포 소수성은 균주 현탁액과 헥사데칸의 혼합 교반액에서 생성된 수층의 흡광도를 측정하여 확인할 수 있으며, 상기 균주의 세포 소수성은 오염 유류와의 넓은 접촉면 형성을 가능하게 하여, 균주의 유류분해능과 정량적인 상관관계를 가지는 것으로 판단할 수 있다.The Pseudomonas sp. sp . ) The SDY3 strain is characterized by high cell hydrophobicity and low emulsifying ability. The cell hydrophobicity can be confirmed by measuring the absorbance of the water layer formed in the mixed solution of the suspension suspension and hexadecane. The cell hydrophobicity of the strain enables a wide contact surface with the contaminated oil, It can be determined that they have a correlation.
또한, 상기 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 방향족 탄화수소의 분해능을 보이며, 바람직하게는 탄소수 16 이하의 방향족 탄화수소에 유용하다. 본 발명의 실험예 3은 플루오렌에서 28.8%의 우수한 분해능을 보이나, 본 발명의 특성은 이에 한정되지 않을 것이다.In addition, the above Pseudomonas sp. sp . ) The strain SDY3 shows an ability to decompose aromatic hydrocarbons, and is preferably useful for aromatic hydrocarbons having 16 or less carbon atoms. Experimental Example 3 of the present invention shows excellent resolution of 28.8% in fluorene, but the characteristics of the present invention are not limited thereto.
2. 슈도모나스 속(2. Pseudomonas sp. PseudomonasPseudomonas spsp .. ) ) SDY3SDY3 균주의 분리, 동정, 선별 단계 Isolation, Identification and Screening of Strain
상기 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주를 분리, 동정, 선별하고 그 유류분해능을 확인하는 과정은 바람직하게는 (1) 유류에 오염된 지역으로부터 오염된 토양을 채취하는 단계, (2) 고형화 배지를 이용하여 유류를 분해하는 균주를 분리하는 초기 선발 단계, (3) 최소배지 이용 액체배양 선발을 통하여 균주의 유류분해능과 분해속도를 측정하는 단계, (4) 디젤오염토양에서의 유류분해능과 분해속도 측정단계, (5) 최종적으로 선발된 우수균주를 선별하여 동정하는 단계를 포함하며, 추가적으로 실제 유류 오염 토양에서도 유효한 유류분해능을 나타낼 수 있는지를 시험하는 단계를 포함할 수 있다. 다만, 본 발명은 이에 한정되는 것은 아니며, 예컨대, 상기 각 단계 중 일부는 경우에 따라 생략될 수도 있고, 각 단계의 세세한 방법은 변동이 가능하며, 본 특허에 제한을 받지는 않는다. 상기 본 발명의 구성을 구체적으로 설명하면 다음과 같다.The Pseudomonas sp. sp . The process of isolating, identifying, selecting and isolating the SDY3 strain is preferably (1) collecting the contaminated soil from the oil-contaminated area, (2) decomposing the oil using the solidification medium, (3) measurement of the oil degradation rate and degradation rate of the strain through the selection of liquid culture using minimal media, (4) the step of measuring the oil resolution and degradation rate in the diesel contaminated soil, (5) Selecting the finally selected excellent strain and further identifying whether or not it can exhibit effective oil resolution even in actual oil contaminated soil. However, the present invention is not limited thereto. For example, some of the above steps may be omitted in some cases, the detailed method of each step may vary, and the present invention is not limited to this patent. The configuration of the present invention will be described in detail as follows.
첫 번째 단계는 유류 분해 효율이 높은 미생물을 분리하기 위해, 저유소나 유출된 유류에 오염된 주위의 토양과 같이 유류에 오염된 토양을 채취하는 단계를 포함한다. 바람직하게는 유류에 오염된 토양은 철거중인 육군 기지의 디젤 저유소 및 전국의 주유소 부근에서 채취된 것으로서 오염원의 주 성분으로 디젤을 포함하는 것으로 할 수 있다. The first step involves collecting contaminated soil in the oil, such as the surrounding soil contaminated with low-oil or leached oil, to isolate microorganisms with high efficiency of oil degradation. Preferably, the soil contaminated with oil is collected from a diesel storage site of a demolished army base or a gas station around the country, and may include diesel as a main component of the pollution source.
두 번째 단계는 상기의 유류에 오염된 토양을 희석한 후, 디젤이 함유된 최소영양 고형화 배지에 도말하여 유류분해능이 있는 균주 콜로니를 선발하는 단계를 포함한다.The second step involves diluting the soil contaminated with the oil and then streaking on a minimal nutrient solidification medium containing diesel to select strain colonies with oil resolution.
세 번째 단계는 상기의 선발된 균주 콜로니를 디젤과 탄화수소 성분이 함유된 함유된 최소영양 배지(Minimal Salt Medium, MSM)내로 첨가하여 농화 배양하는 단계를 포함한다. 이 때, 유류 분해능이 우수한 균주를 선별하기 위해 1일 내지 5일 간격으로 배양액을 교체하여 스크리닝되는 균주를 이차적으로 선별한다. 농화배양 10일 경과 후 트립틱 콩 한천 배지(Tryptic Soy Agar, TSA)상에 배양액을 도말하여 유류 오염된 토양 내에 존재하는 우수한 유류 분해 균주들을 확인하고, 확인된 균주는 디젤과 탄화수소 성분을 포함하는 최소영양배지에 각각 접종하여 균주의 성장률이 우수한 유류분해 균주를 교차하여 선발한다. 즉, 디젤과 탄화수소의 분해능이 우수하고 분해속도가 빠른 유류분해 균주를 최종적으로 선별한다.The third step involves concentrating the selected strain colonies by adding them into a Minimal Salt Medium (MSM) containing diesel and hydrocarbon components. At this time, in order to select strains having excellent oil-resolving ability, strains to be screened are alternately screened by replacing the culture medium at intervals of 1 to 5 days. After 10 days of concentration, the culture broth was streaked on Tryptic Soy Agar (TSA) to identify excellent oil degradation strains present in the oil contaminated soil. The identified strains were identified as containing diesel and hydrocarbon components Inoculation is carried out on the minimal nutrient medium and the oil-degrading strains having excellent growth rate of the strain are crossed and selected. That is, the oil-degrading strain having a high decomposition rate of diesel and hydrocarbon and having a high decomposition rate is finally selected.
네 번째 단계는 유류 오염 토양의 정화에 사용할 수 있는 최적의 균주를 선별하기 위하여, 각 균주의 유류분해능을 액체배양액 내에서 시험하는 단계를 포함한다. 본 단계는 일정량의 디젤과 탄화수소를 포함하는 최소영양배지 내에서 각 균주의 디젤 분해능과 성장률을 측정하는 단계이며, 상기 선별된 균주의 탄화수소 분해능을 측정하는 단계를 포함할 수도 있다. 상기 탄화수소는 원유 정제 및 제지 산업에서 발생하는 폴리 방향족 탄화수소(PAH:Poly Aromatic Hydrocarbon)등을 포함할 수 있다. 탄화수소의 분해능은 특정 탄화수소들의 혼합액을 배양액 내에 첨가하여 일정 시간 균주를 배양한 후, 배양액 내의 탄화수소 잔류량을 측정함으로써 알 수 있다.The fourth step involves testing the oil degradation of each strain in a liquid culture to select the best strains available for purification of oil contaminated soils. This step may be a step of measuring the diesel resolving power and growth rate of each strain in a minimal nutrient medium containing a predetermined amount of diesel and hydrocarbon, and may include a step of measuring the hydrocarbon resolution of the selected strain. The hydrocarbons may include polyaromatic hydrocarbons (PAH) generated in the crude oil refining and paper industry. The decomposition ability of hydrocarbons can be determined by adding a mixture of specific hydrocarbons to the culture solution, culturing the strain for a certain period of time, and then measuring the residual amount of hydrocarbons in the culture solution.
다섯 번째 단계는 상기의 단계에서 선별된 디젤 분해능을 보이는 균주들을 동정하는 단계로서, API Test Kit 사용을 포함한다. API Test Kit법은 Biochemical test, assimilation test, fermentation test를 이용하여 물질의 대사유무를 색의 변화로 판정하는 것으로, 알려지지 않은 미생물을 유추 및 동정하는 방법이다.The fifth step is to identify strains showing diesel resolving ability selected in the above step, and includes use of API Test Kit. The API Test Kit method is a method to determine the presence or absence of metabolism by color change using biochemical test, assimilation test, fermentation test, and to infer unknown microorganisms.
추가적으로, 디젤을 포함한 액체 배양액 내에서 유류분해능을 가지는 균주가 실제 유류 오염 토양에서도 유효한 유류분해능을 나타낼 수 있는지를 시험하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 시험은 멸균된 일정량의 토양에 최소영양배지에서 24시간 배양한 균주 현탁액을 접종하고, 여기에 최소영양배지와 디젤을 혼합한 시험액을 첨가하여 일정 시간 후의 디젤분해능을 확인하는 과정을 포함한다.Additionally, testing may include testing whether a strain having oil resolution in a liquid culture containing diesel can exhibit effective oil resolution in actual oil contaminated soils. The test includes a step of inoculating a sterilized suspension of the strain cultivated in a minimal nutritive medium for 24 hours in a sterilized amount of soil, and adding a test solution in which a minimal nutrient medium and diesel are mixed to confirm the diesel resolution after a certain period of time.
3. 슈도모나스 속(3. Pseudomonas spp. PseudomonasPseudomonas spsp .. ) ) SDY3SDY3 균주를 토양에 분주하여 오염된 토양을 정화하는 방법. A method of purifying contaminated soil by dispensing the strain into the soil.
본 발명은 상기 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주를 유류 오염 토양에 분주함으로써 유류로 오염된 토양의 유류를 분해하는 방법을 제공한다. The present invention relates to the aforementioned Pseudomonas sp. sp . ) A method of decomposing the oil of soil contaminated with oil by distributing the strain SDY3 to oil contaminated soil.
상기에서, 유류로는 특별히 한정되지 않으나 석유계 유류이며, 항공유, 휘발유, 등유, 경우, 중유, 디젤 등을 제한 없이 포함할 수 있다. 본 발명의 실험예 2에 따르면 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 실제 2%(w/w) 디젤에 오염된 토양에 대하여 28일 내에 90% 이상의 디젤을 분해하여, 디젤 오염 토양에 분주하였을 때, 빠른 속도의 우수한 디젤 분해능을 나타낸다. In the above, the oil path is not particularly limited, but it is a petroleum-based oil, and may include aviation oil, gasoline, kerosene, case, heavy oil, diesel and the like. According to Experimental Example 2 of the present invention, Pseudomonas sp. sp . ) The SDY3 strain exhibits fast diesel resolution with fast speed when decomposing more than 90% of the diesel in 28 days for soil contaminated with actual 2% (w / w) diesel, and dispensing to diesel contaminated soil.
또한, 상기 유류 오염 토양은 탄화수소 오염 물질을 포함하는 것일 수 있다. 상기 탄화수소는 특별히 한정되지 않지만 방향족 탄화수소이며, 벤젠, 나프탈렌, 크실렌 안트라센 뿐만 아니라, 플루오렌(Fluorene), 페난트렌(Phenanthrene), 또는 피렌(Pyrene)을 포함한다. 본 발명의 슈도모나스 속(Pseudomonas sp) SDY3 균주는 탄화수소 오염 물질에 뛰어난 분해능을 나타내며, 특히 탄소수 16 이하의 방향족 탄화수소에 유용한 분해능을 가진다. 실험예 3에 따르면, 본 발명의 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 플루오렌, 페난트렌, 또는 피렌에 대한 분해능을 나타내고, 특히 플루오렌의 경우 28%이상의 우수한 분해능을 나타내므로, 유류 오염 토양뿐 아니라 유류 및 탄화수소의 복합 오염 토양 및 탄화수소 오염 토양에 상기 균주를 분주함으로써 토양을 정화할 수 있다.
In addition, the oil contaminated soil may contain hydrocarbon pollutants. The hydrocarbon is not particularly limited but is an aromatic hydrocarbon and includes benzene, naphthalene, xylene anthracene, as well as fluorene, phenanthrene, or pyrene. Pseudomonas species of this invention (Pseudomonas sp ) The SDY3 strain exhibits excellent resolving power for hydrocarbon contaminants, especially for aromatic hydrocarbons having up to 16 carbon atoms. According to Experimental Example 3, the Pseudomonas sp. sp . ) Since the SDY3 strain shows a resolving power against fluorene, phenanthrene, or pyrene, in particular, fluorene exhibits an excellent resolving power of 28% or more. Therefore, in the case of not only oil contaminated soil but also contaminated soil of oil and hydrocarbon and soil contaminated with hydrocarbon, The soil can be purified by dispensing the strain.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are intended to further illustrate the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
< < 실시예Example 1> 오염토양 채취 및 균주 분리 1> Collect contaminated soil and isolate strain
경기도와 국내 철거중인 육군 기지의 디젤 저유소 및 전국 각지의 주유소 부근에서 유류 오염 토양을 채취한 후, 채취된 토양 시료를 현장에서 채로 걸러 큰 입자를 제거한 후에 4℃의 냉장고에 보관하였다. After collecting oil contaminated soil from diesel storage sites in Gyeonggi Province and Korea Army bases and disposal sites around the country, sampled soil samples were collected by filtration and stored in a refrigerator at 4 ℃.
상기 토양 중 1g을 0.3%(v/v)의 디젤을 함유하는 10ml의 최소 영양배지(Minimal Salt Medium(MSM); 1리터 증류수 내 K2HPO4:5.8g, KH2PO4:4.5g, MgCl2:0.16g, CaCl2:0.02g, NaNO4:0.002g, FeSO4:0.001g, MnCl2:0.001g 포함)에 첨가하고 농화 배양하였다. 상기 배양액의 MSM을 48시간 간격으로 교체했으며, 동시에 유류분해능이 우수한 균주를 효과적으로 선발하기 위해, 디젤과 탄화수소를 추가하여 선별배양을 하였다. 이러한 과정을 5회 추가 반복한 후, 트립틱 콩 한천배지(Tryptic Soy Agar, TSA)상에 배양액을 도말하였다. 상기 배지를 30℃에서 48시간 동안 배양한 후 17개의 균 집락을 얻었다.1 g of the above soil was suspended in 10 ml of Minimal Salt Medium (MSM) containing 5.8 g of K 2 HPO 4 , 4.5 g of KH 2 PO 4 in 1 liter of distilled water, containing 0.3% (v / v) MgCl 2 : 0.16 g, CaCl 2 : 0.02 g, NaNO 4 : 0.002 g, FeSO 4 : 0.001 g, and MnCl 2 : 0.001 g). MSM of the culture broth was replaced at intervals of 48 hours. In order to effectively select a strain having excellent oil resolving ability, diesel and hydrocarbons were added for selective culture. This procedure was repeated 5 times, and the culture broth was plated on a tryptic soy agar (TSA). The medium was incubated at 30 DEG C for 48 hours and 17 colonies were obtained.
상기 균 집락으로부터 채취한 각각의 균주를 디젤을 함유하는 MSM에 접종하여 가장 우수한 디젤 분해능을 보이는 4개의 균주를 선별하였다. 구체적으로 2%(v/v)디젤이 함유된 20ml MSM에 영양배지에서 24시간 배양된 균주를 각각 3%(v/v)농도로 접종하여 25℃, pH7, 150rpm에서 5일간 배양한 후 유류 분해능을 측정하여 균주를 선별한다. 이렇게 선별된 상기 4개의 균주를 각각 트립틱 콩 한천배지(Tryptic Soy Agar, TSA)에서 24시간 동안 배양한 후, API Test법을 사용하여 균주들을 동정하였다.Each of the strains collected from the above bacterial colonies was inoculated into MSM containing diesel to select four strains exhibiting the best diesel resolution. Specifically, 20 ml of MSM containing 2% (v / v) diesel was inoculated at a concentration of 3% (v / v) for 24 hours in a nutrient medium and cultured at 25 ° C, pH7, 150 rpm for 5 days. The strain is selected by measuring the resolution. The four selected strains were cultured in a Tryptic Soy Agar (TSA) for 24 hours, respectively, and strains were identified using the API Test method.
상기 4개의 균주들을 각각 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY1, 아시네토박터 속(Acinetobacter sp .) SDY2, 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3, 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY4로 명명하였다.The four strains were designated Pseudomonas sp. sp . ) SDY1, Acinetobacter sp . ) SDY2, Pseudomonas sp . ) SDY3, Pseudomonas sp . ) SDY4.
< < 실시예Example 2> 슈도모나스 속( 2> Pseudomonas sp. PseudomonasPseudomonas spsp .. ) ) SDY3SDY3 균주의 세포 소수특성 Cell hydrophobicity of strains
본 발명에 따른 유류 분해 균주 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주의 세포 소수 특성을 알기 위하여, 2%(v/v)디젤이 함유된 50ml의 최소영양배지(MSM)에 본 발명 균주를 접종하고 5일 동안 배양한 후, 배양액을 원심분리하여 얻은 균체를 최소영양배지(MSM)에 현탁시켰다. 현탁액과 헥사데칸을 10:1로 혼합하여 교반한 후 정치시켜 생성된 수층을 취하여 흡광도를 측정하였고, 흡광도의 초기수치와 비교하여 %로 나타내었다. 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 의 소수성은 98%로 나타났으며, 이러한 세포의 소수성이 균주의 유류분해능과 상관관계를 가지는 것으로 판단되었다.Oil decomposition strain according to the present invention Pseudomonas species (Pseudomonas sp . ) In order to determine the cell hydrophobicity of the strain SDY3, the strain of the present invention was inoculated into 50 ml of minimal nutrient medium (MSM) containing 2% (v / v) diesel and cultured for 5 days, The cells were suspended in minimal nutrient medium (MSM). The suspension was mixed with hexadecane at a ratio of 10: 1, stirred, and then the aqueous layer formed was taken and absorbance was measured. The absorbance was expressed in% compared with the initial value of absorbance. Pseudomonas sp . The hydrophobicity of SDY3 was 98% , and the hydrophobicity of these cells was correlated with the oil resolution of the strain.
< < 실시예Example 3> 슈도모나스 속( 3> Pseudomonas sp. PseudomonasPseudomonas spsp .. ) ) SDY3SDY3 균주의 Strain 유화능Emulsifying ability
슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주의 유화능을 알기 위하여, 2%(v/v)디젤이 함유된 2ml MSM에 본 발명 균주를 접종하여 5일동안 배양하고, 이 배양액을 여과지로 여과한 후 남은 액을 인산삼칼륨(Patassium Phosphate)완충액에 첨가하였다. 상기 용액에 헥사데칸을 1/10의 비율로 첨가하여 교반한 후 10분간 정치시켜 생성된 수층을 취하여, 수층에 유화되어 있는 헥사데칸을 흡광도로 측정하였다. 이에 따른 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주의 유화능은 13%로 나타났다. Pseudomonas sp . ) To determine the emulsifying activity of the SDY3 strain, the strain of the present invention was inoculated in 2 ml of MSM containing 2% (v / v) diesel and cultured for 5 days. The culture solution was filtered with a filter paper, (Patassium Phosphate) buffer. Hexadecane was added to the solution at a ratio of 1/10, stirred, and allowed to stand for 10 minutes. The resulting aqueous layer was measured for hexadecane emulsified in the water layer by absorbance. The resulting Pseudomonas sp . ) The emulsifying ability of SDY3 strain was 13% .
< < 실험예Experimental Example 1> 액체 배양을 통한 유류분해능의 측정 1> Measurement of oil resolution by liquid culture
2%(v/v) 디젤이 함유된 20ml MSM에 영양배지에서 24시간 배양된 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY1 균주, 아시네토박터 속(Acinetobacter sp .) SDY2 균주, 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주, 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY4 균주를 각각 3%(v/v)의 농도로 접종하여, 25℃, pH7, 150rpm에서 5일간 배양한 후, 15ml 헥산으로 잔류 디젤을 추출하여 가스크로마토그래피 GC-FID(HP6890)로 분석했다. 측정된 각 균주의 디젤 분해능은 하기 표 2과 같다. 20 ml of MSM containing 2% (v / v) diesel was added to the culture medium of Pseudomonas sp . ) SDY1 strain, Acinetobacter sp . ) SDY2 strain, Pseudomonas sp. sp . ) SDY3 strain, Pseudomonas sp. sp . ) SDY4 strain was inoculated at a concentration of 3% (v / v), and cultured at 25 DEG C, pH7, and 150 rpm for 5 days. Residual diesel was extracted with 15 mL of hexane and analyzed by gas chromatography GC-FID (HP6890) did. The diesel resolutions of the respective strains were as shown in Table 2 below.
상기 표 2에서, 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주의 디젤 분해능이 93%로 가장 높게 나타났다.In Table 2 above, Pseudomonas sp. sp . ) The highest resolution of SDY3 strain was 93%.
<< 실험예Experimental Example 2> 슈도모나스 속( 2> Pseudomonas sp. PseudomonasPseudomonas spsp .. ) ) SDY3SDY3 균주의 디젤오염 토양에서의 유류분해능 Oil Resolutions in Diesel Contaminated Soils of Strain
경기도 군포시에 소재한 야산에서 토양을 채취하고, 수분 보유능, pH 및 총 유기물 량을 통하여 토양의 특성을 분석하였다. 채취한 토양을 분석한 결과, 수분보유능은 0.58g(H2O)/g(토양), 총 유기물 량은 9.66%(w/v), pH는 4.28로 산성을 띠고 있었다. 균주의 생장을 위해 본 토양에 CaCO3를 첨가하여 pH를 7.0으로 보정한 후 실험을 수행했다. The soil was collected from the mountains of Gunpo, Gyeonggi - do, and the characteristics of the soil were analyzed through water availability, pH and total organic matter. As a result of analysis of the collected soil, the acidity was found to be 0.58g (H 2 O) / g (soil), 9.66% (w / v) total organic matter, and 4.28 pH. For the growth of the strain, the pH was adjusted to 7.0 by adding CaCO 3 to the soil and then the experiment was carried out.
1.19mm 체를 이용해 토양을 거른 후, 습열멸균(121℃,30분,3번)하고 75℃건조기에서 24시간 동안 건조시켜, 50g의 멸균된 토양을 준비했다. 상기 토양에 2%(w/w)의 디젤을 분무하고, TSB(트립틱 콩 배지)에서 24시간 동안 배양한 슈도모나스 속(Pseudomonas sp) SDY3 균주를 원심분리하여 균체를 획득한 후, 이를 최소영양배지(MSM)로 현탁해 토양 수분보유능이 40%가 되도록 상기 토양에 분주하고 고루 섞어 주었다. 또한 균주의 성장을 위해 토양 10g당 0.1g의 CaCO3 를 첨가하고 섞어주었다. 본 실험을 28일 동안 진행했으며, 배양시간(일)에 따른 디젤 분해에 대한 실험결과는 하기 표 3에 나타나있다. The soil was sieved using a 1.19 mm sieve, followed by moist heat sterilization (121 캜, 30 minutes, 3 times) and drying in a 75 캜 drier for 24 hours to prepare sterilized soil of 50 g. The soil was sprayed with 2% (w / w) of diesel and cultivated in TSB (tryptic bean medium) for 24 hours. Pseudomonas The strain SDY3 was centrifuged to obtain microbial cells, which were suspended in a minimal nutrient medium (MSM) and mixed with the soil so that the soil water holding capacity was 40%. For the growth of the strain, 0.1 g CaCO 3 per 10 g soil was added and mixed. This experiment was carried out for 28 days, and the experimental results for diesel decomposition with the incubation time (days) are shown in Table 3 below.
상기 표 3에서, 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주의 실제 토양에서의 유류분해능은 28일 이내에 90%이상으로, 빠른 분해속도와 우수한 분해능이 나타난다.In Table 3, Pseudomonas sp. sp . ) The SDY3 strain has an oil degradation rate of 90% or more within 28 days in the actual soil, showing a rapid degradation rate and excellent resolution.
<< 실험예Experimental Example 3> 슈도모나스 속( 3> Pseudomonas sp. PseudomonasPseudomonas spsp .. ) ) SDY3SDY3 균주의 방향족 탄화수소 분해능 측정 Determination of Aromatic Hydrocarbon Resolution Ability of Strain
캡 튜브(Cap Tube)에 2ml의 최소 영양배지와 탄소원으로 아세토니트릴 내 폴리방향족 탄화수소(PAH:Poly Aromatic Hydrocarbon)혼합물을 최종 10ppm이 되도록 첨가하였다. 상기 폴리방향족 탄화수소(PAH)는 플루오렌(Fluorene), 페난트렌(Phenanthrene) 및 피렌(Pyrene)의 1:1:1(v/v) 혼합물로 이루어졌다. 상기 배양액에 28℃ TSB(트립틱 콩 배지)에서 12시간 동안 배양한 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주를 2%(v/v)로 접종하여 10일간 배양하였다. 배양온도는 28℃, 교반속도는 150rpm으로 하였다. To the cap tube was added 2 ml of the minimal nutrient medium and a mixture of polyaromatic hydrocarbon (PAH) in acetonitrile as the carbon source to a final concentration of 10 ppm. The polyaromatic hydrocarbons (PAH) consisted of a 1: 1: 1 (v / v) mixture of Fluorene, Phenanthrene and Pyrene. At 28 ℃ TSB (Tryptic soy medium) in the culture medium for 12 hours, the cultured Pseudomonas species (Pseudomonas sp . ) SDY3 strain was inoculated with 2% (v / v) and cultured for 10 days. The culture temperature was 28 ° C and the stirring speed was 150 rpm.
잔류한 PAH의 분석은 배양액 2ml에 에탄올 8ml를 넣어 잔류 PAH를 추출하고, 이를 10,000g로 원심분리하여 상층액을 분석함으로써 수행한다. 정량분석은 HPLC 시스템(Thermal Separation Products, U.S.A)을 이용하였다. 칼럼은 C18 비닥(Vydac)칼럼을 사용하였고, 분석조건은 이동상: 75% 아세토니트릴, 유속: 1ml/min, 감지기: 254nm 에서의 UV/VIS 감지기; 로 하였다.The remaining PAH is analyzed by extracting the residual PAH by adding 8 ml of ethanol to 2 ml of the culture solution, and centrifuging it to 10,000 g to analyze the supernatant. Quantitative analysis was performed using an HPLC system (Thermal Separation Products, USA). The column used was a C18 Vydac column, the analysis conditions were mobile phase: 75% acetonitrile, flow rate: 1 ml / min, detector: UV / VIS detector at 254 nm; Respectively.
상기 분석의 결과는 하기 표 4와 같다.The results of the above analysis are shown in Table 4 below.
상기 표 4에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 신규한 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주의 탄화수소 분해능은 플루오렌 분해능이 28.8%로 가장 높고, 전반적으로 방향족 탄화수소의 탄소수가 많을수록 분해능이 감소하였다.As shown in Table 4, the novel Pseudomonas sp. sp . ) Hydrolysis ability of SDY3 strain was highest at 28.8% of fluorene decomposition ability, and resolution was decreased as the carbon number of aromatic hydrocarbon was larger overall.
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 유류오염토양, 특히, 디젤 오염 토양에서 탁월한 유류 분해능을 보여준다. As it described above, according to the present invention Pseudomonas species (Pseudomonas sp . ) The SDY3 strain shows excellent oil resolution in oil contaminated soils, especially diesel contaminated soils.
본 발명의 슈도모나스 속(Pseudomonas sp .) SDY3 균주는 고농도의 2%(v/v)디젤에서도 뛰어난 디젤 분해능을 보이며, 그 분해속도가 우수하여 경제적이고 효율적으로 토양을 정화하는데 이용될 수 있다. 또한, 플루오렌과 같은 방향족 탄화수소의 분해 능력도 나타내고 있어, 유류 오염 토양 및 유류와 유기 화합물의 복합적인 오염 토양 등의 정화에 다방면으로 이용될 가능성이 크다고 하겠다.Pseudomonas species of this invention (Pseudomonas sp . ) The SDY3 strain exhibits excellent diesel resolution even at high concentration of 2% (v / v) diesel and can be used to purify the soil economically and efficiently because of its excellent decomposition rate. It also shows the decomposition ability of aromatic hydrocarbons such as fluorene, and is likely to be widely used for the purification of polluted soils including oil contaminated soil and a complex contaminated soil with oil and organic compounds.
Claims (7)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020150088311A KR101710044B1 (en) | 2015-06-22 | 2015-06-22 | Pseudomonas sp. sdy3 being abled to resolve oil and oil degradation method using the same |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020150088311A KR101710044B1 (en) | 2015-06-22 | 2015-06-22 | Pseudomonas sp. sdy3 being abled to resolve oil and oil degradation method using the same |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20160150391A true KR20160150391A (en) | 2016-12-30 |
KR101710044B1 KR101710044B1 (en) | 2017-02-24 |
Family
ID=57737149
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020150088311A KR101710044B1 (en) | 2015-06-22 | 2015-06-22 | Pseudomonas sp. sdy3 being abled to resolve oil and oil degradation method using the same |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR101710044B1 (en) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108504591A (en) * | 2018-03-23 | 2018-09-07 | 辽宁大学 | The composite bacteria agent of polycyclic aromatic hydrocarbon pollutant and its application in a kind of degradation freeze-thaw soils |
KR101896428B1 (en) * | 2017-07-12 | 2018-09-10 | (주)티에스케이워터 | Pseudomonas aeruginosa TSKW-S5 strain having oil resolution and oil-releasing ability, a method for purifying contaminated soil using the same, and a method for selecting the strain |
KR20220159775A (en) * | 2021-05-26 | 2022-12-05 | 이화여자대학교 산학협력단 | Novel Pseudomonas sp. strain having nitrous oxide-reducing ability, and uses thereof |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101816087B1 (en) | 2017-06-02 | 2018-01-08 | (주)티에스케이워터 | Pseudomonas aeruginosa TSKW-U6 strain having oil resolution ability, a method of oil degradation using the same, and a method of selecting the strain |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0723773A (en) * | 1992-09-04 | 1995-01-27 | Kaiyo Bio Technol Kenkyusho:Kk | New microorganism having hydrocarbon-decomposition capability and method for treating marine pollution |
KR20010004646A (en) * | 1999-06-29 | 2001-01-15 | 허태학 | Complex strain for disintegrating kerosene and its making method |
KR20010004647A (en) * | 1999-06-29 | 2001-01-15 | 허태학 | Complex strain for disintegrating diesel oil and its making method |
KR20130065453A (en) * | 2011-12-09 | 2013-06-19 | 그린바이로 주식회사 | Pseudomonas sp. nr1 and oil degradation method using the same |
-
2015
- 2015-06-22 KR KR1020150088311A patent/KR101710044B1/en active IP Right Grant
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0723773A (en) * | 1992-09-04 | 1995-01-27 | Kaiyo Bio Technol Kenkyusho:Kk | New microorganism having hydrocarbon-decomposition capability and method for treating marine pollution |
KR20010004646A (en) * | 1999-06-29 | 2001-01-15 | 허태학 | Complex strain for disintegrating kerosene and its making method |
KR20010004647A (en) * | 1999-06-29 | 2001-01-15 | 허태학 | Complex strain for disintegrating diesel oil and its making method |
KR20130065453A (en) * | 2011-12-09 | 2013-06-19 | 그린바이로 주식회사 | Pseudomonas sp. nr1 and oil degradation method using the same |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101896428B1 (en) * | 2017-07-12 | 2018-09-10 | (주)티에스케이워터 | Pseudomonas aeruginosa TSKW-S5 strain having oil resolution and oil-releasing ability, a method for purifying contaminated soil using the same, and a method for selecting the strain |
CN108504591A (en) * | 2018-03-23 | 2018-09-07 | 辽宁大学 | The composite bacteria agent of polycyclic aromatic hydrocarbon pollutant and its application in a kind of degradation freeze-thaw soils |
CN108504591B (en) * | 2018-03-23 | 2021-06-25 | 辽宁大学 | Complex microbial inoculant for degrading polycyclic aromatic hydrocarbon pollutants in freeze-thaw soil and application thereof |
KR20220159775A (en) * | 2021-05-26 | 2022-12-05 | 이화여자대학교 산학협력단 | Novel Pseudomonas sp. strain having nitrous oxide-reducing ability, and uses thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR101710044B1 (en) | 2017-02-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Das et al. | Crude petroleum-oil biodegradation efficiency of Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa strains isolated from a petroleum-oil contaminated soil from North-East India | |
Vanishree et al. | Biodegradation of petrol using the fungus Penicillium sp | |
KR101710044B1 (en) | Pseudomonas sp. sdy3 being abled to resolve oil and oil degradation method using the same | |
Singh et al. | Biodegradation of BTEX (benzene, toluene, ethyl benzene and xylene) compounds by bacterial strain under aerobic conditions | |
Obafemi et al. | Biodegradation of crude petroleum by bacterial consortia from oil-contaminated soils in Ota, Ogun State, South-Western, Nigeria | |
KR101300348B1 (en) | Liquid composition of microorganisms for bioremediation of hydrocarbon-contaminated soil, method of preparing the same, and Bioremediation using the same | |
Dai et al. | Bioremediation of heavy oil contaminated intertidal zones by immobilized bacterial consortium | |
KR100679420B1 (en) | Degrading bacteria of polycyclic aromatic | |
Mbachu et al. | Isolation and characterization of hydrocarbon degrading fungi from used (spent) engine oil polluted soil and their use for polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) degradation | |
Ishaya et al. | Degradation of used engine oil by alcaligenes sp. strain isolated from oil contaminated site: isolation, identification, and optimization of the growth parameters | |
Shaieb et al. | Studies on crude oil degrading bacteria isolated from Libyan desert | |
Baruah et al. | Native hydrocarbonoclastic bacteria and hydrocarbon mineralization processes | |
Tripathi et al. | Assessing the half-life and degradation kinetics of aliphatic and aromatic hydrocarbons by bacteria isolated from crude oil contaminated soil | |
KR101332347B1 (en) | Pseudomonas sp. nr1 and oil degradation method using the same | |
Benchouk et al. | Petroleum-hydrocarbons biodegradation by Pseudomonas strains isolated from hydrocarbon-contaminated soil | |
KR100389689B1 (en) | Acinetobacter calcoaceticus HS1 and Oil Degradation Method Using The Same | |
KR101896428B1 (en) | Pseudomonas aeruginosa TSKW-S5 strain having oil resolution and oil-releasing ability, a method for purifying contaminated soil using the same, and a method for selecting the strain | |
KR20130100532A (en) | Oil-degrading pseudomonas nitrorducens-octo1 and method for oil degradation using the same | |
JP2009166027A (en) | Method cleaning soil contaminated with petroleum | |
CN104046580A (en) | Sphingobacterium strain for degrading polycyclic aromatic hydrocarbon organic pollutant and application thereof | |
KR20090030897A (en) | Liquid composition of microorganisms for bioremediation of hydrocarbon-contaminated soil, method of preparing the same, and bioremediation using the same | |
KR101816087B1 (en) | Pseudomonas aeruginosa TSKW-U6 strain having oil resolution ability, a method of oil degradation using the same, and a method of selecting the strain | |
JP2017176899A (en) | Decomposition treatment method of oil | |
KR100641834B1 (en) | A novel microorganism capable of decomposing petroleum and a method for decomposing petroleum therewith | |
Badis | Biodegradation of diesel and isomerate by pseudomonas aeruginosa and Brevibacillus laterosporus isolated from hydrocarbons contaminated soil |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant |