KR20160085235A - The Functional Health Ice Cream For Improving The Intestine Function and Environment and Enhencing Immunity - Google Patents

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KR20160085235A
KR20160085235A KR1020160081000A KR20160081000A KR20160085235A KR 20160085235 A KR20160085235 A KR 20160085235A KR 1020160081000 A KR1020160081000 A KR 1020160081000A KR 20160081000 A KR20160081000 A KR 20160081000A KR 20160085235 A KR20160085235 A KR 20160085235A
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Abstract

The present invention relates to a nano-type kimchi lactic acid bacteria, and more specifically, to L. plantarum, which is isolated from kimchi and effective at improving intestinal health. According to the present invention, the nano-type kimchi lactic acid bacteria serves to suppress putrefactive microorganisms inside the intestines and enhances the immune function, thereby improving intestinal health, and preventing and treating colonic diseases including colitis and colon cancer. Also, the uniform size of constituent particles of the present lactic acid bacteria serves to facilitate absorption inside the intestines, and thus the degree to which intestinal health improves is proportional to the increase in concentration of the lactic acid bacteria. Therefore, the present nano-type kimchi lactic acid bacteria can serve as a food additive that is capable of imparting the benefit of lactic acid bacteria to a food product without altering the taste and aroma of the food product, and in which the present lactic acid bacteria is highly heat-resistant and thus can be added to thermally processed food products and still provide the benefit thereto.

Description

면역증진 및 장내환경개선용 건강기능성 아이스크림{The Functional Health Ice Cream For Improving The Intestine Function and Environment and Enhencing Immunity}The Functional Health Ice Cream For Improving The Intestine Function and Environment and Enhencing Immunity}

본 발명은 나노형 김치 유산균에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 장내 환경 개선 효과가 뛰어난 김치로부터 분리된 락토바실러스 플란타룸 (L. plantarum)유산균에 관한 것이다.The present invention relates to nano-type kimchi lactic acid bacteria, and more specifically, to a Lactobacillus plantarum (L. plantarum) lactic acid bacteria isolated from kimchi having excellent intestinal environment improvement effect.

유산균(lactic acid bacteria, lactobacillus)은 글루코오스 등 당류를 분해하여 젖산을 생성하는 세균으로 젖산균이라고도 불리며, 젖산발효에 의해 생성되는 젖산에 의해서 병원균과 유해세균의 생육이 저지되는 성질이 있어 유제품·김치류·양조식품 등의 식품제조에 이용하고 있다. 또한, 유산균은 포유류의 장내에 서식하여 잡균에 의한 이상발효를 방지하여 정장제(整腸劑)로도 이용되고 있다. 상기 유산균은 그람양성균으로, 통성혐기성 또는 혐기성을 성질을 지니며, 락토바실러스 속과 스트렙토코쿠스 속에 여러 종류가 알려져 있다. Lactic acid bacteria (lactic acid bacteria, lactobacillus) are bacteria that produce lactic acid by decomposing sugars such as glucose, and are also called lactic acid bacteria, and have the property of inhibiting the growth of pathogens and harmful bacteria by lactic acid produced by lactic acid fermentation. It is used in food manufacturing such as brewed food. In addition, lactic acid bacteria live in the intestines of mammals and are used as intestinal agents by preventing abnormal fermentation by various bacteria. The lactic acid bacteria are Gram-positive bacteria, and have an anaerobic or anaerobic property, and several types are known in the genus Lactobacillus and the genus Streptococcus.

김치는 유산균에 의하여 발효되는 한국 전통 식품으로, 김치에서 분류된 유산균으로는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides), 류코노스톡 덱스트라니쿰(Leuconostoc dextranicum), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 페디오코코스 펜토사쿠스(Pediococcus pentosacues) 등이 있다. Kimchi is a Korean traditional food fermented by lactic acid bacteria, and the lactic acid bacteria classified in kimchi include Leukonostoc mesenteroides, Leukonostoc dextranicum, Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum, Pediococcus pentosacues, and the like.

김치에서 분리한 유산균에 관한 특허로는 항균 펩타이드 물질을 생산하는 유산균 락토코커스 락티스 BH5 (대한민국 특허 제413335호), 항산화 활성이 우수한 락토바실러스 플랜타럼 NC (대한민국 특허 제771209호), 박테이로신을 생산하는 유산균주 (대한민국 특허 제1068531호) 등이 있다.Patents related to lactic acid bacteria isolated from kimchi include Lactococcus lactis BH5 (Korean Patent No. 413335), which produces antibacterial peptide substances, Lactobacillus Plantarum NC (Korean Patent No. 771209), which has excellent antioxidant activity, and Bactero. There are lactic acid strains that produce gods (Korean Patent No. 1068531).

그러나 종래 공개된 김치 유산균은 모두 생균제(Probiotics)에 관한 것으로서, 식품으로 섭취 시 장내 환경에서 생균수가 급격히 감소할 뿐만 아니라, 장내에서 흡수가 이뤄지지 않아 고유한 효과가 떨어지는 문제점을 갖고 있으며, 일정 부피의 배양액 내에서 생육할 수 있는 균주가 제한되어 있어, 1일 섭취량이 제한된다는 문제가 있었다.However, the conventionally disclosed kimchi lactic acid bacteria are all related to probiotics, and when ingested as food, the number of viable bacteria in the intestinal environment rapidly decreases, and there is a problem that the intrinsic effect is inferior because it is not absorbed in the intestine. Since strains that can grow in the culture medium are limited, there is a problem that the daily intake is limited.

이에, 본 발명의 목적은 김치로부터 분리한 유산균 중 장내 환경 개선 효과가 가장 뛰어난 유산균을 동정하고, 이를 나노형 김치 유산균으로 제공함으로써 상기와 같은 문제점을 해결하는 데 있다.Accordingly, an object of the present invention is to solve the above problems by identifying the lactic acid bacteria having the most excellent effect of improving the intestinal environment among lactic acid bacteria isolated from kimchi, and providing them as nano-type kimchi lactic acid bacteria.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 김치로부터 분리한 신규한 락토바실러스 플란타룸 균주를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a novel Lactobacillus plantarum strain isolated from kimchi.

또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 플란타룸 균주 또는 이의 배양상등액을 유효성분으로 포함하는 식품 첨가제를 제공한다.In addition, the present invention provides a food additive comprising the Lactobacillus plantarum strain or a culture supernatant thereof as an active ingredient.

또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 플란타룸 균주 또는 이의 배양상등액을 유효성분으로 포함하는 대장질환의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of colon diseases comprising the Lactobacillus plantarum strain or a culture supernatant thereof as an active ingredient.

또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 플란타룸 균주로부터 나노형 김치 유산균을 제조하는 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method of producing a nano-type kimchi lactic acid bacteria from the Lactobacillus plantarum strain.

또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 플란타룸 균주로 제조한 나노형 김치 유산균을 제공한다.In addition, the present invention provides a nano-type kimchi lactic acid bacteria prepared with the Lactobacillus plantarum strain.

또한, 본 발명은 상기 나노형 김치 유산균을 포함하는 식품 첨가제 또는 발효식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a food additive or fermented food containing the nano-type kimchi lactic acid bacteria.

또한, 본 발명은 상기 나노형 김치 유산균을 포함하는 대장질환 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing and treating colon diseases including the nano-type kimchi lactic acid bacteria.

또한, 본 발명은 상기 나노형 김치 유산균을 포함하는 대장질환 예방 및 치료용 건강기능식품 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food composition for preventing and treating colon diseases including the nano-type kimchi lactic acid bacteria.

본 발명에 따른 나노형 김치 유산균은 장내 부패균의 억제효과 및 면역기능 활성화를 통한 장내 환경 개선 효과가 있으며, 대장염, 대장암을 포함하는 대장 질환의 예방 및 치료 효과가 우수하다. 또한 장내 흡수가 용이하도록 균일한 입자로 구성되어 있어, 농도에 따라 장내 환경 개선 효과가 비례적으로 증가하는 특징을 갖는다.The nano-type kimchi lactic acid bacteria according to the present invention has an inhibitory effect of intestinal decay bacteria and an effect of improving the intestinal environment through activation of immune functions, and has excellent preventive and therapeutic effects of colon diseases including colitis and colon cancer. In addition, since it is composed of uniform particles to facilitate absorption in the intestine, the effect of improving the intestinal environment increases proportionally depending on the concentration.

또한, 본 발명에 따른 나노형 김치 유산균은 식품 첨가제로서 식품 본연의 맛과 향을 전혀 해치지 않고, 유산균이 갖는 효과를 그대로 제공할 수 있으며, 내열성이 강하여, 열을 가하는 식품에 첨가여도 그 효과가 유지되는 특징이 있다.In addition, the nano-type kimchi lactic acid bacteria according to the present invention is a food additive that does not harm the natural taste and aroma of food, and can provide the effect of the lactic acid bacteria as it is. There are features that are maintained.

도 1은 본 발명의 김치 유산균의 (a) 콜로니 관찰 이미지 및 (b) 그람 염색 결과 이미지이다.
도 2는 본 발명의 김치 유산균(SIID11558)의 16S rRNA 서열을 분석하여 나타낸 분자계통도이다 (왼쪽 아래의 선은 스케일바, 계통기 분기에 위치하는 숫자는 부트스트렙 값, 주명 말미의 T는 그 종의 기준주(Type strain)를 나타낸다.)
도 3은 본 발명의 나노형 김치 유산균 nF1의 제조 공정도이다.
도 4는 본 발명의 김치 유산균을 나노화 처리 전후로 관찰한 현미경 사진이다. (a) 나노화 처리 전 : 막대모양, (b) 나노화 처리 후 : 구형.
도 5는 본 발명의 실험 모델의 체중변화를 측정한 결과이다.
도 6(a)는 nF1 처리를 한 대장염 유도 마우스의 대장 길이 변화, (b)는 nF1 파우더를 첨가한 김치를 투여한 대장염 유도 마우스의 대장 길이 변화를 나타내는 그래프이다. (a~d는 Duncan's multiple range tests에 따른 유의적인 차이(p < 0.05)를 의미함)
도 7은 대장 조직 내 병리학적 관찰 결과를 나타내는 사진이다.
도 8은 nF1 처리를 한 대장염 유도 마우스의 염증성 사이토카인 발현량 변화를 나타내는 그래프이다. (a~d는 Duncan's multiple range tests에 따른 유의적인 차이(p < 0.05)를 의미함)
도 9는 nF1 파우더를 첨가한 김치를 투여한 대장염 유도 마우스의 염증성 사이토카인 발현량 변화를 나타내는 그래프이다. (a~d는 Duncan's multiple range tests에 따른 유의적인 차이(p < 0.05)를 의미함)
도 10은 nF1 처리를 한 대장염 유도 마우스의 염증성 사이토카인 mRNA 발현량 변화를 나타내는 그래프이다. (a~d는 Duncan's multiple range tests에 따른 유의적인 차이(p < 0.05)를 의미함)
도 11은 nF1 파우더를 첨가한 김치를 투여한 대장염 유도 마우스의 염증성 사이토카인 mRNA 발현량 변화를 나타내는 그래프이다. (a~d는 Duncan's multiple range tests에 따른 유의적인 차이(p < 0.05)를 의미함)
도 12는 마우스의 대장 내 염증 관련 유전자(iNOS, COX-2)의 mRNA 발현 수준을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 13은 대장염 유도 마우스의 장내 유산균 수를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 14는 대장염 유도 마우스의 장내 유해효소 활성을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.1 is a (a) colony observation image and (b) Gram staining result image of the kimchi lactic acid bacteria of the present invention.
Figure 2 is a molecular tree diagram showing the analysis of the 16S rRNA sequence of the kimchi lactic acid bacteria (SIID11558) of the present invention (the lower left line is the scale bar, the number located at the branch of the phylogeny is the bootstrap value, and T at the end of the main name is the species It represents the type strain of.)
Figure 3 is a manufacturing process chart of the nano-type kimchi lactic acid bacteria nF1 of the present invention.
Figure 4 is a microscopic photograph of the kimchi lactic acid bacteria of the present invention observed before and after nano-processing. (a) Before nano-processing: rod shape, (b) After nano-processing: spherical.
5 is a result of measuring the weight change of the experimental model of the present invention.
6(a) is a graph showing the change in the length of the colon of the colitis-induced mice treated with nF1, and (b) is a graph showing the change in the length of the colon of the colitis-induced mice to which kimchi to which nF1 powder was added. (a~d mean significant difference (p <0.05) according to Duncan's multiple range tests)
7 is a photograph showing the results of pathological observation in colon tissue.
8 is a graph showing changes in the expression level of inflammatory cytokines in colitis-induced mice treated with nF1. (a~d mean significant difference (p <0.05) according to Duncan's multiple range tests)
9 is a graph showing changes in the expression level of inflammatory cytokines in colitis-induced mice administered kimchi to which nF1 powder was added. (a~d mean significant difference (p <0.05) according to Duncan's multiple range tests)
10 is a graph showing changes in the expression level of inflammatory cytokine mRNA in colitis-induced mice treated with nF1. (a~d mean significant difference (p <0.05) according to Duncan's multiple range tests)
11 is a graph showing changes in the expression level of inflammatory cytokine mRNA in colitis-induced mice administered kimchi to which nF1 powder was added. (a~d mean significant difference (p <0.05) according to Duncan's multiple range tests)
12 is a graph showing the results of measuring the mRNA expression level of inflammation-related genes (iNOS, COX-2) in the colon of the mouse.
13 is a graph showing the results of measuring the number of intestinal lactic acid bacteria in a colitis-induced mouse.
14 is a graph showing the results of measuring the intestinal harmful enzyme activity of colitis-induced mice.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 김치로부터 분리한 신규한 락토바실러스 플란타룸 균주를 제공한다. The present invention provides a novel Lactobacillus plantarum strain isolated from kimchi.

본 발명자들은 김치에서 유산간균을 분리하여 장내 환경 개성 효과가 가장 우수한 미생물을 선별하였으며, 이를 동정한 결과 그람 양성 및 간균 형태의 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillusplantarum)인 것으로 밝혀졌다. 상기 신균주는 일본 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 특허 미생물 기탁 센터(National Institute of Technology and Evaluation, NITE; International Patent Organism Depositary, IPOD)에 2012년 11월 8일자로 "nF1"으로 기탁하였다 (NITE P-1462). 본 균주는 장내 부패균의 억제효과 및 면역기능 활성화를 통한 장내 환경 개선 효과가 있으며, 대장염, 대장암을 포함하는 대장 질환의 예방 및 치료 효과를 가지고 있음을 확인하였다.The present inventors have been found that by separating the lactic acid bacilli from Kimchi intestinal environment unique effect that was selected the best microorganism is a result Gram-positive bacillus and forms of Lactobacillus Planta room (Lactobacillusplantarum) identified them. Shin Kyunju was deposited as "nF1" on November 8, 2012 to the National Institute of Technology and Evaluation (NITE; International Patent Organism Depositary, IPOD), a Japanese independent administrative corporation (NITE P-1462). It was confirmed that this strain has an inhibitory effect of intestinal spoilage bacteria and an effect of improving the intestinal environment through activation of immune function, and has the effect of preventing and treating colon diseases including colitis and colon cancer.

또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 플란타룸 균주 또는 이의 배양상등액을 유효성분으로 포함하는 식품 첨가제를 제공한다. In addition, the present invention provides a food additive comprising the Lactobacillus plantarum strain or a culture supernatant thereof as an active ingredient.

본 발명의 김치 유산균 또는 이의 배양상등액을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 김치 유래 유산균을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 상기 락토바실러스 플란타룸 균주 또는 이들의 배양상등액을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 과자류, 스낵류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함하는 유제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 건강음료, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등을 포함할 수 있으며, 통상적인 의미에서 건강식품을 모두 포함한다.When the kimchi lactic acid bacteria or the culture supernatant thereof of the present invention is used as a food additive, the kimchi-derived lactic acid bacteria may be added as it is or may be used with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method. The mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined according to the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment). There is no particular limitation on the type of the food. Examples of foods to which the Lactobacillus plantarum strain of the present invention or the culture supernatant thereof can be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, confectionery, snacks, pizza, ramen, other noodles, gums, ice cream. It may include dairy products, various soups, beverages, teas, drinks, health drinks, alcoholic beverages, vitamin complexes, etc., and includes all health foods in the usual sense.

또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 플란타룸 균주 또는 이의 배양상등액을 유효성분으로 포함하는 대장질환의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of colon diseases comprising the Lactobacillus plantarum strain or a culture supernatant thereof as an active ingredient.

상기 대장질환은 대장염 또는 대장암을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The colon disease may include colitis or colon cancer, but is not limited thereto.

본 발명의 락토바실러스 플란타룸 균주 또는 이의 배양상등액에는 유효성분으로 포함하는 대장질환의 예방 및 치료용 약학 조성물에는 임상 투여 시 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며, 주성분인 상기 락토바실러스 플란타룸 균주 또는 이의 배양상등액 유효량에 1종 또는 2종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 통상적인 담체 또는 첨가제를 선택하여 통상적인 약제학적 제형의 조성물로 제조할 수 있다.The Lactobacillus plantarum strain or its culture supernatant of the present invention can be administered orally or parenterally in the pharmaceutical composition for the prevention and treatment of colon disease, which is included as an active ingredient, and is the main component, the Lactobacillus plantarum strain. Alternatively, one or two or more pharmaceutically acceptable conventional carriers or additives may be selected in an effective amount of the culture supernatant thereof to prepare a composition of a conventional pharmaceutical formulation.

담체는 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제, 방부제 중에서 1종 또는 2종 이상을 선택하여 사용할 수 있으며, 첨가제로는 향료, 비타민류, 항산화제 중에서 1종 또는 2종 이상을 선택하여 사용할 수 있다. The carrier can be used by selecting one or two or more of diluents, lubricants, binders, disintegrants, sweeteners, stabilizers, and preservatives, and one or two or more of flavors, vitamins, and antioxidants can be selected as additives. Can be used.

본 발명에 있어서, 담체 및 첨가제는 약제학적으로 허용 가능한 것은 모두 사용이 가능하며, 구체적으로는 희석제로는 유당, 옥수수 전분, 콩기름, 미결정 셀룰로오스 또는 만니톨이 좋고, 활택제로는 스테아린산 마그네슘 또는 탈크가 바람직하며, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈(PVP) 또는 하이드록시프로필셀룰로오스(HPC) 중에서 선택함이 바람직하다. 또한, 붕해제로는 카르복시메칠셀룰로오스칼슘(Ca-CMC), 전분글리콜산나트륨, 폴라크릴린칼륨 또는 크로스포비돈 중에서 선택함이 바람직하고, 감미제로는 백당, 과당, 소르비톨 또는 아스파탐 중에서 선택되고, 안정제로는 카르복시메칠셀룰로오스나트륨(Ma-CMC), 베타-싸이크로덱스트린, 백납 또는 산탄검 중에서 선택되며, 방부제로는 파라옥시안식향산메칠, 파라옥시안식향산프로필, 또는 소르빈산칼륨 중에서 선택하는 것이 바람직하다.In the present invention, all pharmaceutically acceptable carriers and additives can be used, and specifically, lactose, corn starch, soybean oil, microcrystalline cellulose, or mannitol is good as a diluent, and magnesium stearate or talc is preferable as a lubricant. And, the binder is preferably selected from polyvinylpyrrolidone (PVP) or hydroxypropyl cellulose (HPC). In addition, the disintegrant is preferably selected from calcium carboxymethylcellulose (Ca-CMC), sodium starch glycolate, potassium polyacrylic or crospovidone, and the sweetener is selected from sucrose, fructose, sorbitol or aspartame, and is stable. Zero is selected from sodium carboxymethylcellulose (Ma-CMC), beta-cyclodextrin, white lead or xanthan gum, and as the preservative, it is preferable to select from methyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, or potassium sorbate.

본 발명의 약학 조성물은 대장 질환을 효율적으로 치료 또는 예방하는 목적으로 사용되는 것으로 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바 없으며, 음료, 파우더, 캅셀, 연질캅셀, 정제, 껌, 점착 타입 액제 조성물로 사용될 수 있으며, 로션, 연고, 겔, 크림, 패치 또는 분무제와 같은 경피 투여형 제형으로 사용할 수 있고, 탕제, 환제, 정제, 산제, 과립제 등의 제제로 사용할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention is used for the purpose of efficiently treating or preventing colon diseases, and is not particularly limited in its formulation, and can be used as a beverage, powder, capsule, soft capsule, tablet, gum, adhesive type liquid composition. In addition, it can be used in transdermal dosage forms such as lotions, ointments, gels, creams, patches or sprays, and can be used as preparations such as baths, pills, tablets, powders, and granules.

본 발명의 약학 조성물에는 상기 주요성분 이외에도 보조성분으로 비타민 B, C, E나 베타카로틴, Ca, Mg, Zn 등의 미네랄 함유 화합물이나 레시틴 등의 인지질 또는 말톨, 올리고당, 아미노산 등의 화합물을 사용할 수 있으며, 이 중에서도 비타민 C, E나 베타카로틴, 말톨 등 중에서 2 내지 3 성분을 혼합하여 사용하면 생체 활성 효과를 보강할 수 있기 때문에 더욱 바람직하다.In the pharmaceutical composition of the present invention, in addition to the above main ingredients, as auxiliary ingredients, mineral-containing compounds such as vitamins B, C, E, beta-carotene, Ca, Mg, Zn, phospholipids such as lecithin, or compounds such as maltol, oligosaccharides, amino acids, etc. can be used. Among these, a mixture of two to three components among vitamins C and E, beta-carotene, maltol, etc. is more preferable because it can reinforce the bioactive effect.

또한, 상기 성분 이외에도 공지의 첨가제로서 미각을 돋구기 위하여 매실, 레몬향, 파인애플향 또는 허브향과 같은 천연향료나 천연과즙, 클로르필린(Chlorophyllin), 플라보노이드(Flovonoid) 등의 천연색소 및 감미 성분인 과당, 벌꿀, 당알코올, 설탕 등과 구연산, 구연산나트륨 같은 산미제를 혼합하여 사용할 수 있다. In addition, in addition to the above ingredients, natural flavors such as plum, lemon, pineapple or herbal flavors, natural fruit juices, and natural pigments such as chlorophyllin and flavonoids, as well as sweetening components, in order to enhance taste as well-known additives. , Honey, sugar alcohol, sugar, etc. can be used by mixing acidulants such as citric acid and sodium citrate.

또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 플란타룸 균주로부터 나노형 김치 유산균을 제조하는 방법을 제공한다. In addition, the present invention provides a method of producing a nano-type kimchi lactic acid bacteria from the Lactobacillus plantarum strain.

또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 플란타룸 균주로 제조한 나노형 김치 유산균을 제공한다.In addition, the present invention provides a nano-type kimchi lactic acid bacteria prepared with the Lactobacillus plantarum strain.

본 발명에 따른 나노형 김치 유산균의 균체는 입도 분포에서의 최빈값(입도)이 1.0 ㎛ 이하인 것이며, 바람직하게는 0.5~1.0 ㎛인 것이다.The microbial cells of the nano-type kimchi lactic acid bacteria according to the present invention have a mode (particle size) of 1.0 µm or less in particle size distribution, and preferably 0.5 to 1.0 µm.

본 발명에서, "입도 분포에서의 최빈값"은 균의 크기를 나타내는 지표가 되는 값으로, 균체의 입자직경을 측정했을 때의 입도 분포에서의 상대빈도가 최대가 되는 입자직경을 말한다. In the present invention, the "mode value in particle size distribution" is a value that serves as an index indicating the size of the bacteria, and refers to the particle diameter at which the relative frequency in the particle size distribution when the particle diameter of the cells is measured is the maximum.

본 발명의 나노형 김치 유산균의 균체의 형태는 생균 또는 사균 모두 가능하지만, 생균의 경우 제품 제조 이후의 배송 또는 진열 시에 형태변화를 일으킬 가능성이 있기 때문에, 그 이상 형태 변화를 일으키지 않는 사균인 것이 바람직하다.The shape of the cells of the nano-type kimchi lactic acid bacteria of the present invention can be either live or dead, but in the case of live bacteria, since there is a possibility of causing a change in shape during delivery or display after product manufacture, it is a dead bacteria that does not cause any further change in shape. desirable.

유산균은 배양시의 생육 환경이 열악해지면, 그 스트레스로 형태가 변화되는 것으로 알려져 있다. 그래서 본 발명에서는, 배양 및 가공조건을 제어함으로써 유산균의 형태가 일정하게 되도록 유지하면서 유산균을 증식시켜, 상기한 입도 분포에서의 최빈값을 갖는 나노형 김치 유산균을 제조한다. It is known that lactic acid bacteria change their shape due to the stress when the growing environment during cultivation becomes poor. Therefore, in the present invention, by controlling the culture and processing conditions, the lactic acid bacteria are grown while maintaining the morphology of the lactic acid bacteria to be constant, thereby producing a nano-type kimchi lactic acid bacteria having a mode in the particle size distribution described above.

또한, 본 발명의 "나노형 김치 유산균의 균체"는 분산 처리된 것이 바람직하다. In addition, the "nano-type kimchi lactic acid bacteria cells" of the present invention is preferably dispersed.

분산 처리의 수법으로서는, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들면, 균의 배양액을 습식으로 150 kgf/cm2(1.5 MPa)정도의 고압 호모지나이저로 분산하는 방법을 들 수 있다. The method of the dispersion treatment is not particularly limited, for example, a method of dispersing the culture medium of bacteria in a wet manner with a high-pressure homogenizer of about 150 kgf/cm 2 (1.5 MPa).

이 경우, 미리 공지의 분산제 또는 부형제를 배양액에 첨가해 두는 것이 바람직하며, 이것에 의해, 균체의 재응집을 효율적으로 방지할 수 있다. 사용하는 분산제 및 부형제의 첨가량은 균체의 성상에 따라 변화되지만, 질량 환산으로 균체에 대하여 1∼100배량이 바람직하고, 2∼20배량이 보다 바람직하다. 적합한 분산제 및 부형제로서는 트레할로스, 덱스트린, 스킴 밀크 등을 들 수 있다. In this case, it is preferable to add a known dispersant or excipient to the culture solution in advance, whereby the reaggregation of the cells can be efficiently prevented. The amount of the dispersant and excipient to be added varies depending on the properties of the cells, but in terms of mass, the amount is preferably 1 to 100 times, more preferably 2 to 20 times, with respect to the cells. Suitable dispersants and excipients include trehalose, dextrin, skim milk, and the like.

또한, 본 발명의 "나노형 김치 유산균의 균체"를 최종적으로 분말로서 얻기 위해서는, 배양액에 공지의 분산제·부형제 등을 첨가하여 균체가 재응집하지 않도록 분산 처리한 후, 동결건조나 분무건조 하는 것이 바람직하다. 이에 따라 물에 대한 분산성이 우수한 균체 분말을 얻을 수 있다. In addition, in order to finally obtain the "nano-type kimchi lactic acid bacteria cells" of the present invention as a powder, it is recommended to add a well-known dispersant or excipient to the culture solution and perform dispersion treatment so that the cells do not re-aggregate, and then freeze-drying or spray drying. desirable. Accordingly, it is possible to obtain a microbial powder having excellent dispersibility in water.

이상에서 설명한 본 발명의 나노형 김치 유산균의 균체는, 입도가 1.0 ㎛ 이하의 나노미터(nm) 사이즈로까지 미세화된 것이다. The microbial cells of the nano-type kimchi lactic acid bacteria of the present invention described above have a particle size of 1.0 μm or less to a nanometer (nm) size.

또, 이 균체는 상기 방법에 의해 건조분말로 하고, 당해 분말을 생리적 소화액에 재현탁한 경우에도 균체 입도가 1.0㎛ 이하를 유지한다. 생리적 소화액이란 공지의 방법으로 조제된 인공 위액 혹은 장액을 의미한다. In addition, this cell body is made into a dry powder by the above method, and even when the powder is resuspended in a physiological digestive solution, the cell particle size is maintained at 1.0 µm or less. The physiological digestive fluid means an artificial gastric juice or intestinal fluid prepared by a known method.

본 발명의 나노형 김치 유산균의 제조 시 첨가되는 분산제 또는 부형제의 양에 따라 건조 분말 1 g 당 김치 유산균 락토바실러스 플란타룸 균주의 농도를 조절할 수 있다. 본 발명은 나노형 김치 유산균 분말 1 g 당 김치 유산균 균주가 1억 내지 5조 마리가 포함되는 것을 특징으로 하며, 바람직하게는 분말 1 g 당 균주 1조 내지 5조 마리를 포함할 수 있다.The concentration of the Kimchi lactic acid bacteria Lactobacillus plantarum strain per 1 g of dry powder can be adjusted according to the amount of the dispersant or excipient added during the production of the nano-type kimchi lactic acid bacteria of the present invention. The present invention is characterized in that 100 million to 5 trillion kimchi lactic acid bacteria strains are included per 1 g of nano-type kimchi lactic acid bacteria powder, and preferably 1 to 5 trillion strains per 1 g of powder may be included.

본 발명의 나노형 김치 유산균의 균체는 그대로 제품화 할 수도 있으나, 일반적으로는, 각종 첨가제 또는 향미료(flavor)를 첨가, 배합함으로써 풍미를 높이거나, 필요한 형상으로 제조하여 최종 제품을 만들 수 있다.Although the microbial cells of the nano-type kimchi lactic acid bacteria of the present invention may be commercialized as they are, in general, various additives or flavors may be added and blended to enhance the flavor, or may be prepared in a required shape to make a final product.

구체적으로, 본 발명은 상기 나노형 김치 유산균을 포함하는 식품 첨가제 또는 발효식품을 제공한다. Specifically, the present invention provides a food additive or fermented food containing the nano-type kimchi lactic acid bacteria.

구체적으로, 본 발명의 나노형 김치 유산균에 첨가, 혼합되는 성분으로는 각종 당질이나 유화제, 감미료, 산미료, 과즙 등을 들 수 있다. 보다 구체적으로는 글루코스, 수크로스, 프룩토스, 벌꿀 등의 당류; 소르비톨, 크실리톨, 에리트리톨, 락티톨, 파라티니트 등의 당 알코올; 수크로스 지방산 에스테르, 글리세린당 지방산 에스테르, 레시틴 등의 유화제 등을 들 수 있다. 그 밖에도, 비타민 A, 비타민 B류, 비타민 C, 비타민 E 등의 각종 비타민류나 허브 추출물, 곡물 성분, 야채 성분, 젖 성분 등을 배합해도, 우수한 풍미의 나노형 김치 유산균 조성물을 얻을 수 있다. Specifically, various sugars, emulsifiers, sweeteners, acidulants, fruit juices, etc. are mentioned as ingredients added to and mixed with the nano-type kimchi lactic acid bacteria of the present invention. More specifically, sugars such as glucose, sucrose, fructose, and honey; Sugar alcohols such as sorbitol, xylitol, erythritol, lactitol, and paratinite; And emulsifiers such as sucrose fatty acid ester, glycerin sugar fatty acid ester, and lecithin. In addition, even if various vitamins such as vitamin A, vitamin B, vitamin C, and vitamin E, herbal extracts, grain components, vegetable components, milk components, and the like are blended, a nano-type kimchi lactic acid bacteria composition having excellent flavor can be obtained.

또한, 향미료로서는 요구르트계, 베리계, 오렌지계, 모과계, 자소계, 시트러스계, 애플계, 민트계, 그레이프계, 페어, 카스타드 크림, 피치, 멜론, 바나나, 트로피컬, 허브계, 홍차, 커피계 등의 향미료를 들 수 있고, 이것들을 1종 또는 2종 이상 조합하여 사용할 수 있다. 향미료의 첨가량은 특별히 한정되지 않지만, 풍미면에서 균체 내에 0.05∼0.5질량%, 특히 0.1∼0.3질량% 정도가 바람직하다. In addition, as flavoring, yogurt-based, berry-based, orange-based, quince-based, perilla-based, citrus-based, apple-based, mint-based, grape-based, pear, custard cream, peach, melon, banana, tropical, herbal, black tea, coffee And flavorings such as system, and these can be used alone or in combination of two or more. The amount of flavoring added is not particularly limited, but from the viewpoint of flavor, it is preferably about 0.05 to 0.5% by mass, particularly about 0.1 to 0.3% by mass, in the cells.

또한, 본 발명은 상기 나노형 김치 유산균을 포함하는 대장질환 예방 및 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition and a health functional food composition for preventing and treating colon diseases, including the nano-type kimchi lactic acid bacteria.

이상에서 설명한 본 발명의 나노형 김치 유산균의 균체는 고형상, 액상 등 어느 형태의 제품으로 할 수도 있다. 구체적으로는, 의약적으로 수용한 염, 부형제, 보존제, 착색제, 교미제 등과 함께, 의약품 또는 식품의 제조분야에서의 공지의 방법에 의해, 음료, 과립, 정제, 캡슐제 등의 여러 형태로서 제품화 할 수 있다. The cells of the nano-type kimchi lactic acid bacteria of the present invention described above may be made into any type of product, such as solid or liquid. Specifically, it is commercialized in various forms such as beverages, granules, tablets, capsules, etc. by a known method in the field of pharmaceutical or food production together with pharmaceutically acceptable salts, excipients, preservatives, coloring agents, flavoring agents, etc. can do.

또, 본 발명의 나노형 김치 유산균 균체는 식품 조성물로 이용할 수 있으며, 특히 건강식품에 이용할 수 있다. 건강식품이란 통상의 식품보다도 적극적인 의미로, 보건, 건강유지·증진 등을 목적으로 한 식품을 의미한다. 그 형태는 액체, 반고형, 고형의 어떤 것이어도 되고, 구체적으로는, 쿠키, 전병, 젤리, 양갱, 과자, 빵, 케익 등의 과자류; 요구르트, 청량음료, 영양음료, 식혜, 과일음료 등의 음료류; 스프, 아이스크림, 분유, 김치, 라면 등을 들 수 있다. In addition, the nano-type kimchi lactic acid bacteria cells of the present invention can be used as a food composition, in particular can be used in health food. Health food is more active than ordinary food, and refers to food for the purpose of health, maintenance and promotion of health, etc. The form may be liquid, semi-solid, or solid, and specifically, confectionery such as cookies, rice crackers, jelly, yokan, confectionery, bread, and cake; Beverages such as yogurt, soft drinks, nutritional drinks, sikhye, and fruit drinks; Soup, ice cream, milk powder, kimchi, ramen, etc. are mentioned.

또한, 본 발명의 나노형 김치 유산균의 균체는 로션(화장수), 화장용 크림류, 유액, 화장수, 팩제, 스킨 밀크(유제), 젤제, 파우더, 립 크림, 립스틱, 언더 메이크업, 파운데이션, 썬 케어, 목욕용제, 보디 샴푸, 보디 린스, 비누, 클렌징 폼, 연고, 첩부제, 젤리제, 에어로졸제 등 여러 제품 형태로 피부 외용제에 이용할 수도 있다. In addition, the bacteria of the nano-type kimchi lactic acid bacteria of the present invention are lotion (toilet), cosmetic creams, emulsion, lotion, pack, skin milk (emulsion), gel, powder, lip cream, lipstick, under makeup, foundation, sun care, It can also be used for external skin preparations in various product forms, such as bath products, body shampoos, body rinses, soaps, cleansing foams, ointments, patches, jelly, and aerosols.

또한, 본 발명의 나노형 김치 유산균의 균체에는, 하기에 예시되는 것과 같은 화장품, 의약부외품, 의약품에서 통상 사용되는 각종 성분이나, 첨가제를 필요에 따라 적당하게 배합할 수 있다. In addition, in the microbial cells of the nano-type kimchi lactic acid bacteria of the present invention, various ingredients or additives commonly used in cosmetics, quasi-drugs, and pharmaceuticals, such as those exemplified below, can be suitably blended as needed.

구체적으로, 글리세린, 바셀린, 요소, 히알루론산, 헤파린 등의 보습제; PABA 유도체(파라아미노벤조산, 에스칼롤 507(아이에스비·재팬(주)) 등), 신남산 유도체(네오헬리오판, 파르솔 MCX(DSM 뉴트리션 재팬(주), 썬가드 B((주)시세이도) 등), 살리실산 유도체(옥틸살리실레이트 등), 벤조페논 유도체(ASL-24, ASL-24S((유)쇼난케미칼 서비스) 등), 디벤조일메탄 유도체(파르솔 A, 파르솔 DAM(DSM 뉴트리션 재팬(주) 등), 복소환 유도체(티누빈계 등), 산화티탄 등의 자외선흡수제·산란제; 에데트산 2나트륨, 에데트산 3나트륨, 시트르산, 시트르산 나트륨, 타르타르산, 타르타르산 나트륨, 락트산, 말산, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속 봉쇄제; 살리실산, 유황, 카페인, 탄닌 등의 피지 억제제; 염화벤잘코늄, 염화 벤제토늄, 글루콘산 클로로헥시딘 등의 살균·소독제; 염산디펜히드라민, 트라넥삼산, 구아이아줄렌, 아줄렌, 알란토인, 히노키티올, 글리시리즈산 및 그 염, 글리시리즈산 유도체, 글리실레틴산 등의 항염증제; 비타민 A, 비타민 B군(B1, B2, B6, B12, B15), 폴산, 니코틴산류, 판토텐산류, 비오틴, 비타민 C, 비타민 D군(D2, D3), 비타민 E, 유비퀴논류, 비타민 K(K1, K2, K3, K4) 등의 비타민류; 아스파르트산, 글루탐산, 알라닌, 리신, 글리신, 글루타민, 세린, 시스테인, 시스틴, 티로신, 프롤린, 아르기닌, 피롤리돈카르복실산 등의 아미노산 및 그 유도체; 레티놀, 아세트산 토코페롤, 아스코르브산 인산 마그네슘, 아스코르브산 글루코시드, 알부틴, 코지산, 엘라그산, 태반 추출액 등의 미백제; 부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 갈산 프로필 등의 항산화제; 염화아연, 황산아연, 석탄산아연, 산화아연, 황산알루미늄칼륨 등의 수렴제; 글루코스, 프룩토스, 말토스, 수크로스, 트레할로스, 에리트리톨, 만니톨, 크실리톨, 락티톨 등의 당류; 감초, 카밀레, 마로니에, 범의귀, 작약, 모과나무, 황금, 황벽나무, 황련, 삼백초, 은행잎 등의 각종 식물 추출물 등 이외에, 유성 성분, 계면활성제, 증점제, 알코올류, 분말성분, 색소 등을 적당하게 배합할 수 있다. Specifically, moisturizing agents such as glycerin, petrolatum, urea, hyaluronic acid, and heparin; PABA derivatives (paraaminobenzoic acid, Escalol 507 (ISB Japan), etc.), cinnamic acid derivatives (Neo Heliopan, Parsol MCX (DSM Nutrition Japan, Ltd.), Sunguard B (Shiseido, Ltd.), etc. ), salicylic acid derivatives (octyl salicylate, etc.), benzophenone derivatives (ASL-24, ASL-24S ((Y) Shonan Chemical Service), etc.), dibenzoylmethane derivatives (parsol A, parsol DAM (DSM Nutrition Japan) (Note), etc.), heterocyclic derivatives (such as tinuvin), and ultraviolet absorbers and scattering agents such as titanium oxide; disodium edetate, trisodium edetate, citric acid, sodium citrate, tartaric acid, sodium tartrate, lactic acid, malic acid, Metal blockade agents, such as sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, and gluconic acid; Sebum inhibitors such as salicylic acid, sulfur, caffeine, and tannin; sterilizing and disinfecting agents such as benzalkonium chloride, benzethonium chloride, and chlorohexidine gluconate; difenic acid hydrochloride Anti-inflammatory agents such as hydramine, tranexamic acid, guaazulene, azulene, allantoin, hinokitiol, glysarylic acid and its salts, glysarylic acid derivatives, and glycyletic acid; vitamin A, vitamin B group (B1, B2) , B6, B12, B15), folic acid, nicotinic acid, pantothenic acid, biotin, vitamin C, vitamin D group (D2, D3), vitamin E, ubiquinone, vitamin K (K1, K2, K3, K4), etc. Vitamins; amino acids such as aspartic acid, glutamic acid, alanine, lysine, glycine, glutamine, serine, cysteine, cystine, tyrosine, proline, arginine, pyrrolidonecarboxylic acid, and derivatives thereof; retinol, tocopherol acetate, magnesium ascorbate , Ascorbic acid glucoside, arbutin, kojic acid, ellagic acid, placenta extract, and other whitening agents; butylhydroxytoluene, butylhydroxyanisole, and propyl gallate; antioxidants such as zinc chloride, zinc sulfate, zinc phenol, zinc oxide, Astringents such as potassium aluminum sulfate; sugars such as glucose, fructose, maltose, sucrose, trehalose, erythritol, mannitol, xylitol, and lactitol; licorice, chamomile, maroni, pan's ear, peony, quince, gold, Various formulas such as Hwangbyeok tree, Hwangryeon, Sambaekcho, Ginkgo leaf In addition to water extracts and the like, oily components, surfactants, thickeners, alcohols, powder components, pigments, and the like can be appropriately blended.

이하, 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail by examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다. However, it is obvious to those skilled in the art that various changes and modifications are possible within the scope of the present invention and the scope of the technical idea only to illustrate the present invention, and it is natural that such modifications and modifications belong to the appended claims. will be.

며 nF1-H군에서 가장 낮게 나타났다 (p < 0.05). TNF-α, IL-1β, IL-12의 발현 수준은 nF1-H군과 nF1-M군간 유의성은 없었으나 nF1-L군보다는 유의적으로 감소하는 것을 나타냈고, IFN-γ와 IL-17A의 발현수준은 nF1-H, nF1-M, nF1-L 모두 대조군에 비해 유의적으로 감소하였으며, nF1-H군의 발현량이 가장 적었다. 이상의 결과를 종합하여 보면 nF1을 투여한 군에서는 대조군에 비해 사이토카인의 발현량이 감소하는 것을 알 수 있었고, 특히 고농도를 투여할수록 사이토카인 발현량이 낮게 나타났다. 따라서 nF1을 고농도로 섭취할 경우 대장염 예방 효과가 가장 높은 것을 알 수 있었다.And was the lowest in the nF1-H group (p <0.05). The expression levels of TNF-α, IL-1β, and IL-12 were not significant between the nF1-H and nF1-M groups, but were significantly decreased compared to the nF1-L group. The expression levels of nF1-H, nF1-M, and nF1-L were all significantly decreased compared to the control group, and the expression level of the nF1-H group was the least. In summary, it was found that the expression of cytokines decreased in the group administered with nF1 compared to the control group. In particular, the higher the concentration was, the lower the cytokine expression level was. Therefore, it was found that the effect of preventing colitis was highest when nF1 was ingested at a high concentration.

또한, 도 9에 나타난 바와 같이, 김치를 투여한 마우스의 경우, nF1-Kimchi군은 N-Kimchi군에서보다 사이토카인의 발현 수준이 모두 유의적으로 낮은 것을 확인할 수 있었으며 (p < 0.05), 따라서 nF1을 김치에 첨가하면 대장염 예방 효과를 상승시키는 것을 확인할 수 있었다.In addition, as shown in Figure 9, in the case of the mice administered kimchi, it was confirmed that the nF1-Kimchi group had significantly lower cytokine expression levels than in the N-Kimchi group (p <0.05), thus It could be confirmed that adding nF1 to kimchi increases the effect of preventing colitis.

3-5) 조직 내 염증성 사이토카인의 mRNA 발현 수준 측정 3-5) Measurement of mRNA expression level of inflammatory cytokines in tissues

실험 마우스의 대장 조직을 PBS로 세척한 후 트리졸(trizol)을 이용하여 전체 RNA(total RNA)를 분리하였다. 분리한 RNA 중 mRNA를 모두 cDNA로 만들기 위하여, 분리된 RNA를 정량한 후, 올리고 dT 프라이머(oligo dT primer)와 AMV 역전사효소(reverse transcriptase)를 이용하여 2 μg의 RNA에서 mRNA에 상보적인 ss cDNA로 역전사시켰다. 이 cDNA를 주형(template)으로 사용하여 PCR (polymerase chain reaction) 방법으로 TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-12, IL-17A, COX-2, iNOS 유전자의 특정 유전자 부위를 증폭하였다. 이 때 내부 대조군(internal control)으로 하우스키핑 유전자(housekeeping gene)인 GAPDH를 사용하였다. 각 PCR 산물들을 2% 아가로스 겔을 이용하여 전기영동하고 브롬화 에티듐(ethidium bromide, EtBr, Sigma, USA)을 이용하여 염색한 후 UV 하에서 확인하였다. 대장 조직 내 염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokines; TNF-α, IL-1β, IL-6 등)의 mRNA 발현 수준을 RT-PCR을 통해 확인한 결과를 도 10 및 도 11에 나타내었다. After washing the colon tissue of the experimental mouse with PBS, total RNA (total RNA) was isolated using trizol. Ss cDNA complementary to mRNA in 2 μg of RNA using oligo dT primer and AMV reverse transcriptase after quantifying the isolated RNA to make all mRNAs of the isolated RNA into cDNA. Was reverse transcribed. Using this cDNA as a template, amplify specific gene sites of TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-12, IL-17A, COX-2, and iNOS genes by PCR (polymerase chain reaction) method. I did. In this case, GAPDH, a housekeeping gene, was used as an internal control. Each PCR product was electrophoresed using a 2% agarose gel, stained with ethidium bromide (EtBr, Sigma, USA), and then confirmed under UV. The results of confirming the mRNA expression level of pro-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6, etc.) in the colon tissue through RT-PCR are shown in FIGS. 10 and 11.

도 10 및 11에 의하면, TNF-α, IL-1β, IFN-γ, IL-6 및 IL-17A의 발현은 정상군보다 대조군에서 유의적으로 상승하였으며 (p < 0.05), 이로부터 대장염이 유발되면 염증성 사이토카인의 mRNA 발현 수준이 증가하는 것을 알 수 있었다.According to Figures 10 and 11, the expression of TNF-α, IL-1β, IFN-γ, IL-6 and IL-17A was significantly increased in the control group than in the normal group (p <0.05), from which colitis was induced. It was found that the mRNA expression level of inflammatory cytokines increased.

한편, nF1 투여군의 경우 도 10에 나타난 바와 같이, 농도가 높을수록 TNF-α, IFN-γ, IL-6 의 mRNA 발현량이 유의적으로 감소하는 것으로 나타났다 (p < 0.05). IL-1β 및 IL-17A의 mRNA 발현량은 nF1-H와 nF1-M에서 유의적인 차이를 나타내지는 않았으나 nF1-L보다는 모두 낮은 수준이었다 (p < 0.05).On the other hand, in the case of the nF1 administration group, as shown in FIG. 10, the higher the concentration, the significantly decreased the mRNA expression levels of TNF-α, IFN-γ, and IL-6 (p <0.05). The mRNA expression levels of IL-1β and IL-17A were not significantly different between nF1-H and nF1-M, but were all lower than nF1-L (p <0.05).

김치 투여군의 경우 도 11에 나타난 바와 같이, F1-Kimchi군의 염증성 사이토카인 mRNA 발현 수준이 N-Kimchi군에 비해 유의적으로 낮게 나타났다 (p < 0.05). In the case of the kimchi-administered group, as shown in FIG. 11, the inflammatory cytokine mRNA expression level of the F1-Kimchi group was significantly lower than that of the N-Kimchi group (p <0.05).

따라서 nF1을 고농도로 섭취할 경우 대장염 예방 효과가 가장 높은 것을 알 수 있었으며, 김치에 nF1을 첨가하면 대장염 예방 효과가 유의적으로 상승되는 것을 확인할 수 있었다.Therefore, it was found that the effect of preventing colitis was highest when nF1 was ingested at a high concentration, and it was confirmed that the effect of preventing colitis was significantly increased when nF1 was added to kimchi.

3-6) 염증 관련 유전자(iNOS, COX-2)의 mRNA 발현 수준 측정 3-6) Measurement of mRNA expression level of inflammation-related genes (iNOS, COX-2)

대장 조직 내 염증 관련 유전자 iNOS 및 COX-2의 mRNA 발현 수준을 RT-PCR을 통해 확인하고 그 결과를 도 12에 나타내었으며, iNOS 및 COX-2의 발현 수준 역시 상기 실시예 3-4 및 3-5의 염증성 사이토카인과 비슷한 양상을 보였다. The mRNA expression levels of the inflammation-related genes iNOS and COX-2 in the colon tissue were confirmed through RT-PCR, and the results are shown in FIG. 12, and the expression levels of iNOS and COX-2 were also described in Examples 3-4 and 3- It showed a similar pattern to the inflammatory cytokines of 5.

도 12에 나타난 바와 같이, 대조군의 iNOS와 COX-2 발현 수준이 정상군보다 높게 나타나, 궤양성 대장염이 유발됨에 따라 iNOS와 COX-2의 발현량이 유의적으로 증가함을 확인할 수 있었다 (p < 0.05).As shown in FIG. 12, the expression levels of iNOS and COX-2 in the control group were higher than that of the normal group, and it was confirmed that the expression levels of iNOS and COX-2 were significantly increased as ulcerative colitis was induced (p < 0.05).

한편, nF1투여군의 경우 nF1 투여 농도가 높을수록 낮은 발현 수준을 나타내고, 투여 농도가 낮을수록 높은 발현 수준을 나타내어, nF1 투여 농도에 따라 iNOS와 COX-2 발현 수준에 유의적인 차이를 나타내었다 (p < 0.05). On the other hand, in the case of the nF1 administration group, the higher the nF1 administration concentration, the lower the expression level, and the lower the administration concentration, the higher the expression level, indicating a significant difference in the expression levels of iNOS and COX-2 according to the nF1 administration concentration (p <0.05).

또한, nF1-Kimchi군과 N-Kimchi군을 비교하였을 때, nF1-Kimchi의 iNOS, COX-2는 각각 0.62 ± 0.00, 0.60 ± 0.04이며, N-Kimchi의 iNOS, COX-2는 각각 0.83 ± 0.00, 0.85 ± 0.01로 나타나 양자 간의 유의적인 차이를 확인하였다 (p < 0.05). nF1을 첨가한 김치에서 일반 김치보다 iNOS와 COX-2의 발현량이 낮게 나타나, 대장염 예방 효과가 유의적으로 상승되는 것을 확인할 수 있었다.In addition, when comparing the nF1-Kimchi group and the N-Kimchi group, nF1-Kimchi's iNOS and COX-2 are 0.62 ± 0.00 and 0.60 ± 0.04, respectively, and N-Kimchi's iNOS and COX-2 are 0.83 ± 0.00, respectively. , 0.85 ± 0.01, confirming a significant difference between the two (p <0.05). In kimchi to which nF1 was added, the expression levels of iNOS and COX-2 were lower than that of general kimchi, indicating that the colitis prevention effect was significantly increased.

3-7) 분변 중 유산균 수 측정3-7) Measurement of the number of lactic acid bacteria in feces

대장 내의 유산균은 유기산을 생성하여 장 내 pH를 낮추고 유해균들의 생육을 억제하여 장내환경의 개선을 가져온다고 알려져 있다. 이에 시험물질 투여에 따른 분변 중의 유산균 수의 변화를 측정하였으며, 그 결과를 도 13에 나타내었다.It is known that lactic acid bacteria in the large intestine produce organic acids to lower the intestinal pH and suppress the growth of harmful bacteria, thereby improving the intestinal environment. Accordingly, the change in the number of lactic acid bacteria in the feces according to the administration of the test substance was measured, and the results are shown in FIG. 13.

유산균 수의 측정은 평판계수법(plate count technique)을 이용하였다. 마우스의 분변을 멸균된 증류수로 단계별로 희석하여, 미리 가열 용해한 후 43~45℃로 냉각한 MRS agar plate (Difco, Detroit, MI, USA)에 0.1 mL씩 분주하여 도말하였다. 37℃에서 2일 동안 혐기 조건의 인큐베이터에서 배양하고, 배양된 균의 생성 콜로니 개수(colony forming units per gram, CFU/g)로 총 유산균 수를 나타내었다. The number of lactic acid bacteria was measured using a plate count technique. Mouse feces were diluted step by step with sterilized distilled water, heated and dissolved in advance, and then sprayed by 0.1 mL into MRS agar plates (Difco, Detroit, MI, USA) cooled to 43-45°C. Cultured in an incubator under anaerobic conditions at 37° C. for 2 days, and the total number of lactic acid bacteria was expressed as the number of colonies produced by the cultured bacteria (colony forming units per gram, CFU/g).

도 13에 나타난 바와 같이, 분변 중의 유산균을 측정한 결과 마우스가 섭취하는 시험물질에 따라 유산균 수가 상이한 것을 알 수 있었다. 정상군과 대조군은 투여 전과 큰 차이가 없었고, nF1 투여군(nF1-H, nF1-M, nF1-L)과 김치 투여군 모두 분변 중의 유산균 수가 증가하였는데, 그 중 nF1-H군에서 가장 많은 증가를 보였다As shown in FIG. 13, as a result of measuring the lactic acid bacteria in the feces, it was found that the number of lactic acid bacteria was different depending on the test substance consumed by the mouse. There was no significant difference between the normal group and the control group, and the number of lactic acid bacteria in feces increased in both the nF1-treated group (nF1-H, nF1-M, nF1-L) and kimchi-treated group, of which the nF1-H group showed the greatest increase.

구체적으로, 총 2주간의 시험물질 투여 후 nF1-H군의 분변 속 유산균은 8.47 ± 0.09 Log CFU/g으로 높은 양의 유산균이 검출되어, 고농도의 nF1을 섭취할 경우 장내에 유산균을 증가시키는 효과가 있는 것으로 나타났다.Specifically, after administration of the test substance for a total of 2 weeks, lactic acid bacteria in the feces of the nF1-H group were detected in a high amount of 8.47 ± 0.09 Log CFU/g, and the effect of increasing the lactic acid bacteria in the intestine when ingesting a high concentration of nF1 Appeared to be.

또한, 2주 후 nF1-Kimchi군의 분변 속 유산균은 8.31 ± 1.10 Log CFU/g으로 nF1를 첨가하지 않은 일반 김치에 비해 높은 양의 유산균이 검출되어, 김치에 nF1을 첨가할 경우 장내에 유산균을 증가시키는 효과가 있다는 것을 확인할 수 있었다.In addition, after 2 weeks, the lactic acid bacteria in the feces of the nF1-Kimchi group were 8.31 ± 1.10 Log CFU/g, and a higher amount of lactic acid bacteria was detected compared to general kimchi without nF1. It was confirmed that there is an increasing effect.

3-8) 분변 중 유해효소(β-glucosidase, β-glucuronidase) 측정3-8) Measurement of harmful enzymes (β-glucosidase, β-glucuronidase) in feces

장내 세균들의 대사작용 등을 통하여 분비되는 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)와 베타-글루쿠로니다아제(β-glucuronidase)는 베타-글루코사이드(β-glucoside) 배당체 화합물과 글루쿠론산 화합물을 유해화합물로 변형시키는 유해효소로 알려져 있다. 특히 장내의 대표적인 유해효소인 베타-글루쿠로니다아제는 아민류와 독성물질, 변이원 등을 생성하여 장점막에 손상을 주어 대장암을 일으키고 장관내로 흡수된 유독 물질들은 체내를 순환하면서 각종 장기에 손상을 입히며 암 유발, 동맥경화, 간장 장해, 면역기능 저하 등을 초래한다. 이에 시험물질 투여에 따른 마우스 분변 중의 유해효소 활성 변화를 측정하였으며, 그 결과를 도 9에 나타내었다.Beta-glucosidase and beta-glucuronidase, which are secreted through metabolism of intestinal bacteria, contain beta-glucoside glycoside compounds and glucuronic acid compounds. It is known as a harmful enzyme that transforms into harmful compounds. In particular, beta-glucuronidase, a representative harmful enzyme in the intestine, creates amines, toxic substances, mutants, etc., causing colorectal cancer by damaging the intestinal tract, and toxic substances absorbed into the intestine circulate in the body and damage various organs. It causes cancer, arteriosclerosis, liver failure, and immune function decline. Accordingly, changes in the activity of harmful enzymes in mouse feces according to administration of the test substance were measured, and the results are shown in FIG. 9.

구체적으로, β-글루코시다아제 활성은 0.1 M 인산 나트륨 완충액(Sodium phosphate buffer, pH 7.0) 0.3 mL, 2 mM p-니트로페닐-β-D-글루코피라노사이드 (p-nitropheyl-β-D-glucopyranoside) 0.2 mL에 효소액 0.1 mL을 가하여 37℃에서 15분 간 반응시킨 후, 0.5 N NaOH 0.3 mL를 가하여 반응을 종료시켰다. 여기에 증류수 1 mL을 가한 후 3,000 rpm에서 20분 간 원심분리한 후 상등액을 취해 405 nm에서 흡광도를 측정하였다.Specifically, β-glucosidase activity is 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 7.0) 0.3 mL, 2 mM p-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside (p-nitropheyl-β-D- 0.1 mL of the enzyme solution was added to 0.2 mL of glucopyranoside) and reacted at 37° C. for 15 minutes, and then 0.3 mL of 0.5 N NaOH was added to terminate the reaction. 1 mL of distilled water was added thereto, centrifuged at 3,000 rpm for 20 minutes, and then the supernatant was taken and the absorbance was measured at 405 nm.

시험물질을 투여하기 전(initial) 마우스의 β-글루코시다아제 활성은 1.11 ± 0.22 units/g이었고, 도 14에 나타난 바와 같이, 시험물질을 2주 간 투여 하고 난 후 정상군의 활성은 1.48 ± 0.04 units/g, 대조군의 활성은 2.76 ± 0.29 units/g로 나타났다. The β-glucosidase activity of mice before administration of the test substance (initial) was 1.11 ± 0.22 units/g, and as shown in FIG. 14, the activity of the normal group after administration of the test substance for 2 weeks was 1.48 ± The activity of the control group was 0.04 units/g and 2.76 ± 0.29 units/g.

한편, nF1을 투여한 마우스군의 경우 nF1-H군이 1.64 ± 0.06 units/g, nF1-M군이 1.81 ± 0.06 units/g, nF1-L군이 2.57 ± 0.04 units/g로 나타나 고농도로 갈수록 β-글루코시다아제의 활성이 낮아지는 것을 확인할 수 있었다. 또한, nF1-Kimchi군의 경우 1.97 ± 0.23 units/g, N-Kimchi군은 2.09 ± 0.10 units/g으로 나타나, nF1을 첨가한 김치에서 유의적으로 보다 낮은 활성을 나타내는 것을 알 수 있었다 (p < 0.05).On the other hand, in the case of the nF1-administered mouse group, the nF1-H group was 1.64 ± 0.06 units/g, the nF1-M group was 1.81 ± 0.06 units/g, and the nF1-L group was 2.57 ± 0.04 units/g. It was confirmed that the activity of β-glucosidase was lowered. In addition, the nF1-Kimchi group was 1.97 ± 0.23 units/g, and the N-Kimchi group was 2.09 ± 0.10 units/g, indicating significantly lower activity in kimchi added with nF1 (p < 0.05).

또한, β-글루쿠로니다아제 활성은 0.1 M S인산 나트륨 완충액 (pH 7.0) 0.38 mL, 2 mM p-니트로페닐-β-D-글루쿠로니드 (p-nitropheyl-β-D-glucuronide) 0.02 mL에 효소액 0.1 mL을 가하여 37℃ 에서 1시간 반응시킨 후, 0.5 N NaOH 0.4 mL을 가하여 반응을 종료시켰다. 여기에 증류수 1 mL을 첨가하고 이것을 3,000 rpm에서 20분 간 원심분리한 후 상등액을 취해 405 nm에서 흡광도를 측정하였다.In addition, β-glucuronidase activity was 0.1 MS sodium phosphate buffer (pH 7.0) 0.38 mL, 2 mM p-nitrophenyl-β-D-glucuronide (p-nitropheyl-β-D-glucuronide) 0.02 0.1 mL of the enzyme solution was added to mL, followed by reaction at 37°C for 1 hour, and then 0.4 mL of 0.5 N NaOH was added to terminate the reaction. 1 mL of distilled water was added thereto, and after centrifugation at 3,000 rpm for 20 minutes, the supernatant was taken and the absorbance was measured at 405 nm.

시험물질을 투여하기 전(initial) 마우스의 β-글루쿠로니다아제 활성은 0.29 ± 0.01이었으며, 도 14에 나타난 바와 같이, 2주 간 시험물질을 투여한 후 정상군의 활성은 0.27 ± 0.01 units/g, 대조군의 활성은 0.58 ± 0.04 units/g으로 나타났다. Before administration of the test substance (initial), the β-glucuronidase activity of the mouse was 0.29 ± 0.01, and as shown in FIG. 14, after administration of the test substance for 2 weeks, the activity of the normal group was 0.27 ± 0.01 units. /g, the activity of the control group was 0.58 ± 0.04 units/g.

한편, nF1을 투여한 마우스군의 경우 nF1-H군이 0.44 ± 0.01 units/g, nF1-M군이 0.44 ± 0.01 units/g, nF1-L군이 0.50 ± 0.05 units/g로 나타나 고농도군과 중농도군에서 β-글루쿠로니다아제의 활성이 낮았다. 또한, nF1-Kimchi군의 경우 0.44 ± 0.01 units/g, N-Kimchi군은 0.47 ± 0.05 units/g으로 나타나, nF1을 첨가한 김치에서 유의적으로 보다 낮은 활성을 나타내는 것을 알 수 있었다 (p < 0.05).On the other hand, in the case of the nF1-administered mouse group, the nF1-H group was 0.44 ± 0.01 units/g, the nF1-M group was 0.44 ± 0.01 units/g, and the nF1-L group was 0.50 ± 0.05 units/g. The activity of β-glucuronidase was low in the medium concentration group. In addition, in the case of nF1-Kimchi group, 0.44 ± 0.01 units/g and in the N-Kimchi group were 0.47 ± 0.05 units/g, indicating significantly lower activity in kimchi added with nF1 (p < 0.05).

따라서 nF1을 고농도로 섭취하거나 김치에 nF1을 첨가할 경우 분변에서 β-글루코시다아제 및 β-글루쿠로니다아제 효소의 활성이 감소하는 것으로 나타나, 장내 유독물질의 생성(pro-carcinogen을 carcinogen으로 전환)을 감소시킴으로써 대장 내 환경을 개선시키는 효과가 있는 것으로 보인다.Therefore, when nF1 is ingested at high concentrations or when nF1 is added to kimchi, the activities of β-glucosidase and β-glucuronidase enzymes in feces decrease, producing toxic substances in the intestine (pro-carcinogen as carcinogen). Conversion) seems to have an effect of improving the environment in the colon.

독립행정법인제품평가기술기반기구특허미생물기탁센터Independent Administrative Corporation Product Evaluation Technology Infrastructure Organization Patent Microorganism Deposit Center nF1NITEP-1462nF1NITEP-1462 2012110820121108

<110> BIOGENICS KOREA CO., LTD <120> Nano-Sized Lactic Acid Bacteria from Kimchi <130> 13P1169 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1492 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 16S rRNA of Lactobacillus plantarum gene : nF1 <400> 1 gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gaactctggt attgattggt 60 gcttgcatca tgatttacat ttgagtgagt ggcgaactgg tgagtaacac gtgggaaacc 120 tgcccagaag cgggggataa cacctggaaa cagatgctaa taccgcataa caacttggac 180 cgcatggtcc gagcttgaaa gatggcttcg gctatcactt ttggatggtc ccgcggcgta 240 ttagctagat ggtggggtaa cggctcacca tggcaatgat acgtagccga cctgagaggg 300 taatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga 360 atcttccaca atggacgaaa gtctgatgga gcaacgccgc gtgagtgaag aagggtttcg 420 gctcgtaaaa ctctgttgtt aaagaagaac atatctgaga gtaactgttc aggtattgac 480 ggtatttaac cagaaagcca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg 540 gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca ggcggttttt taagtctgat 600 gtgaaagcct tcggctcaac cgaagaagtg catcggaaac tgggaaactt gagtgcagaa 660 gaggacagtg gaactccatg tgtagcggtg aaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt 720 ggcgaaggcg gctgtctggt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagtatg ggtagcaaac 780 aggattagat accctggtag tccataccgt aaacgatgaa tgctaagtgt tggagggttt 840 ccgcccttca gtgctgcagc taacgcatta agcattccgc ctggggagta cggccgcaag 900 gctgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 960 gaagctacgc gaagaacctt accaggtctt gacatactat gcaaatctaa gagattagac 1020 gttcccttcg gggacatgga tacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1080 tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttattatc agttgccagc attaagttgg 1140 gcactctggt gagactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc 1200 atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga tggtacaacg agttgcgaac 1260 tcgcgagagt aagctaatct cttaaagcca ttctcagttc ggattgtagg ctgcaactcg 1320 cctacatgaa gtcggaatcg ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc 1380 cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgagagtttg taacacccaa agtcggtggg 1440 gtaacctttt aggaaccagc cgcctaaggt gggacagatg attagggtga ag 1492 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer <400> 2 gagtttgatc ctggctcag 19 <210> 3 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer <400> 3 tcgtaacaag gtagcc 16 <110> BIOGENICS KOREA CO., LTD <120> Nano-Sized Lactic Acid Bacteria from Kimchi <130> 13P1169 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1492 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 16S rRNA of Lactobacillus plantarum gene: nF1 <400> 1 gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gaactctggt attgattggt 60 gcttgcatca tgatttacat ttgagtgagt ggcgaactgg tgagtaacac gtgggaaacc 120 tgcccagaag cgggggataa cacctggaaa cagatgctaa taccgcataa caacttggac 180 cgcatggtcc gagcttgaaa gatggcttcg gctatcactt ttggatggtc ccgcggcgta 240 ttagctagat ggtggggtaa cggctcacca tggcaatgat acgtagccga cctgagaggg 300 taatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga 360 atcttccaca atggacgaaa gtctgatgga gcaacgccgc gtgagtgaag aagggtttcg 420 gctcgtaaaa ctctgttgtt aaagaagaac atatctgaga gtaactgttc aggtattgac 480 ggtatttaac cagaaagcca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg 540 gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca ggcggttttt taagtctgat 600 gtgaaagcct tcggctcaac cgaagaagtg catcggaaac tgggaaactt gagtgcagaa 660 gaggacagtg gaactccatg tgtagcggtg aaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt 720 ggcgaaggcg gctgtctggt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagtatg ggtagcaaac 780 aggattagat accctggtag tccataccgt aaacgatgaa tgctaagtgt tggagggttt 840 ccgcccttca gtgctgcagc taacgcatta agcattccgc ctggggagta cggccgcaag 900 gctgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 960 gaagctacgc gaagaacctt accaggtctt gacatactat gcaaatctaa gagattagac 1020 gttcccttcg gggacatgga tacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1080 tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttattatc agttgccagc attaagttgg 1140 gcactctggt gagactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc 1200 atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga tggtacaacg agttgcgaac 1260 tcgcgagagt aagctaatct cttaaagcca ttctcagttc ggattgtagg ctgcaactcg 1320 cctacatgaa gtcggaatcg ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc 1380 cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgagagtttg taacacccaa agtcggtggg 1440 gtaacctttt aggaaccagc cgcctaaggt gggacagatg attagggtga ag 1492 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer <400> 2 gagtttgatc ctggctcag 19 <210> 3 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer <400> 3 tcgtaacaag gtagcc 16

Claims (2)

김치로부터 분리되고, 그람양성 간균 형태이며, 서열번호 1로 기재되는 16S rRNA 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillusplantarum) nF1 균주(수탁번호 NITE P-1462)를 나노화 처리하여, 입도 분포의 최빈값이 0.5 ~ 1.0 ㎛ 되는 것을 특징으로 하는 나노형 김치 유산균 조성물을 포함하는 면역기능활성용 건강기능성 아이스크림.Is separated from Kimchi, and positive bacilli form gram, and the Lactobacillus Planta room (Lactobacillusplantarum) nF1 strain (accession number NITE P-1462), characterized in that having a 16S rRNA nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1 treated nano, Wherein the mode of particle size distribution is in the range of 0.5 to 1.0 占 퐉. The health functional ice cream for immune function activity comprising the nano-form Kimchi lactic acid bacteria composition. 제 1항에 있어서, 상기 나노화 처리는 상기 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillusplantarum) nF1 균주를 pH 5~7의 조건에서 배양하는 단계, 상기 균주의 배양액을 80℃에서 8~12분간 가열 멸균 처리하는 단계, 상기 배양액에 부형제를 첨가하여 140~ 160kgf/cm2 고압 호모지나이저로 분산시키는 단계, 분산된 배양액을 동결건조하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 건강기능성 아이스크림.

The method of claim 1, wherein the nano processing method comprising the Lactobacillus Planta room (Lactobacillusplantarum) 8 ~ heated 12 minutes sterilized nF1 strain step, the culture medium of the strain cultured under the conditions of pH 5 ~ 7 at 80 ℃ treatment , Adding an excipient to the culture solution, dispersing the mixture in a high pressure homogenizer at 140 to 160 kgf / cm 2, and lyophilizing the dispersed culture solution.

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