KR20150055792A - Novel Pediococcus pentosaceus sp. EP106 and Producing Method of Fermented Pueria Radix or Soy Hypocotyl using the Same - Google Patents

Novel Pediococcus pentosaceus sp. EP106 and Producing Method of Fermented Pueria Radix or Soy Hypocotyl using the Same Download PDF

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강세찬
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Abstract

The present invention relates to Pediococcuspentosaceus EP106 strains (accession number: KACC91829P) capable of converting daidzein or genistein respectively to dihydrodaidzein (DHD) or dihydrogenistein (DHG). The present invention also relates to a method for preparing fermented soybean embryo (Glycine max) or arrow root (Pueraria thunbergiana) by using the same.

Description

신규한 페디오코커스 펜토사세우스 EP106 균주 및 이를 이용한 칡 또는 대두배아 발효물의 제조 방법{Novel Pediococcus pentosaceus sp. EP106 and Producing Method of Fermented Pueria Radix or Soy Hypocotyl using the Same}A novel Pediococcus pentosaceus EP106 strain and a method for producing a fermented soybean or soybean fermented product using the same, and a method for producing the fermented product of Novel Pediococcus pentosaceus sp. EP106 and Producing Method of Fermented Pueria Radix or Soy Hypocotyl using the Same}

본 발명은 신규한 페디오코커스 펜토사세우스 균주 및 이를 이용한 칡 또는 대두배아 발효물의 제조 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a novel strain of Pediococcus pentosaceus and a process for producing a fermented soybean or soybean fermented product using the same.

칡(갈근 Pueria Radix)은 한국, 일본, 중국 등에 분포하는 야생식물로서, 전분질 함량이 많아 고래로부터 구황식품으로 이용된 콩과(Leguminosae) 식물로서, 이른 봄 또는 늦은 가을에 캐어서 건조하여 약재로 이용하고 있으며, 발한, 해열, 청량약, 하혈, 구갈, 두통을 다스린다고 하며, 고혈압, 협심증, 당뇨병, 숙취제거 등에 이용되고 있는데, 항산화 효과, 보간작용 등의 효능이 보고되고 있다. 칡 (Pueria Radix) is a wild plant distributed in Korea, Japan, China, etc. It is a leguminosae plant used as a crab food from whales because of its high starch content. It is caulked and dried in early spring or late autumn, It has been reported that it controls hypertension, angina pectoris, diabetes, hangover, etc. It has been reported that antioxidant effect and interpolation effect are effective.

또한, 대두 배아는 그것 자체를 그대로 이용하지 않고, 대부분 폐기되고 있는 것이 현실이다. In addition, the soybean embryo itself is not used as it is, and most of it is discarded.

특히, 칡이나 대두 배아는 다이드진(daidzin), 다이드제인(daidzein), 제니스테인(genistein)과 같은 이사플라본 물질이 있는 것으로 알려져 있어, 그 추출물에 관해서는 다양한 용도가 개발되어 있다. In particular, it has been known that the 칡 or soybean embryo has a moving flavone substance such as daidzin, daidzein, and genistein, and various uses have been developed for the extract.

상기 다이드진(daidzin), 다이드제인(daidzein), 제니스테인(genistein)과 같은 이사플라본 (isoflavone)은 화학 구조가 에스트로겐과 비슷하여 타 물질에 비하여 체내 흡수율이 높으며, 에스트로겐 수용체와의 결합력이 뛰어나 에스트로겐의 수용체에 대한 조절 작용을 나타낸다고 보고된 바 있다. 그러나, 최근 갱년기 증상 개선에 관여하는 주요 물질이 이소플라본 자체가 아니라 장내 미생물에 의해 전환되는 이소플라본의 대사체로 밝혀지면서 관련 연구 분야에서 새로운 고찰 및 연구가 이루어지고 있다. Isoflavone, such as daidzin, daidzein, and genistein, has a chemical structure similar to estrogen and has a higher uptake in the body than other substances, and has excellent binding properties to estrogen receptors It has been reported that estrogen has a regulatory effect on the receptor. However, recent studies and researches have been carried out in the field of related research, as the major substances involved in the improvement of menopausal symptoms have recently been identified as isoflavones metabolized by intestinal microorganisms, rather than isoflavones themselves.

이와 관련하여, 예를 들어 한국 공개 특허 제 2011-7008760 호 등에서는 칡으로부터 이소플라본을 제조하는 방법을 개시하고 있다.In this connection, Korean Patent Laid-Open Publication No. 2011-7008760, for example, discloses a method for producing isoflavones from bean sprouts.

그러나, 이러한 균주들은 혐기적인 조건에서만 사용되기 때문에, 미생물 생체전환율(생산성)이 낮아 배양시에 한계를 갖고 있기 때문에, 호기적 조건에서 이소플라본의 대사체를 생산하는 미생물 및 칡 발효액, 발효추출물에 대한 개발의 필요성이 있는 현실이다.
However, since these strains are used only under anaerobic conditions, they have a limitation in culturing due to low microbial bio-conversion (productivity). Therefore, microorganisms that produce metabolites of isoflavones under aerobic conditions, fermentation broth and fermented extract It is a reality that needs development of Korea.

KR 10-2011-7008760 AKR 10-2011-7008760 A

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been made to solve the above-mentioned problems occurring in the prior art,

다이드제인 또는 제니스테인을 각각 다이하이드로다이드제인(dihydrodaidzein, DHD) 또는 디하이드로제니스테인(dihydrogenistein, DHG)으로 호기적 조건에서도 전환 할 수 있는 새로운 균주 및 이를 이용하여 칡 또는 대두 배아 발효물을 제조하는 방법을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
A novel strain capable of converting daidzein or genistein into dihydrodaidzein (DHD) or dihydrogenistein (DHG) under aerobic conditions, respectively, and using the same to produce a fermented soybean or soybean fermented product The present invention is directed to providing a method for providing a service to a user.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은,According to an aspect of the present invention,

다이드제인 또는 제니스테인을 각각 다이하이드로다이드제인(dihydrodaidzein, DHD) 또는 디하이드로제니스테인(dihydrogenistein, DHG)으로 전환 할 수 있는 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus) EP106 (수탁번호: KACC91829P) 균주를 제공한다.Diadjene or genistein can be converted into dihydrodaidzein (DHD) or dihydrogenistein (DHG), respectively, by using Pediococcus pentosaceus ) EP106 (accession number: KACC91829P).

또한, 본 발명은 상기 균주를 이용하여, 칡 추출물로부터 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for producing a fermented product containing a dihydrolidase from a fermented milk extract using the strain.

또한, 본 발명은 상기 균주를 이용하여, 대두 추출물로부터 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법을 제공한다.
In addition, the present invention provides a method for producing a dihydrogenentyne-containing soybean embryo fermented product from a soybean extract using the strain.

또한, 본 발명은 상기 균주를 이용하여 제조된 칡 발효물를 제공한다.The present invention also provides a fermented product produced using the strain.

또한, 본 발명은 상기 균주를 이용하여 제조된 대두 배아 발효물를 제공한다.
The present invention also provides a soybean embryo fermented product produced using the strain.

또한, 본 발명은 상기 칡 발효물을 동결 건조하여 제조된 칡 발효 동결 건조물을 제공한다.The present invention also provides a fermented fermented dried product prepared by freeze-drying the fermented product.

또한, 본 발명은 상기 대두 배아 발효물을 동결 건조하여 제조된 대두 배아 발효 동결 건조물을 제공한다.Also, the present invention provides a soybean embryo fermented frozen product prepared by freeze-drying the fermented soybean embryo.

또한, 본 발명은 갱년기 장애, 골다공증, 전립선 암, 전립선 비대증 또는 여성호르몬 조절 장애 의 예방 또는 치료에 사용되는, 상기 칡 발효물을 포함하는 의약 제제를 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical preparation comprising the above fermented product, which is used for the prevention or treatment of menopausal disorder, osteoporosis, prostate cancer, hypertrophy of the prostate gland or female hormone control disorder.

또한, 본 발명은 갱년기 장애, 골다공증, 또는 여성호르몬 조절 장애 의 예방 또는 치료에 사용되는, 상기 대두 배아 발효물을 포함하는 의약 제제를 제공한다.
The present invention also provides a pharmaceutical preparation comprising the fermented soybean embryo used for the prevention or treatment of menopausal disorder, osteoporosis, or female hormone control disorder.

본 발명에 따른 칡 및 대두 배아 발효물을 제조하는 방법에 의하면, According to the method for producing the fermented soybean and soybean fermented product according to the present invention,

호기적 조건에서 사용 가능한 신규한 균주를 이용하기 때문에, 골다공증 등의 여성 호르몬 관련질환의 예방 및 치료기능을 갖는 이퀄의 전구체인 다이하이드로다이드제인(dihydrodaidzein, DHD) 또는 디하이드로제니스테인(dihydrogenistein, DHG)을 칡 또는 대두 배아를 이용하여 호기적 조건에서도 제조할 수 있다는 효과가 있다.
Dihydrodaidzein (DHD) or dihydrogenistein (DHG), which is an equol precursor having a function of preventing and treating female hormone related diseases such as osteoporosis, ) Can be produced under aerobic conditions by using 칡 or soybean embryo.

도 1은 본 발명의 균주의 염기서열을 나타낸 그림이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 칡 발효물의 DHD 함량의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 칡 발효물의 발효 전후의 DHD 함량의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따른 칡 발효물의 여성호르몬 조절 능력을 측정한 그래프이다.
도 5는 본 발명의 실시예에 따른 대두 배아 발효물의 발효 전후의 DHG 함량의 변화를 나타낸 그래프이다.
1 is a view showing the nucleotide sequence of the strain of the present invention.
2 is a graph showing changes in the DHD content of the fermented product according to an embodiment of the present invention.
FIG. 3 is a graph showing changes in DHD content of fermented products before and after fermentation according to an embodiment of the present invention.
FIG. 4 is a graph showing the ability of female fermented products to regulate female hormones according to an embodiment of the present invention.
FIG. 5 is a graph showing changes in DHG content of the fermented soybean embryo before and after fermentation according to an embodiment of the present invention. FIG.

추출물로부터 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법에 관한 것이다.To a process for producing a dihydrogenentyne-containing soybean embryo fermentation product from an extract.

본 발명에서 사용되는 미생물 이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.Microorganisms used in the present invention The present invention will be described in detail below.

본 발명은 다이드제인 또는 제니스테인을 각각 다이하이드로다이드제인(dihydrodaidzein, DHD) 또는 디하이드로제니스테인(dihydrogenistein, DHG)으로 전환 할 수 있는 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus) EP106 (수탁번호: KACC91829P) 균주 및 이를 이용하여 칡 추출물로부터 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법 및 대두 은 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus) 균주로, 본 발명의 발명자에 의하여 인간의 대변으로부터 동정된 균주인 EP106 (KACC91829P)가 기탁되어 있으며, 본 발명에서는 상기 기탁균주를 사용할 수 있다.
The present invention relates to Pediococcus pentosaceus EP106 (accession number: P104) capable of converting diidene or genistein to dihydrodaidzein (DHD) or dihydrogenistein (DHG), respectively, KACC91829P) and a method for producing a fermented product containing a dihydroididase from a mushroom extract using the same, and soybean is a strain of Pediococcus pentosaceus , which is obtained from the feces of a human by the inventors of the present invention EP106 (KACC91829P), which is an identified strain, has been deposited. In the present invention, the deposited strain may be used.

상기 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법은,The method for producing the fermented product containing the dihydroididase,

(a) 분쇄한 칡을 에탄올로 교반 추출하는 추출단계; 및(a) an extraction step of agitating and extracting the pulverized liquor with ethanol; And

(b) 상기 (a) 단계에서 얻은 추출물에 상기 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus) EP106 (수탁번호: KACC91829P) 균주를 접종한 후 이를 교반하여 배양액을 만드는 배양단계;를 포함한다.
(b) a culture step of inoculating the Pediococcus pentosaceus strain EP106 (accession number: KACC91829P) into the extract obtained in step (a) and stirring the same to prepare a culture solution.

상기 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법은, 상기 (a) 추출단계에서 사용되는 원료로 칡을 이용할 수 있다. 본 발명에 사용되는 칡은 함유되어 있는 다이드제인 등이 소실되지 않는 한 칡의 산지나 가공의 유무에 관해서는 제한되지 않는다. 예를 들면, 미처리 상태의 것; 가열 처리, 건조 처리, 증자 처리 등이 행해진 칡으로부터 분리된 것; 미가공된 칡으로부터 분리된 것을 가열 처리, 건조 처리 또는 증자 처리 등으로 처리한 것 등 중의 어느 것일 수도 있다. 또한, 본 발명에 사용되는 칡의 형상에 관해서는 특별히 제한되는 것이 아니고, 분말상이거나, 분쇄 또는 파쇄된 것일 수도 있으나, 분말상의 칡을 사용하는 것이 바람직하다
The method for producing the fermented product containing the dihydroididase may use a raw material used in the (a) extraction step. There is no restriction as to whether or not the raw materials used in the present invention are produced or processed, as long as the raw materials, etc. contained therein are not destroyed. For example, untreated; Those separated from the furnace where the heat treatment, the drying treatment, the thickening treatment, etc. are performed; And a product obtained by separating the raw material from the raw material by heat treatment, drying treatment or thickening treatment, or the like. The shape of the foil used in the present invention is not particularly limited and may be a powder, a ground or a crushed, but it is preferable to use a powdery foil

상기 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법은 상기 (a) 추출단계에서 사용하는 용매로서 극성 용매를 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 에탄올로는 추출의 효울성을 위하여 주정 기준으로 30% 내지 90%의 에탄올을 사용하는 것이 바람직하다.The method for producing the fermented product containing the dihydroididase may use a polar solvent as the solvent used in the extraction step (a), more preferably ethanol. As the ethanol used in the present invention, ethanol is preferably used in an amount of 30% to 90% on the basis of alcohol for the efficiency of extraction.

상기 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법은, 호기성 균주를 사용하기 때문에, 일정한 속도로 교반을 하여 산소를 공급하도록 한다. 이를 위하여, 상기 (b) 배양단계의 교반속도는 100 내지 300rpm로 하는 것이 바람직하다.In the method for producing the fermented product containing the dihydroididase, since aerobic strain is used, stirring is performed at a constant rate to supply oxygen. For this, the agitation speed of the culturing step (b) is preferably 100 to 300 rpm.

상기 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법은, 상기 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus) EP106 (수탁번호: KACC91829P) 균주를 배지에 접종한 후, 상기 균주가 생육 가능한 온도 영역에서 20 내지 80 시간 동안 호기 발효시킴으로써 배양되는데, 상기 온도는 생육에 바람직한 조건이면 되고, 예를 들면, 20 내지 40?, 바람직하게 는 35 내지 40?, 더욱 바람직하게는 36 내지 38?를 들 수 있다. The method for producing the fermented product containing the dihydroidide is characterized in that the Pediococcus pentosaceus ) EP106 (Accession No .: KACC91829P) is inoculated into a culture medium and then cultured in aerobic fermentation for 20 to 80 hours in the temperature range in which the strain is able to grow. The temperature may be a condition suitable for growth, for example, 20 to 40 ?, preferably 35 to 40 ?, more preferably 36 to 38 ?.

상기 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법은 상기 (b) 배양단계에서 상기 (a) 추출단계에서 추출된 추출물을 배양액 총량 기준으로 0.2 내지 3중량%로 포함시키는 것이 바람직하다.
The method for producing the fermented product containing dihydroididase according to the present invention preferably comprises 0.2 to 3% by weight based on the total amount of the extract extracted from the step (a) in the step (b).

또한, 본 발명은 상기 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus) EP106 (수탁번호: KACC91829P) 균주를 이용하여 제조된 칡 발효물을 제공한다. 상기 단계를 거쳐 발효 처리되어 얻어지는 칡 발효물에는 디이하이드로다이드제인(dihydrodaidzein, DHD)이 생성되어 축적되어 있다. 상기 조건으로 발효 처리되어 얻어지는 칡 발효물은 발효 후 상태 그대로 식품, 의약품, 화장료 등의 소재로서 사용할 수도 있고, 필요에 따라서 건조 처리를 행하여 건조 고형물 상태로 하여 상기 소재로서 사용할 수도 있다. 칡 발효물의 보존 안정성을 향상시키기 위해서는, 가열 건조 처리에 의해 고형상으로 해두는 것이 바람직하다. 또한, 가열 건조 처리된 칡 발효물은, 필요에 따라서 분말화 처리를 하여 분말상으로 할 수도 있다.
In addition, the present invention provides a fermented product produced by using the strain Pediococcus pentosaceus EP106 (accession number: KACC91829P). Dihydrodaidzein (DHD) is formed and accumulated in the fermented product obtained by fermentation through the above steps. The fermented product obtained by the fermentation treatment under the above conditions can be used as a raw material for foods, medicines, cosmetics and the like as it is after the fermentation, and can be used as the raw material in a dry solid state, if necessary, in a dry solid state. (2) In order to improve the storage stability of the fermented product, it is desirable to make the fermented product solid by heating and drying treatment. The fermented product subjected to heat-drying treatment may be pulverized to a powder form if necessary.

또한, 본 발명의 상기 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법은,Further, the method for producing the dihydrogenentyne-containing soybean embryo fermented product of the present invention comprises:

(a) 분쇄한 대두를 에탄올로 추출하는 추출단계; 및(a) an extraction step of extracting pulverized soybean with ethanol; And

(b) 상기 (a) 단계에서 얻은 추출물에 상기 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus) EP106 (수탁번호: KACC91829P) 균주를 접종한 후 이를 교반하여 배양액을 만드는 배양단계;를 포함한다.
(b) a culture step of inoculating the Pediococcus pentosaceus strain EP106 (accession number: KACC91829P) into the extract obtained in step (a) and stirring the same to prepare a culture solution.

상기 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법은, 상기 (a) 추출단계에서 사용되는 원료로 대두 배아를 이용할 수 있다. 대두 배아란, 대두의 발아 시에 유아, 유근이 되는 부분이고, 제니스테인 등의 이소플라본류가 많이 포함되어 있는 것이 알려져 있다. 본 발명에 사용되는 대두 배아는 함유되어 있는 제니스테인 등이 소실되지 않는 한 대두의 산지나 가공의 유무에 관해서는 제한되지 않는다. 예를 들면, 미처리 상태의 것; 가열 처리, 건조 처리, 증자 처리 등이 행해진 대두로부터 분리된 것; 미가공된 대두로부터 분리된 배아를 가열 처리, 건조 처리 또는 증자 처리 등으로 처리한 것 등 중의 어느 것일 수도 있다. 또한, 본 발명에서 사용되는 대두 배아는 탈지 처리나 탈단백질 처리를 행한 것일 수도 있다. 또한, 본 발명에 사용되는 대두 배아의 형상에 관해서는 특별히 제한되는 것이 아니고, 분말상이거나, 분쇄 또는 파쇄된 것일 수도 있으나, 분말상의 대두 배아을 사용하는 것이 바람직하다
The method for producing the dihydrogenentyne-containing soybean embryo fermented product may use a soybean embryo as a raw material used in the (a) extraction step. It is known that soybean embryo is a part which becomes infant and legume when germinating soybeans and contains a lot of isoflavones such as genistein. The soybean embryo used in the present invention is not limited as to whether the soybean is produced or not, as long as the contained genistein and the like are not lost. For example, untreated; Those separated from soybeans subjected to heat treatment, drying treatment, thickening treatment and the like; The embryo separated from the unprocessed soybeans may be treated with a heat treatment, a drying treatment or a thickening treatment or the like. In addition, the soybean embryo used in the present invention may be subjected to degreasing treatment or deproteinization treatment. The shape of the soybean embryo used in the present invention is not particularly limited, and it may be in the form of powder, pulverized or crushed, but it is preferable to use a powdered soybean embryo

상기 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법은 상기 (a) 추출단계에서 사용하는 용매로서 극성 용매를 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 에탄올로는 추출의 효울성을 위하여 주정 기준으로 20% 내지 80%의 에탄올을 사용하는 것이 바람직하다.The method for preparing the dihydrogenentyne-containing soybean embryo fermented product may use a polar solvent as the solvent used in the step (a), more preferably ethanol. As the ethanol used in the present invention, 20% to 80% of ethanol is preferably used on the basis of the alcohol for efficiency of extraction.

상기 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법은, 호기성 균주를 사용하기 때문에, 일정한 속도로 교반을 하여 산소를 공급하도록 한다. 이를 위하여, 상기 (b) 배양단계의 교반속도는 100 내지 300rpm로 하는 것이 바람직하다.The method for producing the dihydrogenentyne-containing soybean embryo fermented product is such that aerobic strains are used so that oxygen is supplied by stirring at a constant rate. For this, the agitation speed of the culturing step (b) is preferably 100 to 300 rpm.

상기 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법은, 상기 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus) EP106 (수탁번호: KACC91829P) 균주를 배지에 접종한 후, 상기 균주가 생육 가능한 온도 영역에서 20 내지 80 시간 동안 호기 발효시킴으로써 배양되는데, 상기 온도는 생육에 바람직한 조건이면 되고, 예를 들면, 20 내지 40℃, 바람직하게 는 28 내지 37℃, 더욱 바람직하게는 25 내지 30℃를 들 수 있다. The method for producing the dihydrogenenisteine-containing soybean embryo fermentation product is characterized in that the Pediococcus pentosaceus ) EP106 (Accession No .: KACC91829P) is inoculated into a culture medium and then cultured in aerobic fermentation for 20 to 80 hours in the temperature range in which the strain is able to grow. The temperature may be a condition suitable for growth, for example, 20 to 40 占 폚, preferably 28 to 37 占 폚, and more preferably 25 to 30 占 폚.

상기 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법은 상기 (b) 배양단계에서 상기 (a) 추출단계에서 추출된 추출물을 배양액 총량 기준으로 0.2 내지 3중량%로 포함시키는 것이 바람직하다.
The method for producing the dihydrogenentyne-containing soybean embryo fermented product preferably comprises 0.2 to 3% by weight based on the total amount of the culture medium extracted from the step (a) in the step (b).

또한, 본 발명은 상기 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus) EP106 (수탁번호: KACC91829P) 균주를 이용하여 제조된 대두 배아 발효물을 제공한다. 상기 단계를 거쳐 발효 처리되어 얻어지는 대두 배아 발효물에는 디하이드로제니스테인(dihydrogenistein, DHG)이 생성되어 축적되어 있다. 상기 조건으로 발효 처리되어 얻어지는 대두 배아 발효물은 발효 후 상태 그대로 식품, 의약품, 화장료 등의 소재로서 사용할 수도 있고, 필요에 따라서 건조 처리를 행하여 건조 고형물 상태로 하여 상기 소재로서 사용할 수도 있다. 대두 배아 발효물의 보존 안정성을 향상시키기 위해서는, 가열 건조 처리에 의해 고형상으로 해두는 것이 바람직하다. 또한, 가열 건조 처리된 대두 배아 발효물은, 필요에 따라서 분말화 처리를 하여 분말상으로 할 수도 있다.
The present invention also provides a soybean embryo fermented product produced using the strain Pediococcus pentosaceus EP106 (accession number: KACC91829P). Dihydrogenistein (DHG) is produced and accumulated in the fermented soybean embryo obtained by fermentation through the above steps. The fermented soybean embryo obtained by fermentation under the above conditions can be used as a raw material for foods, medicines, cosmetics and the like as it is after fermentation. In order to improve the storage stability of the fermented soybean embryo, it is preferable to make it solid by heat-drying treatment. The heat-dried soybean-embryo fermented product may be pulverized to a powder form if necessary.

본 발명의 칡 발효물 및 대두 배아 발효물은, 상술한 바와 같이, DHD와 같은 유용 생리 활성 물질이 포함되어 있기 때문에, 다양한 생리 활성이나 약리 활성을 발현할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 칡 발효물 및 대두 배아 발효물은, 여성 호르몬 수용체의 조절 효과가 일반 칡보다 고농도에서 우수하며, 세포독성이 완화되는 특성을 갖고 있어, 인체에 안전하면서도, 동시에 골다공증 등의 질환이나 증상의 예방 내지 개선에 유용하다. 또한, 본 발명의 칡 발효물 및 대두 배아 발효물은, 특히 중노년 여성에 있어서의 여성호르몬 조절 장애에 따른 관련질환인 갱년기 장애 또는 폐경에 수반하는 증상의 예방 내지 개선에 유용하다. Since the fermented product of the present invention and the fermented soybean embryo contain a useful physiologically active substance such as DHD as described above, various physiological activities and pharmacological activities can be expressed. For example, the fermented product of the present invention and the fermented product of soybean embryo are excellent in the control effect of the female hormone receptor at a higher concentration than general fungus, and have the characteristic of alleviating the cytotoxicity, so that it is safe for the human body, Which is useful for preventing or ameliorating the disease or symptom. In addition, the fermented product of the present invention and the fermented product of soybean embryo are useful for preventing or ameliorating symptoms associated with menopausal disorders or menopause, which are diseases related to female hormone control disorders, particularly in middle-aged women.

또한, 본 발명의 칡 발효물 및 대두 배아 발효물을 의약품 소재로서 사용하는 경우에는, 상기 칡 발효물 및 대두 배아 발효물은 정제, 환제, 산제, 액제, 현탁제, 유제, 과립제, 캡슐제, 좌제 등의 형태의 의약 제제로 제조된다. 본 발명의 칡 발효물 및 대두 배아 발효물을 함유하는 의약 제제는 갱년기 장애, 골다공증 등의 질환이나 증상의 예방 내지 개선제 등으로서 유용하다. 특히, 칡 발효물 및 대두 배아 발효물을 함유하는 의약 제제는 중노년 여성에 있어서의 권태 호소 내지 폐경에 수반하는 증상(예를 들면, 골다공증, 갱년기 장애 등)의 예방 또는 치료에 바람직하게 사용된다.When the fermented product of the present invention and the fermented product of soybean embryo are used as a pharmaceutical material, the fermented product and the fermented product of the soybean embryo may be used in the form of tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, Suppositories, and the like. The pharmaceutical preparation containing the fermented product of the present invention and the fermented product of the soybean embryo is useful as a preventive or remedy for diseases and symptoms such as menopausal disorder, osteoporosis and the like. Particularly, the pharmaceutical preparation containing the fermented product and the fermented product of soybean embryo is preferably used for the prevention or treatment of symptoms accompanying boredom or menopause (for example, osteoporosis, menopausal disorder, etc.) in middle-aged women .

이러한 칡 발효물 및 대두 배아 발효물을 더욱 효과적으로 적용시키기 위해서, 본 발명은 상기 칡 발효물 및 대두 배아 발효물을 동결 건조하여 칡 발효 동결 건조물을 제조하여 제공 할 수 있다.
In order to more effectively apply such fermented product and soybean embryo fermented product, the present invention can provide the fermented fermented product and the soybean embryo fermented product by lyophilizing to prepare a fermented fermented product.

이하 본 발명을 실시예에 기초하여 더욱 상세하게 설명하지만, 하기에 개시되는 본 발명의 실시 형태는 어디까지 예시로써, 본 발명의 범위는 이들의 실시 형태에 한정되지 않는다. 본 발명의 범위는 특허청구범위에 표시되었고, 더욱이 특허 청구범위 기록과 균등한 의미 및 범위 내에서의 모든 변경을 함유하고 있다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, the embodiments of the present invention described below are illustrative only and the scope of the present invention is not limited to these embodiments. The scope of the present invention is indicated in the claims, and moreover, includes all changes within the meaning and range of equivalency of the claims.

실시예Example

1. 균주의 동정 1. Identification of strain

1달 동안 칡 추출물을 섭취한 사람의 분변을 수집하여 gifu anaerobic medium(GAM), trypticase soy agar(TSA), ethylene bromide agar(EMA), brain heart infusion(BHI) 4종의 배지에 도말하여, 28?에서 24시간 동안 배양하면서 생성되는 colony의 형태와 색상을 기준으로 하여, 각각의 균주를 분리하였다. 또한, 2주 동안 갈근을 섭취한 사람의 분변을 gifu anaerobic medium(GAM), trypticase soy agar(TSA), ethylene bromide agar (EMA), reinforced clostridial medium(RCM), brain heart infusion(BHI), Lactobacilli MRS(MRS) 6종의 배지에 도말 한 후 형태와 색상을 기준으로 하여 각각의 균주를 분리하였다. For the first month, feces were collected from the feces of a person who consumed 칡 extract and applied to the medium of four kinds of gifu anaerobic medium (GAM), trypticase soy agar (TSA), ethylene bromide agar (EMA) and brain heart infusion (BHI) Each strain was isolated on the basis of the shape and color of the colony produced by incubation for 24 hours. In addition, the feces of people who ingested PGS for 2 weeks were divided into gifu anaerobic medium (GAM), trypticase soy agar (TSA), ethylene bromide agar (EMA), reinforced clostridial medium (RCM), brain heart infusion (BHI), Lactobacilli MRS (MRS) were sprinkled on 6 kinds of medium, and each strain was isolated based on the shape and color.

상기 분리된 균주들은 HPLC를 이용하여 분석하여 이소플라본 대사체 생성균주를 확인하였다. 각각의 분리 균주를 규명하기 위해 genomic DNA는 Solgent사의 genomic DNA prep kit를 이용하여 추출하였으며, 각각의 primer는 세균의 16S rRNA 부위를 특이적으로 증폭하는 forward primer인 27F (5'-agagtttgatcMtggctcag-3')와 reverse primer인 1492R (5'-ggYtaccttg ttacgactt-3')를 사용하였다. PCR reaction mixture는 template 1 ㎕, 2X Taq PCR premix(QIAGEN) 10 ㎕, forward primer 2 ㎕(10 pmole/㎕), reverse primer 2 ㎕(10 pmole/㎕), dDW 5 ㎕를 섞은 뒤 PCR을 수행하였다. PCR cycle은 94℃에서 10초, 45℃에서 20초, 72℃에서 1분 동안 수행하였으며, PCR 과정은 30번 반복하였다. 또한, Pre-denaturation과정은 94?에서 2분 동안 수행하였고 post-elongation 과정은 72℃에서 5분 동안 수행하였으며, PCR 결과는 0.7% agarose gel에서 확인하였다. PCR product의 정제는 QIAquick Gel Extraction kit를 사용하였으며, 균주 동정을 위해 정제된 DNA를 Solgent사에 의뢰하여 sequencing 한 뒤 NCBI BLAST(Basic Local Alignment Search Tool) 를 이용하여 분석한 결과를 도 1에 나타내었다. 최종 분리 균주는 Pediococcus pentosaceus와 상동성을 나타내었으며, 따라서 Pediococcus pentosaceus EP106로 명명하고 국립농업과학원에 2013년 7월 10일에 수탁번호 KACC91829P로 기탁하였다.
The isolated strains were analyzed by HPLC to confirm isoflavone metabolism producing strains. Genomic DNA was extracted using Solgent's genomic DNA prep kit to identify each isolate. Each primer contained a forward primer, 27F (5'-agagtttgatcMtggctcag-3 ', which specifically amplifies the 16S rRNA region of bacteria) ) And reverse primer 1492R (5'-ggYtaccttg ttacgactt-3 ') were used. PCR reaction mixture was prepared by mixing 1 μl of template, 10 μl of 2X Taq PCR premix (QIAGEN), 2 μl of forward primer (10 pmole / μl), 2 μl of reverse primer (10 pmole / μl) and 5 μl of dDW . The PCR cycle was performed at 94 ° C for 10 seconds, 45 ° C for 20 seconds, and 72 ° C for 1 minute, and the PCR procedure was repeated 30 times. In addition, the pre-denaturation procedure was performed at 94? For 2 minutes, the post-elongation procedure was performed at 72? For 5 minutes, and the PCR result was confirmed in 0.7% agarose gel. The purified product of the PCR product was purified using QIAquick Gel Extraction kit. The purified DNA was sequenced by Solgent for identification and analyzed using NCBI BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) . The final isolate was Pediococcus pentosaceus , thus indicating that Pediococcus pentosaceus EP106, and deposited with the National Academy of Sciences on July 10, 2013 under accession number KACC91829P.

2. 칡 추출물의 제조 및 배양액의 제조2. Preparation of 칡 extract and preparation of culture

분쇄한 갈근을 20% 주정(1:10비율)로 하여 하기 표 1과 같은 조건으로 칡 추출물을 제조한 한 후, 여과지(Hyundai micro, 20 ㎛)를 이용하여 감압여과 하였으며, 용매를 제거하기 위해 회전진공농축기(EYELA, Japan)를 사용하였다. 이 후, 1L 삼각플라스크에 GAM배지 100mL을 넣고, 하기 표 1과 같은 조건으로 추출물을 배지에 넣은 후 EP106을 0.1% 접종하여 배양액을 제조하였다.The crude extracts were prepared in the same conditions as shown in Table 1 with a 20% alcohol (1:10 ratio), and filtered under reduced pressure using a filter paper (Hyundai micro, 20 μm) A rotary vacuum concentrator (EYELA, Japan) was used. Subsequently, 100 mL of GAM medium was placed in a 1 L Erlenmeyer flask, and the extract was inoculated into the medium under the same conditions as shown in Table 1, followed by inoculation with 0.1% of EP106 to prepare a culture.

이 때, 배양액 제조시의 배양 시간, 배양액 제조시의 배양 온도, 배양액 제조시의 교반 속도 및 배양액 제조시의 추출물의 함량은 하기 표 1의 조건이 되도록 제조하였다.
At this time, the incubation time at the time of preparing the culture liquid, the incubation temperature at the time of preparing the culture liquid, the stirring speed at the time of preparing the culture liquid, and the content of the extract at the time of preparing the culture liquid were prepared as shown in Table 1 below.

배양시간(h)Culture time (h) 배양 온도(℃)Culture temperature (캜) 교반 속도(rpm)Stirring speed (rpm) 추출물 함량(%)Extract content (%) 실시예 1Example 1 2424 2828 250250 1.51.5 실시예 2Example 2 4848 2828 250250 1.51.5 실시예 3Example 3 7272 2828 250250 1.51.5 실시예 4Example 4 2424 3737 250250 1.51.5 실시예 5Example 5 4848 3737 250250 1.51.5 실시예 6Example 6 7272 3737 250250 1.51.5 실시예 7Example 7 4848 2828 100100 1.51.5 실시예 8Example 8 4848 2828 150150 1.51.5 실시예 9Example 9 4848 2828 200200 1.51.5 실시예 10Example 10 4848 2828 300300 1.51.5 실시예 11Example 11 4848 2828 250250 0.10.1 실시예 12Example 12 4848 2828 250250 0.20.2 실시예 13Example 13 4848 2828 250250 0.50.5 실시예 14Example 14 4848 2828 250250 1.01.0 실시예 15Example 15 4848 2828 250250 2.02.0 실시예 16Example 16 2424 2828 250250 2.02.0

3. 대두 배아 추출물의 제조 및 배양액의 제조3. Preparation of soybean embryo extract and preparation of culture

분쇄한 대두 배아을 20% 주정(1:10비율)로 하여 하기 표 2와 같은 조건으로 대두 배아 추출물을 제조한 한 후, 여과지(Hyundai micro, 20 ㎛)를 이용하여 감압여과 하였으며, 용매를 제거하기 위해 회전진공농축기(EYELA, Japan)를 사용하였다. 이 후, 1L 삼각플라스크에 GAM배지 100mL을 넣고, 하기 표 2와 같은 조건으로 추출물을 배지에 넣은 후 EP106을 0.1% 접종하여 배양액을 제조하였다.The soybean embryo extract was prepared using the pulverized soybean embryo as a 20% alcohol (1:10 ratio) under the conditions shown in Table 2, and then filtered under reduced pressure using a filter paper (Hyundai micro, 20 μm) A rotary vacuum concentrator (EYELA, Japan) was used. Subsequently, 100 mL of GAM medium was placed in a 1 L Erlenmeyer flask, and the extract was inoculated into the medium under the same condition as shown in Table 2, and EP106 was inoculated 0.1% to prepare a culture.

이 때, 배양액 제조시의 배양 시간, 배양액 제조시의 배양 온도, 배양액 제조시의 교반 속도 및 배양액 제조시의 추출물의 함량은 하기 표 2의 조건이 되도록 제조하였다.At this time, the incubation time at the time of preparing the culture liquid, the incubation temperature at the time of preparing the culture liquid, the stirring speed at the time of producing the culture liquid, and the content of the extract at the time of producing the culture liquid were prepared as shown in Table 2 below.

배양시간(h)Culture time (h) 배양 온도(℃)Culture temperature (캜) 교반 속도(rpm)Stirring speed (rpm) 추출물 함량(%)Extract content (%) 실시예 17Example 17 2424 2828 250250 1.51.5 실시예 18Example 18 4848 2828 250250 1.51.5 실시예 19Example 19 7272 2828 250250 1.51.5

4. 배양액의 분석 조건4. Analysis conditions of the culture medium

상기 배양액의 분석에는 DGU-20A3R(Shimazu, Japan) HPLC를 사용하였으며, 검출기는 PDA detector(Shimazu, SPD-M20A)로 280nm에서 측정하였다. 컬럼은 Skypack C18(SKchemical, 4.6*250mm, 5micron), Mobile phase A는 water: acetic acid = 100: 1(v/v%), B는 water: acetonitrile: acetic acid = 50 : 50 : 1(v/v%), flow rate는 1mL/min, column oven은 40℃, injection volume은 50 ㎕를 사용하였다. Injection sample은 원심분리기를 이용하여 12000 rpm, 15min, 4℃의 조건으로 상등액을 분리하여 사용하였다.
DGU-20A3R (Shimazu, Japan) HPLC was used for the analysis of the culture, and the detector was measured at 280 nm with a PDA detector (Shimazu, SPD-M20A). Acetonitrile: acetic acid = 50: 50: 1 (v / v) for mobile phase A: water: acetic acid = 100: v%), a flow rate of 1 mL / min, a column oven at 40 ° C, and an injection volume of 50 μl. Injection samples were separated by centrifugation at 12,000 rpm for 15 min at 4 ° C.

3'-hydroxydaidzein (White amorphous powder); 1H-NMR (DMSO-d6, 500MHz) a: 6.77 (2H, d, J=8.6Hz, H-5'), 6.81 (1H, dd, J=8.6, 2.2Hz, H-6), 6.86 (1H, d, J=2.2Hz, H-8), 6.94 (1H, dd, J=8.6, 2.2Hz, H-6'), 7.03 (1H, d, J=2.2Hz, H-2'), 7.97 (1H, d, J=8.6Hz, H-5), 8.26 (1H, s, H-2).
3'-hydroxydaidzein (White amorphous powder); (1H, dd, J = 8.6, 2.2 Hz, H-6), 6.86 (2H, d, J = 8.6 Hz, d, J = 2.2 Hz, H-8), 6.94 (1H, dd, J = 8.6, 2.2 Hz, H- (1H, d, J = 8.6 Hz, H-5), 8.26 (1H, s, H-2).

8-O-methylretusin (White amorphous powder); 1H-NMR (DMSO-d6, 500MHz) a: 3.80 (3H, s, OMe), 3.89 (3H, s, OMe), 7.00 (2H, d, J=8.6Hz, H-3',5'), 7.04 (1H, d, J=8.5Hz, H-6), 7.52 (2H, d, J=8.6Hz, H-2',6'), 7.73 (1H, d, J=8.5Hz, H-5), 8.43 (1H, s, H-2).
8-O-methylretinine (White amorphous powder); (3H, s, OMe), 7.00 (2H, d, J = 8.6Hz, H-3 ', 5'), D, J = 8.5 Hz, H-5 (1H, d, J = ), 8.43 (1H, s, H-2).

실험예Experimental Example 1: 배양온도 및 시간에 따른  1: Depending on incubation temperature and time EP106EP106 of DHDDHD 생산량 output

배양 온도 및 시간에 따른 DHD(dihydrodaidzein)의 생산량의 변화를 확인하기 위하여, 실시예 1 내지 실시예 6의 배양액에 대하여, HPLC를 이용하여 280 nm에서 DHD 의 함량을 측정하였다. 하기 표 3에 나타난 바와 같이, 28℃에서 48시간 동안 배양한 실시예 2의 DHD 생산량이 가장 많은 것을 알 수 있었다.In order to confirm the change in the production amount of DHD (dihydrodaidzein) according to the incubation temperature and time, the content of DHD was measured at 280 nm using the HPLC of the culture solutions of Examples 1 to 6. As shown in the following Table 3, DHD production of Example 2 cultured at 28 ° C for 48 hours was the highest.

DHD 생산량 (mg/g)DHD production (mg / g) 실시예 1Example 1 336.21336.21 실시예 2Example 2 490.45490.45 실시예 3Example 3 475.82475.82 실시예 4Example 4 5.555.55 실시예 5Example 5 9.779.77 실시예 6Example 6 18.6018.60

실험예Experimental Example 2: 배양액에 포함되는 추출물의 함량에 따른 효과의 차이 2: Difference in effect according to content of extract contained in culture

배양액에 포함되는 추출물의 함량에 따른 생산량의 변화를 확인하기 위하여, 실시예 2, 11 내지 실시예 15의 배양액에 대하여, HPLC를 이용하여 280 nm에서 DHD 의 함량을 측정하였다. 하기 도 2에 나타난 바와 같이, 2%의 함량을 갖는 실시예 15의 DHD 생산량이 가장 많은 것을 알 수 있었다.
In order to confirm the change of the production amount depending on the content of the extract contained in the culture, the content of DHD was measured at 280 nm using the HPLC of the culture solutions of Examples 2, 11 to 15. As shown in FIG. 2, the amount of DHD produced in Example 15 having the content of 2% was the highest.

실험예Experimental Example 3: 배양액에 포함되는 산소 농도에 따른 효과의 차이 3: Difference in effect according to oxygen concentration in culture

배양액을 교반할 때, 교반 속도에 비례하여 포함되는 산소의 농도도 증가한다는 점을 이용하여, 교반 속도에 따라, DHD 의 생산량이 변화하는 것을 측정하기 위하여, 실시예 2, 7 내지 10의 배양액에 대하여, HPLC를 이용하여 280 nm에서 DHD 의 함량을 측정하였다. 하기 표 4에 나타난 바와 같이, 교반 속도가 증가함에 따라서 생성되는 DHD의 함량이 증가한다는 것을 알 수 있었다. 이를 통하여 본 발명의 균주가 호기성 균주라는 것을 다시 한번 확인 할 수 있었다. Using the fact that the concentration of oxygen contained in proportion to the stirring speed also increased when the culture liquid was stirred, in order to measure the change in the production amount of DHD according to the stirring speed, the culture medium of Examples 2, 7 to 10 , The content of DHD was measured at 280 nm using HPLC. As shown in Table 4 below, it was found that the content of DHD produced increases with increasing stirring speed. Thus, it was confirmed once again that the strain of the present invention is an aerobic strain.

교반속도 Stirring speed DHD (mg/g) DHD (mg / g) 실시예 10Example 10 300 rpm 300 rpm 221.4 221.4 실시예 2Example 2 250 rpm 250 rpm 162.7 162.7 실시예 9Example 9 200 rpm 200 rpm 156.5 156.5 실시예 8Example 8 150 rpm 150 rpm 155.1 155.1 실시예 7Example 7 100 rpm 100 rpm 132.2 132.2

실험예Experimental Example 4: 칡  4: 칡 발효물의Fermented 발효 전 후의  Before and after fermentation DHDDHD 함량 측정 Content measurement

본 발명의 EP106 배양물을 접종하지 않은 칡 추출물을 비교예 1로 하여, 실시예 16의 배양액과 비교하였다. 도 3은 발효 전(비교예 1)과 발효 후 (실시예 16)를 비교한 것이다. 그 결과 칡 추출물에 함유되어 있던 Daidzein이 약 50% 없어지고, 칡 추출물에 없는 EP106에 의하여 생성된 DHD(dihydrodaidzein), 3,-HD (3 -hydroxydaidzein) 및 8-MR(8-O-methylretusin)이 나타난 것을 알 수 있었다.
As compared with the culture solution of Example 16, the extract of Phellinus linteus not inoculated with the EP106 culture of the present invention was regarded as Comparative Example 1. Fig. 3 compares the fermentation state before (before fermentation) (Comparative Example 1) and after fermentation (Example 16). As a result, about 50% of Daidzein contained in the extract was eliminated, and DHD (dihydrodaidzein), 3 -hydroxydaidzein (DHD) and 8-O-methylretusin (DHD) .

실험예Experimental Example 5: 칡  5: 칡 발효물의Fermented 여성호르몬 수용체 조절 효과의 측정 Measurement of female hormone receptor modulating effect

본 발명의 EP 106 균주를 이용하여, 여성호르몬 수용체 조절 효과를 확인하였다. 본 실험에 사용된 MCF-7 BUS 세포주는 미국 Tufts 대학에서 분양 받았으며, MG-63 세포주 및 LNCap 세포주는 한국세포주은행(KTCC, Korea)에서 구입하였다. MCF-7 BUS 세포주는 10% fetal bovine serum(Gibco, USA), 1% penicillin/streptomycin(GIBCO, USA)이 첨가된 Dulbecco? modified eagle? medium(Gibco, USA)을 사용하였으며, MG-63 세포주과 LNCap 세포주는 10% fetal bovine serum(Gibco, USA), 1% penicillin/streptomycin(GIBCO, USA)이 첨가된 Eagle's minimum essential medium(Gibco, USA)을 사용하였고, 37 ℃, 5% CO2가 유지되는 CO2배양기에서 배양하였다.Using the EP 106 strain of the present invention, the female hormone receptor modulating effect was confirmed. The MCF-7 BUS cell line used in this experiment was purchased from Tufts University in the USA, and MG-63 cell line and LNCap cell line were purchased from Korean Cell Line Bank (KTCC, Korea). MCF-7 BUS cells were cultured in Dulbecco's fashion supplemented with 10% fetal bovine serum (Gibco, USA) and 1% penicillin / streptomycin (GIBCO, USA) modified eagle? (Gibco, USA) supplemented with 10% fetal bovine serum (Gibco, USA) and 1% penicillin / streptomycin (GIBCO, USA) were used for the MG-63 and LNCap cell lines. And cultured in a CO 2 incubator maintained at 37 ° C and 5% CO 2.

MCF-7 BUS 세포주를 이용한 E-screen assay는 에스트로겐에 대한 민감성을 측정하기 위한 방법으로, 우선 96 well plate에 5 x 103 cells/well로 분주한 후, 37 ℃, 5% CO2가 유지되는 CO2배양기에서 배양하였으며, 24시간 후 charcoaled FBS 10%가 함유된 DMEM 배지로 교환하였다. 이 때, 상기 실시예 16의 발효 배양액을 0.01 ug/mL~100ug/mL의 농도로 처리하였으며, 양성 대조군으로 17ß-estradiol(E2, Sigma, USA)을 10-10 M로 처리하였다. 72시간 후 MTT (5 mg/mL)시약을 이용하여 550 nm에서 ELISA reader(Tecan, Switzerland)를 이용하여 측정하여, 도 4에 나타내었다. E-screen assay using MCF-7 BUS cell line is a method for measuring estrogen sensitivity. First, it is divided into 5 x 103 cells / well in a 96-well plate and incubated at 37 ° C in a CO2 incubator maintained at 5% . After 24 hours, the cells were changed to DMEM medium containing 10% of charcoaled FBS. At this time, the fermentation broth of Example 16 was treated at a concentration of 0.01 ug / mL to 100 ug / mL, and 17-estradiol (E2, Sigma, USA) was treated with 10-10 M as a positive control. The measurement was carried out at 550 nm using an ELISA reader (Tecan, Switzerland) using MTT (5 mg / mL) reagent after 72 hours and shown in FIG.

도 4에서 나타낸 바와 같이, 여성호르몬 수용체 조절효과를 비교한 결과, 합성 여성호르몬 (17beta-estradiol, E2)을 양성 대조군으로 하였을 때, 칡 20%주정 추출물 (Pueraria lobata)은 고농도에서 오히려 MCF7-BUS세포 (유방암 세포주)를 억제하여 여성호르몬 조절효과가 없어지면서 세포독성이 나타나는 반면 본 발명의 EP106을 이용하여 칡 추출물을 최적조건으로 발효하였을 때의 발효물은 고농도에서도 세포독성이 나타나지 않고, 여성호르몬 수용체 조절효과를 나타낸다는 것을 알 수 있었다. As shown in FIG. 4, when a synthetic hormone (17beta-estradiol, E2) was used as a positive control, the 20% extract of Pueraria lobata showed a higher concentration of MCF7-BUS Cells (breast cancer cell line) are suppressed and cytotoxicity is observed as the female hormone control effect disappears. However, when EP106 of the present invention is fermented under optimum conditions, the cell extract is not cytotoxic even at a high concentration, Receptor-modulating effect.

따라서, 본 발명의 EP106 균주를 이용하여 제조한 칡 발효물을 이용하는 경우에는 단일물질에 비하여 인체에 안전하면서 동시에 여성호르몬 수용체 조절효과를 통한 여성호르몬 관련 질환에 도움을 줄 수 있다는 것을 알 수 있다.
Therefore, it can be seen that when the fermented product prepared using the EP106 strain of the present invention is used, it is safer to the human body than the single substance, and at the same time, can help the female hormone-related diseases through regulating the female hormone receptor.

실험예Experimental Example 6: 대두 배아  6: soybean embryo 발효물의Fermented 배양 시간에 따른  Depending on incubation time EP106EP106 of DHGDHG 생산량 output

대두 배아 발효물의 배양 시간에 따른 디하이드로제니스테인(dihydrogenistein, DHG)의 생산량의 변화를 확인하기 위하여, 본 발명의 EP106 배양물을 접종하지 않은 대두 배아 추출물을 비교예 2로 하여, 실시예 17 내지 실시예 19의 배양액을 도 5와 같이 비교하였다. 도 5 에서, 피크 1은 Puerarin이고, 피크 4가 디하이드로제니스테인(dihydrogenistein, DHG)을 나타낸다. 18분 대에 변화가 없는 성분이 genistein이다. 도 5 나타난 바와 같이, 피크 1의 puerarin과 피크 3의 성분이 없어지면서, 디하이드로제니스테인(dihydrogenistein, DHG)의 피크 4가 증가되는 것을 확인 할 수 있었다.
In order to confirm the change in the production amount of dihydrogenistein (DHG) according to the incubation time of the fermented soybean embryo, the soybean embryo extract inoculated with the EP106 culture of the present invention was used as Comparative Example 2, The culture solution of Example 19 was compared as shown in Fig. In Figure 5, Peak 1 is Puerarin and Peak 4 is dihydrogenistein (DHG). Genistein is an unchanged ingredient in the 18th minute. As shown in FIG. 5, it was confirmed that the peak 4 of dihydrogenistein (DHG) was increased by eliminating the components of puerarin and peak 3 at peak 1.

국립농업과학원National Academy of Agricultural Sciences KACC91829PKACC91829P 2013071020130710

Claims (19)

다이드제인 또는 제니스테인을 각각 다이하이드로다이드제인(dihydrodaidzein, DHD) 또는 디하이드로제니스테인(dihydrogenistein, DHG)으로 전환할 수 있는 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus) EP106 (수탁번호: KACC91829P) 균주.
Diadjene or genistein can be converted into dihydrodaidzein (DHD) or dihydrogenistein (DHG), respectively, by using Pediococcus pentosaceus ) EP106 (accession number: KACC91829P).
청구항 1의 균주를 이용하여, 칡 추출물로부터 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법.
A method for producing a fermented product containing a dihydrolidase from a fermented extract using the strain of claim 1.
청구항 2에 있어서,
상기 방법은,
(a) 분쇄한 칡을 에탄올로 추출하는 추출단계; 및
(b) 상기 (a) 단계에서 얻은 추출물에 청구항 1의 균주를 접종한 후 이를 교반하여 배양액을 만드는 배양단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법.
The method of claim 2,
The method comprises:
(a) an extraction step of extracting the pulverized liquor with ethanol; And
(b) a step of culturing the strain obtained in step (a) inoculating the strain of claim 1, followed by agitation thereof to prepare a culture solution; and a step of culturing the fermented product containing the dihydroididase.
청구항 3에 있어서,
상기 (b) 배양단계의 교반속도는 100 내지 300rpm인 것을 특징으로 하는 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법.
The method of claim 3,
Wherein the stirring speed of the culturing step (b) is 100 to 300 rpm. ≪ RTI ID = 0.0 > 11. < / RTI >
청구항 3에 있어서,
상기 (b) 배양단계의 온도는 20 내지 40℃인 것을 특징으로 하는 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법.
The method of claim 3,
Wherein the temperature of the culture step (b) is 20 to 40 ° C.
청구항 3에 있어서,
상기 (b) 배양단계의 배양시간은 20시간 내지 80시간인 것을 특징으로 하는 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법.
The method of claim 3,
Wherein the culturing time of the step (b) is 20 to 80 hours. ≪ Desc / Clms Page number 19 >
청구항 3에 있어서,
상기 (b) 배양단계에서 상기 추출물을 배양액 총량 기준으로 0.2 내지 3중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 다이하이드로다이드제인 함유 칡 발효물을 제조하는 방법.
The method of claim 3,
Wherein the extract is contained in an amount of 0.2 to 3% by weight based on the total amount of the culture in the step (b) of culturing the fermented product.
청구항 1의 균주를 이용하여, 대두 추출물로부터 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법.
A method for producing a dihydrogenentyne-containing soybean embryo fermentation product from a soybean extract using the strain of claim 1.
청구항 8에 있어서,
상기 방법은,
(a) 분쇄한 대두를 에탄올로 추출하는 추출단계; 및
(b) 상기 (a) 단계에서 얻은 추출물에 청구항 1의 균주를 접종한 후 이를 교반하여 배양액을 만드는 배양단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법.
The method of claim 8,
The method comprises:
(a) an extraction step of extracting pulverized soybean with ethanol; And
(b) a step of culturing the strain obtained in step (a) inoculating the strain of claim 1, followed by agitation to produce a culture solution; and (c) culturing the fermented soybean embryo.
청구항 8에 있어서,
상기 (b) 배양단계의 교반속도는 100 내지 300rpm인 것을 특징으로 하는 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법.
The method of claim 8,
Wherein the stirring speed of the (b) culturing step is 100 to 300 rpm. ≪ RTI ID = 0.0 > 11. < / RTI >
청구항 8에 있어서,
상기 (b) 배양단계의 온도는 20 내지 40℃인 것을 특징으로 하는 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법.
The method of claim 8,
Wherein the temperature of the culture step (b) is 20 to 40 占 폚.
청구항 8에 있어서,
상기 (b) 배양단계의 배양시간은 20시간 내지 80시간인 것을 특징으로 하는 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법.
The method of claim 8,
Wherein the culture time of the step (b) is 20 to 80 hours. ≪ Desc / Clms Page number 20 >
청구항 8에 있어서,
상기 (b) 배양단계에서 상기 추출물을 배양액 총량 기준으로 0.2 내지 3중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 디하이드로제니스테인 함유 대두 배아 발효물을 제조하는 방법.
The method of claim 8,
Wherein the extract comprises 0.2 to 3% by weight based on the total amount of the culture in the step (b) of culturing the fermented soybean embryo.
청구항 1의 균주를 이용하여 제조된 칡 발효물.
A fermented product produced by using the strain of claim 1.
청구항 14의 칡 발효물을 동결 건조하여 제조된 칡 발효 동결 건조물.
A fermented fermented dried product produced by freeze-drying the fermented product of claim 14.
갱년기 장애, 골다공증, 전립선 암, 전립선 비대증 또는 여성호르몬 조절 장애의 예방 또는 치료에 사용되는, 청구항 14의 칡 발효물을 포함하는 의약 제제.
A pharmaceutical preparation comprising the fermentation product of claim 14, which is used for the prevention or treatment of menopausal disorders, osteoporosis, prostate cancer, prostate hyperplasia or female hormone control disorders.
청구항 1의 균주를 이용하여 제조된 대두 배아 발효물.
A fermented soybean embryo produced using the strain of claim 1.
청구항 17의 대두 배아 발효물을 동결 건조하여 제조된 대두 배아 발효 동결 건조물.
A freeze-dried fermented soybean embryo produced by freeze-drying the fermented soybean embryo of claim 17.
갱년기 장애, 골다공증, 전립선 암, 전립선 비대증 또는 여성호르몬 조절 장애의 예방 또는 치료에 사용되는, 청구항 17의 대두 배아 발효물을 포함하는 의약 제제.A pharmaceutical preparation comprising the fermented soybean embryo of claim 17 for use in the prevention or treatment of menopausal disorders, osteoporosis, prostate cancer, hyperplasia of the prostate, or female hormone control disorders.
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2017082478A1 (en) * 2015-11-09 2017-05-18 대한민국(농촌진흥청장) Pharmaceutical composition for preventing or treating osteoporosis comprising soybean germinated embryo extract
KR101878590B1 (en) * 2017-01-20 2018-08-17 경상북도(관련부서:경상북도산림자원개발원) Composition of fermented vinegar of kudzu root for preventing or treating menopausal symptoms
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KR102542030B1 (en) * 2022-12-28 2023-06-14 주식회사 정.식품 Makgeolli-derived Lacticaseibacillus paracasei subsp. paracasei DCF0429 and functional postbiotics using the same

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