KR20140094462A - Pharmaceutical composition comprising CD31-ITIM polypeptide or nucleic acids encoding the same for promoting blood vessel formation - Google Patents
Pharmaceutical composition comprising CD31-ITIM polypeptide or nucleic acids encoding the same for promoting blood vessel formation Download PDFInfo
- Publication number
- KR20140094462A KR20140094462A KR1020140007004A KR20140007004A KR20140094462A KR 20140094462 A KR20140094462 A KR 20140094462A KR 1020140007004 A KR1020140007004 A KR 1020140007004A KR 20140007004 A KR20140007004 A KR 20140007004A KR 20140094462 A KR20140094462 A KR 20140094462A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- angiogenesis
- itim
- pharmaceutical composition
- heart failure
- polypeptide
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
본원은 단백질을 이용한 혈관생성 조절을 통한 이와 관련된 질환 치료제 개발에 관한 것이다.
The present invention relates to the development of therapeutic agents for diseases associated with the regulation of angiogenesis using proteins.
허혈이란 국소 빈혈이 심하여 해당 부위에 육안으로 혈액이 있음을 거의 인정할 수 없는 상태로 대표적인 예로 허혈성 심혈관질환을 들 수 있다. 허혈성 심혈관 질환의 치료법으로는 세포치료법 및 약물학적 방법 등을 들 수 있다.Ischemia is an ischemic cardiovascular disease that is rarely recognized as having ischemic blood due to severe ischemia. Methods for treating ischemic cardiovascular diseases include cell therapy and pharmacological methods.
세포치료 방법은 주로 조직 재생이 가능한 성체 줄기세포 또는 전구세포를 이용한 것으로 예를 들면 골수유래 줄기세포를 이용한 혈관 및 근육을 재생하려는 시도가 있다. 하지만 성체줄기세포를 구성하는 세포 및 조직 재생에 적합한 줄기세포의 선별을 위한 방법에 대한 불충분한 이해로 인해 실제 사용에 어려움이 있다. 예를 들면 분획화되지 않은 전체 골수유래 줄기세포를 사용하는 경우, 심근내 석회화가 유발될 수 있다.Cell therapy methods mainly use adult stem cells or progenitor cells capable of tissue regeneration. For example, there are attempts to regenerate blood vessels and muscles using bone marrow derived stem cells. However, there are difficulties in practical use due to insufficient understanding of methods for selecting stem cells suitable for cell and tissue regeneration constituting adult stem cells. For example, when whole bone marrow-derived stem cells that are not fractionated are used, calcification of the myocardium may be induced.
약물학적 방법으로는 포스포디에스터라제 III의 선택적 저해작용에 의해 혈소판내 cAMP를 증가시켜, 혈소판 응집 억제작용을 나타내는 실로스타졸(Cilostazol)을 들 수 있으며, 상기 약물은 이외에도 혈관확장작용, 혈관 평활근 세포 증식억제작용, 중성지방 저하작용 등이 있다. 그 외 신경세포 세포사 예방 효과등도 밝혀지고 있으며, 이와 같은 작용으로 실제 허혈성 질환의 임상 치료제로 사용되고 있다.As a pharmacological method, Cilostazol, which increases cAMP in platelets by selective inhibition of phosphodiesterase III and exhibits an action of inhibiting platelet aggregation, may be mentioned. Smooth muscle cell proliferation inhibitory action, and triglyceride lowering action. In addition, other neuronal cell death prevention effects have been revealed, and these actions are used as clinical therapeutic agents for actual ischemic diseases.
동맥경화증은 심근경색, 뇌졸중, 혈관성 사망 등과 같은 허혈성 혈관질환으로 발전하는 병적상태로서 심한 경우 사망에까지 이를 수 있기 때문에 그 치료가 매우 중요하다. 클로피도그렐 (Clopidogrel)은 티에노피리딘계 항혈소판 응집억제 약물로, 혈소판의 ADP 수용체를 막아 피브리노겐과의 결합을 차단함으로써 혈소판의 점착과 응집을 감소시켜 동맥경화증의 치료에 사용된다.Atherosclerosis is a pathological condition that develops into ischemic vascular diseases such as myocardial infarction, stroke, and vascular death, and treatment is very important because it can lead to death even in severe cases. Clopidogrel is a thienopyridine-based anti-platelet aggregation inhibitory drug that is used to treat atherosclerosis by blocking platelet adhesion and aggregation by blocking the binding of fibrinogen by blocking the ADP receptor on platelets.
미국공개특허 제2010/0119490호는 CD31 발현세포를 치료제로 사용하는 것에 관한 것으로, CD31 발현 세포의 분리 및 이를 조직 재생 용도로 사용하는 방법에 대하여 개시한다.U.S. Published Patent Application No. 2010/0119490 relates to the use of CD31-expressing cells as therapeutic agents, and discloses methods for using CD31-expressing cells for tissue regeneration.
대한민국 공개특허 제2007-0054140호는 제대혈 유래 다분화능 줄기세포 및 이를 함유하는 허혈성괴사질환 치료용 세포치료제에 관한 것으로 폐쇄성 동맥질환에 의한 허혈성 괴사질환 치료용 세포치료제를 제공한다.Korean Patent Publication No. 2007-0054140 is related to cord blood-derived multipotent stem cells and a cell therapy agent for treating ischemic necrosis disease containing the same, and provides a cell therapy agent for treating ischemic necrosis disease caused by obstructive arterial disease.
종래의 세포치료제 또는 저분자화합물 이외에 이용한 약물 이외의 다양한 치료제 개발에 대한 필요성이 있다.
There is a need to develop various therapeutic agents other than drugs used in addition to conventional cell therapy agents or low molecular compounds.
본원은 혈관생성이 필요한 질환 치료제를 제공하고자 한다.
The present invention seeks to provide a therapeutic agent for diseases requiring angiogenesis.
한 양태에서 본원은 혈관생성 촉진용의 하나 이상의 CD31-ITIM 폴리펩타이드 또는 이를 코딩하는 유전자를 제공한다. 본원에 따른 일 구현예에서 CD31-ITIM 폴리펩타이드는 복수개 특히 1 ~ 4개 포함될 수 있고, 또한 폴리펩타이드는 특정 잔기에서 인산화될 수 있다. 본원의 펩타이드가 효과가 있는 혈관생성은 혈관형성 및/또는 혈관신생을 포함한다.In one aspect, the disclosure provides one or more CD31-ITIM polypeptides for promoting angiogenesis, or a gene encoding the same. In one embodiment according to the present disclosure, a plurality of CD31-ITIM polypeptides may be included, particularly 1 to 4, and the polypeptide may be phosphorylated at a specific residue. The angiogenesis to which the peptide of the present invention is effective includes angiogenesis and / or angiogenesis.
다른 양태에서 본원은 본원에 따른 폴리펩타이드를 코딩하는 유전자, 상기 유전자를 포함하는 원핵 또는 진핵 세포 발현용 벡터, 및 상기 벡터로 형질전환된 E.coli와 같은 박테리아, 효모, 또는 포유류 유래 세포를 제공한다.In another aspect, the present invention provides a method of producing a polypeptide comprising the steps of providing a gene encoding a polypeptide according to the present invention, a prokaryotic or eukaryotic cell expression vector comprising said gene, and a bacterial, yeast or mammalian cell such as E. coli transformed with said vector do.
본원에 따른 펩타이드에 의한 혈관생성 촉진은 허혈성 질환 또는 증상의 예방 또는 치료와 관련된 것으로, 상기 허혈성 질환 또는 증상은 예를 들면 허혈로 인한 조직 손상, 뇌경색, 뇌졸중, 재관류손상, 심근경색, 울혈성심장기능상실, 말초혈관폐색증, 심장비후, 저심장수축증, 저심장이완증, 부적응성심장비대, 수축기 심부전, 이완기 심부전, 고혈압성 심부전, 동맥 및 승포판 질환, 폐동맥판 질환심혈관, 또는 허혈성 장염을 포함하나 이로 제한하는 것은 아니다.Promoting angiogenesis by the peptides according to the present invention relates to the prevention or treatment of an ischemic disease or condition, wherein the ischemic disease or condition is selected from the group consisting of tissue damage due to ischemia, stroke, stroke, reperfusion injury, myocardial infarction, Including cardiac hypertrophy, cardiac hypertrophy, cardiac hypertrophy, cardiac hypertrophy, maladaptive cardiac insufficiency, systolic heart failure, diastolic heart failure, hypertensive heart failure, arterial and vascular disease, pulmonary artery disease cardiovascular, or ischemic enteritis But is not limited thereto.
다른 양태에서 본원은 CD31-ITIM 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자를 포함하는, 혈관생성 촉진용 조성물을 제공하며, 한 구현예에서는 허혈성 증상 또는 질환 치료용으로 사용된다. 다양한 유래의 CD31-ITIM이 사용될 수 있으며, 예를 들면 상기 CD31-ITIM 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자는 포유류, 특히 인간 유래이다. 상기 허혈성 질환 또는 증상은 근육, 뇌, 신장, 대장 또는 심장에서 발생한 것으로 상기 허혈성 증상 또는 질환은 예를 들면 허혈로 인한 조직 손상, 뇌경색, 뇌졸중, 재관류손상, 심근경색, 울혈성심장기능상실, 말초혈관폐색증, 심장비후, 저심장수축증, 저심장이완증, 부적응성심장비대, 수축기 심부전, 이완기 심부전, 고혈압성 심부전, 동맥 및 승포판 질환, 폐동맥판 질환심혈관, 또는 허혈성 장염을 들 수 있으나 이로 제한하는 것은 아니다.
In another aspect, the invention provides a composition for promoting angiogenesis, comprising a CD31-ITIM protein or a gene encoding the same, and in one embodiment is used for the treatment of ischemic conditions or diseases. Various derived CD31-ITIM may be used, for example, the CD31-ITIM protein or the gene encoding it is derived from a mammal, particularly a human. The ischemic disease or condition occurs in muscle, brain, kidney, large intestine, or heart, and the ischemic symptom or disease is selected from the group consisting of ischemic tissue damage, cerebral infarction, stroke, reperfusion injury, myocardial infarction, Cardiac hypertrophy, arterial and vascular disease, pulmonary arterial disease, cardiovascular disease, or ischemic enteritis, but not limited to, cardiomyopathy, cardiomyopathy, cardiac hypertrophy, hypothyroidism, hypothyroidism, maladaptation equipment, systolic heart failure, diastolic heart failure, It is not.
본원의 CD31-ITIM 또는 이를 코딩하는 유전자 또는 이를 포함하는 약학조성물은 혈관 형성을 유도하여, 혈관생성의 촉진이 필요한 다양한 질환 예를 들면 근육, 뇌, 심장, 신장, 또는 대장에서 발생한 허혈성 질환, 예를 들면 허혈로 인한 조직 손상, 뇌경색, 뇌졸중, 재관류손상, 심근경색, 울혈성심장기능상실, 말초혈관폐색증, 심장비후, 저심장수축증, 저심장이완증, 부적응성심장비대, 수축기 심부전, 이완기 심부전, 고혈압성 심부전, 동맥 및 승포판 질환, 폐동맥판 질환심혈관, 또는 허혈성 장심혈관 재생 또는 회복에 유용하게 사용될 수 있다.
The CD31-ITIM of the present invention, or a gene encoding the same, or a pharmaceutical composition containing the CD31-ITIM can induce angiogenesis and induce various diseases requiring promotion of angiogenesis, for example, ischemic diseases caused by muscle, brain, heart, For example, tissue damage caused by ischemia, cerebral infarction, stroke, reperfusion injury, myocardial infarction, congestive heart failure, peripheral vascular occlusion, cardiac hypertrophy, hypochondroplasia, hypotonia, maladaptive device, systolic heart failure, diastolic heart failure , Hypertensive heart failure, arterial and vascular disease, pulmonary arterial disease cardiovascular, or ischemic intestinal cardiovascular regeneration or recovery.
도 1은 HUVEC (GFP-HUVEC)을 이용하여 rhCD31 (ITIM) 이 혈관생성에 미치는 영향을 형광현미경을 사용하여 분석한 결과이다.
도 2는 rhCD31 (ITIM)이 Scratch wound healing assay (in vitro)을 이용하여 HUVEC의 이동 (Migration)을 분석한 결과로, 도 2a는 rhCD31을 처리 후 6시간에 촬영한 사진이며, 도 2b는 rhCD31을 처리 후 6시간에 wound size을 정량한 결과이다.
도 3은 혈관 형성에 중요하다고 알려진 분자들의 유전자 발현을 정량 역전사중합효소증폭반응(qRT-PCR)으로 분석한 결과이다.Figure 1 shows the result of analysis of the effect of rhCD31 (ITIM) on angiogenesis using HUVEC (GFP-HUVEC) using fluorescence microscopy.
FIG. 2 shows the results of analysis of migration of HUVEC using rhythm 31 (ITIM) in a Scratch wound healing assay (in vitro). FIG. 2a shows a photograph taken at 6 hours after treatment of rhCD31, And the wound size was determined at 6 hours after treatment.
FIG. 3 shows the results of analysis of gene expression of molecules known to be important for angiogenesis by quantitative RT-PCR (qRT-PCR).
본원은 내피 세포 표지인자로 알려진 CD31 또는 PECAM-1의 ITIM이 혈관생성능이 있다는 발견에 기초한 것이다.The present invention is based on the discovery that the ITIM of CD31 or PECAM-1, known as endothelial cell markers, is angiogenic.
CD31 또는 PECAM-1 (Platelte Endothelial Cell Adhesion Molecule-1)은 면역글로불린 수퍼패밀리에 속하는 130 kDa의 타입 I 막관통 당단백질로 내피세포의 세포-세포 경계 (junction)과 단핵구, 과립구, 자연킬러세포, 나이브 T세포 및 혈소판과 같은 조혈세포의 표면에서 발현되는 것으로 알려져 있다. 아미노말단은 면역글로불린 유사영역으로 세포-세포 상호작용에 필요한 동종친화성 결합에 관여하며, 세포내에 존재하는 ITIM (immunoreceptor tyrosine inhibitory motif)는 타이로신 포스파타제와 같은 신호전달 분자를 모으는 스캐폴드 기능을 하여 상기 단백질의 억제 기능을 매개한다. 일반적으로는 조직절편에서 내피세포 마커로서 사용되었으나, 이의 혈관 형성 촉진 기능은 알려진 바 없다.CD31 or PECAM-1 (Platelte Endothelial Cell Adhesion Molecule-1) is a 130 kDa type I transmembrane glycoprotein belonging to the immunoglobulin superfamily. It is a cell-cell junction of endothelial cells and a monocyte, granulocyte, natural killer cell, It is known to be expressed on the surface of hematopoietic cells such as naive T cells and platelets. The amino terminus is involved in the kinase-dependent binding necessary for cell-cell interaction into an immunoglobulin-like domain. The ITIM (immunoreceptor tyrosine inhibitory motif) present in the cell functions as a scaffold for collecting signaling molecules such as tyrosine phosphatase, It mediates the inhibitory function of proteins. In general, it was used as an endothelial cell marker in tissue sections, but its function of promoting angiogenesis is not known.
따라서 한 양태에서 본원은 하나 이상의 CD31-ITIM 폴리펩타이드를 포함하는 혈관 형성 촉진용 폴리펩타이드에 관한 것이다.Thus, in one aspect, the present invention relates to a polypeptide for promoting angiogenesis comprising one or more CD31-ITIM polypeptides.
상술한 바와 같이 본원의 CD31-ITIM은 CD31의 세포내 존재하는 카르복시 말단을 이루는 모티브로, 예를 들면 인간유래 CD31은 GenBank No. NP_000433로 개시되어 있으며, ITIM은 아미노산 잔기 621-738에 해당한다. 본원의 목적을 위해서는 한 개 이상의 ITIM이 사용될 수 있다. 본원에 따른 일 구현예에서는 1 ~ 4개가 포함되며, 특히 두 개가 포함된다. 각 ITIM 모티브는 공지된 펩타이드 또는 비펩타이드성 연결체를 이용하여 연결될 수 있다. 두 개 이상의 ITIM 모티브는 두 개 또는 그 이상으로 연결 될 수 있다.As described above, the CD31-ITIM of the present invention is a motif that forms the carboxy terminal present in the cell of CD31. NP_000433, and ITIM corresponds to amino acid residues 621-738. More than one ITIM may be used for purposes of this application. In one embodiment according to the present application, there are 1 to 4, especially 2. Each ITIM motif can be linked using known peptides or non-peptide linkages. Two or more ITIM motifs can be connected in two or more.
나아가 본원의 ITIM 모티브는 하나 이상의 타이로신 잔기에서 인산화될 수 있다. 예를 들면 상기 NP_000433로 개시된 서열을 기준으로 690 및/또는 713 위치가 인산화 될 수 있다. 인산화가 되면 SHP-2와 Gab1이 리쿠르트되어, 이로 인해 Erk가 활성화되고 하위 신호가 증폭된다 (Ref: Peter J. Newman and Debra K. Newman, ATVB, 2003 Jun 1;23(6):953-64).Further, the ITIM motifs herein may be phosphorylated at one or more tyrosine residues. For example, 690 and / or 713 positions may be phosphorylated based on the sequence disclosed in NP_000433. Upon phosphorylation, SHP-2 and Gab1 are recruited, which activates Erk and amplifies the lower signal (Ref: Peter J. Newman and Debra K. Newman, ATVB, 2003 Jun 1; 23 (6): 953-64 ).
상술한 서열은 예시적인 것으로, CD31-ITIM 폴리펩타이드 또는 이를 코딩하는 유전자는 본 발명에 따른 효과를 나타내는 한 인간을 포함한 다양한 포유류 유래의 것 및 이와 기능적으로 동등한 변이체가 모두 본원의 범위에 포함된다. 본원에 사용될 수 있는 CD31 아미노산 서열은 예를 들면 인간 유래의 경우 GenBank 번호 NP_000433, 핵산 서열은 NC_000017 을 들 수 있으나, 이로 제한하는 것은 아니며, 이와 기능적으로 동등한 변이체도 포함한다. ITIM은 상기 CD31의 카르복시 말단에 존재하는 (아미노산 잔기 621-738) CD31의 세포내 영역이다. 본원에서 CD31 또는 ITIM 폴리펩타이드는 GenBank 번호 NP_000433에 개시된 ITIM 아미노산 서열과 적어도 85%의 상동성을 가진다.The above-mentioned sequences are illustrative, and the CD31-ITIM polypeptide or the gene encoding the CD31-ITIM polypeptide is included in the scope of the present invention as well as various mammalian-derived and functionally equivalent variants thereof, including human beings, which exhibit the effects according to the present invention. The CD31 amino acid sequence that can be used in the present invention includes, for example, GenBank number NP_000433 in the case of a human origin, NC_000017 in a nucleic acid sequence, and mutants which are functionally equivalent thereto. ITIM is an intracellular region of CD31 (amino acid residues 621-738) present at the carboxy terminus of the CD31. The CD31 or ITIM polypeptide herein has at least 85% homology with the ITIM amino acid sequence set forth in GenBank No. NP_000433.
본원의 CD31-ITIM은 ITIM 분자를 하나 또는 두 개 이상을 포함할 수 있으며, 일 구현예에서는 하나, 다른 구현예에서는 두 개, 또다른 구현예에서는 세 개를 포함한다.The CD31-ITIM herein may include one or more ITIM molecules, one in one embodiment, two in another, and three in another embodiment.
용어 "기능적으로 동등한 변이체"란 특정 종 유래의 야생형 단백질 또는 이의 유전자 서열과 비교하여 변이가 있지만 혈관 형성 촉진 기능을 갖는 것을 말한다. 따라서, 예를 들면, 본원의 CD31-ITIM 또는 이를 코딩하는 유전자는 사람 유래의 GenBack NO. NP_000433로 표시되는 서열과 기능적으로 동등한 변이체를 포함한다. 예를 들면 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열로 이루어지는 단백질을 암호화하는 돌연변이체(mutants), 유도체(derivatives), 대립유전자(alleles), 변형체(variants) 및 동질체 (homologues)를 포함한다.The term "functionally equivalent variant" refers to a variant of wild-type protein or its gene sequence derived from a specific species, but having the ability to promote angiogenesis. Thus, for example, the CD31-ITIM of the present invention or the gene encoding it may be derived from human-derived GenBack NO. Lt; RTI ID = 0.0 > NP-000433 < / RTI > Mutants, derivatives, alleles, variants and variants encoding a protein consisting of an amino acid sequence in which one or more amino acids in the amino acid sequence are substituted, deleted, added and / or inserted, And homologues.
이와 같이, 야생형 CD31-ITIM 단백질을 암호화하는 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실 및/또는 부가된 아미노산 서열을 가지는 단백질을 암호화하는 유전자도 동등한 기능을 가지는 단백질을 암호화하는 한, 본 발명의 유전자에 포함된다. 나아가, 예를 들어, 염기서열 변이가 단백질 중의 아미노산의 변이를 수반하지 않는 경우(축중변이)가 존재하며, 이러한 축중변이체(degeneracy mutants)도 본 발명의 유전자에 포함된다.
As such, as long as a gene encoding a protein having an amino acid sequence in which at least one amino acid is substituted, deleted and / or added in the amino acid sequence encoding the wild-type CD31-ITIM protein also encodes a protein having an equivalent function, . Furthermore, for example, there is a case where the base sequence mutation does not involve a mutation of the amino acid in the protein (axial shift), and such a degenerative mutant is also included in the gene of the present invention.
상기 본원에 사용되는 단백질은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들면 상기 단백질을 코딩하는 상응하는 유전자를 포함하는 플라스미드를 원핵 또는 진핵세포 세포 예를 들면 곤충세포, 포유류 세포에 전달하여 과발현 시킨 후 정제하여 사용할 수 있다. 상기 플라스미드는 예를 들면 pET28b(Novagen)과 같은 벡터에 해당 유전자를 클로닝하여 세포주에 전달이입한 후, 발현된 단백질을 당업계에 공지된 분리방법에 의해 정제하여 사용할 수 있다. 정제 방법은 통상, 세포잔여물(cell debris) 등을 제거하기 위해 세포 파쇄물 또는 시험관내 번역한 결과물을 원심분리한 후, 침전, 투석, 각종 컬럼 크로마토그라피 예를 들면 이온교환 크로마토그라피, 겔-퍼미에이션 크로마토그라피, HPLC, 역상-HPLC, 프렙용 SDS-PAGE, 친화성 컬럼에 적용한다. 친화성 컬럼은, 예를 들어, 항-스크리닝 단백질 항체를 이용하여 만들 수 있다.The proteins used in the present invention can be prepared using methods known in the art. For example, a plasmid containing the corresponding gene encoding the protein may be transferred to prokaryotic or eukaryotic cells such as insect cells and mammalian cells for overexpression, followed by purification. For example, the plasmid can be used by cloning the gene into a vector such as pET28b (Novagen), transferring it to a cell line, and then purifying the expressed protein by a separation method known in the art. The purification method is usually performed by centrifuging a cell lysate or an in vitro translation product to remove cell debris and the like, and thereafter precipitating, dialysis, various column chromatography, for example, ion exchange chromatography, gel- HPLC, reversed-phase HPLC, SDS-PAGE for Fragment, and affinity column. Affinity columns can be made, for example, using anti-screening protein antibodies.
본원의 펩타이드는 치료용 펩타이드로 사용될 수 있으며, 치료용 펩타이드는 개체의 기능에 긍정적 영향을 미치는 단백질 또는 그 유사체로, 질환, 증상, 질병의 발생 또는 진행을 감소, 억제, 경감, 완화 또는 안정화 시킬 수 있다. 일 구현예에서, 본원의 폴리펩타이드는 혈관생성의 촉진에 효과가 있는 것으로 혈류의 감소로 인해 발생하는 다양한 허혈성 질환의 치료에 사용될 수 있다.
The peptide of the present invention may be used as a therapeutic peptide, and the therapeutic peptide may be a protein or an analogue thereof positively affecting the function of an individual, and may be used to reduce, inhibit, alleviate, alleviate, or stabilize the occurrence or progression of a disease, . In one embodiment, the polypeptide of the invention is effective in promoting angiogenesis and may be used in the treatment of a variety of ischemic diseases resulting from decreased blood flow.
따라서 다른 양태에서 본원은 본원에 따른 펩타이드 및/또는 이를 코딩하는 유전자를 포함하는 혈관생성의 촉진용 조성물에 관한 것이다. 본원의 조성물은 혈관생성의 촉진에 효과가 있는 것으로 혈류의 감소로 인해 발생하는 다양한 허혈성 질환의 치료에 사용될 수 있다.Accordingly, in another aspect, the present invention relates to a composition for promoting angiogenesis comprising a peptide according to the present invention and / or a gene encoding the same. The composition of the present invention is effective for promoting angiogenesis and can be used for the treatment of various ischemic diseases caused by reduction of blood flow.
본원에서 “혈관생성”은 “혈관형성 (vasculogenesis)”및“혈관신생(angiogenesis)”을 모두 포함하는 것이다. 혈관 형성은 초기 배아에서 일차 혈관총의 형성시 발생하는 것과 같이 내피세포 전구체의 성숙한 내피세포로의 제자리 분화 및 신생혈관을 형성하기 위한 이들 세포의 회합을 특징으로 한다. 혈관신생은 이미 존재하고 있는 혈관의 성장 및 분기에 의한 혈관 성장이 원인이다. 다른 측면에서는 이미 존재하는 혈관에서 유래한 것일 수도 있으며, 줄기세포, 혈관모세포 또는 기타 전구세포에서 생성된 것일 수 있다. 혈관생성을 측정하는 방법은 공지된 것으로, 예를 들면 비분지형 혈관 분절의 수 (단위 면적당 분절의 수), 기능성 혈관밀도 (단위 면적당 관류된 혈관의 총 길이), 혈관 직경, 또는 혈관 부피 밀도 (단위면적당 각 분절의 직경과 길이를 근거로 계산한 총 혈관 부피)를 측정하여 결정할 수 있다.As used herein, " angiogenesis " includes both " vasculogenesis " and " angiogenesis ". Angiogenesis is characterized by the differentiation of endothelial cell precursors into mature endothelial cells and the assembly of these cells to form new blood vessels, as occurs in the formation of primary vascular grafts in early embryos. Angiogenesis is caused by the growth and branching of blood vessels that already exist. In another aspect, it may be derived from an already existing blood vessel, or it may be stem cells, blood vessel cells or other progenitor cells. Methods for measuring angiogenesis are well known and include, for example, the number of non-segmented blood vessel segments (number of segments per unit area), functional blood vessel density (total length of perfused blood vessels per unit area), vessel diameter, or vessel volume density The total vessel volume calculated on the basis of the diameter and length of each segment per unit area).
본원에서 “치료”란 질환, 또는 질환으로 인한 증상 또는 상태의 억제, 제거, 경감, 완화, 개선, 및/또는 예방을 포함하는 개념이다.As used herein, the term " treatment " is a concept involving inhibiting, eliminating, alleviating, ameliorating, improving and / or preventing a disease or condition or condition due to a disease.
본원에서 “허혈 증상”이란 출혈, 색전 (embolism) 및 경색 (infarction) 등에 의해 조직으로의 혈류공급이 중단되어 세포손상이 일어난 상태로, 불충분한 혈액 순환으로 인한 산소결핍으로 인한 다양한 증상을 포함한다. 본원에서“허혈성 질환”이란, 허혈로 인하여 발생하는 조직 또는 장기의 손상 또는 이로 인한 질환으로, 근육조직, 뇌, 심장, 신장, 대장과 같은 각종 장기를 포함하는 어떤 장기에서도 발생할 수 있다. 예를 들면 뇌 허혈은 뇌졸중, 재관류손상 등과 같은 질환으로 이어지며, 장의 경우 대장으로의 혈류가 감소할 경우 허혈성 대장염이 발생할 수 있고, 심장 허혈은 심근경색, 울혈성심장기능상실로 이어질 수 있다.As used herein, the term " ischemic symptom " includes various symptoms due to oxygen deficiency due to insufficient blood circulation in which blood supply to the tissue is stopped due to bleeding, embolism and infarction, . As used herein, the term " ischemic disease " refers to a disorder or a disease caused by ischemic tissue or organs, and may occur in any organ including various tissues such as muscle tissue, brain, heart, kidney, and large intestine. For example, cerebral ischemia leads to diseases such as stroke and reperfusion injury. In the case of intestine, decreases in blood flow to the large intestine may cause ischemic colitis, and cardiac ischemia may lead to myocardial infarction and congestive heart failure.
한 구현예에서 허혈성 질환은 허혈성 심질환으로, 허혈로 인한 심혈관 조직 손상을 포함한다. 허혈성 심질환은 관상동맥의 죽상경화 등에 의하여 심근에 대한 혈류가 감소하여 초래되는 심장 질환으로, 임상적으로 예를 들면 심근경색, 협심증, 울혈성심장기능상실, 말초혈관폐색증, 심장비후, 저심장수축증, 저심장이완증, 부적응성심장비대, 수축기 심부전, 이완기 심부전, 고혈압성 심부전, 동맥 및 승포판 질환, 및 폐동맥판 질환 등을 포함하나, 이로 제한하는 것은 아니다. CD31-ITIM 을 포함하는 본원 조성물은 심장 조직의 혈관생성을 촉진하거나 또는 심장 기능을 향상시키는데 사용될 수 있다.In one embodiment, the ischemic disease is ischemic heart disease, including cardiovascular tissue damage due to ischemia. Ischemic heart disease is a heart disease caused by a decrease in blood flow to the myocardium due to atherosclerosis of the coronary artery. Clinically, for example, myocardial infarction, angina pectoris, congestive heart failure, peripheral vascular occlusion, But are not limited to, cardiac insufficiency, low cardiac relaxation, maladaptive cardiac output, systolic heart failure, diastolic heart failure, hypertensive heart failure, arterial and vascular disease, and pulmonary valve disease. The composition comprising CD31-ITIM may be used to promote angiogenesis of cardiac tissue or to enhance cardiac function.
다른 구현예에서 허혈성 질환은 허혈성 뇌질환으로 뇌졸중, 재관류 손상 및 하지허혈성질환과 같은 질환을 포함하나, 이로 제한하는 것은 아니다. CD31-ITIM 을 포함하는 본원 조성물은 뇌 조직 혈관생성을 촉진하거나 또는 뇌 기능을 향상시키는데 사용될 수 있다.In other embodiments, the ischemic disease is ischemic brain disease, including, but not limited to, stroke, reperfusion injury, and ischemic diseases. The composition comprising CD31-ITIM may be used to promote brain tissue angiogenesis or to enhance brain function.
본원에서 “치료적으로 유효한 양”은 환자의 증상, 상태 또는 질환의 경감, 또는 치료에 필요한 양을 의미한다. 본원 조성물에 포함되는 CD31-ITIM의 유효량은 투여경로, 환자의 나이, 체중, 기저질환, 일반적 건강상태 등에 따라 달라질 수 있으며, 최종적으로 진료 의사의 판단에 의해서 결정될 것이다.As used herein, the term " therapeutically effective amount " means the amount needed to relieve, or treat, a patient ' s symptoms, condition or disease. The effective amount of CD31-ITIM contained in the composition of the present invention may vary depending on the route of administration, the age, body weight, underlying disease, general health condition, and the like of the patient, and will ultimately be determined at the discretion of the medical practitioner.
본원의 ITIM 유전자 또는 이에 의해 코딩되는 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물은 상기 유효성분을 총 중량에 대하여 상기 유효성분을 0.0001 내지 50 중량%로 포함할 수 있다.The composition comprising the ITIM gene of the present invention or a protein encoded thereby may contain the active ingredient in an amount of 0.0001 to 50% by weight based on the total weight of the active ingredient.
본원의 ITIM 유전자 또는 이에 의해 코딩되는 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물은 임상 투여시에 비경구로 투여, 예를 들면, 정맥주사, 근육주사, 또는 병소에의 직접주입이 가능하며, 레밍턴 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 참조하여 각 질환의 정도, 종류 또는 유효성분에 따라 일반적인 의약품 제제의 형태로 제조될 수 있다.Compositions comprising the ITIM gene of the present invention or a protein encoded thereby can be administered parenterally, for example, intravenously, intramuscularly, or directly into a lesion at the time of clinical administration. Remington's Pharmaceutical Science (recent edition), Mack Publishing Company, Easton PA) according to the degree, type or effective ingredient of each disease.
본원 조성물은 여러 가지 비경구 제형으로 제조되어 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함할 수 있다.The composition of the present invention may be prepared and administered in various parenteral formulations. In the case of formulation, in addition to the above-described effective ingredients, one or more pharmaceutically acceptable carriers may be further included.
약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올, 리포좀 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 비경구제형은 예를 들면, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형으로 제제화할 수 있으며, 표적 기관에 특이적으로 작용할 수 있도록 표적 기관 특이적 항체 또는 기타 리간드를 상기 담체와 결합시켜 사용할 수 있다.The pharmaceutically acceptable carrier may be a mixture of saline, sterilized water, Ringer's solution, buffered saline, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol, liposome and one or more of these components. , A buffer solution, a bacteriostatic agent, and the like may be added. The parenteral preparation can be formulated into injectable formulations such as, for example, aqueous solutions, suspensions, emulsions and the like by additionally adding a diluent, a dispersant, a surfactant, a binder and a lubricant, Target organ specific antibodies or other ligands may be used in conjunction with the carrier.
상기 치료제의 일일 투여량은 약 0.005 내지 10mg/kg 이고, 바람직하게는 0.05 내지 1 mg/kg 이며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하며, 환자의 상태 및 질환의 발병 정도에 따라 변할 수 있다.The daily dose of the therapeutic agent is about 0.005 to 10 mg / kg, preferably 0.05 to 1 mg / kg, and the dosage is appropriately selected depending on the patient's body weight, age, sex, health condition, diet, administration time, The severity of the disease, and the like, and may vary depending on the condition of the patient and the severity of the disease.
나아가, 본원 조성물은 허혈과 관련된 질환의 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
Furthermore, the compositions of the present invention can be used alone or in combination with methods for the treatment of diseases associated with ischemia, or using surgery, hormonal therapy, drug therapy and biological response modifiers.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 더욱 구체적으로 설명하나 본 발명의 범주가 이로 제한되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to the following examples, but the scope of the present invention is not limited thereto.
실시예 1. GFP를 발현하는 HUVEC 제작Example 1. Fabrication of HUVEC expressing GFP
세포의 관형성 여부를 관찰하기 위하여 GPF (Green Fluorescence Protein)를 발현하는 Lentiviral vector PLL3.7 system (Addgene plasmid 11795, USA)을 HUVEC (Human Umbilical Vein Endothelial Cell, Lonza, USA)에 형질도입(Transduction)하여 사용하였다. 구체적으로 렌티 바이러스 벡터로부터 바이러스를 제조하는 방법은 ViraPower™ Lentiviral Packaging Mix (Invitrogen)을 이용하여 293T 세포에 전달이입을 하였으며, 그로부터 24시간 후에 배양액을 (DMEM, 10% FBS) 교환 후 24시간 뒤에 상등액을 얻은 후 25,000 rpm, 90분, 4℃에서 원심분리하여 바이러스를 얻었다. 이렇게 얻은 바이러스를 HUVEC에 형질도입하여 GFP 발현 HUVEC 을 제조하였다. 형질 도입 방법은 앞서 얻은 렌티바이러스를 약 5X105 pfu/ml 농도로 사용하였다. 배지는 EGM-2MV(Lonza)를 이용하였으며, Polybrene 10ug/ml을 처리하였으며, 37℃, 5% CO2에서 18시간 배양 후 배양액을 교체하였다.Lentiviral vector PLL3.7 system (Addgene plasmid 11795, USA) expressing GPF (Green Fluorescence Protein) was transduced into HUVEC (Human Umbilical Vein Endothelial Cell, Lonza, USA) Respectively. Specifically, the method for producing virus from lentiviral vector was carried out by using ViraPower ™ Lentiviral Packaging Mix (Invitrogen), and after 24 hours, 24 hours after the exchange of the culture medium (DMEM, 10% FBS) And then centrifuged at 25,000 rpm for 90 minutes at 4 ° C to obtain virus. The thus obtained virus was transfected into HUVEC to prepare GFP-expressing HUVEC. For the transduction method, the previously obtained lentivirus was used at a concentration of about 5 × 10 5 pfu / ml. The culture medium was EGM-2MV (Lonza), treated with 10 ug / ml of polybrene, and incubated at 37 ° C and 5% CO 2 for 18 hours.
HUVEC은 1.5% 젤라틴(Sigma-Aldrich,USA)을 코팅한 배양접시에서 EGM-2MV배지를 이용하여 배양하였다.
HUVEC was cultured in EGM-2MV medium in a culture dish coated with 1.5% gelatin (Sigma-Aldrich, USA).
실시예 2. Example 2. rhCD31rhCD31 ( ( ITIMITIM )이 혈관생성에 미치는 영향) On blood vessel formation
혈관생성에 미치는 영향은 GFR Matrigel (BD Bioscience, USA)를 제조사의 방법대로 사용하여 수행하였다. 요약하면 얼음 위에서 35mm 콘포칼 디쉬 (ibidi Inc.)에 Matrigel을 대략 80㎕ 로 코팅한 후, 37℃, 5% CO2에서 30분간 두어 반고형 중합화를 수행하였다. 이어 상기 디쉬에 1% FBS를 포함하는 EBM-2 (Endothelial basal medium-2)에서 배양된 대략 3X104 개의 GFP-HUVEC 세포를 넣었다. 이어 여기에 대조군으로 BSA (Bovine serum albumin) 및 rhCD31 (ITIM) 분자를 각각 200 ng/ml로 처리 한 후 37℃, 5% CO2에서 24시간 배양하였다. rhCD31(ITIM) 단백질은 PROSPEC회사에서 구입하여 사용 하였다. 이어 형광현미경(Olympus IX2, 40 배율) 을 통해 HUVEC (GFP-HUVEC)의 관형성을 비교하였다.The effect on angiogenesis was performed using GFR Matrigel (BD Bioscience, USA) according to the manufacturer's method. In summary, semi-solid polymerization was carried out by coating Matrigel in 35 mm conical dishes (ibidi Inc.) on ice at approximately 80 μl, followed by incubation at 37 ° C, 5% CO 2 for 30 minutes. Subsequently, approximately 3 x 104 GFP-HUVEC cells cultured in EBM-2 (Endothelial basal medium-2) containing 1% FBS were added to the dish. Bovine serum albumin (BSA) and rhCD31 (ITIM) molecules were treated with 200 ng / ml of each, followed by incubation at 37 ° C and 5% CO 2 for 24 hours. The rhCD31 (ITIM) protein was purchased from PROSPEC. The tube formation of HUVEC (GFP-HUVEC) was then compared via fluorescence microscopy (Olympus IX2, 40 magnification).
결과는 도 1에 기재되어 있다. 대조군으로 BSA로 처리된 세포와 비교하여 rhCD31로 처리된 세포에서 관형성이 월등히 증가하였다. 이는 rhCD31 (ITIM) 단백질이 혈관 형성을 촉진시킬 수 있음을 나타내는 것이다.The results are shown in FIG. Tube formation was significantly increased in rhCD31 treated cells compared to cells treated with BSA as a control. This indicates that the rhCD31 (ITIM) protein can promote angiogenesis.
이어 Scratch wound healing assay (in vitro)을 이용하여 Migration을 평가하였다. 구체적으로 6웰 플레이트에 HUVEC을 시딩한 후 24시간 후에 스크래치하였다. 이어 5% FBS와 Thymidine (1mM)이 포함된 EBM-2 배지에 각각 rhCD31(100, 200ng/ml)을 처리 하였다. 6시간 후에 Wound size를 정량하여 Migration을 평가하였다. 결과는 도 2에 있다. 도 2a는 rhCD31을 처리 후 6시간에 촬영한 사진이며, 도 2b는 rhCD31을 처리 후 6시간에 wound size을 정량한 결과이다. 이에 나타난 바와 같이, rhCD31을 처리한 조건에서 Migration이 증가한 것으로 나타났다.
Migration was assessed using Scratch wound healing assay (in vitro). Specifically, HUVEC was seeded on a 6-well plate and scratched after 24 hours. Then, rhCD31 (100, 200 ng / ml) was treated with EBM-2 medium containing 5% FBS and Thymidine (1 mM). After six hours, the wound size was quantified and migration was evaluated. The results are shown in Fig. FIG. 2A is a photograph of rhCD31 taken 6 hours after treatment, and FIG. 2B is a result of quantifying
실시예 3. 혈관생성에 중요한 분자의 발현 양상 분석Example 3. Analysis of Expression Patterns of Molecules Important for Angiogenesis
혈관생성에 중요한 분자의 발현 양상을 역전사 PCR로 분석하였다.Expression patterns of molecules important for angiogenesis were analyzed by reverse transcription - polymerase chain reaction.
10% FBS를 포함하는 EBM-2에서 배양된 HUVEC에 매체 대조군(BSA)과 rhCD31(ITIM), rhCD31(extra membrane fragment) 각각을 200ng/ml 처리 한 후 37℃, 5% CO2에서 4시간 배양하였다. 이후 각 실험군의 RNA를 RNeasy Mini Kit (Qiagen, USA)를 제조자의 방법대로 사용하여 추출하고 cDNA synthesis kit (Takara)를 제조자의 방법대로 사용하여 cDNA를 합성하였다. 이어 하기 표 1에 기재된 프라이머를 사용하 혈광생성에 중요하다고 알려진 분자들의 유전자 발현을 PCR로 분석하였다. 결과는 도 3에 기재되어 있다. 이에 나타난 바와 같이, rhCD31 (ITIM) 단백질을 처리해 준 HUVEC에서 VEGF, HGF, Ang2, IL-10의 유전자의 발현이 증가했으며, 뿐만 아니라 Integrin alpha 5, Integrin beta 3, Integrin beta 8 등의 integrin 유전자의 발현도 증가하였다.
10% FBS media control to cultured HUVEC in EBM-2 (BSA) containing and rhCD31 (ITIM), rhCD31 (extra membrane fragment) 4 hours of incubation the at 200ng / ml after treatment 37 ℃, 5% CO 2, respectively Respectively. The RNAs from each experimental group were extracted using RNeasy Mini Kit (Qiagen, USA) according to the manufacturer's instructions and cDNA synthesis kit (Takara) was used according to the manufacturer's instructions. Using the primers described in the following Table 1, gene expression of molecules known to be important for the production of blood light was analyzed by PCR. The results are shown in FIG. The expression of VEGF, HGF, Ang2, and IL-10 was increased in HUVEC treated with rhCD31 (ITIM) protein as well as the expression of integrin genes such as Integrin alpha 5,
(Foward)FW
(Foward)
(Reverse)RV
(Reverse)
도 1과 도 2의 결과를 종합해 보면, rhCD31 (ITIM)을 처리한 HUVEC에서 혈관 형성 유전자가 증가했을 뿐만 아니라 실제 관형성이 증가하였다. 이는 rhCD31 (ITIM) 단백질에 의해 혈관 형성을 촉진 시킬 수 있음을 나타내는 것이다.
Taken together, the results of FIGS. 1 and 2 show that HUVEC treated with rhCD31 (ITIM) not only increased the angiogenic gene but also increased the actual tube formation. This indicates that rhCD31 (ITIM) protein can promote angiogenesis.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해되어야 한다.It will be understood by those skilled in the art that the foregoing description of the present invention is for illustrative purposes only and that those of ordinary skill in the art can readily understand that various changes and modifications may be made without departing from the spirit or essential characteristics of the present invention. will be. It is therefore to be understood that the above-described embodiments are illustrative in all aspects and not restrictive.
Claims (7)
At least one CD31-ITIM polypeptide or a gene encoding said polypeptide.
The pharmaceutical composition for promoting angiogenesis according to claim 1, wherein 1-4 CD31-ITIM polypeptides or genes are contained.
The pharmaceutical composition for promoting angiogenesis according to claim 1, wherein the CD31-ITIM polypeptide is phosphorylated.
2. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein said CD31-ITIM polypeptide is derived from mammals.
The pharmaceutical composition for accelerating angiogenesis according to claim 1, wherein the angiogenesis comprises angiogenesis or angiogenesis, or angiogenesis and angiogenesis.
The pharmaceutical composition for promoting angiogenesis according to claim 1, wherein said angiogenesis promotion is prevention or treatment of ischemic diseases or symptoms.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020130006357 | 2013-01-21 | ||
KR20130006357 | 2013-01-21 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20140094462A true KR20140094462A (en) | 2014-07-30 |
KR101595641B1 KR101595641B1 (en) | 2016-02-18 |
Family
ID=51740198
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020140007004A KR101595641B1 (en) | 2013-01-21 | 2014-01-21 | Pharmaceutical composition comprising CD31-ITIM polypeptide or nucleic acids encoding the same for promoting blood vessel formation |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR101595641B1 (en) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003055516A1 (en) * | 2001-12-22 | 2003-07-10 | The University Of Reading | Pecam-1 modulation |
-
2014
- 2014-01-21 KR KR1020140007004A patent/KR101595641B1/en active IP Right Grant
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003055516A1 (en) * | 2001-12-22 | 2003-07-10 | The University Of Reading | Pecam-1 modulation |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Cancer Investigation, Vol 30, Pages 364-371 (2012)* * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR101595641B1 (en) | 2016-02-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6336549B2 (en) | Peptides and their use to induce tissue regeneration | |
US9279012B2 (en) | Method of reducing cell death by administering a nucleic acid encoding a paracrine factor of a mesenchymal stem cell | |
Boengler et al. | The myocardial JAK/STAT pathway: from protection to failure | |
Taddei et al. | Inhibitory effect of full-length human endostatin on in vitro angiogenesis | |
RU2448159C1 (en) | Treating and preventing cardiac diseases with using two or more isoforms of hepatocyte growth factor | |
US20090036369A1 (en) | Anti-tumor agents comprising r-spondins | |
JP2021046437A (en) | Cytokine storm inhibitor | |
KR101595641B1 (en) | Pharmaceutical composition comprising CD31-ITIM polypeptide or nucleic acids encoding the same for promoting blood vessel formation | |
KR101438996B1 (en) | Use of Mutated Haptoglobin having angiogenesis promoting activity | |
KR20110102788A (en) | Haptoglobin gene introduced endothelial progenitor cells and compositions for promoting angiogenesis comprising the same | |
KR20210116350A (en) | Composition comprising a cardiac stem cell for the prevention and treatment of ischemic disease | |
KR101084529B1 (en) | Pharmaceutical composition for prophylaxis or treatment of hypertension comprising interleukin-24 or nucleic acid coding interleukin-24 | |
AU2006313672B2 (en) | Combination of glycoisoforms for the treatment or prevention of sepsis, transgenic cell line producing erythropoietin glycoisoforms, pharmaceutical composition comprising such combination, procedures to obtain the cell line, procedures to produce such combination of glycoisoforms, and sepsis treatment and prevention methods | |
KR20220066116A (en) | Recombinant human neuregulin derivatives and uses thereof | |
KR20230167535A (en) | Composition for promoting differentiation of stem cells into smooth muscle cells containing fibrillin recombinant protein | |
CN112500493A (en) | Recombinant human neuregulin derivative and application thereof | |
CN116917307A (en) | Peptides with angiogenic activity |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190201 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20200203 Year of fee payment: 5 |