KR20140089521A - 생체내적 ａｄｃｃ 모델 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 인간화된 저친화성 FcgR 좌를 포함하는 비-인간 동물에 관한 것이다. 본원에서는 또한 항체의 생체내적 효능 결정을 위한 상기 비-인간 동물의 용도 및 항체의 생체내적 효능 결정 방법을 제공한다.
Description
본 발명의 분야는 내생적 저친화성 FcgR 유전자의 인간 저친화성 FcgR 유전자에 의한 치환을 포함하는 형질이식 비-인간 동물을 포함하고, 4 가지 관능성 인간 저친화성 FcgR 유전자를 발현할 수 있는 비-인간 동물을 포함하고, 내생적 저친화성 FcgR 유전자를 발현하지 않는 비-인간 동물을 포함하는 인간화된 저친화성 Fc-γ 수용체 (FcgR) 좌를 포함하는 형질이식 비-인간 동물에 관한 것이다.
치료용 항체 (TherAbs) 는 신생물성 장애 또는 자가면역 염증 병과 같은 인간 질환 치료에 매우 효능적인 것으로 나타났다. 종종, TherAbs 의 치료 작용은 종양 세포의 세포독성적 제거를 기반으로 하여, 그러한 항체 작용제의 효과기 기능 특성이 중요한 문제거리가 되곤 한다. 쥐과동물 기원의 TherAbs 는 종종 치료 환자에서 면역 반응을 유도하기도 한다 (항-약물 항체 (ADA) 반응). 순수한 인간의 TherAbs 라면 ADA 반응의 문제점을 실질적으로 경감시킬 것으로 기대되나, 인간 치료에 진입하기 전에 그들의 생물학적 효능의 예측가능성은 여전히 대부분 풀리지 않은 채 남아 있다. 신규한 TherAbs 개발과 연계된 막대한 비용때문에 그 과정에서 그들이 효능을 조기에 예측할 수단이 필요하다. 항종양 약물의 생체내적 효능은 보통 이종이식 검정에서 시험한다. 여기서는 표적 인간 종양을 먼저, 전형적으로는 Scid 또는 RAG 돌연변이인 면역 결핍 마우스에 접종하고, 생장하도록 두고, TherAbs 의 주사를 후속한다. TherAbs 의 효능은 인간 종양을 제거하는 그들의 역량으로 결정된다. 상기 시스템에서, 접종된 암 세포의 파괴는 대개 접종된 (인간) TherAbs 에 의한 본래 면역 시스템의 (쥐과동물) 세포 상에서의 효과기 기능의 활성화에 좌우된다.
항원-항체 복합체의 상이한 면역 세포 표면 상의 보체 (C) 또는 Fc-수용체 (FcR) 로의 결합은 항체 의존성 세포 세포독성 (ADCC) 을 촉발하여, 면역 시스템의 효과기 세포가 표적 (종양) 세포를 능동적으로 용해시킨다. 보체 의존성 세포독성 (CDC), 마크로파지-매개성 식균작용 또는 자연 살해 세포 (NK) 또는 과립구에 의해 유도되는 세포 용해반응이 암 세포의 파괴에 기여한다.
그러나, 그러한 메커니즘의 효능은 상이한 종에 따라 변동되며, 심지어 동종의 상이한 개체에 따라서도 변동된다. 특히, 마우스는 오직 2 개의 활동 저친화성 FcR 유전자 (Fcgr3 및 Fcgr4) 을 가진 반면, 인간은 4 개의 활동 저친화성 FcR 유전자 (FCGR2A, FCGR2C, FCGR3A, FCGR3B) 를 갖고 있다. 나아가, 주된 관능성 인간 FcR 인 FcγRIIIa (FCGR3A 유전자에 의해 인코딩됨) 은 NK 세포 및 마크로파지에서 발견되는 한편, 그의 쥐과동물 상동물인 FcγR4 는 과립구 및 마크로파지에서는 발견되지만 NK 세포에서는 발견되지 않는다. 인간 과립구는 마우스에는 대응자 (conterpart) 가 FcR 인 FCGR3B 를 발현한다. 마지막으로, 저친화성 마우스 Fcg3 는 마크로파지, NK 세포 및 과립구에서 발현되고, 그의 인간 상동물인 FcgR2a 은 마크로파지 및 과립구에서만 발견되고, 인간 변이체 FcgR2c 는 집단의 약 20% 에서만 NK 세포에서 독보적으로 발현될 뿐이다. 따라서, 마우스 및 인간 효과기 세포에서의 FcgR 발현 차이로 인해, 마우스 이종이식 시스템에서의 인간 치료용 항체의 생물학적 효능 평가는 열악한 예측 가치를 지니게 된다. 쥐과동물 및 인간 효과기 세포 및 -메커니즘 사이의 고유한 차이 때문에, 이종이식 검정의 수득된 데이터는 인간에서보다는 마우스에서의 TherAbs 의 효능에 대해 더 많이 예측하게 된다.
오늘날까지, 인간 효과기 세포 및 -메커니즘에 더욱 가깝게 모방하는 다양한 생체내적 모델이 개발되어 왔다. 예를 들어, 개별 인간 FcgR 유전자를 발현하는 형질이식 마우스가 제조되었다. 그러나, 그 마우스 모델은 세포 배치 및 발현 수준 측면 모두에서, 인간에서의 해당 유전자에 대해서만 일부 필적할 뿐이다. 명백하게 저친화성 FcgR 유전자의 고도로 보존성인 좌 (인간 및 마우스 모두에서 1 번 염색체에 위치) 는 개별 FcgR 유전자의 충실한 발현에 필요한 유전자내 영역 중의 조절 요소들을 포함하며, 국지적인 유전자 맥락과 구분하여 고려될 수는 없다.
따라서, 또다른 접근법은 200 kb 이하의 유전체 인간 DNA 을 보유하는 형질이식 박테리아 인공 염색체 (BAC) 를 이용하여 형질이식 마우스에서 인간 발현 패턴을 복제하는 것이다. 그러나, BAC 형질이식 마우스에서는, 인간 및 내생적 마우스 FcgR 가 발현되어, FcgR 의 전체적 수준의 비정상적 상승을 유도했다. 추가로, 결과로서 수득되는 세포 배치는 쥐과동물 및 인간 발현 패턴의 합이었다.
따라서, 이종이식 검정의 예측 잠재성을 개선할 비-인간 동물에서의 인간 FcgR 유전자의 발현을 재현할 생체내적 모델이 여전히 필요하다.
본 발명은 인간화된 저친화성 FcgR 좌를 가진 신규한 형질이식 비-인간 동물에 관한 것이다. 비-인간 동물은 마우스이다.
본원에서는 4 가지 관능성 인간 저친화성 FcgR 유전자를 발현할 수 있는 비-인간 동물을 포함하고, 내생적 저친화성 FcgR 유전자를 발현하지 않는 비-인간 동물을 포함하는 내생적 저친화성 FcgR 유전자의 인간 저친화성 FcgR 유전자에 의한 치환을 포함하는 형질이식 비-인간 동물이 제공된다. 한 구현예에서, 상기 4 가지 관능성 인간 저친화성 FcgR 유전자는 FCGR2A, FCGR3A, FCGR2C 및 FCGR3B 이다.
그러한 신규한 형질이식 비-인간 동물에서, 전체 저친화성 FcgR 유전자가 인간 대응자 (counterpart) 로 치환된다. 예를 들어, 한 구현예에서, 비-인간 동물은 마우스이며, 여기서 두가지 쥐과동물 저친화성 수용체 유전자 (Fcgr4, Fcgr3) 를 포함하는 좌는 네가지 인간 유전자 (FCGR2A, FCGR3A, FCGR2C, FCGR3B) 로 치환된다. 따라서, 인간 발현을 연상시킬 수준 및 세포 특이성을 갖추어, 쥐과동물 유전자 대신에 인간 저친화성 FcgR 의 셋트를 발현할 수 있는 마우스 계열 (mouse line) 이 확립되었다. 그러한 FcgR-인간화된 마우스 계열은, 그것이 인간 FcgR 발현 수준 및 세포 특이성을 정확히 재현하면서도 마우스 FcgR 의 누적 발현 및 혼합된 세포 배치를 피하기 때문에 치료용 인간 항체의 효능 예측을 위한 이상적인 수단을 나타낸다.
한 구현예에서, 비-인간 동물은, 이형접합성 및 동형접합성 표적화 마우스에서 모두, 마크로파지 및 과립구 상에서는 인간 FCGR2A 을 발현하고, NK 세포 및 마크로파지 상에서는 인간 FCGR3A 을 발현하며, 과립구 상에서는 인간 FCGR3B 을 발현한다. 또다른 구현예에서, 상기 비-인간 동물은 내생적 쥐과동물 저친화성 Fcgr4 및 Fcgr3 유전자를 발현하지 않는다.
본 발명에 따른 비-인간 동물은 인간 발현을 연상시킬 세포 특이성 패턴을 갖고 내생적 유전자 대신 인간 저친화성 FcgR 의 셋트를 발현하기 때문에, 항체 ADCC 효능 결정을 위한 생체내적 모델로서 유용하다. 따라서, 본 발명의 두번째 목적에서, 상기 비-인간 시험 동물은 항체 효능 결정을 위한 생체내적 모델로서 이용된다.
한 구현예에서, 평가할 항체를 본 발명에 따라 인간화된 저친화성 FcgR 좌를 가진 비-인간 동물에 투여하는 단계를 포함하는 항체 효능 결정 방법이 제공된다. 한 구현예에서, 상기 방법은 a) 인간화된 저친화성 FcgR 좌가 있는 비-인간 동물을 제공하는 단계, b) 표적 종양을 상기 비-인간 동물에 접종하여 생장하게 두는 단계, c) 평가할 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 항체의 효능은 종양을 제거하는 그의 역량 또는 종양의 생장을 지연시키는 그의 능력에 의해 결정된다. 바람직하게는, 상기 종양은 인간 종양이다. 한가지 바람직한 구현예에서, 상기 항체는 종양 세포 표면 항원을 표적으로 하는 인간 항체 또는 인간화된 항체이다.
용어 "치환" 은 비-인간 동물의 유전체 내 서열이 인간 서열로 치환되도록 하여 비-인간 동물의 세포의 유전체로 DNA 서열이 들어가 있음을 포함한다.
용어 "FcgR" 은 Fc, 예를 들어 IgG 면역글로불린의 Fc 부분에 대한 수용체를 포함한다. FcgR 유전자는 세포 표면 상에서 발현되는 α-사슬을 포함하며, 리간드-결합 도메인으로서 제공되며, FcRγ-사슬의 단독이량체 또는 FcRγ-사슬의 이종이량체 및 α-사슬에 회합한다. 여러 상이한 FcgR 유전자가 있으며, 이들은 면역 복합체 내 IgG 에 대한 선호하는 결합에 따라 저친화성 및 고친화성 유형으로 분류될 수 있다. 인간에서의 저친화성 FcgR 유전자는 FCGR2A, FCGR3A, FCGR2C, FCGR3B 및 FCGR2B 을 포함하며, 자가면역 질환이 있는 인간 대상체에서는 이들 유전자 대부분에서 유전자 차이 또는 다형현상이 자연적으로 일어나는 것이 보고된 바 있다.
본 발명에 사용된 바와 같은 용어 "인간화된 저친화성 FcgR 좌" 는 인간 FCGR2A, FCGR3A, FCGR2C 및 FCGR3B 유전자를 인코딩하는 서열 및 인접 비-코딩 영역으로 치환된 저친화성 내생적 FcgR 유전자를 인코딩하는 비-인간 동물의 유전체 부분에 관한 것이다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "내생적 저친화성 FcgR 유전자" 는 비-인간 동물의 유전체에서 자연적으로 나타나는 저친화성 FcgR 유전자에 관한 것이다. 예를 들어, 마우스의 내생적 저친화성 FcgR 유전자는 FcgR3 및 FcgR4 이다.
본원에 사용된 용어 "야생형" 은 내생적 저친화성 FcgR 유전자를 갖고 있으며, 인간화된 저친화성 FcgR 좌를 갖고 있지 않은 비-인간 동물을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "항체의 효능" 은 세포에서의 항체 의존적 세포 독성 (ADCC) 의 정도를 지칭한다. ADCC 는 면역 시스템의 효과기 세포에 의한 표적 세포의 세포용해를 매개한다. 따라서, 항체의 효능은 표적 세포를 제거하는 그의 역량 또는 표적 세포의 생장을 지연시키는 그의 능력에 의해 결정될 수 있다. 바람직하게는, 상기 표적 세포가 종양 세포이다.
평가될 항체에는, 이에 제한되지 않으나, 종양 세포의 에피토프를 표적으로하는 항체가 포함된다.
평가될 항체의 투여 방법에는, 이에 제한되지 않으나, 경구 투여 및 비경구 투여 (예를 즐어, 정맥내 투여, 복막내 투여 및 비강내 투여) 가 포함된다. 평가할 항체는 약제학적으로 허용되는 통상적 부형제 (예컨대, 담체 및 희석제) 와 조합하여 투여될 수 있다. 치료용 항체의 투여는 종종, 피부 러쉬 (skin rush), 구토, 아나필락시스 과민반응 (anaphylactoid reaction) 및 싸이토카인 방출 증후군 (cytokine release syndrom) 과 같은 심각한 주입물 반응을 동반한다. 그러한 부작용 대부분은 마크로파지, NK 세포 및 호중구와 같은 효과기 세포 상의 FcgR 과 주입된 항체의 상호작용과 연관있다. 따라서, 본원에서 제공하는 비-인간 동물은 인간에서의 항체 최초 주입에 의해 유발되는 심각한 역효과 평가를 위한 생체내적 모델로서 유용하다.
본 발명은 또한 동일하거나 또는 또다른 유전자형을 가진 것과의 교배에 의해 수득되는, 본 발명에 의해 제공되는 비-인간 동물의 자손에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 자손은 동일한 유전자형과의 교배에 의해 수득된다. 본 발명의 추가적인 대상은 항체의 효능을 결정하기 위한 생체내적 모델로서의 상기 자손의 용도이다. 본 발명의 추가적인 대상은 치료용 항체의 최초 주입에 의해 유효하게 되며, 상이한 효과기 세포 상의 FcgR 에 의해 매개되는 심각한 주입물 반응의 평가를 위한 생체내적 모델로서의 상기 마우스의 용도이다. 한 구현예에서, 치료용 항체를 본 발명의 비-인간 동물 또는 그의 자손에 투여하는 단계, 및 심각한 주입물 반응이 일어나는지 여부를 평가하는 단계를 포함하는, 치료용 항체의 잠재적 안전성 위험 평가를 위한 방법이 제공된다. 심각한 주입물 반응은 아나필락시스 반응 또는 싸이토카인 방출 증후군을 평가하여 측정될 수 있다.
나아가, 본 발명은 상기 기재된 바와 같은 인간화된 저친화성 FcgR 좌를 가진 비-인간 동물 또는 그의 자손으로부터 유도되는 세포주 또는 초대 세포 배양물에 관한 것이다.
나아가, 본 발명은 또한 상기 기재된 바와 같은 인간화된 저친화성 FcgR 좌를 가진 비-인간 동물 또는 그의 자손으로부터 유도된 조직 또는 장기 이식물 또는 그의 배양물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기 기재된 바와 같은 인간화된 저친화성 FcgR 좌를 가진 비-인간 동물 또는 그의 자손으로부터 유도된 조직 또는 세포 추출물에 관한 것이다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 인간화된 저친화성 FcgR 좌를 가진 비-인간 동물 또는 그의 자손으로부터 유도된 상기 언급된 세포주 또는 초대 세포 배양물, 조직 또는 장기 이식물 또는 그의 배양물, 조직 또는 세포 추출물이 항체 효능 결정을 위한 생체내적 모델로서 사용된다.
본원에 기재된 "비-인간 동물" 은 인간이 아닌 임의의 동물을 지칭한다. 바람직하게는 비-인간 동물은 포유류이며, 더욱 바람직하게는 쥐과동물, 예컨대 래트 또는 마우스이고, 가장 바람직하게는 비-인간 동물은 마우스이다.
도면의 설명
도 1 - 두가지 쥐과동물 저친화성 FcgR 유전자, Fcgr4 및 Fcgr3 (상단의 선) 의, BAC 표적화 구축물 내에 위치되어 있는 네가지 인간 저친화성 FcgR 유전자, FCGR2A, FCGR3A, FCGR2C 및 FCGR3B (중앙선) 에 의한 치환을 유도하는 RMGR 프로세스를 제시하는 도면. Cre-매개성 재조합 결과로 인한 돌연변이화된, "인간화된" 대립형질이 하단의 선에 도시되어 있다.
도 2 - (A) 표시된 LoxP 및 Lox511 엘리먼트 (채색된 삼각형) 에서 Cre-보조 재조합을 통해 54 kb 길이 영역의 인간 저친화성 FcR 유전자들의 전체적인 셋트를 포함하는 160 kb 의 인간 DNA 에 의한 치환시 마우스 저친화성 FcgR 좌를 제시하는 도면. 검출 PCR 검정에 이용된 올리고뉴클레오티드의 위치는 그들의 해당 배향을 가리키는 짧은 화살표로 표시함. (B) 표시된 PCR 검정에서의 개별 마우스 생검으로부터 증폭된 DNA 절편 (5' 말단: 약 5 kb; 3' 말단: 1.2 kb) 이 1% 아가로스 겔 상의 분리시 제시된다. Tm 는 돌연변이 마우스를, wt 는 야생형 마우스를, M 은 마커 DNA 를 나타냄.
도 3 - (A) FCGR-인간화된 좌를 도해로 도시하여, 도 2 에서와 같지만 약어 명칭으로 표기된, 개별 인간 FcgR 유전자의 PCR 증폭에 이용된 프라이머의 위치를 표시한다. FCGR2A, FCGR3A, FCGR2C 및 FCGR3B 를 인코딩하는 유전자들은 각각 프라이머쌍 1+2, 3+4, 5+6 및 7+8 를 이용해 증폭했다. SalI 제한효소 절단 위치는 수직 화살표로 표시한다. (B) 아가로스 겔이 치환 돌연변이에 대해 이형접합성인 마우스로부터 취해진 생검 DNA 로부터 증폭된 DNA 절편을 보여준다. 특이적 프라이머가 사용되어 인간 유전자 FCGR2A (2A: 12.9 kb), FCGR3A (3A: 9.6 kb), FCGR2C (2C: 18.5 kb) 및 FCGR3B (3B: 9.6 kb) 를 증폭한다. X 및 IV 는 사용된 DNA 분자량 마커 (단위는 kb) 를 나타낸다 (Roche Diagnostics 사). (C) 3A 및 3B PCR 에 대해 특이적인 프라이머를 이용해 증폭된 두 9.6 PCR 절편의 특이성은 SalI 소화로 시험한 것인데: 3A 절편은 SalI 을 이용해 8 kb 및 1.65 kb 절편으로 절단되었으며, FCGR3B 유전자로부터 증폭된 9.6 kb PCR 절편 (3B) 은 SalI 소화에 대해 저항적이어서, 증폭된 절편이 두가지 상이한 유전자에 해당된다는 것을 증명했다.
도 4 - (A) 유전자-표적화 Human FCGR2A /3A/2C/3B 이형접합성 마우스 및 야생형 마우스의 말초혈 세포에서의 인간 FCGR3B 유전자의 발현을, 표시된 항체로 염색 후 FACS Canto 기기를 이용하는 FACS 분석으로 모니터링했다: 발현은 F4/80+ 단핵구, NK1.1+ 자연 살해 세포 (두가지 모두 림프구 게이팅 내부) 및 Gr-1+ 과립구에서, 골수 게이팅 내부에서 검출된 것과 마찬가지로 명백하게 검출되었다. (B) (A) 에서와 마찬가지로, 유전자-표적화 Human FCGR2A /3A/2C/3B 이형접합성 마우스 및 야생형 마우스의 말초혈 세포에서의 인간 FCGR2A (CD32) 의 발현: 발현은 인간 CD32 에 대해 예측된 바와 마찬가지로, F4/80+ 단핵구 및 Gr-1+ 과립구에서 분명했지만, NK1.1+ 자연 살해 세포에서는 부재했다.
도 5 - (A) 유전자-표적화 Human FCGR2A /3A/2C/3B 동형접합성 마우스 및 야생형 마우스의 말초혈 세포에서의 인간 FCGR3A (CD16) 의 발현을, 표시한 항체를 이용한 염색 후 FACS Canto 기기를 이용하는 FACS 분석으로 모니터링했다: 발현은, 골수 게이팅 내부에서 검출된 것과 마찬가지로, F4/80+ 단핵구, NK1.1+ 자연 살해 세포 (두가지 모두 림프구 게이팅 내부) 및 Gr-1+ 과립구에서 명확하게 검출되었다. (B) (A) 에서와 같은, 유전자-표적화 Human FCGR2A /3A/2C/3B 동형접합성 마우스 및 야생형 마우스의 말초혈 세포에서의 인간 FCGR2A (CD32) 의 발현: 인간 CD32 에 대해 예측된 바와 마찬가지로, 발현은 F4/80+ 단핵구 및 Gr-1+ 과립구에서는 분명했지만, NK1.1+ 자연 살해 세포에서는 부재했다.
도 6 - (A) 유전자-표적화 Human FCGR2A /3A/2C/3B 동형접합성 마우스의 말초혈 내 표시된 세포 집단 내부에서 표면 인간 FcγRIII 또는 FcγRII 를 보유하는 세포의 양을 보여준다. 히스토그램은 F4/80+ 단핵구, NK1.1+ 자연 살해 세포 (두가지 모두 림프구 게이팅 내부) 및 Gr-1+ 과립구 (골수 게이팅 내부) 에서 검출된 것과 같이, 야생형 마우스 (회색선) 와 비교하여 동형접합성 유전자-표적화 마우스 (흑색선) 에서의 인간 FcγR 에 대해 양성인 세포의 양을 보여준다.
표 1
상기 표는 Human FCGR2A /3A/2C/3B 이형접합성 (Het) 또는 동형접합성 (Hom) 마우스에서의 F4/80+ 단핵구; NK1.1+ 자연 살해 세포 또는 Gr-1+ 과립구의 선별된 집단에서 표면 인간 FcγRIII (CD16) 또는 FcγRII (CD32) 를 발현하는 말초혈 세포의 백분율을 요약해 놓았다.
실시예
두가지 쥐과동물 저친화성 수용체 유전자 (Fcgr4, Fcgr3) 를 포함하는 전체적인 좌를, 리컴비나아제 매개 유전자 치환 (recombinase mediated gene replacement (RMGR)) 을 통해 네가지 인간 유전자 (FCGR2A, FCGR3A, FCGR2C, FCGR3B) 로 치환시켰다. 그러한 기법을 이용해, Fcgr4, Fcgr3 및 인접한 비-코딩 DNA 영역을 포함하는 마우스 유전체 54 kb 를 먼저, 마우스 ES 세포에서의 연쇄적인 상동적 유전자 표적화를 통해 2 개의 비상용적 Lox 엘리먼트 (LoxP 및 Lox511) 의 측면에 두게 했다. 동시에, 역시 LoxP 및 Lox511 의 측면에 배치된유전자 FCGR2A, FCGR3A, FCGR2C, FCGR3B 및 인접 비-코디 영역을 포함하는 인간 유전체 DNA 160 kb 을 포함하는 BAC 구축물을 준비했다. 이어서, 후에 언급한 DNA 구축물로는 인간 DNA 에 의한 마우스 영역의 Cre-리컴비나아제 매개 교환을 실시해, 그들의 두가지 쥐과동물 대응유전자 대신에 마우스 유전체의 그의 본래 위치에 네가지 인간 저친화성 FcgR 유전자를 위치시켜 보유하고 있는 돌연변이 ES 세포를 제공하게 되었다 (도 1 내지 3 참조). 돌연변이화된 ES 세포를 수용자 마우스 배반포에 마이크로주입시, 키메라 마우스가 생성되었다. 돌연변이의 후속 세대로의 전달시, 두가지 쥐과동물 대응유전자 대신에 인간 저친화성 FcgR 을 활성화시키며, 인간 세포의 것을 반영하는 세포 특이성 패턴을 가진 셋트를 발현할 수 있는 마우스 계열이 확립되었다 (도 4 내지 6 및 표 1 참조). 그러한 FcgR-"인간화" 된 마우스 계열은 인간 FcgR 발현 수준의 정확한 재현성 및 세포 특이성을 조합시키는 한편, 마우스 FcgR 의 누적적 발현 및 혼합된 세포 배치를 피하게 되므로 치료용 인간 항체의 효능 예측을 위한 이상적인 수단을 나타낸다.
본 발명은 전형적 인간 세포 특이성을 따르는 인간 FcgR 유전자를 발현하는, RMGR 을 통한 FcgR-인간화된 마우스의 제조를 기재한다. Human FCGR2A/3A/2C/3B 로 언급되는 그러한 마우스들은 치료용 항체의 생체내적 ADCC 잠재성의 예측 성상 및 이에 따라 치료용의 일련의 후보자들을 기능에 따라 조기에 선별하기에 적합하다.
Claims (12)
- 인간화된 저친화성 FcgR 좌를 포함하는 비-인간 형질이식 동물.
- 제 1 항에 있어서, 내생적 저친화성 FcgR 유전자가 인간 저친화성 FcgR 유전자로 완전히 치환되어 있는 비-인간 동물.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 포유류인 비-인간 동물.
- 제 3 항에 있어서, 설치류인 비-인간 동물.
- 제 4 항에 있어서, 마우스인 비-인간 동물.
- 동일하거나 또는 또다른 유전자형의 동물과의 교배에 의해 수득되는 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 비-인간 동물의 자손.
- 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 비-인간 동물 또는 제 6 항의 자손으로부터 유도된 세포주 또는 초대 세포 배양물.
- 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 비-인간 동물 또는 제 6 항의 자손으로부터 유도된 조직 또는 장기 이식물 또는 그의 배양물.
- 항체 효능 결정을 위한 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 비-인간 동물 또는 제 6 항의 자손, 제 7 항의 세포주 또는 초대 세포 배양물 또는 제 8 항의 조직 또는 장기 이식물의 용도.
- 종양 세포 또는 종양을 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 비-인간 동물 또는 제 6 항의 자손에 접종하는 단계, 및 항체를 상기 비-인간 동물 또는 그의 자손에 투여하는 단계를 포함하는 항체 효능 결정 방법.
- 치료용 항체를 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항의 비-인간 동물 또는 제 6 항의 자손에 투여하는 단계, 및 임의의 심각한 주입물 반응이 일어나는지 여부를 평가하는 단계를 포함하는, 치료용 항체의 잠재적 안전성 위험 평가 방법.
- 본질적으로 본원에 기재된 비-인간 동물, 용도 및 방법.
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