KR20140087724A - Peptide composition with antiinflammatory effect - Google Patents
Peptide composition with antiinflammatory effect Download PDFInfo
- Publication number
- KR20140087724A KR20140087724A KR1020120158317A KR20120158317A KR20140087724A KR 20140087724 A KR20140087724 A KR 20140087724A KR 1020120158317 A KR1020120158317 A KR 1020120158317A KR 20120158317 A KR20120158317 A KR 20120158317A KR 20140087724 A KR20140087724 A KR 20140087724A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- peptide composition
- kgtekc
- peptide
- macrophages
- inflammatory
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
본 발명은 항염증 효과를 구비하는 펩타이드 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a peptide composition having an anti-inflammatory effect.
염증(炎蒸, inflammation)이란 어떤 자극에 대한 생체조직의 방어반응의 하나로, 조직 변질, 순환장애와 삼출(渗出), 조직 증식의 세 가지를 병발하는 복잡한 병변을 일컫는다.Inflammation (inflammation, inflammation) is one of the biological tissue defense response to any stimulus, refers to complex lesions involving tissue degeneration, circulatory disturbances and exudates, and tissue proliferation.
또한, 여러 가지 형태의 감염(infection)이나 생체 내 대사산물 중의 자극성 물질에 대한 생체 내 방어기전의 발현이라 할 수 있고, 다양한 화학적 매개체가 염증의 발현 기전에 관여하고 있으며, 그 병인도 매우 복잡하다. 이는 조직의 상해 또는 파괴에 의해 유발되는 국소 보호 반응으로,상해 유발 물질과 상해된 조직 모두를 파괴, 약화시키거나 차폐하는 작용을 한다.In addition, various types of infection and expression in the in vivo defense system against irritants in metabolites in vivo, various chemical mediators are involved in the mechanism of expression of inflammation, and the pathogenesis thereof is very complicated. It is a topical protective response caused by tissue injury or destruction, which acts to destroy, weaken or mask both injurious and injurious tissues.
이러한 염증의 특징은 미세혈관이 천공되고, 혈액 성분이 틈새 공간으로 누출되며, 백혈구가 염증 조직으로 이동한다는 것으로, 통상적으로 홍반, 부종, 통각과민 및 통증 등의 임상적 증상들을 동반한다.The characteristic of this inflammation is that the microvessels are perforated, the blood components leak into the interstitial space, and the white blood cells migrate to the inflammatory tissues, usually accompanied by clinical symptoms such as erythema, edema, hyperalgesia and pain.
생체에 있어서 염증의 발생 원인으로는 다양한 생화학적인 현상이관여하고 있으며, 특히 산화질소(nitric Oxide : NO)를 발생시키는 효소인 니트릭옥사이드 신타제(nitric oxide synthase : NOS)와 프로스타글란딘(prostaglandin)의 생합성에 관련된 효소들이 염증 반응을 매개하는데 있어서 중요한 역할을 하고 있는 것으로 알려진 바 있다.The causes of inflammation in living organisms are various biochemical phenomena. In particular, nitric oxide synthase (NOS) and prostaglandin (NO), which are enzymes that generate nitric oxide (NO) Enzymes involved in biosynthesis have been shown to play an important role in mediating inflammatory responses.
이에 L-아르기닌(L-Arginine)으로부터 NO를 생성시키는 효소인 NOS나, 아라키돈산(Arachidonic acid)으로부터 프로스타글란딘류를 합성하는데 관련된 효소인 COX(시클로옥시게나제)는 염증을 차단하는데 있어서 주된 작용을 하고 있다.Thus, NOS, an enzyme that produces NO from L-arginine, and COX (cyclooxygenase), an enzyme involved in the synthesis of prostaglandins from arachidonic acid, have a major role in blocking inflammation .
최근의 연구 결과에 따르면, NOS는 뇌에 존재하는 bNOS(brain NOS), 신경계에 존재하는 nNOS(neuronal NOS), 혈관계에 존재하는 eNOS(endothelial NOS) 등이 있으며, 체내에 항상 일정수준으로 발현되고 있고, 이들에 의해 소량 생성되는 NO는 신경전달이나 혈관확장을 유도하는 등 정상적인 신체의 향상성 유지에 중요한 역할을 한다.Recent studies have shown that NOS is expressed in the brain such as brain nOS, neuronal nOS, and endothelial NOS in the vasculature, , And the small amount of NO produced by them plays an important role in maintenance of normal body improvement such as nerve conduction and vasodilation.
이에 반하여, 각종 사이토카인(cytokines)이나 외부 자극물질에 의해 유도되는 iNOS(inducible NOS)에 의해 급격히 과량 발생되는 NO는 세포독성이나 각종 염증반응을 일으키는 것으로 알려져 있으며, 만성 염증은 iNOS 활성의 증가와 관련 있다는 연구가 있다.On the other hand, NO, which is rapidly over-induced by various cytokines or inducible NOS induced by external stimulants, is known to cause cytotoxicity and various inflammatory responses, and chronic inflammation is associated with an increase in iNOS activity There is research that is related.
TNF-α와 같은 다기능성 사이토카인(cytokine)은 정상조직에서 발현될 뿐만 아니라 병변 과정에서 그 발현 정도가 증가되며, 특히 암 촉진 과정에서 일어나는 피부염증에 중요한 역할을 한다. TNF-α가 인간의 염증성 피부 질환과 관련이 있음은 이미 많이 보고되고 있다.Multifunctional cytokines such as TNF-α are expressed not only in normal tissues but also in the course of the lesions, and play an important role in skin inflammation, especially in cancer-promoting processes. It has been reported that TNF-a is associated with inflammatory skin diseases in humans.
또한, 여러 염증질환과 알러지(allergy) 현상에 TNF-α에 대한 항체를 처리하였을 때 증상이 완화되었고, TNF-α는 호중성 백혈구를 활성화시켜 과산화수소 생성을 증가시킴으로써 내인성 암촉진제로서의 기능도 하고 있다.In addition, symptoms are alleviated when various inflammatory diseases and allergy are treated with antibodies to TNF-α, TNF-α also acts as an endogenous cancer promoting agent by activating neutrophil leukocytes to increase hydrogen peroxide production .
따라서, 발암촉진단계와 밀접한 관계가 있는 염증단계에 중추적 역할을 하고 있는 사이토카인인 TNF-α의 발현을 저해시키거나 COX-2 활성저해에 기인하는 프로스타글란딘 PGE2의 생성 억제를 통해 초기 염증성 분자(proinflammatory molecule)의 증가를 수반하는 병변 과정을 조절할 수 있을 가능성이 높은 것으로 알려져 있다.Thus, inhibition of the expression of TNF-α, a cytokine that plays a pivotal role in the inflammatory process, which is closely related to the carcinogenic acceleration step, or inhibition of the production of prostaglandin PGE2 due to inhibition of COX-2 activity leads to proinflammatory molecule is known to be able to regulate the lesion process.
즉, 세균감염 하에서 항생제로 치료 시, 박테리아를 죽이면서 세포외막으로부터 방출되는 LPS는 엔도톡신 쇼크(endotoxin shock)를 일으키며, 이러한 과정에 의해 심하게 파괴될 경우에 계속해서 생성되는 LPS를 중화시키지 못하게 된다.In other words, when treated with an antibiotic under bacterial infection, the LPS released from the extracellular membrane while killing the bacteria causes an endotoxin shock, and when it is severely destroyed by this process, it does not neutralize the continuously generated LPS.
한편, 대식세포(macrophage)는 혈액의 단핵세포(백혈구)에서 유래한 것으로 특수한 조직세포의 한 종류이다. 대식세포는 세포 파편을 제거하거나 병원성 미생물을 죽이고 림프구 세포로 모아져서 항원작용을 한다. 그러므로 대식세포의 활성은 효과적인 내적 면역체계에서 중요한 역할을 수행하게 된다. 신체가 병원성 자극이나 손상을 받게 되면 대식세포는 다양한 전염증성 사이토카인(종양괴사인자(TNF-α), 인터류킨-1, 인터류킨-2), 세포 사이의 신호 전달을 담당하는 케모카인(chemokines), 염증성 분자(산화질소(NO), 활성산소종(ROS) 및 PGE2)를 방출하고, 또한 당단백질(공동자극분자인 CD80 및 CD86, 부착분자)의 표면 수준을 상향조절한다.On the other hand, macrophages are derived from mononuclear cells (white blood cells) of blood and are a kind of special tissue cells. Macrophages act by removing cellular debris or killing pathogenic microorganisms and collecting into lymphocytes. Therefore, the activity of macrophages plays an important role in an effective internal immune system. When the body is exposed to pathological stimuli or damage, macrophages can be treated with a variety of proinflammatory cytokines (TNF-α, interleukin-1, interleukin-2), chemokines responsible for intercellular signaling, Release the molecules (nitric oxide (NO), reactive oxygen species (ROS) and PGE2) and also upregulate the surface levels of glycoproteins (co-stimulatory molecules CD80 and CD86, adhesion molecules).
그러나 이러한 대식세포들의 이점들은 숙주의 면역성 반응의 크기에 의존한다. 염증 매개물질에서 유래한 대식세포는 혈액 내에서 양이 많아져 셉틱 쇼크나 류머티즘성 관절염, 동맥경화증과 같은 염증성 질병과 같은 손상을 막을 수 있다. 그렇기 때문에 어떠한 병이 심한 상태에서 회복이 되느냐하는 것은 대식세포 기능 조절에 달려있다.However, the advantages of these macrophages depend on the magnitude of the host's immune response. Macrophages derived from inflammatory mediators can become more abundant in the blood and prevent damage such as septic shock, inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis and arteriosclerosis. Therefore, recovery from severe disease depends on the regulation of macrophage function.
한편, 자가면역 질환은 숙주의 면역 반응이 외래 항원을 자가 분자(자가 항원)와 구별하는데 실패하여 비정상적인 면역 반응을 유도할 때 초래된다. 자가면역 질병에서 자가 분자에 대한 면역 반응은 자가-내성의 정상적인 상태를 벗어나게 하는데, 이는 자가항원에 대해 반응할 수 있는 T 세포 및 B 세포의 파괴를 수반하며 살아있는 동안 면역계의 발육에 조기에 발생하는 사건에 의해 예방되어 왔다. 프로세싱된 펩티드를 T 세포에 결합시키고 제시하는 능력을 통해 면역 반응의 조절에서 중추적인 역할을 하는 세포 표면 단백질이 주조직적합 복합체(MHC)분자이다. MHC는 두 개의 형태는 클래스Ⅰ또는 클래스Ⅱ로 존재하며, 둘 모두는 단일 유전자 복합체내에서 엔코딩된다. 자가면역 질환은 MHC 클래스Ⅰ또는 클래스Ⅱ 유전자의 특정 대립유전자와 현저한 유전적 관련성을 갖는다.On the other hand, autoimmune disease is caused when the host's immune response fails to differentiate the foreign antigen from the self-molecule (autoantigen) and induces an abnormal immune response. In autoimmune diseases, the immune response to an autologous molecule deviates from the normal state of self-immunity, which involves the destruction of T cells and B cells capable of responding to autoantigens and occurs early in the development of the immune system during life It has been prevented by the incident. Cell surface proteins that play a pivotal role in the regulation of the immune response through the ability to bind and present processed peptides to T cells are the main histocompatibility complex (MHC) molecules. There are two forms of MHC, class I or class II, both encoded in a single gene complex. Autoimmune diseases have a significant genetic relationship with specific alleles of MHC class I or class II genes.
자가면역 질환으로는 류마티스 관절염(RA), 다발성 경화증(MS), 사람 타입Ⅰ또는 인슐린-의존성 당뇨병(IDDM), 자가면역 포도막염, 일차 쓸개관 간경화증(PBC) 및 복부 질병이 있다. 소수의 클래스Ⅰ관련 질병이 존재하나, 대부분의 자가면역 장애는 클래스Ⅱ 대립유전자와 관련된 것으로 밝혀졌다. MHC 클래스Ⅱ 분자는 단백질 항원에 대한 면역 반응을 조절하는 CD4+ T림프구의 선별 및 활성화에 매우 중요하다. 게놈 분석으로 여럿 중에서도 특히 호지킨병, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 보통 천포창, 인슐린 의존성 당뇨병(IDDM) 및 복부 질병과 관련된 인간 백혈구 항원(HLA)의 개개의 특정 대립유전자 변이체를 동정하였다.(Thomson(1995) Crit.Rev.Clin.Lab.Sci.32: 183-219; Nepom and Erlich(1991)Annu.Rev.Immunol.9: 493-525;Tiwari, 상술함)Autoimmune diseases include rheumatoid arthritis (RA), multiple sclerosis (MS), human type I or insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM), autoimmune uveitis, primary use cirrhosis (PBC) and abdominal disease. There are a small number of Class I related diseases, but most autoimmune disorders have been found to be related to Class II alleles. MHC class II molecules are critical for the selection and activation of CD4 + T lymphocytes that regulate the immune response to protein antigens. Genome analysis identified a particular specific allelic variant of human leukocyte antigen (HLA), particularly Hodgkin's disease, multiple sclerosis, rheumatoid arthritis, usually pemphigus, insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) and abdominal disease (Thomson 1995) Crit.Rev.Clin.Lab.Sci. 32: 183-219; Nepom and Erlich (1991) Annu.Rev.Immunol.9: 493-525; Tiwari,
한편, 현재까지의 비스테로이드성 항염증 약물(nonsteroidal antiinflannatory drug, NSAID)의 사용으로 인한 염증의 감소는 흔히 상당한 기간 동안 통증의 완화를 초래해 왔으며, 비마약성 진통제(아스피린 등)의 대부분 역시 항염증 효과를 가지므로 급성 및 만성 염증 질환의 치료에 적절히 사용되어 왔다.On the other hand, the reduction of inflammation due to the use of nonsteroidal antiinflannatory drugs (NSAIDs) to date has often resulted in pain relief for a considerable period of time, and most non-narcotic analgesics (such as aspirin) Has been used for the treatment of acute and chronic inflammatory diseases.
즉, 염증 반응의 물리적 불편함을 감소시키는 제약학적 제제를 투여하여 치료하고 있으나 일반적인 항염증성 약제는 광범위한 질병의 치료에 사용되고, 동일한 약제가 종종 상이한 질병의 치료에 이용되기 때문에 치료 작용 및 부작용을 공유하게 된다. 이 중 부작용에는 호흡촉진현상, 순환계 붕괴, 상복부 통증, 구토, 위장출혈, 간 손상 및 혈소판 저해 등의 증상이 알려진 바 있다.That is, although the pharmaceutical agent which reduces the physical inconvenience of the inflammatory reaction is administered and treated, general anti-inflammatory drugs are used for treatment of a wide range of diseases, and since the same medicines are often used for the treatment of different diseases, . These side effects include respiratory distress, circulatory collapse, upper abdominal pain, vomiting, gastrointestinal bleeding, liver damage, and platelet inhibition.
이러한 부작용 때문에 기존의 항염증성 약제는 장기적으로 사용하기가 곤란하고, 현재까지의 치료법에 부작용의 심각성이 너무 크기 때문에 새롭거나 개선된 치료제 개발은 필수적이고 시급한 실정이며, 부작용에 대한 우려가 없는 인체에 안전한 항염제의 필요성이 대두되고 있다.Because of these side effects, it is difficult to use existing anti-inflammatory drugs in the long-term, and the seriousness of the side effects is too great for the treatment until now, so it is essential and urgent to develop new or improved therapeutic agents. The need for safe anti-inflammatory drugs is emerging.
아울러, 생체내 전달 효율을 높이기 위한 최신 기술인 자기조립형 펩타이드 전달체 나노섬유(nanofibers) 제제화 연구가 현재 활발히 진행되고 있으며, 대한민국 등록특허공보 제10-1093200호 및 공개특허공보 제2012-0022603호에는 이러한 자기조립형 펩타이드 기술에 대해 제시된 바 있다.In addition, studies on the preparation of self-assembling peptide carrier nanofibers, which are the latest technologies for enhancing in vivo delivery efficiency, have been actively conducted, and in Korean Patent Registration No. 10-1093200 and Published Patent Application No. 2012-0022603, Self-assembled peptide technology has been proposed.
특히 조직내 효소들의 활성을 통한 나노섬유로부터의 치료용 펩타이드 방출을 유도하는 기술들이 최근 활발히 연구되고 있다. 그러나 나노섬유 구조의 신체형이 갖는 방출조건의 최적화조건 확립, 방출원리, 및 인체 면역계에 미치는 영향 등에 대한 연구가 전무한 상태이다. 역학적으로 세포 주변의 환경과 상호작용하는 하이드로겔 은 다기능성 물질로 약물 전달, 지지체, 바이오 센서 등을 포함한 다양한 적용가능성에 관하여 활발하게 연구되고 있다. 자가조립형 펩타이드는 복잡한 나노 구조에 생물기능적 모티프를 결합시킴으로써 새로운 나노 구조의 소재가 되는 유력한 기술로 증명되고 있다. 특히, 이온-상보성 자가조립형 펩타이드 RADARADARADARADA(RADA4, type I: -+; II: --++)는 나노섬유로 자가 조립되어 수용액 상에서 점탄성 3차원 매트릭스로 발달하는 것이 관찰되었다.In particular, techniques for inducing therapeutic peptide release from nanofibers through the activity of enzymes in tissues have been actively studied. However, there have been no researches on the optimization conditions of emission conditions of nanofiber structure, release principle, and effects on human immune system. Hydrogels, which mechanically interact with the environment around the cells, have been actively studied for various applications including drug delivery, scaffolds, and biosensors as multi-functional materials. Self-assembling peptides are proving to be a promising technology for new nanostructures by combining biomolecule motifs into complex nanostructures. In particular, the ion - complementary self - assembly peptide RADARADARADARADA (RADA4, type I: - +; II: - ++) was self assembled into nanofibers and developed into a viscoelastic three dimensional matrix in aqueous solution.
최근 연구결과에서 RADA4는 나노 약물 플랫폼으로써 연골조직에 적용할 수 있는 가능성이 제시되었으며, 펩타이드 서열 프로그램 가능성, 비세포독성, 경미한 염증반응 (메커니즘이 알려지지 않은), 비침습적 치료방법으로의 가능성, in situ 겔화, 3-D 세포내 활성, 국소적인 약물 전달 등이 연구되어지고 있다.Recent research has shown that RADA4 is a promising candidate for cartilage tissue as a nano drug platform and has potential for peptide sequence programability, non-cytotoxic, mild inflammatory response (no mechanism known), noninvasive treatment methods, and in situ gelation, activity in 3-D cells, and local drug delivery have been studied.
그러나 자가조립형 펩타이드와 in vivo 상태의 생체 반응에 대한 연구는 거의 실행되지 않았으며 특히 염증반응에서 이러한 자가조립형 물질, 플라즈마 단백질에 대한 분자 수준에서의 연구는 거의 이루어지지 않았다.However, little research has been conducted on the in vivo bioreactivity of self-assembled peptides and little research has been done at the molecular level for these self-assembling substances and plasma proteins in the inflammatory response.
따라서, 생체내 전달 효율이 높고 수식화된 나노섬유로 제작한 펩타이드를 이용한 항염증 효과를 구비하는 펩타이드 조성물의 개발이 요구되는 실정이다.Therefore, there is a need for the development of a peptide composition having an anti-inflammatory effect using a peptide produced from modified nanofibers with high in vivo delivery efficiency.
본 발명은 상기 문제점을 개선하기 위하여 창작된 것으로써, 본 발명의 목적은, 생체내 전달 효율이 높고 면역 대식세포를 저해하지 않으며, PGE2, AP-1의 활성을 저해하는 항염증 효과를 구비하는 펩타이드 조성물을 제공하는 데 있다.The present invention has been made in order to overcome the above problems, and it is an object of the present invention to provide an anti-inflammatory agent which has high in vivo delivery efficiency, does not inhibit immune macrophages, Peptide composition.
상기 목적은, 본 발명에 따라, 하기 화학식 1로 표시되는 펩타이드 조성물로서,According to the present invention, there is provided a peptide composition represented by the following formula (1)
[화학식 1][Chemical Formula 1]
상기 화학식 1에서, R1, R4, R5는 수소이고, R2, R3는 히드록시이며, K는 Lys이고, G는 Gly이고, T는 Thr이고, E는 Glu이며, C Cys인 항염증 효과를 구비하는 펩타이드 조성물에 의해 달성될 수 있다.Wherein
본 발명에 의해, 생체내 전달 효율이 높고 면역 대식세포를 저해하지 않으며, PGE2, AP-1의 활성을 저해하는 항염증 효과를 구비하는 펩타이드 조성물을 제공할 수 있다.According to the present invention, it is possible to provide a peptide composition having an anti-inflammatory effect that inhibits the activity of PGE2 and AP-1 without inhibiting immune macrophages with high in vivo delivery efficiency.
첨부의 하기 도면들은, 전술한 발명의 상세한 설명과 함께 본 발명의 기술적 사상을 이해시키기 위한 것이므로, 본 발명은 하기 도면에 도시된 사항에 한정 해석되어서는 아니 된다.
도1은 RAW 264.7 세포에 본 발명에 따른 펩타이드 조성물(CA-KGTEKC)을 처리하여 RAW 264.7 세포의 초산 생성을 나타낸 그래프이다.
도2는 RAW 264.7 세포에서 펩타이드 조성물(CA-KGTEKC)을 처리하여 RAW 264.7 세포의 활성을 나타낸 그래프이다.
도3은 RAW 264.7 세포에서 펩타이드 조성물(CA-KGTEKC)의 PGE2 생성 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도4는 HEK293 세포에서 펩타이드 조성물(CA-KGTEKC)을 처리하여 AP-1 루시페라아제 활성화 증가율을 나타낸 그래프이다.
도5는 웨스턴 블롯(western blot)을 이용해 펩타이드 조성물(CA-KGTEKC)을 처리한 RAW 264.7 세포 내 AP-1 관련 신호인 p-JNK, JNK, p-Mkk 4/7, MKK 4/7, p-TAK 1, TAK, IRAK4, IRAK1, β-actin의 단백질 발현 레벨을 도시한 것이다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The accompanying drawings, which are included to provide a further understanding of the invention and are incorporated in and constitute a part of this specification, illustrate embodiments of the invention and, together with the description, serve to explain the principles of the invention.
1 is a graph showing the production of acetic acid in RAW 264.7 cells by treating the RAW 264.7 cells with the peptide composition (CA-KGTEKC) according to the present invention.
Figure 2 is a graph showing the activity of RAW 264.7 cells treated with the peptide composition (CA-KGTEKC) in RAW 264.7 cells.
3 is a graph showing the inhibitory effect of the peptide composition (CA-KGTEKC) on PGE2 production in RAW 264.7 cells.
4 is a graph showing the increase rate of AP-1 luciferase activation by treating the peptide composition (CA-KGTEKC) in HEK293 cells.
FIG. 5 is a graph showing the effect of AP-1-related signals p-JNK, JNK, p-
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구성을 상세히 설명하기로 한다. Hereinafter, the configuration of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.
이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어는 사전적인 의미로 한정 해석되어서는 아니되며, 발명자는 자신의 발명을 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절히 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여, 본 발명의 기술적 사상에 부합되는 의미와 개념으로 해석되어야 한다.Prior to this, the terms used in the specification and claims should not be construed in a dictionary sense, and the inventor may, on the principle that the concept of a term can be properly defined in order to explain its invention in the best way And should be construed in light of the meanings and concepts consistent with the technical idea of the present invention.
따라서, 본 명세서에 기재된 실시예 및 도면에 도시된 구성은 본 발명의 바람직한 실시예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 표현하는 것은 아니므로, 본 출원 시점에 있어 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 존재할 수 있음을 이해하여야 한다.
Therefore, the embodiments shown in the present specification and the drawings are only exemplary embodiments of the present invention, and not all of the technical ideas of the present invention are presented. Therefore, various equivalents It should be understood that water and variations may exist.
본 발명에 따른 항염증 효과를 구비하는 펩타이드 조성물은, 하기 화학식 1로 표시되는 펩타이드 조성물로서,The peptide composition having an anti-inflammatory effect according to the present invention is a peptide composition represented by the following formula (1)
[화학식 1][Chemical Formula 1]
상기 화학식 1에서, R1, R4, R5는 수소이고, R2, R3는 히드록시이며, K는 Lys이고, G는 Gly이고, T는 Thr이고, E는 Glu이며, C Cys이다.In the above formula (1), R1, R4, and R5 are hydrogen, R2 and R3 are hydroxy, K is Lys, G is Gly, T is Thr, E is Glu and Cys.
본 발명에서는 CA-KGTEKC를 유효성분으로 포함하는 조성물의 항염증 효과를 알아보기 위하여 RAW 264.7 대식 세포주, 복부 대식세포(Peritoneal macrophages), 골수 유래 대식세포(Bone Marrow derived macrophages)를 선택하여 세포 활성을 측정하고, CA-KGTEKC를 처리하여 프로스타글란딘(PGE2), 활성 단백질(AP-1) 등의 활성을 억제하는 반응에 대한 실험을 하였다.
In the present invention, RAW 264.7 macrophages, peritoneal macrophages, and bone marrow derived macrophages were selected to examine the anti-inflammatory effect of the composition containing CA-KGTEKC as an active ingredient. (PGE2) and active protein (AP-1) were inhibited by CA-KGTEKC.
실시예Example
Caffeic acid(CA)(R1, R4, R5는 수소, R2, R3는 히드록시)-KGTEKC(Lys-Gly-Thr-Glu-Lys-Cys)의 제조Preparation of Caffeic acid (CA) (R1, R4, R5 are hydrogen, R2 and R3 are hydroxy) -KGTEKC (Lys-Gly-Thr-Glu-Lys-Cys)
-펩타이드-레진의 합성- Synthesis of peptide-resin
일반적으로 펩타이드는 0-플루오레닐메톡시카르보닐(Fmoc)을 아미노산의 보호기로 사용하여 통상의 고체상 펩타이드 합성법에 의해 합성하였으며, N-히드록시벤조트리아졸과 디시클로헥실카보디이미드(DCC)를 활성제로 사용하여 아미노산 잔기를 연장하였다.In general, the peptide was synthesized by a conventional solid phase peptide synthesis method using 0-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) as an amino acid protecting group, and N-hydroxybenzotriazole and dicyclohexylcarbodiimide (DCC) The amino acid residues were extended using as an activator.
-CA-KGTEKC의 합성Synthesis of -CA-KGTEKC
전술한 방법으로 합성된 펩타이드-레진에 20%리페리딘/NMP 용액을 가하여 아미노기에 결합된 Fmoc를 제거하고, N-메틸-2-피롤리돈(NMP)과 디크로로메탄(DCM)으로 세적한 후 카페익산 5당량과 실온에서 하룻밤 동안 커플링 반응시켰다. 반응이 종료된 후 NMP와 DCM으로 수회 세척한 다음 건조시켰다.To the peptide-resin synthesized by the above-mentioned method, 20% piperidine / NMP solution was added to remove the Fmoc bound to the amino group, and N-methyl-2-pyrrolidone (NMP) and dichloromethane The mixture was reacted with 5 equivalents of caffeic acid at room temperature overnight. After the reaction was completed, the reaction was washed several times with NMP and DCM, and then dried.
건조된 카페오일-펩타이드-레진을 트리플루오로아세트산 : 페놀 : 티오아니솔 : 물 : 에탄디티올(82.5 : 5 : 5 : 5 : 2.5 (v/v))의 혼합 용액으로 실온에서 2 내지 3시간 동안 반응시켜, 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기의 측쇄에 존재하는 작용기의 보호기인 t-부틸옥시카르보닐(Boc) 및 트리틸(트리페닐메틸)기를 제거하고 레진으로부터 CA-KGTEKC를 분리시킨 다음, 차가운 디에틸에테르로 상기 펩타이드를 침전시켰다.The dried caffe oil-peptide-resin was dissolved in a mixed solution of trifluoroacetic acid: phenol: thioanisole: water: ethanedithiol (82.5: 5: 5: Butyloxycarbonyl (Boc) and trityl (triphenylmethyl) groups which are protecting groups of functional groups present in the side chain of the amino acid residues constituting the peptide were removed and CA-KGTEKC was separated from the resin, The peptide was precipitated with cold diethyl ether.
수득한 CA-KGTEKC를 0.1% 트리플루오로아세트산이 포함된 물과 아세토니트릴을 용매로 역상 고성능 액체크로마토그래피(reverse phase high performance liquid chromatography; column: Gemini, C18 110A 250×21.2mm)하여 정제하였다.The obtained CA-KGTEKC was purified by using water containing 0.1% trifluoroacetic acid and acetonitrile as a solvent by reverse phase high performance liquid chromatography (Gemini, C18 110A 250 x 21.2 mm).
1. One. 펩타이드Peptides 조성물( Composition ( CACA -- KGTEKCKGTEKC )의 준비) Preparation
Caffeic acid-KGTEKC(CA-KGTEKC)Caffeic acid-KGTEKC (CA-KGTEKC)
100ppm으로 정제수에 녹임.
100 ppm dissolved in purified water.
*분석방법* Analysis method
상기 실시예에서 제조된 샘플을 아래의 조건으로 분석한다.The samples prepared in the above examples are analyzed under the following conditions.
-HPLC 기기 종류: Waters 1525μ Binary HPLC Pump-HPLC Instrument Type: Waters 1525μ Binary HPLC Pump
-Column 종류 : Gemini 5u C18 110 A(5μm, 4.6 X 250nm, Phenomenex 사)-Column type: Gemini 5u C18 110 A (5 m, 4.6 x 250 nm, Phenomenex)
-Column 규격 : 250 * 4.60 mm, 5 micron-Column Specification: 250 * 4.60 mm, 5 micron
-이동상 조건 - Mobile condition
용매 A : Water (0.1% TFA함유) Solvent A: Water (containing 0.1% TFA)
용매 B : Acetonitrile (0.1% TFA함유)Solvent B: Acetonitrile (containing 0.1% TFA)
-파장 : 230 nm (UV 램프)- Wavelength: 230 nm (UV lamp)
-유속 : 1 ml / min- Flow rate: 1 ml / min
-주입량 : 20μL- Injection volume: 20 μL
-Run Time : 36min-Run Time: 36min
-기울기(Gradient)- Gradient
2. 대식세포의 활성 측정2. Measurement of macrophage activity
도2를 참조하면, 대식세포 RAW264.7에 CA-KGTEKC 양을 각각 다르게 처리(50, 100, 200, 300, 400, 600, 800 ㎍/㎖, 30분동안 전처리)하여 세포 활성을 측정하였다. 그 결과, CA-KGTEKC의 양에 따라 대식세포의 활성에 유의한 변화가 없는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 그래프에 나타나는 것과 같이 유의하게 감소 또는 증가하는 추세가 관찰되지 않았으므로, CA-KGTEKC가 면역세포인 대식세포의 활성에 영향을 미치지 않는 것이 확인되었다.
Referring to FIG. 2, the cell activity was measured by treating the macrophages RAW264.7 with different amounts of CA-KGTEKC (50, 100, 200, 300, 400, 600, 800 占 퐂 / ml for 30 minutes). As a result, it was confirmed that the amount of CA-KGTEKC did not significantly change the activity of macrophages. That is, it was confirmed that CA-KGTEKC did not affect the activity of macrophages, which are immune cells, since no significant decrease or increase tendency was observed as shown in the graph.
3. 프로스타글란딘(3. Prostaglandins ( PGE2PGE2 )의 생성 측정)
RAW264.7 대식세포 및 골수 유래 대식세포에서 프로스타글란딘의 생성에 있어서 CA-KGTEKC의 억제 효과를 알아보기 위하여 프로스타글란딘의 생성을 측정하였다.RAW264.7 The production of prostaglandins was measured in order to investigate the inhibitory effect of CA-KGTEKC on the production of prostaglandins in macrophages and bone marrow-derived macrophages.
도3을 참조하면, RAW264.7 대식세포에 LPS(1㎍/㎖)를 처리하여, 활성화를 유도한 다음, CA-KGTEKC의 양을 각각 다르게 처리(200, 400, 600, 800 ㎍/㎖)하여 24시간 동안 배양 후, 프로스타글란딘의 생성을 측정하였으며, 그 결과, 도3에 도시된 바와 같이, RAW264.7 대식세포 및 골수 유래 대식세포에서 CA-KGTEKC가 프로스타글란딘의 생성을 억제하는 것을 확인할 수 있다.
3, RAW264.7 macrophages were treated with LPS (1 μg / ml) to induce activation, and the amounts of CA-KGTEKC were treated (200, 400, 600, 800 μg / ml) And the production of prostaglandins was measured after 24 hours of incubation. As a result, it was confirmed that CA-KGTEKC inhibited the production of prostaglandins in RAW264.7 macrophages and bone marrow-derived macrophages .
4. 4. APAP -1 루시페라아제 활성화율 측정-1 luciferase activity rate measurement
HEK293 세포에서 펩타이드 조성물(CA-KGTEKC)을 처리하여 AP-1 루시페라아제 활성화율을 측정하였다.The peptide composition (CA-KGTEKC) was treated in HEK293 cells to measure the activation rate of AP-1 luciferase.
도4를 참조하면, HEK293 세포에 PMA(100nM)를 처리하여, 활성화를 유도한 다음, CA-KGTEKC의 양을 각각 다르게 처리(100, 200, 400, 600 ㎍/㎖)하여 6시간 동안 배양 후, AP-1 루시페라아제 활성화율을 측정하였으며, 그 결과, 도4에 도시된 바와 같이, HEK293 세포에서 CA-KGTEKC가 루시페라아제 활성화가 저감됨을 확인할 수 있다.
4, HEK293 cells were treated with PMA (100 nM) to induce activation and then treated with different amounts of CA-KGTEKC (100, 200, 400, 600 / / ml) , And the activation rate of AP-1 luciferase was measured. As a result, as shown in FIG. 4, it was confirmed that CA-KGTEKC reduced luciferase activity in HEK293 cells.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따른 항염증 효과를 구비하는 펩타이드 조성물은, 생체내 전달 효율이 높고 면역 대식세포를 저해하지 않으며, PGE2, AP-1의 활성을 저해하는 효과를 발휘할 수 있다.
As described above, the peptide composition having an anti-inflammatory effect according to the present invention can exhibit the effect of inhibiting the activity of PGE2 and AP-1 without increasing the in vivo delivery efficiency and inhibiting immune macrophages.
위에서 설명한 바와 같이 본 발명에 대한 구체적인 설명은 첨부된 도면을 참조한 실시예에 의해서 이루어졌지만, 상술한 실시예는 본 발명의 바람직한 예를 들어 설명하였을 뿐이기 때문에, 본 발명이 상기의 실시예에만 국한되는 것으로 이해되어져서는 아니 되며, 본 발명의 권리범위는 후술하는 청구범위 및 그 등가개념으로 이해되어져야 할 것이다.
While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed exemplary embodiments. And the scope of the present invention should be understood as the following claims and their equivalents.
Claims (1)
[화학식 1]
상기 화학식 1에서,
R1, R4, R5는 수소이고, R2, R3는 히드록시이며,
K는 Lys이고, G는 Gly이고, T는 Thr이고, E는 Glu이며, C Cys인 것을 특징으로 하는 항염증 효과를 구비하는 펩타이드 조성물.1. A peptide composition represented by the following formula (1)
[Chemical Formula 1]
In Formula 1,
R1, R4, R5 are hydrogen, R2 and R3 are hydroxy,
K is Lys, G is Gly, T is Thr, E is Glu, and Cys.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020120158317A KR20140087724A (en) | 2012-12-31 | 2012-12-31 | Peptide composition with antiinflammatory effect |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020120158317A KR20140087724A (en) | 2012-12-31 | 2012-12-31 | Peptide composition with antiinflammatory effect |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20140087724A true KR20140087724A (en) | 2014-07-09 |
Family
ID=51736599
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020120158317A KR20140087724A (en) | 2012-12-31 | 2012-12-31 | Peptide composition with antiinflammatory effect |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20140087724A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20180110638A (en) * | 2017-03-29 | 2018-10-10 | 주식회사 비드테크 | Composition for preventing or treating skin disease Inflammatory and method for preparing thereof |
-
2012
- 2012-12-31 KR KR1020120158317A patent/KR20140087724A/en not_active Application Discontinuation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20180110638A (en) * | 2017-03-29 | 2018-10-10 | 주식회사 비드테크 | Composition for preventing or treating skin disease Inflammatory and method for preparing thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kumari et al. | Invitro anti-inflammatory and anti-artheritic property of Rhizopora mucronata leaves | |
| Wang et al. | Metformin preconditioning provide neuroprotection through enhancement of autophagy and suppression of inflammation and apoptosis after spinal cord injury | |
| KR102057035B1 (en) | New recombinant high stability superoxide dismutase and its application | |
| Qureshi et al. | Langerhans cells express inducible nitric oxide synthase and produce nitric oxide | |
| Roddy et al. | Stanniocalcin-1 rescued photoreceptor degeneration in two rat models of inherited retinal degeneration | |
| JP6640725B2 (en) | Retro-inverso analogs of spadin show increased antidepressant effects | |
| KR101318031B1 (en) | Pharmaceutical Composition For Treatment Of Inflammatory And Autoimmune Disease | |
| KR20170003975A (en) | Curcumin-peptide conjugates and formulations thereof | |
| CN115209908A (en) | Protein-based pharmaceutical compositions with neuroprotective, immunomodulatory, anti-inflammatory and antimicrobial activities | |
| US20180085430A1 (en) | Antiviral agent comprising recombinant mistletoe lectins | |
| RU2458069C2 (en) | Recovered peptide for enhancing wound healing activity of keratinocytes, composition for wound healing in mammal and drug applied in wound healing in mammal | |
| Velayutham et al. | PS9, derived from an aquatic Fungus virulent protein, glycosyl hydrolase, arrests MCF-7 proliferation by regulating intracellular reactive oxygen species and apoptotic pathways | |
| US9279004B2 (en) | Synthetic PnTx(19) peptide, pharmaceutical compositions and use | |
| RU2537560C2 (en) | Tetrapeptide and preparation, possessing cerebroprotective and antiamnestic activities (versions) | |
| JP2013542196A (en) | Peptide derived from the poison of Roparlus junseus scorpion and pharmaceutical composition | |
| JP2014519514A (en) | Method for repairing tissue damage using protease resistant mutants of stromal cell-derived factor-1 | |
| EP3578566A1 (en) | Biocidal peptide and preparation based thereon | |
| KR20140087724A (en) | Peptide composition with antiinflammatory effect | |
| Yang et al. | The emerging spectrum of early life exposure-related inflammation and epigenetic therapy | |
| FR3050455B1 (en) | POLYCAFEOYLQUINIC ACID AMIDE DERIVATIVES, PROCESS FOR PREPARATION AND USES | |
| KR20140087723A (en) | Pharmaceutical composition for therapeutic treatment of inflammatory and autoimmune pathologies | |
| Ding et al. | Effect of Achyranthes bidentata Blume extract on carrageenan-induced chronic prostatitis in rats | |
| Zhang et al. | Development of a Stretchable and Water-Resistant Hydrogel with Antibacterial and Antioxidant Dual Functions for Wound Healing in Movable Parts | |
| CA2831771A1 (en) | Polyamide compound and pharmaceutical composition for treating mitochondrial genetic diseases | |
| CN104356216A (en) | SibaDef of blood sucking insect, as well as gene and application thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E601 | Decision to refuse application |