KR20140022199A - Paspg copolymer and gene delivery carrier comprising the same - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 폴리에틸렌옥사이드 (poly(ethylene oxide), PEO)와 폴리아스파르트아마이드 (polyaspartamide)로 구성되는, N-아세틸글루코사마이드가 결합된 PASPG (P[Asp(Sper)-b-PEO-GlcNAc]) 공중합체, 상기 PASPG 공중합체를 포함하는 유전자 전달체 및 섬유증의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to PASPG (P [Asp (Sper) -b-PEO-GlcNAc] conjugated with N-acetylglucosamid, which is composed of polyethylene oxide (PEO) and polyaspartamide, A gene carrier containing the PASPG copolymer, and a composition for preventing or treating fibrosis.
유전자 치료 (gene therapy)는 치료 유전자를 체내의 원하는 장기로 전달하여 세포 내에서 새로운 단백질이 발현되도록 하여 질병을 치료하는 것으로, 질병의 증상을 치료하는 것이 아니고 질병의 원인을 치료하여 제거하는 방식이다. 유전자 치료는 일반적인 약물에 의한 치료에 비해 우수한 선택성을 가질 수 있고 다른 치료법으로는 조절하기 힘든 질병의 치료율 및 치료 속도를 개선할 수 있다. 그러나, 치료 유전자로서 DNA는 생체 내 효소에 의한 가수분해에 취약하고 세포 내로 유입되는 효율이 낮기 때문에, 효과적인 유전자 치료를 위해서는 치료 유전자를 원하는 표적세포로 안전하게 전달하여 높은 발현 효율을 가능케 하는 유전자 전달체 (gene carrier)를 개발하는 것이 필요하다.Gene therapy is the treatment of diseases by delivering therapeutic genes to the desired organs in the body so that new proteins are expressed in the cells, not by treating the symptoms of the disease, but by treating and eliminating the causes of the disease . Gene therapy can have better selectivity than treatment with conventional drugs and improve the rate of treatment and the rate of treatment of diseases that are difficult to control with other therapies. However, since DNA as a therapeutic gene is susceptible to hydrolysis by in vivo enzymes and has low efficiency of introduction into cells, effective gene therapy requires a gene carrier capable of delivering a therapeutic gene to a desired target cell safely and thereby achieving high expression efficiency gene carrier.
유전자 전달체는 독성이 낮거나 없어야 하며, 유전자를 선택적이고 효과적으로 원하는 세포에 전달할 수 있어야 한다. 이러한 유전자 전달체는 크게 바이러스성과 비바이러스성으로 나눌 수 있다. Gene transporters should be low or no toxic, and should be able to deliver genes selectively and efficiently to the desired cells. These gene carriers can be divided into viral and nonviral.
최근까지 임상 실험에는 유전자 전달체로 형질도입 효율이 높은 바이러스성 벡터(viral vector)가 사용되었다. 그러나, 레트로바이러스(retrovirus), 아데노바이러스(adenovirus), 아데노바이러스와의 복합체(adeno-associated virus)와 같은 바이러스성 벡터는 제조과정이 복잡할 뿐만 아니라, 면역원성, 감염 가능성, 염증 유발, 비특이적 DNA의 삽입 등의 안전성 문제와 수용할 수 있는 DNA의 크기가 한정되어 있다는 문제로 인해 인체에 적용하기엔 한계가 많다. 이에 현재는 비바이러스성 벡터(non-viral vector)가 바이러스성 벡터의 대용으로 각광을 받고 있다.Until recently, viral vectors with high transfection efficiency were used in clinical trials. However, viral vectors such as retroviruses, adenoviruses, and adeno-associated viruses are not only complicated in the manufacturing process, but also include immunogenicity, susceptibility to infection, inflammation induced, nonspecific DNA And the size of the DNA that can be accommodated is limited. Therefore, there are many limitations to apply to the human body. Currently, non-viral vectors are attracting attention as substitutes for viral vectors.
비바이러스성 벡터는 최소한의 면역반응으로 반복 투여할 수 있고, 특정 세포로의 특이적 전달이 가능하며, 저장 안정성이 우수하고, 대량 생산이 용이하다는 장점을 가지고 있다. 이러한 비바이러스성 벡터의 예로는 양이온성 리포좀(liposome) 계열로서 N-[1-(2,3-다이올레일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸암모늄 클로라이드 (DOTMA), 알킬암모늄(alkylammonium), 양이온성 콜레스테롤 유도체(cationic cholesterol derivatives), 그라미시딘(gramicidin) 등이 있다. 최근 비바이러스성 벡터 중 양이온성 고분자는 음전하를 띠는 DNA와의 이온결합을 통한 복합체를 형성할 수 있어 많은 관심을 불러일으키고 있다. 이러한 양이온성 고분자에는 폴리-L-라이신(PLL), 폴리(4-하이드록시-L-프롤린 에스테르), 폴리에틸렌이민(PEI), 폴리[α-(4-아미노부틸)-L-글리콜산], 폴리아미도아민 덴드리머, 폴리[N,N'-(다이메틸아미노)에틸]메타크릴레이트(PDMAEMA) 등이 포함되며, 이들은 DNA를 압축하여 나노 입자를 형성함으로써 효소분해로부터 DNA를 보호하고, 빠르게 세포 안으로 침투하여 엔도좀(endosome)에서 빠져나올 수 있도록 도와준다. 대부분의 비바이러스성 벡터는 바이러스성 벡터에 비해 생분해성, 낮은 독성, 비면역원성, 사용상의 간편함 등의 장점을 가지나, 큰 분자량을 갖는 DNA의 낮은 내포율, 상대적으로 낮은 형질도입 효율, 제한적인 입자 크기 등의 문제점을 가지고 있다. 따라서, 기존의 비바이러스성 벡터의 장점은 그대로 유지하면서 형질도입 효율을 증강시킨 유전자 전달체의 개발이 절실히 요구되고 있다.The non-viral vector has an advantage that it can be repeatedly administered with a minimal amount of immunity, capable of specific delivery to specific cells, excellent in storage stability, and easy in mass production. Examples of such non-viral vectors include N- [1- (2,3-dioleyloxy) propyl] -N, N, N-trimethylammonium chloride (DOTMA) as a cationic liposome family, alkylammonium alkylammonium, cationic cholesterol derivatives, gramicidin, and the like. Recently, cationic polymers among nonviral vectors have attracted much attention because they can form complexes by ionic bonding with negatively charged DNA. Such cationic polymers include poly-L-lysine (PLL), poly (4-hydroxy-L-proline ester), polyethyleneimine (PEI), poly [ (PDMAEMA), and the like. They protect DNA from enzymatic degradation by forming DNA nanoparticles by compressing the DNA, and rapidly decompose the DNA It penetrates inside and helps to escape from the endosome. Most non-viral vectors have advantages such as biodegradability, low toxicity, non-immunogenicity, ease of use and the like as compared with viral vectors, but the low encapsulation rate of DNA having a large molecular weight, relatively low transfection efficiency, Particle size and so on. Therefore, there is a desperate need to develop a gene carrier that enhances transfection efficiency while maintaining the advantages of existing non-viral vectors.
이에 본 발명자들은 신규한 유전자 전달체를 개발하기 위해 노력한 결과, 폴리에틸렌옥사이드 (poly(ethylene oxide), PEO)와 폴리아스파르트아마이드 (polyaspartamide)로 구성되는, N-아세틸글루코사마이드가 결합된 PASPG (P[Asp(Sper)-b-PEO-GlcNAc]) 공중합체가 DNA에 높은 결합능을 나타내고, 세포 독성이 매우 낮으며, 비멘틴-발현 세포에서 우수한 트렌스펙션 효율을 가지고 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
As a result of efforts to develop a novel gene carrier, the present inventors have found that PASPG (P [(N-acetylglucosaminyl) conjugated with N-acetylglucosamid, which is composed of polyethylene oxide (PEO) and polyaspartamide, Asp (Sper) -b-PEO-GlcNAc]) copolymer exhibits a high binding capacity to DNA, has very low cytotoxicity, and has an excellent transfection efficiency in vimentin-expressing cells .
본 발명의 목적은 폴리에틸렌옥사이드 (poly(ethylene oxide), PEO)와 폴리아스파르트아마이드 (polyaspartamide)로 구성되는, N-아세틸글루코사마이드가 결합된 PASPG (P[Asp(Sper)-b-PEO-GlcNAc]) 공중합체를 제공하는 것이다. It is an object of the present invention to provide a PASPG (P [Asp (Sper) -b-PEO-GlcNAc (Sper) -b-PEO-GlcNAc ]) Copolymer.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 PASPG 공중합체를 포함하는 유전자 전달체를 제공하는 것이다. It is still another object of the present invention to provide a gene carrier comprising the PASPG copolymer.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 PASPG 공중합체를 포함하는 섬유증의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
It is still another object of the present invention to provide a composition for preventing or treating fibrosis comprising the PASPG copolymer.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 폴리에틸렌옥사이드 (poly(ethylene oxide), PEO)와 폴리아스파르트아마이드 (polyaspartamide)로 구성되는, N-아세틸글루코사마이드가 결합된 PASPG (P[Asp(Sper)-b-PEO-GlcNAc]) 공중합체를 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a PASPG (P [Asp (Sper) - PEGP) conjugated with N-acetylglucosamid, which is composed of polyethylene oxide (PEO) and polyaspartamide, b-PEO-GlcNAc]) copolymer.
또한, 본 발명은 상기 PASPG 공중합체를 포함하는 유전자 전달체를 제공한다. The present invention also provides a gene carrier comprising the PASPG copolymer.
또한, 본 발명은 상기 PASPG 공중합체를 포함하는 섬유증의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
The present invention also provides a composition for preventing or treating fibrosis comprising the PASPG copolymer.
본 발명에 따른 PASPG 공중합체는 DNA에 높은 결합능을 나타내어 PASPG/DNA 복합체를 형성하며, 상기 PASPG/DNA 복합체는 200 nm이하의 작은 크기로 내포 작용을 통한 유전자 전달이 가능하고, 세포 독성이 매우 낮으며, 비멘틴-발현 세포에서 우수한 트렌스펙션 효율을 가지고 있어, 유전자 전달체 또는 섬유증의 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
The PASPG / DNA complex of the present invention exhibits a high binding ability to DNA to form a PASPG / DNA complex. The PASPG / DNA complex has a small size below 200 nm and is capable of gene transfer through encapsulation, And has excellent transfection efficiency in vimentin-expressing cells, and thus can be usefully used as a composition for preventing or treating a gene carrier or fibrosis.
도 1 은 전기영동을 이용한 겔 지연 어세이 결과를 나타낸 도이다 (A: PASP/DNA, B: PASPG/DNA, Ⅰ: DNA, Ⅱ~Ⅵ: 폴리머/DNA 복합체의 N/P 비가 각각 0.1, 0.5, 1, 5, 10) .
도 2는 EF-TEM을 통해 PASPG/DNA 복합체의 형태를 관찰한 도이다 (A: PASP/DNA, B: PASPG/DNA).
도 3은 293T 세포에서 PASPG/DNA 복합체의 독성을 확인하기 위한 MTT 어세이 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 HeLa 세포에서 PASPG/DNA 복합체의 독성을 확인하기 위한 MTT 어세이 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 A549 세포에서 PASPG/DNA 복합체의 독성을 확인하기 위한 MTT 어세이 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 293T 세포에서 PASPG/DNA 복합체의 트랜스펙션 효율을 확인하기 위한 루시퍼레이즈 어세이 결과를 나타낸 도이다.
도 7는 HeLa 세포에서 PASPG/DNA 복합체의 트랜스펙션 효율을 확인하기 위한 루시퍼레이즈 어세이 결과를 나타낸 도이다.
도 8는 A549세포에서 PASPG/DNA 복합체의 트랜스펙션 효율을 확인하기 위한 루시퍼레이즈 어세이 결과를 나타낸 도이다.
도 9은 293T 세포에 자유 GlcNAc를 전처리한 후, PASPG/DNA 복합체의 트랜스펙션 효율을 확인하기 위한 경쟁 어세이 결과를 나타낸 도이다.
도 10는 HeLa 세포에 자유 GlcNAc를 전처리한 후, PASPG/DNA 복합체의 트랜스펙션 효율을 확인하기 위한 경쟁 어세이 결과를 나타낸 도이다.
도 11은 293T 세포에서 혈청 첨가 유무에 따른 PASPG/DNA 복합체의 트랜스펙션 효율을 확인하기 위한 루시퍼레이즈 어세이 결과를 나타낸 도이다.FIG. 1 is a graph showing the results of gel retardation assay using electrophoresis (A: PASP / DNA, B: PASPG / DNA, I: DNA, II to VI: polymer / , 1, 5, 10).
FIG. 2 is a diagram (A: PASP / DNA, B: PASPG / DNA) of a PASPG / DNA complex observed through EF-TEM.
Figure 3 shows the results of MTT assay for confirming the toxicity of the PASPG / DNA complex in 293T cells.
FIG. 4 shows the result of MTT assay for confirming toxicity of PASPG / DNA complex in HeLa cells. FIG.
FIG. 5 shows the result of MTT assay for confirming toxicity of PASPG / DNA complex in A549 cells. FIG.
6 is a graph showing the results of luciferase assay for confirming the transfection efficiency of the PASPG / DNA complex in 293T cells.
7 is a graph showing the results of Luciferase assays for confirming the transfection efficiency of the PASPG / DNA complex in HeLa cells.
8 is a graph showing the results of Luciferase assays for confirming the transfection efficiency of the PASPG / DNA complex in A549 cells.
FIG. 9 is a view illustrating a competitive assay result for confirming the transfection efficiency of PASPG / DNA complex after pre-treatment of 293T cells with free GlcNAc. FIG.
10 is a view showing a result of a competitive assay for confirming the transfection efficiency of a PASPG / DNA complex after pretreatment of free GlcNAc in HeLa cells.
11 is a graph showing the results of luciferase assay for confirming transfection efficiency of PASPG / DNA complex according to presence or absence of serum in 293T cells.
이하, 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는, N-아세틸글루코사마이드가 결합된 PASPG (P[Asp(Sper)-b-PEO-GlcNAc]) 공중합체를 제공한다. The present invention provides a PASPG (P [Asp (Sper) -b-PEO-GlcNAc] copolymer to which N-acetylglucosamid is attached, represented by the following formula (1).
상기 화학식 1에서, X는 10 내지 1000이고, Y는 20 내지 2000이다. In the above formula (1), X is 10 to 1000 and Y is 20 to 2000.
상기 PVAX공중합체의 제조 시, 공중합은 유기용매 하에서 진행되는 것이 바람직하다. 본 발명의 일 실시예에서는, 하기와 같은 과정을 통해 PASPG를 제조한다. In the preparation of the PVAX copolymer, the copolymerization is preferably carried out in an organic solvent. In one embodiment of the present invention, PASPG is produced through the following process.
먼저, BLA-NCA (β-benzyl-L-asprtate N-carboxyanhydride)와 HO-PEO-NH2 (α-hidroxy-ω-amino PEO)를 유기용매에서 반응시켜(반응몰비: BLA-NCA/HO-PEO-NH2=5-500) PBLA-b-PEO-OH를 제조한다. 상기 PBLA-b-PEO-OH를 APTES(3-triethoxysilyl propylamine)와 함께 유기용매에서 반응시켜(반응몰비: PBLA-b-PEO-OH/APTES =1~3) PBLA-b-PEO-NH2를 제조한다. 상기 PBLA-b-PEO-NH2를 키토비오닉 산 (chitobionic acid)과 함께 유기용매에서 반응(반응몰비: PBLA-b-PEO-NH2/키토비오닉 산 =1)시켜 PBLA-b-PEO-GlcNAc를 제조한다. 마지막으로, 상기 PBLA-b-PEO-GlcNAc를 스페르민과 함께 유기용매에서 반응(반응몰비: PBLA-b-PEO-GlcNAc/스페르민=1~50)시켜 최종 PASPG (P[Asp(Sper)-b-PEO-GlcNAc]) 공중합체를 제조한다. 이때, 스페르민 대신 폴리에틸렌이민 (polyethylenimine), 디에틸렌트리아민 (diethylenetriamine), 에틸렌디아민 (ethylenediamine), 트리에틸렌테트라아민 (triethylenetetraamine), 테트라에틸렌펜타민 (tetraethylenepentamine) 등을 이용할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다. 상기 PSAPG 공중합체는 동결 건조될 수 있으며, 동결건조는 통상적으로 사용되는 동결건조 방법 또는 동결건조기를 사용하여 수행될 수 있다. 상기 유기용매는 DMF, DMSO, 다이옥세인, THF, 디클로로메탄 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.First, a mixture of BLA-NCA (β-benzyl-L-asprtate N-carboxyanhydride) and HO-PEO-NH 2 b-PEO-OH is prepared by reacting (? -hydroxy-? -amino PEO) in an organic solvent (reaction molar ratio: BLA-NCA / HO-PEO-NH 2 = 5-500). PELA-b-PEO-OH was reacted with APTES (3-triethoxysilyl propylamine) in an organic solvent (reaction molar ratio: PBLA-b-PEO-OH / APTES = 1 to 3) do. PELA-b-PEO-NH2 was reacted with chitobionic acid in an organic solvent (reaction molar ratio: PBLA-b-PEO-NH2 / chitobionic acid = 1) . Finally, PBLA-b-PEO-GlcNAc was reacted with spermine in an organic solvent (reaction molar ratio: PBLA-b-PEO-GlcNAc / spermine = 1 to 50) to obtain final PASPG (P [Asp ) -b-PEO-GlcNAc]) copolymer. In this case, instead of spermine, polyethylenimine, diethylenetriamine, ethylenediamine, triethylenetetraamine, tetraethylenepentamine, and the like can be used. Do not. The PSAPG copolymer may be lyophilized, and the lyophilization may be performed using a commonly used lyophilization method or a freeze dryer. The organic solvent includes, but is not limited to, DMF, DMSO, dioxane, THF, dichloromethane and the like.
본 발명에 따른 PASPG 공중합체는 DNA에 높은 결합능을 나타내어 PASPG/DNA 복합체를 형성하며, 상기 PASPG/DNA 복합체는 200 nm이하의 작은 크기로 내포 작용 (endocytosis)을 통한 유전자 전달이 가능하고, 세포 독성이 매우 낮으며, 비멘틴-발현 세포에서 우수한 트렌스펙션 효율을 가지고 있다. 따라서, 본 발명의 PASPG 공중합체는 유전자 전달체 또는 섬유증의 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
The PASPG / DNA complex is capable of gene transfer through endocytosis at a small size of 200 nm or less, and is capable of carrying out cytotoxicity Is very low and has excellent transmission efficiency in vimentin-expressing cells. Accordingly, the PASPG copolymer of the present invention can be usefully used as a composition for preventing or treating a gene carrier or fibrosis.
이에 본 발명은 상기 PASPG 공중합체를 포함하는 유전자 전달체를 제공한다. Accordingly, the present invention provides a gene carrier comprising the PASPG copolymer.
상기 유전자 전달체는 PASPG 공중합체에 치료 유전자가 결합된 형태인 것을 특징으로 한다. The gene carrier is characterized in that the therapeutic gene is bound to the PASPG copolymer.
상기 유전자 전달체에 결합될 수 있는 치료 유전자의 종류는 특별히 한정되지 않으며, 본 발명의 목적에 따라 원하는 표적에 전달되어 원하는 치료 효과를 발휘할 수 있는 어떠한 형태의 유전자도 본 발명의 범위에 포함되며, 예를 들어 gDNA, cDNA, pDNA, mRNA, tRNA, rRNA, siRNA, shRNA, miRNA등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.The type of the therapeutic gene which can be bound to the gene carrier is not particularly limited and any type of gene that can be delivered to a desired target according to the purpose of the present invention and exhibit a desired therapeutic effect is included in the scope of the present invention, But are not limited to, gDNA, cDNA, pDNA, mRNA, tRNA, rRNA, siRNA, shRNA, miRNA and the like.
상기 유전자 전달체의 크기는 20 내지 200 nm, 바람직하게는 80 내지 200 nm이다. The size of the gene carrier is 20 to 200 nm, preferably 80 to 200 nm.
상기 유전자 전달체의 N/P 비는 바람직하게는 0.1 내지 30이다. The N / P ratio of the gene carrier is preferably 0.1 to 30.
본 발명의 유전자 전달체는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 적절한 방법으로 투여될 수 있다. 본 발명의 유전자 전달체는 통상의 방법에 따라 경구형 제형 또는 멸균 주사용액 등의 형태로 다양하게 제형화할 수 있으며, 고체의 나노입자 및 미립구 분말로 제조할 수 있다.
The gene carrier of the present invention may be administered by a suitable method including a pharmaceutically acceptable carrier. The gene delivery vehicle of the present invention can be variously formulated in the form of an oral formulation or a sterile injection solution according to a conventional method, and can be produced as solid nanoparticles and microparticulate powders.
또한, 본 발명은 상기 PASPG 공중합체를 포함하는 섬유증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating fibrosis comprising the PASPG copolymer.
상기 섬유증 (fibrosis)은 섬유아세포에 의한 세포외 기질의 비정상적 생성, 축적 및 침착이 일어나는 질환으로, 신장 섬유증, 간 섬유증, 폐 섬유증, 피부 섬유증, 심장 섬유증, 관절 섬유증, 신경 섬유증, 근섬유증, 복막 섬유증 등을 포함하며, 바람직하게는 신장 섬유증이다. The fibrosis is a disease in which abnormal formation, accumulation and deposition of extracellular matrix by fibroblasts occurs. The fibrosis includes fibrosis, hepatic fibrosis, pulmonary fibrosis, dermal fibrosis, cardiac fibrosis, joint fibrosis, nerve fibrosis, Fibrosis and the like, preferably renal fibrosis.
본 발명의 약학적 조성물은 섬유증 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention may contain at least one known active ingredient having an effect of treating fibrosis.
본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌 (Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등이 있다. 상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. The compositions of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents conventionally used in the manufacture of pharmaceutical compositions. In addition, it can be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, oral formulations such as syrups and aerosols, external preparations, suppositories and sterilized injection solutions according to a conventional method. Suitable formulations known in the art are preferably those as disclosed in Remington ' s Pharmaceutical Science, recently, Mack Publishing Company, Easton PA. Examples of carriers, excipients and diluents which may be included include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, Cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil. When the composition is formulated, it is prepared using a diluent such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, a surfactant, or an excipient usually used. Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which are prepared by mixing at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, It is prepared. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used. Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. . Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. Examples of suppository bases include withexol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin and the like.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.The term "administering" as used herein is meant to provide any desired composition of the invention to a subject in any suitable manner.
본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. The preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the condition and the weight of the patient, the degree of disease, the type of drug, the route of administration and the period of time, but can be appropriately selected by those skilled in the art.
본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 약학적 조성물은 1 일 1 mg 내지 3 mg의 양으로 투여할 수 있다. 상기 조성물의 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수 회 나누어 투여할 수도 있다. The preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the condition and the weight of the patient, the degree of disease, the type of drug, the route of administration and the period of time, but can be appropriately selected by those skilled in the art. For a desired effect, the pharmaceutical composition of the present invention may be administered in an amount of 1 mg to 3 mg per day. The composition may be administered once a day, or divided into several doses.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to a subject by various routes. All modes of administration may be expected, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intra-uterine dural or intracerebral injection.
본 발명의 조성물은 섬유증 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
The composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy, and biological response modifiers for the treatment of fibrosis.
이하 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예, 실험예 및 제조예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, preferred embodiments, experimental examples, and production examples are provided to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples, experimental examples and production examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the examples, experimental examples and production examples.
실시예Example 1. One. PASPGPASPG (P[ (P [ AspAsp (( SperSper )-b-) -b- PEOPEO -- GlcNAcGlcNAc ]) 공중합체의 제조]) Copolymer
BLA-NCA (β-benzyl-L-asprtate N-carboxyanhydride) 는 Fine Chemical Co. (Yeochun, Korea)에서, MPEO-NH2(α-Methoxy-ω-amino poly(ethylene oxide), MW=12,000)는 Sunbio (Anyang, Korea)에서, HO-PEO-NH2 (α-hidroxy-ω-amino PEO, MW=10,000)는 각각 및 Nippon Oil and Fats (Tokyo, Japan)에서 제공받았다. 또한, 키토비오스 (Chitobiose)는 Yaizu Suisankagaku Industy Co. Ltd. (Shizuoka, Japan)에서, 스페르민 (Spermine), APTES(3-triethoxysilyl propylamine) 및 DMF(N,N-dimethylformamide)는 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다.BLA-NCA (β-benzyl-L-asprtate N-carboxyanhydride) was purchased from Fine Chemical Co. (Yeochun, Korea) in, MPEO-NH 2 (α- Methoxy-ω-amino poly (ethylene oxide), MW = 12,000) is in the (Anyang, Korea) Sunbio, HO -PEO-NH 2 (? -hydroxy-? -amino PEO, MW = 10,000) were each supplied by Nippon Oil and Fats (Tokyo, Japan). In addition, Chitobiose is commercially available from Yaizu Suisankagaku Industy Co. Ltd. Spermine, APTES (3-triethoxysilyl propylamine) and DMF (N, N-dimethylformamide) were purchased from Sigma-Aldrich (St. Louis, Mo., USA).
먼저, BLA-NCA 와 HO-PEO-NH2를 DMF에서 40 ℃에서 72 시간 동안 반응시켜, 아미노 그룹의 고리열림중합 (ring opening polymerization)을 통해 PBLA-b-PEO-OH를 중합하였다. 다음으로, 상기 PBLA-b-PEO-OH를 APTES와 함께 DMF에서 상온에서 18시간 동안 반응시켜 PBLA-b-PEO-NH2를 수득하였다. 상기 PBLA-b-PEO-NH2를 키토비오스의 산화를 통해 수득된 키토비오닉 산 (chitobionic acid)과 DMF에서 반응시켜 PBLA-b-PEO-GlcNAc를 수득하였다. 마지막으로 상기 PBLA-b-PEO-GlcNAc를 DMF, 무수상태, 40 ℃에서 24 시간 동안 스페르민 (PBLA부분의 벤질 그룹의 50 배량)과 반응시켜 PASPG 공중합체를 수득하였다. 반응이 끝난 후, 혼합물을 10% 아세트산에 천천히 떨어뜨리고, 0.01N HCl 및 멸균수 (MWCO: 3500 Da)에 투석한 후, 감압 하에 동결 건조하였다.
First, PBLA-b-PEO-OH was polymerized by ring opening polymerization of amino groups by reacting BLA-NCA and HO-PEO-NH 2 in DMF at 40 ° C for 72 hours. Next, by reacting at room temperature for 18 hours, the above PBLA-b-PEO-OH in DMF with APTES was obtained PBLA-b-PEO-NH 2 . It is reacted in the PBLA-b-PEO-NH 2 The key ohnik Tobias acid (chitobionic acid) obtained by the oxidation of Quito agarobiose and the DMF to give a PBLA-b-PEO-GlcNAc. Finally, the PBLA-b-PEO-GlcNAc was reacted with spermine (50 times the benzyl group of the PBLA moiety) in DMF, anhydrous, at 40 ° C for 24 hours to obtain a PASPG copolymer. After the reaction was completed, the mixture was slowly added to 10% acetic acid, dialyzed against 0.01 N HCl and sterilized water (MWCO: 3500 Da), and lyophilized under reduced pressure.
비교예Comparative Example 1. One. PASPPASP (P[ (P [ AspAsp (( SperSper )-b-) -b- PEOPEO ]) 공중합체의 제조]) Copolymer
PASP는 PBLA-b-PEO를 무수상태, 40 ℃에서 24 시간 동안 스페르민 (PBLA부분의 벤질 그룹의 50 배량)과 반응하여 준비하였다. 반응이 끝난 후, 혼합물을 10% 아세트산에 천천히 떨어뜨리고, 0.01N HCl 및 멸균수 (MWCO: 3500 Da)에 투석한 후, 감압 하에 동결 건조하였다.
PASP was prepared by reacting PBLA-b-PEO with spermine (50 times the benzyl group of the PBLA moiety) for 24 hours at 40 ° C in an anhydrous state. After the reaction was completed, the mixture was slowly added to 10% acetic acid, dialyzed against 0.01 N HCl and sterilized water (MWCO: 3500 Da), and lyophilized under reduced pressure.
실험예Experimental Example 1. 물리화학적 특성 분석 1. Physical and chemical characterization
상기 실시예 1에서 수득한 PASPG 공중합체의 물리 화학적 특성을 분석하였다.
The physicochemical properties of the PASPG copolymer obtained in Example 1 were analyzed.
1-1. 겔 지연 1-1. Gel delay 어세이Assay
효율적인 유전자 전달체로서의 기능을 확인하기 위하여, 겔 지연 어세이 (Gel retardation assay)를 수행하였다. 보다 구체적으로는, PASP 또는 PASPG 및 DNA (pGL3-control, 0.1 μg) 복합체를 0.1 내지 10의 다양한 N(질소)/P(인) 비로 혼합한 후, 상온에서 30분간 배양하였다. 이를 1% 아가로즈 겔에서 전기영동한 후, UV 조명하에서 관찰하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다. In order to confirm the function as an efficient gene carrier, a gel retardation assay was performed. More specifically, PASP or PASPG and DNA (pGL3-control, 0.1 μg) complexes were mixed at various N (nitrogen) / P (phosphorus) ratios of 0.1 to 10 and then cultured at room temperature for 30 minutes. This was electrophoresed on 1% agarose gel and observed under UV illumination. The results are shown in Fig.
도 1에 나타낸 바와 같이, PASPG는 DNA과 정전기적 상호작용을 통하여 압축됨을 확인하였다. 상기 결과를 통하여, PASPG의 DNA 압축 능력이 우수함을 확인하였으며, N/P 비가 1일 때부터 DNA의 이동이 완전하게 지연되고, PASPG의 GlcNAc 부분은 DNA의 이동에 영향을 미치지 않음을 확인하였다.
As shown in Fig. 1, PASPG was confirmed to be compressed through electrostatic interaction with DNA. From the above results, it was confirmed that the DNA compression capacity of PASPG was excellent. It was confirmed that the DNA migration was completely delayed when the N / P ratio was 1, and the GlcNAc portion of PASPG did not affect DNA migration.
1-2. 크기 및 형태 관찰1-2. Size and shape observation
효과적인 내포 작용을 통한 표적세포로의 유전자의 전달은 복합체의 크기에 의존적이며, 기존 연구 결과를 통해 복합체의 크기가 200 nm 또는 그 이하인 것이 중요하다고 알려져 있다. 이에 N/P비를 달리하여 PASPG/DNA 복합체의 크기를 DLS (dynamic light scattering spectrophotometer, DLS 8000, Otsuka Electronics, Osaka, Japan)를 이용하여 분석하였다. 대조군으로 PASP/DNA 복합체를 이용하였다. 그 결과를 표 1에 나타내었다. It is known that the delivery of genes to target cells through effective inclusion is dependent on the size of the complex and that the size of the complex is 200 nm or less through previous studies. The size of the PASPG / DNA complex was analyzed by DLS (DLS 8000, Otsuka Electronics, Osaka, Japan) with different N / P ratios. As a control, PASP / DNA complex was used. The results are shown in Table 1.
(nm)PASP
(nm)
(nm)PASPG
(nm)
표 1에 나타낸 바와 같이, PASPG/DNA 복합체의 크기는 N/P 비가 증가함에 따라 80 내지 160 nm로 증가하며, PASPG의 GlcNAc는 복합체의 크기에 영향을 미치지 않음을 확인하였다.
As shown in Table 1, the size of the PASPG / DNA complex increased from 80 to 160 nm with increasing N / P ratio, and GlcNAc of PASPG did not affect the size of the complex.
또한, N/P 비가 10일 때 PASPG/DNA 복합체의 EF-TEM (energy-filtering transmission electron microscopy, LIBRA 120, Carl Zeiss, Germany) 이미지를 관찰하였다. 대조군으로 PASP/DNA 복합체를 이용하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다. When the N / P ratio was 10, images of the PASPG / DNA complex were observed by EF-TEM (LIBRA 120, Carl Zeiss, Germany). As a control, PASP / DNA complex was used. The results are shown in Fig.
도 2에 나타낸 바와 같이, PASPG/DNA 복합체는 균일한 구형이며, DLS 측정치보다 작은 100 nm 정도의 크기임을 확인하였다. As shown in FIG. 2, the PASPG / DNA complex was uniformly spherical, and was found to be about 100 nm smaller than the DLS measurement value.
상기 PASPG/DNA 복합체의 모양 및 크기 분석을 통해 PASPG/DNA 복합체는 세포 내로 내포 작용을 통한 효율적인 유전자 전달이 가능함을 확인하였다.
By analyzing the shape and size of the PASPG / DNA complex, it was confirmed that the PASPG / DNA complex can efficiently transfer the gene through encapsulation into the cell.
실험예Experimental Example 2. 세포 독성 분석 2. Cytotoxicity analysis
상기 실시예 1에서 수득한 PASPG 공중합체의 세포 독성을 확인하기 위하여, MTT 어세이를 수행하였다. A549 (Human lung adenocarcinoma epithelial cells), HeLa (human cervix epithelial carcinoma) 및 293T (human kidney transformed cells) 세포를 이용하였다. 먼저, 각 세포를 96웰 플레이트에 1 × 104 cells/well의 농도로 심고, 약 80% 컨플루언시를 이룰수 있도록 18 내지 20시간 동안 성장 배지에서 배양하였다. 이 후, 성장 배지를 제거한 후, 다양한 N/P 비를 가진 PASPG/DNA 복합체를 포함한 혈청 (serum)-프리 배지로 교체하고, MTT 용액을 이용하여 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 3 내지 도 5에 나타내었다. In order to confirm the cytotoxicity of the PASPG copolymer obtained in Example 1, MTT assay was performed. Human lung adenocarcinoma epithelial cells (A549), HeLa (human cervix epithelial carcinoma) and 293T (human kidney transformed cells) cells were used. First, each cell was seeded in a 96-well plate at a concentration of 1 × 10 4 cells / well and cultured in a growth medium for 18 to 20 hours to achieve about 80% confluency. After this, the growth medium was removed and replaced with a serum-free medium containing PASPG / DNA complex with various N / P ratios, and the absorbance was measured using MTT solution. The results are shown in Figs. 3 to 5. Fig.
도 3 내지 도 5에 나타낸 바와 같이, PASPG/DNA 복합체는 세 종류의 세포에서 모두 높은 N/P 비에도 현저하게 낮은 독성을 나타냄을 확인하였다.
As shown in FIG. 3 to FIG. 5, it was confirmed that the PASPG / DNA complex showed remarkably low toxicity even in high N / P ratio in all three kinds of cells.
실험예Experimental Example 3. 3. 트랜스펙션Transfection 효율 분석 Efficiency analysis
상기 실시예 1에서 수득한 PASPG 공중합체의 트렌스펙션 효율을 분석하기 위하여, 하기와같은 실험을 수행하였다. 세포는 비멘틴이 발현되는 293T 및 HeLa 세포와 비멘틴이 발현되지 않는 A549 세포를 각각 이용하였다. 먼저, 각 세포를 24 웰 플레이트에 10 × 104 cells/ml의 농도로 심고, 약 70-80% 컨플루언시를 이룰 때까지 배양하였다. 이 후, 각 웰에 다양한 N/P 비를 가진 PASPG/DNA 복합체를 처리하고, 37 ℃에서 4시간 동안 배양하였다. 이 후, 혈청-프리 배지로 교체하고 24시간 동안 더 배양한 후, 루시퍼레이즈 어세이를 수행하였다. 상대적인 RLUs (relative light units)값은 BCA 단백질 어세이 키트 (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA)를 이용하여 측정한 세포 내의 단백질 농도를 통해 표준화하여 구하였다. 그 결과를 도 6 내지 도 8에 나타내었다. In order to analyze the transfection efficiency of the PASPG copolymer obtained in Example 1, the following experiment was conducted. The cells were treated with 293T, in which visemen was expressed, and A549 cells, in which HeLa cells and non - mentin were not expressed. First, plant cells in each 24-well plate at 10 × 10 4 cells / ml concentration, were incubated until achieve at about 70-80% confluency. Each well was then treated with a PASPG / DNA complex with various N / P ratios and incubated at 37 ° C for 4 hours. Thereafter, the medium was replaced with serum-free medium and further cultured for 24 hours, followed by luciferase assay. Relative light units (RLUs) were determined by standardizing the protein concentration in the cells using a BCA protein assay kit (Pierce Biotechnology, Rockford, Ill., USA). The results are shown in FIGS. 6 to 8. FIG.
도 6 내지 도 8에 나타낸 바와 같이, 비멘틴-발현 세포에서 PASPG/DNA 복합체는 PASP/DNA 복합체에 비해 높은 트렌스펙션 효율을 가지고 있으며, 비멘틴-비발현 세포에서는 유의한 차이가 없음을 확인하였다. 상기 결과를 통하여, PASPG/DNA 복합체의 트렌스펙션은 GlcNAc와 비멘틴의 특이적인 상호작용에 의한 수용체-매개의 내포 작용 메커니즘에 의한 것임을 확인하였다. 또한, N/P 비의 증가에 따라 트렌스펙션 효율이 감소하였는데, 이것은 불완전한 아미노 분해 (aminolysis) 반응에 의한 복합체 내의 남아있는 수소성 벤질 그룹의 독성에 의한 것임을 확인하였다.
As shown in FIGS. 6 to 8, it was confirmed that the PASPG / DNA complexes in the visentin-expressing cells had a higher transfection efficiency than the PASP / DNA complexes and no significant difference in the non-mentin-expressing cells . From the above results, it was confirmed that the permeation of the PASPG / DNA complex is due to the receptor-mediated inclusion mechanism by specific interaction of GlcNAc and Vimentin. In addition, the transfection efficiency decreased with increasing N / P ratio, which was confirmed by the toxicity of the remaining hydrogenated benzyl groups in the complex due to incomplete aminolysis reaction.
또한, PASPG/DNA의 수용체-매개적인 내포 작용 메커니즘을 재 확인하기 위하여, 비멘틴-발현 세포에 경쟁자로 자유 GlcNAc를 전처리하여 경쟁 어세이 (competition assay)를 수행하였다. 그 결과를 도 9 및 도 10에 나타내었다. In addition, in order to reaffirm the receptor-mediated inclusion mechanism of PASPG / DNA, competition inhibition was performed by pretreating free GlcNAc as a competitor to visentin-expressing cells. The results are shown in FIGS. 9 and 10.
도 9 및 도 10에 나타낸 바와 같이, PASPG/DNA 복합체는 GlcNAc의 농도가 증가함에 따라 트렌스펙션 효율이 현저하게 감소하는데 반해, PASP/DNA 복합체는 GlcNAc의 전처리에 영향을 받지 않음을 확인하였다. 상기 결과를 통하여, PASPG 내의 GlcNAc 리간드와 세포의 비멘틴 발현의 특이적인 상호작용을 통해 수용체-매개적인 내포 작용 유전자 발현이 발생함을 확인하였다.
As shown in FIG. 9 and FIG. 10, the PASPG / DNA complex showed a significant reduction in the transfection efficiency as the GlcNAc concentration was increased, whereas the PASP / DNA complex was not affected by the GlcNAc pretreatment. Through the above results, it was confirmed that the receptor-mediated inclusion gene expression occurred through the specific interaction of the GlcNAc ligand in the PASPG with the vimentin expression of the cells.
또한, 배지 내 혈청 첨가 유무가 트랜스펙션 효율에 미치는 영향을 확인하기 위하여, PASPG/DNA 복합체 처리 시 혈청 첨가 유무를 달리한 후, 루시퍼레이즈 어세이를 수행하였다. 그 결과를 도 11에 나타내었다. In order to confirm the effect of serum addition in the medium on the transfection efficiency, luciferase assay was performed after the presence or absence of serum addition in the PASPG / DNA complex treatment. The results are shown in Fig.
도 11에 나타낸 바와 같이, PASPG/DNA 복합체의 트렌스펙션 효율은 혈청의 첨가 유무에 영향을 받지 않음을 확인하였다. As shown in Fig. 11, it was confirmed that the transmission efficiency of the PASPG / DNA complex was not influenced by the addition of serum.
이상의 실험 결과를 통하여, PASPG 공중합체는 DNA에 높은 결합능을 나타내어 PASPG/DNA 복합체를 형성하며, 상기 PASPG/DNA 복합체는 200 nm 이하의 작은 크기로 내포 작용을 통한 유전자 전달이 가능하고, 세포 독성이 매우 낮으며, 비멘틴-발현 세포에서 우수한 트렌스펙션 효율을 가지고 있어, 유전자 전달체 또는 섬유증의 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인하였다.
As a result, the PASPG / DNA complexes were found to have high binding capacity to DNA and to form PASPG / DNA complexes. The PASPG / DNA complexes were able to deliver gene through encapsulation at a small size of 200 nm or less, And has excellent transspection efficiency in vimentin-expressing cells, and thus it can be used as a composition for preventing or treating a gene carrier or fibrosis.
이하 본 발명의 상기 조성물을 포함하는 약학적 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
Hereinafter, formulation examples of the pharmaceutical composition containing the composition of the present invention will be described, but the present invention is not intended to be limited but is specifically described .
제제예Formulation example 1. 약학적 조성물의 제조 1. Preparation of pharmaceutical compositions
1-1. 1-1. 산제의Sanje 제조 Produce
PASPG 공중합체 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
The above components are mixed and filled in airtight bags to prepare powders.
1-2. 정제의 제조1-2. Manufacture of tablets
PASPG 공중합체 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mgMagnesium stearate 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
After mixing the above components, tablets are prepared by tableting according to the usual preparation method of tablets.
1-3. 캡슐제의 제조1-3. Preparation of capsules
PASPG 공중합체 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mgCrystalline cellulose 3 mg
락토오스 14.8 mgLactose 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mgMagnesium stearate 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
The above components are mixed according to a conventional capsule preparation method and filled in gelatin capsules to prepare capsules.
1-4. 주사제의 제조1-4. Injection preparation
PASPG 공중합체 10 mg
만니톨 180 mg180 mg mannitol
주사용 멸균 증류수 2974 mgSterile sterilized water for injection 2974 mg
Na2HPO4·2H2O 26 mgNa 2 HPO 4 .2H 2 O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
(2 ml) per 1 ampoule in accordance with the usual injection preparation method.
1-5. 1-5. 액제의Liquid 제조 Produce
PASPG 공중합체 20 mg
이성화당 10 g10 g per isomer
만니톨 5 g5 g mannitol
정제수 적량Purified water quantity
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
Each component was added and dissolved in purified water according to the usual liquid preparation method, and the lemon flavor was added in an appropriate amount. Then, the above components were mixed, and purified water was added thereto. The whole was added with purified water to adjust the total volume to 100 ml, And sterilized to prepare a liquid preparation.
Claims (7)
[화학식 1]
상기 화학식 1에서, X는 10 내지 1000이고, Y는 20 내지 2000이다.
(P [Asp (Sper) -b-PEO-GlcNAc]) copolymer with N-acetylglucosamid represented by the following formula (1).
[Chemical Formula 1]
In the above formula (1), X is 10 to 1000 and Y is 20 to 2000.
A gene carrier comprising the PASPG copolymer of claim 1.
3. The gene transporter according to claim 2, wherein the gene is at least one selected from the group consisting of gDNA, cDNA, pDNA, mRNA, tRNA, rRNA, siRNA, shRNA and miRNA.
The gene carrier according to claim 2, wherein the size of the gene carrier is 20 to 200 nm.
3. The gene transporter according to claim 2, wherein the gene carrier has a N (nitrogen) / P (phosphorus) ratio of 0.1 to 30.
A pharmaceutical composition for preventing or treating fibrosis comprising the PASPG copolymer of claim 1.
Priority Applications (1)
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